具有生物活性的土槿皮酸复合物及其制备方法
阅读：878发布：2023-01-21
专利汇可以提供具有生物活性的土槿皮酸复合物及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种具有 生物 活性的土槿皮酸复合物及其制备方法，本发明的土槿皮 酸化 合物与具有 碱 性的抗病毒药、抗 真菌 药、抗 肿瘤 药形成复合物、组合物制剂及其制备方法，该土槿皮酸复合物比土槿皮酸类化合物在 水 溶性、 稳定性 以及 治疗 病毒感染 、真菌感染以及抗肿瘤治疗方面作用更为突出，且刺激性和毒性更轻微。，下面是具有生物活性的土槿皮酸复合物及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：含有式（I）所示化合物的药用复合物，其中R各自独立地为CH3或COOCH3，R= CH3，土槿甲酸；
R= COOCH3，土槿乙酸；
。
2.根据权利要求1所述的具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：所述式（I）中B表示吗啉胍、金刚烷胺、阿糖胞苷、苦参碱、克霉唑、舍他康唑、喜树碱或长春新碱及其衍生物。
3.根据权利要求1所述的具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：所述土槿皮酸复合物与其它在药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物制剂，其剂型是药剂学上所说的如下剂型：包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入剂、口服液、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、巴布剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、栓剂、缓释制剂、控释制剂。
4.根据权利要求3所述的具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：所述土槿皮酸与呈碱性的抗病毒药、抗真菌药及抗肿瘤药物化合物单体形成的复合物与填充剂、崩解剂组方配制的片剂或胶囊剂；或者是土槿皮酸及土槿皮酸与具有碱性的抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤药物单体形成的药用复合物与填充剂、羟丙甲纤维素K4M组配的缓释片剂或胶囊剂；或者是土槿皮酸复合物分散于油相中得到土槿皮酸复合物软胶囊；或者是土槿皮酸复合物与增溶剂或助溶剂形成的注射剂；或者是土槿皮酸复合物形成的注射用冻干粉针；或者是土槿皮酸复合物分散于油相中得到的注射用乳剂，或者是混悬型注射液，所述的混悬型注射液是将土槿皮酸复合物微粉和吐温80混研后，溶解到含磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、尼泊金酯和羧甲基纤维素钠的水溶液，经研磨制得。
5.根据权利要求4所述的具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：所述填充剂是蔗糖、乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉、碳酸钙或磷酸钙；所述的崩解剂是羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠；所述的油相是大豆油、花生油、棉子油、聚乙二醇400、麻油、橄榄油或玉米油；在所述的油相中可以加入增溶剂或助溶剂或抗氧化剂。
6.根据权利要求4或5所述的具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：所述增溶剂是聚氧乙烯醚蓖麻油、聚山梨酯、普流罗尼克；所述的助溶剂是精氨酸、赖氨酸、复合氨基酸、鸟氨酸、组氨酸、色氨酸、去乙酰壳聚糖、Na2HPO4、葡甲胺、二乙胺、三乙胺、尿素、普鲁卡因、月桂胺、氨基葡萄糖、烟酰胺、脯氨酸、柠檬酸及其钠盐、钾盐。
7.根据权利要求1或2所述的具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：所述土槿皮酸复合物具有生物活性，具有生物活性的土槿皮酸复合物在治疗病毒感染性疾病、治疗真菌感染性疾病、治疗肿瘤疾病中的应用。
8.根据权利要求3~6所述的具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：所述土槿皮酸复合物的药物组合物制剂具有生物活性，具有生物活性的土槿皮酸复合物的药物组合物制剂在治疗病毒感染性疾病、治疗真菌感染性疾病、治疗肿瘤疾病中的应用。
9.一种土槿皮酸复合物的制备方法，其特征在于：土槿皮酸与呈碱性的抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤化合物药物单体或其他碱性化合物以1：0.1～5.0的摩尔比例，在水和/或醇等有机溶剂中反应。
