本发明涉及一种以β-1，3-葡聚糖为有效成分的抗缺血与再灌 注损伤药物及其在心血管保护领域的用途。

对于血液循环系统来说，缺血(缺氧)及其再灌注都可造成 缺血区组织和器官的损伤甚至坏死。缺血通常是导致组织缺氧的 直接原因。对于心肌、大脑等耗氧量大、对氧需求敏感的组织器 官来说，缺血持续时间的长短通常是决定其是否可以挽救和治疗 的决定性因素。以急性心肌梗塞(AMI)为例，心肌损伤最初主 要为缺血性损伤，随着缺血时间的延长，再灌注后通常会表现出 更严重的心肌损伤。一般认为，心肌缺血15分钟以内的再灌注损 伤通常是较轻的，一般无不可逆性坏死现象；缺血30分钟以上 的再灌注损伤通常趋于严重，心肌组织出现结构性损伤；缺血4- 6小时以上的再灌注心肌已基本无法挽救。由于AMI患者从发病 开始到被送往医院诊治耗时通常已超过30分钟，再加上药物溶栓 尚需一段时间，造成严重的再灌注损伤通常难以避免。因此临床 治疗AMI的最重要步骤就是及早进行再灌注疗法，其次还需要增 加必要的抗再灌注损伤措施。因为在缺乏有效保护措施的情况 下，再灌注后通常又会造成更严重的心肌损伤，是造成AMI患者 死亡率高、预后差的重要原因。

所谓“再灌注损伤”，即“缺血-再灌注损伤”(Ischemia- Reperfusion Injury)，是指遭受一段时间缺血(循环障碍)的组 织(或器官)在恢复血液灌注(循环)后往往发生更严重的、甚 至不可逆的细胞损伤和坏死。该现象七十年代末期才被发现。以 AMI溶栓治疗为例，再灌注损伤可以导致如下四种后果：1、再灌 注性心肌死亡，属于不可逆损伤；2、血管再灌注损伤，主要指再 灌注期的无再流现象，与微血管内皮的肿胀、白细胞堵塞等有 关；3、心肌顿抑(stunned myocardium)，指存活心肌的机械 功能低下，属于可逆性损伤；4、再灌注心率失常，这种损伤的范 围和程度与浸润白细胞的数量和炎症反应密切相关，属于可逆性 损伤，但有潜在致命性。

随着心血管外科的蓬勃发展，近年来体外循环技术目新月 异，心脏手术成功率逐年上升，许多复杂的先天性心脏病、急 诊、高龄、重危患者的心脏血管手术也已日趋成熟，微创外科已 经应用于心脏手术，但是绝大多数心血管手术仍然需要心脏停 搏，使得术中心肌缺血与再灌注损伤难以避免。应当说明的是， 虽然缺血前预适应技术在一定程度上可以减轻再灌注损伤，但由 于许多情况下缺血已经发生，如AMI、脑卒中等急性事件，缺血 前预适应技术难以应用，使患者面临严重后遗症甚至生命的危 险，况且缺血预适应技术抗再灌注损伤的效果也很有限，而且还 存在伦理道德方面的潜在问题。因此研发抗缺血与再灌注损伤药 物是非常必要的。由于所谓″缺血″可以是更广义性概念，如血液 低灌流(如休克等)状态也能产生该现象，因此再灌注损伤可以 涉及心、脑、肝、肾、肺、消化道等许多组织和器官，因此其影 响具有广泛性，后果也是非常严重的，可以导致相关组织和器官 的损伤、坏死以及功能衰竭，有较高的死亡率和后遗症，目前尚 无良好的防治方法。

对于急性缺血性疾病的治疗来说，再灌注损伤是临床经常遇 到的医疗难题。目前抗再灌注损伤的防治药物尚处于空白状态， 有些药物(如钙离子拮抗剂维拉帕米)虽有一定抗再灌注损伤作 用，但疗效有限。抗缺血性损伤药物目前虽然已有不少，但疗效 也有待提高。因此，开发抗再灌注损伤用途的心血管保护药物无 疑具有重要的临床应用价值，如果该药物还兼有抗缺血性损伤作 用，无疑具有更大的医药开发价值。因为既能抗缺血性损伤又能 抗再灌注损伤的药物，无疑对心血管系统具有更全面的保护作 用。

