色氨酸(Trp)是生物合成蛋白质、烟酸和神经递质5-羟色胺(血清 素)需要的必需氨基酸。酶吲哚胺2，3-双加氧酶(又称为INDO或IDO) 在将L-色氨酸降解为N-甲酰基-犬尿氨酸的第一步和限速步骤中起催 化作用。在人细胞中，由IDO活性导致Trp耗竭是著名的γ干扰素 (IFN-γ)-诱导型抗微生物效应器机制。IFN-γ刺激诱发IDO的激活， 其导致Trp耗竭，因而抑制依赖Trp的细胞内病原体例如鼠弓形体 (Toxoplasma gondii)和砂眼依原体(Chlamydia trachomatis)的生长。IDO 活性还对多种肿瘤细胞有抗增殖作用，且在同种异体肿瘤排斥期间， 可在体内观察到IDO诱导，表明该酶可能在肿瘤排斥过程中起作用 (Daubener，et al.1999，Adv.Exp.Med.Biol.467：517-24；Taylor，et al. 1991，FASEB J.5：2516-22)。
已注意到，与周围血液淋巴细胞(PBL)共培养的HeLa细胞通过 IDO活性的上调获得免疫抑制表型。据信，用白介素-2(IL2)处理导 致PBL增殖减少是因肿瘤细胞对PBL分泌IFNG响应释放的IDO所 致。通过用特异性IDO抑制剂1-甲基-色氨酸(1MT)处理，可反转该 作用。有人提出可用癌细胞中IDO活性削弱抗肿瘤反应(Logan，et al. 2002，Immunology，105：478-87)。
近来，Trp耗竭的免疫调节作用受到很多关注。几项证据提示， IDO涉及诱发免疫耐受性。有关哺乳动物怀孕、肿瘤耐药性、慢性 感染和自身免疫性疾病的研究表明，表达IDO的细胞可抑制T细胞 反应并提高耐受性。Trp分解代谢加速出现在与细胞免疫激活有关的 疾病和病症例如感染、癌、自身免疫性疾病和AIDS以及怀孕期间。 例如，在自身免疫性疾病中观察到升高水平的IFN和升高水平的尿 Trp代谢物；据推测，发生在自身免疫性疾病中的全身性和局部性Trp 耗竭可能与这些疾病的变性和萎缩症状有关。在从关节炎性关节滑 液中分离的细胞中出现高水平的IDO证明该假设。在人免疫缺陷病 毒(HIV)患者中IFN也升高，IFN水平升高与预后恶化有关。因此有 人提出，HIV感染长期诱发IDO，机会性感染使它进一步增加，长 期丢失Trp起动导致恶病质、痴呆和腹泻并且可能使AIDS患者免疫 抑制的机制(Brown，et al.1991，Adv.Exp.Med.Biol.294：425-35)。最 终，近来表明抑制IDO可升高小鼠HIV模型中的病毒特异性T细胞 水平，同时减少感染病毒的巨噬细胞的数目(Portula et al.2005，Blood， 106：2382-90)。
据信，IDO在防止子宫中胎儿排斥的免疫抑制过程中起作用。 在40多年前就已注意到，在怀孕期间，无论组织移植免疫学如何预 测，异种遗传哺乳动物孕体均存活(Medawar，1953，Symp.Soc.Exp.Biol. 7：320-38)。母体与胎儿的解剖分离和胎儿抗原未成熟性不能完全解 释胎儿同种异体移植存活。近来关注集中在母体的免疫耐受性上。 因为在正常怀孕期间，人合胞滋养层细胞表达IDO，且全身色氨酸 浓度下降，据假设，在母体-胎儿接触面上表达IDO是防止胎儿同种 异体移植免疫排斥所必须的。为验证该假设，当怀孕小鼠(怀有同源 或异源胎儿)暴露于1MT时，迅速出现T细胞诱发的对所有异源孕体 的排斥。因此，在鼠科动物怀孕期间，通过色氨酸分解代谢，哺乳 动物孕体似乎抑制T细胞活性，使本身免除排斥和阻滞色氨酸分解 代谢，允许母体T细胞引起胎儿同种异体移植排斥(Munn，et al.1998， Science 281：1191-3)。
基于色氨酸通过IDO降解的肿瘤免疫耐药机制的另一个证据来 自大多数人肿瘤组成型表达IDO的现象，通过免疫原性小鼠肿瘤细 胞表达的IDO阻止预免疫小鼠中的排斥。在发生该作用同时，伴随 肿瘤部位缺乏特异性T细胞蓄积，在无明显的毒性下，通过用IDO 抑制剂全身处理小鼠，缺乏的特异性T细胞可部分恢复。因此，提 示可通过同时给予IDO抑制剂，提高给予癌症患者治疗性疫苗的效 力(Uyttenhove et al.2003，Nature Med.9：1269-74)。还证实，IDO抑 制剂、1-MT可与化疗药物协同减少小鼠中肿瘤生长，提示抑制IDO 还可增强常规细胞毒疗法的抗肿瘤活性(Muller et al.2005，Nature Med.11：312-9)。
导致肿瘤无免疫应答性的一个机制可能是耐受原性宿主APC提 供肿瘤抗原。已有表达IDO提呈抗原的人细胞(APC)亚组的阐述，APC 共表达CD123(IL3RA)和CCR6并抑制T细胞增殖。成熟和不成熟 的CD123-阳性树突细胞抑制T细胞活性，1MT阻滞该IDO抑制活 性(Munn，et al.2002，Science 297：1867-70)。已证实，小鼠肿瘤引流 淋巴节(TDLN)含有组成型表达免疫抑制水平IDO的plasmacytoid树 突细胞(pDC)亚组。尽管在体外仅含0.5％淋巴节细胞，但这些pDC 按显性方式有效抑制T细胞对pDC本身提供的抗原的反应；抑制T 细胞对非抑制性APC提供的第三方(third party)抗原的反应。在pDC 群体中，绝大多数功能性IDO介导的抑制因子活性与新的共表达B 谱系标记物CD19的pDC亚组无关。因此据假设，通过TDLN中的 pDC引起的IDO介导的抑制创造出有效抑制宿主抗肿瘤T细胞反应 的局部微环境(Munn，et al.2004，J.Clin.Invest.114(2)：280-90)。
IDO将色氨酸、5-羟色胺和褪黑素的吲哚部分降解，引发产生 统称为犬尿氨酸的神经活性和免疫调节代谢物。通过局部消耗色氨 酸和增加促凋亡的犬尿氨酸，树突细胞(DC)表达的IDO可极大影响 T细胞增殖和存活。在DC中诱发IDO可能是调节性T细胞驱动的 消耗耐受性的普通机制。因为，可预计此类耐受原性反应在多种生 理病理病症中起作用。色氨酸代谢和犬尿氨酸产生可代表免疫和神 经系统之间的关键介面(Grohmann，et al.2003，Trends Immunol.24： 242-8)。在持续免疫激活的状态中，由于5-羟色胺生成减少，因此可 利用的游离血清Trp减少，5-羟色胺能功能可能也受影响(Wirleitner，et al.2003，Curr.Med.Chem.10：1581-91)。
有意义的是，已观察到给予干扰素-α引起神经精神病性副作用， 例如抑郁症状和认知功能改变。对5-羟色胺能神经传递的直接影响 可能导致这些副作用。另外，因为IDO激活导致5-羟色胺(5-HT)的 前体色氨酸水平下降，IDO还可能通过减少中枢5-HT合成，在这些 神经精神病性副作用中起作用。另外，犬尿氨酸代谢物例如3-羟基- 犬尿氨酸(3-OH-KYN)，喹啉酸(QUIN)对脑功能有毒性作用。3-OH- KYN可通过增加活性氧类(ROS)生成，产生氧化应激，QUIN可过度 刺激海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体，导致细胞凋亡和海马萎 缩。通过NMDA过度刺激导致ROS超量产生和海马萎缩与抑郁有 关(Wichers and Maes，2004，J.Psychiatry Neurosci.29：11-17)。因此， IDO活性可能在抑郁症中起作用。
正在开发治疗或预防IDO相关疾病例如上述那些疾病的IDO的 小分子抑制剂。例如，PCT公布号WO 99/29310报道了改变T细胞 介导免疫的方法，它包括用IDO抑制剂例如1-甲基-DL-色氨酸、对- (3-苯并呋喃基)-DL-丙氨酸、对-[3-苯并(b)噻吩基]-DL-丙氨酸和6-硝 基-L-色氨酸，改变局部细胞外的色氨酸和色氨酸代谢物的浓度(Munn， 1999)。在WO 03/087347中，报道了制备抗原提呈细胞的方法，用 于增强或减少T细胞耐受性(Munn，2003)，它同时也在欧洲专利 1501918中公布。还在WO 2004/094409中，报道了具有吲哚胺-2，3- 双加氧酶(IDO)抑制活性的化合物；和美国专利公布号2004/0234623 涉及通过联合给予吲哚胺-2，3-双加氧酶抑制剂和其它治疗形式治疗癌 症或感染患者的方法。
按照表明IDO在免疫抑制、肿瘤耐药性和/或排斥、慢性感染、 HIV感染、AIDS(包括其表现形式例如恶病质、痴呆和腹泻)、自身 免疫性疾病或病症(例如类风湿性关节炎)，和免疫耐受性以及预防子 宫胎儿排斥中的作用实验数据，需要针对通过抑制IDO活性而抑制 色氨酸降解的治疗药物。当T细胞被怀孕、癌细胞和病毒例如HIV 抑制时，可用IDO抑制剂激活T细胞，从而增强T细胞激活。抑制 IDO还可以是神经病学或神经精神疾病或病症例如抑郁症患者的重 要治疗策略。本文中的化合物、组合物和方法帮助满足了目前对IDO 调节剂的需求。
发明概述
本发明尤其提供式I化合物：

或其药学上可接受的盐形式或前药。
本发明还提供含式I化合物和药学上可接受的载体的组合物。
本发明还提供调节IDO酶活性的方法，它包括使式I化合物与 IDO接触。
本发明还提供治疗IDO相关疾病的方法，这些疾病包括例如癌 症、病毒感染、抑郁症、神经变性病症、创伤、与年龄有关的白内 障、器官移植排斥或自身免疫疾病，所述方法包括给予患者治疗有 效量的式I化合物。
本发明还提供改变哺乳动物中细胞外色氨酸水平的方法，所述 方法包括给予哺乳动物治疗有效量的式I化合物。
本发明还提供抑制患者免疫抑制例如IDO介导的免疫抑制的方 法，所述方法包括给予患者有效量的式I化合物。
本发明还提供用于治疗的本发明化合物或其盐或前药。
本发明还提供本发明化合物或其盐或前药在制备用于治疗的药 物中的用途。
详述
本发明尤其提供式I化合物：

或其药学上可接受的盐形式或前药，其中：
环A是被1、2、3、4或5个R6任选取代的碳环基或杂环基；
W、X1、X2、Y1和Y2独立选自(CRaRb)t、(CRaRb)uO(CRaRb)v、 (CRaRb)uC(O)(CRaRb)v、(CRaRb)uC(O)NRc(CRaRb)v、 (CRaRb)uC(O)O(CRaRb)v、(CRaRb)uC(S)(CRaRb)u、 (CRaRb)uC(S)NRc(CRaRb)v、(CRaRb)uS(O)(CRaRb)v、 (CRaRb)uS(O)NRc(CRaRb)v、(CRaRb)uS(O)2(CRaRb)v、 (CRaRb)uS(O)2NRc(CRaRb)v、(CRaRb)uNRc(CRaRb)v和 (CRaRb)uC(＝NRd)NRc(CRaRb)v；
R1是H、C(O)R7、C(O)NR8aR8b、C(O)OR8、C1-8烷基、C2-8链烯 基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷 基烷基、杂芳基烷基或杂环烷基烷基；
R2是H、C1-6烷基或C3-7环烷基；
R3a、R4a和R5a独立选自C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、芳基、 环烷基、杂芳基和杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或 5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4 卤代烷基、Cy1、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、 OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1；
R3b、R4b和R5b独立选自H、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、 芳基、环烷基、杂芳基和杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、 4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、 NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、 S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1；
或R2和-(R3a)a-(W)b-R3b与它们连接的N原子一起形成4元-20 元杂环烷基，所述杂环烷基被独立选自以下的1、2、3、4或5个取 代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷 基、Cy3、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、 OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 或S(O)2NRg1Rh1；
或-(Y1)q-(R4a)r-(Y2)s-R4b和-(X1)m-(R5a)n-(X2)p-R5b与它们连接的N 原子一起形成4元-20元杂环烷基，所述杂环烷基被独立选自以下的 1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy4、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、 NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、 S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1；
R6为卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、芳 基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基 烷基、杂环烷基烷基、CN、NO2、ORe2、SRe2、C(O)Rf2、C(O)NRg2Rh2、 C(O)ORe2、OC(O)Rf2、OC(O)NRg2Rh2、NRg2Rh2、NRg2C(O)Rf2、 NRg2C(O)ORe2、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf2)2、 P(ORe2)2、P(O)Re2Rf2、P(O)ORe2ORf2、S(O)Rf2、S(O)NRg2Rh2、S(O)2Rf2 或S(O)2NRg2Rh2；
R7和R8独立选自H、C1-8烷基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环 烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基，各自 被一个或多个取代基任选取代，所述取代基独立选自卤代、CN、NO2、 OH、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、C2-8二烷基 氨基、C1-6烷基、C2-6链烯基和C2-6炔基；
R8a和R8b独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6 炔基、芳基、环烷基、芳基烷基和环烷基烷基；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4独立选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷 基，各自被1、2、3、4或5个取代基任选取代，所述取代基独立选 自卤代、C1-4烷基、C2-4链烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基、CN、NO2、 ORe3、SRe3、C(O)Rf3、C(O)NRg3Rh3、C(O)ORe3、OC(O)Rf3、 OC(O)NRg3Rh3、NRg3Rh3、NRg3C(O)Rh3、NRg3C(O)ORe3、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf3)2、P(ORe3)2、P(O)Re3Rf3、 P(O)ORe3ORf3、S(O)Rf3、S(O)NRg3Rh3、S(O)2Rf3和S(O)2NRg3Rh3；
Ra和Rb独立选自H、卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷 基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基烷基、CN、NO2、ORe4、SRe4、C(O)Rf4、 C(O)NRg4Rh4、C(O)ORe4、OC(O)Rf4、OC(O)NRg4Rh4、NRg4Rh4、 NRg4C(O)Rh4、NRg4C(O)ORe4、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、 P(Rf4)2、P(ORe4)2、P(O)Re4Rf4、P(O)ORe4ORf4、S(O)Rf4、S(O)NRg4Rh4、 S(O)2Rf4和S(O)2NRg4Rh4；
Rc为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、芳基、 环烷基、芳基烷基或环烷基烷基；
Rd为H、ORd1、CN或NO2；
Rd1为H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、芳 基、环烷基、芳基烷基或环烷基烷基；
Re1、Re2、Re3和Re4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、(C1-6烷氧基)-C1-6烷基、C2-6炔基、芳基、环烷基、杂芳基、 杂环烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基；
Rf1、Rf2、Rf3和Rf4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、杂芳基和杂环烷基；
Rg1、Rg2、Rg3和Rg4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、芳基烷基和环烷基烷基；
Rh1、Rh2、Rh3和Rh4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、芳基烷基和环烷基烷基；
或Rg1和Rh1与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg2和Rh2与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg3和Rh3与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg4和Rh4与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
Ri是H、CN或NO2；
a为0或1；
b为0或1；
m为0或1；
n为0或1；
p为0或1；
q为0或1；
r为0或1；
s为0或1；
t为1、2、3、4、5或6；
u为0、1、2、3、4、5或6；且
v为0、1、2、3、4、5或6。
在某些实施方案中，如果环A是

R2是H；
-(Y1)q-(R4a)r-(Y2)s-R4b是H；且
-(X1)m-(R5a)n-(X2)p-R5b是H；
则-(R3a)a-(W)-R3b不是：
i)苯基、4-碘苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、3-甲基 苯基、2-甲基苯基、2，4--二-甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，5-二甲基苯 基、3，4-二甲基苯基、2-甲氧基苯基或2-二甲基氨基-5-硝基苯基；
ii)-CH2CH2NRxRy，其中Rx和Ry各自独立是H、乙基；被氨基 任选取代的-C(O)-二唑，或任选具有至少一个硝基取代基的苯基； 或
iii)C1-3烷基、-C(O)-(C1-4卤代烷基)、萘基或苄基。
在某些实施方案中，如果环A是具有至少2个甲基取代基的苯 基；
-(Y1)q-(R4a)r-(Y2)s-R4b是H；且
-(X1)m-(R5a)n-(X2)p-R5b是H；
则-(R3a)a-(W)-R3b不是未取代的苯基。
在某些实施方案中，如果环A是具有至少一个硝基取代基的苯 基；
-(Y1)q-(R4a)r-(Y2)s-R4b是H；且
-(X1)m-(R5a)n-(X2)p-R5b是H；
则-(R3a)a-(W)-R3b不是被C1-4烷基取代的吡唑基。
在某些实施方案中，如果环A是

