镇痛剂
阅读：297发布：2020-05-11
专利汇可以提供镇痛剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 的目的在于提供一种在各种 疼痛 疾病 的 预防 或 治疗 中有效的 镇痛 剂。本发明提供一种含有 碳 原子 数为10的 脂肪酸 的酯作为有效成分的镇痛剂。以该化合物作为有效成分的本发明镇痛剂作为针对各种疼痛疾病的治疗剂、例如 膝关节 骨性关节炎或髋关节骨性关节炎等骨性关节炎、多发性硬化症或格林-巴利综合征等脱髓鞘疾病等所引起的疼痛的预防或治疗剂的有用性高。，下面是镇痛剂专利的具体信息内容。
1.一种镇痛剂，其含有碳原子数为10的脂肪酸的酯作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的镇痛剂，其中，所述脂肪酸的酯中的脂肪酸为癸烯酸。
3.根据权利要求2所述的镇痛剂，其中，所述癸烯酸为2-癸烯酸。
4.根据权利要求3所述的镇痛剂，其中，所述2-癸烯酸为反式-2-癸烯酸。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的镇痛剂，其中，所述脂肪酸的酯中的酯为链烷基酯。
6.根据权利要求1至4中任一项所述的镇痛剂，其中，所述脂肪酸的酯中的酯为链烯基酯。
7.根据权利要求1至4中任一项所述的镇痛剂，其中，所述脂肪酸的酯中的酯为环烷基酯。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的镇痛剂，其中，所述镇痛剂为针对关节疼痛的治疗剂。
9.根据权利要求8所述的镇痛剂，其中，所述关节疼痛为骨性关节炎所引起的疼痛。
10.根据权利要求9所述的镇痛剂，其中，所述骨性关节炎为膝关节骨性关节炎或髋关节骨性关节炎。
11.根据权利要求1至7中任一项所述的镇痛剂，其中，所述镇痛剂为针对与脱髓鞘疾病相伴的疼痛的治疗剂。
12.根据权利要求11所述的镇痛剂，其中，所述脱髓鞘疾病为多发性硬化症或格林-巴利综合征。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的镇痛剂，其中，所述镇痛剂为注射剂。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的镇痛剂，其中，所述镇痛剂为经口制剂。
15.根据权利要求13或14所述的药剂，其中，所述镇痛剂为环糊精包合物。
16.根据权利要求1至12中任一项所述的镇痛剂，其中，所述镇痛剂为外用剂。
17.根据权利要求16所述的镇痛剂，其中，所述外用剂为贴剂。
镇痛剂
技术领域
背景技术
[0002] 本发明涉及一种含有碳原子数为10的脂肪酸的酯作为有效成分的镇痛剂。关于碳原子数为10的脂肪酸的酯，广泛已知10-羟基-2-癸烯酸为蜂王浆的特有成分，是具有与胰岛素相同的作用、具有使体内的糖代谢正常的作用等被期待改善生活习惯病和美容效果的物质。但是，与作为本发明药剂的有效成分的碳原子数为10的脂肪酸的酯相比，在脂肪酸链的10位被羟基取代的方面和不是酯的方面是具有不同结构的化合物。另一方面，专利文献1中公开了碳原子数为8或碳原子数为10至12的脂肪酸或脂肪酸的酯具有神经营养因子样作用。但是，仅记载了专利文献1的神经营养因子样作用剂作为阿尔茨海默病、帕金森病等神经退行性疾病、抑郁症、焦虑症(神经症)等精神疾病的预防/改善剂是有用的，关于本发明中的具有镇痛作用，没有任何记载。如上所述，碳原子数为10的脂肪酸的酯作为针对疼痛疾病的镇痛剂有效是迄今为止未知的见解。
[0003] 现有技术文献
[0004] 专利文献
[0005] 专利文献1：国际公开WO2009/038110号公报
发明内容
[0006] 发明要解决的问题
[0007] 本发明的目的在于提供一种具有优异效果的镇痛剂。
[0008] 用于解决问题的方案
[0009] 本发明人等进行了深入研究，结果发现碳原子数为10的脂肪酸的酯对于疼痛疾病显示出优异的镇痛效果，从而完成了本发明。即，本发明如下所述。
[0010] (1)一种镇痛剂，其含有碳原子数为10的脂肪酸的酯作为有效成分。