β-1，3-葡聚糖(β-1，3-glucan)是一类重要的免疫活性分 子，其天然提取物的分子量通常为几万至几百万道尔顿(Dalton)， 已往的研究和应用主要集中于一些大分子β-1，3-葡聚糖，较有代 表性的如香菇多糖(Lentinan)，平均分子量为约400- 800KD(Kilo Dalton)，有较强的抗肿瘤、抗病毒和增强免疫机能等 作用，此类分子的药用研究大多集中于此方面；而有关β-1，3-葡 聚糖较小分子的研究和应用则很少，用于其它医药用途的研究就 更少。总之，本发明所述β-1，3-葡聚糖在抗缺血与再灌注损伤的 医药用途方面尚无研究报道。

本发明旨在推出一种以β-1，3-葡聚糖为有效成分的抗缺血与 再灌注损伤药物并将其用于相关疾病的预防和治疗。

药理研究表明，β-1，3-葡聚糖不但具有显著的抗缺血性损伤 作用，还具有显著的抗再灌注损伤作用。以分子量分布为10- 100KD的β-1，3-葡聚糖为例，20-150mg/kg静脉给药能显著增强 小鼠的常压耐缺氧能力，其中大剂量效果非常显著；45mg/kg静 脉给药能显著降低冠脉结扎犬心肌缺血引起的心电图ST段抬高 程度，对犬急性心肌梗死再灌注后出现的心率失常有非常显著的 预防作用，可显著降低犬急性心肌梗死再灌注后的死亡率，对防 止缺血区再灌注心肌坏死也有较好作用。不仅如此，该β-1，3-葡 聚糖还是一种优良的炎性(渗出)抑制剂，能显著抑制急性炎症反 应，对于降低心、脑血管急性损伤后导致的炎性损伤和肿胀反应 也具有重要意义。该作用注射与口服给药均有效。

本发明所述β-1，3-葡聚糖具有良好的安全性，尤其是其中优 选的中小分子量组分。以分子量分布为10-100KD的β-1，3-葡聚 糖组分为例，小鼠静脉给药或腹腔给药的LD50均不低于 1500mg/Kg，口服给药测不出LD50，组织相容性良好，无刺激、 过敏等不良反应，也无致畸、致突变等毒性。

本发明推出的抗缺血与再灌注损伤药物具有如下主要特征：

1.以β-1，3-葡聚糖为有效成分；

2.β-1，3-葡聚糖不但具有显著的抗缺血性损伤作用，还具有 显著的抗再灌注损伤作用；

3.β-1，3-葡聚糖的分子量选择范围为0.5-3000KD(Kilo Dalton)，较好的选择范围为1-500KD，更优的选择范围为2- 100KD。

本发明所述以β-1，3-葡聚糖为有效成分的抗缺血与再灌注损 伤药物，其临床用途包括用于急性心肌梗塞、脑卒中、休克、冠 心病及其介入治疗、心血管手术、肠缺血、组织与器官移植等疾 病的急救和治疗，这些疾病均以血液循环系统中发生或将要发生 缺血和(或)再灌注损伤为特征。其中所述的用法包括给该病患 者使用一段时期有效量的β-1，3-葡聚糖直到不再需要使用为止。

关于以β-1，3-葡聚糖为有效成分的抗缺血与再灌注损伤药物 的临床应用，一般原则是发病后尽早使用，只有这样才能起到更 好的抗缺血和再灌注损伤作用。以急性心肌梗塞的临床急救来 说，尽早给患者滴注本发明所述药物，不但可以抗缺血性损伤， 为溶栓等再灌注疗法创造出更多的心肌耐受时间，还可为随后可 能发生的再灌注损伤发挥更好的防治作用。对于脑卒中患者来 说，尽早给药对于增强大脑的耐缺氧能力也具有重要意义。总 之，无论对于抗缺血性损伤来说，还是对于抗再灌注损伤来说， 都应当尽早使用该药物，至少应当与再灌注治疗措施同时进行， 若能在再灌注前先行则更好。若在再灌注以后进行则通常已经晚 了，难以取得良好效果。对于手术、器官移植等过程可以控制的 缺血与再灌注来说，也应尽可能预防性用药。另外，本发明所述 抗缺血与再灌注损伤药物也可用于取代临床缺血预适应技术的应 用。

