本申请涉及用于治疗至少一种IL-4或IL-4或IL-13纤维化相关病状的 组合物和方法，包括治疗性组合物、制剂、给药和装置。通过参考，本申请 完整地纳入2006年12月15日提交的US 60/870,105。

白细胞介素-4是对B细胞、T细胞和许多非淋巴细胞(包括单核细胞、 内皮细胞和成纤维细胞)具有多种生物学作用的T细胞和肥大细胞源的多效 性细胞因子。它诱导小鼠B细胞分泌IgG1和IgE，并且诱导人B细胞分泌 IgG4和IgE。IL4-依赖的IgE产生以及可能的IgG1和IgG4产生归因于IL4 诱导的同种型转换。在人中，IL4与IL13都有此性质。IL4的三维结构已经 用NMR和X射线晶体学法测定。它具有一个具有疏水核心的紧密球状结构。 螺旋以左手反平行束排列的4α-螺旋束和两个含有一个2股反平行β-折叠的 上向连接构成了分子的大部分。该结构与GM-CSF、M-CSF和IL3类似。
白细胞介素13(IL-13)由活化的T细胞分泌，并且能够通过LFS-激活的 单核细胞抑制炎症细胞因子(IL1、IL6、TNF、IL8)的产生。人和小鼠IL 13 诱导人B细胞表达CD23，与抗Ig或CD40抗体结合促进细胞增殖并且刺激 IgM、IgE和IgG4的分泌。据显示IL13还能延长人单核细胞的存活并增加 MHC II类和CD23的表面表达。其晶体结构还未确定但是已经构建出理论 的分子模型。基于IL-4和IL-4或IL-13的生物学功能，它们都是治疗上很 重要的蛋白。据显示IL-4能够抑制自身免疫性疾病，并且IL-4和IL-4或 IL-13均显示出促进抗肿瘤免疫反应的可能。换言之，由于两种细胞因子都 参与了过敏性疾病的发病机理，所以这些细胞因子的拮抗剂可能提供过敏和 过敏性哮喘的治疗有益效果。
非人的、嵌合多克隆(例如，抗血清)和/或单克隆抗体(Mabs)和片 段(例如，其蛋白水解消化产物)是可能的治疗药剂，它们在一些情况下使 用以试图治疗某些疾病。然而此类包含非人部分的抗体在给药给人时会引起 免疫反应。此免疫反应可能引起免疫复合物介导的抗体从循环中的清除，并 进行不适于治疗的重复给药，从而降低对患者的治疗有益效果并限制Ig衍 生蛋白的再次给药。例如，重复给药包含非人部分的抗体可能导致血清病和 /或过敏反应。为了避免这些和其它的此类问题，采取了一些方法来降低此 类抗体及其部分的免疫原性，包括本领域所熟知的嵌合和“人源化”。这些 方法生产出了具有较低免疫原性的抗体，但是具有其它不太期望的性质。
发明概述
本发明提供用至少一种分离的抗-IL-4或IL-13的人Ig衍生蛋白(Ig衍 生蛋白(Ig derived proteins))，包括免疫球蛋白、受体融合蛋白、它们的 断裂产物和其他特定部分和变体、以及抗-IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白组合 物、编码核酸或互补核酸、载体、宿主细胞、组合物、制剂、装置、转基因 动物、转基因植物，来治疗至少一种IL-4或IL-13相关纤维化病状的方法和 组合物，以及制备和使用它们的方法，如本文所描述和所实现的，和本领域 已知的那些一起，用于治疗至少一种IL-4或IL-13纤维化相关病状。
本发明还提供本文描述的任何发明，不限于本文提供的任何具体描述、 实施方式或实施例。
发明详述
本发明还提供方法或组合物中的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白、 特定部分或变体，当以治疗有效量给药时用于调节、治疗或减少细胞、组织、 器官、动物或患者中与至少一种IL-4或IL-13纤维化相关的状况或疾病的至 少一种体征(sign)或症状，和/或按需要用于很多不同的条件下，例如但不 限于：在本领域所熟知的和/或本文所述的相关疾病或治疗状况之前、之后 或期间。可以根据本发明治疗的纤维化相关状况的非限制性实例包括间质性 肺病、硬皮病、肝纤维化、肾纤维化、结节病(sarcoidosis)、肥厚性瘢痕 (hypertrophic scarring)、瘢痕疙瘩性瘢痕(keloid scarring)、心肌纤维化、 老年性黄斑变性、或胶原血管病。
本发明还提供至少一种用于治疗细胞、组织、器官或动物中IL-4或IL-13 纤维化相关状况的方法，所述方法包括使纤维化相关状况调节有效量的至少 一种IL-4或IL-3人Ig衍生蛋白接触或将其给药至所述细胞、组织、器官或 动物，任选地，所述动物为灵长类，任选为猴子或人。所述方法还可以任选 包括其中所述有效量为0.001-100mg/千克的所述细胞、组织、器官或动物。 此方法还可以包括其中所述接触或所述给药通过至少一个选自如下的模式 进行：静脉内、肌内、快速注射、腹膜内、皮下、呼吸、吸入、鼻、阴道、 直肠、颊、舌下、鼻内、真皮下(subdermal)或透皮。
本发明还包括至少一种制剂，所述制剂包含：至少一种IL-4或IL-13的 人Ig衍生蛋白和选自无菌水、无菌缓冲水或至少一种防腐剂中的至少一种， 所述防腐剂选自由下列组成的组：酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、 苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯、氯化苄烷铵、氯化苄乙铵、脱氢乙酸钠和硫 柳汞、或它们在水性稀释剂中的混合物，任选地，其中IL-4或IL-13的人Ig 衍生蛋白的浓度为约0.1mg/ml至约100mg/ml，还包含至少一种等渗剂或 至少一种生理上可接受的缓冲剂。
本发明还包括至少一种制剂，所述制剂包含：在第一容器中相应冻干形 式的至少一种IL-4或IL-13的人Ig衍生蛋白和任选的含有至少一种无菌水、 无菌缓冲水或至少一种防腐剂的第二容器，所述防腐剂选自由下列组成的 组：酚、间甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯、 氯化苄烷铵、氯化苄乙铵、脱氢乙酸钠和硫柳汞、或它们在水性稀释剂中的 混合物，任选地，其中IL-4或IL-13的人Ig衍生蛋白的浓度重新配制成约 0.1mg/ml至约500mg/ml的浓度，还包含等渗剂或还包含生理上可接受的 缓冲剂。
本发明还提供至少一种治疗至少一种IL-4或IL-13介导的状况的方法， 所述方法包括给予需要的患者本发明的制剂。
此Ig衍生蛋白可任选地包括抗体和受体融合蛋白，它们阻断IL-4或 IL-13与至少一种受体结合并且包括下列标准的3个或更多个，如3、4、5、 6或7个。
标准
1、结合至少一种人野生型(wt)重组或纯化的IL-4或IL-13、IL-4或IL-13 受体和/或其它特定的IL-4或IL-13突变蛋白，例如，但不限于Ile48、Val48、 Gln90、Glu90、Leu95、Ile95、Leu96、Ile96、Leu99、Ile99、Phe103、Tyr103、 Asn130和/或Gln130中的至少一种；SEQ ID NO：42、43或44的1-145氨基 酸，例如但不限于SEQ ID NO：42、43或44的氨基酸1-10、10-20、20-30、 30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、 120-130、130-140、和/或14-145中的至少一个(ELISA中)。
2、特异性地结合重组wt人IL13或IL-4或IL-13受体，但不特异性结 合结构上相近的细胞因子人GM-CSF(ELISA中)。
3、抑制人重组wt人IL13(优选地)与人IL-4或IL-13受体或适宜动 物的IL-4或IL-13受体相互作用，并且ND50≤10nM。
4、与阴性对照相比，抑制人肿瘤TF-1细胞的人野生型人IL-4或IL-13 依赖性增殖。
5、对人IL 13wt或特定突变体的表观Kd≤0.5nM  (如BIAcore所测 定)。
6、在新鲜人B细胞中抑制人IL13wt重组人IL-4或IL-13依赖性体外 IgE产生，比阴性对照抑制更强，如B9分析。
7、与天然wt人IL13交叉反应的效力类似于与重组IL-4或IL-13交叉 反应的效力，如B9分析和/或ELISA中所测定。
本发明还提供此类抗IL-4或IL-13Ig衍生蛋白的组合物、制剂、方法、 装置和用途，包括治疗和诊断用途。
本发明还提供Ig衍生蛋白，所述Ig衍生蛋白适于通过阻断IL-4或IL-13 结合一或多个它们的受体来治疗至少一种IL-4或IL-13纤维化相关状况。
本发明提供分离的、重组的和/或合成的IL-4或IL-13Ig衍生蛋白或特 定部分或变体，以及组合物和编码核酸分子，所述编码核酸分子包括编码至 少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白的至少一种多核苷酸。本发明的这种Ig 衍生蛋白或特定部分或变体包括特定的Ig衍生蛋白全长序列、或它们的结 构域、片段和特定变体，以及制备和使用所述核酸和Ig衍生蛋白或特定部 分或变体的方法，包括治疗组合物、方法和装置。
如本文所用“抗IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白”、“抗IL-4或IL-13的 Ig衍生蛋白部分”、“抗IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白片段”、“抗IL-4或 IL-13的Ig衍生蛋白变体”、“IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白”、“IL-4或 IL-13的Ig衍生蛋白部分”或“IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白片段”和/或“IL-4 或IL-13的Ig衍生蛋白变体”等在体外、原位和/或优选地在体内降低、阻 断、抑制、消除或干扰IL-4或IL-13蛋白的活性、结合或IL-4或IL-13蛋白 受体的活性或结合，并且还包括上文所述标准的至少3-7个。
举例而言，本发明的适宜IL-4或IL-13Ig衍生蛋白、特定部分或变体可 结合至少一个IL-4或IL-13蛋白或受体，并且包括抗IL-4或IL-13Ig衍生 蛋白、它们的抗原结合片段、以及它们与IL-4或IL-13特异结合的特定部分、 变体或结构域。适宜的IL-4或IL-13Ig衍生蛋白、特定部分、或变体还可降 低、阻断、消除、干扰、阻止和/或抑制IL-4或IL-13蛋白RNA、DNA或蛋 白质合成、IL-4或IL-13蛋白释放、IL-4或IL-13蛋白或受体信号、膜IL-4 或IL-13蛋白断裂、IL-4或IL-13相关活性、IL-4或IL-13蛋白产生和/或合 成，例如，如本文所述或本领域所已知。
可用于本发明的方法和组合物的抗IL-4或IL-13Ig衍生蛋白(也称为抗 IL-4或IL-13Ig衍生蛋白)的特征在于高亲和力地结合IL-4或IL-13蛋白 并且任选地和优选地具有低毒性。具体来说，本发明的Ig衍生蛋白、特定 片段或变体可用于本发明，其中Ig衍生蛋白、特定片段或变体的单独组分 (如，可变区、恒定区和构架)单独地和/或共同地、任选地和优选地具有 低免疫原性。可用于本发明的Ig衍生蛋白任选地特征为它们能够长时间治 疗患者、良好地或优异地缓解症状并具有低毒性。低免疫原性和/或高亲和 力以及其它适宜的性质可以有助于达成治疗结果。“低免疫原性”在本文被 定义为在低于约75％或优选低于约50％的被治疗患者中引起显著的HAHA、 HACA或HAMA反应和/或在被治疗患者中引起低滴定度(用双抗原酶免疫 分析小于约300，优选小于约100)(Elliott等人，Lancet 344：1125-1127 (1994)，每个上述参考文献在此全文引入作为参考)。
用途
本发明的分离核酸可以用于产生至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白、 其片段或特定变体，它们可用于在细胞、组织、器官或动物(包括哺乳动物 和人)中起作用，用于调节、治疗、缓解至少一种IL-4或IL-13状况，帮助 预防该状况的发生，或减轻其症状。
这种方法可包括给予需要所述调节、治疗、缓解、预防或减轻症状、作 用或机制的细胞、组织、器官、动物或患者有效量的包含至少一种抗-IL-4 或抗-IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的组合物或药物组合物。所 述有效量可以包括单次或多次给药约0.001-500mg/kg的量，或单次或多次 给药使血清浓度达到0.01-5000μg/ml的量，或其中的任何有效范围或数值， 该有效量可如本文所述或相关领域所知用已知的方法完成和确定。
引用文献
在此引入本文所引用的所有出版物或专利的完整内容作为参考，无论它 们是否特别指出，它们显示了本发明时的技术状态，和/或为本发明提供了 说明，并使本发明成为可能。出版物是指任何科学或专利公开，或可以用任 何媒体形式包括所有录制、电子或印刷形式获得的任何其它信息，在此全文 引入以下文献作为参考：Ausubel等，主编，Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons，Inc.，NY，NY(1987-2001)；Sambrook等， Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2nd Edition，Cold Spring Harbor，NY (1989)；Harlow and Lane，antibodies，a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor， NY(1989)；Colligan等，主编，Current Protocols in Immunology，John Wiley & Sons，Inc.，NY(1994-2001)；Colligan等，Current Protocols in Protein Science， John Wiley & Sons，NY，NY，(1997-2001)。
本发明的Ig衍生蛋白
术语“Ig衍生蛋白”意欲涵盖Ig衍生蛋白、它们的消化片段、特定部 分和变体，包括Ig衍生蛋白模拟物或包含模拟抗体或它们的特定片段或部 分的结构和/或功能的Ig衍生蛋白部分，包括单链Ig衍生蛋白和它们的片段， 并且还意欲涵盖含有治疗蛋白、抗体和它们的消化片段、特定部分和变体的 模拟物的蛋白，其中所述蛋白包含至少一个功能性IL-4或IL-13蛋白配体结 合区(LBR)，其任选替代衍生Ig衍生蛋白、部分或变体的抗体的至少一个互 补决定区(CDR)。在一个实施方案中，Ig衍生蛋白包含至少一个CDR或 特异性结合至少一个生物活性靶标(如，IL-4或IL-13或IL-4或IL-13受体) 的靶结合区，并且还含有至少SEQ ID NO：1-41之一的至少10至384-500氨 基酸，或表1所述的相应重链或轻链氨基酸序列的至少一个区域的至少一部 分，任选地还含有至少一个取代、插入或去除，如2004年6月17日提交， 2005年1月20日公开的PCT WO05/05604(全文以引入方式并入本文)的 图1-41中所述。此类IL-4或IL-13的IgG衍生蛋白、特定部分或变体包括 模拟至少一种IL-4或IL-13蛋白拮抗剂(如IL-4或IL-13蛋白抗体或受体或 配体蛋白或片段或类似物)的结构和/或功能的那些。功能性片段包括结合 人IL-4或IL-13蛋白或它们的片段的抗原结合片段。举例而言，能够结合人 IL-4或IL-13蛋白或它们的片段的Ig衍生蛋白片段包括但不限于Fab(例如， 通过木瓜蛋白酶消化)、Fab′(例如，通过胃蛋白酶消化和部分还原)和F(ab’)2 (例如，通过胃蛋白酶消化)、facb(例如，通过纤溶酶(plasmin)消化)、 pFc’(例如，通过胃蛋白酶或纤溶酶消化)、Fd(例如通过胃蛋白酶消化、 部分还原和再聚集)、Fv或scFv  (例如，通过分子生物学技术)片段， 都涵盖在本发明中(参见，例如，Colligan，Immunology，上文)。
此类片段可以通过酶裂解、合成或重组技术制备，如本领域已知和/或 本文所述。Ig衍生蛋白还可使用其中在天然终止位点的上游引入了一个或多 个终止密码子的Ig衍生蛋白基因以多种截短形式制备。举例而言，编码 F(ab′)2重链的嵌合基因可以被设计成包括编码重链的CH1结构域和/或铰链 区的DNA序列。Ig衍生蛋白的各种部分可通过常规技术以化学方法连接在 一起或可以使用基因工程技术制备成连续蛋白(contiguous protein)。举例 而言，可以表达编码人Ig衍生蛋白链的可变区和恒定区的核酸以制备连续 蛋白。参见，例如，关于片段化的Colligan，Immunology，见上文，第2.8和 2.10节；和关于单链Ig衍生蛋白的Ladner等人，美国专利No.4,946,778和 Bird，R.E.等人，Science，242：423-426(1988)，这些公开物各自的全文以引用 方式并入本文。
本文所用术语“人Ig衍生蛋白”是指Ig衍生蛋白，其中基本上蛋白的 每个部分(例如，CDR、LBR、构架、CL、CH结构域(例如，CH1、CH2、 CH3)、铰链(VL、VH))基本上都无免疫原性，并且仅有少量序列改变或 变化。此类改变或变化任选地和优选地在人中保持或降低对未修饰的人Ig 衍生蛋白的免疫原性。因此，人Ig衍生蛋白与嵌合或人源化Ig不同。人Ig 衍生蛋白可以由能够表达功能性重排的人免疫球蛋白(例如，重链和/或轻 链)基因的非人动物或原核或真核细胞产生。此外，当人Ig衍生蛋白为单 链Ig衍生蛋白时，它可以包含在自身人Ig衍生蛋白中未发现的连接肽。举 例而言，Fv可以包含连接肽，如2至约8个甘氨酸或其它氨基酸残基，该 连接肽连接重链的可变区和轻链的可变区。此类连接肽被认为是人源的。含 有至少一个IL-4或IL-13蛋白配体或它们的受体的IL-4或IL-13的Ig衍生 蛋白可以针对合适的配体(如分离的和/或IL-4或IL-13蛋白或它们的部分 (包括合成分子，如合成肽))设计。此类IL-4或IL-13Ig衍生蛋白的制备 使用已知技术来鉴别和鉴定配体结合区域或至少一个IL-4或IL-13蛋白或它 们的部分的序列。
可用合适的免疫原性抗原如分离的IL-4或IL-13蛋白或其部分(包括合 成分子例如合成的肽)来产生对p40亚基有特异性的人Ig衍生蛋白。免疫 原性抗原的制备以及单克隆Ig衍生蛋白的生产可用任何合适的技术进行。 已描述了多种方法(参见，例如，Kohler等，Nature，256：495-497(1975)和 Eur.J.Immunol.6：511-519(1976)；Milstein等，Nature 266：550-552(1977)； Koprowski等，美国专利号4,172,124；Harlow，E.和D.Lane，1988，Ig derived proteins：A Laboratory Manual，(冷泉港实验室：纽约，冷泉港)；Current Protocols In Molecular Biology，Vol.2(例如，增刊27，94夏)，Ausubel，F.M. 等，主编，(John Wiley & Sons：New York，NY)，第11章，(1991-2006))，上 述各文献在此全文引入作为参考。一般，通过将合适的永生化细胞系(例如 骨髓瘤细胞系，例如但不限于Sp2/0、Sp2/0-AG14、NS0、NS1、NS2、 AE-1、L.5、＞243、P3X63Ag8.653、Sp2 SA3、Sp2 MAI、Sp2 SS1、Sp2 SA5、U937、MLA 144、ACT IV、MOLT4、DA-1、JURKAT、WEHI、 K-562、COS、RAJI、NIH 3T3、HL-60、MLA 144、NAMAIWA、NEURO 2A等，或异源骨髓瘤(细胞系)，它们的融合产物，或它们衍生的任何细 胞或融合细胞，或本领域所知的任何其他合适的细胞系，参见，例如 www.atcc.org、www.lifetech.com等，上述内容在此全文引入作为参考)与 产生Ig衍生蛋白的细胞融合来产生杂交瘤细胞，所述产生Ig衍生蛋白的细 胞例如但不限于分离或克隆的脾细胞，或表达重链或轻链恒定区或可变区或 框架区或CDR序列的任何其他细胞，它们可作为内源或外源核酸，作为重 组或内源的病毒、细菌、藻类、原核的、两栖类的、昆虫的、爬行动物的、 鱼类的、哺乳动物的、啮齿类的、马的、羊的(ovine)、山羊的(goat)、 绵羊的(sheep)、灵长类的、真核的基因组DNA、cDNA、rDNA、线粒体 DNA或RNA、叶绿体DNA或RNA、hnRNA、mRNA、tRNA，单链、双 链或三链的，或杂交的等等，以及它们的混合物。参见，例如Ausubel，见 上文以及Colligan，Immunology，见上文，第2章，上述各文献在此全文引入 作为参考。可从已经用感兴趣抗原免疫接种的人或其他合适动物的外周血或 优选脾或淋巴结中获得产生Ig衍生蛋白的细胞。也可用任何其他合适的宿 主细胞表达编码本发明Ig衍生蛋白、其特定片段或变体的异源或内源核酸。 可用选择性培养条件或其他合适的已知方法分离融合的细胞(杂交瘤细胞) 或重组细胞，并用限制性稀释或细胞分选或其他已知方法来克隆。可用合适 的试验(例如ELISA)选择产生具有所需特异性的Ig衍生蛋白的细胞。
如本领域所知或如本文所述，可用于产生或分离具有所需特异性的的抗 体的其他合适方法包括但不限于，从肽或蛋白质文库(例如但不限于，噬菌 体、核糖体、寡核苷酸、RNA、cDNA等展示文库，例如，可从以下来源获 得：Cambridge antibody Technologies，Cambridgeshire，UK；MorphoSys， Martinsreid/Planegg，DE；Biovation，Aberdeen，Scotland，UK；BioInvent，Lund， Sweden；Dyax Corp.，Enzon，Affymax/Biosite；Xoma，Berkeley，CA；Ixsys。 参见例如EP 368,684，PCT/GB91/01134；PCT/GB92/01755； PCT/GB92/002240；PCT/GB92/00883；PCT/GB93/00605；US 08/350260(5/12/94)；PCT/GB94/01422；PCT/GB94/02662；PCT/GB97/01835； (CAT/MRC)；WO90/14443；WO90/14424；WO90/14430；PCT/US94/1234； WO92/18619；WO96/07754；(Scripps)；WO96/13583，WO97/08320 (MorphoSys)；WO95/16027(BioInvent)；WO88/06630；WO90/3809(Dyax)；US 4,704,692(Enzon)；PCT/US91/02989(Affymax)；WO89/06283；EP 371 998；EP 550 400；(Xoma)；EP 229 046；PCT/US91/07149(Ixsys)；或随机 (stochastically)产生的肽或蛋白-US 5723323，5763192，5814476，5817483， 5824514，5976862，WO 86/05803，EP 590 689(Ixsys，现在是Applied Molecular Evolution(AME)，上述各文献在此全文引入作为参考)选择重组 抗体的方法或依赖于转基因动物免疫接种的方法(例如，SCID小鼠，Nguyen 等，Microbiol.Immunol.41：901-907(1997)；Sandhu等，Crit.Rev.Biotechnol. 16：95-118(1996)；Eren等，Immunol.93：154-161(1998)，上述各文献以及相关 专利和专利申请在此全文引入作为参考)，所述转基因动物能够产生一套 (repertoire)人抗体。这些技术包括但不限于核糖体展示(Hanes等，Proc.Natl. Acad.Sci.USA，94：4937-4942(May 1997)；Hanes等，Proc.Natl.Acad.Sci. USA，95：14130-14135(Nov.1998))；单细胞抗体产生技术(例如，选择淋巴 细胞抗体方法(“SLAM”)(美国专利号5,627,052，Wen等，J.Immunol. 17：887-892(1987)；Babcook等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：7843-7848 (1996))；凝胶微滴和流式细胞术(Powell等，Biotechnol.8：333-337(1990)； 一个细胞系统(One Cell Systems)，Cambridge，MA；Gray等，J.Imm.Meth. 182：155-163(1995)；Kenny等，Bio/Technol.13：787-790(1995))；B-细胞选择 (Steenbakkers等，Molec.Biol.Reports 19：125-134(1994)；Jonak等，Progress Biotech，Vol.5，杂交瘤体外免疫技术(In Vitro Immunization in Hybridoma Technology)，Borrebaeck，主编，Elsevier Science Publishers B.V.，Amsterdam， Netherlands(1988))，上述各文献在此全文引入作为参考。
也可使用人源化非-人Ig衍生蛋白的方法，这些方法是本领域公知的。 一般而言，人源化抗体具有一个或多个从非人来源引入的氨基酸残基。这些 非人氨基酸残基常常称为“输入(import)”残基，其通常来自“输入”可 变结构域。可基本根据Winter及其同事的方法(Jones等，Nature 321：522 (1986)；Riechmann等，Nature 332：323(1988)；Verhoeyen等，Science 239：1534 (1988)，上述各文献在此全文引入作为参考)进行人源化，其中将啮齿类的(一 个或多个)CDR替换为人抗体的相应序列。因此，这种“人源化”Ig衍生 蛋白是嵌合的Ig衍生蛋白(Cabilly等，见上文)，其中基本上少于 (substantially less than)完整的人可变结构域被非人物种的相应序列替代。 实践中，人源化Ig衍生蛋白通常是人Ig衍生蛋白，其中一些CDR残基以 及可能一些FR残基被啮齿类Ig衍生蛋白的类似(analogous)位点替代。