R2是H；
-(Y1)q-(R4a)r-(Y2)s-R4b是H；且
-(X1)m-(R5a)n-(X2)p-R5b是H；
则-(R3a)a-(W)-R3b不是：
i)被选自以下的1或2个取代基任选取代的苯基：卤代、C1-4烷 基和C1-4烷氧基；
ii)-CH2CH2NRxRy，其中Rx和Ry各自独立是H、C1-4烷基、被 氨基任选取代的-C(O)-杂芳基，或1或2个硝基或1或2个卤代任选 取代的苯基；或
iii)C1-4烷基、-C(O)-(C1-4卤代烷基)、萘基或苄基。
在某些实施方案中，当r为0时，则q和s的和为0或1。
在某些实施方案中，当n为0时，则m和p的和为0或1。
在某些实施方案中，环A是被1、2、3、4或5个R6任选取代 的杂环基。
在某些实施方案中，环A是被1、2、3、4或5个R6任选取代 的5元或6元杂环基。
在某些实施方案中，环A是被1、2、3、4或5个R6任选取代 的5元杂环基。
在某些实施方案中，环A是含至少一个成环N原子的5元杂环 基，且环A被1、2、3、4或5个R6任选取代。
在某些实施方案中，环A是含至少一个成环O原子的5元杂环 基，且环A被1、2、3、4或5个R6任选取代。
在某些实施方案中，环A是含至少一个成环O原子和至少一个 成环N原子的5元杂环基，且环A被1、2、3、4或5个R6任选取 代。
在某些实施方案中，环A是

在某些实施方案中，环A是

在某些实施方案中，环A是

在某些实施方案中，R1是H、C(O)R7、C(O)OR8、C1-8烷基、C2-8 链烯基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、 环烷基烷基、杂芳基烷基或杂环烷基烷基.
在某些实施方案中，R1是H、C(O)R7、C(O)NR8aR8b或C(O)OR8。
在某些实施方案中，R1是H、C(O)R7或C(O)OR8。
在某些实施方案中，R1是H。
在某些实施方案中，R2是H。
在某些实施方案中，R3a是芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基， 各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、 C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、 CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、 OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3a是芳基或杂芳基，各自被独立选自以下 的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、 C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3a是被独立选自以下的1、2、3、4或5 个取代基任选取代的苯基：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、 NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、 S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3b是芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基， 各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、 C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、 CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、 OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3b是芳基或杂芳基，各自被独立选自以下 的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、 C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3b是被独立选自以下的1、2、3、4或5 个取代基任选取代的苯基：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、 NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、 S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3b是芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基， 各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、 C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、 SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3b是芳基或杂芳基，各自被独立选自以下 的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R3b是被独立选自以下的1、2、3、4或5 个取代基任选取代的苯基：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、 C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、 NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，W是(CRaRb)t、(CRaRb)uO(CRaRb)v、 (CRaRb)uC(O)(CRaRb)v、(CRaRb)uC(O)NRc(CRaRb)v或 (CRaRb)uC(O)O(CRaRb)v。
在某些实施方案中，W是(CRaRb)t或(CRaRb)uO(CRaRb)v。
在某些实施方案中，Y1是(CRaRb)t、(CRaRb)uC(O)(CRaRb)v、 (CRaRb)uC(O)NRc(CRaRb)v或(CRaRb)uC(O)O(CRaRb)v。
在某些实施方案中，Y1是(CRaRb)t或(CRaRb)uC(O)(CRaRb)v。
在某些实施方案中，X1是(CRaRb)t、(CRaRb)uC(O)(CRaRb)v、 (CRaRb)uC(O)NRc(CRaRb)v或(CRaRb)uC(O)O(CRaRb)v。
在某些实施方案中，X1是(CRaRb)t或(CRaRb)uC(O)(CRaRb)v。
在某些实施方案中，R4a是C1-8烷基、C2-8链烯基或C2-8炔基，各 自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6 烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy1、CN、NO2、ORe1、 SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R4a是芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基， 各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、 C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy1、CN、NO2、ORe1、 SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R5a是C1-8烷基、C2-8链烯基或C2-8炔基，各 自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6 烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy1、CN、NO2、ORe1、 SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R5a是芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基， 各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、 C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy1、CN、NO2、ORe1、 SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R4b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基或C2-8炔基， 各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、 C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、 CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、 OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R4b是芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基， 各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、 C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、 CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、 OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R4b是H。
在某些实施方案中，R5b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、 芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、 4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、 NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、 S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R5b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、 芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、 4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、 C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、 NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R5b是H。
在某些实施方案中，R4b是H，R5b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基、 C2-8炔基、芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下 的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、 C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、 NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、 C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rt1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R4b是H，R5b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基、 C2-8炔基、芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下 的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rt1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，-(Y1)q-(R4a)r-(Y2)s-R4b是H，-(X1)m-(R5a)n- (X2)p-R5b是H。
在某些实施方案中，a和b均为0。
在某些实施方案中，r和s均为0。
在某些实施方案中，q、r和s均为0。
在某些实施方案中，n和p均为0。
在某些实施方案中，a为0。
在某些实施方案中，a为1。
在某些实施方案中，b为0。
在某些实施方案中，b为1。
在某些实施方案中，q为0。
在某些实施方案中，q为1。
在某些实施方案中，r为0。
在某些实施方案中，r为1。
在某些实施方案中，s为0。
在某些实施方案中，s为1。
在某些实施方案中，m为0。
在某些实施方案中，m为1。
在某些实施方案中，n为0。
在某些实施方案中，n为1。
在某些实施方案中，p为0。
在某些实施方案中，p为1。
在某些实施方案中，t为1。
在某些实施方案中，t为2。
在某些实施方案中，t为3。
在某些实施方案中，t为4。
在某些实施方案中，u为0。
在某些实施方案中，u为1。
在某些实施方案中，u为2。
在某些实施方案中，u为3。
在某些实施方案中，v为0。
在某些实施方案中，v为1。
在某些实施方案中，v为2。
在某些实施方案中，v为3。
在某些实施方案中，本发明化合物具有式II：

其中：
X1是(CRaRb)t或(CRaRb)uC(O)(CRaRb)v；
R3a是C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂芳基 或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选 取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy1、 CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、 OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、 S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1；
R3b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂 芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基 任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、 Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、 OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、 S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1；
R5b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂 芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基 任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、 Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、 OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、 S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1；
Cy1和Cy2独立选自芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基，各自被 独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-4烷 基、C2-4链烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基、CN、NO2、ORe3、SRe3、 C(O)Rf3、C(O)NRg3Rh3、C(O)ORe3、OC(O)Rf3、OC(O)NRg3Rh3、NRg3Rh3、 NRg3C(O)Rh3、NRg3C(O)ORe3、P(Rf3)2、P(ORe3)2、P(O)Re3Rf3、 P(O)ORe3ORf3、S(O)Rf3、S(O)NRg3Rh3、S(O)2Rf3和S(O)2NRg3Rh3；
Ra和Rb独立选自H、卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷 基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基烷基、CN、NO2、ORe4、SRe4、C(O)Rf4、 C(O)NRg4Rh4、C(O)ORe4、OC(O)Rf4、OC(O)NRg4Rh4、NRg4Rh4、 NRg4C(O)Rh4、NRg4C(O)ORe4、P(Rf4)2、P(ORe4)2、P(O)Re4Rf4、 P(O)ORe4ORf4、S(O)Rf4、S(O)NRg4Rh4、S(O)2Rf4和S(O)2NRg4Rh4；
Re1、Re3和Re4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯 基、(C1-6烷氧基)-C1-6烷基、C2-6炔基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环 烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基和杂环烷基烷基；
Rf1、Rf3和Rf4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯 基、C2-6炔基、芳基、环烷基、杂芳基和杂环烷基；
Rg1、Rg3和Rg4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯 基、C2-6炔基、芳基、环烷基、芳基烷基和环烷基烷基；
Rh1、Rh3和Rh4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯 基、C2-6炔基、芳基、环烷基、芳基烷基和环烷基烷基；
或Rg1和Rh1与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg3和Rh3与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg4和Rh4与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
a为0或1；
m为0或1；
t为1、2、3、4、5或6；
u为0、1、2、3、4、5或6；且
v为0、1、2、3、4、5或6。
在某些式II实施方案中，当-(X1)m-R5b是H时；则-(R3a)a-R3b不 是：
i)苯基、4-碘苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、4-甲基苯基、3-甲基 苯基、2-甲基苯基、2，4-二甲基苯基、2，6-二甲基苯基、2，5-二甲基苯 基、3，4-二甲基苯基、2-甲氧基苯基或2-二甲基氨基-5-硝基苯基；
ii)-CH2CH2NRxRy，其中Rx和Ry各自独立是H、乙基；被氨基 任选取代的-C(O)-二唑，或被至少一个硝基取代基任选取代的苯 基；或
iii)C1-3烷基、-C(O)-(C1-4卤代烷基)、萘基或苄基。
在某些实施方案中，R3a为C1-8烷基。
在某些实施方案中，R3b为芳基或杂芳基，各自被独立选自以下 的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，R5b是H、芳基或杂芳基，各自被独立选自 以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链 烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、 P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1。
在某些实施方案中，本发明化合物具有式I：