10.根据权利要求9所述土槿皮酸复合物的制备方法，其特征在于：所述土槿皮酸以1：
0.1～5.0的摩尔比例，与吗啉胍或金刚烷胺或阿糖胞苷或克霉唑或舍他康唑或喜树碱及其衍生物或长春新碱及其衍生物反应。
具有生物活性的土槿皮酸复合物及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及中药制药领域，具体地说涉及以土槿皮酸为主要活性成分的复合物制备和以该化合物复合物为活性成分的药物组合物的制备及其制剂，以及该药物组合物在治疗病毒感染性疾病、真菌感染性疾病以及肿瘤疾病中的应用。
背景技术
[0002] 土槿皮，又名土荆皮、金钱松、水松皮、荆树皮，来源于松科植物金钱松（pseudolarix amabilis（Nelson）Regd [p．kaempferi Gord]的根皮和近根树皮。最早见于清代赵学敏所著《本革纲目抬遗》，性辛、温，有毒、止痒杀虫，用于治疗癣症；其具有抗真菌、抗肿瘤、抗生育、使胆囊自截等作用。植化研究发现，土槿皮含有二萜类、三萜类、三萜内酯及甾醇类等成份。1960年从土槿皮中分离出土槿酸，经硅胶层析可进一步分离得到土槿甲酸、土槿乙酸、土槿丙酸以及土槿皮酸的降解产物等成分。研究显示土槿皮酸有显著的抗肿瘤、抗真菌等作用，特别是土槿甲酸、土槿乙酸具有抗新生血管形成的独特作用，与现有抗肿瘤药物相比，使其具有特殊优势。但是，土槿甲酸、土槿乙酸化合物用于抗肿瘤和抗真菌治疗时，单独使用疗效依然有待提高。将土槿皮酸化合物与具有碱性的抗肿瘤药或抗病毒药或抗真菌药制成复合物用于疾病的治疗，可显著提高疗效，减少给药剂量，降低药物不良反应发生率，提高治疗安全性。特别是将土槿皮酸化合物与具有碱性的常用抗肿瘤药制成复合物，不仅可发挥碱性抗肿瘤药的直接抗肿瘤作用，同时，由于土槿皮酸可显著抑制肿瘤组织血管生成，因而可在不同途径产生抗肿瘤作用，显著提高疗效。
发明内容
[0003] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提出了一类新颖的以土槿皮酸化合物与具有碱性的抗肿瘤药、抗病毒药、抗真菌药形成药用复合物的制备方法，及其各种药物组合物制剂，该类药物制剂可用于抗病毒、抗真菌以及抗肿瘤的治疗。
[0004] 为达上述目的，本发明的一种含恩丹西酮的口服液体缓释制剂，采用以下的技术方案：一种具有抗病毒、抗真菌感染以及抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，其特征在于：含有式（I）所示化合物的药用复合物，其中R各自独立地为CH3或COOCH3。R= CH3，土槿甲酸；R= COOCH3，土槿乙酸；
式（I）中B表示吗啉胍、金刚烷胺、阿糖胞苷、苦参碱、克霉唑、舍他康唑、喜树碱或长春新碱及其衍生物。
式（I）中B表示吗啉胍、金刚烷胺、阿糖胞苷、苦参碱、克霉唑、舍他康唑、喜树碱或长春新碱及其衍生物。
[0005] 进一步，所述土槿皮酸复合物与其它在药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物制剂，其剂型是药剂学上所说的如下剂型：包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入剂、口服液、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、巴布剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、栓剂、缓释制剂、控释制剂。
[0006] 进一步，所述土槿皮酸与呈碱性的抗病毒药、抗真菌药及抗肿瘤药物化合物单体形成的复合物与填充剂、崩解剂组方配制的片剂或胶囊剂；或者是土槿皮酸及土槿皮酸与具有碱性的抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤药物单体形成的药用复合物与填充剂、羟丙甲纤维素K4M组配的缓释片剂或胶囊剂；或者是土槿皮酸复合物分散于油相中得到土槿皮酸复合物软胶囊；或者是土槿皮酸复合物与增溶剂或助溶剂形成的注射剂；或者是土槿皮酸复合物形成的注射用冻干粉针；或者是土槿皮酸复合物分散于油相中得到的注射用乳剂，或者是混悬型注射液，所述的混悬型注射液是将土槿皮酸复合物微粉和吐温80混研后，溶解到含磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、尼泊金酯和羧甲基纤维素钠的水溶液，经研磨制得。
[0007] 进一步，所述填充剂是蔗糖、乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉、碳酸钙或磷酸钙；所述的崩解剂是羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠；所述的油相是大豆油、花生油、棉子油、聚乙二醇400、麻油、橄榄油或玉米油；在所述的油相中可以加入增溶剂或助溶剂或抗氧化剂。