用于制备人源化Ig衍生蛋白的人可变区(轻链和重链)的选择可用于 降低抗原性。根据所谓的“最适”方法，用已知的人可变区序列的整个文库 筛选啮齿动物抗体可变区序列。然后接近于啮齿动物序列的人序列被接受为 人源化抗体的人构架(FR)(Sims等人，J.Immunol.151：2296(1993)；Chothia 和Lesk，J.Mol.Biol.196：901(1987)，各自的全文以引入方式并入本文)。 另一个方法使用源自轻链或重链特定亚基的所有人Ig衍生蛋白的共有序列 的特定构架。相同的构架可以用于一些不同的人源化Ig衍生蛋白(Carter 等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：4285(1992)；Presta等人，J.Immunol. 151：2623(1993)，各自的全文以引用方式并入本文)。
Ig衍生蛋白还可以任选地被人源化，同时保留对抗原的高亲和力和其 它有利的生物学性质。为达到这个目标，根据优选方法，人源化Ig衍生蛋 白通过使用母序列和人源化序列的三维模型来分析母序列和各种概念上的 人源化产物的方法来制备。三维免疫球蛋白模型通常可以得到并且是本领域 的技术人员所熟悉的。可以获得例示并展示所选择的候选免疫球蛋白序列可 能的三维构象结构的计算机程序。这些展示的观察容许分析残基用作候选免 疫球蛋白序列时的可能作用，即，分析影响候选免疫球蛋白与其抗原结合能 力的残基。在这个方面，可以从共同序列和输入序列中选择并组合FR残基 以便达成所期望的性质，如与靶抗原更高的亲和力。一般而言，CDR残基 直接地并且大部分实质上参与影响抗原结合。
人单克隆Ig衍生蛋白可以通过杂交瘤法来制备。用于制备人单克隆Ig 衍生蛋白的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系已经有所描述，例如， Kozbor，J.Immunol.133：3001(1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63页(Marcel Dekker，Inc.， New York，1987)；以及Boerner等人，J.Immunol.147：86(1991)，各自的全 文以引用方式并入本文。
或者，可以使用噬菌体展示技术和上文所示的技术在体外由来自未免疫 供体的免疫球蛋白可变(V)区基因谱系制备人Ig衍生蛋白和抗体片段。根 据此技术的一个非限制性实例，将抗体V结构域基因框内克隆成丝状噬菌 体(如M13或fd)的主要或次要外壳蛋白基因，并且表达成在噬菌体颗粒 表面上的功能性抗体片段。由于丝状颗粒含有噬菌体基因组的单链DNA拷 贝，基于抗体功能性质的选择也会导致选择出编码抑制这些性质的抗体的基 因。因此噬菌体模仿B细胞的一些性质。噬菌体展示可以多种形式进行，参 见关于它们的综述，例如Johnson等人，Current Opinion in Structural Biology 3：564(1993)，其各自的全文以引用方式并入本文。一些V基因片段的来源 可用于噬菌体展示。Clackson等人Nature 352：624(1991)从来自免疫小鼠脾 脏的V基因的小的随机组合文库分离出抗恶唑酮Ig衍生蛋白的多种阵列。 可以构建来自未免疫人供体的V基因谱系并且可以根据下列文献所述的技 术实质上分离针对不同抗原阵列(包括自身抗原)的Ig衍生蛋白：Marks 等人，J.Mol.Biol.222：581(1991)；或Griffith等人，EMBO J.12：725(1993)， 其各自的全文以引用方式并入本文。
在天然免疫反应中，抗体基因高速累积突变(体细胞超突变)。所引入 的一些改变将产生较高的亲和力并且展示高亲和力表面免疫球蛋白的B细 胞优选在随后的抗原激发期间复制和分化。这个天然过程可以通过采用称为 “链改组”的技术来模拟(Marks等人，Bio/Technol.10：779(1992))。在这 个方法中，通过噬菌体展示所获得的“初级”人Ig衍生蛋白的亲和力可以 通过用自未免疫供体获得的V结构域基因的自然产生的变体(谱系)的谱 系来替换重链和轻链V区基因来改善。此技术使得能够在制备亲和力在nM 范围内的Ig衍生蛋白和抗体片段。Waterhouse等人(Nucl.Acids Res.21：2265 (1993))已经描述了制备极大的噬菌体抗体谱系的策略。基因改组(gene shuffling)也可用于从鼠Ig衍生蛋白产生人Ig衍生蛋白，其中人抗体具有 与起始的鼠抗体类似的亲和力和特异性。根据此方法(也称为“抗原决定簇 印迹”)用人V结构域基因谱系替代通过噬菌体展示技术获得的鼠Ig衍生 蛋白的重链或轻链V结构域基因，从而产生鼠-人嵌合体。抗原选择导致能 够恢复功能性抗原结合位点的人可变区的分离，即，抗原决定簇决定(印迹) 配对物的选择。当重复此过程以替代剩余的鼠V结构域时，获得人抗体(参 见PCT WO 93/06213，1993年4月1日公开)。与通过CDR移植的鼠Ig 衍生蛋白的传统人源化不同，此技术提供完全的人Ig衍生蛋白，该蛋白不 具有鼠源构架或CDR残基。
也可以使用单克隆的双特异性Ig衍生蛋白，优选具有至少两个不同抗 原结合特异性的人或人源化Ig衍生蛋白。在本发明的情况下，一个结合特 异性是对于至少一种IL-4或IL-3蛋白的，另一个是针对任何其它抗原的。 举例来说，特异性结合IL-4或IL-13蛋白和至少一个神经营养因子、或两种 不同类型的IL-4或IL-13多肽的双特异性Ig衍生蛋白属于本发明的范围内。
用于制备双特异性Ig衍生蛋白的方法在本领域内是已知的。传统上， 双特异性Ig衍生蛋白的重组产物基于两种免疫球蛋白重链-轻链对的共表 达，其中两个重链具有不同的特异性(Milstein和Cuello，Nature 305：537 (1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分类，这些杂交瘤(四体杂交 瘤(quadromas))产生10种不同抗体分子的可能混合物，其中只有一种具有 正确的双特异性结构。正确分子的纯化(通常通过亲和层析步骤进行)相当 麻烦，并且产率很低。类似的工序公开于1993年5月13日公布的WO 93/08829和Traunecker等人，EMBO J.10：3655(1991)中，其全文以引用方 式并入本文。
根据不同的且更优选的方法，具有期望的结合特异性(抗体-抗原结合 位点)的抗体可变区与免疫球蛋白恒定区序列融合。融合体优选具有免疫球 蛋白重链恒定区，包含至少部分铰链区、第二重链恒定区(C.sub.H 2)和第 三重链恒定区(C.sub.H 3)。优选含有轻链结合所必需的位点的第一重链恒 定区(C.sub.H 1))存在于至少一个融合体中。将编码免疫球蛋白重链融合 体和(如果期望)免疫球蛋白轻链的DNA插入不同的表达载体并且共转染 到适宜的宿主有机体。在构建体中使用不等比例的三种多肽链提供最佳产率 的实施方案中，这能够在调节三种多肽片段的相互比例中提供很大的适应 性。然而，当至少等比例两条多肽链能产生高产率或者当比例没有特别意义 时，可能在一个表达载体中插入两条或三条多肽链的编码序列。在此方法的 优选实施方案中，双特异性Ig衍生蛋由在一臂中具有第一结合特异性的杂 交免疫球蛋白重链和在另一臂中的杂交免疫球蛋白轻链-重链对(提供第二 结合特异性)构成。这种不对称结构有利于从不希望的免疫球蛋白混合物中 分离期望的双特异性化合物，因为免疫球蛋白轻链只存在于在一半的双特异 性分子中，这提供了容易的分离方法。对于产生双特异性Ig衍生蛋白的进 一步细节，参见，例如Suresh等人，Methods in Enzymology 121：210(1986)。
异源耦联Ig衍生蛋白也属于本发明的范围内。异源耦联Ig衍生蛋白由 两个共价连接的Ig衍生蛋白构成。推测这种Ig衍生蛋白能(例如)使免疫 系统的细胞靶向不需要的细胞(美国专利No.4,676,980)并且用于治疗HIV 感染(WO 91/00360；WO 92/00373；和EP 03089)。异源耦联Ig衍生蛋白 可以使用任何方便的交联法制备。本领域内所熟知的适宜交联剂公开于美国 专利No.4,676,980中，其中还有一些交联技术。
在优选的实施方案中，至少一种本发明的抗IL-4或IL-13Ig衍生蛋白或 特定部分或变体由细胞系、混合细胞系、永生化细胞或永生化细胞的克隆群 产生。永生化产IL-4或IL-3的细胞可以使用合适的方法制备，例如经由爱 波斯坦巴尔病毒(Epstein Barr virus)感染融合人Ig衍生产蛋白细胞和异源 骨髓瘤或永生化的活化人B细胞(Niedbala等人，Hybridoma，17(3)：299-304 (1998)；Zanella等人，J Immunol Methods，156(2)：205-215(1992)；Gustafsson 等人，Hum Ig derived proteins Hybridomas，2(1)26-32(1991))。优选地，人 抗人IL-4或IL-13蛋白或片段或特定部分或变体通过免疫能够产生人Ig衍 生蛋白谱系的转基因动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、非人灵长类等)产生， 如本文所述和/或本领域所已知。产生人抗IL-4或IL-13Ig衍生蛋白的细胞 可以从此类动物分离并使用合适的方法永生化，如本文所述的方法。
可产生结合人抗原的人Ig衍生蛋白谱系的转基因小鼠可以通过已知的 方法制备(例如，但不限于授予Lonberg等人的美国专利No：5,770,428、 5,569,825、5,545,806、5,625,126、5,625,825、5,633,425、5,661,016和5,789,650； Jakobovits等人WO 98/50433；Jakobovits等人WO 98/24893；Lonberg等人 WO 98/24884；Lonberg等人WO 97/13852；Lonberg等人WO 94/25585； Kucherlapate等人WO 96/34096；Kucherlapate等人EP 0463 151 B1； Kucherlapate等人EP 0710 719 A1；Surani等人美国专利No.5,545,807； Bruggemann等人WO 90/04036；Bruggemann等人EP 0438 474 B1；Lonberg 等人EP 0814 259 A2；Lonberg等人GB 2 272 440 A；Lonberg等人Nature 368：856-859(1994)；Taylor等人Int.Immunol.6(4)579-591(1994)；Green 等人Nature Genetics 7：13-21(1994)；Mendez等人Nature Genetics 15：146-156 (1997)；Taylor等人Nucleic Acids Research 20(23)：6287-6295(1992)； Tuaillon等人Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724(1993)；Lonberg等人 Int Rev Immunol 13(1)：65-93(1995)和Fishwald等人Nat Biotechnol 14(7)：845-851(1996)；其各自的全文以引用方式并入本文)。一般而言，这 些小鼠含有至少一个包含来自功能上重排的或可以进行功能重排的至少一 个人免疫球蛋白位点的转基因。可以破坏或去除这种小鼠中的内源免疫球蛋 白位点以消除动物产生内源基因编码Ig衍生蛋白的能力。
本文所用的术语“功能上重排”是指来自免疫球蛋白位点的DNA片段 进行V(D)J重组，从而产生编码免疫球蛋白链(例如，重链、轻链)或其任 何部分的免疫球蛋白基因。功能上重排的免疫球蛋白基因可以使用合适的方 法直接或间接鉴别，例如，核酸测序、杂交(如，Southern印迹、Northern 印迹)，该杂交使用可以退火以编码基因片段间接合的探针或用可以退火以 编码基因片段间接合的引物酶扩增免疫球蛋白基因(例如聚合酶链式反应)。 细胞是否产生可包含特定可变区或含有特定序列(例如，至少一个CDR序 列)的可变区的Ig衍生蛋白也可以使用适宜的方法来测定。在一个实施例 中，mRNA可以自Ig衍生产蛋白细胞(例如，杂交瘤或重组细胞或其它适 宜来源)分离并用于产生编码Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的cDNA。 cDNA可以克隆和测序或可以扩增(例如，通过聚合酶链式反应或其它已知 的或适宜的方法)，该扩增使用对感兴趣的可变区部分(例如，CDR，编码 接合位点(coding joint))特异性退火的第一引物和对非可变区序列(例如， CH1，VH)特异性退火的第二引物。
可以通过肽展示文库，方便地筛选与相似蛋白或片段特异性结合的抗 体。该方法包括筛选大量肽中具有所需功能或结构的各个成员。肽展示文库 的抗体筛选是本领域公知的。展示的肽序列长度可以为3-5000或更多氨基 酸，通常长度为5-100个氨基酸，一般长度为约8-25个氨基酸。除了产 生肽文库的直接化学合成方法以外，已经描述了一些重组DNA法。一种类 型包括在噬菌体或细胞的表面展示肽序列。每种噬菌体或细胞含有具体展示 的肽序列的编码核苷酸序列。这些方法描述于PCT专利公开91/17271， 91/18980，91/19818和93/08278。用于产生肽文库的其它系统同时具有体外 化学合成和重组方法的两个方面。见PCT专利公开92/05258，92/14843和 96/19256。也见美国专利5,658,754和5,643,768。肽展示文库、载体和筛选 试剂盒可以从Invitrogen(Carlsbad，CA)和Cambridge antibody Technologies (Cambridgeshire，UK)等供应商购得。见，例如Enzon的美国专利4704692， 4939666，4946778，5260203，5455030，5518889，5534621，5656730，5763733， 5767260，5856456；Dyax的美国专利5223409，5403484，5571698，5837500； Affymax的美国专利5427908，5580717；Cambridge antibody Technologies的 美国专利5885793；Genentech的美国专利5750373；Xoma的美国专利 5618920，5595898，5576195，5698435，5693493，5698417；Colligan，同上； Ausubel，同上；Sambrook，同上，在此全文引入上述每个专利和出版物作 为参考。
也可以使用编码至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或 变体的核酸提供转基因动物或哺乳动物，从而制备本发明的Ig衍生蛋白、 其特定部分或变体，所述动物如山羊、牛、马、绵羊等，它们在其乳汁中产 生这些Ig衍生蛋白、其特定部分或变体。这些动物可以通过已知的方法提 供，见，例如，但不限于美国专利5,827,690；5,849,992；4,873,316；5,849,992； 5,994,616；5,565,362；5,304,489，等，在此全文引入作为参考。
还可以使用编码至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或 变体的核酸提供在植物部分或由其培养的细胞中产生所述Ig衍生蛋白或其 特定部分或变体的转基因植物和培养的植物细胞(例如，但不限于烟草和玉 米)，从而制备本发明的Ig衍生蛋白、其特定部分或变体。作为非限制性 的实例，已经成功使用表达重组蛋白的烟叶提供大量重组蛋白，如，使用诱 导型启动子。见，例如，Cramer等，Curr.Top.Microbol.Immunol.240：95-118 (1999)及其中引用的文献。同样，已经采用转基因玉米以商业生产水平表达 哺乳动物蛋白，其生物活性等于在其它重组系统产生或从天然来源纯化的蛋 白。见，例如Hood等，Adv.Exp.Med.Biol.464：127-147(1999)及其中引 用的文献。也已经从转基因植物种子，包括烟草种子和马铃薯块根中大量产 生了Ig衍生蛋白，包括Ig衍生蛋白片段，例如单链Ig衍生蛋白(scFv′s)。见， 例如Conrad等，Plant Mol.Biol.38：101109(1998)及其中引用的文献。这 样，也可以根据已知方法采用转基因植物产生本发明的抗体。也见Fischer等， Biotechnol.Appl.Biochem.30：99-108(Oct.，1999)，Ma等，Trends Biotechnol. 13：522-7(1995)；Ma等，Plant Physiol.109：341-6(1995)；Whitelam等， Biochem.Soc.Trans.22：940-944(1994)；及其中引用的文献。在此全文引用 上述每一篇文献作为参考。
本发明的抗体可以以宽范围的亲和性(KD)结合人IL-4或IL-13蛋白或片 段。在一种优选的实施方案中，本发明的至少一种人抗体可以任选地以高亲 和性结合人IL-4或IL-13蛋白或片段。例如，人抗体可以与人IL-4或IL-13 蛋白或片段结合，其KD等于或小于约10-9M，或更优选，KD等于或小于约 0.10-9.99(或其中的任意范围或任意值)×10-8、10-9、10-10、10-11、10-12、 10-13、10-14、10-15或其中的任意范围或任意值。
Ig衍生蛋白与抗原的亲和性或亲和力可以采用适当的方法进行实验测 定。(见，例如，Berzofsky等，“Ig derived protein-Antigen Interactions，”收 编于Fundamental Immunology，Paul，W.E.，主编，Raven Press：New York， NY(1984)；Kuby，Janis Immunology，W.H.Freeman and Company：New York， NY(1992)；及本文描述的方法)。如果在不同的条件(如盐浓度、pH)下测 定，所测定的特定抗体-抗原相互作用的亲和性可以不同。因此，优选地用 Ig衍生蛋白和抗原标准溶液、标准缓冲液例如本文描述的缓冲液，测量亲和 性和其它抗原结合参数(例如KD、Ka、Kd)。
核酸分子
采用本文提供的信息，如编码本发明的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白、 其特定片段、变体或共有序列的至少一种的至少90-100％连续氨基酸的核 苷酸序列，或包含这些序列中的至少一种的保藏载体，可以根据本文描述或 本领域公知的方法获得编码至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定 部分或变体的本发明的核酸分子。
本发明的核酸分子可以是RNA形式，例如mRNA，hnRNA，tRNA或任 意其它形式，或可以是DNA形式，包括，但不限于通过克隆或合成产生， 或其任意组合而产生的cDNA和基因组DNA。DNA可以是三链、双链或单 链，或其任意组合。DNA或RNA的至少一条链的任意部分可以是编码链， 也称作有义链，或可以是非编码链，也称作反义链。
本发明的分离核酸分子可以包括含有开放读码框(ORF)的核酸分子，任 选地，具有一种或多种内含子，例如，但不限于分别至少一种重链或轻链的 至少一种CDR如CDR1、CDR2和/或CDR3的至少一个特定部分；包含IL-4 或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的编码序列的核酸分子；以及包 含基本不同于上述那些的核苷酸序列的核酸分子，但由于遗传密码简并性， 它们仍然编码本文描述和/或本领域公知的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生 蛋白。当然，遗传密码是本领域公知的。因此，本领域技术人员制备这种编 码本发明的特异性IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的简并 核酸变体是常规的。见，例如，Ausubel等，同上，这些核酸变体包括在本发 明中。
如本文指出的，包含编码IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或 变体的核酸的本发明核酸分子可以包括，但不限于自身编码Ig衍生蛋白片 段的氨基酸序列的核酸；完整Ig衍生蛋白或其部分的编码序列；Ig衍生蛋 白、片段或部分的编码序列，以及其它的序列，例如至少一种信号前导肽或 融合肽的编码序列，它具有或不具有前面提到的其它编码序列，如至少一种 内含子，同时具有其它的非编码序列，包括，但不限于非编码5’和3’序列， 如在转录、mRNA加工，包括剪接和聚腺苷酸化信号中起作用(例如mRNA 的核糖体结合和稳定性)的转录的、未翻译的序列；编码其它氨基酸，如提 供其它功能的氨基酸的其它序列。因此，编码Ig衍生蛋白或特定部分或变 体的序列可以与标记序列融合，例如与肽的编码序列融合，所述肽促进包含 Ig衍生蛋白片段或部分的融合Ig衍生蛋白或特定部分或变体的纯化。
选择性地与本文描述的多核苷酸杂交的多核苷酸
本发明提供了在选择性杂交条件下与编码本发明的IL-4或IL-13的Ig 衍生蛋白的多核苷酸杂交的分离核酸。因此，该实施方案中的多核苷酸可以 用于分离、检测和/或定量包含所述多核苷酸的核酸。例如，本发明的多核 苷酸可以用于在保藏的文库中鉴定、分离或扩增部分或全长克隆。在一些实 施方案中，多核苷酸是分离的基因组或cDNA序列，或者互补于来自于人或 哺乳动物核酸文库的cDNA。
优选地，cDNA文库包含全长序列的至少80％，优选地包含全长序列的 至少85％或90％，更优选地包含全长序列的至少95％。可以对cDNA文库 进行标准化，以增加稀有序列的代表性。低或中度严格杂交条件一般、但不 是专门用于相对于互补序列的序列同一性较低的序列。中度和高度严格性条 件任选地用于具有更高同一性的序列。低严格性杂交条件允许具有约70％的 序列同一性的序列的选择性杂交，并且可以用于鉴定直系(orthologous)同 源序列或旁系(paralogous)同源序列。
本发明的多核苷酸任选地编码由本文描述的多核苷酸编码的Ig衍生蛋 白或其特定部分或变体的至少一部分。本发明的多核苷酸包括可以用于与编 码本发明的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的多核苷酸选择性杂交的核酸 序列。见，例如Ausubel，同上；Colligan，同上，在此全文引入作为参考。
核酸的构建
使用本领域公知的(a)重组方法，(b)合成技术，(c)纯化技术，或它们的 组合，可以制备本发明的分离核酸。
核酸可以方便地包含除本发明的多核苷酸以外的序列。例如，可以将包 含一个或多个内切核酸酶限制位点的多克隆位点插入核酸，以帮助多核苷酸 的分离。也可以插入可翻译的序列，以帮助本发明的被翻译的多核苷酸的分 离。例如，一种六组氨酸标记序列提供了纯化本发明的蛋白的方便方法。除 编码序列外，本发明的核酸任选地为用于克隆和/或表达本发明的多核苷酸 的载体、连接物(adapter)或接头(linker)。
在这种克隆和/或表达序列中也可以加入其它序列，用于优化它们在克 隆和/或表达中的功能，用于帮助多核苷酸的分离，或用于改进多核苷酸向 细胞中的导入。克隆载体、表达载体、连接物和接头的用途是本领域中公知 的(参见，例如，Ausubel，同上；或Sambrook，同上)。
构建核酸的重组方法
本发明的分离核酸组合物，如RNA，cDNA，基因组DNA或其任意组 合可以用本领域技术人员公知的任何克隆方法从生物来源中获得。在一些实 施方案中，在严格条件下选择性与本发明的多核苷酸杂交的寡核苷酸探针被 用于鉴定cDNA或基因组DNA文库中的所需序列。RNA的分离和cDNA以 及基因组文库的构建是本领域普通技术人员所公知的。(见，例如Ausubel， 同上；或Sambrook，同上)。
核酸筛选和分离方法
可以采用基于本发明的多核苷酸序列的探针筛选cDNA或基因组文库， 本文所公开。可以用探针与基因组DNA或cDNA序列杂交，以分离相同或 不同生物体中的同源基因。本领域技术人员将理解，在测定中可以使用不同 严格性程度的杂交，杂交或洗涤介质中的任意一个都可以是严格的。当杂交 条件更严格时，探针和靶序列之间的互补性必须更高，这样才能形成双链体。 严格性程度可以由温度、离子强度、pH和甲酰胺等部分变性溶剂的存在中 的一个或多个条件进行控制。例如，杂交的严格性可以通过改变反应物溶液 的极性而方便地改变，反应物溶液的极性可以通过例如在0％-50％的范围 内操作甲酰胺的浓度而改变。可检测的结合所要求的互补性程度(序列同一 性)将根据杂交介质和/或洗涤介质的严格性而改变。互补性程度最佳为 100％或90-100％，或其中的任意范围或任意值。然而，应该理解，探针和 引物中的小量序列变异可以通过减少杂交和/或洗涤介质的严格性而补偿。
扩增RNA或DNA的方法是本领域公知的，可以根据本文的教导和指 导用于本发明，而不需要过多的实验。
已知的扩增RNA或DNA的方法包括，但不限于聚合酶链式反应(PCR) 和相关的扩增方法(见，例如，Mullis等的美国专利4,683,195，4,683,202， 4,800,159，4,965,188；Tabor等的4,795,699和4,921,794；Innis的5,142,033； Wilson等的5,122,464；Innis的5,091,310；Gyllensten等的5,066,584；Gelfand 等的4,889,818；Silver等的4,994,370；Biswas的4,766,067；Ringold的 4,656,134)和RNA介导的扩增，该扩增中使用靶序列的反义RNA作为模板 用于双链DNA合成(Malek等的美国专利5,130,238，商品名为NASBA)， 在此全文引入所有参考文献作为参考。(见，例如Ausubel，同上；或 Sambrook，同上。)
例如，可以用聚合酶链式反应(PCR)技术从基因组DNA或cDNA文库 直接扩增本发明的多核苷酸序列和相关基因。也可以用PCR和其它体外扩 增方法克隆需要表达的蛋白的编码核酸序列，制备用于检测样品中是否存在 所需mRNA的探针，对核酸测序，或其它目的。足够指导技术人员使用体 外扩增方法的技术的例子见，Berger，同上，Sambrook，同上，和Ausubel，同 上，以及Mullis等的美国专利4,683,202(1987)；以及Innis等，PCR Protocols A Guide to Methods and Applications，Eds.，Academic Press Inc.，San Diego， CA(1990)。用于基因组PCR扩增的商品化试剂盒是本领域已知的。见，例 如，Advantage-GC基因组PCR试剂盒(Clontech)。T4基因32蛋白(Boehringer Mannheim)可以用于改进长PCR产物的产率。
构建核酸的合成方法
本发明的分离核酸也可以根据已知方法通过直接化学合成而制备(见， 例如Ausubel等，同上)。化学合成一般产生单链核苷酸，该单链核苷酸可 以通过与互补序列杂交或通过用单链作为模板，采用DNA聚合酶进行聚合 而转化为双链DNA。本领域技术人员了解，尽管DNA的化学合成可以限制 在约100或更多碱基的序列，也可以通过较短序列的连接获得较长的序列。
