光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸
技术领域
[0001] 本
发明涉及光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸及其制备方法，还涉及用于制备代谢改善解毒药物的用途及药物制剂。
背景技术
[0002] N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸，通用名为硫普罗宁，临床用于
治疗急慢性
肝炎、肝硬化等，具有很好的治疗肝脏
疾病的用途，且制备方法及药物制剂已多有公开。 中国
专利申请CN02129300.7公开了硫普罗宁药物制剂，中国药物化学杂志1997年3月第七卷第一期55-56页公开了硫普罗宁的合成工艺。但对于N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的光学活性即其左、右旋体未有任何报导。 大多数药物单一对映体疗效高，不良反应小，这称为优对映体；而无活性或活性低的对映体称为劣对映体，在很多情况下，劣对映体不仅没有疗效，而且还可能部分抵消对映体的作用，甚至产生严重的不良反应。 对映体药物在体内的药理活性、代谢过程有显著差距，表现出不同的
生物活性和药效。 在临床应用中由于没有认识到
手性药物各对映体药效学和药动学行为的不同，因此得出的结论与疗效或不良反应的发生有时不一致，甚至会错误的指导临床用药。 因此对药物光学活性的研究是非常必要的。
发明内容
[0003] 本发明的目的在于提供光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸。
[0004] 本发明的另一目的还在于提供制备光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的方法。
[0005] 本发明的又一目的还在于提供光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸在制备代谢改善解毒药物的用途。
[0006] 本发明的再一目的还在于提供含光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨
酸化合物的药物制剂。
[0007] 本发明提供一种光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸，它是左旋N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸或右旋N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸，
[0008] 其中：
[0009] 左旋N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸为S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸[0010] S-构型，或其药学上可接受的盐或酯，其中盐可以为氨基酸盐或金属盐。
[0011] 其中氨基酸盐的结构通式为：
[0012] ，其中R可以为氨基酸，其中氨基酸可以为精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、
门冬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、
鸟氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、
色氨酸、蛋氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸等；
[0013] 其中金属盐的结构通式为：
[0015] 其中酯的结构通式为：
[0016] ，其中R1为C1-C5直链烷基。
[0017] 右旋N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸为R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸[0018] R-构型，或其药学上可接受的盐或酯，其中盐可以为氨基酸盐或金属盐。
[0019] 其中氨基酸盐的结构通式为：
[0020]
[0021] 其中R可以为氨基酸，其中氨基酸可以为精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、门冬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、鸟氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、缬氨酸、丝氨酸、组氨酸、苏氨酸、色氨酸、蛋氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸等；
[0022] 其中金属盐的结构通式为：
[0023] ，其中R0可以钾、钠等。
[0024] 其中酯的结构通式为：
[0025] ，其中R1为C1-C5直链烷基。
[0026] 本发明还提供了光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的制备方法如下：
[0027] 一、S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的制备方法：
[0028] 1.将R-(+)-2-氯丙酸与氯化亚砜反应得R-(+)-2-氯丙酰氯，
[0029] 2.将R-(+)-2-氯丙酰氯与甘氨酸在弱
碱性条件下反应得R-(+)-2-氯代丙酰甘氨酸，
[0030] 3.将硫化钠与升化硫反应得二硫化钠，再将R-(+)-2-氯代丙酰甘氨酸与二硫化钠反应经酸化得S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸；
[0031] 所得S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸再与酸、碱或醇反应得盐或酯。
[0032] 二、R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的制备方法，如下：
[0033] 1.将S-(-)-2-氯丙酸与氯化亚砜反应得S-(-)-2-氯丙酰氯。
[0034] 2.将S-(-)-2-氯丙酰氯与甘氨酸在弱碱性条件下反应得S-(-)-2-氯代丙酰甘氨酸。
