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美洲帘蛤多糖的制备方法

阅读:630发布:2023-01-23

专利汇可以提供美洲帘蛤多糖的制备方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开一种美洲帘蛤多糖的制备方法,依次按以下步骤进行:制美洲帘蛤肉糜制品;蛤肉糜制品与 水 匀浆,得到蛤肉糜浆;向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或 碱 性蛋白酶或复合蛋白酶酶解;用 风 味酶进一步酶解;向蛤肉酶解液中加入 盐酸 或氢 氧 化钠溶液,得到蛤肉酶解中和液;将蛤肉酶解中和液浓缩,离心去沉淀后,添加食盐得到蛤肉酶解盐溶液;向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入无水 乙醇 ,得到上清液和沉淀两部分;将沉淀物用丙 酮 洗涤,用Sevag 试剂 脱蛋白后,装入截留分子量为6000Da的 透析 袋中透析24h,得到粗多糖;将所得的粗多糖过DEAE-52 纤维 素离子交换柱,收集单一糖峰组分并采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化,浓缩,冻干,即得到美洲帘蛤多糖。,下面是美洲帘蛤多糖的制备方法专利的具体信息内容。

1.一种美洲帘蛤多糖的制备方法,其特征在于依次按以下步骤进行:
a.选取鲜活的美洲帘蛤,洗净后取肉,采用组织捣碎机捣碎,得到蛤肉糜制品;
b.蛤肉糜制品与质量比为1∶1~3匀浆,得到蛤肉糜浆;
c.向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或性蛋白酶或复合蛋白酶,采用1~4N氢化钠或盐酸调节pH,酶解1~5小时,得到蛤肉酶解液A;
d.将得到蛤肉酶解液A采用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH,用味酶进一步酶解1~
3h,得蛤肉酶解液B;
e.向蛤肉酶解液B中加入与c和d步骤等体积等当量的盐酸或氢氧化钠溶液,得到蛤肉酶解中和液;
f.将蛤肉酶解中和液浓缩至蛋白含量为3~10%,离心去沉淀后,添加食盐,使食盐终浓度达到1~2%,得到蛤肉酶解盐溶液;
g.向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入3~7倍体积的无水乙醇,摇匀后,在1~6℃下静置12~24小时,采用8000~12000转/分钟离心15~30分钟,得到上清液和沉淀两部分;将沉淀物用丙洗涤,用Sevag试剂脱蛋白后,装入截留分子量为6000Da的透析袋中透析24h,得到粗多糖;
h.将所得的粗多糖过DEAE-52纤维素离子交换柱,先用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液洗脱,再以0~2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱,流速为1~2mL/min,采用苯酚硫酸跟踪测定多糖,收集单一糖峰组分;
i.将得到的单一糖峰组分,采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化,用蒸馏水洗脱,流速为0.2mL/min,采用苯酚-硫酸法跟踪测定多糖,用自动收集器收集单一糖峰组分;
j.将收集的单一糖峰组分进行浓缩,冻干,即得到美洲帘蛤多糖。
2.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法,其特征在于所述c步骤是加入酶活单位为100万u/g的木瓜蛋白酶,加酶量为蛤肉质量的4.0~8.0%,用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH6.0~7.0,在温度为55~60℃条件下酶解1~5h。
3.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法,其特征在于所述c步骤是是加入酶活力单位为2.4AU/克的碱性蛋白酶,加酶量为蛤肉质量的1.0~1.5%,用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH7.5~8.0,在温度为55~60℃条件下酶解1~2h。
4.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法,其特征在于所述c步骤是加入酶活力单位为1.5AU/克的复合蛋白酶,加酶量为蛤肉质量的1.0~1.5%,用1~4N盐酸调节pH6.0~6.5,在温度为55~60℃条件下酶解3~5h。
5.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法,其特征在于所述d步骤是采用
1~4N氢氧化钠或盐酸调节蛤类酶解液A的pH至6.5~7.0,加入酶活力500LAPU/克的风味酶,加酶量为蛤肉质量的0.25~1.0%,在温度为45~50℃条件下,酶解1~3h。
6.根据权利要求1所述的美洲帘蛤多糖的制备方法,其特征在于所述g步骤是将离心后得到的上清液减压浓缩,回收乙醇,然后将浓缩液加热至90~98℃,保温10~15分钟后,再将浓缩液冷却至30℃以下或干燥得到蛤营养保健调味品

说明书全文

美洲帘蛤多糖的制备方法

技术领域:

