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用于预防治疗骨相关疾病的取代的苯并呋喃并色烯和相关化合物

阅读:762发布:2021-01-19

专利汇可以提供用于预防治疗骨相关疾病的取代的苯并呋喃并色烯和相关化合物专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及具有通式I的新型取代的苯并呋喃并色烯和相关化合物、其盐和 手性 、非手性衍 生物 ;其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8独立地选自下:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷 氧 基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的 氨 基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化 碳 、硝基,但不限于此;其中,R1R2或R2R3或R6R7可以连接并形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可以通过亚甲基二氧部分连接;其中,X选自由以下构成的单元:任选的 酮 基、任选的亚甲基、任选取代的亚甲基、任选取代的烯 烃 ;其中,Y和Z选自以下单元:CH、C-OH、C-Me、C-OMe,附加条件是Y和Z之间的键为单键;其中,Y和Z可以是碳 原子 ,附加条件是Y和Z之间的键为双键。通式化合物用于 预防 和 治疗 骨相关 疾病 。,下面是用于预防治疗骨相关疾病的取代的苯并呋喃并色烯和相关化合物专利的具体信息内容。

1.具有通式I的取代的新型苯并呋喃并色烯和相关化合物、其盐和手性、非手性衍生物
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其中,R、R、R、R、R、R、R、R 独立地选自下组:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化、硝基,但不限于此;
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其中,RR 或RR 或RR 可以连接并形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可以通过亚甲基二氧部分连接;
其中,X选自以下单元:任选的基、任选的亚甲基、任选取代的亚甲基、任选取代的烯
其中,Y和Z选自以下单元:CH、C-OH、C-Me、C-OMe,附加条件是Y和Z之间的键为单键;
其中,Y和Z可以是碳原子,附加条件是Y和Z之间的键为双键。
2.如权利要求1所述的化合物,其中,具有通式I的特别优选的新型化合物更具体由模板I描述;
模板-I
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其中R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
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其中RR 或RR 或RR 可以连接并可形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可通过亚甲基二氧部分连接。
3.如权利要求1所述的化合物,其中,具有模板-I的通式的化合物的新型前体具体由模板-II描述;
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其中R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
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其中RR 或RR 或RR 可连接并可形成五元环或六元环如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可通过亚甲基二氧部分连接。
4.如权利要求1所述的化合物,其中,代表性的化合物包括以下,但不限于这些实例;
xviii.3-烯丙氧基-4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯xix.4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇
xx.6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇
xxi.(4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-基氧基)-乙腈xxii.3-异丙氧基-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯
xxiii.3-(烯丙氧基)-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯
xxiv.1-(2-(6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯-3-基氧基)乙基)哌啶xxv.3-羟基-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯-6-酮
xxvi.7,8-二羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮
xxvii.7,8-二羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮
xxviii.6-氯-7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮
xxix.6-氯-7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮
xxx.7-羟基-3-(2-羟苯基)-8-甲基-色烯-4-酮
xxxi.7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮
xxxii.7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮
xxxiii.3-(2,4-二甲氧苯基)-7-羟基-色烯-4-酮
xxxiv.7-羟基-3-(2-羟基-4-甲氧苯基)-色烯-4-酮。
5.如权利要求1所述的化合物,其中,所述化合物用于预防治疗与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的多种医学适应症,优选用于预防或治疗人类和动物中发生的疾病和综合症,特别是骨质疏松症、骨丢失、骨形成;在II型/年龄有关/老年性骨质疏松症、发育阶段和生长达到较高骨量峰值的期间的骨形成、骨折愈合、用于替代缺陷骨的体外/体内的新骨形成的促进作用;雌激素相关疾病或综合症,优选在哺乳动物中由雌激素的缺乏状态引起的疾病或综合症;心血管效应,更特别是高脂血症、血栓症和血管舒缩系统;
神经变性效应如中、老年性痴呆-阿尔滋海默型和帕金森病;更年期综合症,包括热潮红、泌尿生殖道萎缩、抑郁症、躁狂症、精神分裂症等、小便失禁、痛经的缓解;功能失调性子宫出血的缓解、卵巢发育的助剂、痤疮和多毛症的治疗;癌症如前列腺癌乳腺癌、子宫癌、子宫颈癌和结肠癌;人类及其他动物的繁殖的控制或调控;用于先兆或习惯性流产的预防;产后哺乳的抑制;生理学疾病如肥胖症、抑郁症。
-12
6.如权利要求1所述的化合物,其中,在第18天的骨髓培养物中,所述化合物在10 M-10
和10 M下显示在新生沉积的矿化作用方面比对照显著提高。
-12 -6
7.如权利要求1所述的化合物,其中,所述化合物在10 M到10 M的浓度下显示成骨细胞ALP活性。
-12 -10
8.如权利要求1所述的化合物,其中,所述化合物在不同浓度即10 M到10 M下显著抑制脂肪形成。
9.如权利要求1所述的化合物,其中,所述化合物在1.0-10mg/kg的剂量下显著提高体内BMD。
10.通式I化合物、其盐和手性、非手性衍生物,
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其中,R、R、R、R、R、R、R、R 独立地选自下组:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
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其中,RR 或RR 或RR 可以连接并形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可以通过亚甲基二氧部分连接;
其中,X选自以下单元:任选的酮基、任选的亚甲基、任选取代的亚甲基、任选取代的烯烃;
其中,Y和Z选自以下单元:CH、C-OH、C-Me、C-OMe,附加条件是Y和Z之间的键为单键;
其中,Y和Z可以是碳原子,附加条件是Y和Z之间的键为双键;
其中所有已知的天然和合成的紫檀类化合物如6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(S-006-1709),但不限于这种化合物,以及新型异黄酮和相关化合物,
用于治疗骨质疏松症、骨丢失、骨形成;在II型/年龄有关/老年性骨质疏松症、发育阶段和生长达到较高骨量峰值的期间的骨形成、骨折愈合或任何其他骨疾病的用途。
11.一种制备如权利要求1所述的具有通式I的取代的苯并呋喃并色烯和相关化合物、其盐和衍生物的方法,该方法包括:
(i)在25℃-150℃温度范围,使具有通式A的化合物与通式B的取代的2′-甲氧苯基乙酸在路易斯酸,优选三氟化醚合物的存在下反应1小时到20小时,如说明书附图所示,
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其中取代基R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基等;
(ii)分离如说明书附图所示的通式C的化合物并通过色谱技术纯化式C的化合物;
(iii)使通式C化合物与甲磺酰氯在酸性介质的存在下反应,和在25℃-100℃温度下加热1小时到10小时;
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(iv)分离如说明书附图所示通式D的化合物,其中取代基R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基等;通过色谱技术纯化通式D的化合物;
(v)使通式D的化合物与三溴化硼或三氯化在选自THF、DMF、乙醇、乙腈、二氯甲烷等
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的质子溶剂非质子溶剂中在-40℃到150℃温度反应1小时到20小时,其中取代基R、R、
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R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基等;分离和通过色谱技术纯化通式E的化合物;
(vi)使通式E的化合物与还原剂如氢化铝锂、硼氢化钠在质子溶剂或非质子溶剂如DMSO、乙醇、甲醇、THF、DMF等中在0℃到150℃的温度反应1到20小时,如说明书附图所示,
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其中取代基R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,分离并通过色谱技术纯化通式F的化合物。
12.如权利要求10所述的方法,其中,所述化合物可以转化为药学可接受的盐,包括:
