多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒制剂
阅读：574发布：2021-03-24
专利汇可以提供多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒制剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 描述了纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物的组合物。该组合物包含纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物和至少一种表面稳定剂，可以用于 癌症 治疗 。，下面是多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒制剂专利的具体信息内容。
1.组合物，其包含：
(a)具有有效平均粒径小于约2000nm的多西紫杉醇或其类似物 的粒子；和
(b)至少一种表面稳定剂。
2.权利要求1的组合物，其中多西紫杉醇或其类似物选自晶形 相、无定形相、半晶形相、半无定形相和它们的混合物。
3.权利要求1或权利要求2的组合物，其中多西紫杉醇或其类似 物粒子的有效平均粒径选自：小于约1900nm、小于约1800nm、小于 约1700nm、小于约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小 于约1300nm、小于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、 小于约900nm、小于约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小 于约600nm、小于约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于 约400nm、小于约350nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约 200nm、小于约150nm、小于约100nm、小于约75nm和小于约50 nm。
4.权利要求1至3的任何一项的组合物，其中配制组合物：
(a)用于选自下列的给药：口、肺、直肠、眼、结肠、胃肠外、 脑池内、阴道内、腹膜内、局部、颊、鼻和表面给药；
(b)形成选自下列的剂型：液体分散体、固体分散体、液体填充胶 囊、凝胶剂、气溶胶、软膏、霜剂、冻干制剂、片剂、胶囊、多颗粒 填充胶囊、多颗粒组成的片剂、压制片剂和包有肠溶衣的多西紫杉醇 或其类似物的子珠填充的胶囊，
(c)形成选自下列的剂型：控释制剂、快熔制剂、延迟释放制剂、 延长释放制剂、脉冲式释放制剂以及立即释放和控制释放的混合制剂； 或
(d)(a)、(b)和(c)的任何组合。
5.权利要求4的组合物，其中组合物为注射制剂。
6.权利要求1至5的任何一项的组合物，其中：
(a)基于多西紫杉醇或其类似物和至少一种表面稳定剂组合的但 不包括其它辅料的干燥总重量，表面稳定剂按重量计以约0.5％至约 99.999％、约5.0％至约99.9％、和约10％至约99.5％的量存在；
(b)基于多西紫杉醇或其类似物和至少一种表面稳定剂组合的但 不包括其它辅料的总重量，多西紫杉醇或其类似物按重量计以约 99.5％至约0.001％、约95％至约0.1％、和约90％至约0.5％的量存在；或 (c)(a)和(b)的组合。
7.权利要求1至6的任何一项的组合物，其中表面稳定剂选自阴 离子表面稳定剂、阳离子表面稳定剂、两性离子表面稳定剂、非离子 表面稳定剂和离子表面稳定剂。
8.权利要求1至7的任何一项的组合物，其中至少一种表面稳定 剂选自氯化十六烷基吡啶_、白蛋白、明胶、酪蛋白、磷脂、右旋糖 酐、甘油、阿拉伯胶、胆固醇、黄芪胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸 钙、单硬脂酸甘油酯、鲸蜡硬脂醇、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨醇酯、 聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪 酸酯、聚乙二醇、溴化十二烷基三甲基铵、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶态 二氧化硅、磷酸酯或盐、十二烷基硫酸钠、羧甲基纤维素钙、羟丙基 纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维 素、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯、非晶性纤维素、硅酸镁铝、三乙醇 胺、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、含环氧乙烷和甲醛的4-(1，1，3，3- 四甲基丁基)-苯酚聚合物、泊洛沙姆；poloxamines、带电荷的磷脂、 磺基琥珀酸二辛酯、磺基琥珀酸钠二烷基酯、月桂基硫酸钠、烷基芳 基聚醚磺酸酯、蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物、对异壬基 苯氧基聚-(缩水甘油)、癸酰基-N-甲基葡糖酰胺；正癸基β-D-吡喃葡 萄糖苷；正癸基β-D-吡喃麦芽糖苷；正十二烷基β-D-吡喃葡萄糖 苷；正十二烷基β-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正庚基- β-D-吡喃葡萄糖苷；正庚基β-D-硫葡糖苷；正己基β-D-吡喃葡萄 糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖酰胺；正壬基β-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰 基-N-甲基葡糖酰胺；正辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷；辛基β-D-硫代 吡喃葡萄糖苷；溶菌酶、PEG-磷脂、PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、 PEG-维生素A、PEG-维生素E、乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的无规则 共聚物、阳离子聚合物、阳离子生物聚合物、阳离子多糖、阳离子纤 维素、阳离子海藻酸盐、阳离子非聚合化合物、阳离子磷脂、阳离子 类脂、溴化三甲铵聚甲基丙烯酸甲酯、锍化物、二甲基硫酸聚乙烯吡 咯酮-2-二甲基氨基乙基异丁烯酸酯、溴化十六烷基三甲铵、磷_化合 物、季铵化合物、溴化苄基-二(2-氯乙基)乙基铵、椰子油三甲氯化铵、 椰子油三甲溴化铵、椰子油甲基二羟基乙基氯化铵、椰子油甲基二羟 基乙基溴化铵、癸基三乙基氯化铵、癸基二甲基羟乙基氯化铵、癸基 二甲基羟乙基氯化溴化铵、C12-15二甲基羟乙基氯化铵、C12-15二甲基羟 乙基氯化溴化铵、椰子油二甲基羟乙基氯化铵、椰子油二甲基羟乙基 溴化铵、肉豆蔻基三甲基铵甲基硫酸酯、月桂基二甲基苄基氯化铵、 月桂基二甲基苄基溴化铵、月桂基二甲基(乙烯氧基)4氯化铵、月桂基 二甲基(乙烯氧基)4溴化铵、N-烷基(C12-18)二甲基苄基氯化铵、N-烷 基(C14-18)二甲基苄基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合 物、二甲基二癸基氯化铵、N-烷基和(C12-14)二甲基1-萘基甲基氯化铵、 三甲基卤化铵、烷基三甲铵盐、二烷基二甲铵盐、月桂基三甲基氯化 铵、乙氧基化烷基酰氨基烷基二烷基铵盐、乙氧基化三烷基铵盐、二 烷基苯二烷基氯化铵、N-二癸基二甲基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄 基氯化铵一水合物、N-烷基(C12-14)二甲基1-萘基甲基氯化铵、十二 烷基二甲基苄基氯化铵、二烷基苯烷基氯化铵、月桂基三甲基氯化铵、 烷基苄基甲基氯化铵、烷基苄基二甲基溴化铵、C12三甲基溴化铵、C15 三甲基溴化铵、C17三甲基溴化铵、十二烷基苄基三乙基氯化铵、聚二 烯丙基二甲基氯化铵(DADMAC)、二甲基氯化铵、烷基二甲基铵卤化物、 三鲸蜡基甲基氯化铵、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三乙基溴化铵、 十四烷基三甲基溴化铵、甲基三辛基基氯化铵、POLYQUAT 10TM、四丁 基溴化铵、苄基三甲基溴化铵、胆碱酯、苯扎氯铵、氯化硬脂酰二甲 基苄基铵化合物、溴化十六烷基吡啶_、氯化十六烷基吡啶_、季铵 化聚氧乙烯烷基胺的卤盐、MIRAPOLTM、ALKAQUATTM、烷基吡啶_盐；胺、 胺盐、胺氧化物、咪唑_盐、质子化四元丙烯酰胺、甲基化四元聚合 物和阳离子瓜耳胶。
9.权利要求1至8的任何一项的组合物，还包含一种或多种非多 西紫杉醇或其类似物的活性剂。
10.权利要求1至9的任何一项的组合物，其中在对哺乳动物施 药后多西紫杉醇或其类似物粒子可再分散为具有选自下列有效平均粒 径的粒子：小于约1900nm、小于约1800nm、小于约1700nm、小于 约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小于约1300nm、小 于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、小于约900nm、 小于约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于约600nm、 小于约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约400nm、小 于约350nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于 约150nm、小于约100nm、小于约75nm和小于约50nm。
11.权利要求1至10的任何一项的组合物，其中该组合物再分散 在生物相关的介质中，使得多西紫杉醇或其类似物粒子具有选自下列 的有效平均粒径：小于约1900nm、小于约1800nm、小于约1700nm、 小于约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小于约1300nm、 小于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、小于约900nm、 小于约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于约600nm、 小于约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约400nm、小 于约350nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于 约150nm、小于约100nm、小于约75nm和小于约50nm。
12.权利要求11的组合物，其中生物相关的介质选自水、电解质 的水溶液、盐的水溶液、酸的水溶液、碱的水溶液和它们的组合。
13.权利要求1至12的任何一项的组合物，其中当测定哺乳动物 受试者用药后的血浆时，多西紫杉醇或其类似物的Tmax小于以相同剂 量给药的非纳米微粒多西紫杉醇或其类似物制剂的Tmax。
14.权利要求13的组合物，其中相同剂量给药时，所述Tmax为选 自不大于约90％、不大于约80％、不大于约70％、不大于约60％、不大 于约50％、不大于约30％、不大于约25％、不大于约20％、不大于约15％、 不大于约10％和不大于约5％的非纳米微粒多西紫杉醇或其类似物制剂 的所显示Tmax。
15.权利要求13或权利要求14的组合物，其中给禁食受试者施 用后该组合物，显示出小于约6小时、小于约5小时、小于约4小时、 小于约3小时、小于约2小时、小于约1小时和小于约30分钟的Tmax。
16.权利要求1至15的任何一项的组合物，其中当测定哺乳动物 受试者用药后的血浆时，多西紫杉醇或其类似物的Cmax大于以相同剂 量给药的非纳米微粒多西紫杉醇或其类似物制剂的Cmax。
17.权利要求16的组合物，其中在相同剂量给药时，Cmax大于至 少约50％、至少约100％、至少约200％、至少约300％、至少约400％、 至少约500％、至少约600％、至少约700％、至少约800％、至少约900％、 至少约1000％、至少约1100％、至少约1200％、至少约1300％、至少约 1400％、至少约1500％、至少约1600％、至少约1700％、至少约1800％ 或至少约1900％的非纳米微粒多西紫杉醇或其类似物制剂所显示的 Cmax。
18.权利要求1至17的任何一项的组合物，其中当测定哺乳动物 受试者用药后的血浆时，多西紫杉醇或其类似物的AUC大于以相同剂 量给药的非纳米微粒多西紫杉醇或其类似物制剂的AUC。
19.权利要求18的组合物，其中在相同剂量给药时，AUC大于至 少约25％、至少约50％、至少约75％、至少约100％、至少约125％、至 少约150％、至少约175％、至少约200％、至少约225％、至少约250％、 至少约275％、至少约300％、至少约350％、至少约400％、至少约450％、 至少约500％、至少约550％、至少约600％、至少约750％、至少约700％、 至少约750％、至少约800％、至少约850％、至少约900％、至少约950％、 至少约1000％、至少约1050％、至少约1100％、至少约1150％或至少约 1200％多西紫杉醇或其类似物的非纳米微粒制剂所显示的AUC。
20.权利要求1至19的任何一项的组合物，其在进食状态给药与 禁食状态给药相比时不会产生显著差异的吸收水平。
21.权利要求20的组合物，其中在进食状态给药与禁食状态给药 相比时，本发明的多西紫杉醇或其类似物组合物的吸收差异小于约 100％、小于约90％、小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、 小于约40％、小于约30％、小于约25％、小于约20％、小于约15％、小 于约10％、小于约5％和小于约3％。
22.权利要求1至21的任何一项的组合物，其中在禁食状态下给 人施用该组合物与在进食状态下给受试者施用该组合物是生物等效 的。
23.权利要求22的组合物，其中“生物等效”被确定为：
(a)AUC和Cmax的90％置信区间均在0.80至1.25之间；或
(b)AUC的90％置信区间在0.80至1.25之间并且Cmax的90％区间 在0.70至1.43之间。
24.权利要求1至23的任何一项的组合物，其中多西紫杉醇类似 物选自：
(a)在C-3′苯甲酸酯位置、C-2苯甲酸酯位置、或此两种位置上 含有环己基基团而不是苯基基团的多西紫杉醇类似物；
(b)C-3′或C-2位置缺少苯基或芳基的多西紫杉醇类似物；
(c)2-酰氨基多西紫杉醇类似物；
(d)缺少环氧丙烷D-环但具有4α-乙酰氧基的多西紫杉醇类似 物；
(e)5(20)去氧多西紫杉醇；
(f)10-脱氧-10-C-吗啉代乙基多西紫杉醇类似物；
(g)具有叔丁基氨基甲酸酯作为异丝氨酸N-酰基的取代基但又 不同于多西紫杉醇的C-10(乙酰基对羟基)和C-13异丝氨酸键连(烯 醇酯对酯)的类似物；
(h)在C3位具有肽支链的多西紫杉醇类似物；
(i)XRP9881(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物)；
(j)XRP6528(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物)；
(k)Ortataxel(14-β羟基-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇 类似物)；
(1)MAC-321(10-脱乙酰基-7-丙酰基浆果赤霉素多西紫杉醇类似 物)；
(m)DJ-927(7-脱氧-9-β-二氢-9，10，0-乙缩醛紫杉烷多西紫杉 醇类似物)；
(n)具有C2-C3′N-键合的多西紫杉醇类似物，其中C2位携带芳 环并在N3′和C2-芳环的邻位之间链接；
(0)具有C2-C3′N-键合的多西紫杉醇类似物，其中C2位携带芳 环并在N3′和C2-芳环的间位之间链接；
(p)多西紫杉醇类似物，其携带连接C-2 OH和C-3′NH部分的 22-元(或更多元)环；
(q)7β-O-糖基化的多西紫杉醇类似物；
(r)10-烷基化多西紫杉醇类似物；
(s)2′，2′-二氟代多西紫杉醇类似物；
(t)3′-(2-呋喃基)多西紫杉醇类似物；
(u)3′-(2-吡咯基)多西紫杉醇类似物；和
(v)荧光的和生物素化的多西紫杉醇类似物。
25.权利要求24的组合物，其中多西紫杉醇类似物选自：
(a)3′-脱苯基-3′环己基多西紫杉醇；
(b)2-(六氢)多西紫杉醇；
(c)3′-脱苯基-3′环己基-2-(六氢)多西紫杉醇；
(d)3′-脱苯基-3′-环己基多西紫杉醇；
(e)2-(六氢)多西紫杉醇；
(f)间甲氧基多西紫杉醇类似物；
(g)间氯苯甲酰氨基多西紫杉醇类似物；
(h)5(20)-硫杂多西紫杉醇类似物；
(i)其中7-羟基被修饰为疏水甲氧基的多西紫杉醇类似物；
(j)其中7-羟基被修饰为疏水性脱氧的多西紫杉醇类似物；
(k)其中7-羟基被修饰为疏水性6，7-烯的多西紫杉醇类似物；
(1)其中7-羟基被修饰为疏水性α-F的多西紫杉醇类似物；
(m)其中7-羟基被修饰为疏水性7-β-8-β-亚甲基的多西紫杉 醇类似物；
(n)其中7-羟基被修改为疏水氟代甲氧基的多西紫杉醇类似物；
(o)在烷基部分的末端具有甲氧基羰基的10-烷基化多西紫杉醇 类似物；
(p)在7或3′位置具有N-(7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二唑-4-基)酰 氨基-6-己酰基链的多西紫杉醇类似物；
(q)在3′位具有N-(7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二唑-4-基)酰氨基 -3-丙酰基基团的多西紫杉醇类似物；和
(r)在7、10或3′位置具有5′-生物素基酰氨基-6-己酰基链的多 西紫杉醇类似物。
26.权利要求1至25的任何一项组合物用于制备药物的用途。
27.权利要求26的用途，其中该组合物被配制成用于注射给药。
28.权利要求26或权利要求27的用途，其中此药物用于治疗选 自乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌和肺癌的癌症。
29.纳米微粒多西紫杉醇或其类似物组合物的制备方法，包括在一 定的时间和条件下将多西紫杉醇或其类似物粒子与至少一种表面稳定 剂接触，以提供具有有效平均粒径小于约2000nm的多西紫杉醇或其 类似物的组合物。
30.权利要求29的方法，其中该接触包含碾磨、匀化、沉淀或超 临界液体处理。
技术领域
本发明涉及多西紫杉醇(docetaxel)及其类似物的纳米微粒 (nanoparticulate)组合物、该组合物的制备方法、以及该纳米微粒组 合物在治疗癌症，尤其是治疗乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和肺癌中的 用途。
背景技术
A.关于多西紫杉醇及其类似物的背景
二萜紫杉烷(taxoids)或紫杉烷(taxanes)为通过阻止细胞分裂而 抑制细胞生长的化合物，其包括多西紫杉醇和紫杉醇。它们也称为抗 有丝分裂剂或抗微管剂(Antimicrotubule agents)或有丝分裂抑制 剂。
美国专利5,438,072中描述了具有抗肿瘤和抗白血病活性的基于 二萜紫杉烷的组合物及其用途。美国专利6,624,317涉及用于癌症治 疗的二萜紫杉烷结合物的制备。Magnus的美国专利5,508,447(简称 “Magnus专利”)的图1A中显示了紫杉烷环系的结构和编号。Magnus 专利涉及用于癌症治疗的紫杉酚的合成。美国专利5,698,582和 5,714,512涉及紫杉烷衍生物，其以适合注射的药物组合物用于肿瘤 和白血病的治疗。美国专利6,028,206和5,614,645涉及有用于癌症 治疗的紫杉酚类似物的制备。美国专利4,814,470和5,411,984均涉 及用于癌症治疗的一些紫杉酚衍生物的制备。
美国专利5,494,683和5,399,363中描述了紫杉醇的纳米微粒组 合物。这些专利没有描述纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
紫杉醇的化学结构如下所示：
多西紫杉醇为半合成的属于二萜紫杉烷家族的抗肿瘤剂。多西紫 杉醇为白色至近似白色的粉末，其实验式为C43H53NO14·3H2O，分子量为 861.9。它是高度亲脂的和几乎不溶于水的。多西紫杉醇的化学名为 (2R，3S)-N-羧基-3-苯基丝氨酸，N-叔丁酯，13-5β-20-环氧-1，2α，4， 7β，10β，13 α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮酯，4-乙酸酯，2-苯甲酸酯的 三水合物。多西紫杉醇是从紫杉植物的可更新针叶生物中提取的前体 (二萜紫杉烷10-脱乙酰基浆果赤霉素III)开始半合成制得的。多西 紫杉醇的结构(如下所示)与紫杉醇的结构显著不一样：
多西紫杉醇具有独一无二的化学结构，相对于紫杉醇有2个改变： (1)在紫杉酚B环的C-10位置上用羟基代替乙酰基；和(2)C-13例链 的变化(例如在紫杉酚的侧链上用N-叔丁氧基羰基代替N-苯甲酰基)。 这些显著的结构差别导致紫杉醇和多西紫杉醇具有不同的活性。例如， 多西紫杉醇比紫杉醇更有效。Angelo等，“Docetaxel versus paclitaxel for antiangiogenesis，”J.Hematother.Stem.Cell Res.，11(1)：103-18(2002)。另外，在比较由紫杉醇和多西紫杉醇诱 导COX-2表达的研究中，发现了紫杉醇在人和鼠细胞中诱导的COX-2 表达具有相似的动力学和浓度响应曲线，相反地，多西紫杉醇只在人 单核细胞中诱导COX-2表达，而在鼠细胞中不能诱导COX-2的表达。 Cassidy等，Clin.Can.Res.，8：846-8 55(2002)。
而且，多西紫杉醇的作用机理不同于紫杉醇的作用机理。多西紫 杉醇使发生有丝分裂所必需的细胞微管网状构造(microtubular network)分裂，以及影响正常微管所调节的细胞活动。这种作用机理 导致它与紫杉醇相比具有较少的严重的副反应。
多西紫杉醇由Aventis Pharmaceuticals(Bridgewater，New Jersey)以TAXOTERE_Injection Concentrate市售。TAXOTERE_为无 菌无热原的，并且可用的为含有20mg(0.5mL)或80mg(2.0mL) 的多西紫杉醇(无水的)单次剂量小瓶。每mL含有40mg的多西紫杉醇 (无水的)和1040mg的聚山梨醇酯80。TAXOTERE__Injection Concentrate要求使用前稀释。为了此目的，需提供无菌无热原的单 次剂量稀释液。用于TAXOTERE_的稀释液含有13％乙醇的注射用水，并 在小瓶中提供。
聚山梨醇酯80和乙醇(应用它们增加多西紫杉醇的溶解度)的存 在可引起不良反应。因为与TAXOTERE_有关的不良超敏性，在化疗开 始24小时前建议口服地塞米松三天的前驱给药。聚山梨醇酯80与严 重的过敏性反应有关，该反应的特征为低血压和/或支气管痉挛或全身 性疹/红斑，在接受推荐的三天地塞米松前驱给药法的患者中 2.2％(2/92)发生了这类反应。另外，多西紫杉醇注射液要求使用前稀 释。为此，必须提供无菌无热原的单次剂量稀释液。如上所述，用于 TAXOTERE_注射制剂的稀释液含有13％乙醇的注射用水，必须随同药物 一起提供该稀释液。
多西紫杉醇可引起患者骨髓中的血细胞数减少，该药物也可引起 肝损害。另外，已经观察到TAXOTERE_给药的过敏病例。症状包括低 血压和/或支气管痉挛、和全身性疹/红斑。也已观察了一些超剂量的 病例(150-200mg/m2的剂量)。与此有关的一些并发症包括骨髓抑制、 周围神经毒性、和粘膜炎。
溶剂聚山梨醇酯80和乙醇对于TAXOTERE_给药所观察到的过敏性 反应应负至少一部分责任。给予类固醇和其它的组胺阻断药物作为前 驱给药法可减少这些反应的发生率和严重度，但是关于前驱给药法也 涉及不良事件(例如库欣(Cushing′s)综合征、传染性并发症、高血糖 症、高血压、和精神病的效应(包括类固醇诱导的精神病))，尤其是在 长期给药时。溶剂也促成增塑剂从聚氯乙烯(PVC)袋和管中溶出，并可 能产生与这些试剂有关的其它不良反应(例如，神经病和肿瘤细胞耐 药性)。
应用于紫杉醇的一种具有较高水溶性的替代药物制剂为白蛋白结 合的紫杉醇(ABRAXANE_)。然而，这种药物制剂要求紫杉醇共价结合到 白蛋白上，因此可改变紫杉醇的性质。例如，在白蛋白结合的紫杉醇 的临床I和II期临床试验中，没有看到溶剂介导的毒性，不要求前驱 给药法，和可在仅仅30分钟内输入药物。然而，在I期试验中这种药 物的药动学曲线似乎为线性，这不同于显示非线性药动学性质的传统 紫杉醇“Abraxane(paclitaxel protein-bound particles for injectable suspension [albumin-bound])product information，” Abraxis Oncology(Schamburg，IL)，January 2005。
在临床药理学意义上，多西紫杉醇为抗肿瘤剂，其通过使发生有 丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的细胞微管网状构造破裂起作用。 多西紫杉醇结合到游离的微管蛋白并促进微管蛋白装配进入稳定的微 管中，同时抑制它们的拆散。这导致没有正常功能的微管束的生成和 微管的稳定，结果是抑制细胞的有丝分裂。多西紫杉醇结合到微管不 会改变结合的微管中的原丝数目，这是不同于当前临床使用的大多数 纺锤体毒剂的特征。Physicians′Desk Reference，58th Ed.，pp.3， 307，771-78(Thompson PDR，Montvale，New Jersey，2004)。
TAXOTERE_(多西紫杉醇)在1996年首先获得美国食品与药品管理 局的批准，用于先前蒽环类化疗失败后的局部晚期的或转移性乳腺癌。 该药物然后在1999年被批准用于局部晚期的或转移性非小细胞肺癌 (NSCLC)的二线应用。在2002年11月，美国食品与药品管理局批准 TAXOTERE_(多西紫杉醇)与顺铂组合使用，用于不能切除的、局部晚 期的或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者的治疗，对于这种情况患者先 前并没有受到化疗。在2004年，与泼尼松组合的TAXOTERE_被批准用 于非雄激素依赖的(耐激素的)转移性前列腺癌患者的治疗。另外，与 多柔比星和环磷酰胺联用的TAXOTERE_已经被美国FDA批准用于可手 术的、结节阳性(node-positive)乳腺癌患者的辅助治疗。在临床试验 中继续将TAXOTERE_试用于许多类型癌症的各期治疗。
在I期试验中，给予从20mg/m2至115mg/m2范围的剂量后评价 癌症患者中的多西紫杉醇(TAXOTERE_)药动学。在静脉注射70mg/m2 至115mg/m2的剂量后，多西紫杉醇的药动学是剂量不依赖的并符合3 室模型，其α、β、γ半衰期的总体均数分别为4分钟、36分钟、和 11.1小时。TAXOTERE_批准的剂量范围为60mg/m2至100mg/m2。IV 给予100mg/m2的剂量后，平均峰值血浆水平为3.7μg/mL(SD＝0.8)， 相应的AUC为4.6μg/mL·h(SD＝0.8)。据发现，虽然药物清除率不依 赖于剂量或者给药方案，多西紫杉醇(TAXOTERE_)的血浆浓度和AUC 与剂量是直接成比例的，这符合线性的药代动力学类型。总体清除率 和稳态分布容积的平均值分别为21L/h/m2和113L。多西紫杉醇 (TAXOTERE_)在静脉内(IV)给药后迅速地和广泛地分布。体外研究表明 约有94％多西紫杉醇与血浆蛋白(主要与白蛋白、α1-酸性糖蛋白和脂 蛋白)结合。
TAXOTERE_(多西紫杉醇)剂量方案依治疗的癌症类型而不同。至于 乳腺癌，推荐剂量为每三周于1小时内静脉内给予60-100mg/m2。在 非小细胞肺癌情形下，TAXOTERE_只应用于先前基于铂的化疗失败后。 推荐剂量为每三周于1小时内静脉内给予75mg/m2。
与多西紫杉醇使用相关的重要的限制为不可预知的个体间的效果 和毒性的差异性。自其临床应用以来，改善多西紫杉醇治疗的尝试已 经遍及多方面：减少个体间的药动学(PK)和药效学(PD)的差异性，优化 给药方案、途径和药物制剂，以及逆转耐药性。
已经描述的多西紫杉醇的类似物，包括3′-脱苯基-3′-环己基多 西紫杉醇、2-(六氢)多西紫杉醇、和3′-脱苯基-3′-环己基-2-(六氢) 多西紫杉醇。这些多西紫杉醇类似物在C-3′和/或C-2苯甲酸酯位置 上含有环己基而不是苯基。Ojima等“Synthesis and Structure-Activity Relationships of New Antitumor Taxoids： Effects of Cyclohexyl Substitution at the C-3′and/or C-2 TAXOTERE_(Docetaxel)，”J.Med.Chem.，37：2602-08(1994)。据 报道，3′-脱苯基-3′-环己基多西紫杉醇和2-(六氢)多西紫杉醇对微 管拆散(microtubule disassembly)具有等同于多西紫杉醇的强抑制 活性。这证明C-3′或C-2位置的苯基或芳基对于与微管的强结合来说 不是必要的。
其它先前描述的多西紫杉醇类似物包括各种2-酰氨基多西紫杉 醇类似物(包括间甲氧基和间氯苯甲酰氨基类似物)(Fang等， “Synthesis and Cytotoxicity of 2alpha-amido Docetaxel Analogues，”Bioorg.Med.Chem.Lett.，12：1543-6(2002))；缺少 环氧丙烷D环但具有对生物活性重要的4α-乙酰氧基的多西紫杉醇类 似物(Deka等，“Deletion of the oxetane ring in docetaxel analogues：synthesis and biological evaluation，”Org.Lett.， 5：5031-4(2003))；5(20)去氧多西紫杉醇(Dubois等，“Synthesis of5(20)deoxydocetaxel，a new active docetaxel analogue，” Tetrahedfon Lett.，41：3331-3334(2000))；10-脱氧-10-C-吗啉代 乙基多西紫杉醇类似物(Iimura等，“Orally active docetaxel analogue-synthesis of 10-deoxy-10-C-morpholinoethyl docetaxel analogues，”Bioorganic and Medicinal Chem.Lett，11：407-410 (2001))；Cassidy等在Clin.Can.Res.，8：846-855(2002)中描述 的多西紫杉醇类似物，例如具有叔丁基氨基甲酸酯作为异丝氨酸N-酰 基的取代基但又不同于多西紫杉醇的C-10(乙酰基对羟基)和C-13异 丝氨酸键连(烯醇酯对酯)的类似物；和C3位具有肽支链的多西紫杉醇 类似物，参见Larroque等“Novel C2-C3″N-peptide linked macrocyclic taxoids.Part 1 ：Synthesis and biological activities of docetaxel analogues with a peptide side chainat C3”，Bioorg.Med.Chem.Lett.15(21)：4722-4726(2005)。另外 临床试验中有多种多西紫杉醇衍生物，包括XRP 9881(也是指RPR 10988 1A)(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物)(Aventis Pharma)、XRP6528(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物) (Aventis Pharma)、Ortataxel(14-β羟基-脱乙酰基浆果赤霉素III 多西紫杉醇类似物)(Bayer/Indena)、MAC-321(10-脱乙酰基-7-丙酰 基(propanoyl)浆果赤霉素多西紫杉醇类似物)(Wyeth-Ayerst)和 DJ-927(7-脱氧-9-β-二氢-9，10，O-乙缩醛紫杉烷多西紫杉醇类似物) (Daiichi Pharmaceuticals)，全部描述在Engels等的“Potential for Improvement Docetaxel-Based Chemotherapy：A Pharmacological Review，”British J.of Can.，93：173-177(2005)中。另外的多西 紫杉醇衍生物描述在Querolle等的“Novel C2-C3′N-linked Macrocyclic Taxoids：Novel Docetaxel Analogues with High Tubulin Activity，”J.Med.Chem.，(Nov.2004)。
B.关于纳米微粒活性物质组合物的背景
纳米微粒活性物质组合物是美国专利5,145,684(简称“′684专 利”)首先描述的粒子，它由吸附或结合于非交联的表面稳定剂表面的 溶解性差的治疗或诊断剂组成。′684专利没有描述多西紫杉醇或其类 似物的纳米微粒组合物。
下列文献描述了制备纳米微粒活性物质组合物的方法，例如美国 专利5,518,187和5,862,999，两者均为“碾磨药用物质的方法”；美 国专利5,718,388为“碾磨药用物质的后续方法”；以及美国专利 5,510,118为“包含纳米粒的治疗组合物的制备方法”。
