本发明涉及针对肿瘤负荷筛选患者的方法以及VEGF-R抑制剂单独或 与化学疗法联合用于治疗具有高血清或血浆LDH5水平的肠胃癌、泌尿生 殖器癌、淋巴癌和肺癌(小细胞和非小细胞)患者和患有神经嵴起源(neural crest origin)癌症的患者的用途。

血管内皮生长因子受体(VEGF-R)抑制剂用于治疗增殖性疾病的用途 是本领域已知的。在胚胎发育和正常生长期间以及在大量病理性异常和疾 病中，在调节血管系统及其组成的生长和分化的网状结构中心存在有称作 “血管内皮生长因子”的血管生成因子及其细胞受体(参见Breier等人， Trends in Cell Biology，6，454-456(1996)及其中引用的文献)。VEGF是通 过二硫键连接的46-kDa二聚糖蛋白。VEGF受体是跨膜受体酪氨酸激酶。 它们的特征为具有七个免疫球蛋白样结构域的胞外域和胞内酪氨酸激酶结 构域。已知某些疾病与失控的血管生成相关联，例如由眼新生血管引起的 疾病，诸如视网膜病、年龄相关性黄斑变性、牛皮癣、动脉硬化以及尤其 是增殖性疾病，诸如所谓的实体瘤例如结肠直肠癌，以及液体肿瘤诸如白 血病。本领域已经描述了大量的抑制VEGF-R酪氨酸激酶活性的化合物。

在诊断中展示出某些预后因素的人类癌症患者与缺乏此类预后因素的 那些患者相比，被认为是具有更低预期存活时间的患者。例如，对于结肠 直肠癌而言，已经鉴定了适于确定疾病状态以及预测患者的预期存活时间 的存活预后因素(N.Kemeny等，患有结肠直肠癌肝转移的患者中的预后变 量(Prognostic variables in patients with hepatic metastases from colorectal cancer)，Cancer63(4)，1989，742-7)。

人们已将高血清总LDH(乳酸脱氢酶)水平与许多实体瘤的差的预后相 关联，所述实体瘤包括肺癌1-3、胰腺癌4、以及结肠直肠癌5-6。这一血清 总LDH显示出是体积大、含氧量低和侵袭性肿瘤以及喜好转移生长的肿 瘤的替代性标志物5。

血管为肿瘤提供氧和营养。随着肿瘤在大小和细胞密度上的生长，其 达到氧气和能量扩散的极限。在离血管约100微米的距离，肿瘤细胞变得 含氧量低，并且与低氧相关的基因诸如低氧诱导因子(HIFs)变得稳定。它 们随后结合到包括LDHA的各种基因启动子区中的低氧反应元件(HRE)上 并增加蛋白的产生。

LDH(乳酸脱氢酶)是由5种四聚体同工型LDH1-5组成的糖酵解酶， 所述四聚体同工型由M和H亚单位组成。

H亚单位衍生自LDHB基因并且不受低氧调节。M亚单位衍生自 LDHA基因且在低氧期间增加。

在结肠直肠腺癌和肺癌中，血清总LDH与高肿瘤组织LDH-5和肿瘤 中低氧标志物相关联3，7。因此可将肿瘤LDH-5认为是低氧的内源性标志物 8。此外，已显示：在来自肺和膀胱的相邻正常和肿瘤组织中，存在从LDH-H 亚单位到含有M的同工型的转变。

令人惊奇的是，现在已发现来自血浆或血清的LDH5很可能是来自肿 瘤的，并且是比总LDH更具特异性的低氧肿瘤标志物。

血浆或血清中高LDH5与肿瘤负荷相关联，并且因此可以被用作分级 标志物，以鉴定具有最高肿瘤负荷并因此对用VEGF-R抑制剂的治疗更好 地响应的那些患者。由于LDH5水平能够预测肿瘤负荷，可以将血清或血 浆LDH5用作监测对用VEGF-R抑制剂治疗的响应的非侵入性方法。

在以下实验部分描述的研究中，显示了血浆或血清LDH5与来自2种 不同肿瘤类型的肿瘤负荷的紧密联系。这一联系可能可适用于许多肿瘤类 型。例如，可将这一联系用作临床试验中的生物标志物，以评估来自特定 治疗的肿瘤响应或复发。它可以应用于从抗肿瘤到抗血管生成治疗的所有 类型的治疗。

因此，本发明涉及通过测量血清或血浆LDH5针对肿瘤负荷筛选患者 的非侵入性方法，其用于选择用VEGF-R抑制剂可成功治疗的患者，高血 清或血浆LDH5是选择候选者的标准。