[0011] (2)根据前述(1)所述的镇痛剂，其中，前述脂肪酸的酯中的脂肪酸为癸烯酸。
[0012] (3)根据前述(2)所述的镇痛剂，其中，前述癸烯酸为2-癸烯酸。
[0013] (4)根据前述(3)所述的镇痛剂，其中，前述2-癸烯酸为反式-2-癸烯酸。
[0014] (5)根据前述(1)至(4)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述脂肪酸的酯中的酯为链烷基酯。
[0015] (6)根据前述(1)至(4)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述脂肪酸的酯中的酯为链烯基酯。
[0016] (7)根据前述(1)至(4)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述脂肪酸的酯中的酯为环烷基酯。
[0017] (8)根据前述(1)至(7)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述镇痛剂为针对关节疼痛的治疗剂。
[0018] (9)根据前述(8)所述的镇痛剂，其中，前述关节疼痛为骨性关节炎所引起的疼痛。
[0019] (10)根据前述(9)所述的镇痛剂，其中，前述骨性关节炎为膝关节骨性关节炎或髋关节骨性关节炎。
[0020] (11)根据前述(1)至(7)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述镇痛剂为针对与脱髓鞘疾病相伴的疼痛的治疗剂。
[0021] (12)根据前述(11)所述的镇痛剂，其中，前述脱髓鞘疾病为多发性硬化症或格林-巴利综合征。
[0022] (13)根据前述(1)至(12)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述镇痛剂为注射剂。
[0023] (14)根据前述(1)至(12)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述镇痛剂为经口制剂。
[0024] (15)根据前述(13)或(14)所述的药剂，其中，前述镇痛剂为环糊精包合物。
[0025] (16)根据前述(1)至(12)中任一项所述的镇痛剂，其中，前述镇痛剂为外用剂。
[0026] (17)根据前述(16)所述的镇痛剂，其中，前述外用剂为贴剂。
[0027] (18)根据前述(1)至(7)中任一项所述的碳原子数为10的脂肪酸的酯，其用于治疗疼痛疾病。
[0028] (19)一种疼痛疾病的治疗方法，其特征在于，对疼痛疾病的患者给与有效量的前述(1)至(7)中任一项所述的碳原子数为10的脂肪酸的酯。
[0029] (20)根据前述(1)至(7)中任一项所述的碳原子数为10的脂肪酸的酯在用于治疗疼痛疾病的药物的制造中的使用。
[0030] 发明的效果
[0031] 本发明镇痛剂所涉及的碳原子数为10的脂肪酸的酯是显示出优异镇痛作用的化合物，作为用于治疗骨性关节炎等关节疼痛所引起的疼痛、与多发性硬化症或格林-巴利综合征等脱髓鞘疾病相伴的疼痛等各种疼痛性疾病的药剂非常有用。附图说明
[0032] 图1是调查本发明镇痛剂的单次给药对于骨性关节炎模型大鼠的痛觉过敏的效果的结果。
[0033] 图2是调查本发明镇痛剂的反复给药对于骨性关节炎模型大鼠的痛觉过敏的效果的结果。
[0034] 图3是调查本发明镇痛剂的反复给药对于骨性关节炎模型大鼠的关节疼痛的效果的结果。
[0035] 图4是与图3同样地调查本发明镇痛剂的反复给药对于骨性关节炎模型大鼠的关节疼痛的效果的结果。
具体实施方式
[0036] 本发明涉及一种含有碳原子数为10的脂肪酸的酯作为有效成分的镇痛剂。
[0037] 能够用作本发明镇痛剂的有效成分的脂肪酸的酯是由碳原子数为10的脂肪酸和醇形成的脂肪酸的酯，可以将这些脂肪酸的酯单独或混配使用2种以上。作为碳原子数为10的脂肪酸，可以是作为直链饱和脂肪酸的癸酸(capric acid)、作为直链不饱和脂肪酸的癸烯酸、作为支链不饱和脂肪酸的牻牛儿酸等中的任意种，优选可以举出2-癸烯酸、3-癸烯酸、9-癸烯酸等碳链的双键为一个的不饱和脂肪酸，进一步优选为这些的反式体，特别优选为反式-2-癸烯酸。
