四环化合物、其制备方法以及其药物组合物
阅读：997发布：2020-05-27
专利汇可以提供四环化合物、其制备方法以及其药物组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及四环化合物、其制备方法以及其药物组合物。具体而言，本发明涉及外消旋形式或旋光异构体形式的相对构型为反式的式I化合物和它们与药学上可接受的酸形成的加成盐以及它们的 水 合物，在式I中，X代表 氧 原子 或NR2基团；Y选自-CH2-、-(CH2)2-和-CH＝CH-；R1和R2可以相同或不同，代表氢原子或选自烷基、环烷基和环烷基烷基。本发明的化合物可用作药物。，下面是四环化合物、其制备方法以及其药物组合物专利的具体信息内容。
1.外消旋形式或旋光异构体形式的相对构型为反式的式I化合物和它们与药学上可接受的酸形成的加成盐以及它们的水合物：
其中：
X代表氧原子或NR2基团，
Y选自-CH2-、-(CH2)2-和-CH＝CH-，
R1和R2可以相同或不同，代表氢原子或选自直链或支链C1-C6烷基、C3-C8环烷基和环烷基烷基，其中烷基基团为C1-C6并且是直链的或支链的，环烷基基团为C3-C8。
2.根据权利要求1的式I化合物，其中R1代表烷基基团。
3.根据权利要求1或2的式I化合物，其中X代表NR2基团。
4.根据权利要求1或2的式I化合物，其中Y代表CH2基团。
5.根据权利要求1的式I化合物，所述化合物选自：
(4aRS，11bRS)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，11b-八氢异吲哚并[5，6-h][1，4]苯并噁嗪-10(2H)-酮和其对映异构体及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
(4aR，11bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，11b-八氢-10H-呋喃并[3’，4’：6，7]萘并[1，
2-b][1，4]噁嗪-10-酮及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
(4aR，12bR)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，12b-八氢-2H，11H-吡喃并[4’，3’：6，7]萘并[1，2-b][1，4]噁嗪11-酮及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
(4aR，12bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，9，10，12b-十氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并噁嗪-11-酮及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
(4aR，12bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，10，12b-八氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并噁嗪-11-酮及其与药上学可接受的酸形成的加成盐。
6.制备根据权利要求1的式I化合物的方法，该方法以相对构型为反式的式II化合物为原料：
其中R1如式I中所定义，
将式II化合物在吡啶存在下与三氟甲磺酸酐反应，制备式III化合物：
其中R1定义同上，
将式III化合物在二甲基甲酰胺中、在加热情况下与氰化锌和四(三苯基磷)钯(0)反应，制备式IV化合物：
其中R1定义同上，
在回流条件下，用盐酸和乙酸的混合物对式IV化合物进行处理，制备式V化合物：
其中R1定义同上，
然后通过常规有机化学反应将式V化合物转变为式I化合物。
7.药物组合物，该药物组合物包含作为活性成分的根据权利要求1-5中的任何一项的化合物和一种或多种惰性非毒性的药学上可接受的赋形剂或载体。
8.根据权利要求1的式I化合物在制备用于治疗涉及多巴胺能系统的中枢神经系统疾病的药物中的用途。
9.根据权利要求1的式I化合物在制备用于神经保护或治疗帕金森病、高催乳素血症、性功能障碍、抑郁症、焦虑症、阿尔茨海默氏病和例如脑卒中的其它神经退行性疾病的药物中的用途。
10.根据权利要求7的药物组合物用于制备治疗涉及多巴胺能系统的中枢神经系统疾病的药物的用途。
11.根据权利要求7的药物组合物用于制备神经保护或治疗帕金森病、高催乳素血症、性功能障碍、抑郁症、焦虑症、阿尔茨海默氏病和例如脑卒中的其它神经退行性疾病的药物的用途。
四环化合物、其制备方法以及其药物组合物
技术领域
[0001] 本发明涉及新的四环化合物、其制备方法以及其药物组合物。
[0002] 更具体来讲，本发明涉及外消旋形式或旋光异构体形式的相对构型为反式的式I化合物和它与药学上可接受的酸形成的加成盐以及它的水合物：
[0003]
[0004] 其中：
[0006] Y选自-CH2-、-(CH2)2-和-CH＝CH-，
[0007] R1和R2可以相同或不同，代表氢原子或选自直链或支链C1-C6烷基、C3-C8环烷基和环烷基烷基(其中烷基基团为C1-C6且是直链的或支链的，环烷基基团为C3-C8)。
[0008] C3-C8环烷基应理解为是3-8元的单环饱和烃基团。
[0009] 在药学上可接受的酸中，作为非限制性的示例可以提及，如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲磺酸、苯磺酸、樟脑酸、二苯甲酰酒石酸。
[0010] 一方面，本发明涉及其中R1代表烷基基团、特别是丙基的式I化合物。
[0011] 另一方面，本发明涉及其中X代表NR2基团、特别是NH基团的式I化合物。
[0012] 再一方面，本发明涉及其中Y代表CH2基团的式I化合物。
[0013] 还一方面，本发明涉及下面的式I化合物：
[0014] (4aRS，11bRS)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，11b-八氢异吲哚并[5，6-h][1，4]苯并嗪-10(2H)-酮、其对映异构体及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
[0015] (4aR，11bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，11b-八氢-10H-呋喃并[3’，4’：6，7]萘并[1，2-b][1，4] 嗪-10-酮，及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
[0016] (4aR，12bR)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，12b-八氢-2H，11H-吡喃并[4’，3’：6，7]萘并[1，2-b][1，4] 嗪-11-酮，及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
[0017] (4aR，12bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，9，10，12b-十氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并 嗪-11-酮，及其与药学上可接受的酸形成的加成盐；
[0018] (4aR，12bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，10，12b-八氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并 嗪-11-酮，及其与药学上要可接受的酸形成的加成盐。
[0019] 式I化合物为强效的多巴胺能配体。
背景技术
[0021] 至今已经克隆和鉴定了五种多巴胺能受体亚型(D1-D5)。目前此类中的绝大多数药物通过它们对D2亚型的作用而作用于多巴胺能系统，它们可作为阻滞剂(拮抗剂)或作为活化剂(激动剂)。这些药物有很多次级效应：在前者情况下有运动障碍、高催乳素血症和闭经，在后者情况下对心血管有影响和催吐作用。