本发明还涉及通过测量作为肿瘤负荷的代表物(surrogate)或生物标志 物的血清或血浆LDH5针对肿瘤负荷筛选患者的非侵入性方法，其用于监 测对用VEGF-R抑制剂治疗的响应/复发。

本发明还涉及VEGF-R抑制剂单独或与化学疗法联合用于治疗具有高 血清或血浆LDH5水平的肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌和肺癌(小细胞和 非小细胞)患者和具有高血清或血浆LDH5水平的患有神经嵴起源癌症的 患者的用途。

本发明还涉及血浆或血清中LDH5在用抗VEGF-R抑制剂治疗期间作 为监测肿瘤大小的生物标志物的用途，其然后可被用于评估肿瘤进展、稳 定和退化。

本发明还涉及VEGF-R抑制剂单独或如上面所述联合用于制备治疗具 有高血清或血浆LDH5水平的肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌和肺癌(小细 胞和非小细胞)患者和具有高血清或血浆LDH5水平的患有神经嵴细胞起 源癌症的患者的药物的用途；商业包装产品或制品，其包含作为同时、独 立或相继使用的联合制品的组合产品以及使用该组合产品治疗具有高血清 或血浆LDH5水平的肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌和肺癌(小细胞和非小 细胞)患者和具有高血清或血浆LDH5水平的患有神经嵴细胞起源癌症的 患者的说明书；并涉及治疗具有高血清或血浆LDH5水平的肠胃癌、泌尿 生殖器癌、淋巴癌和肺癌(小细胞和非小细胞)患者和具有高血清或血浆 LDH5水平的患有神经嵴细胞起源癌症的患者的方法。

更具体地，本发明涉及：

●治疗肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌或肺癌(小细胞和非小细胞)的 方法，该方法包括给具有高血清或血浆LDH5水平的人类患者施用治疗有 效量的VEGF-R抑制剂；以及

●治疗肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌或肺癌(小细胞和非小细胞)或 患有神经嵴细胞起源癌症的患者的方法，该方法包括给具有高血清或血浆 LDH5水平的人类患者施用治疗有效量的4-吡啶基甲基-酞嗪衍生物，

●在治疗开始之前针对血清或血浆LDH5水平筛选患者，以及在治疗 中监测其作为肿瘤负荷代表物或生物标志物的水平，从而给出对用 VEGF-R抑制剂治疗(抗VEGFR治疗)的响应/复发信息的方法。

本文所使用的术语“肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌和肺癌(小细胞和 非小细胞)和神经嵴细胞起源癌症”具体是指结肠直肠癌、肺癌(诸如非小 细胞肺癌和小细胞肺癌)、黑色素瘤、嗜铬细胞瘤、成神经细胞瘤、胰腺癌、 淋巴瘤，尤其是伯基特、霍奇金以及非霍奇金淋巴瘤、睾丸癌、间皮瘤、 肾细胞癌、卵巢癌和前列腺癌。在本发明的一个优选的实施方案中，肿瘤 类型是结肠直肠癌，尤其是转移性结肠直肠癌。

可通过本领域已知的标准实验室血清评价方法从患者的血浆样品测定 LDH5值。对于该目的而言，通常从静脉或从足跟、手指、脚趾或耳垂抽 取血液样品(2至10ml)并收集至预冷的(冰浴)肝素化管中，轻轻地颠倒8至 10次并立即放置于冰浴中。在30分钟内，通过离心(例如，大约2,000×g， 4℃，10分钟)制备血浆。离心后，可将血浆样品在≤-18℃冷冻储存直到分 析。

可通过本领域已知的标准实验室血清评价方法从患者的血清样品测定 LDH5值。对于该目的而言，通常从静脉或从足跟、手指、脚趾或耳垂抽 取血液样品(2至10ml)并收集至含有Z-Gel的正常微型管中，以使血液层 更好地分离(Sarstedt，Nümbrecht，德国)。将其在室温下放置30分钟。在 30分钟内，通过离心(例如，大约2,000×g，4℃，10分钟)制备血清。离 心后，可将血清样品在≤-18℃冷冻储存直到分析。