下列文献也描述了制备纳米微粒活性物质组合物的方法，例如美 国专利5,298,262为“应用离子浊点改性剂防止消毒过程中粒子聚集”； 5,302,401“减少冷冻干燥过程中粒径生长的方法”；5,318,767“用 于医学成像的X射线造影组合物”；5,326,552“应用高分子量非离子 型表面活性剂的纳米微粒X射线血池造影剂的新制剂”；5,328,404 “应用碘化芳族丙二酸酯的X射线成像的方法”；5,336,507“减少纳 米粒聚集的带电荷磷脂的应用”；5,340,564“的防止粒子聚集并增加 稳定性的包含Olin 10-G制剂”；5,346,702“应用非离子浊点改性剂 使消毒过程中纳米微粒聚集最小化”；5,349,957“极小磁性-右旋糖 酐粒子的制备及磁性性质”；5,352,459“应用纯化表面改性剂防止消 毒过程中粒子聚集”；5,399,363和5,494,683，两者均为“表面修 饰的抗癌纳米粒”；5,401,492“不溶于水的非磁性锰颗粒用作磁共振 增强剂”；5,429,824“四丁酚醛用作纳米微粒稳定剂”；5,447,710 “应用高分子量非离子型表面活性剂制备纳米微粒X射线血池造影剂 的方法”；5,451,393“用于医学成像的X射线造影组合物”；5,466,440 “口服胃肠诊断的X射线造影剂与药学上可接受的粘土组合的制剂”； 5,470,583“减少聚集的包含带电荷磷脂的纳米粒组合物的制备方法”； 5,472,683“纳米微粒诊断性混合氨基甲酸酐用作血池和淋巴系统成像 的X射线造影剂”；5,500,204“纳米微粒诊断性二聚物用作血池和淋 巴系统成像的X射线造影剂”；5,518,738“纳米微粒NSAID制剂”； 5,521,218“纳米微粒碘代二帕胺(Iododipamide)衍生物用作X射线造 影剂”；5,525,328“用于血池和淋巴系统成像的纳米微粒诊断性 Diatrizoxy Ester X射线造影剂”；5,543,133“包含纳米粒的X射 线造影组合物的制备方法”；5,552,160“表面修饰的NSAID纳米粒”； 5,560,931“作为可消化油或脂肪酸中的纳米微粒分散体化合物的制 剂”；5,565,188“聚亚烷基嵌段共聚物用作纳米粒的表面改性剂”； 5,569,448“硫酸化非离子的嵌段共聚物表面活性剂用作纳米粒组合物 的稳定剂包衣”；5,571,536“作为可消化油或脂肪酸中的纳米微粒分 散体化合物的制剂”；5,573,749“纳米微粒诊断性混合羧酸酐用作血 池和淋巴系统成像的X射线造影剂”；5,573,750“诊断性成像的X 射线造影剂”；5,573,783“具有保护性外层的可再分散的纳米微粒膜 基质”；5,580,579“使用由高分子量线性聚(环氧乙烷)聚合物稳定的 纳米粒在胃肠道内特定位点的粘附”；5,585,108“口服胃肠治疗剂与 药学上可接受的粘土组合的制剂”；5,587,143“环氧丁烷-环氧乙烷 嵌段共聚物表面活性剂用作纳米粒组合物的稳定剂包衣”；5,591,456 “与羟丙基纤维素一起碾磨的萘普生用作分散体稳定剂”；5,593,657 “由非离子和阴离子稳定剂稳定的钡盐新制剂”；5,622,938“用于纳 米晶体的糖基表面活性剂”；5,628,981“口服胃肠诊断的X射线造影 剂和口服胃肠治疗剂的改良制剂”；5,643,552“纳米微粒诊断性混合 碳酸酐用作血池和淋巴系统成像的X射线造影剂”；5,718,388“碾磨 药用物质的连续方法”；5,718,919“包含布洛芬R(-)对映体的纳米 粒”；5,747,001“包含倍氯米松纳米粒分散体的气溶胶”；5,834,025 “静脉内给予纳米微粒制剂引起不良生理反应的减少”；6,045,829 “使用纤维素(Cellulosic)表面稳定剂的人免疫缺陷性病毒(HIV) 蛋白酶抑制剂的纳米晶体制剂”；6,068,858“使用纤维素表面稳定剂 制备人免疫缺陷性病毒(HIV)蛋白酶抑制剂的纳米晶体制剂的方法”； 6,153,225“纳米微粒萘普生的注射剂”；6,165,506“纳米微粒萘普 生的新固体剂型”；6,221,400“应用人免疫缺陷性病毒(HIV)蛋白酶 抑制剂的纳米晶体制剂治疗哺乳动物的方法”；6,264,922“含有纳米 粒分散体的喷雾气溶胶”；6,267,989“防止纳米粒组合物中晶体生长 和粒子聚集的方法”；6,270,806“PEG衍生的类脂用作纳米微粒组合 物的表面稳定剂的用途”；6,316,029“快速崩解的固体口服剂型”； 6,375,986“包含协同组合的聚合的表面稳定剂和磺基琥珀酸二辛酯钠 的固体剂型纳米微粒组合物”；6,428,814“具有阳离子的表面稳定剂 的生物粘附纳米微粒组合物”；6,431,478“小型碾磨”；6,432,381 “靶向药物递送至上和/或下部胃肠道的方法”；6,592,903“包含协 同组合的聚合的表面稳定剂和磺基琥珀酸二辛酯钠的纳米微粒分散 体”；6,582,285“用于卫生的湿磨仪器”；6,656,504“包含无定形 的环孢霉素A的纳米微粒组合物”；6,742,734“用于碾磨材料的系 统和方法”；6,745,962“小型磨及其方法”；6,811,767“纳米微粒 药物的液滴气溶胶”；6,908,626“具有立即释放和控制释放特性组合 的组合物”；6,969,529“包含乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的共聚物 作为表面稳定剂的纳米微粒组合物”；6,976,647“用于碾磨材料的系 统和方法”；特别地，在此引入所有这些作为参考文献。另外，2002 年1月31日公开的美国专利申请20020012675 A1“控释纳米微粒组 合物”描述了纳米微粒组合物，特别地，在此将其引入作为参考。这 些专利都没有描述多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒制剂。
下列文献描述了无定形小粒子组合物，例如美国专利4,783,484 “作为抗微生物剂的微粒组合物及其用途”；4,826,689“由不溶于水 的有机化合物制备大小均匀的粒子的方法”；4,997,454“由不溶性化 合物制备大小均匀的粒子的方法”；5,741,522“内部夹带气泡的大小 均匀的超小非聚集多孔颗粒及方法”；5,776,496，“用于增强超声反 向散射的超小多孔颗粒”。
当前需要具有提高溶解性特性(该特性又对给药患者提供提高的 生物利用度和降低的毒性)的多西紫杉醇制剂。本发明通过提供包含多 西紫杉醇或其类似物的纳米微粒制剂的组合物及方法满足这些需要。 这些制剂包括但不限于注射纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物的制 剂。
二萜紫杉烷(taxoids)或紫杉烷(taxanes)为通过阻止细胞分裂而 抑制细胞生长的化合物，其包括多西紫杉醇和紫杉醇。它们也称为抗 有丝分裂剂或抗微管剂(Antimicrotubule agents)或有丝分裂抑制 剂。
美国专利5,438,072中描述了具有抗肿瘤和抗白血病活性的基于 二萜紫杉烷的组合物及其用途。美国专利6,624,317涉及用于癌症治 疗的二萜紫杉烷结合物的制备。Magnus的美国专利5,508,447(简称 “Magnus专利”)的图1A中显示了紫杉烷环系的结构和编号。Magnus 专利涉及用于癌症治疗的紫杉酚的合成。美国专利5,698,582和 5,714,512涉及紫杉烷衍生物，其以适合注射的药物组合物用于肿瘤 和白血病的治疗。美国专利6,028,206和5,614,645涉及有用于癌症 治疗的紫杉酚类似物的制备。美国专利4,814,470和5,411,984均涉 及用于癌症治疗的一些紫杉酚衍生物的制备。
美国专利5,494,683和5,399,363中描述了紫杉醇的纳米微粒组 合物。这些专利没有描述纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
紫杉醇的化学结构如下所示：
多西紫杉醇为半合成的属于二萜紫杉烷家族的抗肿瘤剂。多西紫 杉醇为白色至近似白色的粉末，其实验式为C43H53NO14·3H2O，分子量为 861.9。它是高度亲脂的和几乎不溶于水的。多西紫杉醇的化学名为 (2R，3S)-N-羧基-3-苯基丝氨酸，N-叔丁酯，13-5β-20-环氧-1，2α，4， 7β，10β，13 α-六羟基紫杉烷-11-烯-9-酮酯，4-乙酸酯，2-苯甲酸酯的 三水合物。多西紫杉醇是从紫杉植物的可更新针叶生物中提取的前体 (二萜紫杉烷10-脱乙酰基浆果赤霉素III)开始半合成制得的。多西 紫杉醇的结构(如下所示)与紫杉醇的结构显著不一样：
多西紫杉醇具有独一无二的化学结构，相对于紫杉醇有2个改变： (1)在紫杉酚B环的C-10位置上用羟基代替乙酰基；和(2)C-13例链 的变化(例如在紫杉酚的侧链上用N-叔丁氧基羰基代替N-苯甲酰基)。 这些显著的结构差别导致紫杉醇和多西紫杉醇具有不同的活性。例如， 多西紫杉醇比紫杉醇更有效。Angelo等，“Docetaxel versus paclitaxel for antiangiogenesis，”J.Hematother.Stem.Cell Res.，11(1)：103-18(2002)。另外，在比较由紫杉醇和多西紫杉醇诱 导COX-2表达的研究中，发现了紫杉醇在人和鼠细胞中诱导的COX-2 表达具有相似的动力学和浓度响应曲线，相反地，多西紫杉醇只在人 单核细胞中诱导COX-2表达，而在鼠细胞中不能诱导COX-2的表达。 Cassidy等，Clin.Can.Res.，8：846-8 55(2002)。
而且，多西紫杉醇的作用机理不同于紫杉醇的作用机理。多西紫 杉醇使发生有丝分裂所必需的细胞微管网状构造(microtubular network)分裂，以及影响正常微管所调节的细胞活动。这种作用机理 导致它与紫杉醇相比具有较少的严重的副反应。
多西紫杉醇由Aventis Pharmaceuticals(Bridgewater，New Jersey)以TAXOTERE_Injection Concentrate市售。TAXOTERE_为无 菌无热原的，并且可用的为含有20mg(0.5mL)或80mg(2.0mL) 的多西紫杉醇(无水的)单次剂量小瓶。每mL含有40mg的多西紫杉醇 (无水的)和1040mg的聚山梨醇酯80。TAXOTERE__Injection Concentrate要求使用前稀释。为了此目的，需提供无菌无热原的单 次剂量稀释液。用于TAXOTERE_的稀释液含有13％乙醇的注射用水，并 在小瓶中提供。
聚山梨醇酯80和乙醇(应用它们增加多西紫杉醇的溶解度)的存 在可引起不良反应。因为与TAXOTERE_有关的不良超敏性，在化疗开 始24小时前建议口服地塞米松三天的前驱给药。聚山梨醇酯80与严 重的过敏性反应有关，该反应的特征为低血压和/或支气管痉挛或全身 性疹/红斑，在接受推荐的三天地塞米松前驱给药法的患者中 2.2％(2/92)发生了这类反应。另外，多西紫杉醇注射液要求使用前稀 释。为此，必须提供无菌无热原的单次剂量稀释液。如上所述，用于 TAXOTERE_注射制剂的稀释液含有13％乙醇的注射用水，必须随同药物 一起提供该稀释液。
多西紫杉醇可引起患者骨髓中的血细胞数减少，该药物也可引起 肝损害。另外，已经观察到TAXOTERE_给药的过敏病例。症状包括低 血压和/或支气管痉挛、和全身性疹/红斑。也已观察了一些超剂量的 病例(150-200mg/m2的剂量)。与此有关的一些并发症包括骨髓抑制、 周围神经毒性、和粘膜炎。
溶剂聚山梨醇酯80和乙醇对于TAXOTERE_给药所观察到的过敏性 反应应负至少一部分责任。给予类固醇和其它的组胺阻断药物作为前 驱给药法可减少这些反应的发生率和严重度，但是关于前驱给药法也 涉及不良事件(例如库欣(Cushing′s)综合征、传染性并发症、高血糖 症、高血压、和精神病的效应(包括类固醇诱导的精神病))，尤其是在 长期给药时。溶剂也促成增塑剂从聚氯乙烯(PVC)袋和管中溶出，并可 能产生与这些试剂有关的其它不良反应(例如，神经病和肿瘤细胞耐 药性)。
应用于紫杉醇的一种具有较高水溶性的替代药物制剂为白蛋白结 合的紫杉醇(ABRAXANE_)。然而，这种药物制剂要求紫杉醇共价结合到 白蛋白上，因此可改变紫杉醇的性质。例如，在白蛋白结合的紫杉醇 的临床I和II期临床试验中，没有看到溶剂介导的毒性，不要求前驱 给药法，和可在仅仅30分钟内输入药物。然而，在I期试验中这种药 物的药动学曲线似乎为线性，这不同于显示非线性药动学性质的传统 紫杉醇“Abraxane(paclitaxel protein-bound particles for injectable suspension [albumin-bound])product information，” Abraxis Oncology(Schamburg，IL)，January 2005。
在临床药理学意义上，多西紫杉醇为抗肿瘤剂，其通过使发生有 丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的细胞微管网状构造破裂起作用。 多西紫杉醇结合到游离的微管蛋白并促进微管蛋白装配进入稳定的微 管中，同时抑制它们的拆散。这导致没有正常功能的微管束的生成和 微管的稳定，结果是抑制细胞的有丝分裂。多西紫杉醇结合到微管不 会改变结合的微管中的原丝数目，这是不同于当前临床使用的大多数 纺锤体毒剂的特征。Physicians′Desk Reference，58th Ed.，pp.3， 307，771-78(Thompson PDR，Montvale，New Jersey，2004)。
TAXOTERE_(多西紫杉醇)在1996年首先获得美国食品与药品管理 局的批准，用于先前蒽环类化疗失败后的局部晚期的或转移性乳腺癌。 该药物然后在1999年被批准用于局部晚期的或转移性非小细胞肺癌 (NSCLC)的二线应用。在2002年11月，美国食品与药品管理局批准 TAXOTERE_(多西紫杉醇)与顺铂组合使用，用于不能切除的、局部晚 期的或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者的治疗，对于这种情况患者先 前并没有受到化疗。在2004年，与泼尼松组合的TAXOTERE_被批准用 于非雄激素依赖的(耐激素的)转移性前列腺癌患者的治疗。另外，与 多柔比星和环磷酰胺联用的TAXOTERE_已经被美国FDA批准用于可手 术的、结节阳性(node-positive)乳腺癌患者的辅助治疗。在临床试验 中继续将TAXOTERE_试用于许多类型癌症的各期治疗。
在I期试验中，给予从20mg/m2至115mg/m2范围的剂量后评价 癌症患者中的多西紫杉醇(TAXOTERE_)药动学。在静脉注射70mg/m2 至115mg/m2的剂量后，多西紫杉醇的药动学是剂量不依赖的并符合3 室模型，其α、β、γ半衰期的总体均数分别为4分钟、36分钟、和 11.1小时。TAXOTERE_批准的剂量范围为60mg/m2至100mg/m2。IV 给予100mg/m2的剂量后，平均峰值血浆水平为3.7μg/mL(SD＝0.8)， 相应的AUC为4.6μg/mL·h(SD＝0.8)。据发现，虽然药物清除率不依 赖于剂量或者给药方案，多西紫杉醇(TAXOTERE_)的血浆浓度和AUC 与剂量是直接成比例的，这符合线性的药代动力学类型。总体清除率 和稳态分布容积的平均值分别为21L/h/m2和113L。多西紫杉醇 (TAXOTERE_)在静脉内(IV)给药后迅速地和广泛地分布。体外研究表明 约有94％多西紫杉醇与血浆蛋白(主要与白蛋白、α1-酸性糖蛋白和脂 蛋白)结合。
TAXOTERE_(多西紫杉醇)剂量方案依治疗的癌症类型而不同。至于 乳腺癌，推荐剂量为每三周于1小时内静脉内给予60-100mg/m2。在 非小细胞肺癌情形下，TAXOTERE_只应用于先前基于铂的化疗失败后。 推荐剂量为每三周于1小时内静脉内给予75mg/m2。
与多西紫杉醇使用相关的重要的限制为不可预知的个体间的效果 和毒性的差异性。自其临床应用以来，改善多西紫杉醇治疗的尝试已 经遍及多方面：减少个体间的药动学(PK)和药效学(PD)的差异性，优化 给药方案、途径和药物制剂，以及逆转耐药性。
已经描述的多西紫杉醇的类似物，包括3′-脱苯基-3′-环己基多 西紫杉醇、2-(六氢)多西紫杉醇、和3′-脱苯基-3′-环己基-2-(六氢) 多西紫杉醇。这些多西紫杉醇类似物在C-3′和/或C-2苯甲酸酯位置 上含有环己基而不是苯基。Ojima等“Synthesis and Structure-Activity Relationships of New Antitumor Taxoids： Effects of Cyclohexyl Substitution at the C-3′and/or C-2 TAXOTERE_(Docetaxel)，”J.Med.Chem.，37：2602-08(1994)。据 报道，3′-脱苯基-3′-环己基多西紫杉醇和2-(六氢)多西紫杉醇对微 管拆散(microtubule disassembly)具有等同于多西紫杉醇的强抑制 活性。这证明C-3′或C-2位置的苯基或芳基对于与微管的强结合来说 不是必要的。
其它先前描述的多西紫杉醇类似物包括各种2-酰氨基多西紫杉 醇类似物(包括间甲氧基和间氯苯甲酰氨基类似物)(Fang等， “Synthesis and Cytotoxicity of 2alpha-amido Docetaxel Analogues，”Bioorg.Med.Chem.Lett.，12：1543-6(2002))；缺少 环氧丙烷D环但具有对生物活性重要的4α-乙酰氧基的多西紫杉醇类 似物(Deka等，“Deletion of the oxetane ring in docetaxel analogues：synthesis and biological evaluation，”Org.Lett.， 5：5031-4(2003))；5(20)去氧多西紫杉醇(Dubois等，“Synthesis of5(20)deoxydocetaxel，a new active docetaxel analogue，” Tetrahedfon Lett.，41：3331-3334(2000))；10-脱氧-10-C-吗啉代 乙基多西紫杉醇类似物(Iimura等，“Orally active docetaxel analogue-synthesis of 10-deoxy-10-C-morpholinoethyl docetaxel analogues，”Bioorganic and Medicinal Chem.Lett，11：407-410 (2001))；Cassidy等在Clin.Can.Res.，8：846-855(2002)中描述 的多西紫杉醇类似物，例如具有叔丁基氨基甲酸酯作为异丝氨酸N-酰 基的取代基但又不同于多西紫杉醇的C-10(乙酰基对羟基)和C-13异 丝氨酸键连(烯醇酯对酯)的类似物；和C3位具有肽支链的多西紫杉醇 类似物，参见Larroque等“Novel C2-C3″N-peptide linked macrocyclic taxoids.Part 1 ：Synthesis and biological activities of docetaxel analogues with a peptide side chainat C3”，Bioorg.Med.Chem.Lett.15(21)：4722-4726(2005)。另外 临床试验中有多种多西紫杉醇衍生物，包括XRP 9881(也是指RPR 10988 1A)(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物)(Aventis Pharma)、XRP6528(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物) (Aventis Pharma)、Ortataxel(14-β羟基-脱乙酰基浆果赤霉素III 多西紫杉醇类似物)(Bayer/Indena)、MAC-321(10-脱乙酰基-7-丙酰 基(propanoyl)浆果赤霉素多西紫杉醇类似物)(Wyeth-Ayerst)和 DJ-927(7-脱氧-9-β-二氢-9，10，O-乙缩醛紫杉烷多西紫杉醇类似物) (Daiichi Pharmaceuticals)，全部描述在Engels等的“Potential for Improvement Docetaxel-Based Chemotherapy：A Pharmacological Review，”British J.of Can.，93：173-177(2005)中。另外的多西 紫杉醇衍生物描述在Querolle等的“Novel C2-C3′N-linked Macrocyclic Taxoids：Novel Docetaxel Analogues with High Tubulin Activity，”J.Med.Chem.，(Nov.2004)。
B.关于纳米微粒活性物质组合物的背景
纳米微粒活性物质组合物是美国专利5,145,684(简称“′684专 利”)首先描述的粒子，它由吸附或结合于非交联的表面稳定剂表面的 溶解性差的治疗或诊断剂组成。′684专利没有描述多西紫杉醇或其类 似物的纳米微粒组合物。
下列文献描述了制备纳米微粒活性物质组合物的方法，例如美国 专利5,518,187和5,862,999，两者均为“碾磨药用物质的方法”；美 国专利5,718,388为“碾磨药用物质的后续方法”；以及美国专利 5,510,118为“包含纳米粒的治疗组合物的制备方法”。
下列文献也描述了制备纳米微粒活性物质组合物的方法，例如美 国专利5,298,262为“应用离子浊点改性剂防止消毒过程中粒子聚集”； 5,302,401“减少冷冻干燥过程中粒径生长的方法”；5,318,767“用 于医学成像的X射线造影组合物”；5,326,552“应用高分子量非离子 型表面活性剂的纳米微粒X射线血池造影剂的新制剂”；5,328,404 “应用碘化芳族丙二酸酯的X射线成像的方法”；5,336,507“减少纳 米粒聚集的带电荷磷脂的应用”；5,340,564“的防止粒子聚集并增加 稳定性的包含Olin 10-G制剂”；5,346,702“应用非离子浊点改性剂 使消毒过程中纳米微粒聚集最小化”；5,349,957“极小磁性-右旋糖 酐粒子的制备及磁性性质”；5,352,459“应用纯化表面改性剂防止消 毒过程中粒子聚集”；5,399,363和5,494,683，两者均为“表面修 饰的抗癌纳米粒”；5,401,492“不溶于水的非磁性锰颗粒用作磁共振 增强剂”；5,429,824“四丁酚醛用作纳米微粒稳定剂”；5,447,710 “应用高分子量非离子型表面活性剂制备纳米微粒X射线血池造影剂 的方法”；5,451,393“用于医学成像的X射线造影组合物”；5,466,440 “口服胃肠诊断的X射线造影剂与药学上可接受的粘土组合的制剂”； 5,470,583“减少聚集的包含带电荷磷脂的纳米粒组合物的制备方法”； 5,472,683“纳米微粒诊断性混合氨基甲酸酐用作血池和淋巴系统成像 的X射线造影剂”；5,500,204“纳米微粒诊断性二聚物用作血池和淋 巴系统成像的X射线造影剂”；5,518,738“纳米微粒NSAID制剂”； 5,521,218“纳米微粒碘代二帕胺(Iododipamide)衍生物用作X射线造 影剂”；5,525,328“用于血池和淋巴系统成像的纳米微粒诊断性 Diatrizoxy Ester X射线造影剂”；5,543,133“包含纳米粒的X射 线造影组合物的制备方法”；5,552,160“表面修饰的NSAID纳米粒”； 5,560,931“作为可消化油或脂肪酸中的纳米微粒分散体化合物的制 剂”；5,565,188“聚亚烷基嵌段共聚物用作纳米粒的表面改性剂”； 5,569,448“硫酸化非离子的嵌段共聚物表面活性剂用作纳米粒组合物 的稳定剂包衣”；5,571,536“作为可消化油或脂肪酸中的纳米微粒分 散体化合物的制剂”；5,573,749“纳米微粒诊断性混合羧酸酐用作血 池和淋巴系统成像的X射线造影剂”；5,573,750“诊断性成像的X 射线造影剂”；5,573,783“具有保护性外层的可再分散的纳米微粒膜 基质”；5,580,579“使用由高分子量线性聚(环氧乙烷)聚合物稳定的 纳米粒在胃肠道内特定位点的粘附”；5,585,108“口服胃肠治疗剂与 药学上可接受的粘土组合的制剂”；5,587,143“环氧丁烷-环氧乙烷 嵌段共聚物表面活性剂用作纳米粒组合物的稳定剂包衣”；5,591,456 “与羟丙基纤维素一起碾磨的萘普生用作分散体稳定剂”；5,593,657 “由非离子和阴离子稳定剂稳定的钡盐新制剂”；5,622,938“用于纳 米晶体的糖基表面活性剂”；5,628,981“口服胃肠诊断的X射线造影 剂和口服胃肠治疗剂的改良制剂”；5,643,552“纳米微粒诊断性混合 碳酸酐用作血池和淋巴系统成像的X射线造影剂”；5,718,388“碾磨 药用物质的连续方法”；5,718,919“包含布洛芬R(-)对映体的纳米 粒”；5,747,001“包含倍氯米松纳米粒分散体的气溶胶”；5,834,025 “静脉内给予纳米微粒制剂引起不良生理反应的减少”；6,045,829 “使用纤维素(Cellulosic)表面稳定剂的人免疫缺陷性病毒(HIV) 蛋白酶抑制剂的纳米晶体制剂”；6,068,858“使用纤维素表面稳定剂 制备人免疫缺陷性病毒(HIV)蛋白酶抑制剂的纳米晶体制剂的方法”； 6,153,225“纳米微粒萘普生的注射剂”；6,165,506“纳米微粒萘普 生的新固体剂型”；6,221,400“应用人免疫缺陷性病毒(HIV)蛋白酶 抑制剂的纳米晶体制剂治疗哺乳动物的方法”；6,264,922“含有纳米 粒分散体的喷雾气溶胶”；6,267,989“防止纳米粒组合物中晶体生长 和粒子聚集的方法”；6,270,806“PEG衍生的类脂用作纳米微粒组合 物的表面稳定剂的用途”；6,316,029“快速崩解的固体口服剂型”； 6,375,986“包含协同组合的聚合的表面稳定剂和磺基琥珀酸二辛酯钠 的固体剂型纳米微粒组合物”；6,428,814“具有阳离子的表面稳定剂 的生物粘附纳米微粒组合物”；6,431,478“小型碾磨”；6,432,381 “靶向药物递送至上和/或下部胃肠道的方法”；6,592,903“包含协 同组合的聚合的表面稳定剂和磺基琥珀酸二辛酯钠的纳米微粒分散 体”；6,582,285“用于卫生的湿磨仪器”；6,656,504“包含无定形 的环孢霉素A的纳米微粒组合物”；6,742,734“用于碾磨材料的系 统和方法”；6,745,962“小型磨及其方法”；6,811,767“纳米微粒 药物的液滴气溶胶”；6,908,626“具有立即释放和控制释放特性组合 的组合物”；6,969,529“包含乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的共聚物 作为表面稳定剂的纳米微粒组合物”；6,976,647“用于碾磨材料的系 统和方法”；特别地，在此引入所有这些作为参考文献。另外，2002 年1月31日公开的美国专利申请20020012675 A1“控释纳米微粒组 合物”描述了纳米微粒组合物，特别地，在此将其引入作为参考。这 些专利都没有描述多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒制剂。
下列文献描述了无定形小粒子组合物，例如美国专利4,783,484 “作为抗微生物剂的微粒组合物及其用途”；4,826,689“由不溶于水 的有机化合物制备大小均匀的粒子的方法”；4,997,454“由不溶性化 合物制备大小均匀的粒子的方法”；5,741,522“内部夹带气泡的大小 均匀的超小非聚集多孔颗粒及方法”；5,776,496，“用于增强超声反 向散射的超小多孔颗粒”。
当前需要具有提高溶解性特性(该特性又对给药患者提供提高的 生物利用度和降低的毒性)的多西紫杉醇制剂。本发明通过提供包含多 西紫杉醇或其类似物的纳米微粒制剂的组合物及方法满足这些需要。 这些制剂包括但不限于注射纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物的制 剂。
发明内容
本发明涉及包含多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒的多西紫杉醇 组合物，其中多西紫杉醇或其类似物的粒子(particle)具有小于约 2000nm的有效平均粒径。该组合物还包含至少一种表面稳定剂，其 被吸附于或结合于多西紫杉醇或多西紫杉醇类似物粒子的表面。虽然 可应用任何药学上可接受的剂型，本发明优选的剂型为注射剂型。
本发明另一个方面涉及药物组合物，其包含纳米微粒的多西紫杉 醇或其类似物、至少一种表面稳定剂和药学上可接受的载体、以及任 何需要的辅料。
在本发明的一个实施方案中，提供多西紫杉醇或其类似物的注射 制剂。在另一个实施方案中，制剂不含有聚山梨醇酯(包括聚山梨醇酯 80)或乙醇的水溶液。
本发明的一个方面涉及令人惊讶和料想不到发现的多西紫杉醇或 其类似物(统称为“活性成分”)的新注射制剂，其通过给药实现了下列 目的：(1)注射制剂无需聚山梨醇酯或乙醇水溶液的存在，和(2)纳米 微粒多西紫杉醇或其类似物的有效平均粒径小于约2微米。在一个实 施方案中，该注射制剂包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物和吸附或 结合于多西紫杉醇或其类似物表面的作为表面稳定剂的聚维酮聚合 物。
本发明提供组合物，其包含低注射容量的多西紫杉醇或其类似物 的浓缩物，不含聚山梨醇酯和/或乙醇，并在给药时具有快速的药物溶 出度。
本发明另一个方面涉及包含多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒组 合物，其与常规多西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)相比具有改善药动 学性质。
本发明的另一个实施方案涉及纳米微粒组合物，其包含多西紫杉 醇或其类似物并且还包含本领域已知的用于治疗癌症的或通常与二萜 紫杉烷联合使用的一种或多种非多西紫杉醇或非多西紫杉醇类似物的 活性剂。
本发明还公开了制备含多西紫杉醇或其类似物的本发明纳米微粒 组合物的方法。该方法包括在一定的时间和条件下将纳米微粒的多西 紫杉醇或其类似物粒子与至少一种表面稳定剂接触，以提供具有小于 约2000nm的有效平均粒径的多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒组合 物。一种或多种表面稳定剂可以在多西紫杉醇尺寸减少之前、期间或 之后与多西紫杉醇或其类似物接触。
本发明也涉及使用本文公开的新纳米微粒的多西紫杉醇或其类似 物治疗癌症的方法。该方法包含给受试者施用治疗有效量的本发明的 纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物。使用本发明纳米微粒组合 物的其它治疗方法对本领域技术人员来说是已知的。
上面的一般性描述和以下的附图简述以及详细描述都是示例和解 释性的，旨在对权利要求的本发明提供进一步解释。根据以下本发明 的详细描述，本领域技术人员将容易明白其它的目的、优点、和新特 征。
本发明另一个方面涉及药物组合物，其包含纳米微粒的多西紫杉 醇或其类似物、至少一种表面稳定剂和药学上可接受的载体、以及任 何需要的辅料。
在本发明的一个实施方案中，提供多西紫杉醇或其类似物的注射 制剂。在另一个实施方案中，制剂不含有聚山梨醇酯(包括聚山梨醇酯 80)或乙醇的水溶液。
本发明的一个方面涉及令人惊讶和料想不到发现的多西紫杉醇或 其类似物(统称为“活性成分”)的新注射制剂，其通过给药实现了下列 目的：(1)注射制剂无需聚山梨醇酯或乙醇水溶液的存在，和(2)纳米 微粒多西紫杉醇或其类似物的有效平均粒径小于约2微米。在一个实 施方案中，该注射制剂包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物和吸附或 结合于多西紫杉醇或其类似物表面的作为表面稳定剂的聚维酮聚合 物。
本发明提供组合物，其包含低注射容量的多西紫杉醇或其类似物 的浓缩物，不含聚山梨醇酯和/或乙醇，并在给药时具有快速的药物溶 出度。
本发明另一个方面涉及包含多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒组 合物，其与常规多西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)相比具有改善药动 学性质。
本发明的另一个实施方案涉及纳米微粒组合物，其包含多西紫杉 醇或其类似物并且还包含本领域已知的用于治疗癌症的或通常与二萜 紫杉烷联合使用的一种或多种非多西紫杉醇或非多西紫杉醇类似物的 活性剂。
本发明还公开了制备含多西紫杉醇或其类似物的本发明纳米微粒 组合物的方法。该方法包括在一定的时间和条件下将纳米微粒的多西 紫杉醇或其类似物粒子与至少一种表面稳定剂接触，以提供具有小于 约2000nm的有效平均粒径的多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒组合 物。一种或多种表面稳定剂可以在多西紫杉醇尺寸减少之前、期间或 之后与多西紫杉醇或其类似物接触。
本发明也涉及使用本文公开的新纳米微粒的多西紫杉醇或其类似 物治疗癌症的方法。该方法包含给受试者施用治疗有效量的本发明的 纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物。使用本发明纳米微粒组合 物的其它治疗方法对本领域技术人员来说是已知的。
上面的一般性描述和以下的附图简述以及详细描述都是示例和解 释性的，旨在对权利要求的本发明提供进一步解释。根据以下本发明 的详细描述，本领域技术人员将容易明白其它的目的、优点、和新特 征。
附图说明
图1.未碾磨的多西紫杉醇(无水的)(Camida Ltd.)在100X下应 用相位光学(phase optics)的光显微照片。
图2.5％(w/w)多西紫杉醇(Camidta Ltd.)与1.25％(w/w)聚乙 烯吡咯酮(PVP)K17和0.25％(w/w)去氧胆酸钠结合的纳米微粒水分散 系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图3.5％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与1.25％(w/w) Tween_80和0.1％(w/w)卵磷脂结合的纳米微粒水分散系在100X下 应用相位光学的光显微照片。
图4.5％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与1.25％(w/w) 聚乙烯吡咯酮(PVP)K12、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w)葡萄 糖结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图5.1％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与0.25％(w/w) Plasdone_S630和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)结合的纳米 微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图6.1％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与0.25％(w/w) 羟丙基甲基纤维素(HPMC)和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS) 结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图7.1％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与0.25％(w/w) Pluronic_F127结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的 光显微照片。
图8.未碾磨的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)在100X下应 用相位光学的光显微照片。
图9.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K12和0.25％(w/w)去氧胆酸钠 (NaDeoxycholate)结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学 的光显微照片。
图10.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K17、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w) 葡萄糖结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照 片。
图11.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K17、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w) 葡萄糖结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照 片。
图12.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)Tween_80、0.1％(w/w)卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖结合的纳 米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图13.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)Tween_80、0.1％(w/w)卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖结合的纳 米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图14.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)TPGS(PEG化的维生素E)和0.1％(w/w)去氧胆酸钠结合的纳米 微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图15.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)Pluronic_F 108、0.1％(w/w)去氧胆酸钠和10％(w/w)葡萄糖 (w/w)结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照 片。
