本发明涉及具有部分多巴胺-D2受体激动活性和5-羟色胺和/或 去甲肾上腺素重摄取抑制活性的化合物或化合物组合用于制备治疗由 主要单胺能(多巴胺、5-羟色胺和/或去甲肾上腺素)系统紊乱引起 的，或能够经过操作那些系统而治疗的精神病学和/或神经病学疾病的 药用组合物的用途，所述疾病选自：精神分裂症和其它精神病性精神 障碍(psychotic disorders)；心境障碍，例如I型双相性精神障碍 (bipolar I disorders)、II型双相性精神障碍(bipolar II disorders) 和单相性抑郁障碍(unipolar depressive disorders)如轻度抑郁(minor depression)、季节性情感障碍、出生后抑郁(postnatal depression)、 精神抑郁症和严重抑郁；焦虑症，包括惊恐症(具有或不具有广场恐 怖症)、社交恐怖症、强迫症(OCD，具有或不具有共同发病的慢性 抽搐或精神分裂性障碍(co-morbid chronic tic or schizotypal disorder))、创伤后精神紧张性障碍和广泛性焦虑症(GAD)；物 质相关性障碍(substance related disorders)，包括应用精神作用物 质所致精神障碍(如依赖和滥用)和精神作用物质引起的精神障碍 (substance induced disorders)(如物质戒断(substance withdrawal))； 综合性精神发育障碍(pervasive development disorders)，包括孤独 症和雷特病(Rett’s disorder)；注意缺陷和破坏性行为障碍(attention deficit and disruptive behavior disorders)，例如注意缺陷多动症 (ADHD)；冲动控制障碍如病理性赌博；进食障碍如神经性厌食和 神经性贪食症；抽搐症(tic disorders)如图雷特病(Tourette’s disorder)；多动腿综合症；以认知、记忆损害和/或共同发病的精神 病学障碍为特征的疾病以及神经康复(创伤后脑损害)(disorders characterized by impairment of cognition，memory and co-morbid psychiatric disorders and neurorehabilitation(post-traumatic brain lesions))。

多巴胺能神经元，尤其是黑质纹状体途径中的那些，参与运动控制 的微调。这一途径退化可能引起神经学上的疾病。然而，脑中多巴胺 也是边缘系统的一部分，边缘系统包括边缘皮层(limbic cortex)、杏 仁核、伏隔核(nucleus accumbens，septum)、嗅结节和额叶皮层。因此， 在这些系统的紊乱是与知觉紊乱以及尤其是情绪性行为紊乱联系在一 起的。

5-羟色胺能和去甲肾上腺素能投射调节了许多精神疾病中被干扰 的行为上和情感上的状态。5-羟色胺和去甲肾上腺素的重摄取抑制剂 以及将这两种活性结合在一起的化合物广泛地用于抑郁症和焦虑症的 治疗。

与全多巴胺-D2受体激动剂或拮抗剂的使用相反，部分多巴胺- D2受体激动剂的使用提供了一种时刻自我调节以适应患者内源状态 的动态药物疗法。这样，它提供了所希望的多巴胺系统的灵活调整以 及回避许多不良作用，这些不良作用或是由使用全多巴胺-D2受体激 动剂如溴隐亭(幻觉、恶心、呕吐、运动障碍、体位性低血压、 somnolascence)，或是由使用全多巴胺-D2受体拮抗剂如氟哌啶醇(情 感迟钝、烦躁不安、迟发性运动障碍)来治疗而引起的。由于这些很 多不良作用，已发现全激动剂和拮抗剂在抑郁症和焦虑症治疗中的应 用仅仅是非常有限的。

部分多巴胺-D2受体激动剂不仅显示了灵活的调整作用和有利的 副作用特征，而且它们在相关动物模型中显示了显著的抗焦虑药特征 (Drugs of the Future 2001，26(2)：128-132)。去甲肾上腺素和/或5- 羟色胺的重摄取抑制剂具有更显著的抗抑郁特征。

现已发现，当两种活性被结合在一种药用制剂中时，这样的制剂允 许完全治疗所有疾病症状(如精神分裂症阳性和阴性症状)，并特别 地对涉及多巴胺能系统活性低、高或波动的精神病学疾病的治疗有用。 这样的制剂也可以用于治疗遭受与精神病发作(psychotic episodes) 结合在一起的躁狂症、焦虑症或抑郁症的患者。