盐酸盐、甲酸盐、醋酸盐、苯基醋酸盐、三氟醋酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、溴代苯甲酸盐、碘代苯甲酸盐、硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、烷基苯甲酸盐、烷氧基苯甲酸盐、烷氧基羰基苯甲酸盐、-2-苯甲酸盐、丁酸盐、苯基丁酸盐、羟基丁酸盐、癸酸盐、辛酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、庚酸盐、尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、草酸盐、钠盐、盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、重硫酸盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、重硫酸盐、磺酸盐、苯磺酸盐、溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙烷磺酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、甲苯磺酸盐等。
13.一种用于预防或治疗由以下引起的疾病和综合症的药物组合物:骨质疏松症、骨丢失、骨形成、骨折愈合、在生长阶段当施用后的较高骨量峰值的获得和新骨形成的促进作用,所述药物组合物含有权利要求1所述的化合物或紫檀碱类化合物如6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(S-006-1709),任选含或不含药学可接受的载体或稀释剂或赋形剂。
14.如权利要求12所述的药物组合物,其中,所述式I化合物或紫檀碱类化合物如6a,
11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(S-006-1709)与药学可接受载体或稀释剂或赋形剂的比率优选为芯材的1-20%,每毫克载药量含有10-40%的非离子表面活性剂,然后为了表面修饰用10-60%的带相反电荷的聚合电解质和10-30%的胆汁盐包封。
15.如权利要求12所述的药物组合物,其中,已知、未知的苯并呋喃并色烯(紫檀碱类)和相关化合物的组合以不同比例、或基于摩尔浓度、百分比产率,优选等量使用。
16.如权利要求12所述的组合物,其中,所述药物稀释剂选自以下:乳糖、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素、蔗糖、柠檬酸钠、磷酸二钙或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合。
17.如权利要求1所述的组合物,其中,所述药物赋形剂选自如下:
i.稀释剂如乳糖、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素、蔗糖、柠檬酸钠、磷酸二钙或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
ii.粘合剂如黄蓍胶、阿拉伯树胶、甲基纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
iii.崩解剂如琼脂、碳酸钙、碳酸钠、酸盐、藻酸、玉米淀粉、马铃薯木薯淀粉、primogel或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
iv.润滑剂硬脂酸镁、硬脂酸钙或steorote、滑石、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠或类似性质的其他任何成分,单独或以其合适的组合;
v.助流剂如胶态二氧化硅或类似性质的其他任何成分,单独或以其合适的组合;
vi.甜味剂如蔗糖、糖精或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
vii.芳香剂如薄荷、水杨酸甲酯、有机香料、香草香料或任何其他药学上可接受的香料,单独或以其合适的组合;
viii.润湿剂如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯或任何其他药学可接受的调味剂,单独或以其合适的组合;
ix.吸附剂如高岭土膨润土或任何其他药学可接受的调味剂,单独或以其合适的组合;
x.溶解迟延剂如蜡、石蜡或任何其他药学可接受的调味剂,单独或以其合适的组合。
18.如权利要求12所述的组合物,其中,所述组合物的有效剂量为每公斤体重0.1mg到
5000mg,优选每公斤体重1mg到500mg,以每日、每两周、每周或更多的分剂量。
19.如权利要求12所述的组合物,其中,所述组合物通过选自以下的途径给药:口服、经皮、肌肉、腹膜内、静脉内、局部。
20.如权利要求12所述的组合物,其中,所述组合物以片剂、糖浆、粉末、胶囊、悬浮液、溶液、药膏、混合物的形式使用。

说明书全文

用于预防治疗骨相关疾病的取代的苯并呋喃并色烯和相

关化合物

技术领域

[0001] 本发明涉及说明书附图中所示的通式I的取代的苯并呋喃并色烯(benzfurochromenes)及相关化合物的开发,其可用作预防或治疗多种与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的医学适应症、优选用于预防或治疗人类或动物中发生的疾病和综合症的治疗药。
[0002] 本发明更具体地涉及通式I的化合物:
[0003]
[0004] 其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8独立地选自下组:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基(acylthio)、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化(carbontrifluoride)、硝基,但不限于此;
[0005] 其中,R1R2或R2R3或R6R7可以连接并形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可以通过亚甲基二氧(methylenedeoxy)部分连接;
[0006] 其中,X选自以下单元:任选的基、任选的亚甲基、任选取代的亚甲基、任选取代的烯
[0007] 其中,Y和Z选自以下单元:CH、C-OH、C-Me、C-OMe,附加条件是Y和Z之间的键为单键;
[0008] 其中,Y和Z可以是碳原子,附加条件是Y和Z之间的键为双键;
[0009] 更具体地,本发明涉及任选取代的苯并呋喃并色烯及其相关化合物,制备所述化合物和它们的药学可接受的盐和组合物的方法,其用于预防或治疗与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的多种医学适应症,优选用于预防或治疗人类和动物中发生的疾病和综合症,特别是骨质疏松症、骨丢失、骨形成;在II型/年龄有关/老年性骨质疏松症、发育阶段和生长达到较高骨量峰值的期间的骨形成、骨折愈合、用于替代缺陷骨的体外/体内的新骨形成的促进作用;雌激素相关疾病或综合症,优选在哺乳动物中由雌激素的缺乏状态引起的疾病或综合症;心血管效应,更特别是高脂血症、血栓症和血管舒缩系统;神经变性效应如中、老年性痴呆-阿尔滋海默型和帕金森病;更年期综合症,包括热潮红、泌尿生殖道萎缩、抑郁症、躁狂症、精神分裂症等、小便失禁、痛经的缓解;功能失调性子宫出血的缓解、卵巢发育的助剂、痤疮和多毛症的治疗;癌症如前列腺癌乳腺癌、子宫癌、子宫颈癌和结肠癌;人类及其他动物的繁殖的控制或调控;用于先兆或习惯性流产的预防;产后哺乳的抑制;生理学疾病如肥胖症、抑郁症等。

背景技术

[0010] 已定义为“低骨量状态”的骨质疏松症是我们老龄化社会的主要问题之一。该疾病的特征是骨组织的微结构恶化,从而导致骨脆性的增加和在老年人群中骨折风险的增加。已知影响50岁以上的大于50%的女性和30%的男性。在女性中,还存在立即以及绝经后不同年限的加速的骨丢失速率。
[0011] 旨在降低这种风险因素和骨折发生率的努力已导致了通过抑制骨再吸收和/或通过增强骨形成来保存骨量的化合物的开发(Dwivedy I,Ray S,1995″Recent developments in the chemotherapy of osteoporosis″Progress in Drug Research45,289-338,编辑E Jucker,′Birkhauser Vela;Marshall DH,Horsmann A,Nordin BEC,
1977,″The prevention and management of post-menopausal osteoporosis″Acta Obstet Gynecol Scand (Suppl)65:49-56;Hutchinson TA,Polansky SM,Feinstein AR,
1979,″Postmenopausal estrogen protect against fractures of hip and distal radius:A care-control study″Lancet 2:705-709。雌激素替代疗法也对CVS&CNS相关疾病具有积极效果(Lobo RA,1990,″Cardiovascular implication of estrogen replacement therapy ″ Obstetrics&Gynaecology 75:185-245;Mendelson ME,Karas RH,1994,″Estrogen and the blood vessel wall″Current opinion in Cardiology
1994:619-626;Stampfer MJ,Colditz GA,1991, ″ Estrogen replacement therapy and coronary heart disease:a quantitative assessment of the epidemiological evidence″Preventive Medicine 20:47-63)。
[0012] 可用于临床用途的大部分药理学药物如、维生素D及其类似物、雌激素、降血钙素、二膦酸盐、雷洛昔芬等,通过降低骨再吸收的速率起作用,由此减缓骨丢失的速度。及时给药这样的抗再吸收的药物防止骨丢失。然而骨质一旦丢失就不能通过使用这样的抗再吸收药物来恢复。
[0013] 在传统医学中,很多天然药物具有治疗骨疾病的可能。然而已经报道的评估天然药物的可能的开发和用途的实验室工作很少,除了已经临床上应用于该适应症的一种异类黄酮-伊普黄酮。
[0014] 已经证实包含在本专利中的化合物在众多试验中促进体内造骨细胞的增殖和分化、基质的成熟和矿化作用,以及在延长的治疗后提高体内的骨矿物密度和骨机械强度,以及不仅将在骨折的快速愈合和年龄有关的(II型)骨质疏松症方面具有巨大用途,而且在生长发育期间给药时可有助于达到较高的骨量峰值,促进体外/体内新骨形成用于替代有缺陷的骨和预防包括绝经后骨质疏松症在内的雌激素缺乏状态的再吸收。本发明的一些化合物在动物实验中显示良好的全身有效性,这与其的药效动力学性质良好相关。
[0015] 目前报道显示骨形成活性的药剂仅包括(a)甲状旁腺激素,其通过肠胃外给药并在较高剂量提高骨的再吸收,(b)氟化物,已知其过度摄入引起骨质疏松症以及(c)雄激素,借助其合成代谢活性。这是源自天然来源的种类中的第一个药物,并将被开发为人类使用和健康的口服制剂。
[0016] 苯并呋喃并色烯构成第二最大类的天然异类黄酮类,其包含通过4-和2`位置之间的醚键衍生自该异类黄酮骨架的四环体系[(a)Dewich,P.M.In Harbome,J.B.,Ed.;The Flavanoids:Advances in Research Since1986;Chapman and Hall:London,1994;
(b)Tanaka,H.;Oh-Uchi,T.;Etoh,H.;Shimizu,H.;Tateishi,Y.Phytochemistry 2002,
60,789]。多种生物学活性与这种化合物有关,其包括有效的植物抗毒素(Mansfield,J.W.In Phytoalexins;Bailey,J.A.,Mansfield,J.W.,Eds.;Glasgow,1982.)、抗毒素和抗病毒(Nakagawa,M.;Nakanishi,K.;Darko,L.L.;Vick,J.A.Tetrahedron Lett.1982,
