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HSP47表达的调节

阅读：892发布：2020-05-23

专利汇可以提供HSP47表达的调节专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文提供了调节靶基因，尤其是热休克蛋白47(hsp47)的表达的组合物、方法和试剂盒。所述组合物、方法和试剂盒可包括调节编码hsp47的基因，例如编码人hsp47的基因的核酸分子(例如，短干扰核酸(siNA)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)或短发夹RNA(shRNA))。本文公开的所述组合物和方法也可用于治疗与hsp47相关的病状和病症，例如肝纤维化、肺纤维化、腹膜纤维化和肾纤维化。，下面是HSP47表达的调节专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种双链核酸分子，其包含有义链和反义链的，其中所述有义链和反义链选自描述为SERPINH1_2(SEQ ID NO:60 和 127)、SERPINH1_6(SEQ ID NO:63 和 130)、SERPINH1_45a(SEQ ID NO:98 和 165)、SERPINH1_51(SEQ ID NO:101 和 168) 和SERPINH1_51a(SEQ ID NO:105和172)的寡核苷酸。
2.一种双链核酸分子，其中一条链包含SEQ ID NO:127而第二条链包含SEQ ID NO:60。
3.一种双链核酸分子，其中所述反义链为SEQ ID NO:127而有义链为SEQ ID NO:60。
4.一种双链核酸分子，其中所述反义链为SEQ ID NO:127并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置1、5、6或7的至少一处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的3’末端非核苷酸部分；并且所述有义链为SEQ ID NO:60并包括至少一个2’5’核糖核苷酸或
2’OMe修饰的核糖核苷酸，在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分。
5.一种双链核酸分子，其中所述反义链为SEQ ID NO:127并包括在位置3、5、9、11、13、
15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的非核苷酸部分；并且所述有义链为SEQ ID NO:60并包括于3’末端位置15、16、17、18和19(5’>3’)处的5个连续2’5’核糖核苷酸，在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基部分。
6.一种核酸分子(化合物_1)，其中所述反义链为SEQ ID NO:127并包括在位置3、5、
9、11、13、15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分；并且所述有义链为SEQ ID NO:60并包括于3’末端位置15、16、17、18和19(5’>3’)处的5个连续2’5’核糖核苷酸，在3’末端共价连接的C3Pi非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基部分；并且其进一步包括在所述反义链的位置1处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。
7.一种核酸分子(化合物6)，其中所述反义链为SEQ ID NO:127并包括在位置3、5、9、
11、13、15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分；并且所述有义链为SEQ ID NO:60并包括于3’末端位置15、16、17、18和19(5’>3’)处的5个连续2’5’核糖核苷酸，在3’末端共价连接的C3Pi非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基部分；并且其进一步包括在所述反义链的位置1处的2’5’核糖核苷酸。
8.一种核酸分子(化合物5)，其中所述反义链为SEQ ID NO:127并包括在位置1、3、
5、9、11、13、15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分；并且所述有义链为SEQ ID NO:60并包括在位置(5’>3’)7、13、16和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置9处的2’5’核糖核苷酸，在3’末端共价连接的C3非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基部分。
9.一种双链核酸分子，其中一条链包含SEQ ID NO:63而第二条链包含SEQ ID NO:130。
10.一种双链核酸分子，其中所述有义链为SEQ ID NO:63而所述反义链为SEQ ID NO:130。
11.一种双链核酸分子，其中所述有义链为SEQ ID NO:63并包括2’OMe糖修饰的嘧啶核糖核苷酸；在3’末端共价连接的非核苷酸部分；和在5’末端共价连接的帽部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:130并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在位置5、6或7的至少一处的2’-5’核糖核苷酸；和在3’末端共价连接的非核苷酸部分。
12.一种双链核酸分子，其中所述有义链为SEQ ID NO:63并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:130并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和在3’末端共价连接的非核苷酸部分。
13.一种双链分子(化合物2)，其中所述有义链为SEQ ID NO:63并包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:130并包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；和在位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分。
14.一种双链分子(化合物7)，其中所述有义链为SEQ ID NO:63并包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:130并包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；和在位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分。
15.一种双链核酸分子，其中一条链包含SEQ ID NO:98而第二条链包含SEQ ID NO:165。
16.一种双链核酸分子，其中所述有义链为SEQ ID NO:98而所述反义链为SEQ ID NO:165。
17.一种双链核酸分子，其中所述有义链为SEQ ID NO:98并包括在3’末端位置处的
2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:165并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在位置5、6或7的至少一处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的非核苷酸部分。
18.一种双链核酸分子(化合物3)，其中所述有义链为SEQ IDNO:98并包括在位置(5’>3’)15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的C3-OH3’部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:165并包括在位置(5’>3’)2、4、6、8、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。
19.一种双链核酸分子，其中一条链包含SEQ ID NO:101而第二条链包含SEQ ID NO:168。
20.一种双链核酸分子，其中所述有义链为SEQ ID NO:101而所述反义链为SEQ ID NO:168。
21.一种双链核酸分子，其中所述有义链为SEQ ID NO:101并包括2’OMe糖修饰的嘧啶核糖核苷酸，在位置9或10其中一处的任选2’-5’核糖核苷酸，在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:168并包括
2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置5、6或7的至少一处的2’5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的非核苷酸部分。
22.一种双链核酸分子(化合物4)，其中所述有义链为SEQ IDNO:101并包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置9处的2’-5’核糖核苷酸，在3’末端共价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:168并包括在位置(5’>3’)1、4、8、11和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置6处的2’5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分。
23.一种双链核酸分子(化合物8)，其中有义链为SEQ ID NO:101并包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在3’末端共价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:168并包括在位置(5’>3’)1、4、8、11和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置6处的2’5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分。
24.一种双链核酸分子(化合物9)，其中所述有义链为SEQ ID NO:101并包括在位置(5’>3’)2、4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在3’末端共价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且所述反义链为SEQ ID NO:168并包括在位置(5’>3’)1、4、8、11和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置6处的2’5’核糖核苷酸，在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分。
25.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于降低细胞中hsp47的表达。
26.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗与hsp47相关的疾病。
27.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗选自纤维化、肝纤维化、肝硬变、肺纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化、慢性肝损伤和原纤维形成的疾病。
28.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗肝纤维化。
29.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗肺纤维化。
30.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗肾纤维化。
31.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗腹膜纤维化。
32.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗慢性肝损伤。
33.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗原纤维形成。
34.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗选自归因于肝脏移植后丙型肝炎或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的肝硬变；特发性肺纤维化；导致肺纤维化的放射性肺炎；糖尿病性肾病；与持续性非卧床腹膜透析(CAPD)相关的腹膜硬化和眼部瘢痕性类天庖疮的疾病。
35.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗归因于肝脏移植后丙型肝炎或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的肝硬变。
36.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗特发性肺纤维化。
37.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗导致肺纤维化的放射性肺炎。
38.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗糖尿病性肾病。
39.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗与持续性非卧床腹膜透析(CAPD)相关的腹膜硬化。
40.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子、组合物、寡核苷酸或化合物，其用于治疗眼部瘢痕性类天庖疮。
41.一种核酸分子，其中：
(a)所述核酸分子包括有义链和反义链；
(b)所述核酸分子每条链的长度独立地为15-49个核苷酸；
(c)所述反义链的15-49核苷酸序列与编码hsp47的mRNA的序列互补；并且
(d)所述有义链的15-49核苷酸序列与所述反义链互补并包括编码hsp47的mRNA的
15-49核苷酸序列。
42.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸600-800之间的序列互补的序列。
43.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸801-899之间的序列互补的序列。
44.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸900-1000之间的序列互补的序列。
45.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸1001-1300之间的序列互补的序列。
46.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸674-693之间的序列互补的序列。
47.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸698-716之间的序列互补的序列。
48.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸698-722之间的序列互补的序列。
49.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸701-720之间的序列互补的序列。
50.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸920-939之间的序列互补的序列。
51.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸963-982之间的序列互补的序列。
52.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸947-972之间的序列互补的序列。
53.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸948-966之间的序列互补的序列。
54.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸945-969之间的序列互补的序列。
55.根据权利要求41所述的核酸分子，其中与编码人hsp47的mRNA的序列互补的所述反义链的所述序列包含与SEQ ID NO:1的核苷酸945-963之间的序列互补的序列。
56.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链包含选自以下的序列：SEQ ID NO:4或其一部分、SEQ ID NO:6或其一部分、SEQ ID NO:8或其一部分、SEQ ID NO:10或其一部分、SEQ ID NO:12或其一部分、SEQ ID NO:14或其一部分、SEQ ID NO:16或其一部分、SEQ ID NO:18或其一部分、SEQ ID NO:20或其一部分、SEQ ID NO:22或其一部分、SEQ ID NO:24或其一部分、SEQID NO:26或其一部分、SEQ ID NO:28或其一部分、SEQ ID NO:30或其一部分、SEQ ID NO:32或其一部分、SEQ ID NO:34或其一部分、SEQ ID NO:36或其一部分、SEQ ID NO:38或其一部分、SEQ IDNO:40或其一部分、SEQ ID NO:42或其一部分、SEQ ID NO:44或其一部分、SEQ ID NO:46或其一部分、SEQ ID NO:48或其一部分、SEQ ID NO:50或其一部分、SEQ ID NO:52或其一部分、SEQ ID NO:54或其一部分、SEQ ID NO:56或其一部分和SEQ ID NO:58或其一部分。
57.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链包含选自以下的序列：SEQ ID NO:3或其一部分、SEQ ID NO:5或其一部分、SEQ ID NO:7或其一部分、SEQ ID NO:9或其一部分、SEQ ID NO:11或其一部分、SEQ ID NO:13或其一部分、SEQ ID NO:15或其一部分、SEQ ID NO:17或其一部分、SEQ ID NO:19或其一部分、SEQ ID NO:21或其一部分、SEQ ID NO:23或其一部分、SEQID NO:25或其一部分、SEQ ID NO:27或其一部分、SEQ ID NO:29或其一部分、SEQ ID NO:31或其一部分、SEQ ID NO:33或其一部分、SEQ ID NO:35或其一部分、SEQ ID NO:37或其一部分、SEQ IDNO:39或其一部分、SEQ ID NO:41或其一部分、SEQ ID NO:43或其一部分、SEQ ID NO:45或其一部分、SEQ ID NO:47或其一部分、SEQ ID NO:49或其一部分、SEQ ID NO:51或其一部分、SEQ ID NO:53或其一部分、SEQ ID NO:55或其一部分和SEQ ID NO:57或其一部分。
58.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链长度独立地为17-35个核苷酸。
59.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链长度独立地为17-30个核苷酸。
60.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链长度独立地为15-25个核苷酸。
61.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链长度独立地为18-23个核苷酸。
62.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链长度独立地为19-21个核苷酸。
63.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链长度独立地为25-30个核苷酸。
64.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链长度独立地为26-28个核苷酸。
65.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为15-49个核苷酸的双链体区。
66.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为15-35个核苷酸的双链体区。
67.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为15-25个核苷酸的双链体区。
68.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为17-23个核苷酸的双链体区。
69.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为17-21个核苷酸的双链体区。
70.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为25-30个核苷酸的双链体区。
71.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为15-25个核苷酸的双链体区。
72.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链包含长度为25-28个核苷酸的双链体区。
73.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链为单独的多核苷酸链。
74.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链为单独的多核苷酸链；并且其中所述反义链和有义链通过氢键合形成双链结构。
75.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和有义链为单独的多核苷酸链；并且其中所述反义链和有义链通过共价键合连接。
76.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链为具有有义和反义区的多核苷酸单链的一部分。
77.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链为具有有义和反义区的多核苷酸单链的一部分；并且其中所述核酸分子具有发夹结构。
78.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在两端均具有平端。
79.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的两端均具有突出端。
80.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的两端均具有突出端；其中所述突出端的长度为1-8个核苷酸。
81.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的两端均具有突出端；其中所述突出端的长度为2个核苷酸。
82.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的两端均具有3’-突出端。
83.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的两端均具有3’-突出端；其中所述突出端的长度为2个核苷酸。
84.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的两端均具有5’-突出端。
85.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的两端均具有5’-突出端；其中所述突出端的长度为2个核苷酸。
86.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端。
87.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为1-8个核苷酸突出端。
88.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为3’-突出端。
89.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为2个核苷酸的3’-突出端。
90.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为3’-突出端；并且其中所述突出端在所述有义链上。
91.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为3’-突出端；并且其中所述突出端在所述反义链上。
92.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为5’-突出端。
93.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为2个核苷酸的5’-突出端。
94.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为5’-突出端；并且其中所述突出端在所述有义链上。
95.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子为双链分子并且在所述分子的一端具有平端而在所述分子的另一端具有突出端；其中所述突出端为5’-突出端；并且其中所述突出端在所述反义链上。
96.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中突出核苷酸为经修饰的核苷酸。
97.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中突出核苷酸为2’-脱氧核苷酸。
98.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中一个或多个突出核苷酸为经修饰的核苷酸。
99.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中一个或多个突出核苷酸为
2’-脱氧核苷酸。
100.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子选自表I所示核酸分子。
101.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个修饰或经修饰的核苷酸。
102.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个包含经修饰的糖部分的核苷酸。
103.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个包含经修饰的糖的核苷酸；并且其中所述经修饰糖部分独立地选自2’-O-甲基、2’-甲氧基乙氧基、2’-脱氧基、2’-氟、2’-烯丙基、2’-O-[2-(甲基氨基)-2-氧乙基]、4’-硫代、
4’-(CH2)2-O-2’-桥、2’-锁核酸或2’-O-(N-甲基氨基甲酸酯基)。
104.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个经修饰的核碱基。
105.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个经修饰的核碱基；并且其中所述一个或多个经修饰的核碱基独立地选自黄嘌呤、次黄嘌呤、
2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤代、氨基、巯基、硫代烷基、羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和无环核苷酸。
106.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个针对磷酸二酯主链的修饰。
107.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含一个或多个针对磷酸二酯主链的修饰；并且其中所述一个或多个针对磷酸二酯主链的修饰独立地选自硫代磷酸酯键、3’-(或-5’)脱氧-3’-(或-5’)硫代-硫代磷酸酯键、二硫代磷酸酯键、硒代磷酸酯键、3’-(或-5’)脱氧亚膦酸酯键、硼代磷酸酯键、3’-(或-5’)脱氧-3’-(或
5’-)氨基氨基磷酸酯氢膦酸酯键、硼代磷酸酯键、氨基磷酸酯键、烷基或芳基膦酸酯和磷酸三酯或磷键。
108.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子在所述有义链而非所述反义链中包含一个或多个修饰。
109.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子在所述反义链而非所述有义链中包含一个或多个修饰。
110.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述核酸分子在所述有义链和所述反义链中均包含一个或多个修饰。
111.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链包括交替修饰模式。
112.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式。
113.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式，并且其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分。
114.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式，并且其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分。
115.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式，其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分；并且其中所述模式从所述有义链5’端的经修饰的核苷酸开始。
116.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式，其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分；并且其中所述模式从所述反义链5’端的经修饰的核苷酸开始。
117.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式，其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分；并且其中所述模式从所述有义链3’端的经修饰的核苷酸开始。
118.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式，其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分；并且其中所述模式从所述反义链3’端的经修饰的核苷酸开始。
119.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链均包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式；其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分；并且所述模式经构型为使得所述有义链的经修饰的核苷酸与所述反义链上的未经修饰的核苷酸相对且反之亦然。
120.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和反义链均包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式；其中所述修饰为2’-O-甲基糖部分；并且所述模式经构型为使得所述有义链的每个经修饰的核苷酸与所述反义链上的经修饰的核苷酸相对。
121.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述反义链和/或所述有义链包括核酸分子。
122.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和/或反义链中的一者或两者在3’端包含1-3个脱氧核糖核苷酸。
123.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链和/或反义链中的一者或两者在5’端包含磷酸基团。
124.根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子，其中所述有义链包含至少一个缺口或间隙。
125.一种降低细胞中hsp47的表达的方法，所述方法包括按足以降低hsp47的表达的量向细胞内引入根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子。
126.根据权利要求125所述的方法，其中所述细胞为肝细胞星状细胞。
127.根据权利要求125所述的方法，其中所述细胞为肾或肺组织中或来自其中的星状细胞。
128.根据权利要求125所述的方法，其中在体外进行所述方法。
129.根据权利要求125所述的方法，其中在体内进行所述方法。
130.一种治疗患有hsp47相关疾病的个体的方法，所述方法包括按足以降低hsp47表达的量向所述个体施用根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子。
131.根据权利要求130所述的方法，其中所述hsp47相关疾病为选自纤维化、肝纤维化、肝硬变、肺纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化、慢性肝损伤和原纤维形成的疾病。
132.一种组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子和药学上可接受的载体。
133.一种组合物，其包含经包装以供患者使用的根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子。
134.根据权利要求132或133所述的组合物，其中所述组合物包括提供有关可如何使用根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子的某些信息的标签或药品说明书。
135.根据权利要求134所述的组合物，其中所述标签或药品说明书包括给药信息。
136.根据权利要求134或135所述的组合物，其中所述标签或药品说明书包括使用指南。
137.根据权利要求134-136中任一项所述的组合物，其中所述标签或药品说明书指出根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子适合用于治疗。
138.根据权利要求134-137中任一项所述的组合物，其中所述标签或药品说明书指出根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子适合用于治疗患有hsp47相关疾病的患者。
139.根据权利要求134-136中任一项所述的组合物，其中所述标签或药品说明书指出根据前述权利要求中任一项所述的核酸分子适合用于治疗患有选自纤维化、肝纤维化、肝硬变、肺纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化、慢性肝损伤和原纤维形成的疾病的患者。
140.一种双链寡核苷酸化合物，其具有结构(A1)：
(A1)5’(N)x–Z 3’(反义链)
3’Z’-(N’)y–z”5’(有义链)
其中N和N’各自为可未经修饰或经修饰的核苷酸，或非常规部分；
其中(N)x和(N’)y各自为其中每个连续N或N’通过共价键与下一个N或N’连接的寡核苷酸；
其中Z和Z’各自独立地存在或不存在，但如果存在则独立地包括在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；
其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分；
其中x和y各自独立地为18至40之间的整数；其中(N’)y的序列与(N)x的序列互补；并且其中(N)x包括SEQ ID NO:1的反义序列。
141.根据权利要求140所述的化合物，其中(N)x包括表A-19中存在的反义寡核苷酸。
142.根据权利要求141所述的化合物，其中(N)x包括SERPINH1_4、SERPINH1_12、SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58或SERPINH1_88中存在的反义寡核苷酸。
143.根据权利要求142所述的化合物，其中(N)x包括SERPINH1_4、SERPINH1_12、SERPINH1_30或SERPINH1_58中存在的反义寡核苷酸。
144.根据权利要求140所述的化合物，其中(N)x包括表B或C的任一个中存在的反义寡核苷酸。
145.根据权利要求140-144中任一项所述的化合物，其中x=y=19。
146.根据权利要求140-145中任一项所述的化合物，其中Z和Z’均不存在。
147.根据权利要求140-145中任一项所述的化合物，其中Z或Z’的其中一个存在。
148.根据权利要求147所述的化合物，其中Z或Z’独立地为选自脱碱基脱氧核糖部分、脱碱基核糖部分、反向脱碱基脱氧核糖部分、反向脱碱基核糖部分、C3部分、C4部分、C5部分、氨基-6部分的非常规部分。
149.根据权利要求148所述的化合物，其中Z或Z’独立地选自C3和氨基-C6部分。
150.根据权利要求140-149中任一项所述的化合物，其中N或N’的至少一个包含2’糖修饰的核糖核苷酸。
151.根据权利要求150所述的化合物，其中所述2’糖修饰的核糖核苷酸包含氨基、氟、烷氧基或烷基部分的存在。
152.根据权利要求151所述的化合物，其中所述2’糖修饰的核糖核苷酸包含2’-OCH3。
153.根据权利要求140-152中任一项所述的化合物，其中(N)x包含交替2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和未经修饰的核糖核苷酸。
154.根据权利要求153所述的化合物，其中(N)x包含至少5个交替2’OMe糖修饰和未经修饰的核糖核苷酸。
155.根据权利要求154所述的化合物，其中(N)x在位置2、4、6、8、11、13、15、17和19处包含2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。
156.根据权利要求154所述的化合物，其中(N)x在位置1、3、5、7、9、11、13、15、17和
19处包含2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。
157.根据权利要求140-152中任一项所述的化合物，其中(N)x包含2’OMe修饰的嘧啶核糖核苷酸。
158.根据权利要求157所述的化合物，其中(N)x中的所有嘧啶核糖核苷酸均包含
2’OMe修饰的嘧啶核糖核苷酸。
159.根据权利要求140-158中任一项所述的化合物，其中(N)x包含在位置6或
7(5’>3’)处的L-DNA部分。
160.根据权利要求140-159中任一项所述的化合物，其中(N)y包含至少一个选自镜像核苷酸2’-5’核糖核苷酸的非常规部分。
161.根据权利要求160所述的化合物，其中所述非常规部分为镜像核苷酸。
162.根据权利要求161所述的化合物，其中所述镜像核苷酸为L-脱氧核糖核苷酸(L-DNA)。
163.根据权利要求150-162中任一项所述的化合物，其中(N’)y由位置1-17和19处的未修饰核糖核苷酸和3’倒数第二个位置(位置18)处的一个L-DNA组成。
164.根据权利要求163所述的化合物，其中(N’)y由位置1-16和19处的未修饰核糖核苷酸和3’倒数第二个位置(位置17和18)处的两个连续L-DNA组成。
165.根据权利要求160所述的化合物，其中所述非常规部分为通过2’-5’核苷酸间磷酸键与相邻核苷酸连接的核苷酸。
166.根据权利要求165所述的化合物，其中通过2’-5’核苷酸间磷酸键与相邻核苷酸连接的核苷酸进一步包含3’-O-甲基(3’OMe)糖修饰。
167.一种双链寡核苷酸化合物，其具有以下所示结构(A2)：
1
(A2)5’N-(N)x-Z 3’(反义链)
2
3’Z’-N-(N’)y-z”5’(有义链)
2
其中N、N和N’各自为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸或非常规部分；
其中(N)x和(N’)y各自为其中每个连续N或N’通过共价键与相邻N或N’连接的寡核苷酸；
其中x和y各自独立地为17至39之间的整数；
其中(N’)y的序列与(N)x的序列互补并且(N)x与靶RNA中的连续序列互补；
1
其中N 与(N)x共价结合并且与所述靶RNA错配或为所述靶RNA的互补DNA部分；
1
其中N 选自天然或经修饰的尿苷、脱氧核糖尿苷、核糖胸苷、脱氧核糖胸苷、腺苷或脱氧腺苷；
2
其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分；
其中Z和Z’各自独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸、连续非核苷酸部分或其组合。
168.根据权利要求167所述的化合物，其中x=y=18。
169.根据权利要求168所述的化合物，其中(N)x和(N’)y的寡核苷酸选自表D和E中所示的一对寡核苷酸。
170.根据权利要求167所述的化合物，其中(N)x包含表A-18中存在的反义寡核苷酸。
171.根据权利要求170所述的化合物，其中(N)x包含SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPINH1_52 或SERPINH1_86中存在的反义寡核苷酸。
172.根据权利要求171所述的化合物，其中(N)x包含SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPINH1_52或SERPINH1_86中存在的反义寡核苷酸。
173.一种药物组合物，其包含根据权利要求140-172中任一项所述的化合物和药学上可接受的载体的。
174.一种治疗患有选自以下的疾病或病状的受试者的方法：纤维化病状例如肝纤维化；出于任何原因的肾纤维化(包括ESRD在内的CKD)；肺纤维化(包括ILF)；骨髓纤维化，与所有可能类型的意外及医原性(手术)皮肤损伤相关的异常瘢痕形成(瘢痕瘤)；硬皮病；心肌纤维化、青光眼滤过手术失败；肠粘连；所述方法包括按治疗所述疾病或病状有效的量向所述受试者施用抑制HSP47表达的siRNA化合物。

说明书全文

HSP47表达的调节

[0001] 相关专利申请

[0002] 本申请要求2010年8月9日提交的美国临时申请序列号61/372,072、2010年2月23日提交的美国临时申请序列号61/307,412和2009年12月9日提交的美国临时申请
序列号61/285,149的权益，各自标题均为“HSP47表达的调节”并且出于种种目的通过引用
整体并入本文。

[0003] 序列表

[0004] 本申请含有标题为220-PCT1_ST25_07-Dec-10.txt的序列表，2010年12月7日创建的所述ASCII拷贝，并且大小为533kb，据此通过引用整体并入。

[0005] 发明领域

[0006] 本文提供了调节hsp47表达的组合物和方法。

[0007] 发明背景

[0008] Sato,Y.等公开了施用维生素A偶联脂质体以将针对gp46（人热休克蛋白47的大鼠同系物）的小干扰RNA(siRNA)递送至肝硬变大鼠动物模型中。Sato,Y.等，Nature
Biotechnology，第26(4)卷，第431-442页(2008)。

[0009] Chen,J-J.等公开了用HSP47-shRNA(小发夹RNA)转染人瘢痕瘤样品以检查瘢痕瘤成纤维细胞的增殖。Chen,J-J.等，British Journal of Dermatology，第156卷，第
1188-1195页(2007)。

[0010] PCT专利申请No.WO 2006/068232公开了一种星形胶质细胞特异性药物载体，其包括类维生素A衍生物和/或维生素A类似物。

[0011] 发明概述

[0012] 本文提供了调节靶基因表达的组合物、方法和试剂盒。在各个方面和实施方案中，本文提供的组合物、方法和试剂盒调节也称为SERPINH1的热休克蛋白47(hsp47)的表达。
所述组合物、方法和试剂盒可牵涉使用结合编码hsp47的核苷酸序列(例如mRNA序列)，例
如SEQ ID NO:1例示的人hsp47的mRNA编码序列的核酸分子(例如，短干扰核酸(siNA)、
短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)或短发夹RNA(shRNA))。在某些优选
的实施方案中，本文公开的组合物、方法和试剂盒抑制hsp47的表达。例如，提供了siNA分
子(例如RISC长度dsNA分子或Dicer长度dsNA分子)以降低或抑制hsp47表达。还提供
了治疗和/或预防hsp47相关疾病、病状或病症的组合物、方法和试剂盒，所述hsp47相关
疾病、病状或病症为例如肝纤维化、肝硬变、包括肺脏纤维化在内的肺纤维化(包括ILF)、
由任何病状引起的肾纤维化(例如，包括ESRD在内的CKD)、腹膜纤维化、慢性肝损伤、原纤
维形成、其它器官的纤维化疾病、与所有可能类型的意外及医原性(手术)皮肤损伤相关的
异常瘢痕形成(瘢痕瘤)；硬皮病；心肌纤维化、青光眼滤过手术失败；和肠粘连。

[0013] 一方面，提供了核酸分子(例如，siNA分子)，其中(a)核酸分子包括有义链和反义链；(b)核酸分子的每条链长度独立地为15-49个核苷酸；(c)反义链的15-49核苷酸序
列与编码人hsp47的mRNA的序列(例如，SEQ ID NO:1)互补；并且(d)有义链的15-49核
苷酸序列与反义链的序列互补并包括编码人hsp47的mRNA的15-49核苷酸序列(例如，SEQ
ID NO:1)。

[0014] 在某些实施方案中，与编码人hsp47的mRNA的序列互补的反义链的序列包括与SEQ ID NO:1的核苷酸600-800或801-899或900-1000或1001-1300之间，或SEQ ID NO:1
的核苷酸650-730或900-975之间的序列互补的序列。在一些实施方案中，反义链包括与对
应于以下的编码人hsp47的mRNA的序列互补的序列：SEQ ID NO:1的核苷酸674-693或其
一部分，或SEQ ID NO:1的核苷酸698-716或其一部分，或SEQ ID NO:1的核苷酸698-722或
其一部分，或SEQID NO:1的核苷酸701-720或其一部分，或SEQ ID NO:1的核苷酸920-939
或其一部分，或SEQ ID NO:1的核苷酸963-982或其一部分，或SEQ ID NO:1的核苷酸
947-972或其一部分，或SEQ ID NO:1的核苷酸948-966或其一部分，或SEQ ID NO:1的核
苷酸945-969或其一部分，或SEQ ID NO:1的核苷酸945-963或其一部分。

[0015] 在某些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链包括对应于以下的序列：SEQ ID NO:4或其一部分；或SEQ IDNO:6或其一部分；或SEQ ID NO:8或其
一部分；或SEQ ID NO:10或其一部分；或SEQ ID NO:12或其一部分；或SEQ ID NO:14或
其一部分；或SEQ ID NO:16或其一部分；或SEQ ID NO:18或其一部分；或SEQ ID NO:20
或其一部分；或SEQ ID NO:22或其一部分；或SEQ ID NO:24或其一部分；或SEQ ID NO:26
或其一部分；或SEQID NO:28或其一部分；或SEQ ID NO:30或其一部分；或SEQ ID NO:32
或其一部分；或SEQ ID NO:34或其一部分；或SEQ ID NO:36或其一部分；或SEQ ID NO:38
或其一部分；或SEQ ID NO:40或其一部分；或SEQ ID NO:42或其一部分；或SEQ ID NO:44
或其一部分；或SEQ ID NO:46或其一部分；或SEQ ID NO:48或其一部分；或SEQ ID NO:50
或其一部分；或SEQ ID NO:52或其一部分；或SEQID NO:54或其一部分；或SEQ ID NO:56
或其一部分和SEQ ID NO:58或其一部分。在某些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，
siNA分子)的有义链包括对应于以下的序列：SEQ ID NO:3或其一部分；或SEQ ID NO:5或
其一部分；或SEQ ID NO:7或其一部分；或SEQID NO:9或其一部分；或SEQ ID NO:11或其
一部分；或SEQ ID NO:13或其一部分；或SEQ ID NO:15或其一部分；或SEQ ID NO:17或
其一部分；或SEQ ID NO:19或其一部分；或SEQ ID NO:21或其一部分；或SEQ ID NO:23
或其一部分；或SEQ ID NO:25或其一部分；或SEQ ID NO:27或其一部分；或SEQ ID NO:29
或其一部分；或SEQ ID NO:31或其一部分；或SEQ ID NO:33或其一部分；或SEQID NO:35
或其一部分；或SEQ ID NO:37或其一部分；或SEQ ID NO:39或其一部分；或SEQ ID NO:41
或其一部分；或SEQ ID NO:43或其一部分；或SEQ ID NO:45或其一部分；或SEQ ID NO:47
或其一部分；或SEQ ID NO:49或其一部分；或SEQ ID NO:51或其一部分；或SEQ ID NO:53
或其一部分；或SEQ ID NO:55或其一部分和SEQ ID NO:57或其一部分。

[0016] 在某些优选的实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链包括与表A-19所示任一反义序列相对应的序列。在某些优选的实施方案中，反
义链和有义链选自表A-19中所示序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链选自
SERPINH1_4、SERPINH1_12、SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58 和 SERPINH1_88 中
所示序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_4(SEQ ID NO:195和
220)、SERPINH1_12(SEQ ID NO:196 和 221)、SERPINH1_30(SEQ ID NO:199 和 224) 和
SERPINH1_58(SEQ ID NO:208和233)中所示序列对。

[0017] 在一些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链和有义链包括SERPINH1_4(SEQ ID NO:195和220)中所示的序列对。在一些实施方案中，本文公开的核
酸分子(例如，siNA分子)的反义链和有义链包括SERPINH1_12(SEQ ID NO:196和221)中
所示的序列对。在一些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链和有
义链包括SERPINH1_30(SEQ ID NO:199和224)中所示的序列对。在一些实施方案中，本文
公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链和有义链包括SERPINH1_58(SEQ ID NO:208
和233)中所示的序列对。

[0018] 在某些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链包括与表B或C的任一个所示的任一反义序列相对应的序列。

[0019] 在某些优选的实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链包括与表A-18所示任一反义序列相对应的序列。在某些优选的实施方案中，反义链和有义
链选自表A-18中所示的序列对。在一些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA
分子)包括选自SERPINH1_2(SEQ ID NO:60和127)、SERPINH1_6(SEQ ID NO:63和130)、
SERPINH1_11(SEQ ID NO:68和135)、SERPINH1_13(SEQID NO:69和136)、SERPINH1_45(SEQ
ID NO:97和164)、SERPINH1_45a(SEQ ID NO:98和 165)、SERPINH1_51(SEQ ID NO:101
和168)、SERPINH1_52(SEQ ID NO:102和169)或SERPINH1_86(SEQ ID NO:123和190)
中所示序列对的反义链和有义链。在一些优选的实施方案中，反义链和有义链选自
SERPINH1_2(SEQ ID NO:60和127)、SERPINH1_6(SEQ ID NO:63和130)、SERPINH1_45a(SEQ
ID NOS:98和165)和SERPINH1_51(SEQ ID NO:101和168)中所示的序列对。

[0020] 在一些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)包括选自SERPINH1_2(SEQ ID NO:60和127)中所示序列对的反义链和有义链。在一些实施方
案中，反义链和有义链包括SERPINH1_6(SEQ ID NO:63和130)中所示的序列对。在
一些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)包括SERPINH1_11(SEQ ID
NO:68和135)中所示序列对的反义链和有义链。在一些实施方案中，反义链和有义链为
SERPINH1_13(SEQ ID NO:69和136)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链
为SERPINH1_45(SEQ ID NO:97和164)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有
义链为SERPINH1_45a(SEQ ID NO:98和165)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链
和有义链为SERPINH1_51(SEQ ID NO:101和168)中所示的序列对。

[0021] 在某些实施方案中，本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的反义链包括与表D或E的任一个所示的任一反义序列相对应的序列。

[0022] 在本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的各个实施方案中，反义链长度可为15-49个核苷酸(例如，长度为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、
31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸)；或长度为
17-30个核苷酸；或长度为15-25个核苷酸；或长度为18-25个核苷酸；或长度为18-23个
核苷酸；或长度为19-21个核苷酸；或长度为25-30个核苷酸；或长度为26-28个核苷酸。
在本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的一些实施方案中，反义链长度可为19个核苷
酸。类似地，在本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的有义链长度可为15-49个核苷酸
(例如，长度为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、
36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸)；或长度为17-35个核苷酸；
或长度为17-30个核苷酸；或长度为15-25个核苷酸；或长度为18-25个核苷酸；或长度为
18-23个核苷酸；或长度为19-21个核苷酸；或长度为25-30个核苷酸；或长度为26-28个
核苷酸。在本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的一些实施方案中，有义链长度可为
19个核苷酸。在本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的一些实施方案中，反义链和有
义链长度可为19个核苷酸。本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的双链体区长度可为
15-49个核苷酸(例如，约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、
33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸)；或长度为15-35个核苷酸；或长度为15-30个核苷酸；或长度为15-25个核苷酸；或长度为17-25个核苷酸；
或长度为17-23个核苷酸；或长度为17-21个核苷酸；或长度为25-30个核苷酸；或长度为
25-28个核苷酸。在本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的各个实施方案中，双链体区
长度可为19个核苷酸。

[0023] 在某些实施方案中，本文提供的核酸分子(例如，siNA核酸分子)的有义链和反义链为单独的多核苷酸链。在一些实施方案中，单独的反义链和有义链通过氢键合，例如沃
森-克里克碱基配对(Watson-Crick base pairing)来形成双链结构。在一些实施方案中，
有义链和反义链为两个相互共价连接的单独链。在其它实施方案中，有义链和反义链为具
有有义和反义区的多核苷酸单链的一部分；在一些优选的实施方案中多核苷酸链具有发夹
结构。

[0024] 在某些实施方案中，核酸分子(例如，siNA分子)为关于突出端对称并且在两端均具有平端的双链核酸(dsNA)分子。在其它实施方案中，核酸分子(例如，siNA分子)为
关于突出端对称并且在dsNA分子两端均有突出端的dsNA分子；优选地，分子具有1、2、3、
4、5、6、7或8个核苷酸的突出端；优选地，分子具有2个核苷酸的突出端。在一些实施方案
中突出端为5’突出端；在替代性实施方案中突出端为3’突出端。在某些实施方案中，突出
核苷酸经本文公开的修饰所修饰。在一些实施方案中，突出核苷酸为2’-脱氧核苷酸。

[0025] 在某些实施方案中，核酸分子(例如，siNA分子)为关于突出端不对称并且在所述分子的一端具有平端而在分子的另一端具有突出端的dsNA分子。在某些实施方案中，突
出端为1、2、3、4、5、6、7或8个核苷酸；优选地，突出端为2个核苷酸。在一些优选的实施方案中，不对称dsNA分子在有义链上出现的双链体的一侧具有3’-突出端(例如2个核苷
酸的3’-突出端)；而在分子的另一侧具有平端。在一些优选的实施方案中，不对称dsNA
分子在有义链上出现的双链体的一侧具有5’-突出端(例如2个核苷酸的5’-突出端)；
而在分子的另一侧具有平端。在其它优选的实施方案中，不对称dsNA分子在反义链上出现
的双链体的一侧具有3’-突出端(例如2个核苷酸的3’-突出端)；而在分子的另一侧具
有平端。在一些优选的实施方案中，不对称dsNA分子在反义链上出现的双链体的一侧具有
5’-突出端(例如2个核苷酸的5’-突出端)；而在分子的另一侧具有平端。在某些优选
的实施方案中，突出端为2’-脱氧核苷酸。

[0026] 在一些实施方案中，核酸分子(例如，siNA分子)具有发夹结构(在一个多核苷酸上具有有义链和反义链)，其中一端具有环结构而另一端具有平端。在一些实施方案中，
核酸分子具有发夹结构，其中一端具有环结构而另一端具有突出端(例如1、2、3、4、5、6、7或8个核苷酸突出端)；在某些实施方案中，突出端为3’-突出端；在某些实施方案中突出
端为5’-突出端；在某些实施方案中，突出端在有义链上；在某些实施方案中，突出端在反
义链上。

[0027] 在一些优选的实施方案中，核酸分子选自表I所示核酸分子。

[0028] 本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)可包括例如本文所述的一个或多个修饰或经修饰的核苷酸。例如，本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可包括具有经修饰糖
的经修饰的核苷酸；具有经修饰核碱基的经修饰的核苷酸；或具有经修饰磷酸基团的经修
饰的核苷酸。类似地，本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可包括经修饰的磷酸二酯
主链和/或可包括经修饰的末端磷酸基团。

[0029] 所提供的核酸分子(例如，siNA分子)可具有一个或多个包括例如本文所述经修饰糖部分的核苷酸。在一些优选的实施方案中，经修饰糖部分选自2’-O-甲基、2’-甲氧基
乙氧基、2’-脱氧基、2’-氟、2’-烯丙基、2’-O-[2-(甲基氨基)-2-氧乙基]、4’-硫代、
4’-(CH2)2-O-2’-桥、2’-锁核酸和2’-O-(N-甲基氨基甲酸酯基)。

[0030] 所提供的核酸分子(例如，siNA分子)可具有一个或多个例如本文所述经修饰的核碱基，所述经修饰的核碱基可优选为选自黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟
嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、5-卤代
尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶
(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤代、氨基、巯基、硫代烷基、羟基和其它8-取代的腺嘌呤
和鸟嘌呤、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和无环核苷酸中的
一个。

[0031] 所提供的核酸分子(例如，siNA分子)可具有一个或多个例如本文所述针对磷酸二酯主链的修饰。在一些优选的实施方案中，通过用硫代磷酸酯键、3’-(或-5’)脱
氧-3’-(或-5’)硫代-硫代磷酸酯键、二硫代磷酸酯键、硒代磷酸酯键、3’-(或-5’)脱
氧亚膦酸酯键、硼代磷酸酯键、3’-(或-5’)脱氧-3’-(或5’-)氨基氨基磷酸酯键、氢膦
酸酯键、硼代磷酸酯键、氨基磷酸酯键、烷基或芳基膦酸酯键和磷酸三酯键或磷键取代磷酸
二酯键来修饰磷酸二酯键。

[0032] 在各个实施方案中，提供的核酸分子(例如，siNA分子)可在有义链而非反义链中包括一个或多个修饰。在一些实施方案中，提供的核酸分子(例如，siNA分子)在反义链
而非有义链中包括一个或多个修饰。在一些实施方案中，提供的核酸分子(例如，siNA分
子)在有义链和反义链中包括一个或多个修饰。

[0033] 在提供的核酸分子(例如，siNA分子)具有修饰的一些实施方案中，有义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式，和/或反义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替
的模式；在这些实施方案的一些优选形式中，所述修饰为2’-O-甲基(2’甲氧基或2’OMe)
糖部分。经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式可从其中一条链的5’端或3’端处的经修
饰的核苷酸开始；例如经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式可从有义链5’端或3’端的
经修饰的核苷酸开始和/或经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式可从反义链5’端或3’
端的经修饰的核苷酸开始。当反义链和有义链包括经修饰和未经修饰的核苷酸交替的模式
时，经修饰的核苷酸模式可经构型为使得有义链上的经修饰的核苷酸与反义链上的经修饰
的核苷酸相对；或在所述模式中可存在相移，使得有义链的经修饰的核苷酸与反义链上的
未经修饰的核苷酸相对并且反之亦然。

[0034] 本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可包括有义链和/或反义链的3’端处的1-3个(即，1、2或3个)脱氧核苷酸。

[0035] 本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可包括有义链和/或反义链的5’端处的磷酸基团。

[0036] 在一方面，提供了具有结构(A1)的双链核酸分子：

[0037] (A1)5’(N)x–Z 3’(反义链)

[0038] 3’Z’-(N’)y–z”5’(有义链)

[0039] 其中N和N’各自为可未经修饰或经修饰的核苷酸，或非常规部分；

[0040] 其中(N)x和(N’)y各自为其中每个连续N或N’通过共价键与下一个N或N’连接的寡核苷酸；

[0041] 其中Z和Z’各自独立地存在或不存在，但如果存在则独立地包括在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；

[0042] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分；

[0043] 其中x和y各自独立地为18至40之间的整数；

[0044] 其中(N’)y的序列与(N)x的序列互补；并且其中(N)x包括SEQ ID NO:1的反义序列。在一些实施方案中，(N)x包括表A-19中存在的反义寡核苷酸。在其它实施方案中，
(N)x选自表B或C中存在的反义寡核苷酸。

[0045] 在一些实施方案中连接每个连续N或N’的共价键为磷酸二酯键。

[0046] 在一些实施方案中，x=y并且x和y各自为19、20、21、22或23。在各个实施方案中，x=y=19。

[0047] 在本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)的一些实施方案中，双链核酸分子为siRNA、siNA或miRNA。

[0048] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_4(SEQ ID NO:195和220)、SERPINH1_12(SEQ ID NO:196 和 221)、SERPINH1_30(SEQ ID NO:199 和 224) 和
SERPINH1_58(SEQ ID NO:208和233)中所示的序列对。

[0049] 在一些实施方案中，反义链和有义链为SERPINH1_4(SEQ ID NO:195和220)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链为SERPINH1_12(SEQ ID NO:196和221)
中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链为SERPINH1_30(SEQ ID NO:199和
224)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链为SERPINH1_58(SEQ ID NO:208
和233)中所示的序列对。

[0050] 在一些实施方案中，双链核酸分子包含处于反义链的位置1(5’末端)处的DNA部分或与靶标的错配物。本文描述了这种结构。根据一个实施方案，提供了具有以下所示结
构(A2)的经修饰的核酸分子：

[0051] (A2)5’N1-(N)x-Z 3’(反义链)

[0052] 3’Z’-N2-(N’)yz”5’(有义链)

[0053] 其中N2、N和N’各自为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸或非常规部分；

[0054] 其中(N)x和(N’)y各自为其中每个连续N或N’通过共价键与相邻N或N’连接的寡核苷酸；

[0055] 其中x和y各自独立地为17至39之间的整数；

[0056] 其中(N’)y的序列与(N)x的序列互补并且(N)x与靶RNA中的连续序列互补；

[0057] 其中N1与(N)x共价结合并且与靶RNA错配或为靶RNA的互补DNA部分；

[0058] 其中N1选自天然或经修饰的尿苷、脱氧核糖尿苷、核糖胸苷、脱氧核糖胸苷、腺苷或脱氧腺苷；

[0059] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分；并且

[0060] 其中Z和Z’各自独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸、连续非核苷酸部分或其组合。

[0061] 在一些实施方案中，(N’)y的序列与(N)x的序列完全互补。在各个实施方案中，2 1
N-(N’)y的序列与N-(N)x的序列互补。在一些实施方案中，(N)x包含与靶RNA中约17至
约39个连续核苷酸完全互补的反义序列。在其它实施方案中，(N)x包含与靶RNA中约17
至约39个连续核苷酸实质上互补的反义序列。

[0062] 在一些实施方案中，N1和N2形成沃森-克里克碱基对。在一些实施方案中，N1和2
N 形成非沃森-克里克碱基对。在一些实施方案中，在核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸之间
形成碱基对。

[0063] 在一些实施方案中，x=y=18，x=y=19或x=y=20。在优选的实施方案中，x=y=18。当1 1 2
N-(N)x中x=18时，N 指位置1并且位置2-19包括在(N)18中。当N-(N’)y中y=18时，
2
N 指位置19并且位置1-18包括在(N’)18中。

[0064] 在一些实施方案中，N1与(N)x共价结合并且与靶RNA错配。在各个实施方案中，1
N 与(N)x共价结合并且为与靶RNA互补的DNA部分。

[0065] 在一些实施方案中，反义链位置1处的尿苷经选自腺苷、脱氧腺苷、脱氧尿苷(dU)1 1
或脱氧胸苷的N 取代。在各个实施方案中，N 选自腺苷、脱氧腺苷或脱氧尿苷。

[0066] 在一些实施方案中，反义链位置1处的鸟苷经选自腺苷、脱氧腺苷、尿苷、脱氧尿1 1
苷、胸苷或脱氧胸苷的N 取代。在各个实施方案中，N 选自腺苷、脱氧腺苷、尿苷或脱氧尿
苷。

[0067] 在一些实施方案中，反义链位置1处的胞苷经选自腺苷、脱氧腺苷、尿苷、脱氧尿1 1
苷、胸苷或脱氧胸苷的N 取代。在各个实施方案中，N 选自腺苷、脱氧腺苷、尿苷或脱氧尿
苷。

[0068] 在一些实施方案中，反义链位置1处的腺苷经选自脱氧腺苷、脱氧尿苷、胸苷或脱1 1
氧胸苷的N 取代。在各个实施方案中，N 选自脱氧腺苷或脱氧尿苷。

[0069] 在一些实施方案中，N1和N2在尿苷或脱氧尿苷与腺苷或脱氧腺苷之间形成碱基1 2
对。在其它实施方案中，N 和N 在脱氧尿苷和腺苷之间形成碱基对。

[0070] 在一些实施方案中，双链核酸分子为siRNA、siNA或miRNA。本文提供的双链核酸分子也称为“双链体”。

[0071] 在一些实施方案中，(N)x包括表A-18中存在的反义寡核苷酸。在一些实施方案中，x=y=18并且N1-(N)x包括表A-18中存在的反义寡核苷酸。在一些实施方案中，x=y=19
或x=y=20。在某些优选的实施方案中，x=y=18。在一些实施方案中，x=y=18并且N1-(N)x
和N2-(N’)y的序列选自表A-18中所示的寡核苷酸对。在一些实施方案中，x=y-18并且
N1-(N)x和N2-(N’)y的序列选自表D和E中所示的寡核苷酸对。在一些实施方案中，反义
链和有义链选自SERPINH1_2(SEQ ID NO:60和127)、SERPINH1_6(SEQ ID NO:63和130)、
SERPINH1_11(SEQ ID NO:68和135)、SERPINH1_13(SEQ ID NO:69和136)、SERPINH1_45(SEQ
ID NO:97和164)、SERPINH1_45a(SEQ ID NO:98和 165)、SERPINH1_51(SEQ ID NO:101
和168)、SERPINH151a(SEQ ID NO:105 和172)、SERPINH1_52(SEQ ID NO:102 和 169)
或SERPINH1_86(SEQ ID NO:123和190)中所示的序列对。在一些优选的实施方案中，
反义链和有义链选自SERPINH1_2(SEQ ID NO:60和127)、SERPINH1_6(SEQ ID NO:63和
130)、SERPINH145a(SEQ ID NO:98 和 165)、SERPINH1_51(SEQ ID NOS:101 和 168) 和
SERPINH1_51a(SEQ ID NO:105和172)中所示的序列对。

[0072] 在一些优选的实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2(SEQ ID NO:60和127)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链为SERPINH1_6(SEQ ID NO:63
和130)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链为SERPINH1_11(SEQ ID
NO:68和135)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链为SERPINH1_13(SEQ
ID NO:69和136)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义链为
SERPINH1_45(SEQ ID NO:97和164)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和有义
链为SERPINH1_45a(SEQ ID NO:98和165)中所示的序列对。在一些实施方案中，反义链和
有义链为SERPINH1_51(SEQ ID NO:101和168)中所示的序列对。在一些实施方案中，反
义链和有义链为SERPINH1_51a(SEQ ID NO:105和172)中所示的序列对。在一些实施方
案中，反义链和有义链为SERPINH1_52(SEQ ID NO:102和169)中所示的序列对。在一些
实施方案中，反义链和有义链为(SEQ ID NO:123和190)中所示的序列对。在一些实施方
案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2(SEQ ID NO:60和127)、SERPINH1_6(SEQ ID NO:63
和130),SERPINH1_45a(SEQ ID NO:98和165),SERPINH1_51(SEQ ID NOS:101和168)和
SERPINH1_51a(SEQ ID NO:105和172)中所示的序列对。

[0073] 在一些实施方案中，N1和N2形成沃森-克里克碱基对。在其它实施方案中，N1和N2形成非沃森-克里克碱基对。在一些实施方案中，N1为经修饰的核糖腺苷或经修饰的核
糖尿苷。

[0074] 在一些实施方案中，N1和N2形成沃森-克里克碱基对。在其它实施方案中，N1和N2形成非沃森-克里克碱基对。在某些实施方案中，N1选自核糖腺苷、经修饰的核糖腺苷、
脱氧核糖腺苷、经修饰的脱氧核糖腺苷。在其它实施方案中，N1选自核糖尿苷、脱氧核糖尿
苷、经修饰的核糖尿苷和经修饰的脱氧尿苷。

[0075] 在某些实施方案中，反义链中的位置1(5’末端)包括脱氧核糖尿苷(dU)或腺苷。在一些实施方案中，N1选自核糖腺苷、经修饰的核糖腺苷、脱氧核糖腺苷、经修饰的脱氧核
糖腺苷并且N2选自核糖尿苷、脱氧核糖尿苷、经修饰的核糖尿苷和经修饰的脱氧尿苷。在
某些实施方案中，N1选自核糖腺苷和经修饰的核糖腺苷并且N2选自核糖尿苷和经修饰的
核糖尿苷。

[0076] 在某些实施方案中，N1选自核糖尿苷、脱氧核糖尿苷、经修饰的核糖尿苷和经修饰的脱氧尿苷并且N2选自核糖腺苷、经修饰的核糖腺苷、脱氧核糖腺苷、经修饰的脱氧核糖
腺苷。在某些实施方案中，N1选自核糖尿苷和脱氧尿苷并且N2选自核糖腺苷和经修饰的
核糖腺苷。在某些实施方案中，N1为核糖尿苷并且N2为核糖腺苷。在某些实施方案中，N1
为脱氧尿苷并且N2为核糖腺苷。

[0077] 在结构(A2)的一些实施方案中，N1包括2’OMe糖修饰的核糖尿嘧啶或2’OMe糖修饰的核糖腺苷。在结构(A)的某些实施方案中，N2包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸或脱
氧核糖核苷酸。

[0078] 在结构(A2)的一些实施方案中，N1包括2’OMe糖修饰的核糖尿嘧啶或2’OMe糖修饰的核糖胞嘧啶。在结构(A)的某些实施方案中，N2包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。

[0079] 在一些实施方案中，N和N’各自为未经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，N或N’的至少一个包括经化学修饰的核苷酸或非常规部分。在一些实施方案中，非常规部分选
自镜像核苷酸、脱碱基核糖部分和脱碱基脱氧核糖部分。在一些实施方案中，非常规部分为
镜像核苷酸，优选为L-DNA部分。在一些实施方案中，N或N’的至少一个包括2’OMe糖修
饰的核糖核苷酸。

[0080] 在一些实施方案中，(N’)y的序列与(N)x的序列完全互补。在其它实施方案中，(N’)y的序列与(N)x的序列实质上互补。

[0081] 在一些实施方案中，(N)x包括与靶RNA中约17至约39个连续核苷酸完全互补的反义序列。在其它实施方案中，(N)x包含与靶RNA中约17至约39个连续核苷酸实质上互
补的反义序列。