重组表达盒
本发明进一步提供了包含本发明的核酸的重组表达盒。本发明的核酸序 列，例如，编码本发明的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的cDNA或基因 组序列可以用于构建重组表达盒，该表达盒可以被导入至少一种需要的宿主 细胞。重组表达盒一般包含本发明的多核苷酸，该多核苷酸可操作性连接于 指导多核苷酸在目的宿主中转录的转录起始调节序列。异源性和非异源性 (即内源性)启动子可以用于指导本发明的核酸分子的表达。
在一些实施方案中，作为启动子、增强子或其它元件的分离核酸可以导 入本发明的多核苷酸的非异源形式中的适当位置(位于内含子上游、下游或 内部)，以便上调或下调本发明的多核苷酸的表达。例如，可以通过突变、 去除和/或取代而体内或体外改变内源性启动子。
根据需要，本发明的多核苷酸可以正义或反义方向表达。应理解，控制 基因以正义或反义方向表达可直接影响所观察到的特性。
另一种抑制方法是正义(sense)抑制。已证明引入设定为正义方向的核 酸可有效阻断靶基因的转录。
可使用多种交联剂、烷化剂和在本发明多核苷酸上产生侧链基团的物质 (radical generating species as pendant groups on polynucleotides of the present invention)来结合、标记、检测和/或断裂核酸。Knorre等，Biochimie 67：785-789 (1985)；Vlassov，等，Nucleic Acids Res.14：4065-4076(1986)；Iverson和Dervan，J. Am.Chem.Soc.109：1241-1243(1987)；Meyer等，J.Am.Chem.Soc. 111：8517-8519(1989)；Lee等，Biochemistry 27：3197-3203(1988)；Home等，J.Am. Chem.Soc.112：2435-2437(1990)；Webb和Matteucci，J.Am.Chem.Soc. 108：2764-2765(1986)；Nucleic Acids Res.14：7661-7674(1986)；Feteritz等，J.Am. Chem.Soc.113：4000(1991)。本领域已知多种可结合、检测、标记、和/或断裂核 酸的化合物。见例如，美国专利5,543,507；5,672,593；5,484,908；5,256,648；和 5,681941，上述各文献的全文以引用方式纳入本文。
载体和宿主细胞
本发明也涉及包含本发明的分离核酸分子的载体，用重组载体基因工程 化的宿主细胞，以及通过本领域公知的重组技术产生至少一种IL-4或IL-13 的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体。见，例如，Sambrook等，同上；Ausubel 等，同上，在此全文引入作为参考。
多核苷酸可以任选地与含有可选择标记的载体连接，用于在宿主中增 殖。一般地，将质粒载体导入一种沉淀物，例如磷酸钙沉淀，或导入具有带 电脂质的复合物。如果载体是病毒，可以用适当的包装细胞系将其包装后转 导至宿主细胞。
DNA插入物可以操作性与适当启动子连接。表达构建体进一步包含转 录起始位点、转录终止位点和转录区中的位点，以及用于翻译的核糖体结合 位点。由构建体表达的天然转录物的编码部分将优选地包含位于起始处的翻 译起始密码子和位于被翻译的mRNA末端适当位置的终止密码子(如UAA， UGA或UAG)，哺乳动物或真核细胞表达优选地采用UAA和UAG。
表达载体优选地但任选地包含至少一种可选择标记。这些标记包括，例 如，但不限于真核细胞培养物的氨甲蝶呤(MTX)、二氢叶酸还原酶(DHFR，美 国专利4,399,216；4,634,665；4,656,134；4,956,288；5,149,636；5,179,017)、氨 苄青霉素、新霉素(G418)、霉酚酸或谷氨酰胺合成酶(GS，美国专利5,122,464； 5,770,359；5,827,739)抗性基因，以及大肠杆菌和其它细菌或原核生物的四 环素或氨苄青霉素抗性基因(上述专利在此全文引入作为参考)。上述宿主 细胞的适当培养基和培养条件是本领域公知的。适当的载体是本领域技术人 员容易理解的。可以通过磷酸钙转染、DEAE-右旋糖苷介导的转染、阴离子 脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染或其它已知方法将载体构建体导入宿 主细胞。这些方法在本领域有描述，例如Sambrook，同上，1-4和16-18 章；Ausubel，同上，1、9、13、15、16章。
本发明的至少一种Ig衍生蛋白或其特定部分或变体可以以修饰的形式， 例如以融合蛋白的形式表达，并且可以包括分泌信号和其它异源功能区。例 如，其它的氨基酸区域，特别是带电氨基酸区域可以添加至Ig衍生蛋白或 其特定部分或变体的N端以改进纯化或随后的加工和储存过程中在宿主中 的稳定性和耐受性。也可以将肽部分添加至本发明的Ig衍生蛋白或其特定 部分或变体，以促进纯化。这些区域可以在Ig衍生蛋白或其至少一个片段 的最终制备之前去除。这些方法描述于许多实验室手册，例如Sambrook，同 上，17.29-17.42和18.1-18.74章；Ausubel，同上，16、17和18章。
本领域普通技术人员了解，许多表达系统都可以用于表达编码本发明的 蛋白的核酸。
或者，本发明的核酸可以通过在包含编码本发明的Ig衍生蛋白或其特 定部分或变体的内源性DNA的宿主细胞中打开(turning on)(通过操作) 而在宿主细胞中表达。这些方法是本领域公知的，如描述于美国专利 5,580,734，5,641,670，5,733,746和5,733,761，在此引入每一篇专利作为参考。
用于产生Ig衍生蛋白、其特定部分或变体的示例性的细胞培养物为哺 乳动物细胞。哺乳动物细胞系统一般是单层细胞的形式，但也可以使用哺乳 动物细胞悬浮液或生物反应器。本领域中已经开发了许多能够表达完整糖基 化蛋白的适当宿主细胞系，包括COS-1(如ATCC CRL 1650)，COS-7(如 ATCC CRL1651)，HEK293，BHK21(如ATCC CRL-10)，CHO(如ATCC CRL 1610)和BSC-1(如ATCC CRL-26)细胞系，Cos-7细胞，CHO细胞，hep G2 细胞，P3X63Ag8.653，SP2/0-Ag14，293细胞，HeLa细胞等，它们可以容易从 例如美国典型培养物保藏中心Manassas，Va获得。特别优选的宿主细胞是 P3X63Ag8.653细胞(ATCC保藏号CRL-1580)和SP2/0-Ag14细胞(ATCC 保藏号CRL-1851)。在一种特别优选的实施方案中，重组细胞是 P3X63Ab8.653或SP2/0-Ag14细胞。
这些细胞的表达载体可以包含一种或多种以下表达控制序列，例如，但 不限于复制起点；启动子(如晚期或早期SV40启动子，CMV启动子(美 国专利5,168,062；5,385,839)、HSV tk、PGK(磷酸甘油酯激酶)启动子、 EF-1α启动子(美国专利5,266,491)、至少一种人类免疫球蛋白启动子)； 增强子和/或加工信号位点，例如核糖体结合位点，RNA剪接位点、聚腺苷 酸化位点(如SV40大T Ag聚腺苷酸添加位点)和转录终止子序列。见， 例如Ausubel等，同上；Sambrook等，同上。其它用于产生本发明的核酸或 蛋白的细胞是已知的和/或可得到的，例如从美国典型培养物保藏中心细胞 系和杂交瘤目录(www.atcc.org)或商业来源得到。
当使用真核宿主细胞时，一般将聚腺苷酸化或转录终止子序列掺入载 体。终止子序列的一个例子是来自于牛生长激素基因的聚腺苷酸化序列。也 可以包括用于准确剪接转录物的序列。剪接序列的一个例子是SV40的VP1 内含子(Sprague等，J.Virol.45：773-781(1983))。此外，用于控制宿主细胞中 复制的基因序列可以掺入本领域公知的载体中。
Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的纯化
可以通过公知的方法从重组细胞培养物中回收并纯化IL-4或IL-13的Ig 衍生蛋白或其特定部分或变体，所述方法包括，但不限于，蛋白A纯化、 硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阴离子交换层析、磷酸纤维素层析、 疏水相互作用层析、亲和层析、羟基磷灰石层析和凝集素层析。也可以采用 高效液相层析(″HPLC″)进行纯化。见，例如，Colligan，Current Protocols in Immunology，或Current Protocols in Protein Science，John Wiley & Sons，NY， NY，(1997-2006)，例如1、4、6、8、9、10章，在此全文引入作为参考。
本发明的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体包括天然纯化产物，化学合 成程序产物，以及通过重组技术从酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞等 真核宿主产生的产物。根据在重组体产生程序中使用的宿主，本发明的Ig 衍生蛋白或其特定部分或变体可以被糖基化或可以未糖基化，优选地被糖基 化。这些方法描述于许多实验室手册，例如Sambrook，同上，17.37-17.42 部分；Ausubel，同上，10、12、13、16、18和20章；Colligan，Protein Science， 同上，12-14章，在此全文引入所有这些文献作为参考。
IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白、片段和/或变体
本发明的分离的Ig衍生蛋白包含由本文详细描述的任一本发明多核苷 酸编码的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体，或任何分离的或制备的Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体。
优选地，人Ig衍生蛋白或抗原-结合片段结合人IL-4或IL-13蛋白或片 段，并因此基本上中和该蛋白的生物活性。能部分地或优选基本上中和至少 一种IL-4或IL-13蛋白或其片段的至少一种生物活性的Ig衍生蛋白或其特 定部分或变体，可以结合该蛋白或片段，从而抑制由IL-4或IL-13与至少一 种IL-4或IL-13受体的结合介导的活性或由其它IL-4或IL-13依赖性或介导 的机制介导的活性。本文用到的术语“中和Ig衍生蛋白”是指根据所采用 的测定，可以抑制约20-120％，优选地至少约60、70、80、90、91、92、 93、94、95、96、97、98、99、100％或更高的人p40或p19蛋白或片段相 关-依赖性活性的Ig衍生蛋白。抗-人IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定 部分或变体抑制人IL-4或IL-13相关-依赖性活性的能力优选地通过至少一 种适当的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或蛋白测定方法进行评估，如本文描 述的和/或本领域公知的。本发明的人Ig衍生蛋白或其特定部分或变体可以 是任意类型(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD等)或亚型(例如IgA1、IgA2、IgG1、 IgG2、IgG3、IgG4等)或同种型，可以包含κ或λ轻链。在一种实施方案 中，人Ig衍生蛋白或其特定部分或变体包含IgG重链或限定的片段，例如， 同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的至少一种。这种类型的Ig衍生蛋白 可以通过使用含有至少一种人轻链(如IgG、IgA和IgM(例如γ1、γ2、 γ3、γ4))转基因的转基因小鼠或其它转基因非人哺乳动物制备，如本文 描述的和/或本领域所公知。在另一种实施方案中，IL-4或IL-13的Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体包含IgG1重链和IgG1轻链。
本发明的至少一种Ig衍生蛋白或其特定部分或变体结合至少一个特定 表位，所述表位对至少一种IL-4或IL-13蛋白、其亚基、片段、部分或其任 意组合是特异性的。所述至少一个表位可包含至少一个Ig衍生蛋白结合区， 该区包含所述蛋白的至少一部分，该表位优选地由所述蛋白的至少一个细胞 外、可溶性、亲水性、外部或细胞质部分组成。作为非限制性例子，(a) IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体特异性结合至少一种表位， 所述表位包含选自人IL-4或IL-13的至少一个亚基的至少1-3个至全部氨基 酸序列。所述至少一种特定表位可以包含人IL-4或IL-13的亚基的至少1个 氨基酸的任意组合，例如但不限于，SEQ ID NO：42、43或44的1-10、10-20、 20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、 120-130、130-140、140-145(位氨基酸)中至少1个的1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸。
本发明的人Ig衍生蛋白或抗原结合片段一般包含抗原结合区，该区包 含至少一个重链可变区的至少一个人互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)或 变体、和至少一个轻链可变区的至少一个人互补决定区(CDR1、CDR2和 CDR3)或变体。作为非限制性的实例，Ig衍生蛋白或抗原结合部分或变体可 以包含重链CDR3和/或轻链CDR3中的至少一个。在一种特定的实施方案 中，Ig衍生蛋白或抗原结合片段可以具有抗原结合区，该区包含至少一个重 链CDR(即CDR1、CDR2和/或CDR3)的至少一部分，所述重链CDR具 有相应CDR1、CDR2和/或CDR3的氨基酸序列。在另一种特定实施方案中， Ig衍生蛋白或抗原结合部分或变体可以具有抗原结合区，该区包含具有相应 CDR1、CDR2和/或CDR3的氨基酸序列的至少一个轻链CDR(即CDR1、 CDR2和/或CDR3)的至少一部分。
可以如下制备这样的Ig衍生蛋白：通过使用常规技术将Ig衍生蛋白的 不同部分(例如，CDR，构架区)化学连接到一起，通过使用重组DNA技术的 常规技术制备和表达(即一个或多个)编码该Ig衍生蛋白的核酸分子，或通 过使用任何其它合适的方法。
抗-IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白可以包含至少一种具有确定氨基酸序列 的重链或轻链可变区。例如，在一种优选的实施方案中，IL-4或IL-13的Ig 衍生蛋白包含至少一种重链可变区和/或至少一种轻链可变区中的至少一 种。结合于人IL-4或IL-13蛋白或片段并包含确定的重链或轻链可变区的人 Ig衍生蛋白可以用适当方法制备，例如噬菌体展示(Katsube，Y.等，Int J Mol. Med，1(5)：863-868(1998))或使用转基因动物的方法，如本领域所公知和/ 或本文所描述。例如，可以用人IL-4或IL-13蛋白或其片段免疫转基因小鼠 以诱导Ig衍生蛋白的产生，该转基因小鼠包含功能性重排的人免疫球蛋白 重链转基因和包含来源于能够进行功能性重排的人免疫球蛋白轻链基因座 的转基因。如果需要，可以采用本文描述的和/或本领域公知的方法分离Ig 衍生蛋白产生细胞以及制备杂交瘤或其它永生化的Ig衍生蛋白产生细胞。 或者，可以在适当宿主细胞中用其编码核酸或其部分表达Ig衍生蛋白、其 特定部分或变体。
本发明也涉及包含与本文描述的氨基酸序列基本相同的氨基酸序列的 Ig衍生蛋白、抗原结合片段、免疫球蛋白链和CDR。优选地，这些Ig衍生 蛋白或抗原结合片段和包含所述链或CDR的Ig衍生蛋白可以以高亲和性 (如KD小于或等于约10-9M)与人IL-4或IL-13蛋白或片段结合。与本文 描述的序列基本相同的氨基酸序列包括含有保守氨基酸取代和氨基酸去除 和/或插入的序列。保守氨基酸取代是指，用具有与第一种氨基酸相似的化 学和/或物理特性(如电荷、结构、极性、疏水性/亲水性)的第二种氨基酸 代替第一种氨基酸。保守氨基酸取代包括用下列各组中的一种氨基酸代替另 一种氨基酸：赖氨酸(K)、精氨酸(R)和组氨酸(H)；天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)； 天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q)，丝氨酸(S)，苏氨酸(T)，酪氨酸(Y)，K，R，H，D 和E；丙氨酸(A)，缬氨酸(V)，亮氨酸(L)，异亮氨酸(I)，脯氨酸(P)，苯丙氨酸 (F)，色氨酸(W)，甲硫氨酸(M)，半胱氨酸(C)和甘氨酸(G)F，W和Y；C，S和 T。
氨基酸代码
组成本发明的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的氨基 酸通常以缩写表示。可以通过单字母代码、三字母代码、名称或三核苷酸密 码子表示氨基酸，这是本领域公知的(参见Alberts，B.等，Molecular Biology of The Cell，第三版，Garland Publishing，Inc.，New York，1994)：
  单字母代码   三字母代码   名称   三核苷酸密码子   A   Ala   丙氨酸   GCA，GCC，GCG，GCU   C   Cys   半胱氨酸   UGC，UGU   D   Asp   天冬氨酸   GAC，GAU   E   Glu   谷氨酸   GAA，GAG   F   Phe   苯丙氨酸   UUC，UUU   G   Gly   谷氨酸   GGA，GGC，GGG，GGU   H   His   组氨酸   CAC，CAU   I   Ile   异亮氨酸   AUA，AUC，AUU   K   Lys   赖氨酸   AAA，AAG   L   Leu   亮氨酸   UUA，UUG，CUA，CUC，   CUG，CUU   M   Met   甲硫氨酸   AUG   N   Asn   天冬酰胺   AAC，AAU   P   Pro   脯氨酸   CCA，CCC，CCG，CCU   Q   Gln   谷氨酰胺   CAA，CAG   R   Arg   精氨酸   AGA，AGG，CGA，CGC，   CGG，CGU   S   Ser   丝氨酸   AGC，AGU，UCA，UCC，   UCG，UCU   T   Thr   苏氨酸   ACA，ACC，ACG，ACU   V   Val   缬氨酸   GUA，GUC，GUG，GUU   W   Trp   色氨酸   UGG   Y   Tyr   酪氨酸   UAC，UAU
本发明的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体可以包括本 文所指出的通过天然突变或人工操作导致的一个或多个氨基酸取代、去除或 添加。
当然，技术人员所进行的氨基酸取代的数目将取决于许多因素，包括前 面提到的那些。一般说来，任何给定的IL-4或IL-13多肽的氨基酸取代、插 入或去除的数目不超过40、30、20、19、18、17、16、15、14、13、12、 11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1，例如1-30或其中的任意范围或任 意值，如本文所规定。
可以通过本领域公知的方法鉴定对功能起关键作用的本发明的IL-4或 IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体中的氨基酸，如定点诱变或丙氨酸 扫描诱变(如Ausubel，同上，8，15章；Cunningham和Wells，Science 244： 1081-1085(1989))。后一种程序在分子中每个残基处导入单个丙氨酸突变。 然后检测得到的突变分子的生物活性，例如，但不限于至少一种IL-4或IL-13 中和活性。也可以通过结晶、核磁共振或光亲和性标记等结构分析，鉴定Ig 衍生蛋白或其特定部分或变体结合的关键位点(Smith等，J.Mol.Biol.224： 899-904(1992)以及de Vos等，Science 255：306-312(1992))。
本发明的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体，或其特定变体，可以包含 来源于本发明的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的任意数目的连续氨基酸 残基，其中该数目选自IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体中 连续残基数目的10-100％。任选地，该连续氨基酸的亚序列长度为至少约 10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、 160、170、180、190、200、210、220、230、240、250或更多个氨基酸， 或其中的任意范围或任意值。此外，这些亚序列的数目可以是选自1-20的 任意整数，例如至少2、3、4或5。
本领域技术人员可以理解，本发明包括本发明的至少一种生物活性Ig 衍生蛋白或其特定部分或变体。生物活性Ig衍生蛋白或其特定部分或变体 具有天然(非合成)、内源性或相关和已知Ig衍生蛋白或其特定部分或变 体的至少20％，30％或40％的比活，优选地至少50％、60％或70％，最优选 地至少80％、90％或95％-1000％。测定和定量测定酶活性和底物特异性的 方法是本领域技术人员公知的。
另一方面，本发明涉及本文描述的人Ig衍生蛋白和抗原结合片段，它 们可以通过共价连接有机部分而得到修饰。这种修饰可以产生具有改进的药 代动力学特性(如增加的体内血清半衰期)的Ig衍生蛋白或抗原结合片段。 有机部分可以是线性或分支的疏水聚合物基团、脂肪酸基团或脂肪酸酯基 团。在特定实施方案中，亲水聚合物基团的分子量可以为约800-约120,000 道尔顿，并且可以是聚链烷醇(如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG))、碳水 化合物聚合物、氨基酸聚合物或聚乙烯基吡咯烷酮，脂肪酸或脂肪酸酯基团 可以包含约8-约40个碳原子。
本发明的修饰的Ig衍生蛋白和抗原结合片段可以包含与Ig衍生蛋白或 其特定部分或变体直接或间接共价结合的一个或多个有机部分。与本发明的 Ig衍生蛋白或抗原结合片段结合的每一个有机部分可以独立是亲水聚合物 基团、脂肪酸基团或脂肪酸酯基团。本文用到的术语“脂肪酸”包括单羧酸 和二羧酸，本文用到的“亲水聚合物基团”是指在水中比在辛烷中的溶解度 更高的有机聚合物。例如，聚赖氨酸在水中比在辛烷中的溶解度更高。因此， 本发明包括通过共价连接聚赖氨酸而被修饰的Ig衍生蛋白。适于修饰本发 明的Ig衍生蛋白的亲水聚合物可以是线性的或分支的，可以包括，例如聚 链烷醇(如PEG、单甲氧基-聚乙二醇(mPEG)、PPG等)，碳水化合物(如 右旋糖苷、纤维素、寡糖、多糖等)，亲水氨基酸的聚合物(如聚赖氨酸、 聚精氨酸、聚天冬氨酸等)，聚环氧烷(如聚环氧乙烷、聚环氧丙烷等)和 聚乙烯基吡咯烷酮。优选地，可以修饰本发明的Ig衍生蛋白的亲水聚合物 作为独立分子实体的分子量为约800-约150,000道尔顿。例如，可以使用 PEG5000和PEG20,000，其中下标是以道尔顿为单位表示的聚合物的分子量。 可以用1至约6个烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基团替换亲水聚合物基团。可以 采用适当的方法制备用脂肪酸或脂肪酸酯基团替换的亲水聚合物基团。例 如，包含胺基的聚合物可以与脂肪酸或脂肪酸酯的羧基偶联，脂肪酸或脂肪 酸酯的上的活化羧基(如用N，N-羰基二咪唑活化)可以与聚合物上的羟基 偶联。
适于修饰本发明的Ig衍生蛋白的脂肪酸和脂肪酸酯可以是饱和的，或 可以包含一个或多个不饱和单元。适于修饰本发明的Ig衍生蛋白的脂肪酸 包括，例如正十二烷酸(C12，月桂酸)，正十四烷酸(C14，肉豆蔻酸)，正十八 烷酸(C18，硬脂酸)，正二十烷酸(C20，花生酸)，正二十二烷酸(C22，山嵛酸)， 正三十烷酸(C30)，正四十烷酸(C40)，顺式-Δ9-十八烷酸(C18，油酸)，所有顺 式-Δ5，8，11，14-二十碳四烯酸(C20，花生四烯酸)，辛二酸，十四烷二酸，十 八烷二酸，二十二烷二酸等。适当的脂肪酸酯包括含有线性或分支低级烷基 的二羧酸单酯。低级烷基可以包含1个至约12个，优选地1个至约6个碳 原子。
可以通过适当的方法，例如通过与一种或多种修饰剂反应，制备修饰的 人Ig衍生蛋白和抗原结合片段。本文用到的术语“修饰剂”是指包括活化 基团的适当有机基团(如亲水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)。“活化基团” 是指在适当条件下，可以与第二种化学基团反应，从而形成修饰剂与第二种 化学基团之间的共价键的化学部分或官能团。例如，胺反应性活化基团包括 亲电子基团，如甲苯磺酸酯、甲磺酰酯、卤素(氯、溴、氟、碘)、N-羟基 琥珀酰亚胺酯(NHS)等。可以与硫醇反应的活化基团包括，例如，马来酰亚 胺、碘代乙酰基、丙烯酰基、二硫吡啶、5-巯基-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB硫 醇)等。可以将醛官能团与含有酰胺或酰肼的分子偶联，可以使叠氮基与三 价磷酸基反应，形成氨基磷酸酯或亚氨代磷酸酯键。用于将活化基团导入分 子的适当方法是本领域公知的(见例如，Hermanson，G.T.，Bioconjugate Techniques.Academic Press：San Diego，CA(1996))。活化基团可以直接与有 机基团(如亲水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)结合，或通过接头部分与其结 合，所述接头部分例如二价C1-C12基团，其中一个或多个碳原子可以被氧、 氮或硫等杂原子替换。适当的接头部分包括，例如，四甘醇、-(CH2)3-， -NH-(CH2)6-NH-，-(CH2)2-NH-和-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-。 例如，可以在1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)存在下，使单-Boc- 烷基二胺(如单-Boc-乙二胺、单-Boc-二氨基己烷)与脂肪酸反应，在游离 胺和脂肪酸羧基之间形成酰胺键，以便产生包含接头部分的修饰剂。用四氟 乙酸(TFA)处理产物，从而使伯胺暴露，可以从产物去除Boc保护基，该 伯胺可以与上述另一羧基偶联，或可以与马来酸酐反应，将得到的产物环化， 产生脂肪酸的活化的马来酰亚胺衍生物(见，例如。Thompson等，WO 92/16221，在此引入其完整教导作为参考)。
