白介素－8受体的拮抗剂5－氰基－1H－吲哚的新型衍生物
阅读：315发布：2023-02-23
专利汇可以提供白介素－8受体的拮抗剂5－氰基－1H－吲哚的新型衍生物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及如式(I)表示的5－氰基－1H－吲哚的衍 生物 及其可药用盐、 溶剂 化物和 水 合物，其中R1、R2、X和n的定义与 权利要求 1相同。本发明还涉及含有该类物质的药物组合物，并涉及该类物质在制药方面的用途，该药物可用于与白介素－8的CXCR2受体的活化及与其同族的趋化因子的活化有关的 疾病 的 预防 和 治疗 。，下面是白介素－8受体的拮抗剂5－氰基－1H－吲哚的新型衍生物专利的具体信息内容。
1.如式(I)表示的化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物：
其中：
-X代表双键-C＝C-或硫原子；
-R1和R2彼此独立地代表氢原子、卤素原子或C1-C3烷基、C1-C3烷氧 基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基；
-n等于2或3。
2.如权利要求1所述的化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物， 所述化合物如式(Ia)所示：
其中R1、R2和n的定义与权利要求1中的(I)相同。
3.如权利要求2所述的化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物， 所述化合物如式(Ib)所示：
其中R1、R2和n的定义与权利要求1中的(I)相同。
4.如权利要求1至3中任一项所述的化合物，其特征在于R1和 R2均独立地代表氢原子、氯原子或氟原子或C1-C2烷基、甲氧基、三氟甲 基、三氟甲氧基、氰基或硝基。
5.如权利要求4所述的化合物，其特征在于R1和R2均独立地代 表氢原子、氯原子或氟原子或甲基。
6.如权利要求1至5中任一项所述的化合物，其特征在于n等于 3。
7.如权利要求1至6中任一项所述的化合物，其特征在于R1代 表氯原子或氟原子。
8.如式(II)表示的酯：
其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
9.用作药物的如权利要求1至7中任一项所述的化合物。
10.包含权利要求1至7中任一项所述的化合物及可药用介质、载 体或赋形剂的药物组合物。
11.如权利要求1至7中任一项所述的化合物在制备预防或治疗疾 病的药物中的应用，所述的疾病与白介素的CXCR2受体的活化及与其同 族的趋化因子的活化有关。
12.如权利要求11所述的在制备预防或治疗疾病的药物中的应用， 所述的疾病有特应性皮炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、慢性肺 阻塞、急性呼吸道疾病综合征、结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、 中风发作、心肌梗塞、感染性休克、多发性硬化、内毒素休克、银屑病、 与革兰氏阴性细菌有关的败血病、中毒休克综合征、心脏、肺或肾的局 部缺血和再灌注现象、肾小球性肾炎、血栓形成、移植物与移植接受体 的反应、阿尔茨海默氏病、同种异体移植的排斥、疟疾、再狭窄、血管 生成、动脉粥样硬化症、骨质疏松症、龈炎、骨髓干细胞的非生理性释 放、由呼吸道病毒、疱疹病毒和肝病毒引起的疾病。
技术领域
本发明涉及5-氰基-1H-吲哚的新型衍生物和含所述衍生物的药物组 合物，以及它们在制药方面的用途，所述的药物用于治疗与白介素-8受 体有关的疾病。
背景技术
IL-8(白介素-8)是由72个氨基酸组成的蛋白质，其属于能吸引白细胞 的蛋白质超家族，所述的蛋白质超家族也被称为C-X-C或C-C细胞因子、 intercrine细胞因子，近来又被称为趋化因子(Oppenheim等，Annu.Rev Immunol.(免疫学年鉴)，1991.9，617-648页)。白介素-8拥有多种名称， 例如NAP-1(“嗜中性白细胞活化肽-1”、NAF(“嗜中性白细胞活化因子”) 和“T淋巴细胞趋化因子”。人们认为趋化因子家族的许多成员与炎性过 程和白细胞迁移有关。趋化因子家族是由两个截然不同的亚家族组成：α- 趋化因子和β-趋化因子。α-趋化因子例如IL-8、NAP-2(“嗜中性白细胞活 化肽-2”)、MGSA/Gro或Gro-α(“黑素瘤生长刺激活性”)和ENA-78(“上 皮细胞衍生的嗜中性白细胞活化蛋白78”)的作用全在于吸引和活化白细 胞，特别是中性白细胞。所述的亚家族还包括本身不对中性白细胞产生 作用的PF-4(“血小板因子-4”)、β-血栓球蛋白和CTAPIII(“结缔组织活化 蛋白III”)。
最初是通过IL-8吸引和活化多形核白细胞(中性白细胞)的能力来对 IL-8进行鉴别。最近已经证实，受促炎细胞因子例如α-或β-IL-1、TNF α(“肿瘤坏死因子”)或其他促炎剂例如LPS(“脂多糖”)的影响，在多种组织 或细胞例如巨噬细胞、成纤维细胞、内皮和上皮细胞甚至中性白细胞中， 可迅速地诱导IL-8的表达(Van Damme J.，Interleukin-8 and related chemotactic cytokines(白介素-8和相关的趋化细胞因子)；1994；The Cytokines Handbook(细胞因子手册)，第二版，A.W.Thomson编，Academic Press(学术出版社)，伦敦，185-208页)。此外，所述文献中的某些数据还 证实，与中性白细胞有关的某些炎症中存在着高系统性水平的IL-8，这 表明IL-8及与其同族的其他趋化因子可能是中性白细胞活化过程中的基 本介体((Van Damme，Interleukin-8 and related chemotactic cytokines；1994； The Cytokines Handbook，第三版，A.W.Thomson编，Academic Press，伦 敦，271-311页)。
Gro-α、Gro-β、Gro-γ和NAP-2均属于趋化因子家族，与IL-8一样， 这些蛋白质也有多种名称。也即，Gro-α、β和γ分别被称为MGSA(“黑 素瘤生长刺激活性”)a、b和g(Richmond和Thomas，J.Cell Physiol.(细胞 生理学杂志)，1986，129，375-384；Cheng等，J.Immunol.(免疫学杂志)，1992， 148，451-456)。这些趋化因子均属于以CXC单元为特征，并具有ELR(天 冬氨酸-亮氨酸-精氨酸)单元的α-趋化因子组。这些趋化因子均与2型受 体即CXCR2结合。
已对两种IL-8受体进行过表征和克隆，所述的IL-8受体属于具有7 个跨膜区域的G蛋白偶联受体家族：以高亲和力与IL-8和GCP-2“粒细 胞趋化吸引剂蛋白质2”结合的A型IL-8受体(IL-8RA)即CXCR1；和以 IL-8、GCP-2、Gro-α、Gro-β、Gro-γ和NAP-2为特定配体的B型IL-8受 体(IL-8RB)即CXCR2(Ponath，Exp.Opin.Invest.Drugs，1998，7，1-18)。这 两种受体的氨基酸序列的同源性为77％。已有大量的出版物显示，在类 风湿性关节炎、感染性休克、哮喘、粘稠物阻塞症、心肌梗塞和银屑病 中存在着异常高水平的IL-8(Baggiolini等，FEBS Lett.(欧洲生物化学协会 联合会快报)，1992，307，97-101；Mille和Krangel.，Crit.Rev.Immunol.(免疫 学评论)，1992，12，17-46；Oppenheim等，Annu.Rev.Immunol.，1991，9， 617-648；Seitz等，J.Clin.Invest.(临床研究杂志)，1991，87，463-469；Miller 等，Am.Rev.Resp.Dis.(美国呼吸道疾病评论)，1992，146，427-432； Donnelly等，Lancet(柳叶刀)，1993，341，643-647)。IL-8似乎与肺部的局 部缺血-再灌注现象有关(Sekido等，Nature(自然)，1993，365，654-657)。 一种能阻断由IL-8诱导的家兔中性白细胞体外迁移的IL-8抗体可防止由 家兔的肺局部缺血-再灌注过程导致的组织损伤。IL-8似乎在由心肌缺氧- 再灌注引起的变化中起到了主要作用(Kukelka等，J.Clin.Invest.，1995，95， 89-103)。
另一项研究证实了IL-8的一种中和抗体在内毒素诱发的家兔胸膜炎 模型中的有益效果(Broadus等，J.Immunol.，1994，152，2960-2967)。借助 于IL-8的中和抗体在用酸滴注家兔肺而诱发的肺侵蚀模型(Folkesson等， J.Clin.Invest.，1995，96，107-116)和由内毒素诱发的急性呼吸道疾病综合 征模型(Yokoi等，Lab.Invest.，1997，76，375-384)中的作用，已证实IL-8 与肺炎有关及其有害作用。其他的报告也以IL-8的中和抗体在皮肤病、 关节炎和肾小球性肾炎的动物模型中的作用，证实其相似的有益效果 (Akahoshi等，Lymphokine and Cytokine Res.(淋巴因子与细胞因子的研究)， 1994，13，113-116；Nishimura等，J.Leukoc.Biol.(白细胞生物学杂志)，1997， 62，444-449；Wada等.，J.Exp.Med.(实验医学杂志)，1994，180，1135-1140)。 此外，通过除去用于编码鼠IL-8受体的基因，可产生缺乏白介素-8受体 的小鼠，所述的鼠IL-8受体与人的2型受体(CXCR2)同源(Cacalano等， Science(科学)，1994，265，682-684)。尽管这些小鼠是健康的，但其中性白 细胞的特性已经被改变了。实际上，受腹膜内注射巯基乙酸盐的影响， 其中性白细胞向腹膜内迁移的能力减弱了。
所有这些结果均表明，在某些炎性条件下，IL-8家族的趋化因子是 中性白细胞及其他类型的细胞例如内皮细胞迁移和活化的重要介体。此 外，在很多种癌症中，IL-8家族的趋化因子被认为对肿瘤生长、转移灶 的形成和肿瘤的血管生成起到了重要的作用(Hebert和Baker，Cancer Invest.(癌症研究)，1993，11，743-750；Richards等，Am.J.Surg.(美国外科 杂志)，1997，174，507-512)。
现有技术中描述了某些能和IL-8受体结合的化合物：例如，WO 96/18393公开了1-苄基-2-吲哚羧酸的衍生物，所述的衍生物能与某些 IL-8受体结合而具有抑制效果。最近公开的WO 99/06354也提出，脲衍 生物或硫脲衍生化合物可用作IL-8受体的拮抗剂。
此外，国际公开号为WO 00/51984的专利申请公开了式(A)某吲哚衍 生物：
所述的衍生物可作为中间体用于合成速激肽拮抗剂。
然而，必须注意的是，该式(A)化合物中，没有提到R’1a或R’1b为处 于5位上的氰基的化合物。