[0022] 与D2受体相反，D3受体在黑质纹状体核和泌乳细胞中的浓度非常低(Pharmacol Ther.2001，90(2-3)，231-59；中枢神经系统和神经疾病药物靶点(CNSNeurol Disord Drug Targets)2006，5(1)，25-43)。另一方面，与D2受体类似，D3受体在边缘系统中的浓度非常高(Pharmacol Ther.2001，90(2-3)，231-59；中枢神经系统和神经疾病药物靶点2006，5(1)，25-43)。这两种受体亚型所处位置的显著差异促使人们寻找优先作用于D3亚型的新药物，这将使上面提到的通常与D2亚型相关的次级效应减到最小程度(Pharmacol Ther.2001，
90(2-3)，231-59；药理学和实验治疗杂志(J Pharmacol Exp Ther.)2004，309(3)，936-50；
药理学和实验治疗杂志2004，309(3)，921-35；中枢神经系统和神经疾病药物靶点2006，
5(1)，25-43)。
90(2-3)，231-59；药理学和实验治疗杂志(J Pharmacol Exp Ther.)2004，309(3)，936-50；
药理学和实验治疗杂志2004，309(3)，921-35；中枢神经系统和神经疾病药物靶点2006，
5(1)，25-43)。
发明内容
[0024] 本发明的化合物为D3受体的优先配体，对D2受体的亲和力较低。
[0025] 这种特性使本发明的化合物特别有价值，因为它们显出低水平的次级效应。
[0026] 许多实验已证明它们的作用机制和它们在治疗多种中枢神经系统疾病中的应用价值。
[0027] 具体地讲，本发明的化合物在对6-OH-DA-损毁大鼠的突触前的多巴胺能自身受体活化实验、强迫游泳实验、超声发声实验和旋转实验中显示具有活性。
[0028] 这些结果表明，本发明的化合物可用于神经保护和治疗包括多巴胺能系统的中枢神经系统疾病，例如帕金森病(Pharmacol Ther.2001，90(2-3)，231-59；药理学和实验治疗杂志2004，309(3)，936-50；中枢神经系统和神经疾病药物靶点2006，5(1)，25-43)、高催乳素血症(Pharmacol Ther.2001，90(2-3)，231-59；妇产科学的当前观点(Curr Opin Obstet Gynecol.)1993，5(3)，360-7)、性功能障碍(生理学及行为(Physiol Behav.)2004，83卷，291-307；神经科学杂志(J.Neurosci.)1999，19卷，456-463)、抑郁症(Pharmacol Ther.2006，110(2)，135-370；药理学和实验治疗杂志2004，309(3)，936-50)、焦虑症(神经生物学进展(Prog Neurobiol.)2003，70(2)，83-244；药理学和实验治疗杂志2004，
309(3)，936-50)、阿尔茨海默氏病和例如脑卒中的其它神经退行性疾病(欧洲神经科学
杂志(Eur J Neurosci.)2005，22(10)，2422-30；神经胶质(Glia.)2005，52(4)，336-43；
神经科学2006，26(27)，7272-80；脑(Brain)1999，122(Pt8)，1449-68)；神经科学研究(J Neurosci Res.)2002，67(4)，494-500)。
309(3)，936-50)、阿尔茨海默氏病和例如脑卒中的其它神经退行性疾病(欧洲神经科学
杂志(Eur J Neurosci.)2005，22(10)，2422-30；神经胶质(Glia.)2005，52(4)，336-43；
神经科学2006，26(27)，7272-80；脑(Brain)1999，122(Pt8)，1449-68)；神经科学研究(J Neurosci Res.)2002，67(4)，494-500)。
[0029] 本发明也涉及式I化合物的制备方法，该方法用相对构型为反式的式II化合物为起始原料：
[0030]
[0031] 其中R1如式I中所定义，
[0032] 将式II化合物在吡啶存在下与三氟甲磺酸酐反应，制备式III化合物：
[0033]
[0034] 其中R1定义同上，
[0035] 将式III化合物在二甲基甲酰胺中加热情况下与氰化锌和四(三苯基磷)钯(0)反应，制备式IV化合物：
[0036]
[0037] 其中R1定义同上，
[0038] 在回流条件下，用盐酸和乙酸的混合物对式IV化合物进行处理，制备式V化合物：
[0039]
[0040] 其中R1定义同上，
[0041] 然后通过常规有机化学反应，将式V化合物转变为式I化合物。
[0042] 例如，通过将式V化合物与二乙胺在常规酰胺化(amidification)条件下反应，制备式VI化合物，可以获得X代表NH且Y代表CH2的式I化合物：
[0043]
[0044] 其中R1定义同上，
[0045] 式VI化合物在邻位金属化(orthometallation)条件下与氰酸苯酯反应，制备式VII化合物：
[0046]
[0047] 其中R1定义同上，
[0048] 在例如兰尼(Raney)镍的还原剂的存在下，还原式VII化合物，制备式VIII化合物：
[0049]
[0050] 其中R1定义同上，
[0051] 在例如叔丁基锂的有机锂化合物的存在下，将式VIII化合物环合，制备式Ia化合物，即具体的式I化合物：
[0052]
[0053] 其中R1定义同上。
[0054] 通过将式VI化合物在邻位金属化条件下与二甲基甲酰胺反应，制备式IX化合物，可以获得X代表O且Y代表CH2的式I化合物：
[0055]
[0056] 其中R1定义同上，
[0057] 在例如硼氢化钠的选择性还原剂存在下，还原式IX化合物，制备式X化合物：
[0058]
[0059] 其中R1定义同上，
[0060] 在例如盐酸的有机或无机酸存在下将式X化合物环合，制备式Ib化合物，即具体的式I化合物：
[0061]
[0062] 其中R1定义同上，
[0063] 通过将式Ib化合物与式NH2R’2的伯胺反应，制备式Ic化合物，可以获得式I化合物，其中X代表NR’2基团，R’2选自直链或支链C1-C6烷基、C3-C8环烷基和环烷基烷基(其中烷基基团为C1-C6并为直链的或支链的，环烷基基团为C3-C8)，且Y代表CH2基团，式Ic化合物是式I化合物的具体情况：
[0064]
[0065] 其中R1和R’2定义同上，
[0066] 通过将式X化合物与例如亚硫酰氯或亚硫酰溴的卤化试剂或在PPh3存在下与式CG4化合物(其中G代表氯、溴或碘原子)反应，制备式XI化合物，可以获得X代表NH且Y
代表-(CH2)2-的式I化合物：
代表-(CH2)2-的式I化合物：
[0067]
[0068] 其中R1定义同上且G代表氯、溴或碘原子，
[0070]
[0071] 其中R1定义同上，
[0072] 在例如兰尼镍的常规还原剂的存在下，还原式XII化合物，制备式XIII化合物：
[0073]
[0074] 其中R1定义同上，
[0075] 在如叔丁基锂的有机锂化合物的存在下，将式XIII化合物环合，制备式Id化合物，即式I化合物的具体情况：
[0076]
[0077] 其中R1定义同上，
[0078] 通过将式VI化合物与溴乙醇在正丁基锂存在和邻位金属化条件下反应，制备式XIV，可以获得X代表O且Y代表-(CH2-)2-的式I化合物：
[0079]
[0080] 其中R1定义同上，
[0081] 在例如盐酸的有机或无机酸存在下将式XIV化合物环合，制备式Ie化合物，即式I化合物的具体情况：
[0082]
[0083] 其中R1定义同上，
[0084] 通过将式Ie化合物与式NH2R’2的伯胺反应，制备式If化合物，可以获得式I化合物，其中X代表NR’2基团，R’2选自直链或支链C1-C6烷基、C3-C8环烷基和环烷基烷基(其中烷基基团为C1-C6并为直链的或支链的，环烷基基团为C3-C8)，且Y代表CH2基团，式If化合物是式I化合物的具体情况：
[0085]
[0086] 其中R1和R’2定义同上，
[0087] 通过将式V化合物与例如亚硫酰氯的氯化试剂反应，制备式XV化合物，可以获得X代表NH且Y代表CH＝CH的式I化合物：
[0088]
[0089] 其中R1定义同上，
[0091]