23,3855.)、抗 真菌 ((a)Maximo,P.;Lourenc,o,A.Phytochemistry 1998,48,359;(b)Perrin,D.R.Tetrahedron Lett.1964,1,29.)和抗细菌(Ingham,J.L.In Progress in the Chemistry of Organic Natural Products;Herz,W.,Grisebach,H.,Kirby,G.W.,Eds.;
Springer:New York,1983;Vol.43,pp 1-266.)性能。我们参与合成天然产物如类黄酮类、萜烯类和其他相关的生物学重要的氧杂环化合物,以及在多种内部筛选模型中评估它们的生物学特性。最近我们制备了一系列苯并吡喃并色烯和相关的化合物,它们用于预防或治疗与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的多种医学适应症,优选用于预防或治疗人类和动物中发生的疾病和综合症,特别是骨质疏松症、骨丢失、骨形成;在II型/年龄有关/老年性骨质疏松症、发育阶段和生长达到较高骨量峰值的期间的骨形成、骨折愈合、用于替代缺陷骨的体外/体内的新骨形成的促进作用。
[0017] 一些新型合成的苯并呋喃并色烯特别是3-烯丙氧基-4-甲基-6a,11a-二-12 -6
氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯(S-007-1500)在重复筛选中在10 M到10 M浓度的来自颅顶的成骨细胞中显示ALP活性的刺激。这种令人鼓舞的结果促使我们制备了几种仿天然的苯并呋喃并色烯和它们的相关化合物,它们用于预防或治疗雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的多种医学适应症,优选用于预防或治疗人类和动物中发生的疾病和综合症。对合成的化合物的详细的生物学研究(体外和体内)在本文的生物学评估部分涉及。
[0018] 骨质疏松症是我们老龄化社会中的主要问题之一。骨质疏松症引起人口中老年人,特别是绝经后的女性的骨折。在传统医学中,有很多天然药物可用于治疗骨病。到目前为止,还没有显示成骨和抗破骨活性的可利用的药。因此,急需发现和开发具有理想的药理学特性并促进新骨形成的药物。

发明内容

[0019] 本发明的主要目的是提供用于预防和治疗骨相关疾病的取代的苯并呋喃并色烯苯并呋喃并色烯和相关化合物。
[0020] 本发明的另一个目的是提供制备取代的苯并呋喃并色烯和相关化合物的方法。
[0021] 本发明的又一个目的是提供具有骨形成/强化活性的化合物。
[0022] 发明简述
[0023] 因此,本发明提供具有通式I的取代的新型苯并呋喃并色烯和相关化合物、其盐和手性、非手性衍生物:
[0024]
[0025] 其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8独立地选自下组:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
[0026] 其中,R1R2或R2R3或R6R7可以连接并形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可以通过亚甲基二氧部分连接;
[0027] 其中,X选自以下单元:任选的酮基、任选的亚甲基、任选取代的亚甲基、任选取代的烯烃;
[0028] 其中,Y和Z选自以下单元:CH、C-OH、C-Me、C-OMe,附加条件是Y和Z之间的键为单键;
[0029] 其中,Y和Z可以是碳原子,附加条件是Y和Z之间的键为双键;
[0030] 在本发明的一实施方式中,其中,具有通式I的特别优选的新型化合物更具体由模板I描述;
[0031]
[0032] 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
[0033] 其中R1R2或R2R3或R6R7可以连接并可形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可通过亚甲基二氧部分连接;
[0034] 在本发明的另一实施方式中,其中,具有模板-I的通式的化合物的新型前体具体由模板-II描述;
[0035]
[0036] 其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
[0037] 其中R1R2或R2R3或R6R7可连接并可形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可通过亚甲基二氧部分连接。
[0038] 在本发明的另一实施方式中,其中,代表性的化合物包括以下,但不限于这些是实施例
[0039] i.3-烯丙氧基-4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯[0040] ii.4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇
[0041] iii.6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇
[0042] iv.(4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-基氧基)-乙腈
[0043] v.3-异丙氧基-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯
[0044] vi.3-(烯丙氧基)-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯
[0045] vii.1-(2-(6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯-3-基氧基)乙基)哌啶[0046] viii.3-羟基-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯-6-酮
[0047] ix.7,8-二羟基-3-(2-甲氧基-苯基)-色烯-4-酮
[0048] x.7,8-二羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮
[0049] xi.6-氯-7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮
[0050] xiii.7-羟基-3-(2-羟苯基)-8-甲基-色烯-4-酮
[0051] xiv.7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮
[0052] xv.7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮
[0053] xvi.3-(2,4-二甲氧苯基)-7-羟基-色烯-4-酮
[0054] xvii.7-羟基-3-(2-羟基-4-甲氧苯基)-色烯-4-酮
[0055] 在本发明的进一步的实施方式中,其中,所述化合物用于预防或治疗与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的多种医学适应症,优选用于预防或治疗人类和动物中发生的疾病和综合症,特别是骨质疏松症、骨丢失、骨形成;在II型/年龄有关/老年性骨质疏松症、发育阶段和生长达到较高骨量峰值的期间的骨形成、骨折愈合、用于替代缺陷骨的体外/体内的新骨形成的促进作用;雌激素相关疾病或综合症,优选在哺乳动物中由雌激素的缺乏状态引起的疾病或综合症;心血管效应,更特别是高脂血症、血栓症和血管舒缩系统;神经变性效应如中风、老年性痴呆-阿尔滋海默型和帕金森病;更年期综合症,包括热潮红、泌尿生殖道萎缩、抑郁症、躁狂症、精神分裂症等、小便失禁、痛经的缓解;功能失调性子宫出血的缓解、卵巢发育的助剂、痤疮和多毛症的治疗;癌症如前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、子宫颈癌和结肠癌;人类及其他动物的繁殖力的控制或调控;用于先兆或习惯性流产的预防;产后哺乳的抑制;生理学疾病如肥胖症、抑郁症。在本发明的一实施方式中,其中,-12 -10所述化合物在10 M和10 M的第18天骨髓培养物中,显示在新生钙沉积的矿化作用方面比对照组显著提高。
[0056] 在本发明的一实施方式中,其中,所述化合物在10-12M到10-6M的浓度显示成骨细胞ALP活性。
[0057] 在本发明的一实施方式中,其中,所述化合物在不同浓度,即10-12M到10-10M,显著抑制脂肪形成。
[0058] 在本发明的一实施方式中,其中,所述化合物在1.0-10mg/kg的剂量下显著提高体内BMD。
[0059] 在本发明的进一步的实施方式中,所述通式I化合物、其盐和手性、非手性衍生物,
[0060]
[0061] 其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8独立地选自下组:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
[0062] 其中,R1R2或R2R3或R6R7可以连接并形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可以通过亚甲基二氧部分连接;
[0063] 其中,X选自以下单元:任选的酮基、任选的亚甲基、任选取代的亚甲基、任选取代的烯烃;
[0064] 其中,Y和Z选自以下单元:CH、C-OH、C-Me、C-OMe,附加条件是Y和Z之间的键为单键;
[0065] 其中,Y和Z可以是碳原子,附加条件是Y和Z之间的键为双键;
[0066] 其中所有已知的天然和合成的紫檀类化合物如6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(S-006-1709),但不限于这种化合物,以及新型异黄酮和相关化合物,其用于治疗骨质疏松症、骨丢失、骨形成;在II型/年龄有关/老年性骨质疏松症、发育阶段和生长达到较高骨量峰值的期间的骨形成、骨折愈合或任何其他骨疾病。
[0067] 因此,本发明涉及制备如权利要求1要求保护的具有通式I的取代的苯并呋喃并色烯、其盐和衍生物的方法,该方法包括:
[0068] (i)在25℃-150℃温度范围,使具有通式A的化合物与通式B的取代的2′-甲氧苯基乙酸在路易斯酸,优选三氟化醚合物的存在下反应1小时到20小时,如说明书附1 2 3 4 5 6 7 8
图所示,其中取代基R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基等;
[0069] (ii)分离如说明书附图所示的通式C的化合物并通过色谱技术纯化式C的化合物;
[0070] (iii)使通式C化合物与甲磺酰氯在酸性介质的存在下反应,和在25℃-100℃温度下加热1小时到10小时;
[0071] (iv)分离如说明书附图所示通式D的化合物,其中取代基R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、8
R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基等;通过色谱技术纯化通式D的化合物;
[0072] (v)使通式D的化合物与三溴化硼或三氯化在选自THF、DMF、乙醇、乙腈、二氯甲烷等的质子溶剂非质子溶剂中在-40℃到150℃温度反应1小时到20小时,其中取代基1 2 3 4 5 6 7 8
R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基等;分离和通过色谱技术纯化通式E的化合物;
[0073] (vi)使通式E的化合物与还原剂如氢化铝锂、硼氢化钠在质子溶剂或非质子溶剂如DMSO、乙醇、甲醇、THF、DMF等中在0℃到150℃的温度反应1到20小时,如说明书附图所1 2 3 4 5 6 7 8
示,其中取代基R、R、R、R、R、R、R、R 独立选自以下基团:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,分离并通过色谱技术纯化通式F的化合物。