本发明的修饰的Ig衍生蛋白可以通过使人Ig衍生蛋白或抗原结合片段 与修饰剂反应而产生。例如，通过采用胺反应性修饰剂，例如，PEG的NHS 酯，有机部分可以与Ig衍生蛋白以非位点特异性方式结合。也可以通过还 原Ig衍生蛋白或抗原结合片段的二硫键(如链内二硫键)，制备修饰的人 Ig衍生蛋白或抗原结合片段。然后可以使被还原的Ig衍生蛋白或抗原结合 片段与硫醇反应性修饰剂反应，以便产生本发明的修饰Ig衍生蛋白。可以 采用反向蛋白水解等适当方法制备包含与本发明Ig衍生蛋白或其特定部分 或变体的特定位点结合的有机部分的修饰人Ig衍生蛋白和抗原结合片段 (Fisch等，Bioconjugate Chem.，3：147-153(1992)；Werlen等，Bioconjugate Chem.，5：411-417(1994)；Kumaran等，Protein Sci.6(10)：2233-2241(1997)； Itoh等，Bioorg.Chem.，24(1)：59-68(1996)；Capellas等，Biotechnol. Bioeng.，56(4)：456-463(1997))，也可以采用描述于Hermanson，G.T.， Bioconjugate Techniques，Academic Press：San Diego，CA(1996)中的方法。
IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物
本发明还提供了至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或 变体组合物，其含有如文中描述和/或本领域公知的至少1种、至少2种、 至少3种、至少4种、至少5种、至少6种或更多IL-4或IL-13的Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体，它们以非天然发生的组合物、混合物或形式提供。 这些组合物包括非天然发生的组合物，其含有IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白 氨基酸序列或其特定片段、结构域或变体的至少一个或两个全长、C-和/或 N-端缺失的变体、结构域、片段或特定变体。这些组合物百分数按照液体或 者无水溶液、混合物、悬浮液、乳剂、或者胶体的重量、体积、浓度、体积 摩尔浓度或者重量摩尔浓度计算，如本领域公知或者文中描述的。
本发明的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物可以 还含有至少一种适宜的辅助剂，例如但不限于，稀释剂、粘合剂、稳定剂、 缓冲剂、盐、亲脂性溶剂、防腐剂、佐剂等。优选药学上可接受的辅助剂。 制备这些无菌溶液的非限制性实例和方法是本领域众所周知的，如，但不限 于，Gennaro，编，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Co，(Easton，PA)1990。药学上可接受的载体可以常规地选自 适于IL-4或IL-13组合物的给药方式、溶解性和/或稳定性的载体，如本领 域中公知的或者本文描述的。
可用于本发明的药物赋形剂和添加剂可以包括，但不限于蛋白、肽、氨 基酸、脂质和糖(例如，糖，包括单糖、二糖、三糖、四糖和寡糖；衍生糖， 如糖醇、醛糖酸、酯化糖等；和多糖或者糖聚合物)，它们可以单独或者联 合存在，单独或者联合按重量计或者体积计构成1-99.99％。示例性蛋白赋形 剂包括血清清蛋白，如人血清清蛋白(HSA)、重组人清蛋白(rHA)、明 胶、酪蛋白，等。也可以在缓冲能力中起作用的代表性氨基酸/Ig衍生蛋白 或其特定部分或变体成分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、 谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫 氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜等。一种优选的氨基酸是甘氨酸。
适宜用于本发明的糖赋形剂包括，例如，单糖，如果糖、麦芽糖、半乳 糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖、等；二糖，诸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤 维二糖、等；多糖，诸如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖、淀粉、等； 和糖醇，诸如甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇(maltitol)、乳糖醇(lactitol)、 木糖醇山梨糖醇(葡糖醇(glucitol))、肌醇等。用于本发明的优选的糖赋 形剂为甘露醇、海藻糖，和棉子糖。
IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白组合物还可以包括缓冲剂或者pH调节剂； 通常，缓冲剂为从有机酸或者碱制备的盐。代表性缓冲剂包括有机酸盐，如 柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸，或邻苯二甲酸 的盐；Tris、盐酸三羟甲基氨基甲烷，或磷酸盐缓冲剂。由于本组合物的优 选缓冲剂为有机酸盐，如柠檬酸盐。
此外，本发明的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合 物可以包括聚合赋形剂/添加剂，如聚乙烯吡咯烷酮、菲科尔(ficolls)(一 种聚合糖)、葡聚糖结合剂(例如，环糊精，如2-羟基丙基-β-环糊精)、 聚乙二醇、调味剂、抗微生物剂、增甜剂、抗氧化剂、抗静电剂、表面活性 剂(例如，聚山梨醇酯，如“TWEEN 20”和“TWEEN 80”)、脂质(例 如，磷脂、脂肪酸)、类固醇(例如，胆固醇)、和螯合剂(例如，EDTA)。
用于根据本发明的IL-4或IL-13组合物的这些和其它额外的公知药物赋 形剂和/或添加剂是本领域公知的，例如，如“Remington：The Science & Practice of Pharmacy”，第19版，Williams & Williams，(1995)，和“Physician’s Desk Reference”，第52版，Medical Economics，Montvale，NJ(1998)所 列举的那些，它们的公开内容并入本文作为参考。优选的载体或者赋形剂材 料是糖(例如，糖类和糖醇)和缓冲剂(例如，柠檬酸盐)或者聚合剂。
包含其它治疗成分的Ig衍生蛋白组合物
组合物还可以任选含有有效量的至少一种化合物或者蛋白，所述化合物 或者蛋白选自至少一种抗感染药物、心血管(CV)系统药物、中枢神经系 统(CNS)药物、自主神经系统(ANS)药物、呼吸道药物、胃肠(GI)道 药物、激素药物、用于流体或者电解质平衡的药物、血液药物、抗肿瘤药、 免疫调制药物、眼、耳或鼻药物、局部药物、营养药物、抑制素，等。这些 药物是本领域众所周知的，包括文中给出的每种药物的制剂、适应症、剂量 和给药(见，例如，Nursing 2001 Handbook of Drugs，第21版，Springhouse Corp.，Springhouse，PA，2001；Health Professional’s Drug Guide 2001，编 著，Shannon，Wilson，Stang，Prentice-Hall，Inc，Upper Saddle River，NJ； Pharmcotherapy Handbook，Wells等人，编著，Appleton & Lange，Stamford， CT，每一篇都完整并入本文作为参考)。
抗感染药可以是选自杀阿米巴药的至少一种或者至少一种抗原生动物 药、驱肠虫药、抗真菌剂、抗疟药、抗结核药或至少一种抗麻风药、氨基糖 苷类、青霉素、头孢菌素、四环素、磺胺药物、氟喹诺酮、抗病毒药物、大 环内酯类抗感染药物、混杂的抗感染药物。CV药物可以是选自变力性药物、 抗节律不齐药、抗心绞痛药物、抗高血压药、抗脂血药、混杂的心血管药的 至少一种。CNS药物可以是选自非麻醉性镇痛剂的至少一种或者选自解热 药、非甾体类抗炎药、麻醉药的至少一种或至少一种阿片样镇痛剂、镇静催 眠药、抗惊厥药、抗抑郁药、抗焦虑药、抗精神病药、中枢神经系统兴奋剂、 抗帕金森病药物、混杂的中枢神经系统药物。ANS药物可以是选自胆碱能 药物(拟副交感神经功能药物)、抗胆碱能药、肾上腺素能药物(拟交感神 经药)、肾上腺素能药物阻滞剂(抗交感神经药)、骨骼肌松弛药、神经肌 肉阻滞剂的至少一种。呼吸道药物可以是选自抗组胺剂、支气管扩张药、祛 痰药的至少一种或至少一种止咳药、混杂的呼吸相关药物。胃肠道药物可以 是选自抗酸剂的至少一种或至少一种吸附剂或至少一种抗肠胃气胀药、消化 酶或至少一种胆结石增溶剂、止泻药、缓泻药、止吐剂、抗溃疡药。激素药 物可以是选自皮质类固醇、雄激素的至少一种或至少一种促蛋白合成类固 醇、雌激素或至少一种孕酮、促性腺激素、抗糖尿病药物或至少一种胰高血 糖素、甲状腺激素、甲状腺激素拮抗剂、垂体激素、甲状旁脲-样药物。流 体和电解质平衡的药物可以是选自利尿剂、电解质的至少一种或至少一种替 代溶液、酸化剂或至少一种碱化剂。血液药物可以是选自补血药、抗凝剂、 血液衍生物、溶解血栓的酶的至少一种。抗癌药可以是选自烷化药物、抗代 谢物、抗生素类抗癌药、改变激素平衡的抗癌药、混杂的抗癌药的至少一种。 免疫调制药物可以是选自免疫抑制剂、疫苗的至少一种或者至少一种类毒 素、抗毒素或者至少一种抗蛇毒素、免疫血清、生物应答修饰剂。眼、耳和 鼻药物可以是选自眼科抗感染药、眼科消炎药、缩瞳药、放瞳剂、眼科血管 收缩剂、混杂的眼科、耳科、鼻科药的至少一种。局部药物可以是选自抗感 染药、杀疥螨剂的至少一种或至少一种杀虱剂、局部的皮质类固醇。营养药 物可以是选自维生素、矿物质、或者热量的至少一种。见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook，如前的内容。
至少一种杀阿米巴药或者抗原生动物药可以是选自阿托夸酮、盐酸氯 喹、磷酸氯喹、甲硝唑、盐酸甲硝唑、羟乙磺酸戊烷脒的至少一种。至少一 种驱肠虫药可以是选自甲苯咪唑、双羟萘酸噻嘧啶、噻苯咪唑的至少一种。 至少一种抗真菌剂可以是选自两性霉素B、两性霉素B胆甾烯基硫酸酯复合 物、两性霉素B脂质复合物、两性霉素B脂质体、氟康唑、氟胞嘧啶、微 尺寸(microsize)灰黄霉素、超微尺寸灰黄霉素、伊曲康唑、酮康唑、制霉 菌素、盐酸特比萘芬的至少一种。至少一种抗疟药可以是选自盐酸氯喹、磷 酸氯喹、强力霉素、硫酸羟氯喹、盐酸甲氟喹、磷酸伯氨喹、乙胺嘧啶、乙 胺嘧啶与磺胺多辛的至少一种。至少一种抗结核药或者抗麻风药可以是选自 氯苯吩嗪、环丝氨酸、氨苯砜、盐酸乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺、利福布 丁、利福平、利福喷丁、硫酸链霉素的至少一种。至少一种氨基糖苷类可以 是选自硫酸阿米卡星、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素、硫酸链霉素、硫酸妥布 霉素的至少一种。至少一种青霉素可以是选自阿莫西林/克拉维酸钾、阿莫 西林三水合物、氨苄青霉素、氨苄青霉素钠、三水苄青霉素、氨苄青霉素钠 /青霉烷砜钠、氯苯青霉素钠、双氯青霉素钠、美洛西林钠、乙氧萘青霉素 钠、苯唑西林钠、苄星青霉素G、青霉素G钾、普鲁卡因青霉素G、青霉素 G钠、青霉素V钾、哌拉西林钠、哌拉西林钠/三唑巴坦钠、羧噻酚青霉素 钠、羧噻酚青霉素钠/可拉维酸钾的至少一种。至少一种头孢菌素可以是选 自头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢唑啉钠、头孢地尼、盐酸头孢平、头孢克肟、 头孢美唑钠、头孢尼西钠、头孢哌酮钠、头孢氨噻肟钠、头孢替坦二钠、头 孢西丁钠、头孢泊肟酯、头孢罗齐、头孢他啶、头孢布坦、头孢唑肟钠、头 孢曲松钠、头孢呋辛酯、头孢呋辛钠钠、盐酸头孢氨苄、头孢氨苄一水合物、 泛捷复、氯拉卡比的至少一种。至少一种四环素可以是选自盐酸去甲金霉素、 强力霉素钙、盐酸多西环素、盐酸强力霉素、一水强力霉素、盐酸米诺环素、 盐酸四环素的至少一种。至少一种磺胺药物可以是选自复方新诺明、磺胺嘧 啶、新诺明、磺胺异噁唑、磺胺乙酰异噁唑的至少一种。至少一种氟喹诺酮 可以是选自阿拉曲沙星甲磺酸盐、环丙沙星、依诺沙星、左氟沙星、盐酸洛 美沙星、萘啶酸、诺氟沙星、氧氟沙星、司帕沙星、甲磺酸曲伐沙星的至少 一种。至少一种氟喹诺酮可以是选自阿拉曲沙星甲磺酸盐、环丙沙星、依诺 沙星、左氟沙星、盐酸洛美沙星、萘啶酸、诺氟沙星、氧氟沙星、司帕沙星、 甲磺酸曲伐沙星的至少一种。至少一种抗病毒剂可以是选自阿波卡韦硫酸、 无环鸟苷钠、盐酸金刚胺、安泼那韦、西多福韦、地拉韦定甲磺酸盐、地达 诺新、依非韦伦、法昔洛韦、福米韦生钠、膦甲酸钠、更昔洛韦、吲哚那韦 硫酸、拉米夫定、拉米夫定/叠氮胸苷、奈非那韦甲磺酸盐、奈韦拉平、奥 赛他米韦磷酸盐、病毒唑、盐酸金刚乙胺、利托那韦、沙喹那韦、甲磺酸沙 喹那韦、司他夫定、法昔洛韦盐酸、扎西胞苷、扎那米韦、叠氮胸苷的至少 一种。至少一种大环内酯类抗感染剂可以是选自阿奇霉素、克拉霉素、地红 霉素、红霉素碱、依托红霉素、琥乙红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素 的至少一种。至少一种混杂抗感染剂可以是选自氨曲南、杆菌肽、琥珀酸钠 氯霉素、盐酸克林霉素、盐酸氯林可霉素棕榈酸酯、磷酸氯林可霉素、泰宁 和西拉司丁钠、美罗培南、呋喃妥因大晶体、呋喃妥因微晶、喹奴普丁/达 福普汀、盐酸大观霉素、甲氧苄啶、盐酸万古霉素的至少一种(见，例如， Nursing 2001 Drug Handbook的24-214页)。
至少一种变力性剂(inotropic)可以是选自乳酸氨利酮、地高辛、乳酸 米力农的至少一种。至少一种抗心律不齐药可以是选自腺苷、盐酸胺碘酮、 硫酸阿托品、溴苯乙胺、盐酸地尔硫丙吡胺、磷酸丙吡胺、盐酸艾司洛 尔、醋酸氟卡胺、伊布利特富马酸盐、盐酸利多卡因、盐酸美西律、盐酸莫 需西嗪、苯妥英、苯妥英钠、盐酸普鲁卡因胺、盐酸普罗帕酮、盐酸普萘洛 尔、奎尼丁重硫酸盐、葡糖酸奎尼丁、奎尼丁聚半乳糖醛酸盐、硫酸奎尼丁、 索他洛尔、盐酸妥卡胺、盐酸维拉帕米的至少一种。至少一种抗心绞痛药可 以是选自阿罗地平磺酸盐、亚硝戊酯、盐酸苄普地尔、盐酸地尔硫硝酸 异山梨酯、单硝酸异山梨酯、萘羟心安、盐酸硝吡胺甲酯、硝苯地平、硝酸 甘油、盐酸普萘洛尔、维拉帕米、盐酸维拉帕米的至少一种。至少一种抗高 血压药可以是选自盐酸醋丁洛尔、阿罗地平磺酸盐、阿替洛尔、盐酸贝那普 利、盐酸倍他索洛尔、富马酸比索洛尔、坎得沙坦(candesartan)cilexetil、 卡托普利、盐酸喹酮心安、卡维地洛、可乐定、盐酸可乐定、二氮嗪、盐酸 地尔硫甲磺酸多沙唑嗪、伊那普利拉、马来酸伊那普利、甲磺酸伊普沙 坦、非洛地平、甲磺酸芬洛多潘、福辛普利钠、醋酸胍那苄、硫酸胍那决尔、 盐酸胍法辛、盐酸肼苯哒嗪、依贝沙坦、伊拉地平、盐酸拉贝洛尔、赖诺普 利、氯沙坦钾、甲基多巴、盐酸甲基多巴、琥珀酸美托洛尔、酒石酸美托洛 尔、米诺地尔、盐酸莫西普利、萘羟心安、盐酸硝吡胺甲酯、硝苯地平、尼 索的平、硝普钠、硫酸环戊丁心安、哌林多普利erbumine、甲磺酸酚妥拉明、 心得静、盐酸哌唑嗪、盐酸普萘洛尔、盐酸喹那普利、雷米普利、替米沙坦、 盐酸特拉唑嗪、马来酸噻马洛尔、群多普利、缬沙坦、盐酸维拉帕米的至少 一种。至少一种抗脂血药可以是选自阿托伐他汀钙、西伐他丁钠、消胆胺、 盐酸降胆宁、非诺贝特(微粒化)、氟伐他丁钠、吉非贝齐、洛伐他汀、烟 酸、普伐他丁钠、辛伐他汀的至少一种。至少一种混杂CV药物可以是选自 阿昔单抗、前列地尔、盐酸阿布他明、西洛他唑、氯吡格雷重硫酸盐、双嘧 达莫、表非替得、盐酸甲氧胺福林、己酮可可碱、盐酸噻氯匹定、盐酸替罗 非班的至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的215-336页)。
至少一种非麻醉性镇痛剂或者解热药可以为选自醋氨酚、乙酰水杨酸、 三水杨酸胆碱镁、二氟苯水杨酸、水杨酸镁的至少一种。至少一种非甾体类 抗炎药可以为选自塞来昔布、双氯酚酸钾、双氯酚酸钠、依托度酸、苯氧苯 丙酸钙、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、吲哚美辛钠三水合物、酮基布洛芬、 酮咯酸、萘丁美酮、萘普生、甲氧萘丙酸钠、奥沙普嗪、吡罗昔康、罗非克 西、舒林酸的至少一种。至少一种麻醉性或者阿片样镇痛剂可以为选自盐酸 阿芬他尼、盐酸丁丙诺啡、酒石酸环丁甲二羟吗喃、磷酸可待因、硫酸可待 因、枸橼酸芬太尼、芬太尼透皮体系、跨粘膜芬太尼、盐酸二氢吗啡酮、盐 酸哌替啶、盐酸美沙酮、盐酸吗啡、硫酸吗啡、酒石酸吗啡、盐酸纳布啡、 盐酸羟氢可待酮、果胶酸羟可待酮、盐酸氢羟吗啡酮、盐酸镇痛新、盐酸镇 痛新和盐酸纳洛酮、乳酸镇痛新、盐酸丙氧芬、萘磺酸丙氧芬、盐酸雷米芬 太尼、枸橼酸舒芬太尼、盐酸反胺苯环醇的至少一种。至少一种镇静催眠药 可以是选自水合氯醛、艾司唑仑、盐酸氟胺安定、戊巴比妥、戊巴比妥钠、 苯巴比妥钠、司可巴比妥钠、甲羟安定、三唑苯二氮、扎来普隆、酒石酸唑 吡坦的至少一种。至少一种抗惊厥药可以是选自乙酰唑胺、卡马西平、氟硝 安定、二钾氯氮安定、双丙戊酸钠、乙琥胺、磷苯妥英钠、加巴喷丁、 拉莫三嗪、硫酸镁、苯巴比妥、苯巴比妥钠、苯妥英、苯妥英钠、苯妥英钠 (持久的)、扑癫酮、盐酸硫加宾、托吡酯、丙戊酸钠、丙戊酸的至少一种。 至少一种抗抑郁药可以是选自盐酸阿米替林、羟嗪阿米替林、阿莫沙平、盐 酸丁氨苯丙酮、氢溴酸西酞普兰、盐酸氯米帕明、盐酸去甲丙咪嗪、盐酸多 塞平、盐酸氟西汀、盐酸丙咪嗪、羟嗪丙咪嗪、米氮平、盐酸奈法唑酮、盐 酸去甲替林、盐酸帕罗克赛、硫酸苯乙肼、盐酸珊特拉林、硫酸反苯环丙胺、 马来酸三甲丙咪嗪、盐酸万拉法新的至少一种。至少一种抗焦虑药可以是选 自阿普唑仑、盐酸丁螺旋酮、氯氮盐酸氯氮二钾氯氮安定、盐 酸多塞平、双羟萘酸羟嗪、盐酸羟嗪、双羟萘酸羟嗪、氯羟安定、眠尔通 (mephrobamate)、盐酸咪哒唑仑、去甲羟安定的至少一种。至少一种抗精 神病药可以是选自盐酸氯丙嗪、氯氮平、氟奋乃静癸酸酯、氟奋乃静庚酸酯 (fluephenazine enanthate)、盐酸氟奋乃静、氟哌啶醇、癸酸氟哌啶醇、乳 酸氟哌啶醇、盐酸克噻平、琥珀酸克塞平、苯磺酸甲砜达嗪、盐酸吗茚酮、 奥兰扎平、奋乃静、哌迷清、甲哌氯丙嗪、富马酸喹迪平、维思通、盐酸硫 利哒嗪、氨砜噻吨、盐酸氨砜噻吨、盐酸三氟拉嗪的至少一种。至少一种中 枢神经系统兴奋剂可以选自硫酸苯丙胺、咖啡因、硫酸右旋苯丙胺、盐酸多 沙普仑、盐酸脱氧麻黄碱、盐酸哌醛甲酯、莫达非尼、匹莫林、盐酸苯丁胺 的至少一种。至少一种抗帕金森病药可以是选自盐酸金刚胺、甲磺酸苯甲托 品、盐酸比哌立登、乳酸比哌立登、甲磺酸溴隐亭、卡比多巴-左旋多巴、 恩他卡朋、左旋多巴、甲磺酸硫丙麦角林、二盐酸派拉米苏、盐酸累匹利洛、 盐酸司来吉兰、托卡朋、盐酸苯海索的至少一种。至少一种混杂的中枢神经 系统药物可以是选自利鲁唑、盐酸丁氨苯丙酮、盐酸多奈哌齐、氟哌啶、马 来酸氟戊肟胺、碳酸锂、枸橼酸锂、盐酸那拉曲坦、烟碱polacrilex、烟碱 透皮体系、异丙酚、安息香酸雷扎曲坦、盐酸西布茶明一水合物、琥珀酸磺 马曲坦、盐酸单满吖啶氨、佐米曲坦的至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的337-530)。
至少一种胆碱能药物(例如，拟副交感神经功能药物)可以是选自氯化 氨甲酰甲胆碱、氯化滕喜龙、溴新斯的明、甲基硫酸新斯的明、水杨酸毒扁 豆碱、溴化吡啶斯的明的至少一种。至少一种抗胆碱能药物可以是选自硫酸 阿托品、盐酸双环胺、胃长宁、莨菪碱、硫酸莨菪碱、溴化丙胺太林、东莨 菪碱、丁溴东莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱的至少一种。至少一种肾上腺素能药 物(拟交感神经药)可以是选自盐酸多巴酚丁胺、盐酸多巴胺、酒石酸间羟 胺、重酒石酸氢去甲肾上腺素、盐酸新福林、盐酸伪麻黄碱、硫酸伪麻黄碱 的至少一种。至少一种肾上腺素能阻滞剂(抗交感神经药)可以是选自甲磺 酸二氢麦角胺、酒石酸麦角胺、马来酸二甲麦角新碱、盐酸普萘洛尔的至少 一种。至少一种骨骼肌松弛剂可以是选自巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、盐 酸环苯扎林、达者仑钠、美索巴莫、盐酸替扎尼定的至少一种。至少一种神 经肌肉阻滞剂可以是选自安托肌松、苯碳酸顺阿曲库胺、多沙氯铵、氯化米 库氯铵、泮库溴铵、哌库溴铵、瑞库溴铵(rapacuronium)、罗库溴铵、氯 化琥珀胆碱、氯化筒箭毒碱、维库溴铵的至少一种(见，例如Nursing 2001 Drug Handbook的531-84页)。
至少一种抗组胺药可以是选自马来酸溴苯吡胺、盐酸西替利嗪、马来酸 氯苯吡胺、富马酸氯苯苄咯、盐酸赛庚啶、盐酸苯海拉明、盐酸甲美芳铵、 氯雷他定、盐酸异丙嗪、茶异丙嗪、盐酸曲普立定的至少一种。至少一种支 气管扩张药可以是选自沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、氨茶碱、硫酸阿托品、硫 酸麻黄碱、肾上腺素、重酒石酸肾上腺素、盐酸肾上腺素、异丙托溴铵、异 丙肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、硫酸异丙上腺素、盐酸左旋沙丁胺醇 (levalbuterol)、硫酸奥西那林、胆茶碱、醋酸吡布特罗、昔美酸沙美特罗、 硫酸特布他林、茶碱的至少一种。至少一种祛痰药或者止咳药可以是选自苯 佐那酯、磷酸可待因、硫酸可待因、右旋甲吗喃氢溴酸盐、盐酸苯海拉明、 愈创木酚甘油醚、盐酸氢吗啡酮的至少一种。至少一种混杂呼吸药物可以是 选自乙酰半胱氨酸、倍氯美松双丙酸酯、贝雷克坦、布地缩松、calfactant、 色甘酸钠、阿法脱氧核糖核酸酶、环前列烯醇钠、氟尼缩松、丙酸氟地松、 孟鲁司特钠、来多克罗米钠、帕利珠单抗、曲安奈德、扎鲁司特、弃白通的 至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的585-642页)。
至少一种抗酸剂、吸附剂或者抗肠胃气胀药可以是选自碳酸铝、氢氧化 铝、碳酸钙、氢氧化镁铝、氢氧化镁、氧化镁、二甲基硅油、碳酸氢钠的至 少一种。至少一种消化酶或者胆结石增溶剂可以是选自胰酶、胰脂肪酶、熊 去氧胆酸的至少一种。至少一种止泻药可以是选自活性白土、碱式水杨酸铋、 钙聚丙烯酸树脂、盐酸地芬诺酯或硫酸阿托品、洛哌丁胺、善得定甲地孕酮、 阿片酊、阿片酊(含樟脑的)的至少一种。至少一种缓泻药可以是选自 bisocodyl、钙聚丙烯酸树脂、美鼠李皮(cascara sagrada)、鼠李芳香的流 体提取物、鼠李流体提取物、蓖麻油、琥珀辛酯磺酸钙、琥珀辛酯磺酸钠、 甘油、乳果糖、柠檬酸镁、氢氧化镁、硫酸镁、甲基纤维素、矿物油、聚乙 二醇或电解质溶液、欧车前、番泻叶、磷酸钠的至少一种。至少一种止吐剂 可以是选自盐酸氯丙嗪、茶苯海明、多拉司琼甲磺酸盐、屈大麻酚、盐酸格 雷西隆、盐酸氯苯苄嗪、甲氧氯普胺盐酸、盐酸奥丹西隆、奋乃静、甲哌氯 丙嗪、乙二磺酸甲哌氯丙嗪、马来酸甲哌氯丙嗪、盐酸异丙嗪、东莨菪碱、 马来酸硫乙哌丙嗪、盐酸曲美苄胺的至少一种。至少一种抗溃疡药可以是选 自甲腈咪胍、盐酸甲腈咪胍、法莫替丁、达克普隆、迷索前列醇、尼扎替丁、 奥美拉唑、雷贝拉唑钠、雷尼替丁枸橼酸铋、盐酸雷尼替丁、硫糖铝的至少 一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的643-95页)。
至少一种皮质类固醇可以是选自倍他米松、醋酸倍他米松或倍他米松磷 酸钠、倍他米松磷酸钠、醋酸可的松、地塞米松、醋酸氟美松、地塞米松磷 酸钠、醋酸氟氢可的松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、氢化可的松环戊丙 酸酯、氢可松磷酯钠、氢化可的松琥珀酸钠、甲基强的松龙、醋酸甲基强的 松龙、甲氢泼尼松龙琥珀酸钠、氢化泼尼松、醋酸氢化泼尼松、氢化泼尼松 磷酸钠、强的松龙叔丁乙酯、强的松、氟羟泊尼松龙、曲安奈德、双醋酸去 炎松的至少一种。至少一种雄激素或者促蛋白合成类固醇可以是选自达那 唑、氟羟甲睾酮、甲睾酮、癸酸诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、环戊丙酸睾酮、 庚酸睾酮、丙酸睾酮、睾酮透皮体系的至少一种。至少一种雌激素或者孕酮 可以是选自酯化雌激素、雌二醇、环戊丙酸雌二醇、雌二醇/醋炔诺酮透皮 体系、戊酸雌二醇、雌激素(缀合物)、哌嗪雌酮、乙炔雌二醇、乙炔雌二 醇和炔雌醇、乙炔雌二醇和双醋炔诺醇、乙炔雌二醇和炔雌醇、乙炔雌二醇 和双醋炔诺醇、乙炔雌二醇和左旋甲炔诺酮、乙炔雌二醇和炔诺酮、乙炔雌 二醇和醋炔诺酮、乙炔雌二醇和炔诺肟酯、乙炔雌二醇和甲基炔诺酮、乙炔 雌二醇和炔诺酮和醋酸盐和富马酸铁、左旋甲炔诺酮、醋酸甲羟孕酮、甲氢 龙和诺炔酮、炔诺酮、醋酸炔诺酮、甲基炔诺酮、黄体酮的至少一种。至少 一种促性腺激素可以是选自乙酸加尼瑞克、醋酸高纳瑞林、乙酸希司曲林、 绝经促性素的至少一种。至少一种抗糖尿病药或者高血糖素(glucaon)可以是 选自阿卡波糖、氯磺丙脲、格列美脲、格列甲嗪、胰高血糖素、优降糖、胰 岛素、盐酸二甲双胍、米格列醇、盐酸吡格列酮、瑞格列奈、马来酸罗格列 酮、曲格列酮的至少一种。至少一种甲状腺激素可以是选自左旋甲状腺素钠、 碘甲腺氨酸钠、复方甲状腺素、甲状腺激素的至少一种。至少一种甲状腺激 素拮抗剂可以是选自甲巯咪唑、碘化钾、碘化钾(饱和溶液)、丙硫氧嘧啶、 放射性碘(碘化钠131I)、浓碘溶液的至少一种。至少一种垂体激素可以是 选自促皮质素、二十四肽促皮质素、醋酸去氨加压素、醋酸亮丙瑞林、长效 的促皮质素、人蛋氨生长素、促生长激素、加压素的至少一种。至少一种甲 状旁腺样药物可以是选自骨化二醇、降钙素(人)、降钙素(鲑鱼)、钙三 醇、双氢速变固醇、依替磷酸二钠的至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的696-796页)。