[0038] 另一方面，作为形成本发明镇痛剂中的脂肪酸的酯的酯部分的醇，可以举出链烷基醇、链烯基醇、环烷基醇等。对链烷基醇没有特别限定，优选可以举出甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基、异己基、庚基、异庚基、辛基、异辛基、壬基、异壬基、癸基、异癸基、十一烷基、异十一烷基、十二烷基、异十二烷基等碳原子数为1至12的直链状或支链状的链烷基的醇。
[0039] 对链烯基醇没有特别限定，优选可以举出乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、仲丁烯基、叔丁烯基、戊烯基、异戊烯基、新戊烯基、叔戊烯基、己烯基、异己烯基、庚烯基、异庚烯基、辛烯基、异辛烯基、壬烯基、异壬烯基、癸烯基、异癸烯基、十一碳烯基、异十一碳烯基、十二碳烯基、异十二碳烯基等碳原子数为2至12的直链状或支链状的链烯基的醇，进一步优选可以举出壬烯基、异壬烯基、癸烯基、异癸烯基、十一碳烯基、异十一碳烯基等碳原子数为9至11的直链状或支链状的链烯基的醇。
[0040] 对环烷基醇没有特别限定，优选可以举出环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基等碳原子数为3至8的环烷基的醇，进一步优选可以举出环戊基、环己基等碳原子数为5或6的环烷基的醇。
[0041] 作为本发明镇痛剂的有效成分的碳原子数为10的脂肪酸的酯，能够使用专利文献1中记载的公知化合物及市售品，还能够利用已知的方法制造。例如，也可以通过将碳原子数为10的脂肪酸和醇脱水缩合来制造，脱水缩合反应能够使用公知的方法。
[0042] 作为公知的缩合方法，例如，能够使碳原子数为10的脂肪酸和醇在适当的缩合剂(例如，二环己基碳二亚胺(DCC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺·HCl等)的存在下反应。反应能够在通常溶剂(例如，二氯甲烷等)中实施。醇的用量通常相对于碳原子数为10的脂肪酸1摩尔为0.5～2摩尔(优选为1～1.5摩尔)。
[0043] 除此之外，能够将碳原子数为10的脂肪酸暂时转换成羧酰卤，之后在碱的存在下或非存在下与醇反应。向羧酰卤的转换例如能够使用亚硫酰氯、磺酰氯、三氯化磷、五氯化磷、草酰氯、磷酸三氯等卤化剂。作为碱，可以举出三乙胺、吡啶等。醇的用量通常相对于碳原子数为10的脂肪酸1摩尔为0.5～2摩尔(优选为1～1.5摩尔)。在使用碱的情况下，碱的用量通常相对于碳原子数为10的脂肪酸1摩尔为1～5摩尔左右。
[0044] 上述反应终止后，能够使用公知的精制和分离操作(例如，提取、层析、蒸馏、重结晶等)，得到目标化合物碳原子数为10的脂肪酸的酯。
[0045] 将这样得到的化合物的例子示于表1和表2。以下，在称呼各个化合物时，使用表中记载的化合物编号。
[0046] [表1]
[0047]
[0048] [表2]
[0049]
[0050] 需要说明的是，在上述表1和表2中记载的化合物中，关于文献未记载的化合物8、9、12、14、15和17，将反式-2-癸烯酸和与各酯部分对应的适当的醇作为起始原料，利用上述反应进行合成，使用硅胶层析等进行精制，以油状物的形式得到各化合物。
[0051] 本发明镇痛剂含有碳原子数为10的脂肪酸的酯作为有效成分，作为针对各种疼痛疾病的预防或治疗剂是有用的。作为疼痛疾病，例如，可以举出膝关节骨性关节炎或髋关节骨性关节炎等骨性关节炎所引起的疼痛及类风湿性关节炎所引起的疼痛等关节疼痛、或者与多发性硬化症或格林-巴利综合征等脱髓鞘疾病相伴的疼痛等。
