图1柱状图表示在痛觉过敏模型中用盐水或7A14A肽治疗的大鼠的疼痛阈值。MI：治疗前的疼痛阈值；MF：给予治疗后的疼痛阈值。为了评价疼痛敏感性，采用大鼠爪压力试验。在足跖内注射前列腺素E2(100ng/爪)之前(最初测量)和之后3小时(最终测量)，测定疼痛极限值，该值用缩爪时所需要的压力(单位：克)表示。临用伤害性物质之前，口服给予肽(5μg/kg)或盐水(对照组)。数据表示每组5只动物的平均值±e.p.m.。与初始测量值相比*p＜0.05，与对照组相比**p＜0.05。
图2曲线图表示在大鼠痛觉过敏模型中由7A14A肽产生的抗伤害感受作用的持续时间。为了评价疼痛敏感性，采用大鼠爪压力试验。在用合成肽(5μg/kg)或盐水(对照组)口服治疗之前(时间0)以及之后3小时、120小时和192小时(最终测量)测定了疼痛极限值，该值用缩爪时所需要的压力(单位：克)表示。在各个最终测量之前3小时注射用作痛觉过敏物质的前列腺素(100ng/爪)。数据表示每组6只动物的平均值±e.p.m.。与对照组相比*p＜0.05。
图3柱状图表示在痛觉过敏模型中用盐水或7A14A肽治疗的大鼠的疼痛阈值。将7A14A肽稀释，然后在稀释后0天、30天、40天、60天或90天，在模型中进行了试验。为了评价疼痛敏感性，采用大鼠爪压力试验。在足跖内注射前列腺素E2(100ng/爪)后3小时测定疼痛极限值，该值用缩爪时所需要的压力(单位：克)表示。临用伤害性物质之前，口服给予用前稀释或者稀释后30天、40天、60天或90天(dias/day)的肽(5μg/kg)或盐水(salina/saline)(对照组)。数据表示每组5只动物的平均值±e.p.m.。与初始测量值相比*p＜0.05，与对照组相比**p＜0.05。
图4柱状图表示在大鼠痛觉过敏模型中用盐水或7A14A肽治疗的疼痛阈值。为了诱导神经病性疼痛，按照Bennett和Xie所述方法(1988)，实施外科手术对坐骨神经进行慢性压迫。为了评价痛觉过敏，采用大鼠爪压力试验(Analgesy-Meter UgoItália；Randall和Sellito(1957)。动物用盐水(对照)或sem ponte(肽7A14A(1μg/kg))进行口服治疗。在治疗之前(初始测量)，在口服给予盐水或肽后第14天以及24小时、48小时72小时和96小时进行爪压力试验。
图5A和5B柱状图表示小鼠内脏性疼痛模型中由ENPAK和7A14A肽产生的抗伤害感受作用。
发明详述
概况
本公开内容的特征是用于治疗疼痛(例如急性疼痛或慢性疼痛)的新型肽。肽可降低疼痛敏感性，具有镇痛作用。在一些实施方案中，所述肽具有抗伤害感受作用。该肽可通过例如激活阿片样物质受体来诱导痛觉缺失。该肽可产生长效镇痛和/或抗伤害感受作用。本文还描述了这类肽的使用方法(例如用于治疗疼痛)、这类肽的制备方法及含有这类肽的药盒和组合物。
疼痛和伤害感受
国际疼痛研究学会(International Association for the Study of Pain，IASP)将疼痛定义为“一种不愉快的感觉性、情绪性感受，我们主要将其与组织损害联系在一起，或者从组织损害方面进行描述，或者既与组织损害相联系又从损害方面进行描述”。这一定义认为疼痛是一种综合感觉、情绪和认知的现象，对于遭受疼痛的患者，不一定存在身体上的病理变化。可从概念上将疼痛视为由三个层次水平构成：感觉-分辨组成(例如部位、强度、性质)、动机-情绪组成(例如抑郁、焦虑)和认知-评价组成(例如关于疼痛起因和意义的认知)。疼痛的感知的支持基础在于感觉神经元(伤害性感受器)系统和具体响应潜在有害的组织损害性刺激的神经传入途径。所述传入途径的活动受非伤害感受病理生理(例如神经系统处理异常)或心理因素的影响。
疼痛可以是潜在疾病或病症的症状，或者疼痛本身即为一种疾病。疼痛一般可分成两个类型：急性和慢性。急性疼痛和慢性疼痛之间的区别所根据的不是其感受的持续时间，而是疼痛本身的性质。主要的区别是急性疼痛在损害之后起保护作用，而慢性疼痛不起此作用或不适于任何其它目的。急性疼痛是疼痛症状；而慢性疼痛是疼痛疾病。
大部分急性疼痛由疾病、炎症或组织损伤造成。该疼痛类型一般在例如创伤或外科手术之后突然发生，并可伴有焦虑或情绪低落。通常可以诊断出急性疼痛的原因并对其进行治疗，且疼痛常常是自限性的，也就是说，它限于特定时间段并且严重。在一些情况下，急性疼痛可转变成慢性疼痛。
普遍认为慢性疼痛本身就是疾病。环境和心理因素可使之恶化。慢性疼痛比急性疼痛持续时间更长，并可对许多药物治疗具有抗性。
根据临床特征，可推断持续疼痛机制的主要类型。基于推测的病理生理的分类，在广义上将疼痛综合征分成伤害感受性、神经病性、精神性、混合型或特发型。
伤害感受性疼痛机制：在临床上，如果可以推知疼痛与随组织损伤引发过程而来的伤害性感受器刺激和随后的感觉神经纤维活化有关，则疼痛可称为“伤害感受”。伤害感受性疼痛包括受有害刺激而正常激活伤害感受系统。伤害感受由四个过程组成：转导、传递、感知和调节。
正常体感处理包括由组织损伤激活的传入系统和伴发炎症之间的相互作用。主要的传入系统包括伤害性感受器(A-δ纤维和C纤维)、脊髓背角的信号处理、上行性神经通路以及丘脑和其它特化脑结构。外周伤害性感受器在主要的传入伤害感受(感觉)神经元末端略有髓鞘(A-δ纤维)或无髓鞘(C纤维)。外周伤害性感受器具有各种不同的响应特性，它们可存在于皮肤、肌肉、关节和一些内脏组织。
伤害感受过程始于响应有害刺激时在外周伤害性感受器上的转导(去极化)。传递是由此将这些刺激沿初级传入伤害感受轴突行进到脊髓然后再行进到高级中心的过程。只有当冲动到达脑部时，才能通过脑力识别为疼痛。这就是感知。
最终的疼痛感知取决于所述传入系统的活动及其在多个神经系统水平上的调节。疼痛调节取决于内源性阿片样物质能系统(opioidergic system)和其它疼痛调节系统的活动。在阿片样物质能系统中，通过内源性阿片样化合物与阿片样物质受体(主要为μ、δ和κ阿片样物质受体)结合介导痛觉缺失。内源性阿片样物质分布广，并与已知调节稳态、响应应激和疼痛的系统密切相关。在这个复杂的系统中，5-羟色胺和去甲肾上腺素等其它神经递质也在内源疼痛调节系统中发挥作用。
伤害感受性疼痛可以是急性的(短暂、间歇性的)或持续的(长期、慢性的)，主要可包括躯体或内脏组织的损伤。由躯体初级传入活化引起的疼痛称为躯体性疼痛，并且通常是局限性的，且描述为酸痛(aching)、压痛(squeezing)、刺痛(stabbing)或跳痛(throbbing)。关节炎和骨转移疼痛为躯体性疼痛的实例。在内脏中由传入受体的刺激引起的疼痛称为内脏性疼痛。由空腔脏器梗阻所引起的内脏性疼痛定位差(因为大多数内脏不含伤害性感受器)，常常用绞痛(cramping)和咬痛(gnawing)来描述，在一天内的疼痛强度是变化的。当涉及器官包膜时，疼痛可描述为锐痛(sharp)、刺痛或跳痛，描述语与躯体疼痛有关的描述类似。
伤害感受性疼痛可涉及急性炎症或慢性炎症。炎症生理学十分复杂。除了由炎性细胞和/或免疫细胞释放或者由伤害性感受器上的浆组分所产生的炎性介质的活性以外，还可包括由C多觉伤害性感受器逆向释放的物质。这种“神经源性炎症”包括内源性促疼痛化学物质(称为P物质)以及5-羟色胺、组胺、乙酰胆碱和缓激肽的释放。这些物质激活和敏化其它伤害性感受器。在损伤部位产生的前列腺素通过降低有害刺激的阈值以进一步提高对炎症的伤害感受响应。伴有伤害感受刺激的慢性炎症可能是持续疼痛的原因。
疼痛的实例：有许多疼痛的实例和疼痛的原因。实例包括分娩疼痛、心脏病发作疼痛、手术期间伴发的疼痛或手术之后的疼痛、截肢之后的疼痛、癌症伴发性疼痛和严重创伤后的疼痛(例如与头部和脊髓损伤有关的疼痛)。其它非限制性的实例和原因包括：
蛛网膜炎：其中覆盖脑和脊髓的三层膜之一的称为蛛网膜的膜发生炎症的病况。包括感染或创伤在内的多种原因可导致此膜发炎。蛛网膜炎可引起致残性、进行性、甚至持久性疼痛。
关节炎，例如关节炎病症，例如：骨关节炎、类风湿性关节炎、关节强硬性脊椎炎和痛风。这些疾病的特征是四肢关节疼痛。
累及身体软组织的炎症性疾病，包括腱炎和粘液囊炎。
背痛：使人伤残的常见原因，尤其是下背部。背痛包括坐骨神经痛，它可延伸至腿部。背痛的另一个常见类型与脊柱椎间盘有关。椎间盘通过减震保护脊柱，但椎间盘随着年龄增长往往发生退化，有时还会发生破裂。脊椎前移是当一个椎骨延伸超过另一个椎骨时发生的背部病症，对神经产生压力并因此产生疼痛。神经根损伤(神经根病)是严重病症，可能引起剧烈疼痛。
烧伤疼痛：例如与一度、二度或三度烧伤有关的疼痛。即使在伤口愈合之后，受治疗者仍可在烧伤部位出现慢性疼痛。
癌症疼痛：这种疼痛的可能原因是肿瘤生长、癌或肿瘤转移、癌症治疗或者与癌症对身体的持久作用有关的慢性问题。
头痛：包括慢性头痛，例如偏头痛、丛集性头痛和紧张性头痛。偏头痛的特征是跳痛，有时呈其它症状，例如恶心和视觉障碍。应激可引发偏头痛，偏头痛还使患病者有中风风险。丛集性头痛的特征是头部一侧极度的刺痛。紧张性头痛常常被描述为头部像被带子紧紧箍住一样。
头部和面部疼痛可能是疼痛难忍的，可能由例如牙科疾病或颅神经痛等病症引起，其中脸、头或颈部的某一神经发炎。三叉神经痛累及大量的颅神经，其特征是刺痛、射痛(shooting pain)。
肌肉疼痛的范围可从肌肉酸痛、痉挛或劳损到伴有麻痹的严重强直。其它致残综合征为纤维肌痛，这是一种特征是疲劳、僵硬、关节触痛和广泛性肌肉疼痛的疾病。多肌炎、皮肌炎和包涵体肌炎是以肌肉炎症为特征的疼痛病症。它们可能由感染或自身免疫功能障碍引起，有时与结缔组织病症有关，例如狼疮和类风湿性关节炎。
肌筋膜疼痛综合征累及位于身体肌肉内称为扳机点的敏感区。纤维肌痛是肌筋膜疼痛综合征的一个类型。
神经病性疼痛是一种由外周神经系统或中枢神经系统神经损伤引起的疼痛。神经病性疼痛可发生在身体的任何部位，常常被描述为灼热感、烫觉。它可由累及神经的疾病(例如糖尿病)或创伤引起，或者它可以是癌症治疗的结果，因为化疗药物可能影响神经。除许多神经病性疼痛病况外，还有三叉神经痛、糖尿病性神经病(由糖尿病血管问题继发的神经损伤引起)；可在损伤之后发生的反射性交感神经营养不良综合征；幻肢痛和可由外科手术切除肢体产生的截肢后疼痛；可在带状疱疹发生后出现的疱疹后神经痛以及可由脑或脊髓创伤引起的中枢性疼痛综合征。
反射性交感神经营养不良综合征或RSDS：伴有灼痛和对温度的超敏反应。RSDS常常由创伤或神经损伤引发，RSDS引起受累区域皮肤变得特别光亮。最近几年中，RSDS被称为复杂区域疼痛综合征(complex regional pain syndrome，CRPS)；在过去则常常称为灼痛。
重复性应激损伤：由正常工作或其它日常活动过程中进行重复动作引起的肌肉病症。它们包括：见于音乐家和作家及其他人的指痉挛；压迫性或受压性神经病变，包括腕长期过度伸展引起的腕管综合征；以及累及一个或多个腱的腱炎或腱鞘炎。
坐骨神经痛：由坐骨神经受压引起的疼痛性病况，该主神经由脊髓分支并向下延伸到股、腿、踝和足部。坐骨神经痛的特征是臀部疼痛，可能由多种因素导致。用力、肥胖症和不良姿势都可使坐骨神经受压。坐骨神经痛的一个常见原因是椎间盘突出。
