技术领域
[0001] 本
发明涉及光、声动
力治疗药物,具体是脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯。
背景技术
[0002] 脱镁叶绿酸a具有一定的光敏性和热敏性,因而脱镁叶绿酸a既是一种
光敏剂,也是一种很有潜力的声敏剂。它能够产生更多的ROS(
活性氧簇),而且无毒、
肿瘤组织高选择性及非肿瘤组织清除率高,对
皮肤的副反应也较小,因此适合用于肿瘤光、声动力治疗。但是脱镁叶绿酸a
水溶性差,因此限制了其在临床的开发应用。
[0003] 香菇多糖(lentinan,LNT) 是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分,是具有分支的β- (1-3)-D-葡聚糖,主链由β-(1-3)-连接的
葡萄糖基组成,沿主链随机分布着由β-(1-6)连接的葡萄糖基,呈
梳状结构。
[0004] 临床与药理研究表明,香菇多糖是一种宿主免疫增强剂(host defense potentiator,HDP),具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用。功能主治:不能手术或复发性胃癌、肝癌、膀胱癌,使用本品能缓解症状,提高病人免疫功能,纠正微量元素失调。香菇多糖加放疗、化疗治疗小细胞
肺癌、乳癌、恶性淋巴瘤等。也可用于癌性胸腹水的治疗。
[0005] 香菇多糖为灰白色粉末,大多为酸性多糖,溶于水、稀
碱,尤其易溶于热水,不溶于
乙醇、丙
酮、乙酸乙酯、乙醚等
有机溶剂,其水溶液呈透明黏稠状。香菇多糖对正常
机体并无免疫促进作用,但能使荷瘤式或感染后的机体的免疫应答得以提高。香菇多糖具有抗肿瘤作用,它没有
化疗药物的毒
副作用。香菇多糖与化疗剂联合使用,有减毒、增效的作用。香菇多糖还能使肿瘤部位的血管扩张和出血,导致肿瘤出血
坏死和完全退化。
[0006] 未见香菇多糖与脱镁叶绿酸a结合的报道。
发明内容
[0007] 为了综合香菇多糖与脱镁叶绿酸a的优点,开发更好的用于光、声动力治疗的药物,本发明提供脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯。
[0008] 脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯的结构如下式:由香菇多糖与脱镁叶绿酸a发生酯化反应制备得到。
[0009] 脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯的制备方法,包括下述步骤:1)、在保护气体和避光条件下,香菇多糖与脱镁叶绿酸a发生酯化;
2)、离心,上清液以去离子水
透析,
冷冻干燥。
[0010] 3)、干燥物用
硅胶柱层析分离,洗脱剂是体积比为3/7 7/3的二氯甲烷/甲醇的混~合溶液;
4)、挥去二氯甲烷/甲醇后,用甲醇或乙腈溶解,用反相柱层析精制纯化,洗脱剂为甲醇/水
混合液或乙腈/水混合液;所述反相柱使用的填料为C18;所述甲醇/水混合液或乙腈/水混合液的体积比为3/7 7/3;
~
5)、所得纯化液浓缩至干,再将浓缩物
真空干燥24 36h或冷冻干燥,得目标产物。
~
[0011] 脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯的应用,在于制备治疗皮肤病、
恶性肿瘤或癌性胸腹水的药物,所述皮肤病包括:尖锐湿疣、扁平疣、痤疮、鲜红斑痣、毛细血管瘤,所述恶性肿瘤包括:食管癌、肺癌、脑瘤、头颈部肿瘤、眼肿瘤、咽癌、胸壁肿瘤、
乳腺癌、胸膜间皮瘤、
腹腔肉瘤、膀胱癌、妇科肿瘤、直肠癌、Kaposi肉瘤、皮肤癌、
口腔癌、喉癌、
宫颈癌、
阴道癌、外阴癌、阴茎癌、肝癌、胆管癌、胃癌、小细胞肺癌、恶性淋巴瘤、白血病。
[0012] 本发明的脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯具有下述主要的优点:1)、香菇多糖作为溶于水的极性端,使得脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯溶于水,解决了Ce6
水溶性差的问题。
[0013] 2)、具有脱镁叶绿酸a和香菇多糖双重抗肿瘤作用。
[0014] 3)、香菇多糖还能使肿瘤部位的血管扩张和出血,导致肿瘤出血坏死和完全退化。而在本发明中,这种血管扩张和出血恰好为脱镁叶绿酸a产生的ROS提供了直接作用肿瘤细胞的有利途径,因而本发明的脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯具有更好的
抗肿瘤效果。
附图说明
[0015] 图1是
实施例1目标产物的H1-NMR图。
[0016] 图2是实施例1目标产物的C13-NMR图。
具体实施方式
[0017] 实施例1在保护气体和避光条件下,脱镁叶绿酸a溶于乙醇中,为A。香菇多糖溶于50 80度热水~
后,加入A,30℃条件搅拌下下反应48h;其中脱镁叶绿酸a与香菇多糖为等摩尔量。
[0018] 离心,上清液以去离子水透析,冷冻干燥。
[0019] 干燥物用硅胶柱层析分离,洗脱剂是体积比为3/7 7/3的二氯甲烷/甲醇的混合溶~液;
挥去二氯甲烷/甲醇后,用甲醇或乙腈溶解,用反相柱层析精制纯化,洗脱剂为甲醇/水混合液或乙腈/水混合液;所述反相柱使用的填料为C18;所述甲醇/水混合液或乙腈/水混合液的体积比为3/7 7/3;
~
所得纯化液浓缩至干,再将浓缩物真空干燥24 36h或冷冻干燥,得目标产物脱镁叶绿~
酸a-香菇多糖酯。
[0020] 纯度达到HPLC大于95%,产率大于68%。
[0021] 脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯的H1-NMR、C13-NMR如图1、2。分析可知结构得到确证。
[0022] 脱镁叶绿酸a-香菇多糖酯的水溶性
溶解度为:28.6。
[0023] 应
用例1体外抗癌活性评价:
光动力活性:HepG2 肝癌细胞,663nm的吸收
波长,
光源高度为 20cm,测得IC50/μm:
36.7。
[0024] 声动力活性:HepG2 肝癌细胞,距超声发声
探头2cm,超声激发(2MHz,2W)2min,测得IC50/μm:92.4。