[0052] 本发明的碳原子数为10的脂肪酸的酯能够与适当的医药用的载体及稀释剂适宜组合而制剂化成各种剂型(经口制剂、注射剂、外用剂等)。另外，本发明镇痛剂可以是将碳原子数为10的脂肪酸的酯与其它医药活性成分组合而成的混配剂。此外，本发明镇痛剂可以作为与环糊精等的包合物而制剂化。通过这样操作，能够得到药理活性的增强、稳定性的提高、持续化、操作的容易性等。包合物例如能够将碳原子数为10的脂肪酸的酯与α-环糊精、β-环糊精或γ-环糊精混合而形成，由此，确认到例如经口给药时的药理活性的增强。
[0053] 在将本发明镇痛剂制成经口制剂的情况下，通过在碳原子数为10的脂肪酸的酯中适宜组合适当的添加剂、例如赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、增量剂、润湿剂、缓冲剂、保存剂、香料等的处方，能够制成片剂、散剂、颗粒剂或胶囊剂。另外，在制成注射剂的情况下，在含有碳原子数为10的脂肪酸的酯的溶液或悬浮液中加入稳定剂、保存剂、等渗剂等，能够制成注射剂。在制成外用剂的情况下，能够制剂化成例如贴剂、凝胶剂、软膏、霜剂等外用剂等。即，将碳原子数为10的脂肪酸的酯在适当的基剂中混合、熔融、乳化等而制备，在贴剂的情况下，将其延展涂布于支承体上。作为贴剂、凝胶化剂等，例如能够制成使用了有机凝胶化剂的组成的物质。需要说明的是，能够根据各外用剂的剂型而适宜选择通常使用的保存剂、抗氧化剂、调味剂、粘合剂等而加入处方中。
[0054] 本发明镇痛剂的期望给药量能够考虑用法、患者的年龄、性别、症状的程度等而适宜增减，通常成人每1天可以1天1次或分数次给与1至1000mg、优选为5至300mg。
[0055] 实施例
[0056] 以下，示出与本发明的碳原子数为10的脂肪酸的酯的新型药理作用、即镇痛作用相关的药理试验结果的一例，但是本发明并不受这些实施例的记载的任何限制。
[0057] 药理试验I：对于骨性关节炎模型大鼠的镇痛作用
[0058] 使用作为骨性关节炎(Osteoarthritis;OA)的模型动物的一碘乙酸钠(MIA)诱发OA大鼠，进行调查本发明镇痛剂的镇痛作用的下述实验。
[0059] 1.向MIA诱发OA大鼠单次给与本发明镇痛剂的试验
[0060] (1)MIA诱发OA大鼠的制作
[0061] 测定6周龄雄性Wistar系大鼠的对于机械刺激的50%反应阈值(测定方法如后所述)，筛选正常对照组。对于正常对照组以外的大鼠，以0.3mg/50μL的用量向右膝关节内单次给与用生理盐水制备的MIA，向左膝关节内给与生理盐水50μL，制作MIA诱发OA大鼠。另外，对正常对照组向两膝的关节内给与生理盐水50μL。
[0062] (2)组编制
[0063] 对于实验动物6周龄雄性Wistar系大鼠，正常对照组以外在上述(1)的给与MIA的24天后测定对于机械刺激的50%反应阈值(测定方法如后所述)和体重，以1组6只的形式进行正常对照组、发病对照组、试验药给药组、洛索洛芬钠水合物(LOX)给药组(阳性对照)4组的组编制。
[0064] (3)试验药的给药
[0065] 使用化合物4作为试验药的试验药溶液(0.1mg/mL)和LOX悬浮液(1mg/mL)分别用包含0.1vol%二甲基亚砜(DMSO)的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)和0.5w/v%的羧甲基纤维素水溶液制备。
[0066] 刚进行组编制后(给与MIA24天后)，对于试验药给药组以0.5mg/kg的用量向腹腔内单次给与试验药溶液，对于LOX给药组以5mg/kg的用量经口单次给与LOX悬浮液。另外，对于正常对照组和发病对照组，向腹腔内单次给与含有0.1vol%DMSO的PBS。
[0067] (4)对于机械刺激的50%反应阈值的测定(冯弗雷试验)的结果