本发明的部分多巴胺-D2受体激动剂(partial dopamine-D2 receptor agonists)是，当在浓度响应范围内被测试时，在功能性cAMP 基于细胞的分析(下面有描述)中，甚至在极高浓度例如化合物EC50 值100倍时，实现至少20％、但不大于60％的激活作用的化合物。在 该功能性多巴胺-D2受体分析中产生的激活作用少于20％或者大于 60％的化合物被分别认为是全拮抗剂和全激动剂，它们倾向于引起与 多巴胺-D2受体拮抗剂和激动剂相关的不良作用。部分多巴胺-D2 受体激动剂在多巴胺内源突触水平(endogenous synaptic tone)低的 情况下，或者在全多巴胺-D2受体拮抗剂存在的情况下作为激动剂， 而在多巴胺内源突触水平高的情况下，或者在全多巴胺-D2受体激动 剂存在情况下作为拮抗剂。这在图1中作了说明，图解了部分激动剂 缺乏和存在的情况下内源性激动剂(如多巴胺)变化水平之间的假设 关系，显示主要是幅度受到影响，保证了在低周围多巴胺浓度时水平 增加，以及限制了在高水平下峰值效应。

如同全激动剂一样，一般部分多巴胺-D2受体激动剂在致敏系统 (sensitized systems)中是有活性的。它们诱导在黑质致密部 (substantia nigra pars compacta)中单侧6-羟基-多巴胺 (6-OHDA)损伤的大鼠的对侧旋转。在MPTP处理的普通绒猴中， 它们产生有效而持久的运动症状逆转(Drugs of the Future 2001， 26(2)：128-132)。然而，与全激动剂相反，部分多巴胺-D2激动剂在 非致敏系统中是相当缺乏活性的：在大鼠中它们几乎不能逆转由利血 平诱导的hypolocomotion。

现已经发现，在一个分子中具有部分多巴胺-D2活性和5-羟色胺 和/或去甲肾上腺素重摄取抑制活性的化合物，或由具有部分多巴胺- D2活性和5-羟色胺和/或去甲肾上腺素重摄取抑制活性的化合物组合 组成的药用制剂，被微量透析试验证实，在体内同时显示了所有三种 活性(分别两种活性)。

对于治疗涉及过度活跃的多巴胺能系统的CNS疾病来说，推荐用 将低固有功能性活性的部分多巴胺-D2受体激动活性与5-羟色胺和/ 或去甲肾上腺素重摄取抑制活性相结合的药用制剂。对于涉及多巴胺 不足的疾病，本发明的将具有高固有功能性活性的部分多巴胺-D2受 体激动活性与5-羟色胺和/或去甲肾上腺素重摄取活性相结合的药用 制剂具有相当大的优点。

令人惊讶的是，现已发现一种或多种化合物的药用制剂可用于治疗 所有需要动态再调节多巴胺系统的精神病学疾病，其中所述一种或多 种化合物兼有至少20％、至多60％的固有功能性多巴胺活性和5-羟 色胺和/或去甲肾上腺素重摄取活性。

特征为多巴胺神经传递动态波动的疾病，如双相性抑郁(bipolar depression)和成隐，将尤其从药物制剂中部分多巴胺-D2受体激动 剂对多巴胺系统的灵活调节中得益。将这种“多巴胺能神经传递稳定 化”活性与5-羟色胺和/或去甲肾上腺素重摄取抑制活性相结合将提 高抗抑郁和抗焦虑的功效。

总的说来，本发明证明，在预测抗精神病、抗抑郁和抗焦虑活性的 动物模型中将部分多巴胺-D2受体激动活性与5-羟色胺和/或去甲肾 上腺素重摄取抑制活性结合的药用制剂的广泛功效，清楚地强调与 5-HT和/或NA抑制活性的抗抑郁作用结合的多巴胺介导的神经传递 的动态调节用于治疗许多共同发病的精神病学疾病的可能用途。