[0092] 其中R1定义同上，
[0093] 在邻位金属化条件下，将式XVI化合物与碘甲烷反应，制备式XVII化合物：
[0094]
[0095] 其中R1定义同上，
[0096] 在例如仲丁基锂的有机锂化合物存在下，将式XVII化合物与二甲基甲酰胺反应，制备式XVIII化合物：
[0097]
[0098] 其中R1定义同上，
[0099] 将式XVIII化合物与氯化(III)反应，制备式Ig化合物，即式I化合物的具体情况：
[0100]
[0101] 其中R1定义同上，
[0102] 用公知的原料根据文献描述的方法制备式II起始化合物。
[0103] (4aRS，11bRS)或(4aRS，10bRS)异构体理解为是绝对构型分别为(4aR，11bR)和(4aS，11bS)或者(4aR，10bR)和(4aS，10bS)的对映异构体的外消旋混合物。
[0104] 旋光活性的式I化合物是根据文献中公知的方法以旋光活性的式II起始化合物作原料或通过拆分外消旋的式I化合物制得的。
[0105] 本发明化合物是多巴胺能配体。它们用作治疗包括多巴胺能系统的中枢神经系统疾病的药物，所述疾病包括例如帕金森病、高催乳素血症、性功能障碍、抑郁症、焦虑症、阿尔茨海默氏病和例如脑卒中的其它神经退行性疾病。
[0106] 本发明还涉及药物组合物，该药物组合物包括作为活性成分的式I化合物或其与药学上可接受的酸的加成盐，以及一种或多种惰性的、非毒性的、药学上可接受的赋形剂或载体。
[0107] 在根据本发明的药物组合物中，可以特别提及适用于口服、肠胃外(静脉内、肌内或皮下)、经-或透过-皮、鼻、直肠、经舌、眼或呼吸给药的药物组合物，并且特别是片剂或糖衣剂、舌下片剂、明胶胶囊、胶囊、栓剂、乳膏剂、膏剂、皮肤凝胶剂、可注射或可饮用的制剂、气雾剂、滴眼剂和滴鼻剂。
[0108] 有效剂量根据患者的年龄和体重、给药途径、疾病的性质和严重性及其它任何治疗相关的给药等情况变化，每天为0.5-500mg，可以一次或多次给药。
具体实施方式
[0110] 实施例1：(4aRS，11bRS)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，11b-八氢异吲哚并[5，6-h][1，4]苯并 嗪-10(2H)-酮和其盐酸盐。
[0111] 步骤A：(4aRS，10bRS)-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0112] 向混悬于二氯甲烷(815ml)中的51g(163mmol)反式-(4aRS，10bRS)-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酸盐酸盐(根据专利EP 0899267的说明书中描述的方法制备)中，依次加入二乙胺(18.3ml，177mmol，1.09当量)、O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲 四氟硼酸盐(TBTU)(57g，177mmol，1.07当量)和三乙胺(56ml，402mmol，2.4当量)。将所得溶液在环境温度下搅拌20小时，然后用1N氢氧化钠溶液(425ml)处理反应混合物。将有机层分离出来，用饱和NaCl溶液洗涤，经硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(90/5)的混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。收集得到油状的预期化合物。
[0113] IR：1629cm-1
[0114] N.M.R.1H 300MHz(CDCl3)：7.60；7.25；7.10；4.30；4.10；3.95；3.7-3.15；3.00-2.75；2.50；2.4-2.2；1.7-1.4；1.35-1.00；0.95。
[0115] 步骤B：(4aRS，10bRS)-N，N-二乙基-8-氰基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0116] 将溶于四氢呋喃(220ml)的上面步骤中得到的酰胺(12g，36mmol)加入到预冷至-78℃的溶液中，该溶液由s-BuLi(1.3M)的己烷(40ml)和N，N，N’，N’-四甲基乙二
胺(TMEDA)(8.2ml)的四氢呋喃溶液(240ml)组成，同时保持内温低于-65℃。在-70℃下
将得到的反应混合物搅拌1小时30分钟。加入氰酸苯酯(PhOCN)(12g)，同时保持内温低
于-65℃。在-65℃下将混合物搅拌5分钟，然后在1小时30分钟内将反应混合物升回环
境温度，再在环境温度下搅拌1小时。用10％水的四氢呋喃溶液水解反应混合物，用乙醚萃取，干燥并浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(95/5)的混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。收集得到油状的预期化合物。
胺(TMEDA)(8.2ml)的四氢呋喃溶液(240ml)组成，同时保持内温低于-65℃。在-70℃下
将得到的反应混合物搅拌1小时30分钟。加入氰酸苯酯(PhOCN)(12g)，同时保持内温低
于-65℃。在-65℃下将混合物搅拌5分钟，然后在1小时30分钟内将反应混合物升回环
境温度，再在环境温度下搅拌1小时。用10％水的四氢呋喃溶液水解反应混合物，用乙醚萃取，干燥并浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(95/5)的混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。收集得到油状的预期化合物。
[0117] IR：2228cm-1；1632cm-1.
[0118] N.M.R.1H300MHz(CDCl3)：7.65；7.40；4.30；4.05；3.90；3.60；3.25；3.05-2.75；2.50-2.15；1.8-1.4；1.15；0.95。
[0119] 步骤C：(4aRS，10bRS)-8-(氨基甲基)-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0120] 在兰尼镍(1g)存在下及4bar压力和60℃条件下将溶于甲醇(60ml)的上面步骤中得到的腈(0.61g，1.7mmol)用氢气处理4小时。在降回环境温度后，过滤除去催化剂，然后浓缩滤液。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇/氨(90/10/1)的混合物为洗
脱剂，将得到的残余物进行纯化。得到无定形固体状的预期化合物。
脱剂，将得到的残余物进行纯化。得到无定形固体状的预期化合物。
[0121] IR：3388-3314cm-1；1626cm-1.
[0122] N.M.R.1H(CDCl3)：7.35，s，1H；7.10，s，1H；4.30，d，1H；4.05，dd，1H；3.90，dt，1H；3.75，s，2H；3.55，q，2H；3.20，q，1H；2.85，m，1H；2.90，m，2H；2.80，m，1H；2.30，m，1H；2.30，m，1H；1.55，m，1H；1.50，m，2H；1.30，t，3H；1.05，t，3H；0.90，t，3H。
[0123] 步骤D：(4aRS，11bRS)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，11b-八氢异吲哚并[5，6-h][1，4]苯并 嗪-10(2H)-酮和其盐酸盐。
[0124] 将叔丁基锂的(1.5M的戊烷溶液)(10ml)加入到上面步骤中得到的胺(1.8g)的四氢呋喃溶液(200ml)中。将得到的混合物在-75℃下搅拌15分钟并在-40℃下搅拌20
分钟，然后用10％水的四氢呋喃溶液进行水解。在二氯甲烷存在下进行分离后，干燥并减压浓缩，以白色固体形式分离得到预期化合物，该化合物的盐酸盐从甲醇中结晶得到。
分钟，然后用10％水的四氢呋喃溶液进行水解。在二氯甲烷存在下进行分离后，干燥并减压浓缩，以白色固体形式分离得到预期化合物，该化合物的盐酸盐从甲醇中结晶得到。
[0125] IR：1691cm-1；3183cm-1.