图16.5％(w/w)的多西紫杉醇与1.25％(w/w)Plasdone_S630 和0.05％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)结合的纳米微粒水分散系在 100X下应用相位光学的光显微照片。
图17.5％(w/w)的多西紫杉醇与1.25％(w/w)HPMC和0.05％(w/w) 磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相 位光学的光显微照片。
图18.5％(w/w)的无水多西紫杉醇与1％(w/w)白蛋白和0.5％ (w/w)去氧胆酸钠结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学 的光显微照片。
图19.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物与1％(w/w)白蛋白和0.5％ (w/w)去氧胆酸钠结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学 的光显微照片。
发明详述
A.概况
本发明涉及包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物及其制 备和应用的方法。与多西紫杉醇的常规制剂(TAXOTERE_)相比，纳米微 粒组合物令人惊讶地和出乎意料地不需要包括用以增加药物溶解度的 聚山梨醇酯或乙醇。
能制得多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒组合物是令人惊讶的。 虽然先前已制得紫杉醇的纳米微粒组合物，但多西紫杉醇具有显著不 同于紫杉醇的结构。这种不同的结构导致多西紫杉醇具有比紫杉醇显 著更强的活性。而且，多西紫杉醇经由不同于紫杉醇的机理发挥作用。 根据所给出的这两种化合物的不同结构，料想不到的是，吸附或结合 于多西紫杉醇或其类似物表面的表面稳定剂能够成功地使化合物稳定 在纳米微粒的大小。
含多西紫杉醇或其类似物的组合物具有小于约2000nm的有效平 均粒径和至少一种表面稳定剂。在一个实施方案中，描述了可注射的 组合物，其包含纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物以及作为表面稳定 剂的具有分子量小于约40,000道尔顿的聚维酮聚合物。在另一个实 施方案中，纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物的药物制剂具有约6至 约7之间的pH值。
在人类治疗中，提供体内释放所需治疗量的活性成分并以快速和 恒定的方式使活性成分成为生物可利用的剂型是重要的。因此，本文 描述了多种纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物制剂，以满足这种需要。 纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物剂型的两个实例为注射纳米微粒剂 型和包衣纳米微粒剂型(例如固体分散体或液体填充胶囊)，当然也可 使用任何药学上可接受的剂型。
可以以在患者上施用时显示多种释放性质的制剂来提供本发明的 剂型，包括例如立即释放(IR)制剂、允许每日给药一次(或其它适当的 时间期限，例如每周/月给药一次/两次/三次)的控制释放(CR)制剂、 和IR和CR组合的制剂。因为本发明组合物的CR形式可要求每日只给 药一次剂量(或如每周或每月的适当时间期限给药一次剂量)，这样的 剂型有益于提高患者便利性和依从性。可以以多种途径实现CR形式中 所用的控制释放的机制，包括但不限于使用可侵蚀的制剂、控制扩散 的制剂、和渗透控制的制剂。
本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物制剂优于多西紫杉醇常 规形式(例如，非纳米微粒或增溶的剂型，例如TAXOTERE_)的优点包 括但不限于：(1)增加水溶性；(2)增加生物利用度；(3)更小的剂型 规格由于提高生物利用度；(4)更低的治疗剂量由于提高生物利用 度；(5)减少不期望的副作用的风险；(6)提高患者的便利性和依从性； (7)更高的剂量而可能没有不良副作用；和(8)更有效的癌症治疗。本发 明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物的注射制剂超过多西紫杉醇注射 常规形式(例如TAXOTERE_)的进一步优点是无需使用聚山梨醇酯或乙 醇来增加药物溶解度。
本发明也包括纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组合物，其包含 一种或多种无毒的生理学上可接受的载体、辅助剂、或赋形剂(统称为 载体)。组合物可配制用于胃肠外注射(例如静脉内、肌内、或皮下注 射)，以固体、液体或气溶胶形式口服给药，经阴道、鼻、直肠、眼、 局部(粉末、软膏或滴剂)、颊、脑池内、腹膜内、或表面(topical) 等等给药的制剂。
B.定义
本文使用如下面和整个申请所述的若干定义来描述本发明。
本文所用的术语“有效平均粒径小于约2000nm”表示当通过例 如沉积场流分级分离法(sedimentation field flow fractionation)、 光子相关光谱法(photon correlation spectroscopy)、光散射、碟 式离心法(disk centrifugation)、和本领域技术人员已知的其它技术 测量时，按重量计至少50％的多西紫杉醇或其类似物的粒子具有小于 约2000nm的大小。
本文所用的“约”应是本领域普通技术人员所理解的，并且在应 用它的上下文中会有在某种程度上变化。如果在所给出的应用它的上 下文中具有本领域普通技术人员不清楚的术语使用时，“约”将表示 该特定术语的至多加或减10％。
本文所用的“稳定的”多西紫杉醇或其类似物粒子包括但不限于 具有一种或多种以下参数的多西紫杉醇或其类似物：(1)多西紫杉醇或 其类似物粒子不会由于粒子间的吸引力或别的随着时间显著增加粒径 的因素出现可看到的絮凝或凝聚；(2)多西紫杉醇或其类似物粒子的物 理结构不会随着时间而改变，例如从无定形相转化为晶形相；(3)多西 紫杉醇或其类似物粒子是化学稳定的；和/或(4)在制备本发明纳米粒 中，多西紫杉醇或其类似物没有受到在多西紫杉醇或其类似物的熔点 或以上温度下的加热步骤。
术语“常规的”或“非纳米微粒”活性剂或多西紫杉醇或其类似 物应是指增溶的或具有大于约2000nm的有效平均粒径的活性剂，例 如多西紫杉醇或其类似物。如本文所定义的纳米微粒活性剂具有小于 约2000nm的有效平均粒径。
本文所用的短语“水溶性差的药物”是指在水中的溶解度小于约 30mg/ml、小于约20mg/ml、小于约10mg/ml、或小于约1mg/m的 药物。
本文所用的短语“治疗有效量”表示在需要此治疗的众多患者给 予该药物时提供的特定药理学反应的药物剂量。应强调的是，在特定 情况下给特定患者施用的治疗有效量的药物在治疗本文所述的病症/ 疾病中不总是有效的，即使领域技术人员认定该剂量为治疗有效量。
本文所用的术语“微粒”或“粒子”是指物质的状态，其特征为 不分大小、形状或形态存在的离散的粒子(particles)、小丸 (pellets)、珠(beads)、或颗粒(granules)。本文所用的术语“多微 粒”表示不分大小、形状或形态的复数个离散的或聚集的粒子、小丸、 珠、或颗粒或者它们的混合物。
本文所用的与根据本发明组合物或与包衣或包衣材料有关的或用 于其它任何上下文中的术语“改性释放”表示非立即释放的释放，它 包括控制释放、持续释放(sustained release)、延迟释放(delayed release)。
本文所用的术语“时间延迟”是指在给予组合物到多西紫杉醇或 其类似物从特定组分中释放之间的时间延续期。
本文所用的术语“滞后时间”是指活性成分从一个组分释放到多 西紫杉醇或其类似物从另一个组分中继后释放之间的时间。
C.纳米微粒的多西紫杉醇组合物的特征
本发明的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物具有许多提高 的药理学性质。
1.提高的生物利用度
在本发明的一个实施方案中，纳米微粒多西紫杉醇或其类似物制 剂在相同剂量的相同多西紫杉醇或其类似物下显示出提高的生物利用 度，并且与先前的常规多西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)相比，只需 要更小的剂量。
纳米微粒多西紫杉醇或其类似物剂型获得常规微晶多西紫杉醇剂 型(例如TAXOTERE_)所观察到的相同药理学效果，只需要更少的药物。 因此，纳米微粒多西紫杉醇或其类似物剂型与常规微晶多西紫杉醇剂 型相比，具有提高的生物利用度。
2.本发明多西紫杉醇组合物药动学曲线不受摄入此组合物的受 试者进食或禁食状态的影响
在本发明的另一个实施方案中描述了纳米微粒的多西紫杉醇或其 类似物的组合物，其中本发明多西紫杉醇组合物药动学曲线基本上不 受摄入此组合物的受试者进食或禁食状态的影响。这表示当纳米微粒 的多西紫杉醇或其类似物的组合物在进食状态施用与在禁食状态施用 对比时，在药物吸收的量或药物吸收的速率上，几乎没有差异或没有 可察觉的差异。
基本上消除食物影响的剂型的益处包括增加受试者的便利性，从 而增加受试者的依从性，因为受试者不需要确保他们在用药时是否进 食。而这是有意义的，因为多西紫杉醇或其类似物的受试者依从性不 好，可以观察到所开处方药物用于的医疗疾病加重，即癌症患者(例如 乳腺癌或肺癌患者)的预后可变得更糟。
本发明也提供多西紫杉醇或其类似物的组合物，其在给哺乳动物 受试者施用时具有预期的药动学性质。优选地，多西紫杉醇或其类似 物的组合物预期的药动学性质包括但不限于：(1)当测定哺乳动物受 试者用药后的血浆时，多西紫杉醇或其类似物的Cmax大于以相同剂量 给药的非纳米微粒多西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)的Cmax；和/或(2) 当测定哺乳动物受试者用药后的血浆时，多西紫杉醇或其类似物的 AUC大于以相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉醇制剂(例如 TAXOTERE_)的AUC；和/或(3)当测定哺乳动物受试者用药后的血浆时， 多西紫杉醇或其类似物的Tmax小于以相同剂量给药的非纳米微粒多西 紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)的Tmax。本文所用的预期的药动学性质为 在多西紫杉醇或其类似物初始剂量后所测量的药动学性质。
在一个实施方案中，在与相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉醇 制剂(例如TAXOTERE_)比较的药动学试验中，优选的多西紫杉醇或其 类似物组合物所显示的Tmax不大于约90％、不大于约80％、不大于约70％、 不大于约60％、不大于约50％、不大于约30％、不大于约25％、不大于 约20％、不大于约15％、不大于约10％、或不大于约5％的非纳米微粒多 西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)所显示的Tmax。
在另一个实施方案中，在与相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉 醇制剂(例如TAXOTERE_)比较的药动学试验中，本发明的多西紫杉醇 或其类似物组合物所显示的Cmax大于至少约50％、至少约100％、至少 约200％、至少约300％、至少约400％、至少约500％、至少约600％、至 少约700％、至少约800％、至少约900％、至少约1000％、至少约1100％、 至少约1200％、至少约1300％、至少约1400％、至少约1500％、至少约 1600％、至少约1700％、至少约1800％、至少约1900％的非纳米微粒多 西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)所显示的Cmax。
在还一个实施方案中，在与相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉 醇制剂(例如TAXOTERE_)比较的药动学试验中，本发明的多西紫杉醇 或其类似物组合物显示出的AUC大于至少约25％、至少约50％、至少约 75％、至少约100％、至少约125％、至少约150％、至少约175％、至少约 200％、至少约225％、至少约250％、至少约275％、至少约300％、至少 约350％、至少约400％、至少约450％、至少约500％、至少约550％、至 少约600％、至少约750％、至少约700％、至少约750％、至少约800％、 至少约850％、至少约900％、至少约950％、至少约1000％、至少约1050％、 至少约1100％、至少约1150％、或至少约1200％的非纳米微粒多西紫杉 醇制剂(例如TAXOTERE_)所显示的AUC。
3.进食状态与禁食状态给药时本发明多西紫杉醇组合物的生物 等效性
本发明也包括包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物，其 中在禁食状态下给受试者施用该组合物与在进食状态下给受试者施用 该组合物是生物等效的。
包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物在进食状态给药与 禁食状态给药相比时，其吸收的差异优选小于约100％、小于约95％、 小于约90％、小于约85％、小于约80％、小于约75％、小于约70％、小 于约65％、小于约60％、小于约55％、小于约50％、小于约45％、小于 约35％、小于约35％、小于约30％、小于约25％、小于约20％、小于约 15％、小于约10％、小于约5％、或小于约3％。
在本发明的一个实施方案中，本发明包括包含纳米微粒多西紫杉 醇或其类似物的组合物，其中在禁食状态下给受试者施用该组合物与 在进食状态下给受试者施用该组合物是生物等效的，尤其是按照美国 食品与药品管理局(USFDA)和相应的欧洲调控机构(EMEA)所给出的Cmax 和AUC指导方针定义时是生物等效的。在USFDA指导方针下，如果AUC 和Cmax的90％置信区间(CI)在0.80至1.25(Tmax测量与调节目的的生物 等效性无关)时，则两种产品或方法是生物等效的。为了表明两种化合 物或给药条件之间的生物等效性，按照欧洲EMEA指导方针，AUC的90％ CI必须为0.80至1.25且Cmax的90％CI必须为0.70至1.43。
4.本发明多西紫杉醇组合物的溶出性质
在本发明的又一个实施方案中，本发明多西紫杉醇或其类似物的 组合物出乎意料地具有引人注目的溶出性质。多西紫杉醇或其类似物 的快速溶出是优选的，因为溶出越快通常导致起效越快，生物利用度 也越高。为了改善多西紫杉醇或其类似物的溶出性质和生物利用度， 增加药物的溶出度是有用的，这样可获得接近100％的水平。
本发明多西紫杉醇或其类似物的组合物优选具有以下溶出性质： 其中在约5分钟内溶出至少约20％的多西紫杉醇或其类似物的组合物。 在本发明的另一个实施方案中，在约5分钟内溶出至少约30％或至少约 40％的多西紫杉醇或其类似物的组合物。在本发明另外的又一个实施方 案中，优选在约10分钟内溶出至少约40％、至少约50％、至少约60％、 至少约70％、或至少约80％的多西紫杉醇或其类似物的组合物。最后， 在本发明的再一个实施方案中，优选在约20分钟内溶出至少约70％、 至少约80％、至少约90％、或至少约100％的多西紫杉醇或其类似物的 组合物。
优选在有区分力的介质中测量溶出度。对于在胃液具有极为不同 的溶出性质的两种产品，这样的溶出介质会产生两种极为不同的溶出 曲线，即此溶出介质可预测组合物的体内溶出度。示例性溶出介质为 含有0.025M月桂基硫酸钠表面活性剂的水性介质。可通过分光光度 法进行溶出量的测定。可使用转桨法(欧洲药典)测量溶出度。
5.本发明多西紫杉醇组合物的再分散性性质
在本发明的一个实施方案中，将本发明多西紫杉醇或其类似物的 组合物制备成再分散的固体剂型，这样使再分散的多西紫杉醇或其类 似物粒子的有效平均粒径小于约2微米。这是重要的，因为如果给予 纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物后不能再分散为纳米微粒的 粒子大小，那么该剂型就会丧失通过将多西紫杉醇或其类似物制备成 纳米微粒的粒子大小所提供的益处。
事实上，本发明的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物组合物的益处 来自多西紫杉醇或其类似物的小粒径；如果多西紫杉醇或其类似物在 给药后不能再分散为小粒径，那么由于纳米微粒系统非常高的表面自 由能和热力学驱动力使自由能全面减少，将形成“成块”或成团的多 西紫杉醇或其类似物粒子。随着这种成团粒子的形成，该剂型的生物 利用度下降。
此外，本发明纳米微粒的二萜紫杉烷的组合物，包括包含纳米微 粒多西紫杉醇或其类似物的组合物，在给哺乳动物(例如人或动物)施 用后表现出纳米微粒多西紫杉醇或其类似物粒子显著的再分散性(这 如同在生物相关水性介质中重构/再分散所证明的一样)，这样使再分 散的多西紫杉醇或其类似物粒子的有效平均粒径小于约2微米。这种 生物相关水性介质可以是具有形成生物相关介质基础所需的离子强度 和pH的任何水性介质。所需的离子强度和pH是代表人体内存在的生 理条件的那些。这样的生物相关水性介质可以是，例如电解质水溶液 或任何盐、酸或碱的水溶液，或它们的组合，它们均具有所需的离子 强度和pH。
生物相关的pH是本领域众所周知的。例如，在胃中pH范围为略 小于2(但是一般大于1)至4或5。在小肠中pH范围可为4至6，和在 结肠中pH范围可为6至8。生物相关的离子强度也是本领域众所周知 的。禁食状态胃液具有约0.1M的离子强度，而禁食状态肠液具有约 0.14的离子强度。参见例如Lindahl等，“Characterization of Fluids from the Stomach and Proximal Jejunum in Men and Women，”Pharm. Res.，14(4)：497-502(1997)。
据信，试验溶液的pH和离子强度比具体化学内容物更为关键。因 此，通过强酸、强碱、盐、强碱、单个或多个共轭酸碱对(即，弱酸和 该酸相应的盐)、一元和多元电解质的众多组合，可获得适当的pH和 离子强度值。
代表性的电解质溶液可以为但不限于为约0.001至约0.1N浓度 的HCl溶液，和约0.001至约0.1M浓度的NaCl溶液，以及它们的 混合物。例如，电解质溶液可以为但不限于为约0.1N或更低浓度的 HCl、约0.01N或更低浓度的HCl、约0.001N或更低浓度的HCl、 约0.1M或更低浓度的NaCl、约0.01M或更低浓度的NaCl、约0.001 M或更低浓度的NaCl、以及它们的混合物。这些电解质溶液中，0.01 N HCl和/或0.1M NaCl是最有代表性的人禁食生理条件，因为这是 近端胃肠道的pH和离子强度的状况。
0.001N HCl、0.01N HCl、和0.1N HCl的电解质浓度分别相 当于pH3、pH2、和pH1。因此，0.01N HCl溶液模拟胃中存在的 通常酸性条件。0.1M NaCl的溶液提供了合理的近似整个机体(包括 胃肠液)内存在的离子强度的条件，尽管高于0.1M的浓度可用于模拟 进食时人GI道的条件。
盐、酸、碱或它们组合的具有所需pH和离子强度的示例溶液包括 但不限于磷酸/磷酸盐+氯化钠、氯化钾和氯化钙，乙酸/乙酸盐+氯化 钠、氯化钾和氯化钙，碳酸/碳酸氢盐+氯化钠、氯化钾和氯化钙，以 及柠檬酸/柠檬酸盐+氯化钠、氯化钾和氯化钙。
在本发明的另一个实施方案中，按照光散射法、显微镜检查法、或 其它适合的方法测量时，本发明的再分散的多西紫杉醇或其类似物粒 子(再分散在水性、生物相关的、或任何其它适用的介质中)具有有效 平均粒径小于约2000nm、小于约1900nm、小于约1800nm、小于约 1700nm、小于约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小于 约1300nm、小于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、小 于约900nm、小于约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于 约600nm、小于约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约 400nm、小于约350nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200 nm、小于约150nm、小于约100nm、小于约75nm、小于约50nm。 用于测量有效平均粒径这些方法对本领域普通技术人员来说是已知 的。
使用本领域已知的任何适用的方法可测试再分散性。参见，例如 美国专利6,375,986“包含协同组合的聚合的表面稳定剂和磺基琥珀 酸二辛酯钠的固体剂型纳米微粒组合物”的实施例部分。
6.与其它活性剂结合应用的多西紫杉醇组合物
本发明的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物可另外包括用 于癌症治疗(尤其为乳腺癌和/或肺癌治疗)的一种或多种化合物。本发 明组合物可以与这样的其它活性剂一起共同配制(co-formulated)，或 者本发明组合物可以与这样的活性剂结合共同给予或顺序地给予。可 以与本发明多西紫杉醇组合物共同给予或共同制备的药物实例，包括 但不限于抗癌剂、化学治疗剂、地塞米松、COX-2抑制剂、laniquidar、 奥利默森(oblimersen)、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、类固醇(例如泼 尼松和其它组胺阻断药物)、环磷酰胺、环孢霉素A、易瑞沙(ZD1839)、 沙利度胺、米托蒽醌、英利昔单抗(Infliximab)、埃罗替尼 (erlotinib)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、TLK286、MDX-010、ZD1839、 表柔比星、他莫昔芬、贝伐单抗(bevacizumab)、非格司亭 (filgrastim)、长春瑞滨、西妥昔单抗(cetuximab)、伊立替康、雌 莫司汀、依昔舒林(exisulind)、卡铂、ZD6474、吉西他滨、异环磷酰 胺、卡培他滨、黄酮吡啶酚(flavopiridol)、塞来考昔、舒林酸、和 舒林酸砜(Exisulind)。
D.组合物
本发明提供包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物粒子和至少一种 表面稳定剂的组合物。优选地表面稳定剂被吸附在或结合于多西紫杉 醇或其类似物粒子的表面。本文所用的表面稳定剂与多西紫杉醇或其 类似物粒子或其本身之间不会起化学反应。优选地，表面稳定剂的个 体分子基本上没有分子间的交联键合。在另一个实施方案，本发明组合 物可包含两种或更多种表面稳定剂。
本发明也包括纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组合物，其中包 含一种或多种无毒的生理学上可接受的载体、辅助剂、或赋形剂(统称 为载体)。组合物可制备用于胃肠外注射(例如静脉内、肌内、或皮下 注射)，以固体、液体或气溶胶形式口服给药，经阴道、鼻、直肠、眼、 局部(粉末、软膏或滴剂)、颊、脑池内、腹膜内、或表面等等给药的 制剂。在本发明的一些实施方案中，纳米微粒的多西紫杉醇或其类似 物制剂为注射形式或包衣口服形式。
1.多西紫杉醇
本文所有的术语“多西紫杉醇”包括其类似物和盐，并且可以是 晶形相、无定形相、半晶形相、半无定形相(semi-amorphous phase)、 或它们的混合物。多西紫杉醇或其类似物可以以一种基本上为光学纯 的对映异构体形式或者以对映异构体的混合物、消旋体或别的形式存 在。
本发明所述和包含的多西紫杉醇类似物包括但不限于，
(1)在C-3′和/或C-2苯甲酸酯位置上含有环己基基团而不是苯 基基团的多西紫杉醇类似物，例如3′-脱苯基-3′-环己基多西紫杉醇、 2-(六氢)多西紫杉醇、和3′-脱苯基-3′-环己基-2-(六氢)多西紫杉 醇(Ojima等“Synthesis and structure-activity relationships of new antitumor taxoids.Effects of cyclohexyl substitution at the C-3′and/or C-2 taxotere(docetaxel)，″J.Med.Chem.， 37(16)：2602-8(1994)；
(2)C-3′或C-2位置缺少苯基或芳基的多西紫杉醇类似物，例如 3′-脱苯基-3′-环己基多西紫杉醇和2-(六氢)多西紫杉醇；
(3)2-酰氨基多西紫杉醇类似物，包括间甲氧基和间氯苯甲酰氨 基类似物(Fang等，Bioorg.Med.Chem.Lett，12(11)：1543-6 (2002)；
(4)缺少环氧丙烷(oxetane)D环但具有对生物活性重要的4α- 乙酰氧基的多西紫杉醇类似物，例如5(20)-硫杂多西紫杉醇(thia docetaxel)类似物，它可由10-脱乙酰基浆果赤霉素III或紫杉碱B 和异紫杉碱(isotaxine)B合成，参见Merckle等，“Semisynthesis of D-ring modified taxoids：novel thia deriva tives of docetaxel，” J.Org.Chem.，66(15)：5058-65(2001)，和Deka等，Org.Lett.， 5(26)：5031-4(2003)；
(5)5(20)去氧多西紫杉醇；
(6)10-脱氧-10-C-吗啉代乙基多西紫杉醇类似物，包括其中7-羟 基被改性为疏水基(甲氧基、脱氧、6，7-烯、α-F、7-β-8-β-亚甲基、 氟代甲氧基)的多西紫杉醇类似物，它描述在Iimura等，“Orally active docetaxel analogue：synthesis of 10-deoxy-10-C- morpholinoethyl docetaxel analogues，”Bioorg.Med.Chem.Lett.， 11：(3)407-10(2001)；
(7)Cassidy等在Clin.Can.Res.，8：846-855(2002)中描述 的多西紫杉醇类似物，例如具有叔丁基氨基甲酸酯作为异丝氨酸N-酰 基的取代基但不又同于多西紫杉醇的C-10(乙酰基对羟基)和C-13异 丝氨酸键连(烯醇酯对酯)的类似物；
(8)在C3位具有肽支链的多西紫杉醇类似物，参见Larroque等 “Novel C2-C3″N-peptide linked macrocyclic taxoids.Part 1： Synthesis and biological activities of docetaxel analogues with a peptide side chain at C3”，Bioorg.Med.Chem.Lett. 15(21)：4722-4726(2005)；
(9)XRP9881(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物)；
(10)XRP6528(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似 物)；
(11)Ortataxel(14-β羟基-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉 醇类似物)；
(12)MAC-321(10-脱乙酰基-7-丙酰基浆果赤霉素多西紫杉醇类 似物)；
(13)DJ-927(7-脱氧-9-β-二氢-9，10，O-乙缩醛紫杉烷多西紫杉 醇类似物)；
(14)具有C2-C3′N-键合的多西紫杉醇类似物，其中C2位携带芳 环并在N3′和C2-芳环的邻、间或对位之间链接。该对位取代的衍生物 不能使微管稳定，而邻位和间位取代的化合物在冷诱导的微管拆散测 定中显示出显著的活性。Olivier等，“Synthesis of C2-C3′N-Linked Macrocyclic Taxoids；Novel Docetaxel Analogues with High Tubulin Activity，”J.Med.Chem.，47(24：5937-44(Nov.2004)；
(15)多西紫杉醇类似物，其携带连接C-2 OH和C-3′NH部分的 22-元(或更多)环，(对携带连接C-2 OH和C-3′NH部分的18-、20-、 21-、和22-元环的多西紫杉醇类似物的生物学评价表明活性依赖于环 的大小；只有22-元环的二萜紫杉烷3d显示显著的微管结合力) (Querolle等，“Synthesis of novel macrocyclic docetaxel analogues.Influence of their macrocyclic ring size on tubulin activity，”J.Med.Chem.，46(17)：3623-30(2003).)；
(16)7β-O-糖基化的多西紫杉醇类似物(Anastasia等， “Semi-Synthesis of an O-glycosylated docetaxel analogue，” Bioorg.Med.Chem.，11(7)：1551-6(2003))；
(17)10-烷基化多西紫杉醇类似物，例如在烷基部分的末端具有 甲氧基羰基的10-烷基化多西紫杉醇类似物(Nakayama等，“Synthesis and cytotoxic activity of novel 10-alky lated docetaxel analogs，”Bioorg.Med.Chem.Lett.，8(5)：427-32(1998))；
(18)2′，2′-二氟代，3′-(2-呋喃基)，和3′-(2-吡咯基)多西紫杉 醇类似物(Uoto等，“Synthesis and structure-activity relationships of novel 2′，2′-difluoro analogues of docetaxel，” Chem.Pharm.Bull.(Tokyo，45(11)：1793-804(1997))；和
(19)荧光的和生物素化的多西紫杉醇类似物，例如具有(a)在7 或3′位置的N-(7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二唑-4-基)酰氨基-6-己酰基 链，(b)在3′位的N-(7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二唑-4-基)酰氨基-3-丙 酰基基团，或(c)在7、10或3′位置的5′-生物素基酰氨基-6-己酰基 链的多西紫杉醇类似物(Dubois等，“Fluorescent and biotinylated analogues of docetaxel：synthesis and biological evaluation，”Bioorg.Med.Chem.，3(10)：1357-68(1995))。
2.表面稳定剂
在本发明的多西紫杉醇或其类似物制剂中可应用一种以上的表面 稳定剂的组合。在本发明的一个实施方案中，多西紫杉醇或其类似物 制剂为注射制剂。适用的表面稳定剂包括但不限于已知的有机和无机 药用辅料。这些辅料包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物、 和表面活性剂。表面稳定剂包括非离子、离子、阴离子、阳离子、和 两性离子表面活性剂。在本发明的一个实施方案中，注射纳米微粒的 多西紫杉醇或其类似物制剂的表面稳定剂为聚维酮聚合物。
表面稳定剂的代表性实例包括羟丙基甲基纤维素(现称为羟丙甲 纤维素)、白蛋白、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、月桂基硫酸钠、 磺基琥珀酸二辛酯、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、右旋糖酐、阿拉 伯胶、胆固醇、黄芪胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘 油酯、鲸蜡硬脂醇(cetostearyl alcohol)、聚西托醇乳化蜡 (cetomacrogol emulsifying wax)、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚 (例如聚乙二醇醚，如聚乙二醇1000单鲸蜡基醚)、聚氧乙烯蓖麻油衍 生物、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(例如商业上可得的Tween8_，如 Tween_20和Tween_80(ICI Speciality Chemicals))；聚乙二醇(例如 Carbowaxes 3550_和934_(Union Carbide))、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶 态二氧化硅、磷酸酯(盐)、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲 基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯、非晶性纤维 素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、含环氧乙烷和甲醛的 4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚聚合物(也称为泰洛沙泊(tyloxapol)、 四丁酚醛(superione)、和曲拉通(triton))、泊洛沙姆(例如 Pluronics_F68和F108，它们是环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚 物)；poloxamines(例如Tetronic 908_，也称为Poloxamine 908_，它 是将环氧丙烷和环氧乙烷顺序与乙二胺加成衍生的四功能嵌段共聚物 (BASF Wyandotte Corporation，Parsippany，N.J.))；Tetronic 1508_(T-1508)(BASF Wyandotte Corporation)，Tritons X-200_， 它是烷基芳基聚醚磺酸酯(Rohm and Haas)；Crodestas F-110_，它是 蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物(Croda Inc.)；对异壬基苯 氧基聚-(缩水甘油)，也称为Olin-10G_或表面活性剂10-G_(Olin Chemicals，Stamford，CT)；Crodestas SL-40_(Croda，Inc.)；和 SA90HCO，它是C18H37CH2C(O)N(CH3)-CH2(CHOH)4(CH2OH)2(Eastman Kodak Co.)；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺(glucamide)；正癸基(-D-吡喃葡萄糖苷； 正癸基(-D-吡喃麦芽糖苷；正十二烷基(-D-吡喃葡萄糖苷；正十二烷基 (-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正庚基-(-D-吡喃葡萄糖苷； 正庚基(-D-硫葡糖苷；正己基(-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖 酰胺；正壬基(noyl)(-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正 辛基-(-D-吡喃葡萄糖苷；辛基-(-D-硫代吡喃葡萄糖苷；PEG-磷脂、 PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、PEG-维生素A、PEG-维生素E、溶菌 酶、乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的无规共聚物等等。并且，如果需 要，可以制备成无磷脂的本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物制 剂。