实施例

能够用于本发明的化合物组合是大体上包含以下组分的制剂：

(1)部分多巴胺-D2激动剂(定义如上)，特异5-HT重摄取抑制 剂和/或特异去甲肾上腺素重摄取抑制剂。

(2)部分多巴胺-D2激动剂和同时具有5-HT和去甲肾上腺素重摄 取活性的化合物。

(3)部分多巴胺-D2激动剂，其也是特异5-HT重摄取抑制剂，与 特异去甲肾上腺素重摄取抑制剂结合。

(4)部分多巴胺-D2激动剂，其也是特异去甲肾上腺素重摄取抑制 剂，与特异5-HT重摄取抑制剂结合。

根据本发明可以用于组合制剂中的化合物的具体实例是(但并不 局限于)特异5-羟色胺重摄取抑制剂(SSRI’s)：阿拉丙酯、西酞 普兰、氟西汀、氟伏沙明、利托西汀、奈法唑酮、帕罗西汀、舍曲林、 曲唑酮和齐美利定(zimelidine)；特异去甲肾上腺素重摄取抑制剂 (SNRI’s)：阿莫沙平、地昔帕明、马普替林、马吲哚、尼索西汀、诺 米芬辛、去甲替林(nortriptiline)、普罗替林(protriptiline)、瑞波西 汀和托莫西汀；兼有5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取抑制活性的化 合物：氯丙咪嗪(chlorimipramine)、度洛西汀、丙米嗪、茚达曲林、 米那普仑、S-33005、西布曲明和文拉法辛；以及部分多巴胺-D2激动 剂：BP 897、双氢麦角汀、双氢麦角胺、丙克拉莫((S)-(-)-3-PPP)、特 麦角脲、bifeprunox和SLV308(实施例中的结构(1)，其中R为CH3)。

根据本发明可以使用的单个化合物是既是部分多巴胺-D2激动剂、 又是特异5-HT重摄取抑制剂的化合物，例如具有通式(1)的苯基哌 嗪衍生物以及它们的盐：

其中R由(a)、(b)、(c)、(d)或(e)部分组成。

此外，根据本发明可以使用的单个化合物是具有所有三种活性的化 合物：部分多巴胺-D2激动作用、5-HT重摄取抑制作用和NA重摄 取抑制作用，例如具有以下给出结构的苯基哌嗪衍生物。

                     实例2a                                            实例2b

                    实例2c

与本发明的化合物可以形成合适的酸加成盐的可药用酸例如有盐 酸、硫酸、磷酸、硝酸、和有机酸如柠檬酸、富马酸、马来酸、酒石 酸、乙酸、苯甲酸、对甲苯磺酸、甲磺酸和萘磺酸。

所述化合物及其酸加成盐可以使用辅助物质如液态和固态载体物 质借助于适当方法，制成适于给药的形式。

实例1a-1e和2a-2c可以如WO 00EP08190所述合成。

药理学试验

可以用于本发明的化合物和有关参照化合物对多巴胺-D2受体的 体外功能活性，包括固有活性(∈)，通过其抑制毛喉素诱导的 [3H]-cAMP积累的能力进行了测定。5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取 抑制活性在大鼠脑突触体中测定。其方法如下，所得到的结果表示在 表1中。

毛喉素诱导的[3H]-cAMP积累的抑制

从Grandy博士(Vollum Institute，Portland，Oregon，USA)得到 克隆在成纤维细胞系CHO-K1细胞中的人类多巴胺-D2，L受体。CHO 细胞生长在37℃，93％空气/7％CO2中的Dulbecco改良Eagle培养基 (DMEM)中，向该培养基添加有10％热处理失活的胎牛血清、2mM 谷氨酰胺、1mM丙酮酸、5000单位/ml青霉素、5000μg/ml链霉素 以及200μg/ml。为与试验化合物温育，使用生长在24孔平板中的铺 满培养物。每种条件或物质按常规进行4个重复测试。向细胞中加入 0.5ml培养基/孔中的1μCi[3H]-腺嘌呤。2小时以后，用包含1mM 的磷酸二酯酶抑制剂异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)的0.5ml PBS对培 养物进行洗涤，并与加入或不加入试验化合物的包含1mM IBXM和 毛喉素的0.5ml PBM温育20分钟。吸出以后，用1ml 5％(w/v)三 氯乙酸终止反应。按Solomon Y、Landos C、Rodbell M，1974，高选 择性的腺苷酰环化酶分析，Anal Biochem 58：541-548以及Weiss S、 Sebben M、Bockaert JJ，1985，在皮层神经元初代培养中细胞内环 AMP生产的促肾上腺皮质激素-肽调节，J Neurochem 45：869-874所 述分析细胞提取物中形成的[3H]-ATP和[3H]-cAMP。0.8ml提取物通 过Dowex(50WX-4 200-400网眼)和氧化铝柱，用水和0.1M咪唑 (pH＝7.5)洗脱。将洗脱物与7ml Insta-gel混合，用液体闪烁记数器计 数其放射性。[3H]-ATP到[3H]-cAMP的转化表示为cAMP级分中放射 性百分比与cAMP和ATP两级分中合并的放射性相比的比值，并减 去基本活性以对自发活性作校正。

