首页 / 专利库 / 解剖与生理 / 角膜 / 作为治疗剂的吡唑并嘧啶类

作为治疗剂的吡唑并嘧啶类

阅读：661发布：2022-11-15

专利汇可以提供作为治疗剂的吡唑并嘧啶类专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了式(I)的化合物，包括其药学上可接受的盐和/或前药，其中G、Ra、R2和R3在 说明书 中定义。，下面是作为治疗剂的吡唑并嘧啶类专利的具体信息内容。

1.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基、环烷基、吡咯烷基、喹 啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a] 嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、 四氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多个 选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代 或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；
Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取代 基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的氨基 和取代或未取代的苯基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨基、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的烷氧 基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的 链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取代或 未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代 的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、 取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取代或未 取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的炔 基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未取代 的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、- Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；
RC每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
A是-(C1-C6)-、-O-、-S-、-S(O)p-、-N(R)-、-N(C(O)OR)-、-N(C(O)R)-、 -N(SO2R)-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2N(R)-、-CH(NR)-、-CH2N(C(O)R))-、 -CH2N(C(O)OR)-、-CH2N(SO2R)-、-CH(NHR)-、-CH(NHC(O)R)-、- CH(NHSO2R)-、-CH(NHC(O)OR)-、-CH(OC(O)R)-、-CH(OC(O)NHR)-、 -CH＝CH-、-C(＝NOR)-、-C(O)-、-CH(OR)-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、 -N(R)S(O)p、-OC(O)N(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-、-N(R)C(O)O-、 -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-、-S(O)pN(R)-、-O-(CR2)n+1-C(O)-、-O-(CR2)n+1-O-、 -N(C(O)R)S(O)p-、-N(R)S(O)pN(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-、- C(O)N(R)C(O)-、-S(O)pN(R)C(O)-、-OS(O)pN(R)-、-N(R)S(O)pO-、- N(R)S(O)pC(O)-、-SOpN(C(O)R)-、-N(R)SOpN(R)-、-C(O)O-、- N(R)P(ORb)O-、-N(R)P(ORb)-、-N(R)P(O)(ORb)O-、-N(R)P(O)(ORb)-、 -N(C(O)R)P(ORb)O-、-N(C(O)R)P(ORb)-、-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或- N(C(O)R)P(ORb)-；
其中R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
Rb每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基、取代或未取代的环烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；或
在含磷的基团中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6元杂 环；或
A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成取代或未取代的与环1 稠合的5或6元杂环；或
Z110-A-Z111结合在一起为共价键；和
R2为a)氢；b)取代或未取代的三苯甲基；c)取代或未取代的环 烯基；d)被取代或未取代的烷基取代的氮杂芳基；e)被一个或多个选 自以下的取代基取代的氮杂环烷基：取代或未取代的-(C1-C6)-烷基、取 代或未取代的-C1-C6-烷基-OR、取代或未取代的-C(O)-C1-C6-烷基- N(R)2、取代或未取代的C1-C6-烷基-N(R)2、取代或未取代的-C1-C6-烷 基-环烷基、取代或未取代的四氢噻吩基和取代或未取代的四氢噻喃 基；或f)下式的基团

其中E1为哌啶基、哌嗪基、咪唑基、吗啉基、吡咯烷基、氨基、酰氨 基或四氢噻唑基，且其中E任选被选自以下的一个或多个取代基取 代：-C0-C6-烷基-OR、-C1-C6-烷基-C(O)OR、-C1-C6-烷基-杂芳基、-C1-C6- 烷基-杂环烷基和-C1-C6-烷基-N(R)2；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为共价键时，Z100不为烷基；和
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为C1-C6烷基时，Z100不为苯基、 吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃 基或噻吩基。
2.权利要求1的化合物，其中R2为以下结构式表示的基团：

其中E1选自-氨基-C1-C6-烷基-吗啉-4-基、-哌啶子基-C1-C6-烷基-OR、 -咪唑基-C1-C6-烷基-C(O)OR、-哌嗪-1-基-C1-C6-烷基-OR、-氨基-C1-C6- 烷基-OR、-吡咯烷-1-基-OR、-氨基-C1-C6-烷基-咪唑-1-基、-氨基-C1- C6-烷基-N(R)2、-酰氨基-C1-C6-烷基-N(R)2、四氢噻唑基、N，N-二-(羟 基-C1-C6-烷基)氨基-和-哌嗪-1-基-OR。
3.权利要求2的化合物，其中：
E1选自4-(2-羟乙基)吗啉-4-基、3-羟甲基哌啶子基、2-[3-(甲基羧 基)丙基]咪唑-4-基、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基、2-羟乙基氨基、3-羟基吡 咯烷-1-基、3-咪唑-1-基丙氨基、4-羟基丁基氨基、3-甲氧基丙基氨基、 3-(N，N-二甲氨基)丙基氨基、N-[2-(N，N-二甲基)乙基]酰氨基、四氢噻 唑基、N，N-二-(2-羟乙基)氨基、4-羟基哌嗪-1-基和4-羟甲基哌嗪-1-基。
4.权利要求2的化合物，其中Z110-A-Z111为-NHC(O)-。
5.权利要求2的化合物，其中G为由以下结构式表示的基团：

6.权利要求5的化合物，其中G为由以下结构式表示的基团：

7.权利要求1的化合物，其中R2为被C1-C6烷基取代的氮杂芳 基，其中所述烷基任选被一个或多个选自以下的取代基取代：RO-、- C(O)OR、-C(O)N(R)2和-N(R)2。
8.权利要求7的化合物，其中R2为4-(2-羟乙基)吡啶-2-基、3- 氨基甲基吡啶-4-基或2-甲基咪唑-4-基。
9.权利要求8的化合物，其中G为由以下结构式表示的基团：

10.权利要求1的化合物，其中R2为被2-甲氧基乙基、N，N-二甲 氨基甲基、N，N二甲氨基-1-氧代乙基或2-(N-甲基氨基)-1-氧代丙基取 代的吡咯烷基。
11.权利要求10的化合物，其中G为由以下结构式表示的基团：

12.权利要求1的化合物，其中R2为被四氢噻喃基、四氢噻吩基、 2-(N-甲基)-2-甲基-1-氧代丙基、2-甲氧基乙基或环丙基甲基取代的哌 啶基。
13.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为吡咯烷基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基、二 氮杂萘基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并 [2，1-b][1，3]噻唑基、H-吡啶酮基、1，1-二氧苯并异噻唑基、苯并异噁唑 基、烷基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、吡咯并吡啶基或

其中前述所有的Z100基团均任选被R1取代；
Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多个 选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代 或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；
Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取代 基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的氨基 和取代或未取代的苯基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨 基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的 烷氧基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取 代的链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取 代或未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未 取代的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基- S(O)p-、取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取 代或未取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取 代的炔基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或 未取代的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、 -Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；
RC每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
A是-(C1-C6)-、-O-、-S-、-S(O)p-、-N(R)-、-N(C(O)OR)-、-N(C(O)R)-、 -N(SO2R)-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2N(R)-、-CH(NR)-、-CH2N(C(O)R))-、 -CH2N(C(O)OR)-、-CH2N(SO2R)-、-CH(NHR)-、-CH(NHC(O)R)-、- CH(NHSO2R)-、-CH(NHC(O)OR)-、-CH(OC(O)R)-、-CH(OC(O)NHR)-、 -CH＝CH-、-C(＝NOR)-、-C(O)-、-CH(OR)-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、 -N(R)S(O)p-、-OC(O)N(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-、-N(R)C(O)O-、 -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-、-S(O)pN(R)-、-O-(CR2)n+1-C(O)-、-O-(CR2)n+1-O-、 -N(C(O)R)S(O)p-、-N(R)S(O)pN(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-、- C(O)N(R)C(O)-、-S(O)pN(R)C(O)-、-OS(O)pN(R)-、-N(R)S(O)pO-、- N(R)S(O)pC(O)-、-SOpN(C(O)R)-、-N(R)SOpN(R)-、-C(O)O-、- N(R)P(ORb)O-、-N(R)P(ORb)-、-N(R)P(O)(ORb)O-、-N(R)P(O)(ORb)-、 -N(C(O)R)P(ORb)O-、-N(C(O)R)P(ORb)-、-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或- N(C(O)R)P(ORb)-；
其中R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
Rb每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基、取代或未取代的环烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；或
在含磷的基团中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6元杂 环；或
A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成取代或未取代的与环1 稠合的5或6元杂环；或
Z110-A-Z111结合在一起为共价键；和
R2为氢或式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烯基、取代或未取代的饱和或不饱和的杂环基团或取代 或未取代的饱和或不饱和的杂双环基团；其中所述取代的烷基、取代 的环烷基、取代的环烯基、取代的杂环和取代的杂双环基团带有一个 或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、卤基、 取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)- 烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取 代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2- R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-(C1- C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)- N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代的脲基、取代或未取 代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、氧代基团以及饱和或不饱和的或芳族的取代或未取代的杂环基 团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所述杂 环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基团取代：氧代基团、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、 取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)-N(R)2、- C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳基烷基或 取代或未取代的杂芳基烷基；或
R2是式-B-E的基团，其中B是取代或未取代的环烷基、取代或未 取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基磺酰基、取代或未取 代的烷氧基烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基烷基 羰基、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未 取代的亚烷基羰基或者取代或未取代的氨基烷基羰基；且E是取代或 未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的(C1-C6)-氮杂环烷基、取代 或未取代的氮杂环烷基羰基、取代或未取代的氮杂环烷基磺酰基、取 代或未取代的氮杂环烷基烷基、取代或未取代的杂芳基-N(R)-(C1- C6)-、取代或未取代的芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的烷基- N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的杂芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代 的芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代的烷基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未 取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基羰基、取代或未取代的烷基羰 基、取代或未取代的芳基羰基、取代或未取代的杂芳基磺酰基、取代 或未取代的烷基磺酰基、取代或未取代的芳基磺酰基、取代或未取代 的杂芳基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的氮杂环烷 基羰基氨基、取代或未取代的杂芳基羰基氨基、取代或未取代的芳基 羰基氨基、取代或未取代的烷基羰基氨基或者取代或未取代的芳基；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数；
条件是当A为-N(R)-，Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟 基四氢呋喃-2-基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基时，则Z100不为烷基、 四氢吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基或吡咯烷基；
条件是当Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟基四氢呋喃-2- 基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基，Z100为取代或未取代的烷基时，A 不为烷基、-O-、-C(O)-、-NHC(O)-或-C(O)O-；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为共价键时，Z100不为烷基；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为C1-C6烷基时，Z100不为苯基、 吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃 基或噻吩基；以及
条件是当R2为取代或未取代的环戊基，Z100为取代或未取代的烷 基，Z110和Z111各自为共价键时，A不为-O-、-C(O)O-或-N(R)-。
14.权利要求13的化合物，其中Z100为2-吡咯烷基、1，2-二氢-2- 氧代吡啶-3-基、苯并异噁唑-3-基、1，1-二氧苯并异噻唑-3-基、咪唑并 [1，2-a]吡啶-2-基或

和R2为4-(4-甲基哌嗪-1-基)-环己基。
15.权利要求14的化合物，其中Z110-A-Z111为-NH-。
16.权利要求13的化合物，其中Z100为选自以下的吡咯并吡啶 基：