有用的阳离子表面稳定剂的实例包括但不限于聚合物、生物聚合 物、多糖、纤维素、海藻酸盐、磷脂、和非聚合化合物，例如两性离 子稳定剂、聚-n-甲基吡啶_、氯化蒽基(anthryul)吡啶_、阳离子磷 脂、壳聚糖、聚赖氨酸、聚乙烯咪唑、聚凝胺(polybrene)、三甲基聚 甲基丙烯酸甲酯溴化铵(PMMTMABr)、三甲基己基二苯乙酮基溴化铵 (HDMAB)、和二甲基硫酸聚乙烯吡咯酮-2-二甲基氨基乙基异丁烯酸酯。 其它有用的阳离子稳定剂的实例包括但不限于阳离子类脂、锍、磷、 和季铵化合物，例如硬脂酰三甲基氯化铵、溴化苄基-二(2-氯乙基) 乙基铵、椰子油三甲氯化或溴化铵、椰子油甲基二羟基乙基氯化或溴 化铵、癸基三乙基氯化铵、癸基二甲基羟乙基氯化或溴化铵、C12-15 二甲基羟乙基氯化或溴化铵、椰子油二甲基羟乙基氯化或溴化铵、肉 豆蔻基三甲基铵甲基硫酸酯、月桂基二甲基苄基氯化或溴化铵、月桂 基二甲基(乙烯氧基)4氯化或溴化铵、N-烷基(C12-18)二甲基苄基氯 化铵、N-烷基(C14-18)二甲基苄基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯 化铵一水合物、二甲基二癸基氯化铵、N-烷基和(C12-14)二甲基1-萘 基甲基氯化铵、三甲基卤化铵、烷基三甲铵盐和二烷基二甲铵盐、月 桂基三甲基氯化铵、乙氧基化烷基酰氨基烷基二烷基铵盐和/或乙氧基 化三烷基铵盐、二烷基苯二烷基氯化铵、N-二癸基二甲基氯化铵、N- 十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合物、N-烷基(C12-14)二甲基1-萘 基甲基氯化铵和十二烷基二甲基苄基氯化铵、二烷基苯烷基氯化铵、 月桂基三甲基氯化铵、烷基苄基甲基氯化铵、烷基苄基二甲基溴化铵、 C12、C15、C17三甲基溴化铵、十二烷基苄基三乙基氯化铵、聚二烯 丙基二甲基氯化铵(DADMAC)、二甲基氯化铵、烷基二甲基铵卤化物、 三鲸蜡基甲基氯化铵、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三乙基溴化铵、 十四烷基三甲基溴化铵、氯化甲基三辛基铵(ALIQUAT 336)、POLYQUAT、 溴化四丁基铵、溴化苄基三甲基铵、胆碱酯(例如脂肪酸的胆碱酯)、 苯扎氯铵、氯化硬脂酰二甲基苄基铵(stearalkonium chloride)化合 物(例如氯化硬脂酰三甲铵(stearyltrimonium chloride)和氯化二硬 脂酰二甲铵(distearyldimonium chloride))、溴化或氯化十六烷基 吡啶_、季铵化聚氧乙烯烷基胺的卤盐、MIRAPOL和ALKAQUAT(Alkaril Chemical Company)、烷基吡啶_盐；胺(例如烷基胺、二烷基胺、烷 醇胺、聚乙烯聚胺、N，N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯、以及乙烯吡啶)、 胺盐(例如醋酸月桂胺、醋酸硬脂基胺、烷基吡啶_盐和烷基咪唑_ 盐)、以及胺氧化物；咪唑_(imide azolinium)盐；质子化四元 (quaternary)丙烯酰胺；甲基化四元聚合物(例如聚[二烯丙基二甲基 氯化铵]和聚-[N-氯化甲基乙烯基吡啶_]；和阳离子瓜耳胶。
这些示例性的阳离子表面稳定剂和其它有用的阳离子表面稳定剂 描述于J.Cross和E.Singer，Cationic Surfactants：Analytical and Biological Evaluation(Marcel Dekker，1994)；P.和D. Rubingh(Editor)，Cationic Surfactants：Physical Chemistry (Marcel Dekker，1991)；和J.Richmond，Cationic Surfactants： Organic Chemistry，(Marcel Dekker，1990)。
非聚合表面稳定剂为任何非聚合化合物，例如苯扎氯铵、碳_化 合物、磷_化合物、氧_化合物、卤_(halonium)化合物、阳离子有 机金属化合物、四价磷(quarternary phosphorous)化合物、吡啶_化 合物、苯胺_(anilinium)化合物、铵化合物、羟铵化合物、伯铵化合 物、仲铵化合物、叔铵化合物、以及式NR1R2R3R4(+)的季铵化合物。 至于式NR1R2R3R4(+)的化合物：
(i)R1-R4中无一为CH3；
(ii)R1-R4中的一个为CH3；
(iii)R1-R4中的三个为CH3；
(iv)所有R1-R4均为CH3；
(v)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且R1-R4 中的一个为七个或更少个碳原子的烷基链；
(vi)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且 R1-R4中的一个为十九个或更多个碳原子的烷基链；
(vii)R1-R4中的两个为CH3，并且R1-R4中的一个为C6H5(CH2)n 基团，其中n＞1；
(viii)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且 R1-R4中的一个包含至少一个杂原子；
(ix)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且 R1-R4中的一个包含至少一个卤素；
(x)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且R1-R4 中的一个包含至少一个环状片段；
(xi)R1-R4中的两个为CH3，并且R1-R4中的一个为苯环；或
(xii)R1-R4中的两个为CH3，并且R1-R4中的两个为纯脂肪族片 段。
这些化合物包括但不限于氯化二十二烷基二甲基苄基铵 (behenalkonium chloride)、苄索氯铵、氯化十六烷基吡啶_、氯化 二十二烷基三甲基铵(behentrimonium chloride)、劳拉氯铵 (lauralkonium chloride)、西他氯铵、西曲溴铵(cetrimonium bromide)、氯化十六烷基三甲铵、十六烷基胺氢氟化物(cethylamine hydrofluoride)、氯化氯烯丙基六亚甲基四胺 (chlorallylmethenamine)(Quaternium-15)、氯化二硬脂基二甲铵 (Quaternium-5)、十二烷基二甲基乙基苄基氯化铵(Quaternium-14)、 Quaternium-22、Quaternium-26、Quaternium-18锂蒙脱石、氯化二 甲基氨乙基盐酸盐、盐酸半胱氨酸、二乙醇铵POE(10)油基(oletyl) 醚磷酸盐、二乙醇铵POE(3)油基醚磷酸盐、氯化牛脂二甲基苄基铵 (tallow alkonium)、二甲基双十八烷基铵膨润土、氯化硬脂酰二甲基 苄基铵、度米芬、苯甲地那铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十二烷 基三甲基氯化铵、二盐酸乙二胺、盐酸胍、盐酸吡哆醇、盐酸碘非他 胺、盐酸葡甲胺、甲苄索氯铵、溴化肉豆蔻基三甲基铵(myrtrimonium bromide)、氯化油基三甲基铵(oleyltrimonium)、聚季铵盐-1、盐酸 普鲁卡因、椰子酰基甜菜碱(cocobetaine)、硬脂烷铵(stearalkonium) 膨润土、硬脂烷铵锂蒙脱石(stearalkoniumhectonite)、硬脂基三羟 基乙基丙二胺二氢氟酸盐、氯化牛脂三甲铵(tallowtrimonium)、和十 六烷基三甲基溴化铵。
这些表面稳定剂大多数是已知的药用辅料，并且美国药物协会和 英国药学会联合出版的Handbook of Pharmaceutical Excipients(The Pharmaceutical Press，2000)对它们作了详细描述，在此特别地将 其引入作为参考。
聚维酮聚合物
聚维酮聚合物是用于制备纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物注射 制剂中使用的示例性表面稳定剂。聚维酮聚合物也称为聚维酮、 povidonum、PVP、和聚乙烯吡咯烷酮，其以商标名Kollidon_(BASF Corp.)和Plasdone_(ISP Technologies，Inc.)销售。它们为多分 散的大分子的分子，化学名为1-次乙基-2-吡咯烷酮聚合物和1-乙烯 基-2-吡咯烷酮聚合物。商业上生产的聚维酮聚合物为具有平均分子量 从约10,000至约700,000道尔顿的系列产品。为了用作注射纳米微粒 的多西紫杉醇或其类似物组合物的表面稳定剂，优选聚维酮聚合物具 有分子量小于约40,000道尔顿，因为对于注射剂而言，分子量大于 40,000道尔顿将难于被机体清除。
通过例如Reppe氏方法制备聚维酮聚合物，其包含：(1)通过 Reppe丁二烯合成由乙炔和甲醛获得1，4-丁二醇；(2)在200℃下经铜 使1，4-丁二醇脱氢，形成γ-丁内酯；和(3)将γ-丁内酯与氨反应，产 生吡咯烷酮。继后用乙炔处理得到乙烯基吡咯烷酮单体。在H2O和NH3 存在下通过加热实现聚合作用。参见The Merck Index，10th Edition， pp.7581(Merck&Co.，Rahway，NJ，1983)。
聚维酮聚合物的制备方法产生含有不相等链长分子的聚合物，并 因此具有不同的分子量。每种特定商业上可得级别的分子分子量的平 均值不同。因为难于直接地确定聚合物的分子量，最广泛使用的划分 各种分子量级别的方法为基于粘度测量的K值法。各种级别的聚维酮 聚合物的K值具有代表平均分子量的函数，它由粘度测量得到并根据 Fikentscher氏公式计算。
通过测量个体分子的重量的方法(例如光散射法)确定分子量的平 均重量(Mw)。表1提供数种商业上可得聚维酮聚合物(所有这些均是可 溶的)的分子量数据。
虽然申请人不希望受理论机制的束缚，但应当相信聚维酮聚合物 通过在粒子之间的力学或立体障碍的作用和使接近(凝聚和絮凝必需 的粒子间的接近)减至最少，阻碍多西紫杉醇或其类似物粒子的絮凝和 /或凝聚。
表1
聚维酮 K值 Mv(道尔顿)** Mw(道尔顿)** Mn (道尔顿)** Plasdone_C-15 17±1 7,000 10,500 3,000 Plasdone_C-30 30.5±1.5 38,000 62,500* 16,500 Kollidon_12PF 11-14 3,900 2,000-3,000 1,300 Kollidon_17PF 16-18 9,300 7,000-11,000 2,500 Kollidon_25 24-32 25,700 28,000-34,000 6,000
*因为分子量大于40,000道尔顿的聚维酮聚合物不用作胃肠外给 予(即注射)的药物化合物的表面稳定剂
**Mv为粘度平均分子量，Mn为数均分子量，Mw为重均分子量。通 过光散射和超速离心法测定Mw和Mn，通过粘度测量测定Mv。
基于表1所提供的数据，优选示例性的商业上可得的用于注射组 合物的聚维酮聚合物包括但不限于Plasdone_C-15、Kollidon_12PF、 Kollidon_17PF、和Kollidon_25。
3.纳米微粒的多西紫杉醇粒径
基于重量的平均粒径，通过本领域技术人员众所周知的常规粒径 测量技术的测量以确定本文所用的粒径。这些技术包括，例如沉积场 流分级分离法、光子相关光谱法、光散射、和碟式离心法。
本发明组合物包含具有有效平均粒径小于约2微米的多西紫杉醇 或其类似物粒子。在本发明的另一个实施方案中，按照光散射法、显微 镜检查法、或其它适用的方法测量时，多西紫杉醇或其类似物粒子具 有有效平均粒径小于约1900nm、小于约1800nm、小于约1700nm、 小于约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小于约1300nm、 小于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、小于约900nm、 小于约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于约600nm、 小于约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约400nm、小 于约350nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于 约150nm、小于约100nm、小于约75nm或小于约50nm。在本发 明的又一个实施方案中，本发明组合物为注射剂型，并且按照光散射 法、显微镜检查法、或其它适用的方法测量时，多西紫杉醇或其类似 物粒子优选具有有效平均粒径小于约1000nm、小于约900nm、小于 约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于约600nm、小于 约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约400nm、小于约350 nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于约150nm、 小于约100 nm、小于约75nm或小于约50nm。可注射的组合物可包 含有效平均粒径大于约1微米，至多约2微米的多西紫杉醇或其类似 物。
“有效平均粒径小于约2000nm”表示按重量计至少50％的多西紫 杉醇或其类似物的粒子具有粒径小于此有效平均数，即小于约2000 nm。如果“有效平均粒径”小于约600nm，那么当按照上述技术测量 时，至少约50％的多西紫杉醇或其类似物的粒子具有小于约600nm 的尺寸。对于上述的其它粒径也是同样的定义。
在另外的实施方案中，至少约60％、至少约70％、至少约80％、至 少约90％、至少约95％、或至少约99％的多西紫杉醇或其类似物粒子 具有粒径小于有效平均数，即小于约1000nm、约900nm、约800nm 等。
在本发明中，纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物的D50值 为按重量计50％的多西紫杉醇或其类似物粒子落在该粒径的下面，类 似地，D90值为按重量计90％的多西紫杉醇或其类似物粒子落在该粒径 的下面。
4.纳米微粒的多西紫杉醇和表面稳定剂的浓度
多西紫杉醇或其类似物与一种和多种表面稳定剂的相对含量可宽 泛地变化。个体组分的最佳量依赖于例如所选的表面稳定剂和多西紫 杉醇或其类似物的物理和化学属性，例如亲水亲脂平衡(HLB)、熔点、 和稳定剂水溶液的表面张力等等。
优选地，基于多西紫杉醇或其类似物和至少一种表面稳定剂组合 的而不包括其它辅料的总重量，多西紫杉醇或其类似物的浓度按重量 计可为约99.5％至约0.001％、约95％至约0.1％、或约90％至约0.5％。 根据剂量和成本效益观点，通常优选较高浓度的活性成分。
优选地，基于多西紫杉醇或其类似物和至少一种表面稳定剂组合 的而不包括其它辅料的总重量，表面稳定剂的浓度按重量计可为约 0.5％至约99.999％、约5.0％至约99.9％、或约10％至约99.5％。
5.其它的药物辅料
本发明的药物组合物也可以依据给药途径和预期的剂型包含一种 或多种粘合剂、填充剂、润滑剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、 缓冲剂、湿润剂、崩解剂、泡腾剂、和其它的辅料。这些辅料是本领 域众所周知的。
填充剂的实例为乳糖一水合物、无水乳糖、和各种淀粉；粘合剂的 实例为各种纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素(如 Avicel_PH101和Avicel_PH102)、微晶纤维素、和硅化微晶纤维素 (ProSolv SMCCTM)。
适用的润滑剂(包括对要被压缩的粉末流动性起作用的试剂)为胶 态二氧化硅(如Aerosil_200)、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸 钙、和硅胶。
甜味剂的实例为任何天然的或人工的甜味剂，例如蔗糖、木糖醇、 糖精钠、环磺酸盐(cyclamate)、阿司帕坦(aspartame)、和安赛蜜 (acsulfame)。矫味剂的实例为Magnasweet_(MAFCO商标)、泡泡糖香 料(bubble gum flavor)、和水果香料等等。
防腐剂的实例为山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯、 苯甲酸和其盐、其它的对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸丁酯)、醇 类(例如乙醇或苯甲醇)、酚化合物(例如苯酚)、和四价(quarternary) 化合物(例如苯扎氯铵)。
适用的稀释剂包括药学上可接受的惰性填充剂，例如微晶纤维素、 乳糖、磷酸氢钙、糖、和/或上述的任意混合物。稀释剂的实例包括微 晶纤维素(例如Avicel_PH101和Avicel_PH102)；乳糖(例如乳糖一 水合物、无水乳糖、和Pharmatose_DCL21)；磷酸氢钙(例如 Emcompress_)；甘露醇；淀粉；山梨醇；蔗糖；和葡萄糖。
适用的崩解剂包括轻度交联的聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉(corn starch)、马铃薯淀粉、玉米淀粉(maize stareh)、和改性淀粉、交联 羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、淀粉羟乙酸钠、和它们的混合物。
泡腾剂的实例为泡腾剂对(effervescent coupies)，例如有机酸 和碳酸盐或碳酸氢盐。适用的有机酸包括，例如枸橼酸、酒石酸、苹 果酸、富马酸、己二酸、琥珀酸和海藻酸以及酸酐和酸盐。适用的碳 酸盐和碳酸氢盐包括，例如碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、 碳酸镁、甘氨酸碳酸钠、L-赖氨酸碳酸盐(L-lysine carbonate)和精 氨酸碳酸盐(arginine carbonate)。或者，可以只有泡腾剂对中的碳 酸氢钠组分存在。
6.可注射的纳米微粒多西紫杉醇制剂
在本发明的一个实施方案中，提供可注射的纳米微粒多西紫杉醇 或其类似物制剂，它可以在低注射容量中包含高浓度，给药时具有快 速溶出度的特点。示例性的组合物以％w/w为计包含：
多西紫杉醇或其类似物 5-50％
表面稳定剂 0.1-50％
防腐剂 0.05-0.25％
pH调节剂 pH约6至约7
注射用水 适量
示例性的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯(以％w/w计约0.18％)、对 羟基苯甲酸丙酯(以％w/w计约0.02％)、苯酚(以％w/w计约0.5％)、和 苯甲醇(最高达2％v/v)。示例性的pH调节剂是氢氧化钠，示例性的 液体载体是灭菌注射用水。其它有用的防腐剂、pH调节剂和液体载体 是本领域众所周知的。
7.包衣的口服制剂
当与食物一起施用时，多西紫杉醇或其类似物的生物利用度减少。 与食物一起施用，多西紫杉醇或其类似物在胃中滞留的时间增加。该增 加的滞留时间使多西紫杉醇或其类似物在胃酸条件下溶解。然后，当 溶解的药物从胃中排出并进入较为碱性条件的小肠上部时，多西紫杉 醇或其类似物从溶液中沉淀析出。析出的多西紫杉醇或其类似物不好 被吸收，因为在它被吸收之前它必须再一次溶解，并且溶解过程因为 多西紫杉醇或其类似物的弱水溶性而缓慢。药物在胃中溶出，随后沉 淀析出，降低了多西紫杉醇或其类似物由于服用纳米微粒剂型(例如纳 米微粒多西紫杉醇或其类似物的固体分散体、或纳米微粒多西紫杉醇 或其类似物的液体填充胶囊)所获得的提高的生物利用度。避免药物在 胃的低pH条件会减少或消除对生物利用度的这种下降。
因此，本文描述了包含包衣的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物(例 如肠溶包衣的多西紫杉醇或其类似物)的组合物。在一个实施方案中， 口服制剂包括例如肠溶包衣的固体剂型的口服制剂。
供口服给药的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉末、 和颗粒。在这些固体剂型中，将多西紫杉醇或其类似物与下列的至少 一种混合：(a)一种和多种惰性辅料(或载体)，例如枸橼酸钠或磷酸二 钙；(b)填充剂或增充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、 和硅酸；(c)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐(alignates)、明 胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、和阿拉伯胶；(d)保湿剂，例如甘油；(e) 崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些复合 硅酸盐、和碳酸钠；(f)溶液阻滞剂，例如石蜡；(g)吸收促进剂， 例如季铵类化合物；(h)润湿剂，例如十六醇和单硬脂酸甘油酯；(i) 吸附剂，例如白陶土和膨润土；和(j)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、 硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠或它们的混合物。至于胶囊、 片剂、和丸剂，这些剂型也可包含缓冲剂。
药物释放曲线
在一个实施方案中，本文所述包衣的纳米微粒多西紫杉醇或其类 似物(例如肠溶包衣的多西紫杉醇或其类似物)的组合物在以口服剂型 给患者施用时，显示出脉冲式血浆曲线。与药物化合物施用有关的此 血浆曲线可以被描述为“脉冲式曲线”，其中可观察到脉冲式的高浓 度多西紫杉醇或其类似物之间有散置的低浓度谷。含有两个峰的脉冲 式曲线可以被描述为“双峰”。类似地，施用时产生这种曲线的组合 物或剂型可以说是表现出“脉冲释放”的多西紫杉醇或其类似物。
常规的以定期间隔施用立即释放(IR)剂型的频繁给药方案一般会 引起脉冲式血浆曲线。在这种情形中，在施用每个IR剂量后可观察到 血浆药物浓度峰，并在连续施用的时间点之间形成谷(药物低浓度区 域)。这些给药方案(和它们所得的脉冲式血浆曲线)具有与它们有关的 特定药理学和治疗学效果。例如，峰间多西紫杉醇或其类似物的血浆 浓度下降所提供的间歇期被认为是减轻或防止患者对各种类型药物耐 受性的有益因素。
Devane等的美国专利6,228,398、6,730,325和6,793,936中公 开并要求保护与本文公开相似的多微粒改性控制释放(CR)组合物，在 此特别地将它们全部引入作为参考。可以在那里找到本领域所有有关 的现有技术。
本发明的另一个方面为多微粒改性释放组合物，其具有含有第一 数量的多西紫杉醇或其类似物的第一种组分和含有第二数量的多西紫 杉醇或其类似物的第二种组分。含成分粒子的第二种组分包有改性释 放包衣。可替代地或另外地，含第二数量的多西紫杉醇或其类似物的 粒子进一步包含改性释放基质材料。随口腔递送后，服用的此组合物 以脉冲方式释放多西紫杉醇或其类似物。
在本发明的多微粒改性释放组合物的优选实施方案中，第一种组 分为立即释放组分。
第二数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子所用的改性释放包衣， 会引起活性成分从含第一数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放 和活性成分从含第二数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放之间 的滞后时间。类似地，在含第二数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子 中存在的改性释放基质材料，会引起多西紫杉醇或其类似物从含第一 数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放和活性成分从含第二数量 的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放之间的滞后时间。通过改变所 用成分和/或改性释放包衣量和/或改变成分和/或改性释放基质材料 的量，可以改变滞后的期间。此，可设计滞后时间的期间以模拟想要 的血浆曲线。
因为施用时多微粒改性释放组合物所产生的血浆曲线基本上相似 于连续施用两次或更多次IR剂型所产生的血浆曲线，所以本发明多微 粒控制释放组合物优其可对耐受性可能有问题的患者施用多西紫杉醇 或其类似物。因此，多微粒改性释放组合物有利于减轻或最大限度地减 轻患者对本组合物活性成分耐受性的发展。
本发明还提供治疗癌症，尤其乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和/或肺 癌的方法，包括施用治疗有效量的本发明组合物，以提供多西紫杉醇 或其类似物脉冲的或双峰的给药。本发明的优点包括减少常规多个IR 给药方案所需的给药频率，而仍然维持脉冲式血浆曲线所产生的益处。 这种减少的给药频率有利于患者的依从性，可使制剂以减少的频率施 用。通过应用本发明组合物可能得到的这种给药频率的减少，应当有 助于减少卫生保健工作者用在药物施用上的时间数而减少医疗费用。
每个组分中的活性成分可以是相同的或不同的。例如，其中第一 种组分含有多西紫杉醇或其类似物而第二种组分含有第二种活性成分 的组合物，可能对于联合治疗是理想的。当然，当活性成分彼此相容 时，可以将两种或更多种活性成分合并到同一组分中。在本组合物的 一个组分中存在的药物化合物可以，例如在本组合物的另一个组分中 伴随存在增强剂化合物或敏化剂化合物，以改变此药物化合物的生物 利用度或疗效。
本文所用的术语“增强剂”是指能够通过促进透过动物(例如人) 的胃肠道的净转运而增强活性成分吸收和/或生物利用度的化合物。增 强剂包括但不限于中链脂肪酸；盐、酯、醚及其衍生物，包括甘油酯和 甘油三酯；非离子型表面活性剂例如可由环氧乙烷与脂肪酸、脂肪醇、 烷基酚、或脱水山梨醇起反应制得的那些或甘油脂肪酸酯；细胞色素 P450抑制剂、P-糖蛋白抑制剂等等；和这些物质的两种或更多种的混 合物。
每种组分中存在的多西紫杉醇或其类似物比例可以相同或不同， 这取决于预期的给药方案。多西紫杉醇或其类似物以足够引起治疗反 应的任何量存在于第一种组分和第二种组分中。当适用时，多西紫杉 醇或其类似物可以以一种基本上光学纯的对映异构体，形式或者以对 映异构体的混合物、外消旋体或别的形式存在。
通过改变每种组分的成分(包括改变可存在的任何辅料或包衣成 分)，可以改变多西紫杉醇或其类似物从每种组分中释放的时间-释放 的特性。特别地，通过改变成分和/或粒子上的改性释放包衣量(如果 存在包衣)，可以控制多西紫杉醇或其类似物的释放。如果存在多于一 种的改性释放组分，这些组分的每个改性释放包衣可以相同或不同。 类似地，当凭借含有改性释放基质材料促进改性释放时，通过所用改 性释放基质材料的选择和量，可以控制活性成分的释放。改性释放包 衣可以以使每个特定组分足够产生预期延迟时间的任何量存在于每个 组分中。改性释放包衣可以以足够产生两组分之间预期时滞的任何量 存在于各组分中。
通过改变各个组分的成分(包括改变可存在的任何辅料或包衣的 成分)，也可以改变多西紫杉醇或其类似物从每个组分中释放的滞后时 间或延迟时间。例如，第一种组分可以为立即释放的组分，其中多西 紫杉醇或其类似物在给药后基本上立即释放。或者，第一种组分可以 为，例如时间-延迟的立即释放组分，其中多西紫杉醇或其类似物在时 间延迟后基本上立即释放。第二种组分可以为，例如如刚刚所述的时 间-延迟的立即释放组分，或可替代选择地，时间-延迟的持续释放或 延长释放(extended release)组分，其中多西紫杉醇或其类似物以控 制方式在延长的时间期限内释放。
本领域技术人员将会理解血浆浓度曲线的准确性质会受到刚刚所 述的所有这些因素组合的影响。特别地，通过改变各种组分的成分和 包衣(如果存在)，可以控制每个组分中的多西紫杉醇或其类似物释放 (并因此开始产生作用)之间的滞后时间。因此通过改变各种组分的成 分(包括活性成分的量和性质)和通过改变滞后时间，可以获得大量的 释放和血浆曲线。取决于多西紫杉醇或其类似物从每个组分中释放之 间的滞后时间和从每个组分中释放的性质(即立即释放、持续释放等)， 血浆曲线的脉冲可以很好地分离并清楚地确定峰(例如当滞后时间较 长时)，或者脉冲可以一定程度地重叠(例如在当滞后时间较短时)。
在优选的实施方案中，根据本发明的多微粒改性释放组合物具有 立即释放组分和至少一种改性释放组分，此立即释放组分包含含有第 一数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子且改性释放组分包含含有第二 数量和随后数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子。第二种和随后的改 性释放组分可以包含控制释放包衣。另外或可选择地，第二种和随后 的改性释放组分可以包含改性释放基质材料。实践中，例如具有单一 改性释放组分的此多微粒改性释放组合物的给药，导致多西紫杉醇或 其类似物特征性的脉冲血浆浓度水平，其中此组合物的立即释放组分 在血浆曲线中产生第一峰，而此改性释放组分在血浆曲线中产生第二 峰。包含多于一种改性释放组分的本发明实施方案在血浆曲线中产生 其它的峰。
当期望释放两个(或更多个)脉冲式的多西紫杉醇或其类似物而又 不需要服用两个(或更多个)剂量单位时，单次剂量单位给药所产生这 种血浆曲线是有利的。
肠溶包衣
可以使用以预期方式调整多西紫杉醇或其类似物释放的任何包衣 材料。特别地，适用于本发明实践的包衣材料包括但不限于：聚合物 包衣材料，例如邻苯二甲酸醋酸纤维素、三马来酸(trimaletate)醋酸 纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、 异丁烯酸铵共聚物(例如以商标Eudragit_RS和RL销售那些)、聚丙 烯酸和聚丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯共聚物(例如以商标Eudragit_S 和L销售的那些)、聚乙烯乙缩醛二乙氨基醋酸酯、琥珀酸醋酸羟丙基 甲基纤维素、虫胶；水凝胶和凝胶成型材料，例如羧基乙烯基聚合物、 海藻酸钠、羧甲纤维素钠、羧甲纤维素钙、羧甲基淀粉钠、聚乙烯醇、 羟乙基纤维素、甲基纤维素、明胶、淀粉、和纤维素基(cellulose based) 交联聚合物-其中交联度较低，以有助于吸咐水分和聚合物基质的膨 胀、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联淀粉、 微晶纤维素、壳多糖、氨基丙烯基-甲基丙烯酸酯共聚物(Eudragit_ RS-PM，Rohm&Haas)、支链淀粉(pullulan)、胶原、酪蛋白、琼脂、 阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠、(可膨胀亲水聚合物)聚(羟烷基甲基丙烯 酸酯)(分子量为约5k-5,000k)、聚乙烯吡咯酮(分子量为约10k-360 k)、阴离子和阳离子水凝胶、含有低醋酸残基(acetate residual)的 聚乙烯醇、琼脂和羧甲基纤维素的可膨胀混合物、马来酸酐和苯乙烯 的共聚物、乙烯或丙烯或异丁烯、果胶(分子量为约30k-300k)，多 糖例如琼脂、阿拉伯胶、卡拉牙胶、黄芪胶、藻酸铵(algins)和瓜耳 胶、聚丙烯酰胺、Polyox聚氧化乙烯(分子量为约100k-5,000k)、 AquaKeep丙烯酸酯聚合物、右旋糖酐二酯(diesters of polyglucan)、 交联聚乙烯醇和聚N-乙烯基-2-吡咯烷酮、淀粉甘醇酸(glucolate) 钠(例如Explotab_；Edward Mande 11C.Ltd.)；亲水聚合物例如多糖、 甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或钙、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维 素、羟乙基纤维素、硝基纤维素、羧甲基纤维素、纤维素醚、聚氧化 乙烯(例如Polyox_，Union Carbide)、甲基乙基纤维素、乙基羟基乙 基纤维素、醋酸纤维素、丁酸纤维素、丙酸纤维素、明胶、胶原、淀 粉、麦芽糖糊精、支链淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚醋酸乙 烯酯、甘油脂肪酸酯、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、甲基丙烯酸或甲基丙 烯酸的共聚物(例如Eudragit_，Rohm and Haas)、其它丙烯酸衍生物、 脱水山梨醇酯、天然树胶、卵磷脂、果胶、海藻酸盐、海藻酸铵、海 藻酸钠、海藻酸钙、海藻酸钾、丙二醇海藻酸酯、琼脂、和树胶例如 阿拉伯胶、卡拉牙胶、刺槐豆胶、黄芪胶、角叉菜胶、瓜耳胶、黄原 胶、硬葡聚糖和它们的混合物以及掺和物。本领域技术人员将会理解 包衣中可加入增塑剂、润滑剂、和溶剂等。适用的增塑剂包括例如乙 酰化单酸甘油酯；邻苯二甲酸(丁酯)(羟乙酸丁酯)酯(butyl phthalyl butyl glycolate)；酒石酸二丁基酯；邻苯二甲酸二乙酯；邻苯二甲 酸二甲酯；邻苯二甲酸(乙酯)(羟乙酸乙酯)酯；甘油；丙二醇；三乙 酸甘油酯；柠檬酸酯；三丙酸甘油酯(tripropioin)；二乙酸甘油酯； 邻苯二甲酸二丁酯； 乙酰基单酸甘油酯；聚乙二醇；蓖麻油；柠檬 酸三乙酯；多元醇、甘油、醋酸酯、甘油三醋酸酯、乙酰基柠檬酸三 乙酯、邻苯二甲酸二苄基酯、邻苯二甲酸二己酯、邻苯二甲酸丁基辛 基酯、邻苯二甲酸二异壬基酯、邻苯二甲酸丁基辛基酯、壬二酸二辛 酯、环氧化树脂酸酯(epoxidised tallate)、偏苯三酸三异辛酯、邻 苯二甲酸二乙基己基酯、邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二异辛酯、 邻苯二甲酸二异癸基酯、邻苯二甲酸二正十一烷基酯、邻苯二甲酸二 正十三烷基酯、偏苯三酸三-2-乙基己基酯、己二酸二-2-乙基己基酯、 癸二酸二-2-乙基己基酯、壬二酸二-2-乙基己基酯、癸二酸二丁酯。
当改性释放组分含有改性释放基质材料时，可以使用任何适用的 改性释放基质材料或改性释放基质材料的适当组合。这些材料是本领 域技术人员已知的。本文所用的术语“改性释放基质材料”包括亲水 聚合物、疏水聚合物和它们的混合物，它们在体外或体内能够改变分 散其中的多西紫杉醇或其类似物的释放。适用于本发明实践的改性释 放基质材料包括但不限于微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羟基烷基纤 维素(例如羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素)、聚氧化乙烯、烷基纤 维素(例如甲基纤维素和乙基纤维素)、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、 醋酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、邻苯二甲酸醋酸纤维素、偏苯三酸酸 醋酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚烷基甲基丙烯酸酯、聚醋 乙烯酯和它们的混合物。