参照化合物与试验化合物均在100％DMSO中以10mM母液形式 得到，并用PBS/IBMX稀释成最终浓度。典型地，化合物在10-10M到 10-5M的浓度使用。从4个重复数据计数中，得到平均值作为对指明 第二信使积累的药物诱导、受体介导的效应的评价，表示为对照值(毛 喉素刺激的cAMP积累，减去基础活性)的百分比。通过使用非线性 曲线拟合程序INPLOT或Excel-add-in XL-Fit，相对于药物浓度(摩 尔)将平均值作图，并构建S型曲线(4参数的对数曲线)。由毛喉 素诱导的最大刺激转化作为最大值，最大抑制作用(通常在药物浓度 为10-6M或10-5M)作为最小值，并在拟合过程中固定这些值。这样， 引起最大得到的毛喉素诱导cAMP积累的抑制作用的50％的化合物 浓度(EC50)在几个实验中进行平均，在图和表中表示为平均 pEC50±SEM。通过与固定激动剂浓度和指明的拮抗剂浓度共同温育细 胞来评价拮抗剂效力。曲线拟合程序是与那些用于估计EC50值同样 的。这样，IC50值，即，能够达到可以由该化合物实现的最大拮抗作 用50％的浓度。用Cheng-Prussoff等式对IC50值进行校正，就激动剂 浓度以及在同样实验中得到的EC50值对其进行校正。所以， Kb＝IC50/(1+[激动剂]/EC50，激动剂)。相应pA2值为-log(Kb)。由浓度- 响应曲线拟合可以估计pEC50值以及可达到最大效应(固有活性或功 效(∈)。全受体激动剂为∈＝1，全受体拮抗剂为∈＝0，部分受体激动 剂具有中间的固有活性。因此部分多巴胺D2受体激动剂的化合物选择 完全依赖于由CHO-D2，L细胞中cAMP积累测量的浓度-响应关系以及 希望值在0.20到0.60的范围内的∈的估计。

若干化合物被证明只是部分抑制cAMP形成，如特麦角脲、丙克拉 莫((S)-(-)-3-PPP)以及SLV308。在CHO细胞中已经按浓度依赖方式 试验了这些化合物，所述细胞稳定地表达人类多巴胺D2受体，并且与 喹吡罗(100％)比较，这些化合物中都不能够消弱cAMP形成60％以 上。这样，这些化合物被鉴定为部分激动剂。SLV308是真正部分激 动剂，这通过将SLV308本身应用在多巴胺受体上或当全激动剂喹吡 罗存在的情况下被发现。因此，SLV308能够诱导效应(抑制cAMP 形成)，它也能以浓度依赖方式阻断全激动剂的作用(pEC50 8.0；pA2 8.4)。图2显示了SLV308以及其它参照化合物对于人类多巴胺D2 受体的效应。上面部分说明了化合物的激动剂特性：这样，喹吡罗和 他利克索是全激动剂，而SLV308和特麦角脲是部分激动剂。下面部 分说明了相对于参照激动剂喹吡罗的拮抗剂效应。这样，氟哌啶醇对 D2受体是一种全拮抗剂，SLV308和特麦角脲均被发现是“部分拮抗 剂”，仅仅阻断最大生物学效应的一半。激动作用以及拮抗作用保持 平衡状态。

[3H]-5-羟色胺重摄取的体外功能性抑制

将雄大鼠(Wistar Hsd/Cpb：WU；175-200g)去头，迅速取出大脑 半球，制备P2-突触体部分。将突触体在37℃下含有或不含有试验化 合物时在介质中预温育15分钟，该介质包含有单胺氧化酶抑制剂帕吉 林(7μM)。然后，将突触体暴露在[3H]-5-羟色胺(最终浓度0.2mM) 中10分钟。