[0035] 3.将硫化钠与升化硫反应得二硫化钠，再将S-(-)-2-氯代丙酰甘氨酸与二硫化钠反应经酸化得R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸。
[0036] 所得R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸再与酸、碱或醇反应得盐或酯。
[0037] 本发明还提供了将光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸即S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸或R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸或其药学上可接受的盐或酯用于制备代谢改善解毒药物的用途，特别是用于治疗急慢性肝病和改善肝功能，包括对肝脏组织细胞的保护作用，治疗各种肝炎如急慢性肝炎、病毒性肝炎、酒精性肝炎、药物性肝炎、重金属中毒性肝炎等，还可治疗脂肪肝、急慢性肝损伤、肝硬化；还用于防治
放化疗所致外周白细胞减少并
加速肝细胞的恢复，降低化疗的不良反应；防治老年性早期
白内障及玻璃体混浊；及重金属解毒的用途。
[0038] 经药效学试验得，S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸和R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸对肝损伤均有较好的保护作用，且作用均强于N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸。
[0039] 经药物代谢动
力学试验得，S-(-)-N-(α-巯基丙酰基) 甘氨酸和R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸在体内没有发生相互转化。具体试验为受药动物体内药代动力学试验，包括用高效液相-质谱联用法测定
血浆中药物。
[0040] 血浆样本的处理方法，包括血浆酸化，再提取，然后进行衍生化反应，即可配制进样溶液，具体如下：
[0041] 1.血浆酸化，其中用于酸化的酸可以为
盐酸、
磷酸、高氯酸、
醋酸等，优选盐酸，更优选1mol/L盐酸；其中酸的量∶血浆样本的量为(150μl-250μl)∶(2ml-4ml)，优选为200μl∶3ml；
[0042] 2.对已酸化的血浆提取，其中用于提取的
有机溶剂可以为乙酸乙酯、氯仿、三氯甲烷、乙醚、正已烷等，优选乙酸乙酯；
[0043] 3.对提取物进行衍生化反应，其中所用衍生化
试剂可以为异硫氰酸苯酯、2，3，4，6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡糖异硫氰酸酯(GITC)溶液等，优选GITC溶液，更优选2mg/mlGITC溶液，最优选2mg/mlGITC的四氢呋喃溶液；其中衍生化
温度为
15-45℃，优选25-35℃，更优选30℃；其中衍生化时间为10-30min，优选15-25min，更优选20min；
[0044] 色谱条件：
[0045] 流动相A：甲醇。 流动相B：
水溶液，含0.05-0.20mmol/L
氯化钠和5.0-6.0mmol/L
甲酸，优选含0.10mmol/L氯化钠和5.3mmol/L甲酸。 其中A∶B为(40-50∶50-60，优选为44∶56)。
[0046] 质谱条件：
[0047]
离子化方式：电喷雾离子化；选择性离子监测；曲型脱溶剂装置(CDL)；温度：200℃-300℃，优选250℃；加热
块温度：150℃-250℃，优选200℃；CDL
电压：20V-30V，优选25V；检测电压：+1.2kV～+1.8kV，优选+1.50kV；雾化气流速：1.2L/min-1.8L/min，优选1.5L/min；干燥气流速：1.5L/min-2.5L/min，优选2.0L/min；检测离子为：试验药物衍生物[M+Na]+(m/z)：575.20，内标N-异丁酰基-D-半胱氨酸(NIDC)衍生物[M+Na]+(m/z)：603.05；
[0048] 内标物为NIDC，内标峰与主峰分离度符合中华人民共合国药典要求即可。
[0049] 结果显示，在单独给予S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的各时间点的谱图中，未明显检测到R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸存在；同样，给予R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸后也没有检测到S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的存在，这说明两者在动物体内没有发生相互转化。
[0050] 由此，将S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸或R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸制为适于临床使用的药物制剂具有实用性。
[0051] 本发明将光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸制成适于临床使用的药物制剂，该制剂以S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸或R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸或它们的药学上可接受的盐或酯为活性成分，同时还含有药学上可接受的辅料，所说的制剂是口服
给药剂或注射给药制剂。
[0052] 所说的口服给药制剂如：一般口服制剂如：片剂、胶囊剂、颗粒剂、咀嚼片、泡腾片等，速释制剂：如分散片、
口腔崩解片等，缓释制剂如：缓释片剂、缓释微丸等；及注射给药制剂如：注射液、注射用浓溶液、注射用无菌粉末等。
[0053] 所说的口服药物制剂中，辅料为填充剂、
粘合剂、崩解剂，填充剂与崩解剂的重量组成分别为10-60％、2-30％；此外还可含有助流剂、
润滑剂、
表面活性剂，三者的重量含量分别为0.1-5％、0.1-5％、0.005-1％。 其中所述的填充剂可以为
淀粉、预胶化淀粉、羧甲基淀粉、微晶
纤维素、乳糖、糊精、
蔗糖、
葡萄糖、甘露醇、山梨醇、
硫酸钙二水物、磷酸二钙、磷酸三钙、
碳酸钙。 粘合剂可以为玉米淀粉、预凝胶玉米淀粉、预凝胶淀粉、明胶、蔗糖、阿拉伯胶、聚维