本发明的多微粒改性释放组合物可被掺合形成易于活性成分以脉 冲方式释放的任何适宜剂型。一般地，剂型可以是不同数量的含多西 紫杉醇或其类似物粒子的混和物，其中该粒子被制成立即释放和改性 释放的组分，该混合物被装入适当的胶囊中，例如硬或软明胶胶囊。 可选择地，可以将不同个体数量的含有活性成分的粒子分别压制成(任 选地与另外的辅料一起)小片，随后可以以适当的比例将小片装入胶 囊。其它适用的剂型为多层片剂型。在这种情况中，可以将多微粒改 性释放组合物的第一种组分压制成一层，接着加入第二种组分压制成 该多层片的第二层。制备本发明组合物的一定数量的含多西紫杉醇或 其类似物粒子可进一步被包括在快速溶解剂型中，例如泡腾剂剂型或 速熔(fast-melt)剂型中。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含体外溶出曲线不同的 至少两种数量的含多西紫杉醇或其类似物粒子。
优选地，实践中，本发明组合物和含有本组合物的固体口服剂型 以下列方式释放多西紫杉醇或其类似物，即基本上使所有包含在第一 种组分中的多西紫杉醇或其类似物在第二种组分中的多西紫杉醇或其 类似物释放之前释放。例如当第一种组分含有IR组分时，多西紫杉醇 或其类似物从第二种组分中释放优选为延迟的，直到基本上所有的多 西紫杉醇或其类似物从IR组分中释放出来。通过使用改性释放包衣和 /或改性释放基质材料，可以如上所述延迟多西紫杉醇或其类似物从第 二种组分中的释放。
在一个实施方案中，当希望通过提供有助于第一剂量的多西紫杉 醇或其类似物从患者系统中清除的给药方案以使患者耐受性降到最低 时，多西紫杉醇或其类似物从第二种组分中的释放被延迟直到基本上 所有包含在第一种组分中的多西紫杉醇或其类似物被释放出来，并且 进一步被延迟直到至少一部分从第一种组分中释放出来的多西紫杉醇 或其类似物从患者系统中被清除。在具体的实施方案中，实践中多西 紫杉醇或其类似物从组合物第二种组分中的释放基本上(如果不是完 全地)被延迟组合物给药后至少约2小时的时间。
实践中药物从组合物第二种组分中的释放基本上(如果不是完全 地)被延迟组合物给药后至少约4小时，优选约4小时的时间。
E.制备纳米微粒多西紫杉醇组合物的方法
纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物可使用本领域已知的任 何适合的方法(例如碾磨法、匀化法、沉淀法、或超临界液体的粒子产 生技术)制得。美国专利5,145,684中描述了制备纳米微粒组合物的示 例方法。下列文献也描述了制备纳米微粒组合物的方法：美国专利 5,518,187“碾磨药用物质的方法”；美国专利5,718,388“碾磨药用 物质的连续方法”；美国专利5,862,999“碾磨药用物质的方法”； 美国专利5,665,331“纳米微粒药物与晶体成长调节剂的共微沉淀”； 美国专利5,662,883“纳米微粒药物与晶体成长调节剂的共微沉淀”； 美国专利5,560,932“纳米微粒药物的微量沉淀”；美国专利5,543,133 “制备包含纳米粒的X-射线造影组合物的方法”；美国专利5,534,270 “制备稳定药物纳米粒的方法”；美国专利5,510,118“制备包含纳米 粒的治疗组合物的方法”；和美国专利5,470,583“制备包含减少聚集 带电荷磷脂的纳米粒组合物方法”中，在此特别引入所有这些文献作 为参考。
所得纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物或分散体可以应用 于固体、半固体、或液体剂型中，例如液体分散体、凝胶剂、气溶胶、 软膏、霜剂、控释制剂、快熔制剂、冻干制剂、片剂、胶囊、延迟释 放制剂、延长释放制剂、脉冲式释放制剂、立即释放和控制释放的混 合制剂等。
示例性的碾磨或匀化方法包括：(1)将多西紫杉醇或其类似物分散 在液体分散介质中；和(2)用机械将多西紫杉醇或其类似物的粒径减少 到小于约2000nm的有效平均粒径。在粒径减少之前、期间、或之后 加入表面稳定剂。在粒径减少过程中，液体分散介质的pH优选维持在 约5.0至约7.5的范围。优选地，用于粒径减少过程的分散介质为水 性的，虽然也可应用不溶解且分散多西紫杉醇或其类似物的任何介质。 非水性分散介质的实例包括但不限于红花油、乙醇、叔丁醇、甘油、 聚乙二醇(PEG)、己烷、或乙二醇。
为多西紫杉醇或其类似物粒径减少提供机械力的有效方法包括球 磨、介质碾磨和匀化法，例如用Microfluidizer_机器(Microfluidics Corp.)。球磨为使用碾磨介质、药物、稳定剂和液体的低能量碾磨方 法。将这些材料放入碾磨容器中，以最佳速度旋转，使介质通过撞击 分级并减少粒径。所用介质必须具有高密度，因为需要通过研磨介质 的重力和质量提供粒径减少的能量。
介质碾磨为高能量碾磨方法。将多西紫杉醇或其类似物、表面稳 定剂和液体放入储存容器中，然后在含有介质和旋转柄/叶轮的腔室内 反复循环。旋转的柄搅动介质，这使多西紫杉醇或其类似物和表面稳 定剂受到撞击和剪切力(sheer forces)，从而减少它们的粒径。
匀化为不使用碾磨介质的技术。将多西紫杉醇或其类似物、表面 稳定剂和液体(或者多西紫杉醇或其类似物和液体，在粒径减少后加入 表面稳定剂)流射入处理区域，该区域在Microfluidizer_机器中称 为相互作用室(Interaction Chamber)。将要处理的产物引入泵内，然 后压出。Microfluidizerò机器的初始阀将空气排出泵内。一旦泵内充 满了产物，关闭初始阀，该产物被加压通过相互作用室。几何形状的 相互作用室产生强大的剪切、撞击和窝旋力，这些力使多西紫杉醇或 其类似物的粒径减少。特别地，在相互作用室里面，加压的产物被分 离成两股川流并且被加速到非常高的速度。然后将所形成的射流在相 互作用区域彼此相对并碰撞。所得的产物具有极细的和均匀的粒径或 液滴尺寸。Microfluidizer_机器也提供热交换器以冷却产物。Bosch 等的美国专利5,510,118涉及施用Microfluidizer_产生400nm以下 粒子的方法，在此将其特别引入作为参考。
Pace等的1997年4月24日出版公布的国际专利申请WO 97/144407公开了具有平均100nm至300nm大小的不溶水性生物学 活性化合物的粒子，其制备方法包括将化合物溶解在溶液中，然后在 适当表面稳定剂存在下将此溶液喷射到压缩气体、液体或超临界液体 中。
应用粒径减少的方法，将多西紫杉醇或其类似物的粒径减少到小 于约2000nm的有效平均粒径。
可以向液体介质中加入多西紫杉醇或其类似物以形成预混物，多 西紫杉醇或其类似物基本上是不溶解。在液体介质中多西紫杉醇或其 类似物的浓度可为约5至约60％、约15至约50％(w/v)、或约20至约 40％。在预混物中可存在表面稳定剂，或可在粒径减少后接着向多西紫 杉醇或其类似物分散体中加入表面稳定剂。表面稳定剂的浓度按重量 计可为约0.1至约50％、约0.5至约20％、或约1至约10％。
此预混物可直接应用于机械手段，以使分散体中多西紫杉醇或其 类似物的平均粒径减至小于约2000nm。当用球磨机磨擦时，优选直 接应用预混物。选择地，可应用适当的搅拌(例如Cowles型混合机) 使多西紫杉醇或其类似物和表面稳定剂分散在液体介质中，直至观察 到其中没有裸眼可见的大块粒的均质分散体形成。当用反复循环介质 碾磨机磨擦时，优选预混物进行预碾磨分散的步骤。
用于减少多西紫杉醇或其类似物粒径的机械方法可方便地采用分 散碾磨的形式。适用的分散碾磨包括球碾磨、磨碎机(attritor)碾磨、 振动碾磨和介质碾磨(例如沙碾磨和珠碾磨)。由于提供所需粒径减少 需要相对较短的碾磨时间，优选介质碾磨。对于介质碾磨，预混物表 观粘度优选为约100至约1,000厘泊，对于球磨，预混物表观粘度优 选为约1至约100厘泊。这样的范围趋于提供有效粒径减少和介质浸 蚀之间的最佳平衡。
磨擦时间可广泛地变化并且主要取决于所选的特定机械方法和处 理条件。对于球碾磨，可能需要高达5天或更长的处理时间。替代选 择性地，应用高剪切介质碾磨的处理时间可能小于1天(一分钟直至几 小时的滞留时间(residence times))。
多西紫杉醇或其类似物的粒子可以在不会使它显著降解的温度下 减少其尺寸。通常优选地，处理温度小于约30℃至小于约40℃。如果 需要，可使用常规冷却装置冷却处理装置。控制温度(例如，通过在冰 水中将碾磨室加外套或将碾磨室浸入冰水中)是需要考虑的。一般地， 本发明的方法可方便地在对于碾磨处理是安全有效的环境温度和处理 压力的条件下进行。环境处理压力为球磨、磨碎碾磨和振动碾磨的一 般压力。
碾磨介质
用于粒径减少步骤的碾磨介质可选自刚性介质，优选为具有平均 尺寸小于约3mm、更优选小于约1mm的球形或微粒形式。这样的介 质预期能提供对本发明粒子更短的处理时间和对碾磨装置产生更少的 磨损。据信碾磨介质材料的选择不是关键性的。氧化锆例如用镁稳定 的95％ZrO、硅酸锆、陶瓷、不锈钢、钛、铝、用钇稳定的95％ZrO、 和玻璃碾磨介质为示例性的碾磨材料。
碾磨介质可包含基本上由聚合树脂组成的粒子，优选基本上为球 形(例如珠)粒子。可选择地，碾磨介质可包含具有聚合树脂涂层粘附 其上的核心。在本发明的一个实施方案中，聚合树脂可具有约0.8至 约3.0g/cm3的密度。
一般而言，适用的聚合树脂为化学和物理惰性的，基本上不含金 属、溶剂和单体的，并且有足够硬度和脆性，能使本身在研磨中避免 碎裂或压碎。适用的聚合树脂包括交联的聚苯乙烯，例如与二乙烯基 苯交联的聚苯乙烯；苯乙烯共聚物；聚碳酸酯；聚缩醛，例如 Delrinò(E.I.du Pont de Nemours and Co.)；氯乙烯聚合物和共聚 物；聚氨基甲酸酯(polyurethanes)；聚酰胺；聚(四氟乙烯)，例如 Teflonò(E.I.du Pont de Nemours and Co.)，和其它氟聚合物；高 密度聚乙烯；聚丙烯；纤维素醚和酯(例如醋酸纤维素)；聚羟基甲 基丙烯酸酯；聚羟基乙基丙烯酸酯；和含硅酮聚合物(例如聚硅氧烷) 等。聚合物可以是生物可降解的。示例性生物可降解聚合物包括丙交 酯和乙交酯的聚(丙交酯)、聚(乙交酯)共聚物，聚酐，聚(羟乙基甲基 丙烯酸酯)、聚(亚胺基碳酸酯)，聚(N-酰基羟基脯氨酸)酯，聚(N-棕 榈酰羟基脯氨酸)酯，乙烯-醋酸乙烯酯共聚物，聚(原酸酯)，聚(己内 酯)和聚(磷腈)。对于生物可降解聚合物，接触的介质本身可在体内有 利地代谢为生物学上可接受的产物，此产物可被机体清除。
碾磨介质优选在约0.01至约3mm的尺寸范围内。对于精细碾磨， 碾磨介质优选在约0.02至约2mm，更优选在约0.03至约1mm的尺 寸。
在优选的研磨方法中，连续地制备多西紫杉醇或其类似物粒子。 该方法包括将多西紫杉醇或其类似物连续地引入碾磨室中，使室内的 多西紫杉醇或其类似物与碾磨介质接触以减少粒径，和连续地从碾磨 室中移出纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的活性形式。
应用常规分离技术在后续方法(例如通过单纯滤过，通过筛过滤 器或滤网筛过等等)中，将碾磨介质从碾磨过的纳米微粒多西紫杉醇或 其类似物中分离出去。也可以应用其它的分离技术(例如离心分离法)。
无菌产品的制备
可注射的组合物的研制要求生产无菌产品。本发明的制备方法类 似于已知的无菌混悬剂的一般制备方法。无菌混悬剂的一般制备方法 流程图如下：
正如括弧中的任选步骤所示，一些处理过程取决于粒径减少的方 法和/或灭菌方法。例如，不应用介质的碾磨方法不需要介质调配的步 骤。如果由于化学和/或物理不稳定性使终末灭菌不可行的，可应用无 菌操作。
F.治疗方法
在人类治疗中，提供体内释放治疗需要量的药物并以恒定方式使 药物成为生物可利用的多西紫杉醇或其类似物的剂型是重要的。因此， 本发明的另一个方面是提供治疗需要抗癌治疗(包括抗肿瘤和抗白血 病治疗)的哺乳动物(包括人)的方法，包括给所述哺乳动物施用本发明 的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的制剂。
可用本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组合物治疗的示例 性癌症包括但不限于乳腺癌、肺癌(包括但不限于非小细胞肺癌)、卵 巢癌、前列腺、实体瘤(包括但不限于头颈、乳房、肺、胃肠、泌尿生 殖器、黑素瘤和肉瘤)、原发性CNS赘生物、多发性骨髓瘤、非何杰金 氏淋巴瘤、间变型星形细胞瘤(anaplastic astrocytoma)、间变性脑 膜瘤(anaplastic meningioma)、间变型少枝胶质细胞瘤(anaplastic oligodendroglioma)、脑恶性血管外皮细胞瘤、下咽部鳞状细胞癌、 喉鳞状细胞癌、白血病、唇和口腔鳞状细胞癌、鼻咽鳞状细胞癌、口 咽鳞状细胞癌、宫颈癌和胰腺癌。
在本发明的一个实施方案中，本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其 类似物组合物的有效剂量小于相当的非纳米微粒的多西紫杉醇制剂 (例如TAXOTERE_)所要求的量。TAXOTERE_(多西紫杉醇)的给药方案 可随着它治疗的癌症类型而改变，它可供用的为20mg(0.5mL)和80 mg(2.0mL)小瓶。对于乳腺癌，推荐的剂量为每三周经1小时静脉内 给予60-100mg/m2。在非小细胞肺癌情形下，TAXOTERE_只应用于先前 基于铂的化疗失败以后。推荐剂量为每三周经1小时静脉内给予75 mg/m2。因此，在本发明的一个实施方案中，本发明纳米微粒的多西紫 杉醇或其类似物组合物的剂量小于约100mg/m2、小于约90mg/m2、小于 约80mg/m2、小于约70mg/m2、小于约60mg/m2、小于约50mg/m2、小于 约40mg/m2、小于约30mg/m2、小于约20mg/m2或小于约10mg/m2。
在本发明的又一个实施方案中，当与相当的非纳米微粒的多西紫 杉醇制剂(例如TAXOTERE_)相比时，本发明纳米微粒的多西紫杉醇或 其类似物组合物可以以显著更高的剂量给予。如下实施例16中所述， 示例性纳米微粒的多西紫杉醇制剂在体内显示的最大耐受剂量为500 mg/kg，而对照的TAXOTERE_最大耐受剂量为40mg/kg。因此，在本发 明的另一个实施方案中，本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组 合物的剂量大于约50mg/m2、大于约60mg/m2、大于约70mg/m2、大于 约80mg/m2、大于约90mg/m2、大于约100mg/m2、大于约110mg/m2、大 于约120mg/m2、大于约130mg/m2、大于约140mg/m2、大于约150mg/m2、 大于约160mg/m2、大于约170mg/m2、大于约180mg/m2、大于约190mg/m2、 大于约200mg/m2、大于约210mg/m2、大于约220mg/m2、大于约230mg/m2、 大于约240mg/m2、大于约250mg/m2、大于约260mg/m2、大于约270mg/m2、 大于约280mg/m2、大于约290mg/m2、大于约300mg/m2、大于约310mg/m2、 大于约320mg/m2、大于约330mg/m2、大于约340mg/m2或大于约 350mg/m2。
本发明特别有利的特征包括本发明药物制剂在给药时表现出出乎 意料地活性成分的快速吸收。在本发明的一个实施方案中，纳米微粒 的多西紫杉醇或其类似物组合物(包括可注射的组合物)不含聚山梨醇 酯、乙醇或它们的组合。另外，当制成注射制剂时，本发明组合物可 提供用于注射的小容量高浓度制剂。可以以快速浓注(bolus injection)或经适当的时间缓慢静滴给予本发明的多西紫杉醇或其类 似物的注射组合物。
普通技术人员将会理解可以根据经验确定多西紫杉醇或其类似物 的有效量，并且可应用其纯净形式，或当存在下述形式时，可应用药 学上可接受的盐、酯或前体药物形式。在本发明注射和口服组合物中 多西紫杉醇或其类似物的实际剂量水平可以变化，以获得多西紫杉醇 或其类似物的量，此量为特定组合物和给药方法能有效获得预期治疗 反应的量。因此所选的剂量水平取决于所要的治疗效果、给药途径、 所给予的多西紫杉醇或其类似物的效能、所需的治疗持续时间和其它 因素。
单元剂量的组合物可含有多个小剂量，以构成日剂量。但是，应 当理解到任何特定的患者的具体剂量水平依赖于多种因素：要获得的 细胞或生理学的反应的类型和程度；所用特定药物或组合物的活性；所 用特定药物或组合物；患者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食； 给药时间、给药途径和药物的排泄率；治疗持续时间；与该特定药物组 合或同时应用的药物；以及医学领域众所周知的类似因素。
* * * * *
下面给出的实施例用于举例说明本发明。然而，应当理解本发明 的精神和范围不受这些实施例中所述的具体条件或细节的限制，而只 应受到所附权利要求范围的限制。本文所指定的所有参考文献(包括美 国专利)均在此明确地引入作为参考。
图2.5％(w/w)多西紫杉醇(Camidta Ltd.)与1.25％(w/w)聚乙 烯吡咯酮(PVP)K17和0.25％(w/w)去氧胆酸钠结合的纳米微粒水分散 系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图3.5％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与1.25％(w/w) Tween_80和0.1％(w/w)卵磷脂结合的纳米微粒水分散系在100X下 应用相位光学的光显微照片。
图4.5％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与1.25％(w/w) 聚乙烯吡咯酮(PVP)K12、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w)葡萄 糖结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图5.1％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与0.25％(w/w) Plasdone_S630和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)结合的纳米 微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图6.1％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与0.25％(w/w) 羟丙基甲基纤维素(HPMC)和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS) 结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图7.1％(w/w)的无水多西紫杉醇(Camida Ltd.)与0.25％(w/w) Pluronic_F127结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的 光显微照片。
图8.未碾磨的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)在100X下应 用相位光学的光显微照片。
图9.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K12和0.25％(w/w)去氧胆酸钠 (NaDeoxycholate)结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学 的光显微照片。
图10.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K17、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w) 葡萄糖结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照 片。
图11.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K17、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w) 葡萄糖结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照 片。
图12.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)Tween_80、0.1％(w/w)卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖结合的纳 米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图13.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)Tween_80、0.1％(w/w)卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖结合的纳 米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图14.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)TPGS(PEG化的维生素E)和0.1％(w/w)去氧胆酸钠结合的纳米 微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照片。
图15.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)与1.25％ (w/w)Pluronic_F 108、0.1％(w/w)去氧胆酸钠和10％(w/w)葡萄糖 (w/w)结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学的光显微照 片。
图16.5％(w/w)的多西紫杉醇与1.25％(w/w)Plasdone_S630 和0.05％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)结合的纳米微粒水分散系在 100X下应用相位光学的光显微照片。
图17.5％(w/w)的多西紫杉醇与1.25％(w/w)HPMC和0.05％(w/w) 磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相 位光学的光显微照片。
图18.5％(w/w)的无水多西紫杉醇与1％(w/w)白蛋白和0.5％ (w/w)去氧胆酸钠结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学 的光显微照片。
图19.5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物与1％(w/w)白蛋白和0.5％ (w/w)去氧胆酸钠结合的纳米微粒水分散系在100X下应用相位光学 的光显微照片。
发明详述
A.概况
本发明涉及包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物及其制 备和应用的方法。与多西紫杉醇的常规制剂(TAXOTERE_)相比，纳米微 粒组合物令人惊讶地和出乎意料地不需要包括用以增加药物溶解度的 聚山梨醇酯或乙醇。
能制得多西紫杉醇或其类似物的纳米微粒组合物是令人惊讶的。 虽然先前已制得紫杉醇的纳米微粒组合物，但多西紫杉醇具有显著不 同于紫杉醇的结构。这种不同的结构导致多西紫杉醇具有比紫杉醇显 著更强的活性。而且，多西紫杉醇经由不同于紫杉醇的机理发挥作用。 根据所给出的这两种化合物的不同结构，料想不到的是，吸附或结合 于多西紫杉醇或其类似物表面的表面稳定剂能够成功地使化合物稳定 在纳米微粒的大小。
含多西紫杉醇或其类似物的组合物具有小于约2000nm的有效平 均粒径和至少一种表面稳定剂。在一个实施方案中，描述了可注射的 组合物，其包含纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物以及作为表面稳定 剂的具有分子量小于约40,000道尔顿的聚维酮聚合物。在另一个实 施方案中，纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物的药物制剂具有约6至 约7之间的pH值。
在人类治疗中，提供体内释放所需治疗量的活性成分并以快速和 恒定的方式使活性成分成为生物可利用的剂型是重要的。因此，本文 描述了多种纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物制剂，以满足这种需要。 纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物剂型的两个实例为注射纳米微粒剂 型和包衣纳米微粒剂型(例如固体分散体或液体填充胶囊)，当然也可 使用任何药学上可接受的剂型。
可以以在患者上施用时显示多种释放性质的制剂来提供本发明的 剂型，包括例如立即释放(IR)制剂、允许每日给药一次(或其它适当的 时间期限，例如每周/月给药一次/两次/三次)的控制释放(CR)制剂、 和IR和CR组合的制剂。因为本发明组合物的CR形式可要求每日只给 药一次剂量(或如每周或每月的适当时间期限给药一次剂量)，这样的 剂型有益于提高患者便利性和依从性。可以以多种途径实现CR形式中 所用的控制释放的机制，包括但不限于使用可侵蚀的制剂、控制扩散 的制剂、和渗透控制的制剂。
本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物制剂优于多西紫杉醇常 规形式(例如，非纳米微粒或增溶的剂型，例如TAXOTERE_)的优点包 括但不限于：(1)增加水溶性；(2)增加生物利用度；(3)更小的剂型 规格由于提高生物利用度；(4)更低的治疗剂量由于提高生物利用 度；(5)减少不期望的副作用的风险；(6)提高患者的便利性和依从性； (7)更高的剂量而可能没有不良副作用；和(8)更有效的癌症治疗。本发 明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物的注射制剂超过多西紫杉醇注射 常规形式(例如TAXOTERE_)的进一步优点是无需使用聚山梨醇酯或乙 醇来增加药物溶解度。
本发明也包括纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组合物，其包含 一种或多种无毒的生理学上可接受的载体、辅助剂、或赋形剂(统称为 载体)。组合物可配制用于胃肠外注射(例如静脉内、肌内、或皮下注 射)，以固体、液体或气溶胶形式口服给药，经阴道、鼻、直肠、眼、 局部(粉末、软膏或滴剂)、颊、脑池内、腹膜内、或表面(topical) 等等给药的制剂。
B.定义
本文使用如下面和整个申请所述的若干定义来描述本发明。
本文所用的术语“有效平均粒径小于约2000nm”表示当通过例 如沉积场流分级分离法(sedimentation field flow fractionation)、 光子相关光谱法(photon correlation spectroscopy)、光散射、碟 式离心法(disk centrifugation)、和本领域技术人员已知的其它技术 测量时，按重量计至少50％的多西紫杉醇或其类似物的粒子具有小于 约2000nm的大小。
本文所用的“约”应是本领域普通技术人员所理解的，并且在应 用它的上下文中会有在某种程度上变化。如果在所给出的应用它的上 下文中具有本领域普通技术人员不清楚的术语使用时，“约”将表示 该特定术语的至多加或减10％。
本文所用的“稳定的”多西紫杉醇或其类似物粒子包括但不限于 具有一种或多种以下参数的多西紫杉醇或其类似物：(1)多西紫杉醇或 其类似物粒子不会由于粒子间的吸引力或别的随着时间显著增加粒径 的因素出现可看到的絮凝或凝聚；(2)多西紫杉醇或其类似物粒子的物 理结构不会随着时间而改变，例如从无定形相转化为晶形相；(3)多西 紫杉醇或其类似物粒子是化学稳定的；和/或(4)在制备本发明纳米粒 中，多西紫杉醇或其类似物没有受到在多西紫杉醇或其类似物的熔点 或以上温度下的加热步骤。
术语“常规的”或“非纳米微粒”活性剂或多西紫杉醇或其类似 物应是指增溶的或具有大于约2000nm的有效平均粒径的活性剂，例 如多西紫杉醇或其类似物。如本文所定义的纳米微粒活性剂具有小于 约2000nm的有效平均粒径。
本文所用的短语“水溶性差的药物”是指在水中的溶解度小于约 30mg/ml、小于约20mg/ml、小于约10mg/ml、或小于约1mg/m的 药物。
本文所用的短语“治疗有效量”表示在需要此治疗的众多患者给 予该药物时提供的特定药理学反应的药物剂量。应强调的是，在特定 情况下给特定患者施用的治疗有效量的药物在治疗本文所述的病症/ 疾病中不总是有效的，即使领域技术人员认定该剂量为治疗有效量。
本文所用的术语“微粒”或“粒子”是指物质的状态，其特征为 不分大小、形状或形态存在的离散的粒子(particles)、小丸 (pellets)、珠(beads)、或颗粒(granules)。本文所用的术语“多微 粒”表示不分大小、形状或形态的复数个离散的或聚集的粒子、小丸、 珠、或颗粒或者它们的混合物。
本文所用的与根据本发明组合物或与包衣或包衣材料有关的或用 于其它任何上下文中的术语“改性释放”表示非立即释放的释放，它 包括控制释放、持续释放(sustained release)、延迟释放(delayed release)。
本文所用的术语“时间延迟”是指在给予组合物到多西紫杉醇或 其类似物从特定组分中释放之间的时间延续期。
本文所用的术语“滞后时间”是指活性成分从一个组分释放到多 西紫杉醇或其类似物从另一个组分中继后释放之间的时间。
C.纳米微粒的多西紫杉醇组合物的特征
本发明的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物具有许多提高 的药理学性质。
1.提高的生物利用度
在本发明的一个实施方案中，纳米微粒多西紫杉醇或其类似物制 剂在相同剂量的相同多西紫杉醇或其类似物下显示出提高的生物利用 度，并且与先前的常规多西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)相比，只需 要更小的剂量。
纳米微粒多西紫杉醇或其类似物剂型获得常规微晶多西紫杉醇剂 型(例如TAXOTERE_)所观察到的相同药理学效果，只需要更少的药物。 因此，纳米微粒多西紫杉醇或其类似物剂型与常规微晶多西紫杉醇剂 型相比，具有提高的生物利用度。
2.本发明多西紫杉醇组合物药动学曲线不受摄入此组合物的受 试者进食或禁食状态的影响
在本发明的另一个实施方案中描述了纳米微粒的多西紫杉醇或其 类似物的组合物，其中本发明多西紫杉醇组合物药动学曲线基本上不 受摄入此组合物的受试者进食或禁食状态的影响。这表示当纳米微粒 的多西紫杉醇或其类似物的组合物在进食状态施用与在禁食状态施用 对比时，在药物吸收的量或药物吸收的速率上，几乎没有差异或没有 可察觉的差异。
基本上消除食物影响的剂型的益处包括增加受试者的便利性，从 而增加受试者的依从性，因为受试者不需要确保他们在用药时是否进 食。而这是有意义的，因为多西紫杉醇或其类似物的受试者依从性不 好，可以观察到所开处方药物用于的医疗疾病加重，即癌症患者(例如 乳腺癌或肺癌患者)的预后可变得更糟。
本发明也提供多西紫杉醇或其类似物的组合物，其在给哺乳动物 受试者施用时具有预期的药动学性质。优选地，多西紫杉醇或其类似 物的组合物预期的药动学性质包括但不限于：(1)当测定哺乳动物受 试者用药后的血浆时，多西紫杉醇或其类似物的Cmax大于以相同剂量 给药的非纳米微粒多西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)的Cmax；和/或(2) 当测定哺乳动物受试者用药后的血浆时，多西紫杉醇或其类似物的 AUC大于以相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉醇制剂(例如 TAXOTERE_)的AUC；和/或(3)当测定哺乳动物受试者用药后的血浆时， 多西紫杉醇或其类似物的Tmax小于以相同剂量给药的非纳米微粒多西 紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)的Tmax。本文所用的预期的药动学性质为 在多西紫杉醇或其类似物初始剂量后所测量的药动学性质。
在一个实施方案中，在与相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉醇 制剂(例如TAXOTERE_)比较的药动学试验中，优选的多西紫杉醇或其 类似物组合物所显示的Tmax不大于约90％、不大于约80％、不大于约70％、 不大于约60％、不大于约50％、不大于约30％、不大于约25％、不大于 约20％、不大于约15％、不大于约10％、或不大于约5％的非纳米微粒多 西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)所显示的Tmax。
在另一个实施方案中，在与相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉 醇制剂(例如TAXOTERE_)比较的药动学试验中，本发明的多西紫杉醇 或其类似物组合物所显示的Cmax大于至少约50％、至少约100％、至少 约200％、至少约300％、至少约400％、至少约500％、至少约600％、至 少约700％、至少约800％、至少约900％、至少约1000％、至少约1100％、 至少约1200％、至少约1300％、至少约1400％、至少约1500％、至少约 1600％、至少约1700％、至少约1800％、至少约1900％的非纳米微粒多 西紫杉醇制剂(例如TAXOTERE_)所显示的Cmax。
在还一个实施方案中，在与相同剂量给药的非纳米微粒多西紫杉 醇制剂(例如TAXOTERE_)比较的药动学试验中，本发明的多西紫杉醇 或其类似物组合物显示出的AUC大于至少约25％、至少约50％、至少约 75％、至少约100％、至少约125％、至少约150％、至少约175％、至少约 200％、至少约225％、至少约250％、至少约275％、至少约300％、至少 约350％、至少约400％、至少约450％、至少约500％、至少约550％、至 少约600％、至少约750％、至少约700％、至少约750％、至少约800％、 至少约850％、至少约900％、至少约950％、至少约1000％、至少约1050％、 至少约1100％、至少约1150％、或至少约1200％的非纳米微粒多西紫杉 醇制剂(例如TAXOTERE_)所显示的AUC。
3.进食状态与禁食状态给药时本发明多西紫杉醇组合物的生物 等效性
本发明也包括包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物，其 中在禁食状态下给受试者施用该组合物与在进食状态下给受试者施用 该组合物是生物等效的。
包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物在进食状态给药与 禁食状态给药相比时，其吸收的差异优选小于约100％、小于约95％、 小于约90％、小于约85％、小于约80％、小于约75％、小于约70％、小 于约65％、小于约60％、小于约55％、小于约50％、小于约45％、小于 约35％、小于约35％、小于约30％、小于约25％、小于约20％、小于约 15％、小于约10％、小于约5％、或小于约3％。