[0126] N.M.R.1H300MHz(CDCl3)：8.09，s，1H；7.16，s，1H；6.68，未能分辨的峰，1H；4.38，m，1H；4.35，d，1H；4.09，m，1H；3.95，td，1H；3.00，m，2H；2.89，d，1H；2.82，m，1H；2.46，td，1H；2.29，m，3H；1.64，m，1H；1.53，m，2H；0.92，t，3H。
[0127] 实施例2：(4aR，11bR)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，11b-八氢异吲哚并[5，6-h][1，4]苯并 嗪-10(2H)-酮和其盐酸盐。
[0128] 将700mg实施例1的步骤D中制得的产物装至Chiralcel OD柱上，并用异丙醇和三氟乙酸200∶1的混合物作流动相通过HPLC进行分离。首先洗脱出预期化合物。用
氢氧化钠，然后用2M氯化氢的醚溶液处理后，得到预期产物的盐酸盐。
氢氧化钠，然后用2M氯化氢的醚溶液处理后，得到预期产物的盐酸盐。
[0129] 熔点：287-291℃
[0130] 旋光性：溶剂＝甲醇
[0131] 浓度＝1％
[0132] 温度＝20℃
[0133] λ＝589nm
[0134] D＝+52.4
[0135] 实施例3：(4aS，11bS)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，11b-八氢异吲哚并[5，6-h][1，4]苯并 嗪-10(2H)-酮和其盐酸盐
[0136] 在实施例2中洗脱出来的第二个产物为预期产物。用氢氧化钠，然后用2M氯化氢的醚溶液处理后，得到预期产物的盐酸盐。
[0137] 熔点：302-308℃
[0138] 旋光性：溶剂＝甲醇
[0139] 浓度＝1％
[0140] 温度＝20℃
[0141] λ＝589nm
[0142] D＝-53.9
[0143] 实施例4：(4aR，11bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，11b-八氢-10H-呋喃并[3’，4’：6，7]-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-10-酮和其盐酸盐
[0144] 步骤A：(4aR，10bR)-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0145] 将(4aR，10bR)-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b[1，4] 嗪-9-甲酸盐酸盐(αD＝+90.6，20℃，浓度1％，溶剂为甲醇)如实施例1中的步骤
A进行处理，制得预期产物。
A进行处理，制得预期产物。
[0146] 步骤B：(4aR，10bR)-，N-二乙基-8-甲酰基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0147] 将溶于四氢呋喃(10ml)的上面步骤中得到的酰胺(2g，6.05mmol)加入到预冷至-78℃的溶液中，所述溶液由s-BuLi(1.3M，7.86ml)的己烷(40ml)和N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TMEDA)(1.2ml，7.9mmol)的四氢呋喃溶液(25ml)组成，同时整个过程中保持内温低于-65℃。将得到的混合物搅拌1小时30分钟，然后加入N，N-二甲基甲酰胺(1ml)，
同时保持内温低于-65℃。将混合物在-65℃下搅拌5分钟；然后在1小时30分钟内将反
应混合物升回环境温度，再在环境温度下搅拌1小时。
同时保持内温低于-65℃。将混合物在-65℃下搅拌5分钟；然后在1小时30分钟内将反
应混合物升回环境温度，再在环境温度下搅拌1小时。
[0148] 用10％水的四氢呋喃溶液水解反应混合物后，用乙醚萃取，干燥并浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、用混合物(二氯甲烷/乙醇：90/5)洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。收集得到油状的预期化合物。
[0149] IR：2940-1696cm-1；1628cm-1。
[0150] N.M.R.1H300MHz(CDCl3)：9.90，s，1H；7.70，s，1H；6.30，s，1H；4.25，d，1H；4.00，m，1H；3.80，m，1H；3.45，q，2H；3.00，q，2H；3.00-2.70，m，4H；2.35-2.05，m，4H；1.45，m，3H；1.20，t，3H；0.90，t， 3H；0.85，t，3H。
[0151] 步骤C：(4aR，11bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，11b-八氢-10H-呋喃并[3’，4’：6，7]-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-10-酮和其盐酸盐
[0152] 将上面步骤中制得的醛(3.5g)溶于甲醇(35ml)中。用硼氢化钠(0.45g)处理冷却至0℃的上述溶液。将反应混合物搅拌20小时，随后升回至环境温度。将反应混合物冷却到0℃；加入6N盐酸溶(7ml)。将得到的混合物加热回流20小时。降回环境温度后，分
离得到预期产物的盐酸盐，并从甲醇中重结晶。
离得到预期产物的盐酸盐，并从甲醇中重结晶。
[0153] 熔点：268-271℃
[0154] IR：2780cm-1，2140cm-1，1746cm-1。
[0155] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：11.90，s，1H；7.80，s，1H；7.50，s，1H；5.40，s，2H；5.10，d，1H；4.25，m，2H；3.60，m，1H；3.45-3.15，m，3H；3.15-2.95，m，3H；2.55，m，1H；2.10，m，1H；1.75(sext)，2H；0.95，(t)，3H。
[0156] 实施例5：(4aR，12bR)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，12b-八氢-2H，11H-吡喃并[4’，3’：6，7]萘并[1，2-b][1，4] 嗪-11-酮和其盐酸盐
[0157] 步骤A：(4aR，10bR)-8-(2-羟乙基)-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0158] 将溶于四氢呋喃(60ml)的实施例4步骤A中得到的酰胺(5g，15mM)加入到预冷至-78℃的溶液中，所述溶液由s-BuLi(1.3M)的己烷(14.7ml)和N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TMEDA)(3ml)的四氢呋喃(65ml)溶液组成，同时保持内温低于-65℃。在-70℃下将得
到的反应混合物搅拌30分钟。用导管加入锂化的溴乙醇溶液[用溴乙醇和正丁基锂(2.5M
的己烷溶液)在四氢呋喃中制备]，同时保持内温低于-65℃。将混合物在-65℃下搅拌5
分钟；然后在1小时30分钟内将反应混合物升回环境温度，继续搅拌1小时。用10％水的
四氢呋喃溶液水解反应混合物，用二氯甲烷萃取，干燥并浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(90/10)的混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。收集得到油状
的预期化合物。
到的反应混合物搅拌30分钟。用导管加入锂化的溴乙醇溶液[用溴乙醇和正丁基锂(2.5M
的己烷溶液)在四氢呋喃中制备]，同时保持内温低于-65℃。将混合物在-65℃下搅拌5
分钟；然后在1小时30分钟内将反应混合物升回环境温度，继续搅拌1小时。用10％水的
四氢呋喃溶液水解反应混合物，用二氯甲烷萃取，干燥并浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(90/10)的混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。收集得到油状
的预期化合物。
[0159] IR：3600-3090cm-1，1621cm-1.