[0074] 在本发明的一实施方式中,其中,所述化合物可以转化为药学可接受的盐,包括:盐酸盐、甲酸盐、醋酸盐、苯基醋酸盐、三氟醋酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、溴代苯甲酸盐、碘代苯甲酸盐、硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、烷基苯甲酸盐、烷氧基苯甲酸盐、烷氧基羰基苯甲酸盐、-2-苯甲酸盐、丁酸盐、苯基丁酸盐、羟基丁酸盐、癸酸盐、辛酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、庚酸盐、尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、草酸盐、钠盐、盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、重硫酸盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、重硫酸盐、磺酸盐、苯磺酸盐、溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙烷磺酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、甲苯磺酸盐等。
[0075] 一种用于预防或治疗由以下引起的疾病和综合症的药物组合物:骨质疏松症、骨丢失、骨形成、骨折愈合、在生长阶段当施用后的较高骨量峰值的获得,和新骨形成的促进作用,所述药物组合物含有通式1的化合物或紫檀碱类化合物如6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(S-006-1709),含或不含药学可接受的载体或稀释剂或赋形剂。
[0076] 在本发明的一实施方式中,其中,所述式I化合物或紫檀碱类化合物如6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(S-006-1709)与药学可接受载体或稀释剂或赋形剂的比率优选为芯材的1-20%,每毫克载药量含有10-40%的非离子表面活性剂,然后为了表面修饰用10-60%带相反电荷的聚合电解质和10-30%的胆汁盐包封。
[0077] 具有通式的药学可接受的盐和组合物,用于预防或治疗与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的多种医学适应症,优选用于预防或治疗人类和动物中发生的疾病和综合症,特别是骨质疏松症、骨丢失、骨形成;在II型/年龄有关/老年性骨质疏松症、发育阶段和生长达到较高骨量峰值的期间的骨形成、骨折愈合、用于替代缺陷骨的体外/体内的新骨形成的促进作用;雌激素相关疾病或综合症,优选在哺乳动物中由雌激素的缺乏状态引起的疾病或综合症;心血管效应,更特别是高脂血症、血栓症和血管舒缩系统;神经变性效应如中风、老年性痴呆-阿尔滋海默型和帕金森病;更年期综合症,包括热潮红、泌尿生殖道萎缩、抑郁症、躁狂症、精神分裂症等、小便失禁、痛经的缓解;功能失调性子宫出血的缓解、卵巢发育的助剂、痤疮和多毛症的治疗;癌症如前列腺癌、乳腺癌、子宫癌、子宫颈癌和结肠癌;人类及其他动物的繁殖力的控制或调控;用于先兆或习惯性流产的预防;产后哺乳的抑制;生理学疾病如肥胖症、抑郁症。
[0078] 根据主要实施方式,本发明提供苯并呋喃并色烯和相关化合物及其药学可接受的盐和组合物,它们用于预防或治疗与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症相关的多种医学适应症,优选用于预防或治疗人类和动物中发生的疾病或综合症。
[0079] 在重要的实施方式中,本发明提供药学组合物,包含治疗有效量的苯并呋喃并色烯和相关化合物、其药学可接受的盐和组合物,以单独、混合形式或药理学活性或非活性药或两者与一种或多种药学可接受的载体或赋形剂的组合使用。
[0080] 在另一实施方式中,本发明提供使用苯并呋喃并色烯和相关化合物、其药学可接受的盐和分离自这些或其他天然来源或合成的纯化合物、其药学可接受的盐和组合物的医学方法,以及使用这样的试剂用于预防或治疗哺乳动物和动物中雌激素依赖性或独立状态的综合症,特别是骨质疏松症、骨丢失、骨形成和心血管效应以及雌激素依赖性或雌激素独立的癌症以及用于治疗与对内源性雌激素的异常生理应答有关的病症或疾病(包括人类和其他动物繁殖力的控制或调控)的方法。
[0081] 在重要的实施方式中,本发明证明本发明化合物之一S006-1709在实验动物中的全身有效性。

附图说明

[0082] 通过参考以下附图/表可更清楚了解本发明:
[0083] 图1a说明化合物S006-1709对成骨细胞增殖的影响。
[0084] 图1b表示化合物S006-1710对成骨细胞增殖的影响。
[0085] 图1c说明化合物S006-1711对成骨细胞增殖的影响。
[0086] 图2a说明化合物S006-1713对成骨细胞增殖的影响。
[0087] 图2b说明化合物S006-1714对成骨细胞增殖的影响。
[0088] 图3a说明化合物S006-1709在研究的10-16M到10-6M的浓度下对成骨细胞ALP活性的影响。
[0089] 图3b说明S006-1710对颅顶和骨髓成骨细胞的成骨细胞分化的影响。
[0090] 图3c说明在颅顶和骨髓衍生的成骨细胞中S006-1711的ALP活性。
[0091] 图4a说明S006-1713的ALP活性。
[0092] 图4b说明S006-1714的ALP活性。
[0093] 图5说明S006-1709到S006-1711对颅顶成骨细胞的矿化作用的影响。
[0094] 图6说明S006-1709到S006-1711对骨髓成骨细胞的矿化作用的影响。
[0095] 图7说明在S007-1351、S007-1352、S007-1353、S007-1495、S007-1500的研究的-12 -610 M到10 M浓度下成骨细胞ALP活性。
[0096] 图8a描述在8天实验结束时形成的脂肪细胞。
[0097] 图8b表示化合物S006-1709、S007-1495和S007-1500在不同浓度下对脂肪形成的影响。
[0098] 表1表示化合物S006-1709的雌激素和非雌激素活性。
[0099] 表2表示S006-1709的体内功效。
[0100] 表3表示S007-1500的体内功效。
[0101] 表4表示S006-1709的药代动力学参数的估算值。
[0102] 发明的详述
[0103] 本发明涉及通式I的化合物:
[0104]
[0105] 其中,R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8独立地选自下组:氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的烷硫基、任选取代的氨基、任选取代的酰基氨基、任选取代的芳氨基、任选取代的酰硫基、任选取代的酰基、任选取代的芳酰基、任选取代的酰氧基、任选取代的硫代酰氨基、卤素、腈类、酯类、羟基、巯基、三氟化碳、硝基,但不限于此;
[0106] 其中,R1R2或R2R3或R6R7可以连接并形成五元环或六元环,如任选取代的呋喃、任选取代的二氢呋喃、任选取代的吡喃;或可以通过亚甲基二氧部分连接;
[0107] 其中,X选自以下单元:任选的酮基、任选的亚甲基、任选取代的亚甲基、任选取代的烯烃;
[0108] 其中,Y和Z选自以下单元:CH、C-OH、C-Me、C-OMe,附加条件是Y和Z之间的键为单键;
[0109] 其中,Y和Z可以是碳原子,附加条件是Y和Z之间的键为双键,
[0110] 及其药学可接受的盐和组合物,以及将这样的药物用于预防或治疗人类和/或动物中发生的与雌激素非依赖性或依赖性疾病或综合症有关的多种医学适应症的症状的方法。
[0111] 如本说明书和所附权利要求书通篇所用的术语“药学可接受的盐”是指由Berge等人的文章(J.Phramaceutical Sciences,66(1),1-19,1977)记载的盐类型。合适的药学可接受的盐包括由无机酸如盐酸、氢溴酸氢碘酸硝酸、硫酸、磷酸、次磷酸等形成的盐,以及由有机酸如脂肪族的单和二羧酸、苯基取代的链烷酸、芳族酸、脂肪族和芳族磺酸形成的盐。这样的药学可接受的酸加成盐包括甲酸盐、醋酸盐、苯基醋酸盐、三氟醋酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、溴代苯甲酸盐、碘代苯甲酸盐、硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、烷基苯甲酸盐、烷氧基苯甲酸盐、烷氧基羰基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、丁酸盐、苯基丁酸盐、羟基丁酸盐、癸酸盐、辛酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、水杨酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、重硫酸盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、重硫酸盐、磺酸盐、苯磺酸盐、溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙烷磺酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、甲苯磺酸盐等。最优选的盐是延胡索酸盐或抗坏血酸盐或盐酸盐。
[0112] 如本说明书和所附权利要求书通篇所用的本发明药物的术语“药学可接受的组合物”可通过本领域已知的方法利用本领域已知的药学可接受的赋形剂制备。
[0113] 在此提及的预防或治疗疾病或病症的方法包括向需要这样的治疗的人个体或任何其他哺乳动物或任何其他动物施用治疗有效量的一种或多种本发明的药物或其药学可接受的盐或药学可接受的组合物,以及一种或多种药学可接受的载体、赋形剂等。
[0114] 本发明的药物或其药学可接受的盐或药学可接受的组合物及一种或多种药学可接受的载体、赋形剂等的给药方案和给药模式,将根据在此描述的疾病类型或病情而变化,以及经过有关医师的诊断。
[0115] 本发明的药物或其药学可接受的盐或药学可接受的组合物以及一种或多种药学可接受的载体、赋形剂等可以0.1mg到5000mg的剂量,更优选0.5到1000mg的剂量,或还更优选1mg到500mg的剂量,每周或每两周或每天或每天两次或每天三次或更多的分剂量有效给药。
[0116] 治疗有效量的本发明药物或其药学可接受的组合物可以包封在明胶胶囊中,或压缩成片剂或丸剂,或可以配制成锭剂、与环糊精的包合络合物、可注射储库制剂、气雾剂、颗粒剂、粉末、口服液剂、粘膜胶粘制剂、胶凝剂、糖锭、酏剂、悬浮剂、糖浆剂、薄片(wafer)、脂质体输送系统、植入物、栓剂、阴道药栓、微型乳剂、纳米乳剂、微颗粒剂、纳米颗粒剂、控释给药系统、经皮给药系统、靶向的输送系统如与单克隆抗体或与其他适合载体部分的偶联物。
[0117] 该剂量可通过任何适当的途径给药,如口服、全身、局部或局部输送,例如静脉、动脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、真皮内、口腔、鼻内、吸入、阴道、直肠、经皮或任何其他合适的方式,以任何常规的液体或固体剂型形式,以达到本发明化合物或其药学可接受的盐或药学可接受的组合物及一种或多种药学可接受的载体、赋形剂等的常规输送、控制输送或靶向输送。
[0118] 本发明药物或其药学可接受的盐或药学可接受的组合物的优选给药模式是口服。
[0119] 口服组合物通常包含本发明药物或其药学可接受的组合物和一种或多种药学可接受的赋形剂。
[0120] 口服组合物如片剂、丸剂、胶囊、粉末、颗粒剂等可包含任何以下药学可接受的赋形剂:
[0121] 1.稀释剂如乳糖、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素、蔗糖、柠檬酸钠、磷酸二钙或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
[0122] 2.粘合剂如黄蓍胶、阿拉伯树胶、甲基纤维素、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