最初是通过IL-8吸引和活化多形核白细胞(中性白细胞)的能力来对 IL-8进行鉴别。最近已经证实，受促炎细胞因子例如α-或β-IL-1、TNF α(“肿瘤坏死因子”)或其他促炎剂例如LPS(“脂多糖”)的影响，在多种组织 或细胞例如巨噬细胞、成纤维细胞、内皮和上皮细胞甚至中性白细胞中， 可迅速地诱导IL-8的表达(Van Damme J.，Interleukin-8 and related chemotactic cytokines(白介素-8和相关的趋化细胞因子)；1994；The Cytokines Handbook(细胞因子手册)，第二版，A.W.Thomson编，Academic Press(学术出版社)，伦敦，185-208页)。此外，所述文献中的某些数据还 证实，与中性白细胞有关的某些炎症中存在着高系统性水平的IL-8，这 表明IL-8及与其同族的其他趋化因子可能是中性白细胞活化过程中的基 本介体((Van Damme，Interleukin-8 and related chemotactic cytokines；1994； The Cytokines Handbook，第三版，A.W.Thomson编，Academic Press，伦 敦，271-311页)。
Gro-α、Gro-β、Gro-γ和NAP-2均属于趋化因子家族，与IL-8一样， 这些蛋白质也有多种名称。也即，Gro-α、β和γ分别被称为MGSA(“黑 素瘤生长刺激活性”)a、b和g(Richmond和Thomas，J.Cell Physiol.(细胞 生理学杂志)，1986，129，375-384；Cheng等，J.Immunol.(免疫学杂志)，1992， 148，451-456)。这些趋化因子均属于以CXC单元为特征，并具有ELR(天 冬氨酸-亮氨酸-精氨酸)单元的α-趋化因子组。这些趋化因子均与2型受 体即CXCR2结合。
已对两种IL-8受体进行过表征和克隆，所述的IL-8受体属于具有7 个跨膜区域的G蛋白偶联受体家族：以高亲和力与IL-8和GCP-2“粒细 胞趋化吸引剂蛋白质2”结合的A型IL-8受体(IL-8RA)即CXCR1；和以 IL-8、GCP-2、Gro-α、Gro-β、Gro-γ和NAP-2为特定配体的B型IL-8受 体(IL-8RB)即CXCR2(Ponath，Exp.Opin.Invest.Drugs，1998，7，1-18)。这 两种受体的氨基酸序列的同源性为77％。已有大量的出版物显示，在类 风湿性关节炎、感染性休克、哮喘、粘稠物阻塞症、心肌梗塞和银屑病 中存在着异常高水平的IL-8(Baggiolini等，FEBS Lett.(欧洲生物化学协会 联合会快报)，1992，307，97-101；Mille和Krangel.，Crit.Rev.Immunol.(免疫 学评论)，1992，12，17-46；Oppenheim等，Annu.Rev.Immunol.，1991，9， 617-648；Seitz等，J.Clin.Invest.(临床研究杂志)，1991，87，463-469；Miller 等，Am.Rev.Resp.Dis.(美国呼吸道疾病评论)，1992，146，427-432； Donnelly等，Lancet(柳叶刀)，1993，341，643-647)。IL-8似乎与肺部的局 部缺血-再灌注现象有关(Sekido等，Nature(自然)，1993，365，654-657)。 一种能阻断由IL-8诱导的家兔中性白细胞体外迁移的IL-8抗体可防止由 家兔的肺局部缺血-再灌注过程导致的组织损伤。IL-8似乎在由心肌缺氧- 再灌注引起的变化中起到了主要作用(Kukelka等，J.Clin.Invest.，1995，95， 89-103)。
另一项研究证实了IL-8的一种中和抗体在内毒素诱发的家兔胸膜炎 模型中的有益效果(Broadus等，J.Immunol.，1994，152，2960-2967)。借助 于IL-8的中和抗体在用酸滴注家兔肺而诱发的肺侵蚀模型(Folkesson等， J.Clin.Invest.，1995，96，107-116)和由内毒素诱发的急性呼吸道疾病综合 征模型(Yokoi等，Lab.Invest.，1997，76，375-384)中的作用，已证实IL-8 与肺炎有关及其有害作用。其他的报告也以IL-8的中和抗体在皮肤病、 关节炎和肾小球性肾炎的动物模型中的作用，证实其相似的有益效果 (Akahoshi等，Lymphokine and Cytokine Res.(淋巴因子与细胞因子的研究)， 1994，13，113-116；Nishimura等，J.Leukoc.Biol.(白细胞生物学杂志)，1997， 62，444-449；Wada等.，J.Exp.Med.(实验医学杂志)，1994，180，1135-1140)。 此外，通过除去用于编码鼠IL-8受体的基因，可产生缺乏白介素-8受体 的小鼠，所述的鼠IL-8受体与人的2型受体(CXCR2)同源(Cacalano等， Science(科学)，1994，265，682-684)。尽管这些小鼠是健康的，但其中性白 细胞的特性已经被改变了。实际上，受腹膜内注射巯基乙酸盐的影响， 其中性白细胞向腹膜内迁移的能力减弱了。
所有这些结果均表明，在某些炎性条件下，IL-8家族的趋化因子是 中性白细胞及其他类型的细胞例如内皮细胞迁移和活化的重要介体。此 外，在很多种癌症中，IL-8家族的趋化因子被认为对肿瘤生长、转移灶 的形成和肿瘤的血管生成起到了重要的作用(Hebert和Baker，Cancer Invest.(癌症研究)，1993，11，743-750；Richards等，Am.J.Surg.(美国外科 杂志)，1997，174，507-512)。
现有技术中描述了某些能和IL-8受体结合的化合物：例如，WO 96/18393公开了1-苄基-2-吲哚羧酸的衍生物，所述的衍生物能与某些 IL-8受体结合而具有抑制效果。最近公开的WO 99/06354也提出，脲衍 生物或硫脲衍生化合物可用作IL-8受体的拮抗剂。
此外，国际公开号为WO 00/51984的专利申请公开了式(A)某吲哚衍 生物：
所述的衍生物可作为中间体用于合成速激肽拮抗剂。
然而，必须注意的是，该式(A)化合物中，没有提到R’1a或R’1b为处 于5位上的氰基的化合物。
发明内容
本发明提供的是新型非肽类化合物，所述的化合物为5-氰基-1H-吲 哚的衍生物，其具有以拮抗剂的方式与IL-8的CXCR2受体及与其同族 的其他趋化因子例如NAP-2、Gro-α或ENA-78结合的特性。
因此，本发明的一项主题是式(I)5-氰基-1H-吲哚的新型衍生物及其可 药用盐、溶剂化物和水合物：
其中：
-X代表双键-C＝C-或硫原子；
-R1和R2彼此独立地代表氢原子、卤素原子或C1-C3烷基、C1-C3烷 氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基；
-n等于2或3。
所述的“烷基”应理解为线性或支化的饱和单价烃基。
所述的“C1-C3烷基”应理解为具有1至3个碳原子的烷基。
所述的“卤素原子”应理解为氟、碘、氯或溴原子，优选氟和氯原 子。
在本发明的化合物中通常优选式(Ia)化合物及其可药用盐、溶剂化物 和水合物：
其中R1、R2和n的定义与(I)相同。
通常更优选式(Ib)化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物：
其中R1、R2和n的定义与(I)相同。
式(I)、(Ia)和(Ib)化合物中，优选R1和R2均独立地代表氢原子、氯原 子或氟原子或C1-C2烷基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基， 且n等于2或3的化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物。
在上述优选的式(I)、(Ia)和(rb)化合物中，更优选R1和R2均独立地代 表氢原子、氯原子或氟原子或甲基，且n等于2或3的化合物及其可药 用盐、溶剂化物和水合物。
更优选的式(I)、(Ia)和(Ib)化合物为满足至少一项以下条件的化合物 及其可药用盐、溶剂化物和水合物：
n等于3；以及
R1代表氯原子或氟原子。
通过本领域的技术人员公知的技术，可采用可药用无机碱或有机碱 使式(I)、(Ia)和(Ib)化合物变成盐。术语“无机碱”应理解为碱金属碱例 如碳酸钠、碳酸钾、氧化锂或碱土金属碱例如石灰。术语“有机碱”应 理解为伯、仲或叔胺、氨基醇、某些无毒性的含氮杂环以及碱性的氨基 酸。在这些盐中，优选钠盐或钾盐和赖氨酸与精氨酸的盐或2-氨基-2-甲 基-1，3-丙二醇。
举例来说，本发明的式(I)化合物可根据以下的示意图1进行制备， 其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，而Y代表溴 或碘原子。
示意图1
式(I)化合物可通过相应的式(II)酯的水解进行制备：
其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，特别是 甲基或乙基。
化合物(II)是新型中间体，而且是本发明的一个完整的组成部分。
根据本领域的技术人员公知的技术，例如通过氢氧化钠的水-醇溶液 的作用，可将化合物(II)水解为酸(I)。
根据以下的方法可制备式(II)化合物：
a)通过氰化物的作用，使式(III)化合物转换为式(II)化合物：
其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，而Y代 表溴或碘原子，
b)或者在有钯催化剂例如四(三苯基膦)钯的条件下，通过式(V)溴化 衍生物与式(2)硼酸之间的铃木偶联(Suzuki coupling)进行制备，
所述的式(V)为：
其中n的定义与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
所述的式(2)为：
其中R1、R2和X的定义与(I)相同。
在a)描述的步骤中，举例来说，可在有N-甲基-2-吡咯烷酮存在的条 件下，使氰化亚铜参与反应。也可在有钯催化剂存在的条件下，使用氰 化钾。在这种情况下，举例来说，可使所述的反应在有四(三苯基膦)钯和 碘化铜存在的条件下、在溶剂例如四氢呋喃中进行。
b)所描述的步骤优选在有氯化锂和碳酸钠存在的条件下进行。
举例来说，式(III)化合物可通过式(IV)化合物与式(1)苯肼之间的费歇 尔(Fischer)反应制得。
所述的式(IV)为：
其中n、R1、R2和X的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，
所述的式(1)为：
其中Y代表溴或碘原子。
举例来说，所述的费歇尔反应可在有二氯化锌存在的条件下，在乙 酸中进行，其反应温度为20至80℃。
所述的式(1)化合物可选用己商品化的产品或可根据本领域的技术人 员公知的技术制得。
举例来说，化合物(IV)可由以下方法制得：