至少一种利尿剂可以是选自乙酰唑胺、乙酰唑胺钠、盐酸阿米洛利、布 美他尼、氯噻酮、依他尼酸钠、利尿酸、呋塞米、双氢克尿塞、吲达帕胺、 甘露醇、美托拉宗、螺内酯、托塞米、氨苯喋啶、脲的至少一种。至少一种 电解质或者替代溶液可以是选自乙酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳 醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、磷酸钙(二碱价的)、磷酸钙 (三碱价的)、葡聚糖(高分子量)、葡聚糖(低分子量)、羟乙基淀粉、 氯化镁、硫酸镁、乙酸钾、碳酸氢钾、氯化钾、葡萄糖酸钾、林格注射液、 林格注射液(乳酸盐)、氯化钠的至少一种。至少一种酸化剂或者碱化剂可 以是选自碳酸氢钠、乳酸钠、三羟甲基氨基甲烷的至少一种。(见，例如， Nursing 2001 Drug Handbook的797-833页)。
至少一种补血药可以是选自富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、硫酸亚铁、硫 酸亚铁(无水的)、右旋糖酐铁、山梨醇铁、多糖-铁络合物、葡糖酸铁钠 络合物的至少一种。至少一种抗凝剂可以是选自阿地肝素钠、达肝素钠、达 那肝素钠、依诺肝素钠、肝素钙、肝素钠、华法林钠的至少一种。至少一种 血液衍生物可以是选自清蛋白5％、清蛋白25％、抗甲种血友病因子、抗抑 制剂凝血剂复合物、抗凝血酶III(人)、因子IX(人)、因子IX复合物、 血浆蛋白级分的至少一种。至少一种溶血栓酶可以是选自阿替普酶、艾尼斯 屈酶、瑞替普酶(重组的)、链激酶、尿激酶的至少一种。(见，例如， Nursing 2001 Drug Handbook的834-66页)。
至少一种烷化药物可以是选自白消安、卡铂、卡氮芥、苯丁酸氮芥、顺 铂、环磷酰胺、异环磷酰胺、环己亚硝脲、盐酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、盐酸 苯丙氨酸氮芥、链脲霉素、泰莫佐罗、噻替哌的至少一种。至少一种抗代谢 物可以是选自卡培他滨、克拉利平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟达拉滨、氟 尿嘧啶、羟基脲、巯基嘌呤、氨甲蝶呤、氨甲蝶呤钠、硫鸟嘌呤的至少一种。 至少一种抗生素抗癌瘤药可以是选自硫酸博来霉素、放线菌素D、柠檬酸柔 红霉素脂质体、盐酸柔红霉素、盐酸阿霉素、盐酸阿霉素脂质体、盐酸表阿 霉素、盐酸去甲柔毛霉素、丝裂霉素、喷托他丁、普卡霉素、戊柔比星的至 少一种。改变激素平衡的至少一种抗癌剂可以是选自阿那曲唑、比卡鲁胺、 磷雌氮芥、依西美坦、氟利坦、醋酸性瑞林、来曲唑、醋酸亮丙瑞林、甲地 孕酮、尼鲁米特、枸橼酸他莫昔芬、睾内酯、柠檬酸涛瑞米芬的至少一种。 至少一种混杂抗癌剂可以是选自天冬酰胺酶、卡介苗(BCG)(活的膀胱内 的)、达卡巴嗪、多西他赛、依托泊苷、磷酸依托泊苷、盐酸吉西他滨、盐 酸依立替康、米托坦、盐酸米托蒽醌、紫杉醇、天门冬酰胺酶、卟吩姆钠、 盐酸甲基苄肼、利妥希玛、替尼泊苷、盐酸拓扑替康、司徒曼布、维甲酸、 硫酸长春碱、硫酸长春新碱、长春瑞宾的至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的867-963页)。
至少一种免疫抑制剂可以是选自硫唑嘌呤、巴利昔单抗、环孢菌素、达 珠单抗、淋巴细胞免疫球蛋白、鼠单克隆Ig衍生蛋白CD3、霉酚酸酯、盐 酸霉酚酸酯、西罗莫司、他克莫司的至少一种。至少一种疫苗或者类毒素可 以是选自BCG疫苗、霍乱疫苗、白喉和破伤风类毒素(吸附的)、吸附的 白喉和破伤风类毒素和无细胞百日咳疫苗、白喉和破伤风类毒素和完整细胞 百日咳疫苗、b型嗜血菌(Haemophilius b)缀合物疫苗、甲型肝炎疫苗(灭 活的)、乙型肝炎疫苗(重组的)、流感病毒疫苗1999-2000三价类型A & B(纯化的表面抗原)、流感病毒疫苗1999-2000三价类型A & B(亚病毒 体或纯化的亚病毒体)、流感病毒疫苗1999-2000三价类型A & B(完整病 毒体)、日本脑炎病毒疫苗(灭活的)、Lyme病疫苗(重组的OspA)、麻 疹和腮腺炎和风疹病毒疫苗(活的)、麻疹和腮腺炎和风疹病毒疫苗(活的 减毒的)、麻疹病毒疫苗(活的减毒的)、脑膜炎球菌多糖疫苗、腮腺炎病 毒疫苗(活的)、鼠疫疫苗、肺炎球菌疫苗(多价的)、脊髓灰质炎病毒疫 苗(灭活的)、脊髓灰质炎病毒疫苗(活的、经口的、三价的)、狂犬病疫 苗(吸附的)、狂犬病疫苗(人二倍体细胞)、风疹和腮腺炎病毒疫苗(活 的)、风疹病毒疫苗(活的、减毒的)、破伤风类毒素(吸附的)、破伤风 类毒素(流体)、伤寒疫苗(经口的)、伤寒疫苗(肠胃外的)、伤寒Vi 多糖疫苗、水痘病毒疫苗、黄热病疫苗的至少一种。至少一种抗毒素或抗蛇 毒素可以是选自黑寡妇蜘蛛抗蛇毒素、蝮科(Crotalidae)抗蛇毒素(多价 的)、白喉抗毒素(马)、黄金珊瑚蛇(Micrurus fulvius)抗蛇毒素的至少 一种。至少一种免疫血清可以是选自巨细胞病毒免疫球蛋白(静脉内的)、 乙型肝炎免疫球蛋白(人)、肌内免疫球蛋白、静脉内免疫球蛋白、狂犬病 免疫球蛋白(人)、静脉内的呼吸道合胞病毒免疫球蛋白(人)、Rh0(D) 免疫球蛋白(人)、静脉内的Rh0(D)免疫球蛋白(人)、破伤风免疫球 蛋白(人)、水痘-带状疱疹免疫球蛋白的至少一种。至少一种生物应答修 饰剂可以是选自阿地流津、重组人类红细胞生成素α、非格司亭、注射用乙 酸格拉太咪尔、干扰素α-1、干扰素α-2a(重组的)、干扰素α-2b(重组的)、 干扰素β-1a、干扰素β-1b(重组的)、干扰素γ1b、盐酸左旋咪唑、奥普瑞 白介素、沙格司亭的至少一种。(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook 的964-1040页)。
至少一种眼科抗感染剂可以是选自杆菌肽、氯霉素、盐酸环丙沙星、红 霉素、硫酸庆大霉素、氧氟沙星0.3％、硫酸多粘菌素B、乙酰磺胺钠10％、 乙酰磺胺钠15％、乙酰磺胺钠30％、妥布霉素、阿糖腺苷的至少一种。至少 一种眼科消炎药可以是选自地塞米松、地塞米松磷酸钠、双氯酚酸钠0.1％、 氟氢缩松、氟比洛芬钠、酮咯酸、醋酸氢化泼尼松(悬浮液)氢化泼尼松磷 酸钠(溶液)的至少一种。至少一种缩瞳药可以是选自氟乙酰胆碱、卡巴胆 碱(眼内的)、卡巴胆碱(局部的)、碘乙膦硫胆碱、毛果芸香碱、盐酸毛 果芸香碱、硝酸毛果芸香碱的至少一种。至少一种放瞳剂可以是选自硫酸阿 托品、盐酸环喷托酯、盐酸肾上腺素、环硼肾上腺素、氢溴酸后马托品、盐 酸新福林、氢溴酸东莨菪碱、托吡卡胺的至少一种。至少一种眼科血管收缩 剂可以是选自盐酸萘甲唑啉、盐酸氧甲唑啉、盐酸四氢唑啉的至少一种。至 少一种混杂眼药可以是选自盐酸阿拉可乐定、盐酸倍他索洛尔、酒石酸溴莫 尼定、盐酸卡替洛尔、盐酸地匹福林、盐酸多佐胺、依美司汀酯、荧光素钠、 富马酸酮替芬、拉坦前列素、盐酸左布诺洛尔、盐酸美替洛尔、氯化钠(高 渗的)、马来酸噻马洛尔的至少一种。至少一种耳药可以是选自硼酸、过氧 化氢脲、氯霉素、三乙醇胺多肽油酸盐-缩合物的至少一种。至少一种鼻药 可以是选自倍氯米松双丙酸酯、布地缩松、硫酸麻黄碱、盐酸肾上腺素、氟 尼缩松、丙酸氟地松、盐酸萘甲唑啉、盐酸氧甲唑啉、盐酸新福林、盐酸四 氢唑啉、曲安奈德、盐酸赛洛唑啉的至少一种(Nursing 2001 Drug Handbook 的1041-97页)。
至少一种局部抗感染剂可以是选自无环鸟苷、两性霉素B、壬二酸乳膏、 杆菌肽、硝酸布康唑、磷酸克林霉素、克霉唑、硝酸益康唑、红霉素、硫酸 庆大霉素、酮康唑、醋酸磺胺米隆、甲硝唑(局部的)、硝酸咪康唑、莫匹 罗星、盐酸萘夫替芬、硫酸新霉素、呋喃西林、制霉素、磺胺嘧啶银、盐酸 特比萘芬、曲康唑、盐酸四环素、噻康唑、托萘酯的至少一种。至少一种杀 疥螨剂或者杀虱剂可以是选自克罗米通、林丹、氯菊酯、除虫菊酯的至少一 种。至少一种局部皮质类固醇可以是选自二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、 丙酸氯倍他索、丙缩羟强龙、去羟米松、地塞米松、地塞米松磷酸钠、双醋 二氟松、醋酸氟轻松、氟轻松、氟氢缩松、丙酸氟地松、氯氟舒松(halcionide)、 氢化可的松、醋酸氢化可的松、丁酸氢化可的松、戊酸氢化可的松、糠酸毛 他松、曲安奈德的至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的 1098-1136页)。
至少一种维生素或者矿物质可以是选自维生素A、复合维生素B、氰钴 胺素、叶酸、羟钴胺素、甲酰四氢叶酸钙、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核 黄素、盐酸硫胺素、维生素C、维生素D、胆钙化醇、麦角钙化醇、维生素 D类似物、1α羟基维生素D2、帕立骨化醇、维生素E、维生素K类似物、 维生素K1、氟化钠、氟化钠(局部的)、痕量元素、铬、铜、碘、锰、硒、 锌的至少一种。至少一种热量可以是选自氨基酸输注液(结晶的)、溶于葡 萄糖中的氨基酸输注液、氨基酸输注液与电解质、溶于葡萄糖中的氨基酸输 注液与电解质、用于肝衰竭的氨基酸输注液、用于高代谢压力的氨基酸输注 液、葡萄糖、脂肪乳剂、中等链甘油三酯(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的1137-63页)。
制剂
如上面指出的，本发明提供了适于药物或者兽药用途的稳定制剂，其优 选为具有盐水或所选择盐的磷酸缓冲液，以及含有防腐剂的防腐溶液和制 剂，以及多用途防腐制剂，所述制剂含有药学上可接受的制剂中的至少一种 IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体。防腐制剂含有至少一种公 知的防腐剂或者其任选选自苯酚、间-甲酚、对甲酚、邻甲酚、氯甲酚、苯 甲醇、亚硝酸苯汞、苯氧基乙醇、甲醛、氯代丁醇、氯化镁(例如，六水合 物)、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等)、苯扎 氯铵、氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞的防腐剂，或者它们在水性稀释 剂中的混合物。任意适宜的浓度或者混合物都可以使用，如本领域所公知的， 如，0.001-5％，或者其中任意范围或者值，例如但不限于0.001、0.003、0.005、 0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4.、0.5、0.6、0.7、 0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、 2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、 3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9，或者其中任意范围或者值。 非限制性实例包括，但不限于，0.1-2％间甲酚(例如，0.2、0.3、0.4、0.5、 0.9、1.0％)，0.1-3％苯甲醇(例如，0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5％)、 0.001-0.5％硫柳汞(例如，0.005、0.01)、0.001-2.0％苯酚(例如，0.05、0.25、 0.28、0.5、0.9、1.0％)、0.0005-1.0％对羟基苯甲酸烷基酯(例如，0.00075、 0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.01、0.02、0.05、0.075、0.09、 0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0％)、等。
如上面指出的，本发明提供了一种制品，其含有包装材料和至少一个瓶 子，后者含有任选在水性稀释剂中的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白 或其特定部分或变体与规定的缓冲剂和/或防腐剂的溶液，其中所述包装材 料包含标签，其指出这种溶液可以保存1、2、3、4、5、6、9、12、18、20、 24、30、36、40、48、54、60、66、72小时或更长时间。本发明还包括产 品，其包含包装材料、含有冻干的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或 其特定部分或变体的第一个瓶子，和含有规定的缓冲剂或防腐剂的水性稀释 剂的第二个瓶子，其中所述包装材料包含标签，其指导患者将所述至少一种 IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体用水性稀释剂重构，以形成 可以保存24小时或更长时间的溶液。
根据本发明使用的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分 或变体可以通过重组方法产生，包括从哺乳动物细胞或者转基因制剂产生， 或者可以从如本文中描述或者本领域公知的其它生物来源纯化。
本发明产品中至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变 体的范围包括重构后(如果为湿润/干燥体系)产生约1.0μg/ml到约1000 mg/ml浓度的量，然而更低和更高的浓度是可行的，并且取决于计划的递送 载体，例如，溶液制剂将与透皮贴剂、肺、跨粘膜或者渗透或微量泵方法不 同。
优选地，水性稀释剂任选还含有药学上可接受的防腐剂。优选的防腐剂 包括选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲 酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等)、苯扎氯铵、氯化苄乙氧 铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞，或它们的混合物的防腐剂。用于制剂中的防腐剂 的浓度为足够产生抗微生物效果的浓度。该浓度取决于所选的防腐剂并且可 以由技术人员容易地确定。
其它赋形剂，例如，等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂增强剂可以任 选和优选地加入到稀释剂中。等渗剂，如甘油，通常以已知浓度使用。优选 将生理耐受的缓冲剂加入以提供改善的pH控制。所述制剂可以覆盖宽范围 的pH，如从约pH 4到约pH 10，优选的范围为约pH 5到约pH 9，最优选 的范围为约6.0到约8.0。优选地，本发明的制剂具有约6.8到约7.8的pH。 优选的缓冲剂包括磷酸缓冲液，最优选磷酸钠，尤其磷酸缓冲盐溶液(PBS)。
其它添加剂，如药学上可接受的增溶剂，如Tween 20(聚氧乙烯(20) 山梨糖醇酐单月桂酸酯)、Tween 40(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酸 酯)、Tween 80(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯)、Pluronic F68(聚 氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物)、和PEG(聚乙二醇)或者非离子表面活性剂， 如聚山梨醇酯20或80或泊洛沙姆184或188、多元醇(polyls)， 其它嵌段共聚物，和螯合剂，如EDTA和EGTA可任选加入所述制剂或组 合物以减小聚集。如果使用泵或者塑料容器给予所述制剂，那么这些添加剂 尤其有用。药学上可接受的表面活性剂的存在可以减轻蛋白聚集的倾向。
通过如下方法可以制备本发明的制剂，该方法包括将至少一种IL-4或 IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体与防腐剂在水性稀释剂中混合，该 防腐剂选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、对羟基苯 甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等)、苯扎氯铵、氯化苄乙 氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞，或它们的混合物。用常规溶解和混合方法将所 述至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体与防腐剂在水 性稀释剂中混合。为了制备适宜的制剂，例如，将缓冲液中的至少一种测量 的量的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体与所希望的防腐剂 在缓冲液中以一定量组合，所述量足够提供所需浓度的蛋白和防腐剂。本领 域技术人员将认识该方法的变形。例如，所加入的组分的顺序、是否使用额 外的添加剂、制备制剂的温度和pH，是可以关于浓度和所用给药方式进行 最优化的所有因素。
所要求保护的制剂可以以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一 瓶冻干的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体，其用 含有水、防腐剂和/或赋形剂，优选溶于水性稀释剂的磷酸缓冲液和/或盐水 和所选盐的第二个瓶子中重构。需要重构的单个溶液瓶或者两只瓶子可以重 复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当 前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。
要求保护的产品可以用于在立即到24小时或更长时间时间段内给药。 因此，本要求保护的制品为患者提供显著的优点。本发明的制剂可以任选在 约2℃到约40℃的温度下安全保存并且长时间保持所述蛋白的生物活性，从 而允许包装标签指出该溶液可以在6、12、18、24、36、48、72、或96小 时或更长的时间段内保存和/或使用。如果使用防腐的稀释剂，此类标签可 以包括使用最长达1-12月、半年、一年半和/或两年。
通过包括将至少一种Ig衍生蛋白或其特定部分或变体在水性稀释剂中 混合的方法，可以制备本发明的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其 特定部分或变体的溶液。用常规溶解和混合方法实施混合。为了制备稳定的 稀释剂，例如，将水或者缓冲液中的至少一种经测量的量的Ig衍生蛋白或 其特定部分或变体以一定量组合，所述量足够提供所需浓度的蛋白和任选地 防腐剂或者缓冲剂。本领域技术人员将认识到该方法的变形。例如，所加入 的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以关于 浓度和所用给药方式进行最优化的所有因素。
所要求保护的产品可以以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一 瓶冻干的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体，其用 含有水性稀释剂的第二个瓶子重构。需要重构的单个溶液瓶或者两只瓶子可 以重复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供 比当前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。
所要求保护的产品可以间接提供给患者，这可以通过为药房、门诊部或 者其它此类机构和设施提供澄清溶液或者两只瓶子，其含有一瓶冻干的至少 一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体，其用含有水性稀释 剂的第二个瓶子重构。在该情况中澄清溶液的大小可以最多达1升或更大， 从而提供较大的储库(reservoir)，可以一次或多次从该储库取回更小部分 的至少一种Ig衍生蛋白或其特定部分或变体溶液以转移到更小的瓶子中和 由药房或者门诊部提供给它们的顾客和/或患者。
包含这些单一瓶子系统的公知的装置包括用于递送溶液的那些笔形注 射器装置，如BD Pens，BDPen， 和GenotronormHumatro Reco-RoferonJ-tip Needle-FreeMedi-例如，由Becton Dickensen(Franklin Lakes，NJ， www.bectondickenson.com)、Disetronic(Burgdorf，瑞士，www.disetronic.com； Bioject，波兰，Oregon(www.bioject.com)；National Medical Products， Weston Medical(Peterborough，英国，www.weston-medical.com)、Medi-Ject Corp(Minneapolis，MN，www.mediject.com)生产或开发的那些。含有双 瓶系统的公知装置包括用于在递送重构溶液的药筒中重构冻干药物的那些 笔形注射器系统，如
当前要求保护的产品包括包装材料。包装材料除了提供管理机构要求的 信息外，还提供了该产品可以使用的条件。本发明的包装材料提供了患者使 用说明，其指导患者将所述至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定 部分或变体在水性稀释剂中重构，以形成溶液和在2-24小时或更长的时间 段内使用该双瓶、湿润/干燥产品的溶液。对于单瓶溶液产品，标签指出此 类溶液可以在2-24小时或更长时间段内使用。当前要求保护的产品可用于 人药品用途。
通过如下方法可以制备本发明的制剂，所述方法包括将至少一种IL-4 或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体和所选缓冲剂，优选含有盐水或 者所选盐的磷酸缓冲液混合。用常规溶解和混合方法实施至少一种Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体和缓冲剂在水性稀释剂中的混合。为了制备稳定的 制剂，例如，将水或者缓冲液中的至少一种经测量的量的Ig衍生蛋白或其 特定部分或变体以一定量与所需缓冲剂在水中混合，所述量足够提供所需浓 度的所述蛋白和缓冲剂。本领域技术人员将认识到该方法的变形。例如，所 加入的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以 关于浓度和所用给药方式进行最优化的所有因素。
可以将要求保护的稳定或者防腐制剂以澄清溶液或者两只瓶子提供给 患者，其含有一瓶冻干的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部 分或变体，其用含有溶于水性稀释剂中的防腐剂或缓冲剂和赋形剂的第二个 瓶子重构。需要重构的单个溶液瓶或者两只瓶子可以重复使用多次，并且可 以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当前可利用的治疗方案 更方便的治疗方案。
文中描述的稳定或者防腐制剂或溶液中的至少一种IL-4或IL-13的Ig 衍生蛋白或其特定部分或变体可以根据本发明通过多种递送方法给予患者， 所述递送方法包括皮下(SC)或者肌内(IM)注射；透皮、肺、跨粘膜、 植入、渗透泵、药筒、微型泵或者技术人员理解以及本领域公知的其它方法。
治疗应用
本发明还提供一种调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的至少 一种IL-4或IL-13纤维化相关状况或病状的方法，所述状况或病状包括但不 限于以下至少一种：间质性肺病、硬皮病、肝纤维化、肾纤维化、结节病、 肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩性瘢痕、心肌纤维化、老年性黄斑变性、或胶原血管 病等。见，例如《默克手册》(Merck Manual)，12-17版，Merck & Company， Rahway，NJ(1972，1977，1982，1987，1992，1999)，Pharmacotherapy Handbook， Wells等主编，第二版，Appleton and Lange，Stamford，Conn.(1998，2000)， 在此引入作为参考。
大多数创伤是通过修复愈合的，这意味着新形成的组织在结构上和化学 上与原有组织(瘢痕组织)不同。在组织修复的早期阶段，几乎总是涉及的 一个过程是在组织损伤区域形成瞬时结缔组织。该过程开始时是通过成纤维 细胞形成新的细胞外胶原基质。然后这种新的细胞外胶原基质用于在最终愈 合过程中支持结缔组织。在大多数组织中，最终愈合(过程)是形成包含结 缔组织的瘢痕。在具有再生性质的组织例如皮肤和骨中，最终愈合(过程) 包括原有组织的再生。这种再生的组织常常也具有一些疤痕特征，例如愈合 的折骨(healed bone fracture)的增厚。
创伤愈合的阶段通常包括发炎(通常1-3天)、迁移(通常1-6天)、 增生(通常3-24天)和成熟(通常1-12个月)。愈合过程是一种复杂的、 配合良好的生理过程，包括多种细胞类型的迁移、增生和分化以及基质组分 的合成。愈合过程可分为以下三个阶段：
i)止血和发炎。当血小板存在于循环系统之外并暴露于凝血酶和胶原 时，它们被激活并聚集。因此，血小板通过聚集并形成暂时的堵塞(plug) 而启动修复过程，确保凝血并防止细菌入侵。被激活的血小板启动凝固系统， 释放生长因子样血小板衍生生长因子(PDGF)和表皮生长因子(EGF)以及 转化生长因子(TGF)。首先入侵伤口的细胞是嗜中性白细胞，然后是被巨 噬细胞激活的单核细胞。
嗜中性白细胞的主要作用似乎是清除伤口的污染性细菌或将伤口与污 染性细菌隔开，通过除去死细胞和血小板而促进伤口愈合。如果伤口中不存 在细菌污染，嗜中性白细胞的浸润在约最初的48小时内停止。过量的嗜中 性白细胞被从来自血液的单核细胞的循环库中募集而来的组织巨噬细胞吞 噬。据信，巨噬细胞对于伤口愈合非常重要，因为它们还负责吞噬病原体并 清除组织碎片。而且，它们释放很多参与愈合过程后续事件的因子。巨噬细 胞吸引成纤维细胞，成纤维细胞启动胶原的生产。