带状疱疹和其它疼痛性疾病累及皮肤：疼痛是许多皮肤疾病(包括皮疹)的常见症状。带状疱疹(herpes zoster)是一种感染，可引起难以治疗的剧烈疼痛。用抗病毒药进行迅速治疗对于阻止感染十分重要，如果拖延则可导致称为疱疹后神经痛的相关病症。累及皮肤的其它疼痛性疾病包括：血管炎或血管炎症；其它感染，包括单纯疱疹；皮肤肿瘤和囊肿以及与神经纤维瘤病(一种神经遗传病)有关的肿瘤。
运动损伤：例如扭伤、劳损、挫伤、脱位和骨折都可引起疼痛。在极端情况下，运动损伤可出现代价高和疼痛的脊髓损伤和头损伤形式。
椎管狭窄(Spinal stenosis)：脊髓周围的管道变窄。该病症随着衰老而自然发生。椎管狭窄引起腿部衰弱，当人站立时通常感到腿痛，坐下时腿痛常常减轻。
手术疼痛：外科手术可能需要在手术期间局部或全身麻醉和/或在手术之后给药以控制不适。
颞下颌疾病(Temporomandibular disorder)：颞下颌关节(颌)受损和/或咀嚼和说话的肌肉变紧张的疾病。该病可能是多种因素的结果，例如颌损伤或关节错位，并可引发多种症状，最常见为颌、脸和/或颈部肌肉疼痛。
创伤：例如可在家中、在工作场所、在运动活动期间或在路上等受伤后发生。这些损伤的任一种可引起严重伤残和轻微或严重疼痛。一些脊髓损伤的患者会感受到从刺痛到灼痛或两者兼有的剧烈疼痛。这类受治疗者可能对冷热温度和接触敏感。会把接触感受成为剧烈灼痛，表明了往来脑部传递的信号异常。这种病症称为中枢性疼痛综合征，或者如果损伤发生在丘脑(用于处理全身感觉的脑中心)，则称为丘脑疼痛综合征。可能累及患有多发性硬化、帕金森病、截肢、脊髓损伤或中风的受治疗者。
血管疾病或损伤，例如血管炎或血管炎症、冠状动脉疾病和循环系统疾病：血管疼痛累及数百万美国人，当血管和神经之间的通讯受阻时便会发生。血管破裂、痉挛、狭窄或梗阻以及其中供应器官、组织或四肢的血液受阻时出现的局部缺血，也可导致疼痛。与血管疾病有关的疼痛还包括脑血管意外(例如中风)后。
可以通过本文所述的化合物和方法治疗的疼痛的其它实例包括由以下疾病引起的疼痛：交感神经营养不良、肿瘤性疼痛、牙痛、痛经、肾痛、经期绞痛或胆绞痛、关节痛、眼内高压、关节镜后疼痛、妇科腹腔镜术后疼痛、经皮肾石切除术产生的疼痛、耻骨后根治性前列腺切除术后疼痛、胸廓切开术后疼痛、儿科受治疗者扁桃体切除术后疼痛、子宫切除术后疼痛、剖腹产术后疼痛、可卡因或阿片样物质依赖或戒断、细胞增殖、小细胞肺癌、抑郁症和精神病、炎症、由血管生成活性增加所致疾病、创伤、冠状动脉缺血性疾病、帕金森病和运动障碍、肝性脑病、认知疾病、阿尔茨海默病、搔痒，例如由患多囊卵巢女性的肝内胆汁郁积或高胰岛素血症引起的瘙痒。
疼痛源
疼痛体验可根据伤害性感受器的来源和受累情况(如有的话)分类。
皮肤疼痛由皮肤组织或表皮组织损伤引起。皮肤伤害性感受器终止于皮肤正下面，由于高度密集的神经末梢，因此产生清晰可辨的局部短期疼痛。产生皮肤疼痛的损伤的实例包括纸割伤、小伤口、轻度(一度)烧伤和撕裂伤。
躯体疼痛源自韧带、腱、骨骼、血管，甚至神经本身。它被躯体伤害性感受器检测出来。在这些缺乏疼痛感受器的区域产生钝性难定位的疼痛，疼痛期比皮肤疼痛期长；实例包括扭伤和骨折。
内脏性疼痛源自身体内脏或器官。内脏伤害性感受器位于身体器官和内部腔穴内。在这些更缺乏伤害性感受器的区域产生的疼痛通常比躯体疼痛更重并且持续更长时间。内脏性疼痛极难定位，若干内脏组织损伤表现出“牵涉性”疼痛，痛感所处位置与损伤部位完全不相关。心肌缺血(流入部分心脏肌肉组织的血液丧失)可能是已知的牵涉性疼痛的最佳实例；发生在上胸部的感觉为窒闷感，或者发生在左肩、左臂或甚至左手的感觉为疼痛。牵涉性疼痛可用以下发现来解释，即内脏的疼痛感受器同样激发受皮肤组织激发的脊髓神经元。由于脑通常与随着皮肤或肌肉的躯体组织刺激而发生的这些脊髓神经元的放电有关，因此由内脏发生的疼痛信号被脑解释为源自皮肤。
幻肢痛是来自已丧失肢体或个人不再从肢体接受生理信号的疼痛感。
神经病性疼痛(亦称神经痛)是由外周神经系统或中枢神经系统(CNS)中感觉轴突的直接损伤或者功能障碍所产生的推断为疼痛综合征的名称。这些变化可由神经组织或非神经组织的损伤引起。尽管神经病性疼痛受正在发生的组织损伤的影响，但有假设认为使疼痛持续的基本机制已变得独立于最初的损伤或损害。疼痛可以是或不是刀割样(lacinating)疼痛。神经病性疼痛综合征与牵涉性疼痛、异常性疼痛(由轻触等无害刺激引起的疼痛)、痛觉过敏(对有害刺激的响应增强)或痛觉过度(夸大对疼痛性刺激的响应，在刺激停止后有持续痛感)有关。
已经认识到在外周产生的神经病性疼痛可发生一些神经生理和神经解剖变化。外周神经轴突损伤可在损伤后数周至数月导致神经再生异常。受损轴突可生长出多个神经新芽，其中一些形成神经瘤。这些神经新芽，包括形成神经瘤的神经新芽，可产生自发性活动，其强度在损伤之后数周达到峰值。与正常轴突不同，这些结构对生理膨胀(physical distention)更敏感，临床上与触痛和出现提内尔征(Tinel’s sign)(即当轻拍或推拿该部位时出现麻刺感或“发麻”感)有关。在一段时间后，可在神经损伤区域的神经新芽之间或脱髓鞘轴突之间发生非典型连接，允许在躯体传出神经或交感传出神经与伤害性感受器之间“相互作用(cross-talk)”。在外周神经损伤之后还可以生出背根纤维。
伤害性感受器
伤害性感受器是游离神经末梢，它们在背根神经节脊柱外围具有其胞体。存在机械伤害性感受器、热伤害性感受器和化学伤害性感受器。它们存在于皮肤以及例如骨膜和关节表面等的内表面上。内表面深处仅提供稀少的疼痛感受器，如果这些区域发生组织损害，则会传递慢性疼痛感。
伤害性感受器的两种主要类型Aδ伤害性感受器和C伤害性感受器分别介导快速痛和慢速痛。薄髓鞘型Aδ纤维介导快速痛，可用锐痛、急性痛、刺痛描述，且包括机械痛和热痛(分别由Aδ机械敏感伤害性感受器(mechanosensitive nociceptor)和Aδ机械温度伤害性感受器(mechanothermal nociceptor)介导)。由较慢的无髓鞘型C疼痛纤维介导的慢速痛为酸痛、跳痛、灼痛。对热、机械和化学刺激作出反应的多觉伤害性感受器为C伤害性感受器类型。化学性疼痛(Chemical pain)是慢速痛的实例。伤害性感受器不适应刺激。在一些情况下，当疼痛刺激延续时，疼痛纤维兴奋性变得更高，导致痛觉过敏。
中枢神经系统中伤害感受信号的传递：中枢神经系统中伤害感受的传递有两条通路：新脊髓丘脑束(用于快速痛)和旧脊髓丘脑束(用于慢速痛)。
快速痛沿Aδ纤维型传导止于脊髓背角I层(缘层(laminamarginalis))。然后，从新脊髓丘脑束的二级神经元出发，到穿过灰连合的中线并在对侧前外侧柱(contralateral anterolateral column)中向上移动的长纤维。然后，这些纤维止于丘脑腹侧基底核丛(VentrobasalComplex，VBC)的网状结构上。三级神经元于此与体感皮层连接。
慢速痛通过较慢的C纤维型传递至统称胶状质的背角II层和III层。二级神经元离开，并止于同样在背角上的V层。然后，三级神经元与来自快速通路的纤维连接，经由灰连合穿过相反一侧，向上通过前外侧通路移动。这些神经元大多止于脑干，其中1/10的纤维在丘脑中停止，其余在骨髓、脑桥和中脑顶盖、导水管周围灰质停止。
伤害感受的后果：当伤害性感受器受到刺激时，它们通过脊髓中的感觉神经元传递信号。这些神经元释放一种主要的兴奋性神经递质谷氨酸，将信号由一个神经元传递给另一个。
如果信号被送达脑干网状结构、丘脑，则疼痛被感知，但疼痛为钝型且较难定位。当疼痛部位确定并且性质更具体时，信号可由丘脑传递到大脑体感皮层。
疼痛诊断
测量疼痛并没有完全准确的方法。有时，如在头痛的情况下，诊断的最佳辅助是受治疗者自己描述疼痛的类型、持续时间和部位。
可以采用多项技术来鉴定疼痛的原因。实例包括：
电诊断法包括肌电图描述法(EMG)、神经传导研究和诱发电位(EP)研究。EMG的信息可精确鉴定出哪些肌肉或神经衰弱或疼痛。将细针插入肌肉中，医生可以看到或听到EMG机上显示的电信号。至于神经传导研究，将两套电极(与心电图所使用的电极类似)置于肌肉之上的皮肤上。第一套给予受治疗者轻微电击，刺激使肌肉活动的神经。第二套电极用来记录神经的电信号，并可由此信息确定存在的神经损伤。EP试验也包括两套电极--一套用于刺激神经(这些电极与肢体连接)，另一套置于头皮上，用于记录神经信号传递到脑的速度。
成像，尤其是核磁共振成像(MRI)提供身体结构和组织的图像。MRI利用磁场和无线电波来分辨健康组织与患病组织。
神经系统检查，其中测定运动、反射、感觉、平衡和协调。
还可使用X射线评价例如骨骼和关节。
痛觉缺失
内源镇痛系统是由三个主要组元介导的：导水管周围灰质(中脑中)、中缝大核(骨髓中)和伤害感受抑制神经元(脊髓背角内)，起抑制伤害感受的作用，发射神经元也位于脊髓背角。
可通过阿片样物质受体介导抗伤害感受作用。若干种不同类型的阿片样物质受体在响应与内源性阿片样肽(opioid peptide)结合时被激活。存在于身体各部位的这些受体抑制神经元放电，而由伤害性感受器活化反倒不被刺激得抑制放电。因此，阿片样物质受体的活化(例如用本文所述肽)可引起抗伤害感受和镇痛作用。
阿片样物质受体是一组以阿片样物质为配体的阿片样物质G蛋白偶联受体。内源性阿片样物质为强啡肽、脑啡肽和内啡肽。有三种主要的阿片样物质受体亚型：μ(mu)、κ(kappa)和δ(delta)。已鉴定出孤儿阿片样物质受体(ORL1)。在人组织中鉴定出多种受体亚型(μ1、μ2；κ1、κ2、κ3；δ1、δ2)。
μ受体：μ阿片样物质受体在突触前或突触后存在，这取决于细胞类型。μ受体主要存在于导水管周围灰质区突触前和脊髓背角浅层。μ受体定位的其它区域包括嗅球外丛层、伏隔核(nucleus accumbens)、大脑皮质的若干层和一些杏仁核中。数据还表明在包括炎性细胞和外周神经末梢在内的外围存在μ阿片样物质受体。μ受体对脑啡肽和β内啡肽有高亲和力，但对强啡肽的亲和力低。阿片样生物碱吗啡和可待因与μ受体结合。由激动剂(例如吗啡)活化的μ受体引起痛觉缺失、镇静、血压下降、搔痒、恶心、欣快、呼吸减弱、瞳孔缩小(缩瞳)和常常导致便秘的肠蠕动减少。这些作用中的一些，例如镇静、欣快和呼吸减弱，往往随着连续使用因为产生耐受性而消失。还观察到对镇痛作用的耐受性。瞳孔缩小和肠蠕动减少往往持续；对这些作用几乎不产生耐受性。很大程度上因为这些作用由不同μ受体亚型的活化引起，因此按不同的速率对不同的作用产生耐受性。刺激μ1受体阻断疼痛，而刺激μ2受体则引起呼吸抑制和便秘。
κ受体：κ阿片样物质受体也与痛觉缺失有关，但是活化也会产生明显的恶心和烦燥不安。κ配体还以其特有的利尿作用而著称，这是由其负调节抗利尿激素(ADH)所致。κ激动作用针对缺氧/局部缺血具有神经保护作用，因此，κ受体可代表新的治疗靶标。κ受体的内源配体为强啡肽。κ受体可位于外周、感觉神经元、脊髓和脑中。κ激动剂可产生拟神经病作用。一种称为ketocyclazocine的药物与κ受体结合。