[0082] 在结构A1和结构A2的一些实施方案中，化合物具有平端，例如其中Z和Z’均不存在。在替代性实施方案中，Z或Z’的至少一个存在。Z和Z’独立地包括一个或多个共价
连接的经修饰或未经修饰的核苷酸，包括脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸，或非常规部分，例
如反向脱碱基脱氧核糖部分或脱碱基核糖部分；非核苷酸C3、C4或C5部分、氨基-6部分、
镜像核苷酸等。在一些实施方案中，Z和Z’各自独立地包括C3部分或氨基-C6部分。在
一些实施方案中，Z’不存在而Z存在并包括非核苷酸C3部分。在一些实施方案中，Z不存
在而Z’存在并包括非核苷酸C3部分。

[0083] 在结构A1和结构A2的一些实施方案中，每个N由未经修饰的核糖核苷酸组成。在结构A1和结构A2的一些实施方案中，每个N’由未经修饰的核苷酸组成。在优选的实施方
案中，N和N’的至少一个为经修饰的核糖核苷酸或非常规部分。

[0084] 在其它实施方案中，结构A1或结构A2的化合物包括至少一个在糖残基中经修饰的核糖核苷酸。在一些实施方案中，化合物包括糖残基的2’位置处的修饰。在一些实施方
案中，2’位置处的修饰包括氨基、氟、烷氧基或烷基部分的存在。在某些实施方案中，2’修饰包括烷氧基部分。在优选的实施方案中，烷氧基部分为甲氧基部分(也称为2’-O-甲基；
2’OMe；2’-OCH3)。在一些实施方案中，核酸化合物包括位于反义链和有义链的其中一条
或两条上的2’OMe糖修饰的交替核糖核苷酸。在其它实施方案中，化合物包括仅位于反义
链(N)x或N1-(N)x上的2’OMe糖修饰核糖核苷酸。在某些实施方案中，反义链的中部核糖
核苷酸；例如19聚体(19-mer)链位置10处的核糖核苷酸未经修饰。在各个实施方案中，
核酸化合物包括至少5个交替的经2’OMe糖修饰和未经修饰的核糖核苷酸。在另外的实
施方案中，结构A1或结构A2的化合物包括交替位置处的经修饰核糖核苷酸，其中(N)x或
N1-(N)x的5’和3’末端的每个核糖核苷酸的糖残基被修饰，并且(N’)y或N2-(N)y的5’
和3’末端的每个核糖核苷酸的糖残基未经修饰。

[0085] 在一些实施方案中，双链分子包括以下修饰的一个或多个：

[0086] a)来自反义链5’末端的位置5、6、7、8或9的至少一处的N选自2’5’核苷酸或镜像核苷酸；

[0087] b)来自有义链5’末端的位置9或10的至少一处的N’选自2’5’核苷酸和假尿苷；并且

[0088] c)(N’)y的3’末端位置处4、5或6个连续位置中的N’包含2’5’核苷酸。

[0089] 在一些实施方案中，双链分子包括以下修饰的组合

[0090] a)反义链包括来自5’末端的位置5、6、7、8或9的至少一处的2’5’核苷酸或镜像核苷酸；并且

[0091] b)有义链包括来自5’末端的位置9或10处的2’5’核苷酸和假尿苷。

[0092] 在一些实施方案中，双链分子包括以下修饰的组合

[0093] a)反义链包括来自5’末端的位置5、6、7、8或9的至少一处的2’5’核苷酸或镜像核苷酸；并且

[0094] c)有义链包括4、5或6个位于3’倒数第二个或3’末端位置处的连续2’5’核苷酸。

[0095] 在一些实施方案中，有义链[(N)x或N1-(N)x]包括1、2、3、4、5、6、7、8或9个2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。在一些实施方案中，反义链包括在位置2、4、6、8、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。在其它实施方案中，反义链包括在位置1、3、5、7、9、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。在其它实施方案中，反义链包括在位置
3、5、7、9、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。在一些实施方案中，反义链包括一个或多个2’OMe糖修饰的嘧啶。在一些实施方案中，有义链包括2’OMe糖修饰的嘧
啶。

[0096] 在结构A1和结构A2的一些实施方案中，有义链和反义链3’和5’末端均未磷酸化。在其它实施方案中，有义链和反义链中的一者或两者3’末端被磷酸化。

[0097] 在结构A1和结构A2的一些实施方案中，(N)y包括至少一个选自镜像核苷酸、2’5’核苷酸和TNA的非常规部分。在一些实施方案中，非常规部分为镜像核苷酸。在各个实施
方案中，镜像核苷酸选自L-核糖核苷酸(L-RNA)和L-脱氧核糖核苷酸(L-DNA)。在优选
的实施方案中，镜像核苷酸为L-DNA。在某些实施方案中，有义链包含在位置9或10(来自
5’末端)处的非常规部分。在优选的实施方案中，有义链包括在位置9(来自5’末端)处
的非常规部分。在一些实施方案中，有义链长度为19个核苷酸并且包含在位置15(来自5’
末端)处的4、5或6个连续非常规部分。在一些实施方案中，有义链包括在位置15、16、17
和18处的4个连续2’5’核糖核苷酸。在一些实施方案中，有义链包括在位置15、16、17和
18处的5个连续2’5’核糖核苷酸。在各个实施方案中，有义链进一步包含Z’。在一些实
施方案中，Z’包括C3OH部分或C3Pi部分。

[0098] 在结构A1的一些实施方案中，(N’)y包括至少一个L-DNA部分。在一些实施方案中，x=y=19并且(N’)y由位置1-17和19处的未修饰核糖核苷酸和3’倒数第二个位置
(位置18)处的一个L-DNA组成。在其它实施方案中，x=y=19并且(N’)y由位置1-16和
19处的未修饰核糖核苷酸和3’倒数第二个位置(位置17和18)处的两个连续L-DNA组
成。在各个实施方案中，非常规部分为通过2’-5’核苷酸间磷酸键与相邻核苷酸连接的核
苷酸。根据各个实施方案，(N’)y包括3'末端处通过2’-5’核苷酸间连键连接的2、3、4、
5或6个连续核糖核苷酸。在一个实施方案中，(N’)y的3'末端处的4个连续核苷酸通过
3个2’-5’磷酸二酯键连接，其中形成2’-5’磷酸二酯键的一个或多个2’-5’核苷酸进
一步包括3’-O-甲基(3’OMe)糖修饰。优选地，(N’)y的3’末端核苷酸包括2’OMe糖修
饰。在某些实施方案中，x=y=19并且(N’)y包括在位置15、16、17、18和19处的两个或更
多个连续核苷酸，其包括通过2’-5’核苷酸间键与相邻核苷酸连接的核苷酸(2’-5’核苷
酸)。在各个实施方案中形成2’-5’核苷酸间键的核苷酸包括3’脱氧核糖核苷酸或3’甲
氧基核苷酸(3’H或3’OMe代替3’OH)。在一些实施方案中，x=y=19并且(N’)y包括在位
置15、16和17处的2’-5’核苷酸，使得相邻核苷酸通过位置15-16、16-17和17-18之间的
2’-5’核苷酸间键连接；或位置15、16、17、18和19处的2’-5’核苷酸，使得相邻核苷酸通过位置15-16、16-17、17-18和18-19之间的2’-5’核苷酸间键连接并且可在3’末端核苷
酸处获得3’OH，或位置16、17和18处的2’-5’核苷酸，使得相邻核苷酸通过位置16-17、
17-18和18-19之间的2’-5’核苷酸间键连接。在一些实施方案中，x=y=19并且(N’)y包
括在位置16和17或位置17和18或位置15和17处的2’-5’核苷酸，使得相邻核苷酸分
别通过位置16-17和17-18之间或位置17-18和18-19之间或位置15-16和17-18之间的
2’-5’核苷酸间键连接。在其它实施方案中，(N’)y中的嘧啶核糖核苷酸(rU、rC)被通过
2’-5’核苷酸间键与相邻核苷酸连接的核苷酸取代。在一些实施方案中，反义链和有义链
选自SERPINH1_4、SERPINH1_12、SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58或SERPINH1_88
中所示的序列对，x=y=19并且(N’)y包含在3’末端通过4个2’-5’连键，特别是核苷酸
位置15-16、16-17、17-18和18-19之间的连键连接的5个连续核苷酸。

[0099] 在一些实施方案中，所述连键包括磷酸二酯键。在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_4、SERPINH1_12、SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58 或
SERPINH1_88中所示的序列对并且x=y=19，并且(N’)y包含在3’末端通过4个2’-5’连
键连接的5个连续核苷酸并任选进一步包括独立地选自反向脱碱基部分和C3烷基[C3；
1,3-丙二醇单(磷酸二氢酯)]帽的Z’和z’。C3烷基帽与3’或5’末端核苷酸共价连接。
在一些实施方案中，3’C3末端帽进一步包含3’磷酸。在一些实施方案中，3’C3末端帽进
一步包含3’末端羟基。

[0100] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_4、SERPINH1_12、SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58或SERPINH1_88中所示的序列对，x=y=19并且
(N’)y包括L-DNA位置18；并且(N’)y任选进一步包括独立地选自反向脱碱基部分和C3
烷基[C3；1,3-丙二醇单(磷酸二氢酯)]帽的Z’和z’。

[0101] 在一些实施方案中，(N’)y包括3’末端磷酸。在一些实施方案中，(N’)y包括3’末端羟基。

[0102] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_4、SERPINH1_12、SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58或SERPINH1_88中所示的序列对，x=y=19并且
(N)x包括在位置1、3、5、7、9、11、13、15、17、19或位置2、4、6、8、11、13、15、17、19处的2’OMe糖修饰核糖核苷酸。在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_4、SERPINH1_12、
SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58和SERPINH1_88中所示的序列对，x=y=19并且
(N)x包括2’OMe糖修饰的嘧啶。在一些实施方案中，(N)x中的所有嘧啶均包括2’OMe糖
修饰。

[0103] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52 或SERPINH1_86中所示的序列对，x=y=18并且N2为核糖腺苷部分。

[0104] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH_16、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52 或SERPINH186中所示的序列对并且x=y=18，并且N2-(N’)y包括在3’末端通过4个2’-5’
连键，特别是核苷酸位置15-16、16-17、17-18和18-19之间的连键连接的5个连续核苷酸。
在一些实施方案中，所述连键包括磷酸二酯键。

[0105] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52 或SERPINH186中所示的序列对并且x=y=18，并且N2-(N’)y包括在3’末端通过4个2’-5’
连键连接的5个连续核苷酸并任选进一步包括独立地选自反向脱碱基部分和C3烷基[C3；
1,3-丙二醇单(磷酸二氢酯)]帽的Z’和z’。

[0106] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52 或2
SERPINH1_86中所示的序列对并且x=y=18，并且N-(N’)y包括L-DNA位置18；并且(N’)y
任选进一步包括独立地选自反向脱碱基部分和C3烷基[C3；1,3-丙二醇单(磷酸二氢酯)]
帽的Z’和z’。

[0107] 在一些实施方案中，N2-(N’)y包含3’末端磷酸。在一些实施方案中，N2-(N’)y包含3’末端羟基。

[0108] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52 或1
SERPINH1_86中所示的序列对并且x=y=18，并且N-(N)x包括在位置1、3、5、7、9、11、13、
15、17、19或位置1、3、5、9、11、13、15、17、19或位置3、5、9、11、13、15、17或位置2、4、6、8、
11、13、15、17、19处的2’OMe糖修饰核糖核苷酸。在一些实施方案中，反义链和有义链选
自 SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、
SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52或SERPINH1_86中所示的序列对，x=y=18并且
1
N-(N)x包括在位置11、13、15、17和19(来自5’末端)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。
在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH
1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52或SERPINH1_86
1
中所示的序列对，x=y=18并且N-(N)x包括在位置1、3、5、7、9、11、13、15、17、19或位置3、5、
7、9、11、13、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52或SERPINH1_86中所示的序列对，x=y=18并且
N1-(N)x包括在位置2、4、6、8、11、13、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。

[0109] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_11、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPIN51a、SERPINH1_52 或SERPINH1_86中所示的序列对，x=y=18并且N1-(N)x包括2’OMe糖修饰的嘧啶。在一些实
施方案中，(N)x中的所有嘧啶均包括2’OMe糖修饰。在一些实施方案中，反义链进一步包括
在位置5、6或7处的L-DNA或2’-5’核苷酸(5’>3’)。在其它实施方案中，反义链进一步
包括在位置5-6或6-7的核糖核苷酸之间生成2’5’核苷酸间连键的核糖核苷酸(5’>3’)。

[0110] 在另外的实施方案中，N1-(N)x进一步包括Z，其中Z包括非核苷酸突出端。在一些实施方案中，非核苷酸突出端为C3-C3[1，3-丙二醇单(磷酸二氢酯)]2。

[0111] 在结构A2的一些实施方案中，(N)y包括至少一个L-DNA部分。在一些实施方案中，x=y=18并且(N’)y由位置1-16和18处的未修饰核糖核苷酸和3’倒数第二个位置
(位置17)处的一个L-DNA组成。在其它实施方案中，x=y=18并且(N’)y由位置1-15和
18处的未修饰核糖核苷酸和3’倒数第二个位置(位置16和17)处的两个连续L-DNA组
成。在各个实施方案中，非常规部分为通过2’-5’核苷酸间磷酸键与相邻核苷酸连接的核
苷酸。根据各个实施方案，(N’)y包括3'末端处通过2’-5’核苷酸间连键连接的2、3、4、
5或6个连续核糖核苷酸。在一个实施方案中，(N’)y的3'末端处的4个连续核苷酸通过
3个2’-5’磷酸二酯键连接，其中形成2’-5’磷酸二酯键的一个或多个2’-5’核苷酸进一
步包括3’-O-甲基(3’OMe)糖修饰。优选地，(N’)y的3’末端核苷酸包括2’OMe糖修饰。
在某些实施方案中，x=y=18并且(N’)y中位置14、15、16、17和18处的两个或更多个连续
核苷酸包括通过2’-5’核苷酸间键与相邻核苷酸连接的核苷酸。在各个实施方案中，形成
2’-5’核苷酸间键的核苷酸包括3’脱氧核糖核苷酸或3’甲氧基核苷酸。在一些实施方案
中，x=y=18并且(N’)y包括通过位置15-16、16-17和17-18之间或位置16-17和17-18之
间的2’-5’核苷酸间键与相邻核苷酸连接的核苷酸。在一些实施方案中，x=y=18并且(N’)
y包括通过位置14-15、15-16、16-17和17-18之间或位置15-16、16-17和17-18之间或位
置16-17和17-18之间或位置17-18或位置15-16和17-18之间的2’-5’核苷酸间键与相
邻核苷酸连接的核苷酸。在其它实施方案中，(N’)y中的嘧啶核糖核苷酸(rU、rC)被通过
2’-5’核苷酸间键与相邻核苷酸连接的核苷酸取代。

[0112] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自表A-18中所示的寡核苷酸对并且本文鉴定为SERPINH1_2(SEQ ID NO:60 和127)、SERPINH1_6(SEQ ID NOS:63 和
130)、SERPINH1_45a(SEQ ID NO:98 和 165)、SERPINH1_51(SEQ ID NO:101 和 168) 和
SERPINH1_51a(SEQ ID NO:105和172)。

[0113] 在一些实施方案中，双链核酸分子包括SEQ ID NO:127中所示的反义链和SEQ IDNO:60中所示的有义链；本文鉴定为SERPINH1_2。在一些实施方案中，双链核酸分子具有结
构

[0114] 5’UAUAGCACCCAUGUGUCUC-Z3’(反义SEQ ID NO:127)

[0115] │││││││││││││││││││

[0116] 3’Z’-AUAUCGUGGGUACACAGAG–z”5’(有义SEQ ID NO:60)

[0117] 其中每个“│”表示核糖核苷酸之间的碱基配对；

[0118] 其中A、C、G、U的每一个独立地为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸，或非常规部分；

[0119] 其中Z和Z’的每一个独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；并且

[0120] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分。

[0121] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括一个或多个2’OMe糖修饰的嘧啶和/或嘌呤嘌呤、在位置5、6、7或8处的2’-5’核糖核苷酸和
3’末端核苷酸或非核苷酸突出端。在一些实施方案中，有义链(SEQ ID NO:60)包括3’末
端或倒数第二个位置处的4或5个连续2’5’核苷酸、在3’末端共价连接的核苷酸或非核
苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分。在其它实施方案中，有义链(SEQ ID NO:60)包
括一个或多个2’OMe嘧啶、在3’末端共价连接的核苷酸或非核苷酸部分和在5’末端共价
连接的帽部分。

[0122] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:60)选自包
括以下的有义链：

[0123] a)位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸，C3OH 3’末端非核苷酸突出端；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；或

[0124] b)位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸，3’末端磷酸；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；或

[0125] c)位置(5’>3’)5、7、13和16处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置18处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基
脱氧核糖核苷酸部分；或

[0126] d)位置(5’>3’)7、13、16和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置9处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基
脱氧核糖核苷酸部分；或

[0127] e)位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的C3-Pi部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0128] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与
3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:60)包括在位置15、16、17、18
和19处的2’-5’核糖核苷酸：C33’末端突出端；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧
核糖核苷酸部分。

[0129] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和C3Pi-C3OH 3’末端突出端；并且有义链(SEQ ID NO:60)包括在位置15、16、17、18和19处
的2’-5’核糖核苷酸：3’末端磷酸；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0130] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与
3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:60)包括在位置(5’>3’)5、
7、13和16处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置18处的2’-5’核糖核苷酸；在3’末端
共价连接的C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0131] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与
3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:60)包括在位置(5’>3’)7、
13、16和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置9处的2’-5’核糖核苷酸；在3’末端
共价连接的C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0132] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与
3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:60)包括在位置(5’>3’)15、
16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的C3-Pi部分；和在5’末端共
价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0133] 在一些实施方案中，本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:127)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和C3-C33’末端突出端；并且有义链(SEQ ID NO:60)包括在位置(5’>3’)7、9、13、16和18处的2’OMe糖修
饰的核糖核苷酸；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0134] 在一些实施方案中，本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:60)包括在位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：3’末端磷酸和在5’末端共价连接的
反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分，并且反义链(SEQ ID NO:127)包括选自下列之一的反义
链：

[0135] a)位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0136] b)位置(5’>3’)1、3、6、8、10、12、14、17、18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0137] 在一些实施方案中，本文提供了包括SEQ ID NO:130中所示反义链和SEQ IDNO:63中所示有义链的双链核酸分子；本文鉴定为SERPINH1_6。在一些实施方案中，双链体
包含结构：

[0138] 5’UACUCGUCUCGCAUCUUGU-Z 3’(反义SEQ ID NO:130)

[0139] │││││││││││││││││││

[0140] 3’Z’-AUGAGCAGAGCGUAGAACA -z”5’(有义SEQ ID NO:63)

[0141] 其中每个“│”表示核糖核苷酸之间的碱基配对；

[0142] 其中A、C、G、U的每一个独立地为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸，或非常规部分；

[0143] 其中Z和Z’的每一个独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；并且

[0144] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分。

[0145] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:63)包括一个或多个2’OMe糖修饰的嘧啶；3’末端核苷酸或非核苷酸突出端；和在5’末端共价连接的
帽部分。在一些实施方案中，反义链(SEQ ID NO:130)包括一个或多个2’OMe糖修饰的嘧
啶；在3’末端共价连接的核苷酸或非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分。

[0146] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:63)包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3OH或
C3Pi部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID
NO:130)选自包括以下的反义链：

[0147] a)位置(5’>3’)1、3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0148] b)位置(5’>3’)1、3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0149] c)位置(5’>3’)3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0150] d)位置(5’>3’)3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置1处的dU；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0151] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:63)包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；
和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:130)包
括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的
2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0152] 在一些实施方案中，提供了双链体寡核苷酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:63)包括在位置(5’>3’)14和18处且任选在位置2处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末
端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且
反义链(SEQ ID NO:130)包括在位置(5’>3’)1、3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0153] 在一些实施方案中，提供了双链体寡核苷酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:63)包括在位置(5’>3’)14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的
C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID
NO:130)选自包括以下的反义链：

[0154] a)位置(5’>3’)1、3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3Pi或C3Pi-C3OH部分；或

[0155] b)位置(5’>3’)1、3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3Pi或C3Pi-C3OH部分。

[0156] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:63)包括在位置(5’>3’)14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端
共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:130)包括在位置
(5’>3’)1、3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0157] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:63)包括在位置(5’>3’)14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端
共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:130)包括在位置
(5’>3’)1、3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和C3Pi-C3OH 3’末端突出端。

[0158] 在一些实施方案中，双链体包括SEQ ID NO:165中所示的反义链和SEQ ID NO:98中所示的有义链；本文鉴定为SERPINH1_45a。在一些实施方案中，双链体包括结构：

[0159] 5’AGGAAGUUGAUCUUGGAGU-Z 3’(反义SEQ ID NO:165)

[0160] │││││││││││││││││││

[0161] 3’Z’-UCCUUCAACUAGAACCUCA–z”5’(有义SEQ ID NO:98)

[0162] 其中每个“│”表示核糖核苷酸之间的碱基配对；

[0163] 其中A、C、G、U的每一个独立地为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸，或非常规部分；

[0164] 其中Z和Z’的每一个独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；并且

[0165] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分。

[0166] 在一些实施方案中，有义链(SEQ ID NO:98)包括在位置(5’>3’)15、16、17和18或15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的核苷酸或非核苷酸部
分，和在5’末端共价连接的帽部分。在一些实施方案中，反义链(SEQ ID NO:165)包括在
位置5、6、7或8(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的嘧啶和/或嘌呤；和在3’末端共价连接的
核苷酸或非核苷酸部分。

[0167] 在一些实施方案中，有义链(SEQ ID NO:98)包括在位置(5’>3’)15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：C3Pi或C3-OH 3’末端非核苷酸部分和在5’末端共价连接的
反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:165)包括选自下列之一的反义
链：

[0168] a)位置(5’>3’)2、4、6、8、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸和C3Pi-C3Pi或C3Pi-C3OH 3’末端突出端；或

[0169] b)位置(5’>3’)2、4、6、8、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和C3Pi-C3Pi或C3Pi-C3OH 3’末端突出端；

[0170] c)位置(5’>3’)1、3、5、9、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸和C3Pi-C3Pi或C3Pi-C3OH 3’末端突出端；或

[0171] d)位置(5’>3’)1、3、5、9、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和C3Pi-C3Pi或C3Pi-C3OH 3’末端突出端。

[0172] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:98)包括在位置(5’>3’)15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：C3-OH 3’末端部分和在5’末端共价连接的反向
脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:165)包括在位置(5’>3’)2、4、6、
8、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸和
C3Pi-C3OH 3’末端突出端。

[0173] 在一些实施方案中，双链核酸分子包括SEQ ID NO:168中所示的反义链和SEQ IDNO:101中所示的有义链；本文鉴定为SERPINH1_51。在一些实施方案中，双链体包括结构：

[0174] 5’UCACCCAUGUGUCUCAGGA-Z 3’(反义SEQ ID NO:168)

[0175] │││││││││││││││││││

[0176] 3’Z’-AGUGGGUACACAGAGUCCU–z”5’(有义SEQ ID NO:101)

[0177] 其中每个“│”表示核糖核苷酸之间的碱基配对；

[0178] 其中A、C、G、U的每一个独立地为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸，或非常规部分；

[0179] 其中Z和Z’的每一个独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；并且

[0180] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分。

[0181] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:101)包括2’OMe糖修饰的嘧啶、任选在位置9或10处的2’-5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的核
苷酸或非核苷酸部分和任选在5’末端共价连接的帽部分。在一些实施方案中，反义链(SEQ
ID NO:168)包括2’OMe糖修饰的嘧啶和/或嘌呤、在位置5、6、7或8(5’>3’)处的2’-5’
核苷酸；和在3’末端共价连接的核苷酸或非核苷酸部分。

[0182] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ IDNO:101)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的嘧啶、任选在位置9或10处的2’-5’核糖
核苷酸、在3’末端共价连接的C3Pi或C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱
碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:168)选自包括以下的反义链：

[0183] a)位置(5’>3’)1、8和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置6或7处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH突出端；或

[0184] b)位置(5’>3’)1、4、8、13和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置6或7处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH突出端；或

[0185] c)位置(5’>3’)1、4、8、11和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH突出端；或

[0186] d)位置(5’>3’)1、3、8、12、13和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0187] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:101)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、任选在位置9处的2’-5’核糖核苷酸、在3’
末端共价连接的C3-OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸
部分；并且反义链(SEQ ID NO:168)包括在位置(5’>3’)1、8和15处的2’OMe糖修饰的
核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0188] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:101)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、任选在位置9处的2’-5’核糖核苷酸、在3’
末端共价连接的C3-OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸
部分；并且反义链(SEQ ID NO:168)包括在位置(5’>3’)1、4、8、13和15处的2’OMe糖修
饰的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0189] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:101)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、任选在位置9处的2’-5’核糖核苷酸、在3’
末端共价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部
分；并且反义链(SEQ ID NO:168)包括在位置(5’>3’)1、4、8、11和15处的2’OMe糖修饰
的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0190] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:101)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置9处的2’-5’核糖核苷酸、在3’末端共
价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并
且反义链(SEQ ID NO:168)包括在位置(5’>3’)1、3、8、12、13和15处的2’OMe糖修饰的
核糖核苷酸；位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0191] 在一些实施方案中，双链核酸分子包括SEQ ID NO:168中所示的反义链和SEQ IDNO:101中所示的有义链；本文鉴定为SERPINH1_51a。在一些实施方案中，双链体包含结构

[0192] 5’ACACCCAUGUGUCUCAGGA-Z 3’(反义SEQ ID NO:172)

[0193] │││││││││││││││││││

[0194] 3’Z’-UGUGGGUACACAGAGUCCU -z”5’(有义SEQ ID NO:105)

[0195] 其中每个“│”表示核糖核苷酸之间的碱基配对；

[0196] 其中A、C、G、U的每一个独立地为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸，或非常规部分；

[0197] 其中Z和Z’的每一个独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；并且

[0198] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分。

[0199] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:105)包括2’OMe糖修饰的嘧啶、任选在位置9或10处的2’-5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的核
苷酸和非核苷酸部分和任选在5’末端共价连接的帽部分。在一些实施方案中，反义链(SEQ
ID NO:172)包括2’OMe糖修饰的嘧啶和/或嘌呤，在位置5、6、7或8(5’>3’)处的2’-5’
核苷酸；和在3’末端共价连接的核苷酸和非核苷酸部分。

[0200] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ IDNO:105)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的嘧啶、任选在位置9或10处的2’-5’核糖
核苷酸、在3’末端共价连接的C3Pi或C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱
碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:172)选自包括以下的反义链：

[0201] a)在位置(5’>3’)8和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在位置6或7处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0202] b)在位置(5’>3’)4、8、13和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在位置6或7处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0203] c)在位置(5’>3’)4、8、11和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0204] d)在位置(5’>3’)3、8、12、13和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0205] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:105)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、任选在位置9处的2’-5’核糖核苷酸、在3’
末端共价连接的C3-OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸
部分；并且反义链(SEQ ID NO:172)包括在位置(5’>3’)8和15处的2’OMe糖修饰的核
糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0206] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:105)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、任选在位置9处的2’-5’核糖核苷酸、在3’
末端共价连接的C3-OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸
部分；并且反义链(SEQ ID NO:172)包括在位置(5’>3’)4、8、13和15处的2’OMe糖修饰
的核糖核苷酸，位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0207] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:105)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、任选在位置9处的2’-5’核糖核苷酸、在3’
末端共价连接的C3-OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸
部分；并且反义链(SEQ ID NO:172)包括在位置(5’>3’)4、8、11和15处的2’OMe糖修饰
的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0208] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:105)包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，任选在位置9处的2’-5’核糖核苷酸，在3’
末端共价连接的C3-OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸
部分；并且反义链(SEQ ID NO:172)包括在位置(5’>3’)3、8、12、13和15处的2’OMe糖
修饰的核糖核苷酸，位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0209] 在一些实施方案中，反义链和有义链选自表A-19中所示的寡核苷酸对并且本文鉴定为SERPINH1_4(SEQ ID NO:195和220)和SERPINH1_12(SEQ ID NO:196和221)。

[0210] 在一些实施方案中，双链核酸分子包括SEQ ID NO:220中所示的反义链和SEQ IDNO:194中所示的有义链；本文鉴定为SERPINH1_4。在一些实施方案中，双链核酸分子具有
结构：

[0211] 5’AAUAGCACCCAUGUGUCUC-Z3’(反义SEQ ID NO:220)

[0212] │││││││││││││││││││

[0213] 3’Z’-UUAUCGUGGGUACACAGAG–z”5’(有义SEQ ID NO:195)

[0214] 其中每个“│”表示核糖核苷酸之间的碱基配对；

[0215] 其中A、C、G、U的每一个独立地为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸，或非常规部分；

[0216] 其中Z和Z’的每一个独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；并且

[0217] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分。

[0218] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ IDNO:220)包括在位置(5’>3’)3、5、9、11、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:195)选自包
括以下的有义链：

[0219] a)位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸，与3’末端共价连接的C3OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；或

[0220] b)位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸，3’末端磷酸；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；或

[0221] c)位置(5’>3’)5、7、13和16处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置18处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；或

[0222] d)位置(5’>3’)7、13、16和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置9处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；或

[0223] e)位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的C3Pi部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0224] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:220)包括在位置(5’>3’)3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:195)包括在位置15、16、17、18
和19处的2’-5’核糖核苷酸：与3’末端共价连接的C3部分；和在5’末端共价连接的反
向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0225] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:220)包括在位置(5’>3’)3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:195)包括在位置15、16、17、18
和19处的2’-5’核糖核苷酸：3’末端磷酸；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖
核苷酸部分。

[0226] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:220)包括在位置(5’>3’)3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:195)包括在位置(5’>3’)5、7、
13和16处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置18处的2’-5’核糖核苷酸；在3’末端共
价连接的C3OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0227] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:220)包括在位置(5’>3’)3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:195)包括在位置(5’>3’)7、13、
16和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置9处的2’-5’核糖核苷酸；在3’末端共价
连接的C3OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0228] 本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQ ID NO:220)包括在位置(5’>3’)3、5、9、11、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:195)包括在位置15、16、17、18
和19处的2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的C3Pi部分；和在5’末端共价连接的
反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分。

[0229] 在一些实施方案中，本文提供了双链核酸分子，其中反义链(SEQID NO:220)包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、13、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；并且有义链(SEQ ID NO:195)包括在位置(5’>3’)7、9、13、16
和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷
酸部分。

[0230] 在一些实施方案中，本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQID NO:195)包括在位置15、16、17、18和19处的2’-5’核糖核苷酸：3’末端磷酸和在5’末端共价连接的
反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分，并且反义链(SEQ ID NO:220)包括选自下列之一的反义
链：

[0231] a)位置(5’>3’)3、5、7、9、11、13、15、17、19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0232] b)位置(5’>3’)1、3、6、8、10、12、14、17、18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0233] 在一些实施方案中，本文提供了双链核酸分子，其包括SEQ ID NO:130中所示的反义链和SEQ ID NO:63中所示的有义链；本文鉴定为SERPINH1_12。在一些实施方案中，双
链体包含结构：

[0234] 5’AACUCGUCUCGCAUCUUGU-Z 3’(反义SEQ ID NO:221)

[0235] │││││││││││││││││││

[0236] 3’Z’-UUGAGCAGAGCGUAGAACA–z”5’(有义SEQ ID NO:196)

[0237] 其中每个“│”表示核糖核苷酸之间的碱基配对；

[0238] 其中A、C、G、U的每一个独立地为未经修饰或经修饰的核糖核苷酸，或非常规部分；

[0239] 其中Z和Z’的每一个独立地存在或不存在，但如果存在则独立地为在其存在的链的3’末端共价连接的1-5个连续核苷酸或非核苷酸部分或其组合；并且

[0240] 其中z”可能存在或不存在，但如果存在则为在N2-(N’)y的5’末端共价连接的加帽部分。

[0241] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:196)包括一个或多个2’OMe糖修饰的嘧啶；3’末端核苷酸或非核苷酸突出端；和在5’末端共价连接的
帽部分。在一些实施方案中，反义链(SEQ ID NO:221)包括一个或多个2’OMe糖修饰的嘧
啶；在3’末端共价连接的核苷酸或非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分。

[0242] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:196)包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3OH部分；
和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:221)包
括选自包括以下的反义链：

[0243] a)位置(5’>3’)3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0244] b)位置(5’>3’)3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0245] 在一些实施方案中，提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ IDNO:196)包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；
和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:221)
包括在位置(5’>3’)3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的
2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0246] 在一些实施方案中，提供了双链体寡链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:196)包括在位置(5’>3’)2、14和18以及任选在位置2处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末
端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且
反义链(SEQ ID NO:221)包括在位置(5’>3’)3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的
核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0247] 在一些实施方案中，提供了双链体寡核苷酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:196)包括在位置(5’>3’)14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的
C3-OH部分；和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID
NO:221)包括选自包括以下的反义链：

[0248] a)位置(5’>3’)3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分；或

[0249] b)位置(5’>3’)3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0250] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:196)包括在位置(5’>3’)14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端
共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:221)包括在位置
(5’>3’)1、3、5、9、11、13、15和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0251] 本文提供了双链核酸分子，其中有义链(SEQ ID NO:196)包括在位置(5’>3’)14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；在3’末端共价连接的C3-OH部分；和在5’末端
共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链(SEQ ID NO:220)包括在位置
(5’>3’)1、3、5、7、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸；位置7处的2’-5’核糖核苷酸；和与3’末端共价连接的C3Pi-C3OH部分。

[0252] 在结构A1和A2的更多实施方案中，(N’)y包括1-8个经修饰的核糖核苷酸，其中经修饰的核糖核苷酸为DNA核苷酸。在某些实施方案中，(N’)y包括1、2、3、4、5、6、7或多达8个DNA部分。

[0253] 在一些实施方案中，Z或Z'存在且独立地包括两个非核苷酸部分。

[0254] 在另外的实施方案中，Z和Z′均存在且各自独立地包括两个非核苷酸部分。

[0255] 在一些实施方案中，Z和Z'的每一个包括脱碱基部分，例如脱氧核糖脱碱基部分(本文称为“dAb”)或核糖脱碱基部分(本文称为“rAb”)。在一些实施方案中，Z和/或
Z'的每一个包括两个共价连接的脱碱基部分并且为(例如)dAb-dAb或rAb-rAb或dAb-rAb
或rAb-dAb，其中每个部分优选通过基于磷酸基的键与相邻部分连接。在一些实施方案中基
于磷酸基的键包括硫代磷酸酯键、膦酰基乙酸酯键或磷酸二酯键。在一些实施方案中基于
磷酸基的键包括磷酸二酯键。

[0256] 在一些实施方案中，Z和/或Z'的每一个包括烷基部分、任选丙烷[(CH2)3]部分或其衍生物，包括丙醇(C3-OH)和丙二醇的磷酸化衍生物(“C3-3’Pi”)。在一些实施方案
中，Z和/或Z'的每一个包括通过磷酸二酯键或硫代磷酸酯键与反义链或有义链的3’末
端共价连接和通过磷酸二酯键或硫代磷酸酯键与彼此共价连接的两个烷基部分，并且在一
些实例中为C3Pi-C3Pi或C3Pi-C3OH。反义链的3’末端和/或有义链的3’末端通过基于
磷酸基的键与C3部分共价连接，并且C3部分通过基于磷酸基的键与C3-OH部分共价连接。
在一些实施方案中，基于磷酸基的键包括硫代磷酸酯键、膦酰基乙酸酯键或磷酸二酯键。在
优选的实施方案中基于磷酸基的键包括磷酸二酯键。

[0257] 在结构A1或结构A2的各个实施方案中，Z和Z’存在。在其它实施方案中，Z或Z’存在。在一些实施方案中，Z和/或Z’的每一个独立地包括C2、C3、C4、C5或C6烷基部
分、任选C3[丙烷、-(CH2)3-]部分或其衍生物，包括丙醇(C3-OH/C3OH)、丙二醇和丙二醇的
磷酸二酯衍生物(“C3Pi”)。在优选的实施方案中，Z和/或Z’的每一个包括两个烃部分
并且在一些实例中为C3Pi-C3OH或C3Pi-C3Pi。每个C3通过共价键，优选通过基于磷酸基
的键与相邻C3共价轭合。在一些实施方案中基于磷酸基的键为硫代磷酸酯键、膦酰基乙酸
酯键或磷酸二酯键。

[0258] 在特定实施方案中，x=y=19并且Z包含至少一个C3烷基突出端。在一些实施方案中C3-C3突出端通过共价连键，优选通过磷酸二酯键与(N)x或(N’)y的3’末端共价连
接。在一些实施方案中，第一个C3与第二个C3之间的键为磷酸二酯键。在一些实施方案
中，3’非核苷酸突出端为C3Pi-C3Pi。在一些实施方案中，3’非核苷酸突出端为C3Pi-C3Ps。
在一些实施方案中，3’非核苷酸突出端为C3Pi-C3OH(OH为羟基)。在一些实施方案中，3’
非核苷酸突出端为C3Pi-C3OH。

[0259] 在各个实施方案中，烷基部分包含烷基衍生物，包括包含末端羟基、末端氨基或末端磷酸基团的C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基。在一些实施方案中，烷基部分为C3烷
基或C3烷基衍生物部分。在一些实施方案中，C3烷基部分包含丙醇、磷酸丙酯、硫代磷酸
丙酯或其组合。C3烷基部分通过磷酸二酯键与(N’)y的3’末端和/或(N)x的3’末端共
价连接。在一些实施方案中，烷基部分包含丙醇、磷酸丙酯或硫代磷酸丙酯。在一些实施方
案中，Z和Z’的每一个独立地选自丙醇、磷酸丙酯、硫代磷酸丙酯、其组合或其多个，尤其是
2或3个共价连接的丙醇、磷酸丙酯、硫代磷酸丙酯或其组合。在一些实施方案中，Z和Z’
的每一个独立地选自磷酸丙酯、硫代磷酸丙酯、丙基磷酸-丙醇；丙基磷酸-硫代磷酸丙酯；
丙基磷酸-磷酸丙酯；(磷酸丙酯)3、(磷酸丙酯)2-丙醇、(磷酸丙酯)2-硫代磷酸丙酯。Z
或Z’中可包括任何丙烷或丙醇轭合部分。

[0260] 示例性3’末端非核苷酸的结构如下：

[0261]

[0262] 在一些实施方案中，Z和Z’的每一个独立地选自丙醇、磷酸丙酯、硫代磷酸丙酯、其组合或其多个。

[0263] 在一些实施方案中，Z和Z’的每一个独立地选自磷酸丙酯、硫代磷酸丙酯、丙基磷酸-丙醇；丙基磷酸-硫代磷酸丙酯；丙基磷酸-磷酸丙酯；(磷酸丙酯)3、(磷酸丙酯)2-丙
醇、(磷酸丙酯)2-硫代磷酸丙酯。Z或Z’中可包括任何丙烷或丙醇轭合部分。

[0264] 在另外的实施方案中，Z和/或Z’的每一个包括脱碱基部分和未经修饰的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的组合、或烃部分和未经修饰的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸的组
合、或脱碱基部分(脱氧核糖或核糖)和烃部分的组合。在这些实施方案中，Z和/或Z’的
每一个包括C3-rAb或C3-dAb，其中每个部分通过基于磷酸基的键，优选通过磷酸二酯键、
硫代磷酸酯键或膦酰基乙酸酯键与相邻部分共价结合。

[0265] 在某些实施方案中，本文公开的核酸分子包括分别选自以下表A-18和A-19中所示寡核苷酸编号2-67或68-92的任一个的有义寡核苷酸序列。

[0266] 在某些实施方案中，所提供的化合物包括如本文所述的化合物1、化合物2、化合物3、化合物4、化合物5、化合物6、化合物_7、化合物_8和化合物_9。

[0267] 在一些实施方案中，(例如，如本文所述的化合物1、化合物5和化合物6)提供了19聚体双链核酸分子，其中反义链为SEQ ID NO:127而有义链为SEQ ID NO:60。在某些实
施方案中，提供了19聚体双链核酸分子，其中反义链为SEQ ID NO:127并包括2’OMe糖修
饰的核糖核苷酸、在位置1、5、6或7的至少一处的2’-5’核糖核苷酸和与3’末端共价连接
的3’末端非核苷酸部分；并且有义链为SEQ ID NO:60并包括至少一个2’5’核糖核苷酸
或2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接
的帽部分。在一些实施方案中，提供了19聚体双链核酸分子，其中反义链为SEQ ID NO:127
并包括在位置3、5、9、11、13、15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的3’末端C3OH非核苷酸部分；并且有义链
为SEQ IDNO:60并包括于3’末端位置15、16、17、18和19(5’>3’)处的5个连续2’5’核
糖核苷酸、在3’末端共价连接的C3Pi非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基部
分。

[0268] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物1，其中反义链为SEQID NO:127并包括在位置3、5、9、11、13、15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分；并
且有义链为SEQ ID NO:60并包括于3’末端位置15、16、17、18和19(5’>3’)处的5个连
续2’5’核糖核苷酸、在3’末端共价连接的C3Pi非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反
向脱碱基部分；并且进一步包括反义链的位置1处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。

[0269] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物6，其中反义链为SEQID NO:127并包括在位置3、5、9、11、13、15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分；并
且有义链为SEQ ID NO:60并包括于3’末端位置15、16、17、18和19(5’>3’)处的5个连
续2’5’核糖核苷酸、在3’末端共价连接的C3Pi非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反
向脱碱基部分；并且进一步包括反义链的位置1处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸。

[0270] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物5，其中反义链为SEQID NO:127并包括在位置1、3、5、9、11、13、15、17和19(5’>3’)处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分；
并且有义链为SEQ ID NO:60并包括于3’末端位置(5’>3’)7、13、16和18处的2’OMe糖
修饰的核糖核苷酸、位置9处的2’5’核糖核苷酸、在3’末端共价连接的C3OH非核苷酸部
分和在5’末端共价连接的反向脱碱基部分。

[0271] 在一些实施方案(例如，如本文所述的化合物2和化合物7)中，提供了19聚体双链核酸分子，其中有义链为SEQ ID NO:63而反义链为SEQ ID NO:130。在一些实施方案中，
提供了19聚体双链核酸分子，其中有义链为SEQ ID NO:63并包括2’OMe糖修饰的嘧啶核
糖核苷酸、在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分；并且反义链
为SEQ ID NO:130并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在
3’末端共价连接的非核苷酸部分。在一些实施方案中，提供了19聚体双链核酸分子，其中
有义链为SEQ ID NO:63并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在3’末端共价连接的非核苷
酸部分和在5’末端共价连接的帽部分；并且反义链为SEQ ID NO:130并包括2’OMe糖修
饰的核糖核苷酸、位置5、6或7至少一处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的非核
苷酸部分。

[0272] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物2，其中有义链为SEQID NO:63并包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在3’末端
共价连接的C3OH部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义
链为SEQID NO:130并包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、12、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在位置5、6或7至少一处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH
非核苷酸部分。

[0273] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物7，其中有义链为SEQID NO:63并包括在位置(5’>3’)2、14和18处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在3’末端
共价连接的C3OH部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义
链为SEQID NO:130并包括在位置(5’>3’)1、3、5、9、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH非核苷酸部分。

[0274] 在一些实施方案(例如，如本文所述的化合物3)中，提供了19聚体双链核酸分子，其中有义链为SEQ ID NO:98而反义链为SEQ ID NO:165。在一些实施方案中，提供了
19聚体双链核酸分子，其中有义链为SEQ ID NO:98并包括3’末端位置处的2’-5’核糖核
苷酸：在3’末端共价连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分；并且反义链为
SEQ ID NO:165并包括2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，位置5、6或7至少一处的2’-5’核糖
核苷酸和在3’末端共价连接的非核苷酸部分。在一个实施方案中，提供了为19聚体双链
核酸分子的化合物3，其中有义链为SEQ ID NO:98并包括在位置(5’>3’)15、16、17、18和
19处的2’-5’核糖核苷酸：在3’末端共价连接的C3-OH 3’部分和在5’末端共价连接的
反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链为SEQID NO:165并包括在位置(5’>3’)2、
4、6、8、11、13、15、17和19处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置7处的2’-5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的C3Pi-C3OH。

[0275] 在一些实施方案(例如，如本文所述的化合物4、化合物8和化合物9)中，提供了19聚体双链核酸分子，其中有义链为SEQ ID NO:101而反义链为SEQ ID NO:168。在一些
实施方案中，提供了19聚体双链核酸分子，其中有义链为SEQ ID NO:101并包括2’OMe糖
修饰的嘧啶核糖核苷酸，位置9或10其中一处的任选2’-5’核糖核苷酸、在3’末端共价
连接的非核苷酸部分和在5’末端共价连接的帽部分；并且反义链为SEQ ID NO:168并包括
2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，位置5、6或7至少一处的2’5’核糖核苷酸和在3’末端共价
连接的非核苷酸部分。

[0276] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物4，其中有义链为SEQID NO:101并包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，位置9
处的2’-5’核糖核苷酸、在3’末端共价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的
反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部分；并且反义链为SEQ ID NO:168并包括在位置(5’>3’)1、
4、8、11和15处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸；在3’末端
共价连接的3’C3Pi-C3OH突出端。

[0277] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物8，其中有义链为SEQID NO:101并包括在位置(5’>3’)4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸，在3’
末端共价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部
分；并且反义链为SEQ ID NO:168并包括在位置(5’>3’)1、4、8、13和15处的2’OMe糖修
饰的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的3’C3Pi-C3OH突出
端。

[0278] 在一个实施方案中，提供了为19聚体双链核酸分子的化合物9，其中有义链为SEQID NO:101并包括在位置(5’>3’)2、4、11、13和17处的2’OMe糖修饰的核糖核苷酸、在3’末端共价连接的C3OH非核苷酸部分和在5’末端共价连接的反向脱碱基脱氧核糖核苷酸部
分；并且反义链为SEQ ID NO:168并包括在位置(5’>3’)1、4、8、11和15处的2’OMe糖修
饰的核糖核苷酸、位置6处的2’5’核糖核苷酸和在3’末端共价连接的3’C3Pi-C3OH非核
苷酸部分。

[0279] 在另一方面，提供了通过按足以降低hsp47表达的量将本文所提供的核酸分子引入细胞内以降低细胞中hsp47表达的方法。在一个实施方案中，细胞为肝细胞星状细胞。在
另一实施方案中，细胞为肾脏或肺部组织中的星状细胞。在某些实施方案中，在体外进行所
述方法，在其它实施方案中，在体内进行所述方法。

[0280] 在又一方面，提供了治疗患有hsp47相关疾病的个体的方法。所述方法包括按足以降低hsp47表达的量向个体施用例如本文提供的核酸分子。在某些实施方案中，hsp47
相关疾病为选自以下的疾病：肝纤维化、肝硬变、包括肺脏纤维化在内的肺纤维化(包括
ILF)、引起肾纤维化的任何病状(例如，包括ESRD在内的CKD)、腹膜纤维化、慢性肝损伤、原纤维形成、其它器官的纤维化疾病、与所有可能类型的意外及医原性(手术)皮肤损伤相关
的异常瘢痕形成(瘢痕瘤)；硬皮病；心肌纤维化、青光眼滤过手术失败；和肠粘连。在一些
实施方案中，化合物可用于治疗器官特异性指征，例如包括下表2中所示指征在内的指征：

[0281] 表2

[0282]

[0283]

[0284]

[0285] 在一些实施方案中，优选的指征包括归因于肝脏移植后丙型肝炎的肝硬变；归因于非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的肝硬变；特发性肺纤维化；导致肺纤维化的放射性肺炎；
糖尿病性肾病；与持续性非卧床腹膜透析(CAPD)相关的腹膜硬化和眼部瘢痕性类天庖疮。

[0286] 纤维化肝指征包括酒精性肝硬变、乙肝性肝硬变、丙型肝炎性肝硬变、原位肝移植(OLTX)后丙型肝炎性(Hep C)肝硬变、NASH/NAFLD、原发性胆汁性肝硬变(PBC)、原发性硬
化性胆管炎(PSC)、胆道闭锁、α-1抗胰蛋白酶缺乏综合征(A1AD)、铜贮积病(威尔森氏
病(Wilson's disease))、果糖血症、半乳糖症、糖原贮积疾病(尤其是III、IV、VI、IX和X
型)、铁过载综合征(血色沉着病)、血脂异常(例如，高雪氏病(Gaucher's disease))、过
氧化物酶病(例如，泽韦格综合征(Zellweger syndrome))、酪氨酸血症、先天性肝纤维变
性、细菌感染(例如，布鲁氏菌病(brucellosis))、寄生虫病(例如，包虫病)、布加氏综合
征(Budd-Chiari syndrome)(肝静脉阻塞病)。

[0287] 肺部指征包括特发性肺纤维化、硅肺病、肺尘埃沉着病、新生儿新生儿呼吸窘迫综合征后的支气管肺发育不良、博来霉素/化疗致肺损伤、肺移植后闭塞性细支气管炎
(BOS)、慢性阻塞性肺病(COPD)、囊性纤维变性、哮喘。

[0288] 心脏指征包括心肌病、动脉粥样硬化(伯格氏病等)、心肌心内膜纤维变性、心房纤维性颤动、心肌梗塞(MI)后瘢痕形成。

[0289] 其它胸部指征包括织纹面乳房植入物周围放射诱导的囊体组织反应和口腔粘膜下层纤维变性。

[0290] 肾脏指征包括常染色体显性多囊肾病(ADPKD)、糖尿病性肾病(糖尿病肾小球硬化症)、FSGS(萎陷与其它组织学变体)、IgA肾病(伯格氏病)、狼疮性肾炎、韦格纳氏病
(Wegner's)、硬皮病、肺出血肾炎综合征(Goodpasture Syndrome)、肾小管间质纤维化：药
物诱导的(预防性)青霉素、头孢菌素、镇痛药性肾病变、膜性增生性肾小球性肾炎(MPGN)、
亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein Purpura)、先天性肾病：髓质囊肿病、指甲髌骨综合征
和奥尔波特综合征(Alport Syndrome)。

[0291] 骨髓指征包括淋巴管-平滑肌瘤(lympangiolyomyositosis，LAM)、慢性移植物抗宿主病、真性红细胞增多、原发性血小板增多症、骨髓纤维化。

[0292] 眼部指征包括早产儿视网膜病(RoP)、眼部瘢痕性类天庖疮、泪腺纤维化、视网膜连接术、角膜浑浊、疱疹性角膜炎、翼状胬肉、青光眼、年龄相关性黄斑变性(AMD/ARMD)、视网膜纤维化相关的糖尿病(DM)性视网膜病变。

[0293] 妇产科指征包括子宫内膜异位，其伴随预防STD纤维化/输卵管炎后瘢痕形成的激素疗法发生。

[0294] 全身性指征包括掌腱膜挛缩症(Dupuytren's disease)、掌腱膜纤维瘤病、佩罗尼氏病(Peyronie's disease)、Ledderhose病、瘢痕瘤、多灶性纤维硬化、肾原性系统纤维化、肾原性骨髓纤维化(贫血)。

[0295] 损伤相关的纤维化病包括烧伤(包括化学药品)诱导的皮肤和软组织瘢痕形成和收缩、癌症治疗放疗后放射诱导的皮肤和器官瘢痕形成、瘢痕瘤(皮肤)。

[0296] 手术指征包括腹膜透析管、角膜移植、耳蜗移植、其它移植、乳房硅酮移植后腹膜纤维化、慢性窦炎；透析移植物的黏着、假性内膜增生。

[0297] 其它指征包括慢性胰腺炎。

[0298] 在一些实施方案中，提供了治疗患有肝纤维化的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的核酸分子，从而治疗肝纤维化。在一些实施方案中，受试者
患有归因于肝炎的肝硬变。在一些实施方案中，受试者患有归因于NASH的肝硬变。

[0299] 在一些实施方案中，提供了本文公开的核酸分子用于制备治疗肝纤维化的药剂的用途。在一些实施方案中，肝纤维化归因于肝炎。在一些实施方案中肝纤维化归因于NASH。

[0300] 在一些实施方案中，提供了重塑瘢痕组织的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的本文公开的核酸分子，从而实现瘢痕组织重塑。在一些实施方案中，瘢痕组织
在肝脏中。在一些实施方案中，受试者患有归因于肝炎的肝硬变。在一些实施方案中，受试
者患有归因于NASH的肝硬变。

[0301] 在一些实施方案中，提供了实现纤维化消退的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效量的本文公开的核酸分子，从而实现纤维化消退。