在更广的方面，本发明涉及通过任意种类机制降低具有不良预后的肠 胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌和肺癌(小细胞和非小细胞)患者和具有不良 预后的患有神经嵴细胞起源癌症的患者(尤其是具有高血清或血浆LDH5 水平的患者)中的VEGF活性的化合物的用途。降低VEGF活性的化合物 尤其是抑制VEGF受体酪氨酸激酶的化合物，但也包括抑制VEGF受体的 化合物和结合至VEGF的化合物，并特别是在WO 98/35958、WO 00/09495、WO 00/27820、WO 00/59509、WO 98/11223、WO 00/27819、 WO 01/55114、WO 01/58899和EP 0 769 947中一般或具体公开的那些化 合物、蛋白和单克隆抗体；由M.Prewett等在Cancer Research 59(1999) 5209-5218、由F.Yuan等在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第93卷，第 14765-14770页，1996年12月、由Z.Zhu等在Cancer Res.58，1998， 3209-3214、以及由J.Mordenti等在Toxicologic Pathology，第27卷，第1 期，第14-21页，1999中公开的那些；在WO 00/37502和WO 94/10202中 公开的那些；M.S.O’Reilly等，Cell 79，1994，315-328描述的 AngiostatinTM；以及M.S.O’Reilly等，Cell 88，1997，277-285描述的 EndostatinTM；在每一种情况下，特别是在化合物权利要求和关于终产物 工作实施例中，终产物、药物制剂和权利要求的主题通过引用这些出版物 在此引入本申请中。本文公开的单独作为活性成分或联合应用的化合物分 别可以如同所引用文献描述的那样制备和施用。

在一个实施方案中，本发明涉及4-吡啶基甲基-酞嗪衍生物单独或通过 同时、分别或相继施用物质与化学疗法联合在具有高血清或血浆LDH5水 平的患者中治疗肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌或肺癌(小细胞和非小细胞) 或神经嵴细胞起源癌症的用途。

4-吡啶基甲基-酞嗪衍生物是VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂，它们的制 备、其药物制剂和制备此类化合物的方法描述于WO00/59509、 EP02/04892、WO01/10859中，并且特别是描述于美国专利号6,258,812中， 将其在此引入本文作为参考。最优选的是式I化合物：

其中

r是0至2，

n是0至2，

m是0至4，

R1和R2(i)是低级烷基或

(ii)一起形成子式I＊的桥

键合是通过两个末端碳原子实现的，或

(iii)一起形成子式I＊＊的桥

其中环成员T1、T2、T3和T4中的一个或两个是氮，且其它在每一种 情况下是CH，并通过T1和T4进行键合；

A、B、D和E彼此独立地是N或CH，条件是这些基团中不超过2 个是N；

G 是低级亚烷基、被酰氧基或羟基取代的低级亚烷基、-CH2-O-、 -CH2-S-、-CH2-NH-、氧杂(-O-)、硫杂(-S-)或亚氨基(-NH-)；

Q 是低级烷基；

R 是H或低级烷基；

X 是亚氨基、氧杂或硫杂；

Y 是芳基、吡啶基、或者未取代或取代的环烷基；且

Z 是氨基、单或双取代的氨基、卤素、烷基、取代的烷基、羟基、醚 化或酯化的羟基、硝基、氰基、羧基、酯化的羧基、烷酰基、氨基甲酰基、 N-单或N，N-双取代的氨基甲酰基、脒基、胍基、巯基、磺基、苯硫基、苯 基-低级烷硫基、烷基苯硫基、苯基磺酰基、苯基-低级烷基亚磺酰基或烷 基苯基亚磺酰基，如果存在不止一个基团Z时，取代基Z是相同或彼此不 同的；

并且，其中通过波浪线描述的键(当存在时)是单键或双键；

或所定义化合物的N-氧化物，其中一个或多个N原子携带有氧原子；

条件是，如果Y是吡啶基或未取代的环烷基，X是亚氨基，且其余基 团如所定义的那样，G选自低级亚烷基、-CH2-O-、-CH2-S-、氧杂和硫杂；

以及它们的可药用盐。

在式I化合物的定义中使用的基团和符号具有如WO 98/35958所公开 的含义，将该公布文本在此引入本申请中作为参考。

本文所使用的术语“PTK787”或“PTK/ZK”或“PTK787/ZK222584”意 指式I的VEGF受体酪氨酸抑制剂，其中r、n和m每个都是0，R1和R2 一起形成子式I＊的桥，A、B、D和E每一个都是CH，G是亚甲基，X是 亚氨基，Y是4-氯苯基，且由波浪线描述的键是双键。该式I的VEGF受 体酪氨酸抑制剂是本发明非常优选的。最优选地，PTK787以它的琥珀酸 盐的形式应用。

在人类中的研究显示PTK787是被很好地耐受的且降低肿瘤血管渗透 性。应当理解，在论及PRK787时还旨在包括其可药用盐。

在本发明的一个实施方案中，通过施用阿瓦斯丁()降低 VEGF活性。

用于治疗增殖性疾病的化学疗法是本领域已知的。当与化学疗法联合 应用时，同时、分别或相继施用物质。

在本发明优选的实施方案中，化学疗法包括铂化合物和/或抗肿瘤抗代 谢物、以及任选的亚叶酸。在本发明的一个特定实施方案中，化学疗法包 括铂化合物、5-氟尿嘧啶和亚叶酸。在本发明其它特定实施方案中，化学 疗法包括铂化合物、卡培他滨和亚叶酸。