ii)粒状组织形成和重新形成上皮。造成创伤后48小时内，成纤维细胞 开始增殖并从伤口边缘的结缔组织移动到伤口位置。成纤维细胞产生胶原和 葡萄糖氨基聚糖以及尤其是在伤口处产生低氧压力，刺激内皮细胞增殖。内 皮细胞形成新的毛细网络。
胶原酶和纤溶酶原激活物(plasminogen activator)是角化细胞分泌的。 如果伤口不被打扰并可得到很好的氧气和营养物质的营养条件，角化细胞将 迁移到(migrate over)伤口。据信，角化细胞仅迁移到有活力的(viable) 组织中，因此，角化细胞迁移到死组织下的区域和伤口的痂中。伤口区域通 过收缩而进一步缩小。
iii)皮肤重塑(Dermal Remodelling)。一旦重新形成上皮这一过程结 束，组织重塑就开始了。这个阶段，持续几年，其恢复了受伤组织的力量。
所有上述愈合过程有需要很长的时间。愈合速度受到伤口是否受感染、 个体的总体健康情况、外源物质(foreign bodies)的存在等因素的影响。诸 如感染、浸渍、脱水、较差的总体健康状况和营养不良等的一些病理状况可 导致形成长期溃疡例如局部缺血性溃疡。在至少表面愈合之前，伤口都有发 生持续感染或新感染的风险。因此，伤口愈合越快，就可以越早地解除风险。 因此，能够影响伤口愈合速度或对伤口愈合有有利影响的任何方法都是非常 有价值的。而且，由于几乎所有组织修复过程都包括早期的结缔组织形成， 刺激结缔组织形成以及后续过程被设想能够促进伤口愈合。
在此上下文中，术语“临床愈合”用于指这样一种情况，即不能直观地 (visually)观察到组织中断(interruption)，仅存在分散的(discrete)炎症 迹象例如淡红色或分散的肿胀组织。此外，当器官处于放松状态或未被碰触 时，没有疼痛的不适(complaints of pain)。
如上所述，本发明涉及利用釉基质、釉基质衍生物和/或釉基质蛋白作 为创伤愈合物质，即加速、刺激或促进皮肤或粘膜创伤愈合的物质。因此， 一种很重要的用途是用作组织再生和/或修复物质。而且，由于创伤愈合效 果，釉基质、釉基质衍生物和/或釉基质蛋白具有缓解疼痛的效果。
所述方法可任选包括给予需要所述调节、处理或治疗的细胞、组织、器 官、动物或患者有效量的至少一种包含至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋 白或其特定部分或变体的组合物或药物组合物。
治疗处理.本发明的任何方法可以包括治疗IL-4或IL-13纤维化介导 的紊乱的方法，包括给予需要调节、处理或治疗的细胞、组织、动物或患者 有效量的包含至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的 组合物或药物组合物。
一般地，病理学状况的治疗是通过给予有效量或剂量的至少一种IL-4 或IL-13的Ig衍生蛋白组合物而实现的，该组合物中平均总共含有至少约 0.01-500mg至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体/千 克患者体重/剂，优选地每单次或多次给药约0.01-100mg Ig衍生蛋白或其 特定部分或变体/千克患者体重，这取决于组合物中含有的比活性。或者， 有效血清浓度可以包括每单次或多次给药0.1-5000μg/ml的血清浓度。适当 的剂量是医学从业者已知的，当然，取决于特定的疾病状态、给予的组合物 的比活性、以及患者正在进行的具体治疗。在一些情况下，为获得需要的治 疗量，必须提供重复给药，即重复特定监测或计量剂量的各次给药，其中重 复各次给药，直到达到需要的每日剂量或效果。
优选的剂量可以任选地包括0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、 0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、 18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、 34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、 51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、64、65、66、67、 68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、 85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99和/或100 mg/kg/给药，或其中的任意范围、任意值或任意分数，或每单次或多次给药 达到0.1、0.5、0.9、1.0、1.1、1.2、1.5、1.9、2.0、2.5、2.9、3.0、3.5、3.9、 4.0、4.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、 9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、20、12.5、12.9、13.0、13.5、 13.9、14.0、14.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、 8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、12、12.5、12.9、 13.0、13.5、13.9、14、14.5、15、15.5、15.9、16、16.5、16.9、17、17.5、 17.9、18、18.5、18.9、19、19.5、19.9、20、20.5、20.9、21、22、23、24、 25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、 85、90、96、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、 2000、2500、3000、3500、4000、4500、和/或5000μg/ml血清浓度，或 其中的任意范围、任意值或任意分数。
或者，给药剂量可以根据已知因素而改变，例如具体试剂的药代动力学 特征，以及其给药模式和途径；接受者的年龄、健康和体重；症状的性质和 范围；同时进行的治疗的类型、频率，以及需要的效果。活性成分的剂量通 常为约0.1-100mg/kg体重。通常为0.1-50，优选地0.1-10mg/kg/给药， 或以有效获得需要的结果的持续释放形式。
作为非限制性实例，人或动物的治疗可以通过一次或周期剂量的至少一 种本发明的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体而提供，其剂量为0.1-100 mg/kg，例如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、 28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/kg/日，在第1、2、3、 4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、 22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、 38、39、或40天中的至少一天给药，或作为选择或额外地在第1、2、3、4、 5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、 23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、 39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、或52周的至少 一周给药，或作为选择或额外地在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、 12、13、14、15、16、17、18、19、或20年中的至少一年中给药，或其任 意组合，采用单次输注或重复给药。
适于内部给药的剂型(组合物)一般包含约0.1mg-约500mg活性成分 /单位或容器。在这些药物组合物中，活性成分的量一般为组合物总重量的 约0.5-99.999wt％。
对于肠胃外给药，可以将Ig衍生蛋白或其特定部分或变体配制为与药 学可接受的肠胃外载体结合或分别提供的溶液、悬浮液、乳状液或冷冷冻干 燥燥的粉末。这些载体的例子为水、盐水、林格氏液、右旋糖溶液、和1-10％ 的人血清白蛋白。也可以使用脂质体和非水性载体如固定的油。载体或冷冻 干燥的粉末可以含有维持等渗性(如氯化钠、甘露醇)和化学稳定性(如缓 冲剂和防腐剂)。该制剂可以通过已知或适当技术灭菌。
适当的药物载体描述于本领域的标准参考文献Remington′s Pharmaceutical Sciences，A.Osol的最新版本。
替代给药
可以根据本发明采用许多公知的和开发的方式给予药学有效量的本发 明的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体，尽管在以 下说明书中使用了肺部给药，根据本发明可以使用其它给药方式，得到适当 的结果。
本发明的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白在载体中递送，作为溶液、乳状 液、胶体或悬浮液、或作为干粉末递送，采用适于吸入或通过本文描述的或 本领域公知的其它方式进行给药的任何设备和方法。
肠胃外制剂和给药
肠胃外给药的制剂可以包含作为常规赋形剂的无菌水或盐水、聚链烷醇 如聚乙二醇、植物油、氢化萘等。可以通过适当的乳化剂或润湿剂和悬浮剂 根据已知方法制备用于注射的水性或油性悬浮液。用于注射的试剂可以是无 毒的、非口服给药的稀释剂，如水溶液或无菌可注射溶液或溶剂中的悬浮液。 作为可使用的载体或溶剂，可以使用水、林格氏液、等渗盐水等；作为普通 溶剂或悬浮溶剂，可以使用无菌的不挥发油。对于这些目的，可以使用任意 类型的不挥发油和脂肪酸，包括天然或合成的或半合成的脂肪油或脂肪酸； 天然或合成的或半合成的甘油单酯或二酯或三酯。肠胃外给药是本领域公知 的，包括，但不限于，常规注射工具、描述于美国专利号5,851,198的气加 压的无针头注射设备，和描述于美国专利号5,839,446的激光穿孔器设备， 在此全文引入上述专利作为参考。
替代递送
本发明进一步涉及通过肠胃外、皮下、肌内、静脉内、快速注射、阴道、 直肠、颊、舌下、鼻内或透皮方式而给予至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体。可以制备抗-IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特 定部分或变体的组合物，用于肠胃外(皮下、肌内或静脉内)给药，特别是 以液体溶液或悬浮液给药；用于阴道或直肠给药，特别是以半固体形式给药， 例如，以霜和栓剂形式给药；用于颊部或舌下给药，特别是以片剂或胶囊形 式给药；或用于鼻内给药，特别是以粉末、鼻滴液或气溶胶或某些制剂形式 给药；或用于透皮给药，特别是以凝胶、油膏、洗液、悬浮液或贴剂递送系 统的形式给药，同时用化学增强剂如二甲基亚砜修饰皮肤结构或增加透皮贴 剂的药物浓度(Junginger，等″Drug Permeation Enhancement”；Hsieh，D.S.， Eds.，pp.59-90(Marcel Dekker，Inc.New York 1994，)在此全文引入作为参 考)，或使用氧化剂以便将含有蛋白和肽的制剂应用于皮肤上(WO 98/53847)，或施加电场以便产生电穿孔等瞬时转运途径，或增加带电药物通 过皮肤的迁移率，如离子电渗疗法，或应用超声，如超声电渗疗法(美国专 利号4,309,989和4,767,402)(上述文献和专利在此全文引入作为参考)。
肺/鼻给药
对于肺给药，优选地，至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定 部分或变体组合物以有效到达肺的下气道或鼻窦的颗粒大小进行递送。根据 本发明，至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体可以通 过本领域公知的各种吸入或鼻设备递送，用于通过吸入进行治疗剂的给药。 这些设备可以将气溶胶化的制剂沉积在患者的鼻窦腔或肺泡中，所述设备包 括计量吸入器、喷洒器、干粉产生器、喷雾器等。其它适于指Ig衍生蛋白 或其特定部分或变体的肺或鼻给药的设备是本领域公知的。所有这些设备可 以使用适于以气溶胶形式给予分散Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的制剂。 这些气溶胶可以由溶液(水性和非水性)或固体颗粒组成。
等计量吸入器一般使用推进气体，并且在吸入时要求激活(见， 例如WO 94/16970，WO 98/35888)。由Inhale Therapeutics出售的 TurbuhalerTM(Astra)、(Glaxo)、(Glaxo)、SpirosTM吸入器 (Dura)等干粉吸入器以及粉末吸入器使用呼吸激活的混合粉末 (US 4668218 Astra，EP 237507 Astra，WO 97/25086 Glaxo，WO 94/08552 Dura， US 5458135 Inhale，WO 94/06498 Fisons，在此全文引入作为参考)。AERxTM Aradigm、喷洒器(Mallinckrodt)和Acorn喷洒器(Marquest Medical Products)((US 5404871 Aradigm，WO 97/22376)，上述参考文献在 此全文引入作为参考)从溶液产生气溶胶，而计量吸入器、干粉吸入器等产 生小颗粒气溶胶。这些商购吸入设备的具体例子，用于代表适于实施本发明 的具体设备，不准备限制本发明的范围。
优选地，包含至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变 体的组合物通过干粉吸入器或喷雾器递送。用于本发明的至少一种Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体的给药的吸入设备具有一些需要的特征。例如，通 过吸入设备递送是有利的，它可靠、可重复并且准确。吸入设备可以任选地 递送小的干颗粒，例如小于约10μm，优选地约1-5μm，以便能够较好地 呼吸。
作为喷雾给予IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物 可以迫使至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的 悬浮液和溶液在压力下通过喷嘴，从而产生含有IL-4或IL-13的Ig衍生蛋 白或其特定部分或变体组合物蛋白的喷雾。可以选择喷嘴大小和构型、施加 的压力和填入液体的速度而达到需要的输出量和颗粒大小。可以通过连接于 毛细管或喷嘴的电场产生电喷雾。有利的是，由喷雾递送的至少一种IL-4 或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白的颗粒大小小于约 10μm，优选地约1μm-约5μm，最优选地约2μm-约3μm。
适用于喷雾器的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或 变体组合物蛋白的制剂一般包含溶于水溶液中的Ig衍生蛋白或其特定部分 或变体组合物蛋白，其浓度为约每毫升溶液约0.1-约100mg至少一种IL-4 或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白(或mg/gm)，或其 中的任意范围或任意值，例如，但不限于，.1、.2、.3、.4、.5、.6、.7、.8、.9、 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、 90或100mg/ml或mg/gm。该制剂可以包含赋形剂、缓冲剂、等渗试剂、防 腐剂、表面活性剂和优选地锌等试剂。该制剂也可以包含赋形剂或用于稳定 Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白的试剂，例如缓冲剂、还原剂、 大分子蛋白或碳水化合物。用于配制Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合 物蛋白的大分子蛋白包括白蛋白、鱼精蛋白等。用于配制Ig衍生蛋白或其 特定部分或变体组合物蛋白的典型碳水化合物包括蔗糖、甘露醇、乳糖、海 藻糖、葡萄糖等。Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白制剂也可以包 含表面活性剂，它可以减少或防止由于溶液形成气溶胶时的雾化导致的表面 诱导的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白的聚集。可以使用各种 常规的表面活性剂，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，以及聚氧乙烯山梨糖醇脂 肪酸酯。其含量一般为制剂重量的约0.001-14％。用于本发明的特别优选 的表面活性剂为聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯、聚山梨糖醇酯80、聚山 梨糖醇酯20等。用于IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的蛋 白制剂的其它试剂是本领域公知的，也可以包含在制剂中。
通过喷洒器(Nebulizer)给予IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部 分或变体组合物
可以通过喷洒器给予Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白，例 如喷射喷洒器或超声喷洒器。一般地，在喷射喷洒器中，用压缩气体源通过 一个孔而产生高速气体喷射。当其它膨胀超过喷嘴时，产生低压区，该区将 Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白溶液拉拽通过与液体储存器连 接的毛细管。通过毛细管的液体流出管时被剪切成不稳定的细丝和微滴，产 生气溶胶。可以使用各种构型、流速和挡板类型一般从给定的喷射喷洒去达 到需要的性能特征。在超声喷洒器中，采用高频电能产生振动、机械能，一 般采用压电式换能器。该能量被直接或通过耦合流体转移至Ig衍生蛋白或 其特定部分或变体组合物制剂，产生包含Ig衍生蛋白或其特定部分或变体 组合物蛋白的气溶胶。有利地，由喷洒器递送的Ig衍生蛋白或其特定部分 或变体组合物蛋白的颗粒大小小于约10μm，优选地约1μm-约5μm，最优 选地约2μm-约3μm。
在喷射喷洒器或超声喷洒器中适用的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体制剂的浓度一般为每毫升溶液约0.1mg-约100mg 至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体蛋白。该制剂可 以包含赋形剂、缓冲剂、等渗试剂、防腐剂、表面活性剂和优选地锌等试剂。 该制剂也可以包含赋形剂或用于稳定至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白 或其特定部分或变体组合物蛋白的试剂，例如缓冲剂、还原剂、大分子蛋白 或碳水化合物。用于配制至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部 分或变体组合物蛋白的大分子蛋白包括白蛋白、鱼精蛋白等。用于配制至少 一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的典型碳水化合物包 括蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖等。至少一种IL-4或IL-13的Ig 衍生蛋白或其特定部分或变体制剂也可以包含表面活性剂，它可以减少或防 止由于溶液形成气溶胶时的雾化导致的表面诱导的至少一种IL-4或IL-13的 Ig衍生蛋白或其特定部分或变体的聚集。可以使用各种常规的表面活性剂， 例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，以及聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。其含量一般 为制剂重量的约0.001-4％。用于本发明的特别优选的表面活性剂为聚氧乙 烯失水山梨糖醇单油酸酯、聚山梨糖醇酯80、聚山梨糖醇酯20等。用于Ig 衍生蛋白或其特定部分或变体等蛋白制剂的其它试剂是本领域公知的，也可 以包含在制剂中。
通过计量吸入器给予IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体 组合物
在计量吸入器(MDI)中，在一个小罐中装有作为包含液化的压缩气体的 混合物的抛射剂、至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变 体和任意赋形剂或其它添加剂。计量阀的激活释放作为气溶胶的混合物，优 选地含有大小小于约10μm，优选地约1μm-约5μm，最优选地约2μm-约 3μm的颗粒。需要的气溶胶颗粒大小可以通过使用由本领域技术人员公知 的各种方法，包括喷射研磨、喷雾干燥、临界点浓缩等方法产生的Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体组合物蛋白制剂而获得。优选的计量吸入器包括由 3M或Glaxo制造并且使用氢氟碳抛射剂的那些。
计量吸入器设备中使用的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特 定部分或变体制剂一般包含精细分割的粉末，其中含有作为在非水介质中的 悬浮物的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体，例如， 在表面活性剂的帮助下悬浮于一种抛射剂中。抛射剂可以是用于此目的的任 何常规材料，如氯氟碳、氢氯氟碳、氢氟碳或烃，包括三氯氟甲烷、二氯二 氟甲烷、二氯四氟乙醇和1，1，1，2-四氟乙烷、HFA-134a(氢氟链烷-134a)、 HFA-227(氢氟链烷-227)等。抛射剂优选地是氢氟碳。可以选择表面活性 剂以稳定作为抛射剂中的悬浮物的至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或 其特定部分或变体，从而保护活性试剂免受化学降解等。适当的表面活性剂 包括山梨糖醇三油酸酯、大豆卵磷脂、油酸等。在一些情况下，溶液气溶胶 优选地使用乙醇等溶剂。本领域已知的用于蛋白制剂的其它试剂例如蛋白， 也可以包含在制剂中。
本领域的普通技术人员将认识到，本发明的方法可以通过本文没有描述 的设备对至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体组合物 进行肺部给药而实现。
口服制剂和给药
口服制剂依赖于佐剂(如间苯二酚和非离子型表面活性剂如聚氧乙烯油 酯和正十六烷基聚乙烯酯)的共同给药而人工增加肠壁的通透性，并且依赖 于酶抑制剂(如胰蛋白酶抑制剂、二异丙基氟代硫酸酯(DFF)和抑肽酶)的 共同给药而抑制酶促降解。用于口服给药的固态剂型的活性组成化合物可以 与至少一种添加剂混合，所述添加剂包括蔗糖、乳糖、纤维素、甘露醇、海 藻糖、棉籽糖、麦芽糖醇、右旋糖苷、淀粉、琼脂、arginates、几丁质、脱 乙酰壳聚糖、果胶、黄芪树胶、阿拉伯树胶、明胶、胶原、酪蛋白、白蛋白、 合成或半合成聚合物和甘油酯。这些剂型也可以包含其它类型的添加剂，如 非活性稀释剂、润滑剂如硬脂酸镁、对羟基苯甲酸酯、防腐剂如山梨酸、抗 坏血酸、α生育酚、抗氧化剂如半胱氨酸、崩解剂、粘合剂、增稠剂、缓冲 剂、增甜剂、矫味剂、芳香剂等。
片剂和丸剂可以进一步加工成肠衣制剂。用于口服给药的液体制剂包括 允许医学应用的乳状液、糖浆、酏剂、悬浮液和溶液制剂。这些制剂可以含 有所述领域常用的非活性稀释剂，如水。也已经描述将脂质体用作胰岛素和 肝素的药物递送系统(美国专利号4,239,754)。最近，已经使用混合氨基 酸(类蛋白)的人工聚合物微球体来递送药物(美国专利号4,925,673)。 此外，美国专利号5,879,681和美国专利号5,5,871,753中描述的载体化合物 也已经用于口服递送生物活性试剂，这是本领域公知的。
粘膜制剂和给药
对于通过粘膜表面吸收，给予至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或 其特定部分或变体的组合物和方法包括，含有多种亚微米颗粒、粘膜吸附性 大分子、生物活性肽和水性连续相的乳状液，它通过达到乳状液颗粒的粘膜 吸附而促进通过粘膜表面的吸收(美国专利号5,514,670)。适于施加本发 明的乳状液的粘膜表面可以包括角膜、结膜、颊、舌下、鼻、阴道、肺、胃、 肠和直肠给药途径。用于阴道或直肠给药的制剂，如栓剂，可以包含赋形剂， 例如聚链烷醇、凡士林、可可油等。用于鼻内给药的制剂可以是固体，包含 赋形剂，例如乳糖，或可以是水性或油性的鼻滴液。对于颊部给药，赋形剂 包括糖、硬脂酸钙、硬脂酸镁、预胶化淀粉等(美国专利号5,849,695)。
透皮制剂和给药
对于透皮给药，将至少一种IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分 或变体包被于递送载体，如脂质体或聚合纳米颗粒、微颗粒、微胶囊或微球 体中(除非特别指出，统一称作微颗粒)。已知有许多适当的设备，包括由 以下成分组成的微颗粒：合成聚合物如多羟基酸，如聚乳酸、聚乙醇酸及其 共聚物、聚原酸酯、聚酐和聚磷腈，以及天然聚合物如胶原、聚氨基酸、铝 和其它蛋白、藻酸盐和其它多糖、及其组合(美国专利号5,814,599)。
延长的给药和制剂