a)根据本领域的技术人员公知的反应，可通过醇R3OH的作用使所 述的式(3)酸发生酯化反应，其中的R3代表C1-C4烷基，所述的式(3)为：
其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，所述的酸(3)可在有路易斯酸存在 的条件下，通过式(4)环二酸酐与式(5)化合物之间的弗瑞德-克来福特 (Friedel-Crafts)反应制得，所述的式(4)为：
其中n的定义与(I)相同，所述的式(5)为：
其中R1、R2和X的定义与(I)相同；举例来说，也可使所述的弗瑞德 -克来福特反应在有三氯化铝存在的条件下、在溶剂例如二氯甲烷中进行，
b)或者在有路易斯酸例如三氯化铝存在的条件下，直接通过式(6)酰 基氯与式(5)化合物之间的弗瑞德-克来福特反应制得，所述的式(6)为：
Cl-C(O)(CH2)n+1-COOR3 (6)
其中n的定义与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
式(V)化合物可通过式(VI)化合物的溴化反应例如通过N-溴代琥珀酰 亚胺的作用，进行制备，所述的式(VI)为：
其中n的定义的与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
举例来说，式(VI)化合物可在有钯催化剂存在的条件下，通过氰化物 例如氰化钾的作用，以式(VII)卤化衍生物为原料进行制备，所述的式(VII) 为：
其中Y代表溴或碘原子，优选为碘原子。举例来说，所述的反应可 在有四(三苯基膦)钯和碘化铜存在的条件下、在溶剂例如四氢呋喃中进 行。
可根据类似于制备化合物(III)的方法，即肼(1)与醛(7)： HC(O)(CH2)n+1-COOR3之间的费歇尔反应，制备化合物(VII)，其中n的定 义的与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
所用的硼酸(2)是商品化的或公知的化合物。
将本发明的式(I)化合物作为生物学研究的对象，通过以下的体外检 测，可测得所述化合物对趋化因子IL-8和Gro-α的抑制效果：
A)IL-8受体结合检测
以125I标记的人IL-8([125I]-IL-8)(NEN，Les Ulis，法国)具有接近2,200 Ci/mmol(居里/毫摩尔)的比活性。在HEK 293(ATCC，CRL-1573)、 K-562(ATCC，CCL-243)或THP-1(ATCC，TIB-202)细胞中表达重组的人 CXCR2受体。将所述的HEK 293细胞置于DMEM介质(“达尔伯克改良 伊格尔培养基”)(GIBCO)中培养，所述的培养基中含有4.5g/l葡萄糖、 10％的胎牛血清、1％的Glutamax、1％非必需的氨基酸、1mM的丙酮酸 钠、100IU/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素。将所述的K-562和THP-1 细胞置于RPMl1640培养基(GIBCO)中培养，所述的培养基中含有10％ 的胎牛血清、1％非必需的氨基酸、1mM的丙酮酸钠、100IU/ml的青霉 素和100μg/ml的链霉素。当培养物达到80％的融合时，即可使用所述的 细胞。
根据现有的方法(Bastian等，Br.J.Pharmacol(英国药理学杂志).1997， 122，393-399)制备膜，不同的是，此处采用pH8.0的缓冲盐溶液取代均 化缓冲溶液，所述的盐溶液含有20mM的Tris(三羟甲基氨基甲烷)、1.2 mM的MgSO4(硫酸镁)、0.1mM的EDTA(乙二胺四乙酸)和25mM的 NaCl(氯化钠)。室温下，在每孔为1ml的96孔板中进行竞争实验，其最 终体积为0.25ml。将所述的膜置于由20mM的二-三丙烷和0.4mM的 Tris-HCl组成的pH值为8.0的缓冲溶液中稀释，再将所述的膜与浓度递 减(从100μM到0.01nM)的待测化合物和150pM的[125I]-IL-8放在一起 培育，所述的缓冲溶液含有1.2mM的MgSO4、0.1mM的EDTA、25mM 的NaCl和0.03％的CHAPS{3-[(胆酰胺基丙基)二甲基氨溶]-1-丙烷磺酸 盐}。在有300nM的无标记的IL-8的条件下，测定非特异性的结合。室 温下培育60分钟后，使用华特门(Whatman)GF/C滤器，通过真空快速过 滤停止反应，所用的滤器己预先在+4℃下、在由1％(重量/体积)聚氮丙 啶和0.5％(重量/体积)的BSA(牛血清白蛋白)组成的溶液中培育1小时。 使用含25mM NaCl、1mM MgSO4、0.5mM EDTA和10mM Tris-HCl且pH值为7.4的缓冲溶液清洗所述的滤器。在γ粒子计数管中测定所述 滤器上保留的放射性。
还通过整体细胞结合检测方法，测定本发明所描述的化合物的亲和 性。将转染的THP-1或K-562细胞悬浮于含0.5％(体积/重量)BSA而不 含钙或镁的结合检测用的PBS(缓冲磷酸盐)缓冲液中，所述的缓冲液pH 值为7.4，所得悬浮液浓度为2.5×106个细胞/mi。在每孔为1ml的96 孔板中进行竞争实验，其最终体积为0.25ml。使0.5×106个细胞与浓度 递减(从100μM到0.01nM)的待测化合物和150pM的[125I]-IL-8一起培 育。在有300nM的无放射性标记的趋化因子的条件下，测定非特异性的 结合。+4℃下培育90分钟后，使用华特门GF/C滤器，通过真空快速过 滤停止反应，所用的滤器已预先在+4℃下、3％(重量/体积)的聚氮丙啶 溶液中培育1小时。使用含0.5M NaCl且pH值为7.4的PBS溶液清洗 所述的滤器。在γ粒子计数管中测定所述滤器上保留的放射性。
在浓度为10μM的检测条件下，本发明所描述的式(I)化合物抑制了 至少95％的[125I]-IL-8与所述CXCR2受体的结合。
B)钙流动速率的测定
根据由IL-8或Gro-α诱导的钙的流动速率，可对本发明的化合物的 作用进行评估。
在有荧光指示剂Fura-2AM存在的条件下，以5μM的浓度，将用于 表达重组CXCR2受体的THP-1细胞、以1％(体积/体积)的DMSO(二甲 基亚砜)分化的U937细胞或E013细胞在37℃下培育1小时。在此装料期 之后，清洗所述的细胞，并将其以1×106个细胞/ml的浓度悬浮于盐溶液 中，所述的盐溶液pH值为7.4，并含有：136mM的NaCl、4.7nM的KCl、 1.2mM的MgSO4、1.6mM的CaCl2、1.2mM的KH2PO4、11mM的葡萄 糖和5mM的HEPES(N-[2-羟基乙基]哌嗪-N’-[2-乙烷磺酸])。将该细胞悬 浮液(2ml)装入石英池，在用340nm和380nm的激发波长交替激发后， 用LS50B(Perkin-Elmer)型分光荧光计测定样品在510nm处的荧光强度。 确定以340nm和380nm激发后的荧光强度的比率，根据下式计算细胞 内的钙浓度[Ca2+]i：
其中：
Kd代表Fura-2和钙络合物的亲和常数，Rmax为加入1μM离子载体 Bromo-A23187后的最大荧光强度，Rmin是加入离子载体后，再加入10 mM EGTA(乙烯二(氧乙烯基次氮基)四乙酸)后所测定的最小比率，而 Sf2/Sb2是在380nm的激发波长下，Rmin和Rmax时分别测定的荧光值 的比率。
在1分钟的稳定期内测定细胞内的基准钙浓度，之后，向细胞中加 入待测的化合物或对照用的载体。在2分钟的培育期内测定所述的钙浓 度，之后，使用各种激动剂(IL-8或Gro-α)刺激所述细胞。再过两分钟后， 测定钙浓度。
本发明所描述的式(I)化合物抑制了由IL-8或Gro-α诱导的钙的释放。
经生物学测试证实，本发明的化合物的活性表现出对IL-8的拮抗作 用，从而使其具有治疗用途。
由此，将化合物(I)及其可药用盐、溶剂化物和水合物用作药物成为
本发明的另一主题。
由本发明的另一方面可知，本发明还涉及到式(I)化合物或所述化合 物的可药用盐、溶剂化物或水合物在制备用于哺乳动物特别是人的预防 疗法或根治疗法的药物方面的用途，所述的疗法可用于治疗由IL-8的 CXCR2受体及与其同族的趋化因子的活化决定的疾病，所述疾病的一般 特征是大量中性白细胞的侵入。
通过服用治疗有效量的至少一种式(I)化合物，可治疗许多疾病，其 中可列举的是：特应性皮炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、慢性 肺阻塞、急性呼吸道疾病综合征、结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、 中风发作、心肌梗塞、感染性休克、多发性硬化、内毒素休克、银屑病、 与革兰氏阴性细菌有关的败血病、中毒休克综合征、心脏、肺或肾的局 部缺血和再灌注现象、肾小球性肾炎、血栓形成、移植物与移植接受体 的反应、阿尔茨海默氏病、同种异体移植的排斥、疟疾、再狭窄、血管 生成、动脉粥样硬化症、骨质疏松症、龈炎、骨髓干细胞的非生理性释 放、由呼吸道病毒、疱疹病毒和肝病毒引起的疾病、脑膜炎、脑疱疹、 CNS(中枢神经系统)血管炎、脑创伤、CNS肿瘤、蛛网膜下腔出血、外科 手术后创伤、粘稠物阻塞症、早产、咳嗽、瘙痒症、间质性肺炎、过敏、 由结晶诱发的关节炎、莱姆关节炎、进行性骨化纤维发育不良、急性和 慢性胰腺炎、急性酒精性肝炎、坏死性小肠结肠炎、慢性窦炎、葡萄膜 炎、多肌炎、血管增生(Vascularites)、痤疮、胃溃疡和十二指肠溃疡、腹 部疾病、食道炎、舌炎、肺阻塞、肺反应过度、导致肺炎的细支气管炎、 支气管扩张、细支气管炎、增生性细支气管炎、慢性支气管炎、呼吸困 难、肺气肿、高碳酸血症、低氧血症、低氧症、由外科手术导致的肺活 量的降低、肺纤维化、肺动脉高压、右心室肥大症、结节病、小细支气 管炎发作、换气-灌注缺陷、呼吸道喘鸣、狼疮(lupi)、与病理性血管生成 有关的疾病例如癌症、肿瘤细胞的增生以及例如在黑素瘤与局部脑缺血 时转移灶的形成。
由此，本发明涉及式(I)化合物或所述化合物的可药用盐、溶剂化物 或水合物在制备用于预防或治疗以下疾病的药物方面的用途：特应性皮 炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、慢性肺阻塞、急性呼吸道疾病 综合征、结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、中风发作、心肌梗塞、 感染性休克、多发性硬化、内毒素休克、银屑病、与革兰氏阴性细菌有 关的败血病、中毒休克综合征、心脏、肺或肾的局部缺血和再灌注现象、 肾小球性肾炎、血栓形成、移植物与移植接受体的反应、阿尔茨海默氏 病、同种异体移植的排斥、疟疾、再狭窄、血管生成、动脉粥样硬化症、 骨质疏松症、龈炎、骨髓干细胞的非生理性释放、由呼吸道病毒、疱疹 病毒和肝病毒引起的疾病。
式(I)化合物的服用量必须足以竞争性地令其自身固着于受体上，从 而起到对抗IL-8的作用。有效成分的剂量取决于给药方式和病理类型， 通常在0.01mg/kg和10mg/kg之间。式(I)化合物还可与另一活性成分合 用。
在式(I)化合物的治疗用途范围以内，一般来说，可将所述的化合物 与普通所用的赋形剂结合，从而使用多种给药形式。包含式(I)化合物或 其一种可药用盐、溶剂化物和水合物以及可药用介质、载体或赋形剂的 药物组合物，也是本发明的另一主题。