酮、各种
粘度的甲基
纤维素、低粘度的
羧甲基纤维素钠、各种粘度的乙基纤维素、各种粘度的聚乙烯醇、聚乙二醇6000、羟丙基甲基纤维素的水或醇的溶液。 崩解剂为淀粉、预胶化淀粉、低取代羟丙基纤维素、微晶纤维素、纯木质纤维素、海藻酸、羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、瓜
耳树胶、交联聚乙烯吡咯烷酮、离子交换
树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、以及
有机酸(如
柠檬酸、
酒石酸)和碳酸盐(如碳酸钠、
碳酸氢钠)组成的泡腾崩解剂。 润滑剂可以为
硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸锌、滑石粉、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、硫酸月桂酯镁、
苯甲酸钠、醋酸钠、氯化钠、油酸钠、
硼酸、亮氨酸、
己二酸、富
马酸、三醋酸甘油酯、聚
氧乙烯单硬脂酸酯、单月桂蔗糖酸酯、月桂醇
硫酸镁、月桂醇硫酸钠。 助流剂可以为气相微粉
硅胶、合成微粉硅胶、氧化镁。 表面活性剂为十二烷基硫酸钠、泊洛沙姆、吐温类、司盘类、溴化十六烷三甲胺、月桂醇硫酸钠、硬脂酸磺酸钠、聚氧乙烯
蓖麻油、聚氧乙烯单硬脂酸酯。
处方中还可以加入矫味剂，矫味剂为甜菊甙、果糖、蔗糖、葡萄糖、阿斯巴甜、蛋白糖、木糖醇、甘露醇、山梨醇、乳糖、麦牙糖醇、甘草甜素、环己氨基磺酸钠、香蕉香精、橘子香精、菠萝香精、薄荷香精、茵香、香兰素、柠檬香精、樱桃香精、玫瑰香精。 处方中还可包括润湿剂，即水或者不同浓度的
乙醇溶液。 本发明的药物制剂所用的包衣材料可以为纤维素及其衍生物类、
丙烯酸树脂类、乙烯
聚合物等。
[0054] 所说的注射给药制剂包括注射液、注射用浓溶液以及注射用无菌粉末，辅料为符合注射剂要求的附加剂，所述的附加剂为pH调节剂、等渗等张调节剂、抗氧剂、螯合剂，注射用无菌粉末制剂中还可加入赋形剂。pH调节剂为盐酸、乳酸、甲磺酸、氢氧化钠、碳酸氢钠、磷酸及其盐、醋酸及其盐、枸橼酸及其盐、氨基酸及其盐；等渗等张调节剂包括葡萄糖、氯化钠、甘油、硫酸钠；赋形剂包括山梨醇、甘露醇、右旋糖酐、乳糖、蔗糖、葡萄糖、
水解明胶、氯化钠；抗氧剂包括焦亚硫酸钠或
钾盐0.01％-0.1％、亚硫酸钠0.01-0.5％、亚硫酸氢钠0.01％-0.5％、
硫代硫酸钠0.01％-0.5％、甲
醛合次硫酸氢钠0.1-0.2％、硫脲0.05％-0.1％、
抗坏血酸0.05％-0.2％、硫代甘油0.1％-0.5％、谷胱甘肽0.01-0.2％、丙氨酸0.01％-0.5％、半胱氨酸0.01％-0.5％、
没食子酸及其丙酯或者辛酯0.01-0.1％、叔丁基对羟基茴香醚0.01-0.1％、二叔丁对甲酚0.01％-0.5％、生育酚α、β、γ0.01％-0.1％、去甲二氢愈创木酸0.01％-0.5％或抗抗坏血酸棕榈酯0.01％-0.5％；螯合剂为
乙二胺四乙酸二钠盐、乙二胺四乙酸钙钠盐。
[0055] 本发明提供的化合物可用于制备代谢改善解毒药物。
[0056] 本发明还提供一种高效液相色谱测定光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸光学纯度的方法，具体步骤如下：
[0057] 1)色谱条件：色谱柱采用3，5-二甲基苯基-氨基甲酸糖肽为固定相的手性柱；流动相为正己烷-乙醇-
冰醋酸(80～95∶5～20∶0.01～1.0)，优选(90∶10∶0.1)；检测
波长为200nm～230nm，优选210nm；流动相流速为0.2～3.0ml/min，优选1.0ml/min；
[0058] 2)样品溶液的配置：采用
有机溶剂将样品配制成为含S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸或R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸0.1～20mg/ml(优选1mg/ml)溶液；所述有机溶剂选自正丙醇、异丙醇、乙醇、正丁醇和甲醇，优选乙醇；
[0059] 3)测定：将溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。
具体实施方式
[0060]
实施例1：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的制备
[0061] 1)将R-(+)-2-氯丙酸54.3g(0.5mol)，氯化亚砜60g(0.504mol)，加至干燥的100ml反应瓶，隔绝潮气情况下搅拌回流4h。 反应结束，先蒸出过量的氯化亚砜套用，再收集bp 95～105℃的馏分得无色液体R-(+)-2-氯丙酰氯55g，86.6％。
[0062] 2)将甘氨酸29.9g(0.40mol)，无水碳酸钠21.2g(0.20mol)及250ml水 加至1000ml反应瓶，搅拌溶解。 用冰盐浴冷却，剧烈搅拌下滴加R-(+)-2-氯丙酰氯50.6g(0.40mol)，同时加入无水碳酸钠的饱和溶液，使反应液呈弱碱性。 加完后继续搅拌反应3-5h，反应结束。 浓盐酸酸化至pH＝1，乙酸乙酯提取，无水硫酸镁干燥。 过滤，滤液减压浓缩至有晶体析出，放置。过滤，干燥得白色小针状晶体R-(+)-2-氯代丙酰甘氨酸38.6g。 mp：120-124℃，
[0063] 3)250ml 烧 杯 中 加 入 硫 化 钠(Na2S·9H2O)26.5g(0.11mol)， 升 化 硫3.52g(0.11mol)及水120ml，加热搅拌至溶解，得棕红色二硫化钠溶液备用。 将R-(+)-2-氯代丙酰甘氨酸16.4g(0.10mol)，无水碳酸钠5.6g加至250ml反应瓶中，缓慢加入100ml水，以免气泡溢出。 冷却至0-10℃滴加上述二硫化钠溶液，滴加完毕后于
5-15℃反应10-15小时。反应结束，降至0℃左右，滴加浓硫酸，使pH接近于1。过滤，滤液在搅拌下分批加入锌粉17g，常温反应3小时，反应结束。 过滤，滤液用乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤，减压浓缩，放置析出固体。 滤集固体，再用乙酸乙酯重结晶，
真空干燥得白色结晶固体S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸，8.4g。mp：102-104℃， 含量99.3％(碘滴定液0.1mol/L滴
定)，有关物质＜2％(薄层色谱法：硅胶G薄层板，氯仿-丙酮-冰醋酸(9∶3∶1)，碘蒸气显色)。