本发明涉及的β-1，3-葡聚糖的来源非常丰富。β-1，3-葡聚糖 在自然界的存在和分布相当广泛，通常是作为植物和微生物的细 胞壁结构成分大量存在，其中最主要的来源通常还是真菌的子实 体、菌丝体或其培养液。β-1，3-葡聚糖是一个大家族，不同来源 和制备工艺得到的分子在枝链的连接(键型)、枝链的丰度、以 及分子量等方面可能有所差别。根据枝链连接方式的不同，β- 1，3-葡聚糖主要有如下类型：(1)不含枝链的线性β-1，3-葡聚 糖，如凝胶多糖(Curdlan)，加热冷却后可形成凝胶，提取自产 碱杆菌属(Alealigenes)和土壤杆菌属(Agrobacterium)微生 物；(2)富含β-1，6-葡萄糖枝链的β-1，3-葡聚糖，如在香菇 (Lentinus edodes)的子实体或菌丝体中提取的香菇多糖 (Lentinan)，在裂裥菌(Schizophyllan Commune)的培养液 中提取的裂裥菌多糖(Schizophyllan)，在茯苓(Pachyma Cocos Fr.)中提取的茯苓多糖(Pachyman)，在猪苓(Grifola frondosa)中提取的猪苓多糖(Grifolan)，在昆布(Laminaria japonica)中提取的昆布多糖(Laminaran)，以及在Sclerotinia sclerotiorum(IFO 9395)中提取的SSG[Chem.Pharm. Bull，1986b，34：1362]等均属此类；(3)富含β-1，4-葡萄糖枝链 的β-1，3-葡聚糖，如从地衣(Lichen)和异地衣(Isolichen)中 提取的地衣多糖(Lichenan)和异地衣多糖(Isolichenan)等。 这些多糖的制备和分析方法是已知的，可参见有关的技术文献。

本发明所述β-1，3-葡聚糖，其特征在于分子的主链结构由β- 1，3-葡萄糖苷键连接构成。因此，本发明所述β-1，3-葡聚糖的特 征在于允许在β-1，3-葡聚糖主链上含有较少量的包括β-1，6-或β- 1，4-葡萄糖结构在内的枝链存在。即本发明所述β-1，3-葡聚糖， 是指以β-1，3-葡萄糖苷键为分子主链结构的β-葡聚糖的概括性统 称，β-1，3-葡聚糖是分子的特征性结构部分。

本发明所述β-1，3-葡聚糖作为分子的主链结构，是分子活性 和性质的主要决定因素，枝链状况或修饰基团对分子主链活性的 影响一般是有限的。本发明所述β-1，3-葡聚糖的特征在于包括经 过化学修饰的β-1，3-葡聚糖衍生物及其生理上能够接受的盐类。

分子量大小是决定β-1，3-葡聚糖结构与性质的重要因素 [Chem.Pharm.Bull.1990，38(2)：477]。一般而言，β-1，3-葡聚 糖的分子量越大水溶性越差、粘度越大，免疫刺激作用也越强， 但人体的耐受性也越低，副作用也越多，如大分子β-1，3-葡聚糖 静脉给药容易导致微血管栓塞等。相比之下，较小分子量的β- 1，3-葡聚糖水溶性较好，人体的耐受性也更好，性质更温和，副 作用也更少，更适合用于静脉给药和用于抗缺血与再灌注损伤。 因此，可溶性的、较小分子量的β-1，3-葡聚糖通常是本发明所述 β-1，3-葡聚糖的较好选择。