通过用采集器过滤来终止[3H]-5-羟色胺摄取，未掺入的放射性通 过大量洗涤程序除去。使含有突触体的过滤板脱水，通过Betaplate 液体闪烁记数来确定所存在的[3H]-5-羟色胺量。对[3H]-5-羟色胺 摄取的抑制效应表示为pIC50值，该数值是达到放射性标记神经递质 摄取的最大抑制作用一半的浓度的负对数。表2中给出的pIC50值是 一式二份进行的2-9实验的平均值。将溶于DMSO中的10-2M试验 化合物用Krebs Ringer缓冲液进行稀释，达到试验浓度10-8到10-5M。 更进一步的实验细节(如缓冲液组成等)在J.T.Coyle和S.H.Snyder， 1969，由大鼠脑匀浆中突触体对儿茶酚胺的摄取；不同区域的立体特 异性，J.Pharmacol.Exp.Ther.170，221-231中有描述。

[3H]-去甲肾上腺素重摄取的体外功能性抑制

将雄大鼠(Wistar Hsd/Cpb：WU；175-200g)去头，迅速取出下丘 脑，制备粗突触体部分。将突触体在37℃下含有或不含有试验化合物 时在介质中预温育10分钟，该介质包含有单胺氧化酶抑制剂帕吉林 (7μM)。然后，将突触体暴露于[3H]-去甲肾上腺素(最终浓度0.4mM) 15分钟。

通过用采集器过滤来终止[3H]-去甲肾上腺素摄取，未掺入的放射 性通过大量洗涤程序除去。使含有突触体的过滤板脱水，通过 Betaplate液体闪烁记数来确定存在的[3H]-去甲肾上腺素的量。对 [3H]-去甲肾上腺素摄取的抑制效应表示为pIC50值，该数值是达到放 射性标记神经递质摄取的最大抑制作用一半的浓度的负对数。表2中 给出的pIC50值是一式二份进行的2-9实验的平均值。将溶于DMSO 的10-2M试验化合物用Krebs Ringer缓冲液稀释，达到试验浓度10-8 到10-5M。更进一步的实验细节(如缓冲液组成等)在J.T.Coyle和 S.H.Snyder，1969，由大鼠脑匀浆中突触体对儿茶酚胺的摄取；不同 区域的立体特异性，J.Pharmacol.Exp.Ther.170，221-231中有描述。

表1：由放射性标记的cAMP积累测定的对克隆化人多巴胺D2，L受体 的体外功能性活性(效力：pEC50，固有活性∈)以及纯化合物和组合 制剂对5-羟色胺和去甲肾上腺素重摄取位点的体外功能性活性。 cAMP积累  5-HT摄取  NA摄取   化合物类别   化合物  pEC50*   ∈*   pIC50   pIC50   全多巴胺-   D2激动剂   喹吡罗   7.0   1.00   ＜5.0   ＜5.0   全多巴胺-   D2激动剂   他利克索   7.4   1.00   ＜5.0   ＜5.0   部分多巴胺   -D2激动剂   特麦角脲   9.4   0.38   ＜5.0   ＜5.0   部分多巴胺   -D2激动剂   丙克拉莫   6.4   0.36   ＜5.0   5.3   部分多巴胺   -D2激动剂   bifeprunox   7.8   0.20   4.8   4.6   部分多巴胺   -D2激动剂   SLV308   7.5   0.55   ＜5.0   ＜5.0   特异5-HT重   摄取抑制剂   氟伏沙明   ＜6.0   0.10   6.9   5.3   特异5-HT重   摄取抑制剂   氟西汀   5.9   5.0   特异5-HT重   摄取抑制剂   帕罗西汀   ＜6.0   0.36   7.4   ＜5.0   特异NA重   摄取抑制剂   DMI   ＜6.0   0.12   5.2   7.1   特异NA重   摄取抑制剂   瑞波西汀   ＜6.0   0.09   5.0   7.2   混合   5-HT/NA重   摄取抑制剂   米那普仑   ＜6.0   0.21   6.6   5.5   部分D2激动   剂+SRI   实例1a   ＜6.0   0.27   6.9   ＜5.0   部分D2激动   剂+SRI   实例1b   0.27   ＜5.0   5.2   部分D2激动   剂+SRI   实例1c   6.8   0.53   7.6   ＜5.0