[0160] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：7.10，s，1H；7.00，s，1H；4.60，t，1H；4.15，d，1H；3.95，d，1H；3.75，t，1H；3.50，m，2H；3.40，m，2H；3.05，m，2H；2.80，m，2H；2.60，m，2H；
2.30-2.00，m，5H；1.55-1.35，m，4H；1.15，t，3H；0.95，t，3H；0.85，t，3H。
2.30-2.00，m，5H；1.55-1.35，m，4H；1.15，t，3H；0.95，t，3H；0.85，t，3H。
[0161] 步骤B：(4aR，12bR)-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，12b-八氢-2H，11H-吡喃并[4’，3’：6，7]萘并[1，2-b][1，4] 嗪-11-酮和其盐酸盐
[0162] 在环境温度下，将6N盐酸溶液(2.1ml)加至上面步骤制得的产物(1.08g，2.88mmol)的甲醇(9ml)溶液中。将得到的混合物加热回流20小时。在降至环境温度后，
过滤生成的沉淀，得到预期化合物的盐酸盐。
过滤生成的沉淀，得到预期化合物的盐酸盐。
[0163] 熔点：275-279℃
[0164] IR：2401cm-1，1712cm-1，1620cm-1。
[0165] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：11.50，m，1H；8.00，s，1H；7.21，s，1H；4.95，dd，1H；4.50，t，2H；4.25，d，2H；3.60，m，1H；3.28，m，3H；3.05，m，5H；2.50，m，1H；2.00，m，1H；1.75，m，2H；1.00，t，3H。
[0166] 实施例6：(4aR，12bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，9，10，12b-十氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并 嗪-11-酮和其盐酸盐
[0167] 步骤A：(4aR，10bR)-8-羟甲基-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0168] 将实施例4步骤B中得到的醛(0.85g，2.4mmol)溶于甲醇(10ml)中。用硼氢化钠(0.16g，4.23mmol)处理冷却至0℃的上述溶液。将反应混合物搅拌20小时，期间将温度升回到环境温度。在真空下蒸发除去甲醇。将残余物提取至水和二氯甲烷中。分离后，干燥并浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(95/5)的混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。收集得到油状的预期化合物。
[0169] IR：3600-3070cm-1，1627cm-1。
[0170] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：7.20，s，1H；7.10，s，1H；5.10，t， 1H；4.35，d，1H；4.20，d，1H；4.00，m，1H；3.80，m，1H；3.40，q，2H；3.10，q，2H；2.80，m，4H；2.40-2.00，m，4H；
1.45，m，3H；1.10，t，3H；0.95，t，3H；0.85，t，3H。
1.45，m，3H；1.10，t，3H；0.95，t，3H；0.85，t，3H。
[0171] 步骤B：(4aR，10bR)-8-氯甲基-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0172] 将溶于甲苯的上面步骤中得到的醇，用亚硫酰氯(0.4ml)进行处理。将混合物在环境温度搅拌20小时。在真空下蒸发除去甲苯。将残留物提取在水和二氯甲烷中。分离后，用碳酸氢钠水溶液洗涤，然后干燥，得到油状的预期化合物。
[0173] IR：1627cm-1。
[0174] N.M.R.1H300MHz(FMSO-d6)：7.25，s，1H；7.20，s，1H；4.65，d，1H；4.20，d，1H；4.00，dd，1H；3.80，td，1H；3.45，q，2H；3.10，q，2H；2.90-2.70，m，4H；2.40-2.05，m，4H；
1.6-135，m，3H；1.25，t，3H；1.00，t，3H；0.90，t，3H。
1.6-135，m，3H；1.25，t，3H；1.00，t，3H；0.90，t，3H。
[0175] 步骤C：(4aR，10bR)-8-氰基甲基-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0176] 将溶于四氢呋喃(15ml)的上面步骤中制得的化合物(0.64g，1.68mmol)用氰化四丁基铵(0.8g，2.98mmol)处理20小时。在真空下将混合物浓缩。将残留物提取在水和二氯甲烷中。分离，然后干燥并浓缩，得到油状的预期的腈。
-1
-1
[0177] IR：1628cm 。1
[0178] N.M.R.H300MHz(DSO-d6)：7.20，2s，2H；4.20，d，1H；4.00，dd，1H；3.80，m+s，3H；3.45，q，2H；3.10，q，2H；2.90-2.70，m，4H；2.35-2.05，m，4H；1.55-1.35，m，3H；1.15，t，3H；
1.00，t，3H；0.85，t，3H。
1.00，t，3H；0.85，t，3H。
[0179] 步骤D：(4aR，10bR)-8-(2-氨基乙基)-N，N-二乙基-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪-9-甲酰胺
[0180] 兰尼镍(1g)存在下，以及4bar压力和60℃条件下，将溶于甲醇(250ml)的上面步骤中制得的化合物(2.7g，7.3mmol)用氢气处理4小时。降回环境温度后，滤去催化剂；然后将滤液浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇/氨(90/10/1)混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。分离得到无定形固体状的预期产物。
[0181] IR：3360-3310cm-1，1626cm-1。
[0182] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：7.10，s，1H；7.00，s，1H；4.20，d，1H；4.00，m，1H；3.80，m，1H；3.45，q，2H；3.10，q，2H；2.9-2.7，m，4H；2.50，m，2H；2.4-2.05，m，4H；1.6-1.3，m，3H；1.20，t，3H；1.00，t，3H；0.90，t，3H。
[0183] 步骤E：(4aR，12bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，8，9，10，12b-十氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并 嗪-11-酮和其盐酸盐
[0184] 将1.5M叔丁基锂的戊烷溶液(1.9ml，3.21mmol)加入到上面步骤中得到的胺(0.40g)的四氢呋喃溶液(45ml)中。将得到的溶液在-78℃下搅拌10分钟，然后在-40℃
下搅拌20分钟。用10％水的四氢呋喃溶液水解反应混合物。在二氯甲烷存在下进行分离
后，干燥并减压浓缩，用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(90/10)混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。分离得到无定形固体形式的预期产物，该产物的盐酸盐从乙酸乙酯中结晶得到。
下搅拌20分钟。用10％水的四氢呋喃溶液水解反应混合物。在二氯甲烷存在下进行分离
后，干燥并减压浓缩，用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(90/10)混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。分离得到无定形固体形式的预期产物，该产物的盐酸盐从乙酸乙酯中结晶得到。
[0185] 熔点：263-265℃。
[0186] IR：1666cm-1。
[0187] N.M.R.1H(DMSO-d6)：7.90，s，1H；7.10，s，1H；5.00，d，1H；4.25，m，2H；3.60，m，1H；3.4-3.15，m，5H；3.00，m，3H；2.85，m，2H；2.50，m，2H；2.00，m，1H；1.75，m，2H；1.00，t，3H。
[0188] 实施例7：(4aR，11bR)-9-甲基-4-丙基-3，4，4a，5，6，8，9，11b-八氢异吲哚并[5，6-h][1，4]苯并 嗪-10(2H)-酮和其盐酸盐