或
17.权利要求16的化合物，其中Z110-A-Z111为-NHC(O)-。
18.权利要求17的化合物，其中R2为哌啶-4-基、N-甲基哌啶-4- 基、N-(丙-2-基)哌啶-4-基、N-(咪唑-4-基-甲基)哌啶-4-基、N-(2-甲基咪 唑-4-基-甲基)哌啶-4-基、N(吡唑-4-基-甲基)哌啶-4-基、N-(2-甲氧基乙 基)哌啶-4-基、N-(呋喃-3-基-甲基)哌啶-4-基、N-(四氢吡喃-4-基-甲基) 哌啶-4-基、N-(吡咯-2-基-甲基)哌啶-4-基或N-(2-二氟乙基)哌啶-4-基。
19.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基、环烷基、吡咯烷基、喹 啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a] 嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、 四氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多个 选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代 或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；
Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取代 基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的氨基 和取代或未取代的苯基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、-C(O)O-芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)- 杂芳基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂芳基、取代或未 取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代的 烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、 取代或未取代的杂芳基-S(O)p-，其中Ra和R1中至少一个不为氢；
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
A是-(C1-C6)-、-O-、-S-、-S(O)p-、-N(R)-、-N(C(O)OR)-、-N(C(O)R)-、 -N(SO2R)-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2N(R)-、-CH(NR)-、-CH2N(C(O)R))-、 -CH2N(C(O)OR)-、-CH2N(SO2R)-、-CH(NHR)-、-CH(NHC(O)R)-、- CH(NHSO2R)-、-CH(NHC(O)OR)-、-CH(OC(O)R)-、-CH(OC(O)NHR)-、 -CH＝CH-、-C(＝NOR)-、-C(O)-、-CH(OR)-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、 -N(R)S(O)p-、-OC(O)N(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-、-N(R)C(O)O-、 -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-、-S(O)pN(R)-、-O-(CR2)n+1-C(O)-、-O-(CR2)n+1-O-、 -N(C(O)R)S(O)p-、-N(R)S(O)pN(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-、- C(O)N(R)C(O)-、-S(O)pN(R)C(O)-、-OS(O)pN(R)-、-N(R)S(O)pO-、- N(R)S(O)pC(O)-、-SOpN(C(O)R)-、-N(R)SOpN(R)-、-C(O)O-、- N(R)P(ORb)O-、-N(R)P(ORb)-、-N(R)P(O)(ORb)O-、-N(R)P(O)(ORb)-、 -N(C(O)R)P(ORb)O-、-N(C(O)R)P(ORb)-、-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或- N(C(O)R)P(ORb)-；
其中R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
Rb每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基、取代或未取代的环烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；或
在含磷的基团中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6元杂 环；或
A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成取代或未取代的与环1 稠合的5或6元杂环；或
Z110-A-Z111结合在一起为共价键；和
R2为氢或式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烯基、取代或未取代的饱和或不饱和的杂环基团或取代 或未取代的饱和或不饱和的杂双环基团；其中所述取代的烷基、取代 的环烷基、取代的环烯基、取代的杂环和取代的杂双环基团带有一个 或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、卤基、 取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)- 烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取 代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2- R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-(C1- C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)- N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代的脲基、取代或未取 代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、氧代基团以及饱和或不饱和的或芳族的取代或未取代的杂环 基团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所述 杂环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基团取代：氧代基 团、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂 芳基、取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)- N(R)2、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳基 烷基或取代或未取代的杂芳基烷基；或
R2是式-B-E的基团，其中B是取代或未取代的环烷基、取代或未 取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨烷基磺酰基、取代或未取 代的烷氧基烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基烷基 羰基、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未 取代的亚烷基羰基或者取代或未取代的氨基烷基羰基；且E是取代或 未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的(C1-C6)-氮杂环烷基、取代 或未取代的氮杂环烷基羰基、取代或未取代的氮杂环烷基磺酰基、取 代或未取代的氮杂环烷基烷基、取代或未取代的杂芳基-N(R)-(C1- C6)-、取代或未取代的芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的烷基- N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的杂芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代 的芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代的烷基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未 取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基羰基、取代或未取代的烷基羰 基、取代或未取代的芳基羰基、取代或未取代的杂芳基磺酰基、取代 或未取代的烷基磺酰基、取代或未取代的芳基磺酰基、取代或未取代 的杂芳基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的氮杂环烷 基羰基氨基、取代或未取代的杂芳基羰基氨基、取代或未取代的芳基 羰基氨基、取代或未取代的烷基羰基氨基或者取代或未取代的芳基；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数；
条件是当A为-N(R)-，Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟 基四氢呋喃-2-基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基时，则Z100不为烷基、 四氢吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基或吡咯烷基；
条件是当Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟基四氢呋喃-2- 基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基，Z100为取代或未取代的烷基时，A 不为烷基、-O-、-C(O)-、-NHC(O)-或-C(O)O-；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为共价键时，Z100不为烷基；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为C1-C6烷基时，Z100不为苯基、 吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃 基或噻吩基；以及
条件是当R2为取代或未取代的环戊基，Z100为取代或未取代的烷 基，Z110和Z111各自为共价键时，A不为-O-、-C(O)O-或-N(R)-。
20.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基、环烷基、吡咯烷基、喹 啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a] 嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、 四氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多个 选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代 或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；
Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取代 基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的氨基 和取代或未取代的苯基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨基、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的烷氧 基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的 链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取代或 未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代 的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、 取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取代或未 取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的炔 基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未取代 的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、- Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105二N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；
RC每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
A是-(C1-C6)-；
R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；或
R2为氢或式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烯基、取代或未取代的饱和或不饱和的杂环基团或取代 或未取代的饱和或不饱和的杂双环基团；其中所述取代的烷基、取代 的环烷基、取代的环烯基、取代的杂环和取代的杂双环基团带有一个 或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、卤基、 取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)- 烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取 代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2- R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-(C1- C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)- N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代的脲基、取代或未取 代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、氧代基团以及饱和或不饱和的或芳族的取代或未取代的杂环基 团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所述杂 环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基团取代：氧代基团、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、 取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)-N(R)2、- C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳基烷基或 取代或未取代的杂芳基烷基；或
R2是式-B-E的基团，其中B是取代或未取代的环烷基、取代或未 取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基磺酰基、取代或未取 代的烷氧基烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基烷基 羰基、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未 取代的亚烷基羰基或者取代或未取代的氨基烷基羰基；且E是取代或 未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的(C1-C6)-氮杂环烷基、取代 或未取代的氮杂环烷基羰基、取代或未取代的氮杂环烷基磺酰基、取 代或未取代的氮杂环烷基烷基、取代或未取代的杂芳基-N(R)-(C1- C6)-、取代或未取代的芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的烷基- N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的杂芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代 的芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代的烷基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未 取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基羰基、取代或未取代的烷基羰 基、取代或未取代的芳基羰基、取代或未取代的杂芳基磺酰基、取代 或未取代的烷基磺酰基、取代或未取代的芳基磺酰基、取代或未取代 的杂芳基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的氮杂环烷 基羰基氨基、取代或未取代的杂芳基羰基氨基、取代或未取代的芳基 羰基氨基、取代或未取代的烷基羰基氨基或者取代或未取代的芳基；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为C1-C6烷基时，Z100不为苯基、 吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃 基或噻吩基。
21.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自吡咯烷基、喹啉基、喹喔啉基、 喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a]嘧啶基、1H-咪唑并 [1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、四氢萘基、苯并噻吩 基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨基、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的烷氧 基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的 链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取代或 未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代 的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、 取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取代或未 取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的炔 基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未取代 的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、- Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；
Rc每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；
Z110-A-Z111结合在一起形成共价键；和
R2为氢或式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烯基、取代或未取代的饱和或不饱和的杂环基团或取代 或未取代的饱和或不饱和的杂双环基团；其中所述取代的烷基、取代 的环烷基、取代的环烯基、取代的杂环和取代的杂双环基团带有一个 或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、卤基、 取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)- 烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取 代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2- R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-(C1- C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)- N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代的脲基、取代或未取 代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、氧代基团以及饱和或不饱和的或芳族的取代或未取代的杂环基 团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所述杂 环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基团取代：氧代基 团、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂 芳基、取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)- N(R)2、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳基 烷基或取代或未取代的杂芳基烷基；或
R2是式-B-E的基团，其中B是取代或未取代的环烷基、取代或未 取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基磺酰基、取代或未取 代的烷氧基烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基烷基 羰基、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未 取代的亚烷基羰基或者取代或未取代的氨基烷基羰基；且E是取代或 未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的(C1-C6)-氮杂环烷基、取代 或未取代的氮杂环烷基羰基、取代或未取代的氮杂环烷基磺酰基、取 代或未取代的氮杂环烷基烷基、取代或未取代的杂芳基-N(R)-(C1- C6)-、取代或未取代的芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的烷基- N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的杂芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代 的芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代的烷基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未 取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基羰基、取代或未取代的烷基羰 基、取代或未取代的芳基羰基、取代或未取代的杂芳基磺酰基、取代 或未取代的烷基磺酰基、取代或未取代的芳基磺酰基、取代或未取代 的杂芳基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的氮杂环烷 基羰基氨基、取代或未取代的杂芳基羰基氨基、取代或未取代的芳基 羰基氨基、取代或未取代的烷基羰基氨基或者取代或未取代的芳基；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数。
22.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基、环烷基、吡咯烷基、喹 啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a] 嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、 四氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多个 选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代 或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；
Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取代 基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的氨基 和取代或未取代的苯基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨基、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的烷氧 基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的 链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取代或 未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代 的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、 取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取代或未 取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的炔 基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未取代 的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、- Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z2000、RC和CH2ORC；
RC每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R3每次出现时独立为取代或未取代的-C(O)-烷基、取代或未取代 的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)-杂芳基；
A是-(C1-C6)-、-O-、-S-、-S(O)p-、-N(R)-、-N(C(O)OR)-、-N(C(O)R)-、 -N(SO2R)-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2N(R)-、-CH(NR)-、-CH2N(C(O)R))-、 -CH2N(C(O)OR)-、-CH2N(SO2R)-、-CH(NHR)-、-CH(NHC(O)R)-、- CH(NHSO2R)-、-CH(NHC(O)OR)-、-CH(OC(O)R)-、-CH(OC(O)NHR)-、 -CH＝CH-、-C(＝NOR)-、-C(O)-、-CH(OR)-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、 -N(R)S(O)p-、-OC(O)N(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-、-N(R)C(O)O-、 -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-、-S(O)pN(R)-、-O-(CR2)n+1-C(O)-、-O-(CR2)n+1-O-、 -N(C(O)R)S(O)p-、-N(R)S(O)pN(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-、- C(O)N(R)C(O)-、-S(O)pN(R)C(O)-、-OS(O)pN(R)-、-N(R)S(O)pO-、- N(R)S(O)pC(O)-、-SOpN(C(O)R)-、-N(R)SOpN(R)-、-C(O)O-、- N(R)P(ORb)O-、-N(R)P(ORb)-、-N(R)P(O)(ORb)O-、-N(R)P(O)(ORb)-、 -N(C(O)R)P(ORb)O-、-N(C(O)R)P(ORb)-、-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或- N(C(O)R)P(ORb)-；
其中R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
Rb每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基、取代或未取代的环烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；或
在含磷的基团中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6元杂 环；或
A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成取代或未取代的与环1 稠合的5或6元杂环；或
Z110-A-Z111结合在一起为共价键；和
R2为氢或式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烯基、取代或未取代的饱和或不饱和的杂环基团或取代 或未取代的饱和或不饱和的杂双环基团；其中所述取代的烷基、取代 的环烷基、取代的环烯基、取代的杂环和取代的杂双环基团带有一个 或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、卤基、 取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)- 烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取 代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2- R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-(C1- C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)- N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代的脲基、取代或未取 代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、氧代基团以及饱和或不饱和的或芳族的取代或未取代的杂环基 团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所述杂 环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基团取代：氧代基团、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂 芳基、取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)- N(R)2、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳基 烷基或取代或未取代的杂芳基烷基；或
R2是式-B-E的基团，其中B是取代或未取代的环烷基、取代或未 取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基磺酰基、取代或未取 代的烷氧基烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基烷基 羰基、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未 取代的亚烷基羰基或者取代或未取代的氨基烷基羰基；且E是取代或 未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的(C1-C6)-氮杂环烷基、取代 或未取代的氮杂环烷基羰基、取代或未取代的氮杂环烷基磺酰基、取 代或未取代的氮杂环烷基烷基、取代或未取代的杂芳基-N(R)-(C1- C6)-、取代或未取代的芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的烷基- N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的杂芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代 的芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代的烷基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未 取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基羰基、取代或未取代的烷基羰 基、取代或未取代的芳基羰基、取代或未取代的杂芳基磺酰基、取代 或未取代的烷基磺酰基、取代或未取代的芳基磺酰基、取代或未取代 的杂芳基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的氮杂环烷 基羰基氨基、取代或未取代的杂芳基羰基氨基、取代或未取代的芳基 羰基氨基、取代或未取代的烷基羰基氨基或者取代或未取代的芳基；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数；
条件是当A为-N(R)-，Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟 基四氢呋喃-2-基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基时，则Z100不为烷基、 四氢吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基或吡咯烷基；
条件是当Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟基四氢呋喃-2- 基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基，Z100为取代或未取代的烷基时，A 不为烷基、-O-、-C(O)-、-NHC(O)-或-C(O)O-；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为共价键时，Z100不为烷基；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为C1-C6烷基时，Z100不为苯基、 吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃 基或噻吩基；以及
条件是当R2为取代或未取代的环戊基，Z100为取代或未取代的烷 基，Z110和Z111各自为共价键时，A不为-O-、-C(O)O-或-N(R)-。
23.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基、环烷基、吡咯烷基、喹 啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a] 嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、 四氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多个 选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代 或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；
Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取代 基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的氨基 和取代或未取代的苯基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨 基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的 烷氧基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取 代的链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取 代或未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未 取代的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基- S(O)p-、取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取 代或未取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取 代的炔基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或 未取代的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、 -Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；
Rc每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
A是-(C1-C6)-、-O-、-S-、-S(O)p-、-N(R)-、-N(C(O)OR)-、-N(C(O)R)-、 -N(SO2R)-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2N(R)-、-CH(NR)-、-CH2N(C(O)R))-、 -CH2N(C(O)OR)-、-CH2N(SO2R)-、-CH(NHR)-、-CH(NHC(O)R)-、- CH(NHSO2R)-、-CH(NHC(O)OR)-、-CH(OC(O)R)-、-CH(OC(O)NHR)-、 -CH＝CH-、-C(＝NOR)-、-C(O)-、-CH(OR)-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、 -N(R)S(O)p-、-OC(O)N(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-、-N(R)C(O)O-、 -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-、-S(O)pN(R)-、-O-(CR2)n+1-C(O)-、-O-(CR2)n+1-O-、 -N(C(O)R)S(O)p-、-N(R)S(O)pN(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-、- C(O)N(R)C(O)-、-S(O)pN(R)C(O)-、-OS(O)pN(R)-、-N(R)S(O)pO-、- N(R)S(O)pC(O)-、-SOpN(C(O)R)-、-N(R)SOpN(R)-、-C(O)O-、- N(R)P(ORb)O-、-N(R)P(ORb)-、-N(R)P(O)(ORb)O-、-N(R)P(O)(ORb)-、 -N(C(O)R)P(ORb)O-、-N(C(O)R)P(ORb)-、-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或- N(C(O)R)P(ORb)-；
其中R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
Rb每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基、取代或未取代的环烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；或
在含磷的基团中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6元杂 环；或
A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成取代或未取代的与环1 稠合的5或6元杂环；或
Z110-A-Z111结合在一起为共价键；和
R2为式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是取代或未取代的环烯基；其中所述取代的环烯基带有一个 或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、卤基、 取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)- 烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取 代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2- R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-(C1- C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)- N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代的脲基、取代或未取 代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、氧代基团以及饱和或不饱和的或芳族的取代或未取代的杂环基 团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所述杂 环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基团取代：氧代基团、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、 取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)-N(R)2、- C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳基烷基或 取代或未取代的杂芳基烷基；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数。
24.一种式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、旋光异 构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：
G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基、环烷基、吡咯烷基、喹 啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a] 嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、 四氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多个 选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代 或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；
Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取代 基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的氨基 和取代或未取代的苯基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨基、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的烷氧 基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的 链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取代或 未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代 的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、 取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取代或未 取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取代的炔 基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未取代 的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、- Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；
RC每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
A是-(C1-C6)-、-O-、-S-、-S(O)p-、-N(R)-、-N(C(O)OR)-、-N(C(O)R)-、 -N(SO2R)-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2N(R)-、-CH(NR)-、-CH2N(C(O)R))-、 -CH2N(C(O)OR)-、-CH2N(SO2R)-、-CH(NHR)-、-CH(NHC(O)R)-、- CH(NHSO2R)-、-CH(NHC(O)OR)-、-CH(OC(O)R)-、-CH(OC(O)NHR)-、 -CH＝CH-、-C(＝NOR)-、-C(O)-、-CH(OR)-、-C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、 -N(R)S(O)p-、-OC(O)N(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-、-N(R)C(O)O-、 -N(R)-(CH2)n+1-C(O)-、-S(O)pN(R)-、-O-(CR2)n+1-C(O)-、-O-(CR2)n+1-O-、 -N(C(O)R)S(O)p-、-N(R)S(O)pN(R)-、-N(R)-C(O)-(CH2)n-O-、- C(O)N(R)C(O)-、-S(O)pN(R)C(O)-、-OS(O)pN(R)-、-N(R)S(O)pO-、- N(R)S(O)pC(O)-、-SOpN(C(O)R)-、-N(R)SOpN(R)-、-C(O)O-、- N(R)P(ORb)O-、-N(R)P(ORb)-、-N(R)P(O)(ORb)O-、-N(R)P(O)(ORb)-、 -N(C(O)R)P(ORb)O-、-N(C(O)R)P(ORb)-、-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或- N(C(O)R)P(ORb)-；
其中R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取 代的芳基烷基或者取代或未取代的芳基；
Rb每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基烷基、取代或未取代的环烷基或者取代或未取代的芳基；
p是1或2；或
在含磷的基团中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6元杂 环；或
A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成取代或未取代的与环1 稠合的5或6元杂环；或
Z110-A-Z111结合在一起为共价键；和
R2为式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是取代的饱和或不饱和的杂环基团或取代的饱和或不饱和的 杂双环基团；其中所述取代的杂环和取代的杂双环基团带有一个或多 个取代基，这些取代基各自独立选自硝基、卤基、取代或未取代的 (C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)-烷基、取代或 未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或 未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2-R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1- C6)-OR、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代 的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、取代或未取代的杂环基团，该杂环中含有一个或多个选自O和S 的杂原子；其中所述杂环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下 基团取代：氧代基团、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、 取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代 的-C(O)-(C1-C6)-N(R)2、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的芳基烷基或取代或未取代的杂芳基烷基；
a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件是 D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或
a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且
n每次出现时独立为0至6的整数；
条件是当A为-N(R)-，Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二酰 氧基四氢呋喃-2-基时，则Z100不为烷基、四氢吡喃基、四氢呋喃基、 哌啶基或吡咯烷基；
条件是当Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二酰氧基四氢呋喃 -2-基，Z100为取代或未取代的烷基时，A不为烷基、-O-、-C(O)-、- NHC(O)-或-C(O)O-；
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为共价键时，Z100不为烷基；和
条件是当Z110-A-Z111结合在一起为C1-C6烷基时，Z100不为苯基、 吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋喃 基或噻吩基。
25.一种抑制患者的一种或多种蛋白激酶活性的方法，所述方法 包括给所述患者服用治疗有效量的权利要求1、13、19、20、21、22、 23或24的化合物或其生理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物。
26.权利要求25的方法，其中所述蛋白激酶选自：KDR、FGFR-1、 PDGFRβ、PDGFRα、IGF-1R、c-Met、Flt-1、Flt-4、TIE-2、TIE-1、 Lck、Src、fyn、Lyn、Blk、hck、fgr和yes。
27.一种影响患者的过度增殖性紊乱的方法，所述方法包括给所 述患者使用治疗有效量的权利要求1、13、19、20、21、22、23或24 的化合物或其生理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物。
28.一种影响患者的血管生成的方法，所述方法包括给所述患者 使用治疗有效量的权利要求1、13、19、20、21、22、23或24的化合 物或其生理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物。
29.权利要求25的方法，其中所述蛋白激酶是蛋白丝氨酸/苏氨 酸激酶或蛋白酪氨酸激酶。
30.一种治疗患者的一种或多种溃疡的方法，所述方法包括给所 述患者使用治疗有效量的权利要求1、13、19、20、21、22、23或24 的化合物或其生理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物。
31.权利要求30的方法，其中所述溃疡是由细菌或真菌感染引起 的；或所述溃疡是莫伦氏溃疡；或所述溃疡为溃疡性结肠炎的症状。
32.一种治疗患者的病症的方法，所述方法包括给所述患者使用 治疗有效量的权利要求1、13、19、20、21、22、23或24的化合物或 其生理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物，其中所述病症是眼 部病症、心血管疾病、癌症、Crow-Fukase(POEMS)综合征、糖尿病、 镰刀细胞贫血病、慢性炎症、系统性狼疮、肾小球性肾炎、滑膜炎、 肠炎、克罗恩氏病、肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、多 发性硬化、移植物排斥、莱姆病、败血症、von Hippel Lindau病、类 天疱疮、牛皮癣、佩吉特氏病、多囊性肾病、纤维变性疾病、肉样瘤 病、肝硬化、甲状腺炎、粘滞性过高综合征、Osler-Weber-Rendu疾病、 慢性梗塞性肺病、哮喘或烧伤、外伤、辐射、中风、低氧症、局部出 血、卵巢高刺激性综合征、子痫前期、月经过多、子宫内膜异位或单 纯性疱疹、带状疱疹、人类免疫缺陷病毒、副痘病毒、原生动物或弓 形体病引起的感染。
33.权利要求32的方法，其中所述眼部病症是眼或视网膜黄斑水 肿、眼新血管病、巩膜炎、光角膜切开术、眼色素层炎、玻璃体炎、 近视、眼凹、慢性视网膜脱离、激光治疗后并发症、结膜炎、遗传性 黄斑变性、Eales病、视网膜病或视网膜黄斑变性。
34.权利要求32的方法，其中所述血管病是动脉粥样硬化、再狭 窄、局部出血/再灌注损伤、血管闭塞或颈动脉梗塞性疾病。
35.权利要求32的方法，其中所述癌症是实体瘤、肉瘤、纤维肉 瘤、骨瘤、黑素瘤、成视网膜细胞瘤、成横纹肌细胞肉瘤、成胶质细 胞瘤、成神经细胞瘤、畸胎样瘤、造血系统恶性肿瘤、Kaposi肉瘤、 何杰金氏病、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病或恶性腹水。
36.权利要求32的方法，其中所述糖尿病病症是胰岛素依赖性糖 尿病青光眼、糖尿病性视网膜病或微血管病。
37.一种降低患者生育力的方法，所述方法包括给所述患者使用 有效量的权利要求1、13、19、20、21、22、23或24的化合物或其生 理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物的步骤。
38.权利要求28的方法，其中所述化合物或其生理学上可接受的 盐、前药或生物活性代谢物以能有效促进血管发生或血管生成的量给 药。
39.权利要求26的方法，其中所述蛋白激酶是Tie-2。
40.权利要求38的方法，其中所述式I的化合物或其生理学上可 接受的盐、前药或生物活性代谢物与原血管生成生长因子联合给药。
41.权利要求40的方法，其中所述原血管生成生长因子选自 VEGF、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、HGF、FGF-1、FGF-2， 其衍生物及其抗个体基因型抗体。
42.权利要求38的方法，其中所述患者患有贫血、局部出血、梗 塞、移植排斥、创伤、坏疽或坏死。
43.权利要求25的方法，其中所述蛋白激酶活性参与T细胞活 化、B细胞活化、肥大细胞脱粒、单核细胞活化、炎性反应的加强或 其组合。
44.一种制备由以下结构式表示的4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼 杂环戊烷-2-基中间体的方法：