有时可能需要在延长的时间内向受试者递送本发明的化合物，例如，单 次给药在一周至一年的时间。可以使用各种缓释、储存或植入剂型。例如， 该剂型可以包含化合物的药学可接受的无毒盐，该化合物在体液中具有低溶 解度，例如，(a)多价酸的酸加成盐，所述酸例如磷酸、硫酸、柠檬酸、酒石 酸、鞣酸、扑酸(pamoic acid)、藻酸、聚谷氨酸、萘单或二磺酸、聚半乳 糖醛酸等；(b)多价金属阳离子的盐，所述阳离子如锌、钙、铋、钡、镁、铝、 铜、钴、镍、镉等，或与有机阳离子如N，N′-二苄基-乙二胺或乙二胺形成的 盐；或(c)：(a)和(b)的组合物，如鞣酸锌。此外，本发明的化合物或优选地 相对不溶的盐，如前面描述的化合物和盐，可以与芝麻油等适于注射的物质 一起配制于单硬脂酸铝凝胶等凝胶中。特别优选的盐是锌盐、鞣酸锌盐、巴 莫酸盐等。用于注射的缓释储存制剂的另一种类型包含用于包被于胶囊中的 分散的化合物或盐，所述化合物或盐位于缓慢降解、无毒、非抗原性的聚合 物中，如描述于美国专利号3,773,919的聚乳酸/聚乙醇酸聚合物。该化合物 或优选地相对不溶的盐，如前面描述的化合物和盐，也可以配制于胆固醇基 质硅橡胶丸，特别是用于动物。其它缓释、储存或植入制剂，如气体或液体 脂质体是本领域公知的(美国专利号5,770,222和″Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems″，J.R.Robinson主编，Marcel Dekker，Inc.，N. Y.，1978)。
前面已经一般性地描述了本发明，参考以下实施例可以更容易理解本发 明，实施例是用于举例说明，而不是限制性的。
实施例1：抗-IL-4或IL-13免疫球蛋白衍生蛋白的产生、克隆及其在哺 乳动物细胞中的表达
用已知方法产生抗-IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白，例如用人IL-4或IL-13 免疫的表达人Ig衍生蛋白的鼠科动物或转基因小鼠，用已知方法和试验例 如本领域所知的或本文所述的那些方法和试验(参见，例如 www.copewithcytokines.de，IL-4或IL-13，关于IL-4或IL-13蛋白、IL-4或 IL-13试验的描述和参考，通过参考全部纳入本文，本领域已知)从其中分 离B细胞、克隆并选择其对IL-4或IL-13的特异性和抑制活性。
用本领域已知方法，选择表达IL-4或IL-13特异性Ig衍生蛋白或融合 蛋白例如本发明的抗-IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白的克隆从而使这些克隆中 和或抑制至少一种IL-4或IL-13，并且至少符合以下标准中的3-7个：
标准
1、结合至少一种人野生型(wt)重组或纯化的IL-4或IL-13、IL-4或IL-13 受体和/或其它特定的IL-4或IL-13突变蛋白，例如，但不限于Ile48、Val48、 Gln90、Glu90、Leu95、Ile95、Leu96、Ile96、Leu99、Ile99、Phe103、Tyr103、 Asn130和/或Gln130中的至少一种；SEQ ID NO：42、43或44的1-145氨基 酸，例如但不限于SEQ ID NO：42、43或44的氨基酸1-10、10-20、20-30、 30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、 120-130、130-140、和/或14-145中的至少一个(ELISA中)。
2、特异性地结合重组wt人IL13或IL-4或IL-13受体，但不特异性结 合结构上相近的细胞因子人GM-CSF(ELISA中)。
3、抑制人重组wt人IL13(优选地)与人IL-4或IL-13受体或适宜动 物的IL-4或IL-13受体相互作用，并且ND50≤10nM。
4、与阴性对照相比，抑制人肿瘤TF-1细胞的人野生型人IL-4或IL-13 依赖性增殖。
5、对人IL 13wt或特定突变体的表观Kd≤0.5nM(如BIAcore所测 定)。
6、在新鲜人B细胞中抑制人IL13wt重组人IL-4或IL-13依赖性体外 IgE产生，比阴性对照抑制更强，如B9分析。
7、与天然wt人IL13交叉反应的效力类似于与重组IL-4或IL-13交叉 反应的效力，如B9分析和/或ELISA中所测定。
克隆重链、轻链CDR、可变区或可变区和恒定区并插入合适的表达载 体中。一般的哺乳动物表达载体含有至少一个介导mRNA的转录起始的启 动子元件、Ig衍生蛋白或其特定部分或变体编码序列、转录物的转录终止和 多腺苷酸化所需的信号。其它元件包括增强子、Kozak序列和干扰序列，其 侧翼为RNA剪接的供体和受体位点。高效转录可以用来自SV40的早期和 晚期启动子、来自逆转录病毒(例如，RSV、HTLVI、HIVI)的长末端重复 序列(LTRS)和巨细胞病毒(CMV)的早期启动子实现。然而，也可以使 用细胞元件(例如，人肌动蛋白启动子)。用于实施本发明的适宜的表达载 体包括，例如，诸如pIRES 1neo，pRetro-Off，pRetro-On，PLXSN，或pLNCX (Clonetech Labs，Palo Alto，CA)，pcDNA3.1(+/-)，pcDNA/Zeo(+/-)或 pcDNA3.1/Hygro(+/-)(Invitrogen)，PSVL和PMSG(Pharmacia，Uppsala， Sweden)，pRSVcat(ATCC 37152)，pSV2dhfr(ATCC 37146)和pBC12MI (ATCC 67109)的载体。可以使用的哺乳动物宿主细胞包括人Hela 293、H9 和Jurkat细胞、小鼠NIH3T3和C127细胞、Cos 1、Cos 7和CV 1、鹌鹑 QC1-3细胞、小鼠L细胞和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
或者，基因可以在含有整合到染色体中的该基因的稳定细胞系中表达。 用选择标记如dhfr、gpt、新霉素或者潮霉素的共转染，可以鉴定和分离所 转染的细胞。
还可以扩增所转染的基因，以大量表达所编码的Ig衍生蛋白或其特定 部分或变体。DHFR(二氢叶酸还原酶)标记可用于开发携带目标基因的数 百或甚至数千拷贝的细胞系。另一种有用的选择标记是谷氨酰胺合酶(GS) (Murphy，等人，Biochem.J.227：277-279(1991)；Bebbington，等人， Bio/Technology 10：169-175(1992))。使用这些标记，使哺乳动物在选择 性培养基上生长，并选择具有最高抗性的细胞。这些细胞系含有整合到染色 体中的扩增基因。中国仓鼠卵巢(CHO)和NSO细胞通常用于产生Ig衍生 蛋白或其特定部分或变体。
表达载体pC1和pC4含有劳斯肉瘤病毒的强启动子(LTR)(Cullen， 等人，Molec.Cell.Biol.5：438-447(1985))和CMV-增强子的片段(Boshart， 等人，Cell 41：521-530(1985))。多克隆位点，例如，具有限制酶切割位 点BamHI、XbaI和Asp718的多克隆位点，会促进克隆目的基因。所述载体 还含有大鼠前胰岛素原基因的3’内含子、多腺苷酸化位点和终止信号。
在CHO细胞中的克隆和表达
载体pC4用于表达IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其特定部分或变体。 质粒pC4衍生自质粒pSV2-dhfr(ATCC保藏号37146)。该质粒含有处于 SV40早启动子控制下的小鼠DHFR基因。用这些质粒转染的缺少二氢叶酸 活性的中国仓鼠卵巢细胞或其它细胞，可通过在补加化疗剂氨甲蝶呤的选择 培养基(例如，α缺陷(minus)MEM，Life Technologies，Gaithersburg， MD)上生长以进行选择。已经详细记载了抗氨甲蝶呤(MTX)的细胞中 DHFR基因的扩增(参见，例如，F.W.Alt等，J.Biol.Chem.253：1357-1370 (1978)；J.L.Hamlin和C.Ma，Biochem.et Biophys.Acta 1097：107-143(1990)； 和M.J.Page和M.A.Sydenham，Biotechnology 9：64-68(1991))。在浓度增加 的MTX中生长的细胞，通过过量产生靶酶DHFR(这是由于DHFR基因的 扩增)产生对所述药物的抗性。如果第二种基因连接到DHFR基因，那么该 基因通常被共同扩增和过量表达。本领域公知该方法可以用于开发携带所扩 增基因的1000个拷贝以上的细胞系。随后，当撤掉氨甲蝶呤时，得到含有 整合到宿主细胞的一个和多个染色体中的扩增基因的细胞系。
质粒pC4含有用于表达感兴趣基因的劳斯肉瘤病毒的长末端重复序列 (LTR)的强启动子(Cullen等，Molec.Cell.Biol.5：438-447(1985))以及从人巨 细胞病毒(CMV)立即早期基因的增强子中分离得到的片段(Boshart等， Cell 41：521-530(1985))。启动子下游是BamHI、XbaI和Asp718限制性酶断 裂位点，这些位点允许基因在此整合。除这些克隆位点之外，该质粒还含有 大鼠前胰岛素原基因的聚腺苷酸化位点和3’内含子。其他高效启动子也可以 用于表达，例如人β肌动蛋白启动子、SV40早期或晚期启动子或来自于其 它逆转录病毒(如HIV和HTLVI)的长末端重复序列。Clontech的Tet-Off和 Tet-On基因表达系统和相似的系统，可以用于在哺乳动物细胞中以经调节的 途径表达IL-4或IL-13(M.Gossen，和H.Bujard，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5547-5551(1992))。对于mRNA的聚腺苷酸化，也可以使用例如人生长 激素或球蛋白基因的其它信号。携带整合到染色体中的目的基因的稳定细胞 系，也可以通过用可选择标记如gpt、G418或潮霉素共转染而进行选择。在 开始时使用G418+氨甲蝶呤等一种以上的可选择标记是有利的。用限制酶消 化pC4质粒，然后通过本领域公知的程序，用小牛肠磷酸酶去磷酸化。然后 从1％琼脂糖凝胶分离载体。
根据已知的方法步骤，使用编码完整IL-4或IL-13的Ig衍生蛋白或其 特定部分或变体的DNA序列，其相应于本发明的IL-4或IL-13的Ig衍生蛋 白或其特定部分或变体的HC和LC可变区。在此构建体中也使用编码适当 人恒定区(即HC和LC区)的分离核酸(例如载体p1351中提供的)。
然后用T4DNA连接酶连接分离的可变区和恒定区编码DNA和去磷酸 化的载体。然后转化大肠杆菌HB 101或XL-1Blue细胞，并且用例如限制 酶分析，鉴定含插入pC4质粒的片段的细菌。
用缺乏活性DHFR基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞进行转染。采用脂质 转染，用0.5微克pSV2-neo质粒共转染5微克表达质粒pC4。pSV2-neo质 粒含有显性选择标记，即来自于Tn5的neo基因，它编码一种酶，该酶赋予 对包括G418的抗生素的抗性。将这些细胞种植在补加1微克/ml G418的α 缺陷MEM中。两天后，用胰蛋白酶消化细胞，并且种植在杂交瘤克隆板上 (Greiner，Germany)，置于补加10、25或50ng/ml氨甲蝶呤+1微克/ml G418 的α缺陷MEM中。大约10-14天后，用胰蛋白酶消化单个克隆，然后种植 在6孔培养皿或10ml烧瓶中，使用不同浓度的氨甲蝶呤(50nM，100nM，200 nM，400nM，800nM)。然后将在最高浓度氨甲蝶呤下生长的细胞转移到新的 6孔板中，该板含有更高浓度的氨甲蝶呤(1mM，2mM，5mM，10mM，20 mM)。重复同样的程序，直到获得在100-200mM的浓度下生长的克隆。例 如，通过SDS-PAGE和蛋白印迹或反相HPLC分析所需基因产物的表达。
进一步鉴定了完全人源化的抗-IL-4或IL-13蛋白的Ig衍生蛋白。产生 的几种Ig衍生蛋白预期亲和力常数在1x109和9x1012之间。这些完全人源化 的单克隆Ig衍生蛋白的高亲和力使其适用于治疗IL-4或IL-13蛋白-依赖性 疾病、病状(pathologies)或相关状况。
实施例3：纤维化与IL-13或IL-14
在肺活检中测定IL-13
肺活检样品由密歇根大学的Cory Hogaboam博士通过MTA提供。将来 自UIP和肺肿瘤正常边缘的肺活检样品在含有完全蛋白酶抑制剂(Complete Protease Inhibitor)(Roche)的PBS中均质化。按照厂家的方案通过卢米尼 克斯(luminex)测量IL-13的含量。使用BCA分析测量各个肺活检样品中 的总蛋白。将IL-13含量标准化成各个患者样品中的蛋白毫克数。
成纤维细胞分离与纯化
细胞系通过密歇根大学的Cory Hogaboam博士提供。所有原代成纤维细 胞如之前所述分离(21)。从取自UIP患者(n＝4)的肺活检样品分离肺成 纤维细胞，并且将这些称为“纤维化成纤维细胞”。还从肺肿瘤切除期间所 取的肺组织(n＝5)分离成纤维细胞并且通过组织学分析确定这些样品是非 纤维化的。这些源自非纤维化组织的成纤维细胞被称为“非纤维化成纤维细 胞”。
成纤维细胞基因表达
将人肺成纤维细胞以100,000个细胞/孔涂布到24孔板(Costar，Corning， NY)上并使其贴壁8小时。然后用PBS洗涤细胞并在无血清培养基(含有 1-谷氨酰胺的DMEN，Pen/Strep)中培养过夜。然后在存在或不存在TGFβ-1 (1或10ng/mL)、PDGF-AB(20或200ng/mL)、IL-4(1或10ng/mL) 或IL-13(1或10ng/mL)的条件下刺激细胞24小时。TGFβ1、PDGF-AB、 IL-4和IL-13是自R&D Systems。去除上清并用RNeasy Plus小型试剂盒 (QIAGEN，Valencia，CA)按照厂家的说明分离RNA并用反转 录试剂(Applied Biosystems，Foster City，CA)将RNA反转录成cDNA。通 过实时PCR使用Universal PCR Master Mix(Applied Biosystems) 和预开发的(pre-developed)Gene Expression Assays(Applied Biosystems)按照厂家的说明来测定促纤维化基因表达。
使用比较CT法计算定量的基因表达，其中CT值测定为首次检测到基 因表达的循环数阈值。将感兴趣基因的基因表达倍数变化首先标准化成持家 基因18S，给出ΔCT值。纤维化和非纤维化成纤维细胞之间表达的倍数变化 计算为：ΔCT(非纤维化)-ΔCT(纤维化)＝ΔΔCT，其中非纤维化基因表达用作校准 物。通过ΔΔCT＝ΔCT(未刺激)-ΔCT(刺激)来计算由于体外刺激引起的基因表达 的倍数变化，其中未刺激样品用作校准物。然后计算2-ΔΔCT给出最终变化倍 数相对于校准物的相对值。
来自非纤维化和UIP患者的肺活检中的IL-13蛋白含量
已经显示IL-13在UIP患者中上调(9)。我们检测到，与自非纤维化 肺组织获得的活检相比，肺纤维化患者的肺活检中蛋白水平的IL-13含量增 加(*p＜0.05，用韦尔什(Welch’s)修正的学生非成对t-检验)。
与自非纤维化肺部位分离的成纤维细胞相比，与UIP成纤维细胞的纤维化 相关的各种基因的表达增加
关键词：
SMA：α-平滑肌肌动蛋白
PCOL1：原胶原I
PCOL3：原胶原III
CTGF：结缔组织生长因子
TGFβ-1：转化生长因子-1
TGFβR1：I型TGF受体类型
TGFβR2：II型TGF受体类型
IL13Rα1：白细胞介素-13受体α1亚基
IL13R α2：白细胞介素-13受体α2亚基
为测定与非纤维化(n＝4)成纤维细胞相比UIP成纤维细胞(n＝3)中 促纤维化基因表达的基线表达是否不同，比较了来自两组患者的未刺激细胞 之间的基因表达。数据显示，在所有分析的基因中UIP成纤维细胞具有更高 的基线纤维化基因表达。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4对αSMA表达的影响
非纤维化组织相对不含肌成纤维细胞(4)。肌成纤维细胞含有给于这 些细胞收缩表型的平滑肌肌动蛋白纤维，用于闭合伤口。因此α-平滑肌肌动 蛋白(αSMA)基因表达是肌成纤维细胞的标记物。TGFβ1是原型促纤维化 生长因子，其在之前已经显示能诱导αSMA表达(22)。我们在此观察了非 纤维化和纤维化成纤维细胞中αSMA的TGFβ1诱导，其中诱导量在纤维化 成纤维细胞中更高。PDGF、IL-13和IL-4仅在纤维化成纤维细胞中诱导 αSMA表达中度增加。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4对原胶原I(A)和原胶原III(B)基 因表达的影响
胶原沉积是纤维化的主要特征。之前已经显示原胶原I和原胶原III两 个基因与UIP相关。据显示原胶原I和III在UIP样品中增加，在肺和全身 都增加(23)(24)(25)。本文所示的数据显示IL-13和IL-4在UIP成纤 维细胞中诱导原胶原I和原胶原III。此外，基因诱导的程度与纤维化成纤维 细胞中TGFβ1和PDGF-AB相当。IL-4还在非纤维化成纤维细胞中诱导原胶 原中度增加。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4-诱导的TGFβ1基因表达
已经表明了TGFβ1的促纤维化作用。TGFβ1还具有自分泌产生循环， 其中TGFβ1进一步诱导TGFβ1产生(26、27)。本文也在非纤维化和纤维 化成纤维细胞中都观察到了这种现象。所得数据显示IL-13和IL-4也可以增 强TGFβ1基因表达。与TGFβ1类似，在纤维化成纤维细胞中PDGF和两种 2型细胞因子诱导TGFβ1基因的程度更高。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4-诱导的CTGF基因表达
已经显示结缔组织生长因子(CTGF)能介导一些TGFβ1诱导胶原产生 的作用(28)(29)(30)。TGFβ1在纤维化和非纤维化成纤维细胞中都能 诱导CTGF基因表达增加。此外，低剂量PDGF(20ng/ml)以及IL-13和 IL-4在UIP成纤维细胞中诱导CTGF基因表达增加。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4-诱导的TGFβRI(A)和TGFβRII(B) 基因表达
除了增强TGFβ1基因表达之外，TGFβ1和PDGF在UIP成纤维细胞中 诱导两种TGFβ受体亚基增加。已经发现TGFβ受体在硬皮病成纤维细胞中 增加(31、32)。所得数据还显示IL-13和IL-4在纤维化细胞中诱导两种 TGFβ受体亚基增加，其中IL-4介导最强的TGFβRII基因诱导。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4-诱导的IL13Rα1(A)和IL13Rα2(B) 基因表达
如在文献中所报道的和本报告中所描述的，IL-13在UIP患者的肺中水 平增加。IL-13在体外和体内模型中是促纤维化的。IL-13诱导成纤维细胞的 增殖和胶原产生(12-14)。此外，已经显示，在多种鼠科的肺纤维化模型 中IL-13活性的抑制都是有益的(17-20)。TGFβ1、PDGF、IL-4和IL-13 在UIP成纤维细胞中诱导IL13Rα1表达上调。所有四种调节子都诱导IL 13Rα2表达上调，从而可能使这些细胞对IL-13介导的反应更敏感。而且， 最近已经证明IL13Rα2的信号转导通过诱导TGFβ1而促纤维化(15)。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4-诱导的CD44基因表达
之前已经使用肺纤维化动物模型证明了来自成纤维细胞的透明质酸 (hyaluronan)与纤维化相关(33)。由成纤维细胞释放的透明质酸是促炎 症的，因此可能恶化纤维化反应。透明质酸结合CD44。我们在本文证明了 所有的调节子都在UIP成纤维细胞中诱导CD44基因表达上调，这表明这些 细胞可能对透明质酸介导的下游事件是高反应性的。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4-诱导的纤连蛋白基因表达
纤连蛋白是细胞外基质的组分。本文所示的证据表明所有的调节子都在 UIP成纤维细胞中诱导纤连蛋白基因表达上调，这可能会增加与肺纤维化相 关的过重细胞外基质沉积。
TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4-诱导的PDGFRA(A)和PDGFRB(B) 基因表达
PDGF(血小板衍生的生长因子)是已经证明能促进成纤维细胞增殖的 生长因子。此外，最近已经证明在体外PDGF受体信号的抑制能限制纤维化 (34)。在此研究中，TGFβ1、PDGF、IL-13和IL-4在UIP成纤维细胞中 诱导两个PDGF受体链的增加。这表明所有受测的调节子都可以增强UIP 成纤维细胞对PDGF诱导的下游事件(如增殖)的敏感性。
有益效果
这是目前第一次报道UIP成纤维细胞对IL-4和IL-13二者促纤维化功能 反应的描述。此研究还强调了在评价用于纤维化的可能治疗剂的作用时，比 较非纤维化成纤维细胞与纤维化成纤维细胞的重要性。已经显示IL-4和/或 IL-13的抑制在多种纤维化动物模型中都是有益的。动物模型中纤维化的抑 制被机械地归因于成纤维细胞增殖和胶原生产的降低。然而，此研究通过比 较来自纤维化部位的成纤维细胞和非纤维化组织来源的细胞采取了更多的 转化医学方法(translational medicine)。此研究还阐明了一些在体外用IL-4 或IL-13刺激后增强的基因。总之，本发明描述了在肺纤维化患者中靶向IL-4 和/或IL-13非常有益，因为这两个2型细胞因子任一个的刺激后会诱导大量 基因。此外，一些促纤维化调节子的基因上调程度与经典的促纤维化调节子 TGFβ1和PDGF所诱导的基因上调程度相当。在纤维化组织中发现的两个原 型生长因子TGF B 1和PDGF也诱导IL-13受体亚基上调，这表明在纤维化 组织环境中UIP成纤维细胞对IL-13的反应性进一步增强。最后，此外，由 于一些基因直接受IL-4和IL-13调控，这些基因(例如，IL13Rα2、原胶原 I和III)可以作为用抑制IL-4和IL-13来进行治疗的患者的临床标记物，来 用作对治疗反应的指示。总之，本发明描述了靶向IL-4和/或IL-13在间质 性肺病患者中非常有益，因为在用这些2型细胞因子刺激后诱导了大量的基 因。此外，靶向IL-4和/或IL-13在纤维化病状的许多其它疾病中是有益的， 这些疾病包括但不限于间质性肺病、硬皮病(局部和扩散)、肝纤维化、肾 纤维化、结节病、肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩性瘢痕、心肌纤维化、老年性黄斑 变性、胶原血管病和其它相关疾病。
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应该明确的是，本发明的实施可以不限于前面说明书和实施例的具体描 述。
根据前面的教导，可以对本发明进行各种修饰和变化，因此它们都属于 所附权利要求的范围。
表1


序列表
<110>
<120>用于治疗IL-4或IL-13相关病状的方法和组合物
<130>CEN5067
<160>42
<170>PatentIn Ver 3.1
SEQ ID NO：1
QVQLLVQSGA EVKKPGASVK VSCKASGYTF TXWVRQAPGQ GLEWMGXRVT MTRDTSTSTA     60
YMELSSLRSE DTAVYYCARX WGQGTLVTVS SGSTKGPSVF PLAPSSKSTS GGTAALGCLV    120
KDYFP                                                                125
SEQ ID NO：2
QITLKESGPA LVKPTQTLTL TCTFSGFSLS XWIRQPPGKA LEWLAXRLTI SKDTSKNQVV     60
LTMTNMDPVD TATYYCARXW GQGTLVTVSS GSASAPS                              97
SEQ ID NO：3
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS XWVRQAPGKG LEWVSXRFTI SRDNSKNTLY     60
LQMNSLRAED TAVYYCARXW GQGQGTLVTV SSGSTKAPSV FP                       102
SEQ ID NO：4
EVQLVESGGG LVKPGGSLRL SCAASGFTFS XWVRQAPGKG LEWVGXRFTI SRDDSKNTLY     60
LQMNSLKTED TAVYYCTTXW GQGTLVTVSS ASTKGPSVFP LA                       102
SEQ ID NO：5
EVQLVESGGG LVQPGRSLRL SCTASGFTFG XWVRQAPGKG LEWVGXRFTI  SRDDSKSIAY    60
LQMNSLKTED TAVYYCTRXV TVSSGSTKGP SVLP                                 94
SEQ ID NO：6
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSIS XWIRQPPGKG LEWIGXRVTI SVDTSKNQFS     60
LKLSSVTAAD TAVYYCARXW GQQGTLVTVS SAPTKAPDVF PIISGC                   106
SEQ ID NO：7
EVQLVQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGYSFT XWVRQMPGKG LEWMGXQVTI SADKSISTAY     60
LQWSSLKASD TAMYYCARXW GQGTLVTVSS ASTKGPS                              97
SEQ ID NO：8
QVQLQQSGPG LVKPSQTLSL TCAISGDSVS XWIRQSPSRG LEWLGXRITI NPDTSKNQFS     60
LQLNSVTPED TAVYYCARXW GQGTLVTVSS  G                                   91
SEQ ID NO：9
QVQLVQSGSE LKKPGASVKV SCKASGYTFT XWVRQAPGQG LEWMGXRFVF SLDTSVSTAY     60
LQISSLKAED TAVYYCARXW GQGTLVTVSS S                                    91
SEQ ID NO：10
DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCXWYQQKP GKAPKLLIYX GVPSRFSGSG SGTDFTLTIS    60