本发明虽然并不想限局对所述β-1，3-葡聚糖抗缺血与再灌注 损伤药理作用机理的探讨。但本发明人认为有必要指出，β-1，3- 葡聚糖的抗缺血与再灌注损伤作用可能与其对巨噬细胞(MΦ) 和中性粒细胞(Neutrophil)等的如下调节作用有关。因为有研究 表明，包括巨噬细胞、中性粒细胞等在内的单核吞噬细胞含有β- 1，3-葡聚糖受体(CR3，CD11b/CD18)。一方面，MΦ广泛分布于包 括血管内皮细胞在内的几乎所有组织中，对心血管组织的细胞保 护、修复和再生具有重要的调节和指导作用。本发明所述β-1，3- 匍聚糖，尤其是更优选择的组分，对MΦ具有良好的非炎性活化 作用，静脉给药后可通过与MΦ的识别反应作用于血管内皮细胞 等组织，增强心血管系统的自我保护、抗损伤和修复、再生机 能。另一方面，β-1，3-葡聚糖与中性粒细胞表面CR3的结合，还 可能阻断或抑制中性粒细胞与血管内皮细胞表达的细胞间粘附因 子-1(ICAM-1，CD54)的结合，抑制中性粒细胞的粘附和渗出， 从而降低炎性反应和炎性损伤，对降低缺血与再灌注损伤可能有 重要作用。

已知MΦ最小可识别聚合度(DP)为3～7的β-1，3-葡聚糖 (DP＝3～7)。即β-1，3-葡聚糖对MΦ等免疫细胞的调节作用对 分子量的最小要求可降至约0.5～1.1KD[J.Immunol 1989，142：959；Dev.Comp.Immunol，1994，18(5)：397]。因 此，本发明涉及的β-1，3-葡聚糖对分子量范围的限定最小约为 0.5KD。

本发明所述β-1，3-葡聚糖的分子量选择范围为0.5-3000KD (Kilo Dalton)，较好的选择范围为1-500KD，更优的选择范围为 2-100KD。

天然提取的β-1，3-葡聚糖的分子量通常都在几十万到几百万 道尔顿之间，如要使用分子量较小的β-1，3-葡聚糖组分，可对大 分子进行适度降解，以达到所需的分子量和性质要求。降解β- 1，3-葡聚糖的已知方法很多，常用的有酸(如HCl，HCOOH)、碱 (如NaOH)、酶(如β-葡萄糖苷水解酶)水解，以及热降解 (如大于150℃的高温)和机械破碎(如超声波)等，通过控制 反应物的浓度、温度和时间等条件可获得适宜大小的反应混合 物。由于分子量越大的多糖在乙醇溶液中的溶解度越小，因此通 过控制乙醇的浓度即可将所需大小的多糖组分从该反应混合物中 分级分离出来，再配合适当的超滤、层析或吸附等方法进一步纯 化，即可获取高纯度所需大小的β-1，3-葡聚糖组分，经浓缩和干 燥可制成固体原料药待用。β-1，3-葡聚糖的常规制备、质控及分 析等方法属于已知常规技术，可参见有关的技术文献。

β-1，3-葡聚糖衍生物制备的常用方法包括水解、甲基化、羧 基化、羧甲基化、胺基化、N-乙酰化、羟乙基化、硫酸化、磷酸 化等。由于这些衍生化修饰对分子主链结构的影响通常是有限 的，但对改善分子的某些性质并降低副作用可能是有益的，例如 羧甲基化的β-1，3-葡聚糖水溶性增强，补体(旁路)激活作用减 弱等。因此，β-1，3-葡聚糖的衍生物也包含在本发明的精神之 中。