[0189] 将溶于40％甲胺水溶液(10ml)的实施例4的产物(1g，3.08mmol)在高压釜中120℃下加热16小时。降回环境温度后，用二氯甲烷萃取混合物；有机相用MgSO4干燥。浓缩得到残留物，用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(95/5)混合物为洗脱剂，将该残留物进行纯化。得到白色固体状的预期产物，该产物的盐酸盐从乙腈中结晶得到。
[0190] 熔点：240-245℃。
[0191] IR：1692cm-1。
[0192] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：8.00，s，1H；7.10，s，1H；4.35，d，1H；4.30，s，2H；4.10，m，1H；3.95，m，1H；3.20，s，3H；3.00，m，2H；2.90，m，1H；2.85，m，1H；2.50，m，1H；2.30，m，3H；1.7-1.4，m，3H；0.90，t，3H。
[0193] 实施例8：(4aR，11bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，10，12b-八氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并 嗪-11-酮和其盐酸盐
[0194] 步骤A：(4aR，10bR)-9-(-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4] 嗪)-甲酰氯
[0195] 将3.6ml(41.7mmol)亚硫酰氯滴加到混悬在无水甲苯(100ml)和二甲基甲酰胺(0.15ml)中的(4aR，10bR)-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-b][1，4]嗪-9-甲酸(10g，32mmol)中。将得到的混合物加热回流1小时。降回环境温度后，过滤混合物；用甲苯洗涤固体残留物。在P2O5存在和真空条件下，将固体在烘箱中干燥至恒重，制得预期产物。
[0196] IR：2457cm-1，1753cm-1，814-775cm-1。
[0197] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：8.05(s)1H；7.80(dd)1H；7.30(d)1H；5.05(d)1H；4.30(m)2H；3.60(d)1H；3.50(NH)1H；3.30(m)3H；3.00(m)3H；2.50(m)1H；2.10(m)1H；
1.75(m)2H；0.95(t)3H。
1.75(m)2H；0.95(t)3H。
[0198] 步骤B：(4aR，10bR)-9-(-4-丙基-3，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-萘并[1，2-n][1，4] 嗪)-甲酸甲氧基甲基酰胺
[0199] 将2.62g(31.3mmol)甲氧基胺盐酸盐加入到碳酸钾(13g，94mmol)溶于水(31ml)和乙酸乙酯(62ml)的混合物中。冷却至0℃，向该混合物中分次加入步骤A的酰氯
(10.35g，31.3mmol)，同时保持温度低于5℃。将混合物在0℃下搅拌2小时。在加入乙酸乙酯和水并回到环境温度后，对混合物进行分离；用水洗涤有机相，用硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩，制得固体状的预期产物。
(10.35g，31.3mmol)，同时保持温度低于5℃。将混合物在0℃下搅拌2小时。在加入乙酸乙酯和水并回到环境温度后，对混合物进行分离；用水洗涤有机相，用硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩，制得固体状的预期产物。
[0200] 熔点：147-152℃。
[0201] IR：3194cm-1，2870cm-1，2803-2767cm-1，1650cm-1，1272-1126cm-1，834-760cm-1。
[0202] N.M.R.1H300MHz(DMSO-d6)：11.60(s)1H；7.82(s)1H；7.55(dd)1H；7.18(d)1H；4.20(d)1H；4.00(dd)1H；3.80(td)1H；2.7-3.00(m)3H；2.30(m)2H；2.05-2.2(m)2H；
1.45(m)3H；0.88(t)3H。
1.45(m)3H；0.88(t)3H。
[0203] 步骤C：(4aR，12bR)-10-甲氧基-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，10，12b-八氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并 嗪-11-酮
[0204] 将步骤B中得到的酰胺(4g，13.14mmol)的四氢呋喃(40ml)溶液加入到预冷至-78℃的溶液中，该溶液由s-BuLi(24ml，31.53mM)和N，N，N’，N’-四甲基乙二胺(TMEDA)(4.8ml，31.53mmol)的四氢呋喃溶液(90ml)组成，同时保持内温低于-70℃。将反应混合物升至-20℃，然后在平均温度为-10℃条件下搅拌45分钟。将混合物再次冷却至-78℃，并加入碘甲烷(0.9ml，14.45mmol)。将温度升回0℃，然后升至环境温度。用饱和氯化铵溶液进行水解。加入乙醚后，将混合物进行分离；用水洗涤有机相，用硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩。将s-BuLi(21.4ml，27.8mmol)加入到上面得到的残留物(4.04g)的四氢呋喃(83ml)溶液中。冷却至-78℃，并在此温度下搅拌2小时。在保持温度低于-70℃的同时，将二甲基甲酰胺1.13ml，14.6mmol)加入到上述混合物中，在升回环境温度前将该混合物在此温度下搅拌10分钟。用饱和氯化铵溶液进行水解。加入乙醚后，对混合物进行分离；用水洗涤有机相，用硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩。将残留物提取在四氢呋喃(330ml)中，加入浓盐酸(135ml)，并在环境温度下将混合物搅拌1小时。用浓氢氧化钠溶液处理后，用乙酸乙酯萃取，用水和饱和氯化钠溶液洗涤，有机相用硫酸镁干燥，然后在真空下浓缩。用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(95/5)混合物为洗脱剂，将得到的残余物进行纯化。
得到浅褐色固体状的预期产物。
得到浅褐色固体状的预期产物。
[0205] 熔点：142-145℃。
[0206] N.M.R.1H400MHz(CDCl3)：8.65，7.25，7.22，635，4.47，4.12-4.03，4.05，3.00ppm。
[0207] 步骤D：(4aR，12bR)-4-丙基-2，3，4，4a，5，6，10，12b-八氢-11H-异喹啉并[6，7-h][1，4]苯并 嗪-11-酮和其盐酸盐
[0208] 将15％TiCl3的水溶液(7.6ml)加至步骤C的化合物(1.1g，3.35mmol)的乙醇(3.3ml)溶液中。将混合物在45℃下加热24小时。加热持续6天，每天添加15％TiCl3溶
液(3.5ml)。在回到环境温度后，用水(30ml)和(30g)处理混合物，然后用35％氢氧化钠
溶液使成pH13-14的碱性。用压缩空气气流处理黑色的混悬液，直到混悬液完全脱色。用二氯甲烷萃取后，干燥并浓缩，用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(95/5)混合物为洗脱剂，将得到的残留物进行纯化。分离得到白色固体状的预期产物，该产物的盐酸盐从乙腈中结晶得到。
液(3.5ml)。在回到环境温度后，用水(30ml)和(30g)处理混合物，然后用35％氢氧化钠
溶液使成pH13-14的碱性。用压缩空气气流处理黑色的混悬液，直到混悬液完全脱色。用二氯甲烷萃取后，干燥并浓缩，用快速分离色谱在硅胶上、以二氯甲烷/乙醇(95/5)混合物为洗脱剂，将得到的残留物进行纯化。分离得到白色固体状的预期产物，该产物的盐酸盐从乙腈中结晶得到。
[0209] 熔点：200-203℃。
[0210] IR：3457cm-1，3162cm-1，1632cm-1。
[0211] N.M.R.1H400MHz(DMSO-d6)：11.10(m)2H；8.25(s)1H；7.40(s)1H；7.10(t)1H；6.40(d)1H；4.95(d)1H；4.25(m)2H；3.60(d)1H；3.3-3.0(2m)2H；3.05-2.00(2m)4H；
1.70(m)2H；0.95(t)3H。
1.70(m)2H；0.95(t)3H。
[0212] 药理学研究
[0213] 实施例9：人D2和D3受体结合研究
[0214] 细胞培养
[0215] 根据文献中公知的方法，用编码人多巴胺D2或D3受体的基因稳定地转染CHO(中国仓鼠卵巢)细胞。这些天然细胞缺乏酶DHFR(二氢叶酸还原酶)。在37℃和5％CO2、