在本发明的一个实施方案中，本发明包括包含纳米微粒多西紫杉 醇或其类似物的组合物，其中在禁食状态下给受试者施用该组合物与 在进食状态下给受试者施用该组合物是生物等效的，尤其是按照美国 食品与药品管理局(USFDA)和相应的欧洲调控机构(EMEA)所给出的Cmax 和AUC指导方针定义时是生物等效的。在USFDA指导方针下，如果AUC 和Cmax的90％置信区间(CI)在0.80至1.25(Tmax测量与调节目的的生物 等效性无关)时，则两种产品或方法是生物等效的。为了表明两种化合 物或给药条件之间的生物等效性，按照欧洲EMEA指导方针，AUC的90％ CI必须为0.80至1.25且Cmax的90％CI必须为0.70至1.43。
4.本发明多西紫杉醇组合物的溶出性质
在本发明的又一个实施方案中，本发明多西紫杉醇或其类似物的 组合物出乎意料地具有引人注目的溶出性质。多西紫杉醇或其类似物 的快速溶出是优选的，因为溶出越快通常导致起效越快，生物利用度 也越高。为了改善多西紫杉醇或其类似物的溶出性质和生物利用度， 增加药物的溶出度是有用的，这样可获得接近100％的水平。
本发明多西紫杉醇或其类似物的组合物优选具有以下溶出性质： 其中在约5分钟内溶出至少约20％的多西紫杉醇或其类似物的组合物。 在本发明的另一个实施方案中，在约5分钟内溶出至少约30％或至少约 40％的多西紫杉醇或其类似物的组合物。在本发明另外的又一个实施方 案中，优选在约10分钟内溶出至少约40％、至少约50％、至少约60％、 至少约70％、或至少约80％的多西紫杉醇或其类似物的组合物。最后， 在本发明的再一个实施方案中，优选在约20分钟内溶出至少约70％、 至少约80％、至少约90％、或至少约100％的多西紫杉醇或其类似物的 组合物。
优选在有区分力的介质中测量溶出度。对于在胃液具有极为不同 的溶出性质的两种产品，这样的溶出介质会产生两种极为不同的溶出 曲线，即此溶出介质可预测组合物的体内溶出度。示例性溶出介质为 含有0.025M月桂基硫酸钠表面活性剂的水性介质。可通过分光光度 法进行溶出量的测定。可使用转桨法(欧洲药典)测量溶出度。
5.本发明多西紫杉醇组合物的再分散性性质
在本发明的一个实施方案中，将本发明多西紫杉醇或其类似物的 组合物制备成再分散的固体剂型，这样使再分散的多西紫杉醇或其类 似物粒子的有效平均粒径小于约2微米。这是重要的，因为如果给予 纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物后不能再分散为纳米微粒的 粒子大小，那么该剂型就会丧失通过将多西紫杉醇或其类似物制备成 纳米微粒的粒子大小所提供的益处。
事实上，本发明的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物组合物的益处 来自多西紫杉醇或其类似物的小粒径；如果多西紫杉醇或其类似物在 给药后不能再分散为小粒径，那么由于纳米微粒系统非常高的表面自 由能和热力学驱动力使自由能全面减少，将形成“成块”或成团的多 西紫杉醇或其类似物粒子。随着这种成团粒子的形成，该剂型的生物 利用度下降。
此外，本发明纳米微粒的二萜紫杉烷的组合物，包括包含纳米微 粒多西紫杉醇或其类似物的组合物，在给哺乳动物(例如人或动物)施 用后表现出纳米微粒多西紫杉醇或其类似物粒子显著的再分散性(这 如同在生物相关水性介质中重构/再分散所证明的一样)，这样使再分 散的多西紫杉醇或其类似物粒子的有效平均粒径小于约2微米。这种 生物相关水性介质可以是具有形成生物相关介质基础所需的离子强度 和pH的任何水性介质。所需的离子强度和pH是代表人体内存在的生 理条件的那些。这样的生物相关水性介质可以是，例如电解质水溶液 或任何盐、酸或碱的水溶液，或它们的组合，它们均具有所需的离子 强度和pH。
生物相关的pH是本领域众所周知的。例如，在胃中pH范围为略 小于2(但是一般大于1)至4或5。在小肠中pH范围可为4至6，和在 结肠中pH范围可为6至8。生物相关的离子强度也是本领域众所周知 的。禁食状态胃液具有约0.1M的离子强度，而禁食状态肠液具有约 0.14的离子强度。参见例如Lindahl等，“Characterization of Fluids from the Stomach and Proximal Jejunum in Men and Women，”Pharm. Res.，14(4)：497-502(1997)。
据信，试验溶液的pH和离子强度比具体化学内容物更为关键。因 此，通过强酸、强碱、盐、强碱、单个或多个共轭酸碱对(即，弱酸和 该酸相应的盐)、一元和多元电解质的众多组合，可获得适当的pH和 离子强度值。
代表性的电解质溶液可以为但不限于为约0.001至约0.1N浓度 的HCl溶液，和约0.001至约0.1M浓度的NaCl溶液，以及它们的 混合物。例如，电解质溶液可以为但不限于为约0.1N或更低浓度的 HCl、约0.01N或更低浓度的HCl、约0.001N或更低浓度的HCl、 约0.1M或更低浓度的NaCl、约0.01M或更低浓度的NaCl、约0.001 M或更低浓度的NaCl、以及它们的混合物。这些电解质溶液中，0.01 N HCl和/或0.1M NaCl是最有代表性的人禁食生理条件，因为这是 近端胃肠道的pH和离子强度的状况。
0.001N HCl、0.01N HCl、和0.1N HCl的电解质浓度分别相 当于pH3、pH2、和pH1。因此，0.01N HCl溶液模拟胃中存在的 通常酸性条件。0.1M NaCl的溶液提供了合理的近似整个机体(包括 胃肠液)内存在的离子强度的条件，尽管高于0.1M的浓度可用于模拟 进食时人GI道的条件。
盐、酸、碱或它们组合的具有所需pH和离子强度的示例溶液包括 但不限于磷酸/磷酸盐+氯化钠、氯化钾和氯化钙，乙酸/乙酸盐+氯化 钠、氯化钾和氯化钙，碳酸/碳酸氢盐+氯化钠、氯化钾和氯化钙，以 及柠檬酸/柠檬酸盐+氯化钠、氯化钾和氯化钙。
在本发明的另一个实施方案中，按照光散射法、显微镜检查法、或 其它适合的方法测量时，本发明的再分散的多西紫杉醇或其类似物粒 子(再分散在水性、生物相关的、或任何其它适用的介质中)具有有效 平均粒径小于约2000nm、小于约1900nm、小于约1800nm、小于约 1700nm、小于约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小于 约1300nm、小于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、小 于约900nm、小于约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于 约600nm、小于约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约 400nm、小于约350nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200 nm、小于约150nm、小于约100nm、小于约75nm、小于约50nm。 用于测量有效平均粒径这些方法对本领域普通技术人员来说是已知 的。
使用本领域已知的任何适用的方法可测试再分散性。参见，例如 美国专利6,375,986“包含协同组合的聚合的表面稳定剂和磺基琥珀 酸二辛酯钠的固体剂型纳米微粒组合物”的实施例部分。
6.与其它活性剂结合应用的多西紫杉醇组合物
本发明的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物可另外包括用 于癌症治疗(尤其为乳腺癌和/或肺癌治疗)的一种或多种化合物。本发 明组合物可以与这样的其它活性剂一起共同配制(co-formulated)，或 者本发明组合物可以与这样的活性剂结合共同给予或顺序地给予。可 以与本发明多西紫杉醇组合物共同给予或共同制备的药物实例，包括 但不限于抗癌剂、化学治疗剂、地塞米松、COX-2抑制剂、laniquidar、 奥利默森(oblimersen)、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、类固醇(例如泼 尼松和其它组胺阻断药物)、环磷酰胺、环孢霉素A、易瑞沙(ZD1839)、 沙利度胺、米托蒽醌、英利昔单抗(Infliximab)、埃罗替尼 (erlotinib)、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、TLK286、MDX-010、ZD1839、 表柔比星、他莫昔芬、贝伐单抗(bevacizumab)、非格司亭 (filgrastim)、长春瑞滨、西妥昔单抗(cetuximab)、伊立替康、雌 莫司汀、依昔舒林(exisulind)、卡铂、ZD6474、吉西他滨、异环磷酰 胺、卡培他滨、黄酮吡啶酚(flavopiridol)、塞来考昔、舒林酸、和 舒林酸砜(Exisulind)。
D.组合物
本发明提供包含纳米微粒多西紫杉醇或其类似物粒子和至少一种 表面稳定剂的组合物。优选地表面稳定剂被吸附在或结合于多西紫杉 醇或其类似物粒子的表面。本文所用的表面稳定剂与多西紫杉醇或其 类似物粒子或其本身之间不会起化学反应。优选地，表面稳定剂的个 体分子基本上没有分子间的交联键合。在另一个实施方案，本发明组合 物可包含两种或更多种表面稳定剂。
本发明也包括纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组合物，其中包 含一种或多种无毒的生理学上可接受的载体、辅助剂、或赋形剂(统称 为载体)。组合物可制备用于胃肠外注射(例如静脉内、肌内、或皮下 注射)，以固体、液体或气溶胶形式口服给药，经阴道、鼻、直肠、眼、 局部(粉末、软膏或滴剂)、颊、脑池内、腹膜内、或表面等等给药的 制剂。在本发明的一些实施方案中，纳米微粒的多西紫杉醇或其类似 物制剂为注射形式或包衣口服形式。
1.多西紫杉醇
本文所有的术语“多西紫杉醇”包括其类似物和盐，并且可以是 晶形相、无定形相、半晶形相、半无定形相(semi-amorphous phase)、 或它们的混合物。多西紫杉醇或其类似物可以以一种基本上为光学纯 的对映异构体形式或者以对映异构体的混合物、消旋体或别的形式存 在。
本发明所述和包含的多西紫杉醇类似物包括但不限于，
(1)在C-3′和/或C-2苯甲酸酯位置上含有环己基基团而不是苯 基基团的多西紫杉醇类似物，例如3′-脱苯基-3′-环己基多西紫杉醇、 2-(六氢)多西紫杉醇、和3′-脱苯基-3′-环己基-2-(六氢)多西紫杉 醇(Ojima等“Synthesis and structure-activity relationships of new antitumor taxoids.Effects of cyclohexyl substitution at the C-3′and/or C-2 taxotere(docetaxel)，″J.Med.Chem.， 37(16)：2602-8(1994)；
(2)C-3′或C-2位置缺少苯基或芳基的多西紫杉醇类似物，例如 3′-脱苯基-3′-环己基多西紫杉醇和2-(六氢)多西紫杉醇；
(3)2-酰氨基多西紫杉醇类似物，包括间甲氧基和间氯苯甲酰氨 基类似物(Fang等，Bioorg.Med.Chem.Lett，12(11)：1543-6 (2002)；
(4)缺少环氧丙烷(oxetane)D环但具有对生物活性重要的4α- 乙酰氧基的多西紫杉醇类似物，例如5(20)-硫杂多西紫杉醇(thia docetaxel)类似物，它可由10-脱乙酰基浆果赤霉素III或紫杉碱B 和异紫杉碱(isotaxine)B合成，参见Merckle等，“Semisynthesis of D-ring modified taxoids：novel thia deriva tives of docetaxel，” J.Org.Chem.，66(15)：5058-65(2001)，和Deka等，Org.Lett.， 5(26)：5031-4(2003)；
(5)5(20)去氧多西紫杉醇；
(6)10-脱氧-10-C-吗啉代乙基多西紫杉醇类似物，包括其中7-羟 基被改性为疏水基(甲氧基、脱氧、6，7-烯、α-F、7-β-8-β-亚甲基、 氟代甲氧基)的多西紫杉醇类似物，它描述在Iimura等，“Orally active docetaxel analogue：synthesis of 10-deoxy-10-C- morpholinoethyl docetaxel analogues，”Bioorg.Med.Chem.Lett.， 11：(3)407-10(2001)；
(7)Cassidy等在Clin.Can.Res.，8：846-855(2002)中描述 的多西紫杉醇类似物，例如具有叔丁基氨基甲酸酯作为异丝氨酸N-酰 基的取代基但不又同于多西紫杉醇的C-10(乙酰基对羟基)和C-13异 丝氨酸键连(烯醇酯对酯)的类似物；
(8)在C3位具有肽支链的多西紫杉醇类似物，参见Larroque等 “Novel C2-C3″N-peptide linked macrocyclic taxoids.Part 1： Synthesis and biological activities of docetaxel analogues with a peptide side chain at C3”，Bioorg.Med.Chem.Lett. 15(21)：4722-4726(2005)；
(9)XRP9881(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似物)；
(10)XRP6528(10-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉醇类似 物)；
(11)Ortataxel(14-β羟基-脱乙酰基浆果赤霉素III多西紫杉 醇类似物)；
(12)MAC-321(10-脱乙酰基-7-丙酰基浆果赤霉素多西紫杉醇类 似物)；
(13)DJ-927(7-脱氧-9-β-二氢-9，10，O-乙缩醛紫杉烷多西紫杉 醇类似物)；
(14)具有C2-C3′N-键合的多西紫杉醇类似物，其中C2位携带芳 环并在N3′和C2-芳环的邻、间或对位之间链接。该对位取代的衍生物 不能使微管稳定，而邻位和间位取代的化合物在冷诱导的微管拆散测 定中显示出显著的活性。Olivier等，“Synthesis of C2-C3′N-Linked Macrocyclic Taxoids；Novel Docetaxel Analogues with High Tubulin Activity，”J.Med.Chem.，47(24：5937-44(Nov.2004)；
(15)多西紫杉醇类似物，其携带连接C-2 OH和C-3′NH部分的 22-元(或更多)环，(对携带连接C-2 OH和C-3′NH部分的18-、20-、 21-、和22-元环的多西紫杉醇类似物的生物学评价表明活性依赖于环 的大小；只有22-元环的二萜紫杉烷3d显示显著的微管结合力) (Querolle等，“Synthesis of novel macrocyclic docetaxel analogues.Influence of their macrocyclic ring size on tubulin activity，”J.Med.Chem.，46(17)：3623-30(2003).)；
(16)7β-O-糖基化的多西紫杉醇类似物(Anastasia等， “Semi-Synthesis of an O-glycosylated docetaxel analogue，” Bioorg.Med.Chem.，11(7)：1551-6(2003))；
(17)10-烷基化多西紫杉醇类似物，例如在烷基部分的末端具有 甲氧基羰基的10-烷基化多西紫杉醇类似物(Nakayama等，“Synthesis and cytotoxic activity of novel 10-alky lated docetaxel analogs，”Bioorg.Med.Chem.Lett.，8(5)：427-32(1998))；
(18)2′，2′-二氟代，3′-(2-呋喃基)，和3′-(2-吡咯基)多西紫杉 醇类似物(Uoto等，“Synthesis and structure-activity relationships of novel 2′，2′-difluoro analogues of docetaxel，” Chem.Pharm.Bull.(Tokyo，45(11)：1793-804(1997))；和
(19)荧光的和生物素化的多西紫杉醇类似物，例如具有(a)在7 或3′位置的N-(7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二唑-4-基)酰氨基-6-己酰基 链，(b)在3′位的N-(7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二唑-4-基)酰氨基-3-丙 酰基基团，或(c)在7、10或3′位置的5′-生物素基酰氨基-6-己酰基 链的多西紫杉醇类似物(Dubois等，“Fluorescent and biotinylated analogues of docetaxel：synthesis and biological evaluation，”Bioorg.Med.Chem.，3(10)：1357-68(1995))。
2.表面稳定剂
在本发明的多西紫杉醇或其类似物制剂中可应用一种以上的表面 稳定剂的组合。在本发明的一个实施方案中，多西紫杉醇或其类似物 制剂为注射制剂。适用的表面稳定剂包括但不限于已知的有机和无机 药用辅料。这些辅料包括各种聚合物、低分子量低聚物、天然产物、 和表面活性剂。表面稳定剂包括非离子、离子、阴离子、阳离子、和 两性离子表面活性剂。在本发明的一个实施方案中，注射纳米微粒的 多西紫杉醇或其类似物制剂的表面稳定剂为聚维酮聚合物。
表面稳定剂的代表性实例包括羟丙基甲基纤维素(现称为羟丙甲 纤维素)、白蛋白、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、月桂基硫酸钠、 磺基琥珀酸二辛酯、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、右旋糖酐、阿拉 伯胶、胆固醇、黄芪胶、硬脂酸、苯扎氯铵、硬脂酸钙、单硬脂酸甘 油酯、鲸蜡硬脂醇(cetostearyl alcohol)、聚西托醇乳化蜡 (cetomacrogol emulsifying wax)、脱水山梨醇酯、聚氧乙烯烷基醚 (例如聚乙二醇醚，如聚乙二醇1000单鲸蜡基醚)、聚氧乙烯蓖麻油衍 生物、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(例如商业上可得的Tween8_，如 Tween_20和Tween_80(ICI Speciality Chemicals))；聚乙二醇(例如 Carbowaxes 3550_和934_(Union Carbide))、聚氧乙烯硬脂酸酯、胶 态二氧化硅、磷酸酯(盐)、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲 基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯、非晶性纤维 素、硅酸镁铝、三乙醇胺、聚乙烯醇(PVA)、含环氧乙烷和甲醛的 4-(1，1，3，3-四甲基丁基)-苯酚聚合物(也称为泰洛沙泊(tyloxapol)、 四丁酚醛(superione)、和曲拉通(triton))、泊洛沙姆(例如 Pluronics_F68和F108，它们是环氧乙烷和环氧丙烷的嵌段共聚 物)；poloxamines(例如Tetronic 908_，也称为Poloxamine 908_，它 是将环氧丙烷和环氧乙烷顺序与乙二胺加成衍生的四功能嵌段共聚物 (BASF Wyandotte Corporation，Parsippany，N.J.))；Tetronic 1508_(T-1508)(BASF Wyandotte Corporation)，Tritons X-200_， 它是烷基芳基聚醚磺酸酯(Rohm and Haas)；Crodestas F-110_，它是 蔗糖硬脂酸酯和蔗糖二硬脂酸酯的混合物(Croda Inc.)；对异壬基苯 氧基聚-(缩水甘油)，也称为Olin-10G_或表面活性剂10-G_(Olin Chemicals，Stamford，CT)；Crodestas SL-40_(Croda，Inc.)；和 SA90HCO，它是C18H37CH2C(O)N(CH3)-CH2(CHOH)4(CH2OH)2(Eastman Kodak Co.)；癸酰基-N-甲基葡糖酰胺(glucamide)；正癸基(-D-吡喃葡萄糖苷； 正癸基(-D-吡喃麦芽糖苷；正十二烷基(-D-吡喃葡萄糖苷；正十二烷基 (-D-麦芽糖苷；庚酰基-N-甲基葡糖酰胺；正庚基-(-D-吡喃葡萄糖苷； 正庚基(-D-硫葡糖苷；正己基(-D-吡喃葡萄糖苷；壬酰基-N-甲基葡糖 酰胺；正壬基(noyl)(-D-吡喃葡萄糖苷；辛酰基-N-甲基葡糖酰胺；正 辛基-(-D-吡喃葡萄糖苷；辛基-(-D-硫代吡喃葡萄糖苷；PEG-磷脂、 PEG-胆固醇、PEG-胆固醇衍生物、PEG-维生素A、PEG-维生素E、溶菌 酶、乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯的无规共聚物等等。并且，如果需 要，可以制备成无磷脂的本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物制 剂。
有用的阳离子表面稳定剂的实例包括但不限于聚合物、生物聚合 物、多糖、纤维素、海藻酸盐、磷脂、和非聚合化合物，例如两性离 子稳定剂、聚-n-甲基吡啶_、氯化蒽基(anthryul)吡啶_、阳离子磷 脂、壳聚糖、聚赖氨酸、聚乙烯咪唑、聚凝胺(polybrene)、三甲基聚 甲基丙烯酸甲酯溴化铵(PMMTMABr)、三甲基己基二苯乙酮基溴化铵 (HDMAB)、和二甲基硫酸聚乙烯吡咯酮-2-二甲基氨基乙基异丁烯酸酯。 其它有用的阳离子稳定剂的实例包括但不限于阳离子类脂、锍、磷、 和季铵化合物，例如硬脂酰三甲基氯化铵、溴化苄基-二(2-氯乙基) 乙基铵、椰子油三甲氯化或溴化铵、椰子油甲基二羟基乙基氯化或溴 化铵、癸基三乙基氯化铵、癸基二甲基羟乙基氯化或溴化铵、C12-15 二甲基羟乙基氯化或溴化铵、椰子油二甲基羟乙基氯化或溴化铵、肉 豆蔻基三甲基铵甲基硫酸酯、月桂基二甲基苄基氯化或溴化铵、月桂 基二甲基(乙烯氧基)4氯化或溴化铵、N-烷基(C12-18)二甲基苄基氯 化铵、N-烷基(C14-18)二甲基苄基氯化铵、N-十四烷基二甲基苄基氯 化铵一水合物、二甲基二癸基氯化铵、N-烷基和(C12-14)二甲基1-萘 基甲基氯化铵、三甲基卤化铵、烷基三甲铵盐和二烷基二甲铵盐、月 桂基三甲基氯化铵、乙氧基化烷基酰氨基烷基二烷基铵盐和/或乙氧基 化三烷基铵盐、二烷基苯二烷基氯化铵、N-二癸基二甲基氯化铵、N- 十四烷基二甲基苄基氯化铵一水合物、N-烷基(C12-14)二甲基1-萘 基甲基氯化铵和十二烷基二甲基苄基氯化铵、二烷基苯烷基氯化铵、 月桂基三甲基氯化铵、烷基苄基甲基氯化铵、烷基苄基二甲基溴化铵、 C12、C15、C17三甲基溴化铵、十二烷基苄基三乙基氯化铵、聚二烯 丙基二甲基氯化铵(DADMAC)、二甲基氯化铵、烷基二甲基铵卤化物、 三鲸蜡基甲基氯化铵、癸基三甲基溴化铵、十二烷基三乙基溴化铵、 十四烷基三甲基溴化铵、氯化甲基三辛基铵(ALIQUAT 336)、POLYQUAT、 溴化四丁基铵、溴化苄基三甲基铵、胆碱酯(例如脂肪酸的胆碱酯)、 苯扎氯铵、氯化硬脂酰二甲基苄基铵(stearalkonium chloride)化合 物(例如氯化硬脂酰三甲铵(stearyltrimonium chloride)和氯化二硬 脂酰二甲铵(distearyldimonium chloride))、溴化或氯化十六烷基 吡啶_、季铵化聚氧乙烯烷基胺的卤盐、MIRAPOL和ALKAQUAT(Alkaril Chemical Company)、烷基吡啶_盐；胺(例如烷基胺、二烷基胺、烷 醇胺、聚乙烯聚胺、N，N-二烷基氨基烷基丙烯酸酯、以及乙烯吡啶)、 胺盐(例如醋酸月桂胺、醋酸硬脂基胺、烷基吡啶_盐和烷基咪唑_ 盐)、以及胺氧化物；咪唑_(imide azolinium)盐；质子化四元 (quaternary)丙烯酰胺；甲基化四元聚合物(例如聚[二烯丙基二甲基 氯化铵]和聚-[N-氯化甲基乙烯基吡啶_]；和阳离子瓜耳胶。
这些示例性的阳离子表面稳定剂和其它有用的阳离子表面稳定剂 描述于J.Cross和E.Singer，Cationic Surfactants：Analytical and Biological Evaluation(Marcel Dekker，1994)；P.和D. Rubingh(Editor)，Cationic Surfactants：Physical Chemistry (Marcel Dekker，1991)；和J.Richmond，Cationic Surfactants： Organic Chemistry，(Marcel Dekker，1990)。
非聚合表面稳定剂为任何非聚合化合物，例如苯扎氯铵、碳_化 合物、磷_化合物、氧_化合物、卤_(halonium)化合物、阳离子有 机金属化合物、四价磷(quarternary phosphorous)化合物、吡啶_化 合物、苯胺_(anilinium)化合物、铵化合物、羟铵化合物、伯铵化合 物、仲铵化合物、叔铵化合物、以及式NR1R2R3R4(+)的季铵化合物。 至于式NR1R2R3R4(+)的化合物：
(i)R1-R4中无一为CH3；
(ii)R1-R4中的一个为CH3；
(iii)R1-R4中的三个为CH3；
(iv)所有R1-R4均为CH3；
(v)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且R1-R4 中的一个为七个或更少个碳原子的烷基链；
(vi)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且 R1-R4中的一个为十九个或更多个碳原子的烷基链；
(vii)R1-R4中的两个为CH3，并且R1-R4中的一个为C6H5(CH2)n 基团，其中n＞1；
(viii)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且 R1-R4中的一个包含至少一个杂原子；
(ix)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且 R1-R4中的一个包含至少一个卤素；
(x)R1-R4中的两个为CH3，R1-R4中的一个为C6H5CH2，并且R1-R4 中的一个包含至少一个环状片段；
(xi)R1-R4中的两个为CH3，并且R1-R4中的一个为苯环；或
(xii)R1-R4中的两个为CH3，并且R1-R4中的两个为纯脂肪族片 段。
这些化合物包括但不限于氯化二十二烷基二甲基苄基铵 (behenalkonium chloride)、苄索氯铵、氯化十六烷基吡啶_、氯化 二十二烷基三甲基铵(behentrimonium chloride)、劳拉氯铵 (lauralkonium chloride)、西他氯铵、西曲溴铵(cetrimonium bromide)、氯化十六烷基三甲铵、十六烷基胺氢氟化物(cethylamine hydrofluoride)、氯化氯烯丙基六亚甲基四胺 (chlorallylmethenamine)(Quaternium-15)、氯化二硬脂基二甲铵 (Quaternium-5)、十二烷基二甲基乙基苄基氯化铵(Quaternium-14)、 Quaternium-22、Quaternium-26、Quaternium-18锂蒙脱石、氯化二 甲基氨乙基盐酸盐、盐酸半胱氨酸、二乙醇铵POE(10)油基(oletyl) 醚磷酸盐、二乙醇铵POE(3)油基醚磷酸盐、氯化牛脂二甲基苄基铵 (tallow alkonium)、二甲基双十八烷基铵膨润土、氯化硬脂酰二甲基 苄基铵、度米芬、苯甲地那铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十二烷 基三甲基氯化铵、二盐酸乙二胺、盐酸胍、盐酸吡哆醇、盐酸碘非他 胺、盐酸葡甲胺、甲苄索氯铵、溴化肉豆蔻基三甲基铵(myrtrimonium bromide)、氯化油基三甲基铵(oleyltrimonium)、聚季铵盐-1、盐酸 普鲁卡因、椰子酰基甜菜碱(cocobetaine)、硬脂烷铵(stearalkonium) 膨润土、硬脂烷铵锂蒙脱石(stearalkoniumhectonite)、硬脂基三羟 基乙基丙二胺二氢氟酸盐、氯化牛脂三甲铵(tallowtrimonium)、和十 六烷基三甲基溴化铵。
这些表面稳定剂大多数是已知的药用辅料，并且美国药物协会和 英国药学会联合出版的Handbook of Pharmaceutical Excipients(The Pharmaceutical Press，2000)对它们作了详细描述，在此特别地将 其引入作为参考。
聚维酮聚合物
聚维酮聚合物是用于制备纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物注射 制剂中使用的示例性表面稳定剂。聚维酮聚合物也称为聚维酮、 povidonum、PVP、和聚乙烯吡咯烷酮，其以商标名Kollidon_(BASF Corp.)和Plasdone_(ISP Technologies，Inc.)销售。它们为多分 散的大分子的分子，化学名为1-次乙基-2-吡咯烷酮聚合物和1-乙烯 基-2-吡咯烷酮聚合物。商业上生产的聚维酮聚合物为具有平均分子量 从约10,000至约700,000道尔顿的系列产品。为了用作注射纳米微粒 的多西紫杉醇或其类似物组合物的表面稳定剂，优选聚维酮聚合物具 有分子量小于约40,000道尔顿，因为对于注射剂而言，分子量大于 40,000道尔顿将难于被机体清除。
通过例如Reppe氏方法制备聚维酮聚合物，其包含：(1)通过 Reppe丁二烯合成由乙炔和甲醛获得1，4-丁二醇；(2)在200℃下经铜 使1，4-丁二醇脱氢，形成γ-丁内酯；和(3)将γ-丁内酯与氨反应，产 生吡咯烷酮。继后用乙炔处理得到乙烯基吡咯烷酮单体。在H2O和NH3 存在下通过加热实现聚合作用。参见The Merck Index，10th Edition， pp.7581(Merck&Co.，Rahway，NJ，1983)。
聚维酮聚合物的制备方法产生含有不相等链长分子的聚合物，并 因此具有不同的分子量。每种特定商业上可得级别的分子分子量的平 均值不同。因为难于直接地确定聚合物的分子量，最广泛使用的划分 各种分子量级别的方法为基于粘度测量的K值法。各种级别的聚维酮 聚合物的K值具有代表平均分子量的函数，它由粘度测量得到并根据 Fikentscher氏公式计算。
通过测量个体分子的重量的方法(例如光散射法)确定分子量的平 均重量(Mw)。表1提供数种商业上可得聚维酮聚合物(所有这些均是可 溶的)的分子量数据。
虽然申请人不希望受理论机制的束缚，但应当相信聚维酮聚合物 通过在粒子之间的力学或立体障碍的作用和使接近(凝聚和絮凝必需 的粒子间的接近)减至最少，阻碍多西紫杉醇或其类似物粒子的絮凝和 /或凝聚。
表1
聚维酮 K值 Mv(道尔顿)** Mw(道尔顿)** Mn (道尔顿)** Plasdone_C-15 17±1 7,000 10,500 3,000 Plasdone_C-30 30.5±1.5 38,000 62,500* 16,500 Kollidon_12PF 11-14 3,900 2,000-3,000 1,300 Kollidon_17PF 16-18 9,300 7,000-11,000 2,500 Kollidon_25 24-32 25,700 28,000-34,000 6,000
*因为分子量大于40,000道尔顿的聚维酮聚合物不用作胃肠外给 予(即注射)的药物化合物的表面稳定剂
**Mv为粘度平均分子量，Mn为数均分子量，Mw为重均分子量。通 过光散射和超速离心法测定Mw和Mn，通过粘度测量测定Mv。
基于表1所提供的数据，优选示例性的商业上可得的用于注射组 合物的聚维酮聚合物包括但不限于Plasdone_C-15、Kollidon_12PF、 Kollidon_17PF、和Kollidon_25。
3.纳米微粒的多西紫杉醇粒径
基于重量的平均粒径，通过本领域技术人员众所周知的常规粒径 测量技术的测量以确定本文所用的粒径。这些技术包括，例如沉积场 流分级分离法、光子相关光谱法、光散射、和碟式离心法。
本发明组合物包含具有有效平均粒径小于约2微米的多西紫杉醇 或其类似物粒子。在本发明的另一个实施方案中，按照光散射法、显微 镜检查法、或其它适用的方法测量时，多西紫杉醇或其类似物粒子具 有有效平均粒径小于约1900nm、小于约1800nm、小于约1700nm、 小于约1600nm、小于约1500nm、小于约1400nm、小于约1300nm、 小于约1200nm、小于约1100nm、小于约1000nm、小于约900nm、 小于约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于约600nm、 小于约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约400nm、小 于约350nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于 约150nm、小于约100nm、小于约75nm或小于约50nm。在本发 明的又一个实施方案中，本发明组合物为注射剂型，并且按照光散射 法、显微镜检查法、或其它适用的方法测量时，多西紫杉醇或其类似 物粒子优选具有有效平均粒径小于约1000nm、小于约900nm、小于 约800nm、小于约700nm、小于约650nm、小于约600nm、小于 约550nm、小于约500nm、小于约450nm、小于约400nm、小于约350 nm、小于约300nm、小于约250nm、小于约200nm、小于约150nm、 小于约100 nm、小于约75nm或小于约50nm。可注射的组合物可包 含有效平均粒径大于约1微米，至多约2微米的多西紫杉醇或其类似 物。
“有效平均粒径小于约2000nm”表示按重量计至少50％的多西紫 杉醇或其类似物的粒子具有粒径小于此有效平均数，即小于约2000 nm。如果“有效平均粒径”小于约600nm，那么当按照上述技术测量 时，至少约50％的多西紫杉醇或其类似物的粒子具有小于约600nm 的尺寸。对于上述的其它粒径也是同样的定义。
在另外的实施方案中，至少约60％、至少约70％、至少约80％、至 少约90％、至少约95％、或至少约99％的多西紫杉醇或其类似物粒子 具有粒径小于有效平均数，即小于约1000nm、约900nm、约800nm 等。
在本发明中，纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物的D50值 为按重量计50％的多西紫杉醇或其类似物粒子落在该粒径的下面，类 似地，D90值为按重量计90％的多西紫杉醇或其类似物粒子落在该粒径 的下面。
4.纳米微粒的多西紫杉醇和表面稳定剂的浓度
多西紫杉醇或其类似物与一种和多种表面稳定剂的相对含量可宽 泛地变化。个体组分的最佳量依赖于例如所选的表面稳定剂和多西紫 杉醇或其类似物的物理和化学属性，例如亲水亲脂平衡(HLB)、熔点、 和稳定剂水溶液的表面张力等等。
优选地，基于多西紫杉醇或其类似物和至少一种表面稳定剂组合 的而不包括其它辅料的总重量，多西紫杉醇或其类似物的浓度按重量 计可为约99.5％至约0.001％、约95％至约0.1％、或约90％至约0.5％。 根据剂量和成本效益观点，通常优选较高浓度的活性成分。
优选地，基于多西紫杉醇或其类似物和至少一种表面稳定剂组合 的而不包括其它辅料的总重量，表面稳定剂的浓度按重量计可为约 0.5％至约99.999％、约5.0％至约99.9％、或约10％至约99.5％。
5.其它的药物辅料
本发明的药物组合物也可以依据给药途径和预期的剂型包含一种 或多种粘合剂、填充剂、润滑剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、 缓冲剂、湿润剂、崩解剂、泡腾剂、和其它的辅料。这些辅料是本领 域众所周知的。