本发明所述以β-1，3-葡聚糖为有效成分的抗缺血与再灌注损 伤药物的其它特征还包括：

1、β-1，3-葡聚糖的有效剂量范围通常为每人每天0.5-

   80mg/kg(体重)，更优的选择为每人每天5-50mg/kg；

2、给药途径以注射给药为主，其中包括静脉滴注、静脉注

   射，也可采用肌肉、腹腔注射，以及口服给药；

3、在组成上包括有效剂量的β-1，3-葡聚糖和药学上可以接

   受的载体、辅料和(或)药物；

4、药物的剂型以注射剂型为主，也包括口服剂型；

5、有效剂量的β-1，3-葡聚糖还可以与药学上可以接受的其

   它药物组成复方药物或药物组合物。

非静脉途径给药主要用于疾病的维持期治疗或长期预防性治 疗，此时的应用可选用较小剂量。总之，具体应用时，不同分子 量范围的β-1，3-葡聚糖组分使用的剂量可以有所差别，如较小分 子量的组分用药剂量可以相对较大些，大分子组分剂量可以较小 些；另外，根据病人、病情、以及防治进程等不同情况和需要， 剂量也可有所调整与变化。

本发明所述β-1，3-葡聚糖的应用可以是其含量较高的纯品， 也可以是含有有效量的β-1，3-葡聚糖的混合物，但其药物制剂均 应符合注射剂的质量要求。既可以申报西药(化学药物)也可以 申报中药(天然药物)。

制备注射剂的例子，包括将符合注射剂质量要求的高纯度β- 1，3-葡聚糖按有效剂量和所需量的液体基质混合制作而成，该基 质的例子包括水、生理盐水或其它缓冲液，其中还可添加其它有 益成分或辅料，但均应符合注射剂的有关质量要求。制备复方药 物或组合物的例子，包括将有效剂量的β-1，3-葡聚糖和其它药物 成分混合制成某些剂型。总之，制备这些剂型的方法在药剂学中 是已知和常规的，该领域的技术人员根据需要可以理解和实施， 在此不必赘述。

以下是本发明的实施例，该叙述的目的是为了更好地说明本 发明如何实施及其效果。目的仅在于说明，而并不以任何形式限 制本发明。

                      实施例1

          β-1，3-葡聚糖原料药与注射液的制备

取市售香菇子实体或其菇梗(干)，经粗粉碎后再用微粉碎机 粉碎并过100目筛筛出菇粉。反应罐中加入1份重量的菇粉，再 加入19倍重量的自来水，然后搅拌均匀，加热煮沸15分钟排除 空气，然后密闭反应罐，继续加热升温至165℃并维持3小时， 停止加热，冷却至100℃以下后，放气开罐，搅匀后用滤布过 滤，滤液在搅拌下加入等体积95％食用乙醇，继续搅拌约半小时 后6000rpm×15min离心，取上清液，用超滤法(截留分子量为 10KD)浓缩至约原体积的1/10后，补加蒸馏水至原体积，再同 上重复浓缩两次以充分纯化之，浓缩液中加入1％766型粗粒活性 炭(w/w)，搅拌均匀，加热煮沸约20分钟，用3号垂熔漏斗过 滤，滤液用喷雾干燥法(进风温度150℃/出风温度80℃)制成干 粉，即为β-1，3-葡聚糖原料药。定量分析采用常规“酚-硫酸” 法。经检验，β-1，3-葡聚糖原料药呈米色至浅褐色粉末，有吸湿 性，纯度一般不低于95％，结构为富含β-1，6-葡萄糖枝链的β- 1，3-葡聚糖，分子量分布约10-50KD，水溶性良好，无热源反 应，收率约1-2％(w/w)。

0.5％β-1，3-葡聚糖/0.9％氯化钠注射液的制备：按处方量要求 称取上述β-1，3-葡聚糖原料药和药用氯化钠，加适量注射用水搅 拌溶解，加入1％766型粗粒活性炭(w/w)，搅拌均匀，加热煮 沸约20分钟，用3号垂熔漏斗趁热过滤，滤液调节PH至7，补 加注射用水至设计全量，经3号垂熔漏斗过滤后，罐装于100ml 输液瓶中，每瓶100ml，加盖封口，115℃灭菌30分钟，冷却后 即为所需药物制剂。该制剂为介于无色-浅棕色间的澄明溶液，含 量为每瓶约500mg/100ml。该制剂过程应按照注射制剂的规范要 求进行。对于药物制剂领域的专业技术人员来说，该制剂过程属 于常规技术。