在本发明另一个实施方案中，化学疗法包括拓扑异构酶I抑制剂和/或 抗肿瘤抗代谢物、以及任选的亚叶酸。在本发明的一个特定实施方案中， 化学疗法包括拓扑异构酶I抑制剂、5-氟尿嘧啶或卡培他滨、以及亚叶酸。

术语“抗肿瘤抗代谢物”包括但不限于5-氟尿嘧啶、替加氟、卡培他 滨、克拉屈滨、阿糖孢苷、磷酸氟达拉滨、氟尿苷、吉西他滨、6-巯基嘌 呤、羟基脲、甲氨蝶呤、依达曲沙和此类化合物的盐，以及此外的ZD 1694 (RALTITREXEDTM)、LY231514(ALIMTATM)、LY264618 (LOMOTREXOLTM)和OGT719。

5-氟尿嘧啶例如可以如US 2,802,005所描述的那样制备。其可以以例 如商标为EFUDEXTM、FLURACILTM或FLUROBLASTINTM的市售形式应 用于本发明。替加氟尤其可以以US 5,116,600和US 5,525,603所公开的组 合物形式应用。此外，替加氟例如可以以商标为FTORAFURTM、LAMARTM 或NEBEREKTM的市售形式施用。卡培他滨例如可以以在US 5,472,949中 公开的形式或以例如商标为XELODATM的市售形式施用。克拉屈滨例如可 以如US 4,760,135所公开的那样制备。其可以例如以商标为LEUSTATINTM 或LEUSTATTM的市售形式施用。阿糖胞苷例如可以如US 3,116,282或 Hessler在J.Org.Chem.41(1970)1828中所公开的那样制备。其可以例如 以商标为ARA-CTM、CYTOSARTM或UDICILTM的市售形式施用。该化合物 的合适的盐是阿糖胞苷十八烷基磷酸钠(ocfosfate)(STARASIDTM)，其可以 如US 4,812,560所描述的那样制备。磷酸氟达拉滨可以如US 4,357,324所 描述的那样制备。其可以以商标FLUDARATM的市售形式应用。吉西他滨 例如可以按照US 5,464,826所公开的那样施用，或以例如商标为 GEMZARTM的市售形式施用。6-巯基嘌呤(6-巯嘌呤)例如可以如US 2,933,498所公开的那样制备。其可以例如以商标为LEUKERINTM或 PURINETHOLTM的市售形式应用。羟基脲例如可以如US 2,705,727所公开 的那样制备。甲氨喋呤可以例如以商标为FOLEXTM或MTXTM的市售形式应 用。依达曲沙例如可以如US 4,369,319所公开的那样制备。

术语“亚叶酸”是指N-[4-[[(2-氨基-5-甲酰基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代-6- 蝶啶基)甲基]氨基]苯甲酰基-L-谷氨酸，其例如以商标LEUCOVORINTM市 售。

本文所用的术语“铂化合物”是指卡铂、顺铂和奥沙利铂。优选地， 铂化合物是奥沙利铂。

本文所使用的术语“卡铂”是指抗肿瘤剂顺-二氨(1，1-环丁烷二甲酸根) 合铂(II)，其例如在US 4,140,707中或由R.C.Harrison等在Inorg.Chim. Acta 46，L15(1980)中公开。该药物例如可以以例如商标为CARBOPLATTM 或PARAPLATINTM的市售形式施用。

本文所使用的术语“奥沙利铂”是指也称作草铂的抗肿瘤剂，其例如 公开于US 5,716,988。该药物例如可以以所引用的美国专利描述的形式或 以例如商标为ELOXANTINETM或1-OHPTM的市售形式施用。

本文所使用的术语“顺铂”是指也称作顺-二氨二氯合铂的抗肿瘤剂， 该化合物及其作为抗肿瘤剂的用途例如公开在DE 2,318,020中。

本文所用的术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于托泊替康、依立 替康、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱轭合物PNU-166148(WO99/17804中 的化合物A1)。依立替康可例如以如商标为CAMPTOSARTM的市售形式施 用。托泊替康可例如以如商标为HYCAMTINTM的市售形式施用。

在本发明更广的意义上，术语“化学疗法”是指施用选自以下组别的 抗肿瘤物质，所述组别包括但不限于拓扑异构酶II抑制剂、微管活化剂、 蛋白激酶C抑制剂、促性激素释放素激动剂、抗-雄激素、二膦酸盐、组蛋 白脱乙酰基酶抑制剂、S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶抑制剂以及曲妥珠单抗。