[0064] 1HNMR(DMSO-D6)δppm：1.35(d，3H)；2.79(d，1H)；3.54(m，1H)；3.77(m，2H)；8.25(t，1H)；12.5(bs，1H)；MS(m/z)163；元素分析C5H9NO3S(％)：
C 36.65，H 5.66，N 8.50，S 19.68。
[0065] 实施例2：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的制备
[0066] 1)将S-(-)-2-氯丙酸54.3g(0.5mol)，氯化亚砜60g(0.504mol)，加至干燥的100ml反应瓶，隔绝潮气情况下搅拌回流4h。 反应结束，先蒸出过量的氯化亚砜套用，再收集bp 95～105℃的馏分得无色液体S-(-)-2-氯丙酰氯56g，88.2％。
[0067] 2)将甘氨酸29.9g(0.40mol)，无水碳酸钠21.2g(0.20mol)及250ml水加至1000ml反应瓶，搅拌溶解。 用冰盐浴冷却，剧烈搅拌下滴加S-(-)-2-氯丙酰氯50.6g(0.40mol)同时加入无水碳酸钠饱和水溶液，使反应液呈弱碱性。 加完后继续搅拌反应3-5h，反应结束。 浓盐酸酸化至pH＝1，乙酸乙酯提取，无水硫酸镁干燥。 过滤，滤液减压浓缩至有晶体析出，放置。 过滤，干燥得白色小针状晶体S-(-)-2-氯代丙酰甘氨酸37.8g，mp：120-124℃，
[0068] 3)250ml 烧 杯 中 加 入 硫 化 钠(Na2S·9H2O)26.5g(0.11mol)， 升 化 硫3.52g(0.11mol)及水120ml，加热搅拌至溶解，得棕红色二硫化钠溶液备用。 将S-(-)-2-氯代丙酰甘氨酸16.4g(0.10mol)，无水碳酸钠5.6g加至250ml反应瓶中，缓慢加入100ml水，以免气泡溢出。 冷却至0-10℃滴加上述二硫化钠溶液，滴加完毕后于
5-15℃反应10-15小时。反应结束，降至0℃左右，滴加浓硫酸，使pH接近于1。过滤，滤液在搅拌下分批加入锌粉17g，常温反应3小时，反应结束。 过滤，滤液用乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤，减压浓缩，放置析出固体。滤集固体，再用乙酸乙酯重结晶，真空干燥得白色结晶固体R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸，8.2g。mp：102-104℃， 含量99.1％(碘滴定液0.1mol/L滴
定)，有关物质＜2％(薄层色谱法：硅胶G薄层板，氯仿-丙酮-冰醋酸(9∶3∶1)，碘蒸气显色)。
[0069] 1HNMR(DMSO-D6)δppm：1.40(d，3H)；2.80(d，1H)；3.60(m，1H)；3.81(m，2H)；8.28(t，1H)；12.8(bs，1H)；MS(m/z)163；元素分析C5H9NO3S(％)：
C 36.68，H 5.65，N 8.53，S 19.65
[0070] 实施例3：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的制备
[0071] 1)将S-(-)-2-氯丙酸54.3g(0.5mol)，氯化亚砜60g(0.504mol)，加至干燥的100ml反应瓶，隔绝潮气情况下搅拌回流4h。 反应结束，先蒸出过量的氯化亚砜套用，再收集bp 95～105℃的馏分得无色液体S-(-)-2-氯丙酰氯54.6g。
[0072] 2)将甘氨酸29.9g(0.40mol)，无水碳酸钠21.2g(0.20mol)及250ml水加至1000ml反应瓶，搅拌溶解。 用冰盐浴冷却，剧烈搅拌下滴加S-(-)-2-氯丙酰氯50.6g(0.40mol)同时加入无水碳酸钠的饱和溶液，使反应液呈弱碱性。 加完后继续搅拌反应3-5h，反应结束。 浓盐酸酸化至pH＝1，乙酸乙酯提取，无水硫酸镁干燥。 过滤，滤液减压浓缩至有晶体析出，放置。 过滤，干燥得白色小针状晶体S-(-)-2-氯代丙酰甘氨酸38g。
[0073] 3)250ml 烧 杯 中 加 入 硫 化 钠(Na2S·9H2O)28.8g(0.12mol)， 升 化 硫3.84g(0.12mol)及乙醇150ml，加热搅拌至溶解，得棕红色二硫化钠溶液备用。 将S-(-)-2-氯代丙酰甘氨酸18.3g(0.11mol)，无水碳酸钠6.3g加至250ml反应瓶中，缓慢加入100ml水，以免气泡溢出。 冷却至0-10℃滴加上述二硫化钠溶液，滴加完毕后于
0-10℃反应12小时。 反应结束，同温下滴加浓硫酸，使pH＝1。 过滤，滤液在搅拌下分批加入锌粉17g，常温反应3小时，反应结束。 过滤，滤液用乙酸乙酯提取，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸镁干燥。过滤，减压浓缩，放置析出固体。 滤集固体，再用乙酸乙酯重结晶，真空干燥得白色结晶固体R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸8.1g，含量
99.3％(碘滴定液0.1mol/L滴定)，有关物质＜2％(薄层色谱法：硅胶G薄层板，氯仿-丙酮-冰醋酸(9∶3∶1)，碘蒸气显色)。
[0074] 实施例4：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸光学纯度测定
[0075] 仪器：高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，LC-10AD
泵[0076] 流动相：正己烷-乙醇-冰醋酸(90∶10∶0.1)
[0077] 流速：1.0ml/min
[0078] 色谱柱：CHIRALPAK AD-H(采用3，5-二甲基苯基-氨基甲酸糖肽为固定相)[0079] 柱温：25℃
[0080] 检测波长：210nm
[0081] 样品浓度：0.5mg/ml
[0082] 以上条件测得实施例1所得S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的光学纯度为99.3％。
[0083] 实施例5：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸光学纯度的测定
[0084] 仪器：高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外检测器，LC-10AD泵
[0085] 流动相：正己烷-乙醇-冰醋酸(90∶10∶0.1)
[0086] 流速：1.0ml/min