                      实施例2

      β-1，3-葡聚糖对小鼠常压耐缺氧能力的影响

昆明种小鼠(购自山东大学动物房)36只，体重18- 22g(雌)，随机分组，每组6只。试验样品为β-1，3-葡聚糖生理盐 水注射液(分子量分布为10-100KD)。每鼠尾静脉给药 0.5ml(IV)，1小时后将小鼠放入内置20g钠石灰 (10gNaOH+10gCaCO3)的250ml广口并磨口的试剂瓶中，立即 盖严瓶塞并开始计时，直至小鼠呼吸停止时停止计时。统计并比 较各组结果。(参见表1)

结果显示：β-1，3-葡聚糖对小鼠常压耐缺氧能力有非常显著 的提高作用(p＜0.01)。其中100mg/Kg以上的大剂量组可使小 鼠耐缺氧能力增强60％以上。由于心肌和大脑是对缺氧(缺血) 最敏感的组织器官之一，因此本实验结果提示该β-1，3-葡聚糖对 增强小鼠心、组织的抗缺血(缺氧)能力可能有显著作用。

表1、β-1，3-葡聚糖对小鼠耐缺氧能力的影响： 组别      剂量     给药      耐缺氧时间     耐缺氧增强    P值

    (MG/KG)    途径        (MIN)           率(％) 对照    生理盐水    IV       31.9±4.7         0 样品      20        IV       40.6±4.5         27.3      0.0083

      30        IV       39.7±8.9         24.5      0.089

      60        IV       36.0±6.8         12.9      0.252

      100       IV       53.2±11.2        66.8      0.0016

      150       IV       51.3±12.1        60.8      0.0043 注：耐缺氧增强率(％)＝(试验组-对照组)/对照组×100％

                        实施例3

      β-1，3-葡聚糖抗急性心肌缺血与再灌注损伤作用

实验方法：健康杂种犬(由第二军医大学实验动物中心提 供)8只，雄雌各半，随机分为2组。动物称重后以3％戊巴比 妥钠30mg/kg静脉注射麻醉。气管插管，接麻醉呼吸机(SC- M5型，上海医疗仪器厂)，开胸后行机械通气，呼吸频率16- 18次/分，吸气与呼气之比为1∶2，潮气量350-550ml，并根 据血气分析结果调整通气指标。以针状电极插入四肢及胸前皮 下，监测标准肢导及V1、V3、V5心电图。沿胸骨左缘第3肋间 开胸，并切断第4肋骨充分暴露心脏。剪开心包并作心包吊床。 静脉注射利多卡因2mg/kg预防心律失常。分离左冠状动脉前降 支起始部位，于前降支下绕两段1号丝线打松结，将一段直径1 mm的钢丝插入第一松结内，结扎第一结，将钢丝与冠状动脉一 起结扎，抽出钢丝。30分钟后松开第一结，用动脉夹将血管夹闭 (同时静脉注射给药)。观察完全阻断血流后5分、10分、30分 和90分钟心电图变化。90分钟时松开动脉夹，记录恢复血流 后5分、15分、30分和1小时、2小时的心电图变化和心率失 常情况，从第一次结扎到实验结束共4小时。然后取心脏，称全 心重量，沿主动脉根部左右冠状动脉开口处加压注入10％碳素墨 汁10ml，显示心肌非缺血区(被染黑的心肌)和缺血区(未被染 黑区)，剪取缺血区称重。然后将缺血区切成0.5～1cm厚的 心肌片，用生理盐水洗净，置37℃ 0.025％氯化硝基四氮唑蓝 (NBT)液染色。染色过程中不时摇动染色液使之与心肌充分接 触。30分钟后立即用水冲去多余染料。梗死心肌不着色，非梗死 心肌被染成着黑色，剪去着色部分，将未着色的梗死区称重。

试验样品为0.55％β-1，3-葡聚糖的0.9％氯化钠注射液(分子 量分布为10-100KD)。剂量为45mg/kg，给药次数为一次。给 药方法为静脉注射，与临床拟用药途径一致。对照组于冠状动脉 完全结扎前30分钟静脉注射生理盐水(8ml/kg)；试验样品组 给药容积和条件与生理盐水对照组相同。