对于口服形式中所用的制剂，举例来说，可以是含有粉状或微粉状 的固体活性成分的胶囊或片剂，或者含有溶液形式、悬浮液形式、乳液 形式或微乳液形式的活性成分的糖浆或溶液。
所述的制剂也可采用局部施用的给药形式，例如乳剂或洗液或经皮 肤吸收的方式例如粘合片。所述的有效成分也可按皮下注射、肌肉注射 或静脉内注射的给药形式制剂。
因此，本发明的一项主题是式(I)5-氰基-1H-吲哚的新型衍生物及其可 药用盐、溶剂化物和水合物：
其中：
-X代表双键-C＝C-或硫原子；
-R1和R2彼此独立地代表氢原子、卤素原子或C1-C3烷基、C1-C3烷 氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基；
-n等于2或3。
所述的“烷基”应理解为线性或支化的饱和单价烃基。
所述的“C1-C3烷基”应理解为具有1至3个碳原子的烷基。
所述的“卤素原子”应理解为氟、碘、氯或溴原子，优选氟和氯原 子。
在本发明的化合物中通常优选式(Ia)化合物及其可药用盐、溶剂化物 和水合物：
其中R1、R2和n的定义与(I)相同。
通常更优选式(Ib)化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物：
其中R1、R2和n的定义与(I)相同。
式(I)、(Ia)和(Ib)化合物中，优选R1和R2均独立地代表氢原子、氯原 子或氟原子或C1-C2烷基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基， 且n等于2或3的化合物及其可药用盐、溶剂化物和水合物。
在上述优选的式(I)、(Ia)和(rb)化合物中，更优选R1和R2均独立地代 表氢原子、氯原子或氟原子或甲基，且n等于2或3的化合物及其可药 用盐、溶剂化物和水合物。
更优选的式(I)、(Ia)和(Ib)化合物为满足至少一项以下条件的化合物 及其可药用盐、溶剂化物和水合物：
n等于3；以及
R1代表氯原子或氟原子。
通过本领域的技术人员公知的技术，可采用可药用无机碱或有机碱 使式(I)、(Ia)和(Ib)化合物变成盐。术语“无机碱”应理解为碱金属碱例 如碳酸钠、碳酸钾、氧化锂或碱土金属碱例如石灰。术语“有机碱”应 理解为伯、仲或叔胺、氨基醇、某些无毒性的含氮杂环以及碱性的氨基 酸。在这些盐中，优选钠盐或钾盐和赖氨酸与精氨酸的盐或2-氨基-2-甲 基-1，3-丙二醇。
举例来说，本发明的式(I)化合物可根据以下的示意图1进行制备， 其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，而Y代表溴 或碘原子。
示意图1
式(I)化合物可通过相应的式(II)酯的水解进行制备：
其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，特别是 甲基或乙基。
化合物(II)是新型中间体，而且是本发明的一个完整的组成部分。
根据本领域的技术人员公知的技术，例如通过氢氧化钠的水-醇溶液 的作用，可将化合物(II)水解为酸(I)。
根据以下的方法可制备式(II)化合物：
a)通过氰化物的作用，使式(III)化合物转换为式(II)化合物：
其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，而Y代 表溴或碘原子，
b)或者在有钯催化剂例如四(三苯基膦)钯的条件下，通过式(V)溴化 衍生物与式(2)硼酸之间的铃木偶联(Suzuki coupling)进行制备，
所述的式(V)为：
其中n的定义与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
所述的式(2)为：
其中R1、R2和X的定义与(I)相同。
在a)描述的步骤中，举例来说，可在有N-甲基-2-吡咯烷酮存在的条 件下，使氰化亚铜参与反应。也可在有钯催化剂存在的条件下，使用氰 化钾。在这种情况下，举例来说，可使所述的反应在有四(三苯基膦)钯和 碘化铜存在的条件下、在溶剂例如四氢呋喃中进行。
b)所描述的步骤优选在有氯化锂和碳酸钠存在的条件下进行。
举例来说，式(III)化合物可通过式(IV)化合物与式(1)苯肼之间的费歇 尔(Fischer)反应制得。
所述的式(IV)为：
其中n、R1、R2和X的定义与(I)相同，R3代表C1-C4烷基，
所述的式(1)为：
其中Y代表溴或碘原子。
举例来说，所述的费歇尔反应可在有二氯化锌存在的条件下，在乙 酸中进行，其反应温度为20至80℃。
所述的式(1)化合物可选用己商品化的产品或可根据本领域的技术人 员公知的技术制得。
举例来说，化合物(IV)可由以下方法制得：
a)根据本领域的技术人员公知的反应，可通过醇R3OH的作用使所 述的式(3)酸发生酯化反应，其中的R3代表C1-C4烷基，所述的式(3)为：
其中R1、R2、X和n的定义与(I)相同，所述的酸(3)可在有路易斯酸存在 的条件下，通过式(4)环二酸酐与式(5)化合物之间的弗瑞德-克来福特 (Friedel-Crafts)反应制得，所述的式(4)为：
其中n的定义与(I)相同，所述的式(5)为：
其中R1、R2和X的定义与(I)相同；举例来说，也可使所述的弗瑞德 -克来福特反应在有三氯化铝存在的条件下、在溶剂例如二氯甲烷中进行，
b)或者在有路易斯酸例如三氯化铝存在的条件下，直接通过式(6)酰 基氯与式(5)化合物之间的弗瑞德-克来福特反应制得，所述的式(6)为：
Cl-C(O)(CH2)n+1-COOR3 (6)
其中n的定义与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
式(V)化合物可通过式(VI)化合物的溴化反应例如通过N-溴代琥珀酰 亚胺的作用，进行制备，所述的式(VI)为：
其中n的定义的与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
举例来说，式(VI)化合物可在有钯催化剂存在的条件下，通过氰化物 例如氰化钾的作用，以式(VII)卤化衍生物为原料进行制备，所述的式(VII) 为：
其中Y代表溴或碘原子，优选为碘原子。举例来说，所述的反应可 在有四(三苯基膦)钯和碘化铜存在的条件下、在溶剂例如四氢呋喃中进 行。
可根据类似于制备化合物(III)的方法，即肼(1)与醛(7)： HC(O)(CH2)n+1-COOR3之间的费歇尔反应，制备化合物(VII)，其中n的定 义的与(I)相同，而R3代表C1-C4烷基。
所用的硼酸(2)是商品化的或公知的化合物。
将本发明的式(I)化合物作为生物学研究的对象，通过以下的体外检 测，可测得所述化合物对趋化因子IL-8和Gro-α的抑制效果：
A)IL-8受体结合检测
以125I标记的人IL-8([125I]-IL-8)(NEN，Les Ulis，法国)具有接近2,200 Ci/mmol(居里/毫摩尔)的比活性。在HEK 293(ATCC，CRL-1573)、 K-562(ATCC，CCL-243)或THP-1(ATCC，TIB-202)细胞中表达重组的人 CXCR2受体。将所述的HEK 293细胞置于DMEM介质(“达尔伯克改良 伊格尔培养基”)(GIBCO)中培养，所述的培养基中含有4.5g/l葡萄糖、 10％的胎牛血清、1％的Glutamax、1％非必需的氨基酸、1mM的丙酮酸 钠、100IU/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素。将所述的K-562和THP-1 细胞置于RPMl1640培养基(GIBCO)中培养，所述的培养基中含有10％ 的胎牛血清、1％非必需的氨基酸、1mM的丙酮酸钠、100IU/ml的青霉 素和100μg/ml的链霉素。当培养物达到80％的融合时，即可使用所述的 细胞。
根据现有的方法(Bastian等，Br.J.Pharmacol(英国药理学杂志).1997， 122，393-399)制备膜，不同的是，此处采用pH8.0的缓冲盐溶液取代均 化缓冲溶液，所述的盐溶液含有20mM的Tris(三羟甲基氨基甲烷)、1.2 mM的MgSO4(硫酸镁)、0.1mM的EDTA(乙二胺四乙酸)和25mM的 NaCl(氯化钠)。室温下，在每孔为1ml的96孔板中进行竞争实验，其最 终体积为0.25ml。将所述的膜置于由20mM的二-三丙烷和0.4mM的 Tris-HCl组成的pH值为8.0的缓冲溶液中稀释，再将所述的膜与浓度递 减(从100μM到0.01nM)的待测化合物和150pM的[125I]-IL-8放在一起 培育，所述的缓冲溶液含有1.2mM的MgSO4、0.1mM的EDTA、25mM 的NaCl和0.03％的CHAPS{3-[(胆酰胺基丙基)二甲基氨溶]-1-丙烷磺酸 盐}。在有300nM的无标记的IL-8的条件下，测定非特异性的结合。室 温下培育60分钟后，使用华特门(Whatman)GF/C滤器，通过真空快速过 滤停止反应，所用的滤器己预先在+4℃下、在由1％(重量/体积)聚氮丙 啶和0.5％(重量/体积)的BSA(牛血清白蛋白)组成的溶液中培育1小时。 使用含25mM NaCl、1mM MgSO4、0.5mM EDTA和10mM Tris-HCl且pH值为7.4的缓冲溶液清洗所述的滤器。在γ粒子计数管中测定所述 滤器上保留的放射性。
还通过整体细胞结合检测方法，测定本发明所描述的化合物的亲和 性。将转染的THP-1或K-562细胞悬浮于含0.5％(体积/重量)BSA而不 含钙或镁的结合检测用的PBS(缓冲磷酸盐)缓冲液中，所述的缓冲液pH 值为7.4，所得悬浮液浓度为2.5×106个细胞/mi。在每孔为1ml的96 孔板中进行竞争实验，其最终体积为0.25ml。使0.5×106个细胞与浓度 递减(从100μM到0.01nM)的待测化合物和150pM的[125I]-IL-8一起培 育。在有300nM的无放射性标记的趋化因子的条件下，测定非特异性的 结合。+4℃下培育90分钟后，使用华特门GF/C滤器，通过真空快速过 滤停止反应，所用的滤器已预先在+4℃下、3％(重量/体积)的聚氮丙啶 溶液中培育1小时。使用含0.5M NaCl且pH值为7.4的PBS溶液清洗 所述的滤器。在γ粒子计数管中测定所述滤器上保留的放射性。
在浓度为10μM的检测条件下，本发明所描述的式(I)化合物抑制了 至少95％的[125I]-IL-8与所述CXCR2受体的结合。
B)钙流动速率的测定
根据由IL-8或Gro-α诱导的钙的流动速率，可对本发明的化合物的 作用进行评估。
在有荧光指示剂Fura-2AM存在的条件下，以5μM的浓度，将用于 表达重组CXCR2受体的THP-1细胞、以1％(体积/体积)的DMSO(二甲 基亚砜)分化的U937细胞或E013细胞在37℃下培育1小时。在此装料期 之后，清洗所述的细胞，并将其以1×106个细胞/ml的浓度悬浮于盐溶液 中，所述的盐溶液pH值为7.4，并含有：136mM的NaCl、4.7nM的KCl、 1.2mM的MgSO4、1.6mM的CaCl2、1.2mM的KH2PO4、11mM的葡萄 糖和5mM的HEPES(N-[2-羟基乙基]哌嗪-N’-[2-乙烷磺酸])。将该细胞悬 浮液(2ml)装入石英池，在用340nm和380nm的激发波长交替激发后， 用LS50B(Perkin-Elmer)型分光荧光计测定样品在510nm处的荧光强度。 确定以340nm和380nm激发后的荧光强度的比率，根据下式计算细胞 内的钙浓度[Ca2+]i：