[0123] 3.崩解剂如琼脂、碳酸钙、碳酸钠、酸盐、藻酸、玉米淀粉、马铃薯木薯淀粉、primogel或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
[0124] 4.润滑剂硬脂酸镁、硬脂酸钙或steorote、滑石、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠或类似性质的其他任何成分,单独或以其合适的组合;
[0125] 5.助流剂如胶态二氧化硅或类似性质的其他任何成分,单独或以其合适的组合;
[0126] 6.甜味剂如蔗糖、糖精或类似性质的任何其他成分,单独或以其合适的组合;
[0127] 7.芳香剂如薄荷、水杨酸甲酯、有机香料、香草香料或任何其他药学上可接受的香料,单独或以其合适的组合;
[0128] 8.润湿剂如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯或任何其他药学可接受的调味剂,单独或以其合适的组合;
[0129] 9.吸附剂如高岭土膨润土或任何其他药学可接受的调味剂,单独或以其合适的组合;
[0130] 10.溶解迟延剂如蜡、石蜡或任何其他药学可接受的调味剂,单独或以其合适的组合。
[0131] 以下实施例是通过示例的方式给出的,并不应该理解为是本发明的范围。
[0132] 苯并呋喃并色烯和相关化合物的实施例:
[0133] 实施例-1
[0134] 3-烯丙氧基-4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯(S-007-1500):
[0135]
[0136] 在室温下将化合物4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(100mg,0.34mmol)溶解在DMF(5ml)中并将NaH(8.1mg,0.34mmol)添加到该溶液中,然后添加溴化丙烯(0.06ml,0.68mmol)。在室温搅拌该反应混合物6小时并倒入水中,以及用10%HCl中和得到白色沉淀物。用水洗涤沉淀物,并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化,得到3-异丙氧基-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯(58mg,50%),白色固体。1
[0137] 白 色 固 体;mp 100-102 ℃;H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.13(s,3H,CH3),3.53-3.73(m,2H,H-6β+H-6a),4.32(dd,J=4.4,5.9Hz,1H,H-6α),4.56(d,J=5.0Hz,
2H,CH2),5.27(dd,J=1.4,10.5Hz,1H,CH),5.42(dd,J=1.5,17.3Hz,1H,CH),5.53(d,J=6.6Hz,1H,H-11a),5.97-6.11(m,1H,CH),6.62(d,J=8.6Hz,1H,ArH),6.84(d,J=
8.0Hz,1H,ArH),6.89-6.94(m,1H,ArH),7.13-7.19(m,1H,ArH),7.27(d,J = 8.0Hz,1H,
13
ArH),7.33(d,J=8.5Hz,1H,ArH);C NMR(75.5MHz,CDCl3)δ7.10、38.98、65.26、67.86、
77.10、104.59、108.84、111.46、113.47、115.77、119.49、123.45、126.07、127.06、127.84、+
132.18、153.06、156.32、158.14;MS(ESI)295(M+1);HRMS C19H18O3的计算值294.1256,实测值:294.1241。
[0138] 实施例-2
[0139] 1-(2-(6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯-3-基氧基)乙基)哌啶(S-008-0399):
[0140]
[0141] 在室温将化合物6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(100mg,0.42mmol)溶解在DMF(5ml)中并将NaH(10mg,0.42mmol)添加到该溶液中,然后添加1-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐(366mg,0.84mmol)。将该反应混合物在室温搅拌6小时并倒入冰水中,以及用10%HCl进行中和得到白色沉淀物。用水洗涤沉淀物,并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化,得到1-(2-(6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯-3-基氧基)乙基)哌啶(102mg,70%)白色固体。
[0142] 白 色 固 体;mp 202-204 ℃;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ1.44-1.72(m,6H,3CH2),1.88-2.20(m,4H,2CH2),3.28-3.40(m,2H,CH2),3.55-3.73(m,2H,H-6β+H-6a),4.29(dd,J = 3.6,9.7Hz,1H,H-6α),4.46-4.58(m,2H,CH2),5.50(d,J = 6.3Hz,1H,H-11a),
6.47(d,J=2.4Hz,1H,ArH),6.63(dd,J=2.5,8.5Hz,1H,ArH),6.81-6.95(m,2H,ArH),+
7.10-7.28(m,2H,ArH),7.46(d,J=6.5Hz,1H,ArH);MS(ESI)352(M+1)。
[0143] 实施例-3
[0144] 4- 甲 基 -6a,11a- 二 氢 -6H- 苯 并 [4,5]呋 喃 并[3,2-c] 色 烯 -3- 醇(S-007-1499):
[0145]
[0146] 在0℃向7-羟基-3-(2-羟基-苯基)-8-甲基-色烯-4-酮(3gm,11.2mmol)的无水乙醇(30ml)的搅拌溶液中加NaBH4(2.6gm,67.2mmol)。然后在室温将该反应混合物搅拌24小时。加冰水停止反应并用10%HCl中和溶液,得到白色沉淀物。用水洗涤沉淀物并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化,得到4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(1.56gm,55%),白色固体。
[0147] 白色固体;mp 160-162℃;1HNMR(300MHz,CDCl3)δ2.12(s,3H,CH3),3.52-3.75(m,2H,H-6β+H-6a),4.33(dd,J=4.5,5.8Hz,1H,H-6α),4.87(s,1H,OH,D2O交换),5.52(d,J=6.6Hz,1H,H-11a),6.55(d,J=8.34Hz,1H,ArH),6.81-6.94(m,2H,ArH),7.13-7.23(m,-1
1H,ArH),7.24-7.30(m,2H,ArH);IR(KBr)1479、1552、1599、3383、3407cm (OH);
+
MS(ESI)255(M+1).
[0148] 实施例-4
[0149] 3-异丙氧基-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯(S-008-0398):
[0150]
[0151] 在室温将化合物6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(100mg,0.42mmol)溶解在DMF(5ml)中并将NaH(10mg,0.42mmol)添加到该溶液中,然后加入异丙基碘化物(149mg,0.84mmol)。在室温将该反应混合物搅拌6小时并倒入冰水中,以及用10%HCl中和得到白色沉淀物。用水洗涤沉淀物,并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化,得到3-异丙氧基-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯(60mg,51%),白色固体。
[0152] 白 色 固 体;mp 96-98 ℃;1H NMR(200MHz,CDCl3)δ1.33(d,J = 6Hz,6H,2CH3)3.51-3.75(m,2H,H-6β+H-6a),4.28(dd,J= 3.3,9.8Hz,1H,H-6α),4.42-4.64(m,
1H,CH),5.50(d,J=63Hz,1H,H-11a),6.46(d,J=2.4Hz,1H,ArH),6.62(dd,J=2.4,
8.4Hz,1H,ArH),6.81-6.96(m,2H,ArH),7.13-7.29(m,2H,ArH),7.43(d,J = 8.5Hz,1H,
13
ArH);C-NMR(75.5MHz,CDCl3)δ22.00、40.15、66.36、66.99、77.78、103.50、110.21、
110.73、112.00、120.8、124.72、127.20、129.19、131.88、156.55、159.40;IR(KBr)744、
784、876、928、981、1038、1132、1174、1229、1279、1371、1461、1502、1577、1625、2925、2977、-1 +
3052cm ;MS(ESI)283(M+1).
[0153] 实施例-5
[0154] 3-(烯丙氧基)-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯(S-008-0625):
[0155]
[0156] 在室温将化合物6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(100mg,0.42mmol)溶解在DMF(5ml)中,并将NaH(10mg,0.42mmol)添加到该溶液,然后加入稀丙基溴化物(0.07ml,0.84mmol)。在室温将该反应混合物搅拌6小时并倒入冰水中,以及用10%HCl中和得到白色沉淀物。用水洗涤沉淀物并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到3-(烯丙氧基)-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯(58mg,50%),白色固体。
[0157] 白色固体;mp 72-74℃;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.56-3.72(m,2H,H-6β+H-6a),4.27(dd,J = 4.3,5.9Hz,1H,H-6a),4.52(d,J = 5.2Hz,2H,CH2),5.28(dd,J = 1.2,
10.5Hz,1H,CH),5.40(dd,J = 1.4,17.3Hz,1H,CH),5.49(d,J = 6.4Hz,1H,H-11a),
5.96-6.06(m,1H,CH),6.48(d,J= 6.5Hz,1H,ArH),6.66(dd,J= 2.4,8.5Hz,1H,ArH),
6.81-6.94(m,2H,ArH),7.13-7.22(m,1H,ArH),7.22-7.28(m,1H,ArH),7.43(d,J =
13
8.6Hz,1H,ArH);C NMR(75.5MHz,CDCl3)δ40.12、66.36、68.87、77.7、102.56、109.83、
110.22、112.42、117.89、120.88、124.74、127.25、129.23、131.91、132.95、156.52、159.35、
160.00;IR(KBr)757、803、833、869、888、907、931、995、1033、1086、1111、1178、1230、1266、-1
1304、1337、1385、1432、1461、1478、1504、1585、1619、2898、2925、2989、3016、3050cm ;
+
MS(ESI)280(M+1).