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基、环烷基、吡咯烷基、喹 啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基和二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a] 嘧啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、 四氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四氢 吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、H- 吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚基、 吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异噻唑基、 吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并-噻唑基和苯 并咪唑基；
Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代 或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰氨基、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的烷氧 基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的 链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳氧基、取代或 未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代 的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、 取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳基烷基、取 代或未取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、取代或未取 代的炔基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基、取代或 未取代的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或未取代的芳硫基、 -Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200、-Z105- N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；
RC每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W-(CH2)t-S- 烷基或-W-(CH2)t-OH；
Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；
Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；
Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或Rd、 Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；
t每次出现时独立为2至6的整数；
W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者
R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；
R每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳烷基或取代或未取代的芳基；
p是1或2；和
b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件是 D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或
b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之一 是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；
所述方法包括在非质子碱存在下，使由以下结构式表示的酰氯

与由以下结构式表示的(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯胺反应，形成所述4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间 体的步骤：

45.权利要求44的方法，所述方法还包括在四(三苯基膦)合钯(0) 和碳酸钠存在下，使4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间 体与由以下结构式表示的3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶反应：

其中
R2为氢或式-Z101-Z102的基团；
Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代 的苯基；
Z102是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烯基、取代或未取代的饱和或不饱和的杂环基团或取代 或未取代的饱和或不饱和的杂双环基团；其中所述取代的烷基、取代 的环烷基、取代的环烯基、取代的杂环和取代的杂双环基团带有一个 或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、卤基、 取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)- 烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、取 代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2- R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-(C1- C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)- N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代的脲基、取代或未取 代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、氧代基团以及饱和或不饱和的或芳族的取代或未取代的杂环基 团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所述杂 环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基团取代：氧代基团、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、 取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)-N(R)2、- C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳基烷基或 取代或未取代的杂芳基烷基；或
R2是式-B-E的基团，其中B是取代或未取代的环烷基、取代或未 取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基磺酰基、取代或未取 代的烷氧基烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的氨基烷基 羰基、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的氨基烷基、取代或未 取代的亚烷基羰基或者取代或未取代的氨基烷基羰基；且E是取代或 未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的氮杂环烷基、 取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的(C1-C6)-氮杂环烷基、取代 或未取代的氮杂环烷基羰基、取代或未取代的氮杂环烷基磺酰基、取 代或未取代的氮杂环烷基烷基、取代或未取代的杂芳基-N(R)-(C1- C6)-、取代或未取代的芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的烷基- N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的杂芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代 的芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代的烷基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未 取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基羰基、取代或未取代的烷基羰 基、取代或未取代的芳基羰基、取代或未取代的杂芳基磺酰基、取代 或未取代的烷基磺酰基、取代或未取代的芳基磺酰基、取代或未取代 的杂芳基烷基、取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的氮杂环烷 基羰基氨基、取代或未取代的杂芳基羰基氨基、取代或未取代的芳基 羰基氨基、取代或未取代的烷基羰基氨基或者取代或未取代的芳基； 和
R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的-C(O)- 杂芳基或取代或未取代的烷氧基；
形成由以下结构式表示的化合物的步骤：

46.权利要求45的方法，所述方法还包括使由以下结构式表示的 羧酸：

与草酰氯和非质子碱反应生成由以下结构式表示的酰氯的步骤：

47.权利要求44、45或46的方法，其中所述Z100为任选被R1 取代的吲哚基。
48.权利要求47的方法，其中所述Z100为1-甲基-吲哚-2-基或1- 甲基-吲哚-3-基。
49.权利要求48的方法，其中所述(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂 硼杂环戊烷基)苯胺具有以下的结构式：

所述4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间体具有以下的结 构式：

50.权利要求49的方法，其中所述R2为4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基。

说明书全文

发明背景

至少有400种酶被鉴定为蛋白激酶。这些酶催化靶蛋白底物的 磷酸化。磷酸化作用一般是将一个磷酸根基团从ATP转移到蛋白底 物中的反应。磷酸酯转移的靶底物中的特异性结构为酪氨酸、丝氨 酸或苏氨酸残基。因为这些氨基酸残基为磷酰基转移的靶结构，这 些蛋白激酶通常称为酪氨酸激酶或丝氨酸/苏氨酸激酶。

酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基上的磷酸化反应和对抗磷酸酶反 应参与无数的细胞过程，这些过程构成对各种细胞内信号(一般通过 细胞受体介导)的、细胞功能的调节和细胞过程的激活或者失活的基 础。蛋白激酶的级联经常参与细胞内信号传导并且对认识这些细胞 过程是必要的。由于它们在这些过程中的普遍存在，可以发现蛋白 激酶作为质膜的固有的部分或者作为细胞质酶或者经常作为酶复合 物的成分定位于细胞核中。在许多情况下，这些蛋白激酶为确定细 胞过程在细胞内何处和何时发生的酶和结构蛋白复合物的必需元 件。

蛋白酪氨酸激酶。蛋白酪氨酸激酶(PTKs)为催化细胞蛋白中的 特异性酪氨酸残基磷酸化的酶。这些底物蛋白，经常是酶本身的翻 译后修饰作为调节细胞增殖、激活或者分化的分子开关起作用(对于 综述，参见Schlessinger和Ulrich，1992，Neuron 9：383-391)。在许多 疾病状态，包括良性和恶性增殖性疾病以及由免疫系统的不适宜的 激活引起的疾病(例如，自身免疫性疾病)、同种异体移植排斥和移植 物抗宿主疾病中，已观察到异常或者过度的PTK活性。另外，内皮 细胞特异性受体PTKs例如KDR和Tie-2介导血管生成过程，并且 因此参与支持癌症的发展和其它涉及不适宜的血管发生的疾病(例如 糖尿病性视网膜病、与年龄相关的黄斑退化引起的新血管发生、牛 皮癣、关节炎、过早出现的视网膜病、婴儿血管瘤)。

酪氨酸激酶可属于受体型(具有细胞外结构域、跨膜结构域和细 胞内结构域)或者非受体型(全部在细胞内)。

受体酪氨酸激酶(RTKs)。RTKs包括一个大家族的具有各种生物 活性的跨膜受体。目前，已鉴定至少十九(19)种不同的RTK亚家族。 受体酪氨酸激酶(RTK)家族包括对各种细胞类型的生长和分化至关重 要的受体(Yarden和Ulrich，Ann.Rev.Biochem.57：433-478，1988， Ulrich和Schlessinger，Cell 61：243-254，1990)。一旦配体结合，RTKs 的内在功能被激活，导致受体和多细胞底物的磷酸化，以及随后的 各种细胞应答(Ulrich和Schlessinger，1990，Cell 61：203-212)。因此， 通过与特异性生长因子(配体)的细胞外相互作用，典型的随后的受体 二聚化，内在蛋白酪氨酸激酶活性的刺激和受体转磷酸作用，启动 受体酪氨酸激酶诱导的信号传导。由此建立对细胞内信号传导分子 的结合位点并导致具有各种细胞质的信号分子的复合体的形成，这 些分子有利于合适的细胞应答(例如，细胞分裂、分化、代谢作用、 细胞外微环境的变化)。参见Schlessinger和Ullrich，1992，Neuron 9：1- 20。

具有SH2(src同源物-2)或者磷酸酪氨酸结合(PTB)结构域的蛋白 高亲和性地结合激活的酪氨酸激酶受体及其底物，以将信号传播到 细胞内。两者的结构域识别磷酸酪氨酸。(Fantl等，1992，Cell 69：413- 423，Songyang等，1994，Mol.Cell.Biol.14：2777-2785，Songyang等， 1993，Cell 72：767-778和Koch等，1991，Science 252：668-678，Shoelson， Curr.Opin.Chem.Biol.(1997)，1(2)，227-234，Cowburn，Curr.Opin. Struct.Biol.(1997)，7(6)，835-838)。已鉴定几种与受体酪氨酸激酶 (RTKs)相关的细胞内底物蛋白。它们可以分为两个重要的组：(1)具 有催化结构域的底物和(2)缺乏这样的结构域但用作接合体且与催化 活性的分子有关的底物(Songyang等，1993，Cell 72：767-778)。通过迅 速围绕磷酸化酪氨酸残基的氨基酸残基，可测定受体或者蛋白与它 们的底物的SH2或PTB结构域之间相互作用的特异性。例如，SH2 结构域和围绕在特定受体上的磷酸化酪氨酸的氨基酸序列之间的结 合亲和力差异与在它们的底物磷酸化分布上观察到的差异相关 (Songyang等，1993，Cell 72：767-778)。所观察到的现象暗示各受体酪 氨酸激酶的功能不仅由其表达的形式和配体有效性决定，还由特定受 体激活的下游信号传导路径的排列以及那些刺激物的作用时间点和 持续时期决定。因此，磷酸化作用提供重要的调节步骤，该步骤确 定由特异性生长因子受体以及分化因子受体补充的信号途径的选择 性。

已提示几种受体酪氨酸激酶例如FGFR-1、PDGFR、TIE-2和c- Met及与它们结合的生长因子在血管生成中起作用，尽管某些可以间 接促进血管生成(Mustonen和Alitalo，J.Cell Biol.129：895-898， 1995)。一种这样的受体酪氨酸激酶，称作“胎儿肝激酶1”(FLK-1)， 为RTKs的III型亚类成员。人FLK-1的另一个名称为“含激酶插入 结构域的受体”(KDR)(Terman等，Oncogene 6：1677-83，1991)。由于 FLK-1/KDR高亲和性地结合于VEGF，它的另一个名称为“血管内 皮细胞生长因子受体2”(VEGFR-2)。小鼠FLK-1/VEGFR-2的形式 也称作NYK(Oelrichs等，Oncogene 8(1)：11-15，1993)。已分离出编码 DNAs的小鼠、大鼠和人FLK-1，并报道了核苷和编码的氨基酸序列 (Matthews等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：9026-30(1991)，Terman等， 1991(出处同上)，Terman等，Biochem.Biophys.Res.Comm.187：1579- 86，1992，Sarzani等(出处同上)和Millauer等，Cell 72：835-846，1993)。 例如Millauer等(出处同上)报道的各种研究提示VEGF和FLK- 1/KDR/VEGFR-2为在血管内皮细胞的增殖、血管的形成和萌发(分别 称作血管发生和血管生成)方面起重要作用的配体-受体对。

命名为“fms样酪氨酸激酶-1”(Flt-1)的另一种III型亚类RTK 与FLK-1/KDR有关(DeVries等，Science 255，989-991，1992；Shibuya 等，Oncogene 5：519-524，1990)。Flt-1的另一个名称为“血管内皮细 胞生长因子受体1”(VEGFR-1)。迄今，已发现FLK-1/KDR/VEGFR- 2和Flt-1/VEGFR-1亚家族的成员主要在内皮细胞上表达。通过配体 的血管内皮细胞生长因子(VEGF)家族成员特异性地刺激这些亚类成 员(Klagsbrn和D’Amore，Cytokine & Growth Factor Reviews 7：259-270， 1996)。血管内皮细胞生长因子(VEGF)比FLK-1/KDR更高亲和性地 结合于Flt-1，并且对血管内皮细胞有促有丝分裂作用(Terman等， 1992(出处同上)，Mustonen等(出处同上)，DeVries等(出处同上))。相 信Flt-1在血管发生期间对内皮组织是必要的。Flt-1表达与小鼠胚胎 内的早期血管发生有关，并且与伤口愈合期间的新血管发生有关 (Mustonen和Alitalo(出处同上))。Flt-1在单核细胞、破骨细胞和成 骨细胞以及在成人组织例如肾小球中的表达提示这种受体另外的功 能与细胞生长无关(Mustonen和Alitalo(出处同上))。

如前所述，最近的证据提示VEGF在刺激正常和病理性血管生 成中起作用(Jakeman等，Endocrinology 133：848-859，1993；Kolch等， Breast Cancer Research and Treatment 36：139-155，1995，Ferrara等， Endocrine Reviews 18(1)：4-25，1997，Ferrara等，Regulation of Angiogenesis(L.D.Goldberg和E.M.Rosen编辑)，209-232，1997)。另 外，VEGF与血管通透性的控制和增强有关(Connolly等，J.Biol.Chem. 264：20017-20024，1989，Brown等，Regulation of Angiogenesis，(L.D. Goldberg和E.M.Rosen编辑)，233-269，1997)。已报道由可变剪接 mRNA产生的不同形式的VEGF，包括Ferrara等(J.Cell.Biochem.47： 211-218，1991)描述的四个种类。Ferrara等(出处同上)已鉴定了分泌型 的和主要与细胞相关的种类的VEGF，并且已知所述蛋白以二硫化物 连接的二聚体形式存在。