其中：
Kd代表Fura-2和钙络合物的亲和常数，Rmax为加入1μM离子载体 Bromo-A23187后的最大荧光强度，Rmin是加入离子载体后，再加入10 mM EGTA(乙烯二(氧乙烯基次氮基)四乙酸)后所测定的最小比率，而 Sf2/Sb2是在380nm的激发波长下，Rmin和Rmax时分别测定的荧光值 的比率。
在1分钟的稳定期内测定细胞内的基准钙浓度，之后，向细胞中加 入待测的化合物或对照用的载体。在2分钟的培育期内测定所述的钙浓 度，之后，使用各种激动剂(IL-8或Gro-α)刺激所述细胞。再过两分钟后， 测定钙浓度。
本发明所描述的式(I)化合物抑制了由IL-8或Gro-α诱导的钙的释放。
经生物学测试证实，本发明的化合物的活性表现出对IL-8的拮抗作 用，从而使其具有治疗用途。
由此，将化合物(I)及其可药用盐、溶剂化物和水合物用作药物成为
本发明的另一主题。
由本发明的另一方面可知，本发明还涉及到式(I)化合物或所述化合 物的可药用盐、溶剂化物或水合物在制备用于哺乳动物特别是人的预防 疗法或根治疗法的药物方面的用途，所述的疗法可用于治疗由IL-8的 CXCR2受体及与其同族的趋化因子的活化决定的疾病，所述疾病的一般 特征是大量中性白细胞的侵入。
通过服用治疗有效量的至少一种式(I)化合物，可治疗许多疾病，其 中可列举的是：特应性皮炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、慢性 肺阻塞、急性呼吸道疾病综合征、结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、 中风发作、心肌梗塞、感染性休克、多发性硬化、内毒素休克、银屑病、 与革兰氏阴性细菌有关的败血病、中毒休克综合征、心脏、肺或肾的局 部缺血和再灌注现象、肾小球性肾炎、血栓形成、移植物与移植接受体 的反应、阿尔茨海默氏病、同种异体移植的排斥、疟疾、再狭窄、血管 生成、动脉粥样硬化症、骨质疏松症、龈炎、骨髓干细胞的非生理性释 放、由呼吸道病毒、疱疹病毒和肝病毒引起的疾病、脑膜炎、脑疱疹、 CNS(中枢神经系统)血管炎、脑创伤、CNS肿瘤、蛛网膜下腔出血、外科 手术后创伤、粘稠物阻塞症、早产、咳嗽、瘙痒症、间质性肺炎、过敏、 由结晶诱发的关节炎、莱姆关节炎、进行性骨化纤维发育不良、急性和 慢性胰腺炎、急性酒精性肝炎、坏死性小肠结肠炎、慢性窦炎、葡萄膜 炎、多肌炎、血管增生(Vascularites)、痤疮、胃溃疡和十二指肠溃疡、腹 部疾病、食道炎、舌炎、肺阻塞、肺反应过度、导致肺炎的细支气管炎、 支气管扩张、细支气管炎、增生性细支气管炎、慢性支气管炎、呼吸困 难、肺气肿、高碳酸血症、低氧血症、低氧症、由外科手术导致的肺活 量的降低、肺纤维化、肺动脉高压、右心室肥大症、结节病、小细支气 管炎发作、换气-灌注缺陷、呼吸道喘鸣、狼疮(lupi)、与病理性血管生成 有关的疾病例如癌症、肿瘤细胞的增生以及例如在黑素瘤与局部脑缺血 时转移灶的形成。
由此，本发明涉及式(I)化合物或所述化合物的可药用盐、溶剂化物 或水合物在制备用于预防或治疗以下疾病的药物方面的用途：特应性皮 炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、哮喘、慢性肺阻塞、急性呼吸道疾病 综合征、结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、中风发作、心肌梗塞、 感染性休克、多发性硬化、内毒素休克、银屑病、与革兰氏阴性细菌有 关的败血病、中毒休克综合征、心脏、肺或肾的局部缺血和再灌注现象、 肾小球性肾炎、血栓形成、移植物与移植接受体的反应、阿尔茨海默氏 病、同种异体移植的排斥、疟疾、再狭窄、血管生成、动脉粥样硬化症、 骨质疏松症、龈炎、骨髓干细胞的非生理性释放、由呼吸道病毒、疱疹 病毒和肝病毒引起的疾病。
式(I)化合物的服用量必须足以竞争性地令其自身固着于受体上，从 而起到对抗IL-8的作用。有效成分的剂量取决于给药方式和病理类型， 通常在0.01mg/kg和10mg/kg之间。式(I)化合物还可与另一活性成分合 用。
在式(I)化合物的治疗用途范围以内，一般来说，可将所述的化合物 与普通所用的赋形剂结合，从而使用多种给药形式。包含式(I)化合物或 其一种可药用盐、溶剂化物和水合物以及可药用介质、载体或赋形剂的 药物组合物，也是本发明的另一主题。
对于口服形式中所用的制剂，举例来说，可以是含有粉状或微粉状 的固体活性成分的胶囊或片剂，或者含有溶液形式、悬浮液形式、乳液 形式或微乳液形式的活性成分的糖浆或溶液。
所述的制剂也可采用局部施用的给药形式，例如乳剂或洗液或经皮 肤吸收的方式例如粘合片。所述的有效成分也可按皮下注射、肌肉注射 或静脉内注射的给药形式制剂。
具体实施方式
以下的制备例和实施例只用于对本发明进行举例说明，而决不是用 来限制本发明。下文使用的缩写形式有：s＝单峰、m＝多峰、d＝双峰、t＝ 三重峰、quad＝四重峰和q＝五重峰。
制备例1
4-氟代-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.1
将2.59克氯化铝加入4ml二氯甲烷制成悬浮液，并将所得的悬浮液 冷却至-5℃，逐渐加入由0.97ml的氟苯、1.31ml的6-氯代-6-氧代己酸 甲酯和3ml二氯甲烷组成的混合物，并同时将温度保持在-4℃至-7℃之 间。然后将温度升高至20℃，15小时后，酸化冰水中的水解即可完成。 使用二氯甲烷萃取所得的混合物，用水洗涤所得的有机相，然后将其用 硫酸镁干燥后，进行减压浓缩。由此可回收得到2克的粗产物，再使用 硅胶色谱法纯化所得粗产物，所述的色谱法采用96/4(体积比)的石油醚/ 乙酸乙酯混合物作为洗脱剂。由此可得到1.26克的白色粉末状的目标产 物。(产率＝63％)
熔点＝58-59℃
按相同的方法制备以下的化合物：
3，4-二氯-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.2；熔点＝41-44℃。
3，4-二氟-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.3；熔点＝41-43℃。
4-氯代-3-乙基-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.4。
制备例2
3，4-二氯-δ-氧代苯基戊酸乙酯，化合物IV.5
将5克3，4-二氯-δ-氧代-苯基戊酸加入60ml的乙醇制成悬浮液，并 加入1ml的浓硫酸。将所得的混合物在加热回流的条件下搅拌5小时。 然后对所得的反应混合物实施减压浓缩，再用乙醚吸收所得残余物。用 水洗涤所得的有机相，然后用稀氢氧化钠溶液洗涤，最后用水再洗一次。 用硫酸镁干燥所得的混合物，减压蒸去溶剂，即可得到2.6克棕色油状的 目标产物(产率＝47％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：8.05(d，J＝1.5Hz，1H)；7.80(dd，J＝1.5Hz， J＝8.1Hz，1H)；7.56(d，J＝8.1Hz，1H)；4.13(q，J＝7.4Hz，2H)；3.02(t，J＝6.6Hz， 2H)；2.42(t，J＝6.6Hz，2H)；2.05(q，J＝6.6Hz，2H)；1.25(t，J＝7.4Hz，3H)。
制备例3
4-氯代-3-甲氧基-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.6
a)α-乙酰基-4-氯代-3-甲氧基-β-氧代苯基丙酸乙酯
将500μl乙醇和48-四氯化碳加入237mg镁中，然后加入4ml甲 苯、1ml乙醇和920μl乙酰乙酸乙酯。搅拌所得的反应混合物直至镁消 失。将所得的反应混合物冷却至-5℃，然后加入含2克(4-氯代-3-甲氧基) 苯甲酰氯的1ml甲苯。在此温度下搅拌2小时30分钟后，将所得的反应 混合物在50℃下持续加热30分钟。加入冰/硫酸混合物。所得的混合物 用甲苯萃取后，减压蒸去溶剂。
b)4-氯代-3-甲氧基-β-氧代苯基丙酸乙酯
向2.2克a)所得的化合物中，相继加入由295mg氢氧化钠与10ml 水组成的溶液、787mg氯化铵和1ml氢氧化铵。将反应混合物在50℃下 加热3小时，再使其回流1小时30分钟，最后在室温下放置48小时。 所得的混合物用乙酸乙酯萃取后，减压蒸去溶剂。为了重新溶解沉淀， 加入几滴乙酸乙酯，然后加入石油醚。滤除沉淀，对滤液实施减压蒸镏。
c)2-(4-氯代-3-甲氧基-苯甲酰基)己二酸二乙酯
将b)所得的残余物逐滴加入由在4ml乙醇中加入206mg钠而得到 的乙醇钠溶液。将所得的反应混合物加热回流45分钟，然后将其冷却至 40℃，并在此温度下加入1.28ml 4-溴代丁酸乙酯。将所得的反应混合物 加热回流4小时30分钟。等反应混合物冷却到室温后，将其过滤再用乙 醇洗涤。所得的混合物用乙酸乙酯萃取后，减压蒸去溶剂。将所得的残 余物用硅胶色谱法纯化，所述硅胶色谱法的洗脱剂先后为95/5和9/1的 石油醚/乙酸乙酯混合物(体积比)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.48(d，1H)；7.43(dd，1H)；7.36(d，1H)； 4.17(t，1H)；4.05(quad，2H)；4.01(quad，2H)；3.87(s，3H)；2.26(t，2H)；1.94(m， 2H)；1.58(m，2H)；1.14(t，3H)；1.08(t，3H)。
d)4-氯代-3-羟基-ε-氧代苯基己酸
将2.3ml氢溴酸加入390mg由c)所得的化合物。将所得的反应混合 物加热回流4小时。等所得的混合物冷却到室温并用乙酸乙酯萃取后， 再用10％碳酸钠水溶液洗涤所得的有机相。采用1N盐酸水溶液将所得 的水相酸化至pH＝1，然后用乙酸乙酯进行萃取。干燥所得的有机相，然 后对其实施减压浓缩。
1H NMR(300MHz，DMSO)：7.50(m，3H)；2.58(m，2H)；2.25(m，2H)； 1.55(m，4H)。
e)化合物IV.6
将150mg由d)中所得的化合物、182mg碳酸钾和110μl硫酸二甲 酯加入2ml丙酮制成混合物，并将其加热回流15小时。将其过滤后，减 压蒸去溶剂。用乙酸乙酯萃取后，再次蒸去溶剂。用乙酸乙酯重新溶解 所得的残余物，并加入几滴石油醚。滤除沉淀，并蒸发所得的滤液。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.54(d，1H)；7.46(m，2H)；3.97(s，3H)； 3.67(s，3H)；2.98(t，2H)；2.39(t，2H)；1.75(m，4H)。