[0001] 本发明涉及一种多糖的制备方法,尤其是一种操作简单、提取率高,可同时制备蛤类营养保健调味品的美洲帘蛤多糖的制备方法。背景技术:
[0002] 美洲帘蛤又称硬壳蛤,原产于美国及加拿大沿岸,是美国浅海和滩涂主要的经济双壳贝类之一,它与我国文蛤相似,同属帘蛤科,肉质细嫩,肉味鲜美,富含蛋白质,经济价值高,但与文蛤不同,它个体大,体内没有泥沙,可在多种底质的滩涂和浅海正常生长,适应好、生长快、耐受性强,除此之外美洲帘蛤还富含抗肿瘤、抗衰老、降血压、降血脂、增强免疫力和抗化等活性成分,在国际市场上供不应求。目前,对于多糖的提取大多采用以下两种方法:单一的乙醇提取法,不仅得率低,而且因提取物混杂大量的蛋白质给后续纯化带来麻烦;化学试剂沉淀多糖方法(如CPC等),提取多糖后所产生的副产物不能食用。发明内容:
[0003] 本发明是为了解决现有技术所存在的问题,提供一种操作简单、提取率高,可同时制备蛤类营养保健调味品的美洲帘蛤多糖的制备方法。
[0004] 本发明的技术解决方案是:一种美洲帘蛤多糖的制备方法,其特征在于依次按以下步骤进行:
[0005] a.选取鲜活的美洲帘蛤,洗净后取肉,采用组织捣碎机捣碎,得到蛤肉糜制品;
[0006] b.蛤肉糜制品与质量比为1∶1~3匀浆,得到蛤肉糜浆;
[0007] c.向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶或性蛋白酶或复合蛋白酶,采用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH,酶解1~5小时,得到蛤肉酶解液A;
[0008] d.将得到蛤肉酶解液A采用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH,用味酶进一步酶解1~3h,得蛤肉酶解液B;
[0009] e.向蛤肉酶解液B中加入与c和d步骤等体积等当量的盐酸或氢氧化钠溶液,得到蛤肉酶解中和液;
[0010] f.将蛤肉酶解中和液浓缩至蛋白含量为3~10%,离心去沉淀后,添加食盐至终浓度达到1~2%,得到蛤肉酶解盐溶液;
[0011] g.向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入3~7倍体积的无水乙醇,摇匀后,在1~6℃下静置12~24小时,采用8000~12000转/分钟离心15~30分钟,得到上清液和沉淀两部分;将沉淀物用丙洗涤,用Sevag试剂脱蛋白后,装入截留分子量为6000Da的透析袋中透析24h,得到粗多糖;
[0012] h.将所得的粗多糖过DEAE-52纤维素离子交换柱,先用0.02mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液洗脱,再以0~2mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱,流速为1~2mL/min,采用苯酚硫酸跟踪测定多糖,收集单一糖峰组分;
[0013] i.将得到的单一糖峰组分,采用Sephadex-G100凝胶层析柱作进一步分离纯化,用蒸馏水洗脱,流速为0.2mL/min,采用苯酚-硫酸法跟踪测定多糖,用自动收集器收集单一糖峰组分;
[0014] j.将收集的单一糖峰组分进行浓缩,冻干,即得到美洲帘蛤多糖。
[0015] 所述c步骤是加入酶活力单位为100万u/g的木瓜蛋白酶,加酶量为蛤肉质量的4.0~8.0%,用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH6.0~7.0,在温度为55~60℃条件下酶解1~5h。
[0016] 所述c步骤是是加入酶活力单位为2.4AU/克的碱性蛋白酶,加酶量为蛤肉质量的1.0~1.5%,用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH7.5~8.0,在温度为55~60℃条件下酶解1~2h。
[0017] 所述c步骤是加入酶活力单位为1.5AU/克的复合蛋白酶,加酶量为蛤肉质量的1.0~1.5%,用1~4N盐酸调节pH6.0~6.5,在温度为55~60℃条件下酶解3~5h。
[0018] 所述d步骤是采用1~4N氢氧化钠或盐酸调节蛤类酶解液A的pH至6.5~7.0,加入酶活力500LAPU/克的风味酶,加酶量为蛤肉质量的0.25~1.0%,在温度为45~50℃条件下,酶解1~3h。
[0019] 所述g步骤是将离心后得到的上清液减压浓缩,回收乙醇,然后将浓缩液加热至90~98℃,保温10~15分钟后,再将浓缩液冷却至30℃以下或干燥得到蛤营养保健调味品。
[0020] 本发明是以美洲帘蛤为原料,生产方法操作简单,所采用的复合酶解,有利于多糖的溶出,调节离子浓度和电荷(酸碱中和及添加氯化钠),有利于多糖的沉淀,比单一乙醇沉淀提取的粗多糖得率及纯度高;复合酶解的同时还可以得到抗氧化的保健成分和调味成分,既提供了美洲帘蛤多糖产品,又综合利用了副产物,提高了美洲帘蛤的附加值。具体实施方式:
[0021] 实施例1:
[0022] a.选取新鲜或活的美洲帘蛤,洗净后取肉,采用组织捣碎机捣碎,得到蛤肉糜制品;
[0023] b.蛤肉糜制品与水按质量比为1∶1~3匀浆,得到蛤肉糜浆;
[0024] c.向蛤肉糜浆中加入木瓜蛋白酶,酶活力单位为100万u/g,加酶量为蛤肉质量的4.0~8.0%,用1~4N氢氧化钠或盐酸调节pH6.0~7.0,在温度为55~60℃条件下酶解1~5h,得到蛤肉酶解液A;
[0025] d.将得到蛤肉酶解液A采用风味酶进一步酶解,采用1~4N氢氧化钠或盐酸调节蛤类酶解初液的pH至6.5~7.0,加入酶活力500LAPU/克的风味酶,加酶量为蛤肉质量的0.25~1.0%,在温度为45~50℃条件下,酶解1~3h,得蛤肉酶解液B;
[0026] e.向蛤肉酶解液B中加入与c和d步骤等体积等当量的盐酸或氢氧化钠溶液,以中和整个酶解过程中音调节pH值时所添加的氢氧化钠或盐酸溶液,得到蛤肉酶解中和液;
[0027] f.将蛤肉酶解中和液浓缩至蛋白含量为3~10%,离心去沉淀后,添加食盐,使食盐的浓度达到1~2%,得到蛤肉酶解盐溶液;
[0028] g.向得到的蛤肉酶解盐溶液中加入3~7倍体积的无水乙醇,摇匀后,在1~6℃下静置12~24小时,采用8000~12000转/分钟离心15~30分钟,得到上清液和沉淀
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