95％空气的潮湿气氛条件下，在培养箱中对细胞进行培养。用Lipofectin(Gibco)进行转染。筛选人D2受体和腐草霉素耐药基因共同转染的CHO细胞，因为这些细胞对培养基中存在的抗生素具有抗性。在缺少次黄嘌呤/胸腺嘧啶核苷并且存在氨甲蝶呤的培养基中，对人D3受体转染的细胞进行筛选。所用的培养基的组分为：对于CHO-D2为加有10％胎牛血
清和次黄嘌呤/胸腺嘧啶核苷的DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)；对于CHO-D3为加
有10％透析型胎牛血清的DMEM。在汇合时收获细胞，然后进行膜制备。
95％空气的潮湿气氛条件下，在培养箱中对细胞进行培养。用Lipofectin(Gibco)进行转染。筛选人D2受体和腐草霉素耐药基因共同转染的CHO细胞，因为这些细胞对培养基中存在的抗生素具有抗性。在缺少次黄嘌呤/胸腺嘧啶核苷并且存在氨甲蝶呤的培养基中，对人D3受体转染的细胞进行筛选。所用的培养基的组分为：对于CHO-D2为加有10％胎牛血
清和次黄嘌呤/胸腺嘧啶核苷的DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)；对于CHO-D3为加
有10％透析型胎牛血清的DMEM。在汇合时收获细胞，然后进行膜制备。
[0216] 膜制备：
[0217] 在0.2％胰蛋白酶存在下几分钟后，收集细胞并在2000g下离心5分钟。然后将细胞团重新混悬在含有5mM MgSO4的pH 7.5的10mM Tris-HCl缓冲液中，并用Polytron 进行均质化。然后将匀浆在50000g下离心15分钟，通过温和地超声处理将沉淀物重新混悬
在培养缓冲液中，该缓冲液有以下组成：pH7.5并含有120mM NaCl、5mM KCl、2mM CaCl2、5mM MgCl2的50mMTris-HCl。然后将膜分成等分试样并在-80℃下存放，直到实验使用之日。
在培养缓冲液中，该缓冲液有以下组成：pH7.5并含有120mM NaCl、5mM KCl、2mM CaCl2、5mM MgCl2的50mMTris-HCl。然后将膜分成等分试样并在-80℃下存放，直到实验使用之日。
[0218] 结合实验
[0219] 培养在聚丙烯试管中进行，所用液体终体积为400μl，包含下列组分：
[0220] 100μl[125I]-iodosulpride(Amersham)
[0221] 对于D2和D3受体分别为0.1nM和0.2nM
[0222] 100μl缓冲液(所有试管)
[0223] 或100μl10μM的雷氯比利(raclopride)(非特异性结合)
[0224] 或100μl化合物
[0225] 200μl膜制品，该膜制品中含有D2或D3受体(在加入0.2％BSA(牛血清白蛋白)的缓冲液中)。
[0226] 每个化合物的浓度范围至少包括七个以一式三份测定的点。每个实验至少重复两次。
[0227] 在30℃下培养30分钟，通过用Brandle装置快速过滤终止培养，接着用pH7.4的含有120mM NaCl的Tris-HCl缓冲液连续冲洗三次。收集滤膜，然后用伽玛计数器进行计
数。
数。
[0228] 结果分析
[0229] IC50代表对放射性配体的结合产生50％抑制的浓度，该值由非线性回归法(Prism Graph方法)计算。
[0230] 由 式Ki＝IC50/(1+L/Kd) 计 算 得 到Ki 值，其 中 L为 实 验 中 所 用 的125
[ I]-iodosulpride的浓度，Kd是该化合物的解离常数。结果以pKi(pKi＝-logKi)表示。
[ I]-iodosulpride的浓度，Kd是该化合物的解离常数。结果以pKi(pKi＝-logKi)表示。
[0231] 对于人D2和D3受体，Kd值分别为0.5nM和1.31nM。
[0232] 结果
[0233]化合物 pKi
hD3 hD2
实施例1 8.1 5.9
实施例2 8.4 6.1
实施例4 8.1 5.7
实施例5 6.9 5.8
实施例6 7.4 6.1
实施例8 7.7 5.9
hD3 hD2
实施例1 8.1 5.9
实施例2 8.4 6.1
实施例4 8.1 5.7
实施例5 6.9 5.8
实施例6 7.4 6.1
实施例8 7.7 5.9
[0234] 实施例10：突触前的多巴胺能自身受体活化
[0235] 实验记录大鼠的腹侧被盖区的单个细胞外电活性。
[0236] 原理
[0237] 多巴胺能激动剂的给药以剂量依赖模式降低神经元放电频率。多巴胺能拮抗剂氟哌啶醇可以逆转这种作用。
[0238] 方法
[0239] 用水合氯醛(400mg/kg，i.p.)麻醉大鼠，并在进行股静脉导管插入术后，将其置于立体定向仪(Stereotactic apparatus)(Unimécanique，法国)中。通过每小时将水合氯醛i.p.给药，保持麻醉水平；用恒温控制加热毯使直肠温度保持在37±1℃。将钨微
电极(10MΩ，1μm)，用electronic microdrive(Unimécanique，法国)，植进腹侧被盖区(AP：-5.5/前囟；L：0.7；H：7.0-8.5/硬膜；Paxinos和Watson atlas，1986)。可以通过多巴胺能细胞电位的形态(持续时间超过3毫秒的三相电位+/-/+)、放电节律(规律的或减
小的振幅突增)和放电频率(2-8Hz)来识别它们。用每个动物的单个细胞进行记录。
电极(10MΩ，1μm)，用electronic microdrive(Unimécanique，法国)，植进腹侧被盖区(AP：-5.5/前囟；L：0.7；H：7.0-8.5/硬膜；Paxinos和Watson atlas，1986)。可以通过多巴胺能细胞电位的形态(持续时间超过3毫秒的三相电位+/-/+)、放电节律(规律的或减
小的振幅突增)和放电频率(2-8Hz)来识别它们。用每个动物的单个细胞进行记录。
[0240] 在≥5分钟时间段(基础活性)及最初注射载体(加入几滴稀乳酸的蒸馏水；用1N NaOH将pH调至5)后，以累积增加的剂量每间隔2-3分钟将本发明化合物经静脉给药。
[0241] 结果分析
[0242] 用Spike2软件包(Cambridge Electronic Design，英国)进行数据采集。在每一注射中间最大变化时，对放电频率测定1分钟，并用相对于定义为100％的基础活性(上述的最初处理的5分钟内的平均值)的变化的百分数表示。
[0243] 通过重复测定之间的差异分析，接着通过用于不同剂量的效用与载体(蒸馏水)效用的比较的Dunnett氏检验，对本发明化合物进行统计学评估。
[0244] 结果
[0245] 例如，下表给出了实施例2中的产物的测定数据。
[0246]实施例2-剂量μg/kgi.v. 神经元放电频率
载体(0) 102.6±0.9
0.125 91.8±5.2
*
0.25 79.9±5.9
*
0.5 66.3±5.9
1.0 42.0±7.3*
*
2.0 10.8±8.7
*
4.0 2.3±2.3
*
8.0 0.0±0.0
载体(0) 102.6±0.9
0.125 91.8±5.2
*
0.25 79.9±5.9
*
0.5 66.3±5.9
1.0 42.0±7.3*
*
2.0 10.8±8.7
*
4.0 2.3±2.3
*
8.0 0.0±0.0
[0247] 单个值(n＝5)＝平均值±平均值的标准差。
[0248] *＝与载体相比p＜0.05
[0249] 实施例11：抗抑郁性质：大鼠的强迫游泳实验
[0250] 原理
[0251] 强迫游泳实验(Porsolt R.等人，欧洲药理学杂志(Eur.J.Pharmacol.)，1978，47，379-91)是一种包括在大鼠中诱导“绝望”状态的行为测试，该测试通过将初次用于实验的动物置于充满水且它们不能从中逃出的容器中并持续15分钟来进行。在开始的5-10分
钟，大鼠剧烈挣扎，但是在测试的最后阶段最终采取不动的姿势。第二天将该动物置于同一容器中，它在测试(5分钟持续时间)的大部分时间中保持不动。抗抑郁药减少测试中大鼠不动的持续时间。
钟，大鼠剧烈挣扎，但是在测试的最后阶段最终采取不动的姿势。第二天将该动物置于同一容器中，它在测试(5分钟持续时间)的大部分时间中保持不动。抗抑郁药减少测试中大鼠不动的持续时间。
[0252] 实验方法
[0253] 在两天中对大鼠进行实验，中间有24小时间隔，所用大鼠平均体重170g，在置于单个笼子前适应一天，并自由进食和饮水。在第一天中，将每一只大鼠在装有15cm高并保持25℃的水的玻璃圆柱体(20cm直径×40cm高)中放置15分钟。第二天，将该动物再次在圆柱体中放置5分钟；测定大鼠的总的不动时间(单位为秒)。在开始实验之前30分钟，将本发明产物或溶剂给予动物。通过重复测定之间的差异分析，接着通过用于不同剂量的效用与载体(蒸馏水)效用的比较的Dunnett氏检验，对本发明化合物进行统计学评估。
[0254] 结果
[0255] 例如，为了举例说明本发明化合物的活性，将实施例2中的产物的测定数据列在下面的表中：
[0256]产物 剂量 不动(秒)
mg/kgs.c. 平均值±s.e.m.