制备例4
5-溴代-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.1
将1.5克化合物IV.2、1.74克4-溴代苯肼盐酸盐和0.71克氯化锌加 入10ml乙酸，从而制得混合物。将所得的混合物加热至65-70℃，并在 此温度下持续搅拌5小时。将其冷却后，加入15ml水和20ml乙酸乙酯， 然后将所得的反应混合物过滤。所得的滤液用20ml乙酸乙酯萃取两次。 用水洗涤所得的有机相，将其用硫酸镁干燥后，减压蒸去溶剂。由此得 到1.55克米黄色固体。
熔点＝112-114℃。
按相同的方法制备以下的化合物：
2-(3，4-二氟苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.2；熔点＝ 118-120℃。
2-(4-氯苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.3；熔点＝ 160-165℃。
5-溴代-2-(4-氟代苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.4；熔点＝ 96-98℃。
2-(3，4-二氯苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丙酸乙酯，化合物III.5；熔点＝ 135-138℃。
2-(5-氯代-2-噻吩基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.6；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.50(s，1H)；7.92(d，1H)；7.37(dd，1H)； 7.33(d，1H)；7.24(d，1H)；7.18(d，1H)；3.58(s，3H)；2.85(t，2H)；2.39(t，2H)； 1.82(q，2H)。
2-(4-氯代-3-乙基苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.7；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.97(s，1H)；7.87(d，1H)；7.39(dd，1H)； 7.36(d，1H)；7.33(d，1H)；7.23(dd，1H)；7.08(d，1H)；3.55(s，3H)；2.75(m，4H)； 2.27(t，2H)；1.93(q，2H)；1.22(t，3H)。
2-(4-氯代-3-甲氧基苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.8；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.4(s，1H)；7.95(s，1H)；7.55(d，1H)； 7.38(dd，1H)；7.32(d，1H)；7.24(d，1H)；7.21(dd，1H)；3.95(s，3H)；3.58(s，3H)； 2.85(t，2H)；2.40(t，2H)；1.85(m，2H)。
制备例5
2-(3，4-二氯苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.1
将由1.6克化合物III.1、2.66克氰化亚铜和7ml N-甲基-2-吡咯烷酮 组成的混合物加热回流16小时。然后将所得的反应混合物冷却，并加入 30ml水。将所得的混合物在室温下持续搅拌15分钟，然后加入20ml 乙二胺。随后将所得的混合物用40ml甲苯萃取两次，将所得的有机相合 并后，用30ml饱和氯化钠溶液洗涤三次，然后用硫酸镁干燥。将所得的 混合物过滤后，减压蒸去溶剂。用乙酸乙酯溶解上述蒸发残余物，然后 加入几滴环己烷。滤出目标产物，并对其实施减压干燥；熔点＝ 158-160℃。
按相同的方法制备以下的化合物：
5-氰基-2-(3，4-二氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.2；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：8.3(s，1H)；7.99(s，1H)；7.45(dd，1H)； 7.42(d，1H)；7.36(m，1H)；7.28(m，2H)；3.65(s，3H)；2.88(t，2H)；2.37(t，2H)； 2.00(q，2H)。
2-(4-氯苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.3；熔点＝ 135-137℃
5-氰基-2-(4-氟代苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.4；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.98(s，1H)；7.53(m，2H)；7.42(m，2H)； 7.19(m，2H)；3.60(s，3H)；2.88(t，2H)；2.36(t，2H)；2.00(q，2H)。
5-氰基-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丙酸乙酯，化合物II.5；熔点＝ 148-151℃。
2-(5-氯代-2-噻吩基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.6；熔点 ＝143-144℃。
2-(4-氯代-3-乙基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.7；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.90(s，1H)；8.17(s，1H)；7.61(d，1H)； 7.57(d，1H)；7.50(m，3H)；3.55(s，3H)；2.88(t，2H)；2.79(quad，2H)；2.40(t， 2H)；1.86(q，2H)；1.25(t，3H)。
制备例6
5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物VII.1
根据类似于制备例4描述的方法，以4-碘代苯肼和6-氧代己酸甲酯 为原料，制备化合物VII.1。
1H NMR(300MHz，DMSO)：10.95(s，1H)；7.85(s，1H)；7.32(dd，1H)； 7.19(d，1H)；7.13(d，1H)；3.59(s，3H)；2.66(t，2H)；2.35(t，2H)；1.85(q，2H)。
制备例7
5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物VI.1
将由1.586克化合物VII.1、602mg氰化钾、88mg碘化铜、267mg 四(三苯基膦)钯及6ml四氢呋喃组成的混合物在加热回流的条件下搅拌8 小时。搅拌2小时和6小时后，再加入88mg碘化铜和267mg四(三苯 基膦)钯。等反应混合物冷却到室温后，加入200ml乙酸乙酯，然后用硅 藻土过滤所得的混合物。所得的有机相用水洗涤两次，再用饱和氯化钠 溶液进行洗涤，然后用硫酸镁干燥。减压蒸去溶剂。用硅胶色谱法纯化 所得的残余物，所述色谱法的洗脱剂为7/3(体积比)的石油醚/7酸乙酯混 合物；熔点＝75-76℃。
制备例8
2-溴代-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物V.1
将3克化合物VI.1加入125ml四氯化碳并制成溶液，向所得溶液中 加入2.56克N-溴代琥珀酰亚胺。将所得的反应混合物在加热回流的条件 下搅拌4小时，然后将其冷却至室温。加入200ml乙酸乙酯和200ml热 水。用热水洗涤所得的有机相，然后将其用硫酸镁干燥。减压蒸去溶剂。 所得的残余物用石油醚和二氯甲烷吸收溶解。除去上述的石油醚后，滤 除生成的沉淀，并用甲苯洗涤。蒸发所得的滤液，并将所得的残余物用 硅胶色谱法纯化，所述的色谱法的洗脱剂为8/2(体积比)的石油醚/乙酸乙 酯混合物；熔点＝105-106℃。
制备例9
2-(4-氯代-3-甲基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.8
将73mg化合物V.1和58mg 4-氯代-3-甲基苯基硼酸加入4.7ml甲 醇和4.7ml甲苯中，从而制成溶液。然后边搅拌边加入29mg氯化锂、 13mg四(三苯基膦)钯和0.57ml 1M的碳酸钠溶液。将所得的反应混合物 在回流的条件下持续搅拌1小时，然后减压蒸去溶剂。所得的残余固体 用硅胶色谱法纯化，所述色谱法的洗脱剂为85/15(体积比)的石油醚/乙酸 乙酯混合物。
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.80(s，1H)；8.17(s，1H)；7.65(s，1H)； 7.58(d，1H)；7.48(m，3H)；3.55(s，3H)；2.88(t，2H)；2.38(t，2H)；1.89(q，2H)。
按类似的方法制备以下的化合物：
5-氰基-2-(4-氟代-3-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.9；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.88(s，1H)；8.13(s，1H)；7.58(d，1H)； 7.54(m，3H)；7.31(m，1H)；3.58(s，3H)；2.88(t，2H)；2.38(t，2H)；1.86(q，2H)。
2-[4-氯代-3-(三氟甲基)苯基]-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物 II.10；
2-(3-氯代-4-氟代苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.11；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.90(s，1H)；8.20(s，1H)；7.85(d，1H)； 7.66(m，1H)；7.61(d，1H)；7.49(m，2H)；3.55(s，3H)；2.88(t，2H)；2.40(t，2H)； 1.85(q，2H)。
2-(4-氯代-3-氟代苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.12；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.93(s，1H)；8.21(s，1H)；7.76(d，1H)； 7.68(dd，1H)；7.50(m，3H)；3.55(s，3H)；2.90(t，2H)；2.39(t，2H)；1.84(q，2H)。