[0008] 进一步，所述增溶剂是聚氧乙烯醚蓖麻油、聚山梨酯、普流罗尼克；所述的助溶剂是精氨酸、赖氨酸、复合氨基酸（精氨酸＋赖氨酸）、鸟氨酸、组氨酸、色氨酸、去乙酰壳聚糖、Na2HPO4、葡甲胺、二乙胺、三乙胺、尿素、普鲁卡因、月桂胺、氨基葡萄糖、烟酰胺、脯氨酸、柠檬酸及其钠盐、钾盐。
[0009] 进一步，所述土槿皮酸复合物具有生物活性，具有生物活性的土槿皮酸复合物在治疗病毒感染性疾病、治疗真菌感染性疾病、治疗肿瘤疾病中的应用。
[0010] 进一步，所述土槿皮酸复合物的药物组合物制剂具有生物活性，具有生物活性的土槿皮酸复合物的药物组合物制剂在治疗病毒感染性疾病、治疗真菌感染性疾病、治疗肿瘤疾病中的应用。
[0011] 一种土槿皮酸复合物的制备方法，将土槿皮酸与呈碱性的抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤化合物药物单体或其他碱性化合物以1:0.1~5.0的摩尔比例，在水和/或醇等有机溶剂中反应。
[0012] 进一步，所述土槿皮酸以1:0.1~5.0的摩尔比例，与吗啉胍或金刚烷胺或阿糖胞苷或克霉唑或舍他康唑或喜树碱及其衍生物或长春新碱及其衍生物反应。
[0013] 土槿皮酸具有显著的生物活性，但是由于水溶性较差，临床应用十分不便，因此如何解决其水溶性是对其研究的重点之一。另外，作为一种药物，如何能在提高其水溶性的同时，提高其稳定性、安全性和有效性是新药开发的关键。本发明采用土槿皮酸与抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤药或对维持其生物活性有益的碱性物质形成复合物，与其它土槿皮酸盐或复合物有明显不同，不仅其生物活性不亚于土槿皮酸化合物以及其它土槿皮酸化合物的复合物（特别是以土槿皮酸吗啉胍复合物、土槿皮酸金刚烷胺复合物、土槿皮酸喜树碱复合物作用尤为明显），实验结果显示，本发明复合物的抗病毒、抗真菌、抗肿瘤作用更为明显，同时毒性试验结果显示本发明复合物刺激性小、毒性低，有较高的新药开发价值。
[0014] 本发明所要解决的技术问题可以通过以下的技术方案进一步实现。除了提供上述具有显著抗病毒、抗真菌、抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，还提供了在药学上可接受的药物载体混合形成的药物组合物制剂。上述药学上可接受的载体是指药学领域的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂以及水等；填充剂如淀粉、蔗糖、乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、琼脂和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如聚山梨酯、甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季胺化合物；表面活性剂如十六烷醇、十二烷基磺酸钠；吸收载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸镁和钙、微粉硅胶和聚乙二醇等；香味剂、甜味剂等。
[0015] 本发明所要解决的技术问题可以通过以下的技术方案进一步实现。以上述药物组合物制剂，其特点是，所述的药物组合物可以用来治疗病毒、真菌等感染性疾病，也可以用于抗肿瘤治疗。
[0016] 本发明的药用组合物优选含有重量比为0.1~99.9%的土槿皮酸复合的活性成分，最优选含有重量比为40~95％的土槿皮酸复合物的活性成分。
[0017] 本发明提供的土槿皮酸复合物及药用组合物剂量可根据用药途径、患者个体差2
异、临床用途以及疾病的严重程度等变化进行适当调整，其每日剂量为0.01mg~1000mg/m
2
体表面积，优选每日剂量为0.1mg~200mg/m 体表面积，可以一次或分多次使用。
异、临床用途以及疾病的严重程度等变化进行适当调整，其每日剂量为0.01mg~1000mg/m
2
体表面积，优选每日剂量为0.1mg~200mg/m 体表面积，可以一次或分多次使用。
具体实施方式
[0018] 为能进一步了解本发明的特征、技术手段以及所达到的具体目的、功能，解析本发明的优点与精神，藉由下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅供解释说明所用，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。
[0019] 本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：具有抗病毒、抗真菌、抗肿瘤活性的土槿皮酸复合物，该土槿皮酸复合物是具有通式（ I ）的土槿皮酸类化合物的药用复合物。