[0087] 色谱柱：CHIRALPAK AD-H(采用3，5-二甲基苯基-氨基甲酸糖肽为固定相)[0088] 柱温：25℃
[0089] 检测波长：210nm
[0090] 样品浓度：0.5mg/ml
[0091] 以上条件测得实施例2所得R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的光学纯度为99.2％。
[0092] 实施例6：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸精氨酸盐的制备
[0093] 将按实施例1所得S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸10g、L-精氨酸11.2g、95％甲醇60ml投入反应瓶，搅拌，加热至回流，反应3小时。 反应结束，趁热过滤，滤液冷至室温后放置
冰箱中冷却析晶。 滤集，干燥即得白色结晶固体19.2g，收率：
92.8％。
[0094] 实施例7：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸赖氨酸盐的制备
[0095] 将按实施例2所得R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸10g、L-赖氨酸9.4g、95％甲醇60ml投入反应瓶，搅拌，加热至回流，反应3小时。 反应结束，趁热过滤，滤液冷至室温后放置冰箱中冷却析晶。 滤集，干燥即得白色结晶固体16.8g，收率：
88.6％。
[0096] 实施例8：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸钠的制备
[0097] 1)将S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸16.3g(0.10mol)、45ml甲醇置于反应瓶中，15℃加入二硫叔糖醇0.15g，搅拌15分钟，并加入分子筛5g。
[0098] 2)将NaOH 4.65g，分6次缓慢加至上述甲醇溶液中。
[0099] 3)加完，与15℃搅拌反应1小时。然后，再与20-25℃搅拌反应1小时。 反应结束，过滤，滤除分子筛，将滤液加至130mL丙酮中，充分振摇，使混合均匀。
[0100] 4)待反应液中出现大量白色沉淀，抽滤，
滤饼于80℃干燥，得无水R-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸钠12.8g。
[0101] 实施例9：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸钠的制备
[0102] 1)将R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸16.3g(0.10mol)、45ml甲醇置于反应瓶中，15℃加入二硫叔糖醇0.15g，搅拌15分钟，并加入分子筛5g。
[0103] 2)将NaOH 4.65g，分6次缓慢加至上述甲醇溶液中。
[0104] 3)加完，与15℃搅拌反应1小时。然后，再与20-25℃搅拌反应1小时。 反应结束，过滤，滤除分子筛，将滤液加至130mL丙酮中，充分振摇，使混合均匀。
[0105] 4)待反应液中出现大量白色沉淀，抽滤，滤饼于80℃干燥，得无水S-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸钠13.1g。
[0106] 实施例10：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸片剂的的制备
[0107] 处方组成为：
[0108] S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0109] 微晶纤维素 170g
[0110] 预胶化淀粉 60g
[0111] 8％淀粉浆 适量
[0112] 羧甲基淀粉钠 7g
[0113] 硬脂酸镁 3g
[0114] 制备工艺：以制备1000片S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸片为例。 将原辅料分别
粉碎过100目筛，备用；称取处方量的S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、微晶纤维素、预胶化淀粉混合均匀后用8％的淀粉浆制软材，20目筛制粒，干燥，干颗粒用18筛整粒；加入处方量的羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，混合均匀，压片即得。 片重约为
345mg。
[0115] 实施例11：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸
薄膜衣片的制备[0116] 取实施例10所得素片，再配制8％胃溶型欧巴代(OY-C-7000A)醇溶液；置高效
包衣锅中进行包衣，包衣粉用量为素片重量的2.0-3.0％。
[0117] 实施例12：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸肠溶片的制备
[0118] 取实施例10所得素片，再配制8％肠溶型欧巴代乙醇溶液；置高效包衣锅中进行包衣，包衣粉用量为素片重量的4.0-5.0％。
[0119] 实施例13：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸缓释片的制备
[0120] 处方组成：
[0121] S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 150g
[0122] 羟丙甲纤维素(K15M) 150g
[0123] 乳糖 50g
[0124] 3％聚维酮80％乙醇溶液 适量
[0125] 硬脂酸镁 5g
[0126] 制备工艺：以制备1000片S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸缓释片为例。 原辅料分别粉碎过100目筛，备用；取处方量的S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、羟丙甲纤维素、乳糖混合均匀后用3％聚维酮80％乙醇溶液制软材，20目筛制粒，干燥，干颗粒用18筛整粒；加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀，压片即得。 片重约为360mg。