2-(4-硝基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.13；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：12.10(s，1H)；8.38(d，2H)；8.27(s，1H)； 7.95(d，2H)；7.54(m，2H)；3.56(s，3H)；2.95(t，2H)；2.42(t，2H)；1.88(q，2H)。
2-(4-氰基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.14；熔点＝ 149-151℃
2-[4-(三氟甲氧基)苯基]-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.15； 熔点＝142-143℃
制备例10
2-(4-氯代-3-甲氧基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.16
根据类似于制备例7所用的方法，由化合物III.8制备化合物II.16。
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.90(s，1H)；8.19(s，1H)；7.58(d，1H)； 7.52(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.35(dd，1H)；7.24(dd，1H)；3.98(s，1H)；3.57(s， 3H)；2.91(t，2H)；2.40(t，2H)；1.88(m，2H)。
实施例1
2-(3，4-二氯苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸
将80mg化合物II.1加入3ml二氧六环，制得混合物。在其中加入 1ml的1N氢氧化钠水溶液，再将所得的反应混合物在回流的条件下搅拌 1小时30分钟。然后减压除去溶剂，并用3ml水吸收溶解所得的残余物。 所得的溶液用1N盐酸酸化至pH＝1。过滤分离出沉淀，并用硅胶色谱法 纯化所得沉淀，所述色谱法的洗脱剂为9/1(体积比)的二氯甲烷/甲醇混合 物；熔点＝190-195℃。
按类似的方法，制备以下表1所示的实施例2至16中的目标产物：
表1
制备例1
4-氟代-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.1
将2.59克氯化铝加入4ml二氯甲烷制成悬浮液，并将所得的悬浮液 冷却至-5℃，逐渐加入由0.97ml的氟苯、1.31ml的6-氯代-6-氧代己酸 甲酯和3ml二氯甲烷组成的混合物，并同时将温度保持在-4℃至-7℃之 间。然后将温度升高至20℃，15小时后，酸化冰水中的水解即可完成。 使用二氯甲烷萃取所得的混合物，用水洗涤所得的有机相，然后将其用 硫酸镁干燥后，进行减压浓缩。由此可回收得到2克的粗产物，再使用 硅胶色谱法纯化所得粗产物，所述的色谱法采用96/4(体积比)的石油醚/ 乙酸乙酯混合物作为洗脱剂。由此可得到1.26克的白色粉末状的目标产 物。(产率＝63％)
熔点＝58-59℃
按相同的方法制备以下的化合物：
3，4-二氯-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.2；熔点＝41-44℃。
3，4-二氟-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.3；熔点＝41-43℃。
4-氯代-3-乙基-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.4。
制备例2
3，4-二氯-δ-氧代苯基戊酸乙酯，化合物IV.5
将5克3，4-二氯-δ-氧代-苯基戊酸加入60ml的乙醇制成悬浮液，并 加入1ml的浓硫酸。将所得的混合物在加热回流的条件下搅拌5小时。 然后对所得的反应混合物实施减压浓缩，再用乙醚吸收所得残余物。用 水洗涤所得的有机相，然后用稀氢氧化钠溶液洗涤，最后用水再洗一次。 用硫酸镁干燥所得的混合物，减压蒸去溶剂，即可得到2.6克棕色油状的 目标产物(产率＝47％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：8.05(d，J＝1.5Hz，1H)；7.80(dd，J＝1.5Hz， J＝8.1Hz，1H)；7.56(d，J＝8.1Hz，1H)；4.13(q，J＝7.4Hz，2H)；3.02(t，J＝6.6Hz， 2H)；2.42(t，J＝6.6Hz，2H)；2.05(q，J＝6.6Hz，2H)；1.25(t，J＝7.4Hz，3H)。
制备例3
4-氯代-3-甲氧基-ε-氧代苯基己酸甲酯，化合物IV.6
a)α-乙酰基-4-氯代-3-甲氧基-β-氧代苯基丙酸乙酯
将500μl乙醇和48-四氯化碳加入237mg镁中，然后加入4ml甲 苯、1ml乙醇和920μl乙酰乙酸乙酯。搅拌所得的反应混合物直至镁消 失。将所得的反应混合物冷却至-5℃，然后加入含2克(4-氯代-3-甲氧基) 苯甲酰氯的1ml甲苯。在此温度下搅拌2小时30分钟后，将所得的反应 混合物在50℃下持续加热30分钟。加入冰/硫酸混合物。所得的混合物 用甲苯萃取后，减压蒸去溶剂。
b)4-氯代-3-甲氧基-β-氧代苯基丙酸乙酯
向2.2克a)所得的化合物中，相继加入由295mg氢氧化钠与10ml 水组成的溶液、787mg氯化铵和1ml氢氧化铵。将反应混合物在50℃下 加热3小时，再使其回流1小时30分钟，最后在室温下放置48小时。 所得的混合物用乙酸乙酯萃取后，减压蒸去溶剂。为了重新溶解沉淀， 加入几滴乙酸乙酯，然后加入石油醚。滤除沉淀，对滤液实施减压蒸镏。
c)2-(4-氯代-3-甲氧基-苯甲酰基)己二酸二乙酯
将b)所得的残余物逐滴加入由在4ml乙醇中加入206mg钠而得到 的乙醇钠溶液。将所得的反应混合物加热回流45分钟，然后将其冷却至 40℃，并在此温度下加入1.28ml 4-溴代丁酸乙酯。将所得的反应混合物 加热回流4小时30分钟。等反应混合物冷却到室温后，将其过滤再用乙 醇洗涤。所得的混合物用乙酸乙酯萃取后，减压蒸去溶剂。将所得的残 余物用硅胶色谱法纯化，所述硅胶色谱法的洗脱剂先后为95/5和9/1的 石油醚/乙酸乙酯混合物(体积比)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.48(d，1H)；7.43(dd，1H)；7.36(d，1H)； 4.17(t，1H)；4.05(quad，2H)；4.01(quad，2H)；3.87(s，3H)；2.26(t，2H)；1.94(m， 2H)；1.58(m，2H)；1.14(t，3H)；1.08(t，3H)。
d)4-氯代-3-羟基-ε-氧代苯基己酸
将2.3ml氢溴酸加入390mg由c)所得的化合物。将所得的反应混合 物加热回流4小时。等所得的混合物冷却到室温并用乙酸乙酯萃取后， 再用10％碳酸钠水溶液洗涤所得的有机相。采用1N盐酸水溶液将所得 的水相酸化至pH＝1，然后用乙酸乙酯进行萃取。干燥所得的有机相，然 后对其实施减压浓缩。
1H NMR(300MHz，DMSO)：7.50(m，3H)；2.58(m，2H)；2.25(m，2H)； 1.55(m，4H)。
e)化合物IV.6
将150mg由d)中所得的化合物、182mg碳酸钾和110μl硫酸二甲 酯加入2ml丙酮制成混合物，并将其加热回流15小时。将其过滤后，减 压蒸去溶剂。用乙酸乙酯萃取后，再次蒸去溶剂。用乙酸乙酯重新溶解 所得的残余物，并加入几滴石油醚。滤除沉淀，并蒸发所得的滤液。
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.54(d，1H)；7.46(m，2H)；3.97(s，3H)； 3.67(s，3H)；2.98(t，2H)；2.39(t，2H)；1.75(m，4H)。
制备例4
5-溴代-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.1
将1.5克化合物IV.2、1.74克4-溴代苯肼盐酸盐和0.71克氯化锌加 入10ml乙酸，从而制得混合物。将所得的混合物加热至65-70℃，并在 此温度下持续搅拌5小时。将其冷却后，加入15ml水和20ml乙酸乙酯， 然后将所得的反应混合物过滤。所得的滤液用20ml乙酸乙酯萃取两次。 用水洗涤所得的有机相，将其用硫酸镁干燥后，减压蒸去溶剂。由此得 到1.55克米黄色固体。
熔点＝112-114℃。
按相同的方法制备以下的化合物：
2-(3，4-二氟苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.2；熔点＝ 118-120℃。
2-(4-氯苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.3；熔点＝ 160-165℃。
5-溴代-2-(4-氟代苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.4；熔点＝ 96-98℃。
2-(3，4-二氯苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丙酸乙酯，化合物III.5；熔点＝ 135-138℃。
2-(5-氯代-2-噻吩基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.6；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.50(s，1H)；7.92(d，1H)；7.37(dd，1H)； 7.33(d，1H)；7.24(d，1H)；7.18(d，1H)；3.58(s，3H)；2.85(t，2H)；2.39(t，2H)； 1.82(q，2H)。
2-(4-氯代-3-乙基苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.7；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.97(s，1H)；7.87(d，1H)；7.39(dd，1H)； 7.36(d，1H)；7.33(d，1H)；7.23(dd，1H)；7.08(d，1H)；3.55(s，3H)；2.75(m，4H)； 2.27(t，2H)；1.93(q，2H)；1.22(t，3H)。
2-(4-氯代-3-甲氧基苯基)-5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物III.8；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.4(s，1H)；7.95(s，1H)；7.55(d，1H)； 7.38(dd，1H)；7.32(d，1H)；7.24(d，1H)；7.21(dd，1H)；3.95(s，3H)；3.58(s，3H)； 2.85(t，2H)；2.40(t，2H)；1.85(m，2H)。
制备例5