[0020] 式（ I ）中B表示具有碱性的抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤化合物药物单体或其它碱性化合物。
[0021] 上述B表示吗啉胍、金刚烷胺、阿糖胞苷、苦参碱或喜树碱及其衍生物、长春新及其碱衍生物。
[0022] 土槿皮酸复合物的制备方法，将土槿皮酸与呈碱性的抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤化合物药物单体或其他碱性化合物以1：0.1～5.0的摩尔比例，在水和/或醇等有机溶剂中反应。
[0023] 最优化，将土槿皮酸以1：0.1～5.0的摩尔比例，与吗啉胍或金刚烷胺或阿糖胞苷或苦参碱或喜树碱及其衍生物或长春新碱及其衍生物反应。
[0024] 具有抗病毒、抗真菌、抗肿瘤活性土槿皮酸复合物的药物组合物制剂，它是土槿皮酸复合物与其它在药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物制剂，其剂型是药剂学上所说的如下剂型：包括片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊、喷雾剂、凝胶剂、凝胶吸入剂、口服液、混悬剂、冲剂、贴剂、软膏、丸剂、散剂、巴布剂、注射剂、输液剂、冻干注射剂、脂质体注射剂、靶向给药注射剂、栓剂、缓释制剂、控释制剂。
[0025] 上述的药物组合物制剂，它是土槿皮酸与呈碱性的抗病毒药、抗真菌药及抗肿瘤药物化合物单体形成的复合物与填充剂、崩解剂组方配制的片剂或胶囊剂；或者是土槿皮酸及土槿皮酸与呈碱性的抗病毒药、抗真菌药、抗肿瘤药物单体形成的药用复合物与填充剂、羟丙甲纤维素K4M组配的缓释片剂或胶囊剂；或者是土槿皮酸复合物分散于油相中得到土槿皮酸复合物软胶囊；或者是土槿皮酸复合物与增溶剂或助溶剂形成的注射剂；或者是土槿皮酸复合物形成的注射用粉针剂；或者是土槿皮酸复合物分散于油相中得到的注射用乳剂，或者是混悬型注射液，所述的混悬型注射液是将土槿皮酸复合物微粉和吐温80混研后，溶解到含磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、尼泊金酯和羧甲基纤维素钠的水溶液，经研磨制得。
[0026] 上述的药物组合物制剂，所述填充剂是蔗糖、乳糖、微晶纤维素、糊精、淀粉、碳酸钙或磷酸钙；所述的崩解剂是羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠；所述的油相是大豆油、花生油、棉子油、聚乙二醇400、麻油、橄榄油或玉米油；在所述的油相中可以加入增溶剂或助溶剂或抗氧化剂。
[0027] 上述的药物复合物制剂，所述增溶剂是聚氧乙烯醚蓖麻油、聚山梨酯、普流罗尼克；所述的助溶剂是精氨酸、赖氨酸、复合氨基酸（精氨酸＋赖氨酸）、鸟氨酸、组氨酸、色氨酸、去乙酰壳聚糖、Na2HPO4、葡甲胺、二乙胺、三乙胺、尿素、普鲁卡因、月桂胺、氨基葡萄糖、烟酰胺、脯氨酸、柠檬酸及其钠盐、钾盐。
[0028] 所述具有生物活性的土槿皮酸复合物在治疗病毒感染性疾病中的应用，在治疗真菌感染性疾病中的应用，在治疗肿瘤疾病中的应用。
[0029] 所述具有生物活性的土槿皮酸复合物的药物组合物制剂在治疗病毒感染性疾病中的应用、在治疗真菌感染性疾病中的应用、在治疗肿瘤疾病中的应用。
[0031] 实施例2：土槿乙酸酸金刚烷胺复合物的制备：
取土槿乙酸10g置于适宜容器中，加水，加入金刚烷胺8g，室温搅拌20min 至溶解，减压冷冻干燥，得黄色蓬松固体18g。
取土槿乙酸10g置于适宜容器中，加水，加入金刚烷胺8g，室温搅拌20min 至溶解，减压冷冻干燥，得黄色蓬松固体18g。
[0032] 实施例3：土槿乙酸喜树碱复合物的制备：
取土槿乙酸30g置于适宜容器中，加水，加入喜树碱12g，室温搅拌60min 至溶解，减压冷冻干燥，得浅黄色蓬松固体42g。
取土槿乙酸30g置于适宜容器中，加水，加入喜树碱12g，室温搅拌60min 至溶解，减压冷冻干燥，得浅黄色蓬松固体42g。
[0033] 实施例4：土槿甲酸羟基喜树碱复合物的制备：
取土槿甲酸5g置于适宜容器中，加水，加入羟基喜树碱5g，室温搅拌45min 至溶解，减压冷冻干燥，得乳黄色蓬松固体10g。
取土槿甲酸5g置于适宜容器中，加水，加入羟基喜树碱5g，室温搅拌45min 至溶解，减压冷冻干燥，得乳黄色蓬松固体10g。
[0034] 实施例5：土槿乙酸长春新碱复合物的制备：
取土槿乙酸18g置于适宜容器中，加水，加入长春新碱12g，室温搅拌30min 至溶解，减压冷冻干燥，得浅棕色蓬松固体30g。
取土槿乙酸18g置于适宜容器中，加水，加入长春新碱12g，室温搅拌30min 至溶解，减压冷冻干燥，得浅棕色蓬松固体30g。
[0035] 实施例6：土槿乙酸长春花碱复合物的制备：