其中：
环A是被1、2、3、4或5个R6任选取代的5元碳环或杂环；
W、X1、X2、Y1和Y2独立选自(CRaRb)t、(CRaRb)uO(CRaRb)v、 (CRaRb)uC(O)(CRaRb)v、(CRaRb)uC(O)NRc(CRaRb)v、 (CRaRb)uC(O)O(CRaRb)v、(CRaRb)uC(S)(CRaRb)u、 (CRaRb)uC(S)NRc(CRaRb)v、(CRaRb)uS(O)(CRaRb)v、 (CRaRb)uS(O)NRc(CRaRb)v、(CRaRb)uS(O)2(CRaRb)v、 (CRaRb)uS(O)2NRc(CRaRb)v、(CRaRb)uNRc(CRaRb)v和 (CRaRb)uC(＝NRd)NRc(CRaRb)v；
R1是H、C(O)R7、C(O)NR8aR8b、C(O)OR8、C1-8烷基、C2-8链烯 基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷 基烷基、杂芳基烷基或杂环烷基烷基；
R2是H、C1-6烷基或C3-7环烷基；
R3a、R4a和R5a独立选自C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、芳基、 环烷基、杂芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或 5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4 卤代烷基、Cy1、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、 OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1；
R3b是H、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂 芳基或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基 任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、 C1-4羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、 C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、 NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、 P(Rf1)2、P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、 S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1；
R4b是H；
R5b是C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8炔基、芳基、环烷基、杂芳基 或杂环烷基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选 取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、C1-4 羟基烷基、Cy2、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、 OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf1)2、 P(ORe1)2、P(O)Re1Rf1、P(O)ORe1ORf1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1；
或R2和-(R3a)a-(W)b-R3b与它们连接的N原子一起形成4元-20 元杂环烷基，所述杂环烷基被独立选自以下的1、2、3、4或5个取 代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷 基、Cy3、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、 OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、 NRg1C(O)ORe1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1和S(O)2NRg1Rh1；
或-(Y1)q-(R4a)r-(Y2)s-R4b和-(X1)m-(R5a)n-(X2)p-R5b与它们连接的N 原子一起形成4元-20元杂环烷基，所述杂环烷基被独立选自以下的 1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、 C2-6炔基、C1-4卤代烷基、Cy4、CN、NO2、ORe1、SRe1、C(O)Rf1、 C(O)NRg1Rh1、C(O)ORe1、OC(O)Rf1、OC(O)NRg1Rh1、NRg1C(O)NRg1Rh1、 NRg1Rh1、NRg1C(O)Rf1、NRg1C(O)ORe1、S(O)Rf1、S(O)NRg1Rh1、S(O)2Rf1 和S(O)2NRg1Rh1；
R6是卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、C1-4卤代烷基、芳 基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基 烷基、杂环烷基烷基、CN、NO2、ORe2、SRe2、C(O)Rf2、C(O)NRg2Rh2、 C(O)ORe2、OC(O)Rf2、OC(O)NRg2Rh2、NRg2Rh2、NRg2C(O)Rf2、 NRg2C(O)ORe2、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、P(Rf2)2、 P(ORe2)2、P(O)Re2Rf2、P(O)ORe2ORf2、S(O)Rf2、S(O)NRg2Rh2、S(O)2Rf2 或S(O)2NRg2Rh2；
R7和R8独立选自H、C1-8烷基、芳基、杂芳基、环烷基、杂环 烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、环烷基烷基和杂环烷基烷基，各自 被一个和多个取代基任选取代，所述取代基独立选自卤代、CN、NO2、 OH、C1-4烷氧基、C1-4卤代烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、C2-8二烷基 氨基、C1-6烷基、C2-6链烯基和C2-6炔基；
R8a和R8b独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6 炔基、芳基、环烷基、芳基烷基和环烷基烷基；
Cy1、Cy2、Cy3和Cy4独立选自芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷 基，各自被独立选自以下的1、2、3、4或5个取代基任选取代：卤 代、C1-4烷基、C2-4链烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基、CN、NO2、ORe3、 SRe3、C(O)Rf3、C(O)NRg3Rh3、C(O)ORe3、OC(O)Rf3、OC(O)NRg3Rh3、 NRg3Rh3、NRg3C(O)Rh3、NRg3C(O)ORe3、S(O)Rf3、S(O)NRg3Rh3、S(O)2Rf3 和S(O)2NRg3Rh3；
Ra和Rb独立选自H、卤代、C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、 C1-4卤代烷基、芳基、环烷基、杂芳基、杂环烷基、芳基烷基、环烷 基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基烷基、CN、NO2、ORe4、SRe4、C(O)Rf4、 C(O)NRg4Rh4、C(O)ORe4、OC(O)Rf4、OC(O)NRg4Rh4、NRg4Rh4、 NRg4C(O)Rh4、NRg4C(O)ORe4、C(＝NRi)NRg1Rh1、NRg1C(＝NRi)NRg1Rh1、 P(Rf4)2、P(ORe4)2、P(O)Re4Rf4、P(O)ORe4ORf4、S(O)Rf4、S(O)NRg4Rh4、 S(O)2Rf4和S(O)2NRg4Rh4；
Rc是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、芳基、 环烷基、芳基烷基或环烷基烷基；
Rd是H、ORd1、CN或NO2；
Rd1是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6炔基、芳 基、环烷基、芳基烷基或环烷基烷基；
Re1、Re2、Re3和Re4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、(C1-6烷氧基)-C1-6烷基、C2-6炔基、芳基、环烷基、杂芳基、 杂环烷基、芳基烷基、环烷基烷基、杂芳基烷基或杂环烷基烷基；
Rf1、Rf2、Rf3和Rf4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、杂芳基或杂环烷基；
Rg1、Rg2、Rg3和Rg4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、芳基烷基或环烷基烷基；
Rh1、Rh2、Rh3和Rh4独立选自H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6 链烯基、C2-6炔基、芳基、环烷基、芳基烷基或环烷基烷基；
或Rg1和Rh1与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg2和Rh2与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg3和Rh3与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
或Rg4和Rh4与它们连接的N原子一起形成4元、5元、6元或7 元杂环烷基；
Ri是H、CN或NO2；
a为0或1；
b为0或1；
m为0或1；
n为0或1；
p为0或1；
q为0；
r为0；
s为0；
t为1、2、3、4、5或6；
u为0、1、2、3、4、5或6；和
v为0、1、2、3、4、5或6。
在本说明书全文中，本发明化合物的取代基以组或范围的形式 公开。本发明尤其应包括各此类组和范围以及此类组和范围内成员 的每个单独亚组合。例如，术语“C1-6烷基”尤其应为分别公开的甲 基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基和C6烷基。
本发明化合物还应是稳定的。本文中使用的“稳定的”是指足 够坚固能够经受起由反应混合物分离至有效纯度的过程，优选能够 配制成有效治疗药物的化合物。
还可意识到，也可在单个实施方案中，为了明确起见，按组合 形式提供在不同实施方案上下文中描述的本发明的某些特征。相反， 为了简洁，也可分别或按任何适宜的亚组合形式，提供在单个实施 方案上下文中描述的本发明的各种特征。
本文中使用的术语“烷基”应指直链或支链饱和烃基。烷基的 实例包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例 如正丁基、异丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基) 等。烷基可含有1-约20、2-约20、1-约10、1-约8、1-约6、1-约4， 或1-约3个碳原子。
本文中使用的“链烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的烷基。 链烯基的实例包括乙烯基、丙烯基等。
本文中使用的“炔基”是指具有一个或多个碳-碳三键的烷基。 炔基的实例包括乙炔基、丙炔基等。
本文中使用的“卤代烷基”是指具有一个或多个卤素取代基的 烷基。卤代烷基的实例包括CF3、C2F5、CHF2、CCl3、CHCl2、C2C15 等。
本文中使用的“碳环基”是饱和(即不含双键或三键)或不饱和(即 含一个或多个双或三键)环烃部分。碳环基可以是单环或多环(例如具 有2、3或4个稠合环或螺环)。碳环基的实例包括环丙基、环丁基、 环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、1，3-环戊二烯基、环己烯基、 降冰片烷基、降蒎烷基(norpinyl)、降蒈烷基(norcarnyl)、金刚烷基、 苯基等。碳环基可以为芳族(例如“芳基”)或非芳族(例如“环烷基”)。 在某些实施方案中，碳环基可具有约3-约30个碳原子、约3-约20、 约3-约10，或约3-约7个碳原子。
本文中使用的“芳基”是指单环或多环(例如具有2、3或4个稠 合的环)芳烃，例如苯基、萘基、蒽基、菲基、茚满基、茚基等。在 某些实施方案中，芳基具有6-约20个碳原子。
本文中使用的“环烷基”是指非芳族碳环，它们包括环烷基、 环烯基、环炔基。环烷基可包括单环或多环(例如具有2、3或4个稠 合的环)环系统，它包括螺环。在某些实施方案中，环烷基可具有3- 约20个碳原子、3-约14个碳原子、3-约10个碳原子，或3-7个碳 原子。环烷基还可具有0、1、2或3个双键和/或0、1或2个三键。 具有与环烷基环稠合的(即具有共用键)一个或多个芳环的部分也包括 在环烷基的定义中，例如戊烷、戊烯、己烯、己烷等的苯并衍生物。 环烷基的一个或多个成环碳原子可被氧化，例如具有氧代或硫醚取 代基。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚 基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基、降冰片烷基、 降蒎烷基、降蒈烷基、金刚烷基等。
本文中使用的“杂环基”或“杂环”是指饱和或不饱和的环状 基团，其中一个或多个成环原子是杂原子例如O、S或N。杂环基包 括单环或多环系统。杂环基可以是芳族(例如“杂芳基”)或非芳族(例 如“杂环烷基”)。杂环基可表征为具有3-14、3-12、3-10、3-7或3- 6个环原子。在某些实施方案中，除含至少一个杂原子外，杂环基还 可含有约1-约13、约2-约10，或约2-约7个碳原子，且可通过碳原 子或杂原子连接。在进一步的实施方案中，杂原子可被氧化(例如具 有氧代或硫代(sulfido)取代基)，或可使氮原子季铵化。杂环基的实例 包括吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2，3- 二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯、苯并-1，4-二氧杂环己烷、 哌啶基、吡咯烷基、异唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、唑烷基、 噻唑烷基、咪唑烷基等，和下列“杂芳基”和“杂环烷基”中的任 何基团。杂环的其它实例包括嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、 吩噻嗪基、酚氧硫杂环己二烯基(phenoxathiinyl)、吩嗪基、2，3-二 氮杂萘基、哌嗪基、哌啶基、3，6-二氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、 1，2，5，6-四氢吡啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤 基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡 啶并唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、pyridinyl、吡啶基、嘧啶基、 吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、四氢呋喃基、四氢异喹 啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1，2，5-噻-二嗪基、1，2，3-噻二唑基、 1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、 噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三 嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基、呫 吨基、八氢异喹啉基、二唑基、1，2，3-二唑基、1，2，4-二唑基、1，2，5- 二唑基、1，3，4-二唑基、唑烷基、唑基、唑烷基、喹唑啉基、 喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、吖啶基、吖辛因基、苯 并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻喃基、苯并噻吩基、苯并唑基、苯 并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异唑基、苯并异噻唑基、 苯并咪唑啉基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、1，5-二氮杂萘基、十氢喹 啉基、2H，6H-1，5，2二噻嗪基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃、呋喃基、 呋咱基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、苯并吡 喃基、肉啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、indolenyl、 二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异苯 并二氢吡喃基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、 异噻唑基和异唑基。杂环的其它实例包括氮杂环丁烷-1-基、2，5-二 氢-1H-吡咯-1-基、哌啶(piperindin)-1-基、哌嗪-1-基、吡咯烷-1-基、 异喹啉-2-基、吡啶-1-基、3，6-二氢吡啶-1-基、2，3-二氢吲哚-1-基、1，3，4，9- 四氢咔啉-2-基、噻吩并[2，3-c]吡啶-6-基、3，4，10，10a-四氢-1H-吡嗪并 [1，2-a]吲哚-2-基、1，2，4，4a，5，6-六氢-吡嗪并[1，2-a]喹啉-3-基、吡嗪并 [1，2-a]喹啉-3-基、二氮杂环庚烷-1-基(diazepan-1-y1)、1，4，5，6-四氢-2H- 苯并[f]异喹啉-3-基、1，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-苯并[f]异喹啉-3-基、 3，3a，8，8a-四氢-1H-2-氮杂-环戊二烯并[a]茚-2-基和2，3，4，7-四氢-1H-氮 杂-1-基、氮杂环庚烷-1-基。
本文中使用的“杂芳基”是指具有至少一个环杂原子成员例如 硫、氧或氮的芳杂环。杂芳基包括单环和多环(例如具有2、3或4个 稠合的环)系统。杂芳基中的任何成环N原子也可被氧化形成N-氧代 部分。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、N-氧代吡啶基、嘧啶基、 吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、噻吩基、 咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩 基、苯并噻唑基、异唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1，2，4- 噻二唑基、异噻唑基、苯并噻吩基、嘌呤基、咔唑基、苯并咪唑基、 二氢吲哚基等。在某些实施方案中，杂芳基具有1至约20个碳原子， 在进一步实施方案中，具有约3-约20个碳原子。在某些实施方案中， 杂芳基含有3-约14、3-约7，或5-6个环原子。在某些实施方案中， 杂芳基具有1-约4、1-约3，或1-2个杂原子。
本文中使用的“杂环烷基”是指其中一个或多个成环原子是杂 原子例如O、N或S原子的非芳族杂环。杂环烷基可包括单环或多 环(例如具有2、3或4个稠合的环)环系统和螺环。“杂环烷基”的 实例包括吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、 2，3-二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯、苯并-1，4-二氧杂环 己烷、哌啶基、吡咯烷基、异唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、 唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基等。杂环烷基的成环碳原子和环杂原 子可被氧代或硫代任选取代。具有与非芳族环稠合(即具有共用键)的 一个或多个芳环的部分也包括在杂环烷基的定义中，例如苯二酰亚 氨基、萘二甲酰亚氨基和杂环的苯并衍生物例如indolene和isoindolene 基。在某些实施方案中，杂环烷基具有1-约20个碳原子，在进一步 实施方案中，约3-约20个碳原子。在某些实施方案中，杂环烷基含 有3-约20、3-约14、3-约7，或5-6个成环原子。在某些实施方案中， 杂环烷基具有1-约4、1-约3，或1-2个杂原子。在某些实施方案中， 杂环烷基含有0-3双键。在某些实施方案中，杂环烷基含有0-2个三 键。
本文中使用的“卤代”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
本文中使用的“卤代烷基”是指被至少一个卤素原子取代的烷 基。卤代烷基的实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基等。
本文中使用的“烷氧基”是指-O-烷基。烷氧基的实例包括甲氧 基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。
本文中使用的“烷氧基烷基”是指被烷氧基取代的烷基。
本文中使用的“卤代烷氧基”是指-O-卤代烷基。卤代烷氧基的 实例是OCF3。
本文中使用的“芳基烷基”是指被芳基取代的烷基，而“环烷 基烷基”是指被环烷基取代的烷基。芳基烷基的实例是苄基。
本文中使用的“杂芳基烷基”是指被杂芳基取代的烷基，而“杂 环烷基烷基”是指被杂环烷基取代的烷基。
本文中使用的“氨基”是指NH2。
本文中使用的“烷基氨基”是指被烷基取代的氨基。
本文中使用的“二烷基氨基”是指被2个烷基取代的氨基。
应理解，当描述取代基为连接部分的结构时，它必须至少是二 价。例如，当式I中所描述的结构的R3a变量是烷基时，烷基部分应 理解为烷基连接部分例如-CH2-、-CH2CH2-、CH3CH＜等。
本文中所述化合物可以是不对称的(例如具有一个或多个立体中 心)。除另有所指外，应包括所有立体异构体例如对映体和非对映体。 可将含不对称取代的碳原子的本发明化合物分离为旋光性或外消旋 形式。本领域中已知如何由旋光性原料制备旋光性形式的方法，例 如通过拆分外消旋混合物或通过立体有择合成。烯烃的多种几何异 构体、C＝N双键等也可存在于本文所述的化合物中，所有此类稳定 的异构体均应包括在本发明中。对本发明化合物的顺和反式几何异 构体进行了论述，它们可分离为异构体的混合物或单独异构体形式。
本发明化合物还包括互变异构形式，例如酮-烯醇互变异构体。
本发明化合物还可包括出现在中间体或终化合物的原子的所有 同位素。同位素包括具有相同原子数但不同质量数的那些原予。例 如，氢的同位素包括氚和氘。
本发明还包括本文中所述化合物的药学上可接受的盐。本文中 使用的“药学上可接受的盐”是指公开化合物的衍生物，其中通过 将存在的酸或碱部分转化为其盐形式用于修饰母体化合物。药学上 可接受的盐的实例包括但不限于碱基例如胺的无机或有机酸盐；酸 基例如羧酸的碱或有机盐等。本发明药学上可接受的盐包括例如由 无毒的无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐或季铵盐。可 通过常规化学方法，由含碱性或酸性部分的母体化合物合成本发明 药学上可接受的盐。通常，可在水或在有机溶剂或在两种溶剂的混 合物中，通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计量量的适当 的碱或酸反应，制备此类盐；通常优选非水溶媒如乙醚、乙酸乙酯、 乙醇、异丙醇或乙腈。适宜的盐的目录可在Remington’s Pharmaceutical Sciences，17th ed.Mack Publishing Company，Easton，Pa.1985，p.1418 和Journal of Pharmaceutical Science，66，2(1977)中找到，各自通过引 用全文结合到本文中。
本文中使用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断 范围内，适用于与人和动物组织接触，无过度毒性、刺激、过敏反 应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称的那些化合物、 物质、组合物和/或剂型。
本发明还包括本文中所述化合物的前药。本文中使用的“前药” 是指当给予哺乳动物患者时释放活性母体药物的任何共价结合的载 体。可通过常规操作或在体内，按可分解为母体化合物的修饰方式， 修饰存在于化合物中的官能团，制备前药。前药包括当给予哺乳动 物患者时，其中羟基、氨基、巯基或羧基与任何基团连接的分解后 分别形成游离羟基、氨基、巯基或羧基的化合物。前药的实例包括 但不限于本发明化合物中醇和胺官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸 酯衍生物。T.Higuchi and V.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”A.C.S的第14卷.Symposium Series，和Bioreversible Carriers in Drug Design，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987对前药的制备和使用方法进行了 论述，两者通过引用全文结合到本文中。
合成
可按有机合成领域技术人员已知的多种方法制备本发明化合 物。可将用下述方法和合成有机化学领域中已知的合成方法或本领 域技术人员意识到的有关改变方法结合在一起，合成本发明化合物。
可用以下通用方法和规程，由容易得到的原料制备本发明化合 物。可以意识到，在给出典型的或优选的加工条件(即反应温度、时 间、反应物摩尔比例、溶剂、压力等)时；除另有所指外，也可使用 其它方法条件。最佳反应条件取决于具体的反应物或所用的溶剂， 但本领域技术人员可通过常规优化方法确定此类条件。
可按照本领域中已知的任何合适的方法，监测本文中所述过程。 例如，可通过广谱方法例如核磁共振波谱(例如1H或13C)、红外光谱、 分光光度测定(例如UV-可见)或质谱，或通过色谱例如高效液相色谱 (HPLC)或薄层层析监测产物形成。
制备化合物的方法涉及将各种化学基团保护和脱保护。本领域 技术人员可容易地确定保护和脱保护的需要以及选择适宜的保护基 团。保护基团化学可在例如Greene，et a1.Protective Groups in Organic Synthesis，2d.Ed.Wiley & Sons，1991中找到，其通过引用全文结合 到本文中。
可在合适的溶剂中进行本文中所述方法的反应，有机合成领域 的技术人员可容易地选择合适的溶剂。在反应进行的温度即可在溶 剂的凝固温度至溶剂的沸点温度范围内，适宜的溶剂可基本上不与 原料(反应物)、中间体或产物反应。可在一种溶剂或一种以上的溶剂 的混合物中进行特定的反应。根据具体的反应步骤，可选择用于具 体反应步骤的适宜溶剂。
可通过本领域中已知的任何各种方法拆分化合物的外消旋混合 物。方法实例包括用作为形成盐的旋光性有机酸的“手性拆分酸” 分级重结晶。适合分级重结晶方法的拆分剂是例如旋光性酸，例如 D和L型酒石酸、二乙酰酒石酸、二苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果 酸、乳酸或各种旋光性樟脑磺酸。也可通过洗脱填充旋光性拆分试 剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱，拆分外消旋混合物。本领 域技术人员可确定适宜的洗脱溶剂组合。
例如可用下述反应途径和技术制备本发明化合物。
本领域技术人员可合成式I化合物。实例见流程1所示(Q是 N{(X1)m(R5a)n(X2)pR5b}{Y1)q(R4a)r(Y2)sR4b}，NR’R”是 N(R2){(R3a)a(W)bR3b})。可将腈(1)转化为酰胺肟(2)。将酰胺肟氯化， 可得到氯代肟(3)，使它与各种胺反应，得到取代的酰胺肟(4)。
流程1

合成二唑母核的实例见流程2所示。可将4-氨基-N′-羟基-1，2，5- 二唑-3-甲脒(carboximidamide)(5)[J.Heterocycl.Chem.(1965)，2， 253]转化为氯代肟6[Synth.Commun.(1988)，18，1427]。将多种胺加 成到6，可得到取代的酰胺肟(7)。
流程2

可按流程3所示合成其它式I化合物。将酰胺肟7保护，可得到 8，可使它与多种烷基卤、酰卤、磺酰卤、异氰酸酯和卤代甲酸酯等(X 是离去基团例如卤代)反应，得到它们的相应的烷基胺、酰胺、磺酰 胺、脲和氨基甲酸酯(9)。
流程3

也可按流程4所示制备酰胺肟。使酸例如10与胺偶合，可获 得酰胺11。可将酰胺11转化为硫代酰胺12，将它甲基化，得到甲 硫代亚氨酸酯(thioimidate)13。使13与羟胺反应，可得到酰胺肟14。 或者，可由氯亚氨酸酯15形成酰胺肟14，可用五氯化磷，由酰胺11 合成氯亚氨酸酯15。
流程4

可按流程5所述合成其它的酰胺肟(X是离去基团)。使酰胺肟7 重排，可得到16，用亚硝酸钠在HCl中将它转化为17。使17与胺 反应，可得到化合物例如18。
流程5

可按流程6所示合成其它化合物。使8与酰胺偶合，可得到19， 可将它用五氯化磷处理，然后用氢化物例如氰基硼氢钠或硼烷还原， 得到20。用氢氧化钠使20脱保护，可得到酰胺肟21。也可使酰胺19 脱保护，得到22。也可将化合物8转化为23，可使它与适宜的醇按 Mitsunobu偶合方式偶合，脱保护后，得到24。或者，可使化合物23 烷化，得到25，可使它脱保护，得到26。
流程6