[0127] 实施例14：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸分散片的制备
[0128] 处方组成：
[0129] S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0130] 交联聚乙烯吡咯烷酮 15g
[0131] 微晶纤维素 180g
[0132] 甘露醇 50g
[0133] 60％乙醇溶液 适量
[0134] 十二烷基硫酸钠 0.2g
[0135] 微粉硅胶 5g
[0136] 硬脂酸镁 3g
[0137] 甜菊甙 5g
[0138] 制备工艺：以制成1000片S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸分散片为例。 原辅料分别粉碎过100目筛，备用；称取处方量的S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、微晶纤维素、甘露醇混合均匀，用60％乙醇溶液制软材，制粒，干燥后整粒；加入处方量的交联聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶、硬脂酸镁、甜菊甙混合均匀，压片即得。 片重约为360mg。
[0139] 实施例15：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸胶囊的制备
[0140] 处方组成：
[0141] S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 150g
[0142] 淀粉 45g
[0143] 5％聚维酮60％乙醇溶液 适量
[0144] 硬脂酸镁 2g
[0145] 制备工艺：以制成1000粒S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸胶囊为例。 原辅料分别粉碎过100目筛，备用；称取处方量的S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、淀粉混合均匀，用5％聚维酮60％乙醇溶液制软材，制粒，烘干、整粒；加入处方量的硬脂酸镁混合均匀，充填胶囊，即得。
[0146] 实施例16：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸颗粒剂的制备
[0147] 处方组成：
[0148] S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0149] 甘露醇 350g
[0150] 蔗糖 350g
[0151] 羧甲基纤维素钠 50g
[0152] 阿斯巴甜 10g
[0153] 麦芽糖糊精 140g
[0154] 5％聚维酮80％乙醇溶液 适量
[0155] 香精 1g
[0156] 制备工艺：以制备1000袋S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸颗粒为例。 将原辅料分别粉碎过100目筛，备用；将香精加入到5％聚维酮80％乙醇溶液中，称取处方量的S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、蔗糖、甘露醇、羧甲基纤维素钠、阿斯巴甜、麦芽糖糊精用5％聚维酮80％乙醇溶液制软材，16目筛制粒，干燥，14目筛整粒；用60目筛，筛去细粉后分装，即得。 每袋约1g。
[0157] 实施例17：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸注射液的制备
[0158] 处方组成：
[0159] S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0160] 注射用水加至 2000ml
[0161] 制备工艺：以制成1000支S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸注射液为例。 将处方量的S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸加入到1600ml注射用水中，搅拌使溶解完全；补加注射用水至全量2000ml，搅拌均匀；加入0.1％的针用
活性炭，搅拌均匀，药液经
钛棒脱炭后，再依次经过0.45μm和0.22μm的微孔滤膜精滤至澄明度符合要求；检测中间体，合格后药液在氮气流下灌封于2ml安瓿瓶中，每支装量约2ml，灭菌即得。
[0162] 实施例18：S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸注射剂的制备
[0163] 处方组成：
[0164] S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0165] 右旋糖酐40 50g
[0166] 亚硫酸氢钠 1g
[0167] 乙二胺四乙酸二钠 0.2g
[0168] 制备工艺：以制成1000瓶注射用S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸为例。 将处方量的S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、右旋糖酐40、亚硫酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠加入到1600ml注射用水中，搅拌使溶解完全；用1mol/L的盐酸调节溶液pH值至1.5-2.5，补加注射用水至全量2000ml，搅拌均匀；加入0.1％的针用活性炭，搅拌均匀，药液经钛棒脱炭后，再在无菌条件下将药液次经过0.45μm和0.22μm的微孔滤膜进行除菌过滤；检测中间体pH值、含量和澄明度，合格后药液灌装于西林瓶中，每瓶装量约
2ml，半压塞，
冷冻干燥，压塞轧盖，灯检，即得。
[0169] 实施例19：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸片剂的制备
[0170] 处方组成：
[0171] R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0172] 微晶纤维素 170g
[0173] 预胶化淀粉 60g
[0174] 8％淀粉浆 适量
[0175] 羧甲基淀粉钠 7g
[0176] 硬脂酸镁 3g