[0158] 实施例-6
[0159] (4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-基氧基)-乙腈(S-007-1501):
[0160]
[0161] 在室温将化合物4-甲基-6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(100mg,0.34mmol)溶解在DMF(5ml)中并将NaH(8.1mg,0.34mmol)添加到该溶液,然后加入2-溴乙腈(0.05ml,0.68mmol)。在室温将该反应混合物搅拌6小时并倒入冰水中,以及用10%HCl中和得到白色沉淀物。用水洗涤沉淀物并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到3-异丙氧基-6a,11a-二氢-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯(63.5mg,55%),白色固体。
[0162] 白 色 固 体;mp 130-132 ℃;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ2.12(s,3H,CH3),3.56-3.74(m,2H,H-6β+H-6a),4.35(dd,J=4.0,6.0Hz,1H,H-6a),4.79(s,2H,OH,CH2),
5.53(d,J=6.5Hz,1H,H-11a),6.69(d,J=8.6Hz,1H,ArH),6.85(d,J=8.0Hz,1H,ArH),
6.87-6.96(m,1H,ArH),7.14-7.23(m,1H,ArH),7.27(d,J = 8.0Hz,1H,ArH),7.41(d,J= 8.6Hz,1H,ArH);13C NMR(75.5MHz,CDCl3)δ7.12、38.89、52.88、65.29、76.60、104.54、
108.89、113.90、114.70、119.67、123.47、125.73、127.51、127.97、153.48、154.22、156.11、
158.01;IR(KBr)753、798、825、891、934、986、1018、1121、1176、1234、1277、1316、1352、-1 -1 + +
1390、1481、1612cm ,2273cm (CN);MS(ESI)293,269(M,M+1-CN)。
[0163] 实施例-7
[0164] 6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(S-006-1709):
[0165]
[0166] 在0℃向7-羟基-3-(2-羟基苯基)-色烯-4-酮(3gm,11.8mmol)的无水乙醇(30ml)的搅拌溶液添加NaBH4(2.7gm,70.8mmol)。在室温将该反应混合物搅拌24小时。通过加冰水停止反应并用10%HCl中和该溶液得到白色沉淀物。用水洗涤该白色沉淀物并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(1.6gm,57%),白色固体。
[0167] 白 色 固 体;mp 148-152 ℃;1H NMR(200MHz,CDCl3)δ3.57-3.74(m,2H,H-6β+H-6a),4.22-4.33(m,1H,H-6cc),5.19(s,1H,OH,D2O交换),5.49(d,J=6.2Hz,1H,H-11a),6.42(d,J = 2.4Hz,1H,ArH),6.56(dd,J = 2.4,8.4Hz,1H,ArH),6.81-6.96(m,2H,ArH),7.17(d,J = 7.76Hz,1H,ArH),7.22-7.30(m,1H,ArH),7.41(d,J = 8.4Hz,
1H,ArH);IR(KBr)1017、1082、1122、1170、1222、1259、1289、1351、1381、1476、1516、1597、-1 +
3396cm (OH);MS(ESI)241(M+1)。
[0168] 实施例-8
[0169] 3-羟基-6H-苯并呋喃并[3,2-c]色烯-6-酮(S-008-400):
[0170]
[0171] 在DDQ(190.7mg,0.84mmol)的甲苯(10ml)溶液中将化合物6a,11a-二氢-6H-苯并[4,5]呋喃并[3,2-c]色烯-3-醇(100mg,0.42mmol)回流10小时。过滤沉淀的氢醌并从滤液中去除溶剂。通过硅胶柱和用氯仿-甲醇洗脱纯化该剩余物。
[0172] 白 色 固 体;mp 170-172 ℃;1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.90-6.97(m,2H,ArH),7.40-7.47(m,2H,ArH),7.60-7.68(m,1H,ArH),7.87(d,J=8.2Hz,1H,ArH),8.02-8.10(m,
1H,ArH);IR(KBr)746、773、807、855、951、1000、1122、1264、1309、1372、1440、1610、-1 +
1730(CO)、2927、3085cm ;MS(ESI)252(M+1)。
[0173] 新的异黄酮前体:
[0174] 实施例-9
[0175] 7,8-二羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮(S-007-1352):
[0176]
[0177] 在0℃将BF3-OEt2络合物(7ml,56mmol)逐渐添加到2-(2-甲氧苯基)-1-(2,3,4-三羟苯基)-乙酮(3.8gm,14mmol)的DMF溶液中。将得到的溶液搅拌30分钟。然后在50℃逐渐添加2,4,6-三甲苯基氯化物(1.5ml,42mmol)。然后将该溶液加热至110℃持续5小时。然后浓缩该混合物。用冰水处理剩余物并将得到的固体用硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到7,8-二羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮(0.98gm,25%),白色固体。
[0178] 白 色 固 体;mp 220-222 ℃;1H NMR(300MHz,CDCl3+DMSO)δ3.10(s,3H,OCH3),6.94-7.05(m,3H,ArH),7.25-7.38(m,2H,ArH),7.55-7.65(m,1H,ArH),7.98(s,1H,CH),
13
8.74(s,1H,OH),9.54(s,1H,OH);C NMR(50MHz,CDCl3+DMSO)δ60.85、110.37、119.53、
121.53、123.21、125.53、126.46、126.69、134.77、136.96、138.08、152.23、154.99、158.81、-1 +
162.73、180.92;IR(KBr)1629cm (CO);MS(ESI)285(M+1)。
[0179] 实施例-10
[0180] 7,8-二羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮(S-007-1351):
[0181]
[0182] 在-80℃向7,8-二羟基-3-(2-甲氧苯基)-4H-色烯-4-酮(2gm,7.1mmol)的干燥CH2Cl2(50ml)的搅拌溶液添加BBr3(1.4ml在DCM中,14.2mmol)。然后在-80℃将该反应混合物搅拌1小时和在室温搅拌12小时。然后用冰水停止反应。再用CH2Cl2提取该反应混合物并将有机层分离、用盐水洗涤,在Na2SO4上干燥并蒸发。剩余物通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到7,8-二羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮(0.95gm,50%),白色固体。
[0183] 白 色 固 体;mp 240-242 ℃;1H NMR(300MHz,CDCl3+DMSO)δ6.91-7.00(m,1H,ArH),7.01-7.13(m,2H,ArH),7.21(d,J = 7.6Hz,1H,ArH),7.25-7.35(m,1H,ArH),-17.72(d,J = 7.6Hz,1H,ArH),8.18(s,1H,CH),9.17(s,1H,OH);IR(KBr)1723cm (CO);
+
MS(ESI)271(M+1).
[0184] 实施例-11
[0185] 6-氯-7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮(S-007-1355):
[0186]
[0187] 在0℃将BF3-OEt2络合物(7ml,56mmol)逐渐添加到1-(5-氯-2,4-二羟苯基)-2-(2-甲氧苯基)-乙酮(4.1gm,14mmol)的DMF溶液中。将得到的溶液搅拌30分钟。然后在50℃逐渐添加2,4,6-三甲苯基氯化物(1.5ml,42mmol)。再将该溶液加热到110℃持续5小时。接着浓缩该溶液。剩余物用冰处理并将得到的固体用硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到6-氯-7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮(2.5gm,60%),白色固体。
[0188] 白 色 固 体;mp 228-230 ℃;1H NMR(300MHz,CDCl3+DMSO)δ3.79(s,3H,OCH3),6.95-7.09(m,3H,ArH),7.24-7.40(m,2H,ArH),7.91(s,1H,ArH),8.13(s,1H,CH),
13
10.85(s,1H,OH);C NMR(75.5MHz,CDCl3+DMSO)δ59.16、107.43、114.68、121.50、123.75、
123.90、124.32、125.70、130.29、133.23、135.11、157.33、159.60、160.96、161.45、178.50;
-1 +
IR(KBr)1625cm (CO);MS(ESI)303(M+1)。
[0189] 实施例-12
[0190] 6-氯-7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮(S-007-1354):
[0191]
[0192] 在-80℃向6-氯-7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-4H-色烯-4-酮(2.5gm,8.3mmol)的干燥CH2Cl2(25ml)的搅拌溶液添加BBr3(1.6ml在DCM中,16.6mmol)。然后将该反应混合物在-80℃搅拌1小时和在室温搅拌12小时。用冰水停止反应。然后用CH2Cl2提取该反应混合物并分离有机层,用盐水洗涤,在Na2SO4上干燥并蒸发。剩余物通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到6-氯-7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮(1.4gm,60%),白色固体。