最近已鉴定了VEGF几种相关的同源物。然而，尚未说明它们 在正常生理和疾病过程中的作用。另外，VEGF家族的成员经常在多 种组织中与VEGF共表达，并且，通常能够与VEGF形成异源二聚 体。这种性质可能改变异源二聚体的受体特异性和生物学作用并且 使得它们的如下所述的特异性功能的描述变得更加复杂(Korpelainen 和Alitalo，Curr.Opin.Cell Biol.，159-164，1998，在此引用作为参考)。

胎盘生长因子(PlGF)具有显示与VEGF序列的明显同源性的氨基 酸序列(Park等，J.Biol.Chem.269：25646-54，1994，Maglione等， Oncogene 8：925-31，1993)。如同VEGF，不同种类的PlGF产生于可 变剪接的mRNA，并且该蛋白以二聚体形式存在(Park等(出处同上))。 PlGF-1和PlGF-2高亲和性地结合于Flt-1，并且PlGF-2也倾向于结 合于neuropilin-1(Migdal等，J.Biol.Chem.273(35)：22272-22278)，但 不结合于FLK-1/KDR(Park等(出处同上))。据报道，当VEGF以低浓 度存在时，PlGF促进内皮细胞的VEGF的血管通透性和促有丝分裂 作用(认为由于异源二聚体形成的原因)(Park等(出处同上))。

VEGF-B作为两种同工型(167和185残基)产生，它们也似乎结 合于Flt-1/VEGFR-1。它可在调节细胞外基质降解、细胞粘附，以及 通过调制尿激酶型血纤蛋白溶酶原激活物和血纤蛋白溶酶原激活物 抑制剂1的表达和活性的迁移中起作用(Pepper等，Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A.(1998)，95(20)，11709-11714)。

VEGF-C最初作为主要通过淋巴内皮细胞表达的VEGFR-3/Flt-4 的配体被克隆。VEGF-C也可以以其充分加工的形式结合 KDR/VEGFR-2并在体外刺激内皮细胞的增殖和迁移及体内模型中的 血管生成(Lymboussaki等，Am.J.Pathol.(1998)，153(2)：395-403， Witzenbichler等，Am.J.Pathol.(1998)，153(2)：381-394)。VEGF-C 的转基因过度表达仅引起淋巴血管的增殖和扩增，而血管则不受影 响。并不像VEGF那样，低氧不诱导VEGF-C的表达(Ristimaki等，J. Biol.Chem.(1998)，273(14)，8413-8418)。

最近发现的VEGF-D与VEGF-C结构上非常类似。据报道， VEGF-D结合并激活至少两种VEGFRs，VEGFR-3/Flt-4和 KDR/VEGFR-2。它最初作为成纤维细胞的c-fos可诱导的促细胞分 裂原被克隆并且最主要在肺和皮肤的间充质细胞中表达(Achen等， Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)，95(2)，548-553和在此的参考文 献)。

至于VEGF，已认为当注射给予皮肤组织时，VEGF-C和VEGF- D在Miles试验中诱导增加体内血管通透性(PCT/US 97/14696，WO 98/07832，Witzenbichler等(出处同上))。在表达这些配体的组织内， 其调节血管通透性过高以及内皮应答的生理作用和重要性仍未确 定。

最近已有报道一种病毒编码的、新型血管内皮生长因子VEGF-E (NZ-7VEGF)，该因子优先利用KDR/Flk-1受体并且具有有效的有丝 分裂的活性，但却没有肝素结合结构域(Meyer等，EMBO J.(1999)， 18(2)，363-374，Ogawa等，J.Biol.Chem.(1998)，273(47)，31273- 31282)。VEGF-E序列与哺乳动物的VEGF具有25％同源性并且通过 副痘病毒Orf病毒(OV)编码。这种副痘病毒影响山羊和绵羊并且偶 而影响人，产生伴有血管生成的损害。VEGF-E为一种约20kDa的 二聚体并且没有亲和肝素的基本结构域，但具有存在于所有哺乳动 物的VEGF中的特征性半胱氨酸结基序，并且令人惊奇地发现具有 与肝素结合的VEGF-A的VEGF165同工型类似的效力和生物活性， 即两种因子体外刺激组织因子(TF)的释放、体外培养的血管内皮细胞 的增殖、趋化性和萌发和体内血管生成。像VEGF165一样，发现 VEGF-E高亲和性地结合于VEGF受体-2(KDR)，引起受体自磷酸化 和游离的细胞内Ca2+浓度双相升高，而与VEGF165相反，VEGF-E 不结合VEGF受体-1(Flt-1)。

基于最近发现的VEGF和VEGFR的其它同系物及配体与受体异 二聚作用的惯例，这样的VEGF同系物的作用可以涉及VEGF配体 异源二聚体的形成，和/或受体的异二聚作用，或者结合于尚未发现 的VEGFR(Witzenbichler等(出处同上))。最近的报道也提示 neuropilin-1(Migdal等(出处同上))或者VEGFR-3/Flt-4(Witzenbichler 等(出处同上))，或者非KDR/VEGFR-2受体可以参与诱导血管通透 性(Stacker，S.A.，Vitali，A.，Domagala，T.，Nice，E.，和Wilks，A.F.， “Angiogenesis and Cancer”Conference，Amer.Assoc.Cancer Res.，Jan. 1998，Orlando，FL，Williams，Diabetelogia 40：S118-120(1997))。

Tie-2(TEK)为最近发现的内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶家族的 成员，它参与重要的血管生成过程，如血管的分枝、萌发(sprouting)、 重组织(remodeling)、成熟和稳定。Tie-2为第一种哺乳动物受体酪氨 酸激酶，对于这种激酶，已鉴定出两种激动剂配体(例如，血管生成 素1(“Ang1”)，它刺激受体自磷酸化和信号传导)和拮抗剂配体(例 如，血管生成素2(“Ang2”))。Tie-2及其配体表达的剔除和转基因 操作指明，Tie-2信号的严格的空间和时间控制对新脉管系统的正确 发生是重要的。目前的模型提示，通过Ang1配体刺激的Tie-2激酶 直接参与新血管的分枝、萌发和赘生，并且在维持血管完整性和诱 导静止方面，内皮外周的募集(recruitment)与相互作用支持细胞是重 要的。缺乏Ang1刺激的Tie-2或者由Ang2抑制的Tie-2自动磷酸化 (Ang2在血管退化的部位高水平地产生)可以引起血管结构丧失和基 质接触导致内皮细胞死亡，尤其是在缺乏生长/生存的刺激时。然而 现在的情形更加复杂，因为最近已报道了至少两个另外的Tie-2配体 (Ang3和Ang4)，而且已经证实了对各种激动和拮抗的血管生成素异 低聚反应(由此改进其活性)的能力。因此，靶向Tie-2配体-受体相互 作用作为抗血管生成治疗方法不是有利的，应优选激酶抑制策略。

Tie-2的可溶性细胞外结构域(“ExTek”)可以破坏乳房肿瘤异种 皮移植和肺恶性肿瘤模型及肿瘤细胞诱导眼的新血管发生中的肿瘤 脉管系统的建立。通过腺病毒的感染，在啮齿动物体内产生的ExTek 的mg/ml水平可以达到7-10天而没有不良副作用。这些结果提示正 常健康动物中的Tie-2信号途径的破坏可以很好地被耐受。对ExTek 的这些Tie-2抑制应答可以是配体的多价螯合作用结果和/或具有全长 Tie-2的非生产性异源二聚体的生成。

最近，在人的关节炎关节的血管滑膜翳内已发现Tie-2表达明显 的上调，与在不适宜的新血管发生中的作用相一致。这个发现提示 Tie-2在类风湿性关节炎的发展中起作用。已确定产生组成型激活形 式的Tie-2的点突变与人的静脉畸形疾病有关。因此，Tie-2抑制剂 在治疗这样的疾病和用于其它的不适宜的新血管发生的情形中是有 用的。

非受体酪氨酸激酶。非受体酪氨酸激酶表示缺乏细胞外和跨膜 序列的细胞酶的集合。目前，已鉴定出超过24种不同的非受体酪氨 酸激酶，包括十一个(11)亚家族(Src、Frk、Btk、Csk、Abl、Zap70、 Fes/Fps、Fak、Jak、Ack和LIMK)。目前，非受体酪氨酸激酶的Src 亚家族由大量的PTKs组成并且包括Src、Yes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、 Hck、Fgr和Yrk。酶的Src亚家族与肿瘤发生和免疫反应有关。在Bohlen， 1993，Oncogene 8：2025-2031中提供非受体酪氨酸激酶的更详细的讨 论，其通过引用结合到本文中。

已发现许多酪氨酸激酶，无论是RTK或非受体酪氨酸激酶，均 涉及包括癌症、牛皮癣和其它的过度增殖疾病或者过度免疫反应在 内的多种病理疾病的细胞信号途径。

调控PTKs的化合物的开发。根据推测的PTKs控制、调节和调 控细胞增殖、与异常细胞增殖有关的疾病和紊乱的重要性，已进行 许多尝试，采用各种方法，包括使用突变配体(美国申请号4966849)、 可溶性受体和抗体(申请号WO 94/10202，Kendall & Thomas，1994， Proc.Natl.Acad.Sci 90：10705-09，Kim等，1993，Nature 362：841-844)、 RNA配体(Jellinek等，Biochemistry 33：10450-56，Takano等，1993，Mol. Bio.Cell 4：358A，Kinsella等，1992，Exp.Cell Res.199：56-62，Wright 等，1992，J.Cellular Phys.152：448-57)和酪氨酸激酶抑制剂(WO 94/03427，WO 92/21660，WO 91/15495，WO 94/14808，美国专利号 5330992，Mariani等，1994，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.35：2268)，来 鉴定受体和非受体酪氨酸激酶“抑制剂”。

最近，已做出许多尝试来鉴定用作酪氨酸激酶抑制剂的小分子。 例如，双单环、二环或者杂环芳基化合物(PCT WO 92/20642)和1，2- 亚乙烯基-氮杂吲哚衍生物(PCT WO 94/14808)通常被描述为酪氨酸激 酶抑制剂。苯乙烯基化合物(美国专利号5217999)、苯乙烯基取代的 吡啶基化合物(美国专利号5302606)、某些喹唑啉衍生物(EP申请号 0566266A1，Expert Opin.Ther.Pat.(1998)，8(4)：475-478)、硒基吲哚 和硒化物(PCT WO 94/03427)、三环多羟基化合物(PCT WO 92/21660) 和苄基膦酸化合物(PCT WO 91/15495)已被描述为用作治疗癌症的酪 氨酸激酶抑制剂的化合物。苯胺基噌啉(PCT WO 97/34876)和喹唑啉 衍生物化合物(PCT WO 97/22596，PCT WO 97/42187)已被描述为血管 生成和血管通透性的抑制剂。

另外，已做出许多尝试来鉴定作为丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂起 作用的小分子。例如，双(吲哚基顺丁烯二酰亚胺)化合物已被描述为 抑制特定的PKC丝氨酸/苏氨酸激酶同工型，其信号传导功能与VEGF 相关的疾病的变化的血管通透性有关(PCT WO 97/40830，PCT WO 97/40831)。

Plk-1激酶抑制剂

Plk-1为丝氨酸/苏氨酸激酶，它是细胞周期进展的重要调节剂。 它在有丝分裂纺锤体器的装配和动态功能中起至关重要的作用。Plk- 1和相关激酶也显示密切参与其它细胞周期调节剂，例如细胞周期蛋 白依赖激酶的激活和失活。高水平的Plk-1表达与细胞增殖活性相关。 它在各种来源的恶性肿瘤中经常被发现。预料Plk-1的抑制剂通过中 断参与有丝分裂纺锤体和不适当的激活细胞周期蛋白-依赖激酶的过 程来阻断癌细胞增殖。

cdc2/细胞周期蛋白B激酶抑制剂(Cdc2也称作cdk1)

cdc2/细胞周期蛋白B为另一种丝氨酸/苏氨酸激酶，它属于细胞 周期蛋白依赖激酶(cdks)家族。这些酶参与细胞周期进展的各期之间 的至关重要的过渡。相信失控的细胞增殖(为癌症的标志)依赖于这些 细胞中升高的cdk活性。通过cdc2/细胞周期蛋白B激酶抑制剂抑制 癌细胞中升高的cdk活性可以减少增殖并且可以恢复细胞周期进展的 正常控制。

CDK激活的调节是复杂的，但需要CDK与多种细胞周期蛋白 家族的调节亚基相关联(Draetta，Trends in Cell Biology，3：287-289 (1993))，Murray和Kirschner，Nature，339：275-280(1989)，Solomon等， Molecular Biology of the Cell，3：13-27(1992))。通过激活和失活CDK 亚基的磷酸化发生另外水平的调节(Draetta，Trends in Cell Biology，3： 287-289(1993))，Murray和Kirschner，Nature，339：275-280(1989)， Solomon等，Molecular Biology of the Cell，3：13-27(1992)，Ducommun 等，EMBO Journal，10：3311-3319(1991)，Gautier等，Nature，339：626- 629(1989)，Gould和Nurse，Nature，342：39-45(1989)，Krek和Nigg， EMBO Journal，10：3331-3341(1991)，Solomon等，Cell，63：1013-]024 (1990))。不同的细胞周期蛋白/CDK复合物的相关激活和失活对通过 细胞周期的正常进展是必需的(Pines，Trends in Biochemical Sciences， 18：195-197(1993)，Sherr，Cell，73：1059-1065(1993)。通过激活不同的 细胞周期蛋白/CDK活性控制至关重要的G1-S和G2-M过渡。在G1 中，细胞周期蛋白D/CDK4和细胞周期蛋白E/CDK2被认为介导S- 期的开始(Matsushima等，Molecular & Cellular Biology，14：2066-2076 (1994)，Ohtsubo和Roberts，Science，259：1908-1912(1993)；Quelle等， Genes & Development，7：1559-1571(1993)；Resnitzky等，Molecular & Cellular Biology，14：1669-1679(1994))。通过S-期的进展需要细胞周 期蛋白A/CDK2的活性(Girard等，Cell，67：1169-1179(1991)，Pagano 等，EMBO Journal，11：961-971(1992)，Rosenblatt等，Proceedings of the National Academy of Science USA，89：2824-2828(1992)，Walker和 Maller，Nature，354：314-317(1991)，Zindy等，Biochemical & Biophysical Research Communications，182：1144-1154(1992)，而需要 细胞周期蛋白A/cdc2(CDK1)和细胞周期蛋白B/cdc2的激活用于开始 分裂中期(Draetta，Trends in Cell Biology，3：287-289(1993))，Murray和 Kirschner，Nature，339：275-280(1989)，Solomon等，Molecular Biology of the Cell，3：13-27(1992)，Girard等，Cell，67：1169-1179(1991)， Pagano等，EMBO Journal，11：961-971(1992)，Rosenblatt等， Proceedings of the National Academy of Science USA，89：2824-2828 (1992)，Walker和Maller，Nature，354：314-317(1991)，Zindy等， Biochemical & Biophysical Research Communications，182：1144-1154 (1992))。因此，CDK调节的失控在过度增殖疾病和癌症中是经常发 生的事件，这并不令人惊奇。(Pines，Current Opinion in Cell Biology，4： 144-148(1992)，Lees，Current Opinion in Cell Biology，7：773-780(1995)， Hunter和Pines，Cell，79：573-582(1994))。