δ受体：δ阿片样物质受体活化也产生痛觉缺失。一些研究表明它们还可能与癫痫发作有关。δ受体的内源配体是脑啡肽。激活δ受体的外源配体可以模拟称为“缺血预适应(ischemic preconditioning)”现象。根据实验，如果诱发短期的短暂性局部缺血，既使随后实行供血永久中断，下游组织也得到强有力的保护。具有δ活性的阿片制剂和阿片样物质模拟此作用。在大鼠模型中，引入δ活性配体导致显著的心脏保护作用。
镇痛药(例如本文所述肽)对疼痛的伤害感受机制起作用而产生镇痛作用。例如，本文所述的肽可诱导由阿片样物质受体活化、特别是κ阿片样物质受体和/或δ阿片样物质受体活化而介导的镇痛作用，并产生抗伤害感受作用(和镇痛作用)。
疼痛治疗
疼痛治疗(例如管理)的目的是改善功能，使受治疗者能够工作、上学、参加其它日常活动、缓解痛苦和/或改善疼痛患者的生活质量。可获得多种治疗法。实例包括：
本文所述的肽(例如镇痛和抗伤害感受肽)。可以使用一种肽或肽的组合(例如一种以上本文所述的肽)治疗疼痛。
对乙酰氨基酚(acetaminophen)，可无需处方按处方规格制剂出售，或者可与可待因组合配制。
针刺疗法，其涉及在身体精确穴位上用针。
镇痛药，是包括大多数止痛药的一类药物，例如阿司匹林、对乙酰氨基酚(paracetamol/acetaminophen)和布洛酚(ibuprofen)以及例如本文所列举的其它药物。其它实例包括非甾体抗炎药(NSAID)，例如水杨酸盐；COX2抑制剂；麻醉品，例如吗啡；具有麻醉性质的合成药，例如曲马多(tramadol)、对乙酰氨基酚(泰诺(Tylenol))、可待因(泰诺#2、3、4)、右丙氧芬和对乙酰氨基酚合剂(Darvocet)(右丙氧芬(Propoxyphene)/对乙酰氨基酚)、达尔丰(Darvon)(右丙氧芬)、多瑞吉(Duragesic)(芬太尼(Fentanyl)贴剂)、氢吗啡酮(Hydromorphone)(Palladone、地芬迪德(Dilaudid))、吗啡(美施康定(MSContin)、Oramorph)、羟考酮(Oxycodone)(奥斯康定(OxyContin)、Roxicodone、Percocet(羟考酮/对乙酰氨基酚)、复方羟可酮(Percodan)(羟考酮/阿司匹林)、盐酸喷他佐辛和纳洛酮片剂(Talwin NX)(喷他佐辛(Pentazocine)/纳洛酮(Naloxone))、Ultracet(曲马多/对乙酰氨基酚)、Ultram(曲马多)和维柯丁(Vicodin)(氢可酮(Hydrocodone)/对乙酰氨基酚)。
抗惊厥药可用于治疗癫痫发作疾病，而且有时还开予治疗疼痛。卡马西平特别用于治疗多种疼痛性疾病，包括三叉神经痛。另一种抗癫痫药加巴喷丁，正在对其止痛性质，尤其用作神经病性疼痛的疗法进行研究。
抗抑郁药有时与神经抑制药一起用于治疗疼痛，锂被归类为精神治疗药物。另外，被称为苯并二氮杂 类的抗焦虑药也用作肌肉松弛药，并且有时用作止痛药。
抗偏头痛药包括曲坦类-舒马曲坦(sumatriptan)那拉曲坦(naratriptan)和佐米曲坦(zolmitriptan)-并特别用于偏头痛。
阿司匹林可能是最广泛使用的止痛药物，自1905年以来按非处方销售，尤其用来治疗热病、头痛和肌肉酸痛。
生物反馈用来治疗许多常见的疼痛问题，最特别的是头痛和背痛。使用专门的电子仪器，培训受治疗者了解、跟踪并控制某些身体机能，包括肌紧张、心率和皮肤温度。然后，受治疗者可学习如何通过例如应用松弛技术，以改变他/她对疼痛的反应。同样，在疼痛治疗中应用松弛技术可提高受治疗者的健康感。
辣椒素是存在于辣椒中的化学物质，也是止痛膏的主要成分。
髓核化学溶解法是其中将酶即木瓜凝乳蛋白酶直接注射到突出的腰椎盘的疗法，以期溶解椎盘周围的物质，从而减轻压力和疼痛。
按摩疗法是指用手推拿脊柱，通常用来减轻背痛。
认知行为疗法包括各种应对技能和松弛方法以助于为疼痛作准备并对付疼痛。该疗法用于手术后疼痛、癌症疼痛和分娩疼痛。
咨询辅导可给予患有疼痛的受治疗者非常必要的支持。互助小组可为药物或外科手术治疗提供重要的辅助。心理治疗还可帮助受治疗者了解疼痛所产生的生理变化。
COX-2抑制剂可有效用于例如关节炎受治疗者。COX-2抑制剂(例如塞来考昔)主要阻断环加氧酶-2，而有时由NSAID产生的胃肠副作用可能较少。
电刺激，包括经皮电刺激(TENS)、植入式神经电刺激和脑深部电刺激或脊髓电刺激，是其中对肌肉神经进行各种刺激(包括热或按摩)的操作：
-TENS采用微小的电脉冲，通过皮肤传递到神经纤维，引起肌肉发生变化，例如麻木或收缩。这进而产生短暂缓解疼痛的作用。还有证据显示，TENS可以激活能够在脊髓水平阻断疼痛传递的外周神经纤维亚类。
-外周神经电刺激采用经外科手术在经仔细选择的身体部位上放置电极。然后，受治疗者能够利用天线和发送器按需要将电流传递到患病区域。
-脊髓电刺激采用经外科手术插入脊髓硬膜外腔的电极。受治疗者能够利用小盒样的接受器和粘在皮肤上的天线来向脊髓传递电脉冲。
-脑深部或大脑内电刺激被视为极端疗法，包括外科手术刺激脑部，通常为丘脑。它用于有限的疾病，包括严重疼痛、中枢性疼痛综合征、癌症疼痛、幻肢痛和其它神经病性疼痛。
运动可为疼痛的常规疗法。因为许多类型的慢性疼痛与紧张、肌肉衰弱存在着明确的联系，而运动可通过改善血液和氧气流入肌肉而有助于产生整体健康感。由于应激可能引起疼痛，而运动、睡眠和放松有助于缓解紧张，因而有助于减轻疼痛。已经证实运动对许多患有腰痛的人是有帮助的。
催眠可用来控制身体机能或反应，也就是说，受治疗者可以经受住一定程度的疼痛。催眠可通过对神经系统的化学物质起作用、减缓冲动而使疼痛减轻。
布洛酚是镇痛药阿司匹林家族即所谓的非甾体抗炎药的成员。
一些理疗师偶尔也采用低功率激光来治疗疼痛。
还可使用磁体治疗例如运动相关疼痛和其它疼痛性疾病。磁体通常作为项圈或手表佩戴。磁体可使细胞或身体化学结构发生改变，从而使疼痛减轻。
肌肉松弛药是一组各自对身体具有整体镇静作用的药物。这些药物不会直接对肌肉起作用，然而它们集中起作用，是难得的全身松弛药。通常开予肌肉松弛药以减轻与肌肉痉挛有关的疼痛。有若干常用的肌肉松弛药类型：卡立普多(carisoprodol)(索玛(Soma))、环苯扎林(cyclobenzaprine)(Flexeril)和地西泮(Valium))。
神经封闭利用药物、化学物质或外科技术以中断身体特定区域与脑之间的疼痛信息传递。外科手术神经封闭类型包括神经切除术；脊神经背后根切除术、脊神经颅侧根切除术和脊神经三叉神经根切除术；交感神经根切除术，亦称交感神经根阻断术。
非甾体抗炎药(NSAID)(包括阿司匹林和布洛酚)被大量开出，有时称为非麻醉品或非阿片样物质镇痛药。非甾体抗炎药(NSAID)通过阻断两种酶即环加氧酶-1和环加氧酶-2起作用，这两种酶促进产生称为前列腺素的激素，该激素进而引起炎症、热病和疼痛。
麻醉品是有效的疼痛疗法，且包括阿片样物质。它们还包括可待因和吗啡。吗啡可以各种形式给予，包括用于受治疗者自我给药的泵。阿片样物质具有麻醉作用，也就是说，它们诱导镇静和止痛作用，一些受治疗者可能在身体上对它们产生依赖性。阿片样物质的其它实例包括：阿芬太尼(Alfentanil)、烯丙罗定(Allylprodine)、阿法罗定(Alphaprodine)、阿尼利定(Anileridine)、Betmeprodine、倍他美罗定(Betaprodine)、贝齐米特(Bezitramide)、丁丙诺啡(Buprenorphine)、布托啡诺(Butorphanol)、卡芬太尼(Carfentanil)、右丙氧芬(Dextropropoxyphene)、右吗拉胺(Dextromoramide)、二氢可待因(Dihydrocodeine)、地匹哌酮(Dipipanone)、埃托啡(Etorphine)、芬太尼(Fentanyl)、二醋吗啡(Diamorphine)(海洛因)、氢吗啡酮、氢可酮、左啡诺(Levorphanol)、美沙酮(Methadone)、美托酮(Metopon)、纳布啡(Nalbuphine)、尼可吗啡(Nicomorphine)、全阿片素(Omnopon)、阿片(Opium)、羟考酮、羟吗啡酮(Oxymorphone)、鸦片总碱(Pantopon)、阿片全碱(Papaveretum)、鸦片樟脑酊(Paregoric)、喷他佐辛、哌替啶(Pethidine)(麦啶(Meperidine))、苯哌利啶(Phenoperidine)、哌腈米特(Piritramide)、普鲁丁(Prodine)、普罗庚嗪(Proheptazine)、丙吡兰(Propiram)、右丙氧芬、消旋甲啡烷(Racemorphan)、瑞芬太尼(Remifentanil)、舒芬太尼(Sufentanil)、Tetrapon、替利定(Tilidine)、曲马多和三甲利定(Trimeperidine)。
物理疗法和康复包括在治疗某些疾病时应用物理学技术和方法，例如热、冷、运动、按摩和推拿。这些可用来提高机能、控制疼痛和加快受治疗者完全恢复。
吡唑啉酮是一类用于治疗关节炎和其它肌骨骼和关节疾病的非甾体抗炎药。它含有5元环内酰胺，是含有额外酮基(＝O)的吡唑衍生物。所述衍生物的实例包括：氨基安替比林(Ampyrone)、安乃近(Metamizole)、安替比林(Phenazone)和保泰松(Phenylbutazone)。
R.I.C.E.--休息、冰敷、压迫(compression)和抬高(elevation)--是许多矫形外科医师、教练员、训练员、护士和其它专业人士为临时肌肉或关节疾病(例如扭伤或劳损)提供的4项处理。
可经局部、口服或通过注射给予类固醇。当注射时，可注射入静脉或肌肉、直接注射入关节或囊，或者注射到腱和其它软组织区域周围。例如，可将可的松(cortisone)注射剂注射(例如硬膜外注射)到脊柱中以治疗背痛和/或治疗炎症。口服给予类固醇的实例包括泼尼松(prednisone)和甲泼尼龙(methylprednisolone)。
可能需要外科手术以减轻疼痛，尤其是由背部疾病或严重肌骨骼损伤引起的疼痛。外科手术可采取神经封闭的形式，或者可包括减轻破裂椎盘疼痛的手术。背部疾病的外科手术包括椎间盘切除术，或者当采用显微手术时为显微椎间盘切除术，其中整个椎盘被切除；椎板切除术，是一种外科医师通过脊骨弓形部分开槽进入只切除椎盘碎片的手术；以及脊柱融合术，这是一种整个椎盘被切除并替换上骨移植物的手术。在脊柱融合术中，两块脊骨随后融合在一起。疼痛的其它手术包括脊神经根切除术，其中切断靠近脊髓的神经；以及脊髓索切除术，其中脊髓内的神经束被切断。脊髓索切除术一般只用于对其它疗法不起作用的终末期癌疼痛。用于疼痛的另一种手术是脊髓后根入髓区手术(dorsal root entry zone operation，DREZ)，其中通过外科手术破坏与受治疗者疼痛相对应的脊柱神经元。手术偶尔用选择性破坏脑部靶区的神经元的电极进行。
物理性外部支撑，例如夹板、石膏、吊带、枕头和褥垫可用来减轻疼痛。
本文所述治疗可单独使用，或者与一种或多种本文所述的其它治疗联合使用。联合使用的治疗可以同时或序贯给予。联合治疗可包括用两种或更多种本文所述的肽治疗受治疗者。
镇痛肽