[0302] 在一些实施方案中，提供了减少受试者瘢痕组织的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的核酸分子以减少瘢痕组织的步骤。在一些实施方案中，提供了减
少受试者瘢痕组织的方法，所述方法包括向瘢痕组织局部施用有效量的本文公开的核酸分
子以减少瘢痕组织的步骤。

[0303] 在一些实施方案中，提供了改善瘢痕组织外观的方法，所述方法包括向瘢痕组织局部施用有效量的本文公开的核酸分子以改善瘢痕组织外观的步骤。

[0304] 在一些实施方案中，提供了治疗患有肺纤维化的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的本文公开的核酸分子，从而治疗肺纤维化。在一些实施方案中，受试者
患有间质性肺纤维化(ILF)。在一些实施方案中，受试者患有导致肺纤维化的放射性肺炎。
在一些实施方案中，受试者患有药物诱导的肺纤维化。

[0305] 在一些实施方案中，提供了本文公开的核酸分子用于制备治疗肺纤维化的药剂的用途。在一些实施方案中，肺纤维化为ILF。在一些实施方案中，肺纤维化为药物或放射诱
导的肺纤维化。

[0306] 在一方面，提供了包括于药学上可接受的载体中的本文所述核酸分子(例如，siNA分子)的药物组合物。在某些实施方案中，药物制剂包括或包含适于将核酸分子(例
如，siNA分子)递送至个体(例如患者)的递送系统，例如以下更加详细描述的递送系统。

[0307] 在一有关方面，提供了包括经包装以供患者使用的核酸分子(例如，siNA分子)的组合物或试剂盒。包装可贴标签或包括指出包装的内含物并提供关于患者应或可如何使用
核酸分子(例如，siNA分子)的某些信息的标签或药品说明书，例如标签可包括给药信息和
/或使用指南。在某些实施方案中，标签的内容将具有政府机关(例如美国食品和药物管理
局)规定形式的公告。在某些实施方案中，标签可指出核酸分子(例如，siNA分子)适合
用于治疗患有hsp47相关疾病的患者；例如，标签可指出核酸分子(例如，siNA分子)适合
用于治疗纤维瘤；或例如，标签可指出核酸分子(例如，siNA分子)适合用于治疗选自纤维
化、肝纤维化、肝硬变、肺纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化、慢性肝损伤和原纤维形成的疾病。

[0308] 如本文所使用的术语“热休克蛋白47”或“hsp47”或“HSP47”可互换使用并且指具有任何hsp4蛋白活性的任何热休克蛋白47、肽或多肽。热休克蛋白47为丝氨酸蛋
白酶抑制剂(serpin)，也称为(例如)serpin肽酶抑制剂、进化枝H、成员1(SERPINH1)、
SERPINH2、胶原结合蛋白1(CBP1)、CBP2、gp46；砷转化激活蛋白3(AsTP3)；HSP47；增殖诱导基因14(PIG14)；PPROM；风湿性关节炎抗原A-47(RA-A47)；胶原结合蛋白-1；和胶原结合
蛋白-2。在某些优选的实施方案中，“hsp47”指人hsp47。热休克蛋白47(或更特别地人
hsp47)可具有与SEQ ID NO.2(图7)相同或实质上相同的氨基酸序列。

[0309] 如本文所使用的术语“编码hsp47的核苷酸序列”指编码hsp47蛋白或其部分的核苷酸序列。术语“编码hsp47的核苷酸序列”也旨在包括hsp47编码序列，例如hsp47同种
型、突变hsp47基因、hsp47基因的剪接突变体和hsp47基因多态性。编码hsp47的核酸序
列包括编码hsp47的mRNA序列，也称为“hsp47mRNA”。人hsp47mRNA的示例性序列为SEQ
ID.NO.1。

[0310] 如本文所使用术语“核酸分子”或“核酸”可互换使用并且指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸。本文更加详细地描述了“核酸子”的变型。核酸分子涵盖本文所述的经修饰核
酸分子和未经修饰的核酸分子。核酸分子可包括呈任何组合的脱氧核糖核苷酸、核糖核苷
酸、经修饰的核苷酸或核苷酸类似物。

[0311] 如本文所使用术语“核苷酸”指具有糖(或其类似物或经修饰糖)、核苷酸碱基(或其类似物或经修饰碱基)和磷酸基团(或其类似物或经修饰磷酸基团)的化学部分。核苷
酸涵盖如本文所述经修饰的核苷酸或未经修饰的核苷酸。如本文所使用，核苷酸可包括脱
氧核糖核苷酸(例如，未经修饰的脱氧核糖核苷酸)、核糖核苷酸(例如，未经修饰的核糖核
苷酸)、经修饰的核苷酸类似物，尤其包括锁核酸和解锁核酸、肽核酸、L-核苷酸(也称为镜
像核苷酸)、亚乙基桥接核酸(ENA)、阿拉伯糖苷、PACE、具有6 碳糖的核苷酸以及常视为非
核苷酸的核苷酸类似物(包括脱碱基核苷酸)。在一些实施方案中，核苷酸可在糖、核苷酸
碱基和/或磷酸基团中经本领域中已知的任何修饰，例如本文所述的修饰所修饰。如本文
所使用的“多核苷酸”或“寡核苷酸”指连接的核苷酸链；同样多核苷酸和寡核苷酸可具有
如本领域中众所周知和/或本文公开的核苷酸糖、核苷酸碱基和磷酸主链中的修饰。

[0312] 如本文所使用，术语“短干扰核酸”、“siNA”或“短干扰核酸分子”指能够调节基因表达或病毒复制的任何核酸分子。优选地，siNA抑制或下调基因表达或病毒复制。
siNA包括但不限于能够介导序列特异性RNAi的核酸分子，例如短干扰RNA(siRNA)、双链
RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)、短干扰寡核苷酸、短干扰核酸、短干扰经
修饰寡核苷酸、经化学修饰的siRNA、转录后基因沉默RNA(ptgsRNA)和其它。如本文所使
用，“短干扰核酸”、“siNA”或“短干扰核酸分子”具有本文它处更加详细描述的含义。

[0313] 如本文所使用，术语“互补”指核酸可通过常规沃森-克里克或其它非常规类型与另一核酸序列形成氢键。关于本文公开的核酸分子，核酸分子与其互补序列的结合
自由能足以使核酸的相关功能进行，例如RNAi活性。核酸分子结合自由能的确定在本
领域中众所周知(见，例如，Turner等，1987,CSH Symp.Quant.Biol.LII第123-133页；
Frier 等，1986,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 83:9373-9377；Turner 等，1987,J.Am.Chem.
Soc.109:3783-3785)。百分比互补性指出了核酸分子中可与第二核酸序列形成氢键(例
如，沃森-克里克碱基配对)的邻近残基的百分比(例如第一个寡核苷酸中总计10个核苷
酸中5、6、7、8、9或10的核苷酸与具有10个核苷酸的第二核酸序列碱基配对分别表示50%、
60%、70%、80%、90%和100%互补)。“完全互补”指核酸分子的所有邻近残基将与第二核酸序列中相同数量的邻近残基氢键结合。在一个实施方案中，本文公开的核酸分子包括约15至
约35个或更多个(例如，约15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、
33、34或35个或更多个)与一个或多个靶核酸分子或其部分互补的核苷酸。

[0314] 如本文所使用，术语“有义区”指与siNA分子的反义区互补(部分或完全)的siNA分子的核苷酸序列。siNA分子的有义链可包括与靶核酸序列具有同源性的核酸序列。如本
文所使用，“有义链”指包括有义区并且也可包括另外的核苷酸的核酸分子。

[0315] 如本文所使用，术语“反义区”指与靶核酸序列互补(部分或完全)的siNA分子的核苷酸序列。siNA分子的反义链可任选包括与siNA分子的有义区互补的核酸序列。如
本文所使用，术语“反义链”指包括反义区并且也可包括另外的核苷酸的核酸分子。

[0316] 如本文所使用，术语“RNA”指包括至少一个核糖核苷酸残基的分子。

[0317] 如本文所使用，术语“双链体区”指两个互补或实质上互补的寡核苷酸中通过沃森-克里克碱基配对或允许互补或实质上互补的寡核苷酸链之间的双链体的任何其它方
式相互形成碱基对的区域。例如，具有21个核苷酸单元的寡核苷酸链可与21个核苷酸单
元的另一个寡核苷酸碱基配对，然而每条链上仅19个碱基互补或实质上互补，使得“双链
体区”由19个碱基对组成。剩余碱基对可(例如)作为5’和3’突出端存在。进一步地，
双链体区中，不需要100%互补性；双链体区中可允许实质上的互补性。实质上的互补性指
链之间使其能够在生物条件下退火互补性。根据经验确定两条链是否能够在生物条件下退
火的技术在本领域中众所周知。可选地，可在生物条件下合成两条链并加在一起以确定它
们是否相互退火。

[0318] 如本文所使用，术语“非配对核苷酸类似物”指包括非碱基配对部分的核苷酸类似物，包括但不限于：6消氨基腺苷(水粉蕈素(Nebularine))、4-Me-吲哚、3-硝基吡咯、
5-硝基吲哚、Ds、Pa、N3-Meribo U、N3-Me riboT、N3-Me dC、N3-Me-dT、N1-Me-dG、N1-Me-dA、N3-乙基-dC、N3-Me dC。在一些实施方案中，非碱基配对核苷酸类似物为核糖核苷酸。在
其它实施方案中，非碱基配对核苷酸类似物为脱氧核糖核苷酸。

[0319] 如本文所使用，术语“末端官能团”包括但不限于卤素、醇基、胺基、羧基、酯基、酰胺基、醛基、酮基、醚基。

[0320] 如本文所使用的术语“脱碱基核苷酸”或“脱碱基核苷酸类似物”在本文和本领域中通常也可能称为假核苷酸或非常规部分。虽然核苷酸为核酸的单体单元，通常由核糖或
脱氧核糖、磷酸和碱基(DNA中为腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶或胞嘧啶；RNA中为腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶或胞嘧啶)组成。脱碱基或假核苷酸缺乏碱基，因此在严格意义上并非为本领域
中通常所使用的术语核苷酸。脱碱基脱氧核糖部分包括(例如)脱碱基脱氧核糖-3’-磷
酸；1,2-双脱氧-D-呋喃核糖-3-磷酸；1,4-脱水-2-脱氧-D-核糖醇-3-磷酸。反向脱
碱基脱氧核糖部分包括反向脱碱基脱氧核糖；3’,5’反向脱氧脱碱基5’-磷酸。

[0321] 如本文使用的术语“加帽部分”包括可与(N’)y的5'末端共价连接的部分并且包括脱碱基核糖部分、脱碱基脱氧核糖部分、包括2’O烷基修饰的修饰脱碱基核糖和脱碱
基脱氧核糖部分；反向脱碱基核糖和脱碱基脱氧核糖部分及其修饰；C6-亚氨基-Pi；包括
L-DNA和L-RNA的镜像核苷酸；5’OMe核苷酸；和核苷酸类似物，包括4',5'-亚甲基核苷
酸；1-(β-D-赤型呋喃基)核苷酸；4'-硫代核苷酸、碳环核苷酸；5'-氨基-烷基磷酸酯；
1,3-二氨基-2-丙基磷酸酯、3-氨基丙基磷酸酯；6-氨基己基磷酸酯；12-氨基十二烷基磷
酸酯；羟基丙基磷酸酯；1,5-脱水己糖醇核苷酸；α-核苷酸；苏-戊呋喃糖基核苷酸；无环
3',4'-开环核苷酸；3,4-二羟基丁基核苷酸；3,5-二羟基戊基核苷酸；5'-5'-反向脱碱基
部分；1,4-丁二醇磷酸酯；5'-氨基；和桥接或非桥接甲基膦酸酯和5'-巯基部分。

[0322] 某些加帽部分可为脱碱基核糖或脱碱基脱氧核糖部分；反向脱碱基核糖或脱碱基脱氧核糖部分；C6-氨基-Pi；包括L-DNA和L-RNA的镜像核苷酸。可使用一种或多种反
向核苷酸，例如反向胸苷或反向腺嘌呤合成本文公开的核酸分子(例如见Takei等，2002.
JBC277(26):23800-06)。

[0323] 如本文所使用的术语“非常规部分”指非核苷酸部分，包括脱碱基部分、反向脱碱基部分、烃(烷基)部分及其衍生物，并且进一步包括脱氧核糖核苷酸、经修饰的脱氧核糖
核苷酸、镜像核苷酸(L-DNA或L-RNA)、非碱基配对核苷酸类似物和通过2’-5’核苷酸间磷
酸键与相邻核苷酸连接的核苷酸；包括LNA和亚乙基桥接核酸的桥接核酸，连键修饰(例
如，PACE)和碱基修饰的核苷酸以及本文明确公开为非常规部分的另外的部分。

[0324] 如本文所使用，关于基因表达的术语“抑制”、“下调”或“降低”指基因表达、或编码一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的RNA分子或等效RNA分子(例如，mRNA)的水平、或一种或多种蛋白质或蛋白质亚单位的活性降低至低于在抑制因子(例如具有本文所述结构
特征的核酸分子，例如siNA)缺乏时观察到的活性；例如表达可降低至90%、80%、70%、60%、
50%、40%、30%、20%、10%、5%或低于在抑制剂缺乏时观察到的表达。

[0325] 附图简述

[0326] 图1为示出GFP siNA对各个报告细胞系的影响的条形图。通过将人HSP47cDNA-GFP或大鼠GP46cDNA-GFP构建体经慢病毒诱导为HEK293、人纤维肉瘤细胞系
HT1080、人HSC系hTERT或NRK细胞系创建细胞系。将阴性对照siNA或抗GFP的siNA引
入细胞中并测量GFP荧光。结果显示，在不同细胞系中抗GFP的siNA将荧光敲低至不同程
度。选择293_HSP47-GFP和293_GP46-GFP细胞系进行siHsp47筛选，因为它们易于转染并
且对荧光敲低敏感。

[0327] 图2为示出了293_HSP47-GFP和293_GP46-GFP细胞系中各siHsp47的细胞毒性和敲低效率的一系列条形图。结果显示siHsp47-C、siHsp47-2和siHsp47-2d有效敲低人
HSP47和大鼠GP46(人hsp47同源物)，大体上无细胞毒性。抗GP46的siGp46A不敲低人
HSP47。另外，新设计的siHsp47在敲低大鼠GP46方面优于siGp46A。

[0328] 图3为示出了使用人HSC细胞系hTERT通过 qPCR测量的各siHsp47对hsp47mRNA的敲低作用的条形图。Y轴表示hsp47的剩余mRNA水平。在试验的所有
hsp47siNA中HSP47-C最有效。

[0329] 图4为示出了hTERT细胞中不同hsp47siNA对胶原I表达的影响的条形图。通过使用探针进行实时定量PCR测量胶原ImRNA水平。Y轴表示胶原I的剩余mRNA
表达。结果显示在用一些候选物(siHsp47-2、siHsp47-2d及其与siHsp47-1的组合)处理
的细胞中胶原I mRNA水平显著降低。

[0330] 图5显示在用siHSP47处理的动物体内肝脏的纤维化区域减少。

[0331] 图6为人hsp47mRNA cDNA的示例性核酸序列(SEQ ID NO:1；基于基因库登录号：NM_001235中公开的cDNA)。

[0332] 图7为人hsp47的示例性氨基酸序列(SEQ ID NO:2)。

[0333] 图8为人hsp47cDNA的蛋白质编码核酸序列(SEQ ID NO:59)，其与SEQ ID NO:1的核苷酸230-1486相对应。

[0334] 图9A-9I分别示出了通过溴化乙锭染色检测的化合物_1、化合物_2、化合物_3、化合物_4、化合物_5、化合物_6、化合物_7、化合物_8和化合物_9的血浆稳定性。

[0335] 图10A-10I分别示出了化合物_1、化合物_2、化合物_3、化合物_4、化合物_5、化合物_6、化合物_7、化合物_8和化合物_9的中靶/脱靶活性。AS_CM显示了化合物的反义
链对包含完全匹配插入的质粒的活性；AS_CM显示了化合物的反义链对包含种子序列插入
的质粒的活性；S_CM显示了化合物的有义链对包含完全匹配插入的质粒的活性。除图10F
中所示数据在大鼠REF52细胞中进行外，所有测定均在人细胞中进行。

[0336] 发明详述

[0337] RNA干扰和siNA核酸分子

[0338] RNA干扰指在动物体内受短干扰RNA(siRNA)介导的序列特异性转录后基因沉默过程 (Zamore 等，2000,Cell,101,25-33；Fire 等，1998,Nature,391,806；Hamilton 等，
1999,Science,286,950-951；Lin 等，1999,Nature,402,128-129；Sharp,1999,Genes&Dev.
,13:139-141；和Strauss，1999,Science,286,886)。植物中相应的过程(Heifetz等，国际
PCT公布No.WO 99/61631)通常称为转录后基因沉默(PTG)或RNA沉默。据信转录后基因
沉默的过程是用于防止外源基因表达的进化保守的细胞防御机制(Fire等，1999,Trends
Genet.,15,358)。这种对外源基因表达的防护可能响应于源自病毒感染或转座子元件至
宿主基因组的随机整合的双链RNA(dsRNA)生成，通过特异性破坏同源单链RNA或病毒基
因组RNA的细胞反应而进化。细胞中dsRNA的存在通过尚未完全表征的机制触发RNAi反
应。这种机制似乎不同于牵涉双链RNA特异性核糖核酸酶的其它已知机制，例如由dsRNA
介导的蛋白激酶PKR和2',5'-寡腺苷酸合成酶激活产生的干扰素反应，导致mRNA被核糖
核酸酶L非特异性裂解(见例如美国专利No.6,107,094;5,898,031；Clemens等，1997,J.
Interferon&Cytokine Res.,17,503-524；Adah等，2001,Curr.Med.Chem.,8,1189)。

[0339] 细胞中长dsRNA的存在刺激称为dicer的核糖核酸酶III酶的活性 (Bass,2000,Cell,101,235；Zamore 等，2000,Cell,101,25-33；Hammond 等，
2000,Nature,404,293)。dicer牵涉于将dsRNA加工为称为短干扰RNA(siRNA)的dsRNA
短片段 (Zamore 等，2000,Cell,101,25-33；Bass,2000,Cell,101,235；Berstein 等，
2001,Nature,409,363)。原于dicer活性的短干扰RNA通常长度为约21至约23个核苷酸并
包括约19个碱基对的双链体(Zamore等，2000,Cell,101,25-33；Elbashir等，2001,Genes
Dev.,15,188)。在从翻译控制中牵连的保守结构的前体RNA切除21和22-核苷酸小时序
RNA(stRNA)中也牵连dicer(Hutvagner等，2001,Science,293,834)。RNAi反应也是内切
核酸酶复合体的特征，通常称为RNA诱导的沉默复合体(RISC)，其介导具有与siRNA双链体
的反义链互补的序列的单链RNA的裂解。靶RNA的裂解在与siRNA双链体的反义链互补的
区域的中部发生(Elbashir等，2001,Genes Dev.,15,188)。

[0340] 已经在多种系统中研究了RNAi。Fire等，1998,Nature,391,806首先在秀丽隐杆线虫中观察到了RNAi。Bahramian和Zarbl，1999,Molecular and Cellular
Biology,19,274-283和Wianny和Goetz,1999,Nature Cell Biol.,2,70描述了哺乳动物
系统中dsRNA介导的RNAi。Hammond等，2000,Nature,404,293描述了经dsRNA转染的果
蝇细胞中的RNAi。Elbashir等，2001,Nature,411,494和Tuschl等，国际PCT公布No.WO
01/75164描述了通过将引入培养的哺乳动物细胞(包括人胚肾和HeLa细胞)中合成21-核
苷酸RNA的双链体诱导的RNAi。最近对果蝇胚胎溶解产物的研究(Elbashir等，2001,EMBO
J.,20,6877和Tuschl等，国际PCT公布No.WO 01/75164)已揭示对介导有效RNAi活性所
必需的siRNA长度、结构、化学组成和序列的某些要求。

[0341] 核酸分子(例如具有本文公开的结构特征)可通过以序列特异性方式介导RNA干扰“RNAi”或基因沉默抑制或下调基因表达或病毒复制；见例如，
Zamore 等，2000,Cell,101,25-33；Bass，2001,Nature,411,428-429；Elbashir
等，2001,Nature,411,494-498；和 Kreutzer 等，国际 PCT 公布 No.WO 00/44895；
Zernicka-Goetz 等，国际 PCT 公布 No.WO 01/36646；Fire，国际 PCT公布 No.WO
99/32619；Plaetinck等，国际PCT公布No.WO 00/01846；Mello和Fire,国际PCT公
布No.WO 01/29058；Deschamps-Depaillette，国际PCT公布No.WO99/07409；和Li等，
国际 PCT 公布 No.WO 00/44914；Allshire，2002,Science,297,1818-1819；Volpe 等，
2002,Science,297,1833-1837；Jenuwein，2002,Science,297,2215-2218；和 Hall 等，
2002,Science,297,2232-2237；Hutvagner 和 Zamore，2002,Science,297,2056-60；
McManus等，2002,RNA,8,842-850；Reinhart等，2002,Gene&Dev.,16,1616-1626；和Reinha
rt&Bartel,2002,Science,297,1831)。

[0342] siNA核酸分子可由两条单独的多核苷酸链装配而成，其中一条链为有义链而另一条为反义链，其中反义链和有义链自补(即，每条链包括与另一条链上的核苷酸序列互补
的核苷酸序列)；例如其中反义链和有义链形成具有如本文关于如所提供的核酸分子所描
述的任何长度及结构的双链体或双链结构，例如其中双链区(双链体区)为约15至约49
个碱基对(例如，约17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、
37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个碱基对)；反义链包括与靶核酸分子(即，hsp47mRNA)或其一部分中的核苷酸序列互补的核苷酸序列，并且有义链包括与靶核酸序列
或其一部分相对应的核苷酸序列(例如，本文核酸分子的约17至约49个或更多个核苷酸
与靶核酸或其一部分互补)。

[0343] 在某些方面和实施方案中，本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可为“RISC长度”分子或可为以下更加详细描述的Dicer底物。

[0344] siNA核酸分子可包括单独的有义和反义序列或区域，其中有义和反义区通过如本文领域中已知的核苷酸或非核苷酸连接分子共价连接，或通过离子相互作用、氢键合、范德
华相互作用、疏水相互作用和/或堆积相互作用交替地非共价连接。核酸分子可包括与靶
基因的核苷酸序列互补的核苷酸序列。核酸分子可以使靶基因表达受到抑制的方式与靶基
因的核苷酸序列相互作用。

[0345] 或者，siNA核酸分子可由单个多核苷酸装配而成，其中核酸分子的自补有义和反义区依靠基于核酸或非基于核酸的连接子连接，即反义链和有义链是单个多核苷酸具有折
叠形成双链体区(例如形成本领域中众所周知的“发夹”结构)的反义区和有义区的一部
分。这种siNA核酸分子可为具有双链体、非对称双链体、发夹或非对称发夹二级结构的多
核苷酸，具有自补有义和反义区，其中反义区包括与单独靶核酸分子的核苷酸序列或其一
部分互补的核苷酸序列，并且有义区具有与靶核酸序列(例如，hsp47mRNA的序列)相对应
的核苷酸序列。这种siNA核酸分子可为具有两个或更多个环的环状单链多核苷酸和包含
自补有义和反义区的主干，其中反义区包括与靶核酸分子中的核苷酸序列或其一部分互补
的核苷酸序列，并且有义区具有与靶核酸序列或其一部分相对应的核苷酸序列，并且其中
在体内或体外加工环状多核苷酸以生成能够介导RNAi的活性核酸分子。

[0346] 在本领域中常用以下命名法描述siNA分子的长度和突出端并且可在整篇说明书和实施例中使用。为双链体指定的名称指出了寡聚体的长度和突出端的存在或不存在。
例如，“21+2”双链体含有两条长度均为21个核苷酸的核酸链，也称为21聚体siRNA双链
体或21聚体核酸并且具有2个核苷酸的3’-突出端。“21-2”设计指具有2个核苷酸的
5’-突出端的21聚体核酸双链体。21-0设计为没有突出端(平端)的21聚体核酸双链体。
“21+2UU”为具有2-核苷酸3’-突出端的21聚体双链体并且3’端的2个末端核苷酸均为
U残基(这可能导致与靶序列错配)。前述命名法可应用于具有各种长度的链、双链体和突
出的siNA分子(例如19-0、21+2、27+2等)。在替代性但相似的命名法中，“25/27”为具有
25碱基有义链和27碱基反义链，带有2-核苷酸的3’-突出端的非对称双链体。“27/25”
为具有27碱基有义链和25碱基反义链的非对称双链体。

[0347] 化学修饰

[0348] 在某些方面和实施方案中，本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)包括一个或多个修饰(或化学修饰)。在某些实施方案中，这些修饰包括使得分子不同于标准核糖核苷酸
或RNA分子(即，包括标准腺苷、胞嘧啶、尿嘧啶或鸟苷部分的核糖核苷酸或RNA分子)的
核酸分子或多核苷酸的任何改变；标准核糖核苷酸可称为“未经修饰的”核糖核苷酸或未经
修饰的核糖核酸。具有腺苷、胞嘧啶、胸腺嘧啶或鸟苷部分表示的2’-脱氧糖的常规DNA碱
基和多核苷酸可称为“未经修饰的脱氧核糖核苷酸”或“未经修饰的脱氧核糖核酸”；因此，除非有清楚的相反指示，如本文所使用的术语“未经修饰的核苷酸”或“未经修饰的核酸”指“未经修饰的核糖核苷酸”或“未经修饰的核糖核酸”。这种修饰可存在于核苷酸糖、核苷酸碱基、核苷酸磷酸基团和/或多核苷酸的磷酸主链中。

[0349] 在某些实施方案中，本文公开的修饰可用于增强分子的RNAi活性和/或增强分子在体内的稳定性，尤其是在血清中的稳定性，和/或增强分子的生物利用率。修饰的非限制
性实例包括但不限于核苷酸间或核苷间连键；在核酸分子的任何位置和链上的脱氧核苷酸
和双脱氧核糖核苷酸；在2’-位置处具有优选选自氨基、氟、甲氧基、烷氧基和烷基的修饰
的核酸(例如，核糖核酸)；2’-脱氧核糖核苷酸、2’-O-甲基核糖核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核糖核苷酸、“通用碱基”核苷酸、“无环”核苷酸、5-C-甲基核苷酸、生物素基团和末端甘油基和/或反向脱氧脱碱基残基掺入、位阻分子，例如荧光分子等。其它核苷酸修饰因子可包
括3’-脱氧腺苷(蛹虫草菌素(cordycepin))、3’-叠氮-3’-脱氧胸苷(AZT)、2’,3’-双
脱氧肌苷(ddI)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)、2’,3’-双脱氢-2’,3’-双脱氧
胸苷(d4T)和3’-叠氮-3’-脱氧胸苷(AZT)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)和
2’,3’-双脱氢-2’,3’-双脱氧胸苷(d4T)的单磷酸核苷酸。以下更加详细地描述了有关
各种修饰的更多详情。

[0350] 经修饰的核苷酸包括具有Northern构象(例如，Northern假回转环，见例如Saenger,Principles of Nucleic Acid Structure,Springer-Verlag编，1984)的核苷
酸。具有northern构型的核苷酸的非限制性实例包括锁核酸(LNA)核苷酸(例如，2’-O、
4’-C-亚甲基-(D-呋喃核糖基)核苷酸)；2’-甲氧基乙氧基(MOE)核苷酸；2’-甲基-硫
代-乙基、2’-脱氧-2’-氟代核苷酸、2’-脱氧-2’-氯代核苷酸、2’-叠氮核苷酸和2’-O-甲基核苷酸。例如，在Elman等，2005；Kurreck等，2002；Crinelli等，2002；Braasch和Corey，
2001；Bondensgaard等，2000；Wahlestedt等，2000；和国际专利公布No.WO 00/47599、WO
99/14226、WO 98/39352和WO 2004/083430中描述了锁核酸或LNA。在一个实施方案中，
LNA在有义链的5’末端掺入。

[0351] 化学修饰还包括为非核苷酸、无环类似物的解锁核酸或UNA，其中C2’-C3’键不存在(虽然UNA并非真正的核苷酸，但是UNA显然包括在本文考虑到的“经修饰”核苷酸或
经修饰核酸范围内)。在特定实施方案中，具有突出端的核酸分子可修饰为在突出端位置
(即，2个核苷酸突出端)具有UNA。在其它实施方案中，在3’-或5’-端包括UNA。UNA可
位于沿核酸链的任何地方，即位置7。核酸分子可能含有一个或多个UNA。Nucleic Acids
Symposium Series No.52p.133–134(2008)中公开了示例性UNA。在某些实施方案中，本
文所述的核酸分子(例如，siNA分子)包括一个或多个UNA；或一个UNA。在一些实施方案
中，如本文所述具有3’-突出端的核酸分子(例如，siNA分子)包括一个或两个于3’突出
中的UNA。在一些实施方案中如本文所述的核酸分子(例如，siNA分子)包括于反义链中
的UNA(例如一个UNA)；例如在反义链的位置6或位置7处。化学修饰还包括例如本文所
述的非配对核苷酸类似物。化学修饰进一步包括本文公开的非常规部分。

[0352] 化学修饰还包括于寡核苷酸的5’和/或3’部分的末端修饰并且也称为加帽部分。这种末端修饰选自核苷酸、经修饰的核苷酸、脂质、肽和糖。

[0353] 化学修饰还包括六元“六元环核苷酸类似物”。Allart等(Nucleosides&Nucleotides,1998,17:1523-1526；和Perez-Perez等，1996,Bioorg.and Medicinal Chem Letters
6:1457-1460)中公开了六元环核苷酸类似物的实例。国际专利公布No.WO 2006/047842中
公开了包括六元环核苷酸类似物的寡核苷酸，包括阿卓糖醇核苷酸单体。

[0354] 化学修饰还包括与正常的天然核苷酸相比具有反手性的“镜像”核苷酸；即可为天然存在的D-核苷酸的“L-核苷酸”类似物的镜像核苷酸(见美国专利No.6,602,858)。镜
像核苷酸可进一步包括至少一个例如本文所述的糖或碱基修饰和/或主链修饰，例如硫代
磷酸酯或膦酸酯部分。美国专利No.6,602,858公开了包括至少一个L-核苷酸取代的核酸
催化剂。镜像核苷酸包括(例如)L-DNA(L-脱氧核糖腺苷-3’-磷酸酯(镜像dA)；L-脱
氧核糖胞苷-3’-磷酸酯(镜像dC)；L-脱氧核糖鸟苷-3’-磷酸酯(镜像dG)；L-脱氧核
糖胸苷-3’-磷酸酯(镜像dT))和L-RNA(L-核糖腺苷-3’-磷酸酯(镜像rA)；L-核糖胞
苷-3’-磷酸酯(镜像rC)；L-核糖鸟苷-3’-磷酸酯(镜像rG)；L-核糖尿嘧啶-3’-磷
酸酯(镜像dU)。

[0355] 在一些实施方案中，经修饰的核糖核苷酸包括经修饰的脱氧核糖核苷酸，例如可用作5’末端位置(位置编号1)处的核苷酸的5’OMeDNA(5-甲基-脱氧核糖鸟苷-3'-磷
酸酯)；PACE(脱氧核糖腺苷3'膦酰基乙酸酯、脱氧核糖胞苷3'膦酰基乙酸酯、脱氧核糖鸟
苷3'膦酰基乙酸酯、脱氧核糖胸苷3'膦酰基乙酸酯。

[0356] 修饰可能存在于本文公开的核酸分子的一条或多条链中，例如存在于有义链、反义链或两条链中。在某些实施方案中，反义链可包括修饰而有义链可能仅包括未经修饰的
RNA。

[0357] 核碱基

[0358] 本文公开的核酸的核碱基可包括未经修饰的核糖核苷酸(嘌呤和嘧啶)例如腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶。可用天然和合成的核碱基修饰一条或两条链中的核碱基，
例如胸腺嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、肌苷、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它
烷基衍生物、任何“通用碱基”核苷酸；腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物，5-卤
代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶，6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧
啶(假尿嘧啶)，4-硫代尿嘧啶，8-卤代、氨基、巯基、硫代烷基、羟基和其它8-取代的腺嘌
呤和鸟嘌呤，5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤、脱氮杂嘌呤，嘌
呤和嘧啶的杂环取代类似物（例如氨基乙氧基吩噁嗪）、嘌呤和嘧啶的衍生物(例如，1-烷
基-、1-烯基-、杂芳基和1-炔基衍生物)及其互变异构体，8-氧代-N6-甲基腺嘌呤，7-二
氮杂黄嘌呤，5-甲基胞嘧啶，5-甲基尿嘧啶，5-(1-丙炔基)尿嘧啶，5-(1-丙炔基)胞嘧啶
和4,4-乙醇胞嘧啶)。适合碱基的其它实例包括非嘌呤基和非嘧啶基例如2-氨基吡啶和
三嗪。

[0359] 糖部分

[0360] 本文公开的核酸中的糖部分可包括无任何修饰的2’-羟基-戊呋喃糖基糖部分。或者，糖部分可经修饰，例如2’-脱氧-戊呋喃糖基糖部分、D-核糖、己糖，在戊呋喃糖基糖部分的2’位置处的修饰，例如2’-O-烷基(包括2’-O-甲基和2’-O-乙基)，即2’-烷
氧基，2’-氨基、2’-O-烯丙基、2’-S-烷基、2’-卤素(包括2’-氟、氯和溴)、2’-甲氧
基乙氧基、2’-O-甲氧基乙基、2’-O-2-甲氧基乙基、2’-烯丙氧基(-OCH2CH=CH2)、2’-炔丙基、2’-丙基、乙炔基、乙烯基、丙烯基、CF、氰基、咪唑、羧酸酯基、硫代酸酯基(thioate)、C1-C10低级烷基、经取代的低级烷基、烷芳基或芳烷基、OCF3、OCN、O-、S-或N-烷基；O-、S或N-烯基；SOCH3；SO2CH3；ONO2；NO2、N3；杂环烷基；杂环烷芳基；氨基烷基氨基；多聚烷基氨基或经取代的甲硅烷基，尤其例如欧洲专利EP 0586520B1或EP 0618925B1中所述。

[0361] 烷基基团包括饱和脂肪族基团，包括直链烷基基团(例如，甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等)、支链烷基基团(异丙基、叔丁基、异丁基等)、环烷基(脂环族)基团(环丙基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基)、烷基取代的环烷基基团
和环烷基取代的烷基基团。在某些实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有6个或更
少的碳原子(例如，对于直链而言为C1-C6，对于支链而言为C3-C6)，并且更优选为4个或
更少。同样，优选的环烷基可能在其环结构中具有3-8个碳原子，并且更优选地在其环结构
中具有5个或6个碳。术语C1-C6包括含有1-6个碳原子的烷基基团。烷基基团可为经取
代的烷基基团，例如有取代基取代烃主链的一个或多个碳上的氢的烷基部分。这种取代基
可包括(例如)烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯基、膦酸基、亚膦酸基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基
氨基、氨甲酰基和脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳香族或杂芳族部分。

[0362] 烷氧基基团包括与氧原子共价连接的经取代和未经取代的烷基、烯基和炔基基团。烷氧基基团的实例包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基基团。经
取代的烷氧基基团的实例包括卤化烷氧基基团。烷氧基基团可用例如以下的基团取代：烯
基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷基硫代羰基、烷氧基、磷酸酯基、膦酸基、亚膦酸基、氰基、氨基(包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基)、酰基氨基(包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨甲酰基和
脲基)、脒基、亚氨基、巯基、烷基硫代、芳基硫代、硫代羧酸酯基、硫酸酯基、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰胺基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳香族或杂芳族部分。卤素取代的烷氧基基团的实例包括但不限于氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧
基、氯甲氧基、二氯甲氧基、三氯甲氧基等。

[0363] 在一些实施方案中，戊呋喃糖基环可被缺乏戊呋喃糖基环的C2′-C3′键的无环衍生物取代。例如，无环核苷酸可用2-羟基乙氧基甲基基团取代dNMP中通常存在的2’-脱
氧呋喃核糖基糖。

[0364] 卤素包括氟、溴、氯和碘。

[0365] 主链

[0366] 本文公开的核酸的核苷亚单位可通过磷酸二酯键相互连接。磷酸二酯键可任选用其它连键取代。例如，硫代磷酸酯、硫代磷酸酯-D-核糖实体、三酯、硫代酯、2’-5’桥
接主链(也可能称为5’-2’或2'5'核苷酸或2'5'核糖核苷酸)、PACE、3’-(或-5’)脱
氧-3’-(或-5’)硫代-硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、3’-(或-5’)脱氧亚膦
酸酯、硼代磷酸酯、3’-(或-5’)脱氧-3’-(或5’-)氨基氨基磷酸酯、氢膦酸酯、膦酸酯、硼代磷酸酯、氨基磷酸酯、烷基或芳基膦酸酯和磷酸三酯修饰，例如烷基磷酸三酯、磷酸三
酯磷键、5’-乙氧基磷酸二酯、对烷氧基磷酸三酯、甲基膦酸酯和非含磷键，例如碳酸酯键、氨甲酸酯键、甲硅烷基键、硫键、磺酸酯键、磺胺键、甲醛基键、硫代甲醛基键、肟键、亚甲基亚氨基键、亚甲基甲基亚氨基键、亚甲基亚肼基键、亚甲基二甲基亚肼基键和亚甲氧基甲基
亚氨基键。

[0367] 本文公开的核酸分子可包括肽核酸(PNA)主链。PNA主链包括通过肽键连接的重复N-(2-氨基乙基)-甘氨酸单元。各种碱基(例如)嘌呤、嘧啶、天然和合成的碱基通过
亚甲基羰基键与主链连接。

[0368] 末端磷酸

[0369] 可在末端磷酸基团处进行修饰。不同稳定化学的非限制性实例可用于(例如)稳定核酸序列的3’端，包括(1)[3-3’]-反向脱氧核糖；(2)脱氧核糖核苷酸；(3)
[5’-3’]-3’-脱氧核糖核苷酸；(4)[5’-3’]-核糖核苷酸；(5)[5’-3’]-3’-O-甲基核糖核苷酸；(6)3’-甘油基；(7)[3’-5’]-3’-脱氧核糖核苷酸；(8)[3’-3’]-脱氧核糖核苷酸；(9)[5’-2’]-脱氧核糖核苷酸；和(10)[5-3’]-双脱氧核糖核苷酸。除未经修饰的主
链外，化学处理可与本文所述的一种或多种不同主链修饰组合。

[0370] 示例性化学修饰的末端磷酸基团包括以下所示的基团：团：

[0371]

[0372] 共轭物

[0373] 本文提供的经修饰的核苷酸和核酸分子(例如，siNA分子)可包括共轭物，例如与化学修饰的核酸分子共价连接的共轭物。共轭物的非限制性实例包括Vargeese等，
U.S.Ser.No.10/427,160中所述的共轭物和配体。共轭物可通过生物可降解连接子与核酸
分子(例如siNA分子)共价连接。共轭物分子可在化学修饰的核酸分子的有义链、反义链
或两条链的3’端连接。共轭物分子可在化学修饰的核酸分子的有义链、反义链或两条链的
5’端连接。共轭物分子可在化学修饰的核酸分子的有义链、反义链或两条链的3’端和5’
端或其任何组合处连接。在一个实施方案中，共轭物分子可包括利于化学修饰的核酸分子
递送至生物系统(例如细胞)中的分子。在另一实施方案中，与化学修饰的核酸分子连接
的共轭物分子为聚乙二醇、人血清白蛋白或可介导细胞摄取的细胞受体的配体。Vargeese
等，U.S.Ser.No.10/201,394中描述了本发明考虑到的可与化学修饰的核酸分子连接的特
异性共轭物分子的实例。

[0374] 连接子

[0375] 本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可包括连接核酸的有义区和核酸的反义区的核苷酸、非核苷酸或混合核苷酸/非核苷酸连接子。核苷酸连接子可为长度≥2个核苷
酸，例如长度为3、4、5、6、7、8、9或10个核苷酸的连接子。核苷酸连接子可为核酸适配子。
用本文所使用的“适配子”或“核酸适配子”指特异性结合靶分子的核酸分子，其中所述核
酸分子包括在其自然环境中被靶分子识别的序列的序列。或者，适配子可为与靶分子(例
如hsp47mRN)结合的核酸分子，其中靶分子并非自然与核酸结合。例如，适配子可用于与蛋
白质的结合结构域结合，从而防止天然配体与蛋白质的相互作用。这是非限制性实例并且
本领域中的人员将认识到使用本领域中通常已知的技术可易于产生其它实施方案。见，例
如，Gold等，1995,Annu.Rev.Biochem.,64,763；Brody和Gold,2000,J.Biotechnol.,74,5；
Sun，2000,Curr.Opin.Mol.Ther.,2,100；Kusser，2000,J.Biotechnol.,74,27；Hermann 和Patel，2000,Science,287,820；和Jayasena，1999,ClinicalChemistry,45,1628。

[0376] 非核苷酸连接子可包括脱碱基核苷酸、聚醚、聚胺、聚酰胺、肽、碳水化物、脂质、聚烃或其它聚合化合物(例如具有2-100个乙二醇单元的聚乙二醇)。特定
实例包括 Seela 和 Kaiser，Nucleic Acids Res.1990,18:6353and Nucleic Acids
Res.1987,15:3113；Cload 和 Schepartz，J.Am.Chem.Soc.1991,113:6324；Richardson 和
Schepartz，J.Am.Chem.Soc.1991,113:5109；Ma等，Nucleic Acids Res.1993,21:2585and
Biochemistry 1993,32:1751；Durand等，NucleicAcids Res.1990,18:6353；McCurdy等，
Nucleosides&Nucleotides 1991,10:287；Jschke 等，Tetrahedron Lett.1993,34:301；
Ono等，Biochemistry 1991,30:9914；Arnold等，国际公布No.WO 89/02439；Usman等，国
际公布No.WO 95/06731；Dudycz等，国际公布No.WO 95/11910和Ferentz和Verdine，
J.Am.Chem.Soc.1991,113:4000中描述的连接子。

[0377] 5’端、3’端和突出端

[0378] 本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)可在两侧均具有平端，两侧均有突出端或平端和突出端的组合。突出可在有义链或反义链的5’-或3’-端上出现。

[0379] 双链核酸分子(例如，siNA)的5’-和/或3’-端可具有平端或具有突出端。在有义链或反义链中5’-端可具有平端而3’-端具有突出端。在其它实施方案中，在有义
链或反义链中3’-端可具有平端而5’-端具有突出端。在更多其它实施方案中，5’-和
3’-端均具有平端或5’-和3’-端均具有突出端。

[0380] 核酸的一条或两条链的5’-和/或3’-端可包括游离羟基基团。任何核酸分子链的5’-和/或3’-端可修饰为包括化学修饰。这种修饰稳定核酸分子，例如在3’-端稳
定性可由于核酸分子修饰的存在而具有增强的稳定性。端部修饰(例如，末端帽子)的实
例包括但不限于脱碱基、脱氧脱碱基、反向(脱氧)脱碱基、甘油基、二核苷酸、无环核苷酸、氨基、氟、氯、溴、CN、CF、甲氧基、咪唑、羧酸酯、硫代酯、C1-C10低级烷基、经取代的低级烷基、烷芳基或芳烷基、OCF3、OCN、O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-烯基；SOCH3；SO2CH3；ONO2；
NO2、N3；杂环烷基；杂环烷芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基或经取代的甲硅烷基，其中如欧洲专利EP 586,520和EP 618,925中描述的修饰和本文公开的其它修饰。

[0381] 核酸分子包括具有平端，即不包括任何突出核苷酸的端部的核酸分子。核酸分子可包括一个或多个平端。平端核酸分子的碱基对数量与核酸分子每条链中存在的核苷酸的
数量相等。例如当反义链的5’-端和有义链的3’-端没有任何突出核苷酸时，核酸分子可
包括一个平端。例如当反义链的3’-端和有义链的5-’端没有任何突出核苷酸时，核酸分
子可包括一个平端。例如当反义链的3’-端和有义链的5-’端以及反义链的5’-端和有
义链的3’-端没有任何突出核苷酸时，核酸分子可包括两个平端。平端核酸分子中存在的
其它核苷酸可包括(例如)错配、凸起、环或摆动碱基对以调节核酸分子介导RNA干扰的活
性。

[0382] 在本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)的某些实施方案中，分子的至少一端具有至少一个核苷酸(例如1-8个突出核苷酸)的突出端。例如，本文公开的双链核酸分
子的一条或两条链可在5’端或3’端或二者处具有突出端。突出端可存在于核酸分子的有
义链和反义链的任一条或两条上。突出端的长度可短至1个核苷酸且长至1-8个或更多个
核苷酸(例如，1、2、3、4、5、6、7或8个核苷酸)；在一些优选的实施方案中，突出端为2、3、
4、5、6、7或8个核苷酸；例如突出端可为2个核苷酸。形成突出端的核苷酸可包括脱氧核
糖核苷酸、核糖核苷酸、天然和非天然核碱基或例如本文公开的糖、碱基或磷酸基团中经修
饰的任何核苷酸。双链核酸分子可具有5’-和3’-突出端。5’-和3’-端上的突出可具
有不同长度。突出可包括至少一个可为脱氧核糖核苷酸的核酸修饰。一个或多个脱氧核糖
核苷酸可处于5’-末端。核酸分子各对应链的3’-端可能没有突出端，更优选地没有脱氧
核糖核苷酸突出端。所述一个或多个脱氧核糖核苷酸可能处于3’-末端。dsRNA各对应链
的5’-端可能没有突出端，更优选地没有脱氧核糖核苷酸突出端。链5’或3’-端中的突
出可端为1-8个(例如，约1、2、3、4、5、6、7或8个)未配对核苷酸，优选地，突出端为2-3
个未配对核苷酸；更优选为2个未配对核苷酸。核酸分子可包括具有为约1至约20个(例
如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、1、15、16、17、18、19或20个)，优选1-8个(例如，约1、2、3、4、5、6、7或8个)核苷酸的突出端的双链体核酸分子，例如具有约19个碱基对和
3’-末端单核苷酸、二核苷酸或三核苷酸突出端的约21-核苷酸双链体。本文的核酸分子
可包括具有平端的双链体核酸分子，其中两端均为平端，或可选地，其中一端为平端。本文
公开的核酸分子可包括一个或多个平端，即其中平端没有任何突出核苷酸。在一个实施方
案中，平端核酸分子的碱基对数量与核酸分子每条链中存在的核苷酸数量相等。例如当反
义链的5’-端和有义链的3’-端没有任何突出核苷酸时，核酸分子可包括一个平端。例如
当反义链的3’-端和有义链的5-’端没有任何突出核苷酸时，核酸分子可包括一个平端。
例如当反义链的3’-端和有义链的5-’端以及反义链的5’-端和有义链的3’-端没有任
何突出核苷酸时，核酸分子可包括两个平端。在某些优选的实施方案中，核酸化合物具有平
端。平端siNA分子中存在的其它核苷酸可包括(例如)错配、凸起、环或摆动碱基对以调
节核酸分子介导RNA干扰的活性。

[0383] 在许多实施方案中，本文所述核酸分子(例如，siNA分子)的突出核苷酸的一个或多个或全部经修饰，例如本文所述；例如一个或多个或全部核苷酸可为2’-脱氧核苷酸。

[0384] 修饰的量、位置和模式

[0385] 本文公开的核酸分子(例如，siNA分子)可包括占核酸分子中存在的核苷酸总数量一定百分比的经修饰的核苷酸。因此，核酸分子可包括约5%至约100%经修饰的核苷酸
(例如，约5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、
90%、95%或100%经修饰的核苷酸)。指定核酸分子中存在的经修饰的核苷酸的实际百分比
将取决于核酸中存在的核苷酸总数量。如果核酸分子为单链，则修饰百分比可基于单链核
酸分子中存在的核苷酸的总数量。同样，如果核酸分子为双链，修饰百分比可基于有义链、
反义链或二者中存在的核苷酸的总数量。

[0386] 本文公开的核酸分子可包括占核酸分子中总核苷酸一定百分比的未修饰RNA。因此，核酸分子可包括约5%至约100%经修饰的核苷酸(例如，核酸分子中存在的总核苷酸的
约 5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%)。

[0387] 核酸分子(例如，siNA分子)可包括有义链，所述有义链包括约1至约5个，特别是约1、2、3、4或5个硫代磷酸酯核苷酸间连键，和/或一个或多个(例如，约1、2、3、4、5个或更多个)2’-脱氧基、2’-O-甲基、2’-脱氧-2’-氟，和/或一个或多个(例如，约1、2、
3、4、5个或更多个)通用碱基修饰的核苷酸，和任选地在有义链的3’-端、5’-端或其二者
的末端帽分子；并且其中反义链包括约1至约5个或更多个，特别是约1、2、3、4或5个或更
多个硫代磷酸酯核苷酸间连键，和/或一个或多个(例如，约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个)2’-脱氧基、2’-O-甲基、2’-脱氧-2’-氟，和/或一个或多个(例如，约1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10个或更多个)通用碱基修饰的核苷酸，和任选于反义链的3-端、5’-端或其二者的末端帽分子。核酸分子的有义和/或反义核酸链可包括约1、2、3、4、5、6、7、8、9、
10个或更多个嘧啶核苷酸，经2’-脱氧基、2’-O-甲基和/或2’-脱氧-2’-氟核苷酸化
学修饰，具有或不具有约1至约5个或更多个(例如约1、2、3、4、5或更多个)硫代磷酸酯
核苷酸间连键，和/或存在于相同或不同链中的3’-端、5’-端或其二者处的末端帽分子。

[0388] 核酸分子可能在核酸分子的每条链中包括约1至约5个或更多个(特别是约1、2、3、4、5或更多个)硫代磷酸酯核苷酸间连键。

[0389] 核酸分子可包括(例如)在一条或两条核酸序列链的3’-端、5’-端或其二者处的2’-5’核苷酸间连键。另外，2’-5’核苷酸间连键可存在于一条或两条核酸序列链中的
各个其它位置，例如，包括siNA分子的一条或两条链中每个嘧啶核苷酸的核苷酸间连键在
内的约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个可包括2’-5’核苷酸间连键，或包括siNA分子的一条或两条链中每个嘌呤核苷酸的核苷酸间连键在内的约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个可包括2’-5’核苷酸间连键。

[0390] 化学修饰的短干扰核酸(siNA)分子可包括反义区，其中反义区中存在的任何(例如，一个或多个或全部)嘧啶核苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸(例如，其中所有嘧啶
核苷酸均为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸或多个嘧啶核苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核
苷酸)，并且其中反义区中存在的任何(例如，一个或多个或全部)嘌呤核苷酸为2’-脱
氧嘌呤核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为2’-脱氧嘌呤核苷酸或多个嘌呤核苷酸为
2’-脱氧嘌呤核苷酸)。

[0391] 化学修饰的短干扰核酸(siNA)分子可包括反义区，其中反义区中存在的任何(例如，一个或多个或全部)嘧啶核苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸(例如，其中所有嘧啶
核苷酸均为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸或多个嘧啶核苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷
酸)，并且其中反义区中存在的任何(例如，一个或多个或全部)嘌呤核苷酸为2’-O-甲基
嘌呤核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为2’-O-甲基嘌呤核苷酸或多个嘌呤核苷酸为
2’-O-甲基嘌呤核苷酸)。