用法
本发明化合物可调节吲哚胺-2，3-双加氧酶(IDO)的活性。术语“调 节”是指增加或减少酶或受体活性的能力。因此，通过使酶与本文 中所述任何一种或多种化合物或组合物接触，本发明化合物可用于 调节IDO的方法。在某些实施方案中，本发明化合物可起IDO抑制 剂的作用。在进一步实施方案中，通过给予调节(例如抑制)量的本发 明化合物，本发明化合物可用于调节需要调节的细胞或个体中的酶 的IDO活性。
本发明还提供抑制系统中色氨酸降解的方法，该系统(例如组织、 活有机体或细胞培养物)含有表达IDO的细胞。在某些实施方案中， 通过给予有效量的本文中提供的化合物的组合物，本发明提供改变(例 如增加)哺乳动物细胞外色氨酸水平的方法。测量色氨酸水平和色氨 酸降解的方法是本领域中的常规方法。
通过给予患者有效量的本文中引用的化合物或组合物，本发明 还提供抑制患者免疫抑制例如IDO介导的免疫抑制的方法。IDO介 导的免疫抑制与例如癌症；肿瘤生长、转移；病毒感染；病毒复制 等有关。
通过给予需要这种治疗的个体治疗有效量或剂量的本发明化合 物或其药用组合物，本发明还提供治疗与个体(例如患者)中IDO活性 或表达包括异常活性和/或过度表达有关的疾病的方法。疾病实例可 包括直接或间接与IDO酶表达或活性例如过度表达或异常活性有关 的任何疾病、紊乱或病症。IDO介导的疾病也可包括可通过调节酶 活性预防、缓解或治愈的任何疾病、紊乱或病症。有关IDO的疾病 的实例包括癌症；病毒感染例如HIV感染；抑郁症；神经变性病症 例如早老性痴呆和亨廷顿氏舞蹈病；创伤；与年龄有关的白内障； 器官移植(例如器官移植排斥)和自身免疫疾病，包括哮喘、类风湿性 关节炎、多发性硬化、炎性肠道疾病、银屑病和系统性红斑狼疮。 可通过本文方法治疗的癌症实例包括结肠、胰腺、乳腺、前列腺、 肺、脑、卵巢、宫颈、睾丸、肾、头和颈的癌；淋巴癌；自血病； 黑素瘤等。
本文中使用的术语“细胞”应是指体外、离体或体内细胞。在 某些实施方案中，离体细胞可以是从有机体例如哺乳动物中切除的 组织标本的一部分。在某些实施方案中，体外细胞可以是细胞培养 物中的细胞。在某些实施方案中，体内细胞是生活在有机体例如哺 乳动物中的细胞。
本文中使用的术语“接触”是指将指定部分与体外系统或体内系 统联系在一起。例如，使IDO酶与本发明化合物“接触”包括给予 具有IDO的个体或患者例如人本发明化合物，和例如将本发明化合 物引入含有含IDO酶的细胞或纯化制剂的样品中。
在本文中可互换使用的术语“个体”或“患者”是指包括哺乳 动物在内的任何动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿类动物、兔、狗、 猫、猪、牛、羊、马或灵长类动物，最优选人。
本文中使用的短语“治疗有效量”是指研究人员、兽医、医师 或其它临床医师正在组织、系统、动物、个体或人中寻找的引起生 物学或医学反应的活性化合物或药物的量，它包括以下一项或多项：
(1)预防疾病；例如在易感染疾病、紊乱或病症但尚未经历或 出现疾病病理或症状的个体中预防疾病、紊乱或病症。
(2)抑制疾病；例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理 或症状的个体中抑制疾病、紊乱或病症；和
(3)缓解疾病；例如在正经历或出现疾病、紊乱或病症的病理 或症状的个体中缓解疾病、紊乱或病症(即逆转病理和/或症状)，例如 减低疾病的严重性。
联合疗法
一种或多种其它药物或治疗方法例如抗病毒药物、化疗药物或 其它抗癌药物、免疫促进剂、免疫抑制剂、放疗、抗癌和抗病毒疫 苗、细胞因子疗法(例如IL2，GM-CSF等)和/或酪氨酸激酶抑制剂可 与本发明化合物联合使用，以治疗与IDO有关的疾病、紊乱或病症。 这些药物可与本发明化合物结合在同一个剂型中，或可作为分开的 剂型，同时或序贯给予这些药物。
预计与本发明化合物联用的适宜的抗病毒药物可包括核苷和核 苷酸逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白 酶抑制剂和其它抗病毒药物。
适宜的NRTI的实例包括齐多夫定(AZT)；去羟肌苷(ddl)；扎西 他滨(ddC)；司他夫定(d4T)；拉米夫定(3TC)；阿巴卡韦(1592U89)； 阿德福韦二匹伏酯[二(POM)-PMEA]；洛布卡韦(BMS-180194)； BCH-10652；恩曲他滨[(-)-FTC]；β-L-FD4(又称为β-L-D4C，命名为 β-L-2′，3′-dicleoxy-5-氟-cytidene)；DAPD，((-)-β-D-2，6，-二氨基-嘌呤二 氧戊环)；和洛德腺苷(FddA)。典型的适宜的NNRTI包括奈韦拉平 (BI-RG-587)；地位韦啶(BHAP，U-90152)；依法韦仑(DMP-266)； PNU-142721；AG-1549；MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)- 6-(苯基甲基)-(2，4(1H，3H)-嘧啶二酮)；和(+)-红厚壳素植物提取物 (calanolide A)(NSC-675451)和B。典型的适宜的蛋白酶抑制剂包括沙 奎那韦(Ro 31-8959)；利托那韦(ABT-538)；茚地那韦(MK-639)；奈 非那韦(AG-1343)；氨普奈韦(141W94)；拉西那韦(BMS-234475)； DMP-450；BMS-2322623；ABT-378；和AG-1 549。其它抗病毒药 物包括羟基脲、利巴韦林、IL-2、IL-12、喷他夫西、Yissum项目号 11607。
适宜的化疗药物或其它抗癌药物包括例如烷化剂(包括但不限于 氮芥、环乙亚胺(ethylenimine)衍生物、磺酸烷基酯、亚硝基脲和三氮 烯)，例如乌拉莫司汀、氮芥、环磷酰胺(CytoxanTM)、异环磷酰胺、 美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三亚乙基密胺、塞替派、白消安、 卡莫司汀、洛莫司汀、链佐星、达卡巴嗪和替莫唑胺。
适宜的化疗药物或其它抗癌药物包括例如抗代谢药(包括但不限 于叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)，例 如甲氨碟呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟 嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁和吉西他滨。
适宜的化疗药物或其它抗癌药物还包括例如某些天然产物及其 衍生物(例如长春花生物碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼 毒素)，例如长春碱、长春新碱、长春酰胺、博来霉素、放线菌素D、 柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、阿糖胞苷、紫杉醇 (TaxolTM)、普卡霉素、脱氧考福霉素、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、 干扰素(尤其IFN-a)、依托泊苷和替尼泊苷。
其它细胞毒药物包括诺维本(navelbene)、CPT-11、阿那曲唑、 来曲唑、卡培他滨、reloxafine、环磷酰胺、异环磷酰胺和屈洛昔芬。
细胞毒药物例如表鬼臼毒素；抗肿瘤酶；拓扑异构酶抑制剂； 丙卡巴肼；米托蒽醌；铂配位络合物例如顺铂和卡铂；生物反应调 节物；生长抑制剂；抗激素治疗药物；亚叶酸；替加氟；和造血生 长因子也适用。
其它抗癌药物包括抗体治疗药物例如曲妥单抗(Herceptin)、共同 刺激性分子的抗体例如CTLA-4、4-1BB和PD-1，或细胞因子的抗 体(IL-10，TGF-β等)。
其它抗癌药物还包括阻滞免疫细胞迁移的那些，例如趋化因子 受体拮抗剂包括CCR2和CCR4。
其它抗癌药物还包括增强免疫系统的那些，例如辅药或过继T 细胞转移。
抗癌疫苗包括树突细胞、合成肽、DNA疫苗和重组病毒。
本领域技术人员已知安全并有效给予大多数这些化疗药物的方 法。另外，它们的给药方法在标准文献中也有论述。例如，在″Physicians′ Desk Reference″(PDR，e.g.1996 edition，Medical Economics Company， Montvale，NJ)中阐述了多种化疗药物的给药方法，其公开内容通过引 用结合到本文中。
药物制剂和剂型
当用作药物时，可按药物组合物的形式给予本发明化合物，该 组合物是本发明化合物和药学上可接受的载体的组合。可按药剂领 域中熟知的方式制备这些组合物，可通过多种途径给予它们，这取 决于是否需要局部或全身治疗和所治疗的区域。可局部(包括眼和粘 膜包括鼻内、阴道和直肠递药)、肺(例如通过吸入或吹入粉末或气雾 剂，包括通过喷雾器；气管内、鼻内、皮肤和透皮)、眼、口服或肠 胃外给药。眼递药的方法可包括局部给药(眼滴剂)、结膜下、眼周或 玻璃体内注射或通过气球导管引入或将眼科插入物经手术置于结膜 囊内。肠胃外给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射 或输注；或颅内例如鞘内或心室内给药。可按单次大剂量形式肠胃 外给药，或可通过例如连续灌注泵给药。局部给予的药用组合物和 制剂可包括透皮贴剂、软膏、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、 喷雾剂、液体剂和散剂。常规药物载体、水、粉末或油性基质、增 稠剂等可能是必须的或需要的。
本发明还包括含与一种或多种药学上可接受的载体组合的以一 种或多种以上本发明化合物为活性成分的药用组合物。在制备本发 明的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，通过赋形剂稀释或 装入例如胶囊、小药囊、纸或其它容器形式的这种载体内。当赋形 剂用作稀释剂时，它可以是固体、半固体或液体物质，用作溶媒、 载体或活性成分的介质。因此，组合物可以是以下形式：片剂、丸 剂、散剂、锭剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、 糖浆剂、气雾剂(固体或溶于液体溶媒)；含例如高达10％重量活性化 合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装 粉末。
在制备制剂时，可将活性化合物粉碎，得到适宜粒度，然后与 其它成分混合。如果活性化合物基本上不溶，可将其粉碎成小于200 目粒度的颗粒。如果活性化合物基本上溶于水，可通过粉碎调整粒 度，得到基本上均匀分布在制剂中的粒度例如约40目。
适宜的赋形剂的某些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、 甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸 钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维 素。制剂还可含有：润滑剂例如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；湿润 剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂例如苯甲酸甲酯和苯甲酸羟基丙酯； 甜味剂和矫味剂。可通过使用本领域中已知的方法配制本发明组合 物，以便在给予患者后提供速释、缓释或延迟释放活性成分的作用。
可按单位剂型配制组合物，每一剂量含约5-约100mg，更通常 约10-约30mg活性成分。术语“单位剂型”是指物理上分离的适宜 作为用于人患者和其它哺乳动物的单一剂量单位，各单位含有与适 宜的药物赋形剂混合的经计算可产生所需疗效的预定量的活性物 质。
活性化合物的有效剂量的范围可很大，通常按药用有效量给药。 但是，可以理解实际给予的化合物的量通常由医师根据相关情况决 定，它们包括所治疗的病症、所选择的给药途径、所给予的实际化 合物；患者个体的年龄、重量和反应；患者症状的严重程度等。
对于制备固体组合物例如片剂，将主要的活性成分与药物赋形 剂混合，形成含本发明化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物。 当称这些预制剂组合物为均匀时，是指活性成分通常均匀地分布在 整个组合物中，致使该组合物可容易地划分为同等有效的单位剂型 例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将该固体预制剂划分为上述类型的 含例如0.1-约500mg本发明活性成分的单位剂型。
可将本发明片剂或丸剂包衣或复合，得到提供长效作用优点的 剂型。例如，片剂或丸剂含内剂量和外剂量组分，后者是前者的被 膜形式。可通过肠溶层将两种组分隔离，肠溶层用于在胃中阻止崩 解，以使内组分完整通过十二指肠或延迟释放。多种物质可用于此 类肠溶层或包衣剂，此类物质包括多种高分子酸和高分子酸与此类 物质如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的混合物。
其中可掺入本发明化合物和组合物，用于口服或注射给药的液 体形式包括水溶液、适当矫味的糖浆剂、水或油混悬液；和用食用 油例如棉子油、芝麻油、椰子油或花生油矫味的乳剂；以及酏剂和 类似的药用溶媒。
用于吸入或吹入的组合物包括溶于药学上可接受的水或有机溶 剂或其混合物的溶液剂和混悬液、散剂。液体或固体组合物可含有 如上所述适宜的药学上可接受的赋形剂。在某些实施方案中，通过 口服或鼻呼吸途径给予组合物，实现局部或全身作用。可通过使用 惰性气体，使组合物成雾化。可直接由雾化装置吸入雾化溶液，或 雾化装置可与面罩帷或间歇正压呼吸机连接。可通过口服或由按适 当方式递送制剂的装置通过鼻给予溶液、混悬液或粉末组合物。
给予患者的化合物或组合物的量不固定，取决于给予的药物、 给药的目的例如预防或治疗；患者的状态、给药的方式等。在治疗 应用时，可给予已患疾病的患者足够治愈或至少部分抑制疾病及其 并发症症状的量的组合物。有效剂量应取决于所治疗的疾病状态和 主治临床医师的判断，该判断取决于例如疾病的严重程度、患者的 年龄、体重和一般状况等因素。
给予患者的组合物可以是上述药用组合物形式。可通过常规灭 菌技术或可过滤灭菌，将这些组合物灭菌。可将水溶液包装原样使 用，或冻干，给药前，将冻干制剂与无菌水性载体混合。化合物制 剂的pH通常为3-11，更优选5-9，最优选7-8。可以理解，使用某 些前述赋形剂、载体或稳定剂会导致形成药物盐。
本发明化合物的治疗剂量可根据例如以下而定：治疗的具体用 途、给予化合物的方式、患者的健康和状态，以及签处方医师的判 断。本发明化合物在药用组合物中的比例或浓度可不固定，取决于 多种因素，它们包括剂量、化学特性(例如疏水性)和给药途径。例如 可通过含约0.1-约10％w/v该化合物的生理缓冲水溶液提供本发明化 合物，用于肠胃外给药。某些典型剂量范围为约1μg/kg-约1g/kg体 重/日。在某些实施方案中，剂量范围为约0.01mg/kg-约100mg/kg 体重/日。剂量很可能取决于此类变量，如疾病或病症的种类和发展 程度、具体患者的一般健康状态、所选择的化合物的相对生物学效 力、赋形剂制剂及其给药途径。可通过由体外或动物模型试验系统 导出的剂量-反应曲线外推，得到有效剂量。
本发明化合物也可与一种或多种其它活性成分一起配制，这些 活性成分可包括任何药物例如抗病毒药物、疫苗、抗体、免疫促进 剂、免疫抑制剂、抗炎药物等。
标记化合物和测定方法
本发明的另一方面涉及本发明荧光染料、顺磁标记、重金属或 放射性标记化合物，它们不仅可用于成像而且可用于体内外测定； 用于定位和定量组织标本包括人中的IDO酶；以及通过抑制标记化 合物的结合，用于鉴定IDO酶配体。因此，本发明包括含有此类标 记化合物的IDO酶测定。
本发明还包括同位素标记的式I化合物。“同位素”或“放射性 标记”化合物是具有以下特征的本发明化合物：其中一个或多个原 子被具有不同于通常在自然界中发现的(即天然存在的)原子质量或质 量数的原子质量或质量数的原子置换或取代。可掺入本发明化合物 中的适宜的放射性核包括但不限于2H(又写为D，代表氘)、3H(又写 为T，代表氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、 36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。掺入本发明放射 性标记化合物的放射性核须取决于该放射性标记化合物的专门用 途。例如，对于体外IDO酶标记和竞争测定，掺入3H、14C、82Br、125I、 131I、35S的化合物通常应最有效。对于放射性成像应用，11C、18F、125I、 123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br应最有效。
可以理解，“放射性标记”或“标记化合物”是掺入至少一种 放射性核的化合物。在某些实施方案中，放射性核选自3H、14C、125I、 35S和82Br。
将放射性同位素掺入有机化合物的合成方法适用于本发明化合 物，且在本领域中众所周知。
本发明放射性标记化合物可用于筛选测定，以鉴定/评价化合物。 概括地说，可评价新合成或鉴定的化合物(即试验化合物)减少本发明 放射性标记化合物与IDO酶结合的能力。因此，试验化合物和放射 性标记化合物竞争与IDO酶结合的能力直接与其结合亲和力相关。
药剂盒
本发明还包括用于例如治疗或预防与IDO有关的疾病或病症、 肥胖症、糖尿病和其它本文中涉及的疾病的药剂盒，这种药剂盒包 括一个或多个含药用组合物的容器，所述药用组合物含有治疗有效 量的本发明化合物。此类药剂盒还酌情包括一个或多个各种常规药 剂盒组件，例如含有一种或多种药学上可接受的载体的容器、本领 域技术人员显而易见的其它容器等。也可将用作插页或标签的指明 给予成分的量、用药指南和/或将成分混合的指南的说明书包括在药 剂盒中。
通过具体的实施例更详细地说明本发明。为说明目的提供以下 实施例，它们不应以任何方式限制本发明。本领域技术人员应容易 认识到，可改变或修改多种非关键性参数，得到基本上相同的结果。 按照一种或多种本文中所述测定，发现以下实施例化合物是IDO抑 制剂。
实施例
根据1H NMR检测，以下制备的实施例化合物具有E和Z异构 体。虽然不希望受理论的束缚，但根据例如Zh.Org.Chim.(1993)，29， 1062-1066中报道的数据，相信主要的异构体是Z异构体。
实施例1
4-氨基-N-(3-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