本公开内容提供具有镇痛性质并可用于治疗疼痛(例如急性疼痛或慢性疼痛)的肽。该肽可具有抗伤害感受作用。该肽可用作阿片样物质受体激动剂或部分激动剂。在一些实施方案中，所述肽可直接或间接作用于阿片样物质受体(例如κ型和/或δ型阿片样物质受体)。例如，本文所述肽可直接激活阿片样物质受体，或者可诱导释放内源性阿片样物质(从而间接影响阿片样物质受体)。
本发明的肽包括具有以下序列的肽：
R1-R2-Ser-R4-R5-R6-R7-R8-Gly-R10-Ser-R12-Pro-R14(SEQ IDNO：1)
其中：
R1为焦谷氨酸，
R2为Phe或Trp或Tyr或Leu或Thr，
R4为Pro或Arg，
R5为Glx或Asx或Gly，
R6为Asn或Gln或Leu，
R7为任何氨基酸，
R8为Lys以外的任何氨基酸，
R10为Glx或Asx，
R12为Glx或Lys，
R14为任何氨基酸，
前提条件是如果R7是Cys，则R14不是Cys，如果R14是Cys，则R7不是Cys。
在优选的实施方案中，这类肽具有本文所述7A14肽的活性，例如镇痛作用。
示例性肽包括含有SEQ ID NO：1的肽、基本由或由SEQ ID NO：1组成的肽。在优选的实施方案中，R8为Glx。
一个特别优选的肽含有以下氨基酸序列、基本由或由以下氨基酸序列组成：pGlu-Phe-Ser-Pro-Glu-Asn-Ala-Gln-Gly-Glu-Ser-Gln-Pro-Ala(SEQ ID NO：2)。
还包括这样的肽，所述肽包括与含有SEQ ID NO：1的肽、基本由或由SEQ ID NO：1组成的肽有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约82％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％同一性或完全相同的氨基酸序列，以及由在高严格性条件下与SEQ ID NO：1肽的编码核酸杂交的核酸编码的肽。这类肽可具有本文所述7A14肽的活性，例如镇痛作用。
还包括这样的肽，该肽包括与含有SEQ ID NO：2的肽、基本由或由SEQ ID NO：2组成的肽有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约82％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％同一性或完全相同的氨基酸序列，以及由在高严格性条件下与SEQ ID NO：2肽的编码核酸杂交的核酸编码的肽。这类肽可具有本文所述7A14肽的活性，例如镇痛作用。
如下进行两个序列间的“同源性”或“序列同一性”(术语在本文可互换使用)计算。为了最佳比较目的，对序列进行比对(例如可在第一氨基酸序列或第一核酸序列和第二氨基酸序列或第二核酸序列的一个或两个中引入空位用于最佳比对，对于比较目的，可忽略非同源序列)。运用GCG软件包的GAP程序，用Blossum 62得分矩阵求出最佳比对为最佳分值，其中空位罚分12，空位延伸罚分4，移码空位罚分5。然后对相应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸进行比较。当第一序列某一位置被与第二序列相应位置上相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则该分子在该位置上相同(本文所用氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。两个序列之间的百分比同一性是这两个序列共有的相同位置数的函数。本文所述相关蛋白质的比对有益于鉴定容许修饰的氨基酸位置，例如插入、缺失和取代，例如保守或非保守取代。
第一序列与例如第二序列7A14A(pGlu-Phe-Ser-Pro-Glu-Asn-Ala-Gln-Gly-Glu-Ser-Gln-Pro-Ala(SEQ IDNO：2))的比对可允许参照与7A14A的氨基酸一致的第一序列的氨基酸，例如，与7A14A的pGlu一致的第一序列的氨基酸命名为R1，与Phe一致的第一序列的氨基酸命名为R2，与第一Ser一致的氨基酸命名为R3，与第一Pro一致的氨基酸为R4，与第一Glu一致的氨基酸为R5，与Asn一致的氨基酸为R6，与第一Ala一致的氨基酸为R7，与第一Gln一致的氨基酸为R8，与Gly一致的氨基酸为R9，与第二Glu一致的氨基酸为R10，与第二Ser一致的氨基酸为R11，与第二Gln一致的氨基酸为R12，与第二Pro一致的氨基酸为R13，与第二Ala一致的氨基酸为R14。
本文所用术语“在高严格性条件下杂交”是指杂交和洗涤条件。实施杂交反应的指导可参见Current Protocols in Molecular Biology，JohnWiley&Sons，N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6，该文献通过引用结合到本申请中。该文献描述了水法和非水法，可以使用两者中的任一种。高严格性杂交条件包括于45℃左右在6X SSC中进行杂交，接着于65℃在0.2X SSC、0.1％SDS中或者基本相同的条件下进行一次或多次洗涤。
还包括这样的肽，所述肽含有与SEQ ID NO：1序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列、基本由或由与SEQ ID NO：1序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列组成。它们可在任何位置上，例如内部或末端(例如在氨基端或羧基端)。这类肽可具有本文所述的ENPAK肽或7A14肽的活性，例如镇痛作用。
还包括这样的肽，所述肽含有与SEQ ID NO：1序列相差至少一个但不超过2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列、基本由或由与SEQ ID NO：1序列相差至少一个但不超过2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列组成。它们可在任何位置上，例如内部或末端(例如在N端或C端)。这类肽可具有本文所述的ENPAK肽或7A14肽的活性，例如镇痛作用。
本公开内容还包括这样的肽，该肽含有与SEQ ID NO：1序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个保守氨基酸取代的氨基酸序列、基本由或由与SEQ ID NO：1序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个保守氨基酸取代的氨基酸序列组成。它们可在任何位置上，例如内部或末端(例如在N端或C端)。这类肽可具有本文所述的ENPAK肽或7A14肽的活性，例如镇痛作用。
还包括这样的肽，所述肽含有与SEQ ID NO：2序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列、基本由或由与SEQ ID NO：2序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列组成。它们可在任何位置上，例如内部或末端(例如在N端或C端)。这类肽可具有本文所述的ENPAK肽或7A14肽的活性，例如镇痛作用。
还包括这样的肽，所述肽含有与SEQ ID NO：2序列相差至少一个但不超过2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列、基本由或由与SEQ ID NO：2序列相差至少一个但不超过2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个氨基酸取代、添加或缺失的氨基酸序列组成。它们可在任何位置上，例如内部或末端(例如在N端或C端)。这类肽可具有本文所述的ENPAK肽或7A14肽的活性，例如镇痛作用。
本公开内容还包括这样的肽，该肽含有与SEQ ID NO：2序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个保守氨基酸取代的氨基酸序列、基本由或由与SEQ ID NO：2序列相差1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个保守氨基酸取代的氨基酸序列组成。它们可在任何位置上，例如内部或末端(例如在N端或C端)。这类肽可具有本文所述的ENPAK肽或7A14肽的活性，例如镇痛作用。
本公开内容还包括ENPAK肽或7A14肽的片段，例如，具有ENPAK肽或7A14肽的活性(例如镇痛作用)的片段。该片段可含有例如ENPAK或7A14A氨基端的5、6、7或8个氨基酸。该片段可含有例如ENPAK或7A14A羧基端的5、6、7或8个氨基酸。该片段可含有例如ENPAK或7A14A的氨基酸但不包括该肽的末端肽(例如不含氨基端残基或羧基端残基)，例如可含有5、6、7或8个ENPAK或7A14A内部氨基酸的片段。
本文所用术语“保守氨基酸取代”是指一个氨基酸被另一个具有类似性质的氨基酸取代，例如下列氨基酸组内的取代：缬氨酸、甘氨酸；甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。下列取代是保守取代进一步的非限制性实例：
丙氨酸：被以下氨基酸置换：D-Ala、Gly、β-Ala、L-Cys、D-Cys；
精氨酸：被以下氨基酸置换：D-Arg、Lys、D-Lys、homo-Arg、D-homo-Arg、Met、Ile、D-Met、D-Ile、Orn、D-Orn；
天冬酰胺：被以下氨基酸置换：D-Asn、Asp、D-Asp、Glu、D-Glu、Gln、D-Gln；
天冬氨酸：被以下氨基酸置换：D-Asp、D-Asn、Asn、Glu、D-Glu、Gln、D-Gln；
半胱氨酸：被以下氨基酸置换：D-Cys、S-Me-Cys、Met、D-Met、Thr、D-Thr；
谷氨酰胺：被以下氨基酸置换：D-Gln、Asn、D-Asn、Glu、D-Glu、Asp、D-Asp；
谷氨酸：被以下氨基酸置换：D-Glu、D-Asp、Asp、Asn、D-Asn、Gln、D-Gln；
甘氨酸：被以下氨基酸置换：Ala、D-Ala、Pro、D-Pro、Acp；
异亮氨酸：被以下氨基酸置换：D-Ile、Val、D-Val、Leu、D-Leu、Met、D-Met；
亮氨酸：被以下氨基酸置换：D-Leu、Val、D-Val、Leu、D-Leu、Met、D-Met；
赖氨酸：被以下氨基酸置换：D-Lys、Arg、D-Arg、Homo-arg、D-homo-Arg、Met、D-Met、Ile、D-Ile、Orn、D-Orn；
甲硫氨酸：被以下氨基酸置换：D-Met、S-Me-Cys、Ile、D-Ile、Leu、D-Leu、Val、D-Val；
苯丙氨酸：被以下氨基酸置换：D-Phe、Tyr、D-Thr、L-Dopa、His、D-His、Trp、D-Trp、反式-3-苯基脯氨酸、反式-4-苯基脯氨酸或反式-5-苯基脯氨酸、顺式-3-苯基脯氨酸、顺式-4-苯基脯氨酸或顺式-5-苯基脯氨酸；