如本文所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环类 (antracyclines)，多柔比星(包括脂质体制剂，例如CAELYXTM)、表柔比星、 伊达比星和奈莫柔比星；蒽醌类，米托蒽醌和洛索蒽醌；和鬼臼毒素类 (podophillotoxines)，依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷可例如以如商标为 ETOPOPHOSTM的市售形式施用。替尼泊苷可例如以如商标为VM 26-BRISTOLTM的市售形式施用。多柔比星可例如以如商标为 ADRIBLASTINTM的市售形式施用。表柔比星可例如以如商标为 FARMORUBICINTM的市售形式施用。伊达比星可例如以如商标为 ZAVEDOSTM的市售形式施用。米托蒽醌可例如以如商标为 NOVANTRONTM的市售形式施用。

术语“微管活化剂”是指选自紫杉醇、多西紫杉醇、艾榴塞洛素 (eleutherobin)、长春花生物碱类(如长春碱、特别是硫酸长春碱；长春新碱、 特别是硫酸长春新碱和长春瑞滨)以及淅皮海绵内酯(discodermolide)的微 管稳定剂和微管去稳定剂。硫酸长春碱可以例如以如商标为VINBLASTIN R.P.TM的市售形式施用；硫酸长春新碱可以例如以如商标为FARMISTINTM 的市售形式施用。

术语“蛋白激酶C抑制剂”特别指星状孢子素衍生物，并优选指在 US 5,093,330中公开的那些。此类化合物可以以WO99/48896中所公开的 形式施用。

本文所使用的术语“抗血管生成化合物”是指沙利度胺(THALOMIDTM) SU5416、索拉非尼、舒尼替尼。

本文所使用的术语“促性激素释放素激动剂”包括但不限于阿巴瑞克、 戈舍瑞林和醋酸戈舍瑞林。戈舍瑞林公开在US 4,100,274中，并可例如以 如商标为ZOLADEXTM的市售形式施用。阿巴瑞克可例如像US 5,843,901 所公开的那样配制。

本文所使用的术语“抗-雄激素”包括但不限于比卡鲁胺(CASODEXTM)， 其例如可以如US 4,636,505所公开的那样配制。

本文所使用的术语“二膦酸盐”包括但不限于etridonic酸、氯磷酸、 替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。“Etridonic 酸”可例如以如商标为DIDRONELTM的市售形式施用。“氯磷酸”可例如 以如商标为BONEFOSTM的市售形式施用。“替鲁膦酸”可例如以如商标 为SKELIDTM的市售形式施用。“帕米膦酸”可例如以如商标为AREDIATM 的市售形式施用。“阿仑膦酸”可例如以如商标为FOSAMAXTM的市售形 式施用。“伊班膦酸”可例如以诸如商标为BONDRANATTM的市售形式施 用。“利塞膦酸”可例如以诸如商标为ACTONELTM的市售形式施用。“唑 来膦酸”可例如以诸如商标为ZOMETATM的市售形式施用。

本文所使用的术语“组蛋白脱乙酰基酶抑制剂”包括但不限于MS-275、 SAHA、FK228(以前称FR901228)、曲古抑菌素A和在WO 02/22577中 公开的化合物，特别是NVP-LAQ824或其乳酸盐和NVP-LBH589。

本文所使用的术语“S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶抑制剂”包括但不限于在 US 5,461,076中公开的化合物。

“曲妥珠单抗”可例如以诸如商标为HERCEPTINTM的市售形式施用。

由编号、一般名称或商标名称确认的活性物质的结构可以从标准手册 “默克索引(The Merck Index)”的现行版本或从数据库，例如国际专利 (Patents International)或其它IMS全球出版物(IMS World Publications)中 得到。将其相应内容在此引入作为参考。

本文所使用的术语“联合制品”尤其定义“套装产品(kit of parts)”， 在某种意义上，如上面所定义的组合搭档(a)和(b)可以分别地给药或通过使 用含有显著量的组合搭档(a)和(b)的不同的固定组合产品给药，即同时或在 不同的时间点给药。然后例如可以将套装产品的部分同时施用，或对套装 产品的任意部分而言以相同或不同的时间间隔在不同时间点按时间顺序交 错施用。因此，本发明还包括商业包装产品，其包含适于口服施用形式的 1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其可药用盐，和将1-(4-氯苯胺 基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其可药用盐施用至具有高血清或血浆LDH5水 平的肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌或肺癌(小细胞和非小细胞)患者或具 有高血清或血浆LDH5水平的患有神经嵴细胞起源癌症的患者的说明书。

本发明还涉及本文公开的组合产品在具有高血清或血浆LDH5水平的 患者中治疗肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌或肺癌(小细胞和非小细胞)或 神经嵴细胞起源癌症的用途，以及用于制备治疗特征是高血清或血浆 LDH5水平的肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌或肺癌(小细胞和非小细胞) 或神经嵴细胞起源癌症的药物的用途。