[0392] 能够在细胞或重组体外系统内部介导对hsp47的RNA干扰(RNAi)的化学修饰的短干扰核酸(siNA)分子可包括有义区和反义区，其中有义区中存在的一个或多个嘧啶核
苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸(例如，其中所有嘧啶核苷酸均为2’-脱氧-2’-氟
嘧啶核苷酸或多个嘧啶核苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸)，并且有义区中存在的一个
或多个嘌呤核苷酸为2’-脱氧嘌呤核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为2’-脱氧嘌呤
核苷酸或多个嘌呤核苷酸为2’-脱氧嘌呤核苷酸)，其中反义区中存在的一个或多个嘧啶
核苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸(例如，其中所有嘧啶核苷酸均为2’-脱氧-2’-氟
嘧啶核苷酸或多个嘧啶核苷酸为2’-脱氧-2’-氟嘧啶核苷酸)，并且反义区中存在的一个
或多个嘌呤核苷酸为2’-O-甲基嘌呤核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为2’-O-甲基
嘌呤核苷酸或多个嘌呤核苷酸为2’-O-甲基嘌呤核苷酸)。有义区和反义区可具有末端帽
子修饰，例如任选存在于有义和/或反义序列的3’-端、5’-端或其二者处的任何修饰。有
义区和反义区可任选进一步包括具有约1至约4个(例如，约1、2、3或4个)2’-脱氧核苷
酸的3’-末端核苷酸突出端。突出核苷酸可进一步包括一个或多个(例如，约1、2、3、4个
或更多个)硫代磷酸酯、膦酰基乙酸酯和/或硫代膦酰基乙酸酯核苷酸间连键。或者有义区
中的嘌呤核苷酸可为2’-O-甲基嘌呤核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为2’-O-甲基
嘌呤核苷酸或多个嘌呤核苷酸为2’-O-甲基嘌呤核苷酸)，并且反义区中存在的一个或多
个嘌呤核苷酸为2’-O-甲基嘌呤核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为2’-O-甲基嘌呤
核苷酸或多个嘌呤核苷酸为2’-O-甲基嘌呤核苷酸)。或者有义区中的一个或多个嘌呤核
苷酸可为嘌呤核糖核苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为嘌呤核糖核苷酸或多个嘌呤核
苷酸为嘌呤核糖核苷酸)，并且反义区中存在的任何嘌呤核苷酸为2’-O-甲基嘌呤核苷酸
(例如，其中所有嘌呤核苷酸均为2’-O-甲基嘌呤核苷酸或多个嘌呤核苷酸为2’-O-甲基
嘌呤核苷酸)。或者有义区中和/或存在于反义区中的一个或多个嘌呤核苷酸选自2’-脱
氧核苷酸、锁核酸(LNA)核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、4’-硫代核苷酸和2’-O-甲基核
苷酸(例如，其中所有嘌呤核苷酸均选自2’-脱氧核苷酸、锁核酸(LNA)核苷酸、2’-甲氧
基乙基核苷酸、4’-硫代核苷酸和2’-O-甲基核苷酸，或多个嘌呤核苷酸选自2’-脱氧核苷
酸、锁核酸(LNA)核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、4’-硫代核苷酸和2’-O-甲基核苷酸)。

[0393] 在一些实施方案中，如本文所述的核酸分子(例如，siNA分子)包括反义链中，例如在反义链的位置6或位置7处的经修饰的核苷酸(例如一个经修饰的核苷酸)。

[0394] 修饰模式和交替修饰

[0395] 本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可具有经修饰和未经修饰核酸模式。一段邻近核苷酸中核苷酸的修饰模式可为单个核苷酸或通过标准磷酸二酯键或至少部分通
过硫代磷酸酯键相互共价连接的一组核苷酸中所含的修饰。因此，如本文考虑到的“模式”
尽管可能但并非必须牵涉重复单元。可连同本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)使用
的修饰模式的实例包括Giese，美国专利No.7,452,987中公开的修饰模式。例如，本文提供
的核酸分子(例如，siNA分子)包括具有例如与Giese，美国专利No.7,452,987的图2中
图解所示模式相似或相同的修饰模式的核酸分子。

[0396] 经修饰的核苷酸或经修饰的核苷酸的基团可处于有义链或反义链的5’-端或3’-端，侧翼核苷酸或核苷酸基团排列在经修饰的核苷酸或基团的两侧，其中侧翼核苷酸或
基团未经修饰或不具有前述核苷酸或核苷酸基团的相同修饰。然而，侧翼核苷酸或核苷酸
基团可具有不同修饰。分别地，经修饰的核苷酸的序列或经修饰的核苷酸的基团，和未经修
饰或不同修饰的核苷酸的序列或未经修饰或不同修饰的核苷酸的基团可能重复一次或多
次。

[0397] 在一些模式中，链的5’-末端核苷酸为经修饰的核苷酸，而在其它模式中链的5’-末端核苷酸为未经修饰的核苷酸。在一些模式中，链的5’-端从一组经修饰的核苷酸
开始，而在其它模式中5’-末端为核苷酸的未修饰基团。这种模式可能在第一段或第二段
核酸分子或其二者上。

[0398] 核酸分子其中一条链的经修饰的核苷酸可能在位置上与另一条链的经修饰或未经修饰的核苷酸或核苷酸基团互补。

[0399] 一条链上的修饰或修饰模式之间相对于另一条链的修饰模式可能存在相移，使得修饰基团不重叠。在一种情况下，转移使得有义链核苷酸的经修饰基团与反义链核苷酸的
未修饰基团相对应并且反之亦然。

[0400] 可能存在修饰模式的部分转移，使得经修饰基团重叠。任何指定链中经修饰的核苷酸的基团可能任选地具有相同长度，但可具有不同长度。类似地，任何指定链中未修饰核
苷酸的基团可能任选为相同长度或不同长度。

[0401] 在一些模式中，链末端的第二个(倒数第二个)核苷酸为未修饰核苷酸，或未修饰核苷酸基团的开始。优选地，这种未修饰核苷酸或核苷酸的未修饰基团位于有义和反义链
任一条或二者的5’端并且甚至更优选位于有义链的末端。未修饰核苷酸或核苷酸的未修
饰基团可能位于有义链的5’端。在一个优选的实施方案中，模式由交替的单个经修饰和未
修饰核苷酸组成。

[0402] 在一些双链核酸分子中包括2’-O-甲基修饰的核苷酸和非修饰核苷酸，优选未经2’-O-甲基修饰的核苷酸，以交替方式掺入两条链上，产生交替的2’-O-甲基修饰的
核苷酸和未经修饰或至少不包括2’-O-甲基修饰的核苷酸的模式。在某些实施方案中，
2’-O-甲基修饰和非修饰的相同序列存在于第二条链上；在其它实施方案中，交替2’-O-甲
基修饰的核苷酸仅存在于有义链中并不存在于反义链中；并且在更多其它实施方案中，交
替2’-O-甲基修饰的核苷酸存在于有义链中并不存在于反义链中。在某些实施方案中，两
条链之间存在相移，使得第一条链上的2’-O-甲基修饰的核苷酸与第二条链上的非修饰核
苷酸碱基配对并且反之亦然。这种特殊排列，即两条链上2’-O-甲基修饰和非修饰核苷酸
的碱基配对在某些实施方案中是特别优选的。在某些实施方案中，交替2’-O-甲基修饰的
核苷酸模式存在于整个核酸分子中；或整个双链体区中。在其它实施方案中交替2’-O-甲
基修饰的核苷酸模式仅存在于核酸的一部分中；或整个双链体区中。

[0403] 在“相移”模式中，可能优选的是反义链5’端从2’-O-甲基修饰的核苷酸开始，从而使第二个核苷酸非修饰，因而第三个、第五个、第七个等核苷酸又为2’-O-甲基修饰的核苷酸，而第二个、第四个、第六个、第八个核苷酸等为非修饰核苷酸。

[0404] 示例性修饰位置和模式

[0405] 虽然以下更详细地提供了示例性模式，但涵盖具有本文公开和本领域中已知核酸分子的所有可能特征的所有模式排列(例如，特征包括但不限于有义链长度、反义链长度、
双链体区长度、突出端长度，双链核酸分子的一端还是两端为平端或具有突出端，经修饰核
酸的位置、经修饰核酸的数量、修饰类型，双突出核酸分子在每侧突出端上是否具有相同或
不同数量的核苷酸，是一种还是一种以上类型的修饰用于核酸分子和邻近修饰/未修饰核
苷酸的数量)。至于以下提供的详细实例，虽然显示双链体区为19个核苷酸，但是本文提供
的核酸分子可具有长度为1-49个核苷酸的双链体区，因为双链体区的每条链长度可独立
地为17-49个核苷酸。本文提供了示例性模式。

[0406] 核酸分子可能在包括单个或邻近经修饰核酸组的两端均具有平端(n为0时)。经修饰核酸可能位于沿有义链或反义链的任何位置。核酸分子可包括一组约1、2、3、4、5、
6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、
33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个邻近经修饰的核苷酸。经修饰核酸可能占核酸链的1%、2%、3%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、
65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或100%。下文紧接着的的实例的经修饰核酸可能仅在有义链中，仅在反义链中，或在有义链和反义链两者中。

[0407] 以下示出了一般核酸模式，其中X=双链体区中的有义链核苷酸；Xa=有义链中的5’-突出核苷酸；Xb=有义链中的3’-突出核苷酸；Y=双链体区中的反义链核苷酸；Ya=有
义链中的3’-突出核苷酸；Yb=有义链中的5’-突出核苷酸；且M=双链体区中的经修饰的
核苷酸。每个a和b独立地为0-8(例如，0、1、2、3、4、5、6、7或8)。每个X、Y、a和b独立经修饰或未经修饰。有义链和反义链长度各自独立地为17-49个核苷酸。以下提供的实例具
有19个核苷酸的双链体区；然而，本文公开的核酸分子可具有介于17个和49个核苷酸之
间任何数量的双链体区并且其中每条链长度独立地为17-49个核苷酸。

[0408] 5’XaXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXb

[0409] 3’YbYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYa

[0410] 以下示出了其它示例性核酸分子模式，其中X=未经修饰的有义链核苷酸；x=有义链中未经修饰的突出核苷酸；Y=未经修饰的反义链核苷酸；y=反义链中未经修饰的突出核
苷酸；且M=经修饰的核苷酸。有义链和反义链长度可各自独立地为17-49个核苷酸。以下
提供的实例具有19个核苷酸的双链体区；然而，本文公开的核酸分子可具有介于17个和
49个核苷酸之间任何数量的双链体区并且其中每条链长度独立地为17-49个核苷酸。

[0411] 5’MnXXXXXXXXXMXXXXXXXXXMn

[0412] 3’MnYYYYYYYYYYYYYYYYYYYMn

[0413] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0414] 3’YYYYYYYYYMYYYYYYYYY

[0415] 5’XXXXXXXXMMXXXXXXXXX

[0416] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0417] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0418] 3’YYYYYYYYMMYYYYYYYYY

[0419] 5’XXXXXXXXXMXXXXXXXXX

[0420] 3’YYYYYYYYYMYYYYYYYYY

[0421] 5’XXXXXMXXXXXXXXXXXXX

[0422] 3’YYYYYYYYYMYYYYYYYYY

[0423] 5’MXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0424] 3’YYYYYYYYYYYYMYYYYYY

[0425] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXM

[0426] 3’YYYYYMYYYYYYYYYYYYY

[0427] 5’XXXXXXXXXMXXXXXXXX

[0428] 3’MYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0429] 5’XXXXXXXMXXXXXXXXXX

[0430] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYM

[0431] 5’XXXXXXXXXXXXXMXXXX

[0432] 3’MYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0433] 5’MMMMMMMMMMMMMMMMMM

[0434] 3’MMMMMMMMMMMMMMMMMM

[0435] 核酸分子可能在具有交替经修饰核酸的两端具有平端。经修饰核酸可位于沿有义链或反义链的任何位置。

[0436] 5’MXMXMXMXMXMXMXMXMXM

[0437] 3’YMYMYMYMYMYMYMYMYMY

[0438] 5’XMXMXMXMXMXMXMXMXMX

[0439] 3’MYMYMYMYMYMYMYMYMYM

[0440] 5’MMXMMXMMXMMXMMXMMXM

[0441] 3’YMMYMMYMMYMMYMMYMMY

[0442] 5’XMMXMMXMMXMMXMMXMMX

[0443] 3’MMYMMYMMYMMYMMYMMYM

[0444] 5’MMMXMMMXMMMXMMMXMMM

[0445] 3’YMMMYMMMYMMMYMMMYMM

[0446] 5’XMMMXMMMXMMMXMMMXMM

[0447] 3’MMMYMMMYMMMYMMMYMMM

[0448] 具有5’-平端和3’-端突出端的核酸分子以单个经修饰的核酸结束。

[0449] 具有5’-端突出端和3’-平端的核酸分子以单个经修饰的核酸结束。

[0450] 在两端均具有突出端的核酸分子以及所有突出端为经修饰核酸。在下文紧接着的模式中，M为经修饰核酸的数量n，其中n为0-8的整数(即，1、2、3、4、5、6、7和8)。

[0451] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXM

[0452] 3’MYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0453] 在两端均具有突出端的核酸分子以及一些突出核苷酸为经修饰的核苷酸。在下文紧接着的模式中，M为经修饰核酸的数量n，x为有义链中未修饰突出核苷酸的数量n，y为
反义链中未修饰突出核苷酸的数量n，其中每个n独立地为0-8的整数(即，1、2、3、4、5、6、
7和8)，并且其中每个突出端最多为20个核苷酸；优选最多8个核苷酸(经修饰和/或未
经修饰)。

[0454] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXM

[0455] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0456] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMx

[0457] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0458] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMxM

[0459] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0460] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXM xMx

[0461] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0462] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMxMxM

[0463] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0464] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMxMxMx

[0465] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0466] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMxMxMxM

[0467] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0468] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMxMxMxMx

[0469] 3’yYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0470] 5’MXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0471] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0472] 5’xMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0473] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0474] 5’MxMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0475] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0476] 5’xMxMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0477] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0478] 5’MxMxMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0479] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0480] 5’xMxMxMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0481] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0482] 5’MxMxMxMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0483] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0484] 5’xMxMxMxMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0485] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYy

[0486] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0487] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYM

[0488] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0489] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYMy

[0490] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0491] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYMyM

[0492] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0493] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYMyMy

[0494] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0495] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYMyMyM

[0496] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0497] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYMyMyMy

[0498] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0499] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYMyMyMyM

[0500] 5’xXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0501] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYYMyMyMyMy

[0502] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0503] 3’MYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0504] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0505] 3’yMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0506] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0507] 3’MyMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0508] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0509] 3’yMyMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0510] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0511] 3’MyMyMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0512] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0513] 3’yMyMyMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0514] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0515] 3’MyMyMyMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0516] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXx

[0517] 3’yMyMyMyMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0518] 有义区3’端处的经修饰的核苷酸。

[0519] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXM

[0520] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0521] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM

[0522] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0523] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMMM

[0524] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0525] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMMMM

[0526] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0527] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMMMMM

[0528] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0529] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMMMMMM

[0530] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0531] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMMMMMMMM

[0532] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0533] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMMMMMMMM

[0534] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0535] 有义区5’端处的突出端

[0536] 5’MXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0537] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0538] 5’MMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0539] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0540] 5’MMMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0541] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0542] 5’MMMMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0543] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0544] 5’MMMMMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0545] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0546] 5’MMMMMMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0547] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0548] 5’MMMMMMMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0549] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0550] 5’MMMMMMMMXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0551] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0552] 反义区3’端处的突出端

[0553] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0554] 3’MYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0555] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0556] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0557] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0558] 3’MMMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0559] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0560] 3’MMMMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0561] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0562] 3’MMMMMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0563] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0564] 3’MMMMMMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0565] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0566] 3’MMMMMMMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0567] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0568] 3’MMMMMMMMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0569] 有义区中的经修饰的核苷酸

[0570] 5’XXXXXXXXXMXXXXXXXXX

[0571] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0572] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0573] 3’YYYYYYYYYMYYYYYYYYY

[0574] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM

[0575] 3’YYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0576] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXX

[0577] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0578] 以下连同与以上所用符号一致的等效一般结构一起提供了示例性核酸分子。

[0579] 人和大鼠hsp47的siHSP47-C siRNA，其具有19核苷酸(即，19聚体)的双链体区和在有义链和反义链的3’端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0580] 5’GGACAGGCCUCUACAACUAdTdT 3’

[0581] 3’dTdTCCUGUCCGGAGAUGUUGAU 5’

[0582] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM

[0583] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY

[0584] 人和大鼠hsp47的siHSP47-Cd siRNA，其具有25聚体双链体区、在反义链的3’-端的2个核苷酸突出端以及在有义链的5’-末端和倒数第二个位置处的2个经修饰的
核苷酸。

[0585] 5’GGACAGGCCUCUACAACUACUACdGdA 3’

[0586] 3’UUCCUGUCCGGAGAUGUUGAUGAUGCU 5’

[0587] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0588] 3’yyYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0589] 人和大鼠hsp47cDNA 719-737的siHSP47-1siRNA，其具有19聚体双链体区以及在有义链和反义链的3’-端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0590] 5’CAGGCCUCUACAACUACUAdTdT 3’

[0591] 3’dTdTGUCCGGAGAUGUUGAUGAU 5’

[0592] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0593] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0594] 人hsp47cDNA 719-743的siHSP47-1d siRNA，其具有25聚体，具有在有义链的3’-端的平端、和在反义链的3’-端的2核苷酸突出端以及在有义链的5’-末端和倒数第
二个位置的2个经修饰的核苷酸。

[0595] 5’CAGGCCUCUACAACUACUACGACdGdA 3’

[0596] 3’UUGUCCGGAGAUGUUGAUGAUGCUGCU 5’

[0597] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0598] 3’yyYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0599] 人hsp47cDNA 469-487的siHSP47-2siRNA，其具有19聚体双链体区和在有义链和反义链的3’端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0600] 5’GAGCACUCCAAGAUCAACUdTdT 3’

[0601] 3’dTdTCUCGUGAGGUUCUAGUUGA 5’

[0602] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0603] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0604] 人hsp47cDNA 469-493的siHSP47-2d siRNA，其具有25聚体双链体区，具有在有义链的3’-端的平端、和在反义链的3’-端的2个核苷酸突出端以及在有义链的5’-末端
和倒数第二个位置的2个经修饰的核苷酸。

[0605] 5’GAGCACUCCAAGAUCAACUUCCGdCdG 3’

[0606] 3’UUCUCGUGAGGUUCUAGUUGAAGGCGC 5’

[0607] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0608] 3’yyYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0609] 大鼠Gp46cDNA 466-490的siHSP47-2d大鼠siRNA，其具有25聚体双链体区，具有在有义链的3’-端的平端、和在反义链的3’-端的2个核苷酸突出端以及在有义链的
5’-末端和倒数第二个位置的2个经修饰的核苷酸。

[0610] 5’GAACACUCCAAGAUCAACUUCCGdAdG 3’

[0611] 3’UUCUUGUGAGGUUCUAGUUGAAGGCUC 5’

[0612] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0613] 3’yyYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0614] 人hsp47cDNA 980-998的siHSP47-3siRNA，其具有19聚体双链体区和在有义链和反义链的3’-端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0615] 5’CTGAGGCCATTGACAAGAAdTdT 3’

[0616] 3’dTdTGACUCCGGUAACUGUUCUU 5’

[0617] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0618] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0619] 人hsp47cDNA 980-1004的siHSP47-3d siRNA，其具有25聚体双链体区，具有在有义链的3’-端的平端、和在反义链的3’-端的2个核苷酸突出端以及在有义链的5’-末端
和倒数第二个位置的2个经修饰的核苷酸。

[0620] 5’CTGAGGCCATTGACAAGAACAAGdGdC 3’

[0621] 3’UUGACUCCGGUAACUGUUCUUGUUCCG 5’

[0622] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0623] 3’yyYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0624] 人hsp47cDNA 735-753的siHSP47-4siRNA，其具有19聚体双链体区和在有义链和反义链的3’-端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0625] 5’CUACGACGACGAGAAGGAAdTdT 3’

[0626] 3’dTdTGAUGCUGCUGCUCUUCCUU 5’

[0627] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0628] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0629] 人hsp47cDNA 735-759的siHSP47-4d siRNA，其具有25聚体双链体区，具有在有义链的3’-端的平端、和在反义链的3’-端的2个核苷酸突出端以及在有义链的5’-末端
和倒数第二个位置的2个经修饰的核苷酸。

[0630] 5’CUACGACGACGAGAAGGAAAAGCdTdG 3’

[0631] 3’UUGAUGCUGCUGCUCUUCCUUUUCGAC 5’

[0632] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0633] 3’yyYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0634] 人hsp47cDNA 621-639的siHSP47-5siRNA，其具有19聚体双链体区和在有义链和反义链的3’-端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0635] 5’GCCACACUGGGAUGAGAAAdTdT 3’

[0636] 3’dTdTCGGUGUGACCCUACUCUUU 5’

[0637] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0638] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0639] 人hsp47cDNA 446-464的siHSP47-6siRNA，其具有19聚体双链体区和在有义链和反义链的3’-端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0640] 5’GCAGCAAGCAGCACUACAAdTdT 3’

[0641] 3’dTdTCGUCGUUCGUCGUGAUGUU 5’

[0642] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0643] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0644] 人hsp47cDNA 692-710的siHSP47-7siRNA，其具有19聚体双链体区、和在有义链和反义链的3’-端的2个经修饰的核苷酸(即，脱氧核苷酸)的突出端。

[0645] 5’CCGUGGGUGUCAUGAUGAUdTdT 3’

[0646] 3’dTdTGGCACCCACAGUACUACUA 5’

[0647] 5’XXXXXXXXXXXXXXXXXXXMM 3’

[0648] 3’MMYYYYYYYYYYYYYYYYYYY 5’

[0649] 核酸链中的缺口和间隙

[0650] 本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可具有带缺口或间隙的链，优选有义链。因此，核酸分子可具有三条或更多条链，例如国际专利申请No.PCT/US07/081836中公开的
局部双链体RNA(mdRNA)。具有带缺口或间隙的链的核酸分子可为约1-49个核苷酸，或可
具有RISC长度(例如，约15-25个核苷酸)或例如本文公开的Dicer底物长度(例如，约
25-30个核苷酸)。

[0651] 具有三条或更多条链的核酸分子，例如‘A’(反义)链、‘S1’(第二条)链和‘S2’(第三条)链，其中‘S1’和‘S2’链与‘A’链的非重叠区互补并形成碱基对(例如，
mdRNA可具有A:S1S2形式)。S1、S2或多条链一起形成大体上类似于‘A’反义链的有义
链。通过‘S1’和‘A’链退火形成的双链区与通过‘S2’和‘A’链退火形成的双链区不同
并且不重叠。核酸分子(例如，siNA分子)可为“带间隙的”分子，意味着“间隙”范围为0
个核苷酸至多达约10个核苷酸(例如，0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个核苷酸)。优选地，有义链带间隙。在一些实施方案中，A:S1双链体与A:S2双链体被‘A’链中置于A:S1双链
体与A:S2双链体之间并且不同于‘A’、‘S1’或‘S2’的其中一条或多条的3’端的任何一
个或多个未配对核苷酸的至少一个未配对核苷酸(多达约10个未配对核苷酸)产生的间
隙分开。A:S1双链体与A:B2双链体可能被A:S1双链体与A:S2双链体之间也可称为缺口
dsRNA(ndsRNA)的零核苷酸间隙(即，其中多核苷酸分子中仅两个核苷酸之间的磷酸二酯
键断裂或缺失的缺口)分开。例如，A:S1S2可包括具有至少两个合并总计约14个碱基对至
约40个碱基对的双链区的dsRNA，并且双链区被约0至约10个核苷酸的间隙分开，任选具
有平端，或A:S1S2可包括具有至少两个被多达10个核苷酸的间隙分开的双链区的dsRNA，
其中至少一个双链区包括约5个碱基对至13个碱基对。

[0652] Dicer底物

[0653] 在某些实施方案中，本文提供的核酸分子(例如，siNA分子)可为前体“Dicer底物”分子(例如双链核酸)，其在体内加工以产生活性核酸分子，例如Rossi，美国专利申请
No.20050244858中所述。在某些条件和情形下，已经发现这些相对较长的dsRNA siNA种
类，例如约25至约30个核苷酸的dsRNA siNA种类，在作用效能和持续时间方面可产生出
人意料的有效结果。不期望受任何特定理论限制，认为较长的dsRNA种类在细胞的细胞质
中用作酶Dicer的底物。除将双链核酸裂解为较短片段外，Dicer可促进源自裂解dsRNA的
单链裂解产物掺入负责破坏源自靶基因的细胞质RNA的RNA-诱导的沉默复合体(RISC复
合体)中。

[0654] Dicer底物可具有某些增强其受Dicer加工的性质。Dicer底物具有足够长度，使得其受Dicer加工以产生活性核酸分子并且可能进一步包括以下一种或多种性质：(i)
dsRNA不对称，例如在第一条链(反义链)上具有3’突出端和(ii)dsRNA在反义链(有义
链)上具有经修饰的3’端以指引dsRNA的Dicer结合以及将dsRNA加工成活性siRNA的
取向。在某些实施方案中，Dicer底物中的最长链可为24-30个核苷酸。

[0655] Dicer底物可对称或不对称。Dicer底物可具有包括22-28个核苷酸的有义链和可包括24-30个核苷酸的反义链；因此，在一些实施方案中，所得Dicer底物可在反义链的
3’端具有突出端。Dicer底物可具有长度为25个核苷酸的有义链和长度为27个核苷酸且
具有2个碱基3’-突出端的反义链。突出端可为1-3个核苷酸，例如2个核苷酸。有义链
还可具有5’磷酸。

[0656] 不对称Dicer底物可能进一步含有在有义链的3’-端代替两个核糖核苷酸的两个脱氧核苷酸。一些示例性Dicer底物长度和结构为21+0、21+2、21-2、22+0、22+1、22-1、
23+0、23+2、23-2、24+0、24+2、24-2、25+0、25+2、25-2、26+0、26+2、26-2、27+0、27+2和27-2。

[0657] Dicer底物的有义链长度可为约22至约30个(例如，约22、23、24、25、26、27、28、29或30个)、约22至约28个、约24至约30个、约25至约30个、约26至约30个、约26
至约29个或约27至约28个核苷酸。在某些优选的实施方案中，Dicer底物含有长度为至
少约25个核苷酸且不长于约30个核苷酸、长度为约26至约29个核苷酸或为27个核苷酸
的有义链和反义链。有义链和反义链可具有相同长度(平端)，不同长度(具有突出)或
组合。有义链和反义链可能存在于相同多核苷酸或不同多核苷酸上。Dicer底物可具有约
19、20、21、22、23、24、25或27个核苷酸的双链体区。

[0658] 如同本文提供的其它siNA分子，Dicer底物的反义链可具有在生物条件下，例如在真核细胞的细胞质中退火为反义链的任何序列。

[0659] Dicer底物可具有本领域中已知和/或本文关于其它核酸分子(例如siNA分子)所述的对核苷酸碱基、糖或磷酸主链的任何修饰。在某些实施方案中，Dicer底物可具有
受位于有义链3’端的适合修饰因子修饰以便Dicer加工的有义链，即dsRNA设计为指引
Dicer结合和加工的取向。适合修饰因子包括核苷酸，例如脱氧核糖核苷酸、双脱氧核糖核
苷酸、无环核苷酸等和位阻分子，例如荧光分子等。无环核苷酸用2-羟基乙氧基甲基基团
取代dNMP中通常存在的2’-脱氧呋喃核糖基糖。可用于Dicer底物siNA分子的其它核苷
酸修饰因子包括3’-脱氧腺苷(蛹虫草菌素)、3’-叠氮-3’-脱氧胸苷(AZT)、2’,3’-双
脱氧肌苷(ddI)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)、2’,3’-双脱氢-2’,3’-双脱氧核
糖胸苷(d4T)和3’-叠氮-3’-脱氧核糖胸苷(AZT)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)
和2’,3’-双脱氢-2’,3’-双脱氧胸苷(d4T)的单磷酸核苷酸。在一个实施方案中，脱氧
核苷酸用作修饰因子。当利用核苷酸修饰因子时，它们可取代核糖核苷酸(例如，用1-3个
核苷酸修饰因子或2个核苷酸修饰因子取代有义链3’端上的核糖核苷酸)，使得Dicer底
物的长度不变。当利用位阻分子时，它们可与反义链3’端上的核糖核苷酸连接。因此，在
某些实施方案中，链的长度不随修饰因子的掺入改变。在某些实施方案中，取代dsRNA中的
两个DNA碱基以指引反义链Dicer加工的取向。在另一实施方案中，用两个末端DNA碱基
取代有义链3’端上形成有义链3’端和反义链5’端上双链体的平端的两个核糖核苷酸，并
且2-核苷酸RNA突出位于反义链的3’端。这是与平端上的DNA和突出端上的RNA碱基的
不对称组合。

[0660] 在某些实施方案中，Dicer底物中包括修饰，使得修饰不妨碍核酸分子充当Dicer的底物。在一个实施方案中，进行一个或多个修饰以增强Dicer底物的Dicer加工。可进
行一个或多个修饰以引起更有效的RNAi产生。可进行一个或多个修饰以支持更强的RNAi
作用。进行一个或多个修饰以使每个待递送至细胞的Dicer底物产生更强的效能。可将
修饰掺入3’-末端区、5’-末端区、3’-末端区和5’-末端区或序列中的各个位置。可将
任何数量和组合的修饰掺入Dicer底物，只要修饰不妨碍核酸分子作为Dicer的底物。存
在多个修饰时，修饰可相同或不同。涵盖对碱基、糖部分、磷酸主链及其组合的修饰。任一
5’-末端可被磷酸化。

[0661] Dicer底物磷酸主链修饰的实例包括膦酸酯，包括甲基膦酸酯、硫代磷酸酯和磷酸三酯修饰，例如烷基磷酸三酯等。Dicer底物糖部分修饰的实例包括2’-烷基嘧啶(例如
2’-O-甲基)、2’-氟、氨基和脱氧修饰等(见，例如，Amarzguioui等，2003)。Dicer底物
碱基修饰的实例包括脱碱基糖、2-O-烷基修饰的嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿
嘧啶和5-(3-氨基烯丙基)-尿嘧啶等。也可掺入锁核酸或LNA。

[0662] 有义链可能受位于有义链3’端的适合修饰因子修饰以便Dicer加工，即dsRNA设计为指引Dicer结合和加工的取向。适合修饰因子包括核苷酸，例如脱氧核糖核苷酸、双
脱氧核糖核苷酸、无环核苷酸等，和位阻分子，例如荧光分子等。无环核苷酸用2-羟基乙
氧基甲基基团取代dNMP中通常存在的2’-脱氧呋喃核糖基糖。其它核苷酸修饰因子包括
3’-脱氧腺苷(蛹虫草菌素)、3’-叠氮-3’-脱氧核糖胸苷(AZT)、2’,3’-双脱氧肌苷
(ddI)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)、2’,3’-双脱氢-2’,3’-双脱氧胸苷(d4T)
和3’-叠氮-3’-脱氧胸苷(AZT)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)和2’,3’-双脱
氢-2’,3’-双脱氧胸苷(d4T)的单磷酸核苷酸。在一个实施方案中，脱氧核苷酸用作修饰
因子。当利用核苷酸修饰因子时，用1-3个核苷酸修饰因子或2个核苷酸修饰因子取代有义
链3’端上的核糖核苷酸。当利用位阻分子时，它们可与反义链3’端上的核糖核苷酸连接。
因此，链的长度不随修饰因子的掺入改变。在另一实施方案中，本发明考虑了取代Dicer底
物中的两个DNA碱基以指引反义链Dicer加工的取向。在本发明的另一实施方案中，用两
个末端DNA碱基取代有义链3’端上形成有义链3’端和反义链5’端上双链体的平端的两
个核糖核苷酸，并且2-核苷酸RNA突出端位于反义链的3’端。这是与平端上的DNA和突
出端上的RNA碱基的不对称组合。

[0663] 反义链可能受位于反义链3’端的适合修饰因子修饰以便Dicer加工，即dsRNA设计为指引Dicer结合和加工的取向。适合修饰因子包括核苷酸，例如脱氧核糖核苷酸、
双脱氧核糖核苷酸、无环核苷酸等，和位阻分子，例如荧光分子等。无环核苷酸用2-羟基
乙氧基甲基基团取代dNMP中通常存在的2’-脱氧呋喃核糖基糖。其它核苷酸修饰因子
包括3’-脱氧腺苷(蛹虫草菌素)、3’-叠氮-3’-脱氧胸苷(AZT)、2’,3’-双脱氧肌苷
(ddI)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)、2’,3’-双脱氢-2’,3’-双脱氧胸苷(d4T)
和3’-叠氮-3’-脱氧胸苷(AZT)、2’,3’-双脱氧-3’-硫杂胞苷(3TC)和2’,3’-双脱
氢-2’,3’-双脱氧胸苷(d4T)的单磷酸核苷酸。在一个实施方案中，脱氧核苷酸用作修饰
因子。当利用核苷酸修饰因子时，用1-3个核苷酸修饰因子或2个核苷酸修饰因子取代反义
链3’端上的核糖核苷酸。当利用位阻分子时，它们可与反义链3’端上的核糖核苷酸连接。
因此，链的长度不随修饰因子的掺入改变。在另一实施方案中，本发明考虑了取代Dicer底
物中的两个DNA碱基以指引Dicer加工的取向。在另一发明中，两个末端DNA碱基位于反
义链的3’端取代形成有义链5’端和反义链3’端上双链体的平端的两个核糖核苷酸，并且
2-核苷酸RNA突出端位于有义链的3’端。这是与平端上的DNA和突出端上的RNA碱基的
不对称组合。

[0664] 具有有义链和反义链的Dicer底物可通过三级结构连接。三级结构不会阻断对Dicer底物的Dicer活性并且不会干扰由靶基因转录的RNA的定向破坏。三级结构可为化
学连接基团。适合的化学连接基团在本领域中已知并且可用。可选地，三级结构可为以使
得组成Dicer底物的两个寡核苷酸一旦退火就产生发夹结构的方式连接dsRNA的两个寡核
苷酸的寡核苷酸。发夹结构优选不阻断对Dicer底物的Dicer活性并且不会干扰由靶基因
转录的RNA的定向破坏。

[0665] Dicer底物的有义链和反义链无需完全互补。它们仅需要实质上互补以在生物条件下退火并为产生与靶序列充分互补的siRNA的Dicer提供底物。

[0666] Dicer底物可具有增强其受Dicer加工的某些性质。Dicer底物可具有足以使其受Dicer加工以产生活性核酸分子(例如，siRNA)的长度并且可具有以下一种或多种性质：
(i)Dicer底物不对称，例如第一条链(反义链)上具有3’突出端和(ii)Dicer底物在第二
条链(有义链)上具有经修饰的3’端以指引Dicer结合并将Dicer底物加工成活性siRNA
的取向。Dicer底物可为不对称，使得有义链包括22-28个核苷酸而反义链包括24-30个核
苷酸。因此，所得的Dicer底物在反义链的3’端上具有突出端。突出端为1-3个核苷酸，
例如2个核苷酸。有义链也可具有5’磷酸。

[0667] Dicer底物可能在反义链的3’端具有突出端，并且有义链经修饰以便Dicer加工。有义链的5’端可具有磷酸。有义链和反义链可在生物条件，例如细胞的细胞质中发现的条
件下退火。Dicer底物其中一条链(尤其是反义链)的一个区域可具有至少19个核苷酸的
序列长度，其中这些核苷酸在与反义链3’端相邻的21-核苷酸区中并且与由靶基因生成的
RNA的核苷酸序列充分互补。Dicer底物还可具有以下一种或多种另外的性质：(a)反义链
从相应21聚体右移(即，当与相应21聚体比较时反义链包括于分子右侧的核苷酸)，(b)
链可不完全互补，即，链可能含有单个错配配对和(c)有义链的5’端中可包括碱基修饰，例
如锁核酸。

[0668] Dicer底物核酸分子的反义链可被修饰为在5’端包括1-9个核苷酸以产生22-28个核苷酸的长度。当反义链具有21个核苷酸的长度时，则可在3’端上添加1-7个核糖核
苷酸或2-5个核糖核苷酸和/或4个核糖核苷酸。添加的核糖核苷酸可具有任何序列。虽
然添加的核糖核苷酸可能与靶基因序列互补，但不需要靶序列与反义链之间完全互补。即，
所得的反义链与靶序列充分互补。则有义链可具有24-30个核苷酸。有义链可能与反义链
充分互补以在生物条件下退火为反义链。在一个实施方案中，可将反义链合成为含有经修
饰的3’端以指引Dicer加工。有义链可具有3’突出端。可将反义链合成为含有经修饰的
3’端以便Dicer结合和加工并且有义链具有3’突出端。

[0669] 热休克蛋白47

[0670] 热休克蛋白47(HSP47)为胶原特异性分子伴侣并留在内质网中。在折叠、装配和从内质网转运的过程中热休克蛋白47与原胶原相互作用(Nagata Trends
Biochem Sci 1996;21:226；Razzaque 等 2005；Contrib Nephrol 2005;148:57-69；
Koide 等 2006J.Biol.Chem.；281:3432-38；Leivo 等 Dev.Biol.1980;76:100-114；
Masuda 等 J.Clin.Invest.1994;94:2481-2488；Masuda 等 Cell Stress Chaperones
1998;3:256-264)。已报道HSP47在各种组织纤维化，例如肝硬变(Masuda et al.J Clin
Invest 1994;94:2481-8),肺纤维化 (Razzaque等 VirchowsArch 1998;432:455-60；
Kakugawa等Eur Respir J 2004;24:57-65)和肾小球硬化症(Moriyama等Kidney Int
1998;54:110-19)中表达上调(Koide等J Biol Chem 1999;274:3452326)。基于基因库登
录号：NM 001235和相应mRNA序列(例如，如SEQ ID NO:1所列)中公开了靶标人hsp47cDNA
的示例性核酸序列。本领域中的普通技术人员将理解，指定序列可能随时间变化并因此在
本文的核酸分子中并入需要的任何变化。

[0671] HSP47与不同种类的胶原特异性缔合使得HSP47成为纤维化治疗的潜在标靶。抑制hsp47表达可防止细胞外胶原I分泌。Sato等(NatBiotechnol 2008;26:431–442)
通过使用siRNA用于抑制hsp47表达并防止大鼠肝纤维化进展探究这种可能性。类似
地，Chen等 (Br J Dermatol 2007;156:1188-1195) 和Wang 等 (Plast.Reconstr Surg
2003;111:1980-7)研究RNA干扰技术对hsp47表达的抑制。

[0672] 抑制hsp47的方法和组合物

[0673] 提供了通过使用能够介导或介导对hsp47基因表达的RNA干扰的小核酸分子，例如短干扰核酸(siNA)、干扰RNA(RNAi)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微
RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)分子抑制hsp47表达的组合物和方法。本文公开的组合
物和方法也用于治疗各种纤维化，例如肝纤维化、肺纤维化和肾纤维化。

[0674] 本发明的核酸分子和/或方法用于下调编码(举例而言)基因库登录NM 001235所指的RNA的基因的表达。

[0675] 本文提供的组合物、方法和试剂盒可包括一种或多种核酸分子(例如，siNA)和方法，其独立或联合调节(例如，下调)hsp47蛋白和/或编码hsp47蛋白的基因、蛋白质和/
或编码与hsp47相关疾病、病状或病症的维持和/或发展相关的hsp47的基因(例如编码
包含基因库登录号NM 001235所指的那些序列在内的序列的基因)或其中基因或基因家族
序列共有序列同源性的hsp47基因家族成员的表达，所述hsp47相关疾病、病状或病症例如
肝纤维化、肝硬变、肺纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化、慢性肝损伤和原纤维形成。关于示例性基因hsp47提供了各个方面和实施方案的描述。然而，各个方面和实施方案也针对其它
有关hsp47基因(例如同源基因和转录变体)和与某些hsp47基因相关的多态性(例如，
单核苷酸多态性)。因此，各个方面和实施方案也针对hsp47介导的信号转导途径中牵涉的
其它基因或(例如)本文所述疾病、性状或病状的维持或发展中牵涉的基因表达。可使用
本文对hsp47基因描述的方法分子这些另外的基因的靶位点。因此，其它基因的调节和这
种其它基因调节的作用可如本文所述进行、确定和测量。

[0676] 在一个实施方案中，本文提供的组合物和方法包括下调hsp47基因(例如，SEQ IDNO:1例示的人hsp47)的表达的双链短干扰核酸(siNA)分子，其中核酸分子包括约15至约
49个碱基对。

[0677] 在一个实施方案中，公开的核酸可用于抑制hsp47基因或其中基因或基因家族序列共有序列同源性的hsp47基因家族的表达。可如本领域中已知，例如使用序列比对鉴定
这种同源序列。核酸分子可经设计，以例如使用完美互补序列或通过掺入可提供另外的靶
序列的非规范碱基对（例如错配和/或摆动碱基对）来靶向这种同源序列。在鉴定了错配的
情况下，可使用非规范碱基对(例如，错配和/或摆动碱基)生成靶向一个以上基因序列的
核酸分子。在非限制性实例中，使用非规范碱基对(例如UU和CC碱基对)生成能够靶向
区分共有序列同源性的hsp47靶标的序列的核酸分子。因此，使用本文公开的siNA的一个
优点是可将单个核酸设计为包括与在同源基因之间保守的核苷酸序列互补的核酸序列。在
这种方法中，可使用单个核酸抑制一个以上基因的表达，而不使用一个以上核酸分子靶向
不同基因。

[0678] 可使用核酸分子靶向与基因家族(例如hsp47家族基因)相对应的保守序列。同样地，靶向多个hsp47靶标的核酸分子可提供治疗效果。另外，可使用核酸表征在各种应用
中基因功能的途径。例如，在基因功能分析、mRNA功能分析或翻译分析中在确定未表征基
因功能的途径中可使用核酸分子抑制靶基因的活性。可使用核酸分子确定各种疾病和病状
中牵涉的对于制药研发的潜在靶基因途径。核酸分子可用于了解例如纤维化(例如肝、肾
或肺纤维化)和/或炎症和增生性性状、疾病、病症和/或病状中牵涉的基因表达的途径。

[0679] 在一个实施方案中，本文提供的组合物和方法包括对hsp47RNA具有RNAi活性的核酸分子，其中核酸分子包括与具有hsp47编码序列的任何RNA互补的序列，例如那些具有
如表I所示序列的序列。在另一实施方案中，核酸分子可能对hsp47RNA具有RNAi活性，其
中核酸分子包括与具有变体hsp47编码序列的RNA互补的序列，例如表I中未示出但本领
域中已知与纤维化的维持和/或发展相关的其它突变hsp47基因。表I所示或本文所述的
化学修饰可应用于本文公开的任何核酸构建体。在另一实施方案中，本文公开的核酸分子
包括可与hsp47基因的核苷酸序列相互作用，从而介导hsp47基因表达的沉默的核苷酸序
列，例如，其中核酸分子通过调节hsp47基因的染色质结构或甲基化模式并防止hsp47基因
转录的细胞过程介导hsp47基因表达的调节。

[0680] 本文公开的核酸分子可对hsp47RNA具有RNAi活性，其中核酸分子包括与具有hsp47编码序列（例如具有基因库登录号NM 001235的序列）的任何RNA互补的序列。核酸
分子可对hsp47RNA具有RNAi活性，其中核酸分子包括与具有变体hsp47编码序列的RNA互
补的序列，例如本领域中已知与纤维化的维持和/或发展相关的其它突变hsp47基因。本
文公开的核酸分子包括可与hsp47基因的核苷酸序列相互作用，从而介导hsp47基因表达
的沉默的核苷酸序列，例如，其中核酸分子通过调节hsp47基因的染色质结构或甲基化模
式并防止hsp47基因转录的细胞过程介导hsp47基因表达的调节。

[0681] 治疗方法

[0682] HSP47与不同种类的胶原特异性缔合使得hsp47成为纤维化治疗的标靶。抑制hsp47表达可防止细胞外胶原I分泌。Sato等(Nat Biotechnol 2008;26:431–442)
通过使用siRNA用于抑制hsp47表达并防止大鼠肝纤维化进展探究这种可能性。类似
地，Chen等 (Br J Dermatol 2007;156:1188-1195) 和Wang 等 (Plast.Reconstr Surg
2003;111:1980-7)研究RNA干扰技术对hsp47表达的抑制。

[0683] 在一个实施方案中，核酸分子可用于下调或抑制与疾病或病状(例如，纤维化)相关的hsp47和/或由hsp47产生的hsp47蛋白质和/或hsp47单体型多态性的表达。hsp47
和/或hsp47基因或hsp47和/或hsp47蛋白或RNA水平的分析可用于鉴定具有这种多态
性的受试者或那些处于发展本文所述性状、病状或疾病风险的受试者。这些受试者易于治
疗，例如易于用本文公开的核酸分子和用于治疗hsp47和/或hsp47基因表达有关的疾病
的任何其它组合物治疗。因此，对hsp47和/或hsp47蛋白或RNA水平的分析可用于在治
疗受试者时确定治疗类型和治疗过程。对hsp47和/或hsp47蛋白或RNA水平的监测可用
于预测治疗结果并确定调节与性状、病状或疾病相关的某些hsp47和/或hsp47蛋白的水
平和/或活性的化合物和组合物的效果。

[0684] 提供了通过使用本文所提供的能够介导或介导对hsp47基因表达的RNA干扰的小核酸分子，例如短干扰核酸(siNA)、干扰RNA(RNAi)、短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)和短发夹RNA(shRNA)分子来抑制hsp47表达的组合物和方法。本文公开的
组合物和方法也用于治疗各种纤维化，例如肝纤维化、肺纤维化和肾纤维化。

[0685] 本文公开的核酸分子可单独或联合或连同其它药物用于预防或治疗hsp47相关的疾病、性状、病状或病症，例如肝纤维化、肝硬变、肺纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化、慢性肝损伤和原纤维形成。

[0686] 本文公开的核酸分子能够以序列特异性方式抑制hsp47的表达。核酸分子可包括有义链和反义链，所述有义链和反义链包括与hsp47mRNA至少部分互补的邻接核苷酸。

[0687] 在一些实施方案中，对hsp47有特异性的dsRNA可连同对帮助新合成的蛋白质(例如，钙联蛋白、钙网蛋白、BiP)折叠的其它分子伴侣有特异性的其它dsRNA一起使
用(Bergeron等Trends Biochem.Sci.1994;19:124-128；Herbert等1995；Cold Spring
Harb.Symp.Quant.Biol.60:405-415)。

[0688] 可使用本文公开的核酸分子进行RNA干扰来治疗纤维化。示例性纤维化包括肝纤维化、腹膜纤维化、肺纤维化、肾纤维化。本文公开的核酸分子可以序列特异性方式抑制
hsp47的表达。

[0689] 可通过使用本领域中已知的适合技术，例如使用抗胶原I抗体测定细胞外胶原的水平来监测纤维化的治疗。也可通过测定受影响组织细胞中hsp47mRNA的水平或HSP47蛋
白的水平来监测治疗。也可通过非侵入性扫描受影响器官或组织，例如通过计算机辅助断
层扫描、磁共振弹性成像扫描来监测治疗。

[0690] 治疗或预防受试者或生物体的hsp47相关疾病或病状的方法可包括在适于调节受试者或生物体内hsp47基因表达的条件下使受试者或生物体与本文提供的核酸分子接
触。

[0691] 治疗或预防受试者或生物体纤维化的方法可包括在适于调节受试者或生物体内hsp47基因表达的条件下使受试者或生物体与核酸分子接触。

[0692] 治疗或预防受试者或生物体一种或多种选自肝纤维化、肾纤维化和肺纤维化的纤维化的方法可包括在适于调节受试者或生物体内hsp47基因表达的条件下使受试者或生
物体与核酸分子接触。

[0693] 纤维化疾病

[0694] 通常用细胞外基质中纤维物质的过度沉积表征纤维化疾病，这导致组织架构的异常变化和对正常器官功能的干扰。

[0695] 受创伤损伤的所有组织以发起伤口愈合程序反应。当扰乱伤口愈合反应的正常自限性过程时，纤维化（由过度瘢痕形成表征的一类病症）发生并且引起胶原的过多生成和沉
积。因此，正常器官组织被瘢痕组织代替，这最终导致器官的功能衰竭。

[0696] 纤维化可能由多种原因在各种器官中引发。肝硬变、肺纤维化、结节病、瘢痕瘤和肾纤维化均为与进行性纤维化相关的慢性病状，从而引起正常组织功能不断丧失。

[0697] 急性纤维化(通常伴有突然严重发作且持续时间短)作为对各种形式外伤的正常反应而发生，包括意外损伤(尤其是脊柱和中枢神经系统损伤)、感染、手术、局部缺血性疾
病(例如，心脏病发作后心脏瘢痕形成)、烧伤、环境污染、酒精和其它类型的毒素、急性呼
吸窘迫综合征、放疗和化疗。

[0698] 纤维化，纤维化相关病理或与细胞蛋白的异常交联相关的病理均可通过本文公开的siRNA治疗。纤维化疾病或纤维化明显的疾病(纤维化相关病理)包括急性和慢性形式
的器官纤维化，包括以下所有病源变体：肺纤维化(包括间质性肺病和纤维化肺病)、肝纤
维化、心脏纤维化(包括心肌纤维化)、肾纤维化(包括慢性肾衰竭)、皮肤纤维化(包括
硬皮病、瘢痕瘤和增生性瘢痕)；骨髓纤维化(骨髓纤维变性)；所有类型的眼部瘢痕形成，
包括增生性玻璃体视网膜病变(PVR)和由治疗白内障或青光眼的手术引起的瘢痕形成；病
源可变的炎症性肠病、黄斑变性、Grave眼病、药物诱导的麦角中毒、瘢瘤疤、硬皮病、牛皮癣、李弗劳明综合征(Li-Fraumeni syndrome)中的成胶质细胞瘤、偶发性成胶质细胞瘤、髓
系白血病、急性髓细胞白血病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生综合征、妇科癌、卡波西肉瘤(Kaposi's sarcoma)、麻疯病((Hansen's disease))和胶原性结肠炎。

[0699] 在各个实施方案中，本文公开的化合物(核酸分子)可用于治疗例如本文公开的纤维化疾病，以及除纤维化疾病外本文公开的许多其它疾病和病状。待治疗的其它病状包
括其它器官的纤维化疾病—出于任何原因(包括ESRD在内的CKD)的肾纤维化；肺纤维化
(包括ILF)；骨髓纤维化，与所有可能类型的意外及医原性(手术)皮肤损伤相关的异常瘢
痕形成(瘢痕瘤)；硬皮病；心肌纤维化、青光眼滤过手术失败；肠粘连。

[0700] 眼部手术和纤维化并发症

[0701] 可能常常发生由眼部手术引起的瘢痕组织挛缩。由于组织的瘢痕形成和收缩，建立新的排泄通道的青光眼手术常常失败，可能阻断所建立的排泄系统，因此需要另外的手
术干预。当前的抗瘢痕形成方案(丝裂霉素C或5FU)因牵涉并发症(例如失明)而受限，
例如见Cordeiro MF等，Human anti-transforming growth factor-beta2antibody:a new
glaucoma anti-scarring agent Invest Ophthalmol Vis Sci.1999Sep;40(10):2225-34。
角膜外伤或角膜手术后（例如激光或手术治疗近视或屈光不正）后形成的瘢痕组织也可能
收缩，其中组织的收缩可能导致结果不准确。玻璃体液或视网膜上/中可能形成瘢痕组织，
例如在一些糖尿病患者中可能最终引起失明，并且可能在脱离手术后形成瘢痕组织，称为
增生性玻璃体视网膜病变(PVR)。PVR是视网膜脱离后最常见的并发症并且与视网膜裂孔
或破裂相关。PVR指玻璃体腔内和含有视网膜色素上皮(RPE)细胞的视网膜的前面和后面
的细胞膜生长。这些基本上为瘢痕组织的膜对视网膜施加牵引并且甚至在最初成功的视网
膜脱离手术后，可能引起视网膜脱离复发。

[0702] 在斜视、眼窝或眼睑手术或甲状腺眼病后可能在眼窝中或眼部和眼睑肌肉上形成瘢痕组织，并且其中发生结膜瘢痕形成，正是在青光眼手术后或瘢痕疾病、炎症(例如，类
天疱疮)、传染性疾病(例如，沙眼)中可能发生。与包括胶原的组织收缩相关的进一步眼
疾为白内障摘出后晶状体囊浑浊和挛缩。已经公认了MMP在眼病中的重要作用，包括伤口
愈合、眼干、无菌角膜溃疡、复发性上皮糜烂、角膜新生血管化、翼状胬肉、结膜松弛症、青光眼、PVR和眼部纤维化。

[0703] 肝纤维化

[0704] 肝纤维化(LF)通常为若干病因的肝损伤的不可逆后果。在西方社会，主要病因类别为：酒精性肝病(30-50%)、病毒性肝炎(30%)、胆道疾病(5-10%)、原发性血色素沉积症
(5%)以及药物相关的肝硬变和病因不明的隐原性肝硬变(10-15%)。威尔森氏病、α1-抗胰
蛋白酶缺乏和其它罕见疾病也具有肝纤维化作为症状之一。肝硬变、肝纤维化晚期通常需
要肝脏移植并且为西方社会十大死因之一。

[0705] 肾纤维化和相关病状

[0706] 慢性肾衰竭(CRF)

[0707] 慢性肾衰竭是肾脏排泄废物、浓缩尿液和保存电解液的能力渐进性丧失。CRF为缓慢进行性。其最常由引起肾功能逐渐丧失的任何疾病引起，并且纤维化是引起CRF的主要
病理。