参与介导或者维持疾病症状的激酶的抑制剂代表对这些疾病新 的疗法。这样的激酶的实例包括(但不限于)：(1)抑制癌症中的c-Src (Brickell，Critical Reviews in Oncogenesis，3：401-406(1992)， Courtneidge，Seminars in Cancer Biology，5：236-246(1994)，raf(Powis， Pharmacology & Therapeutics，62：57-95(1994))和细胞周期蛋白-依赖 的激酶(CDKs)1、2和4(Pines，Current Opinion in Cell Biology，4：144- 148(1992)，Lees，Current Opinion in Cell Biology，7：773-780(1995)， Hunter和Pines，Cell，79：573-582(1994))，(2)抑制再狭窄中的CDK2 或者PDGF-R激酶(Buchdunger等，Proceedings of the National Academy of Science USA，92：2258-2262(1995))，(3)抑制阿尔滋海默氏病中的 CDK5和GSK3激酶(Hosoi等，Journal of Biochemistry(Tokyo)，117： 741-749(1995)，Aplin等，Journal of Neurochemistry，67：699-707 (1996)，(4)，抑制激酶骨质疏松症中的c-Src激酶(Tanaka等，Nature，383： 528-531(1996))，(5)抑制II型糖尿病中的GSK-3激酶(Borthwick等， Biochemical & Bicphysical Research Communications，210：738-745 (1995)，(6)抑制炎症中p38激酶(Badger等，The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，279：1453-1461(1996))，(7)抑制参与血 管形成的疾病中的VEGF-R1-3和TIE-1和-2激酶(Shawver，Drug Discovery Today，2：50-63(1997))，(8)抑制病毒感染中的UL97激酶(He 等，Journal of Virology，71：405-411(1997))，(9)抑制骨和肝细胞疾病 中的CSF-1R激酶(Myers等，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters， 7：421-424(1997)和(10)抑制自动免疫疾病和移植排斥中的Lck激酶 (Myers等，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，7：417-420 (1997)。

另外，当激酶不被错调时，某些激酶的抑制剂可能具有治疗疾 病的用途，尽管如此，它对维持疾病状态是必需的。在这种情况下， 抑制激酶活性将起治愈或者减轻这些疾病的作用。例如，许多病毒(如 人乳头瘤病毒)干扰细胞周期并驱使细胞进入细胞周期的S-期 (Vousden，FASEB Journal，7：8720879(1993))。通过抑制必需的S-期 启动活性例如CDK2，避免细胞在病毒感染后进入DNA合成，通过 预防病毒复制可以干扰病毒的生命周期。这种相同的原理可以用于 保护人体的正常细胞免于周期特异性化学治疗剂的毒性(Stone等， Cancer Research，56：3199-3202(1996)，Kohn等，Journal of Cellular Biochemistry，54：44-452(1994))。抑制CDKs2或者4将预防其发展 进入正常细胞的周期并限制作用于S-期、G2或者有丝分裂的细胞毒 素的毒性。另外，CDK2/细胞周期蛋白E活性也显示调节NF-kB。 抑制CDK2活性刺激NF-kB-依赖的基因表达，一种通过与p300辅 激活物相互作用介导的事件(Perkins等，Science，275：523-527 (1997))。NF-kB调节参与炎性反应(例如造血生长因子、趋化因子和 白细胞粘附分子)(Baeuerle和Henkel，Annual Review of Immunology，12： 141-179(1994))的基因并且可以参与细胞内细胞程序死亡的信号的抑 制(Beg和Baltimore，Science，274：782-784(1996)，Wang等，Science， 274：784-787(1996)，Van Antwerp等，Science，274：787-789(1996))。 因此，抑制CDK2可以减少通过涉及NF-kB的机制的细胞毒药物诱 导的细胞程序死亡。因此，这提示在其它的调节NF-kB在疾病的病 因学中起作用的病例中，抑制CDK2活性也可以具有用途。可采用 真菌感染作为另一个实例：曲霉病为免疫调和的患者的一种常见感 染(Armstrong，Clinical Infectious Diseases，16：1-7(1993))。抑制曲霉 激酶Cdc2/CDC28或者Nim A(Osmani等，EMBO Journal，10：2669- 2679(1991)，Osmani等，Cell，67：283-291(1991))可以引起真菌的抑制 或者死亡，改善患有这些感染的患者的治疗结果。

因此，通过调节受体和非受体型酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶的 活性以调节和调制异常或者不合适的细胞增殖、分化或者代谢来鉴 定特异性抑制信号传导和细胞增殖的有效的小分子化合物是合乎需 要的。具体地说，鉴定特异性抑制对血管生成(antiogenic)过程必需的 酪氨酸激酶的功能或者导致水肿、腹水、渗漏、渗出和大分子外渗 及基质沉积以及相关疾病的血管高通透性形成的方法和化合物将是 有益的。

发明概述

本发明提供了式(I)的化合物，其外消旋-非对映异构体混合物、 旋光异构体、药学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物：

其中：

G为

其中Z100为

或任选被R1取代的基团，所述R1选自烷基；环烷基；吡咯烷基；其 中各环具有6个原子的芳香氮杂双环，如喹啉基、喹喔啉基、喹唑 啉基、异喹啉基和二氮杂萘基；其中氮位于桥接位置并且一个芳环 为5元环而另一个芳环为六元环的芳香氮杂双环，如咪唑并[1，2-a]嘧 啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、萘基、四 氢萘基、苯并噻吩基、呋喃基、噻吩基、苯并噁唑基、苯并异噁唑 基、苯并噻唑基、

噻唑基、苯并呋喃基、2，3-二氢苯并呋喃基、吲哚基、异噁唑基、四 氢吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基、吡唑基、吡咯基、吡咯并吡啶基、 H-吡啶酮基、噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噻二唑基、二氢吲哚 基、吲唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并异噻唑基、1，1-二氧苯并异 噻唑基、吡啶并-噁唑基、吡啶并-噻唑基、嘧啶并-噁唑基、嘧啶并- 噻唑基和苯并咪唑基；

Z110是共价键，或是任选取代的(C1-C6)，该基团任选被一个或多 个选自以下的取代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、 取代或未取代的氨基和取代或未取代的苯基；

Z111是共价键，任选取代的(C1-C6)或任选取代的-(CH2)n-环烷基- (CH2)n-；其中所述任选取代的基团任选被一个或多个选自以下的取 代基取代：烷基、CN、OH、卤素、NO2、COOH、取代或未取代的 氨基和取代或未取代的苯基；

Ra和R1各表示一个或多个取代基，该基团每次出现时独立选自： 氢、卤素、-CN、-NO2、-C(O)OH、-C(O)H、-OH、-C(O)O-烷基、-C(O)O- 芳基、-C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取 代或未取代的酰氨基、四唑基、三氟甲基羰基氨基、三氟甲基磺酰 氨基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取 代的烷氧基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代 或未取代的链烯基、取代或未取代的芳氧基、取代或未取代的杂芳 氧基、取代或未取代的杂芳基烷氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、 取代或未取代的烷基-S(O)p-、取代或未取代的烷基-S-、取代或未取 代的芳基-S(O)p-、取代或未取代的杂芳基-S(O)p-、取代或未取代的芳 基烷基、取代或未取代的杂芳基烷基、取代或未取代的环烷基烷基、 取代或未取代的炔基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基 烷基、取代或未取代的酰氨基、取代或未取代的杂芳硫基、取代或 未取代的芳硫基、-Z105-C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)- S(O)2-Z200、-Z105-N(R)-C(O)-N(R)-Z200、RC和CH2ORC；

RC每次出现时独立为氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代 的芳基、-CH2-NRdRe、-W-(CH2)t-NRdRe、-W-(CH2)t-O-烷基、-W- (CH2)t-S-烷基或-W-(CH2)t-OH；

Z105每次出现时独立为共价键或(C1-C6)；

Z200每次出现时独立为取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的 苯基或者被取代的或未被取代的-(C1-C6)-苯基；

Rd和Re每次出现时独立为H、烷基、烷酰基或SO2-烷基；或 Rd、Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环；

t每次出现时独立为2至6的整数；

W每次出现时独立为键或O、S、S(O)、S(O)2或NRf，其中Rf 每次出现时独立为H或烷基；或者

R1是取代或未取代的与环2稠合的碳环或杂环；

R3每次出现时独立为氢、羟基、取代或未取代的烷基、取代或 未取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基、取代或未取代的- C(O)-杂芳基或取代或未取代的烷氧基；

A是-(C1-C6)-、-O-、-S-、-S(O)p-、-N(R)-、-N(C(O)OR)-、- N(C(O)R)-、-N(SO2R)-、-CH2O-、-CH2S-、-CH2N(R)-、-CH(NR)-、- CH2N(C(O)R))-、-CH2N(C(O)OR)-、-CH2N(SO2R)-、-CH(NHR)-、- CH(NHC(O)R)-、-CH(NHSO2R)-、-CH(NHC(O)OR)-、-CH(OC(O)R)-、 -CH(OC(O)NHR)-、-CH＝CH-、-C(＝NOR)-、-C(O)-、-CH(OR)-、- C(O)N(R)-、-N(R)C(O)-、-N(R)S(O)p、-OC(O)N(R)-、-N(R)-C(O)- (CH2)n-N(R)-、-N(R)C(O)O-、-N(R)-(CH2)n+1-C(O)-、-S(O)pN(R)-、- O-(CR2)n+1-C(O)-、-O-(CR2)n+1-O-、-N(C(O)R)S(O)p-、-N(R)S(O)pN(R)-、 -N(R)-C(O)-(CH2)n-O-、-C(O)N(R)C(O)-、-S(O)pN(R)C(O)-、- OS(O)pN(R)-、-N(R)S(O)pO-、-N(R)S(O)pC(O)-、-SOpN(C(O)R)-、- N(R)SOpN(R)-、-C(O)O-、-N(R)P(ORb)O-、-N(R)P(ORb)-、- N(R)P(O)(ORb)O-、-N(R)P(O)(ORb)-、-N(C(O)R)P(ORb)O-、- N(C(O)R)P(ORb)-、-N(C(O)R)P(O)(ORb)O-或-N(C(O)R)P(ORb)-；

其中R每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的芳基烷基或者取代或未取代的芳基；

Rb每次出现时独立为H、取代或未取代的烷基、取代或未取代 的芳基烷基、取代或未取代的环烷基或者取代或未取代的芳基；

p是1或2；或

在含磷的基团中，氮原子、磷原子、R和Rb一起形成5或6元 杂环；或

A是NRSO2，而R、Ra和氮原子一起形成取代或未取代的与环 1稠合的5或6元杂环；

Z110-A-Z111结合在一起为共价键；和

R2为氢或式-Z101-Z102的基团；

Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取 代的苯基；

Z102是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代 或未取代的环烯基、取代或未取代的饱和或不饱和的杂环基团或取 代或未取代的饱和或不饱和的杂双环基团；其中所述取代的烷基、 取代的环烷基、取代的环烯基、取代的杂环和取代的杂双环基团带 有一个或多个取代基，这些取代基各自独立选自羟基、氰基、硝基、 卤基、取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代 的-C(O)-烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1- C6)-OR、取代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)- (C1-C6)-C(O)2-R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或 未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)- C(O)N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的氨磺酰基、取代或未取代 的脲基、取代或未取代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未 取代的-N(R)-(C1-C6)-OR、氧代基团以及饱和或不饱和的、芳族的取 代或未取代的杂环基团，该杂环中含有一个或多个选自N、O和S 的杂原子；其中所述杂环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以 下基团取代：氧代基团、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳 基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未 取代的-C(O)-(C1-C6)-N(R)2、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、 取代或未取代的芳基烷基或取代或未取代的杂芳基烷基；或

R2是式-B-E的基团，其中B是取代或未取代的环烷基、取代或 未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的氮杂环烷 基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的氨基烷基磺酰基、取代 或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的 氨基烷基羰基、取代或未取代的亚烷基、取代或未取代的氨基烷基、 取代或未取代的亚烷基羰基或者取代或未取代的氨基烷基羰基；且E 是取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的 氮杂环烷基、取代或未取代的杂环烷基、取代或未取代的(C1-C6)-氮 杂环烷基、取代或未取代的氮杂环烷基羰基、取代或未取代的氮杂 环烷基磺酰基、取代或未取代的氮杂环烷基烷基、取代或未取代的 杂芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的芳基-N(R)-(C1-C6)-、取代或 未取代的烷基-N(R)-(C1-C6)-、取代或未取代的杂芳基-(C1-C6)-N(R)-、 取代或未取代的芳基-(C1-C6)-N(R)-、取代或未取代的烷基-(C1-C6)- N(R)-、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基羰基、取代 或未取代的烷基羰基、取代或未取代的芳基羰基、取代或未取代的 杂芳基磺酰基、取代或未取代的烷基磺酰基、取代或未取代的芳基 磺酰基、取代或未取代的杂芳基烷基、取代或未取代的芳基烷基、 取代或未取代的氮杂环烷基羰基氨基、取代或未取代的杂芳基羰基 氨基、取代或未取代的芳基羰基氨基、取代或未取代的烷基羰基氨 基或者取代或未取代的芳基；

a是1，而D1、G1、J1、L1和M1各自独立选自CRa和N，条件 是D1、G1、J1、L1和M1中至少两个是CRa；或

a是0，而D1、G1、L1和M1之一是NRa，D1、G1、L1和M1之 一是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；

b是1，而D2、G2、J2、L2和M2各自独立选自CRa和N，条件 是D2、G2、J2、L2和M2中至少两个是CRa；或

b是0，而D2、G2、L2和M2之一是NRa，D2、G2、L2和M2之 一是CRa，且其余独立选自CRa和N，其中Ra定义如上；且

n每次出现时独立为0至6的整数。

条件是当A为-N(R)-，Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟 基四氢呋喃-2-基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基时，则Z100不为烷基、 四氢吡喃基、四氢呋喃基、哌啶基或吡咯烷基；

条件是当Z110和Z111各自为共价键，R2为3，4-二羟基四氢呋喃-2- 基或3，4-二酰氧基四氢呋喃-2-基，Z100为取代或未取代的烷基时，A 不为烷基、-O-、-C(O)-、-NHC(O)-或-C(O)O-；

条件是当Z110-A-Z111结合在一起为共价键时，Z100不为烷基；

条件是当Z110-A-Z111结合在一起为C1-C6烷基时，Z100不为苯基、 吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、呋 喃基或噻吩基；以及

条件是当R2为取代或未取代的环戊基，Z100为取代或未取代的 烷基，Z110和Z111各自为共价键时，A不为-O-、-C(O)O-或-N(R)-。

在第一个实施方案中，式I的化合物中的R2为a)氢；b)取代 或未取代的三苯甲基；c)取代或未取代的环烯基；d)被取代或未取 代的烷基取代的氮杂芳基；e)被一个或多个选自以下的取代基取代 的氮杂环烷基：取代或未取代的-(C1-C6)-烷基、取代或未取代的-C1-C6- 烷基-OR、取代或未取代的-C(O)-C1-C6-烷基-N(R)2、取代或未取代的 C1-C6-烷基-N(R)2、取代或未取代的-C1-C6-烷基-环烷基、取代或未取 代的四氢噻吩基和取代或未取代的四氢噻喃基；或f)式(a)的基团

其中E1为哌啶基、哌嗪基、咪唑基、吗啉基、吡咯烷基、氨基、酰 氨基或四氢噻唑基，且其中E任选被选自以下的一个或多个取代基 取代：-C0-C6-烷基-OR、-C1-C6-烷基-C(O)OR、-C1-C6-烷基-杂芳基、 -C1-C6-烷基-杂环烷基和-C1-C6-烷基-N(R)2。