步骤1.4-氨基-N-羟基-1，2，5-二唑-3-甲亚氨酰氯

在0℃下，将3M氯化氢的水(190mL)溶液用4-氨基-N′-羟基- 1，2，5-二唑-3-甲脒[J.Heterocycl.Chem.(1965)，2，253](7.3g，0.051 mol)处理。用足量的12M氯化氢(～19mL)处理反应混合物，使固体 溶解，然后通过滴加亚硝酸钠(4.4g，0.063mol)的水(24mL)溶液进行 处理，同时用冰/盐水浴使内部温度保持在0-5℃。将反应混合物在0 ℃下搅拌1.5h，过滤，得到米色固体。粗混合物经制备HPLC纯化， 得到所需产物(1.7g，21％)，为灰白色固体。
步骤2：4-氨基-N-(3-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒
将3-氟苯胺(36μL，0.37mmol)的乙醇(0.5mL)溶液用4-氨基-N- 羟基-1，2，5-二唑-3-甲亚氨酰氯(50mg，0.31mmol)的乙醇(1.5mL)溶 液处理，然后滴加三乙胺(51μL，0.37mmol)。将反应混合物在25℃ 下搅拌1h，经制备LCMS纯化，得到所需产物(21mg，29％)。 C9H9FN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝238.0。
实施例2
4-氨基-N′-羟基-N-苯基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用苯胺作原料，制备该化合物。C9H10N5O2 的LCMS(M+H)+：m/z＝220.0。
实施例3
4-氨基-N-(2-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用2-氯苯胺作原料，制备该化合物。 C9H9ClN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝254.0。
实施例4
4-氨基-N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-氯苯胺作原料，制备该化合物。 C9H9ClN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝254.1。
实施例5
4-氨基-N-(4-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-氯苯胺作原料，制备该化合物。 C9H9ClN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝254.1。
实施例6
4-氨基-N-(4-溴苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-溴苯胺作原料，制备该化合物。 C9H9BrN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝297.9。
实施例7
4-氨基-N′-羟基-N-(2-甲基苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用2-甲基苯胺作原料，制备该化合物。 C10H12N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝234.1。
实施例8
4-氨基-N′-羟基-N-(3-甲基苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-甲基苯胺作原料，制备该化合物。 C10H12N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝234.0。
实施例9
4-氨基-N′-羟基-N-(4-甲基苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-甲基苯胺作原料，制备该化合物。 C10H12N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝234.0。
实施例10
4-氨基-N′-羟基-N-[3-(三氟甲基)苯基]-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-(三氟甲基)苯胺作原料，制备该化合 物。C10H9F3N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝288.0。
实施例11
4-氨基-N′-羟基-N-(2-甲氧基苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用2-甲氧基苯胺作原料，制备该化合物。 C10H12N5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝250.0。
实施例12
4-氨基-N′-羟基-N-(3-甲氧基苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-甲氧基苯胺作原料，制备该化合物。 C10H12N5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝250.0。
实施例13
4-氨基-N′-羟基-N-(4-甲氧基苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-甲氧基苯胺作原料，制备该化合物。 C10H12N5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝250.0。
实施例14
4-氨基-N-[3-(苄氧基)苯基]-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-(苄氧基)苯胺作原料，制备该化合物。 C16H16N5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝326.2。
实施例15
N-(3-乙酰基苯基)-4-氨基-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-氨基苯乙酮作原料，制备该化合物。 C11H12N5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝262.2。
实施例16
4-氨基-N-(3-氰基苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-氨基苄腈作原料，制备该化合物。 C10H9N6O2的LCMS(M+H)+：m/z＝245.0。
实施例17
4-氨基-N-(3，4-二氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3，4-二氟苯胺作原料，制备该化合物。 C9H8F2N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝256.1。
实施例18
4-氨基-N-(4-溴-3-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-溴-3-氟苯胺作原料，制备该化合物。 C9H8BrFN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝316.0，318.0。
实施例19
4-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-氯-4-氟苯胺作原料，制备该化合物。 C9H8ClFN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝272.0。
实施例20
4-氨基-N-(3-氯-4-甲基苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-氯-4-甲基苯胺作原料，制备该化合 物。C10H11ClN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝268.1。
实施例21
4-氨基-N-(3，4-二甲基苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3，4-二甲基苯胺作原料，制备该化合物。 C11H14N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝248.0。
实施例22
4-氨基-N-[4-(苄氧基)-3-氯苯基]-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-(苄氧基)-3-氯苯胺作原料，制备该 化合物。C16H15ClN5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝360.0。
实施例23
4-氨基-N-[4-氟-3-(三氟甲基)苯基]-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-氟-3-(三氟甲基)苯胺作原料，制备 该化合物。C10H8F4N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝306.1。
实施例24
4-氨基-N-苄基-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用苄胺作原料，制备该化合物。 C10H12N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝234.2。
实施例25
4-氨基-N-(2-氟苄基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用2-氟苄胺作原料，制备该化合物。 C10H11FN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝252.0。
实施例26
4-氨基-N-(2-氯苄基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用2-氯苄胺作原料，制备该化合物。 C10H11ClN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝268.1。
实施例27
4-氨基-N-(3-氯苄基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-氯苄胺作原料，制备该化合物。 C10H11ClN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝268.0。
实施例28
4-氨基-N-(4-氯苄基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用4-氯苄胺作原料，制备该化合物。 C10H11ClN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝268.1。
实施例29
4-氨基-N′-羟基-N-[3-(三氟甲基)苄基]-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用3-(三氟甲基)苄胺作原料，制备该化合 物。C11H11F3N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝302.2。
实施例30 
4-氨基-N′-羟基-N-(2-甲氧基苄基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用2-(甲氧基)苄胺作原料，制备该化合物。 C11H14N5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝264.0。
实施例31
4-氨基-N′-羟基-N-(吡啶-2-基甲基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用2-(氨基甲基)吡啶作原料，制备该化合 物。C9H11N6O2的LCMS(M+H)+：m/z＝235.0。
实施例32
4-氨基-N′-羟基-N-(2-苯基乙基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用苯乙胺作原料，制备该化合物。 C11H14N5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝248.0。
实施例33
4-氨基-N′-羟基-N-1H-吲哚-5-基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用5-氨基吲哚作原料，制备该化合物。 C11H11N6O2的LCMS(M+H)+：m/z＝259.2。
实施例34
4-氨基-N-丁基-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

按照实施例1的方法，用丁胺作原料，制备该化合物。C7H14N5O2 的LCMS(M+H)+：m/z＝200.2。
实施例35
N-{4-[[(3-氯苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3-基}-2-苯乙 酰胺

步骤1：3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮

将4-氨基-N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒(540mg，2.1 mmol)和N，N-羰基二咪唑(380mg，2.3mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液 在80℃下加热1h。将反应混合物用乙酸乙酯(150mL)稀释，用0.1N HCl(3×75mL)和盐水(75mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过 滤，浓缩，得到所需产物(560mg，94％)，为白色固体，使用时无须 进一步的纯化。C10H7ClN5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝279.9。
步骤2：N-{4-[[(3-氯苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3- 基}-2-苯乙酰胺
将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮(30.0mg，0.107mmol)和4-二甲基氨基吡啶(2.6mg，0.021mmol)的 吡啶(0.50mL)溶液用苯乙酰氯(42.6μL，0.322mmol)处理，搅拌4h。 将混合物浓缩，用乙醇(1.0mL)和2M氢氧化钠水溶液(0.30mL)再稀 释，搅拌45min。粗反应混合物经制备HPLC纯化，得到所需产物(18 mg，45％)。C17H15ClN5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝371.9。
实施例36
N-{4-{[(3-氯苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺

按照实施例35方法，用苯甲酰氯作原料，制备该化合物。 C16H13ClN5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝358.1。
实施例37
N-{4-[(苄基氨基)(羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺

按照实施例35方法，用3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-苄基-1，2，4- 二唑-5(4H)-酮和苯甲酰氯作原料，制备该化合物。C17H16N5O3 的LCMS(M+H)+：m/z＝338.2。
实施例38
N-苄基-4-(苄基氨基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

步骤1.4-苄基-3-[4-(苄基氨基)-1，2，5-二唑-3-基]-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-苄基-1，2，4-二唑-5(4H)-酮 (60.0mg，0.231mmol)和苄基溴(28μl，0.23mmol)溶液在150℃下加热 5h。将苄基溴(28μL)再加入未完全反应的反应物中，继续加热另外 16h。粗反应混合物经制备HPLC纯化，得到所需产物(12mg，15％)。 C18H16N5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝349.9。
步骤2.N-苄基-4-(苄基氨基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒
将4-苄基-3-[4-(苄基氨基)-1，2，5-二唑-3-基]-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮(12mg，34μmol)的乙醇(1mL)溶液用2M氢氧化钠水溶液(300μL) 处理，在25℃下搅拌30min。将反应混合物用乙酸猝灭，经制备HPLC 纯化，得到所需产物(10mg，90％)，为白色固体。C17H18N5O2的LCMS (M+H)+：m/z＝324.2。
实施例39
4-[(苯胺基羰基)氨基]-N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

实施例40
4-[二(苯胺基羰基)氨基]-N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

步骤1.N-{4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5- 二唑-3-基}-N′-苯脲和N-{4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二 唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}-N，N′-二苯基亚氨二甲酰胺(dicarbonimidic diamide)

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮(30mg，0.1mmol)的吡啶(0.5mL，6.2mmol)溶液用异氰酸苯酯(12 μL，0.1mmol)处理，搅拌2h。将反应混合物用4-二甲基氨基吡啶(3mg， 24μmol)和另外的异氰酸苯酯(10μL，92μmol)处理，再搅拌2h。粗 反应混合物经制备HPLC纯化，得到所需产物N-{4-[4-(3-氯苯基)-5- 氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}-N′-苯脲(5mg， 12％)和N-{4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5- 二唑-3-基}-N，N′-二苯基亚氨二甲酰胺(7mg，12％)。C17H12ClN6O4 的LCMS(M+H)+：m/z＝398.9，C24H16ClN7O5Na的LCMS(M+H)+： m/z＝540.0。
步骤2.4-[(苯胺基羰基)氨基]N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲 脒和4-[二(苯胺基羰基)氨基]-N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲 脒
将N-{4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5- 二唑-3-基}-N′-苯脲(17mg，43μmol)的乙醇(1.5mL)溶液用2.0M氢 氧化钠水溶液(0.3mL)处理，搅拌30min。粗反应混合物经制备HPLC 纯化，得到所需产物4-[(苯胺基羰基)氨基]-N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5- 二唑-3-甲脒(6mg，38％)。C16H14ClN6O3的LCMS(M+H)+：m/z＝ 373.0。
按类似方式，由N-{4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑 -3-基]-1，2，5-二唑-3-基}-N，N′-二苯基亚氨二甲酰胺制备4-[二(苯胺基 羰基)氨基]-N-(3-氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒。 C23H19ClN7O4的LCMS(M+H)+：m/z＝492.0。
实施例41
{4-[({4-[(E，Z)-[(3-氯苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3-基} 氨基)羰基]苄基}氨基甲酸叔丁酯

步骤1.{4-[({4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5- 二唑-3-基}氨基)羰基]苄基}氨基甲酸叔丁酯

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮(50mg，0.18mmol)和4-{[(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}苯甲酸(49mg， 0.2mmol)的二氯甲烷(3.5mL)溶液用4-二甲基氨基吡啶(13mg，0.1 mmol)和N，N-二异丙基乙胺(93μL，0.54mmol)处理。反应混合物澄清 后，将它用溴三(吡咯烷子基(pyrrolydino))磷六氟磷酸盐(50mg，0.11 mmol)和另外的N，N-二异丙基乙胺(93μL，0.54mmol)处理。将反应混 合物搅拌16h，再用溴三(吡咯烷子基)磷六氟磷酸盐(50mg，0.11 mmol)处理，再搅拌6h。将反应混合物用乙酸乙酯(60mL)稀释，用 0.1M HCl(2×25mL)和盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤， 浓缩。粗反应混合物经制备LCMS纯化，得到所需产物(22mg，24％)。 C19H14ClN6O6的LCMS([M-tBu+H]+H)+：m/z＝457.1。
步骤2.{4-[({4-[(E，Z)-[(3-氯苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二 唑-3-基}氨基)羰基]苄基}氨基甲酸叔丁酯
按照实施例38步骤2的方法，用{4-[({4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5- 二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}氨基)羰基]苄基}氨基甲酸 叔丁酯作原料，制备该化合物。C22H24ClN6O5的LCMS(M+H)+：m/z ＝487.0。
实施例42
4-(氨基甲基)-N-{4-[(E，Z)-[(3-氯苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5- 二唑-3-基}苯甲酰胺三氟乙酸盐

步骤1.4-(氨基甲基)-N-{4-[4-(3-氯苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑 -3-基]-1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺三氟乙酸盐

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-氯苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮(0.5g，1.8mmol)和4-{[(叔丁氧基羰基)氨基]甲基}苯甲酸(0.67g，2.7 mmol)的二氯甲烷(35mL)溶液用4-二甲基氨基吡啶(0.13g，1.1mmol) 和N，N-二异丙基乙胺(0.93mL，5.4mmol)处理，然后用溴三(吡咯烷子 基)磷六氟磷酸盐(1.3g，2.7mmol)和另外的N，N-二异丙基乙胺(0.93 mL，5.4mmol)处理。将反应混合物搅拌16h，用07乙酸乙酯(～200mL) 稀释，用0.1M HCl(2×100mL)和盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干 燥，过滤，浓缩。粗反应混合物经硅胶纯化，得到中间体{4-[({4-[4-(3- 氯苯基)-5-氧代-4，5-二-氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}氨基)羰 基]苄基}氨基甲酸叔丁酯。将该物质用二氯甲烷(30mL)稀释，用4.0M HCl的1，4-二氧杂环己烷(4.5mL)溶液处理，搅拌1h。将反应混合物 浓缩，经制备LCMS纯化，得到所需产物(542mg，58％)。 C18H14ClN6O4的LCMS(M+H)+：m/z＝413.0。
步骤2.4-(氨基甲基)-N-{4-[(E，Z)-[(3-氯苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]- 1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺三氟乙酸盐
按照实施例38步骤2的方法，用4-(氨基甲基)-N-{4-[4-(3-氯苯 基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺三 氟乙酸盐作原料，制备该化合物。C17H16ClN6O3的LCMS(M+H)+： m/z＝387.0。
实施例43
4-{[(苄基氨基)羰基]氨基}-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3- 甲脒

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-二唑- 5(4H)-酮(30mg，88μmol)和4-二甲基氨基吡啶(5mg，40μmol)的吡啶 (0.5mL)溶液用异氰酸苄酯(29mg，0.2mmol)处理，在微波中，在150 ℃下加热20min。将反应混合物浓缩，经制备LCMS纯化，得到中 间体N-苄基-N′-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3- 基]-1，2，5-二唑-3-基}脲。将该物质用乙醇(1.5mL)稀释，用2.0M氢 氧化钠水溶液(0.3mL)处理，搅拌30min。粗反应混合物经制备HPLC 纯化，得到所需产物(11mg，28％)。C17H15BrFN6O3的LCMS(M+H)+： m/z＝448.9，451.0。
实施例44
4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-噻二唑-3-甲脒

步骤1.4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺

将4-氨基-1，2，5-噻二唑-3-羧酸(250mg，1.7mmol)和3-溴-4-氟苯 胺(393mg，2.1mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5mL)溶液依次用O-(苯并 三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐(784mg，2.1mmol)、N，N- 二异丙基乙胺(0.36mL，2.1mmol)处理，搅拌16h。将反应混合物用 盐水(50mL)和0.1N HCl(100mL)稀释，用乙酸乙酯(2×150mL) 萃取。将合并的有机萃取液用盐水(50mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过 滤，浓缩。粗反应混合物经硅胶纯化，得到所需产物(414mg，76％)。 C9H7BrFN4OS的LCMS(M+H)+：m/z＝316.9，318.8。
步骤2.4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，5-噻二唑-3-硫代甲酰胺