脯氨酸：被以下氨基酸置换：D-Pro、L-I-噻唑烷(thoazolidine)-4-甲酸、D-1-唑烷-4-甲酸或L-1-唑烷-4-甲酸；
丝氨酸：被以下氨基酸置换：D-Ser、Thr、D-Thr、allo-Thr、Met、D-Met、Met(O)、D-Met(O)、L-Cys、D-Cys；
苏氨酸：被以下氨基酸置换：D-Thr、Ser、D-Ser、allo-Thr、Met、D-Met、Met(O)、D-Met(O)、Val、D-Val；
酪氨酸：被以下氨基酸置换：D-Tyr、Phe、D-Phe、L-Dopa、His、D-His；
缬氨酸：被以下氨基酸置换：D-Val、Leu、D-Leu、Ile、D-Ile、Met、D-Met。
可以采用本文所述技术测定本文提供用作镇痛药的肽序列变体(例如携带一个或多个氨基酸取代、添加或缺失)的适宜性。例如，可以测定候选肽(例如与SEQ ID NO：2的肽相差一个氨基酸缺失、取代或添加的肽)的镇痛作用。可以在例如前列腺素E2诱发的痛觉过敏模型中测定候选肽的镇痛作用。可将候选肽的作用与一个或多个标准相比较。例如，合适的标准可以是本文所述的肽，例如由SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成的肽。对候选肽和SEQ ID NO：2肽的镇痛作用进行比较，其中两种肽使用相同浓度，并通过相同给药途径给予。适宜的候选肽比标准品产生的镇痛作用更好或者一样良好。又或者，适宜的候选肽比标准品产生的镇痛作用持续时间更长或一样长。
SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3中的一个或多个氨基酸可为D-氨基酸或L-氨基酸。氨基酸可以是天然存在的或是非天然存在的(例如合成)类似物。可对氨基酸进行修饰。修饰包括：乙酰化(例如在肽的N端)、烷基化(例如甲基化)、生物素化、酰化、生物素化、谷氨酰化、糖基化(例如N-糖基化或O-糖基化)、异戊二烯化(例如加入法呢醇和香叶基香叶醇)、脂化、磷酸泛酰巯基乙胺化(phosphopantetheinylation)、磷酸化、硫酸盐化、硒酸盐化、酰胺化(例如C端酰胺化)、遍在蛋白化、瓜氨酸化/去亚胺基化(deimination)、脱酰氨基化、蛋白酶剪切、甲酰化、豆蔻酰化、加焦谷氨酸(pyroglutamateaddition)、氨基甲酰化、加糖基磷酯酰肌醇(GPI)、O-甲基化、糖基磷酯酰肌醇化、苏素化、酰化、羟基化、加锁链素、脱氨作用、氧化(例如成为醛)、形成亚胺、糖化、氨基甲酰化、形成二硫键(例如产生分子内二硫键或分子间二硫键)、异戊二烯化、棕榈酰化、连接卟啉环、连接黄素、形成GFP辅基(Thr-Tyr-Gly序列)、形成赖氨酸酪氨酸醌(LTQ)、形成topaquinone(TPQ)、形成琥珀酰亚胺、转谷氨酰胺作用(transglutamination)、羧化、多谷氨酰胺化(polyglutamylation)、多甘氨酰化。
可对肽的N端和/或C端进行修饰以提高稳定性，例如降低降解，例如蛋白酶降解。
可对肽进行修饰以含有表位标签(例如His(例如6x His或多His)、Myc、HA、GST、MBP、VSV、硫氧还蛋白、β-Gal、FLAG或GFP标签等)，以有助于例如肽的鉴定或纯化。这类标签可存在于例如肽的N端或C端。切割位点(例如因子Xa蛋白酶、肠激酶、凝血酶、TEV蛋白酶、PRESCISSIONTM蛋白酶、内含肽1或内含肽2或者信号肽酶等的识别位点)可任选位于标签和肽序列之间，以便将标签从肽切割下来。这类技术为本领域所知。另参见Current Protocols in MolecularBiology，第3版，John Wiley和Sons，Inc，New York，NY。
肽制备
本文所述的肽可在生物系统中制备或经化学合成。
为了在生物系统中产生肽，可通过重组DNA技术制备肽。例如，可将含有本文所述肽的编码核酸序列的表达载体导入生物系统(例如细菌、酵母、植物、昆虫或哺乳动物表达系统)中，并应用标准技术进行表达。然后应用标准纯化技术(例如应用基于肽的物理或化学性质的分离技术或者亲和纯化技术)，从生物系统(例如细胞或培养基)中将肽纯化出来。这类技术为本领域所知。参见例如Current Protocols inMolecular Biology第3版，John Wiley和Sons，Inc，New York，NY。
肽可用化学方法合成，例如采用液相合成或固相合成。这类技术是本领域的标准技术，参见例如Atherton，E.，Sheppard，R.C.SolidPhase peptide synthesis：A practical approach.IRL Press，Oxford，England，1989；Stewart J.M.，Young，J.D.Solid phase peptide synthesis，第2版，Pierce Chemical Company，Rockford，1984；Carpino，L.A.19921-Hydroxy-7-azabenzotriazole.An efficient Peptide Coupling Additive(1-羟基-7-氮杂苯并三唑：一种有效的肽偶联添加剂).J.Am.Chem.Soc.115，4397-4398。通过将一个氨基酸的羧基端或C端与另一个的氨基端或N端偶联来合成肽。
液相合成法：液相肽合成法是经典的肽合成方法。它可用于工业大规模生产肽。
固相合成法：固相肽合成法(SPPS)是目前普遍公认的在实验室以合成方式制备肽和蛋白质的方法。SPPS允许例如难以在细菌中表达的天然肽的合成、掺入非天然氨基酸、肽/蛋白质主链修饰和含有D-氨基酸的D-蛋白质和D-肽的合成。可按照例如本文所述方法以手工进行合成，或者采用自动合成仪进行合成。
小珠粒用接头处理，接头上可构建肽链。合成珠将保持与肽的牢固结合直到被试剂(例如三氟乙酸)裂解。珠粒营造一种合成环境，在其中被制成的肽链不会通过过滤材料，而所使用的制备肽链的试剂则可通过。
SPPS有两种常用形式--Fmoc和Boc。与核糖体蛋白质合成不同，固相肽合成法以C端到N端的方式进行。氨基酸单体的N端由这两种基团保护，并被加到未保护的氨基酸链上。
对于两种技术，可利用自动合成仪，尽管许多研究小组继续进行手工SPPS。
Boc SPPS：根据t-Boc((tert)-(B)utyl(o)xy(c)arbonyl(叔丁基-氧基-羰基))方法发明了SPPS。为了从延伸的肽链中脱去Boc，采用酸性条件(通常为无水TFA)。通过在氢氟酸中温育，可在合成法结束时，脱去侧链保护基，从树脂上获得肽。
Fmoc SPPS：Fmoc代表Fmoc保护基((F)luorenyl-(m)eth(o)xy-(c)arbonyl，芴基-甲氧基-羰基)。为了从延伸的肽链上脱去Fmoc，采用碱性条件(通常为20％哌啶的DMF溶液)。通过在三氟乙酸(TFA)中温育，可脱去侧链保护基，从树脂上获得肽。
固相支持体：固相支持体的物理性质和适用固相支持体的方法，随构建支持体的材料、交联的量以及所用接头和处理法而变化。支持体的一个实例为H-Cys(Trt)-2-ClTrt树脂。
聚苯乙烯树脂：这是一种多功能树脂，由于其在DCM中的溶胀极小，因此多用于多孔自动肽合成。
聚酰胺树脂：这是一种有益的多功能树脂。其溶胀可大于聚苯乙烯的溶胀，在这种情况下，可能不适于某些自动合成仪。
树脂类型的实例包括：烯基树脂、胺官能化树脂、BHA树脂、Br官能化树脂、氯甲基树脂、CHO官能化树脂、Cl官能化树脂、COOH官能化树脂、树脂、I官能化树脂、JANDAJELSTM、MBHA树脂、NH2官能化树脂、硝基苯基碳酸酯树脂、OH官能化树脂、肟树脂、Peg交联树脂、Boc-/Bzl肽合成树脂(Boc-/Bzl Peptide Synthesis)、Fmoc-/tBu肽合成树脂(Fmoc-/tBu Peptide Synthesis)、Ph肟树脂、树脂基质(Resin Matrices)树脂、Rink酸性树脂(Rink Acid Resins)、Rink树脂、Safety Catch树脂、树脂、巯基官能化树脂、三嗪基树脂、三苯甲基胺类(Trityl Amines)树脂、Wang树脂(Wang Resin)、Wang衍生物(Wang Derivatives)。各类型的多种树脂是可获得的，也是本领域所知的。
保护基：由于使用了过量氨基酸以确保在各合成步骤中的完全偶联，因此在各氨基酸未被保护的反应中普遍存在氨基酸聚合。为了防止这种聚合，使用了保护基。这就在合成反应中增加了额外的脱保护阶段，形成如下循环的重复设计：
在脱保护反应中从拖尾氨基酸上脱去保护基
-洗去脱保护试剂以提供纯净的偶联环境；
-使溶于例如二甲基甲酰胺(DMF)等溶剂中的被保护氨基酸与偶联试剂混合，泵入合成柱；
-洗去偶联试剂以提供纯净的脱保护环境。
保护基：两种保护基(Fmoc、Boc)目前常常被用于固相肽合成法。它们的不稳定性由氨基甲酸基造成，氨基甲酸基在不可逆的去偶步骤中易释放出CO2。
Fmoc保护基：Fmoc(氨基甲酸-9-芴基甲酯)是目前广泛使用的保护基，一般在由氨基酸单元重复合成肽时从肽的N端脱去。Fmoc的优势是在非常温和的碱性条件(例如哌啶)下裂解，但在酸性条件下保持稳定。这使得在碱性条件下稳定但对弱酸不稳定的保护基(例如Boc和苄基)可用在靶肽氨基酸残基的侧链上。这种正交保护基策略常见于有机合成领域。
Boc保护基：在Fmoc基团普遍使用之前，Boc基团常用于保护肽的末端胺，在正交策略中，侧链保护需要使用对酸更稳定的基团。这在合成期间减少肽的聚集中保持了实用性。可用boc酐和合适的碱将Boc基团加到氨基酸上。
苄氧基-羰基(Z)基团：另一种基于氨基甲酸酯的基团是苄氧基-羰基(Z)基团。它在更严格的条件下脱去：HBr/乙酸或催化氢化。它可用于侧链保护。
Alloc保护基：当需要正交脱保护流程时，烯丙氧基羰基(alloc)保护基常常用来保护羧酸、羟基或氨基。有时在进行树脂上环状肽形成时使用，其中肽通过侧链官能团与树脂连接。可以使用四(三苯基膦)合钯(0)连同氯仿、乙酸和N-甲基吗啉(NMM)的37∶2∶1混合物达2小时来脱去alloc基团。然后必须小心地依次用0.5％DIPEA的DMF溶液、3x10ml 0.5％二乙基硫代氨基甲酸钠的DMF溶液和5x10ml 1∶1DCM∶DMF洗涤树脂。
平版保护基(Lithographic protecting group)：对于特殊应用，如蛋白质微阵列，则使用平版保护基。可通过曝光脱去这些保护基。
活化基团(Activating Group)：对于肽偶联，羧基通常被激活。这对于加快反应十分重要。有两种主要的活化基团类型：碳二亚胺和芳族肟。
碳二亚胺：最常用的为二环己基碳二亚胺(DCC)和二异丙基碳二亚胺(DIC)。与羧酸反应得到高活性的O-酰基脲。在人工蛋白质合成(例如Fmoc固态合成仪)中，C端常常被用作连接点，以在上面添加氨基酸单体。为了提高羧基的亲电性，带负电荷的氧必须首先被“激活”成较好的离去基团。DCC被用于此目的。带负电荷的氧将用作亲核试剂，攻击DCC的中心碳。DCC与前一羧基暂时连接(此时为酯基)，使由氨基(在连接氨基酸时)对前一C端(羰基(carbonil group))的亲核攻击更有效。