[0069] 测定根据Chaplan等(Journal of Neuroscience Methods、53卷、1号、55-63页、1994年)和Dixon等(Annual Review of Pharmacology and Toxicology、20卷、441-462页、1980年)的方法，使用冯弗雷细丝(von Frey filament、North Coast Medical Inc.制)进行。在8根细丝〔刺激负荷(g)：0.4、0.6、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、15.0〕中，从2.0g的细丝开始，用细丝轻度弯曲的程度的力对足底垂直地碰触2～3秒，将后肢显示出逃避反应的情况作为阳性反应。在观察到阳性反应的情况下用低一级的强度的细丝同样地刺激，将反应从阴性向阳性变化或从阳性向阴性变化的时刻作为最初的2个反应，之后连续4次利用上下法(up-down法)进行刺激。使用对于合计6次的刺激的反应，测定对于机械刺激的50%反应阈值，计算出各组的平均值±标准误差。需要说明的是，在无阳性反应的状态下进行至15.0g的刺激的情况下将15.0g作为阈值，在阳性反应持续至0.4g的情况下将
0.25g作为阈值。
0.25g作为阈值。
[0070] 显著性差异的检验在正常对照组与发病对照组间、发病对照组与试验药给药组间、发病对照组与LOX给药组间、以及试验药给药组与LOX给药组间使用2组的检验(学生t检验或Welch检验)或Wilcoxon检验进行。使用SAS系统版本8.2(SAS临床前期程序包Ver.5.0、SAS Institute Japan)进行分析，将p<0.05作为具有显著性差异。
[0071] 将上述试验结果的一例示于图1。与正常对照组相比，通过给与MIA诱发了OA的发病对照组的对于机械刺激的50%反应阈值显著降低。与此相对，如图1所示，在给与MIA后向腹腔内单次给与试验药(化合物4)的试验药给药组中，与发病对照组相比显示出显著高的50%反应阈值。以5mg/kg的用量给药的LOX给药组未显示出显著的痛觉过敏抑制效果，但是试验药给药组以0.5mg/kg的低用量显示出痛觉过敏抑制效果。
[0072] 将与上述同样地单次给与本发明镇痛剂的试验结果的一例示于表3。与上述同样地实施冯弗雷试验，测定各自的50%反应阈值，关于试验药给药1小时后的50%反应阈值，通过下式计算出50%反应阈值的恢复率(%)。
[0073] 50%反应阈值的恢复率(%)=〔(试验药给药1小时后的50%反应阈值-试验药给药前的50%反应阈值)÷(正常阈值-试验药给药前的50%反应阈值)〕×100
[0074] [表3]
[0075]
[0076] 由表3可知，本发明镇痛剂对于给与MIA所诱发的OA的痛觉过敏显示出优异的抑制效果。需要说明的是，在不是酯体的反式-2-癸烯酸中，试验药给药前与试验药给药1小时后的50%反应阈值没有差异，没有确认到痛觉过敏抑制效果。
[0077] 2.向MIA诱发OA大鼠反复给与本发明镇痛剂的试验〔1〕
[0078] (1)MIA诱发OA大鼠的制作
[0079] 与上述1.(1)同样地进行正常对照组的筛选和MIA诱发OA大鼠的制作。
[0080] (2)组编制
[0081] 对于实验动物6周龄雄性Wistar系大鼠，正常对照组以外在上述(1)的给与MIA的27天后测定对于机械刺激的50%反应阈值、对MIA非给药后肢的重量负荷率(测定方法如后所述)和体重，以1组6只的形式进行正常对照组、发病对照组、试验药给药组、LOX给药组(阳性对照)4组的组编制。
[0082] (3)试验药的给药
[0083] 试验药溶液和LOX悬浮液与上述1.(2)同样地制备。
[0084] 从刚进行组编制后起8天(给与MIA27天后至34天后为止)，对于试验药给药组以0.5mg/kg/天的用量向腹腔内反复给与试验药溶液，对于LOX给药组以5mg/kg/天的用量经口反复给与LOX悬浮液，另外，对于正常对照组和发病对照组向腹腔内反复给与含有0.1vol%DMSO的PBS。
[0085] (4)对于机械刺激的50%反应阈值的测定(冯弗雷试验)的结果
[0086] 与上述1.(4)同样地，从试验药的最终给药开始1、3、5和24小时后测定对于机械刺激的50%反应阈值。计算出各组的平均值±标准误差，显著性差异的检验与上述1.(4)同样地进行。
[0087] 将上述试验的结果的一例示于图2。与正常对照组相比，通过给与MIA而诱发了OA的发病对照组的对于机械刺激的50%反应阈值显著降低。与此相对，如图2所示，在给与MIA后向腹腔内反复给与试验药(化合物4)的试验药给药组中，在给药1和3小时后，与发病对照组相比显示出显著高的50%反应阈值。这样，即便在反复给与本发明镇痛剂的情况下，也确认到具有优异的痛觉过敏抑制效果。