[0708] 糖尿病性肾病

[0709] 特点为肾小球硬化症和肾小管间质纤维化的糖尿病性肾病是现代社会晚期肾病的单个最普遍的原因，并且糖尿病患者构成透析的最大群体。这种治疗昂贵并且远不够理
想。移植提供更好的结果，但是存在供体严重不足的问题。

[0710] 慢性肾病

[0711] 慢性肾病(CKD)是全世界的公共健康问题并且公认为与心血管疾病和慢性肾衰竭(CRF)风险升高相关的常见病状。

[0712] 国家肾脏基金会(National Kidney Foundation，NKF)的肾脏病生存质量指导(Kidney Disease Outcomes Quality Initiative，K/DOQI)将慢性肾病定义为肾脏损伤或
肾小球滤过率(GFR)降低3个月或更多个月。也已知CKD的其它标志并用于诊断。通常，
具有不可逆硬化症的肾肿块的破坏和肾元损伤导致GFR渐进性下降。最近，K/DOQI公布了
CKD阶段的分类，如下：

[0713] 阶段1：GFR正常或升高的肾损伤(>90mL/min/1.73m2)

[0714] 阶段2：GFR轻微下降(60-89mL/min/1.73m2)

[0715] 阶段3：GFR中度下降(30-59mL/min/1.73m2)

[0716] 阶段4：GFR严重下降(15-29mL/min/1.73m2)

[0717] 阶段5：肾衰竭(GFR<15mL/min/1.73m2或透析)

[0718] 在阶段1和2CKD中，单独的GFR不确认透析。可依赖肾损伤的其它标志，包括血或尿的组成异常或成像测试异常。

[0719] CKD的病理生理学

[0720] [0352]每个肾中存在大约一百万个肾元，每个均有助于总GFR。不管肾损伤的病因如何，随着肾元的逐渐破坏，肾脏能够通过剩余健康肾元的超滤和代偿性肥大维持GFR。
这种肾元适应性允许继续正常地清除血浆溶质，使得仅在总GFR降至50%后，肾储备耗尽
时，例如尿和肌酸酐等物质开始表现出血浆水平的显著升高。血浆肌酸酐值近乎加倍，GFR
降低50%。因此，患者体内血浆肌酸酐从0.6mg/dL的基线值加倍至1.2mg/dL实际上表示功
能肾元物质损失50%。

[0721] 虽然对于提到的原因有利，但是认为残留肾元超滤和肥大代表进行性肾功能障碍的主要原因。据信这是由于肾小球毛细血管压升高发生的，这样损坏毛细管并且最初导致
局灶节段性肾小球硬化症并最终导致球形肾小球硬化症。这种假设已基于5/6肾切除大鼠
的研究，所述大鼠出现与患有CKD的人中观察到的一致的病变。

[0722] 慢性肾病的两个最常见原因是糖尿病和高血压。其它因素包括肾毒素(包括造影剂)或灌注减少引起的急性创伤；蛋白尿；伴随间质损伤的肾产氨作用增强；高脂血；伴随
磷酸钙沉积的高磷酸盐血症；氧化亚氮水平降低和抽烟。

[0723] 在美国，CKD的发病率和患病率正在上升，带来不良后果且医疗卫生系统的成本高。在美国肾病是第九大致死原因。高死亡率使得US Surgeon General's mandate for
America's citizenry,Healthy People2010含有关注CKD的章节。本章节的目的是明确目
标并提供降低美国慢性肾病的发病率、致病率、死亡率和健康成本的方案。

[0724] 在国际上，自1989年以来晚期肾病(ESRD)的发病率也已稳定升高。美国的ESRD发病率最高，其次是日本。每一百万人口的患病率属日本最高，其次是美国。

[0725] 与血液透析相关的死亡率是惊人的，并且指示进入血液透析的患者的预期寿命明显缩短。在每个年龄段，当与非透析患者和无肾病的个体相比时，进行透析的
ESRD患者死亡率显著升高。在60岁时，健康的人可期望活20年以上，而开始血液透析
的60岁患者的预期寿命更接近4年(Aurora和Verelli，2009年5月21日。Chronic
Renal Failure:Treatment&Medication.Emedicine.http://emedicine.medscape.com/
article/238798-treatment)。

[0726] 肺纤维化

[0727] 间质肺纤维化(IPF)是由各种吸入剂或未知原因(特发性肺纤维化)引起的肺部瘢痕形成，吸入剂包括矿物颗粒、有机粉尘和氧化气体。全世界数百万个体罹患此疾
病，且尚无有效的治疗方法。缺乏有用治疗的主要原因在于所确定的疾病分子机制不足
以设计适当治疗标靶(Lasky JA.,Brody AR.(2000),“Interstitialbrosis and growth
factors”,Environ Health Perspect.;108增刊4:751-62)。

[0728] 心脏纤维化

[0729] 在主要心血管病中心脏衰竭是独特的，因为当其它病状显著减少的同时，唯有心脏衰竭患病率升高。其中一些心脏衰竭可归因于美国和欧洲人口的老龄化。拯救心肌损伤
患者的能力也是主要因素，因为这些患者可能因有害的心脏重塑而发展左心室功能障碍。

[0730] 正常心肌由各种细胞组成，心肌细胞和非心肌细胞（其包括内皮和血管平滑肌细胞和成纤维细胞）。

[0731] 心室壁的结构重塑是心脏病临床结果的关键决定因素。这种重塑牵涉细胞外基质蛋白的生成和破坏、细胞增殖和迁移和凋亡和坏死细胞死亡。心脏成纤维细胞关键地
牵涉于这些过程中，从而产生生长因子和作为自分泌和旁分泌因子的细胞因子以及细胞
外基质蛋白和蛋白酶。最新研究已表明心脏成纤维细胞和心肌细胞之间的相互作用对于
心脏重塑的进展必不可少，心脏重塑的净效应是心脏功能退化和心脏衰竭发作(Manabe I
等，(2002),“Gene expression in broblasts and brosis:involvement in cardiac
hypertrophy”,Circ Res.13;91(12):1103-13)。

[0732] 烧伤和瘢痕

[0733] 尤其在纤维化疾病中可能发生的特殊问题是组织收缩，例如瘢痕收缩。包括细胞外基质组分的组织，特别是包括胶原的组织的收缩可能连同许多不同病理情况和外科或整
形手术发生。例如，瘢痕的挛缩可能引起生理问题，从而可能导致对医学治疗的需要，或可
能导致纯美容性的问题。胶原是瘢痕和其它收缩组织的主要组分并且同样是要考虑的重要
结构组分。然而，瘢痕和其它收缩组织还包括也可能促成组织收缩的其它结构组分，特别是
其它细胞外基质组分，例如弹性蛋白。

[0734] 包括胶原(也可包括其它细胞外基质组分)的组织的收缩经常在烧伤愈合中发生。烧伤可为化学、热或放射性烧伤并且可能在眼部、皮肤表面或皮肤和下层组织。也可能
是内部组织上(例如)由放射治疗引起的烧伤。烧伤组织收缩常常是一个问题并且可能导
致身体和/或美容问题，例如丧失活动和/或毁容。

[0735] 出于各种原因，可应用皮肤移植片并且在应用后常常可能经受收缩。如同烧伤组织愈合一样，收缩可能导致身体和美容问题。例如严重烧伤情况下需要许多皮肤移植片是
一个特别严重的问题。

[0736] 在人造皮肤的生产中收缩也是一个问题。为生产真的人造皮肤，需要通过成纤维细胞来繁殖由上皮细胞(角化细胞)组成的表皮和由胶原组成的真皮。重要的是具有两种
类型的细胞，因为它们使用生长因子进行信号传导且刺激彼此。当通过成纤维细胞填繁殖
时，人造皮肤的胶原组分常常收缩至小于其原面积的1/10。

[0737] 瘢痕收缩是常见的，其为瘢痕纤维组织皱缩而引起的收缩。在一些情况下，瘢痕可能变成恶性瘢痕，一种收缩引起严重畸形的瘢痕。胃溃疡治愈时形成的瘢痕组织的收缩引
起的沙漏挛缩可能将患者的胃部有效分离为两个单独的腔。由于瘢痕组织收缩，可能发生
通道和管道阻塞、瘢痕性狭窄。血管收缩可能是由于原发性阻塞或手术创伤，例如，外科手
术或血管成形术后。也可能发生其它空心管(例如，输尿管)的狭窄。无论是由意外受伤
还是手术引起，发生任何形式的瘢痕形成时，可能出现问题。牵涉包括胶原的组织收缩的皮
肤和肌腱病状包括由手术或意外(例如，手或足部肌腱损伤)引起的创伤后病状、移植后病
状和病理性病状，例如硬皮病、掌腱膜挛缩症和大疱性表皮松解症。眼部组织的瘢痕形成和
收缩可能在各种病状中发生，例如视网膜脱离和糖尿病性眼疾病的后遗症(如上所述)。如
果存在创伤或炎症性损伤，可能发生在眼球和相关结构(包括眼部外肌肉和眼睑)的颅骨
中发现的眼窝收缩。眼窝内组织收缩，引起各种问题，包括复视和外观不好看。

[0738] 有关不同类型的纤维化的更多信息，见：Molina V等，(2002),“Fibroticdiseases”,Harefuah,141(11):973-8,1009；Yu L 等，(2002),“Therapeutic
strategies to halt renal fibrosis”,Curr Opin Pharmacol.2(2):177-81；Keane
WF 和 Lyle PA.(2003),“Recent advances in management of type 2diabetes and
nephropathy:lessons from the RENAAL study”,Am J Kidney Dis.41(3增刊2):S22-5；
Bohle A 等，(1989),“The pathogenesis of chronic renal failure”,Pathol Res
Pract.185(4):421-40；Kikkawa R 等，1997),“Mechanism of the progression of
diabetic nephropathy to renal failure”,Kidney Int Suppl.62:S39-40；Bataller
R和 Brenner DA.(2001),“Hepatic stellates as a target for the treatment of
liver fibrosis”,Semin Liver Dis.21(3):437-51；Gross TJ 和 Hunninghake GW，
(2001)“Idiopathic pulmonary fibrosis”,N Engl J Med.345(7):517-25；Frohlich
ED.(2001)“Fibrosis and ischemia:the real risks in hypertensive heart
disease”,Am J Hypertens;14(6Pt 2):194S-199S；Friedman SL.(2003),“Liver
fibrosis-from bench to bedside”,J Hepatol.38 增刊 1:S38-53；Albanis E 等，
(2003),“Treatment of hepatic fibrosis:almost there”,Curr Gastroenterol
Rep.5(1):48-56；(Weber KT.(2000),“Fibrosis and hypertensive heart disease”,Curr Opin Cardiol.15(4):264-72)。

[0739] 核酸分子和药物制剂的递送

[0740] 可使核酸分子适合单独或联合其它疗法用于预防或治疗纤维化(例如，肝脏、肾脏、腹膜和肺部)疾病、性状、病状和/或病症，和/或与细胞或组织中的hsp47水平有关或
将对其响应的任何其它性状、疾病、病症或病状。核酸分子可包括用于向受试者施用的递送
媒介物(包括脂质体)、载体和稀释剂及其盐，并且/或可存在于药学上可接受的制剂中。

[0741] 本文公开的核酸分子可直接用载体或稀释剂递送或施用，而不含作用以帮助、促进或利于进入细胞的任何递送媒介物，包括病毒载体、病毒颗粒、脂质体(lipofectin)制
剂、脂质体试剂或沉淀剂等。

[0742] 可通过与载体或稀释剂或作用以帮助、促进或利于进入细胞的任何递送媒介物，包括病毒序列、病毒颗粒、脂质体制剂、脂质体试剂或沉淀剂等一起直接应用核酸分子向
受试者递送或施用核酸分子。多肽利于核酸引入预期受试者体内，例如美国申请公布
No.20070155658中所述(例如，三聚氰胺衍生物(例如2,4,6-三胍基三嗪和2,4,6-三酰
胺基肉胺酰基三聚氰胺)、多聚精氨酸多肽和包括交替谷氨酰胺和天冬酰胺残基的多肽)。

[0743] Akhtar 等，Trends Cell Bio.,2:139(1992)；Delivery Strategiesfor Antisense Oligonucleotide Therapeutics，Akhtar 编 (1995)，Maurer
等 Mol.Membr.Biol.,16:129-140(1999)；Hofland 和 Huang，Handb.Exp.
Pharmacol.,137:165-192(1999)；和Lee等，ACS Symp.Ser.,752:184-192(2000)；美国专
利 No.6,395,713；6,235,310；5,225,182；5,169,383；5,167,616；4,959217；4.925,678；
4,487,603；和 4,486,194和Sullivan 等，PCT WO 94/02595；PCT WO 00/03683和 PCT
WO02/08754；和美国专利申请公布No.2003077829中描述了递送核酸分子的方法。可利用
这些方法递送几乎所有核酸分子。可通过本领域中已知的各种方法，包括但不限于包裹在
脂质体中、通过离子电渗疗法或通过掺入其它媒介物中例如生物可降解聚合物、水凝胶、环
糊精(见例如，Gonzalez等，Bioconjugate Chem.,10:1068-1074(1999)；Wang等，国际PCT
公布No.WO 03/47518和WO 03/46185)、聚乳酸乙醇酸(PLGA)和PLCA微球(见例如美国专
利No.6,447,796和美国申请公布No.2002130430)、生物可降解的纳米胶囊和生物粘性微
球或通过蛋白质载体(O’Hare和Normand，国际PCT公布No.WO 00/53722)向细胞施用核
酸分子。或者，通过直接注射或使用输注泵局部递送核酸/媒介物组合。无论经皮下、肌肉
内还是皮内直接注射本发明的核酸分子，可使用标准针头和注射器方法，或通过例如Conry
等，Clin.Cancer Res.,5:2330-2337(1999)和Barry等，国际PCT公布No.WO99/31262中
所述的无针技术进行。本发明的分子可用作药物试剂。药物试剂预防、调节受试者疾病状
态发生，或治疗(使症状减轻至某一程度，优选所有症状)受试者疾病状态。

[0744] 核酸分子可与阳离子脂质复合，包裹在脂质体中，或以其它方式递送至靶细胞或组织。核酸或核酸复合体可经由在掺入或不掺入生物聚合物中的情况下直接真皮敷用、经
皮敷用或注射，在体外或体内局部施用至相关组织。本发明的核酸分子可包括表I所示的
序列。这种核酸分子的实例基本上由表I中提供的序列组成。

[0745] 递送系统包括表面修饰脂质体，所述脂质体含有聚乙二醇脂质(经PEG修饰或长循环脂质体或隐形脂质体)。这些制剂提供了增加靶组织中药物积聚的方法。这类药物载体
抗单核吞噬细胞系统(MPS或RES)的调理素作用和排除作用，从而赋予更长血液循环时间
和增强封装药物的组织暴露(Lasic等，Chem.Rev.1995,95,2601-2627；Ishiwata等，Chem.
Pharm.Bull.1995,43,1005-1011)。

[0746] 可用聚乙烯亚胺(例如，直链或支链PEI)和/或聚乙烯亚胺衍生物一起配制核酸分子或与之复合，聚乙烯亚胺衍生物包括例如聚乙烯亚胺-聚乙二醇-N-乙酰半乳糖胺
(PEI-PEG-GAL)或聚乙烯亚胺-聚乙二醇-三-N-乙酰半乳糖胺(PEI-PEG-triGAL)衍生
物、接枝PEI，例如半乳糖PEI、胆固醇PEI、抗体衍生化PEI及其聚乙二醇PEI(PEG-PEI)衍
生物(见例如Ogris等，2001,AAPA PharmSci,3,1-11；Furgeson等，2003,Bioconjugate
Chem.,14,840-847；Kunath 等，2002,Pharmaceutical Research,19,810-817；Choi
等，2001,Bull.Korean Chem.Soc.,22,46-52；Bettinger 等，1999,Bioconjugate
Chem.,10,558-561；Peterson 等，2002,Bioconjugate Chem.,13,845-854；Erbacher
等，1999,Journal of Gene Medicine Preprint,1,1-18；Godbey 等，1999.,PNAS
USA,96,5177-5181；Godbey 等，1999,Journal of Controlled Release,60,149-160；
Diebold 等，1999,Journal of Biological Chemistry,274,19087-19094；Thomas 和
Klibanov，2002,PNAS USA,99,14640-14645；Sagara，美国专利No.6,586,524和美国专利
申请公布No.20030077829。

[0747] 核酸分子可与膜破裂性试剂复合，例如美国专利申请公布No.20010007666中所述的膜破裂性试剂。膜破裂性试剂和核酸分子也可与阳离子脂质或辅助脂质分子，例如美
国专利No.6,235,310中所述的那些脂质复合。

[0748] 可通过肺部递送，例如通过吸入经吸入装置或喷雾器施用的气溶胶或喷雾剂干燥制剂施用核酸分子，从而向相关肺部组织提供核酸分子的快速局部摄取。可通过研磨干燥
或冻干核酸组合物，然后使微粒化组合物通过(例如)400目筛以破碎或分离出大团块制备
含有微粒化核酸组合物的可呼吸干燥颗粒的固体颗粒组合物。包含本发明核酸组合物的固
体颗粒组合物可任选含有用以促进气溶胶以及其它治疗性化合物的形成的分散剂。适合分
散剂为可与核酸化合物以任何适合比例(例如按重量计1:1比例)混合的乳糖。

[0749] 液体颗粒的气溶胶可包括本文公开的核酸分子并且可通过任何适合方式，例如用喷雾器产生(见例如美国专利No.4,501,729)。喷雾器是市场上出售的装置，其借助于通
过狭窄文氏管孔口加速压缩气体(通常为空气或氧气)或借助于超声搅拌，将活性成分的
溶液或悬浮液转化为气溶胶雾。用于喷雾器的适合制剂包括于液体载体中，量高达制剂的
40%w/w，优选低于20%w/w的活性成分。载体通常为水或稀释含水醇溶液，优选通过添加(例
如)氯化钠或其它适合盐类将载体制备为与体液等渗。如果制剂并非无菌制备，任选添加
剂包括防腐剂，例如甲基羟基苯甲酸酯、抗氧化剂、调味剂、挥发性油、缓冲剂和乳化剂和其它制剂表面活性剂。同样可用任何固体颗粒气溶胶发生器产生包括活性组合物和表面活性
剂的固体颗粒的气溶胶。用于将固体颗粒治疗剂施用给受试者的气溶胶发生器产生如上所
说明的可吸入颗粒并以适于人体施用的速率产生含有预定剂量的治疗性组合物的大量气
溶胶。固体颗粒气溶胶发生器的一种说明性类型为吹入器。用于通过吹入施用的适合制剂
包括可借助于吹入器递送的精细粉碎粉剂。在吹入器中，粉剂，例如进行本文所述治疗有效
的定量，装在通常由凝胶或塑料制成的胶囊或盒中，原位刺穿或打开，并且通过在吸入时空
气吸引通过装置或借助于手动操作泵递送粉剂。吹入器中采用的粉剂仅由活性成分组成或
由包含活性成分、适合粉剂稀释剂(例如乳糖)和任选表面活性剂的粉剂混合物组成。活
性成分通常包括0.1-100w/w的制剂。第二种类型的说明性气溶胶发生器包括定量吸入器。
定量吸入器为加压气溶胶分配器，通常装有于液化推进剂中的活性成分的悬浮液或溶液制
剂。使用期间这些装置通过适于递送定量体积的阀门排出制剂以产生含有活性成分的细颗
粒喷雾。适合的推进剂包括某些氯氟烃化合物，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟
乙烷及其混合物。制剂可另外含有一种或多种助溶剂(例如，乙醇)、乳化剂和其它制剂表
面活性剂(例如油酸或山梨醇酐三油酸酯)、抗氧化剂和适合调味剂。例如，美国专利申请
No.20040037780和美国专利No.6,592,904；6,582,728；6,565,885中描述了肺部递送的其
它方法。PCT专利公布No.WO2008/132723通常涉及寡核苷酸，尤其是siRNA的气溶胶递送
至呼吸系统。

[0750] 可将核酸分子施用至中枢神经系统(CNS)或外周神经系统(PNS)。实验已经证明神经元对核酸的有效体内摄取。见例如，Sommer et al.,1998,Antisense Nuc.Acid Drug
Dev.,8,75；Epa等，2000,Antisense Nuc.Acid Drug Dev.,10,469；Broaddus等，1998,J.
Neurosurg.,88(4),734；Karle 等，1997,Eur.J.Pharmocol.,340(2/3),153；Bannai 等，
1998,Brain Research,784(1,2),304；Rajakumar 等，1997,Synapse,26(3),199；Wu-pong
等，1999,BioPharm,12(1),32；Bannai等，1998,Brain Res.Protoc.,3(1),83；和Simantov
等，1996,Neuroscience,74(1),39。因此核酸分子可经受递送至CNS和/或PNS中的细胞
并为细胞所摄取。

[0751] 通过各种不同方案提供了核酸分子向CNS的递送：可使用的传统CNS递送方法包括但不限于鞘内和脑室内施用、植入导管和泵、在损伤或损害部位直接注射或输注、注入脑
动脉系统或通过化学或渗透开放血脑屏障。其它方法可包括使用各种转运和载体系统，例
如虽然使用共轭物和生物可降解聚合物。而且，基因治疗方法，例如如Kaplitt等，美国专
利No.6,180,613和Davidson，WO 04/013280中所述，可用于在CNS中表达核酸分子。

[0752] 递送系统包括(例如)水和非水凝胶、霜剂、复合型乳剂、微型乳剂、脂质体、软膏、水和非水溶液、洗剂、气溶胶、烃类基质和粉剂，并且可含有赋形剂(例如增溶剂)、渗
透促进剂(例如，脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇和氨基酸)和亲水性聚合物(例如，聚卡波
非(polycarbophil)和聚乙烯吡咯烷酮)。在一个实施方案中，药学上可接受的载体为
脂质体或透皮促进剂。本发明中可用脂质体的实例包括以下：(1)CellFectin，阳离子脂
质N,NI,NII,NIII-四甲基-N,NI,NII,NIII-四棕榈酰-y-精胺和二油酰基磷脂酰乙醇胺
(DOPE)(GIBCO BRL)的1:1.5(M/M)脂质体制剂；(2)细胞转染剂(Cytofectin)GSV，阳离子
脂质和DOPE(Glen Research)的2:1(M/M)脂质体制剂；(3)DOTAP(N-[1-(2,3-二油酰氧
基)-N,N,N-三-甲基-甲基硫酸铵)(Boehringer Manheim)；和(4)Lipofectamine，聚阳
离子脂质DOSPA、中性脂质DOPE(GIBCO BRL)和二-烷基化氨基酸(DiLA2)的3:1(M/M)脂
质体制剂。

[0753] 递送系统包括贴片、片剂、栓剂、子宫托、凝胶、霜剂，并且可含有诸如助溶剂和促进剂(例如，丙二醇、胆汁盐和氨基酸)的赋形剂和其它媒介物(例如，聚乙二醇、脂肪酸酯和衍生物以及亲水性聚合物，例如羟丙基甲基纤维素和透明质酸))。

[0754] 可用聚乙烯亚胺(例如，直链或支链PEI)和/或聚乙烯亚胺衍生物一起配制核酸分子或与之复合，聚乙烯亚胺衍生物包括例如接枝PEI，例如半乳糖PEI、胆固醇
PEI、抗体衍生化PEI及其聚乙二醇PEI(PEG-PEI)衍生物(见例如Ogris等，2001,AAPA
PharmSci,3,1-11；Furgeson 等，2003,Bioconjugate Chem.,14,840-847；Kunath 等，
2002,Pharmaceutical Research,19,810-817；Choi 等，2001,Bull.KoreanChem.
Soc.,22,46-52；Bettinger 等，1999,Bioconjugate Chem.,10,558-561；Peterson 等，
2002,Bioconjugate Chem.,13,845-854；Erbacher 等，1999,Journal ofGene Medicine
Preprint,1,1-18；Godbey 等，1999.,PNAS USA,96,5177-5181；Godbey 等，1999,Journal of Controlled Release,60,149-160；Diebold 等，1999,Journal of Biological
Chemistry,274,19087-19094；Thomas 和 Klibanov，2002,PNAS USA,99,14640-14645；和
Sagara，美国专利No.6,586,524。

[0755] 核酸分子可包括生物共轭物，例如Vargeese等，U.S.Ser.No.10/427,160；美国专利No.6,528,631；美国专利No.6,335,434；美国专利No.6,235,886；美国专利
No.6,153,737；美国专利No.5,214,136；美国专利No.5,138,045中所述的核酸共轭物。

[0756] 本文公开的组合物、方法和试剂盒可包括表达载体，所述表达载体包括以允许核酸分子表达的方式编码本发明至少一种核酸分子的核酸序列。将核酸分子或一种或多种能
够表达dsRNA链的载体引入细胞环境中的方法将取决于细胞的类型及其环境组成。核酸分
子或载体构建体可直接引入细胞中(即，在细胞内)；或在细胞外引入腔、胞间隙内，经口腔
引入生物体的循环中，或可通过将生物体或细胞置于含有dsRNA的溶液中引入。细胞优选
为哺乳动物细胞；更优选为人细胞。表达载体的核酸分子可包括有义区和反义区。反义区
可包括与编码hsp47的RNA或DNA序列互补的序列，并且有义区可包括与反义区互补的序
列。核酸分子可包括两条具有互补有义区和反义区的不同链。核酸分子可包括具有互补有
义区和反义区的单链。

[0757] 可由插入DNA或RNA载体的转录单位表达与靶RNA分子相互作用并下调编码靶RNA分子(例如，本文基因库登录号所指的靶RNA分子)的基因的核酸分子。重组载体可为
DNA质粒或病毒载体。可基于但不限于腺伴随病毒、逆转录病毒、腺病毒或α病毒构建体表
达核酸分子的病毒载体。可如本文所述递送能够表达核酸分子的重组载体，并且存留于靶
细胞内。或者，可使用病毒载体以供核酸分子瞬时表达。必要时可重复施用这种载体。一
旦表达，核酸分子即可经由RNA干扰(RNAi)结合并下调基因功能或表达。核酸分子表达载
体的递送可为全身性的，例如通过静脉内或肌肉内施用，通过向从受试者外植的细胞施用，
然后再引入受试者体内，或通过允许引入所需靶细胞中的任何其它方式。

[0758] 表达载体可包括以允许核酸分子表达的方式编码本文公开的至少一种核酸分子的核酸序列。例如，载体可能含有编码核酸分子包括双链体的两条链的序列。载体
也可含有编码自补并因此形成核酸分子的单个核酸分子的序列。Paul等，2002,Nature
Biotechnology,19,505；Miyagishi 和 Taira，2002,Nature Biotechnology,19,497；Lee
等，2002,Nature Biotechnology,19,500；和Novina等，2002,Nature Medicine，在线预览
版doi:10.1038/nm725中描述了这种表达载体的非限制性实例。哺乳动物(例如，人)细
胞中也可包括表达载体。

[0759] 表达载体可包括编码两种或更多种相同或不同核酸分子的核酸序列。表达载体可包括与基因库登录号NM 001235所指的核酸分子互补的核酸分子的序列，例如表I所示的
那些。

[0760] 表达载体可编码核酸双链体的一条或两条链或自身杂交为核酸双链体的单条自补链。可以允许核酸分子表达的方式可操作地连接编码核酸分子的核酸序列(见例
如 Paul 等，2002,Nature Biotechnology,19,505；Miyagishi 和 Taira，2002,Nature
Biotechnology,19,497，Lee 等，2002,Nature Biotechnology,19,500；和 Novina 等，
2002,Nature Medicine，在线预览版doi:10.1038/nm725)。

[0761] 表达载体可包括以下的其中一个或多个：a)转录起始区(例如，真核pol I、II或III起始区)；b)转录终止区(例如，真核pol I、II或III终止区)；c)内含子和d)编码
至少一个核酸分子的核酸序列，其中所述序列以允许核酸分子表达和/或递送的方式可操
作地与起始区和终止区连接。载体可任选包括编码核酸分子的序列的5’侧或3’侧上可操
作连接的蛋白质开放阅读框(ORF)；和/或内含子(间插序列)。

[0762] 可由真核RNA聚合酶I(pol I)、RNA聚合酶II(pol II)或RNA聚合酶III(polIII)的启动子驱动核酸分子序列的转录。来自pol II或polIII启动子的转录产物
在所有细胞中高水平表达；指定细胞类型中指定pol II启动子的水平取决于附近存
在的基因调节序列(增强子、沉默子等)的性质。也可使用原核RNA聚合酶启动子，只
要原核RNA聚合酶在恰当细胞中表达(Elroy-Stein和Moss，1990,Proc.Natl.Acad.
Sci.USA,87,6743-7；Gao 和 Huang 1993,Nucleic Acids Res.,21,2867-72；Lieber 等，
1993,Methods Enzymol.,217,47-66；Zhou 等，1990,Mol.Cell.Biol.,10,4529-37)。若
干研究人员已经证明由这种启动子表达的核酸分子可在哺乳动物细胞中起作用(例如
Kashani-Sabet等，1992,Antisense Res.Dev.,2,3-15；Ojwang等，1992,Proc.Natl.Acad.
Sci.USA,89,10802-6；Chen等，1992,Nucleic Acids Res.,20,4581-9；Yu等，1993,Proc.
Natl.Acad.Sci.USA,90,6340-4；L’Huillier 等，1992,EMBO J.,11,4411-8；Lisziewicz
等，1993,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A,90,8000-4；Thompson 等，1995,Nucleic Acids
Res.,23,2259；Sullenger&Cech,1993,Science,262,1566)。更特别地，转录单位，例如源
自编码U6小核(snRNA)、转运RNA(tRNA)和腺病毒VA RNA的基因的转录单位用于在细
胞中生成高浓度的所需RNA分子，例如siNA(Thompson等，如上；Couture和Stinchcomb，
1996，如上；Noonberg等，1994,Nucleic Acid Res.,22,2830；Noonberg等，美国转录
No.5,624,803；Good 等，1997,Gene The r.,4,45；Beigelman等，国际PCT 公布 No.WO
96/18736)。以上核酸转录单位可掺入多种载体中以引入哺乳动物细胞中，包括但不限于质
粒DNA载体、病毒DNA载体(例如腺病毒或腺伴随病毒载体)或病毒RNA载体(例如逆转
录病毒或α病毒载体)(见Couture和Stinchcomb，1996如上)。

[0763] 可在细胞内由真核启动子表达核酸分子(例如，Izant和Weintraub，1985,Science,229,345；McGarry 和 Lindquist，1986,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA
83,399；Scanlon 等，1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88,10591-5；Kashani-Sabet
等，1992,Antisense Res.Dev.,2,3-15；Dropulic 等，1992,J.Virol.,66,1432-41；
Weerasinghe 等，1991,J.Virol.,65,5531-4；Ojwang 等，1992,Proc.Natl.Acad.
Sci.USA,89,10802-6；Chen 等，1992,Nucleic Acids Res.,20,4581-9；Sarver 等，
1990Science,247,1222-1225；Thompson等，1995,Nucleic Acids Res.,23,2259；Good等，
1997,Gene Therapy,4,45)。本领域的技术人员认识到可在真核细胞中由恰当DNA/RNA载体
表达任何核酸。可通过用酶核酸从初级转录产物释放核酸来增强这种核酸的活性(Draper
等，PCT WO93/23569，和Sullivan等，PCT WO 94/02595；Ohkawa等，1992,NucleicAcids
Symp.Ser.,27,15-6；Taira 等，1991,Nucleic Acids Res.,19,5125-30；Ventura 等，
1993,Nucleic Acids Res.,21,3249-55；Chowrira等，1994,J.Biol.Chem.,269,25856)。

[0764] 包装于病毒颗粒中的病毒构建体将实现表达构建体有效引入细胞内与表达构建体编码的dsRNA构建体的转录。

[0765] 口服引入的方法包括直接混合RNA与生物体的食物，以及工程化用作食物的物种以表达RNA的工程化方法，然后饲喂给受影响的生物体。可采用物理方法将核酸分子溶液
引入细胞内。引入核酸的物理方法包括注射含有核酸分子的溶液，用被核酸分子覆盖的颗
粒轰击，将细胞或生物体浸入RNA溶液中，或在核酸分子存在下进行细胞膜的电穿孔。

[0766] 可使用本领域中已知将核酸引入细胞的其它方法，例如脂质介导的载体转运、化学物质介导的转运，例如磷酸钙等。因此可随同实现以下一种或多种活性的组分一起引入
核酸分子：增强细胞的RNA摄取，促进双链体链的退火，稳定退火链或增强靶基因的抑制。

[0767] 可使用适合制剂将核酸分子或载体构建体引入细胞中。一种优选的制剂为脂质TM
制剂，例如Lipofectamine 2000(Invitrogen,CA,USA)、维生素A偶联脂质(Sato等，Nat
Biotechnol 2008；26:431-442,PCT专利公布No.WO 2006/068232)。也可(例如)通过静
脉内、肌肉内或腹膜内注射，或经口服或通过吸入或如本领域中已知的其它方法向动物施
用脂质制剂。当制剂适于施用至动物(例如哺乳动物)，尤其是人体内时，所述直接也是药
学上可接受的。用于施用寡核苷酸的药学上可接受的制剂已知并且可使用。在一些情况下，
可优选将dsRNA配制于缓冲液或盐溶液中并且可直接将配制的dsRNA注射至细胞内，如使
用卵母细胞的研究中。也可进行dsRNA双链体的直接注射。关于引入dsRNA的适合方法，
见通过引用并入本文的美国公开的专利申请No.2004/0203145、20070265220。

[0768] 聚合纳米胶囊或微胶囊利于封装或结合dsRNA转运和释放至细胞内。聚合纳米胶囊或微胶囊包括聚合材料和单体物质，尤其包括聚氰基丙烯酸丁酯。已公布关于材料和制
造方法汇总(见Kreuter，1991)。在聚合/纳米颗粒生成步骤中由单体和/或寡聚前体形
成的聚合材料本身由现有技术已知，正如纳米颗粒制造领域中的技术人员可根据普通技术
适当选择聚合材料的分子量和分子量分布。

[0769] 可将核酸分子配制为微乳剂。微乳剂为水、油和两性分子体系，所述体系是单一光学各向同性和热力学稳定液体溶液。通常通过首先将油分散于表面活性剂水溶液中，然后
加入足够量的第4种组分(通常为中链长度的醇)以形成透明体系来制备微乳剂。

[0770] 可用于单独或与助表面活性剂联合制备微乳剂的表面活性剂包括但不限于离子表面活性剂、非离子表面活性剂、Brij 9、聚氧乙烯油基醚、聚甘油脂肪酸酯、单月桂
酸四甘油酯(ML310)、单油酸四甘油酯(MO310)、单油酸六甘油酯(PO310)、五油酸六甘
油酯(PO500)、单癸酸十甘油酯(MCA750)、单油酸十甘油酯(MO750)、倍半油酸十甘油酯
(SO750)、十油酸十甘油酯(DA0750)。助表面活性剂，通常为短链醇(例如乙醇、1-丙醇和
1-丁醇)，由于在表面活性剂分子之间产生空隙空间而通过渗入表面活性剂薄膜并因此产
生无序薄膜而用以增强界面流动性。

[0771] 水溶性交联聚合物

[0772] 递送制剂可包括水溶性可降解交联聚合物，其包括一种或多种可降解交联脂质部分，一种或多种PEI部分和/或一种或多种mPEG(PEG的甲醚衍生物(甲氧基聚(乙二
醇)))。

[0773] 可降解脂质部分优选包括具有以下结构基序的化合物：

[0774]

[0775] 在上式中，酯键为生物可降解基团，R表示相对疏水性“脂质”基团，并且所示结构基序出现m次，其中m范围为约1至约30。例如，在某些实施方案中，R选自C2-C50烷基、C2-C50杂烷基、C2-C50烯基、C2-C50杂烯基、C5-C50芳基、C2-C50杂芳基、C2-C50炔基、
C2-C50杂炔基、C2-C50羧基烯基和C2-C50羧基杂烯基。在优选的实施方案中，E为具有
4-30个碳，更优选具有8-24个碳的饱和或非饱和烷基或固醇，优选为胆甾醇基部分。在优
选的实施方案中，R为油酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈十七烷酸、硬脂酸、花生酸、二十二烷酸或二十四烷酸。在最优选的实施方案中，R为油酸。

[0776] 式(B)中的N可具有电子对或对氢原子的键。当N具有电子对时，在低pH下重复单元可具有阳离子性。

[0777] 可降解交联脂质部分可与聚乙烯亚胺(PEI)反应，如以下方案A所示：

[0778] 方案A

[0779]

[0780] 在式(A)中，R具有以上所述的相同含义。PEI可含有式(B)的重复单元，其中x为约1至约100范围内的整数并且y为约1至约100范围内的整数。

[0781]

[0782] 方案A中说明的反应可通过以下进行：将PEI和二丙烯酸酯(I)混合于互溶剂，例如乙醇、甲醇或二氯甲烷中，并且优选在室温下搅拌几小时，然后蒸发溶剂以回收所生成
的聚合物。虽然不希望受任何特定理论束缚，但是据信PEI和二丙烯酸酯(I)之间的反应
牵涉PEI的一种或多种胺与二丙烯酸酯(I)的双键之间的迈克尔反应(Michaelreaction)
(见J.March,Advanced Organic Chemistry，第3版，第711-712页(1985))。可按照美国
申请No.11/216,986(美国公布No.2006/0258751)中所述的方式制备方案A中所示的二丙
烯酸酯。

[0783] PEI的分子量优选在约200-25,000道尔顿，更优选为400-5,000道尔顿，更优选为600-2000道尔顿的范围内。PEI可为支链或直链。

[0784] PEI与二丙烯酸酯的摩尔比优选在约1:2至约1:20的范围内。阳离子脂聚合物的平均分子量可在约500道尔顿至约1,000,000道尔顿的范围内，优选在约2,000道尔顿至
约200,000道尔顿的范围内。分子量可通过尺寸排阻色谱法使用PEG标准，或通过琼脂糖
凝胶电泳来测定。

[0785] 阳离子脂聚合物优选为可降解的，更优选为生物可降解的，例如可通过选自水解、酶裂解、还原、光裂解和超声波降解的机制降解。虽然不希望受任何特殊理论束缚，但是据
信细胞内式(II)阳离子脂聚合物的降解通过酶裂解和/或水解酯键进行。

[0786] 可通过使可降解脂质部分与以上所述的PEI部分反应进行合成。然后加入mPEG(PEG的甲醚衍生物(甲氧基聚(乙二醇))以形成可降解的交联聚合物。在优选的实
施方案中，在室温下进行反应。可通过本领域中已知的任何方式(包括色谱技术)分离反
应产物。在一个优选的实施方案中，可通过沉淀，然后离心去除反应产物。

[0787] 剂量

[0788] 正如本领域中的人员所显而易见，待施用的有用剂量和施用的特定模式将随以下因素改变：例如细胞类型或(对于体内使用而言)年龄、体重和特定动物及其待治疗部位、
所用特定核酸和递送方法、所预期的治疗或诊断用途和制剂形式，例如悬浮剂、乳剂、微团
或脂质体。通常，按较低水平施用剂量并且增加直至达到预期效果。

[0789] 当使用脂质递送核酸时，施用的脂质化合物的量可改变并且通常取决于施用核酸的量。例如，脂质化合物与核酸的重量比优选为约1:1至约30:1，约5:1至约10:1的重量
比更优选。

[0790] 核酸分子的剂量单位可在约0.001-0.25mg/kg受体体重/天的范围内，或在约0.01-20mg/kg体重/天的范围内，或在约0.01-10mg/kg体重/天的范围内，或在约
0.10-5mg/kg体重/天的范围内，或在约0.1-2.5mg/kg体重/天的范围内。

[0791] 可引入适量的核酸分子并且可使用标准方法以经验为根据确定这些量。细胞环境中个别核酸分子物质的有效浓度可为约1fmol、约50fmol、100fmol、1pmol、1.5pmol、
2.5pmol、5pmol、10pmol、25pmol、50pmol、100pmol、500pmol、1nmol、2.5nmol、5nmol、
10nmol、25nmol、50nmol、100nmol、500nmol、1μmol、2.5μmol、5μmol、10μmol、100μmol或更高。

[0792] 剂量可为0.01g-1g/kg体重(例如，0.1g、0.25g、0.5g、0.75g、1g、2.5g、5g、10g、25g、50g、100g、250g、500g、1mg、2.5mg、5mg、10mg、25mg、50mg、100mg、250mg或500mg/kg)。

[0793] 约0.1mg至约140mg/kg体重/天级别的剂量水平可用于治疗以上指出的病状(约0.5mg至约7g/位受试者/天)。可与载体物质组合生成单剂量的活性成分的量随治疗宿
主和施用的特殊模式而改变。单位剂型通常含有约1mg至约500mg的活性成分。

[0794] 据了解，任何特定受试者的特定剂量水平取决于各种因素，包括采用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径和排泄率、药物组合和受治疗的特定疾病的严重程度。

[0795] 可施用包括本文公开的核酸分子的药物组合物每日一次、每日四次、每日三次、每日两次或每日一次或以任何间隔施用并且施用医学上恰当的任何持续时间。然而，也可按
含有2、3、4、5、6或更多个按恰当间隔整天施用的亚剂量的剂量单位给予治疗剂。在这种情况下，每个亚剂量中所含的核酸分子可相应地较小以达到每日总剂量单位。例如，可使用提
供持续稳定释放dsRNA若干天的常规持续释放制剂将剂量单位经若干天配混成单次剂量。
持续释放制剂在本领域中众所周知。剂量单位可含有相应多个日剂量。以使得多个核酸单
位的总和含有足够剂量的方式配混组合物。

[0796] 药物组合物、试剂和容器

[0797] 还提供了包括如本文提供的用于降低hsp47的表达的核酸分子(例如，siNA分子)的组合物、试剂盒、容器和制剂，其用于向患者施用或分配核酸分子。试剂盒可包括至
少一个容器和至少一个标签。适合容器包括(例如)瓶、小瓶、注射器和试管。可由各种材
料，例如玻璃、金属或塑料形成容器。容器可容纳氨基酸序列、小分子、核酸序列、细胞群体和/或抗体。在一个实施方案中，容器容纳用于检查细胞的mRNA表达概况的多核苷酸以及
用于该目的的试剂。在另一实施方案中，容器包括用于评估hsp47蛋白表达细胞核组织或
相关实验、预后、诊断、预防和治疗目的抗体、其结合片段或特异性结合蛋白；对于这种用途的指南和/或说明书可包括在这种容器上或与该容器一起，用于这些目的的试剂及其它组
合物或工具也可如此。试剂盒可进一步包括相关指南和/或说明书；也可包括用于这些目
的的试剂和其它组合物或工具。

[0798] 容器可选择性地容纳治疗、诊断、预后或预防病状有效的组合物并且可具有无菌接入口(例如容器可为具有可通过皮下注射针头刺穿的塞子的静脉溶液包或小瓶)。组合
物中的活性成分可为能够特异性结合hsp47和/或调节hsp47功能的核酸分子。

[0799] 试剂盒进一步包括第二容器，其包括药学上可接受的缓冲液，例如磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)和/或葡萄糖溶液。第二容器可进一步包括从商业和
用户角度来看需要的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、搅拌器、针头、注射器和/或具有使用指南和/或说明的药品说明书。

[0800] 使用之前将核酸分子包装于其中的单位剂量安瓿或多剂量容器可包括装入一定量的多核苷酸或含有适于其药学上有效剂量或多份有效剂量的多核苷酸的溶液的密封容
器。将多核苷酸包装为无菌制剂，并且将密封容器设计为保持制剂的无菌状态直至使用。

[0801] 其中多核苷酸包括编码细胞免疫反应元件的序列或其片段的容器可包括经标记的包装，并且标签可载有政府机关，例如美国食品和药物管理局规定形式的公告，所述公告
反映经机构根据联邦法律批准生产、使用或销售其中的多核苷酸物质供人类施用。

[0802] 联邦法律要求药物组合物在人类治疗中的使用应经联邦政府机构批准。在美国，美国食品和药物管理局负责执行，发布获得这种批准的适当法规，21U.S.C.§301-392中有
详述。42U.S.C.§262下提供了生物材料，包括由动物组织制成的产品的法规。大多数外国
国家需要类似批准。虽然法规根据国家的不同而有所不同，但个别程序在本领域中众所周
知并且本文提供的组合物和方法相应遵守。

[0803] 待施用的剂量很大程度上取决于病状和治疗受试者的体型以及治疗频率和施用途径。可通过初始反应和临床判断指导持续治疗方案，包括剂量和频率。虽然在特定施用
中可能需要其它肠胃外途径，例如吸入气溶胶制剂，(例如)至鼻、喉、支气管组织或肺的黏
膜，但优选经肠胃外注射至组织胞间隙的途径。

[0804] 因此，本文提供了一种药用产品，其包括：多核苷酸，所述多核苷酸包括于药学上可接受的可注射载体中呈溶液的编码细胞免疫反应元件或其片段的序列，并且适于经间质
引入组织内引起组织的细胞表达细胞免疫反应元件或其片段；装有溶液的容器和附于容器
上政府机构规定形式的规范医药品的生产、使用或销售的公告，所述公告反映了经机构批
准生产、使用或销售多核苷酸溶液供人类施用。

[0805] 指征

[0806] 本文公开的核酸分子可单独或联合其它疗法用于治疗与hsp47相关的疾病、病状或病症，例如肝纤维化、肝硬变、肺纤维化、肾纤维化、腹膜纤维化、慢性肝损伤和原纤维形成和与细胞或组织中的hsp47水平相关或将对其反应的任何其它疾病或病状。因此，本文
公开的组合物、试剂盒和方法可包括包装本文公开的包括标签或药品说明书的核酸分子。
标签可包括核酸分子的使用指南，例如单独或联合其它疗法用于治疗或预防肝纤维化、腹
膜纤维化、肾纤维化和肺纤维化和与细胞或组织中的hsp47水平相关或将对其反应的任何
其它疾病或病状。标签可包括用于降低hsp47表达的指南。“药品说明书”用于指治疗性产
品的商业包装中通常所包括的含有关于指征、用途、剂量、施用、禁忌症、与包装产品组合的其它治疗性产品和/或有关使用这种治疗性产品的警告的信息。

[0807] 本领域的技术人员将认识到本领域中已知的其它抗纤维化治疗、药物和疗法可易于与本文的核酸分子(例如，siNA分子)组合并且因此涵盖于本文中。

[0808] 现将参考以下非限制性实施例更详细地描述本文提供的方法和组合物。

[0809] 实施例1

[0810] 选择hsp47核酸分子序列:

[0811] 使用若干计算机程序，包括Whitehead的siRNA(Whitehead Institute forBiomedical Research)、IDT siRNA Design(Integrated DNA Technologies)、BLOCK-iT
RNAi Designer(Invitrogen)、siDESIGN Center(Dharmacon) 和 IOPREDsi(Friedrich
Miescher Institute for Biomedical Research(这是Novartis Research Foundation
的一部分，可登录http://www.biopredsi.org/start.html)设计抗Hsp47的核酸分子(例
如，siNA≤25个核苷酸)。基于算法以及人和大鼠之间的序列同源性对来自这些程序的高
分siRNA的序列进行比较和选择(见表1)。可通过体外敲低测定检定候选序列。

[0812] 对于选择核酸分子(例如，21聚体siRNA)序列，考虑了若干参数。示例性参数包括：

[0813] 1)热力学稳定性(RISC偏好于具有较不稳定的5’端的链)

[0814] 2)30-52%GC含量

[0815] 3)核苷酸位置优先：(C/G)NNNNNNNN(A/U)10NNNNNNNN(A/U)，其中N为任何核苷酸

[0816] 4)缺乏假定免疫刺激基序

[0817] 5)2-核苷酸3’突出端

[0818] 6)转录产物中(优选cDNA区中)siRNA的位置

[0819] 7)序列特异性(用BLAST核对)

[0820] 8)通过核对SNP数据库确定的单个核苷酸中的变异

[0821] 基于前述方法设计具有≤25个核苷酸的siRNA序列。基于较小序列设计相应Dicer底物siRNA(例如，≥26个核苷酸)并通过向有义链的3’-端添加4个碱基且向反
义链的5’-端添加6个碱基来延伸siNA≤25个核苷酸的靶位点。制成的Dicer底物通常
具有含25个碱基的有义链、含27个碱基的反义链以及含平端及3'-突出端的不对称分子。
表1中提供了有义链和反义链无碱基修饰(碱基序列)和有修饰(实验序列)的序列。

[0822] 实施例2

[0823] 为了筛选出各种siNA分子抗人和大鼠hsp47基因的潜能，通过慢病毒引入人HSP47cDNA-绿色荧光蛋白(GFP)或大鼠GP46cDNA-GFP构建体至293、HT1080、人HSC系
hTERT或NRK细胞系中建立各种报告细胞系。用抗GFP的siRNA进一步评估这些细胞系。
测量剩余荧光信号并标准化为混杂siRNA(Ambion)，随后标准化为细胞活力。结果显示，
在不同细胞系中抗GFP的siRNA将荧光敲低至不同程度(图1)。选择293HSP47-GFP和
293GP46-GFP细胞系进行siHsp47筛选，因为它们易于转染并且对荧光敲低敏感。

[0824] siRNA转染

[0825] 用96孔组织培养板中每孔1.5pmol抗GFP的siNA，使用LipofectamineRNAiMAX(Invitrogen)以反向转染方式转染细胞。按6,000个细胞/孔接种细胞并与siNA
复合物混合。培育72h后在Synergy 2Multi-Mode Microplate Reader(BioTek)上获得荧
光读数。

[0826] 细胞活力测定

[0827] 培育72h后，使用CellTiter-Glo发光细胞活力测定试剂盒，根据手册(Promega)测量用或未用siNA处理的细胞的活力。将读数标准化为用乱序siNA分子处理的样品。

[0828] 实施例3

[0829] 评估siHsp47对报告细胞系中hsp47表达的抑制效率

[0830] 通过评估来自报告GFP的荧光信号的变化来评估293HSP47-GFP和293GP46-GFP细胞系中抗hsp47的siNA的抑制效率。如实施例2中所述进行实验。将荧光信号标准化
为来自用混杂siRNA(Ambion)处理用作对照的细胞的荧光信号。结果表明，试验hsp47siNA
分子在抑制两种细胞系中hsp47mRNA均有效。然而，抗GP46mRNA的siNA(如2008年Sato
等的论文中所公布)仅在293GP46-GFP细胞系中有效。结果示于图2A-B。

[0831] 使用实施例2中所述的方法评估用抗hsp47和gp46的siRNA处理的293HSP47-GFP和293GP46-GFP细胞系的活力。将细胞活力标准化为用混杂siRNA(Ambion)处理的细胞。
结果表明，用siNA分子处理不会显著影响细胞活力。然而，用不同hsp47siNA分子处理的
293HSP47-GFP细胞系的细胞活力随所用siNA分子的不同而改变，而293GP46-GFP细胞系的
活力相似。对于siHsp47-6和Hsp47-7处理细胞而言，293HSP47-GFP细胞的活力比其余细
胞低。结果示于图2C-D。

[0832] 实施例4

[0833] 通过 qPCR评估对hsp47mRNA的siHsp47抑制效果

[0834] 实施例3中，用荧光信号的变化评估报告细胞系中siHsp47的敲低效率。为检定mRNA水平下的结果，使用Lipofectamine RNAiMAX(Invitrogen)以实施例2中描述的反向
转染方式将靶向内源hsp47的siRNA转染至人HSC细胞系hTERT的细胞中。

[0835] 针对各种试验siHsp47siNA分子的敲低效率评估hsp47mRNA水平。简言之，转染72h后，使用RNeasy微型试剂盒(Qiagen)从hTERT细胞分离mRNA。通过逆转录联合定量
PCR，使用探针确定hsp47mRNA的水平。简言之，使用高容量cDNA逆转录试剂盒
(ABI)根据生产商的说明进行cDNA合成，并进行TaqMan基因表达测定(ABI，hsp47测定ID
Hs01060395_g1)。根据生产商的说明(ABI)将hsp47mRNA的水平标准化为GAPDH mRNA的
水平。结果表明，在所有hsp47siRNA中siHsp47-C最有效，siHsp47-2和siHsp47-2d次之。
siHsp47-1与siHsp47-2或siHsp47-1与siHsp47-2d的组合比单独的siHsp47-1更有效。
结果示于图3。