芳族肟：实例包括1-羟基-苯并三唑(HOBt)和1-羟基-7-氮杂-苯并三唑(HOAt)。这些物质可与O-酰基脲反应形成活性酯，该活性酯较不易起反应，并较少外消旋作用的危险。
最新进展完全忽视所述碳二亚胺类，所述活性酯以非亲核阴离子(四氟硼酸盐或六氟磷酸盐)的脲或盐引入：HBTU、HATU、PyBOP。
合成长肽：其中氨基酸依次一步步连接的逐步延长，对于含有2-100个氨基酸残基的小肽是理想的。另一种方法为片段缩合，其中肽片段被偶联。尽管前者可使肽链延长而无外消旋作用，但是收率下降，只有在生产长或高极性肽时使用。对于合成复杂的长肽，片段缩合优于逐步延长，但是必须限制其应用以保护免受外消旋作用。片段缩合同样有不良性，因为偶联片段必须极度过量，这可根据片段长度而具有局限性。
可使用化学连接：未保护的肽链在水溶液中进行化学选择性反应。最初的动力学控制的产物发生重排形成酰胺键。最常见的天然化学连接的形式利用与末端半胱氨酸残基反应的肽硫酯。
药物组合物
本公开内容的肽可以配制成例如给予受治疗者以治疗疼痛的药物组合物。肽可以单独给予，或者可在同一组合物中或作为单独的组合物，与其它疼痛疗法联合给予。
药物组合物通常包括药学上可接受的载体。本文所用的“药学上可接受的载体”包括任何及所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣材料、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。组合物可包括药学上可接受的盐，例如酸加成盐或碱加成盐(参见例如Berge，S.M.等(1977)J.Pharm.Sci.66：1-1966：1-19)。
药物制剂技术是普遍接受的技术，更多详情参见例如Gennaro(编辑)，The Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott，Williams&Wilkins(2000)(ISBN：0683306472)；Ansel等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第7版，Lippincott Williams&Wilkins Publishers(1999)(ISBN：0683305727)；以及Kibbe(编辑)，Handbook of Pharmaceutical Excipients AmericanPharmaceutical Association，第3版(2000)(ISBN：091733096X)。
在一个实施方案中，所述肽与赋形剂材料(例如盐水、氯化钠、磷酸氢二钠七水合物、磷酸二氢钠)和稳定剂一起配制。还可在例如缓冲溶液中按合适的浓度提供，可在2-8℃或约-20℃下保存。
药物组合物可呈各种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液剂(例如注射和输注溶液剂)、分散剂或混悬剂、片剂、丸剂、散剂、脂质体和栓剂。优选的形式可取决于既定的给药方式和治疗应用。
可通过胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或肌内注射)给予组合物。本文所用术语“胃肠外给药”和“经胃肠外给予”是指肠内和局部给药以外的给药方式，通常经注射给药，包括而不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心脏内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外及胸骨内注射和输注。
可经肠内途径给予组合物，例如通过消化道，例如经口服给药。例如，可以片剂、胶囊剂、囊片剂、丸剂、散剂、滴剂、混悬剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂或其它口服剂型给予组合物。肠内途径包括经胃饲管、十二指肠饲管或胃造口或直肠给予，例如以栓剂或灌肠剂形式的组合物。
组合物可局部给药，例如在疼痛部位。局部给药包括例如表皮、鼻内、吸入和阴道给药。可将组合物给予皮肤(例如烧伤、疱或破口)、唇、牙龈、牙、口腔、眼、耳、甲床或咽喉等，例如疼痛部位。局部给药的组合物可为乳膏剂、凝胶剂、洗剂或软膏剂等。
组合物可配制为溶液剂、微乳剂、分散剂、脂质体或适于以高浓度保存的其它有序结构。可按需要将本文所述肽以所需要的量与上述列举成分的一种或其组合一起掺到合适的溶剂中，接着过滤灭菌，来制备无菌注射溶液剂。一般将本文所述肽掺入无菌溶媒中来制备分散剂，所述无菌溶媒含有基础分散介质和所需要的上文列举的其它成分。在用于配制无菌注射溶液剂的无菌粉针剂的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冻干，得到本文所述肽加上任何额外所需成分(得自前述其经灭菌过滤溶液剂)的粉体。通过使用例如卵磷脂等包衣材料，在分散剂的情况下通过维持所需粒径，以及通过使用表面活性剂，可以保持溶液剂适当的流动性。通过在组合物中包括延迟吸收的物质，可以使注射组合物的吸收延长(例如控释剂型)，例如单硬脂酸盐和明胶。
在某些实施方案中，所述肽可与保护肽免于快速释放的载体一起制备(例如制备控释剂型)，包括植入物以及微囊化递送系统。可以使用生物可降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。这类剂型的许多制备方法是专利方法或者普遍已知的方法。参见例如Sustained and Controlled ReleaseDrug Delivery Systems，J.R.Robinson，编辑，Marcel Dekker，Inc.，NewYork，1978。
可以应用例如某种部分对肽进行修饰，所述部分或基团可以改进肽在循环(例如血液、血清或其它组织)中的稳定性和/或保持力达例如至少1.5倍、2倍、5倍、10倍或50倍。
例如，所述肽可与聚合物缔合(例如缀合)，聚合物例如基本无抗原性的聚合物，例如聚环氧烷或聚环氧乙烷。合适的聚合物基本上随重量而变化。可以使用平均分子量范围约为200道尔顿至约35,000道尔顿(或约1,000至约15,000以及2,000至约12,500)的聚合物。
例如，肽可与水溶性聚合物缀合，例如聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮等亲水聚乙烯聚合物。这类聚合物的非限制性实例包括聚环氧烷均聚物，例如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物和其嵌段共聚物，条件是保持嵌段共聚物的水溶性。其它有益的聚合物包括聚氧化烯例如聚氧乙烯、聚氧丙烯、聚氧乙烯与聚氧丙烯的嵌段共聚物；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆以及支链多糖或无支链多糖。
当肽与第二药物(例如本文所述另一药物)联用时，两种药物可分开配制或共同配制。例如，各个药物组合物可在例如临用前混合并同时给予，或者可在例如同一时间或不同时间分开给予。
本文所述的另一种治疗药物还可通过例如标准方法或本文所述方法以药物组合物提供。
给药
可通过多种方法将肽给予受治疗者例如人。对于许多应用，给药途径为胃肠外，例如以下途径之一：静脉内注射或输注(IV)、动脉内注射、皮下注射(SC)、经腹膜内(IP)、心脏内注射、骨内输注、真皮内注射、腹膜内输注或注射、玻璃体腔注射、肌内注射、鞘内注射、关节内注射或硬膜外给药。也可能使用。在一些优选的实施方案中，经肠内途径(例如口服)给予肽。肽可局部给予，例如局部(例如上表皮、鼻内、吸入、阴道等)将例如以乳膏剂、凝胶剂、洗剂或软膏剂给予疼痛部位处的皮肤、唇、牙龈、口腔或咽喉。在一些情况下，可直接向疼痛部位给药。
所述肽可局部或全身给予。
所述肽可通过以下途径给予：例如注射、输注、扩散、植入、局部应用或口服递送。
封闭药可以固定剂量给予，或者以μg/kg或mg/kg剂量给予。
还可选择剂量以减少或避免产生抗此肽的抗体。
还可以通过例如应用肌电图描述法(EMG)、神经传导研究、诱发电位(EP)研究、核磁共振成像(MRI)、神经系统检查、X射线和/或与具体疾病有关的标准参数(例如评价背痛的标准)，对受治疗者进行例如评价或监测，来调整给肽途径和/或方式以适应个别病例。
可对给药剂量方案进行调整以提供所需要的反应，例如治疗反应或综合治疗效果。为了给受治疗者提供生物有效量的肽，一般可使用任何剂量组合(或单独配制或共同配制)的肽(任选例如本文所述第二药物)。例如，可给药的剂量范围为0.1μg/kg-10mg/kg、1μg/kg-1mg/kg、1μg/kg-100μg/kg、5μg/kg-500μg/kg、0.1-100mg/kg、0.5-100mg/kg、1mg/kg-100mg/kg、0.5-20mg/kg或1-10mg/kg。也可使用其它剂量。
本文所用的剂量单位形式或“固定剂量”是指物理独立单位，其适宜用作待治疗的受治疗者的单位剂量；各单位含有经计算产生所需治疗效果的预定量的活性化合物及所需要的药用载体以及任选的其它药物。可以给予单剂量或多剂量。又或者，肽可以通过连续输注给予。
所述肽可以例如一天一次或一天两次给予，或者每周大约1-4次给予，优选每周一次、两周一次或每月一次给予达例如1-10周左右，或者需要时更长，例如对于治疗慢性疼痛，或者对于进行长疗程的受治疗者，例如经过化学疗法的受治疗者。技术人员应当了解某些因素可影响有效治疗受治疗者所需要的剂量和时间安排，包括但不限于疾病或病症的严重程度、剂型、递药途径、之前的治疗、受治疗者的一般健康状况和/或年龄、存在的其它疾病以及受治疗者已经过的其它治疗。此外，用治疗有效量的肽治疗受治疗者可包括单一治疗，或者优选可包括一系列治疗。动物模型也可用来确定有益剂量，例如初始剂量或给药剂量方案。例如，动物研究可用来测量肽的镇痛作用会持续多久。
如果受治疗者有遭受疼痛的风险(例如已安排受治疗者进行外科手术)，则可在可能引起疼痛(例如外科手术)的事件之前给予所述肽作为例如预防性措施。这类预防性治疗的持续时间可以是单剂量的封闭药，或者所述治疗可从事件之前、事件期间和/或事件之后的某一时间开始连续进行(例如多剂量)，以使受治疗者遭受的疼痛降到例如最低。例如，有遭受疼痛风险的受治疗者可在可能引起疼痛的事件之前数小时或数天用封闭药治疗，以便防止疼痛发生或降低所遭受疼痛程度。
药物组合物可包括“治疗有效量”的本文所述的肽。该有效量可根据所给药物(例如肽)的效果确定，或者如果使用一种以上药物时，则根据联用效果确定。治疗有效量的药物还可根据以下因素而变化：例如受治疗者的疼痛类型、疾病状况、年龄、性别和体重以及药物在受治疗者体内引起所需反应(例如改善疼痛)的能力。治疗有效量也是其中组合物的治疗有益作用超过任何毒性或有害作用的量。