填充剂的实例为乳糖一水合物、无水乳糖、和各种淀粉；粘合剂的 实例为各种纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素(如 Avicel_PH101和Avicel_PH102)、微晶纤维素、和硅化微晶纤维素 (ProSolv SMCCTM)。
适用的润滑剂(包括对要被压缩的粉末流动性起作用的试剂)为胶 态二氧化硅(如Aerosil_200)、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸 钙、和硅胶。
甜味剂的实例为任何天然的或人工的甜味剂，例如蔗糖、木糖醇、 糖精钠、环磺酸盐(cyclamate)、阿司帕坦(aspartame)、和安赛蜜 (acsulfame)。矫味剂的实例为Magnasweet_(MAFCO商标)、泡泡糖香 料(bubble gum flavor)、和水果香料等等。
防腐剂的实例为山梨酸钾、对羟基苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯、 苯甲酸和其盐、其它的对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸丁酯)、醇 类(例如乙醇或苯甲醇)、酚化合物(例如苯酚)、和四价(quarternary) 化合物(例如苯扎氯铵)。
适用的稀释剂包括药学上可接受的惰性填充剂，例如微晶纤维素、 乳糖、磷酸氢钙、糖、和/或上述的任意混合物。稀释剂的实例包括微 晶纤维素(例如Avicel_PH101和Avicel_PH102)；乳糖(例如乳糖一 水合物、无水乳糖、和Pharmatose_DCL21)；磷酸氢钙(例如 Emcompress_)；甘露醇；淀粉；山梨醇；蔗糖；和葡萄糖。
适用的崩解剂包括轻度交联的聚乙烯吡咯烷酮、玉米淀粉(corn starch)、马铃薯淀粉、玉米淀粉(maize stareh)、和改性淀粉、交联 羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、淀粉羟乙酸钠、和它们的混合物。
泡腾剂的实例为泡腾剂对(effervescent coupies)，例如有机酸 和碳酸盐或碳酸氢盐。适用的有机酸包括，例如枸橼酸、酒石酸、苹 果酸、富马酸、己二酸、琥珀酸和海藻酸以及酸酐和酸盐。适用的碳 酸盐和碳酸氢盐包括，例如碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、 碳酸镁、甘氨酸碳酸钠、L-赖氨酸碳酸盐(L-lysine carbonate)和精 氨酸碳酸盐(arginine carbonate)。或者，可以只有泡腾剂对中的碳 酸氢钠组分存在。
6.可注射的纳米微粒多西紫杉醇制剂
在本发明的一个实施方案中，提供可注射的纳米微粒多西紫杉醇 或其类似物制剂，它可以在低注射容量中包含高浓度，给药时具有快 速溶出度的特点。示例性的组合物以％w/w为计包含：
多西紫杉醇或其类似物 5-50％
表面稳定剂 0.1-50％
防腐剂 0.05-0.25％
pH调节剂 pH约6至约7
注射用水 适量
示例性的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯(以％w/w计约0.18％)、对 羟基苯甲酸丙酯(以％w/w计约0.02％)、苯酚(以％w/w计约0.5％)、和 苯甲醇(最高达2％v/v)。示例性的pH调节剂是氢氧化钠，示例性的 液体载体是灭菌注射用水。其它有用的防腐剂、pH调节剂和液体载体 是本领域众所周知的。
7.包衣的口服制剂
当与食物一起施用时，多西紫杉醇或其类似物的生物利用度减少。 与食物一起施用，多西紫杉醇或其类似物在胃中滞留的时间增加。该增 加的滞留时间使多西紫杉醇或其类似物在胃酸条件下溶解。然后，当 溶解的药物从胃中排出并进入较为碱性条件的小肠上部时，多西紫杉 醇或其类似物从溶液中沉淀析出。析出的多西紫杉醇或其类似物不好 被吸收，因为在它被吸收之前它必须再一次溶解，并且溶解过程因为 多西紫杉醇或其类似物的弱水溶性而缓慢。药物在胃中溶出，随后沉 淀析出，降低了多西紫杉醇或其类似物由于服用纳米微粒剂型(例如纳 米微粒多西紫杉醇或其类似物的固体分散体、或纳米微粒多西紫杉醇 或其类似物的液体填充胶囊)所获得的提高的生物利用度。避免药物在 胃的低pH条件会减少或消除对生物利用度的这种下降。
因此，本文描述了包含包衣的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物(例 如肠溶包衣的多西紫杉醇或其类似物)的组合物。在一个实施方案中， 口服制剂包括例如肠溶包衣的固体剂型的口服制剂。
供口服给药的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉末、 和颗粒。在这些固体剂型中，将多西紫杉醇或其类似物与下列的至少 一种混合：(a)一种和多种惰性辅料(或载体)，例如枸橼酸钠或磷酸二 钙；(b)填充剂或增充剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、 和硅酸；(c)粘合剂，例如羧甲基纤维素、海藻酸盐(alignates)、明 胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖、和阿拉伯胶；(d)保湿剂，例如甘油；(e) 崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些复合 硅酸盐、和碳酸钠；(f)溶液阻滞剂，例如石蜡；(g)吸收促进剂， 例如季铵类化合物；(h)润湿剂，例如十六醇和单硬脂酸甘油酯；(i) 吸附剂，例如白陶土和膨润土；和(j)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、 硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠或它们的混合物。至于胶囊、 片剂、和丸剂，这些剂型也可包含缓冲剂。
药物释放曲线
在一个实施方案中，本文所述包衣的纳米微粒多西紫杉醇或其类 似物(例如肠溶包衣的多西紫杉醇或其类似物)的组合物在以口服剂型 给患者施用时，显示出脉冲式血浆曲线。与药物化合物施用有关的此 血浆曲线可以被描述为“脉冲式曲线”，其中可观察到脉冲式的高浓 度多西紫杉醇或其类似物之间有散置的低浓度谷。含有两个峰的脉冲 式曲线可以被描述为“双峰”。类似地，施用时产生这种曲线的组合 物或剂型可以说是表现出“脉冲释放”的多西紫杉醇或其类似物。
常规的以定期间隔施用立即释放(IR)剂型的频繁给药方案一般会 引起脉冲式血浆曲线。在这种情形中，在施用每个IR剂量后可观察到 血浆药物浓度峰，并在连续施用的时间点之间形成谷(药物低浓度区 域)。这些给药方案(和它们所得的脉冲式血浆曲线)具有与它们有关的 特定药理学和治疗学效果。例如，峰间多西紫杉醇或其类似物的血浆 浓度下降所提供的间歇期被认为是减轻或防止患者对各种类型药物耐 受性的有益因素。
Devane等的美国专利6,228,398、6,730,325和6,793,936中公 开并要求保护与本文公开相似的多微粒改性控制释放(CR)组合物，在 此特别地将它们全部引入作为参考。可以在那里找到本领域所有有关 的现有技术。
本发明的另一个方面为多微粒改性释放组合物，其具有含有第一 数量的多西紫杉醇或其类似物的第一种组分和含有第二数量的多西紫 杉醇或其类似物的第二种组分。含成分粒子的第二种组分包有改性释 放包衣。可替代地或另外地，含第二数量的多西紫杉醇或其类似物的 粒子进一步包含改性释放基质材料。随口腔递送后，服用的此组合物 以脉冲方式释放多西紫杉醇或其类似物。
在本发明的多微粒改性释放组合物的优选实施方案中，第一种组 分为立即释放组分。
第二数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子所用的改性释放包衣， 会引起活性成分从含第一数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放 和活性成分从含第二数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放之间 的滞后时间。类似地，在含第二数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子 中存在的改性释放基质材料，会引起多西紫杉醇或其类似物从含第一 数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放和活性成分从含第二数量 的多西紫杉醇或其类似物的粒子中释放之间的滞后时间。通过改变所 用成分和/或改性释放包衣量和/或改变成分和/或改性释放基质材料 的量，可以改变滞后的期间。此，可设计滞后时间的期间以模拟想要 的血浆曲线。
因为施用时多微粒改性释放组合物所产生的血浆曲线基本上相似 于连续施用两次或更多次IR剂型所产生的血浆曲线，所以本发明多微 粒控制释放组合物优其可对耐受性可能有问题的患者施用多西紫杉醇 或其类似物。因此，多微粒改性释放组合物有利于减轻或最大限度地减 轻患者对本组合物活性成分耐受性的发展。
本发明还提供治疗癌症，尤其乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和/或肺 癌的方法，包括施用治疗有效量的本发明组合物，以提供多西紫杉醇 或其类似物脉冲的或双峰的给药。本发明的优点包括减少常规多个IR 给药方案所需的给药频率，而仍然维持脉冲式血浆曲线所产生的益处。 这种减少的给药频率有利于患者的依从性，可使制剂以减少的频率施 用。通过应用本发明组合物可能得到的这种给药频率的减少，应当有 助于减少卫生保健工作者用在药物施用上的时间数而减少医疗费用。
每个组分中的活性成分可以是相同的或不同的。例如，其中第一 种组分含有多西紫杉醇或其类似物而第二种组分含有第二种活性成分 的组合物，可能对于联合治疗是理想的。当然，当活性成分彼此相容 时，可以将两种或更多种活性成分合并到同一组分中。在本组合物的 一个组分中存在的药物化合物可以，例如在本组合物的另一个组分中 伴随存在增强剂化合物或敏化剂化合物，以改变此药物化合物的生物 利用度或疗效。
本文所用的术语“增强剂”是指能够通过促进透过动物(例如人) 的胃肠道的净转运而增强活性成分吸收和/或生物利用度的化合物。增 强剂包括但不限于中链脂肪酸；盐、酯、醚及其衍生物，包括甘油酯和 甘油三酯；非离子型表面活性剂例如可由环氧乙烷与脂肪酸、脂肪醇、 烷基酚、或脱水山梨醇起反应制得的那些或甘油脂肪酸酯；细胞色素 P450抑制剂、P-糖蛋白抑制剂等等；和这些物质的两种或更多种的混 合物。
每种组分中存在的多西紫杉醇或其类似物比例可以相同或不同， 这取决于预期的给药方案。多西紫杉醇或其类似物以足够引起治疗反 应的任何量存在于第一种组分和第二种组分中。当适用时，多西紫杉 醇或其类似物可以以一种基本上光学纯的对映异构体，形式或者以对 映异构体的混合物、外消旋体或别的形式存在。
通过改变每种组分的成分(包括改变可存在的任何辅料或包衣成 分)，可以改变多西紫杉醇或其类似物从每种组分中释放的时间-释放 的特性。特别地，通过改变成分和/或粒子上的改性释放包衣量(如果 存在包衣)，可以控制多西紫杉醇或其类似物的释放。如果存在多于一 种的改性释放组分，这些组分的每个改性释放包衣可以相同或不同。 类似地，当凭借含有改性释放基质材料促进改性释放时，通过所用改 性释放基质材料的选择和量，可以控制活性成分的释放。改性释放包 衣可以以使每个特定组分足够产生预期延迟时间的任何量存在于每个 组分中。改性释放包衣可以以足够产生两组分之间预期时滞的任何量 存在于各组分中。
通过改变各个组分的成分(包括改变可存在的任何辅料或包衣的 成分)，也可以改变多西紫杉醇或其类似物从每个组分中释放的滞后时 间或延迟时间。例如，第一种组分可以为立即释放的组分，其中多西 紫杉醇或其类似物在给药后基本上立即释放。或者，第一种组分可以 为，例如时间-延迟的立即释放组分，其中多西紫杉醇或其类似物在时 间延迟后基本上立即释放。第二种组分可以为，例如如刚刚所述的时 间-延迟的立即释放组分，或可替代选择地，时间-延迟的持续释放或 延长释放(extended release)组分，其中多西紫杉醇或其类似物以控 制方式在延长的时间期限内释放。
本领域技术人员将会理解血浆浓度曲线的准确性质会受到刚刚所 述的所有这些因素组合的影响。特别地，通过改变各种组分的成分和 包衣(如果存在)，可以控制每个组分中的多西紫杉醇或其类似物释放 (并因此开始产生作用)之间的滞后时间。因此通过改变各种组分的成 分(包括活性成分的量和性质)和通过改变滞后时间，可以获得大量的 释放和血浆曲线。取决于多西紫杉醇或其类似物从每个组分中释放之 间的滞后时间和从每个组分中释放的性质(即立即释放、持续释放等)， 血浆曲线的脉冲可以很好地分离并清楚地确定峰(例如当滞后时间较 长时)，或者脉冲可以一定程度地重叠(例如在当滞后时间较短时)。
在优选的实施方案中，根据本发明的多微粒改性释放组合物具有 立即释放组分和至少一种改性释放组分，此立即释放组分包含含有第 一数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子且改性释放组分包含含有第二 数量和随后数量的多西紫杉醇或其类似物的粒子。第二种和随后的改 性释放组分可以包含控制释放包衣。另外或可选择地，第二种和随后 的改性释放组分可以包含改性释放基质材料。实践中，例如具有单一 改性释放组分的此多微粒改性释放组合物的给药，导致多西紫杉醇或 其类似物特征性的脉冲血浆浓度水平，其中此组合物的立即释放组分 在血浆曲线中产生第一峰，而此改性释放组分在血浆曲线中产生第二 峰。包含多于一种改性释放组分的本发明实施方案在血浆曲线中产生 其它的峰。
当期望释放两个(或更多个)脉冲式的多西紫杉醇或其类似物而又 不需要服用两个(或更多个)剂量单位时，单次剂量单位给药所产生这 种血浆曲线是有利的。
肠溶包衣
可以使用以预期方式调整多西紫杉醇或其类似物释放的任何包衣 材料。特别地，适用于本发明实践的包衣材料包括但不限于：聚合物 包衣材料，例如邻苯二甲酸醋酸纤维素、三马来酸(trimaletate)醋酸 纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、 异丁烯酸铵共聚物(例如以商标Eudragit_RS和RL销售那些)、聚丙 烯酸和聚丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯共聚物(例如以商标Eudragit_S 和L销售的那些)、聚乙烯乙缩醛二乙氨基醋酸酯、琥珀酸醋酸羟丙基 甲基纤维素、虫胶；水凝胶和凝胶成型材料，例如羧基乙烯基聚合物、 海藻酸钠、羧甲纤维素钠、羧甲纤维素钙、羧甲基淀粉钠、聚乙烯醇、 羟乙基纤维素、甲基纤维素、明胶、淀粉、和纤维素基(cellulose based) 交联聚合物-其中交联度较低，以有助于吸咐水分和聚合物基质的膨 胀、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、交联淀粉、 微晶纤维素、壳多糖、氨基丙烯基-甲基丙烯酸酯共聚物(Eudragit_ RS-PM，Rohm&Haas)、支链淀粉(pullulan)、胶原、酪蛋白、琼脂、 阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠、(可膨胀亲水聚合物)聚(羟烷基甲基丙烯 酸酯)(分子量为约5k-5,000k)、聚乙烯吡咯酮(分子量为约10k-360 k)、阴离子和阳离子水凝胶、含有低醋酸残基(acetate residual)的 聚乙烯醇、琼脂和羧甲基纤维素的可膨胀混合物、马来酸酐和苯乙烯 的共聚物、乙烯或丙烯或异丁烯、果胶(分子量为约30k-300k)，多 糖例如琼脂、阿拉伯胶、卡拉牙胶、黄芪胶、藻酸铵(algins)和瓜耳 胶、聚丙烯酰胺、Polyox聚氧化乙烯(分子量为约100k-5,000k)、 AquaKeep丙烯酸酯聚合物、右旋糖酐二酯(diesters of polyglucan)、 交联聚乙烯醇和聚N-乙烯基-2-吡咯烷酮、淀粉甘醇酸(glucolate) 钠(例如Explotab_；Edward Mande 11C.Ltd.)；亲水聚合物例如多糖、 甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或钙、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维 素、羟乙基纤维素、硝基纤维素、羧甲基纤维素、纤维素醚、聚氧化 乙烯(例如Polyox_，Union Carbide)、甲基乙基纤维素、乙基羟基乙 基纤维素、醋酸纤维素、丁酸纤维素、丙酸纤维素、明胶、胶原、淀 粉、麦芽糖糊精、支链淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚醋酸乙 烯酯、甘油脂肪酸酯、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、甲基丙烯酸或甲基丙 烯酸的共聚物(例如Eudragit_，Rohm and Haas)、其它丙烯酸衍生物、 脱水山梨醇酯、天然树胶、卵磷脂、果胶、海藻酸盐、海藻酸铵、海 藻酸钠、海藻酸钙、海藻酸钾、丙二醇海藻酸酯、琼脂、和树胶例如 阿拉伯胶、卡拉牙胶、刺槐豆胶、黄芪胶、角叉菜胶、瓜耳胶、黄原 胶、硬葡聚糖和它们的混合物以及掺和物。本领域技术人员将会理解 包衣中可加入增塑剂、润滑剂、和溶剂等。适用的增塑剂包括例如乙 酰化单酸甘油酯；邻苯二甲酸(丁酯)(羟乙酸丁酯)酯(butyl phthalyl butyl glycolate)；酒石酸二丁基酯；邻苯二甲酸二乙酯；邻苯二甲 酸二甲酯；邻苯二甲酸(乙酯)(羟乙酸乙酯)酯；甘油；丙二醇；三乙 酸甘油酯；柠檬酸酯；三丙酸甘油酯(tripropioin)；二乙酸甘油酯； 邻苯二甲酸二丁酯； 乙酰基单酸甘油酯；聚乙二醇；蓖麻油；柠檬 酸三乙酯；多元醇、甘油、醋酸酯、甘油三醋酸酯、乙酰基柠檬酸三 乙酯、邻苯二甲酸二苄基酯、邻苯二甲酸二己酯、邻苯二甲酸丁基辛 基酯、邻苯二甲酸二异壬基酯、邻苯二甲酸丁基辛基酯、壬二酸二辛 酯、环氧化树脂酸酯(epoxidised tallate)、偏苯三酸三异辛酯、邻 苯二甲酸二乙基己基酯、邻苯二甲酸二正辛酯、邻苯二甲酸二异辛酯、 邻苯二甲酸二异癸基酯、邻苯二甲酸二正十一烷基酯、邻苯二甲酸二 正十三烷基酯、偏苯三酸三-2-乙基己基酯、己二酸二-2-乙基己基酯、 癸二酸二-2-乙基己基酯、壬二酸二-2-乙基己基酯、癸二酸二丁酯。
当改性释放组分含有改性释放基质材料时，可以使用任何适用的 改性释放基质材料或改性释放基质材料的适当组合。这些材料是本领 域技术人员已知的。本文所用的术语“改性释放基质材料”包括亲水 聚合物、疏水聚合物和它们的混合物，它们在体外或体内能够改变分 散其中的多西紫杉醇或其类似物的释放。适用于本发明实践的改性释 放基质材料包括但不限于微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羟基烷基纤 维素(例如羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素)、聚氧化乙烯、烷基纤 维素(例如甲基纤维素和乙基纤维素)、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、 醋酸纤维素、醋酸丁酸纤维素、邻苯二甲酸醋酸纤维素、偏苯三酸酸 醋酸纤维素、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚烷基甲基丙烯酸酯、聚醋 乙烯酯和它们的混合物。
本发明的多微粒改性释放组合物可被掺合形成易于活性成分以脉 冲方式释放的任何适宜剂型。一般地，剂型可以是不同数量的含多西 紫杉醇或其类似物粒子的混和物，其中该粒子被制成立即释放和改性 释放的组分，该混合物被装入适当的胶囊中，例如硬或软明胶胶囊。 可选择地，可以将不同个体数量的含有活性成分的粒子分别压制成(任 选地与另外的辅料一起)小片，随后可以以适当的比例将小片装入胶 囊。其它适用的剂型为多层片剂型。在这种情况中，可以将多微粒改 性释放组合物的第一种组分压制成一层，接着加入第二种组分压制成 该多层片的第二层。制备本发明组合物的一定数量的含多西紫杉醇或 其类似物粒子可进一步被包括在快速溶解剂型中，例如泡腾剂剂型或 速熔(fast-melt)剂型中。
在另一个实施方案中，本发明的组合物包含体外溶出曲线不同的 至少两种数量的含多西紫杉醇或其类似物粒子。
优选地，实践中，本发明组合物和含有本组合物的固体口服剂型 以下列方式释放多西紫杉醇或其类似物，即基本上使所有包含在第一 种组分中的多西紫杉醇或其类似物在第二种组分中的多西紫杉醇或其 类似物释放之前释放。例如当第一种组分含有IR组分时，多西紫杉醇 或其类似物从第二种组分中释放优选为延迟的，直到基本上所有的多 西紫杉醇或其类似物从IR组分中释放出来。通过使用改性释放包衣和 /或改性释放基质材料，可以如上所述延迟多西紫杉醇或其类似物从第 二种组分中的释放。
在一个实施方案中，当希望通过提供有助于第一剂量的多西紫杉 醇或其类似物从患者系统中清除的给药方案以使患者耐受性降到最低 时，多西紫杉醇或其类似物从第二种组分中的释放被延迟直到基本上 所有包含在第一种组分中的多西紫杉醇或其类似物被释放出来，并且 进一步被延迟直到至少一部分从第一种组分中释放出来的多西紫杉醇 或其类似物从患者系统中被清除。在具体的实施方案中，实践中多西 紫杉醇或其类似物从组合物第二种组分中的释放基本上(如果不是完 全地)被延迟组合物给药后至少约2小时的时间。
实践中药物从组合物第二种组分中的释放基本上(如果不是完全 地)被延迟组合物给药后至少约4小时，优选约4小时的时间。
E.制备纳米微粒多西紫杉醇组合物的方法
纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物可使用本领域已知的任 何适合的方法(例如碾磨法、匀化法、沉淀法、或超临界液体的粒子产 生技术)制得。美国专利5,145,684中描述了制备纳米微粒组合物的示 例方法。下列文献也描述了制备纳米微粒组合物的方法：美国专利 5,518,187“碾磨药用物质的方法”；美国专利5,718,388“碾磨药用 物质的连续方法”；美国专利5,862,999“碾磨药用物质的方法”； 美国专利5,665,331“纳米微粒药物与晶体成长调节剂的共微沉淀”； 美国专利5,662,883“纳米微粒药物与晶体成长调节剂的共微沉淀”； 美国专利5,560,932“纳米微粒药物的微量沉淀”；美国专利5,543,133 “制备包含纳米粒的X-射线造影组合物的方法”；美国专利5,534,270 “制备稳定药物纳米粒的方法”；美国专利5,510,118“制备包含纳米 粒的治疗组合物的方法”；和美国专利5,470,583“制备包含减少聚集 带电荷磷脂的纳米粒组合物方法”中，在此特别引入所有这些文献作 为参考。
所得纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的组合物或分散体可以应用 于固体、半固体、或液体剂型中，例如液体分散体、凝胶剂、气溶胶、 软膏、霜剂、控释制剂、快熔制剂、冻干制剂、片剂、胶囊、延迟释 放制剂、延长释放制剂、脉冲式释放制剂、立即释放和控制释放的混 合制剂等。
示例性的碾磨或匀化方法包括：(1)将多西紫杉醇或其类似物分散 在液体分散介质中；和(2)用机械将多西紫杉醇或其类似物的粒径减少 到小于约2000nm的有效平均粒径。在粒径减少之前、期间、或之后 加入表面稳定剂。在粒径减少过程中，液体分散介质的pH优选维持在 约5.0至约7.5的范围。优选地，用于粒径减少过程的分散介质为水 性的，虽然也可应用不溶解且分散多西紫杉醇或其类似物的任何介质。 非水性分散介质的实例包括但不限于红花油、乙醇、叔丁醇、甘油、 聚乙二醇(PEG)、己烷、或乙二醇。
为多西紫杉醇或其类似物粒径减少提供机械力的有效方法包括球 磨、介质碾磨和匀化法，例如用Microfluidizer_机器(Microfluidics Corp.)。球磨为使用碾磨介质、药物、稳定剂和液体的低能量碾磨方 法。将这些材料放入碾磨容器中，以最佳速度旋转，使介质通过撞击 分级并减少粒径。所用介质必须具有高密度，因为需要通过研磨介质 的重力和质量提供粒径减少的能量。
介质碾磨为高能量碾磨方法。将多西紫杉醇或其类似物、表面稳 定剂和液体放入储存容器中，然后在含有介质和旋转柄/叶轮的腔室内 反复循环。旋转的柄搅动介质，这使多西紫杉醇或其类似物和表面稳 定剂受到撞击和剪切力(sheer forces)，从而减少它们的粒径。
匀化为不使用碾磨介质的技术。将多西紫杉醇或其类似物、表面 稳定剂和液体(或者多西紫杉醇或其类似物和液体，在粒径减少后加入 表面稳定剂)流射入处理区域，该区域在Microfluidizer_机器中称 为相互作用室(Interaction Chamber)。将要处理的产物引入泵内，然 后压出。Microfluidizerò机器的初始阀将空气排出泵内。一旦泵内充 满了产物，关闭初始阀，该产物被加压通过相互作用室。几何形状的 相互作用室产生强大的剪切、撞击和窝旋力，这些力使多西紫杉醇或 其类似物的粒径减少。特别地，在相互作用室里面，加压的产物被分 离成两股川流并且被加速到非常高的速度。然后将所形成的射流在相 互作用区域彼此相对并碰撞。所得的产物具有极细的和均匀的粒径或 液滴尺寸。Microfluidizer_机器也提供热交换器以冷却产物。Bosch 等的美国专利5,510,118涉及施用Microfluidizer_产生400nm以下 粒子的方法，在此将其特别引入作为参考。
Pace等的1997年4月24日出版公布的国际专利申请WO 97/144407公开了具有平均100nm至300nm大小的不溶水性生物学 活性化合物的粒子，其制备方法包括将化合物溶解在溶液中，然后在 适当表面稳定剂存在下将此溶液喷射到压缩气体、液体或超临界液体 中。
应用粒径减少的方法，将多西紫杉醇或其类似物的粒径减少到小 于约2000nm的有效平均粒径。
可以向液体介质中加入多西紫杉醇或其类似物以形成预混物，多 西紫杉醇或其类似物基本上是不溶解。在液体介质中多西紫杉醇或其 类似物的浓度可为约5至约60％、约15至约50％(w/v)、或约20至约 40％。在预混物中可存在表面稳定剂，或可在粒径减少后接着向多西紫 杉醇或其类似物分散体中加入表面稳定剂。表面稳定剂的浓度按重量 计可为约0.1至约50％、约0.5至约20％、或约1至约10％。
此预混物可直接应用于机械手段，以使分散体中多西紫杉醇或其 类似物的平均粒径减至小于约2000nm。当用球磨机磨擦时，优选直 接应用预混物。选择地，可应用适当的搅拌(例如Cowles型混合机) 使多西紫杉醇或其类似物和表面稳定剂分散在液体介质中，直至观察 到其中没有裸眼可见的大块粒的均质分散体形成。当用反复循环介质 碾磨机磨擦时，优选预混物进行预碾磨分散的步骤。
用于减少多西紫杉醇或其类似物粒径的机械方法可方便地采用分 散碾磨的形式。适用的分散碾磨包括球碾磨、磨碎机(attritor)碾磨、 振动碾磨和介质碾磨(例如沙碾磨和珠碾磨)。由于提供所需粒径减少 需要相对较短的碾磨时间，优选介质碾磨。对于介质碾磨，预混物表 观粘度优选为约100至约1,000厘泊，对于球磨，预混物表观粘度优 选为约1至约100厘泊。这样的范围趋于提供有效粒径减少和介质浸 蚀之间的最佳平衡。
磨擦时间可广泛地变化并且主要取决于所选的特定机械方法和处 理条件。对于球碾磨，可能需要高达5天或更长的处理时间。替代选 择性地，应用高剪切介质碾磨的处理时间可能小于1天(一分钟直至几 小时的滞留时间(residence times))。
多西紫杉醇或其类似物的粒子可以在不会使它显著降解的温度下 减少其尺寸。通常优选地，处理温度小于约30℃至小于约40℃。如果 需要，可使用常规冷却装置冷却处理装置。控制温度(例如，通过在冰 水中将碾磨室加外套或将碾磨室浸入冰水中)是需要考虑的。一般地， 本发明的方法可方便地在对于碾磨处理是安全有效的环境温度和处理 压力的条件下进行。环境处理压力为球磨、磨碎碾磨和振动碾磨的一 般压力。
碾磨介质
用于粒径减少步骤的碾磨介质可选自刚性介质，优选为具有平均 尺寸小于约3mm、更优选小于约1mm的球形或微粒形式。这样的介 质预期能提供对本发明粒子更短的处理时间和对碾磨装置产生更少的 磨损。据信碾磨介质材料的选择不是关键性的。氧化锆例如用镁稳定 的95％ZrO、硅酸锆、陶瓷、不锈钢、钛、铝、用钇稳定的95％ZrO、 和玻璃碾磨介质为示例性的碾磨材料。
碾磨介质可包含基本上由聚合树脂组成的粒子，优选基本上为球 形(例如珠)粒子。可选择地，碾磨介质可包含具有聚合树脂涂层粘附 其上的核心。在本发明的一个实施方案中，聚合树脂可具有约0.8至 约3.0g/cm3的密度。
一般而言，适用的聚合树脂为化学和物理惰性的，基本上不含金 属、溶剂和单体的，并且有足够硬度和脆性，能使本身在研磨中避免 碎裂或压碎。适用的聚合树脂包括交联的聚苯乙烯，例如与二乙烯基 苯交联的聚苯乙烯；苯乙烯共聚物；聚碳酸酯；聚缩醛，例如 Delrinò(E.I.du Pont de Nemours and Co.)；氯乙烯聚合物和共聚 物；聚氨基甲酸酯(polyurethanes)；聚酰胺；聚(四氟乙烯)，例如 Teflonò(E.I.du Pont de Nemours and Co.)，和其它氟聚合物；高 密度聚乙烯；聚丙烯；纤维素醚和酯(例如醋酸纤维素)；聚羟基甲 基丙烯酸酯；聚羟基乙基丙烯酸酯；和含硅酮聚合物(例如聚硅氧烷) 等。聚合物可以是生物可降解的。示例性生物可降解聚合物包括丙交 酯和乙交酯的聚(丙交酯)、聚(乙交酯)共聚物，聚酐，聚(羟乙基甲基 丙烯酸酯)、聚(亚胺基碳酸酯)，聚(N-酰基羟基脯氨酸)酯，聚(N-棕 榈酰羟基脯氨酸)酯，乙烯-醋酸乙烯酯共聚物，聚(原酸酯)，聚(己内 酯)和聚(磷腈)。对于生物可降解聚合物，接触的介质本身可在体内有 利地代谢为生物学上可接受的产物，此产物可被机体清除。
碾磨介质优选在约0.01至约3mm的尺寸范围内。对于精细碾磨， 碾磨介质优选在约0.02至约2mm，更优选在约0.03至约1mm的尺 寸。
在优选的研磨方法中，连续地制备多西紫杉醇或其类似物粒子。 该方法包括将多西紫杉醇或其类似物连续地引入碾磨室中，使室内的 多西紫杉醇或其类似物与碾磨介质接触以减少粒径，和连续地从碾磨 室中移出纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的活性形式。
应用常规分离技术在后续方法(例如通过单纯滤过，通过筛过滤 器或滤网筛过等等)中，将碾磨介质从碾磨过的纳米微粒多西紫杉醇或 其类似物中分离出去。也可以应用其它的分离技术(例如离心分离法)。
无菌产品的制备
可注射的组合物的研制要求生产无菌产品。本发明的制备方法类 似于已知的无菌混悬剂的一般制备方法。无菌混悬剂的一般制备方法 流程图如下：
正如括弧中的任选步骤所示，一些处理过程取决于粒径减少的方 法和/或灭菌方法。例如，不应用介质的碾磨方法不需要介质调配的步 骤。如果由于化学和/或物理不稳定性使终末灭菌不可行的，可应用无 菌操作。
F.治疗方法
在人类治疗中，提供体内释放治疗需要量的药物并以恒定方式使 药物成为生物可利用的多西紫杉醇或其类似物的剂型是重要的。因此， 本发明的另一个方面是提供治疗需要抗癌治疗(包括抗肿瘤和抗白血 病治疗)的哺乳动物(包括人)的方法，包括给所述哺乳动物施用本发明 的纳米微粒多西紫杉醇或其类似物的制剂。
可用本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组合物治疗的示例 性癌症包括但不限于乳腺癌、肺癌(包括但不限于非小细胞肺癌)、卵 巢癌、前列腺、实体瘤(包括但不限于头颈、乳房、肺、胃肠、泌尿生 殖器、黑素瘤和肉瘤)、原发性CNS赘生物、多发性骨髓瘤、非何杰金 氏淋巴瘤、间变型星形细胞瘤(anaplastic astrocytoma)、间变性脑 膜瘤(anaplastic meningioma)、间变型少枝胶质细胞瘤(anaplastic oligodendroglioma)、脑恶性血管外皮细胞瘤、下咽部鳞状细胞癌、 喉鳞状细胞癌、白血病、唇和口腔鳞状细胞癌、鼻咽鳞状细胞癌、口 咽鳞状细胞癌、宫颈癌和胰腺癌。
在本发明的一个实施方案中，本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其 类似物组合物的有效剂量小于相当的非纳米微粒的多西紫杉醇制剂 (例如TAXOTERE_)所要求的量。TAXOTERE_(多西紫杉醇)的给药方案 可随着它治疗的癌症类型而改变，它可供用的为20mg(0.5mL)和80 mg(2.0mL)小瓶。对于乳腺癌，推荐的剂量为每三周经1小时静脉内 给予60-100mg/m2。在非小细胞肺癌情形下，TAXOTERE_只应用于先前 基于铂的化疗失败以后。推荐剂量为每三周经1小时静脉内给予75 mg/m2。因此，在本发明的一个实施方案中，本发明纳米微粒的多西紫 杉醇或其类似物组合物的剂量小于约100mg/m2、小于约90mg/m2、小于 约80mg/m2、小于约70mg/m2、小于约60mg/m2、小于约50mg/m2、小于 约40mg/m2、小于约30mg/m2、小于约20mg/m2或小于约10mg/m2。
在本发明的又一个实施方案中，当与相当的非纳米微粒的多西紫 杉醇制剂(例如TAXOTERE_)相比时，本发明纳米微粒的多西紫杉醇或 其类似物组合物可以以显著更高的剂量给予。如下实施例16中所述， 示例性纳米微粒的多西紫杉醇制剂在体内显示的最大耐受剂量为500 mg/kg，而对照的TAXOTERE_最大耐受剂量为40mg/kg。因此，在本发 明的另一个实施方案中，本发明纳米微粒的多西紫杉醇或其类似物组 合物的剂量大于约50mg/m2、大于约60mg/m2、大于约70mg/m2、大于 约80mg/m2、大于约90mg/m2、大于约100mg/m2、大于约110mg/m2、大 于约120mg/m2、大于约130mg/m2、大于约140mg/m2、大于约150mg/m2、 大于约160mg/m2、大于约170mg/m2、大于约180mg/m2、大于约190mg/m2、 大于约200mg/m2、大于约210mg/m2、大于约220mg/m2、大于约230mg/m2、 大于约240mg/m2、大于约250mg/m2、大于约260mg/m2、大于约270mg/m2、 大于约280mg/m2、大于约290mg/m2、大于约300mg/m2、大于约310mg/m2、 大于约320mg/m2、大于约330mg/m2、大于约340mg/m2或大于约 350mg/m2。
本发明特别有利的特征包括本发明药物制剂在给药时表现出出乎 意料地活性成分的快速吸收。在本发明的一个实施方案中，纳米微粒 的多西紫杉醇或其类似物组合物(包括可注射的组合物)不含聚山梨醇 酯、乙醇或它们的组合。另外，当制成注射制剂时，本发明组合物可 提供用于注射的小容量高浓度制剂。可以以快速浓注(bolus injection)或经适当的时间缓慢静滴给予本发明的多西紫杉醇或其类 似物的注射组合物。
普通技术人员将会理解可以根据经验确定多西紫杉醇或其类似物 的有效量，并且可应用其纯净形式，或当存在下述形式时，可应用药 学上可接受的盐、酯或前体药物形式。在本发明注射和口服组合物中 多西紫杉醇或其类似物的实际剂量水平可以变化，以获得多西紫杉醇 或其类似物的量，此量为特定组合物和给药方法能有效获得预期治疗 反应的量。因此所选的剂量水平取决于所要的治疗效果、给药途径、 所给予的多西紫杉醇或其类似物的效能、所需的治疗持续时间和其它 因素。
单元剂量的组合物可含有多个小剂量，以构成日剂量。但是，应 当理解到任何特定的患者的具体剂量水平依赖于多种因素：要获得的 细胞或生理学的反应的类型和程度；所用特定药物或组合物的活性；所 用特定药物或组合物；患者的年龄、体重、总体健康、性别和饮食； 给药时间、给药途径和药物的排泄率；治疗持续时间；与该特定药物组 合或同时应用的药物；以及医学领域众所周知的类似因素。
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下面给出的实施例用于举例说明本发明。然而，应当理解本发明 的精神和范围不受这些实施例中所述的具体条件或细节的限制，而只 应受到所附权利要求范围的限制。本文所指定的所有参考文献(包括美 国专利)均在此明确地引入作为参考。
具体实施方式