在第二个实施方案中，式I化合物中的R2为式(a)表示的基团， 其中E1选自-氨基-C1-C6-烷基-吗啉-4-基、-哌啶子基-C1-C6-烷基-OR、 -咪唑基-C1-C6烷基-C(O)OR、-哌嗪-1-基-C1-C6-烷基-OR、-氨基-C1-C6- 烷基-OR、-吡咯烷-1-基(pyrrolidino)-OR、-氨基-C1-C6-烷基-咪唑-1-基 (imidazolo)、-氨基-C1-C6-烷基-N(R)2、-酰氨基-C1-C6-烷基-N(R)2、四 氢噻唑基、N，N-二-(羟基-C1-C6-烷基)氨基-和-哌嗪-1-基(piperizino)- OR。

在第三个实施方案中，式I化合物中的R2为式(a)表示的基团， 其中E1选自4-(2-羟乙基)吗啉-4-基、3-羟甲基哌啶子基、2-[3-(甲基 羧基)丙基]咪唑-4-基、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基、2-羟乙基氨基、3-羟 基吡咯烷-1-基、3-咪唑-1-基丙氨基、4-羟基丁基氨基、3-甲氧基丙基 氨基、3-(N，N-二甲氨基)丙基氨基、N-[2-(N，N-二甲基)乙基]酰氨基、 四氢噻唑基、N，N-二-(2-羟乙基)氨基、4-羟基哌嗪-1-基和4-羟甲基哌 嗪-1-基。

在第四个实施方案中，在式I化合物中或实施方案1-3的任一个 中的Z110-A-Z111为-NHC(O)-。

在第五个实施方案中，在式I化合物中或实施方案1-4的任一个 中的G为由以下结构式表示的基团：

在第六个实施方案中，在式I化合物中或实施方案1-5的任一个 中的G为由以下结构式表示的基团：

在第七个实施方案中，式I化合物中的R2为被C1-C6烷基取代 的氮杂芳基，其中所述烷基任选被一个或多个选自以下的取代基取 代：RO-、-C(O)OR、-C(O)N(R)2和-N(R)2。

在第八个实施方案中，式I化合物中的R2为4-(2-羟乙基)吡啶-2- 基、3-氨基甲基吡啶-4-基或2-甲基咪唑-4-基。

在第九个实施方案中，式I化合物中或实施方案7或8中的G 为由下式表示的基团：

在第十个实施方案中，式I化合物中的R2为被2-甲氧基乙基、 N，N-二甲氨基甲基、N，N二甲氨基-1-氧代乙基或2-(N-甲基氨基)-1- 氧代丙基取代的吡咯烷基。

在第十一个实施方案中，式I化合物中或实施方案10中的G为 由下式表示的基团：

在第十二个实施方案中，式I化合物中的R2为被四氢噻喃基、 四氢噻吩基、2-(N-甲基氨基)-2-甲基-1-氧代丙基、2-甲氧基乙基或环 丙基甲基取代的哌啶基。

在第十三个实施方案中，式I化合物中的Z100为吡咯烷基、喹啉 基、喹喔啉基、喹唑啉基、异喹啉基、二氮杂萘基、咪唑并[1，2-a]嘧 啶基、1H-咪唑并[1，2-a]咪唑基、咪唑并[2，1-b][1，3]噻唑基、H-吡啶 酮、1，1-二氧苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、烷基、咪唑并[1，2-a]吡 啶基、吡咯并吡啶基或

其中所有前述Z100基团可任选被R1取代。

在第十四个实施方案中，式I化合物或实施方案13中的Z100为 2-吡咯烷基、1，2-二氢-2-氧代吡啶-3-基、苯并异噁唑-3-基、1，1-二氧 苯并异噻唑-3-基、咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基或

和R2为4-(4-甲基哌嗪-1-基)-环己基。

在第十五个实施方案中，式I化合物或实施方案13或14中 Z110-A-Z111为-NH-。

在第十六个实施方案中，式I或实施方案13中的Z100为选自以 下的吡咯并吡啶基：

或

在第十七个实施方案中，实施方案13或16中的Z110-A-Z111为- NHC(O)-。

在第十八个实施方案中，式I或实施方案13、16或17中的R2 为哌啶-4-基、N-甲基哌啶-4-基、N-(丙-2-基)哌啶-4-基、N-(咪唑-4- 基-甲基)哌啶-4-基、N-(2-甲基咪唑-4-基-甲基)哌啶-4-基、N(吡唑-4- 基-甲基)哌啶-4-基、N-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基、N-(呋喃-3-基-甲基) 哌啶-4-基、N-(四氢吡喃-4-基-甲基)哌啶-4-基、N-(吡咯-2-基-甲基)哌 啶-4-基或N-(2-二氟乙基)哌啶-4-基。

在第十九个实施方案中，式I化合物中的Ra和R1每次出现时各 自表示一个或多个独立选自以下基团的取代基：氢、-C(O)O-芳基、- C(O)O-杂芳基、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未 取代的环烷基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的杂芳基烷 氧基、取代或未取代的芳基烷氧基、取代或未取代的烷基-S(O)p-、取 代或未取代的烷基-S-、取代或未取代的芳基-S(O)p-、取代或未取代 的杂芳基-S(O)p-，且Ra和R1中至少一个不为氢。

在第二十个实施方案中，式I化合物中的A为-(C1-C6)-。

在第二十一个实施方案中，在式I表示的化合物中的Z110-A-Z111 一起为共价键。

在第二十二个实施方案中，在式I表示的化合物中的R3每次出 现时独立为取代或未取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的-C(O)-芳基 或取代或未取代的-C(O)-杂芳基。

在第二十三个实施方案，R2为式-Z101-Z102的基团，其中Z101为 共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)--O-、-(C1-C6)--C(O)-、-(C1-C6)-C(O)O-、 -(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代的苯基； 且其中Z102为取代或未取代的环烯基，其中所述取代的环烯基具有一 个或多个各自独立选自以下基团的取代基：羟基、氰基、硝基、卤 基、取代或未取代的(C1-C6)、取代或未取代的芳基、取代或未取代的 -C(O)-烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)- OR、取代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代的-N(R)-(C1- C6)-C(O)2R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取 代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1-C6)-C(O)N(R)- (C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的磺酰氨基、取代或未取代的脲基、取 代或未取代的酰氨基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的-N(R)- (C1-C6)-OR、氧代基团，以及饱和、不饱和或芳族的取代或未取代的 杂环基团，该基团含一个或多个选自N、O和S的杂原子；其中所 述杂环基团或杂双环基团的氮原子任选独立被以下基团取代：氧代 基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的 杂芳基、取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的-C(O)-(C1-C6)- N(R)2、-C(O)烷基、-C(O)-芳基、-C(O)-杂芳基、取代或未取代的芳 基烷基或取代或未取代的杂芳基烷基。

在第二十四个实施方案中，R2为式-Z101-Z102的基团；Z101为共价 键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)--O-、-(C1-C6)--C(O)-、-(C1-C6)--C(O)O-、-(C1- C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代或未取代的苯基；Z102 为取代、饱和或不饱和的杂环基团；或取代、饱和或不饱和的杂双 环基团；其中所述取代的杂环和取代的杂双环基团具有一个或多个 独立选自以下基团的取代基：硝基、卤基、取代或未取代的(C1-C6)、 取代或未取代的芳基、取代或未取代的-C(O)-烷基、取代或未取代的 -N(R)-(C1-C6)-OR、取代或未取代的-N((C1-C6)-OR)2、取代或未取代 的-N(R)-(C1-C6)-C(O)2R、取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-OR、 取代或未取代的-(C1-C6)-N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-(C1- C6)-C(O)N(R)-(C1-C6)-N(R)2、取代或未取代的-N(R)-(C1-C6)-OR，以 及取代或未取代的杂环基团，该基团含一个或多个选自O和S的杂 原子；其中所述杂环基团或杂双环基团的氮原子独立任选被以下基 团取代：氧代基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取 代或未取代的杂芳基、取代或未取代的-C(O)N(R)2、取代或未取代的 -C(O)-(C1-C6)-N(R)2、-C(O)-烷基、-C(O)-芳基、-C(O)杂芳基、取代 或未取代的芳基烷基或取代或未取代的杂芳基烷基。

优选的式(I)化合物是其中R3是H；R1每次出现时独立选自：F、 Cl、Br、I、CH3、NO2、OCF3、OCH3、CN、CO2CH3、CF3、-CH2NRdRe、 叔丁基、吡啶基、取代或未取代的噁唑基、取代或未取代的苄基、 取代或未取代的苯磺酰基、取代或未取代的苯氧基、取代或未取代 的苯基、取代或未取代的氨基、羧基、取代或未取代的四唑基及取 代或未取代的苯乙烯基。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；Ra每次出现时独立选 自：F、Cl、Br、I、CH3、NO2、OCF3、OCH3、CN、CO2CH3、CF3、 叔丁基、吡啶基、取代或未取代的噁唑基、取代或未取代的苄基、 取代或未取代的苯磺酰基、取代或未取代的苯氧基、取代或未取代 的苯基、取代或未取代的氨基、羧基、取代或未取代的四唑基及取 代或未取代的苯乙烯基。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中n是1、2或3。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中m是0、1、2或3，且

Rg是H或-(CH2)pN(R4)R5，其中p是2至6的整数，而R4和R5 各自独立为H、氮杂双环烷基或Y-Z，其中Y选自-C(O)-、-(CH2)q-、 -S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和- (CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整数；且r是0、1或2；且Z是取 代或未取代的部分，选自烷基、烷氧基、氨基、芳基、杂芳基和杂环 烷基，或R4、R5和它们所连接的氮原子一起形成3、4、5、6或7-元 取代或未取代的杂环或杂双环基团。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中m是0、1、2或3，

a和b各自独立为0至6的整数；

Q是-OR6或-NR4R5；

各R4和R5独立为H、氮杂双环烷基或Y-Z，其中Y选自-C(O)-、 -(CH2)q、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH- 和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整数；且r是0、1或2；且Z是 取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、氨基、芳基、杂芳 基或杂环烷基，或

R4、R5和它们所连接的氮原子一起形成3、4、5、6或7元取代 或未取代的杂环或杂双环基团；且

R6是氢或取代或未取代的烷基。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中n是1、2或3；且

R4是H、氮杂双环烷基或Y-Z，其中Y选自-C(O)-、-(CH2)q、- S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和 (CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整数；且r是0、1或2；且Z是取 代或未取代的烷基、取代或未取代的氨基、芳基、取代或未取代的 杂芳基或者取代或未取代的杂环烷基。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中m是0、1、2或3；

R5是H、氮杂双环烷基或Y-Z，其中Y选自如下：共价键、-C(O)-、 -(CH2)q-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-、 -(CH2)qC(O)-、-C(O)(CH2)q-和-(CH2)qS(O)r-，其中-(CH2)q-、-(CH2)qO-、 -(CH2)qNH-、-(CH2)qC(O)-、-C(O)(CH2)q-和-(CH2)qS(O)r的烷基部分任 选被下列基团取代：卤素、羟基或烷基；其中q是0至6的整数； 且r是0、1或2；且Z是取代或未取代的烷基、取代或未取代的氨 基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的芳基、取代或未取代 的杂芳基或者取代或未取代的杂环烷基；

或Y和Z一起是天然或非天然氨基酸，其胺的氮原子上可以单 或二烷基化；且

R6表示一个或多个取代基，各自独立选自氢、羟基、氧代基团、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂环 基、取代或未取代的烷氧基羰基、取代或未取代的烷氧基烷基、取 代或未取代的氨基羰基、取代或未取代的烷基羰基、取代或未取代 的芳基羰基、取代或未取代的杂环基羰基、取代或未取代的氨基烷 基和取代或未取代的芳基烷基；条件是与氮原子相邻的碳原子不被 羟基取代。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中R4是H、取代或未取代的烷基、取代或未取代的氮杂双环烷基 或Y-Z，其中Y选自-C(O)-、-(CH2)q-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、 -CONH-、-(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的 整数，而r是0、1或2；且Z是氢、取代或未取代的烷基、取代或未 取代的氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取 代或未取代的杂环烷基。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中m是1至6的整数；且

R4和R5各自独立为H、取代或未取代的氮杂双环烷基或Y-Z，其 中Y选自-C(O)-、-(CH2)q、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、- (CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整数；且r 是0、1或2；且Z是取代或未取代的烷基、取代或未取代的氨基、 取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的 杂环烷基；或

R4、R5和它们所连接的氮原子一起形成3、4、5、6或7元取代 或未取代的杂环或者取代或未取代的杂双环基团。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中

n是0至4的整数；

r是0而m是1至6的整数；或

r是1而m是0至6的整数；

Q是-OR6或-NR4R5；

各R4和R5独立为H、取代或未取代的氮杂双环烷基或Y-Z，其 中Y选自-C(O)-、-(CH2)q-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、 -(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整数；r是 0、1或2；且Z是取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、 取代或未取代的氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳 基或者取代或未取代的杂环烷基；或

R4、R5和它们所连接的氮原子一起形成3、4、5或6元取代或 未取代的杂环基团；且

R6是氢或取代或未取代的烷基。

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

n是0至4的整数；

m是0至6的整数；

R4是H、取代或未取代的氮杂双环烷基或Y-Z，其中Y选自- C(O)-、-(CH2)q-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、-(CH2)qO-、 -(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中q是0至6的整数；r是0，1或2； 且Z是取代或未取代的烷基、取代或未取代的氨基、取代或未取代 的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂环烷基；且

R6是氢或取代或未取代的烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环基团

其中R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立为低级烷基或 氢；或R7和R8；R9和R10；R11和R12；或R13和R14中的至少一对取 代基一起是一个氧原子；或R7和R9中至少一个是氰基、CONHR15、 COOR15、CH2OR15或CH2NR15(R16)，其中R15和R16各自独立为H、 氮杂双环烷基或V-L，其中V选自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、 -SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p 是0至6的整数，q是0至6的整数，而r是0、1或2；且L是取代 或未取代的烷基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的芳基、取 代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂环烷基；或R15、R16与氮 原子一起形成3、4、5、6或7-元取代或未取代的杂环或取代或未取 代的杂双环基团；

X是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氢、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳基 烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R17或-C(O)OR18，其中R18是氢、取代或未 取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的芳基烷基； 且

t是0或1。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环

其中

R19和R20各自独立为氢或低级烷基；或R19和R20一起是一个氧 原子；

R21和R22各自独立为H、取代或未取代的氮杂双环烷基或V-L，其 中V选自如下：-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、 (CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整数，q是0 至6的整数，而r是0，1或2；且L是取代或未取代的烷基、取代或 未取代的氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者 取代或未取代的杂环烷基；或R21、R22和氮原子一起形成3、4、5或 6-元取代或未取代的杂环基团；

m是1至6的整数；且

n是0至6的整数。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环基团

其中

m是1至6的整数；且

R23是CH2OH、NRR′、C(O)NRR′或COOR，其中R和R′各自独 立为氢或者取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或 未取代的芳基烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环基团

其中R24是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未 取代的芳烷基、羧基、氰基、C(O)OR25、CH2OR25、CH2NR26R27或 C(O)NHR26，其中R25是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、 取代或未取代的芳烷基、取代或未取代的杂环基或者取代或未取代 的杂环芳基；且R26和R27各自独立为H、取代或未取代的氮杂双环 烷基或V-L，其中V选自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、 -CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的 整数，q是0至6的整数，而r是0、1或2；且L是取代或未取代的 烷基，取代或未取代的氨基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的 杂芳基或者取代或未取代的杂环烷基；或R26、R27和氮原子一起形成 3、4、5或6-元取代或未取代的杂环基团。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R4 和R5的至少一个是式Y-Z，其中

Z是下式

其中

T是C(O)、S、SO、SO2、CHOR或NR，其中R是氢或取代或 未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的芳基烷基； 且

n是0、1或2。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R4 和R5的至少一个是式Y-Z，其中Z是式-N(R28)R29，其中R28和R29各 自独立为取代或未取代的羧基烷基、取代或未取代的烷氧基羰基烷 基、取代或未取代的羟基烷基、取代或未取代的烷基磺酰基、取代 或未取代的烷基羰基或者取代或未取代的氰基烷基；或