本文所使用的术语“转移生长”包括肿瘤的转移扩散和微小转移在癌 症患者的其它器官中的生长和发展。

应当理解，提及组合搭档(a)和(b)时，也意指包括所述化合物的可药用 盐。

一般而言，对于治疗结肠直肠癌，可以以连续地口服施用4-吡啶基甲 基-酞嗪衍生物，例如一天一次。对于1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪 琥珀酸盐而言，750mg至2500mg的口服日剂量、尤其是1000mg至1500mg/ 天、更优选1200mg至1300mg/天、最优选1250mg/天被认为是药学有效剂 量。然而，其它施用方案可能也是有效的，并包括在本发明的范围之内。

如果在本文中没有另外说明，当在本文公开的组合产品中使用的组合 搭档以其作为单独药物的市售形式应用时，它们的剂量和施用模式可按照 各个市售药物的包装说明书中提供的信息确定，以得到本文中描述的有益 效果。

通常根据已确定的施用方案施用化学疗法。此类施用方案，例如用于 结肠直肠癌的deGramont方案，是本领域已知的(A De Gramont等，J.Clin. Onc.18(16)，2000，2938-47)。在特定实施方案中，化学疗法包括根据已确 定的施用方案(诸如本领域已知的那些)施用奥沙利铂、亚叶酸和5-氟尿嘧 啶。其中在第一天施用85mg/m2奥沙利铂、在第1天和第2天以2小时输 注给予200mg/m2亚叶酸、以及在第1天和第2天超过22小时以400mg/m2 以及随后600mg/m2的剂量作为推注剂施用5-氟尿嘧啶，并每14天进行一 次的具体化疗方案是特别有用的。

5-氟尿嘧啶可以以约50至1000mg/m2天、例如500mg/m2天的剂量 施用给人。

卡培他滨可以以约10至1000mg/m2天的剂量施用给人。

盐酸吉西他滨可以以约10至约1000mg/周的剂量施用给人。

甲氨喋呤可以以约5至500mg/m2天的剂量施用给人。

ZD 1694(RALTITREXEDTM)可以以15分钟输注约2.0至4.0mg/m2、 例如3.5mg/m2的剂量施用给人，每3周一次。

卡铂可以以约每四至六周约100至400、例如200mg/m2体表的剂量 静脉内施用给人。

奥沙利铂可以以约每二至三周约25至135、例如45或85mg/m2体表 的剂量静脉内施用给人。

顺铂可以以约每三周约25至100mg/m2的剂量施用给人。

托泊替康可以以约1至5mg/m2天的剂量施用给人。

依立替康可以以约50至350mg/m2天的剂量施用给人。

长春碱可以以约1.5至10mg/m2天的剂量施用给人。硫酸长春新碱可 以以约0.025至0.05mg/kg体重×周的剂量肠胃外施用给人。长春瑞滨可 以以约10至50mg/m2天的剂量施用给人。依托泊苷磷酸盐可以以约25至 115mg/m2天、例如56.8或113.6mg/m2天的剂量施用给人。替尼泊苷可 以以约每两周约75至150mg的剂量施用给人。多柔比星可以以约10至 100mg/m2天、例如25或50mg/m2天的剂量施用给人。表柔比星可以以 约10至200mg/m2天的剂量施用给人。伊达比星可以以约0.5至50mg/m2 天的剂量施用给人。米托蒽醌可以以约2.5至25mg/m2天的剂量施用给人。 紫杉醇可以以约50至300mg/m2天的剂量施用给人。阿仑膦酸可以以约5 至10mg/天的剂量施用给人。氯磷酸可以例如以约750至1500mg/天的剂 量施用给人。Etridonic酸可以以约200至400mg/天的剂量施用给人。伊 班膦酸可以以每三至四周约1至4mg的剂量施用给人。利塞膦酸可以以约 20至30mg/天的剂量施用给人。帕米膦酸可以以每三至四周约15至90mg 的剂量施用给人。替鲁膦酸可以以约200至400mg/天的剂量施用给人。 曲妥珠单抗可以以约1至4mg/m2周的剂量施用给人。比卡鲁胺可以以约 25至50mg/m2天的剂量施用给人。

本发明的一个目的是提供药物组合物，该药物组合物包含对增殖性疾 病联合治疗有效量的如本文所述的组合产品。在该组合物中，组合搭档(a) 和(b)可以以一个联合的单位剂型或两个分开的单位剂型一起、相继或分别 地施用。所述单位剂型也可以是固定组合产品。