SLQPEDFATY YCX                                                       73
SEQ ID NO：11
DIVMTQSPLS LPVTPGQPAS ISCXWYLQKP GQSPQLLIYX GVPDRFSGSG SGTDFTLKIS    60
RVEAEDVGVY YCX                                                       73
SEQ ID NO：12
EIVLTQSPGT LSLSPGERAT LSCXWYQQKP GQAPRLLIYX GIPDRFSGSG SGTDFTLTIS    60
RLEPEDFAVY YCX                                                       73
SEQ ID NO：13
ETTLTQSPAF MSATPGDKVN ISCXWYQQKP GEAAIFIIQX GIPPRFSGSG YGTDFTLTIN    60
NIESEDAAYY FCX                                                       73
SEQ ID NO：14
EIVMTQSPVN LSMSAGEXWY QQKPGQAPRL FIYXGISARF SGSGSGTDFT LTITSLQSED    60
FAVYYCX                                                              67
SEQ ID NO：15
ELTQSPGTLS LSPGEXWYQH KPGQAPRLVI HXGISDRFSG SGSGTDFTLT ITRLEPEDFA    60
LYYCX                                                                65
SEQ ID NO：16
QSVLTQPPSA SGTPGQRVTI SCXWYQQLPG TAPKLLIYXG VPDRFSGSKS GTSASLAISG    60
LQSEDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：17
AQSVLTQPPS VSAAPGQKVT ISCXWYQQLP GTAPKLLIYX GIPDRFSGSK SGTSATLGIT    60
GLQTGDEADY YCX                                                       73
SEQ ID NO：18
QSALTQPASV SGSPGQSITI SCXWYQQHPG KAPKLMIYXG VSNRFSGSKS GNTASLTISG    60
LQAEDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：19
SYELTQPPSV SVSPGQTARI TCXWYQQKPG QAPVLVIYXG IPERFSGSSS GTTVTLTISG    60
VQAEDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：20
SYVLTQPPSV SVAPGQTARI TCXWYQQKPG QAPVLVVYXG IPERFSGSNS GNTATLTISR    60
VEAGDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：21
SYELTQPPSV SVSPGQTASI TCXWYQQKPG QSPVLVIYXG IPERFSGSNS GNTATLTISG    60
TQAMDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：22
SSELTQDPAV SVALGQTVRI TCXWYQQKPG QAPVLVIYXG IPDRFSGSSS GNTASLTITG    60
AQAEDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：23
QLVLTQSPSA SASLGASVKL TCXWHQQQPE KGPRYLMKXG IPDRFSGSSS GAERYLTISS    60
LQSEDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：24
QPVLTQSSSA SASLGSSVKL TCXWHQQQPG KAPRYLMKXG VPDRFSGSSS GADRYLTISN    60
LQSEDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：25
QAVLTQPSSL SASPGASASL TCXWYQQKPG SPPQYLLRYX GVPSRFSGSK DASANAGILL    60
ISGLQSEDEA DYYCX                                                     75
SEQ ID NO：26
NFMLTQPHSV SESPGKTVTI SCXWYQQRPG SAPTTVIYXG VPDRFSGSID SSSNSASLTI    60
SGLKTEDEAD YYCX                                                      74
SEQ ID NO：27
QTVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCXWFQQKPG QAPRALIYXW TPARFSGSLL GGKAALTLSG    60
VQPEDEAEYY CX                                                        72
SEQ ID NO：28
QTVVTQEPSF SVSPGGTVTL TCXWYQQTPG QAPRTLIYXG VPDRFSGSIL GNKAALTITG    60
AQADDESDYY CX                                                        72
SEQ ID NO：29
QPVLTQPPSA SASLGASVTL TCXWYQQRPG KGPRFVMRXG IPDRFSVLGS GLNRYLTIKN    60
IQEEDESDYH CX                                                        72
SEQ ID NO：30
QAGLTQPPSV SKGLRQTATL TCXWLQQHQG HPPKLLSYXG ISERFSASRS GNTASLTITG    60
LQPEDEADYY CX                                                        72
SEQ ID NO：31
ASPTSPKVFP LSLCSTQPDG NVVIACLVQG FFPQEPLSVT WSESGQGVTA RNFPPSQDAS    60
GDLYTTSSQL TLPATQCLAG KSVTCHVKHY TNPSQDVTVP CPVPSTPPTP SPSTPPTPSP   120
SCCHPRLSLH RPALEDLLLG SEANLTCTLT GLRDASGVTF TWTPSSGKSA VQGPPERDLC   180
GCYSVSSVLP GCAEPWNHGK TFTCTAAYPE SKTPLTATLS KSGNTFRPEV HLLPPPSZEE   240
LALNELVTLT CLARGFSPKD VLVRWLQGSQ ELPREKYLTW ASRQEPSQGT TTFAVTSILR    300
VAAEDWKKGD TFSCMVGHEA LPLAFTQKTI DRLAGKPTHV NVSVVMAEVD GTCY          354
SEQ ID NO：32
ASPTSPKVFP LSLDSTPQDG NVVVACLVQG FFPQEPLSVT WSESGQNVTA RNFPPSQDAS     60
GDLYTTSSQL TLPATQCPDG KSVTCHVKHY TNPSQDVTVP CPVPPPPPCC HPRLSLHRPA    120
LEDLLLGSEA NLTCTLTGLR DASGATFTWT PSSGKSAVQG PPERDLCGCY SVSSVLPGCA    180
QPWNHGETFT CTAAHPELKT PLTANITKSG NTFRPEVHLL PPPSEELALN ELVTLTCLAR    240
GFSPKDVLVR WLQGSQELPR EKYLTWASRQ EPSQGTTTFA VTSILRVAAE DWKKGDTFSC    300
MVGHEALPLA FTQKTIDRLA GKPTHVNVSV VMAEVDGTCY                          340
SEQ ID NO：33
APTKAPDVFP IISGCRHPKD NSPVVLACLI TGYHPTSVTV TWYMGTQSQP QRTFPEIQRR     60
DSYYMTSSQL STPLQQWRQG EYKCVVQHTA SKSKKEIFRW PESPKAQASS VPTAQPQAEG    120
SLAKATTAPA TTRNTGRGGE EKKKEKEKEE QEERETKTPE CPSHTQPLGV YLLTPAVQDL    180
WLRDKATFTC FVVGSDLKDA HLTWEVAGKV PTGGVEEGLL ERHSNGSQSQ HSRLTLPRSL    240
WNAGTSVTCT LNHPSLPPQR LMALREPAAQ APVKLSLNLL ASSDPPEAAS WLLCEVSGFS    300
PPNILLMWLE DQREVNTSGF APARPPPQPR STTFWAWSVL RVPAPPSPQP ATYTCVVSHE    360
DSRTLLNASR SLEVSYVTDH GPMK                                           384
SEQ ID NO：34
ASTQSPSVFP LTRCCKNIPS NATSVTLGCL ATGYFPEPVM VTWDTGSLNG TTMTLPATTL     60
TLSGHYATIS LLTVSGAWAK QMFTCRVAHT PSSTDWVDNK TFSVCSRDFT PPTVKILQSS    120
CDGGGHFPPT IQLLCLVSGY TPGTINITWL EDGQVMDVDL STASTTQEGE LASTQSELTL    180
SQKHWLSDRT YTCQVTYQGH TFEDSTKKCA DSNPRGVSAY LSRPSPFDLF IRKSPTITCL    240
VVDLAPSKGT VNLTWSRASG KPVNHSTRKE EKQRNGTLTV TSTLPVGTRD WIEGETYQCR    300
VTHPHLPRAL MRSTTKTSGP VGPRAAPEVY AFATPEWPGS RDKRTLACLI QNFMPEDISV    360
QWLHNEVQLP DARHSTTQPR KTKGSGFFVF SRLEVTRAEW EQKDEFICRA VHEAASPSQT    420
VQRAVSVNPG KDVCVEEAEG EAPWTWTGLC IFAALFLLSV SYSAALTLLM VQRFLSATRQ    480
GRPQTSLDYT NVLQPHA                                                   497
SEQ ID NO：35
ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS     60
GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKVEP KSCDKTHTCP PCPAPELLGG    120
PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN    180
STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE    240
LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESBNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL YSKLTVDKSR    300
WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG KTHTCPPCP                           339
SEQ ID NO：36
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS     60
GLYSLSSVVT VPSSNFGTQT YTCNVDHKPS NTKVDKTVER KCCVECPPCP APPVAGPSVF    120
LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR    180
VVSVLTVVHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN    240
QVSLTCLVKG FYPSDIAVEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN    300
VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK                                           326
SEQ ID NO：37
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS       60
GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YTCNVNHKPS NTKVDKRVEL KTPLGDTTHT CPRCPEPKSC      120
DTPPPCPRCP EPKSCDTPPP CPRCPEPKSC DTPPPCPRCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT      180
LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFKWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTF RVVSVLTVLH      240
QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK      300
GFYPSDIAVE WESSGQPENN YNTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NIFSCSVMHE      360
ALHNRFTQKS LSLSPGK                                                     377
SEQ ID NO：38
ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS       60
GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPSCP APEFLGGPSV      120
FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY      180
RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK      240
NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG      300
NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK                                          327
SEQ ID NO：39
GSASAPTLFP LVSCENSPSD TSSVAVGCLA QDFLPDSITF SWKYKNNSDI SSTRGFPSVL       60
RGGKYAATSQ VLLPSKDVMQ GTDEHVVCKV QHPNGNKEKN VPLPVIAELP PKVSVFVPPR      120
DGFFGNPRSK SKLICQATGF SPRQIQVSWL REGKQVGSGV TTDQVQAEAK ESGPTTYKVT      180
STLTIKESDW LSQSMFTCRV DHRGLTFQQN ASSMCVPDQD TAIRVFAIPP SFASIFLTKS      240
TKLTCLVTDL TTYDSVTISW TRQNGEAVKT HTNISESHPN ATFSAVGEAS ICEDDWNSGE      300
RFTCTVTHTD LPSPLKQTIS RPKGVALHRP DVYLLPPARE QLNLRESATI TCLVTGFSPA      360
DVFVQWQMQR GQPLSPEKYV TSAPMPEPQA PGRYFAHSIL TVSEEEWNTG ETYTCVVAHE      420
ALPNRVTERT VDKSTGKPTS ADEEGFENLW ATASTFIVLY NVSLVMSDTA GTCYVK          476
SEQ ID NO：40
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD       60
SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC                    107
SEQ ID NO：41
GQPKAAPSVT LFPPSSEELQ ANKATLVCLI SDFYPGAVTV AWKADSSPVK AGVETTTPSK       60
QSNNKYAASS YLSLTPEQWK SHRKSYSCQV THEGSTVEKT VAPTECS                    107
人IL-13
<210>42
<211>146
<212>PRT
<213>智人
<400>42
Met His Pro Leu Leu Asn Pro Leu Leu Leu Ala Leu Gly Leu Met Ala
1               5                   10                  15
Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly Phe Ala
            20                  25                  30
Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu
        35                  40                  45
Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly
    50                  55                  60
Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala
65                  70                  75                  80
Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr
                85                  90                  95
Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln
            100                 105                 110
Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe
        115                 120                 125
Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Gln
    130                 135                 140
Phe Asn
145
人IL-4
<210>43
<211>146
<212>PRT
<213>智人
<400>43
Met Gly Leu Thr Ser Gln Leu Leu Pro Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala
1               5                   10                  15
Cys Ala Gly Asn Phe Val His Gly His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln
            20                  25                  30
Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys
        35                  40                  45
Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr
    50                  55                  60
Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr
65                  70                  75                  80
Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln
                85                  90                  95
Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg
            100                 105                 110
Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala
        115                 120                 125
Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met
     130                 135                 140
Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser Ser
145                 150
人IL-4剪接变体
<210>44
<211>137
<212>PRT
<213>智人
<400>44
Met Gly Leu Thr Ser Gln Leu Leu Pro Pro Leu Phe Phe Leu Leu Ala
1               5                   10                  15
Cys Ala Gly Asn Phe Val His Gly His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln
            20                  25                  30
Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser Leu Thr Glu Gln Lys Asn Thr Thr
        35                  40                  45
Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr
    50                  55                  60
Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln
65                  70                  75                  80
Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg
                85                  90                  95
Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala
            100                 105                 110
Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met
        115                 120                 125
Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser Ser
     130                 135