取土槿乙酸20g置于适宜容器中，加水，加入长春花碱16g，室温搅拌40min 至溶解，减压冷冻干燥，得棕黄色蓬松固体30g。
取土槿乙酸20g置于适宜容器中，加水，加入长春花碱16g，室温搅拌40min 至溶解，减压冷冻干燥，得棕黄色蓬松固体30g。
[0036] 实施例7：土槿甲酸舍他康唑复合物的制备：
取土槿甲酸8g置于适宜容器中，加水，加入舍他康唑40g，室温搅拌30min 至溶解，减压冷冻干燥，得乳白色蓬松固体48g。
取土槿甲酸8g置于适宜容器中，加水，加入舍他康唑40g，室温搅拌30min 至溶解，减压冷冻干燥，得乳白色蓬松固体48g。
[0037] 实施例8：土槿乙酸克霉唑复合物的制备：
取土槿乙酸酸6g置于适宜容器中，加水，加入克霉唑0.6g，室温搅拌30min 至溶解，减压冷冻干燥，得乳黄色蓬松固体6.6g。
取土槿乙酸酸6g置于适宜容器中，加水，加入克霉唑0.6g，室温搅拌30min 至溶解，减压冷冻干燥，得乳黄色蓬松固体6.6g。
[0038] 实施例9：土槿甲酸吗啉胍复合物粉针剂的制备：
取实施例1复合物20g置于适宜容器中，加注射用水约1800mL，加入甘露醇20g搅拌混匀，再加注射用水至2000mL，用0.22µm微孔滤膜过滤，无菌环境中分装于10mL青霉素瓶中，每瓶10mL，部分塞上丁橡胶塞，装盘，置于冻干机中，插入共晶点及温度探头，关闭箱门，启动冻干机，利用导热油对板层制冷，使晶温下降。当晶温达到共晶点（约－27℃）后，继续制冷，当晶温达到－35℃时，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达到－45℃时，开启真空系统，开启升温升华至干燥，最后干燥温度为35℃，停机，密塞，放气，出箱，扎盖，即得。
取实施例1复合物20g置于适宜容器中，加注射用水约1800mL，加入甘露醇20g搅拌混匀，再加注射用水至2000mL，用0.22µm微孔滤膜过滤，无菌环境中分装于10mL青霉素瓶中，每瓶10mL，部分塞上丁橡胶塞，装盘，置于冻干机中，插入共晶点及温度探头，关闭箱门，启动冻干机，利用导热油对板层制冷，使晶温下降。当晶温达到共晶点（约－27℃）后，继续制冷，当晶温达到－35℃时，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达到－45℃时，开启真空系统，开启升温升华至干燥，最后干燥温度为35℃，停机，密塞，放气，出箱，扎盖，即得。
[0039] 实施例10：土槿乙酸克霉唑复合物片剂的制备：
取实施例8复合物过160目筛，微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10%淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱干燥，干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁混匀，压片，即得。
取实施例8复合物过160目筛，微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10%淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱干燥，干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁混匀，压片，即得。
[0040] 实施例11：土槿乙酸长春新碱复合物胶囊剂的制备：
取实施例5复合物过160目筛，微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10%淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱干燥，干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁和微粉硅胶混匀，灌装于胶囊中，即得。
取实施例5复合物过160目筛，微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠分别过100目筛，将复合物与上述辅料混合均匀，以10%淀粉浆为粘合剂制软材，过20目筛制颗粒，湿颗粒于50℃烘箱干燥，干颗粒过20目筛整粒，与硬脂酸镁和微粉硅胶混匀，灌装于胶囊中，即得。
[0041] 实施例12：土槿乙酸金刚烷胺复合物粉针剂的制备：
取实施例2复合物20g置于适宜容器中，加注射用水约1800mL，加入甘露醇20g搅拌混匀，再加注射用水至2000mL，用0.22µm微孔滤膜过滤，无菌环境中分装于10mL青霉素瓶中，每瓶10mL，部分塞上丁橡胶塞，装盘，置于冻干机中，插入共晶点及温度探头，关闭箱门，启动冻干机，利用导热油对板层制冷，使晶温下降。当晶温达到共晶点（约－22℃）后，继续制冷，当晶温达到－35℃时，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达到－45℃时，开启真空系统，开启升温升华至干燥，最后干燥温度为35℃，停机，密塞，放气，出箱，扎盖，即得。