[0836] 实施例5

[0837] 在蛋白质水平检定siHsp47敲低效果

[0838] 在蛋白质水平通过测量用不同siHsp47转染的hTERT细胞中的HSP47检定不同Hsp47siNA分子(siHsp47)对hsp47mRNA表达的抑制效果。如实施例2中所述，用不同
siHsp47转染hTERT细胞。溶解转染的hTERT细胞并通过离心使细胞溶解产物澄清。通过
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳溶解澄清的细胞溶解产物中的蛋白质。用抗HSP47抗体(Assay
Designs)作为一级抗体，与HRP(Millipore)共轭的山羊抗小鼠IgG作为二级抗体，确
定细胞溶解产物中的HSP47蛋白水平，接着用Supersignal West Pico化学发光试剂盒
(Pierce)进行检测。使用抗肌动蛋白抗体(Abcam)作为蛋白质上样对照。结果显示，用单
独的siHsp47-C、siHsp47-2d或siHsp47-1与siHsp47-2d的组合处理的细胞中Hsp47蛋白
质的水平显著降低。

[0839] 实施例6

[0840] hsp47siRNA对胶原I表达的下调

[0841] 为确定siHsp47对胶原I表达水平的影响，测量用抗hsp47的不同siRNA处理的hTERT细胞中的胶原I mRNA水平。简言之，如实施例2中所述，用不同siHsp47转染hTERT
细胞。72h后，溶解细胞并且根据手册(Qiagen)使用RNeasy微型试剂盒分离mRNA。通过逆
转录联合定量PCR，使用探针确定胶原1mRNA的水平。简言之，使用高容量cDNA
逆转录试剂盒(ABI)根据手册进行cDNA合成，并进行TaqMan基因表达测定(ABI，COL1A1
测定IDHs01076780_g1)。根据生产商的说明(ABI)将胶原I mRNA的水平标准化为GAPDH
mRNA的水平。将信号标准化为从用乱序siNA转染的细胞获得的信号。结果表明，在用一些
候选siHsp47-2、siHsp47-2d及其与siHsp47-1的组合处理的细胞中胶原I mRNA水平显著
降低并且示于图4中。

[0842] 实施例7

[0843] hsp47siRNA处理的hTERT细胞的免疫荧光染色

[0844] 为显现用或未用siHsp47转染的hTERT细胞中两种纤维化标记物胶原I和α平滑肌肌动蛋白(SMA)的表达，用兔抗胶原I抗体(Abcam)和小鼠抗α-SMA抗体(Sigma)
使细胞染色。使用Alexa Fluor 594山羊抗小鼠IgG和Alexa Fluor 488山羊抗兔
IgG(Invitrogen(分子探针))作为二级抗体以使胶原I(绿色)和α-SMA(红色)显现。
使用Hoescht使细胞核(蓝色)显现。结果表明，一些靶基因的siRNA敲低与胶原/SMA表
达之间的相关性。

[0845] 实施例8

[0846] 肝纤维化动物模型中siHSP47的体内试验

[0847] 用于大鼠肝硬变治疗的siRNA

[0848] HSP47(siHSP47C)的siRNA双链体序列如以下所列。

[0849] 有义(5'->3')ggacaggccucuacaacuaTT

[0850] 反义(5'->3')uaguuguagaggccuguccTT

[0851] 通过溶解于无核酸酶水(Ambion)中制备10mg/ml siRNA原液。对于肝硬化大鼠的治疗，如Sato等(Sato Y.等Nature Biotechnology 2008.第26卷，第431页)所述用
微生物A偶联脂质体配制siRNA以靶向生成胶原的激活肝脏星状细胞。微生物A(VA)-脂
质体-siRNA制剂由0.33μmol/ml的VA、0.33μmol/ml的脂质体(Coatsome EL-01-D,NOF
Corporation)和于5%葡萄糖溶液中0.5μg/μl的siRNA组成。

[0852] Sato等 (Sato Y.等 Nature Biotechnology 2008. 第26 卷，第 431页 ) 报道了肝硬变动物模型。用于磷酸盐缓冲液(PBS)中的0.5%二甲基亚硝胺(DMN)(Wako
Chemicals,Japan)诱导4周龄雄性SD大鼠的肝硬变。在第0、2、4、7、9、11、14、16、18、21、
23、25、28、30、32、34、36、38和40天经腹膜内施用2ml/kg体重的剂量，每周连续3天，

[0853] siRNA治疗：从第32天开始进行siRNA治疗，静脉内注射5次。详细地，在第32、34、36、38和40天用siRNA治疗大鼠。然后在第42或43天处死大鼠。测试3种不同siRNA
剂量(1.5mg siRNA/kg体重、2.25mg siRNA/kg体重、3.0mg siRNA/kg体重)。试验组的详
情和每组中动物的数量如下：

[0854] 1)通过DMN注射诱导硬变，然后注射5%葡萄糖，而非siRNA(n=10)

[0855] 2)VA-Lip-siHSP47C 1.5mg/kg(n=10)

[0856] 3)VA-Lip-siHSP47C 2.25mg/kg(n=10)

[0857] 4)VA-Lip-siHSP47C 3.0mg/Kg(n=10)

[0858] 5)假治疗组(注射PBS而非DMN。注射5%葡萄糖而非siRNA)(n=6)

[0859] 6)未处理对照(完好)(n=6)

[0860] VA-Lip指维生素A-脂质体复合物。

[0861] 治疗效果的评估：在第43天，“患病大鼠”组中10只动物中有2只和“VA-Lip-siHSP47C siRNA 1.5mg/kg”中10只动物中有1只由于肝硬变发展死亡。剩余动
物存活。处死大鼠之后，将肝脏组织固定于10%福尔马林中。然后，将每个肝脏的左小叶嵌
入石蜡中以用于组织学研究。用天狼星红和苏木精伊红(HE)为组织载玻片染色。采用天
狼星红染色使胶原沉淀显现并确定硬变水平。HE染色作为对比染色用于细胞核和细胞质。
在显微镜(BZ-8000,Keyence Corp.Japan)下观察每张载玻片并且通过与显微镜连接的图
象分析软件确定每张载玻片天狼星红染色面积的百分比。每个肝脏制备至少4张载玻片进
行图像分析，并且用照相机捕获每张载玻片(肝脏切片)的所有区域并进行分析。通过斯
氏t检验(Student's t-test)进行统计分析。

[0862] 结果：图5显示了纤维化面积。“患病大鼠”体内纤维化面积比“假治疗组”或“未处理对照”组大。因此，DMN处理诱导肝脏中胶原沉积，这是通常观察到的肝纤维化。然而，通过用靶向HSP47基因的siRNA治疗，与“患病大鼠”组(图5)相比，纤维化面积显著减少。该结果表明本文公开的siRNA在实际疾病中有治疗效果。

[0863] 在肝纤维化动物模型中测试另外的siRNA化合物，并且显示减少了肝脏中的纤维化面积。

[0864] 实施例9

[0865] HSP47/SERPINH1的活性双链RNA化合物的序列的生成和表A-18、A-19和B-E中所示siRNA的生成

[0866] 使用专利算法和靶基因的已知序列，生成许多可能siRNA的序列。已使用这种方法生成的序列与相应mRNA序列互补。

[0867] 通过退火互补单链寡核苷酸生成双链体。在层流净化罩中，通过稀释于WFI(注射用水,Norbrook)中制备~500μM单链寡核苷酸原液。通过使用WFI以1:200稀释各500μM
ssRNA，并且使用Nano Drop测量OD来确定实际ssRNA浓度。重复该步骤3次并计算平均
浓度。然后将原液稀释为250μM的最终浓度。通过加热至85℃并经至少45min使其冷却
至室温，以使互补单链退火。通过在20%聚丙烯酰胺凝胶上测试5μl双链体并染色试验双
链体的完全退火。将样品保存在-80℃下。

[0868] 表A-18、A-19和B-E提供了HSP47/SERPINH1的siRNA。对于每个基因而言，存在19聚体siRNA序列的单独列表，基于专利算法中的得分按照靶向人基因表达的最佳顺序以
优先顺序排列19聚体siRNA序列。

[0869] 以下缩写用于本文的表A-18、A-19和B-E中：“其它物种”指其它动物的跨物种身份：D-狗、Rt-大鼠、Rb-兔、Rh-猕猴、P-猪、M-小鼠；ORF：开放阅读框。19聚体和18+1聚
体分别指长度为19和18+1个(反义链位置1中的U，有义链位置19中的A)核糖核酸的寡
聚体。

[0870] 体外测试siRNA化合物的靶基因

[0871] 针对人和大鼠SERPINH1基因的siRNA寡核苷酸的低通量筛选(LTS)。

[0872] 细胞系：人前列腺腺癌PC3细胞(ATCC,目录号CRL-1435)生长于补充有10%FBS和2mM L-谷氨酰胺的RPMI培养基中，并且将人上皮宫颈癌HeLa细胞(ATCC,目录号CCL-2)
保持在补充有10%FBS、2mM L-谷氨酰胺的杜尔贝科改良伊格尔培养基中。在37℃下将细胞
保持在5%CO2中。

[0873] 将约2×105个内源性表达SERPINH1基因的人PC-3细胞接种在1.5mL生长培养TM
基中，24h后达到30-50%汇合。用Lipofectamine 2000试剂转染细胞至每种转染细胞
0.01-5nM的最终浓度。在37±1℃下培育细胞48h。收获siRNA转染细胞并使用EZ-RNA试
剂盒[Biological Industries(#20-410-100)]分离RNA。

[0874] 如以下进行逆转录：进行cDNA的合成并且通过实时qPCR确定人SERPINH1 mRNA水平并标准化为每种样品的亲环素A(CYNA,PPIA)mRNA的水平。基于siRNA处理的样品与
非转染对照样品中SERPINH1 mRNA量的比例确定siRNA活性。

[0875] 由其它测定选择最具活性的序列。从表A-18选择siRNA化合物SERPINH1_2、SERPINH1_6、SERPINH1_13、SERPINH1_45、SERPINH1_45a、SERPINH1_51、SERPINH1_51a、
SERPINH1_52和SERPINH1_86作为优选化合物。从表A-19选择siRNA化合物SERPINH1_4、
SERPINH1_12、SERPINH1_18、SERPINH1_30、SERPINH1_58和SERPINH1_88作为优选化合物。

[0876] 其它优选化合物包括SERPINH1_50、SERPINH1_67、SERPINH1_73、SERPINH1_74。

[0877] LTS选择的SERPINH1siRNA寡核苷酸的IC50值

[0878] 将约2×105个内源性表达SERPINH1基因的人PC-3细胞或0.9×105个大鼠REF52TM
细胞接种在1.5mL生长培养基中，达到30-50%汇合。用Lipofectamine 2000试剂，用
SERPINH1双链RNA化合物(即SERPINH1_2、4、6、12、13、18、45、51、58、88)转染细胞以达到TM
范围在0.0029-100nM之间的最终转染浓度。作为阴性对照，用Lipofectamine 2000试剂
或合成随机化序列非靶向siRNA以20-100nM的最终浓度处理细胞。Cy3-标记的siRNA转
染细胞用作转染效率的阳性对照。

[0879] 在37±1℃、5%CO2下培育细胞48h。收获siRNA转染细胞并使用EZ-RNA试剂盒[Biological Industries(#20-410-100)]分离RNA。逆转录：进行cDNA的合成并且通过实
时qPCR确定人SERPINH1mRNA水平并标准化为每种样品的亲环素A(CYNA,PPIA)mRNA的水
平。

[0880] 通过使用用各种最终siRNA浓度获得的活性结果构造剂量反应曲线确定试验RNAi活性的IC50值。通过将剩余SERPINH1 mRNA的相对量相对于转染siRNA浓度的对数
绘图来构建剂量反应曲线。通过将最佳S形曲线拟合为测量数据计算曲线。S形拟合方法
也称为3-点曲线拟合。

[0881]

[0882] 其中Y为剩余SERPINH1 mRNA反应，X为转染siRNA浓度的对数，Bot为底部稳定水平的Y值，LogIC50为当Y为底部和顶部稳定水平之间的中间值时的X值，HillSlope为
曲线的斜率。

[0883] 使用qPCR分析表达内源基因的细胞中的靶基因，以确定使用特异性siRNA抑制基因表达的百分比。在体外测试根据表A-18、A-19和B-E的其它siRNA化合物，其中表明这
些siRNA化合物抑制基因表达。将活性表示为剩余mRNA百分比；因此，值越小反映活性越
佳。

[0884] 为了测试血清中siRNA化合物的稳定性，在37℃下于4批不同的人血清(100%浓度)中培育特异性siRNA分子长达24h。在第0.5、1、3、6、8、10、16和24h收集样品。在每
次收集时通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)确定作为指征的移行模式。

[0885] 表3显示人细胞系中选自表A-18和A-19的未修饰双链核酸化合物(未修饰的有义链和反义链，dTdT 3’末端突出端)的IC50(或未计算IC50时的活性)。

[0886] 表3

[0887]

[0888]

[0889] siRNA敲低活性

[0890] 在6孔板中，每孔接种约2×105个内源性表达SERPINH1基因的人PC-3细胞并且使其生长约24h，达到30-70%汇合。使用LipofectamineTM2000试剂(Invitrogen)，用在
不同浓度下测试的siRNA转染细胞。在37℃下于5%CO2培育箱中培育细胞48h或72h。在
转染后48-72h，收获细胞并提取细胞RNA。使用Cy3-标记的siRNA双链体作为转染效率的
阳性对照。用LipofectamineTM2000试剂处理的模拟细胞定义为“对照非活性样品”(阴性
对照)而用最终浓度为5nM的已知活性siRNA(HSP47-C)处理的细胞定义为“对照活性样
品”(阳性对照)。Z’和对照倍数{倍数=均值(阴性)/均值(阳性)}是描述测定效率
的方式。

[0891] 通过来自细胞的靶mRNA的Qpcr分析确定测定的每种siRNA对靶基因表达的抑制百分比。通过由细胞合成cDNA并通过实时qPCR确定靶基因mRNA水平进行逆转录。将测
量的细胞mRNA水平标准化为每种样品的亲环素A(CYNA,PPIA)mRNA的水平。基于siRNA处
理的样品与非转染对照样品中靶基因mRNA量的比例确定siRNA活性。Z’和对照倍数{倍
数=均值(阴性)/均值(阳性)}是描述测定效率的方式。

[0892] qPCR结果是通过QC标准的结果，即标准曲线斜率的值在区间[-4，-3]内，R2>0.99，没有引物二聚体。取消未通过QC要求的结果的分析资格。

[0893] 通过使用用各种最终siRNA浓度获得的活性结果构建剂量反应曲线，以确定试验RNAi活性的IC50值。如以上所述，通过将剩余SERPINH1mRNA的相对量相对于转染siRNA
浓度的对数绘图来构建剂量反应曲线。

[0894] 双链RNA分子的中靶和脱靶试验

[0895] psiCHECK系统能够通过监测靶序列表达水平的变化对引导链(GS)(反义)和过客链(PS)(有义链)引起靶向(中靶)和脱靶效应进行评估。制备4个基于
siCHECKTM-2(Promega)的构建体以评估每个测试分子GS和PS链的靶标活性和潜在脱靶活
性。在每个构建体中，将测试分子PS或GS的1个拷贝或3个拷贝的完整靶或种子-靶序
列克隆至位于3′-UTR区中海肾荧光素酶翻译终止密码子下游的多克隆位点。

[0896] 所得的载体称为：

[0897] 1-GS-CM(引导链，完全匹配)载体，含有1个拷贝的完整靶序列(与测试分子的GS的整个19-碱基序列完全互补的核苷酸序列)；

[0898] 2-PS-CM(过客链，完全匹配)载体，含有1个拷贝的完整靶序列(与测试分子的PS的整个19-碱基序列完全互补的核苷酸序列)；

[0899] 3-GS-SM(过客链，种子匹配)载体，含有1个拷贝的或3个拷贝的种子区靶序列(与测试分子的GS的核苷酸1-8互补的序列)；

[0900] 4-PS-SM(过客链，种子匹配)载体，含有1个拷贝的种子区靶序列(与测试分子的PS的核苷酸1-8互补的序列)。

[0901] 命名：

[0902] 引导链：进入RISC复合物并引导互补RNA序列的裂解/沉默的siRNA链

[0903] 种子序列：来自引导链5’端的核苷酸2-8

[0904] cm(完全匹配)：与siRNA的引导链完全互补的DNA片段。在报告基因的3’UTR中克隆该DNA片段并用作直接RNA沉默的靶标。

[0905] sm(种子匹配)：核苷酸ns 12-18与siRNA引导链的ns 2-8完全互补的19聚体DNA片段。在报告基因的3’UTR中克隆该DNA片段并用作“脱靶”沉默的靶标。

[0906] X1：克隆于报告基因的3’UTR中的1个拷贝的cm或sm。

[0907] X3：克隆于报告基因的3’UTR中，以4个核苷酸相互分开的3个拷贝的cm或sm

[0908] 表4：psiCHECK克隆靶标的非限制性实例

[0909]

[0910]

[0911] 使用XhoI和NotI相容限制性酶位点克隆靶序列。在密封的0.5mlEppendorf管中制备退火混合物，在水浴中加热至85℃，浸入沸水浴中，最后逐渐冷却至室温。

[0912] 连接：将通过退火步骤生成的双链寡核苷酸连接至线性化(用XhoI和NotI)TM
psiCHECK -2，并使用标准技术转染至细胞内。鉴定阳性克隆并测序以检定插入序列。表5
示出了插入寡核苷酸的核苷酸序列。

[0913] 表5

[0914]

[0915]

[0916]

[0917]

[0918]

[0919] 在报告mRNA的3’UTR，psiCHECKTM-2(Promega)载体中的海肾荧光素酶中克隆以上所述的相关链。使用标准分子生物学技术将XhoI和NotI用作克隆位点。以化学方式合
成每条链并通过加热至100℃退火并冷却至室温。使用标准分子生物学技术连接3h并转化
为大肠杆菌(E.coli)DH5a细胞。使用相关引物进行菌落-PCR筛选所得的菌落质粒构建体
的存在。每种质粒(载体)均从一个阳性菌落纯化并检定其序列。

[0920] 将约1.3×106个人HeLa细胞接种于10cm盘中。然后在37±1℃、5%CO2培育箱中培育细胞24h。培育1天后用8mL新鲜生长培养基更换生长培养基并且使用
LipofectamineTM2000试剂根据生产方法用以上提到的一种质粒转染每张板并在37±1℃
和5%CO2下培育5h。培育后，再将细胞接种于96孔板中，最终浓度为于80μL生长培养基中
5×103个细胞/孔。16h后，使用在0.001nM-5nM范围的不同浓度的LipofectamineTM2000
试剂用SERPINH1 siRNA分子转染细胞，最终体积为100μL。用LipofectamineTM2000试剂
处理，具有相应psiCHECKTM-2质粒的模拟细胞定义为“对照非活性样品”(阴性对照)而用
最终浓度为5nM的已知活性siRNA (HSP47-C)处理的细胞定义为“对照活性样品”(阳性对
照)。Z’和对照倍数{倍数=均值(阴性)/均值(阳性)}是描述测定效率的方式。

[0921] 然后在37±1℃下培育细胞48h并使用Dual- 测定试剂盒(Promega,目录号E1960)根据生产商程序测量每个siRNA转染样品中海肾和萤火虫荧光素酶活性。合
成siRNA对该靶序列的活性引起融合mRNA裂解并且随后降解，或引起编码蛋白质的翻译抑
制。因此测量海肾荧光素酶活性降低提供了监测siRNA作用的方便途径，而萤火虫荧光素
酶使海肾荧光素酶表达标准化。海肾荧光素酶活性值除以每个样品的萤火虫荧光素酶活性
值(标准化)。最后将海肾荧光素酶活性表示为相对于“对照非活性样品”试验样品中标准
化活性的百分比。

[0922] 暴露于未修饰或经修饰siRNA/LipofectamineTM2000的外周血单核细胞(PMNC)中TNFα和IL-6水平的结果。以基于标准曲线计算的pg/ml值提供结果。“对照Lipofec2000”
涉及用转染试剂LipofectamineTM2000诱导的细胞因子分泌水平。经修饰化合物中无一者
的细胞因子TNFa或IL6的水平高于对照转染试剂的水平。

[0923]

[0924]

[0925]

[0926]

[0927]

[0928] 未修饰和经修饰的双链核酸化合物诱导干扰素(IFN)应答基因MX1和IFIT1的数据。如同对人PMNC中试验那样，所示结果为剩余(对照Lipofectamine2000处理的细胞的
倍数)人IFIT1和MX1基因。数据显示与未修饰(_S709)化合物相比，所有经修饰化合物
诱导很低水平的IFN下游基因。

[0929]

[0930]

[0931]

[0932]

[0933]

[0934] 下表示出了与大鼠细胞中的未修饰(_S709)化合物相比，化合物_1、化合物_2、化合物_3和化合物_4的活性。结果显示为REF52细胞中的剩余靶(对照
LipofectamineTM2000处理的细胞的%)大鼠SERPINH1基因。示出了两个单独实验的结果。
大鼠细胞中的敲低或靶基因与在人类疾病动物模型中试验化合物有关。

[0935]

[0936]

[0937]

[0938]

[0939] 血清稳定性测定

[0940] 测试根据本发明所述经修饰的化合物在人血清或人组织提取物中的双链体温度性，如下：

[0941] 在37℃下于100%人血清(Sigma目录号H4522)中培育最终浓度为7μM的siRNA分子。(按1:14.29将siRNA原液100μM稀释于人血清或来自各种组织类型的人
组织提取物中)。在不同时间点(例如，0、30min、1h、3h、6h、8h、10h、16h和24h)向15μl
1.5×TBE-上样缓冲液加入5μl。立即将样品冷冻于液氮中并保持在-20℃下。

[0942] 将每个样品载于根据本领域中已知的方法制备的非变性20%丙烯酰胺凝胶上。在紫外光下用溴化乙锭使寡核苷酸显现。

[0943] 核酸外切酶稳定性测定

[0944] 为研究3’非核苷酸部分对核酸分子的稳定化作用，在由不同细胞类型制备的细胞溶质提取物中培育有义链、反义链和退火siRNA双链体。

[0945] 提取物：HCT116细胞溶质提取物(12mg/ml)。

[0946] 提取物缓冲液：37℃下pH-7.3的25mM Hepes；8mM MgCl；150mM NaCl以及1mMDTT，使用前立即加入。

[0947] 方法：混合3.5ml试验siRNA(100mM)与46.5ml含有120mg的HCT116细胞溶质提取物。46.5ml由12ml的HCT116提取物和34.5ml补充有DTT和蛋白酶抑制剂混
合物/100(Calbiochem,setIII-539134)的提取物缓冲液组成。培育管中siRNA的最终
浓度为7mM。在37℃下培育样品，并且在指定时间点将5ml样品移至新管中，与15ml的
1XTBE-50%丙三醇上样缓冲液混合，并速冻于液态N2中。上样缓冲液中siRNA的最终浓度
为1.75mM(21ng siRNA/ml)。为了通过天然PAGE和EtBr染色分析每条带上载50ng。对于
Northern分析，每条带载1ng测试siRNA。

[0948] 对SERPINH1 siRNA分子的固有免疫反应

[0949] 在室温下按1:1比例使新鲜人血(室温下)与无菌0.9%NaCl混合，并轻轻载于(1:2比例)Ficoll(Lymphoprep,Axis-Shield目录号1114547)上。在室温下(22℃，800g)
下于摇摆式离心机中离心样品30min，用RPMI1640培养基洗涤并离心(RT，250g)10min。为
细胞计数并接种于生长培养基(RPMI1640+10%FBS+2mM L-谷氨酰胺+1%Pen-Strep)中，最
终浓度为1.5×106个细胞/ml，并且在37℃下培育1h，然后进行siRNA处理。

[0950] 然后使用LipofectamineTM2000试剂(Invitrogen)根据生产商的说明，用在不同浓度下测试的siRNA处理细胞并且在37℃下于5%CO2培育箱中培育24h。

[0951] 作为IFN反应的阳性对照，用最终浓度为0.25-5.0μg/mL的聚(I:C)或最终浓度为0.075-2μg/mL的噻唑喹诺酮(Thiazolaquinolone)(CLO75)处理细胞，聚(I:C)是为
TLR3配体(InvivoGen目录号tlrl-pic)的双链RNA(dsRNA)的合成类似物，噻唑喹诺酮为
TM
TLR 7/8配体(InvivoGen目录号tlrl-c75)。用经Lipofectamine 2000试剂处理的细胞
作为IFN反应的阴性(参考)对照。

[0952] 培育约24h后，收集细胞并将上清液转移至新管。立即将样品冷冻于液氮中并使用IL-6、DuoSet ELISA试剂盒(R&D System DY2060)和TNF-α、DuoSet ELISA试剂盒
(R&D System DY210)，根据生产商的说明测试IL-6和TNF-α的分泌。从细胞团块中提取
RNA并通过qPCR测量人基因IFIT1(干扰素诱导的带有三角形四肽重复序列1的蛋白质)
和MX1(粘液病毒(流感病毒)抗性1、干扰素诱导的蛋白质p78)的mRNA水平。将测量的
mRNA量标准化为参考基因肽脯氨酰异构酶A(亲环素A；CycloA)的mRNA量。通过比较来
自经处理细胞的IFIT1和MX1基因的mRNA量，与其非处理细胞的量评估IFN信号的诱导。
qPCR结果是通过QC标准的结果，即标准曲线斜率的值在区间[-4，-3]内，R2>0.99，没有引
物二聚体。取消未通过QC要求的结果的分析资格。

[0953] 表6示出了siSERPINH1化合物。表6中呈现了一些化合物的活性和稳定性数据。下文表7中呈现了有义链和反义链结构的符号。

[0954] 表6：

[0955]

[0956]

[0957]

[0958]

[0959]

[0960]

[0961]

[0962]

[0963]

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[0965]

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[0967]

[0968]

[0969]

[0970]

[0971]

[0972]

[0973]

[0974]

[0975]

[0976]

[0977]

[0978]

[0979] 表7：本文表中所用经修饰的核苷酸/非常规部分的编码

[0980]

[0981]

[0982] 以下表A-18、A-19和B-E中公开了用于生成双链RNA分子的siRNA寡核苷酸。

[0983] 用于制备siRNA化合物的SERPINH1寡核苷酸序列

[0984] 表A-18：

[0985]

[0986]

[0987]

[0988]

[0989] 表A-18选择siRNA

[0990]

[0991]

[0992] 表A-19：

[0993]

[0994]

[0995]

[0996] 表A-19选择siRNA

[0997]

[0998] 表B：另外的活性19聚体SERPINH1siRNA

[0999]No SEQ 有义siRNA SEQ 反义siRNA 其它人-32454740
1 244 GGCAGACUCUGGUCAAGAA 460 UUCUUGACCAGAGUCUGCC Rh [2009-2027]
2 245 CAGUGAGGCGGAUUGAGAA 461 UUCUCAAUCCGCCUCACUG [1967-1985]
3 246 AGCCUUUGUUGCUAUCAAU 462 AUUGAUAGCAACAAAGGCU Rh [2117-2135]
4 247 CCAUGUUCUUCAAGCCACA 463 UGUGGCUUGAAGAACAUGG Rh,Rb,D [837-855]ORF
5 248 CCCUCUUCUGACACUAAAA 464 UUUUAGUGUCAGAAGAGGG [1850-1868]
6 249 CCUCAAUCAGUAUUCAUAU 465 AUAUGAAUACUGAUUGAGG [1774-1792]
7 250 GAGACACAUGGGUGCUAUU 466 AAUAGCACCCAUGUGUCUC Rh,D,Rt,M [1533-1551]
8 251 GUGACAAGAUGCGAGACGA 467 UCGUCUCGCAUCUUGUCAC Rh [1461-1479]ORF
9 252 GCCACACUGGGAUGAGAAA 468 UUUCUCAUCCCAGUGUGGC Rh,Rb,M [850-868]ORF
10 253 AGAUGCGAGACGAGUUAUA 469 UAUAACUCGUCUCGCAUCU Rh [1467-1485]ORF
11 254 ACGACGACGAGAAGGAAAA 470 UUUUCCUUCUCGUCGUCGU [966-984]ORF
12 255 GCCUCUACAACUACUACGA 471 UCGUAGUAGUUGUAGAGGC Rb,D [951-969]ORF
13 256 AGAUCAACUUCCGCGACAA 472 UUGUCGCGGAAGUUGAUCU D [708-726]ORF
14 257 ACUACUACGACGACGAGAA 473 UUCUCGUCGUCGUAGUAGU Rb [960-978]ORF
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197 440 UCUUCAAGCCACACUGGGA 656 UCCCAGUGUGGCUUGAAGA Rh,Rb,D [843-861]ORF
198 441 UGUUGCUAUCAAUCCAAGA 657 UCUUGGAUUGAUAGCAACA Rh [2123-2141]
199 442 GAGUGGGCCGCGCAGACCA 658 UGGUCUGCGCGGCCCACUC [752-770]ORF
200 443 CCUGAGACACAUGGGUGCU 659 AGCACCCAUGUGUCUCAGG D,Rt,M [1530-1548]
201 444 AGCCGACUGUACGGACCCA 660 UGGGUCCGUACAGUCGGCU [623-641]ORF
202 445 GGGCCUCAGGGUGCACACA 661 UGUGUGCACCCUGAGGCCC [1486-1504]
203 446 ACUGGGAUGAGAAAUUCCA 662 UGGAAUUUCUCAUCCCAGU Rh [855-873]ORF
204 447 AGAAUGACCUGGCCGCAGU 663 ACUGCGGCCAGGUCAUUCU [1952-1970]

[1004]205 448 CAUAUUUAUAGCCAGGUAC 664 GUACCUGGCUAUAAAUAUG Rh [1788-1806]
206 449 AGGUGACCCAUGACCUGCA 665 UGCAGGUCAUGGGUCACCU Rh,Rt,M [1164-1182]ORF
207 450 GCGCUGCAGUCCAUCAACG 666 CGUUGAUGGACUGCAGCGC Rh,Rt [734-752]ORF
208 451 GGUGACAAGAUGCGAGACG 667 CGUCUCGCAUCUUGUCACC Rh [1460-1478]ORF
209 452 CUUCAAAGAUAGGGAGGGA 668 UCCCUCCCUAUCUUUGAAG [2086-2104]
210 453 AGCUGCAAAUCGUGGAGAU 669 AUCUCCACGAUUUGCAGCU Rh [984-1002]ORF
211 454 GUGGAGAACAUCCUGGUGU 670 ACACCAGGAUGUUCUCCAC Rh [419-437]ORF
212 455 GAACAAGGCCGACUUGUCA 671 UGACAAGUCGGCCUUGUUC Rh [1225-1243]ORF
213 456 CAUGAUGCUGAGCCCGGAA 672 UUCCGGGCUCAGCAUCAUG [1688-1706]
214 457 GCGCCUUGAAAAGCUGCUA 673 UAGCAGCUUUUCAAGGCGC Rh [1066-1084]ORF
215 458 GCAGACUCUGGUCAAGAAG 674 CUUCUUGACCAGAGUCUGC Rh [2010-2028]
216 459 CCAGGCAGUGGAGAACAUC 675 GAUGUUCUCCACUGCCUGG Rh [412-430]ORF

[1005] 表C：跨物种19聚体SERPINH1siRNA

[1006]No. SEQ 有义siRNA SEQ 反义siRNA 其它物种人-32454740
1 676 CACUACAACUGCGAGCACU 973 AGUGCUCGCAGUUGUAGUG Rh，D [686-704]ORF
2 677 AACCGUGGCUUCAUGGUGA 974 UCACCAUGAAGCCACGGUU Rh,Rt,M [890-908]ORF
3 678 GGCAAGAAGGACCUGUACC 975 GGUACAGGUCCUUCUUGCC Rh,D,M [1253-1271]ORF
4 679 GGUGGACAACCGUGGCUUC 976 GAAGCCACGGUUGUCCACC Rh,M [883-901]ORF
5 680 AGGCCAUGGCCAAGGACCA 977 UGGUCCUUGGCCAUGGCCU Rh，D [396-414]ORF
6 681 CGCAGCGCGCUGCAGUCCA 978 UGGACUGCAGCGCGCUGCG Rh,Rt [728-746]ORF
7 682 AGCAGCAAGCAGCACUACA 979 UGUAGUGCUGCUUGCUGCU Rh，D [674-692]ORF
8 683 GGCCUCUACAACUACUACG 980 CGUAGUAGUUGUAGAGGCC Rb,D [950-968]ORF
9 684 GAAGAUGCAGAAGAAGGCU 981 AGCCUUCUUCUGCAUCUUC Rh,Rb,Rt [1114-1132]ORF
10 685 GGCUCCUGAGACACAUGGG 982 CCCAUGUGUCUCAGGAGCC D [1526-1544]3′UTR
11 686 AGCAAGCAGCACUACAACU 983 AGUUGUAGUGCUGCUUGCU Rh，D [677-695]ORF
12 687 GGAGGUGACCCAUGACCUG 984 CAGGUCAUGGGUCACCUCC Rh,Rt,M [1162-1180]ORF
13 688 CCCUUUGACCAGGACAUCU 985 AGAUGUCCUGGUCAAAGGG Rh,Rt [1322-1340]ORF
14 689 CUCCUGAGACACAUGGGUG 986 CACCCAUGUGUCUCAGGAG D [1528-1546]3′UTR
15 690 AAGGCUCCUGAGACACAUG 987 CAUGUGUCUCAGGAGCCUU D [1524-1542]3′UTR
16 691 CGCGCUGCAGUCCAUCAAC 988 GUUGAUGGACUGCAGCGCG Rh,Rt [733-751]ORF
17 692 AGGGUGUGGUGGAGGUGAC 989 GUCACCUCCACCACACCCU Rh，D [1152-1170]ORF
18 693 AGCACUACAACUGCGAGCA 990 UGCUCGCAGUUGUAGUGCU Rh，D [684-702]ORF
19 694 GGCUCCCUGCUAUUCAUUG 991 CAAUGAAUAGCAGGGAGCC D [1421-1439]ORF
20 695 GCGCGCAACGUGACCUGGA 992 UCCAGGUCACGUUGCGCGC M [596-614]ORF
21 696 GCUGCAGUCCAUCAACGAG 993 CUCGUUGAUGGACUGCAGC Rh,Rt [736-754]ORF
22 697 ACCAAAGAGCAGCUGAAGA 994 UCUUCAGCUGCUCUUUGGU Rh,Rb,P [1085-1103]ORF
23 698 CCAAGGACGUGGAGCGCAC 995 GUGCGCUCCACGUCCUUGG Rh，D [795-813]ORF
24 699 UGUUCUUCAAGCCACACUG 996 CAGUGUGGCUUGAAGAACA Rh,Rb，D [840-858]ORF
25 700 GCCCAAGGGUGUGGUGGAG 997 CUCCACCACACCCUUGGGC Rh，D [1147-1165]ORF
26 701 ACAGGCCUCUACAACUACU 998 AGUAGUUGUAGAGGCCUGU Rh,Rb,D,Rt,P [947-965]ORF
27 702 UGCGCAGCAGCAAGCAGCA 999 UGCUGCUUGCUGCUGCGCA Rh，D [669-687]ORF
28 703 GGUGGAGGUGACCCAUGAC 1000 GUCAUGGGUCACCUCCACC Rh,Rt,M [1159-1177]ORF
29 704 CUUUGACCAGGACAUCUAC 1001 GUAGAUGUCCUGGUCAAAG Rh,Rt [1324-1342]ORF
30 705 AAGGGUGUGGUGGAGGUGA 1002 UCACCUCCACCACACCCUU Rh，D [1151-1169]ORF

[1007]31 706 UCCUAUACCGUGGGUGUCA 1003 UGACACCCACGGUAUAGGA Rh，D,P [914-932]ORF
32 707 GCGCAGACCACCGACGGCA 1004 UGCCGUCGGUGGUCUGCGC D [761-779]ORF
33 708 CGCAGCAGCAAGCAGCACU 1005 AGUGCUGCUUGCUGCUGCG Rh，D [671-689]ORF
34 709 GCCUCAUCAUCCUCAUGCC 1006 GGCAUGAGGAUGAUGAGGC Rh,D,Rt,M [1026-1044]ORF
35 710 UCUCCAGCCUCAUCAUCCU 1007 AGGAUGAUGAGGCUGGAGA Rh,D,Rt,M [1020-1038]ORF
36 711 CCAUUGACAAGAACAAGGC 1008 GCCUUGUUCUUGUCAAUGG Rh，D [1215-1233]ORF
37 712 AGCAGCACUACAACUGCGA 1009 UCGCAGUUGUAGUGCUGCU Rh，D [681-699]ORF
38 713 UGCACCGGACAGGCCUCUA 1010 UAGAGGCCUGUCCGGUGCA Rh,Rb,Rt,P [939-957]ORF
39 714 ACUCCAAGAUCAACUUCCG 1011 CGGAAGUUGAUCUUGGAGU Rh,D,Rt,M [702-720]ORF
40 715 UGGACAACCGUGGCUUCAU 1012 AUGAAGCCACGGUUGUCCA Rh,M [885-903]ORF
41 716 GAGCAGCUGAAGAUCUGGA 1013 UCCAGAUCUUCAGCUGCUC Rh，D [1091-1109]ORF
42 717 CAGAAGAAGGCUGUUGCCA 1014 UGGCAACAGCCUUCUUCUG Rt [1121-1139]ORF
43 718 AGGCAAGAAGGACCUGUAC 1015 GUACAGGUCCUUCUUGCCU Rh，D [1252-1270]ORF
44 719 CCUCUACAACUACUACGAC 1016 GUCGUAGUAGUUGUAGAGG Rb,D [952-970]ORF
45 720 AGCAGCUGAAGAUCUGGAU 1017 AUCCAGAUCUUCAGCUGCU Rh，D [1092-1110]ORF
46 721 AACUACUACGACGACGAGA 1018 UCUCGUCGUCGUAGUAGUU Rb [959-977]ORF
47 722 GGCAAGCUGCCCGAGGUCA 1019 UGACCUCGGGCAGCUUGCC Rh，D [776-794]ORF
48 723 CCGGACAGGCCUCUACAAC 1020 GUUGUAGAGGCCUGUCCGG Rh,Rb,Rt,P [943-961]ORF
49 724 GCUCCCUGCUAUUCAUUGG 1021 CCAAUGAAUAGCAGGGAGC D [1422-1440]ORF
50 725 AACUGCGAGCACUCCAAGA 1022 UCUUGGAGUGCUCGCAGUU Rh，D [692-710]ORF
51 726 GACACAUGGGUGCUAUUGG 1023 CCAAUAGCACCCAUGUGUC Rh,Rt,M [1535-1553]3′UTR
52 727 GCACCGGACAGGCCUCUAC 1024 GUAGAGGCCUGUCCGGUGC Rh,Rb,Rt,P [940-958]ORF
53 728 AGCGCAGCGCGCUGCAGUC 1025 GACUGCAGCGCGCUGCGCU Rh,Rt [726-744]ORF
54 729 GGACGUGGAGCGCACGGAC 1026 GUCCGUGCGCUCCACGUCC Rh，D [799-817]ORF
55 730 CAGCCUCAUCAUCCUCAUG 1027 CAUGAGGAUGAUGAGGCUG Rh,D,Rt,M [1024-1042]ORF
56 731 AAGAUCAACUUCCGCGACA 1028 UGUCGCGGAAGUUGAUCUU D [707-725]ORF
57 732 GCGCAACGUGACCUGGAAG 1029 CUUCCAGGUCACGUUGCGC M [598-616]ORF
58 733 ACUGCGAGCACUCCAAGAU 1030 AUCUUGGAGUGCUCGCAGU Rh，D [693-711]ORF
59 734 GUGGACAACCGUGGCUUCA 1031 UGAAGCCACGGUUGUCCAC Rh,M [884-902]ORF
60 735 CCACAAGCUCUCCAGCCUC 1032 GAGGCUGGAGAGCUUGUGG Rh，D,P [1012-1030]ORF
61 736 CAAGAUGGUGGACAACCGU 1033 ACGGUUGUCCACCAUCUUG Rh,Rb,M,P [877-895]ORF
62 737 CGAGCACUCCAAGAUCAAC 1034 GUUGAUCUUGGAGUGCUCG Rh，D [697-715]ORF
63 738 AGCUGCCCGAGGUCACCAA 1035 UUGGUGACCUCGGGCAGCU Rh，D [780-798]ORF
64 739 GGACAUCUACGGGCGCGAG 1036 CUCGCGCCCGUAGAUGUCC D [1333-1351]ORF
65 740 AGGACAUCUACGGGCGCGA 1037 UCGCGCCCGUAGAUGUCCU D [1332-1350]ORF
66 741 UGUCAGGCAAGAAGGACCU 1038 AGGUCCUUCUUGCCUGACA Rh，D [1248-1266]ORF
67 742 GGGUGUGGUGGAGGUGACC 1039 GGUCACCUCCACCACACCC Rh，D [1153-1171]ORF
68 743 CAAGCUCUCCAGCCUCAUC 1040 GAUGAGGCUGGAGAGCUUG Rh,D,M,P [1015-1033]ORF
69 744 GUGACCCAUGACCUGCAGA 1041 UCUGCAGGUCAUGGGUCAC Rh,Rt,M [1166-1184]ORF
70 745 GUUCUUCAAGCCACACUGG 1042 CCAGUGUGGCUUGAAGAAC Rh,Rb，D [841-859]ORF
71 746 ACAUCUACGGGCGCGAGGA 1043 UCCUCGCGCCCGUAGAUGU D,M [1335-1353]ORF
72 747 UGGAGGUGACCCAUGACCU 1044 AGGUCAUGGGUCACCUCCA Rh,Rt,M [1161-1179]ORF
73 748 UGCAGAAGAAGGCUGUUGC 1045 GCAACAGCCUUCUUCUGCA Rt [1119-1137]ORF
74 749 UGUACCAGGCCAUGGCCAA 1046 UUGGCCAUGGCCUGGUACA Rh，D [390-408]ORF
75 750 UGUGGUGGAGGUGACCCAU 1047 AUGGGUCACCUCCACCACA Rh，D [1156-1174]ORF
76 751 AGAAGGACCUGUACCUGGC GCCAGGUACAGGUCCUUCU Rh，D [1257-1275]ORF
1048

[1008]77 752 AGCAGCUGCGCGACGAGGA 1049 UCCUCGUCGCGCAGCUGCU Rh，D [528-546]ORF
78 753 ACGCCAUGUUCUUCAAGCC 1050 GGCUUGAAGAACAUGGCGU Rh,Rb,P [834-852]ORF
79 754 ACAAGAUGGUGGACAACCG 1051 CGGUUGUCCACCAUCUUGU Rh,Rb,M,P [876-894]ORF
80 755 CUGCGAGCACUCCAAGAUC 1052 GAUCUUGGAGUGCUCGCAG Rh，D [694-712]ORF
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89 764 AUGUUCUUCAAGCCACACU 1061 AGUGUGGCUUGAAGAACAU Rh,Rb，D [839-857]ORF
90 765 UCCUGAGACACAUGGGUGC 1062 GCACCCAUGUGUCUCAGGA D,Rt,M [1529-1547]3′UTR
91 766 CACUCCAAGAUCAACUUCC 1063 GGAAGUUGAUCUUGGAGUG Rh,D,Rt,M [701-719]ORF
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103 778 UGUUCCACGCCACCGCCUU 1075 AAGGCGGUGGCGUGGAACA D [1281-1299]ORF
104 779 CCCUGCUAUUCAUUGGGCG 1076 CGCCCAAUGAAUAGCAGGG D [1425-1443]ORF
105 780 CCGUGGCUUCAUGGUGACU 1077 AGUCACCAUGAAGCCACGG Rh,Rt,M [892-910]ORF
106 781 CUACAACUACUACGACGAC 1078 GUCGUCGUAGUAGUUGUAG Rb [955-973]ORF
107 782 GCAGCACUACAACUGCGAG 1079 CUCGCAGUUGUAGUGCUGC Rh，D [682-700]ORF
108 783 UGGUGGACAACCGUGGCUU 1080 AAGCCACGGUUGUCCACCA Rh,M [882-900]ORF
109 784 AGACCACCGACGGCAAGCU 1081 AGCUUGCCGUCGGUGGUCU D,Rt [765-783]ORF
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113 788 ACUACAACUGCGAGCACUC 1085 GAGUGCUCGCAGUUGUAGU Rh，D [687-705]ORF
114 789 ACAAGCUCUCCAGCCUCAU 1086 AUGAGGCUGGAGAGCUUGU Rh,D,M,P [1014-1032]ORF
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152 827 AGGCUCCUGAGACACAUGG 1124 CCAUGUGUCUCAGGAGCCU D [1525-1543]3′UTR
153 828 CAAGGACGUGGAGCGCACG 1125 CGUGCGCUCCACGUCCUUG Rh，D [796-814]ORF
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155 830 AGAUGGUGGACAACCGUGG 1127 CCACGGUUGUCCACCAUCU Rh,M [879-897]ORF
156 831 AAGCGCAGCGCGCUGCAGU 1128 ACUGCAGCGCGCUGCGCUU Rh,Rt [725-743]ORF
157 832 CAUGUCAGGCAAGAAGGAC 1129 GUCCUUCUUGCCUGACAUG Rh，D [1246-1264]ORF
158 833 CAAGCCACACUGGGAUGAG 1130 CUCAUCCCAGUGUGGCUUG Rh,Rb [847-865]ORF
159 834 AAGAUGCAGAAGAAGGCUG 1131 CAGCCUUCUUCUGCAUCUU Rh,Rt,M [1115-1133]ORF
160 835 GGCCAUGGCCAAGGACCAG 1132 CUGGUCCUUGGCCAUGGCC Rh，D [397-415]ORF
161 836 GUGCGCAGCAGCAAGCAGC 1133 GCUGCUUGCUGCUGCGCAC Rh，D [668-686]ORF
162 837 CAACUGCGAGCACUCCAAG 1134 CUUGGAGUGCUCGCAGUUG Rh，D [691-709]ORF
163 838 UACAACUGCGAGCACUCCA 1135 UGGAGUGCUCGCAGUUGUA Rh，D [689-707]ORF
164 839 CAUUGACAAGAACAAGGCC 1136 GGCCUUGUUCUUGUCAAUG Rh，D [1216-1234]ORF
165 840 CAAGCAGCACUACAACUGC 1137 GCAGUUGUAGUGCUGCUUG Rh，D [679-697]ORF
166 841 GUGUUCCACGCCACCGCCU 1138 AGGCGGUGGCGUGGAACAC D [1280-1298]ORF
167 842 CCUGCUAUUCAUUGGGCGC 1139 GCGCCCAAUGAAUAGCAGG D [1426-1444]ORF
168 843 GCCCACAAGCUCUCCAGCC 1140 GGCUGGAGAGCUUGUGGGC Rh,D,P [1010-1028]ORF[1010]
169 844 CAGCAGCAAGCAGCACUAC 1141 GUAGUGCUGCUUGCUGCUG Rh，D [673-691]ORF
170 845 UGAUGCACCGGACAGGCCU 1142 AGGCCUGUCCGGUGCAUCA Rh,Rb,Rt,M,P [936-954]ORF
171 846 UCAACUUCCGCGACAAGCG 1143 CGCUUGUCGCGGAAGUUGA D [711-729]ORF
172 847 UCAGGCAAGAAGGACCUGU 1144 ACAGGUCCUUCUUGCCUGA Rh，D [1250-1268]ORF
173 848 ACUUCGUGCGCAGCAGCAA 1145 UUGCUGCUGCGCACGAAGU Rh,D,M [663-681]ORF
174 849 ACAACCGUGGCUUCAUGGU 1146 ACCAUGAAGCCACGGUUGU Rh,Rt,M [888-906]ORF
175 850 AAGGCUGUUGCCAUCUCCU 1147 AGGAGAUGGCAACAGCCUU D,Rt [1127-1145]ORF
176 851 GCAGCUGCGCGACGAGGAG 1148 CUCCUCGUCGCGCAGCUGC Rh，D [529-547]ORF
177 852 UAUUCAUUGGGCGCCUGGU 1149 ACCAGGCGCCCAAUGAAUA D [1431-1449]ORF
178 853 UCCACCACAAGAUGGUGGA 1150 UCCACCAUCUUGUGGUGGA Rh,Rb,D,P [870-888]ORF
179 854 CCCUGGCCCACAAGCUCUC 1151 GAGAGCUUGUGGGCCAGGG Rh，D,P [1005-1023]ORF
180 855 ACCAGGACAUCUACGGGCG 1152 CGCCCGUAGAUGUCCUGGU D,Rt [1329-1347]ORF
181 856 GAUGAUGCACCGGACAGGC 1153 GCCUGUCCGGUGCAUCAUC Rh,Rb,Rt,M [934-952]ORF
182 857 CAACGCCAUGUUCUUCAAG 1154 CUUGAAGAACAUGGCGUUG Rh,Rb,P [832-850]ORF
183 858 ACGGCAAGCUGCCCGAGGU 1155 ACCUCGGGCAGCUUGCCGU Rh，D [774-792]ORF
184 859 CAGCGCGCUGCAGUCCAUC 1156 GAUGGACUGCAGCGCGCUG Rh,Rt [730-748]ORF
185 860 CCCAAGGGUGUGGUGGAGG 1157 CCUCCACCACACCCUUGGG Rh，D [1148-1166]ORF
186 861 CAUGGCCAAGGACCAGGCA 1158 UGCCUGGUCCUUGGCCAUG Rh，D [400-418]ORF
187 862 CUCCAGCCUCAUCAUCCUC 1159 GAGGAUGAUGAGGCUGGAG Rh,D,Rt,M [1021-1039]ORF
188 863 UCUACGGGCGCGAGGAGCU 1160 AGCUCCUCGCGCCCGUAGA D,M [1338-1356]ORF
189 864 GGCCCACAAGCUCUCCAGC 1161 GCUGGAGAGCUUGUGGGCC Rh，D,P [1009-1027]ORF
190 865 GUCAGGCAAGAAGGACCUG 1162 CAGGUCCUUCUUGCCUGAC Rh，D [1249-1267]ORF
191 866 CAUCUACGGGCGCGAGGAG 1163 CUCCUCGCGCCCGUAGAUG D,M [1336-1354]ORF
192 867 CGUGCGCAGCAGCAAGCAG 1164 CUGCUUGCUGCUGCGCACG Rh,D,M [667-685]ORF
193 868 AGCCUCAUCAUCCUCAUGC 1165 GCAUGAGGAUGAUGAGGCU Rh,D,Rt,M [1025-1043]ORF
194 869 UUCAAGCCACACUGGGAUG 1166 CAUCCCAGUGUGGCUUGAA Rh,Rb [845-863]ORF
195 870 AAGAAGGCUGUUGCCAUCU 1167 AGAUGGCAACAGCCUUCUU Rt [1124-1142]ORF
196 871 GGUGUGGUGGAGGUGACCC 1168 GGGUCACCUCCACCACACC Rh，D [1154-1172]ORF
197 872 GAGGUGACCCAUGACCUGC 1169 GCAGGUCAUGGGUCACCUC Rh,Rt,M [1163-1181]ORF
198 873 GUGGAGGUGACCCAUGACC 1170 GGUCAUGGGUCACCUCCAC Rh,Rt,M [1160-1178]ORF
199 874 CACAAGAUGGUGGACAACC 1171 GGUUGUCCACCAUCUUGUG Rh,Rb,M,P [875-893]ORF
200 875 CUGGCCCACAAGCUCUCCA 1172 UGGAGAGCUUGUGGGCCAG Rh,D,P [1007-1025]ORF
201 876 GAUGACUUCGUGCGCAGCA 1173 UGCUGCGCACGAAGUCAUC Rh,Rt,M [659-677]ORF
202 877 ACUUCCGCGACAAGCGCAG 1174 CUGCGCUUGUCGCGGAAGU D [714-732]ORF
203 878 AACGCCAUGUUCUUCAAGC 1175 GCUUGAAGAACAUGGCGUU Rh,Rb,P [833-851]ORF
204 879 GGACCUGUACCUGGCCAGC 1176 GCUGGCCAGGUACAGGUCC Rh，D [1261-1279]ORF
205 880 GCGACGAGGAGGUGCACGC 1177 GCGUGCACCUCCUCGUCGC D [537-555]ORF
206 881 GCAAGCUGCCCGAGGUCAC 1178 GUGACCUCGGGCAGCUUGC Rh，D [777-795]ORF
207 882 AUUCAUUGGGCGCCUGGUC 1179 GACCAGGCGCCCAAUGAAU D [1432-1450]ORF
208 883 GAGGUCACCAAGGACGUGG 1180 CCACGUCCUUGGUGACCUC Rh，D [788-806]ORF
209 884 AAGAAGGACCUGUACCUGG 1181 CCAGGUACAGGUCCUUCUU Rh，D [1256-1274]ORF
210 885 GACAACCGUGGCUUCAUGG 1182 CCAUGAAGCCACGGUUGUC Rh,Rt,M [887-905]ORF
211 886 CUGGGCCUGACUGAGGCCA 1183 UGGCCUCAGUCAGGCCCAG Rt [1199-1217]ORF
212 887 CUCCAAGAUCAACUUCCGC 1184 GCGGAAGUUGAUCUUGGAG Rh,D,Rt,M [703-721]ORF
213 888 CAACUUCCGCGACAAGCGC 1185 GCGCUUGUCGCGGAAGUUG D [712-730]ORF
214 889 CUCCCUGCUAUUCAUUGGG 1186 CCCAAUGAAUAGCAGGGAG D [1423-1441]ORF