观察指标：给药后主要观察指标为心率、死亡率、心律失 常、胸导心电图ST段抬高程度及心肌梗死范围等定量指标，具 体如下：

1、死亡率

2、心率：次/分

3、ST段抬高程度：ΔST

观察时间为给药后5、15、30分钟，和1、2、3、4小时。

4、心肌梗死程度：

    缺血区(g)：即冠脉结扎区(未被墨水染黑的心肌)

    梗死区(g)：即NBT染色未着色心肌

    心肌梗死率(％)：梗死心肌重/缺血区心肌重×100％

统计分析：试验结果以 x±S表示，采用非配对t检验法统 计，P＜0.05为具有显著性统计学差异。

试验结果：

1、对心电图ST段抬高程度的影响：

从表2中可见，试验样品组麻醉开胸犬心肌梗死后心电图ST 段抬高的程度与生理盐水组比较显著降低。

                   表2、心电图ST抬高程度(mv) 组别    结扎前                                   结扎后

              5min      15min     30min      1h         2h        3h        4h 对照    0         0.35      0.4       0.3        0.3        0.35      0.3       0.3 样品    0±0      0.22±          0.24±         0.20±            0.19±            0.17±         0.16±          0.16±

              0.04      0.04      0.04       0.02       0.03      0.02      0.02

2、对死亡率的影响：

从表3可知，再灌注后生理盐水对照组4只犬死亡3只，残 废(死亡)率达75％，残废原因为室颤，发生于再灌注后15分 钟左右；样品组死亡率为0，两组间死亡率比较有非常显著差异 (p＜0.001)。

            表3、缺血与再灌注后死亡率： 组别       动物数      死亡数        死亡率       P值

        (只)       (只)           (％) 对照组       4           3             75 样品组       4           0             0        ＜0.001

3、对心率的影响：

样品组对麻醉开胸犬心率的影响与对照组相比无明显差异。

4、对心肌梗死范围的影响：

从表4中可以看出，样品组能降低急梗再灌注犬的心肌梗死 范围，降低心肌肿胀率。

         表4、对麻醉犬急性心肌梗死范围的影响： 组别    动物数     心脏重量       缺血区重     梗死心肌重    梗死率

     (只)        (g)            (g)          (g)          (％) 对照      4       88.6           16.5          1.2             7.3 样品组    4       79.5±20.8     13.9±4.4     0.63±0.8       4.5

结论：

1、β-1，3-葡聚糖(分子量分布10-100KD)注射液45mg/kg 静脉注射可显著降低犬冠脉结扎后心肌缺血引起的ST段抬高程 度，大部分时间段与生理盐水组比较t检验相差显著。提示该β- 1，3-葡聚糖具有显著的抗缺血性损伤作用。

2、β-1，3-葡聚糖(分子量分布10-100KD)注射液45mg/kg 静脉注射对犬急性心肌梗死再灌注后出现的心律失常有非常显著 的预防作用，并可显著降低再灌注死亡率，对防止缺血与再灌注 后心肌坏死也有良好作用。提示该β-1，3-葡聚糖对心肌缺血与再 灌注损伤有非常显著的防治作用。

研究结果显示，β-1，3-葡聚糖具有显著的抗缺血与再灌注损 伤作用。作为一种以β-1，3-葡聚糖为有效成分的抗缺血与再灌注 损伤药物，在发生急性缺血性疾病后，如果能尽快给患者注射使 用该药物，可望显著降低缺血性损伤和再灌注损伤，对于挽救患 者的生命、减少并发症、以及改善预后等都有重要意义。

以上尽管我们描述了本发明的实施方案与效果，显然并不意 味着仅限于此。实际上，本发明的实施方案可以进行许多改变以 充分利用本发明的用途而不超出本发明的范围和精神。因此应该 理解，本发明的保护范围应当由所附权利要求书来限定，而不是 由以实施例方式表示的特定实施方案来限定。