[0177] 制备工艺：以制备1000片R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸片为例。 将原辅料分别粉碎过100目筛，备用；称取处方量的R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、微晶纤维素、预胶化淀粉混合均匀后用8％的淀粉浆制软材，20目筛制粒，干燥，干颗粒用18筛整粒；加入处方量的羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁，混合均匀，压片即得。片重约为345mg。
[0178] 实施例20：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸薄膜衣片的制备[0179] 取实施例19所得素片，再配制8％胃溶型欧巴代(OY-C-7000A)醇溶液；置高效包衣锅中进行包衣，包衣粉用量为素片重量的2.0-3.0％。
[0180] 实施例21：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸肠溶片的制备
[0181] 取实施例19所得素片，再配制8％肠溶型欧巴代乙醇溶液；置高效包衣锅中进行包衣，包衣粉用量为素片重量的4.0-5.0％。
[0182] 实施例22：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸缓释片的制备
[0183] 处方组成：
[0184] R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 150g
[0185] 羟丙甲纤维素(K15M) 150g
[0186] 乳糖 50g
[0187] 3％聚维酮80％乙醇溶液 适量
[0188] 硬脂酸镁 5g
[0189] 制备工艺：以制备1000片R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸缓释片为例。 原辅料分别粉碎过100目筛，备用；取处方量的R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、羟丙甲纤维素、乳糖混合均匀后用3％聚维酮80％乙醇溶液制软材，20目筛制粒，干燥，干颗粒用18筛整粒；加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀，压片即得。 片重约为360mg。
[0190] 实施例23：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸分散片的制备
[0191] 处方组成：
[0192] R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0193] 交联聚乙烯吡咯烷酮 15g
[0194] 微晶纤维素 180g
[0195] 甘露醇 50g
[0196] 60％乙醇溶液 适量
[0197] 十二烷基硫酸钠 0.2g
[0198] 微粉硅胶 5g
[0199] 硬脂酸镁 3g
[0200] 甜菊甙 5g
[0201] 制备工艺：以制成1000片R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸分散片为例。 原辅料分别粉碎过100目筛，备用；称取处方量的R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、微晶纤维素、甘露醇混合均匀，用60％乙醇溶液制软材，制粒，干燥后整粒；加入处方量的交联聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶、硬脂酸镁、甜菊甙混合均匀，压片即得。 片重约为360mg。
[0202] 实施例24：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸胶囊的制备
[0203] 处方组成：
[0204] R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 150g
[0205] 淀粉 45g
[0206] 5％聚维酮60％乙醇溶液 适量
[0207] 硬脂酸镁 2g
[0208] 制备工艺：以制成1000粒R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸胶囊为例。 原辅料分别粉碎过100目筛，备用；称取处方量的R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、淀粉混合均匀，用5％聚维酮60％乙醇溶液制软材，制粒，烘干、整粒；加入处方量的硬脂酸镁混合均匀，充填胶囊，即得。
[0209] 实施例25：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸颗粒剂的制备
[0210] 处方组成：
[0211] R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0212] 甘露醇 350g
[0213] 蔗糖 350g
[0214] 羧甲基纤维素钠 50g
[0215] 阿斯巴甜 10g
[0216] 麦芽糖糊精 140g
[0217] 5％聚维酮80％乙醇溶液 适量
[0218] 香精 1g
[0219] 制备工艺：以制备1000袋R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸颗粒为例。 将原辅料分别粉碎过100目筛，备用；将香精加入到5％聚维酮80％乙醇溶液中，称取处方量的R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、甘露醇、蔗糖、羧甲基纤维素钠、阿斯巴甜、麦芽糖糊精用5％聚维酮80％乙醇溶液制软材，16目筛制粒，干燥，14目筛整粒；用60目筛，筛去细粉后分装，即得。 每袋约1g。
[0220] 实施例26：R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸注射液的制备
[0221] 处方组成：
[0222] R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0223] 焦亚硫酸钠 1g
[0224] 乙二胺四乙酸二钠 0.2g
[0225] 注射用水加至 2000ml
[0226] 制备工艺：以制成1000支R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸注射液为例。 将处方量的R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、焦亚硫酸钠和乙二胺四乙酸二钠加入到1600ml注射用水中，搅拌使溶解完全；补加注射用水至全量2000ml，搅拌均匀；加入