[0088] (5)利用双通道重量平均法测定对MIA非给药后肢的重量负荷率
[0089] 通过给与MIA而诱发了OA的大鼠后肢发生疼痛症状。因此，大鼠为了避免体重对MIA给药后肢的加重，而对无疼痛的MIA非给药后肢的体重负荷上升。但是，在疼痛症状因试验物质的给药而改善的情况下，大鼠对MIA给药后肢的加重变得容易，相应地对MIA非给药后肢的重量负荷率降低。将该对MIA非给药后肢的重量负荷率作为指标，测定本发明镇痛剂的镇痛作用。
[0090] 关于对MIA非给药后肢的重量负荷率，在试验药的最终给药1小时后使用小动物用镇痛评价装置(双足平衡测痛仪：Linton Instrumentation制)测定对大鼠的左右后肢的重量分配，使用下式求出对MIA非给药后肢的重量负荷率。另外，计算出各组的平均值±标准误差，显著性差异的检验与上述1.(4)同样地进行。
[0091] 对MIA非给药后肢的重量负荷率(%)
[0092] =〔(对MIA非给药后肢的体重负荷-对MIA给药后肢的体重负荷)÷(对MIA非给药后肢的体重负荷+对MIA给药后肢的体重负荷)〕×100
[0093] 将上述试验结果的一例示于图3。与正常对照组相比，通过给与MIA诱发了OA的发病对照组的对MIA非给药后肢的重量负荷率显著上升。与此相对，如图3所示，在给与MIA后向腹腔内反复给与试验药(化合物4)的试验药给药组中，与发病对照组相比，对MIA非给药后肢的重量负荷率显著降低。这样，确认到本发明镇痛剂对于通过给与MIA诱发的OA所导致的疼痛具有优异的镇痛效果。
[0094] 3.向MIA诱发OA大鼠反复给与本发明镇痛剂的试验〔2〕
[0095] (1)对于机械刺激的50%反应阈值的测定
[0096] 向MIA诱发OA大鼠反复给与本发明镇痛剂，与上述试验1.(4)同样地实施冯弗雷试验，测定各个50%反应阈值。关于试验药给药1小时后的50%反应阈值，与上述1.(4)同样地计算出50%反应阈值的恢复率(%)。将该试验结果的一例示于表4。
[0097] [表4]
[0098]
[0099] 由表4可知，本发明镇痛剂对于通过给与MIA所诱发的OA的痛觉过敏显示出优异的抑制效果。
[0100] (2)利用双通道重量平均法测定对MIA非给药后肢的重量负荷率
[0101] 以0.5mg/kg/天的用量向MIA诱发OA大鼠的腹腔内反复给与本发明镇痛剂，将与上述试验2.(5)同样地测定了对MIA非给药后肢的重量负荷率的试验结果的一例示于图4。
[0102] 由图4可知，本发明镇痛剂(化合物16)显著地降低了重量负荷率，即便是其它化合物，重量负荷率也降低，因此确认到本发明镇痛剂对于通过给与MIA所诱发的OA的疼痛具有镇痛效果。
[0103] 药理试验II：对于多发性硬化症模型大鼠的镇痛作用
[0104] 使用作为产生慢性疼痛的多发性硬化症(multiple sclerosis;MS)模型动物的实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoallergic encephalomyelitis;EAE)大鼠，进行调查本发明镇痛剂的镇痛作用的下述实验。
[0105] (1)EAE大鼠的制作
[0106] 测定7周龄雌性Lewis系大鼠的对于机械刺激的50%反应阈值，筛选正常对照组。对于正常对照组以外的大鼠，向麻醉了的大鼠的左后肢皮下给与等量混合0.4mg/mL来自豚鼠髓鞘碱性蛋白的肽(MB68-84)溶液和弗氏完全佐剂(Adjuvant Complete Freund H37Ra)而成的乳液0.1mL进行免疫，制作EAE大鼠。
[0107] (2)组编制
[0108] 关于实验动物7周龄雌性Lewis系大鼠，以1组8只的形式进行正常对照组、发病对照组、试验药0.25mg/kg/天给药组、试验药0.50mg/kg/天给药组4组的组编制。
[0109] (3)试验药的给药
[0110] 从免疫日开始至28天后为止1天1次对试验药给药组以0.25mg/kg/天或0.50mg/kg/天的用量反复腹腔内给与化合物4。