本文所用的“受治疗者”可以是遭受疼痛的任何生物，例如哺乳动物，例如人、农场动物(例如马、驴、骡、牛、母牛、公牛、绵羊、猪等)、家养宠物(例如狗、猫、大鼠、小鼠、兔、仓鼠、豚鼠、白鼬等)或豢养在动物园或水族馆的动物(例如长颈鹿、狮子、老虎、熊、斑马、猴、大猩猩、鲸鱼、海豚、鲨鱼等)。
药物装置和药盒
可以用医疗装置给予包括肽的药物组合物。该装置可包括例如一个或多个可存储包括肽的药物制剂的箱子，并可进行配置以递送一种或多种单位剂量的肽。该装置还可进一步配置以给予第二药物，例如本文所述的第二疼痛治疗药，其可以是还包括所述肽的单一药物组合物，或者为两种独立的药物组合物。
例如，可用无针皮下注射装置给予药物组合物，例如美国专利号5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4,790,824或4,596,556中所公开的装置。众所周知的植入物和模块的实例包括美国专利号4,487,603，其中公开了可植入的微量输注泵，用来以受控速度分散药物；美国专利号4,486,194，其中公开了用来通过皮肤给药的治疗装置；美国专利号4,447,233，其中公开了用来以精确的输注速率递送药物的药物输注泵；U.S.4,447,224，其中公开了可变流速的植入输注装置，用来连续递药；美国专利号4,439,196，其中公开了具有多层隔室的渗透性药物递送系统；以及美国专利号4,475,196，其中公开了渗透性药物递送系统。还已知许多的其它装置、植入物、递送系统和模块。
所述肽还可用药盒提供。在一个实施方案中，药盒包括(a)装有包括本文所述肽的组合物的容器，任选(b)信息资料。信息资料可以是与本文所述方法和/或肽使用的治疗益处有关的说明资料、指导资料、推广资料或其它资料。
在一个实施方案中，药盒还包括用于治疗疼痛的第二药物，例如本文所述的另一药物。例如，药盒包括装有包括肽的组合物的第一容器、包括第二药物的第二容器以及任选信息资料。信息资料可以是与本文所述方法和/或药物使用的治疗益处有关的说明资料、指导资料、推广资料或其它资料。
药盒的信息资料不限于其形式。在一个实施方案中，信息资料可包括有关制备化合物(例如肽)的信息、化合物的分子量、浓度、失效日期、批次或产地信息等。在一个实施方案中，信息资料涉及给予肽和/或第二药物的方法，例如以合适的剂量、剂型或给药方式(例如本文所述剂量、剂型或给药方式)治疗遭受疼痛或有遭受疼痛风险的受治疗者。信息可以多种格式提供，包括印刷文件、计算机可读取资料、录像或录音，或者提供基本资料的链接或地址的信息。
除肽以外，药盒中的组合物可包括其它成分，例如溶剂或缓冲液、稳定剂或防腐剂。肽可以任何形式提供，例如液体形式、干燥形式或冻干形式，优选为基本纯和/或无菌的形式。当药物以液体溶液提供时，液体溶液优选为水溶液。当药物以干燥形式提供时，一般通过加入合适的溶剂来重配。药盒中可任选提供溶剂，例如无菌水或缓冲液。
药盒可包括一个或多个用于一种或多种含有药物(例如肽或肽与另一种药物的组合)的组合物的容器。在一些实施方案中，药盒装有用于组合物的独立的容器、间隔物或隔室和信息资料。例如，组合物可装在瓶子、小瓶或注射器中，信息资料可装在塑料套或塑料包中。在其它实施方案中，药盒中的独立组成部分装在单个未分隔的容器中。例如，组合物装在瓶子、小瓶或注射器中，在上面张贴有标签形式的信息资料。在一些实施方案中，药盒包括多个(例如一组)单独的容器，各自装有组合物的一个或多个单位剂型(例如本文所述剂型)。例如，药盒包括多种口服剂型、注射器、安瓿、箔纸包装(foil packet)、泡罩包装或医疗装置，例如各自装有一个单位剂量的含肽组合物。容器可包括例如组合单位剂量，例如包括按所需比率的肽和第二药物的一个单位。例如，药盒包括多种口服剂型、注射器、安瓿、箔纸包装、泡罩包装或医疗装置，例如各自装有一个组合单位剂量。药盒的容器可以是气密、防水(例如无法透过以避免水分含量改变或蒸发)和/或不透光的。
药盒任选包括适于给予组合物的装置，例如注射器或其它合适的递药装置。可以提供预先装好一种或两种药物的装置，或者可提供空的但适于装载的装置。
实施例
实施例1
对于本文所提供的实施例2-6，在Shimadzu PSSM-8肽合成仪(Shimadzu Corp.，Kyoto，Japan)中，采用N-9-芴基甲氧羰基(Fmoc)化学试剂与TGA树脂(Nova Biochem)，通过逐步固相合成方法，进行了7A14A肽的化学合成。所有Fmoc-L-氨基酸均购自Nova Biochem。通过在室温下用TFA/茴香醚/1，2-乙二硫醇(94∶5∶1，体积)的混合物处理2小时，将肽从树脂上切割下来。经过滤并用TFA洗涤两次除去树脂后，在0℃下将合并的滤液滴加到乙醚中，然后以3000rpm离心10分钟以收集粗制肽的沉淀。所得的粗制合成肽用反相HPLC纯化(采用YMC-Pack ODS，20x150mm(YamamuraKagaku，Kyoto，Japan)，用15％CH3CN/H2O/0.1％TFA按7ml/分钟流速等度洗脱)。通过MALDI-TOF MS和HPLC证实同质性和序列。
实施例2
在前列腺素E2(PGE2)诱发的痛觉过敏疼痛模型中，测试了7A14A肽(SEQ ID NO：2)的抗伤害感受作用。将肽用盐水稀释至5μg/kg的浓度，口服给予大鼠。将通过同一途径接受盐水的动物用作对照。
为了诱导痛觉过敏，将500μg PGE2溶于1ml乙醇来制备前列腺素E2(PGE2)母液。临用时，将母液用无菌盐水再次稀释。所用前列腺素的剂量为100ng/100μl盐水，经每爪足趾途径给药(100ng/爪)。
为了评价疼痛敏感性，采用大鼠爪压力试验(Analgesy-Meter UgoItaly)，按照Randall和Selitto所述方法进行(Randall L.O.和Selitto J.J.Arch.Intern.Pharmacodyn.111：209-219，1957)。在本试验中，压力单位：克(g)，连续将压力以递增的幅度(16g/s)施加在大鼠的一个后爪背表面，当动物做出“缩”爪反应时中断。在这个模型中，疼痛阈值(疼痛极限值)用引起缩爪所必需的压力(g)表示。在足跖内注射PGE2(100ng/爪)之前及之后3小时测量疼痛极限值。口服给予动物肽或盐水(对照)后立即给予PGE2。(另见WO 2005/107357)。
实验结果见图1(MI：PGE2注射前的初始测量值；MF：PGE2注射后的最终测量值)。数据表示平均值±每组5只动物的e.p.m.。与初始测量值相比*p＜0.05，与对照组相比**p＜0.05。如图中所示，在痛觉过敏模型中，口服给肽降低大鼠爪对压力的敏感性，具有镇痛作用。
实施例3
在PGE2诱发的痛觉过敏模型中，对由7A14A肽引起的抗伤害感受作用的持续时间进行了评价。为了评价疼痛敏感性，采用了大鼠爪压力试验。实验按照上述方法进行。
实验结果见图2。在用肽(5μg/kg)或盐水(对照组)口服治疗之前(时间0)和之后3小时、120小时和192小时(最终测量)测定了疼痛阈值(疼痛极限值)，用缩爪时所需要的压力(单位：克)表示。在各最终测量之前3小时注射PGE2(100ng/爪)。数据表示平均值±每组6只动物的e.p.m.。与对照组相比*p＜0.05。这些结果表明，口服给肽后192小时，存在肽的抗伤害感受作用。
实施例4
在稀释后以及在稀释肽的不同保存期之后，对7A14A肽的稳定性进行了评价。肽用盐水稀释，得到终浓度为5μg/kg。然后将稀释肽在-20℃下保存0天、30天、40天、60天或90天后用于痛觉过敏模型。
在PGE2诱发的痛觉过敏模型中对稀释肽进行了评价。实验按照上述方法进行。
为了评价疼痛敏感性，采用大鼠爪压力试验。在足跖内注射PGE2(100ng/爪)后3小时测量了疼痛阈值(疼痛极限值)，用缩爪时所需要的压力(单位：克)表示。将肽(5μg/kg)(临用前稀释，或稀释后保存30天、40天、60天或90天)，或盐水(对照组)经口服给予后立即给予PGE2。
结果见图3。数据表示平均值±每组5只动物的e.p.m.。与最初测量值相比*p＜0.05，与对照组相比**p＜0.05。如图中所示，稀释形式的肽稳定，在-20℃下保存90天后，能够产生抗伤害感受作用和痛觉缺失。
实施例5
在大鼠坐骨神经慢性压迫诱发的痛觉过敏的模型中，对由7A14A肽引起的抗伤害感受作用的持续时间进行了评价，该模型是持续神经病性疼痛的模型。为了诱发神经病性疼痛，按照Bennett，G.J.和Xie，Y.K.所述方法(Pain，33：87-107，1988)，进行了坐骨神经手术。简单来说，按以下方法进行了手术。动物用氟烷麻醉。在股中部区域将坐骨神经暴露出来，移开股二头肌。在接近坐骨神经三叉分枝，距三叉分枝7mm处，对其进行4个松的结扎(chromed catgut 4-0)，彼此距离约为1mm。结扎沿神经进行，距起点最多4-5mm。切口用4-0号丝缝合线分层缝合。
为了评价疼痛敏感性，采用如上所述的大鼠爪压力试验。手术后第14天，口服给予大鼠肽(剂量为1μg/kg)或盐水。手术前(MI：初始测量值)、手术后第14天在给予任何药物治疗之前以及口服给予盐水或肽后24小时、48小时、72小时和96小时进行了爪压力试验。结果见图4。如图中所示，在此慢性痛觉过敏模型中，口服给肽降低对压力的敏感性，显示了在神经病性疼痛中的镇痛作用持续72小时。*p＜0.05，**p＜0.05。
实施例6
在内脏性疼痛模型即乙酸诱发的腹绞痛实验中，对ENPAK肽(SEQ ID NO：3)和7A14A肽(SEQ ID NO：2)的抗伤害感受作用进行了试验。肽用盐水稀释至图5A和5B中标示的浓度，口服给予小鼠。将经同一途径接受盐水的动物用作对照。
小鼠绞痛试验以Koster等(1959)的方法为基础。为了诱发绞痛，将用吗啡(4.5mg/kg，腹膜内)治疗40分钟的小鼠、用ENPAK(1μg/kg、6μg/kg、9μg/kg、12.5μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg、125μg/kg、250μg/kg，口服)治疗100分钟的小鼠、用7A14A(12.5μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、75μg/kg、125μg/kg、250μg/kg、500μg/kg、750μg/kg，口服)治疗100分钟的小鼠和对照小鼠，经腹膜途径注射剂量为60mg/kg的乙酸。在注射后20分钟的一段时间内，对腹部扭曲(abdominalcontortion)，包括腹肌收缩和后肢拉伸，进行了连续统计。依据以肽治疗动物和未治疗动物之间腹部扭曲减少的次数，来观察抗伤害感受活性。
数据表示平均值±每组4-34只动物的e.p.m.。*与盐水组平均值有显著性差异(*p＜0.05)；**与吗啡组平均值有显著性差异(**p＜0.05)。
本文对本发明多个实施方案进行了描述。然而应当了解的是，可在不偏离本发明的精神和范围的情况下进行各种修饰。因此，其它实施方案也在所附权利要求书的范围内。
序列表
<110>COINFAR-CONSRCIO DE INDSTRIAS FARMACUTICAS
 