1
[0193] 白 色 固 体;mp > 250 ℃;H NMR(300MHz,CDCl3+DMSO)δ6.95-7.04(m,3H,ArH),7.20-7.32(m,2H,ArH),8.11(s,1H,ArH),8.20(s,1H,CH),9.05(s,1H,OH);-1 +
IR(KBr)1625cm (CO);MS(ESI)289(M+1)。
[0194] 实施例-13
[0195] 7-羟基-3-(2-羟苯基)-8-甲基-色烯-4-酮(S-007-1498):
[0196]
[0197] 在-80℃向7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-8-甲基-4H-色烯-4-酮(5gm,17.7mmol)的干燥CH2Cl2(50ml)的搅拌溶液添加BBr3(3.4ml在DCM中,35.4mmol)。然后将该反应混合物在-80℃搅拌1小时和在室温搅拌12小时。然后用冰水停止反应。再用CH2Cl2提取该反应混合物并将有几层分离,用盐水洗涤,在Na2SO4上干燥并蒸发。剩余物通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到7-羟基-3-(2-羟苯基)-8-甲基-色烯-4-酮(3.5gm,72%),白色固体。
[0198] 白 色 固 体;mp 196-198 ℃;1H NMR(300MHz,CDCl3+DMSO)δ2.34(s,3H,CH3),6.90-7.06(m,3H,ArH),7.22-7.32(m,2H,ArH),7.95-8.04(m,1H,ArH),8.18(s,1H,CH),-1 +
10.18(s,1H,OH,D2O交换);IR(KBr)1625cm (CO);MS(ESI)269(M+1)。
[0199] 已知的异黄酮前体:
[0200] 实施例-14
[0201] 7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮(S-006-1710):
[0202]
[0203] 在0℃ 将BF3-OEt2络 合物(14ml,112mmol)逐 渐添 加到1-(2,4- 二羟 苯基)-2-(2-甲氧苯基)-乙酮(7.2gm,28mmol)的DMF溶液中。将得到的溶液搅拌30分钟。在50℃将2,4,6-三甲苯基氯化物(6.5ml,84mmol)逐渐添加到该溶液中。然后将溶液加热到110℃持续5小时。浓缩该混合物。剩余物用冰处理以及将所得固体通过硅胶色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮(5.6gm,75%),白色固体。
1
[0204] 白色 固体;mp 222-224℃;H NMR(200MHz,CDCl3+CD3OD)δ3.80(s,3H,OCH3),6.85-7.07(m,4H,ArH),7.23-7.41(m,2H,ArH),7.96(s,1H,CH),8.08(d,J = 8.8Hz,1H,-1 +
ArH);IR(KBr)1628cm (CO);MS(ESI)269(M+1)。
[0205] 实施例-15
[0206] 7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮(S-006-1711):
[0207]
[0208] 在-80℃向7-羟基-3-(2-甲氧苯基)-色烯-4-酮(5gm,18.7mmol)的干燥CH2Cl2(50ml)的搅拌溶液中添加BBr3(3.6ml在DCM中,37.4mmol)。然后将该反应混合物在-80℃搅拌1小时和在室温搅拌12小时。然后用冰水停止反应。用CH2Cl2提取该混合物以及分离有几层,用盐水洗涤,在Na2SO4上干燥并蒸发。剩余物通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到7-羟基-3-(2-羟苯基)-色烯-4-酮(3.8gm,80%),白色固体。
1
[0209] 白 色 固 体;mp 196-198 ℃;H NMR(200MHz,CDCl3+CD3OD)δ6.89-7.05(m,4H,ArH),7.20-7.36(m,2H,ArH),8.12(s,1H,CH),8.15(d,J = 9.04Hz,1H,ArH);
-1 +
IR(KBr)1621cm (CO);MS(ESI)255(M+1)。
[0210] 实施例-16
[0211] 3-(2,4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-色烯-4-酮(S-006-1713):
[0212]
[0213] 在0℃将BF3-OEt2络合物(14ml,112mmol)逐渐加到1-(2,4-二羟基-苯基)-2-(2,4-二甲氧基-苯基)-乙酮(8.1gm,28mmol)的DMF溶液中。将得到的溶液搅拌
30分钟。然后在50℃将2,4,6-三甲苯基氯化物(6.5ml,84mmol)逐渐加到该溶液中。将该溶液加热到110℃持续5小时。浓缩混合物。剩余物用冰处理,并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到3-(2,4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-色烯-4-酮(5.9gm,
70%),白色固体。
[0214] 白 色 固 体;mp 238-240 ℃;1H NMR(200MHz,CDCl3+CD3OD)δ3.78(s,3H,OCH3),3.85(s,3H,OCH3),6.53-6.59(m,2H,ArH),6.83-6.98(m,2H,ArH),7.20(d,J =-18.9Hz,1H,ArH)7.92(s,1H,CH),8.08(d,J = 8.8Hz,1H,ArH);IR(KBr)1621cm (CO);
+
MS(ESI)299(M+1)。
[0215] 实施例-17
[0216] 7-羟基-3-(2-羟基-4-甲氧基-苯基)-色烯-4-酮(S-006-1714):
[0217]
[0218] 在0℃将化合物3-(2,4-二甲氧基-苯基)-7-羟基-色烯-4-酮(2gm,6.7mmol)溶解在CH3CN(25ml)中,并将AlCl3(2.6gm,20mmol)添加到该溶液中。然后将该反应回流10小时。冷却该混合物,并倒入冰水中。将沉淀的固体过滤,用水洗涤并通过硅胶柱色谱法利用己烷-氯仿洗脱液进行纯化得到7-羟基-3-(2-羟基-4-甲氧基-苯基)-色烯-4-酮1
(0.95gm,50%),白色固体。白色固体;mp 210-212℃;H NMR(300MHz,CDCl3+CD3OD)δ3.86(s,3H,OCH3),6.51-6.65(m,2H,ArH),6.90(d,J = 1.9Hz,1H,ArH),7.03(dd,J =
2.2,10.28Hz,1H,ArH),7.13(d,J=8.4Hz,1H,ArH),8.07(s,1H,CH),8.15(d,J=8.9Hz,-1 +
1H,ArH);IR(KBr)1619cm (CO);MS(ESI)285(M+1)。
[0219] 生物评价
[0220] 评价本发明的纯化合物用于成骨骨形成的增强、预防或治疗雌激素缺乏或缺失的症状,包括哺乳动物的雌激素缺乏或缺失状态,特别是人类和其他动物中的骨质疏松症、骨形成、骨丢失。分离的本发明化合物的详细评价过程随后描述。在实验动物中进行本发明的S006-1709化合物的药代动力学评价,并描述详细过程。然而,在以下实施例中说明的活性实验不应认为是对本发明范围的限制。
[0221] 测定成骨性或骨形成活性的测定方法-14 -6
[0222] 在适当的溶剂中制备浓度范围为10 M到10 M的本发明的测试化合物的测试溶液。2μl每种浓度用于评价体内骨形成。在对照试验中,等量的适当溶剂用于替代测试药物。
[0223] 成骨细胞培养物
[0224] 成骨细胞产生自多能性间质干细胞。前成骨细胞的最富集的来源之一是新生大鼠或小鼠的颅顶。成骨细胞还存在于骨髓中。在培养过程中前成骨细胞经历三个成骨细胞的特有阶段,每个阶段具有阶段特异性基因的表达。这些阶段是:
[0225] ■增殖和分化:第1-12天
[0226] 基因-碱性磷酸酶、胶原蛋白-I、Osterix、cbfa1
[0227] ■细胞外基质成熟:第12-18天
[0228] 基因-骨钙素、骨桥蛋白、纤连蛋白
[0229] ■矿化作用:第14-35天
[0230] 特征-钙化作用(节结形成)
[0231] 利用轻微改性如前所述(Endocrinology 145:3451)制备新生大鼠颅顶细胞培养物。简言之,对于初级成骨细胞培养物,将来自新生Sprague-dawley大鼠(1-3天龄)的额骨和顶骨在0.1%胶原酶/0.1%分散酶的α-MEM溶液中消化得到5个连续的消化液。将第二到第五个消化液合并,在37℃和含5%CO2的空气中在α-MEM中生长融合,该α-MEM用10%胎血清(FBS)、2mM谷氨酸盐、100U/ml青霉素-链霉素、非必需氨基酸溶液和丙酮酸钠补充。
[0232] 在成骨细胞和破骨细胞中测试纯的化合物
[0233] MTT细胞增殖试验
[0234] 原理
[0235] 首先由Mosmann在1983描述的MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-联苯基四唑溴化物]试验是基于来自活细胞的线粒体脱氢酶切开淡黄色MTT的四唑环并形成深蓝色甲 (formazan)晶体的能力,所述甲 晶体对于细胞膜是基本不渗透的,因此导致在健康细胞中的积聚。通过添加清洁剂溶液化所述细胞导致释放被溶解的晶体。存活细胞数量与生成的甲 产物水平成正比。然后利用简单的比色测定可将颜色定量化。可在多井扫描分光光度计(Mosmann T.Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival:application to proliferation and cytotoxicity assays.J Immunol Methods.1983年
12月16日;65(1-2):55-63)读出结果。
[0236] 材料和方法
[0237] 在96孔板中以2.0×103个细胞/200μl的密度接种顶骨成骨细胞。将细胞生长至60%融合,然后用以下化合物S006-1709、S006-1710、S006-1711、S006-1713和S006-1714-10 -6
以10 M到10 M的浓度处理24小时。处理后去除培养基,在不含酚红的DMEM培养基中的溶液加入10mM MTT。
[0238] 在孵化4小时后去除MTT溶液。形成溶于DMSO的蓝色晶体,在读板仪上在570nm波长读出吸收值。
[0239] 结果-化合物S006-1709对成骨细胞的增殖没有影响(图1a)。
[0240] 对于成骨细胞分化的碱性磷酸酶活性