R28和R29与氮原子一起形成5或6元取代或未取代的杂环基团。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环基团

其中

R7、R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14各自独立为低级烷基或 氢；或R7和R8；R9和R10；R11和R12；或R13和R14中至少一对取代 基一起是一个氧原子；或R7和R9的至少一个是氰基、CONHR15、 COOR15、CH2OR15或CH2NR15(R16)，其中R15和R16各自独立为H、 取代或未取代的氮杂双环烷基或V-L，其中V选自如下：-C(O)-、- (CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH- 和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整数，q是0至6的整数，而r是 0、1或2；且L是取代或未取代的烷基、取代或未取代的氨基、取 代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂 环烷基；或R15、R16和氮原子一起形成3、4、5、6或7-元取代或未 取代的杂环或杂双环基团；

X是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氢、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳基 烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R18或-C(O)OR18，其中R18是氢、取代或未 取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的芳基烷基； 且

t是0或1。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环基团

其中

R19和R20各自独立为氢或低级烷基；或R19和R20一起是一个氧 原子；

R21和R22各自独立为H、取代或未取代的氮杂双环烷基或V-L，其 中V选自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、 (CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整数，q是0 至6的整数，而r是0、1或2；且L是取代或未取代的烷基、取代或 未取代的氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者 取代或未取代的杂环烷基；或

R21、R22和氮原子一起形成3、4、5或6-元取代或未取代的杂环 基团；

m是1至6的整数；且

n是0至6的整数。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环基团

其中

m是1至6的整数；且

R23是CH2OH、NRR′、C(O)NRR′或COOR，其中R是氢或取代 或未取代的烷基，取代或未取代的芳基或者取代或未取代的芳基烷 基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中 R4、R5和氮原子一起形成下式的杂环基团

其中R24是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未 取代的芳基烷基、羧基、氰基、C(O)OR25、CH2OR25、CH2NR26R27或 C(O)NHR26，其中R25是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、 取代或未取代的芳基烷基、取代或未取代的杂环基或者取代或未取 代的杂环芳基；且R26和R27各自独立为H、取代或未取代的氮杂双 环烷基或V-L，其中V选自-C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、- SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、-(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是 0至6的整数，q是0至6的整数，而r是0、1或2；且L是取代或未 取代的烷基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的芳基、取代或 未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂环烷基；或R26、R27和氮原子 一起形成3、4、5或6元取代或未取代的杂环基团。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R4 和R5的至少一个是式Y-Z，其中

Z是下式的基团

其中

g是0或1；

T是C(O)、O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17 是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代 的芳基烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R18或-C(O)OR18，其中R18是氢、取 代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的芳基 烷基；且

R32是氢、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基 羰基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的羟基烷基、取 代或未取代的氨基羰基、取代或未取代的烷基羰基或者取代或未取 代的芳基烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R4 和R5的至少一个是式Y-Z，其中Z是式-N(R28)R29，其中R28和R29各 自独立为取代或未取代的羧基烷基、取代或未取代的烷氧基羰基烷 基、取代或未取代的羟基烷基、取代或未取代的烷基磺酰基、取代 或未取代的烷基羰基或者取代或未取代的氰基烷基；或

R28和R29与氮原子一起形成5或6元取代或未取代的杂环基团。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R5 是Y-Z，其中Z是式N(R30)R31，其中R30和R31各自独立为氢、烷基、 烷氧基羰基、烷氧基烷基、羟基烷基、氨基羰基、氰基、烷基羰基 或芳基烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R5 是Y-Z，其中Z是下式的基团

其中

各X独立为CH或N；且

R32是氢、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基 羰基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的羟基烷基、取 代或未取代的氨基羰基、取代或未取代的烷基羰基或者取代或未取 代的芳基烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R5 是Y-Z，其中Z是下式的基团

其中

g是0或1；

T是O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17是氢、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳基 烷基、C(O)NH2、-C(NH)NH2、-C(O)R17或-C(O)OR18，其中R18是氢、 取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基或者取代或未取代的芳 基烷基；且

R32是氢、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基 羰基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的羟基烷基、取 代或未取代的氨基羰基、取代或未取代的烷基羰基或者取代或未取 代的芳基烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R5 是Y-Z，其中Z是下式的基团

其中

g是0、1或2；且

R32是氢、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基 羰基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的羟基烷基、取 代或未取代的氨基羰基、取代或未取代的烷基羰基或者取代或未取 代的芳基烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R5 是Y-Z，其中Z是下式的基团

其中

T是C(O)、O、S、SO、SO2、CH2、CHOR17或NR17，其中R17 是氢、取代或未取代的烷基、芳基、芳基烷基、-C(NH)NH2、-C(O)R18 或-C(O)OR18，其中R18是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的 芳基或者取代或未取代的芳基烷基；

g是0或1；且

R32是氢、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基 羰基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的羟基烷基、取 代或未取代的氨基羰基、取代或未取代的烷基羰基或者取代或未取 代的芳基烷基。

更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合物中R5 是Y-Z，其中Z是下式的基团

其中

R32是氢、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基 羰基、取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的羟基烷基、取 代或未取代的氨基羰基、烷基羰基、取代或未取代的烷硫基或者取 代或未取代的芳基烷基；且

R33是氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基羰基、 取代或未取代的烷氧基烷基、取代或未取代的氨基羰基、全卤代烷 基、取代或未取代的链烯基、取代或未取代的烷基羰基或者取代或 未取代的芳基烷基。

优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式的基团

其中

m是0或1；

R34、R35、R36、R37、R38、R39、R40和R41各自独立为甲基或氢； 或R34和R35；R36和R37；R38和R39；或R40和R41中的至少一对取代 基一起是一个氧原子；且

R42是H、取代或未取代的氮杂双环烷基或Y-Z，其中Y选自- C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、 -(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整数，q是0至6的整 数，而r是0、1或2；且Z是取代或未取代的烷基、取代或未取代的 氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未 取代的杂环烷基；或R42是下式的基团

其中

u是0或1；

R43、R44、R45、R46、R47、R48、R49和R50各自独立为甲基或氢； 或R43和R44；R45和R46；R47和R48；或R49和R50中的至少一对取代 基一起是一个氧原子；且

R51是H、取代或未取代的氮杂双环烷基或V-L，其中V选自- C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、 -(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整数，q是0至6的整 数，而r是0、1或2；且L是取代或未取代的烷基、取代或未取代的 氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未 取代的杂环烷基。

优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是下式

其中h、i、j、k和l独立为0或1；

R52、R53、R54、R55、R56、R57、R58、R59、Rg和Rh各自独立为甲 基或氢；或R52和R53；R54和R55；R56和R57；或R58和R59中的至少 一对取代基一起是一个氧原子；且

R60是H、取代或未取代的氮杂双环烷基或Y-Z，其中Y选自- C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、 -(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整数，q是0至6的整 数，而r是0、1或2；且Z是取代或未取代的烷基、取代或未取代的 氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未 取代的杂环烷基；或R60是下式的基团

其中

v是0或1；

R61、R62、R63、R64、R65、R66、R67和R68各自独立为低级烷基或 氢；或R61和R62；R63和R64；R65和R66；和R67和R68中的至少一对 取代基一起是一个氧原子；且

R69是H、取代或未取代的氮杂双环烷基或V-1，其中V选自- C(O)-、-(CH2)p-、-S(O)2-、-C(O)O-、-SO2NH-、-CONH-、(CH2)qO-、 -(CH2)qNH-和-(CH2)qS(O)r-；其中p是0至6的整数，q是0至6的整 数，而r是0、1或2；且L是取代或未取代的烷基、取代或未取代的 氨基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未 取代的杂环烷基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中R3是H；R2是Z101-Z102，其 中Z101是共价键、-(C1-C6)-、-(C1-C6)-O-、-(C1-C6)-C(O)-、-(C1-C6)- C(O)O-、-(C1-C6)-C(O)-NH-、-(C1-C6)-C(O)-N((C1-C6))-或取代的苯基； 且

Z102是氢、取代或未取代的烷基或取代或未取代的饱和或不饱和 的杂环基团。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中Z101选自-CH2-C(O)O-、-CH2-C(O)-、-CH2-C(O)-NH-、-CH2- C(O)-N(Me)-、-CH(Me)-C(O)O-、-(CH2)3-C(O)O-、-CH(Me)-C(O)-NH- 和-(CH2)3-C(O)-NH-；且

Z102选自如下：氢、甲基、乙基、N，N-二甲氨基乙基、N，N-二乙 氨基乙基、2-苯基-2-羟基乙基、吗啉-4-基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基 和2-羟基甲基吡咯烷基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

或

其中Z100是取代或未取代的苯并噁唑基或取代或未取代的苯并噻唑 基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

其中只有一个Ra且其是H或F。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中Z101是共价键；且Z102是任选取代的吡啶基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

另一种优选的式(I)化合物是其中R3是H；

R2是环戊基；且

G是

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中Z110是氢；A是O；且Z100是任选取代的苯基、呋喃基或噻吩基， 其中Z100任选被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立选自： F、COOH、NO2、-OMe、-COOMe、OCF3和CF3。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中Z110是氢；A是-O-、-O-(CR2)n-C(O)-或-O-(CR2)n-O-；n每次出 现时是0至3；

Z100是任选取代的选自以下的基团：环己基、苯基、四氢吡喃基、 四氢呋喃基、异噁唑基和哌啶基；其中Z100任选被一个或多个选自以 下的取代基取代：烷基、烷氧基、卤素、羟基和烷氧基羰基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R2是任选取代的基团，其选自环丁基和环己基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R2任选被一个或多个选自以下的取代基取代：羟基、烷基、羟 基烷基、羧基烷基和苯基烷氧基烷基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是4-苯氧基苯基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中m是2；a是0；R6是H；b是1或2；且R4和R5各是氢。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中m是0、1或2；R6是氢；R5是H或Y-Z；

其中Y是共价键，-C(O)-、-(CH2)qO-、-(CH2)q-、-(CH2)qC(O)-或- C(O)(CH2)q-，其中-(CH2)qO-、-(CH2)p-、-(CH2)qC(O)-和-C(O)(CH2)q-的 烷基部分任选被下列基团取代：卤素、羟基或烷基；且

Z是氢、烷基、任选取代的烷基、烷氧基烷基、任选取代的杂 环烷基、任选取代的杂芳基或任选取代的氨基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中Z是氢、甲基、乙基、羟基甲基、甲氧基乙基、N-甲基-哌啶基、 (叔丁氧基羰基)(羟基)哌啶基、羟基哌啶基、(羟基甲基)哌啶基、(羟 基)(甲基)哌啶基、吗啉-4-基、(甲氧基乙基)哌嗪基、甲基哌嗪基、4- 哌啶基哌啶基、咪唑基、甲基咪唑基、N-甲基氨基、N，N-二甲氨基、 N-异丙基氨基、N，N-二乙氨基、2，3-二羟基丙基氨基、2-羟基乙基氨 基、3-羟基丙基氨基、甲氧基乙基氨基、乙氧基羰基甲基氨基、苯基 甲基氨基、N-甲基-N-甲氧基氨基、

呋喃基甲基氨基、哌啶基乙基氨基、N-(2-N，N-二甲氨基乙基)-N-甲基 氨基、2-N，N-二甲氨基乙基氨基、N-甲基-N-(N-甲基哌啶-4-基)氨基、 2-吗啉-4-基-乙基氨基、3-吗啉-4-基-丙基氨基、3-咪唑基丙基氨基或 3-(2-氧代吡咯烷基)丙基氨基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中m是2；R5是Y-Z；Y是-C(O)-；且Z是

其中n是0、1、2或3。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中

R4是氢或甲基；

G是

A选自O、-N(R)-和-N(R)C(O)-；

Z111是-(CH2)n-环烷基-(CH2)n-；R是氢或烷基；n是0至5；

Ra是一个或多个各自独立选自H、OH、F、Cl、甲基和甲氧基 的取代基；

R1是一个或多个各自独立选自以下基团的取代基：H、CN、F、 CF3、OCF3、甲基、甲氧基和任选取代的氨基；且

其中所述氨基任选被一个或两个各自独立选自以下的基团取 代：烷基、烷氧基烷基、苯基、取代的苯基及任选取代的杂芳基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R1是4-甲基苯硫基或2-吡啶硫基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

其中Z100选自苯并[b]噻吩基、呋喃基和噻吩基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中Ra是烷氧基；A是-NH-C(O)-；且在A和Z100之间存在一个共价 键。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

其中A选自-N(R)-C(O)-N(R)-、-(CH2)n-N(R)C(O)N(R)-、-N(R)-和- N(R)-SO2-；R是氢或烷基；

Z100是

吡啶基，噻唑基，呋喃基，苯并呋喃基或噁唑基；

X是S、O或NR1，其中R1每次出现时独立为H或Me；

Ra是一个或多个各自独立选自H和F的取代基；R1是一个或多 个各自独立选自以下基团的取代基：H、F、Cl、Br、NO2、CF3、烷 基、烷氧基和烷氧基羰基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R4是甲基；m是1、2或3；R5是Y-Z，其中Y是-C(O)O-、-C(O)- 或-C(O)-(CH2)p-；且Z是氨基烷基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基或 羟基烷基氨基烷基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R4是甲基；G是

其中n是0至3；Z100是任选取代的选自以下的基团：吲哚基、茚基、 甲基茚基、甲基吲哚基、二甲氨基苯基、苯基、环己基和苯并呋喃 基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中

G是

Z100是任选取代的选自以下的基团：苯基、咪唑基、吲哚基、呋 喃基、苯并呋喃基和2，3-二氢苯并呋喃基；

其中Z100任选被一个或多个独立选自以下的取代基取代：F、Cl、 CN、任选取代的烷基、-O-(任选取代的烷基)、-COOH、-Z105- C(O)N(R)2、-Z105-N(R)-C(O)-Z200、-Z105-N(R)-S(O)2-Z200和-Z105-N(R)- C(O)-N(R)-Z200；

Z105是共价键或(C1-C6)；

Z200是任选取代的选自以下的基团：(C1-C6)、苯基和-(C1-C6)-苯 基；

Z110和Z111各自独立的是共价键或(C1-C3)基团，其任选被以下基 团取代：烷基、羟基、COOH、CN或苯基；且

A是O、-N(R)-C(O)-N(R)-、-N(R)-C(O)-O-、-N(R)-或-N(R)-C(O)-， 其中R是H或烷基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R4是甲基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中

G是

其中Z100是任选取代的基团，其选自苯并噁唑基、苯并噻唑基和苯并 咪唑基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R4是甲基；A是-NH-；只有一个Ra且其是H或F；Z100任选被 一个或多个各自独立选自以下的取代基取代：烷基、卤素、CF3和烷 氧基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中

G是

Z100是任选取代的选自以下的基团：苯基、吡咯基、吡啶基、苯 并咪唑基、萘基和

其中Z100任选被一个或多个各自独立选自以下的取代基取代：F、Cl、 Br、NO2、氨基、N-烷基氨基、N，N-二烷基氨基、CN、任选取代的 烷基、-O-(任选取代的烷基)和苯基；

Z110和Z111每次出现时独立为(C0-C3)，其任选被任选取代的苯基 取代；且

A是-N(R)-C(O)-N(R)-、-N(R)-S(O)2-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-或- N(R)-C(O)-O-。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R4是甲基和只有一个Ra且其是F。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

Z100是任选取代的选自以下的基团：苯基、异噁唑基、四氢萘基、 呋喃基、苯并呋喃基、吡啶基和吲哚基；

其中Z100任选被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立选 自F、CN、NO2、-C(O)H、-CONH2、-NHSO2CF3、任选取代的烷基、 任选取代的杂芳基和-O-(任选取代的烷基)；