实施例1.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
图1显示未碾磨的多西紫杉醇(无水的)(Camida Ltd.)的光显微照 片，显示出常规的非纳米微粒多西紫杉醇(无水的)的平均粒径为 212,060nm，D50为175,530nm和D90为435,810nm。
将5％(w/w)的多西紫杉醇(Camida Ltd.)的水分散系与1.25％(w/w) 聚乙烯吡咯酮(PVP)K17和0.25％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后向 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA；参见美国专利6,431,478)中加入该混合物，随同加入220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)。将该混合物在 2500转/分的速度碾磨180分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为170nm，D50为145nm和D90为260nm。图2显示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为170nm。
实施例2.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)Tween_ 80和0.1％(w/w)卵磷脂合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔 室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在5500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为166nm，D50为147nm和D90为242nm。图3显示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为166nm。
实施例3.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)聚乙烯 吡咯酮(PVP)K12、0.25％(w/w)去氧胆酸钠(w/w)和20％(w/w)葡萄 糖合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems， King of Prussia，PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在5500 转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为165nm，D50为142nm和D90为248nm。图4显示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为165nm。
实施例4.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将1％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与0.25％(w/w) Plasdone_S630和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。然后 使用低能量滚筒式碾磨机(U.S.Stoneware，Mahwah，NJ)在15mL瓶 中，随同0.5mm陶瓷介质(Tosoh，Ceramics Division)(50％介质负 荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在130转/分的速度碾磨72小时。
碾磨后，接着使用Coulter N4M粒径分析器，在去离子蒸馏水中 测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的平 均粒径为209nm。图5显示碾磨过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为209nm。
实施例5.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将1％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与0.25％(w/w)羟丙 基甲基纤维素(HPMC)和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。 然后使用低能量滚筒式碾磨机(U.S.S toneware，Mahwah，NJ)在15mL 玻璃瓶中，随同0.5mm陶瓷介质(Tosoh，Ceramics Division)(50％ 介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在130转/分的速度碾磨 72小时。
碾磨后，接着使用Coulter N4M粒径分析器，在去离子蒸馏水中 测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的平 均粒径为253nm。图6显示碾磨过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为253nm。
实施例6.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将1％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与0.25％(w/w) Pluronic_F127合并。然后使用低能量滚筒式碾磨机(U.S.Stoneware， Mahwah，NJ)在15mL玻璃瓶中，随同0.5mm陶瓷介质(Tosoh， Ceramics Division)(50％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物 在130转/分的速度碾磨72小时。
使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水中测量碾磨过 的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的平均粒径为 56.42微米，D50为65.55微米，和D90为118.5微米。因为碾磨样品 的较大粒径，将样品超声处理30秒以确定是否存在聚集的多西紫杉醇 粒子。超声处理30秒后，碾磨过的多西紫杉醇粒子的平均粒径为1.468 微米，D50为330nm微米，和D90为5.18微米。图7展示碾磨过的 多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明使用特定浓度的药物和Pluronic_F127表面稳定剂 时，不能成功地使无水的多西紫杉醇稳定。
实施例7.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
图8展示未碾磨的多西紫杉醇三水合物的光显微照片。未碾磨的 多西紫杉醇三水合物具有平均粒径为61,610nm，D50为51,060nm和 D90为119,690nm。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)的水分散系与 1.25％(w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K12和0.25％(w/w)去氧胆酸钠合并。 然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA；参见美国专利6,431,478)中，随同220微米PolyMill_ 研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混 合物在2500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为152nm，D50为141nm和D90为202nm。图9展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为152nm。
实施例8.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w)聚 乙烯吡咯酮(PVP)K17、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w)葡萄糖 合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2900 转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为113nm，D50为109nm和D90为164nm。图10展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为164nm。
实施例9.
本实施例的目的是为了测定实施例8中制备的纳米微粒的多西紫 杉醇三水合物制剂的长期稳定性。
实施例8中制备的纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制剂含有5％ (w/w)的多西紫杉醇三水合物、1.25％(w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K17、 0.25％(w/w)去氧胆酸钠、和20％(w/w)葡萄糖，将该制剂冷藏(＜15℃)6 个月。
6个月的贮藏期后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去 离子蒸馏水中测量多西紫杉醇粒子的粒径。多西紫杉醇粒子的平均粒 径为147nm，D50为136nm和D90为205nm。图11展示6个月的冷 藏后多西紫杉醇组合物的光显微照片。
此结果表明纳米微粒多西紫杉醇组合物可以在延长的时期内储藏， 而没有显著的粒径增长。
实施例10.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w) Tween_80、0.1％(w/w)卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖合并。然后在 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质 负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2900转/分的速度碾磨75 分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为144nm，D50为137nm和D90为193nm。图12展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为144nm。
实施例11.
本实施例的目的是为了测试实施例10中制备的纳米微粒的多西 紫杉醇三水合物制剂的长期稳定性。
实施例10中制备的纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制剂含有5％ (w/w)的多西紫杉醇三水合物、1.25％(w/w)Tween_80、0.1％(w/w) 卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖，将该制剂冷藏(＜15℃)6个月。
6个月的贮藏期后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去 离子蒸馏水中测量多西紫杉醇粒子的粒径。多西紫杉醇粒子的平均粒 径为721nm，D50为371nm和D90为1.76微米。图13展示6个月的 冷藏后多西紫杉醇组合物的光显微照片。
此结果表明纳米微粒多西紫杉醇组合物可以在延长的时期内储藏， 而仍然维持有效平均粒径小于2微米。
实施例12.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w) TPGS(PEG化的维生素E)和0.1％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后在 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质 负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨120 分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为134nm，D50为129nm和D90为179nm。图14展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为134nm。
实施例13.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w) Pluronic_F 108、0.1％(w/w)去氧胆酸钠和10％(w/w)葡萄糖(w/w) 合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2500 转/分的速度碾磨120分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为632nm，D50为172nm和D90为601nm。图15展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为632nm。
实施例14.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)Plasdone_ S630和0.05％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。然后在 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质 负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨60 分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为142nm，D50为97.8nm和D90为142nm。图16展示碾 磨过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为142nm。
实施例15.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)HPMC和0.05％ (w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。然后在NanoMill_0.01的10ml 腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为157nm，D50为142nm和D90为207nm。图17展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为157nm。
实施例16.
本实施例的目的是为了测定纳米微粒的多西紫杉醇制剂的最大耐 受剂量
为了评价和描述纳米微粒的多西紫杉醇制剂急性毒性，应用了两 种纳米微粒分散体。(1)多西紫杉醇纳米微粒分散体，其具有作为表 面稳定剂的PVP和去氧胆酸钠(实施例8中所制备的)；和(2)多西紫杉 醇纳米微粒分散体，其具有作为表面稳定剂的Tween_80和卵磷脂(实 施例10中所制备的)。
以各种剂量给小鼠静脉内施用这两种纳米微粒的多西紫杉醇制 剂。这两种纳米微粒的多西紫杉醇制剂最大耐受剂量(MD)是500 mg/kg。
还将市售非纳米微粒的多西紫杉醇产品，TAXOTERE_与纳米微粒的 多西紫杉醇制剂进行评行测试。TAXOTERE_的MD是40mg/kg。
因此，多西紫杉醇的纳米微粒制剂具有很好耐受性，能够以比常 规非纳米微粒多西紫杉醇制剂显著更高的剂量施用。
实施例17.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与1％(w/w)白蛋白和 0.5％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室 (NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨5.5小时。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为271nm，D90为480nm。图18展示碾磨过的多西紫杉醇的 光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为271nm。
实施例18.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1％(w/w)白蛋白 和0.5％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔 室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为174nm，D90为252nm。图19展示碾磨过的多西紫杉醇 的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为174nm。
本领域技术人员将会明白在不违背本发明实质或范围内，可对本 发明的方法和组合物进行多种修改和变更。因此，如果对本发明的这 些修改和变更落在所附权利要求书及其等同物的范围内，本发明也旨 在涵盖这些修改和变更。
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
图1显示未碾磨的多西紫杉醇(无水的)(Camida Ltd.)的光显微照 片，显示出常规的非纳米微粒多西紫杉醇(无水的)的平均粒径为 212,060nm，D50为175,530nm和D90为435,810nm。
将5％(w/w)的多西紫杉醇(Camida Ltd.)的水分散系与1.25％(w/w) 聚乙烯吡咯酮(PVP)K17和0.25％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后向 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA；参见美国专利6,431,478)中加入该混合物，随同加入220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)。将该混合物在 2500转/分的速度碾磨180分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为170nm，D50为145nm和D90为260nm。图2显示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为170nm。
实施例2.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)Tween_ 80和0.1％(w/w)卵磷脂合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔 室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在5500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为166nm，D50为147nm和D90为242nm。图3显示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为166nm。
实施例3.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)聚乙烯 吡咯酮(PVP)K12、0.25％(w/w)去氧胆酸钠(w/w)和20％(w/w)葡萄 糖合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems， King of Prussia，PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在5500 转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为165nm，D50为142nm和D90为248nm。图4显示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为165nm。
实施例4.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将1％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与0.25％(w/w) Plasdone_S630和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。然后 使用低能量滚筒式碾磨机(U.S.Stoneware，Mahwah，NJ)在15mL瓶 中，随同0.5mm陶瓷介质(Tosoh，Ceramics Division)(50％介质负 荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在130转/分的速度碾磨72小时。
碾磨后，接着使用Coulter N4M粒径分析器，在去离子蒸馏水中 测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的平 均粒径为209nm。图5显示碾磨过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为209nm。
实施例5.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将1％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与0.25％(w/w)羟丙 基甲基纤维素(HPMC)和0.01％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。 然后使用低能量滚筒式碾磨机(U.S.S toneware，Mahwah，NJ)在15mL 玻璃瓶中，随同0.5mm陶瓷介质(Tosoh，Ceramics Division)(50％ 介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在130转/分的速度碾磨 72小时。
碾磨后，接着使用Coulter N4M粒径分析器，在去离子蒸馏水中 测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的平 均粒径为253nm。图6显示碾磨过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为253nm。
实施例6.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的无水的多西紫杉醇制剂。
将1％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与0.25％(w/w) Pluronic_F127合并。然后使用低能量滚筒式碾磨机(U.S.Stoneware， Mahwah，NJ)在15mL玻璃瓶中，随同0.5mm陶瓷介质(Tosoh， Ceramics Division)(50％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物 在130转/分的速度碾磨72小时。
使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水中测量碾磨过 的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的平均粒径为 56.42微米，D50为65.55微米，和D90为118.5微米。因为碾磨样品 的较大粒径，将样品超声处理30秒以确定是否存在聚集的多西紫杉醇 粒子。超声处理30秒后，碾磨过的多西紫杉醇粒子的平均粒径为1.468 微米，D50为330nm微米，和D90为5.18微米。图7展示碾磨过的 多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明使用特定浓度的药物和Pluronic_F127表面稳定剂 时，不能成功地使无水的多西紫杉醇稳定。
实施例7.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
图8展示未碾磨的多西紫杉醇三水合物的光显微照片。未碾磨的 多西紫杉醇三水合物具有平均粒径为61,610nm，D50为51,060nm和 D90为119,690nm。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物(Camida Ltd.)的水分散系与 1.25％(w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K12和0.25％(w/w)去氧胆酸钠合并。 然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA；参见美国专利6,431,478)中，随同220微米PolyMill_ 研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混 合物在2500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为152nm，D50为141nm和D90为202nm。图9展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为152nm。
实施例8.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w)聚 乙烯吡咯酮(PVP)K17、0.25％(w/w)去氧胆酸钠和20％(w/w)葡萄糖 合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2900 转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为113nm，D50为109nm和D90为164nm。图10展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为164nm。
实施例9.
本实施例的目的是为了测定实施例8中制备的纳米微粒的多西紫 杉醇三水合物制剂的长期稳定性。
实施例8中制备的纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制剂含有5％ (w/w)的多西紫杉醇三水合物、1.25％(w/w)聚乙烯吡咯酮(PVP)K17、 0.25％(w/w)去氧胆酸钠、和20％(w/w)葡萄糖，将该制剂冷藏(＜15℃)6 个月。
6个月的贮藏期后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去 离子蒸馏水中测量多西紫杉醇粒子的粒径。多西紫杉醇粒子的平均粒 径为147nm，D50为136nm和D90为205nm。图11展示6个月的冷 藏后多西紫杉醇组合物的光显微照片。
此结果表明纳米微粒多西紫杉醇组合物可以在延长的时期内储藏， 而没有显著的粒径增长。
实施例10.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w) Tween_80、0.1％(w/w)卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖合并。然后在 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质 负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2900转/分的速度碾磨75 分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为144nm，D50为137nm和D90为193nm。图12展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为144nm。
实施例11.
本实施例的目的是为了测试实施例10中制备的纳米微粒的多西 紫杉醇三水合物制剂的长期稳定性。
实施例10中制备的纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制剂含有5％ (w/w)的多西紫杉醇三水合物、1.25％(w/w)Tween_80、0.1％(w/w) 卵磷脂和20％(w/w)葡萄糖，将该制剂冷藏(＜15℃)6个月。
6个月的贮藏期后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去 离子蒸馏水中测量多西紫杉醇粒子的粒径。多西紫杉醇粒子的平均粒 径为721nm，D50为371nm和D90为1.76微米。图13展示6个月的 冷藏后多西紫杉醇组合物的光显微照片。
此结果表明纳米微粒多西紫杉醇组合物可以在延长的时期内储藏， 而仍然维持有效平均粒径小于2微米。
实施例12.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w) TPGS(PEG化的维生素E)和0.1％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后在 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质 负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨120 分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为134nm，D50为129nm和D90为179nm。图14展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为134nm。
实施例13.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇三水合物制 剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1.25％(w/w) Pluronic_F 108、0.1％(w/w)去氧胆酸钠和10％(w/w)葡萄糖(w/w) 合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2500 转/分的速度碾磨120分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为632nm，D50为172nm和D90为601nm。图15展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为632nm。
实施例14.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)Plasdone_ S630和0.05％(w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。然后在 NanoMill_0.01的10ml腔室(NanoMill Systems，King of Prussia， PA)中，随同220微米PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质 负荷率)一起碾磨该混合物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨60 分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为142nm，D50为97.8nm和D90为142nm。图16展示碾 磨过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为142nm。
实施例15.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇的水分散系与1.25％(w/w)HPMC和0.05％ (w/w)磺基琥珀酸二辛酯(DOSS)合并。然后在NanoMill_0.01的10ml 腔室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为157nm，D50为142nm和D90为207nm。图17展示碾磨 过的多西紫杉醇的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为157nm。
实施例16.
本实施例的目的是为了测定纳米微粒的多西紫杉醇制剂的最大耐 受剂量
为了评价和描述纳米微粒的多西紫杉醇制剂急性毒性，应用了两 种纳米微粒分散体。(1)多西紫杉醇纳米微粒分散体，其具有作为表 面稳定剂的PVP和去氧胆酸钠(实施例8中所制备的)；和(2)多西紫杉 醇纳米微粒分散体，其具有作为表面稳定剂的Tween_80和卵磷脂(实 施例10中所制备的)。
以各种剂量给小鼠静脉内施用这两种纳米微粒的多西紫杉醇制 剂。这两种纳米微粒的多西紫杉醇制剂最大耐受剂量(MD)是500 mg/kg。
还将市售非纳米微粒的多西紫杉醇产品，TAXOTERE_与纳米微粒的 多西紫杉醇制剂进行评行测试。TAXOTERE_的MD是40mg/kg。
因此，多西紫杉醇的纳米微粒制剂具有很好耐受性，能够以比常 规非纳米微粒多西紫杉醇制剂显著更高的剂量施用。
实施例17.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的无水多西紫杉醇的水分散系与1％(w/w)白蛋白和 0.5％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔室 (NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨5.5小时。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为271nm，D90为480nm。图18展示碾磨过的多西紫杉醇的 光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为271nm。
实施例18.
本实施例的目的是为了制备纳米微粒的多西紫杉醇制剂。
将5％(w/w)的多西紫杉醇三水合物的水分散系与1％(w/w)白蛋白 和0.5％(w/w)去氧胆酸钠合并。然后在NanoMill_0.01的10ml腔 室(NanoMill Systems，King of Prussia，PA)中，随同220微米 PolyMill_研磨介质(Dow Chemical)(89％介质负荷率)一起碾磨该混合 物。将该混合物在2500转/分的速度碾磨60分钟。
碾磨后，接着使用Horiba LA 910粒径分析器，在去离子蒸馏水 中测量碾磨过的多西紫杉醇粒子的粒径。碾磨过的多西紫杉醇粒子的 平均粒径为174nm，D90为252nm。图19展示碾磨过的多西紫杉醇 的光显微照片。
此结果表明成功制备了稳定的纳米微粒多西紫杉醇制剂，所得平 均粒径为174nm。
本领域技术人员将会明白在不违背本发明实质或范围内，可对本 发明的方法和组合物进行多种修改和变更。因此，如果对本发明的这 些修改和变更落在所附权利要求书及其等同物的范围内，本发明也旨 在涵盖这些修改和变更。
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