取实施例2复合物20g置于适宜容器中，加注射用水约1800mL，加入甘露醇20g搅拌混匀，再加注射用水至2000mL，用0.22µm微孔滤膜过滤，无菌环境中分装于10mL青霉素瓶中，每瓶10mL，部分塞上丁橡胶塞，装盘，置于冻干机中，插入共晶点及温度探头，关闭箱门，启动冻干机，利用导热油对板层制冷，使晶温下降。当晶温达到共晶点（约－22℃）后，继续制冷，当晶温达到－35℃时，停板冷，开启冷凝器，当冷凝器温度达到－45℃时，开启真空系统，开启升温升华至干燥，最后干燥温度为35℃，停机，密塞，放气，出箱，扎盖，即得。
[0042] 实施例13：实施例2制备的土槿乙酸金刚烷胺复合物、实施例1制备的土槿甲酸吗啉胍复合物对ECHO-6型肠道病毒的抗病毒作用。
[0043] 将接种在1mL培养瓶上的HEp-2细胞长成完整单层后分成3大组，分别作不同方式的抗病毒试验。各组均设正常细胞对照以及加入等体积PBS的单用病毒感染的对照。整个实验用的感染复数（MOI）为1 PFu／细胞。复合物高中低剂量的试验是通过细胞毒试验的筛选，单层HEp一2细胞加含药MEM培养液孵育，37℃ 达72 h后，以苔盼蓝拒染法计数死活细胞数。在最大无毒浓度及最小有效浓度范围内考察土槿皮酸复合物对ECHO-6型肠道病毒的直接杀灭作用、感染阻断作用以及对病毒增殖的抑制作用。
[0044] 土槿皮酸复合物对ECHO-6型肠道病毒的直接杀灭作用，病毒悬液与含药的MEM培养液混合摇匀，37℃ 水浴孵1 h，再感染细胞。吸附1h后再用Hank’S液洗3次，加人含0.5%羧甲基纤维素的细胞维持液。按上述方式作抗病毒试验后，37℃孵15h，弃维持液，用
10％甲醛固定30min，再用0.5%结晶紫（2O%甲醇配制）染色，计算空斑数。每次实验重复3次。空斑减数率=（病毒对照组空斑数一药物处理组空斑数）／病毒对照组空斑数×100%。
10％甲醛固定30min，再用0.5%结晶紫（2O%甲醇配制）染色，计算空斑数。每次实验重复3次。空斑减数率=（病毒对照组空斑数一药物处理组空斑数）／病毒对照组空斑数×100%。
[0045] 土槿皮酸复合物对ECHO-6型肠道病毒感染细胞的阻断作用，以含药MEM培养液预先与细胞孵2h，用Hank’s液洗3次后，以ECHO-6型肠道病毒感染细胞，其它处理同上计算空斑数。每次实验重复3次。
[0046] 土槿皮酸复合物对ECHO-6型肠道病毒增殖的抑制作用，先以ECHO-6型肠道病毒感染细胞，吸附1h后以Hank’S液洗3次，加人含药的细胞维持液，其它处理同上计算空斑数。
[0047] 实验结果见表1；表1：土槿皮酸复合物对ECHO-6型肠道病毒的抗病毒作用
。
。
[0048] 实验结果显示，病毒唑对ECHO-6型肠道病毒不具直接杀灭及感染阻断作用，病毒唑对ECHO-6型肠道病毒增殖抑制的ED50为7.64μg /mL，ED90为23.58μg/mL。随着土槿皮酸复合物剂量的增加，ECHO-6的空斑减数率也随之增加并与之成正比，土槿乙酸金刚烷胺复合物对ECHO-6具有直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的ED50分别为2.41、0.27、1.56μg/mL；ED90分别为9.06、2.89、10.78μg/mL。土槿甲酸吗啉胍复合物对ECHO-6具有直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的ED50分别为1.52、1.90、3.51μg/mL；ED90分别为7.02、6.41、11.11μg/mL。病毒唑对ECHO-6增殖抑制的ED50及ED90数值均比土槿皮酸复合物大，说明土槿皮酸复合物抗ECHO-6的药效比病毒唑强。
[0050] 人类肿瘤细胞（肿瘤细胞株：人黑色素瘤LiBr细胞、人胃癌SGC-7901细胞、人肝癌HepG2细胞、人乳腺癌 MCF-7细胞、人卵巢癌Anglne细胞、口腔表皮样癌KB细胞、人白血病K562细胞、人卵巢腺癌OVCAR-3细胞、人食管癌TE-10细胞、人结肠癌Lovo细胞、人肺癌A549细胞、人前列腺癌PC-3细胞）培养于含10%小牛血清的高糖型DMEM培养液中。实验时4
取上述处于指数生长期的细胞，将其稀释成2~3×10 细胞/mL，在磁力搅拌条件下以8头加样枪接种于96孔培养板中，每孔190μL，置于37℃、5%CO2孵育箱中，饱和湿度条件下培养
24 h，待细胞贴壁后，实验组各孔分别加入10μL不同浓度的土槿皮酸长春新碱复合物，每剂量组6孔；每批实验同时设溶剂对照孔6孔。培养48h后，每孔加浓度为5mg/mL的 MTT生理盐水溶液 20μL，继续培养4h，然后弃去培养基，每孔加150μL DMSO充分溶解10min，
8头加样枪移取DMSO溶液加于另一全新微孔培养板中，按MTT法在酶标仪中测定各孔的光密度（OD）值，抑制率按下式计算：