0.1％的针用活性炭，搅拌均匀，药液经钛棒脱炭后，再依次经过0.45μm和0.22μm的微孔滤膜精滤至澄明度符合要求；检测中间体，合格后药液在氮气流下灌封于2ml安瓿瓶中，每支装量约2ml，灭菌即得。
[0227] 实施例27：注射用R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸的制备
[0228] 处方组成：
[0229] R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸 100g
[0230] 右旋糖酐40 50g
[0231] 制备工艺：以制成1000瓶注射用R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸为例。 将处方量的R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸、右旋糖酐40加入到1600ml注射用水中，搅拌使溶解完全；用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节溶液pH值至1.5-2.5，补加注射用水至全量2000ml，搅拌均匀；加入0.1％的针用活性炭，搅拌均匀，药液经钛棒脱炭后，再在无菌条件下将药液次经过0.45μm和0.22μm的微孔滤膜进行除菌过滤；检测中间体pH值、含量和澄明度，合格后药液灌装于西林瓶中，每瓶装量约2ml，半压塞，冷冻干燥，压塞轧盖，灯检，即得。
[0232] 实施例28：静脉注射光学活性的N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸对扑热息痛所致小鼠肝损伤血清生化指标及肝脏指标的影响。
[0233] 将动物按体重随机分为5组，每组10只，分别为溶剂对照组、模型组(扑热息痛400mg/kg，10ml/kg，
腹腔注射)、硫普罗宁组(MPG)、S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组、R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组。 禁食12小时后，除溶剂对照组和模型组静脉注射生理盐水外，其它各试验组均分别静脉注射药物后，立即腹腔注射400/mg/kg扑热息痛，造成肝细胞急性损伤，造模后6小时给食，然后禁食16小时，于造模后24h，摘眼球
采血，离心，取血清。按照
试剂盒方法测定ALT、AST。 制备10％肝匀浆，测定肝GSH。 同时取肝脏和脾脏称重，计算脏器系数，结果见表1、2。
[0234] 表1.静脉注射MPG及其光学对映体对扑热息痛所致小鼠肝损伤血清生化指标的影响
[0235]
[0236] *P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较
[0237] 由表1可知，与溶剂对照组比较，模型组小鼠的肝脏系数明显增加，给药组均能明显抑制血清ALT的升高，其中S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组作用强于R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组。 虽然硫普罗宁组ALT值比S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组低，但在试验过程中，造模后硫普罗宁组小鼠死亡4只，模型组小鼠死亡两只，S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组未有小鼠死亡，因此S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组对扑热息痛所致小鼠肝损伤的保护优于硫普罗宁组。
[0238] 表2.静脉注射MPG及其光学对映体对扑热息痛所致小鼠肝损伤肝脏指标的影响[0239]
[0240] *P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较
[0241] 由表2可知，与模型组比较，各给药组均明显增加肝总蛋白含量，S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组明显增加肝脏GSH含量和降低MDA含量，但R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组和硫普罗宁组无此作用。 结果表明S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸具有较强的肝损伤保护作用。
[0242] 实施例29：N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸及其光学对映体对四氯化碳所致大鼠肝损伤的保护作用。
[0243] 将动物按体重随机分为5组，每组10只，分别为溶剂对照组、模型组(50％CCl4，2ml/kg，腹腔注射)、硫普罗宁组(MPG)、S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组、R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组。除溶剂对照组腹腔注射
橄榄油外，其它各试验组均分别先灌胃(ig)给药4天，每天一次，于第5天腹腔注射1次CCl4，造成肝细胞急性损伤，造模前30min用药物进行治疗(除模型对照组)，造模后2小时再给药1次。然后禁食16小时，于注射CCl4后24小时眼球后静脉丛采血，离心，取血清，按照试剂盒方法测定ALT、AST、
白蛋白。 结果见表3、4。 取肝脏左叶，制备10％肝匀浆，测定GSH和MDA含量，结果见表5。
[0244] 表3.MPG及光学对映体对CCl4所致大鼠肝损伤ALT、AST的影响[0245]
[0246] *P＜0.05，**P＜0.01与模型组比较
[0247] 由表3可知，三种药物均能明显下降ALT、AST水平，其中R-(+)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组和S-(-)-N-(α-巯基丙酰基)甘氨酸组均强于硫普罗宁组。
[0248] 表4.MPG及光学对映体对CCl4所致大鼠肝损伤血清蛋白含量的影响[0249]