2-(3，4-二氯苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.1
将由1.6克化合物III.1、2.66克氰化亚铜和7ml N-甲基-2-吡咯烷酮 组成的混合物加热回流16小时。然后将所得的反应混合物冷却，并加入 30ml水。将所得的混合物在室温下持续搅拌15分钟，然后加入20ml 乙二胺。随后将所得的混合物用40ml甲苯萃取两次，将所得的有机相合 并后，用30ml饱和氯化钠溶液洗涤三次，然后用硫酸镁干燥。将所得的 混合物过滤后，减压蒸去溶剂。用乙酸乙酯溶解上述蒸发残余物，然后 加入几滴环己烷。滤出目标产物，并对其实施减压干燥；熔点＝ 158-160℃。
按相同的方法制备以下的化合物：
5-氰基-2-(3，4-二氟苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.2；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：8.3(s，1H)；7.99(s，1H)；7.45(dd，1H)； 7.42(d，1H)；7.36(m，1H)；7.28(m，2H)；3.65(s，3H)；2.88(t，2H)；2.37(t，2H)； 2.00(q，2H)。
2-(4-氯苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.3；熔点＝ 135-137℃
5-氰基-2-(4-氟代苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.4；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：7.98(s，1H)；7.53(m，2H)；7.42(m，2H)； 7.19(m，2H)；3.60(s，3H)；2.88(t，2H)；2.36(t，2H)；2.00(q，2H)。
5-氰基-2-(3，4-二氯苯基)-1H-吲哚-3-丙酸乙酯，化合物II.5；熔点＝ 148-151℃。
2-(5-氯代-2-噻吩基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.6；熔点 ＝143-144℃。
2-(4-氯代-3-乙基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.7；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.90(s，1H)；8.17(s，1H)；7.61(d，1H)； 7.57(d，1H)；7.50(m，3H)；3.55(s，3H)；2.88(t，2H)；2.79(quad，2H)；2.40(t， 2H)；1.86(q，2H)；1.25(t，3H)。
制备例6
5-碘代-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物VII.1
根据类似于制备例4描述的方法，以4-碘代苯肼和6-氧代己酸甲酯 为原料，制备化合物VII.1。
1H NMR(300MHz，DMSO)：10.95(s，1H)；7.85(s，1H)；7.32(dd，1H)； 7.19(d，1H)；7.13(d，1H)；3.59(s，3H)；2.66(t，2H)；2.35(t，2H)；1.85(q，2H)。
制备例7
5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物VI.1
将由1.586克化合物VII.1、602mg氰化钾、88mg碘化铜、267mg 四(三苯基膦)钯及6ml四氢呋喃组成的混合物在加热回流的条件下搅拌8 小时。搅拌2小时和6小时后，再加入88mg碘化铜和267mg四(三苯 基膦)钯。等反应混合物冷却到室温后，加入200ml乙酸乙酯，然后用硅 藻土过滤所得的混合物。所得的有机相用水洗涤两次，再用饱和氯化钠 溶液进行洗涤，然后用硫酸镁干燥。减压蒸去溶剂。用硅胶色谱法纯化 所得的残余物，所述色谱法的洗脱剂为7/3(体积比)的石油醚/7酸乙酯混 合物；熔点＝75-76℃。
制备例8
2-溴代-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物V.1
将3克化合物VI.1加入125ml四氯化碳并制成溶液，向所得溶液中 加入2.56克N-溴代琥珀酰亚胺。将所得的反应混合物在加热回流的条件 下搅拌4小时，然后将其冷却至室温。加入200ml乙酸乙酯和200ml热 水。用热水洗涤所得的有机相，然后将其用硫酸镁干燥。减压蒸去溶剂。 所得的残余物用石油醚和二氯甲烷吸收溶解。除去上述的石油醚后，滤 除生成的沉淀，并用甲苯洗涤。蒸发所得的滤液，并将所得的残余物用 硅胶色谱法纯化，所述的色谱法的洗脱剂为8/2(体积比)的石油醚/乙酸乙 酯混合物；熔点＝105-106℃。
制备例9
2-(4-氯代-3-甲基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.8
将73mg化合物V.1和58mg 4-氯代-3-甲基苯基硼酸加入4.7ml甲 醇和4.7ml甲苯中，从而制成溶液。然后边搅拌边加入29mg氯化锂、 13mg四(三苯基膦)钯和0.57ml 1M的碳酸钠溶液。将所得的反应混合物 在回流的条件下持续搅拌1小时，然后减压蒸去溶剂。所得的残余固体 用硅胶色谱法纯化，所述色谱法的洗脱剂为85/15(体积比)的石油醚/乙酸 乙酯混合物。
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.80(s，1H)；8.17(s，1H)；7.65(s，1H)； 7.58(d，1H)；7.48(m，3H)；3.55(s，3H)；2.88(t，2H)；2.38(t，2H)；1.89(q，2H)。
按类似的方法制备以下的化合物：
5-氰基-2-(4-氟代-3-甲基苯基)-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.9；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.88(s，1H)；8.13(s，1H)；7.58(d，1H)； 7.54(m，3H)；7.31(m，1H)；3.58(s，3H)；2.88(t，2H)；2.38(t，2H)；1.86(q，2H)。
2-[4-氯代-3-(三氟甲基)苯基]-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物 II.10；
2-(3-氯代-4-氟代苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.11；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.90(s，1H)；8.20(s，1H)；7.85(d，1H)； 7.66(m，1H)；7.61(d，1H)；7.49(m，2H)；3.55(s，3H)；2.88(t，2H)；2.40(t，2H)； 1.85(q，2H)。
2-(4-氯代-3-氟代苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.12；
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.93(s，1H)；8.21(s，1H)；7.76(d，1H)； 7.68(dd，1H)；7.50(m，3H)；3.55(s，3H)；2.90(t，2H)；2.39(t，2H)；1.84(q，2H)。
2-(4-硝基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.13；
1H NMR(300MHz，CDCl3)：12.10(s，1H)；8.38(d，2H)；8.27(s，1H)； 7.95(d，2H)；7.54(m，2H)；3.56(s，3H)；2.95(t，2H)；2.42(t，2H)；1.88(q，2H)。
2-(4-氰基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.14；熔点＝ 149-151℃
2-[4-(三氟甲氧基)苯基]-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.15； 熔点＝142-143℃
制备例10
2-(4-氯代-3-甲氧基苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸甲酯，化合物II.16
根据类似于制备例7所用的方法，由化合物III.8制备化合物II.16。
1H NMR(300MHz，DMSO)：11.90(s，1H)；8.19(s，1H)；7.58(d，1H)； 7.52(d，1H)；7.48(dd，1H)；7.35(dd，1H)；7.24(dd，1H)；3.98(s，1H)；3.57(s， 3H)；2.91(t，2H)；2.40(t，2H)；1.88(m，2H)。
实施例1
2-(3，4-二氯苯基)-5-氰基-1H-吲哚-3-丁酸
将80mg化合物II.1加入3ml二氧六环，制得混合物。在其中加入 1ml的1N氢氧化钠水溶液，再将所得的反应混合物在回流的条件下搅拌 1小时30分钟。然后减压除去溶剂，并用3ml水吸收溶解所得的残余物。 所得的溶液用1N盐酸酸化至pH＝1。过滤分离出沉淀，并用硅胶色谱法 纯化所得沉淀，所述色谱法的洗脱剂为9/1(体积比)的二氯甲烷/甲醇混合 物；熔点＝190-195℃。
按类似的方法，制备以下表1所示的实施例2至16中的目标产物：
表1
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 组合支架再灌注系统 | 2020-05-11 | 790 |
| C1抑制剂在预防缺血-再灌注损伤中的应用 | 2020-05-13 | 484 |
| 减少淤滞引起的再灌注损伤的系统 | 2020-05-11 | 410 |
| 用于治疗再灌注损伤的方法 | 2020-05-11 | 672 |
| GW3965用于制备防治肾缺血再灌注损伤药物的应用 | 2020-05-12 | 300 |
| 化合物对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 | 2020-05-12 | 562 |
| 用腺苷受体拮抗剂治疗缺血再灌注损伤的方法 | 2020-05-13 | 373 |
| 用于血管再形成和灌注的设备与方法 | 2020-05-12 | 109 |
| 一种腹腔镜外科手术用气体灌注和再循环系统 | 2020-05-13 | 127 |
| C1抑制剂在预防缺血-再灌注损伤中的应用 | 2020-05-13 | 503 |
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