[0111] (4)对于机械刺激的50%反应阈值的测定(冯弗雷试验)的结果
[0112] 与上述药理试验I的1.(4)同样地实施冯弗雷试验，经时地测定各组对于机械刺激的50%反应阈值，通过下式计算出50%反应阈值的恢复率(%)。关于显著性差异的检验，在正常对照组与发病对照组间使用2组检验(t检验或Welch检验)，在发病对照组与试验药给药组间使用非参数或参数Dunnett型多重比较来进行。使用SAS系统版本8.2(SAS临床前期程序包Ver.5.0、SAS Institute Japan)进行分析，将p<0.05作为具有显著性差异。
[0113] 需要说明的是，该EAE大鼠从免疫日开始11天后至19天后发生了脱髓鞘变性所引起的临床症状(麻痹)，因此未对这期间的对于机械刺激的50%反应阈值所引起的镇痛作用进行评价。
[0114] 50%反应阈值的恢复率(%)=〔(试验药给药组的50%反应阈值-发病对照组的50%反应阈值)÷(正常对照组的50%反应阈值-发病对照组的50%反应阈值)〕×100
[0115] 将该试验的结果的一例示于表5。
[0116] [表5]
[0117]
[0118] ※:P＜0.05
[0119] 在上述试验中，关于给与用来自豚鼠髓鞘碱性蛋白的肽和弗氏完全佐剂而免疫的发病对照组，在短暂性的麻痹发病的前后，对于机械刺激的50%反应阈值与正常对照组相比显著降低。与此相对，由表5可知，在免疫后向腹腔内反复给与试验药(化合物4)的试验药给药组中，显示出优异的50%反应阈值的恢复率。这样，确认到本发明镇痛剂对于与EAE相伴的疼痛具有优异的镇痛效果。
[0120] 药理试验III：对于格林-巴利综合征模型大鼠的镇痛作用
[0121] 使用作为产生慢性疼痛的格林-巴利综合征模型动物的实验性自身免疫性神经炎(experimental autoimmune neuritis; EAN)大鼠，进行调查本发明镇痛剂的镇痛作用的下述实验。
[0122] (1)EAN大鼠的制作
[0123] 测定7周龄雌性Lewis系大鼠的对于机械刺激的50%反应阈值，筛选正常对照组。对于正常对照组以外的大鼠，向麻醉了的大鼠的左后肢皮下给与等量混合2mg/mL来自牛P2蛋白的肽(SP-26)溶液和弗氏完全佐剂(Adjuvant Complete Freund H37Ra)而成的乳液0.1mL进行免疫，制作EAN大鼠。
[0124] (2)组编制和试验药的给药
[0125] 与药理试验II的(2)和(3)同样地进行组编制，给与试验药。
[0126] (3)对于机械刺激的50%反应阈值的测定(冯弗雷试验)的结果
[0127] 与上述药理试验I的1.(4)同样地实施冯弗雷试验，经时地测定各组对于机械刺激的50%反应阈值。与上述药理试验II的(4)同样地进行显著性差异的检验，计算出50%反应阈值的恢复率(%)。需要说明的是，该EAN大鼠从免疫日开始12天后至21天后发生了脱髓鞘变性所引起的临床症状(麻痹)，因此未对这期间的对于机械刺激的50%反应阈值所引起的镇痛作用进行评价。
[0128] 将该试验结果的一例示于表6。
[0129] [表6]
[0130]
[0131] ※:p＜0.05
[0132] 在上述试验中，给与用来自牛P2蛋白的肽和弗氏完全佐剂而免疫的发病对照组，在短暂性的麻痹发病的前后，对于机械刺激的50%反应阈值与正常对照组相比显著降低。与此相对，由表6可知，在免疫后向腹腔内反复给与试验药(化合物4)的试验药给药组中，显示出优异的50%反应阈值的恢复率。这样，确认到本发明镇痛剂对于与EAN相伴的疼痛具有优异的镇痛效果。
[0133] 产业上的可利用性
[0134] 如上述的药理试验结果所示，以使用了作为OA模型的MIA诱发OA大鼠的动物实验为首，在使用了多发性硬化症或格林-巴利综合征等脱髓鞘疾病模型大鼠的动物实验中，本发明镇痛剂具有优异的镇痛效果和痛觉过敏抑制效果。因此，本发明镇痛剂作为各种疼痛疾病、例如OA或脱髓鞘疾病等所引起的疼痛的预防或治疗剂的有用性高。
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