载体(蒸馏水) 0 1743±9.1
实施例2 0.02 159.4±7.9
0.04 122.7±21.2*
0.08 22.03±5.8*
*
mg/kgs.c. 平均值±s.e.m.
载体(蒸馏水) 0 1743±9.1
实施例2 0.02 159.4±7.9
0.04 122.7±21.2*
0.08 22.03±5.8*
*
[0257] 与载体相比p＜0.05 s.e.m.＝平均值的标准差
[0258] 实施例2中的产物以剂量依赖模式减少动物不动时间，因此说明具有良好的抗抑郁作用。
[0259] 实施例12：由多巴胺能激动剂在黑质单侧损毁的大鼠中诱导的旋转
[0260] 原理
[0261] 将神经毒素6-羟基-多巴胺(6-OH-DA)注射至单侧黑质中，使上行黑质纹状体通路退化，而使损毁同侧的突触后多巴胺能受体超敏。在有上述损毁的大鼠中，直接激动剂产品(阿朴吗啡)的系统性给药可诱导对侧旋转(在损毁的相反一侧旋转)。该实验可以证
明用于治疗帕金森病的产品的多巴胺能激动剂特性。
明用于治疗帕金森病的产品的多巴胺能激动剂特性。
[0262] 方法
[0263] 损毁在体重为280-330g、用戊巴比妥(40-50mg/kgi.p.)麻醉并接受25mg/kgi.p.剂量地昔帕明的Wistar大鼠中进行损毁操作，将动物置于KOPF立体定向仪中，
颅的朝向符合Pellegrino和Cushman Atlas(1979)。用微灌注仪(microperfuser)将
4μl6-OH-DA(2μg/μl)缓慢注入左侧的黑质中(A＝2.4mm；L＝2.0mm；V＝3.1mm，相对
于耳间的零(interaural zero))(U.Ungerstedt，ActaPhysiol.Scandi.Suppl.，1971，367，
69-93)
颅的朝向符合Pellegrino和Cushman Atlas(1979)。用微灌注仪(microperfuser)将
4μl6-OH-DA(2μg/μl)缓慢注入左侧的黑质中(A＝2.4mm；L＝2.0mm；V＝3.1mm，相对
于耳间的零(interaural zero))(U.Ungerstedt，ActaPhysiol.Scandi.Suppl.，1971，367，
69-93)
[0264] 装置：由电脑用ROTACOUNT系统(Columbus Co，USA)自动读取旋转数和方向。将动物置于直径30cm、高50cm的平底圆柱体中。将高质量的半刚电缆(fine，semi-rigidcable)从动物的前爪下面环绕动物，并连接到位于圆柱体的上方且与电脑连接的光学计数单元。
[0265] 损毁动物的选择：在用6-OH-DA诱导损毁后一个月时，以在多巴胺能激动剂阿朴吗啡(0.04mg/kg，s.c.)给药后1小时中至少进行150次对侧旋转为标准，选择适当损毁的动物。
[0266] 实验方法：每星期对动物进行一次测试，本发明化合物与多巴胺能激动剂轮流给药。注射多巴胺能激动剂(T0)时开始记录对侧旋转并持续1小时。通过重复测定之间的差异分析，接着通过用于不同剂量的效用与载体(蒸馏水)的效用的比较的Dunnett氏检
验，对本发明化合物进行统计学评估。
验，对本发明化合物进行统计学评估。
[0267] 结果
[0268] 例如，下面的表给出经s.c.途径给药的实施例2中的产物的结果数据。
[0269]产物 剂量 对侧旋转
mg/kg s.c. 平均值±s.e.m(n)
载体(蒸馏水) 0 53.8±12.8(8)
阿朴吗啡 0.02 497.2±91.4*(11)
实施例2 0.00063 157.4±32.1(5)
0.0025 337.3±48.3*(6)
0.01 553.8±138.3*(5)
mg/kg s.c. 平均值±s.e.m(n)
载体(蒸馏水) 0 53.8±12.8(8)
阿朴吗啡 0.02 497.2±91.4*(11)
实施例2 0.00063 157.4±32.1(5)
0.0025 337.3±48.3*(6)
0.01 553.8±138.3*(5)
[0270] *与载体相比p＜0.05 (n)＝大鼠数目
[0271] s.e.m＝平均值的标准差
[0272] 在该测试中实施例2从0.0025mg/kg剂量开始显示活性。
[0273] 实施例13：抗焦虑性质：大鼠的超声发声实验
[0274] 原理
[0275] 当将大鼠置于之前与不愉快经历(电击爪子)相关的环境中时，它通过发出听不到的叫声(或超声发声)表示出焦虑。通过减少上述发声时间可以证明产品的抗焦虑活性。
[0276] 装置
[0277] 将标准箱(Coulbourn Instruments)置于声音衰减的通风罩中，该标准箱具有带电金属条构成的门(电击发生器和振动器(scrambler)，Med Associates Inc)并在顶篷的中央装有扩音器。将超声转变到可听到的范围(bat detector，Buitenbedrijf)。将以上述方式改变的信号过滤然后加工处理(RTS软件，Engineering Design)。将得到的谱图记录在DAT带中。
[0278] 方法
[0279] 从研究开始之前的五天起直到研究结束，将到来时体重为180-200g的Wistar品系雄性大鼠放在四个笼子中，并自由进食和饮水。将所用方法分为三个连续的以24小时为间隔的阶段，即训练、挑选和测试。在训练期间，将动物单个放入箱子中，在该箱中它们在七分钟时间内随机地受到六次电击(0.8mA，8s)。挑选阶段包括将每个动物置于箱中两分钟，
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