部分D2激动 剂+SRI 实例1d ＞9.0  0.56  6.4 ＜5.0 部分D2激动 剂+SRI 实例1e ＞9.0  0.60  6.6 ＜5.0 部分D2激动 剂+SRI+NRI 实例2a  6.0  0.24  6.3  5.3 部分D2激动 剂+SRI+NRI 实例2b  8.5  0.62  6.0  5.7 部分D2激动 剂+SRI+NRI 实例2c  8.8  0.79  5.1  5.4

*pEC50：为此特定药物得到最大可达到最大效应一半的浓度的-log。*∈， 其固有活性，表示为由全激动剂例如喹吡罗实现的全激动作用(∈＝1) 的分数。

微量透析可以观察到在苏醒的自由活动动物的分离脑区域中脑细 胞外空间中的神经递质以及其代解物的变化。神经递质的细胞外水平 反映了在这些脑区域中的神经元活性(神经递质释放)，并可以受选 择性受体激动剂和拮抗剂、摄取抑制物等的影响。本发明化合物(的 混合物)对于多巴胺、5-羟色胺和去甲肾上腺素水平的体内效应按照 以下给出的方法通过微量透析进行测定：

用体内微量透析法测定多巴胺和5-羟色胺

手术。雄性wistar大鼠，重280-300g，用三氟溴氯乙烷麻醉法 (1.5％三氟溴氯乙烷于NO2/O2 2∶1中)麻醉。手术前(Baytril(150μl/ 鼠i.m.))和手术后(Temgesic(0.005-0.01mg/kg i.m.非稀释的/鼠))投 用抗菌剂和止痛剂。对那些需要确定透析液多巴胺和5-羟色胺水平 的动物，固定在立体定位框架上以后，暴露其头骨并在伏隔核(nucleus accumbens)上方穿过骨头钻一个1mm的钻孔(从耳间点的坐标 (mm)：前-后+10.5，mediolateral-2.1，背腹-6.5，成8度角度(从硬 脑膜)。对其它那些要求确定透析液去甲肾上腺素水平的动物，暴露 其头骨并在前额皮质上方穿过骨头，钻一个1mm的钻孔(从前卤点 的坐标(mm)：前-后+3.2，mediolateral-0.6，背腹-1.5，成0度角度 (从硬脑膜)。在头骨内创一些更小的孔，并插入3个螺钉。大脑内 引导插管(CMA，Carnegie)通过孔被降低，直到其顶端部直接在伏隔 核或前额皮质的上方。螺钉以及引导插管用牙科用胶接剂粘合在骨上 的，并缝合周围皮肤。让动物在微量透析实验进行以前至少恢复6天。

微量透析实验。在实验当天，将微量透析探针(CMA 12，外经 0.5mm，Stockholm，Sweden)通过引导插管插入到伏隔核(2mm膜长 度)或前额皮质(4mm膜长度)。探针入口通过在平衡臂上的液体旋 转接头(双通道；Instech，UK)，与小体积管(F.E.B-管，12μl/10cm， Carnegie)连接在一起，连在注射器泵(Harvard，10通道)上。注射 器泵以2μl/min的稳定流速递送透析液体(147mM NaCl，4mM KCl， 1.2mM CaCl2以及0.7mM MgCl2)。探针出口经液体旋转接头与小 体积管连接在一起，连在CMA140级分收集器上。该管由不锈钢金属 丝支持，金属丝从旋转接头往下引导到安装于动物脖子圈的夹子上。 探针插入后16小时多巴胺、5-羟色胺和去甲肾上腺素水平是稳定的， 随后开始透析取样。样品以2μl/min的流速和20分钟的间隔(40μl 体积)被收集在为防止化合物氧化含有50μl HCOOH/半胱氨酸溶液 (0.02M/0.2w/v％)的小瓶中。在5个样品的基线期以后，将药物系 统地投入，接下来至少收集8个样品。所有样品在收集后保存干冰上， 在用下面描述的结合电化学检测的高效液相层析(HPLC)分析前冷 冻在-80℃。