<120>镇痛化合物
 
<130>1331-0030
 
<150>US 60/915,247
<151>2007-05-01
 
<160>4
 
<170>FastSEQ用于Windows 4.0版
 
<210>1
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>合成生产的肽
 
<220>
<221>变体
<222>1
<223>Xaa＝焦谷氨酸
 
<220>
<221>变体
<222>2
<223>Xaa＝Phe、Trp、Tyr、Leu或Thr
 
<220>
<221>变体
<222>4
<223>Xaa＝Pro或Arg
 
<220>
<221>变体
<222>5
<223>Xaa＝Glx或Asx或Gly
 
<220>
<221>变体
<222>6
<223>Xaa＝Asn、Gln或Leu
 
<220>
<221>变体
<222>7..
<223>Xaa＝任何氨基酸
 
<220>
<221>变体
<222>8
<223>Xaa＝Lys以外的任何氨基酸
 
<220>
<221>变体
<222>10
<223>Xaa＝Glx或Asx
 
<220>
<221>变体
<222>12
<223>Xaa＝Glx或Lys
 
<220>
<221>变体
<222>14
<223>Xaa＝任何氨基酸
 
<400>1
Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Ser Xaa Pro Xaa
1                5                  10
 
<210>2
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>合成生产的肽
 
<400>2
Glu Phe Ser Pro Glu Asn Ala Gln Gly Glu Ser Gln Pro Ala
1                5                  10
 
<210>3
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成生产的肽
 
<400>3
Glu Phe Ser Pro Glu Asn Cys Gln Gly Glu Ser Gln Pro Cys
1                5                  10
 
<210>4
<211>14
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>合成生产的肽
 
<220>
<221>变体
<222>1
<223>Xaa＝焦谷氨酸
 
<220>
<221>变体
<222>2
<223>Xaa＝Phe、Trp、Tyr、Leu或Thr
 
<220>
<221>变体
<222>4
<223>Xaa＝Pro或Arg
 
<220>
<221>变体
<222>5
<223>Xaa＝Glx或Asx或Gly
 
<220>
<221>变体
<222>6
<223>Xaa＝Asn、Gln或Leu
 
<220>
<221>变体
<222>8
<223>Xaa＝Lys以外的任何氨基酸
 
<220>
<221>变体
<222>10
<223>Xaa＝Glx或Asx
 
<220>
<221>变体
<222>12
<223>Xaa＝Glx或Lys
 
<400>4
Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Gly Xaa Ser Xaa Pro Cys
1                5                  10