药物的半数抑制浓度（IC50）用CBAS药理学软件按Logit法计算。
取上述处于指数生长期的细胞，将其稀释成2~3×10 细胞/mL，在磁力搅拌条件下以8头加样枪接种于96孔培养板中，每孔190μL，置于37℃、5%CO2孵育箱中，饱和湿度条件下培养
24 h，待细胞贴壁后，实验组各孔分别加入10μL不同浓度的土槿皮酸长春新碱复合物，每剂量组6孔；每批实验同时设溶剂对照孔6孔。培养48h后，每孔加浓度为5mg/mL的 MTT生理盐水溶液 20μL，继续培养4h，然后弃去培养基，每孔加150μL DMSO充分溶解10min，
8头加样枪移取DMSO溶液加于另一全新微孔培养板中，按MTT法在酶标仪中测定各孔的光密度（OD）值，抑制率按下式计算：
药物的半数抑制浓度（IC50）用CBAS药理学软件按Logit法计算。
[0051] 实验重复三次，IC50值为三次平均值。实验结果见表2；表2：土槿乙酸长春新碱复合物对体外培养肿瘤
细胞株的细胞毒作用（ ）（μg/mL）
。
细胞株的细胞毒作用（ ）（μg/mL）
。
[0052] 通过三次独立实验，结果显示土槿乙酸长春新碱复合物对人肿瘤细胞株的半数抑制浓度（IC50）均在10μg/ml以下。根据国家药监局相关标准（《新药（西药）临床前研究指导原则汇编（药学、药理学、毒理学）》1993；《新药（中药）临床前研究指导原则汇编（药学、药理学、毒理学）》1993），当药物对体外培养癌细胞的半数抑制浓度（IC50）<10μg/ml以下时，即可判断药物有显著的抗肿瘤活性，因此，由实验结果可以判断土槿乙酸长春新碱复合物对恶性肿瘤细胞有明显的细胞毒作用。
[0053] 实施例15：实施例11制备的土槿乙酸长春新碱复合物对小鼠移植性肿瘤的抗肿瘤作用。
[0054] 实验用体重18~22g昆明种小鼠，按药理学研究方法每只用注射用生理盐水1:1稀释的S-180、H22腹水接种腹腔形成小鼠荷腹水瘤模型，接种后肢腋窝皮下形成荷实体瘤模型，小鼠接种肿瘤细胞后次日开始给药，连续给药10天，30天后处死动物称取瘤重。荷腹水瘤昆明种小鼠接种肿瘤细胞后次日开始给药，连续给药10天，计算小鼠存活时间。以Microcal Origin 6.0 Professional统计软件进行数据处理。研究结果见表3、表4；表3：土槿乙酸长春新碱复合物对荷S-180腹水瘤
及实体瘤小鼠的抗肿瘤作用（ ）（n=12）
与0.9%NaCl组比较，*表示p<0.05；**表示p<0.01
与5-FU组比较，△表示p<0.05; △△表示p<0.01 ；
表4：土槿乙酸长春新碱复合物对荷H22腹水瘤
及实体瘤的抗肿瘤作用（ ） （n=12）
与0.9%NaCl组比较，*表示p<0.05；**表示p<0.01
与5-FU组比较，△表示p<0.05; △△表示p<0.01 。
及实体瘤小鼠的抗肿瘤作用（ ）（n=12）
与0.9%NaCl组比较，*表示p<0.05；**表示p<0.01
与5-FU组比较，△表示p<0.05; △△表示p<0.01 ；
表4：土槿乙酸长春新碱复合物对荷H22腹水瘤
及实体瘤的抗肿瘤作用（ ） （n=12）
与0.9%NaCl组比较，*表示p<0.05；**表示p<0.01
与5-FU组比较，△表示p<0.05; △△表示p<0.01 。
[0055] 结果显示，对于S-180肿瘤细胞株所致实体瘤和腹水瘤， 土槿乙酸长春新碱复合物可抑制其增殖，疗效确切，在实验剂量其抑瘤效果优于10mg.kg-1长春新碱（下同）的治疗效果（p<0.01）。对荷H22肝癌细胞株所致实体瘤和腹水瘤，土槿乙酸长春新碱复合物有显著的抗肿瘤作用，疗效确切，在实验剂量其抑瘤效果优于10mg.kg-1长春新碱（下同）的治疗效果（p<0.01）。
[0056] 实施例16：实施例2制备的土槿乙酸金刚烷胺复合物抗深部真菌感染作用：
供试菌种新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）、白色念珠菌（Candida albicans）、烟曲 霉菌（Aspergillus fumigatus）、黑 曲霉 菌（Aspergillus niger）、桔青 霉 菌（Penicillium citrinum）、石膏样毛癣菌（Trichophyton mentagrophytem）、分支孢子菌（Cladosporium heabarum）购自国家药品和生物制品检定所。培养基采用沙氏培养基：蛋白胨lOg，葡萄糖4Og，蒸馏水1000mL，培养条件：自然pH，30℃。对照药氟康唑（3％），广东太阳神集团荔城制药厂生产； 复方酮康唑软膏（1%）：上海宝龙药业有限公司生产。将上述已
6
经活化的供试菌，各挑取数环菌苔，用无菌水分别制成含菌数约1-5x10cfu／mL的菌悬液（血球计数法）。将沙氏固体培养基熔化倾入培养平皿（25ml／皿），待冷却凝固后，加入lmL供试菌悬液，然后用无菌涂布棒涂布均匀。再用7mm打孔器在固体琼脂培养基表面等距离打三个孔，在孔中滴注土槿乙酸金刚烷胺复合物，以无菌水作对照。每个处理重复3次。培养48h后，测量其抑菌圈直径的大小。实验结果见表5；