透析液多巴胺和5-羟色胺的分析。样品用反相柱(Supelcosyl LC-8DB，25cm×4.6mm，颗粒直径5μm，Supelco)以及具有冷却装置 (10℃)的Gilson(型号231-401或232-401)或HP1100自动注射器 分析，反相柱用柱状恒温箱(Mistral；Spark，The Netherlands)维持 在45℃。泵(Hewlett Packard，型号1050或HP1100)在流速为1 ml/min下操作。流动相由(mM)50 HAc/NaAc(3∶1)、1.46 HSA、0.27 EDTA以及16％(v/v)甲醇组成。最终的pH用1N NaOH调节到4.9。 用装备有玻璃质碳工作电极(VT-03；Antec，Leiden，the Netherlands) 的EG&G(型号400，Princeton Applied Research)控制器以电化学法方 法检测多巴胺和5-羟色胺。相对于Ag/AgCl参照电极，电压调在600 mV。将输出记录在装备有测峰高值的HyperchemTM(Hewlett-Packard Inc.)的计算机上。用包含已知量多巴胺和5-羟色胺的分析标准液的 峰高值进行计算(pg/20min)。

透析液多巴胺和去甲肾上腺素的分析。样品用反相柱(Supelcosyl LC-18DB，150mm×4.6mm，dp＝3μm，Supelc0)以及具有冷却装置(10 ℃)的Gilson(型号231-401或232-401)或HP1100自动注射器分析， 反相柱用柱状恒温箱(Mistral；Spark，The Netherlands)维持在25℃。 泵(Hewlett Paclard，型号1050或HP1100)在流速为1ml/min下操 作。基本流动相由50mM NaAc和0.27mM EDTA组成。1-辛烷磺 酸(NOS)和甲醇的最终浓度以及最终pH(用HAc调节)，随实验 中不同脑区域的变化而变化。用装备有玻璃质碳工作电极(VT-03； Antec，Leiden，the Netherlands)的EG&G(型号400，Princeton Applied Research)控制器以电化学法检测化合物。电压相对于Hyref 参照电极调在450mV。用计算峰高值浓度(pg/20min)的Hewlett Packard Chemstation对输出进行分析和存档。用包含已知量化合物 (外标准方法)的分析标准液的峰高值进行计算。

所得到的结果表示在表2中：

表2：多巴胺、5-羟色胺和去甲肾上腺素水平的体内微量透析数据。 化合物类别 化合物 [多巴胺] [5-羟色胺] [去甲肾上腺素] ED75mg/kg ED150mg/kg ED150mg/kg 全多巴胺- D2激动剂 喹吡罗 0.04 ＞3 全多巴胺- D2激动剂 talipexole ＜0.1 ＞10 部分多巴胺 -D2激动剂 特麦角脲 ＞10 ＞10 部分多巴胺 -D2激动剂 丙克拉莫 14.46 ＞30

部分多巴胺 -D2激动剂 bifeprunox  ＞10  ＞101 部分多巴胺 -D2激动剂 SLV308  0.04  0.451  0.53 特异5-HT重 摄取抑制剂 氟伏沙明  ＞302  1.28 特异5-HT重 摄取抑制剂 帕罗西汀  ＞10  ＜10 特异NA重摄 取抑制剂 DMI  ＞3  ＞3  1.64 特异NA重摄 取抑制剂 瑞波西汀  ＞3  ＞3  ＜3.0 混合 5-HT/NA重 摄取抑制剂 米那普仑  ＞30  5.5  2.41 组合的部分 D2激动剂 +SRI SLV308+氟 伏沙明  6.41  ＞10 组合的部分 D2激动剂 +NRI SLV308+瑞 波西汀  ＜0.3  0.771  ＜0.3 组合的部分 D2激动剂 +SRI+NRI SLV308+米 那普仑  ＜3.0  ＞30  ＜3.0 部分D2激动 剂+SRI 实例1a  8.14  2.52 部分D2激动 剂+SRI 实例1c  3.92  14.79 部分D2激动 剂+SRI+NRI 实例2a  ＞302  5.44  ＜1.0

表2。单独的和与5-羟色胺重摄取抑制剂(SRI)或去甲肾上腺素重 摄取抑制物(NRI)组合的全和部分D2激动剂对于苏醒的自由活动大鼠 的伏隔核透析液中多巴胺和5-羟色胺以及前额皮质透析液中去甲肾 上腺素水平的影响。以粗体表示的值是p.o.，斜体表示的值是i.p.。1： ED75，2：ED150。