根据本发明用于组合搭档(a)和(b)分别施用和用于以固定组合产品(即 包含至少两个组合搭档(a)和(b)的单个药物组合物)施用的药物组合物可以 以本身已知的方法制备，并且是适于肠内诸如口服或直肠，以及肠胃外施 用给哺乳动物(温血动物)包括人的那些，其仅包含治疗有效量的至少一种 药理学活性组合搭档，或还包含一种或多种可药用载体，尤其适于肠内或 肠胃外应用。

新的药物组合物例如含有约10％至约100％、优选约20％至约60％的 活性组分。用于肠内或肠胃外施用的联合治疗的药物制剂例如是以单位剂 型存在的那些，例如糖衣片、片剂、胶囊或栓剂，此外还有安瓿剂。除非 另外指明，这些制剂通过本身已知的方法来制备，例如通过常规的混合、 制粒、包糖衣、溶解或冷冻干燥方法来制备。应当理解，各剂型的单剂量 中所含的组合搭档的单位含量本身并不需要构成有效量，因为可通过施用 多个剂量单位来达到必需的有效量。

通过已建立的测试模型可以显示，VEGF-R抑制剂单独或与化学疗法 联合能够产生本文之前所述的有益效果。本领域技术人员完全能够选择相 关的测试模型以证明此类有益效果。例如，可以在临床研究或在基本上如 下文所描述的测试方法中证明药理学活性。

合适的临床研究例如是在患有转移性结肠直肠癌的患者中的随机、双 盲、安慰剂对照、平行的研究，但还包括剂量递增研究。对于包含化疗的 治疗方案而言，可以在化疗的日子里将用于预防急性呕吐的标准止吐方案 任选地给予患者，例如，与或不与皮质类固醇一起的5HT3拮抗剂，诸如 格拉司琼或奥坦西隆。在此类研究中的主要端点可以是体力状态、生活质 量得分、疾病进展时间、发病率、死亡率或无进展生存期的增加。以动态 对比增强核磁共振成像(MRI)形式的肿瘤评估是确定治疗效果的合适方 法。

一方面，本发明提供了商业包装产品，其包含：4-吡啶基甲基-酞嗪衍 生物和至少一种选自铂化合物和/或抗肿瘤抗代谢物以及任选的亚叶酸的 化合物，其中在每一种情况下活性组分以游离形式或以可药用盐的形式存 在；和任选的至少一种可药用载体；以及同时、分别或相继使用它们用于 在具有高血清或血浆LDH5水平的患者中治疗肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋 巴癌或肺癌(小细胞和非小细胞)或神经嵴细胞起源癌症的说明书。

在另一方面，本发明提供了诊断患有肠胃癌、泌尿生殖器癌、淋巴癌 或肺癌(小细胞和非小细胞)或神经嵴起源癌症、尤其转移性结肠直肠癌的 个体的方法，所述个体可能是用VEGF-R抑制剂，优选式I的那些，单独 治疗或与化学疗法联合治疗的合适候选者，所述方法包括分析来自所述个 体的生物学样品、尤其是血液或血清或血浆样品中的LDH5水平，其中与 对照相比具有高血清或血浆LDH5水平的个体是用VEGF-R抑制剂单独治 疗或与化学疗法联合治疗的合适候选者。

实验部分

应用PTK787/ZK222584(血管内皮生长因子(VEGF)受体酪氨酸激酶 抑制剂)、阿瓦斯丁(Avastin)(VEGF-A人源化抗体)和DC101(大鼠抗小鼠 VEGFR2抑制剂)作为降低肿瘤负荷和影响血清/血浆LDH5水平的示例化 合物。

材料

应用来自海伦娜生物科学公司(Helena Biosciences)的酶谱技术在琼脂 糖凝胶上分离LDH同工型。海伦娜生物科学公司的仪器SAS-1Plus(目录 号1531)。用来自海伦娜生物科学欧洲公司(Helena BioSciences Europe)， Colima Avenue，Sunderland Enterprise Park，Sunderland Tyne & Wear， SR5 3 XB，England的诊断试剂盒(目录号201300)估计LDH同工酶的测量 结果。目录号210300施样刀片(Application blades)

目录号210100 一次性样品杯

目录号5014 显影载重(Development weight)