将4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，5-噻二唑-3-甲酰胺(225mg，0.7 mmol)和2，4-二(4-甲氧基苯基)-2，4-二硫代-1，3，2，4-二硫杂二磷杂环丁 烷(dithiadiphosphetane)(570mg，1.4mmol)的甲苯(6.8mL)溶液在95℃ 下搅拌16h。将反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，将不溶物过滤。 将滤液浓缩至粗残留物，经硅胶纯化，得到所需产物(130mg，55％)。 C9H7BrFN4S2的LCMS(M+H)+：m/z＝332.8，334.9。
步骤3.4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，5-噻二唑-3-硫代甲亚氨酸 (carbimidothioate)甲酯

将4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，5-噻二唑-3-硫代甲酰胺(130mg， 0.4mmol)的二氯甲烷(5.2mL)溶液依次用三氟甲磺酸甲酯(64μL，0.6 mmol)、N，N-二异丙基乙胺(102μL，0.6mmol)处理，搅拌1h。将反 应混合物用二氯甲烷(100mL)稀释，用水(50mL)和盐水(50mL)稀释， 用硫酸钠干燥，浓缩，得到所需产物(133mg，98％)。C10H9BrFN4S2 的LCMS(M+H)+：m/z＝346.8，348.8。
步骤4.4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-噻二唑-3-甲脒
将4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，5-噻二唑-3-硫代甲亚氨酸甲酯 (78mg，0.22mmol)的乙醇(2.3mL)溶液依次用盐酸羟胺(62mg，0.9 mmol)、N，N-二异丙基乙胺(180μL，1.0mmol)处理，在90℃下搅拌16 h。反应混合物经制备HPLC纯化，得到所需产物(58mg，78％)。 C9H8BrFN5OS的LCMS(M+H)+：m/z＝331.9，333.9。
实施例45
4-氨基-N-(6-氯吡啶-2-基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒三氟乙酸盐

步骤1.4-氨基-N-(6-氯吡啶-2-基)-1，2，5-二唑-3-甲酰胺

在0℃下，将4-氨基-1，2，5-二唑-3-羧酸(0.4g，3.1mmol)和6-氯 吡啶-2-胺(0.56g，4.3mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(6.2mL)溶液依次用 N，N，N′，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(1.4g，3.7 mmol)、N，N-二异丙基乙胺(0.76mL，4.3mmol)处理。将反应混合物 在25℃下搅拌2h，倾入饱和NaHCO3(50mL)中，用乙酸乙酯(100mL) 萃取。将有机层分离，用盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤， 浓缩至粗固体。将粗固体用乙酸乙酯洗涤，过滤。将滤液浓缩，经 硅胶纯化，得到所需产物，其中含有一些杂质。用氯仿洗涤固体， 将杂质除去，得到所需产物(65mg，9％)。C8H7ClN5O2的LCMS (M+H)+：m/z＝240.1。
步骤2.4-氨基-N-(6-氯吡啶-2-基)-1，2，5-二唑-3-甲亚氨酰氯

将4-氨基-N-(6-氯吡啶-2-基)-1，2，5-二唑-3-甲酰胺(62mg，0.26 mmol)的苯(5mL)溶液用五氯化磷(0.12g，0.57mmol)处理，搅拌，回 流3h。将反应混合物浓缩，用苯再稀释，浓缩(3×)，得到所需产物， 应立即在后续步骤中使用。
步骤3.4-氨基-N-(6-氯吡啶-2-基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒三氟乙 酸盐
将4-氨基-N-(6-氯吡啶-2-基)-1，2，5-二唑-3-甲亚氨酰氯(67mg， 0.26mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液用20M羟胺的水(0.26mL，5mmol) 溶液处理，在60℃下搅拌4h。将反应混合物再用另外20M羟胺的 水(0.13mL，2.5mmol)溶液处理，在70℃下加热1.5h。将反应混合物 浓缩至粗残留物，经制备LCMS纯化，得到所需产物(12mg，12％)。 C8H8ClN6O2的LCMS(M+H)+：m/z＝255.0。
实施例46
4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基异噻唑-3-甲脒三氟乙酸盐

步骤1.4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)异噻唑-3-甲酰胺

按照实施例44步骤1的方法，用4-氨基异噻唑-3-羧酸盐酸盐和 3-溴-4-氟苯胺作原料，制备该化合物。C10H8BrFN3OS的LCMS (M+H)+：m/z＝315.9，317.9。
步骤2.4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)异噻唑-3-甲亚氨酰氯

按照实施例45步骤2的方法，用4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)异噻 唑-3-甲酰胺作原料，制备该化合物，应立即在后续步骤中使用。
步骤3.4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基异噻唑-3-甲脒三氟乙酸盐
按照实施例45步骤3方法，用4-氨基-N-(3-溴-4-氟苯基)异噻 唑-3-甲亚氨酰氯作原料，制备该化合物。C10H9BrFN4OS的LCMS (M+H)+：m/z＝330.9，332.9。
实施例47
4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒

步骤1.4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-1，2，5-二唑-3-甲酰胺

按照实施例45步骤1的方法，用4-氨基-1，2，5-二唑-3-羧酸和 2，5-二氯苯胺作原料，制备该化合物。C9H7Cl2N4O2的LCMS(M+H)+： m/z＝273.0。
步骤2.4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-1，2，5-二唑-3-硫代甲酰胺

按照实施例44步骤2的方法，用4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-1，2，5- 二唑-3-甲酰胺作原料，制备该化合物。C9H7Cl2N4OS的LCMS (M+H)+：m/z＝289.0。
步骤3.4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-1，2，5-二唑-3-硫代甲亚氨酸甲酯

按照实施例44步骤3方法，用4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-1，2，5- 二唑-3-硫代甲酰胺作原料，制备该化合物，应立即在后续步骤中使 用。
步骤4.4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒
按照实施例44步骤4的方法，用4-氨基-N-(2，5-二氯苯基)-1，2，5- 二唑-3-硫代甲亚氨酸甲酯作原料，制备该化合物。C9H8Cl2N5O2 的LCMS(M+H)+：m/z＝288.0。
实施例48
N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3- 基}吗啉-4-甲酰胺

步骤1.{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}氨基甲酸苯酯

按照实施例35方法，用3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4- 氟苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)-酮和氯甲酸苯酯作原料，制备该化合物。 C17H10BrFN5O5的LCMS(M+H)+：m/z＝461.9，463.7。
步骤2.N-{4-[(E，z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5- 二唑-3-基}吗啉-4-甲酰胺
将{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}氨基甲酸苯酯(25mg，54μmol)的二氯甲烷(1mL)溶 液用吗啉(14μL，0.16mmol)处理，搅拌2h。将反应混合物浓缩至粗 残留物，用乙醇(1mL)稀释，用2.0M氢氧化钠的水(0.15mL，3mmol) 溶液处理，搅拌45min。反应混合物经制备HPLC纯化，得到所需 产物(6mg，26％)。C14H15BrFN6O4的LCMS(M+H)+：m/z-428.9， 430.9。
实施例49
N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-(甲基氨基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

步骤1.N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-2，2，2-三氟乙酰胺

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-二唑- 5(4H)-酮(0.4g，1.2mmol)的吡啶(6.5mL)溶液用4-二甲基氨基吡啶(71 mg，0.6mmol)和三氟乙酸酐(0.41mL，2.9mmol)处理，搅拌20min。 将反应混合物浓缩至粗残留物，经硅胶纯化，得到所需产物(0.46g， 89％)。C12H5BrF4N5O4的LCMS(M+H)+：m/z＝438.0，439.9。
步骤2.4-(3-溴-4-氟苯基)-3-[4-(甲基氨基)-1，2，5-二唑-3-基]-1，2，4- 二唑-5(4H)-酮

将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-2，2，2-三氟乙酰胺(0.59mg，1.3mmol)的N，N-二甲基 甲酰胺(3mL)溶液依次用碳酸钾(0.28g，2.0mmol)、甲基碘(125μL，2 mmol)处理，搅拌2h。将反应混合物再用甲基碘(200μL，3.2mmol) 处理，搅拌16h。将反应混合物用水(100mL)和盐水(25mL)稀释， 用乙酸乙酯(2×100mL)萃取。将合并的有机萃取液用水(3×100 mL)和盐水(100mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩至粗残留物， 经硅胶纯化，得到所需产物(0.39g，81％)。 C11H8BrFN5O3的LCMS(M+H)+：m/z-355.9，358.0。
步骤3.N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-(甲基氨基)-1，2，5-二唑-3-甲脒
按照实施例38步骤2的方法，用4-(3-溴-4-氟苯基)-3-[4-(甲基 氨基)-1，2，5-二唑-3-基]-1，2，4-二唑-5(4H)-酮作原料，制备该化合 物。C10H10BrFN5O2的LCMS(M+H)+：m/z＝329.9，332.0。
实施例50
N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3- 基}哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐

步骤1.N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-1-(三氟乙酰基)哌啶-4-甲酰胺

按照实施例35方法，用3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4- 氟苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)-酮和1-(三氟乙酰基)哌啶-4-碳酰氯作原 料，制备该化合物。C18H14BrF4N6O5的LCMS(M+H)+：m/z＝549.0， 550.9。
步骤2.N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5- 二唑-3-基}哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐
按照实施例38步骤2的方法，用N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧 代-4，5-二-氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}-1-(三氟乙酰基)哌啶 -4-甲酰胺作原料，制备该化合物。C15H17BrFN6O3的LCMS(M+H)+： m/z＝427.0，429.9。
实施例51
4-{4-[({4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑 -3-基}氨基)羰基]苄基}哌嗪-1-羧酸叔丁酯三氟乙酸盐

在-15℃下，通过滴加磷酰氯(25μL，0.27mmol)处理3-(4-氨基- 1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)-酮(30mg，88 μmol)、4-{[4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基]甲基}苯甲酸(84mg，0.26mmol) 和4-二甲基氨基吡啶(6.4mg，53μmol)的吡啶(0.75mL)溶液。在微波 下，将反应混合物在100℃下加热5min。将反应混合物浓缩至残留 物，用甲醇(1mL)再稀释，用2.0M氢氧化钠的水(0.3mL，0.6mmol) 溶液处理，搅拌30min。将反应混合物用乙酸(50μL，0.9mmol)猝灭， 过滤，经制备LCMS纯化，得到所需产物(29mg，45％)。 C26H30BrFN7O5的LCMS(M+H)+：m/z＝618.0，620.0。
实施例52
N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3- 基}-4-(哌嗪-1-基甲基)苯甲酰胺二(三氟乙酸盐)

将4-{4-[({4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基]-(羟基亚氨基)-甲基]- 1，2，5-二唑-3-基}氨基)羰基]-苄基}哌嗪-1-羧酸叔丁酯三氟乙酸盐(25 mg，34μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液用4.0M HCl的1，4-二氧杂环己烷 (1mL)溶液处理，搅拌1h。将反应混合物浓缩，经制备HPLC纯化， 得到所需产物(15mg，59％)。C21H22BrFN7O3的LCMS(M+H)+：m/z＝ 518.0，520.0。
实施例53
1-苯甲酰基-N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]- 1，2，5-二唑-3-基}哌啶-4-甲酰胺

按照实施例35步骤2的方法，用N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧 代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}哌啶-4-甲酰胺三氟 乙酸盐和苯甲酰氯作原料，制备该化合物。C22H21BrFN6O4的 LCMS(M+H)+：m/z＝531.0，533.0。
实施例54
N(4)-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑- 3-基}-N(1)-苯基哌啶-1，4-二甲酰胺

将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐(20mg，35μmol)和4-二 甲基氨基吡啶(2mg，20μmol)的乙腈(0.13mL)溶液用异氰酸苯酯处 理，搅拌16h。将反应混合物浓缩，用乙醇(0.4mL)再稀释，用2.0M 氢氧化钠的水(0.12mL，0.24mmol)溶液处理，搅拌30min。将反应混 合物用乙酸(20μL，0.35mmol)猝灭，过滤，经制备HPLC纯化，得 到所需产物(6mg，31％)。C22H22BrFN7O4的LCMS(M+H)+：m/z＝ 546.0，548.0。
实施例55
N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3- 基}-1-乙基哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐

将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐(20mg，35μmol)的乙腈(1 mL)溶液依次用N，N-二异丙基乙胺(12μL，71μmol)、碘乙烷(4μL，53 μmol)处理，搅拌16h。将反应混合物浓缩，用乙醇(1mL)再稀释， 用2.0M氢氧化钠的水(0.2mL，0.4mmol)溶液处理，搅拌30min。将 反应混合物用乙酸(50μL，0.88mmol)猝灭，过滤，经制备HPLC纯 化，得到所需产物(5mg，25％)。C17H21BrFN6O3的LCMS(M+H)+： m/z＝455.0，457.0。
实施例56
4-[(苯甲酰氨基)甲基]-N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基) 甲基]-1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺

将4-(氨基甲基)-N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基]-(羟基亚氨基) 甲基]-1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺三氟乙酸盐(30mg，51μmol)和苯甲 酸(9.3mg，76μmol)的二氯甲烷(0.4mL)和N，N-二甲基甲酰胺(0.1mL) 溶液依次用N，N-二异丙基乙胺(22μL，0.1mmol)和0.6M 1-羟基-7-氮 杂苯并三唑的N，N-二甲基甲酰胺(20μL，10μmol)、N-(3-二甲基氨基 丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(14.5mg，76μmol)处理，搅拌16h。将 反应混合物浓缩，用乙醇(1mL)再稀释，用2.0M氢氧化钠的水(0.3mL， 0.6mmol)溶液处理，搅拌30min。将反应混合物用乙酸(50μL，0.88 mmol)猝灭，过滤，经制备HPLC纯化，得到所需产物(4mg，14％)。 C24H19BrFN6O4的LCMS(M+H)+：m/z＝553.0，555.0。
实施例57
N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3- 基}-2-(2-氰基苯氧基)乙酰胺

在0℃下，将(2-氰基苯氧基)乙酸(62mg，0.35mmol)的二氯甲烷(3 mL)溶液依次用草酰氯(60μL，0.7mmol)、N，N-二甲基甲酰胺(10μL) 处理。将反应混合物在25℃下搅拌2h，浓缩至粗残留物，用吡啶稀 释，用3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-二唑- 5(4H)-酮(40mg，0.12mmol)和4-二甲基氨基吡啶(7mg，58μmol)处 理。在微波中，将反应混合物在150℃下加热20min。将反应混合物 浓缩，用乙醇(1.45mL)再稀释，用2.0M氢氧化钠的水(0.3mL，0.6 mmol)溶液处理，搅拌30min。将反应混合物用乙酸(50μL，0.88mmol) 猝灭，过滤，经制备LCMS纯化，得到所需产物(4mg，.7％)。 C18H13BrFN6O4的LCMS(M+H)+：m/z＝474.9，477.0。
实施例58
N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5-二唑-3- 基}-4-苯基哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐

步骤1.N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-4-苯基哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-二唑- 5(4H)-酮(0.15g，0.44mmol)、1-(叔丁氧基羰基)-4-苯基哌啶-4-羧酸(0.4 g，1.3mmol)和4-二甲基氨基吡啶(32mg，0.26mmol)的乙腈(2mL)溶 液用磷酰氯(0.13mL，1.4mmol)处理，在微波中，在100℃下加热10 min。将反应混合物浓缩，将残留物用乙酸乙酯(25mL)稀释，用水(25 mL)和盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩至粗残留物， 经硅胶纯化，得到偶合产物4-[({4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二 氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}氨基)羰基]-4-苯基哌啶-1-羧 酸叔丁酯。将该物质用二氯甲烷(5mL)稀释，用4.0M HCl的1，4-二 氧杂环己烷(3mL)溶液处理，搅拌45min。将反应混合物浓缩，粗产 物经制备LCMS纯化，得到所需产物(10mg，4％)。C22H19BrFN6O4 的LCMS(M+H)+：m/z＝529.0，531.0。
步骤2.N-{4-[(E，Z)-[(3-溴-4-氟苯基)氨基](羟基亚氨基)甲基]-1，2，5- 二唑-3-基}-4-苯基哌啶-4-甲酰胺三氟乙酸盐
按照实施例38步骤2的方法，用N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧 代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}-4-苯基哌啶-4-甲酰 胺三氟乙酸盐作原料，制备该化合物。C21H21BrFN6O3的LCMS (M+H)+：m/z＝503.0，504.9。
实施例59
N-(3-溴-4-氟苯基)-4-({4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苄基}氨基)- N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒三氟乙酸盐