[1011]215 890 AAGCAGCACUACAACUGCG 1187 CGCAGUUGUAGUGCUGCUU Rh，D [680-698]ORF
216 891 GCGCAGCAGCAAGCAGCAC 1188 GUGGUGCUUGCUGCUGCGC Rh，D [670-688]ORF
217 892 CAGGCCAUGGCCAAGGACC 1189 GGUCCUUGGCCAUGGCCUG Rh，D [395-413]ORF
218 893 GUACCAGGCCAUGGCCAAG 1190 CUUGGCCAUGGCCUGGUAC Rh，D [391-409]ORF
219 894 CUUCGUGCGCAGCAGCAAG 1191 CUUGCUGCUGCGCACGAAG Rh,D,M [664-682]ORF
220 895 CAGCACUACAACUGCGAGC 1192 GCUCGCAGUUGUAGUGCUG Rh，D [683-701]ORF
221 896 UACAACUACUACGACGACG 1193 CGUCGUCGUAGUAGUUGUA Rb [956-974]ORF
222 897 GAUGGUGGACAACCGUGGC 1194 GCCACGGUUGUCCACCAUC Rh,M [880-898]ORF
223 898 CUACAACUGCGAGCACUCC 1195 GGAGUGCUCGCAGUUGUAG Rh，D [688-706]ORF
224 899 AAGGACCUGUACCUGGCCA 1196 UGGCCAGGUACAGGUCCUU Rh，D [1259-1277]ORF
225 900 GCUGCCCGAGGUCACCAAG 1197 CUUGGUGACCUCGGGCAGC Rh，D [781-799]ORF
226 901 GACAUCUACGGGCGCGAGG 1198 CCUCGCGCCCGUAGAUGUC D,M [1334-1352]ORF
227 902 CCACCACAAGAUGGUGGAC 1199 GUCCACCAUCUUGUGGUGG Rh,Rb,D,P [871-889]ORF
228 903 GCGCGACGAGGAGGUGCAC 1200 GUGCACCUCCUCGUCGCGC Rh，D [535-553]ORF
229 904 CUAUUCAUUGGGCGCCUGG 1201 CCAGGCGCCCAAUGAAUAG D [1430-1448]ORF
230 905 CCAGGACAUCUACGGGCGC 1202 GCGCCCGUAGAUGUCCUGG D,Rt [1330-1348]ORF
231 906 AAGAUGGUGGACAACCGUG 1203 CACGGUUGUCCACCAUCUU Rh,M [878-896]ORF
232 907 CAGGACAUCUACGGGCGCG 1204 CGCGCCCGUAGAUGUCCUG D [1331-1349]ORF
233 908 UCCAAGAUCAACUUCCGCG 1205 CGCGGAAGUUGAUCUUGGA D [704-722]ORF
234 909 GUCACCAAGGACGUGGAGC 1206 GCUCCACGUCCUUGGUGAC Rh，D [791-809]ORF
235 910 CUGCCCGAGGUCACCAAGG 1207 CCUUGGUGACCUCGGGCAG Rh，D [782-800]ORF
236 911 GACCAGGACAUCUACGGGC 1208 GCCCGUAGAUGUCCUGGUC D,Rt [1328-1346]ORF
237 912 CCAUGGCCAAGGACCAGGC 1209 GCCUGGUCCUUGGCCAUGG Rh，D [399-417]ORF
238 913 CACCAAGGACGUGGAGCGC 1210 GCGCUCCACGUCCUUGGUG Rh，D [793-811]ORF
239 914 GACAAGCGCAGCGCGCUGC 1211 GCAGCGCGCUGCGCUUGUC Rh,Rt [722-740]ORF
240 915 CAAGCGCAGCGCGCUGCAG 1212 CUGCAGCGCGCUGCGCUUG Rh,Rt [724-742]ORF
241 916 CAGACCACCGACGGCAAGC 1213 GCUUGCCGUCGGUGGUCUG D,Rt [764-782]ORF
242 917 GACCACCGACGGCAAGCUG 1214 CAGCUUGCCGUCGGUGGUC D,Rt [766-784]ORF
243 918 AGGACCUGUACCUGGCCAG 1215 CUGGCCAGGUACAGGUCCU Rh，D [1260-1278]ORF
244 919 CUGCUAUUCAUUGGGCGCC 1216 GGCGCCCAAUGAAUAGCAG D [1427-1445]ORF
245 920 UCAUUGGGCGCCUGGUCCG 1217 CGGACCAGGCGCCCAAUGA Rh，D [1434-1452]ORF
246 921 GCUGCGCGACGAGGAGGUG 1218 CACCUCCUCGUCGCGCAGC Rh，D [532-550]ORF
247 922 CGGCAAGCUGCCCGAGGUC 1219 GACCUCGGGCAGCUUGCCG Rh，D [775-793]ORF
248 923 CCUCAUCAUCCUCAUGCCC 1220 GGGCAUGAGGAUGAUGAGG Rh,D,Rt,M [1027-1045]ORF
249 924 CCAGGCCAUGGCCAAGGAC 1221 GUCCUUGGCCAUGGCCUGG Rh，D [394-412]ORF
250 925 GCCAUGGCCAAGGACCAGG 1222 CCUGGUCCUUGGCCAUGGC Rh，D [398-416]ORF
251 926 CCACCGACGGCAAGCUGCC 1223 GGCAGCUUGCCGUCGGUGG D,Rt [768-786]ORF
252 927 AUGGUGGACAACCGUGGCU 1224 AGCCACGGUUGUCCACCAU Rh,M [881-899]ORF
253 928 CUUCCGCGACAAGCGCAGC 1225 GCUGCGCUUGUCGCGGAAG D [715-733]ORF
254 929 CGCGACGAGGAGGUGCACG 1226 CGUGCACCUCCUCGUCGCG Rh，D [536-554]ORF
255 930 UGGCCCACAAGCUCUCCAG 1227 CUGGAGAGCUUGUGGGCCA Rh,D,P [1008-1026]ORF
256 931 GAGCAGCUGCGCGACGAGG 1228 CCUCGUCGCGCAGCUGCUC Rh，D [527-545]ORF
257 932 UGACCAGGACAUCUACGGG 1229 CCCGUAGAUGUCCUGGUCA Rt [1327-1345]ORF
258 933 ACCACCGACGGCAAGCUGC 1230 GCAGCUUGCCGUCGGUGGU D,Rt [767-785]ORF
259 934 GAAGGACCUGUACCUGGCC 1231 GGCCAGGUACAGGUCCUUC Rh，D [1258-1276]ORF
260 935 CAUUGGGCGCCUGGUCCGG 1232 CCGGACCAGGCGCCCAAUG Rh，D [1435-1453]ORF[1012]
261 936 AUGCACCGGACAGGCCUCU 1233 AGAGGCCUGUCCGGUGCAU Rh,Rb,Rt,P [938-956]ORF
262 937 AUCAACUUCCGCGACAAGC 1234 GCUUGUCGCGGAAGUUGAU D [710-728]ORF
263 938 CAGCUGCGCGACGAGGAGG 1235 CCUCCUCGUCGCGCAGCUG Rh，D [530-548]ORF
264 939 CAGAAACACCUGGCUGGGC 1236 GCCCAGCCAGGUGUUUCUG D [1181-1199]ORF
265 940 CUACGGGCGCGAGGAGCUG 1237 CAGCUCCUCGCGCCCGUAG D,M [1339-1357]ORF
266 941 CGACGAGGAGGUGCACGCC 1238 GGCGUGCACCUCCUCGUCG D [538-556]ORF
267 942 UUUGACCAGGACAUCUACG 1239 CGUAGAUGUCCUGGUCAAA Rt [1325-1343]ORF
268 943 GUCCAUCAACGAGUGGGCC 1240 GGCCCACUCGUUGAUGGAC Rh,Rt,M [742-760]ORF
269 944 AUGACUUCGUGCGCAGCAG 1241 CUGCUGCGCACGAAGUCAU Rh,Rt,M [660-678]ORF
270 945 UCCCUGCUAUUCAUUGGGC 1242 GCCCAAUGAAUAGCAGGGA D [1424-1442]ORF
271 946 CUGCGCGACGAGGAGGUGC 1243 GCACCUCCUCGUCGCGCAG Rh，D [533-551]ORF
272 947 CAAGCUGCCCGAGGUCACC 1244 GGUGACCUCGGGCAGCUUG Rh，D [778-796]ORF
273 948 AAGCUGCCCGAGGUCACCA 1245 UGGUGACCUCGGGCAGCUU Rh，D [779-797]ORF
274 949 UUCUUCAAGCCACACUGGG 1246 CCCAGUGUGGCUUGAAGAA Rh,Rb，D [842-860]ORF
275 950 ACACCUGGCUGGGCUGGGC 1247 GCCCAGCCCAGCCAGGUGU D [1186-1204]ORF
276 951 UCCAUCAACGAGUGGGCCG 1248 CGGCCCACUCGUUAAUGGA Rt,M [743-761]ORF
277 952 AUCUACGGGCGCGAGGAGC 1249 GCUCCUCGCGCCCGUAGAU D,M [1337-1355]ORF
278 953 UCGUGCGCAGCAGCAAGCA 1250 UGCUUGCUGCUGCGCACGA Rh,D,M [666-684]ORF
279 954 CGACGGCAAGCUGCCCGAG 1251 CUCGGGCAGCUUGCCGUCG D [772-790]ORF
280 955 UUCAUUGGGCGCCUGGUCC 1252 GGACCAGGCGCCCAAUGAA Rh，D [1433-1451]ORF
281 956 UUGACCAGGACAUCUACGG 1253 CCGUAGAUGUCCUGGUCAA Rt [1326-1344]ORF
282 957 CCUGGCCCACAAGCUCUCC 1254 GGAGAGCUUGUGGGCCAGG Rh,D,P [1006-1024]ORF
283 958 UGACUUCGUGCGCAGCAGC 1255 GCUGCUGCGCACGAAGUCA Rh,Rt,M [661-679]ORF
284 959 AUGAUGCACCGGACAGGCC 1256 GGCCUGUCCGGUGCAUCAU Rh,Rb,Rt,M,P [935-953]ORF
285 960 CACCGACGGCAAGCUGCCC 1257 GGGCAGCUUGCCGUCGGUG D,Rt [769-787]ORF
286 961 GACGGCAAGCUGCCCGAGG 1258 CCUCGGGCAGCUUGCCGUC Rh，D [773-791]ORF
287 962 UACCAGGCCAUGGCCAAGG 1259 CCUUGGCCAUGGCCUGGUA Rh，D [392-410]ORF
288 963 UCCGCGACAAGCGCAGCGC 1260 GCGCUGCGCUUGUCGCGGA D [717-735]ORF
289 964 UUCCGCGACAAGCGCAGCG 1261 CGCUGCGCUUGUCGCGGAA D [716-734]ORF
290 965 AAGGACGUGGAGCGCACGG 1262 CCGUGCGCUCCACGUCCUU Rh，D [797-815]ORF
291 966 UUCCACCACAAGAUGGUGG 1263 CCACCAUCUUGUGGUGGAA Rh,Rb,D,P [869-887]ORF
292 967 UACGGGCGCGAGGAGCUGC 1264 GCAGCUCCUCGCGCCCGUA D,M [1340-1358]ORF
293 968 AAACACCUGGCUGGGCUGG 1265 CCAGCCCAGCCAGGUGUUU D [1184-1202]ORF
294 969 AACACCUGGCUGGGCUGGG 1266 CCCAGCCCAGCCAGGUGUU D [1185-1203]ORF
295 970 AUUGGGCGCCUGGUCCGGC 1267 GCCGGACCAGGCGCCCAAU Rh，D [1436-1454]ORF
296 971 ACCGACGGCAAGCUGCCCG 1268 CGGGCAGCUUGCCGUCGGU D [770-788]ORF
297 972 UUCGUGCGCAGCAGCAAGC 1269 GCUUGCUGCUGCGCACGAA Rh,D,M [665-683]ORF[1013] 表D：SERPINH1活性18+1聚体siRNA

[1014]No SEQ ID 有义siRNA SEQ ID 反义siRNA 其它物种人-32454740
1 1270 AGCCUUUGUUGCUAUCAAA 1849 UUUGAUAGCAACAAAGGCU Rh [2117-2135]
2 1271 GCCUAAGGGUGACAAGAUA 1850 UAUCUUGUCACCCUUAGGC Rh [1453-1471]
3 1272 GGCCUAAGGGUGACAAGAA 1851 UUCUUGUCACCCUUAGGCC Rh [1452-1470]
4 1273 CCUCAAUCAGUAUUCAUAA 1852 UUAUGAAUACUGAUUGAG [1774-1792]
5 1274 GGCGGAUUGAGAAGGAGCA 1853 UGCUCCUUCUCAAUCCGCC [1973-1991]

[1015]6 1275 GGCAGUGGAGAACAUCCUA 1854 UAGGAUGUUCUCCACUGCC Rh [415-433]
7 1276 GGGUCAGCCAGCCCUCUUA 1855 UAAGAGGGCUGGCUGACCC Rh [1839-1857]
8 1277 GGGUGACAAGAUGCGAGAA 1856 UUCUCGCAUCUUGUCACCC Rh,D [1459-1477]
9 1278 GGACCAGGCAGUGGAGAAA 1857 UUUCUCCACUGCCUGGUCC Rh [409-427]
10 1279 GAGACACAUGGGUGCUAUA 1858 UAUAGCACCCAUGUGUCUC Rh,D,Rt, [1533-1551]
11 1280 GUUGGAGCGUGGAAAAAAA 1859 UUUUUUUCCACGCUCCAAC [2191-2208]
12 1281 GGAACAUGAGCCUUUGUUA 1860 UAACAAAGGCUCAUGUUCC Rh [2109-2127]
13 1282 GCCAUGUUCUUCAAGCCAA 1861 UUGGCUUGAAGAACAUGGC Rh,Rb,D [836-854]
14 1283 GGAUUGAGAAGGAGCUCCA 1862 UGGAGCUCCUUCUCAAUCC [1976-1994]
15 1284 GGGAUGAACUUUUUGUUUA 1863 UAAACAAAAAGUUCAUCCC Rh [2048-2066]
16 1285 GCCGCAGUGAGGCGGAUUA 1864 UAAUCCGCCUCACUGCGGC [1963-1981]
17 1286 GGACCUUCCCAGCUAGAAA 1865 UUUCUAGCUGGGAAGGUCC Rh [1639-1657]
18 1287 GACCUUCCCAGCUAGAAUA 1866 UAUUCUAGCUGGGAAGGUC Rh [1640-1658]
19 1288 CCUGUGAGACCAAAUUGAA 1867 UUCAAUUUGGUCUCACAGG Rh [1814-1832]
20 1289 UGGAGAACAUCCUGGUGUA 1868 UACACCAGGAUGUUCUCCA Rh [420-438]
21 1290 GCCUUUGUUGCUAUCAAUA 1869 UAUUGAUAGCAACAAAGGC Rh [2118-2136]
22 1291 CCGCCUUUGAGUUGGACAA 1870 UUGUCCAACUCAAAGGCGG Rh [1293-1311]
23 1292 CAGGCAGUGGAGAACAUCA 1871 UGAUGUUCUCCACUGCCUG Rh [413-431]
24 1293 CACCUGUGAGACCAAAUUA 1872 UAAUUUGGUCUCACAGGUG Rh [1812-1830]
25 1294 GGGAAGAUGCAGAAGAAGA 1873 UCUUCUUCUGCAUCUUCCC Rh,Rb,Rt [1112-1130]
26 1295 GGCCAUUGACAAGAACAAA 1874 UUUGUUCUUGUCAAUGGCC Rh,D [1213-1231]
27 1296 GCCUUUGAGUUGGACACAA 1875 UUGUGUCCAACUCAAAGGC Rh [1295-1313]
28 1297 AGCGGACCUUCCCAGCUAA 1876 UUAGCUGGGAAGGUCCGCU Rh [1636-1654]
29 1298 GAAGAAGGCUGUUGCCAUA 1877 UAUGGCAACAGCCUUCUUC Rt [1123-1141]
30 1299 ACAAGAUGCGAGACGAGUA 1878 UACUCGUCUCGCAUCUUGU Rh,Rt [1464-1482]
31 1300 GAGGCGGAUUGAGAAGGAA 1879 UUCCUUCUCAAUCCGCCUC [1971-1989]
32 1301 GGACAACCGUGGCUUCAUA 1880 UAUGAAGCCACGGUUGUCC Rh,M [886-904]
33 1302 CAUAUUUAUAGCCAGGUAA 1881 UUACCUGGCUAUAAAUAUG Rh [1788-1806]
34 1303 CGACGACGAGAAGGAAAAA 1882 UUUUUCCUUCUCGUCGUCG [967-985]
35 1304 CUCACCUGUGAGACCAAAA 1883 UUUUGGUCUCACAGGUGAG Rh [1810-1828]
36 1305 GCGGCUCCCUGCUAUUCAA 1884 UUGAAUAGCAGGGAGCCGC [1419-1437]
37 1306 AGAACAUCCUGGUGUCACA 1885 UGUGACACCAGGAUGUUCU [423-441]
38 1307 CACACUGGGAUGAGAAAUA 1886 UAUUUCUCAUCCCAGUGUG Rh [852-870]
39 1308 GCUAGAAUUCACUCCACUA 1887 UAGUGGAGUGAAUUCUAGC Rh [1650-1668]
40 1309 CCUUCAUCUUCCUAGUGCA 1888 UGCACUAGGAAGAUGAAGG [1389-1407]
41 1310 UGCUAUCAAUCCAAGAACA 1889 UGUUCUUGGAUUGAUAGCA Rh [2126-2144]
42 1311 GGAAGAUGCAGAAGAAGGA 1890 UCCUUCUUCUGCAUCUUCC Rh,Rb,Rt [1113-1131]
43 1312 CAUGAGCCUUUGUUGCUAA 1891 UUAGCAACAAAGGCUCAUG Rh [2113-2131]
44 1313 GCGGAUUGAGAAGGAGCUA 1892 UAGCUCCUUCUCAAUCCGC [1974-1992]
45 1314 UGCAGUCCAUCAACGAGUA 1893 UACUCGUUGAUGGACUGCA Rh,Rt,M [738-756]
46 1315 GCACUGCGGAGAAGUUGAA 1894 UUCAACUUCUCCGCAGUGC [321-339]
47 1316 CCAGGCAGUGGAGAACAUA 1895 UAUGUUCUCCACUGCCUGG Rh [412-430]
48 1317 GGCAAGAAGGACCUGUACA 1896 UGUACAGGUCCUUCUUGCC Rh,D,M [1253-1271]
49 1318 CUCUACAACUACUACGACA 1897 UGUCGUAGUAGUUGUAGA Rb [953-971]
50 1319 CUUCCCAGCUAGAAUUCAA 1898 UUGAAUUCUAGCUGGGAAG Rh [1643-1661]
51 1320 AGGCGGAUUGAGAAGGAGA 1899 UCUCCUUCUCAAUCCGCCU [1972-1990]

[1016]52 1321 GGUCCUAUACCGUGGGUGA 1900 UCACCCACGGUAUAGGACC Rh [912-930]
53 1322 GCAAGAAGGACCUGUACCA 1901 UGGUACAGGUCCUUCUUGC Rh,D,M [1254-1272]
54 1323 CCGUGGGUGUCAUGAUGAA 1902 UUCAUCAUGACACCCACGG Rh [921-939]
55 1324 GAUGCGAGACGAGUUAUAA 1903 UUAUAACUCGUCUCGCAUC Rh [1468-1486]
56 1325 GGCAGUGCUGAGCGCCGAA 1904 UUCGGCGCUCAGCACUGCC [511-529]
57 1326 CAGCUAGAAUUCACUCCAA 1905 UUGGAGUGAAUUCUAGCUG Rh [1648-1666]
58 1327 GAGCUUCGCUGAUGACUUA 1906 UAAGUCAUCAGCGAAGCUC Rh [649-667]
59 1328 CUUUGAGUUGGACACAGAA 1907 UUCUGUGUCCAACUCAAAG Rh [1297-1315]
60 1329 GGUGGACAACCGUGGCUUA 1908 UAAGCCACGGUUGUCCACC Rh,M [883-901]
61 1330 GCCUCAUCAUCCUCAUGCA 1909 UGCAUGAGGAUGAUGAGGC Rh,D,Rt, [1026-1044]
62 1331 ACCAGGCAGUGGAGAACAA 1910 UUGUUCUCCACUGCCUGGU Rh [411-429]
63 1332 CCUGCCUCAAUCAGUAUUA 1911 UAAUACUGAUUGAGGCAGG [1770-1788]
64 1333 GAUCAAGCCUGCCUCAAUA 1912 UAUUGAGGCAGGCUUGAUC Rh [1763-1781]
65 1334 CAGACUCUGGUCAAGAAGA 1913 UCUUCUUGACCAGAGUCUG Rh [2011-2029]
66 1335 CGCGCUGCAGUCCAUCAAA 1914 UUUGAUGGACUGCAGCGCG Rh,Rt [733-751]
67 1336 CUGGCACUGCGGAGAAGUA 1915 UACUUCUCCGCAGUGCCAG [318-336]
68 1337 CCAGCUCUAUCCCAACCUA 1916 UAGGUUGGGAUAGAGCUG [1885-1903]
69 1338 AGGGUGUGGUGGAGGUGAA 1917 UUCACCUCCACCACACCCU Rh，D [1152-1170]
70 1339 AGUGAGGCGGAUUGAGAAA 1918 UUUCUCAAUCCGCCUCACU [1968-1986]
71 1340 CGGACAGGCCUCUACAACA 1919 UGUUGUAGAGGCCUGUCCG Rh,Rb,Rt, [944-962]
72 1341 CGACGAGAAGGAAAAGCUA 1920 UAGCUUUUCCUUCUCGUCG Rh [970-988]
73 1342 AGGCCAAGGCAGUGCUGAA 1921 UUCAGCACUGCCUUGGCCU Rh [504-522]
74 1343 GCCUCAGGGUGCACACAGA 1922 UCUGUGUGCACCCUGAGGC [1488-1506]
75 1344 GGAUGAGAAAUUCCACCAA 1923 UUGGUGGAAUUUCUCAUCC Rh [859-877]
76 1345 AGAAGGAAAAGCUGCAAAA 1924 UUUUGCAGCUUUUCCUUCU Rh [975-993]
77 1346 AGCUCUAUCCCAACCUCUA 1925 UAGAGGUUGGGAUAGAGC Rh [1887-1905]
78 1347 UGACAAGAUGCGAGACGAA 1926 UUCGUCUCGCAUCUUGUCA Rh [1462-1480]
79 1348 AGAAGGAGCUCCCAGGAGA 1927 UCUCCUGGGAGCUCCUUCU [1982-2000]
80 1349 CCUUCUCACCUGUGAGACA 1928 UGUCUCACAGGUGAGAAGG Rh [1806-1824]
81 1350 GGCUUCUGGGCAGACUCUA 1929 UAGAGUCUGCCCAGAAGCC Rh [2001-2019]
82 1351 CCAGCCUCAUCAUCCUCAA 1930 UUGAGGAUGAUGAGGCUG Rh,D,Rt, [1023-1041]
83 1352 CCAAAGGCUCCUGAGACAA 1931 UUGUCUCAGGAGCCUUUGG [1521-1539]
84 1353 GGACCUGGGCCAUAGUCAA 1932 UUGACUAUGGCCCAGGUCC [1722-1740]
85 1354 GGGUGUCAUGAUGAUGCAA 1933 UUGCAUCAUCAUGACACCC Rh [925-943]
86 1355 GUACCAGCCUUGGAUACUA 1934 UAGUAUCCAAGGCUGGUAC Rh [1572-1590]
87 1356 GGCUGUUGCCAUCUCCUUA 1935 UAAGGAGAUGGCAACAGCC [1129-1147]
88 1357 CGCAGUGAGGCGGAUUGAA 1936 UUCAAUCCGCCUCACUGCG [1965-1983]
89 1358 CCAAGGACGUGGAGCGCAA 1937 UUGCGCUCCACGUCCUUGG Rh，D [795-813]
90 1359 GGCUCCUGAGACACAUGGA 1938 UCCAUGUGUCUCAGGAGCC D [1526-1544]
91 1360 GCUGCAGUCCAUCAACGAA 1939 UUCGUUGAUGGACUGCAGC Rh,Rt [736-754]
92 1361 CCAGGUACCUUCUCACCUA 1940 UAGGUGAGAAGGUACCUGG Rh [1799-1817]
93 1362 GCAGCGCGCUGCAGUCCAA 1941 UUGGACUGCAGCGCGCUGC Rh,Rt [729-747]
94 1363 GAGACCAAAUUGAGCUAGA 1942 UCUAGCUCAAUUUGGUCUC Rh [1819-1837]
95 1364 GCCGCCGAGGUGAAGAAAA 1943 UUUUCUUCACCUCGGCGGC [281-299]
96 1365 GCAGACUCUGGUCAAGAAA 1944 UUUCUUGACCAGAGUCUGC Rh [2010-2028]
97 1366 CUAGAAUUCACUCCACUUA 1945 UAAGUGGAGUGAAUUCUA Rh [1651-1669]

[1017]98 1367 GCAGUGGAGAACAUCCUGA 1946 UCAGGAUGUUCUCCACUGC Rh [416-434]
99 1368 CGCAUGUCAGGCAAGAAGA 1947 UCUUCUUGCCUGACAUGCG Rh，D [1244-1262]
10 1369 CGGAUUGAGAAGGAGCUCA 1948 UGAGCUCCUUCUCAAUCCG [1975-1993]
10 1370 AGGUGAGGUACCAGCCUUA 1949 UAAGGCUGGUACCUCACCU Rh [1565-1583]
10 1371 CCACACUGGGAUGAGAAAA 1950 UUUUCUCAUCCCAGUGUGG Rh [851-869]
10 1372 GCCAUUGACAAGAACAAGA 1951 UCUUGUUCUUGUCAAUGGC Rh，D [1214-1232]
10 1373 GCGCUGCAGUCCAUCAACA 1952 UGUUGAUGGACUGCAGCGC Rh,Rt [734-752]
10 1374 CUCCCAACUAUAAAACUAA 1953 UUAGUUUUAUAGUUGGGA Rh [1903-1921]
10 1375 GGUGACAAGAUGCGAGACA 1954 UGUCUCGCAUCUUGUCACC Rh [1460-1478]
10 1376 GGCCGACUUGUCACGCAUA 1955 UAUGCGUGACAAGUCGGCC Rh [1231-1249]
10 1377 CCUAAGGGUGACAAGAUGA 1956 UCAUCUUGUCACCCUUAGG Rh [1454-1472]
10 1378 UGAGACACAUGGGUGCUAA 1957 UUAGCACCCAUGUGUCUCA Rh,D,Rt, [1532-1550]
11 1379 GGGUGGAAAAACAGACCGA 1958 UCGGUCUGUUUUUCCACCC [1601-1619]
11 1380 GGUGGAGGUGACCCAUGAA 1959 UUCAUGGGUCACCUCCACC Rh,Rt,M [1159-1177]
11 1381 CUUUGACCAGGACAUCUAA 1960 UUAGAUGUCCUGGUCAAAG Rh,Rt [1324-1342]
11 1382 GAACAUGAGCCUUUGUUGA 1961 UCAACAAAGGCUCAUGUUC Rh [2110-2128]
11 1383 AGCCUUGGAUACUCCAUGA 1962 UCAUGGAGUAUCCAAGGCU Rh [1577-1595]
11 1384 GGAGGUGACCCAUGACCUA 1963 UAGGUCAUGGGUCACCUCC Rh,Rt,M [1162-1180]
11 1385 AGAUCAAGCCUGCCUCAAA 1964 UUUGAGGCAGGCUUGAUCU Rh [1762-1780]
11 1386 GCCCAAGGGUGUGGUGGAA 1965 UUCCACCACACCCUUGGGC Rh，D [1147-1165]
11 1387 AGAACAAGGCCGACUUGUA 1966 UACAAGUCGGCCUUGUUCU Rh [1224-1242]
11 1388 GUGGCUUCAUGGUGACUCA 1967 UGAGUCACCAUGAAGCCAC Rh [894-912]
12 1389 CUCCUGAGACACAUGGGUA 1968 UACCCAUGUGUCUCAGGAG D [1528-1546]
12 1390 CAGCCUUGGAUACUCCAUA 1969 UAUGGAGUAUCCAAGGCUG Rh [1576-1594]
12 1391 AAGGCUCCUGAGACACAUA 1970 UAUGUGUCUCAGGAGCCUU D [1524-1542]
12 1392 AGAAGAAGGCUGUUGCCAA 1971 UUGGCAACAGCCUUCUUCU Rt [1122-1140]
12 1393 CUACUACGACGACGAGAAA 1972 UUUCUCGUCGUCGUAGUAG Rb [961-979]
12 1394 CCUUUGUUGCUAUCAAUCA 1973 UGAUUGAUAGCAACAAAGG Rh [2119-2137]
12 1395 AGGCAGUGGAGAACAUCCA 1974 UGGAUGUUCUCCACUGCCU Rh [414-432]
12 1396 CCAUCACGUGGAGCCUCUA 1975 UAGAGGCUCCACGUGAUGG Rh [1045-1063]
12 1397 AGCUCUCCAGCCUCAUCAA 1976 UUGAUGAGGCUGGAGAGCU Rh,D,Rt, [1017-1035]
12 1398 GGCUCCCUGCUAUUCAUUA 1977 UAAUGAAUAGCAGGGAGCC D [1421-1439]
13 1399 GGGAACAUGAGCCUUUGUA 1978 UACAAAGGCUCAUGUUCCC Rh [2108-2126]
13 1400 GGGCCAUAGUCAUUCUGCA 1979 UGCAGAAUGACUAUGGCCC [1728-1746]
13 1401 CCAAAGAGCAGCUGAAGAA 1980 UUCUUCAGCUGCUCUUUGG Rh,Rb,P [1086-1104]
13 1402 GACGAGAAGGAAAAGCUGA 1981 UCAGCUUUUCCUUCUCGUC Rh [971-989]
13 1403 GGGCUUCUGGGCAGACUCA 1982 UGAGUCUGCCCAGAAGCCC Rh [2000-2018]
13 1404 CAAGGACCAGGCAGUGGAA 1983 UUCCACUGCCUGGUCCUUG Rh [406-424]
13 1405 CUGUGAGACCAAAUUGAGA 1984 UCUCAAUUUGGUCUCACAG Rh [1815-1833]
13 1406 GACUGAGGCCAUUGACAAA 1985 UUUGUCAAUGGCCUCAGUC Rh [1207-1225]
13 1407 GACUUGUCACGCAUGUCAA 1986 UUGACAUGCGUGACAAGUC Rh [1235-1253]
13 1408 GAGGUGAGGUACCAGCCUA 1987 UAGGCUGGUACCUCACCUC [1564-1582]
14 1409 CAGAUACCAUGAUGCUGAA 1988 UUCAGCAUCAUGGUAUCUG Rh [1681-1699]
14 1410 AGGCAAGAAGGACCUGUAA 1989 UUACAGGUCCUUCUUGCCU Rh，D [1252-1270]
14 1411 CUGGGAUGAGAAAUUCCAA 1990 UUGGAAUUUCUCAUCCCAG Rh [856-874]
14 1412 AGGUACCAGCCUUGGAUAA 1991 UUAUCCAAGGCUGGUACCU Rh [1570-1588]

[1018]14 1413 CAGCCAGCCCUCUUCUGAA 1992 UUCAGAAGAGGGCUGGCUG [1843-1861]
14 1414 GUGUCAUGAUGAUGCACCA 1993 UGGUGCAUCAUCAUGACAC Rh [927-945]
14 1415 CCUCUACAACUACUACGAA 1994 UUCGUAGUAGUUGUAGAG Rb,D [952-970]
14 1416 CCGCCGAGGUGAAGAAACA 1995 UGUUUCUUCACCUCGGCGG Rh [282-300]
14 1417 GCUAUCAAUCCAAGAACUA 1996 UAGUUCUUGGAUUGAUAGC Rh [2127-2145]
14 1418 AGCCUGCCUCAAUCAGUAA 1997 UUACUGAUUGAGGCAGGCU [1768-1786]
15 1419 GGUCCGGCCUAAGGGUGAA 1998 UUCACCCUUAGGCCGGACC Rh [1447-1465]
15 1420 GAAGGAAAAGCUGCAAAUA 1999 UAUUUGCAGCUUUUCCUUC Rh [976-994]
15 1421 GGCCUCUACAACUACUACA 2000 UGUAGUAGUUGUAGAGGCC Rb,D [950-968]
15 1422 UGUUCUUCAAGCCACACUA 2001 UAGUGUGGCUUGAAGAACA Rh,Rb,D [840-858]
15 1423 GGCCAAGGCAGUGCUGAGA 2002 UCUCAGCACUGCCUUGGCC Rh [505-523]
15 1424 AGAAAUUCCACCACAAGAA 2003 UUCUUGUGGUGGAAUUUCU Rh [864-882]
15 1425 CUGCAGUCCAUCAACGAGA 2004 UCUCGUUGAUGGACUGCAG Rh,Rt,M [737-755]
15 1426 CCAGCGUGUUCCACGCCAA 2005 UUGGCGUGGAACACGCUGG [1275-1293]
15 1427 GCUCCCUCCUGCUUCUCAA 2006 UUGAGAAGCAGGAGGGAGC [234-252]
15 1428 CCGGACAGGCCUCUACAAA 2007 UUUGUAGAGGCCUGUCCGG Rh,Rb,Rt, [943-961]
16 1429 CCCAUCACGUGGAGCCUCA 2008 UGAGGCUCCACGUGAUGGG Rh [1044-1062]
16 1430 CCGGCCUAAGGGUGACAAA 2009 UUUGUCACCCUUAGGCCGG Rh [1450-1468]
16 1431 CCUAUACCGUGGGUGUCAA 2010 UUGACACCCACGGUAUAGG Rh,D,P [915-933]
16 1432 CAGUGGAGAACAUCCUGGA 2011 UCCAGGAUGUUCUCCACUG Rh [417-435]
16 1433 CACUGGGAUGAGAAAUUCA 2012 UGAAUUUCUCAUCCCAGUG Rh [854-872]
16 1434 AUCCAAAGGCUCCUGAGAA 2013 UUCUCAGGAGCCUUUGGAU [1519-1537]
16 1435 UGAGAAAUUCCACCACAAA 2014 UUUGUGGUGGAAUUUCUCA Rh [862-880]
16 1436 GGUGGAAAAACAGACCGGA 2015 UCCGGUCUGUUUUUCCACC [1602-1620]
16 1437 GCUGGGCAGCCGACUGUAA 2016 UUACAGUCGGCUGCCCAGC [616-634]
16 1438 CCAUAGUCAUUCUGCCUGA 2017 UCAGGCAGAAUGACUAUGG [1731-1749]
17 1439 GCACCGGACAGGCCUCUAA 2018 UUAGAGGCCUGUCCGGUGC Rh,Rb,Rt, [940-958]
17 1440 GUUGGACACAGAUGGCAAA 2019 UUUGCCAUCUGUGUCCAAC [1303-1321]
17 1441 GCCUGCCUCAAUCAGUAUA 2020 UAUACUGAUUGAGGCAGGC [1769-1787]
17 1442 GAUCAACUUCCGCGACAAA 2021 UUUGUCGCGGAAGUUGAUC D [709-727]
17 1443 GGCCGCAGUGAGGCGGAUA 2022 UAUCCGCCUCACUGCGGCC [1962-1980]
17 1444 CUGCGGAGAAGUUGAGCCA 2023 UGGCUCAACUUCUCCGCAG [324-342]
17 1445 GCAUCCAAAGGCUCCUGAA 2024 UUCAGGAGCCUUUGGAUGC [1517-1535]
17 1446 GCUUCUGGGCAGACUCUGA 2025 UCAGAGUCUGCCCAGAAGC Rh [2002-2020]
17 1447 CCAGCCCUCUUCUGACACA 2026 UGUGUCAGAAGAGGGCUGG [1846-1864]
17 1448 GCUCUAUCCCAACCUCUCA 2027 UGAGAGGUUGGGAUAGAG Rh [1888-1906]
18 1449 GGACGUGGAGCGCACGGAA 2028 UUCCGUGCGCUCCACGUCC Rh，D [799-817]
18 1450 CCAAGGCAGUGCUGAGCGA 2029 UCGCUCAGCACUGCCUUGG Rh [507-525]
18 1451 GCAGAAGAAGGCUGUUGCA 2030 UGCAACAGCCUUCUUCUGC Rt [1120-1138]
18 1452 GACAUUUUGUUGGAGCGUA 2031 UACGCUCCAACAAAAUGUC [2183-2201]
18 1453 CGAGCACUCCAAGAUCAAA 2032 UUUGAUCUUGGAGUGCUCG Rh，D [697-715]
18 1454 UCAUGAUGAUGCACCGGAA 2033 UUCCGGUGCAUCAUCAUGA Rh [930-948]
18 1455 CCUGCUUCUCAGCGCCUUA 2034 UAAGGCGCUGAGAAGCAGG [241-259]
18 1456 CCCAACCUCUCCCAACUAA 2035 UUAGUUGGGAGAGGUUGG Rh [1895-1913]
18 1457 UGGGCAGACUCUGGUCAAA 2036 UUUGACCAGAGUCUGCCCA Rh [2007-2025]
18 1458 CUCUGGUCAAGAAGCAUCA 2037 UGAUGCUUCUUGACCAGAG Rh [2015-2033]

[1019]19 1459 GAGCCUCUCGAGCGCCUUA 2038 UAAGGCGCUCGAGAGGCUC [1055-1073]
19 1460 AGAAGGCUGUUGCCAUCUA 2039 UAGAUGGCAACAGCCUUCU Rt [1125-1143]
19 1461 CCCUGCUAGUCAACGCCAA 2040 UUGGCGUUGACUAGCAGGG Rh [822-840]
19 1462 GCCUUCAGCUUGUACCAGA 2041 UCUGGUACAAGCUGAAGGC [380-398]
19 1463 GCUGCUAACCAAAGAGCAA 2042 UUGCUCUUUGGUUAGCAGC [1078-1096]
19 1464 CCCACAAGCUCUCCAGCCA 2043 UGGCUGGAGAGCUUGUGGG Rh,D,P [1011-1029]
19 1465 GCUCCCUGCUAUUCAUUGA 2044 UCAAUGAAUAGCAGGGAGC D [1422-1440]
19 1466 GUUCUUCAAAGAUAGGGAA 2045 UUCCCUAUCUUUGAAGAAC [2083-2101]
19 1467 GUCAGCCAGCCCUCUUCUA 2046 UAGAAGAGGGCUGGCUGAC Rh [1841-1859]
19 1468 GCGGGACACCCAAAGCGGA 2047 UCCGCUUUGGGUGUCCCGC [1405-1423]
20 1469 AGCGCAGCGCGCUGCAGUA 2048 UACUGCAGCGCGCUGCGCU Rh,Rt [726-744]
20 1470 CCGGAAACUCCACAUCCUA 2049 UAGGAUGUGGAGUUUCCGG [1701-1719]
20 1471 CCAUUGACAAGAACAAGGA 2050 UCCUUGUUCUUGUCAAUGG Rh，D [1215-1233]
20 1472 GGACAUCUACGGGCGCGAA 2051 UUCGCGCCCGUAGAUGUCC D [1333-1351]
20 1473 GACACAUGGGUGCUAUUGA 2052 UCAAUAGCACCCAUGUGUC Rh,Rt,M [1535-1553]
20 1474 CCUGGCACUGCGGAGAAGA 2053 UCUUCUCCGCAGUGCCAGG [317-335]
20 1475 GGGCCUGACUGAGGCCAUA 2054 UAUGGCCUCAGUCAGGCCC Rt [1201-1219]
20 1476 ACACUGGGAUGAGAAAUUA 2055 UAAUUUCUCAUCCCAGUGU Rh [853-871]
20 1477 GGUCAGCCAGCCCUCUUCA 2056 UGAAGAGGGCUGGCUGACC Rh [1840-1858]
20 1478 GUGAGGCGGAUUGAGAAGA 2057 UCUUCUCAAUCCGCCUCAC [1969-1987]
21 1479 UCACCUGUGAGACCAAAUA 2058 UAUUUGGUCUCACAGGUGA Rh [1811-1829]
21 1480 AGCUGCAAAUCGUGGAGAA 2059 UUCUCCACGAUUUGCAGCU Rh [984-1002]
21 1481 GGUGCACACAGGAUGGCAA 2060 UUGCCAUCCUGUGUGCACC Rh [1495-1513]
21 1482 GGGUGUGGUGGAGGUGACA 2061 UGUCACCUCCACCACACCC Rh，D [1153-1171]
21 1483 CCAGCCUUGGAUACUCCAA 2062 UUGGAGUAUCCAAGGCUGG Rh [1575-1593]
21 1484 CCACAAGCUCUCCAGCCUA 2063 UAGGCUGGAGAGCUUGUGG Rh,D,P [1012-1030]
21 1485 AAAGGCUCCUGAGACACAA 2064 UUGUGUCUCAGGAGCCUUU [1523-1541]
21 1486 AGGAAAAGCUGCAAAUCGA 2065 UCGAUUUGCAGCUUUUCCU Rh [978-996]
21 1487 CGCAGCAGCUCCUGGCACA 2066 UGUGCCAGGAGCUGCUGCG [307-325]
21 1488 GGUGUCAUGAUGAUGCACA 2067 UGUGCAUCAUCAUGACACC Rh [926-944]
22 1489 CCUCUUCUGACACUAAAAA 2068 UUUUUAGUGUCAGAAGAG [1851-1869]
22 1490 AGCUAGAAUUCACUCCACA 2069 UGUGGAGUGAAUUCUAGCU Rh [1649-1667]
22 1491 CGCUGGGCGGCAAGGCGAA 2070 UUCGCCUUGCCGCCCAGCG [474-492]
22 1492 GGCCUGGCCUUCAGCUUGA 2071 UCAAGCUGAAGGCCAGGCC [374-392]
22 1493 AGACACAUGGGUGCUAUUA 2072 UAAUAGCACCCAUGUGUCU Rh,Rt,M [1534-1552]
22 1494 CGUGGGUGUCAUGAUGAUA 2073 UAUCAUCAUGACACCCACG Rh [922-940]
22 1495 GUGGGUGUCAUGAUGAUGA 2074 UCAUCAUCAUGACACCCAC Rh [923-941]
22 1496 GAGAAGGAGCUCCCAGGAA 2075 UUCCUGGGAGCUCCUUCUC [1981-1999]
22 1497 GACUCUGGUCAAGAAGCAA 2076 UUGCUUCUUGACCAGAGUC Rh [2013-2031]
22 1498 CACUAAAACACCUCAGCUA 2077 UAGCUGAGGUGUUUUAGU [1861-1879]
23 1499 GGAGGCAUCCAAAGGCUCA 2078 UGAGCCUUUGGAUGCCUCC [1513-1531]
23 1500 GACCCAGCUCAGUGAGCUA 2079 UAGCUCACUGAGCUGGGUC [636-654]
23 1501 CCAUGACCUGCAGAAACAA 2080 UUGUUUCUGCAGGUCAUGG Rh,Rt,M [1171-1189]
23 1502 AGAUGCAGAAGAAGGCUGA 2081 UCAGCCUUCUUCUGCAUCU Rh,Rt,M [1116-1134]
23 1503 CAGCAAGCAGCACUACAAA 2082 UUUGUAGUGCUGCUUGCUG Rh,D [676-694]
23 1504 CAAGCUCUCCAGCCUCAUA 2083 UAUGAGGCUGGAGAGCUUG Rh,D,M,P [1015-1033][1020]
23 1505 UGCAGAAGAAGGCUGUUGA 2084 UCAACAGCCUUCUUCUGCA Rt [1119-1137]
23 1506 GGCGCGAGGAGCUGCGCAA 2085 UUGCGCAGCUCCUCGCGCC Rh,D,M [1344-1362]
23 1507 GGUACCAGCCUUGGAUACA 2086 UGUAUCCAAGGCUGGUACC Rh [1571-1589]
23 1508 GCAGCCGACUGUACGGACA 2087 UGUCCGUACAGUCGGCUGC [621-639]
24 1509 CAGCCUCAUCAUCCUCAUA 2088 UAUGAGGAUGAUGAGGCU Rh,D,Rt, [1024-1042]
24 1510 GCCACCGCCUUUGAGUUGA 2089 UCAACUCAAAGGCGGUGGC Rh [1289-1307]
24 1511 AGAAGGACCUGUACCUGGA 2090 UCCAGGUACAGGUCCUUCU Rh，D [1257-1275]
24 1512 GGUGAAGAAACCUGCAGCA 2091 UGCUGCAGGUUUCUUCACC Rh [289-307]
24 1513 GUACCUUCUCACCUGUGAA 2092 UUCACAGGUGAGAAGGUAC Rh [1803-1821]
24 1514 GGCCAAGGACCAGGCAGUA 2093 UACUGCCUGGUCCUUGGCC Rh [403-421]
24 1515 GGCGGCAAGGCGACCACGA 2094 UCGUGGUCGCCUUGCCGCC [479-497]
24 1516 AGCACUCCAAGAUCAACUA 2095 UAGUUGAUCUUGGAGUGCU Rh，D [699-717]
24 1517 AUAUUUAUAGCCAGGUACA 2096 UGUACCUGGCUAUAAAUAU Rh [1789-1807]
24 1518 GGCAGCCGACUGUACGGAA 2097 UUCCGUACAGUCGGCUGCC [620-638]
25 1519 GUCACGCAUGUCAGGCAAA 2098 UUUGCCUGACAUGCGUGAC Rh，D [1240-1258]
25 1520 GACAGGCCUCUACAACUAA 2099 UUAGUUGUAGAGGCCUGUC Rh,Rb,Rt, [946-964]
25 1521 GAUGCAGAAGAAGGCUGUA 2100 UACAGCCUUCUUCUGCAUC Rh,Rt,M [1117-1135]
25 1522 ACCCAUGACCUGCAGAAAA 2101 UUUUCUGCAGGUCAUGGGU Rh,Rt,M [1169-1187]
25 1523 GGCUUCAUGGUGACUCGGA 2102 UCCGAGUCACCAUGAAGCC Rh [896-914]
25 1524 UGCCUCAAUCAGUAUUCAA 2103 UUGAAUACUGAUUGAGGCA [1772-1790]
25 1525 GUUCUUCAAGCCACACUGA 2104 UCAGUGUGGCUUGAAGAAC Rh,Rb,D [841-859]
25 1526 ACUCCAAGAUCAACUUCCA 2105 UGGAAGUUGAUCUUGGAG Rh,D,Rt, [702-720]
25 1527 GCUGUUCUACGCCGACCAA 2106 UUGGUCGGCGUAGAACAGC Rh [1369-1387]
25 1528 UAGUCAACGCCAUGUUCUA 2107 UAGAACAUGGCGUUGACUA Rh [828-846]
26 1529 CCGUGUGCCUGAGCGGACA 2108 UGUCCGCUCAGGCACACGG Rh [1625-1643]
26 1530 AGGCCUCUACAACUACUAA 2109 UUAGUAGUUGUAGAGGCCU Rh,Rb,D, [949-967]
26 1531 GCUUCAUGGUGACUCGGUA 2110 UACCGAGUCACCAUGAAGC Rh [897-915]
26 1532 GGUCAAGAAGCAUCGUGUA 2111 UACACGAUGCUUCUUGACC Rh [2019-2037]
26 1533 CUGCGAGCACUCCAAGAUA 2112 UAUCUUGGAGUGCUCGCAG Rh，D [694-712]
26 1534 GUCCUAUACCGUGGGUGUA 2113 UACACCCACGGUAUAGGAC Rh [913-931]
26 1535 GGCCUGACUGAGGCCAUUA 2114 UAAUGGCCUCAGUCAGGCC Rh [1202-1220]
26 1536 CACUCCAAGAUCAACUUCA 2115 UGAAGUUGAUCUUGGAGU Rh,D,Rt, [701-719]
26 1537 GCGUCGCAGGCCAAGGCAA 2116 UUGCCUUGGCCUGCGACGC [497-515]
26 1538 AAGGGUGACAAGAUGCGAA 2117 UUCGCAUCUUGUCACCCUU Rh，D [1457-1475]
27 1539 CAAGCUGUUCUACGCCGAA 2118 UUCGGCGUAGAACAGCUUG Rh [1366-1384]
27 1540 CCUGCUAGUCAACGCCAUA 2119 UAUGGCGUUGACUAGCAGG Rh [823-841]
27 1541 CCAAGGGUGUGGUGGAGGA 2120 UCCUCCACCACACCCUUGG Rh，D [1149-1167]
27 1542 CACACAGGAUGGCAGGAGA 2121 UCUCCUGCCAUCCUGUGUG Rh [1499-1517]
27 1543 UCCUGAGACACAUGGGUGA 2122 UCACCCAUGUGUCUCAGGA D,Rt,M [1529-1547]
27 1544 CUACAACUACUACGACGAA 2123 UUCGUCGUAGUAGUUGUAG Rb [955-973]
27 1545 GACAAGAUGCGAGACGAGA 2124 UCUCGUCUCGCAUCUUGUC Rh,Rt [1463-1481]
27 1546 CCUGGAAGCUGGGCAGCCA 2125 UGGCUGCCCAGCUUCCAGG [609-627]
27 1547 CUUCAAGCCACACUGGGAA 2126 UUCCCAGUGUGGCUUGAAG Rh,Rb,D [844-862]
27 1548 GCGAGACGAGUUAUAGGGA 2127 UCCCUAUAACUCGUCUCGC Rh [1471-1489]
28 1549 GAAGCUGGGCAGCCGACUA 2128 UAGUCGGCUGCCCAGCUUC [613-631]
28 1550 GUGCCUGAGCGGACCUUCA 2129 UGAAGGUCCGCUCAGGCAC Rh [1629-1647]