表5：土槿乙酸金刚烷胺复合物抗深部真菌的活性对比实验（mm）
最小抑菌浓度 （Minimum Inhibition Consttation，MIC）的检测：吸取槿乙酸金刚烷胺复合物水溶液1.0mL，加入9.0mL沙氏培养基中。充分混匀后，吸出5.0mL，加入含有5.0mL沙氏培养基的另一试管中，混匀；按两倍稀释法逐步稀释至适当浓度，最后每管留有含复合物的沙氏培养基5.0mL。同时设对照组（一管为生长对照管，一管为空白对照管）。然后分别吸取供试菌悬液0.1mL置于各试验管中，分别恒温培养后观察结果。判断无真菌生长的试管内的复合物浓度为最小抑菌浓度。结果见表6；
表6：土槿乙酸金刚烷胺复合物抗深部真菌的最小抑菌
浓度对比实验（μg/mL）
由实验测得的抑菌圈直径（表5）和最小抑菌浓度（表6）显示：土槿乙酸酸金刚烷胺复合物对表5、表6的六株深部感染真菌均有明显的抑制菌体生长的作用，其抑菌效果相当于或略低于氟康唑和酮康唑。其中对桔青霉菌和白色念珠菌生长的抑制作用最强，对烟曲霉菌的抑制作用稍弱。与口服抗真菌药物氟康唑相比较，复合物对表5、表6的六株真菌抑制作用均强于氟康唑。
供试菌种新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）、白色念珠菌（Candida albicans）、烟曲 霉菌（Aspergillus fumigatus）、黑 曲霉 菌（Aspergillus niger）、桔青 霉 菌（Penicillium citrinum）、石膏样毛癣菌（Trichophyton mentagrophytem）、分支孢子菌（Cladosporium heabarum）购自国家药品和生物制品检定所。培养基采用沙氏培养基：蛋白胨lOg，葡萄糖4Og，蒸馏水1000mL，培养条件：自然pH，30℃。对照药氟康唑（3％），广东太阳神集团荔城制药厂生产； 复方酮康唑软膏（1%）：上海宝龙药业有限公司生产。将上述已
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经活化的供试菌，各挑取数环菌苔，用无菌水分别制成含菌数约1-5x10cfu／mL的菌悬液（血球计数法）。将沙氏固体培养基熔化倾入培养平皿（25ml／皿），待冷却凝固后，加入lmL供试菌悬液，然后用无菌涂布棒涂布均匀。再用7mm打孔器在固体琼脂培养基表面等距离打三个孔，在孔中滴注土槿乙酸金刚烷胺复合物，以无菌水作对照。每个处理重复3次。培养48h后，测量其抑菌圈直径的大小。实验结果见表5；
表5：土槿乙酸金刚烷胺复合物抗深部真菌的活性对比实验（mm）
最小抑菌浓度 （Minimum Inhibition Consttation，MIC）的检测：吸取槿乙酸金刚烷胺复合物水溶液1.0mL，加入9.0mL沙氏培养基中。充分混匀后，吸出5.0mL，加入含有5.0mL沙氏培养基的另一试管中，混匀；按两倍稀释法逐步稀释至适当浓度，最后每管留有含复合物的沙氏培养基5.0mL。同时设对照组（一管为生长对照管，一管为空白对照管）。然后分别吸取供试菌悬液0.1mL置于各试验管中，分别恒温培养后观察结果。判断无真菌生长的试管内的复合物浓度为最小抑菌浓度。结果见表6；
表6：土槿乙酸金刚烷胺复合物抗深部真菌的最小抑菌
浓度对比实验（μg/mL）
由实验测得的抑菌圈直径（表5）和最小抑菌浓度（表6）显示：土槿乙酸酸金刚烷胺复合物对表5、表6的六株深部感染真菌均有明显的抑制菌体生长的作用，其抑菌效果相当于或略低于氟康唑和酮康唑。其中对桔青霉菌和白色念珠菌生长的抑制作用最强，对烟曲霉菌的抑制作用稍弱。与口服抗真菌药物氟康唑相比较，复合物对表5、表6的六株真菌抑制作用均强于氟康唑。
[0057] 实施例17：实施例1制备的土槿甲酸吗啉胍复合物对小鼠血液中白细胞数目的影响。
[0058] 实施例1制备的土槿甲酸吗啉胍复合物腹腔注射给予小鼠对移植性Lewis肺癌的抗肿瘤作用及对外周血白细胞计数的影响。实验用体重18~22g雄性昆明种小鼠60只，按照移植性肿瘤药理研究方法接种Lewis肺癌实体瘤，接种24h后称重并随机分为5组，每-1组12只。实施例1复合物分别设10、7、4.9 mg.kg 三个剂量组，5-FU（10mg/Kg）组为阳性对照组，生理盐水组作阴性对照组，于接种24h后腹腔注射给药，每天1次，连续给药10天，于停药后次日眼眶静脉丛取血，镜检白细胞总数，同时解剖分离瘤块，置扭力天平称重，以Microcal Origin 6.0 Professional统计软件进行数据处理。研究结果见表7；
表7：实施例1制备的土槿甲酸吗啉胍复合物腹腔注射
给药对小鼠Lewis肺癌的抑制作用及对外周血
表7：实施例1制备的土槿甲酸吗啉胍复合物腹腔注射
给药对小鼠Lewis肺癌的抑制作用及对外周血
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