步骤1.N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苯甲酰胺三氟 乙酸盐

在0℃下，通过滴加磷酰氯(0.42mL，4.5mmol)处理3-(4-氨基- 1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-二唑-5(4H)-酮(0.50g，1.5 mmol)、4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苯甲酸(1.0g，3.7mmol)和 4-二甲基氨基吡啶(110mg，0.88mmol)的乙腈(8.3mL)和吡啶(1.2mL) 溶液。在微波下，将反应混合物在120℃下加热20min，用乙酸乙酯 (150mL)稀释，用水(50mL)、饱和碳酸氢钠(50mL)和盐水(50mL)洗 涤，用硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗反应混合物经制备LCMS纯化， 得到所需产物(0.36g，35％)。C22H19BrFN6O6S的LCMS(M+H)+：m/z ＝593.0，595.0。
步骤2.N-(3-溴-4-氟苯基)-4-({4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苄基} 氨基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒三氟乙酸盐
将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]-苯甲酰胺三氟 乙酸盐(20mg，28μmol)的四氢呋喃(0.83mL)溶液用2.0M硼烷-甲硫 醚复合物的甲苯(42μL，85μmol)溶液处理，在微波中，在130℃下加 热5min。将反应混合物再用2.0M硼烷-甲硫醚复合物的甲苯(40μL， 80μmol)处理，在微波中，在130℃下加热10min。将反应混合物用 乙酸猝灭，浓缩，经制备LCMS纯化，得到所需产物(1mg，5％)。 C21H23BrFN6O4S的LCMS(M+H)+：m/z＝553.0，554.9。
实施例60
N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-{[4-(吗啉-4-基甲基)苄基]氨基}-1，2，5- 二唑-3-甲脒三氟乙酸盐

步骤1.N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-4-(吗啉-4-基甲基)苯甲酰胺三氟乙酸盐

按照实施例59中步骤1的方法，用4-(吗啉-4-基甲基)苯甲酸作 原料，制备该化合物。C22H19BrFN6O5的LCMS(M+H)+：m/z＝544.9， 547.0。
步骤2.N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-{[4-(吗啉-4-基甲基)苄基]氨基}- 1，2，5-二唑-3-甲脒三氟乙酸盐
将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-4-(吗啉-4-基甲基)苯甲酰胺三氟乙酸盐(60mg，91 μmol)的苯(1.8mL)溶液用五氯化磷(76mg，0.36mmol)处理，搅拌， 回流2.5h。将反应混合物浓缩至残留物，用乙醇(1.4mL)稀释，用氰 基硼氢化钠(17mg，0.27mmol)处理，搅拌2h。将反应混合物用乙酸(50 μL)猝灭，经制备LCMS纯化，得到中间体4-(3-溴-4-氟苯基)-3-(4- {[4-(吗啉-4-基甲基)苄基]氨基}-1，2，5-二唑-3-基)-1，2，4-二唑-5(4H)- 酮。将该物质用乙醇(1mL)稀释，用2.0M氢氧化钠的水(0.2mL，4 mmol)溶液处理，搅拌45min。反应混合物经制备LCMS纯化，得到 所需产物(15mg，27％)。C21H23BrFN6O3的LCMS(M+H)+：m/z＝ 505.0，507.0。
实施例61
N-(3-氰基-4-氟苯基)-4-({4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苄基}氨 基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒三氟乙酸盐

步骤1.4-(3-溴-4-氟苯基)-3-[4-({4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苄 基}氨基)-1，2，5-二唑-3-基]-1，2，4-二唑-5(4H)-酮三氟乙酸盐

将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苯甲酰胺三氟 乙酸盐(20mg，28μmol)的吡啶(0.5mL)溶液用五氯化磷(18mg，85 μmol)处理，在0℃下搅拌4.5h。将反应混合物浓缩，用乙醇(1mL) 稀释，用氰基硼氢化钠(5mg，85μmo1)处理，搅拌2h。反应混合物 经制备LCMS纯化，得到所需产物(9mg，47％)。C22H21BrFN6O5S 的LCMS(M+H)+：m/z＝579.0，581.0。
步骤2.N-(3-氰基-4-氟苯基)-4-({4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苄 基}氨基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒三氟乙酸盐
在微波中，将4-(3-溴-4-氟苯基)-3-[4-({4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4- 基)甲基]苄基}氨基)-1，2，5-二唑-3-基]-1，2，4-二唑-5(4H)-酮三氟乙 酸盐(10mg，14μmol)、氰化锌(5mg，43μmol)和四(三苯膦)合钯(0)(8 mg，7μmol)的N，N-二甲基甲酰胺(0.25mL)溶液在150℃下加热5 min。将反应混合物用3∶1的乙腈/水(2mL)稀释，过滤，经制备LCMS 纯化，得到中间体5-[3-[4-({4-[(1，1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苄基} 氨基)-1，2，5-二唑-3-基]-5-氧代-1，2，4-二唑-4(5H)-基]-2-氟苄腈三氟 乙酸盐。将该物质用乙醇(1mL)稀释，用2.0M氢氧化钠的水(0.1mL) 溶液处理，搅拌45min。将反应混合物用乙酸(50μL，0.9mmol)猝灭， 过滤，经制备LCMS纯化，得到所需产物(1mg，11％)。C22H23FN7O4S 的LCMS(M+H)+：m/z＝500.0。
实施例62
N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-[(吡啶-3-基甲基)氨基]-1，2，5-二唑-3-甲 脒三氟乙酸盐

步骤1.4-(3-溴-4-氟苯基)-3-{4-[(吡啶-3-基甲基)氨基]-1，2，5-二唑-3- 基}-1，2，4-二唑-5(4H)-酮三氟乙酸盐

在0℃下，将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二 唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}-2，2，2-三氟乙酰胺(50mg，0.11mmol)、烟 醇(14μL，0.15mmol)和三苯膦(42mg，0.16mmol)的四氢呋喃(0.35mL) 溶液用偶氮二羧酸二异丙酯(34μL，0.17mmol)处理。将反应混合物在 25℃下搅拌16h，经制备LCMS纯化，得到所需产物(4mg，6％)。 C16H11BrFN6O3的LCMS M+H)+：m/z＝432.9，434.9。
步骤2.N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-[(吡啶-3-基甲基)氨基]-1，2，5-二 唑-3-甲脒三氟乙酸盐
按照实施例38步骤2的方法，用4-(3-溴-4-氟苯基)-3-{4-[(吡啶- 3-基甲基)氨基]-1，2，5-二唑-3-基}-1，2，4-二唑-5(4H)-酮三氟乙酸盐 作原料，制备该化合物。C15H13BrFN6O2的LCMS M+H)+：m/z＝ 406.9，408.9。
实施例63
N-(3-氰基-4-氟苯基)-N′-羟基-4-[(吡啶-4-基甲基)氨基]-1，2，5-二唑-3- 甲脒三氟乙酸盐

在0℃下，将N-{4-[4-(3-氰基-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4- 二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}异烟酰胺三氟乙酸盐(37mg，72μmol)的 吡啶(1.5mL)溶液用五氯化磷(45mg，0.22mmol)处理，搅拌3h。将 反应混合物浓缩，用乙醇(2.5mL)稀释，用氰基硼氢钠(14mg，0.22 mmol)处理，搅拌16h。反应混合物经制备LCMS纯化，得到中间体 2-氟-5-[5-氧代-3-{4-[(吡啶-4-基甲基)氨基]-1，2，5-二唑-3-基}-1，2，4- 二唑-4(5H)-基]苄腈三氟乙酸盐。将该物质用乙醇(1mL)稀释，用2.0M 氢氧化钠的水(0.2mL)溶液处理，搅拌45min。粗反应混合物经制备 HPLC纯化，得到所需产物(8mg，24％)。C16H13FN7O2的LCMS (M+H)+：m/z＝354.0。
实施例64
4-[(3-氰基苄基)氨基]-N-(3-氰基-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲 脒

在0℃下，将3-氰基-N-{4-[4-(3-氰基-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢- 1，2，4-二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}苯甲酰胺(30mg，72μmol)的苯(2 mL)溶液用五氯化磷(45mg，0.22mmol)处理，在90℃下搅拌2h。将 反应混合物浓缩，用乙醇(2.5mL)稀释，用氰基硼氢钠(14mg，0.22 mmol)处理，搅拌16h。反应混合物经制备LCMS纯化，得到中间体 5-[3-{4-[(3-氰基苄基)氨基]-1，2，5-二唑-3-基}-5-氧代-1，2，4-二唑- 4(5H)-基]-2-氟苄腈。将该物质用乙醇(1mL)稀释，用2.0M氢氧化钠 的水溶液(0.2mL)处理，搅拌45min。粗反应混合物经制备HPLC纯 化，得到所需产物(3mg，11％)。C18H13FN7O2的LCMS(M+H)+：m/z ＝378.0。
实施例65
N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-[(1H-四唑-5-基甲基)氨基]-1，2，5-二唑- 3-甲脒

步骤1.N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4-二唑-3-基]- 1，2，5-二唑-3-基}-1H-四唑-5-甲酰胺

将3-(4-氨基-1，2，5-二唑-3-基)-4-(3-溴-4-氟苯基)-1，2，4-二唑- 5(4H)-酮(50mg，0.15mmol)和4-二甲基氨基吡啶(11mg，88μmol)的乙 腈(0.8mL)和吡啶(0.12mL)溶液用磷酰氯(42μL，0.45mmol)处理，搅 拌1h。将反应混合物浓缩，溶于3∶1的乙腈/水，经制备LCMS纯化， 得到所需产物(14mg，22％)。C12H6BrFN9O4的LCMS(M+H)+：m/z＝ 437.8，439.9。
步骤2.N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-[(1H-四唑-5-基甲基)氨基]-1，2，5- 二唑-3-甲脒
在25℃下，将N-{4-[4-(3-溴-4-氟苯基)-5-氧代-4，5-二氢-1，2，4- 二唑-3-基]-1，2，5-二唑-3-基}-1H-四唑-5-甲酰胺(12mg，27μmol)的吡 啶(0.3mL)溶液用五氯化磷(13mg，60μmol)处理。将反应混合物在0 ℃下搅拌2h，浓缩，用甲苯再稀释，浓缩至残留物。将该物质用乙 醇(1mL)稀释，用氰基硼氢钠(5mg，82μmol)处理，搅拌2h。将反应 混合物浓缩，用乙醇(1mL)稀释，用2.0M氢氧化钠水溶液(0.2mL) 处理，搅拌45min。粗反应混合物经制备LCMS纯化，得到所需产 物(2mg，19％)。C11H10BrFN9O2的LCMS(M+H)+：m/z＝398.0， 400.0。
实施例66
N′-(乙酰氧基)-4-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

将4-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒(0.1g， 0.37mmol)的乙酸酐的溶液搅拌2h。将反应混合物浓缩，经制备LCMS 纯化，得到所需产物(625mg，54％)。C11H10ClFN5O3的LCMS (M+H)+：m/z＝314.1。
实施例67
4-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-N′-(丙酰氧基)-1，2，5-二唑-3-甲脒

将4-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒(0.1g， 0.37mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.16mL，0.92mmol)的二氯甲烷(4 mL)溶液用丙酰氯(38μL，0.44mmol)处理，搅拌1h。将反应混合物 浓缩，经制备LCMS纯化，得到所需产物(57mg，47％)。 C12H12ClFN5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝328.0。
实施例68
4-氨基-N′-{[(苄基氨基)羰基]氧基}-N-(3-氯-4-氟苯基)-1，2，5-二唑-3- 甲脒

将4-氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-N′-羟基-1，2，5-二唑-3-甲脒(50mg， 0.18mmol)和N，N-二异丙基乙胺(64μL，0.37mmol)的二氯甲烷(2mL) 溶液用异氰酸苄酯(29mg，0.22mmol)处理，搅拌3h。将反应混合物 浓缩，经制备LCMS纯化，得到所需产物(18mg，24％)。 C17H15ClFN6O3的LCMS(M+H)+：m/z＝405.0。
实施例69
N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-吗啉-4-基-1，2，5-二唑-3-甲脒

步骤1.4-[(E，Z)-(羟基亚氨基)(吗啉-4-基)甲基]-1，2，5-二唑-3-胺

按照实施例1的方法，用吗啉作原料，制备该化合物。C7H12N5O3 的LCMS(M+H)+：m/z＝214.0。
步骤2.N′-羟基-4-吗啉-4-基-1，2，5-二唑-3-甲脒

将4-[(E，Z)-(羟基亚氨基)(吗啉-4-基)甲基]-1，2，5-二唑-3-胺(0.1g， 0.47mmol)的1，2-乙二胺(1.6mL)溶液用氢氧化钾(94mg，1.7mmol)处 理，在130℃下搅拌7h。将反应混合物再用氢氧化钾(53mg，0.94mmol) 处理，在140℃下搅拌5.5h。将反应混合物冷却至0℃，用6.0M HCl 中和，经制备LCMS纯化，得到所需产物(70mg，70％)。C7H12N5O3 的LCMS(M+H)+：m/z＝214.1。
步骤3.N-羟基-4-吗啉-4-基-1，2，5-二唑-3-甲亚氨酰氯

在5-10℃下，通过滴加亚硝酸钠(32mg，0.47mmol)的水(0.5mL) 溶液处理N′-羟基-4-吗啉-4-基-1，2，5-二唑-3-甲脒(66mg，0.3mmol) 的6.0M HCl(0.62mL)溶液，在0℃下搅拌2h。将悬浮液过滤，将 固体用冰水洗涤，得到所需产物(22mg，30％)。将滤液用乙酸乙酯(30 mL)萃取，将萃取液用盐水(10mL)洗涤，过滤，浓缩，再得到产物(23 mg，32％)，其中含有少量杂质。合并的物质应立即在后续步骤中使用。
步骤4.N-(3-溴-4-氟苯基)-N′-羟基-4-吗啉-4-基-1，2，5-二唑-3-甲脒
将N-羟基-4-吗啉-4-基-1，2，5-二唑-3-甲亚氨酰氯(40mg，0.17 mmol)和3-溴-4-氟苯胺(49mg，0.26mmol)的乙醇(1mL)溶液用N，N-二 异丙基乙胺(45μL，0.26mmol)的乙腈(1mL)溶液处理，搅拌62h。反 应混合物经制备HPLC纯化，得到所需产物(32mg，48％)。 C13H14ClFN5O3的LCMS(M+H)+：m/z＝386.0，388.0。
实施例70
4-氨基-N′-羟基-N-[3-(3-羟基丙-1-炔-1-基)苯基]-1，2，5-二唑-3-甲脒

将4-氨基-N′-羟基-N-(3-碘苯基)-1，2，5-二唑-3-甲脒(19mg，55 μmol)、2-丙炔-1-醇(3.6μL，62μmol)、二氯·二(三苯基膦)合钯(II)(1mg， 2μmol)和碘化亚铜(I)(0.4mg，2μmol)的N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL) 溶液用N，N-二乙胺(74μL，0.72mmol)处理，在微波中，在120℃下加 热15min。将反应混合物用1∶1的乙腈/水(1.5mL)稀释，过滤，经制 备LCMS纯化，得到所需产物(4mg，28％)。C12H12N5O3的LCMS (M+H)+：m/z＝274.0。
本发明其它实施例化合物列于下表1。
表1






