目录号4062   孵育室

目录号3100  Rep Prep缓冲液

脱色溶液：将100ml冰醋酸和900ml纯化水混合。贮存在密塞的瓶 中。

方法：

将35μl血浆样品移液到一次性样品杯(#210100)中，并如试剂盒所描 述的那样运行。简而言之，将样品托盘小心地置于施样抽屉中。将400μl Rep Prep缓冲液(#3100)分配到散热装置(heat sink)和凝胶上，琼脂糖凝胶 侧面向上，将其小心地置于散热装置中，避免在凝胶下面产生气泡。用吸 墨纸C纸移除凝胶顶部的过量缓冲液，干燥凝胶表面。将两个电极连接到 电极杆的顶侧以便它们接触凝胶块，将盖子盖在凝胶和电极上并按压5秒 以确保接触。将一个施样刀片组件(#210300)置于仪器顶部位置里面，并进 行LD电泳。通过机器完成5个样品施样。将琼脂糖凝胶以80伏特在15 ℃电泳20分钟。大约在电泳结束之前3-4分钟，通过加入1ml LD同工酶 稀释液重构一小瓶同工酶试剂。将全部含量的LD同工酶试剂沿着凝胶中 部倾泻。为确保试剂的均匀涂布，将一张试剂涂布软片小心地施用在凝胶 顶部。然后将凝胶在45℃孵育25分钟。孵育后，移出试剂涂布软片和两 个凝胶块。然后用10％乙酸使凝胶脱色2分钟。将吸墨纸B在脱色溶液中 湿润并放置在凝胶表面上，随后是3张折叠的纸巾。然后用显影载重挤压 凝胶5分钟。完成后马上扫描凝胶。用Alpha Ease v5.5软件程序量化5条 同工酶条带。

LDH条带的量化

用hp scanjet 5590扫描酶谱凝胶。将扫描图片保存为TIF文件，并用 微软程序Alpha Ease v5.5量化条带。以积分密度值表达结果值(IDV＝在 所定义区域的像素总和)。

将附图(图1-4)引入到说明书中并构成说明书一部分，它们阐明了本发 明的示例性实施方案。

实施例1

血浆获自2个正常健康志愿者、2只没有肿瘤的小鼠以及8只移植有 人类前列腺瘤系DU145的小鼠，在移植了DU145的小鼠中，2只用溶媒 (PEG300)、2只每天口服100mg/kg PTK/ZK、2只每周两次腹腔内给予 5mg/kg阿瓦斯丁，以及每周两次腹腔内给予21mg/kg DC101进行治疗。 在第0天移植DU145肿瘤并且在第17至43天治疗。

人类LDH同工型具有与小鼠LDH同工型不同的电泳迁移。这是因为 两个物种之间的M亚单位是实质上不同的。由于LDH5仅由M亚单位组 成，它显示了人类和小鼠之间最大的不同(比较图1泳道1和2与3和4)。 LDH4、3和2也显示出不同的迁移，因为它们也含有M亚单位。LDH1 条带在小鼠和人类之间似乎是相似的。没有肿瘤的小鼠和人类之间的另一 个令人吃惊的区别在于主要的同工型。人类在它们的血浆中具有更多的 LDH1、2、3，而小鼠具有高数量的LDH5。

人们可以利用有差别的电泳迁移来区别该DU145模型中人类来源的 LDH(肿瘤来源的)和小鼠LDH(间质来源的)。

在图1，泳道5和6(溶媒)、7和8(PTK/ZK)、9和10(阿瓦斯丁)、11 和12(DC101-抗小鼠VEGFR2抗体)中，人们可以清楚地看到人类LDH5 条带，并且因此这肯定是来自肿瘤的。这也与肿瘤负荷相关联，在图1凝 胶的底部以毫克显示了每一肿瘤的所述肿瘤负荷。

也显示出存在间质成分，尽管这更难以确定和定量，因为来自小鼠和 人类的条带跑到了一起。

对每一个带有DU145的小鼠的血浆样品量化了人类LDH5条带。在 图2中，将每一条带的密度针对从动物中切除的肿瘤重量绘图，并且显示 出LDH5和肿瘤负荷的良好相关性。

实施例2

血浆获自2个正常健康志愿者、2只没有肿瘤的小鼠以及8只移植有 人类结肠瘤系SW480并用溶媒处理的小鼠。在第0天移植肿瘤，并且从第 7至22天每天用溶媒(PEG300)处理，在第22天处死动物并取得血浆用于 分析。

在图3，泳道5至12(溶媒)中，人们可清楚地看到人类LDH5条带， 因此这肯定是来自肿瘤的。这也与肿瘤负荷相关联，在图3凝胶的底部以 毫克显示了每一肿瘤的所述肿瘤负荷。也显示出存在间质成分，尽管这更 难以确定和定量，因为来自小鼠和人类的条带跑到了一起。

因此，在这一模型中，我们可以看到至少一些LDH5是来源于肿瘤的， 并且这与肿瘤负荷相关联。

对每一个带有SW480的小鼠的血浆样品量化了人类LDH5条带。在 图4中，将每一条带的密度针对从动物中切除的肿瘤重量绘图。在这一模 型中，LDH5和肿瘤负荷相关联。

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