[0241] 在抗坏血酸盐和甘油磷酸盐的存在下用μM S006-1709处理70到80%融合的颅顶成骨细胞48小时。在孵化期结束时,通过利用对硝基苯磷酸盐(PNPP)作为底物的方法测定总ALP活性。该反应混合物包含二乙醇胺缓冲液(1mol/L,pH 9.8)、0.5mmol/L MgCl2-6H2O和10mmol/L PNPP。通过在405nm下取得由PNPP的脱磷酸形成的一定量的有-16 -6色产物的OD测定ALP活性。结果显示,与载体对照相比,由研究的10 M到10 M浓度的S006-1709处理的成骨细胞ALP活性显著增加(图3a)。另外,研究了S006-1709对颅顶成-12 -10
骨细胞的矿化作用的影响。数据显示通过茜素红提取,10 M和10 M的S006-1709对初期钙沉积的矿化作用与对照相比显著增加(图5)。
[0242] 最近的报道显示在响应多种生长因子方面,颅顶成骨细胞的响应不同于骨髓成骨细胞。显然,S006-1709在颅顶成骨细胞中作为生长和功能促进剂。在绝经后以及其他与年龄有关的骨丢失中,含有骨髓的脊柱骨受到影响。骨髓中的成骨细胞不能以骨丢失的速率形成骨。因此,促进成骨细胞的骨形成的能力是骨丢失疾病的最优选治疗模式。
[0243] 另外,还研究了S006-1709对骨髓成骨细胞的矿化作用的影响。数据显示,通过茜-12 -10素红提取,在第18天骨髓培养物中,在10 M和10 M浓度下,S006-1709对新生钙沉积的矿化作用与对照相比显著增加(图6)。S006-1710-利用与S006-1709类似的研究设计,我们没有观察到S006-1710的成骨细胞增殖作用(图1b)。
[0244] 然后我们研究了其在颅顶和骨髓成骨细胞中对成骨细胞分化的影响。在抗坏血-16 -6酸盐和甘油磷酸盐的存在下用10 M到10 M浓度的S006-1710处理融合的颅顶成骨细胞(70-80%)48小时。在孵化阶段结束时,用前述的相同方法使用对硝基苯磷酸盐(PNPP)作为底物测定总ALP活性。结果显示,与载体对照相比,在研究的全部浓度下用S006-1710处理显著提高成骨细胞的ALP活性(图3b)。
[0245] 发现如如茜素红染色所评价的,在10-12M和10-10M浓度下S006-1710刺激颅顶和骨髓成骨细胞的矿化作用,该茜素红染色测定沉积的新生钙的量。发现该影响与S006-1709的影响相似(图5)。另外,还研究了S006-1710对骨髓成骨细胞的矿化作用的影响。
[0246] 数据显示,通过茜素红提取,在第18天的骨髓培养物中,在10-12M和10-10M浓度下,S006-1710与对照相比显著提高新生钙沉积的矿化作用(图6)。
[0247] S006-1711-S006-1711对成骨细胞增殖没有任何影响(图1c),但在10-16M到10-6M-12 -10浓度下刺激来自颅顶和骨髓的成骨细胞的ALP活性(图3c)。在10 M和10 M浓度下,S006-1711还刺激颅顶和骨髓成骨细胞的矿化作用(图5和图6)。
[0248] S006-1713-S006-1713对成骨细胞增殖没有任何影响(图2a),以及发现对ALP活性的刺激也不显著(图4a)。
[0249] S006-1714-S006-1714对成骨细胞增殖没有任何影响(图2b),以及发现对ALP活性的刺激也不显著(图4b)。
[0250] 对于成骨细胞分化的碱性磷酸酶活性
[0251] S007-1351
[0252] 在抗坏血酸盐和甘油磷酸盐的存在下用S007-1351处理融合70到80%的颅顶成骨细胞48小时。在孵化阶段结束时,通过利用对硝基苯磷酸盐(PNPP)作为底物的方法测定总ALP活性。通过在405nm下取得由PNPP的脱磷酸形成的一定量的有色产物的OD测定-12 -6ALP活性。结果显示,与对照相比,在研究的10 M到10 M的浓度进行S007-1351的处理显著提高成骨细胞的ALP活性(图7)。
[0253] S006-1352
[0254] 在抗坏血酸盐和甘油磷酸盐的存在下以10-12M到10-6M浓度的S007-1352对70到80%融合的颅顶成骨细胞处理48小时。在孵化阶段结束时,通过利用对硝基苯磷酸盐(PNPP)作为底物的方法测定总ALP活性。结果显示,与载体对照相比,在研究的所有浓度下进行S007-1352的处理显著提高成骨细胞的ALP活性(图7)。
[0255] S007-1353用10-12M到10-6M浓度的S007-1353刺激的来自颅顶的成骨细胞的ALP活性(图7)。
[0256] S007-1495-用10-12M到10-6M浓度的S007-1495刺激的来自颅顶的成骨细胞的ALP活性(图7)。
[0257] S007-1500-用10-12M到10-6M浓度的S007-1500刺激的来自颅顶的成骨细胞的ALP活性(图7)。
[0258] S007-1354、S007-1355、S007-1496、S007-1497、S007-1498、S007-1499 和S007-1501-发现用这些化合物对ALP活性的刺激不显著。
[0259] 多种合成化合物的抗脂肪形成作用
[0260] 原理:本实验的目的是识别可抑制脂肪形成的合成化合物,因为已经显示脂肪形成的增加促进体内骨丢失。表征最好的体内脂肪形成模型是3T3-L1细胞系、Swiss 3T3小鼠细胞系的亚株。在正常条件下繁殖的3T3-L1细胞具有成纤维细胞的表型。然而,当用地塞米松、异丁基甲基黄嘌呤(IBMX或MIX)和胰岛素的组合处理时,3T3-L1细胞采用完整表型并在5天内开始在细胞内积聚脂滴形式的脂质。
[0261] 方法:
[0262] 脂肪形成方法(体外)
[0263] 在48孔板上以40,000细胞/孔接种3T3-L1细胞。在含有胎牛血清的DMEM中孵化这些细胞2天直到这些细胞形成融合。然后,在37℃、5%CO2下,用含有具有10%FCS的DMEM、IBMX和地塞米松的脂肪形成起始培养基中孵化这些细胞。两天后,用含有DMEM/10%FCS和胰岛素的脂肪形成进展培养基替换脂肪形成起始培养基,在37℃、5%CO2下孵化48小时。介质再逐渐变化为脂肪形成维持培养基,在37℃、5%CO2下孵化48小时。在实验第8天结束时,将细胞固定并用使脂滴染色的Oil Red O进行染色。提取染料并将提取的染料转移到96孔板,在读板仪上在490nm测定提取的Oil Red O的吸收。
[0264] 结果:
[0265] 在3T3L1细胞系中在两个浓度10-10M和10-12M下体外测试化合物S006-1709、S007-1351-53、S007-1495和S007-1500。图8A描述在实验第8天结束时形成的脂肪细胞。固定的细胞用Oil Red O染色。然后提取染料并定量。在所有化合物中,S006-1709、S007-1495和S007-1500在不同浓度下显著抑制脂肪形成(图8B)。化合物S007-1353在-1010 M下抑制脂肪形成,但发现统计学上并不显著。发现其他化合物S007-1351(两个浓-12
度)、S007-1352(两个浓度)和10 M浓度的S007-1353是脂肪形成的诱导剂而不抗脂肪形成的。
[0266] 雌激素性和抗雌激素性
[0267] 考虑到在更年期后女性中雌激素的促进癌症作用,它是迫使这些女性中止雌激素治疗的主要障碍,我们检测了纯的活性化合物的潜在雌激素性质。
[0268] 切除21天龄的未成年雌性大鼠(25-30克)的卵巢并给予手术后的7天休息。此后它们通过用测试药物(10mg/Kg体重)或载体或作为参考标准的乙炔雌二醇经口服治疗,连续三天。对于抗动情性,代替测试化合物,在治疗化学药品前每间隔15分钟给予乙炔雌二醇(0.01mg/kg)。最后一次治疗后24小时进行尸体解剖,并称取新鲜子宫的重量。
[0269] 化合物S006-1709是非雌激素性的,而发现S006-1710和S006-1711是雌激素性的(表1)。化合物S006-1709抗雌激素性的,而未发现S006-1710和S006-1711是抗雌激素性的(表1)。
[0270] 表1
[0271]
[0272] S-006-1709和S007-1500的体内功效
[0273] 因为发现S006-1709和S007-1500对所有成骨细胞的功能阶段即,增殖、分化和矿化作用具有刺激作用,以及还缺乏任何雌激素性,我们评估了S006-1709(表2)和S007-1500(表3)的体内功效。
[0274] 选择未成年的21天龄的雌性SD大鼠模型,将动物随机分成四组,并用日剂量的检测药物或载体治疗一个月,并在第31天进行尸体解剖。
[0275] 尸体解剖前一天,将动物转移到代谢笼,喂食食物和水使其适应24小时。适应后的动物再在代谢笼中停留24小时,给水但不给食物。24小时后收集血液和尿样。评估多种生物化学参数如血清钙、血清磷、血清骨钙素、血清碱性磷酸酶(ALP)。在第31天对动物进行尸体解剖并分离腰椎、股骨和胫骨,清洗并固定在70%乙醇盐水溶液中并在4℃保存直到BMD测定。尸体解剖时记录最初和最后的体重和子宫重量。利用骨密度计(Model 4500 Elite,Hologic)进行需要区域的BMD测定(腰椎:总体、L1-L4;股骨:总体、颈和中-骨干;胫骨:总体、近端和胫腓骨连接点),所述骨密度计装有商业可购得的软件(QDR 4500 ACCLAIM系列)用于扇束DXA系统,其可体内测定骨密度和测定小动物的身体组成。
[0276] 结果:对于10mg/kg剂量的S006-1709的,BMD显著增加,以及对于1.0和5.0mg/kg剂量的S007-1500在股骨和胫骨中的BMD显著增加。
[0277] 表2
[0278]
[0279] (当与模拟物的BMD比较时,***-p<0.001,**-p<0.01,*-p<0.05)。
[0280] 表3
[0281]
[0282] 数据显示相对于载体对照的增加%
[0283] (当与模拟物的BMD比较时,***-p<0.001,**-p<0.01,*-p<0.05)
[0284] 药代动力学研究:
[0285] 本发明化合物S006-1709的药代动力学评估在实验动物中进行,试验数据(表4)和详细过程描述如下:
[0286] 体内药代动力学参数通过以5mg/kg的剂量的口服途径给药在Sprague Dawley大鼠中产生。血液样品采集于0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、4.0、6、8、10、12、18、24、28、36和48小时,通过液相色谱-质谱分析(LC-MS)处理和分析。在不同时间点绘制血浆浓度以得到血浆浓度时间曲线,以及利用Win NonLin 5.1版本软件将数据非房室模型地拟合,以及通过SD平均值得出药代动力学参数的估算值。发现最大血浆浓度(Cmax)、达到最大血浆浓度的时间(tmax)、曲线下的面积(AUC)、消除半衰期(T1/2)和平均停留时间(MRT)分别是
17.533±1.76、15min、32.12±12.0hr.ng/ml、2.5hr和3.5hr。
[0287] 表4:口服剂量为5mg/kg时,S006-1709在SD大鼠中的药代动力学估算值
[0288]PK参数 在SD大鼠中口服剂量为5mg/kg时,SD大鼠中的S006-1709
Cmax 17.533±1.76
tmax 15min
AUC 32.12+12.0
T1/2 2.5h
MRT 3.5h
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