[1021]28 1551 GGUGACCCAUGACCUGCAA 2130 UUGCAGGUCAUGGGUCACC Rh,Rt,M [1165-1183]
28 1552 AUGAGCCUUUGUUGCUAUA 2131 UAUAGCAACAAAGGCUCAU Rh [2114-2132]
28 1553 CAACUACUACGACGACGAA 2132 UUCGUCGUCGUAGUAGUUG Rb [958-976]
28 1554 GCUGCGCUCACUCAGCAAA 2133 UUUGCUGAGUGAGCGCAGC Rh [571-589]
28 1555 GAGAACAUCCUGGUGUCAA 2134 UUGACACCAGGAUGUUCUC [422-440]
28 1556 CCCAAGCUGUUCUACGCCA 2135 UGGCGUAGAACAGCUUGGG Rh [1364-1382]
28 1557 CAGCUCUAUCCCAACCUCA 2136 UGAGGUUGGGAUAGAGCU [1886-1904]
28 1558 UGAGCUUCGCUGAUGACUA 2137 UAGUCAUCAGCGAAGCUCA Rh [648-666]
29 1559 CCCAAGGCGGCCACGCUUA 2138 UAAGCGUGGCCGCCUUGGG Rh [341-359]
29 1560 CUAUACCGUGGGUGUCAUA 2139 UAUGACACCCACGGUAUAG Rh [916-934]
29 1561 CAUUGACAAGAACAAGGCA 2140 UGCCUUGUUCUUGUCAAUG Rh，D [1216-1234]
29 1562 GGACCCAGCUCAGUGAGCA 2141 UGCUCACUGAGCUGGGUCC [635-653]
29 1563 GACGACGAGAAGGAAAAGA 2142 UCUUUUCCUUCUCGUCGUC Rh [968-986]
29 1564 GCGGCAAGGCGACCACGGA 2143 UCCGUGGUCGCCUUGCCGC [480-498]
29 1565 GGGACACCCAAAGCGGCUA 2144 UAGCCGCUUUGGGUGUCCC [1407-1425]
29 1566 GGGAGGUGAGGUACCAGCA 2145 UGCUGGUACCUCACCUCCC [1562-1580]
29 1567 GCAGCACUACAACUGCGAA 2146 UUCGCAGUUGUAGUGCUGC Rh，D [682-700]
29 1568 GCGCAACGUGACCUGGAAA 2147 UUUCCAGGUCACGUUGCGC M [598-616]
30 1569 GGGCUGGGCCUGACUGAGA 2148 UCUCAGUCAGGCCCAGCCC [1196-1214]
30 1570 CCUGAGCGGACCUUCCCAA 2149 UUGGGAAGGUCCGCUCAGG Rh [1632-1650]
30 1571 GCAGCUGAAGAUCUGGAUA 2150 UAUCCAGAUCUUCAGCUGC Rh,D [1093-1111]
30 1572 AGUGGAGAACAUCCUGGUA 2151 UACCAGGAUGUUCUCCACU Rh [418-436]
30 1573 GCAAGCAGCACUACAACUA 2152 UAGUUGUAGUGCUGCUUGC Rh，D [678-696]
30 1574 AGCUCAGUGAGCUUCGCUA 2153 UAGCGAAGCUCACUGAGCU [641-659]
30 1575 CCGACUUGUCACGCAUGUA 2154 UACAUGCGUGACAAGUCGG Rh [1233-1251]
30 1576 CCGAGGUCACCAAGGACGA 2155 UCGUCCUUGGUGACCUCGG Rh,D [786-804]
30 1577 GGAGCCUCUCGAGCGCCUA 2156 UAGGCGCUCGAGAGGCUCC [1054-1072]
30 1578 GGCCGCGCAGACCACCGAA 2157 UUCGGUGGUCUGCGCGGCC [757-775]
31 1579 GGAAACUCCACAUCCUGUA 2158 UACAGGAUGUGGAGUUUCC Rh [1703-1721]
31 1580 CAAAGCGGCUCCCUGCUAA 2159 UUAGCAGGGAGCCGCUUUG [1415-1433]
31 1581 GCUCCUGAGACACAUGGGA 2160 UCCCAUGUGUCUCAGGAGC D [1527-1545]
31 1582 CCUGGGCCAUAGUCAUUCA 2161 UGAAUGACUAUGGCCCAGG [1725-1743]
31 1583 CGUGGAGCCUCUCGAGCGA 2162 UCGCUCGAGAGGCUCCACG [1051-1069]
31 1584 CCUCCUGCUUCUCAGCGCA 2163 UGCGCUGAGAAGCAGGAGG [238-256]
31 1585 AGUCCCAGAUCAAGCCUGA 2164 UCAGGCUUGAUCUGGGACU Rh [1756-1774]
31 1586 UACCGUGGGUGUCAUGAUA 2165 UAUCAUGACACCCACGGUA Rh [919-937]
31 1587 GCCAGCCCUCUUCUGACAA 2166 UUGUCAGAAGAGGGCUGGC [1845-1863]
31 1588 CCGAGGUGAAGAAACCUGA 2167 UCAGGUUUCUUCACCUCGG Rh,Rt [285-303]
32 1589 UCCUGGCACUGCGGAGAAA 2168 UUUCUCCGCAGUGCCAGGA [316-334]
32 1590 CCCGGAAACUCCACAUCCA 2169 UGGAUGUGGAGUUUCCGGG [1700-1718]
32 1591 ACUCUGGUCAAGAAGCAUA 2170 UAUGCUUCUUGACCAGAGU Rh [2014-2032]
32 1592 CCCAGAUACCAUGAUGCUA 2171 UAGCAUCAUGGUAUCUGGG Rh [1679-1697]
32 1593 CCUGAGACACAUGGGUGCA 2172 UGCACCCAUGUGUCUCAGG D,Rt,M [1530-1548]
32 1594 GCACUACAACUGCGAGCAA 2173 UUGCUCGCAGUUGUAGUGC Rh，D [685-703]
32 1595 CCACAAGAUGGUGGACAAA 2174 UUUGUCCACCAUCUUGUGG Rh,Rb,M, [874-892]
32 1596 GGACACAGAUGGCAACCCA 2175 UGGGUUGCCAUCUGUGUCC [1306-1324]

[1022]32 1597 GAAAAGCUGCUAACCAAAA 2176 UUUUGGUUAGCAGCUUUUC [1073-1091]
32 1598 ACUACAACUGCGAGCACUA 2177 UAGUGCUCGCAGUUGUAGU Rh，D [687-705]
33 1599 GCACUCCAAGAUCAACUUA 2178 UAAGUUGAUCUUGGAGUGC Rh,D [700-718]
33 1600 GCCUUGAAAAGCUGCUAAA 2179 UUUAGCAGCUUUUCAAGGC [1068-1086]
33 1601 GUGACUCGGUCCUAUACCA 2180 UGGUAUAGGACCGAGUCAC Rh [905-923]
33 1602 GUGGUGGAGGUGACCCAUA 2181 UAUGGGUCACCUCCACCAC Rh,Rb,Rt, [1157-1175]
33 1603 AUGCGAGACGAGUUAUAGA 2182 UCUAUAACUCGUCUCGCAU Rh [1469-1487]
33 1604 ACCUUCCCAGCUAGAAUUA 2183 UAAUUCUAGCUGGGAAGGU Rh [1641-1659]
33 1605 CCCAGCUAGAAUUCACUCA 2184 UGAGUGAAUUCUAGCUGGG Rh [1646-1664]
33 1606 GGUCACCAAGGACGUGGAA 2185 UUCCACGUCCUUGGUGACC Rh，D [790-808]
33 1607 GGCCUCAGGGUGCACACAA 2186 UUGUGUGCACCCUGAGGCC [1487-1505]
33 1608 UGAGGUACCAGCCUUGGAA 2187 UUCCAAGGCUGGUACCUCA Rh [1568-1586]
34 1609 CAUGGUGACUCGGUCCUAA 2188 UUAGGACCGAGUCACCAUG Rh [901-919]
34 1610 GGUGAGGUACCAGCCUUGA 2189 UCAAGGCUGGUACCUCACC Rh [1566-1584]
34 1611 GCCGAGGUGAAGAAACCUA 2190 UAGGUUUCUUCACCUCGGC Rh,Rt [284-302]
34 1612 GUACGGACCCAGCUCAGUA 2191 UACUGAGCUGGGUCCGUAC [631-649]
34 1613 CAAGAAGGACCUGUACCUA 2192 UAGGUACAGGUCCUUCUUG Rh,D,M [1255-1273]
34 1614 GAGCACUCCAAGAUCAACA 2193 UGUUGAUCUUGGAGUGCUC Rh，D [698-716]
34 1615 CAUGUUCUUCAAGCCACAA 2194 UUGUGGCUUGAAGAACAUG Rh,Rb,D [838-856]
34 1616 CCCUCCUGCUUCUCAGCGA 2195 UCGCUGAGAAGCAGGAGGG [237-255]
34 1617 AUGUCAGGCAAGAAGGACA 2196 UGUCCUUCUUGCCUGACAU Rh,D [1247-1265]
34 1618 CAAGAUCAACUUCCGCGAA 2197 UUCGCGGAAGUUGAUCUUG D [706-724]
35 1619 GCGUGUUCCACGCCACCGA 2198 UCGGUGGCGUGGAACACGC [1278-1296]
35 1620 CGGACCCAGCUCAGUGAGA 2199 UCUCACUGAGCUGGGUCCG [634-652]
35 1621 CCUUCAGCUUGUACCAGGA 2200 UCCUGGUACAAGCUGAAGG [381-399]
35 1622 GCUCUCCAGCCUCAUCAUA 2201 UAUGAUGAGGCUGGAGAGC Rh,D,Rt, [1018-1036]
35 1623 CCCUGGCCCACAAGCUCUA 2202 U AGAGCUUGUGGGCCAGGG Rh,D,P [1005-1023]
35 1624 GCCCGAGGUCACCAAGGAA 2203 UUCCUUGGUGACCUCGGGC Rh，D [784-802]
35 1625 GUGGAGAACAUCCUGGUGA 2204 UCACCAGGAUGUUCUCCAC Rh [419-437]
35 1626 GCUCACUCAGCAACUCCAA 2205 UUGGAGUUGCUGAGUGAGC Rh [576-594]
35 1627 ACGCCAUGUUCUUCAAGCA 2206 UGCUUGAAGAACAUGGCGU Rh,Rb,P [834-852]
35 1628 ACACAUGGGUGCUAUUGGA 2207 UCCAAUAGCACCCAUGUGU Rh [1536-1554]
36 1629 CCAGCUCAGUGAGCUUCGA 2208 UCGAAGCUCACUGAGCUGG [639-657]
36 1630 CCCAGCUCAGUGAGCUUCA 2209 UGAAGCUCACUGAGCUGGG [638-656]
36 1631 GGGCGGCAAGGCGACCACA 2210 UGUGGUCGCCUUGCCGCCC [478-496]
36 1632 CAGGGUGCACACAGGAUGA 2211 UCAUCCUGUGUGCACCCUG [1492-1510]
36 1633 AGGUGAAGAAACCUGCAGA 2212 UCUGCAGGUUUCUUCACCU Rh [288-306]
36 1634 CCUCUCCCAACUAUAAAAA 2213 UUUUUAUAGUUGGGAGAG Rh [1900-1918]
36 1635 GACUGUACGGACCCAGCUA 2214 UAGCUGGGUCCGUACAGUC [627-645]
36 1636 GAAGGAGCUCCCAGGAGGA 2215 UCCUCCUGGGAGCUCCUUC [1983-2001]
36 1637 ACGCAUGUCAGGCAAGAAA 2216 UUUCUUGCCUGACAUGCGU Rh，D [1243-1261]
36 1638 GACUCGGUCCUAUACCGUA 2217 UACGGUAUAGGACCGAGUC Rh [907-925]
37 1639 CACUACAACUGCGAGCACA 2218 UGUGCUCGCAGUUGUAGUG Rh，D [686-704]
37 1640 AGCUCCUGGCACUGCGGAA 2219 UUCCGCAGUGCCAGGAGCU [313-331]
37 1641 CUAAGGGUGACAAGAUGCA 2220 UGCAUCUUGUCACCCUUAG Rh [1455-1473]
37 1642 UGUGAGACCAAAUUGAGCA 2221 UGCUCAAUUUGGUCUCACA Rh [1816-1834]

[1023]37 1643 GCCGACUUGUCACGCAUGA 2222 UCAUGCGUGACAAGUCGGC Rh [1232-1250]
37 1644 CAGGAUGGCAGGAGGCAUA 2223 UAUGCCUCCUGCCAUCCUG [1503-1521]
37 1645 ACAAGAACAAGGCCGACUA 2224 UAGUCGGCCUUGUUCUUGU Rh [1221-1239]
37 1646 UGCGCUCCCUCCUGCUUCA 2225 UGAAGCAGGAGGGAGCGCA [231-249]
37 1647 GGCGAGCUGCUGCGCUCAA 2226 UUGAGCGCAGCAGCUCGCC Rh [563-581]
37 1648 GAUGCACCGGACAGGCCUA 2227 UAGGCCUGUCCGGUGCAUC Rh,Rb,Rt, [937-955]
38 1649 CGUGUCGCUGGGCGGCAAA 2228 UUUGCCGCCCAGCGACACG [469-487]
38 1650 AUCCCAACCUCUCCCAACA 2229 UGUUGGGAGAGGUUGGGA Rh [1893-1911]
38 1651 UGUUCUACGCCGACCACCA 2230 UGGUGGUCGGCGUAGAACA Rh [13711389]
38 1652 CGGCCUGGCCUUCAGCUUA 2231 UAAGCUGAAGGCCAGGCCG [373-391]
38 1653 GUCGCAGGCCAAGGCAGUA 2232 UACUGCCUUGGCCUGCGAC [499-517]
38 1654 AGUCAUUCUGCCUGCCCUA 2233 UAGGGCAGGCAGAAUGACU [1735-1753]
38 1655 CCCAGAAUGACCUGGCCGA 2234 UCGGCCAGGUCAUUCUGGG [1949-1967]
38 1656 ACAAGAUGGUGGACAACCA 2235 UGGUUGUCCACCAUCUUGU Rh,Rb,M, [876-894]
38 1657 GCUAGUCAACGCCAUGUUA 2236 UAACAUGGCGUUGACUAGC Rh [826-844]
38 1658 ACGCCACCGCCUUUGAGUA 2237 UACUCAAAGGCGGUGGCGU Rh [1287-1305]
39 1659 GCCGCGCAGACCACCGACA 2238 UGUCGGUGGUCUGCGCGGC [758-776]
39 1660 GCUAUUCAUUGGGCGCCUA 2239 UAGGCGCCCAAUGAAUAGC D [1429-1447]
39 1661 CUCAGUGAGCUUCGCUGAA 2240 UUCAGCGAAGCUCACUGAG [643-661]
39 1662 GGAGGUGAGGUACCAGCCA 2241 UGGCUGGUACCUCACCUCC [1563-1581]
39 1663 GCCAAGGCAGUGCUGAGCA 2242 UGCUCAGCACUGCCUUGGC Rh [506-524]
39 1664 CUCUCCAGCCUCAUCAUCA 2243 UGAUGAUGAGGCUGGAGA Rh,D,Rt, [1019-1037]
39 1665 GAAUGACCUGGCCGCAGUA 2244 UACUGCGGCCAGGUCAUUC [1953-1971]
39 1666 UGGUGACUCGGUCCUAUAA 2245 UUAUAGGACCGAGUCACCA Rh [903-921]
39 1667 CAGGUACCUUCUCACCUGA 2246 UCAGGUGAGAAGGUACCUG Rh [1800-1818]
39 1668 GUUCCACGCCACCGCCUUA 2247 UAAGGCGGUGGCGUGGAAC D [1282-1300]
40 1669 CCGACUGUACGGACCCAGA 2248 UCUGGGUCCGUACAGUCGG [625-643]
40 1670 GCAGACCACCGACGGCAAA 2249 UUUGCCGUCGGUGGUCUGC D,Rt [763-781]
40 1671 AAGAUGCGAGACGAGUUAA 2250 UUAACUCGUCUCGCAUCUU Rh [1466-1484]
40 1672 CAAAGAGCAGCUGAAGAUA 2251 UAUCUUCAGCUGCUCUUUG Rh [1087-1105]
40 1673 ACGACGAGAAGGAAAAGCA 2252 UGCUUUUCCUUCUCGUCGU Rh [969-987]
40 1674 CACUCCACUUGGACAUGGA 2253 UCCAUGUCCAAGUGGAGUG Rh [1659-1677]
40 1675 AGUCCAUCAACGAGUGGGA 2254 UCCCACUCGUUGAUGGACU Rh,Rt,M [741-759]
40 1676 GCGCCGGCCUGGCCUUCAA 2255 UUGAAGGCCAGGCCGGCGC Rh [369-387]
40 1677 GGAAAAGCUGCAAAUCGUA 2256 UACGAUUUGCAGCUUUUCC Rh [979-997]
40 1678 ACAUUUUGUUGGAGCGUGA 2257 UCACGCUCCAACAAAAUGU [2184-2202]
41 1679 ACCGUGGCUUCAUGGUGAA 2258 UUCACCAUGAAGCCACGGU Rh,Rt,M [891-909]
41 1680 CCCUUCAUCUUCCUAGUGA 2259 UCACUAGGAAGAUGAAGGG [1388-1406]
41 1681 GAAAUUCCACCACAAGAUA 2260 UAUCUUGUGGUGGAAUUUC Rh [865-883]
41 1682 CUAUAAAACUAGGUGCUGA 2261 UCAGCACCUAGUUUUAUAG Rh [1910-1928]
41 1683 GGAGGUGCACGCCGGCCUA 2262 UAGGCCGGCGUGCACCUCC [544-562]
41 1684 GCAGGCCAAGGCAGUGCUA 2263 UAGCACUGCCUUGGCCUGC [502-520]
41 1685 UGAGACCAAAUUGAGCUAA 2264 UUAGCUCAAUUUGGUCUCA Rh [1818-1836]
41 1686 GCCAUAGUCAUUCUGCCUA 2265 UAGGCAGAAUGACUAUGGC [1730-1748]
41 1687 AGCUGAAGAUCUGGAUGGA 2266 UCCAUCCAGAUCUUCAGCU Rh,D [1095-1113]
41 1688 CCAUCUCCUUGCCCAAGGA 2267 UCCUUGGGCAAGGAGAUGG Rh [1137-1155]

[1024]42 1689 CCCAGAUCAAGCCUGCCUA 2268 UAGGCAGGCUUGAUCUGGG Rh [1759-1777]
42 1690 GCUGUUGCCAUCUCCUUGA 2269 UCAAGGAGAUGGCAACAGC [1130-1148]
42 1691 CGAGGUCACCAAGGACGUA 2270 UACGUCCUUGGUGACCUCG Rh,D [787-805]
42 1692 CAACUAUAAAACUAGGUGA 2271 UCACCUAGUUUUAUAGUUG Rh [1907-1925]
42 1693 GAAGGCUGUUGCCAUCUCA 2272 UGAGAUGGCAACAGCCUUC Rt [1126-1144]
42 1694 UGCGGAGAAGUUGAGCCCA 2273 UGGGCUCAACUUCUCCGCA [325-343]
42 1695 CUCCUUGCCCAAGGGUGUA 2274 UACACCCUUGGGCAAGGAG Rh [1141-1159]
42 1696 GCCCUGAAAGUCCCAGAUA 2275 UAUCUGGGACUUUCAGGGC [1748-1766]
42 1697 CAAGGGUGUGGUGGAGGUA 2276 UACCUCCACCACACCCUUG Rh，D [1150-1168]
42 1698 AAGAGCAGCUGAAGAUCUA 2277 UAGAUCUUCAGCUGCUCUU Rh [1089-1107]
43 1699 GAAGAUGCAGAAGAAGGCA 2278 UGCCUUCUUCUGCAUCUUC Rh,Rb,Rt [1114-1132]
43 1700 CGGAAACUCCACAUCCUGA 2279 UCAGGAUGUGGAGUUUCCG [1702-1720]
43 1701 AGUCAACGCCAUGUUCUUA 2280 UAAGAACAUGGCGUUGACU Rh [829-847]
43 1702 CGAGCGCCUUGAAAAGCUA 2281 UAGCUUUUCAAGGCGCUCG [1063-1081]
43 1703 AUACCGUGGGUGUCAUGAA 2282 UUCAUGACACCCACGGUAU Rh [918-936]
43 1704 GACCUGGGCCAUAGUCAUA 2283 UAUGACUAUGGCCCAGGUC [1723-1741]
43 1705 CAUGUCAGGCAAGAAGGAA 2284 UUCCUUCUUGCCUGACAUG Rh，D [1246-1264]
43 1706 UGCGAGACGAGUUAUAGGA 2285 UCCUAUAACUCGUCUCGCA Rh [1470-1488]
43 1707 CGCAACGUGACCUGGAAGA 2286 UCUUCCAGGUCACGUUGCG [599-617]
43 1708 AGCAAGCAGCACUACAACA 2287 UGUUGUAGUGCUGCUUGCU Rh，D [677-695]
44 1709 GCUGCUGCGCUCACUCAGA 2288 UCUGAGUGAGCGCAGCAGC Rh [568-586]
44 1710 UGAUGAUGCACCGGACAGA 2289 UCUGUCCGGUGCAUCAUCA Rh [933-951]
44 1711 UUGUUGCUAUCAAUCCAAA 2290 UUUGGAUUGAUAGCAACAA Rh [2122-2140]
44 1712 CCUUGAAAAGCUGCUAACA 2291 UGUUAGCAGCUUUUCAAGG [1069-1087]
44 1713 CCCUUUGACCAGGACAUCA 2292 UGAUGUCCUGGUCAAAGGG Rh,Rt [1322-1340]
44 1714 GAGGUGAAGAAACCUGCAA 2293 UUGCAGGUUUCUUCACCUC Rh [287-305]
44 1715 CCCAAGGGUGUGGUGGAGA 2294 UCUCCACCACACCCUUGGG Rh,D [1148-1166]
44 1716 CCCUGCUAUUCAUUGGGCA 2295 UGCCCAAUGAAUAGCAGGG D [1425-1443]
44 1717 CUGAAAGUCCCAGAUCAAA 2296 UUUGAUCUGGGACUUUCAG [1751-1769]
44 1718 GCUGCAAAUCGUGGAGAUA 2297 UAUCUCCACGAUUUGCAGC Rh [985-1003]
45 1719 CAAGCCUGCCUCAAUCAGA 2298 UCUGAUUGAGGCAGGCUUG Rh [1766-1784]
45 1720 CGAGCAGCUGCGCGACGAA 2299 UUCGUCGCGCAGCUGCUCG [526-544]
45 1721 AGGCCGACUUGUCACGCAA 2300 UUGCGUGACAAGUCGGCCU Rh [1230-1248]
45 1722 GCAGCAGCUCCUGGCACUA 2301 UAGUGCCAGGAGCUGCUGC [308-326]
45 1723 GGCCAUAGUCAUUCUGCCA 2302 UGGCAGAAUGACUAUGGCC [1729-1747]
45 1724 CCCGUGUGCCUGAGCGGAA 2303 UUCCGCUCAGGCACACGGG Rh [1624-1642]
45 1725 CAGCUGAAGAUCUGGAUGA 2304 UCAUCCAGAUCUUCAGCUG Rh，D [1094-1112]
45 1726 CAAGCCACACUGGGAUGAA 2305 UUCAUCCCAGUGUGGCUUG Rh,Rb [847-865]
45 1727 GAAUUCACUCCACUUGGAA 2306 UUCCAAGUGGAGUGAAUUC Rh [1654-1672]
45 1728 CGGCGCCCUGCUAGUCAAA 2307 UUUGACUAGCAGGGCGCCG Rh [817-835]
46 1729 UGGAAGCUGGGCAGCCGAA 2308 UUCGGCUGCCCAGCUUCCA [611-629]
46 1730 GGCAAGGCGACCACGGCGA 2309 UCGCCGUGGUCGCCUUGCC Rh [482-500]
46 1731 CACUGCGGAGAAGUUGAGA 2310 UCUCAACUUCUCCGCAGUG [322-340]
46 1732 GGCAGGAGGCAUCCAAAGA 2311 UCUUUGGAUGCCUCCUGCC [1509-1527]
46 1733 GGUGACUCGGUCCUAUACA 2312 UGUAUAGGACCGAGUCACC Rh [904-922]
46 1734 UUUAUAGCCAGGUACCUUA 2313 UAAGGUACCUGGCUAUAAA Rh [1792-1810]

[1025]46 1735 GGCCAUGGCCAAGGACCAA 2314 UUGGUCCUUGGCCAUGGCC Rh，D [397-415]
46 1736 CAAAGAUAGGGAGGGAAGA 2315 UCUUCCCUCCCUAUCUUUG [2089-2107]
46 1737 UCUUCUGACACUAAAACAA 2316 UUGUUUUAGUGUCAGAAG [1853-1871]
46 1738 CUUCUGACACUAAAACACA 2317 UGUGUUUUAGUGUCAGAA [1854-1872]
47 1739 UCACGUGGAGCCUCUCGAA 2318 UUCGAGAGGCUCCACGUGA [1048-1066]
47 1740 CAGUCCAUCAACGAGUGGA 2319 UCCACUCGUUGAUGGACUG Rh,Rt,M [740-758]
47 1741 AGACCAAAUUGAGCUAGGA 2320 UCCUAGCUCAAUUUGGUCU [1820-1838]
47 1742 GGGUUCCCGUGUGCCUGAA 2321 UUCAGGCACACGGGAACCC Rh [1619-1637]
47 1743 UUGCUAUCAAUCCAAGAAA 2322 UUUCUUGGAUUGAUAGCAA Rh [2125-2143]
47 1744 CAACCGUGGCUUCAUGGUA 2323 UACCAUGAAGCCACGGUUG Rh,Rt,M [889-907]
47 1745 CUGUACGGACCCAGCUCAA 2324 UUGAGCUGGGUCCGUACAG [629-647]
47 1746 CAGCAGCAAGCAGCACUAA 2325 UUAGUGCUGCUUGCUGCUG Rh，D [673-691]
47 1747 CCUGCAGCCGCAGCAGCUA 2326 UAGCUGCUGCGGCUGCAGG [299-317]
47 1748 GACACUAAAACACCUCAGA 2327 UCUGAGGUGUUUUAGUGUC [1859-1877]
48 1749 CAACUGCGAGCACUCCAAA 2328 UUUGGAGUGCUCGCAGUUG Rh，D [691-709]
48 1750 ACUGCGGAGAAGUUGAGCA 2329 UGCUCAACUUCUCCGCAGU [323-341]
48 1751 GCGCCCUGCUAGUCAACGA 2330 UCGUUGACUAGCAGGGCGC Rh [819-837]
48 1752 GGAAGCUGGGCAGCCGACA 2331 UGUCGGCUGCCCAGCUUCC [612-630]
48 1753 AGGCUCCUGAGACACAUGA 2332 UCAUGUGUCUCAGGAGCCU D [1525-1543]
48 1754 CGACAAGCGCAGCGCGCUA 2333 UAGCGCGCUGCGCUUGUCG [721-739]
48 1755 UCAGUGAGCUUCGCUGAUA 2334 UAUCAGCGAAGCUCACUGA [644-662]
48 1756 UUGAGAAGGAGCUCCCAGA 2335 UCUGGGAGCUCCUUCUCAA [1979-1997]
48 1757 ACUGCGAGCACUCCAAGAA 2336 UUCUUGGAGUGCUCGCAGU Rh，D [693-711]
48 1758 CAUCCUGGUGUCACCCGUA 2337 UACGGGUGACACCAGGAUG [427-445]
49 1759 GUGCGCAGCAGCAAGCAGA 2338 UCUGCUUGCUGCUGCGCAC Rh，D [668-686]
49 1760 CACGCCACCGCCUUUGAGA 2339 UCUCAAAGGCGGUGGCGUG Rh [1286-1304]
49 1761 UCUCGAGCGCCUUGAAAAA 2340 UUUUUCAAGGCGCUCGAGA [1060-1078]
49 1762 GCUUCGCUGAUGACUUCGA 2341 UCGAAGUCAUCAGCGAAGC Rh [651-669]
49 1763 UCUCCUUGCCCAAGGGUGA 2342 UCACCCUUGGGCAAGGAGA Rh [1140-1158]
49 1764 GCAGUCCAUCAACGAGUGA 2343 UCACUCGUUGAUGGACUGC Rh,Rt,M [739-757]
49 1765 AGAUGGUGGACAACCGUGA 2344 UCACGGUUGUCCACCAUCU Rh,M [879-897]
49 1766 CGGCUCCCUGCUAUUCAUA 2345 UAUGAAUAGCAGGGAGCCG [1420-1438]
49 1767 AUACCAUGAUGCUGAGCCA 2346 UGGCUCAGCAUCAUGGUAU [1684-1702]
49 1768 AGCCAGGUACCUUCUCACA 2347 UGUGAGAAGGUACCUGGCU Rh [1797-1815]
50 1769 GAGCCCGGAAACUCCACAA 2348 UUGUGGAGUUUCCGGGCUC [1697-1715]
50 1770 GCAGCUCCUGGCACUGCGA 2349 UCGCAGUGCCAGGAGCUGC [311-329]
50 1771 CCCGAGGUCACCAAGGACA 2350 UGUCCUUGGUGACCUCGGG Rh，D [785-803]
50 1772 CCUGACUGAGGCCAUUGAA 2351 UUCAAUGGCCUCAGUCAGG Rh [1204-1222]
50 1773 UGCUGAGCCCGGAAACUCA 2352 UGAGUUUCCGGGCUCAGCA [1693-1711]
50 1774 GCCAUCUCCUUGCCCAAGA 2353 UCUUGGGCAAGGAGAUGGC Rh [1136-1154]
50 1775 CAAGCAGCACUACAACUGA 2354 UCAGUUGUAGUGCUGCUUG Rh，D [679-697]
50 1776 CAAGGCAGUGCUGAGCGCA 2355 UGCGCUCAGCACUGCCUUG Rh [508-526]
50 1777 CAAUGACAUUUUGUUGGAA 2356 UUCCAACAAAAUGUCAUUG [2179-2197]
50 1778 AGUGAGCUUCGCUGAUGAA 2357 UUCAUCAGCGAAGCUCACU [646-664]
51 1779 AUGAUGAUGCACCGGACAA 2358 UUGUCCGGUGCAUCAUCAU Rh [932-950]
51 1780 GAAACACCUGGCUGGGCUA 2359 UAGCCCAGCCAGGUGUUUC D [1183-1201]

[1026]51 1781 CCUGCUAUUCAUUGGGCGA 2360 UCGCCCAAUGAAUAGCAGG D [1426-1444]
51 1782 CGCCACCGCCUUUGAGUUA 2361 UAACUCAAAGGCGGUGGCG Rh [1288-1306]
51 1783 GCUUCUCAGCGCCUUCUGA 2362 UCAGAAGGCGCUGAGAAGC [244-262]
51 1784 UGAUGCUGAGCCCGGAAAA 2363 UUUUCCGGGCUCAGCAUCA [1690-1708]
51 1785 UGACCUGGCCGCAGUGAGA 2364 UCUCACUGCGGCCAGGUCA [1956-1974]
51 1786 UGCAGAAACACCUGGCUGA 2365 UCAGCCAGGUGUUUCUGCA [1179-1197]
51 1787 GCAGUGCUGAGCGCCGAGA 2366 UCUCGGCGCUCAGCACUGC [512-530]
51 1788 CGGCGCGCAACGUGACCUA 2367 UAGGUCACGUUGCGCGCCG [594-612]
52 1789 AGUGCUGAGCGCCGAGCAA 2368 UUGCUCGGCGCUCAGCACU [514-532]
52 1790 ACAGGCCUCUACAACUACA 2369 UGUAGUUGUAGAGGCCUGU Rh,Rb,D, [947-965]
52 1791 GCAGCUGCGCGACGAGGAA 2370 UUCCUCGUCGCGCAGCUGC Rh，D [529-547]
52 1792 AUUGAGAAGGAGCUCCCAA 2371 UUGGGAGCUCCUUCUCAAU [1978-1996]
52 1793 CGCGCAGACCACCGACGGA 2372 UCCGUCGGUGGUCUGCGCG [760-778]
52 1794 CCUGUACCUGGCCAGCGUA 2373 UACGCUGGCCAGGUACAGG Rh [1264-1282]
52 1795 CUGAGCGGACCUUCCCAGA 2374 UCUGGGAAGGUCCGCUCAG Rh [1633-1651]
52 1796 GGCCUUCAGCUUGUACCAA 2375 UUGGUACAAGCUGAAGGCC [379-397]
52 1797 CACCCAAAGCGGCUCCCUA 2376 UAGGGAGCCGCUUUGGGUG [1411-1429]
52 1798 GCCAAGGACCAGGCAGUGA 2377 UCACUGCCUGGUCCUUGGC Rh [404-422]
53 1799 CUCAGGGUGCACACAGGAA 2378 UUCCUGUGUGCACCCUGAG [1490-1508]
53 1800 CGAGCUGCUGCGCUCACUA 2379 UAGUGAGCGCAGCAGCUCG Rh [565-583]
53 1801 GGCUGGGCCUGACUGAGGA 2380 UCCUCAGUCAGGCCCAGCC [1197-1215]
53 1802 CCGCAGCAGCUCCUGGCAA 2381 UUGCCAGGAGCUGCUGCGG [306-324]
53 1803 UGUGGGACCUGGGCCAUAA 2382 UUAUGGCCCAGGUCCCACA [1718-1736]
53 1804 AAGAUGCAGAAGAAGGCUA 2383 UAGCCUUCUUCUGCAUCUU Rh,Rt,M [1115-1133]
53 1805 CCACGGCGCGCAACGUGAA 2384 UUCACGUUGCGCGCCGUGG Rh [591-609]
53 1806 ACCUUCUCACCUGUGAGAA 2385 UUCUCACAGGUGAGAAGGU Rh [1805-1823]
53 1807 UGAAGAAACCUGCAGCCGA 2386 UCGGCUGCAGGUUUCUUCA [291-309]
53 1808 CAGCACUACAACUGCGAGA 2387 UCUCGCAGUUGUAGUGCUG Rh，D [683-701]
54 1809 GCGACAAGCGCAGCGCGCA 2388 UGCGCGCUGCGCUUGUCGC [720-738]
54 1810 UAGAAUUCACUCCACUUGA 2389 UCAAGUGGAGUGAAUUCUA Rh [1652-1670]
54 1811 GUGGAAAAACAGACCGGGA 2390 UCCCGGUCUGUUUUUCCAC [1603-1621]
54 1812 ACGUGGAGCCUCUCGAGCA 2391 UGCUCGAGAGGCUCCACGU [1050-1068]
54 1813 GGCGCGCAACGUGACCUGA 2392 UCAGGUCACGUUGCGCGCC [595-613]
54 1814 UGGACAACCGUGGCUUCAA 2393 UUGAAGCCACGGUUGUCCA Rh,M [885-903]
54 1815 CUAGUCAACGCCAUGUUCA 2394 UGAACAUGGCGUUGACUAG Rh [827-845]
54 1816 AGAAUGACCUGGCCGCAGA 2395 UCUGCGGCCAGGUCAUUCU [1952-1970]
54 1817 AGCUGCUGCGCUCACUCAA 2396 UUGAGUGAGCGCAGCAGCU Rh [567-585]
54 1818 CUCUAUCCCAACCUCUCCA 2397 UGGAGAGGUUGGGAUAGA Rh [1889-1907]
55 1819 GCGAGCUGCUGCGCUCACA 2398 UGUGAGCGCAGCAGCUCGC Rh [564-582]
55 1820 CGCAGCAGCAAGCAGCACA 2399 UGUGCUGCUUGCUGCUGCG Rh,D [671-689]
55 1821 GGCUGGGCUGGGCCUGACA 2400 UGUCAGGCCCAGCCCAGCC [1192-1210]
55 1822 UCUCCAGCCUCAUCAUCCA 2401 UGGAUGAUGAGGCUGGAG Rh,D,Rt, [1020-1038]
55 1823 CAACGCCAUGUUCUUCAAA 2402 UUUGAAGAACAUGGCGUUG Rh,Rb,P [832-850]
55 1824 UGGCACUGCGGAGAAGUUA 2403 UAACUUCUCCGCAGUGCCA [319-337]
55 1825 UUUGAGUUGGACACAGAUA 2404 UAUCUGUGUCCAACUCAAA [1298-1316]
55 1826 UGGGCGAGCUGCUGCGCUA 2405 UAGCGCAGCAGCUCGCCCA Rh [561-579]

[1027]55 1827 CUGCUAACCAAAGAGCAGA 2406 UCUGCUCUUUGGUUAGCAG [1079-1097]
55 1828 AACGUGACCUGGAAGCUGA 2407 UCAGCUUCCAGGUCACGUU [602-620]
56 1829 AUGACAUUUUGUUGGAGCA 2408 UGCUCCAACAAAAUGUCAU [2181-2199]
56 1830 CAGGAGGCAUCCAAAGGCA 2409 UGCCUUUGGAUGCCUCCUG [1511-1529]
56 1831 AUCUCCUUGCCCAAGGGUA 2410 UACCCUUGGGCAAGGAGAU Rh [1139-1157]
56 1832 UGGGAUGAGAAAUUCCACA 2411 UGUGGAAUUUCUCAUCCCA Rh [857-875]
56 1833 AAAGCUGCUAACCAAAGAA 2412 UUCUUUGGUUAGCAGCUUU [1075-1093]
56 1834 AGGAGGCAUCCAAAGGCUA 2413 UAGCCUUUGGAUGCCUCCU [1512-1530]
56 1835 CACCGCCUUUGAGUUGGAA 2414 UUCCAACUCAAAGGCGGUG Rh [1291-1309]
56 1836 CCAACUAUAAAACUAGGUA 2415 UACCUAGUUUUAUAGUUGG Rh [1906-1924]
56 1837 CAAGAAGCAUCGUGUCUGA 2416 UCAGACACGAUGCUUCUUG Rh [2022-2040]
56 1838 AGCAGCUGAAGAUCUGGAA 2417 UUCCAGAUCUUCAGCUGCU Rh，D [1092-1110]
57 1839 GCGCUCCCUCCUGCUUCUA 2418 UAGAAGCAGGAGGGAGCGC [232-250]
57 1840 UGCUAGUCAACGCCAUGUA 2419 UACAUGGCGUUGACUAGCA Rh [825-843]
57 1841 CGCCGAGCAGCUGCGCGAA 2420 UUCGCGCAGCUGCUCGGCG [523-541]
57 1842 CCGCGCAGACCACCGACGA 2421 UCGUCGGUGGUCUGCGCGG [759-777]
57 1843 UAGCCAGGUACCUUCUCAA 2422 UUGAGAAGGUACCUGGCUA Rh [1796-1814]
57 1844 UGCUUCUCAGCGCCUUCUA 2423 UAGAAGGCGCUGAGAAGCA [243-261]
57 1845 CUCCCUCCUGCUUCUCAGA 2424 UCUGAGAAGCAGGAGGGAG [235-253]
57 1846 CGCAGGCCAAGGCAGUGCA 2425 UGCACUGCCUUGGCCUGCG [501-519]
57 1847 GCAAGGCGACCACGGCGUA 2426 UACGCCGUGGUCGCCUUGC Rh [483-501]
57 1848 GCAGCCGCAGCAGCUCCUA 2427 UAGGAGCUGCUGCGGCUGC [302-320]

[1028] 表E：SERPINH1跨物种18+1聚体siRNA

[1029]

[1030]

[1031]

[1032]

[1033] 实施例10

[1034] 动物模型

[1035] 纤维化病状的模型系统

[1036] 可在预测动物模型中进行试验本发明的活性siRNA。肾纤维化的大鼠糖尿病和老化模型包括Zucker糖尿病肥胖(ZDF)大鼠、老化fa/fa(肥胖Zucker)大鼠、老化
Sprague-Dawley(SD)大鼠和GotoKakizaki(GK)大鼠；GK大鼠是源自Wistar大鼠的近亲品
系，选择用于自然发展NIDDM(II型糖尿病)。肾纤维化的诱导模型包括永久性单侧输尿管
梗阻(UUO)模型，这是在健康非糖尿病型动物中发生的急性间质纤维化模型；梗阻后几天
内肾纤维化发展。肾纤维化的另一诱导模型为5/6肾切除术。

[1037] 大鼠肝纤维化的两个模型为以假手术为对照的胆管结扎(BDL)和以橄榄油饲喂动物为对照的CCl4中毒，如以下参考中所述：Lotersztajn S等，Hepatic
Fibrosis:Molecular Mechanisms and Drug Targets.Annu Rev Pharmacol Toxicol.2004
年10月7日；Uchio K等，Down-regulation of connective tissue growth factor and
type I collagen mRNA expression by connective tissue growth factor antisense
oligonucleotide during experimental liver fibrosis.Wound Repair Regen.2004年
1-2月；12(1):60-6；Xu XQ等，Molecular classification of liver cirrhosis in a rat model by proteomics and bioinformatics Proteomics.2004年10月；4(10):3235-45。

[1038] 眼部瘢痕形成的模型在本领域中众所周知，例如herwood MB等，J Glaucoma.2004年10月;13(5):407-12.A new model of glaucoma filtering surgery in the rat；
Miller MH 等，Ophthalmic Surg.1989 年 5 月 ;20(5):350-7.Wound healing in an
animal model of glaucoma fistulizing surgery in the Rb；vanBockxmeer FM
等，Retina.1985年秋季- 冬季；5(4):239-52.Models for assessing scar tissue
inhibitors；Wiedemann P 等，J Pharmacol Methods.1984 年 8 月；12(1):69-78.
Proliferative vitreoretinopathy:the Rb cell injection model for screening of
antiproliferative drugs。

[1039] 以下出版物中描述了白内障模型：The role of Src family kinases incortical cataract formation.Zhou J,Menko AS.Invest Ophthalmol Vis Sci.2002年7
月;43(7):2293-300；Bioavailability and anticataract effects of a topical ocular
drug delivery system containing disulfiram and hydroxypropyl-beta-cyclodextrin
on selenite-treated rats.Wang S 等，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.
fcgi?cmd=Retrieve&db=pubm ed&dopt=Abstract&list uids=15370367Curr Eye Res.2004
年7月;29(1):51-8；和Long-term organ culture system to study the effects of UV-A
irradiation on lens transglutaminase.Weinreb O，Dovrat A.；Curr Eye Res.2004年
7月;29(1):51-8。

[1040] 在这些纤维化病状模型中试验表A-18和表A-19的化合物，其中发现所述化合物在治疗肝纤维化和其它纤维化病状中有效。

[1041] 青光眼模型系统

[1042] 例如以下所述在大鼠模型中对于视神经夹伤进行测试用于治疗或预防青光眼的本发明活性siRNA：Maeda等，“A Novel Neuroprotectant against Retinal Ganglion
Cell Damage in a Glaucoma Model and an Optic Nerve Crush Model in the
rat”,Investigative Ophthalmology and visual Science(IOVS)，2004年3月，45(3)851。
特别地，对于视神经横切，通过眶上入路暴露麻醉大鼠的眼窝视神经(ON)，切断脑膜并且通
过用镊子夹伤10s从筛状板横切ON中的所有轴突2mm。

[1043] 在该动物模型中试验本文公开的核酸分子并且结果显示这些siRNA化合物在治疗和/或预防青光眼中有效。

[1044] 大鼠视神经夹伤(ONC)模型：玻璃体内siRNA递送和滴眼剂递送

[1045] 对于视神经横切，通过眶上入路暴露麻醉大鼠的眼窝视神经(ON)，切断脑膜并且通过用镊子夹伤10s从筛状板横切ON中的所有轴突2mm。

[1046] 单独或于5μL体积中组合(10μg/μL)作为滴眼剂递送siRNA化合物。视神经夹伤(ONC)后立即向成年Wistar大鼠的一只或两只眼睛施用20μg/10μl测试siRNA或
10μl PBS并确定注射后5h和第1天，和之后第2天、第4天、第7天、第14天和第21天整
个解剖速冻视网膜中摄取的siRNA水平。进行类似实验以测试通过滴眼剂施用的siRNA的
活性和功效。

[1047] 大鼠肺移植后缺血再灌注损伤的模型系统

[1048] 如Mizobuchi等，The Journal of Heart and Lung Transplantation，第23卷第7期(2004)和Kazuhiro Yasufuku等，Am.J.Respir.Cell Mol Biol，第25卷，第26-34页
(2001)中所述在大鼠动物模型中获得肺缺血/再灌注损伤。

[1049] 特别地，用异氟烷诱导麻醉后，将14号Teflon导管插入气管并且用啮齿动呼吸器，使用100%氧气，以70次呼吸/min的速率和2cmH2O的呼气末正压为大鼠机械换气。用
Castaneda钳封闭左肺动脉、静脉和主支气管。手术期间，用盐水保持肺部湿润并且覆盖切
口以最小化蒸发损失。缺血期长达60min。在缺血期结束时，去除钳并使肺部换气并且在诱
导肺部缺血后再灌注4h、24h和5天。试验结束时，轻轻取下肺脏并冷冻用于RNA提取或固
定于戊二醛混合物中用于后续组织学分析。

[1050] 作为特发性肺纤维化(IPF)模型的博莱霉素动物模型

[1051] 测试通过静脉内注射维生素A-Coatsome配制的siRNA和气管内施用siRNA-维生素A-Coatsome复合物至健康小鼠和博来霉素处理的小鼠体内的肺部和肝脏递送的可行性

[1052] 目的：为了测试维生素A-Coatsome配制的siRNA递送至正常和纤维化小鼠肺部的两种施用途径的可行性。当前研究中测试的主要假设是全身性施用维生素A-Coatsome配
制的经修饰siRNA在纤维化和正常小鼠肺部中是否提供有效摄取和细胞特异性分布。平行
测试维生素A-Coatsome配制的经修饰siRNA的气管内途径。将通过原位杂交(ISH进行肺
和肝脏中的siRNA检测和细胞特异性分布。

[1053] 背景：在过去三十余年间，已经将肺纤维化的博来霉素模型研究和表征清楚(Moeller等，Int J Biochem Cell Biol,40:362-382,2008；Chua等，Am J Respir Cell
Mol Biol 33:9-13,2005)。与IPF患者相似，在BLM处理的动物中存在组织学特点，例如
肺泡内芽、腔壁并入胶原和肺泡腔消失。早期研究证明C57/Bl小鼠始终倾向于BLM诱导
的肺纤维化，而Balb/C小鼠遗传有耐受性。根据施用途径的不同，发展成不同纤维化模
式。BLM的气管内滴注引起支气管中心性加强型纤维化，而静脉内或腹膜内施用诱导与人
类疾病相似的胸膜下瘢痕形成(Chua等，如上)。使用普通型间质性肺炎(UIP)的小鼠
模型。这种模型显示纤维增生不均匀分布，主要分布于腹膜下，形成与在特发性肺纤维化
(IPF)患者的肺部中观察到的相似损害(Onuma等，Tohoku J Exp Med 194:147-156,2001
和Yamaguchi和Ruoslahti，Nature 336:244-246,1988)。将通过每隔一天经腹膜内注射
博来霉素7天来诱发UIP，使小鼠肺部中腹膜下纤维增生组成恒定(Swiderski等，Am J
Pathol 152:821-828,1998和Shimizukawa等，Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol
284:L526-L532,2003)。

[1054] 正如先前证明的，含有siRNA的微生物A载脂质体与视黄醇结合蛋白(RBP)相互作用并且通过RBP受体向肝细胞星状细胞提供有效递送(Sato等Nat Biotechnol
26:431–442,2008)。这项研究经计划以测试维生素A-Coatsome-siRNA复合物是否被博来
霉素处理的小鼠的肺部中表达RBP受体的激活肌成纤维细胞有效摄取。另外，将测试局部
施用途径(气管内滴注)。

[1055] 一般研究设计

[1056] 小鼠-C57Bl雄性

[1057] 起始数目(BLM I.P.)–40(第一试验组为6只，研究使用34只，考虑到预期25%死亡率)

[1058] 起始数目(总计)–60

[1059] 试验siRNA：本文公开的SERPINHI化合物

[1060] 组：

[1061]

[1062] 博来霉素诱导的肺纤维化。将通过腹膜内滴注博来霉素氯酸盐诱导12周龄雌性C57BL/6小鼠的肺纤维化：0.75mg/kg体重溶解于0.1ml盐水中，在第0、2、4和6天，每隔一
天腹膜内滴注7天。

[1063] 模型跟踪和监测。BLM处理之前为小鼠称重，并且在研究持续期间每周称重两次。

[1064] 纤维化建立的初步评估。将小鼠(N=30)分组进行BLM处理，以允许首次处理组(N=5)和其余动物之间一周的时间间隔。在第14天，处死第1组的两只小鼠，并取出肺脏进
行快速HE染色和纤维化的迅速组织病理学评估。当确认肺纤维化时，将剩余大鼠分组并且
在首次BLM处理后第14天用siRNA处理。如果到第14天肺部中无足够纤维化发展，在第
21天处死首次处理组的剩余小鼠，然后进行纤维化的迅速组织病理学评估。从BLM处理后
第21天开始用试验siRNA复合物处理其余动物。

[1065] siRNA施用。在首次BLM施用后第14天或第21天(研究期间TBD，基于纤维化建立的初步评估)，根据BW将动物分组。为来自第1组和第2组的动物经静脉内(尾静脉注
射)按4.5mg/kg BW的siRNA浓度施用siRNA/维生素A/Coatsome复合物。以相同方式处
理同龄原样动物(第5组和第6组)。BLM处理的动物(第9组)将用作维生素A-coatsome
媒介物对照。24h内，向以上所有动物重复注射。

[1066] 用异氟烷麻醉来自第3组和第4组的BLM动物和来自第7组和第8组的原样小鼠并进行气管内滴注2.25mg/kg BW配制于维生素A载脂质体中的siRNA。仅为来自BLM组
10的小鼠施用维生素A/Coatsome媒介物。24h后重复气管内滴注。

[1067] 研究结束。在第二次注射或滴注siRNA复合物后2h处死来自第1、3、5、7、9组的动物。在第二次注射或滴注siRNA复合物后24h处死来自第2、4、6、8、10组的动物。

[1068] 一旦处死动物，为小鼠心脏灌注10%中性缓冲福尔马林。用0.8-1.0ml的10%NBF为肺部充气，并且进行气管结扎。切除肺部并固定于10%NBF中24h。从每只动物取出肝脏
并固定于10%NBF中24h。

[1069] 切片和评估。由肺部和肝脏制备顺向切片。用苏木精和伊红为第一顺向切片染色以评价肺部和肝脏形态，用天狼星红(三色)为第二顺向切片染色以鉴定胶原。第三个顺
向切片进行原位杂交(ISH)以检测siRNA。

[1070] 在这种动物模型中试验本文所述的化合物并且结果显示这些siRNA化合物在治疗和/或预防肺移植后缺血再灌注损伤中有用。

[1071] 表1

[1072] siRNA序列表

[1073]

[1074]

[1075]

[1076]

[1077] 以特别单独指出每个单独的出版物通过引用并入的相同程度特此通过引用将论文、专利和专利申请和本文提及或引用的其它文件和可用电子形式得到的信息的内容整体
并入。

[1078] 申请人保留将来自任何这种论文、专利、专利申请或其它实体和电子文件的任何全部材料和信息实体并入本申请中的权利。

[1079] 本领域中的技术人员显而易见，在不脱离本发明的范围和精神的情况下可对本文公开的发明进行不同替换和修改。因此，这些另外的实施方案在本发明和以下权利要求的
范围内。本发明教本领域的技术人员试验本文所述化学修饰的各种组合和/或替换，以生
成介导RNAi活性的活性增强的核酸构建体。这种活性增强可包括稳定性增强、生物利用率
提高和/或介导RNAi的细胞反应的激活增强。因此，本文所述的特殊实施方案并非限制
性并且本领域中的技术人员可易于意识到，无需过度实验就可测试本文所述修饰的特定组
合，以鉴定RNAi活性增强的核酸分子。

[1080] 本文说明性描述的发明可能适合在本文未特别公开的任何元素、限制缺乏下实施。因此，除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，例如，术语“一个”、“一种”和“该”以及在描述本发明的上下文中(特别是在以下权利要求的上下文中)的类似指示物要解释为包
括单数和复数。术语“包含”、“具有”、“包括”、“含有”等应广义上理解并且不受限制(例如，含意“包括，但不限于”)。除非本文另外指出，本文中对值范围的叙述仅仅旨在用作单独提到每个落入范围内的单独值的简记方法，并且将每个单独值并入说明书中，犹如本文单独
引用每个单独值。除非本文另外指出或与上下文明显矛盾，可按任何适合顺序进行本文所
述的所有方法。本文提供的任何所有实例或示例性语言(例如，“例如”)的用途仅仅旨在
更好地阐明本发明，除非另外要求并未造成对本发明范围的限制。不得将说明书中的语言
解释为指示任何非要求元素为本发明实践所必需。另外，本文采用的术语和表达式已用作
描述而非限制性术语，并且不打算将这些术语和表达式用于将所示和所述特征的任何等价
物或其一部分排除在外，但应认识到各种修改可能在要求的发明范围内。因此，应理解虽然
已通过优选的实施方案和任选特征特别公开了本发明，但是本文公开的其中具体化的本发
明的修改和变型为本领域中的技术人员所采取，并且认为这些修改和变型在本发明的范围
内。

[1081] 本文广泛且一般性地描述了本发明。属于类属公开的每个狭域物种和亚属分组也形成本发明的一部分。这包括本发明的类属描述，有从属中除去任何受试物质的附带条款
或负面限制，而不管本文是否特别引用切除材料。其它实施方案在以下权利要求中。另外，
按照马库西群组描述本发明的特征或方面时，本领域中的技术人员将认识到由此还根据马
库西群组的单独成员或成员亚组描述本发明。

标题	发布/更新时间	阅读量
用于增强对HSP47 表达的调节的类视黄醇-脂质体	2020-05-19	719
用于生物阻抗测量装置的电极、以及在透析期间使用的装置	2020-05-17	689
在疾病治疗中乙酰透明质酸合成的调节和降解	2020-05-26	484
用于生物阻抗测量装置的电极、以及在透析期间使用的装置	2020-05-16	875
减少或防止腹膜透析治疗期间血管钙化的方法和组合物	2020-05-15	693
作为CXC－化学活素受体配体的二取代的二唑	2020-05-24	854
闭式灭菌连接器	2020-05-12	383
作为CXC趋化因子受体配体的3,4－二取代环丁烯－1,2－二酮	2020-05-22	218
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持续性不卧床腹膜透析管	2020-05-11	509

HSP47表达的调节

HSP47表达的调节

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