*([M-Boc+H]+H)+
实施例A
人吲哚胺(idoleamine)2，3-双加氧酶(IDO)测定
将人的具有N-末端His标记的吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)在大肠 杆菌(E.coli)中表达，纯化至同质。在IDO催化下，色氨酸吲哚核的 吡咯环被氧化断裂，得到N’-甲酰基犬尿氨酸。按文献所述，在室温 下，在20mM抗坏血酸盐、5μM亚甲蓝和0.2mg/mL过氧化氢酶的 50mM磷酸钾缓冲液(pH 6.5)的存在下，用95nM IDO和2mM D-Trp 进行测定。当在321nm处的吸光率增大时，由于形成N’-甲酰基犬 尿酸，持续记录初始反应速度。参见：Sono，M.Taniguchi，T.Watanabe， Y.and Hayaishi，O.(1980)J.Biol.Chem.255，1339-1345。将IC50小于 约100μM的本发明化合物视为活性化合物。
实施例B
按基于HeLa细胞的吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)/犬尿酸测定法测定抑 制剂活性
HeLa细胞(#CCL-2)得自American Type Tissue Culture Collection (ATCC，Manassas，VA)，按惯例将它们保存在含2mM L-谷氨酰胺和 调至含1.5g/L碳酸氢钠、0.1mM非必需氨基酸、1mM丙酮酸钠和 10％胎牛血清的Earle′s BSS的极限必需培养基(eagle)(均得自 Invitrogen)中。在37℃下，将细胞保存在提供5％CO2的潮湿培养箱 中。如下进行测定：按5×103/孔密度，将HeLa细胞接种在96孔培 养板中，使生长过夜。第二天，将IFN-γ(50ng/mL终浓度)和系列稀 释浓度的化合物(总体积200μL培养基)加入细胞中。温育48小时后， 将140μL上清液/孔移至新的96孔板中。将10μL 6.1N三氯乙酸 (#T0699，Sigma)加入各孔并混匀，在50℃下温育30min，使吲哚胺2，3- 双加氧酶产生的N-甲酰基犬尿酸水解为犬尿酸。然后在2500rpm速 度下，将反应混合物离心10min，除去沉淀。将100μL上清液/孔移 至另一96孔板中，与100μl 2％(w/v)对二甲基氨基苯甲醛(#15647-7， Sigma-Aldrich)的乙酸溶液混合。在480nm处，用SPECTRAmax 250 微量板读出器(Molecular Devices)测量犬尿酸产生的黄色。用L-犬尿 酸(#K8625，Sigma)作标准。用100μL培养基制备标准液(240、120、 60、30、15、7.5、3.75、1.87μM)，并将它们与等体积的2％(w/v)对 二甲基氨基苯甲醛混合。测定各种浓度下的抑制百分率，得到一式 两份测定结果的平均值。用非线性回归分析数据，得到IC50值(Prism Graphpad)。参见：Takikawa O，et al.(1988)，Mechanism of interferon- gamma action.Characterization of indoleamine 2，3-dioxygenase in cultured human cells induced by interferon-γand evalution of the enzyme- mediated tryptophan degradation in its anticellular activity(干扰素γ的作 用机制，在培养的通过干扰素γ诱导的人细胞中表征吲哚胺2，3-双加 氧酶，评价酶介导的色氨酸降解对其抗细胞活性的影响)。J.Biol.Chem. 263(4)：2041-8。将IC50小于约100μM的本发明化合物视为活性化合 物。
实施例C
测定IDO抑制剂对被表达IDO的树突细胞抑制的T细胞增殖的作用
通过白细胞移动(leukophoresis)，由人周围单核细胞收集单核细 胞。然后按将1×106细胞/孔密度，将单核细胞接种在96孔板中， 使用补充10％胎牛血清和2mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基(均 得自Invitrogen)。在37℃下培养过夜后，板上保留贴壁细胞。然后 用100ng/ml GM-CSF(#300-03，PeproTech)和250ng/ml IL-4(#200-04， PeproTech)刺激贴壁单核细胞5-7天，再用得自伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)的5μg/mL LPS(#437650，Sigma)和50ng/mL IFN-γ(#285-IF，R&D Systems)激活2天，诱导树突细胞成熟。
激活树突细胞后，用补充100-200U/mL IL-2(#CYT-209， ProSpec-Tany TechnoGene)和100ng/mL抗CD3抗体(#555336， PharMingen)、T细胞(2-3×105细胞/孔)和系列稀释度的IDO化合 物的完全RPMI 1640替换培养基。再培养2天后，通过BrdU掺入测 定，按照厂商的说明，用比色细胞增殖ELISA试剂盒(#1647229，Roche Molecular Biochemicals)测量T细胞增殖。在10μM BrdU标记溶液中， 将细胞连续培养16-18h。然后，除去标记培养基，将200μL FixDenat/ 孔加入细胞，在室温下温育30分钟。除去FixDenat溶液，加入100μL/ 孔抗-BrdU-POD抗体轭合物工作液。使反应在室温下进行90分钟。 然后除去抗体轭合物，用200μL/孔洗涤液洗涤细胞三次。最后，加 入100μL/孔底物溶液，在显色期间，用微量板读出器(Spectra Max PLUS，Molecular Devices)得到结果。在不同时间点，记录多个读数， 以确保数据在线性范围内。按惯例，数据由包括适当的对照在内的 平行实验得到。参见：Terness P，et al.(2002).Inhibition of allogeneic T cell proliferation by Indoleamine 2，3-dioxygenase-expressing dendritic cells：mediation of suppression by tryptophan metabolites(通过表达树突 细胞的吲哚胺2，3-双加氧酶抑制同种异体T细胞增殖：通过色氨酸代 谢物抑制介导).J.Exp.Med.196(4)：447-57；和Hwu P，et al.(2000). Indoleamine 2，3-dioxygenase production by human dendritic cells results in the inhibition of T cell proliferation(人树突细胞产生的吲哚胺2，3-双 加氧酶导致T细胞增殖抑制).J.Immunol.164(7)：3596-9。将IC50小于 约100μM的本发明化合物视为活性化合物。
实施例D
体外IDO抑制剂的抗癌活性试验
可用改良的肿瘤同种异体移植/异种移植方案测试体外抗肿瘤效 力。例如，已有文献报道，在免疫活性小鼠中，抑制IDO可对细胞 毒化疗产生协同作用(Muller，A.J.et al)。通过使生长在免疫活性同源 小鼠中的鼠科动物肿瘤异种移植模型(例如B16和有关变种，CT-26， LLC)中的研究用IDO抑制剂的协同作用与用中和抗CD4抗体处理的 同源小鼠出现的作用，或与生长在免疫受损(immune-compromised)小 鼠(例如nu/nu)中的相同肿瘤进行对比，表明该协同作用依赖T细胞。
免疫活性小鼠对比免疫受损小鼠中抗癌作用有区别的概念也可 用作为单一药物的研究用IDO抑制剂测试。例如，LLC肿瘤在它们 的同源宿主品系C57B1/6中生长良好。但是，如果用IDO抑制剂1- MT(与安慰剂对比)处理这些小鼠，肿瘤形成显著延长，提示抑制IDO 即抑制生长(Friberg，M.et al)。按照该逻辑，可检验生长在C57B1/6 免疫活性小鼠的LLC异种肿瘤模型中IDO抑制的效力，并与IDO抑 制剂对生长在裸小鼠或SCID小鼠(或用中和T细胞活性的抗体处理 的C57B1/6小鼠)中的LLC肿瘤生长的作用进行对比。由于缓解IDO 的肿瘤介导的免疫抑制活性的作用可能不同，取决于不同肿瘤模型 的免疫原性潜力，可对癌细胞进行遗传修饰，以增加其免疫原性潜 力。例如，在B16.F10细胞中表达GM-CSF可增加它们的免疫原性 潜力(Dranoff，G.et al)。同样，在某些肿瘤模型(例如B16.F10)中，可 得到表达免疫刺激蛋白例如GM-CSF的[多]克隆，并测试IDO抑制 剂对免疫活性和免疫受损小鼠中的这些癌细胞产生的肿瘤的生长抑 制作用。
评价IDO抑制剂体内效力的第三个途径是用“预免疫”鼠科动 物肿瘤同种移植/异种移植模型。在这些模型中，使免疫活性小鼠对 特异性肿瘤抗原或抗原致敏，模拟治疗性抗癌疫苗。这启动了小鼠 通过免疫系统介导的抗癌反应，然后在异种移植实验中，用鼠科肿 瘤细胞系(具有与用于免疫的那些相似的肿瘤抗原)攻击小鼠。已证明 IDO的表达使抗癌反应钝化，并使异种移植物生长更迅速。重要的 是，IDO抑制剂1-MT抑制该模型的肿瘤生长(Uyttenhove，C.et al)。 该模型尤其有意义，因为IDO活性允许P815肿瘤生长，因此特异性 抑制IDO应抑制生长。
最后，可用治疗性免疫评价IDO抑制剂在体内的效果。例如， 已用B16-BL6细胞证明，通过静脉注射癌细胞，然后用由癌细胞表 达的完全表征的免疫原性肽(例如TRP-2；SVYDFFVWL)处理，可攻 击Blk/6小鼠(Ji，et al.J.Immunol，2005，175：1456-63)。重要的是，免 疫系统调节物例如抗CTL-4抗体可提高对这种治疗性免疫的反应。 可按相似方式-肿瘤肽免疫(用或不用IDO抑制剂)评价IDO抑制剂的 效果。通过动物存活(至发病的时间)或通过在设定时间点测量肿瘤转 移到肺和/或其它器官，评价效力。
在任何/所有上述模型中，也可以直接和/或间接测量肿瘤反应性 免疫细胞的数目和/或活性。测量肿瘤反应性免疫细胞的数目和/或活 性的方法是公认的，可用类似于本领域中用于训练的那些方法(Current Protocols in Immunology，vol 4，Coligan，J.E.et al；Immunotherapy of Cancer，Human Press，2006，Disis，M.L.和其中的参考文献)操作。理论 上，减少IDO的免疫抑制作用可增加肿瘤特异性免疫细胞的数目或 反应性。另外，当与其它疗法例如化疗和/或免疫调节剂(例如抗CTLA4 抗体)联用时，抑制IDO还可增加肿瘤反应性免疫细胞的数目或反应 性。
可用标准肿瘤技术(按Corbett，et al综述)，进行所有同种移植/异 种移植实验。可用类似于本领域中用于训练的那些技术(按Sambrook，J， et al综述)克隆和将基因(例如IDO，GM-CSF)导入癌细胞系。参见： Corbett，T.Polin，L.et al.In vivo methods for screening and preclinical testing.Cancer Drug Discovery and Development：Anticancer Drug Development Guide：Preclinical Screening，Clinical Trials，and Approval， 第2版.Teicher，B.A.和Andrews，P.A.Gumana Press Inc.Totowa，NJ， 2004；Dranoff，G.Jaffee，E.et al。接种分泌小鼠粒细胞巨噬细胞集落 刺激因子的辐射的基因工程改造的肿瘤细胞后，刺激有效、特异性 和长效抗癌免疫性。Proc.Natl.Acad.Sci，USA.90：3539-3543，1993； Friberg，M.Jennings，R.等，吲哚胺2，3-双加氧酶促进T细胞介导的排 斥所致癌细胞逃逸，Int.J.Cancer：101：151-155，2002；Muller，A.J. DuHadaway，J.B.等，抑制吲哚胺2，3-双加氧酶，癌抑制基因Binl的 免疫调节性靶标，强化肿瘤化疗，Nat.Med.11：312-319，2005； Sambrook，J，Russel，D.Molecular Cloning：A laboratory Manual(3rd edition).Cold Spring Harbor Laboratory Press.Cold Spring Harbor，NY， USA.2001；和Uyttenhove，C.Pilotte，L.et al.Evidence for a tumoral immune resistance mechanism based on tryptophan degradation by Indoleamnine 2，3-dioxygenase(基于吲哚胺2，3-双加氧酶所致色氨酸降 解的肿瘤免疫耐药机制的证据).Nat.Med.9：1269-1274，2003。
实施例E
在人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)脑炎模型中体内IDO抑制剂的测试
1.细胞分离和病毒感染
可通过逆流离心冲洗HIV-1、2和乙型肝炎血清阴性供血者的白 细胞移动包，得到单核细胞和PBL。用含有补充10％热灭活的混合 血清、1％谷氨酰胺、50μg/mL庆大霉素、10μg/mL环丙沙星(Sigma) 和1000U/mL高纯度重组人巨噬细胞集落刺激因子的Dulbecco’s Modififed Eagle’s培养基(DMEM，Sigma-Aldrich)的Teflon瓶，将单核 细胞在悬浮液培养基中培养。培养7天后，按0.01感染复数，用 HIV-1ADA感染MDM。
2.Hu-PBL-NOD/SCID HIVE小鼠
可购买4周龄雄性NOD/C.B-17 SCID小鼠(Jackson Laboratory)。 在无病原体条件下，在无菌微型隔离笼中饲养动物。在PBL移植前 3天，给所有动物腹膜内注射大鼠抗CD122(0.25mg/小鼠)，在移植 前1天和注射PBL(20×106细胞/小鼠)3天后，注射兔脱唾液-GM1 抗体(0.2mg/小鼠)(Wako)两次。PBL重组8天后，颅内注射(i.c) HIV-1ADA-感染的MDM(3×105细胞，10μL)，得到hu-PBL-NOD/SCID HIVE小鼠。i.c.注射HIV-1感染的MDM后，立即给hu-PBL-NOD/SCID HIVE小鼠皮下(s.c)移植对照(溶媒)或化合物颗粒(14或28天缓释， Innovative Research)。设计初始实验，以确认在用IDO化合物处理的 hu PBL-NOD/SCID HIVE动物中引入病毒特异性CTL。可通过四聚 体染色和由脑组织中消除的MDM的神经病理学分析确认这一点。 然后设计实验，分析人淋巴细胞重组、体液免疫反应和神经病理性 交替(alternations)。在这些实验中，在i.c.注射人MDM后第7天，将 动物放血，在第14和21天处死。含EDTA的管收集的血用于流量 血细胞计数，而血浆被用于用ELISA(Beckman CoulterTM)检测HIV-1 p24。按照厂商的说明(Cambridge Biotech HIV-1 Western blot kit， Calypte Biomedical)，通过蛋白质印迹试验检测HIV-1-特异性抗体。 在对照和化合物处理的动物中，检测到相似量的病毒特异性抗体。 用3个不同的人自细胞供体，可进行总计3个独立的实验。
3.hu PBL-NOD/SCID HIVE小鼠的外周血和脾的FACS扫描
在i.c.注射人MDM后第1-3周，可对外周血进行双色FACS分 析，在第2和3周分析脾细胞。在4℃下，将人CD4、CD8、CD56、 CD3、IFN-γ的三氟铬-缀合单克隆Abs(mAbs)(eBioscience)与细胞一 起温育30min。为评价细胞免疫反应，与抗人CD8和排除鼠科动物 细胞的FITC-缀合的抗小鼠CD45一起进行IFN-γ细胞内染色。为测 定Ag特异性CTL，在经植物凝集素/白介素-2(PHA/IL-2)-刺激的脾 细胞上进行别藻蓝蛋白-缀合四聚体染色，用于检测HIV-1gag (p17(aa77-85)SLYNTVATL，SL-9)和HIV-1pol[(aa476-485) ILKEPVHGV，IL-9]。按照NIH/National Institute of Allergy and Infections Disease，National Tetramer Core Facilities的建议，将细胞染 色。用FACS CaliburTM，用CellQuest软件(Becton Dickinson Immunocytometry System)分析数据。
4.组织病理学和影像分析
在i.c.注射MDM后第14和21天采集脑组织，用4％磷酸盐缓 冲多聚甲醛固定，包埋在凡士林中或在-80℃下冷冻备用。将包埋块 (block)的冠状截面切开，以鉴定注射部位。对于每只小鼠，由注射人 MDM的部位切开30-100个(5μm-厚)系列截面，分析3-7片载玻片(分 别为10个截面)。用二甲苯脱去脑组织切片中的凡士林，用梯度乙醇 水化。按照基本的间接方案，通过在0.01mol/L柠檬酸缓冲液中加热 至95℃，保持30min用于抗原提取(retrieval)，用抗原提取进行免疫 组织化学染色。为鉴定小鼠脑中的人细胞，使用mAb：波型蛋白(1∶50， 克隆3B4，Dako Corporation)，其用于鉴定全人白细胞。分别用CD68 (1∶50稀释度，克隆KP 1)和CD8(1∶50稀释度，克隆144B)抗体，检测 人MDM和CD8+淋巴细胞。用mAb：HIV-1 p24(1∶10，克隆Kal-1， 均得自Dako)标记病毒感染的细胞。用Iba-1抗体(1∶500，Wako)检测 活性鼠科动物小胶质细胞。用得自日本Sapporo，Hokkaido大学医学 研究生院中心研究所细胞药理学系(Department of Cell Pharmacology， Central Research Institute，Graduate School of Medicine，Hokkaido University，Sapporo，Japan)的Abs目测检验人IDO(huIDO)表达。用 适宜的生物素化次级抗体检测初级抗体，用亲和素-生物素复合物 (Vectastain Elite ABC kit，Vector Laboratories)和与葡聚糖聚合物偶合 的辣根过氧化物酶(HRP)(En Vision，Dako Corporation)显色。用Mayer′s 苏木素对比染色免疫染色截面。掺入用于缺失初级抗体的截面或用 作对照的无关IgG同位型。按照盲法方式，安排两名独立的观察员， 对每只小鼠的每个截面中的CD8+淋巴细胞、CD68+MDM和HIV-1 p24+细胞计数。用Nikon Eclipse 800显微镜(Nikon Instruments Inc)进 行光镜显微检查。按照前述，通过计算机辅助影像分析(Image- ProPlus，Media Cybernetics)对Ibal进行半定量分析(免疫染色占据的 面积百分比)。
5.统计分析
可用具有用于比较的Student t检验和ANOVA的Prism(Graph Pad)分析数据。将P值＜0.05视为有显著性。
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6.参考文献
Poluektova LY，Munn DH，Persidsky Y，and Gendelman HE(2002). Generation of cytotoxic T cells against virus-infected human brain macrophages in a murine model of HIV-1 encephalitis(在鼠科动物HIV- 1脑膜炎模型中，得到抗病毒感染的人脑巨噬细胞的细胞毒T细胞).J. Immunol.168(8)：3941-9。