Z110和Z111各自独立为任选取代的(C0-C3)；且

A是O、-N(R)-C(O)-(CH2)n-N(R)-、-C(O)-N(R)-、-N(R)-C(O)-O-、 -N(R)-C(O)-或-N(R)-。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中R4是甲基；Ra是H或甲氧基；且Z110和Z111各自是未取代的。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

其中R是H或低级烷基而n每次出现时独立为1至6。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中Z100是取代或未取代的苯基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是

其中Z100是任选取代的选自以下的基团：苯并噁唑基、苯并噻唑基和 苯并咪唑基。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中n是2；R6是H；m是1；r是1；且R4和R5各自是氢。

另一种更优选的式(I)化合物是其中在任何适宜的上述优选化合 物中G是4-苯氧基苯基。

本发明的另一方面涉及抑制患者的一种或多种蛋白激酶活性的 方法，所述方法包括给所述患者服用治疗有效量的式(I)的化合物或其 生理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物。优选的方法是其中 所述蛋白激酶选自：KDR、FGFR-1、PDGFRβ、PDGFRα、IGF-1R、 c-Met、Flt-1、Flt-4、TIE-2、TIE-1、Lck、Src、fyn、Lyn、Blk、hck、 fgr和yes。另一个优选的方法是其中所述蛋白激酶是蛋白丝氨酸/苏 氨酸激酶或蛋白酪氨酸激酶。更优选的方法是其中所述蛋白激酶是 TIE-2，而另一种更优选的方法是其中所述蛋白激酶活性参与T细胞 活化、B细胞活化、肥大细胞脱粒、单核细胞活化、炎性反应的加强 或其组合。

本发明的另一个方面涉及影响患者的过度增殖性紊乱的方法， 所述方法包括给所述患者使用治疗有效量的式(I)的化合物或其生理 学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物。

本发明的另一个方面涉及影响患者的血管生成的方法，所述方 法包括给所述患者使用治疗有效量的式(I)的化合物或其生理学上可 接受的盐、前药或生物活性代谢物。优选的方法是其中所述化合物 或其生理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物以能有效促进血 管发生或血管生成的量给药。更优选的方法是其中所述患者患有贫 血、局部出血、梗塞、移植排斥、创伤、坏疽或坏死。

本发明的另一方面涉及治疗患者的一种或多种溃疡的方法，所 述方法包括给所述患者使用治疗有效量的式(I)的化合物或其生理学 上可接受的盐、前药或生物活性代谢物。优选的方法是其中所述溃 疡是由细菌或真菌感染引起的；或所述溃疡是莫伦氏溃疡；或所述 溃疡为溃疡性结肠炎的症状。

本发明的另一方面涉及治疗患者的病症的方法，所述方法包括 给所述患者使用治疗有效量的式(I)的化合物或其生理学上可接受的 盐、前药或生物活性代谢物，其中所述病症是眼部病症、心血管疾病、 癌症、Crow-Fukase(POEMS)综合征、糖尿病、镰刀细胞贫血病、慢 性炎症、系统性狼疮、肾小球性肾炎、滑膜炎、肠炎、克罗恩氏病、 肾小球性肾炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化、移植物 排斥、莱姆病、败血症、von Hippel Lindau病、类天疱疮、牛皮癣、 佩吉特氏病、多囊性肾病、纤维变性疾病、肉样瘤病、肝硬化、甲 状腺炎、粘滞性过高综合征、Osler-Weber-Rendu疾病、慢性梗塞性 肺病、哮喘或烧伤、外伤、辐射、中风、低氧症、局部出血、卵巢 高刺激性综合征、子痫前期、月经过多、子宫内膜异位或单纯性疱 疹、带状疱疹、人类免疫缺陷病毒、副痘病毒、原生动物或弓形体 病引起的感染。

优选的方法是其中所述眼部病症是：

眼或视网膜黄斑水肿、眼新血管病、巩膜炎、光角膜切开术、 眼色素层炎、玻璃体炎、近视、眼凹、慢性视网膜脱离、激光治疗 后并发症、结膜炎、遗传性黄斑变性、Eales病、视网膜病或视网膜 黄斑变性；

所述心血管病是：

动脉粥样硬化、再狭窄、局部出血/再灌注损伤、血管闭塞或颈 动脉梗塞性疾病；

所述癌症是：

实体瘤、肉瘤、纤维肉瘤、骨瘤、黑素瘤、成视网膜细胞瘤、 成横纹肌细胞肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、畸胎样瘤、造 血系统恶性肿瘤、Kaposi(卡波西氏)肉瘤、何杰金氏病、淋巴瘤、骨 髓瘤、白血病或恶性腹水；且

所述糖尿病病症是：

胰岛素依赖性糖尿病青光眼、糖尿病性视网膜病或微血管病。

本发明的另一方面涉及降低患者生育力的方法，所述方法包括给 所述患者使用有效量的式(I)的化合物或其生理学上可接受的盐、前 药或生物活性代谢物的步骤。

本发明的另一方面涉及一种方法，其中所述式I的化合物或其生 理学上可接受的盐、前药或生物活性代谢物与原血管生成生长因子 联合给药。优选的方法是其中所述原血管生成生长因子选自VEGF、 VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E、HGF、FGF-1、FGF-2， 其衍生物及其抗个体基因型(antiiodotypic)抗体。

发明详述

本发明的一个实施方案提供了如上所述的式I化合物。在式I化 合物的优选基团中取代基的含义如下。

优选R1选自如下：F、Cl、Br、I、CH3、NO2、OCF3、OCH3、 CN、CO2CH3、CF3、叔丁基、吡啶基、取代或未取代的噁唑基、取 代或未取代的苄基、取代或未取代的苯磺酰基、取代或未取代的苯 氧基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的氨基、羧基、取代的 和未取代的四唑基、取代的和未取代的苯乙烯基、取代的和未取代 的芳硫基、取代或未取代的烷硫基、取代的和未取代的杂芳硫基； CH2ORc，其中Rc是氢或者取代或未取代的烷基或芳基；及-W-(CH2)t- NRdRe，其中t是约1至约6的整数；W是化学键、O、S、S(O)、S(O)2 或NRf，其中Rf是H或烷基，而Rd和Re独立为H、烷基、烷酰基或 SO2-烷基；或Rd、Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环。

优选Ra选自如下：F、Cl、Br、I、CH3、NO2、OCF3、OCH3、 CN、CO2CH3、CF3、叔丁基、吡啶基、取代或未取代的噁唑基、取 代或未取代的苄基、取代或未取代的苯磺酰基、取代或未取代的苯 氧基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的氨基、取代或未取代 的烷硫基、羧基、取代的和未取代的四唑基、取代的和未取代的苯 乙烯基、取代的和未取代的芳硫基、取代的和未取代的杂芳硫基； CH2ORc，其中Rc是氢或者取代或未取代的烷基或芳基；且-W-(CH2)t- NRdRe，其中t是约1至约6的整数；W是化学键、O、S、S(O)、S(O)2 或NRf，其中Rf是H或烷基，而Rd和Re独立为H、烷基、烷酰基或 SO2-烷基；或Rd、Re和它们所连接的氮原子一起形成5或6元杂环。

式(I)的化合物可以与药学上可接受的酸形成的盐的形式存在。 本发明包括这些盐。此类盐的实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、 甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒 石酸盐[例如(+)-酒石酸盐、(-)-酒石酸盐或其混合物，包括外消旋混 合物]、琥珀酸盐、苯甲酸盐，以及与氨基酸如谷氨酸形成的盐。这 些盐可以通过本领域技术人员已知的方法制备。

具有酸性取代基的某些式(I)的化合物可以与药学上可接受的碱 形成的盐的形式存在。本发明包括这样的盐。此类盐的实例包括钠 盐、钾盐、赖氨酸盐和精氨酸盐。这些盐可以通过本领域技术人员 已知的方法制备。

某些式(I)的化合物及其盐可以存在一种以上的晶体形式，本发明 包括了各晶体形式及其混合物。

某些式(I)的化合物及其盐还可以以溶剂合物的形式存在，例如水 合物，本发明包括了各种溶剂合物及其混合物。

某些式(I)的化合物可以含有一个或多个手性中心，并可以以不同 的旋光体形式存在。当式I的化合物含有一个手性中心时，这些化合 物以两种对映异构体的形式存在，本发明包括了这两种对映异构体以 及各对映异构体的混合物，如外消旋混合物。这些对映异构体可以通 过本领域技术人员已知的方法拆分：例如形成非对映异构体盐，随 后可通过如结晶分离；形成非对映异构体衍生物或络合物，随后可例 如通过结晶、气-液相或液相色谱进行分离；用对映异构体特异性试 剂对一种对映异构体进行选择性反应，例如酶酯化进行分离；或在手 性环境中，例如在手性载体如结合了手性配体的二氧化硅，或者在手 性溶剂的存在下进行气-液相或液相色谱进行分离。应领会当通过上 述分离方法之一将需要的对映异构体转变为另一种化学物质时，需要 进一步的步骤来释放出所需的对映异构体形式。或者，特定的对映异 构体可以通过不对称合成，采用旋光性试剂、底物、催化剂或溶剂 来合成，或通过不对称转化反应将一种对映异构体转变为另一种来合 成。

当式(I)的化合物含有一个以上的手性中心时，其可以非对映异构 体的形式存在。可以通过本领域技术人员已知的方法来分离这些非 对映异构体对，例如通过色谱或结晶进行分离，而每对中的单一对映 异构体可以如上所述进行分离。本发明包括式I化合物的各非对映异 构体及其混合物。

某些式(I)的化合物可以存在不同的互变异构形式或几何异构体， 本发明包括了式I化合物的各互变异构体和/或几何异构体及其混合 物。

某些式(I)的化合物以不同的稳定构象形式存在，这些不同的构象 形式可被分离。由于围绕不对称单键的旋转受限制(例如由于空间位 阻或环张力)带来的扭转不对称性，使不同构象异构体的分离成为可 能。本发明包括式(I)化合物的各构象异构体及其混合物。

某些式(I)的化合物可以两性离子形式存在，本发明包括式(I)化合 物的各种两性离子形式及其混合物。

在本文中所用的杂芳基包括杂芳基环系(例如其例子有(但不限 于)：噻吩基、吡啶基、吡唑基、异噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、 吲唑基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、嘧啶基、吡 嗪基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基或四唑基)以及其中的碳环芳环、 碳环非芳环或杂芳基环与一个或多个其它杂芳基环稠合的杂芳基环 系(例如其例子有(但不限于)：苯并(b)噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁 唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噁二唑基、吲哚基、四氢 吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、喹啉基、咪唑并吡啶、喹唑啉嘌呤、 吡咯并[2，3-d]嘧啶、吡唑并[3，4-d]嘧啶)及其N-氧化物。取代的杂芳 基优选被一个或多个各自独立选自以下的取代基取代：卤素、羟基、 烷基、烷氧基、烷基-O-C(O)-、烷氧基烷基、杂环烷基、任选取代的 苯基、硝基、氨基、单-取代的氨基或二-取代的氨基。

在本文中所用的杂环(杂环基)基团指杂芳基和杂环烷基。

在本文中所用的杂双环基团指饱和、部分不饱和或不饱和的含 有一个或多个杂原子的双环基团。

在本文中所用的芳基烷基是通过具有1至约6个碳原子的脂族 基团与某化合物连接的芳族取代基。优选的芳基烷基是苄基。

在本文中所用的杂芳烷基是通过具有1至约6个碳原子的脂族 基团与某化合物连接的杂芳族取代基。

在本文中所用的杂环烷基是具有3至8个原子并包括至少一个 杂原子如氮原子、氧原子或硫原子的非芳族环系。

在本文中所用的脂族基团或符号如“(C0-C6)”包括直链、支链或 环状烃，它们完全饱和或者含有一个或多个不饱和单元。当该基团是 C0时，意味着该部分不存在，或换言之该部分是一个化学键。

在本文中所用的芳族基团(或芳基)包括芳族的碳环环系(例如苯 基)和稠合的多环芳族环系(例如萘基和1，2，3，4-四氢萘基)。

本文中所用的酰氧基是-OC(O)R。

在本文中所用的术语“天然氨基酸”指本领域已知的23种天然氨 基酸，它们是(以其3个首字母组合表示)：Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、 Cys-Cys、Glu、Gln、Gly、His、Hyl、Hyp、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、 Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val。术语非天然氨基酸指式NH2- (C(X)2)n-COOH的化合物，它们是α-(当n是1时)或β-(当n是2时)氨 基酸，其中X每次出现时独立为本领域技术人员认可的任何侧链部 分；非天然氨基酸的实例包括(但不限于)：羟基脯氨酸、高脯氨酸、 4-氨基-苯丙氨酸、β-(2-萘基)丙氨酸、正亮氨酸、环己基丙氨酸、β-(3- 吡啶基)丙氨酸、β-(4-吡啶基)丙氨酸、α-氨基异丁酸、尿刊酸、N，N- 四甲基脒基-组氨酸、N-甲基丙氨酸、N-甲基-甘氨酸、N-甲基-谷氨 酸、叔丁基甘氨酸、α-氨基丁酸、叔丁基丙氨酸、鸟氨酸、α-氨基异 丁酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、5-氨基戊酸、12-氨基十二烷酸、2-氨 基二氢化茚-2-甲酸等，及其衍生物，特别是其中所述胺的氮原子被单 -或二-烷基化的衍生物。

在本文中，很多部分或取代基被命名为“取代或未取代的”或“任 选取代的”。当某部分被这些术语之一修饰时，其表示该部分中任何 本领域技术人员已知的可取代的部分可以被取代，其包括一个或多个 取代基，其中如果存在一个以上的取代基，则各取代基独立进行选 择。这些取代的方式是本领域熟知的和/或是本公开文本中所教导的。 作为取代基的基团的一些示例性的实例为(但不限于)：烷基(其本身 也可被取代，如-C1-C6-烷基-OR、-C1-C6-烷基-N(R)2和-CF3)、烷氧基 (其本身也可被取代，如-O-C1-C6-烷基-OR、-O-C1-C6-烷基-N(R)2和 OCF3)、卤素或卤素基团(F、Cl、Br、I)、羟基、硝基、氧代基团、CN、 COH、COOH、氨基、N-烷基氨基或N，N-二烷基氨基(其中烷基也可 被取代)、酯(-C(O)-OR，其中R是如烷基、芳基等基团，这些基团可 以被取代)、芳基(最优选苯基，可以被取代)和芳基烷基(可以被取代)。

式I化合物的适当的合成路线在方案I-XII中给出。方案I说明 了3-卤代-4-氯吡唑并嘧啶向N1-取代的3-芳基-4-氨基吡唑并嘧啶的 转变。方案II说明了在3-卤代-4-氨基吡唑并嘧啶的N-1位进行的取 代，接着用芳基置换卤基。方案III阐明了在3-芳基-4-氨基吡唑并嘧 啶的N-1位进行的取代。方案IV说明了4-羟基吡唑并嘧啶向1-取代 的3-溴-4-氯吡唑并嘧啶的转变。方案V阐明了吡唑并嘧啶核的形成。 方案VI说明了3-芳基-4-氨基吡唑并嘧啶的形成。方案VII说明了对 N-1取代基的进一步处理。P表示一种适宜的氨基保护基。方案VIII 举例说明用于方案I中的硼酸芳基酯的制备。方案IX和X显示了对 N-1取代基的改性。方案XI举例说明3-芳基的官能化。在方案I-XI 中，如本领域所知，某些反应可能需要对不参与反应的官能团进行适 当的保护/脱保护。

本发明的化合物具有抗血管生成性质。这些抗血管生成性质至 少部分是由于对血管生成过程中必需的蛋白酪氨酸激酶的抑制。为 此，这些化合物可以用作抗如下疾病的活性剂，例如关节炎、动脉粥 样硬化、再狭窄、牛皮癣、血管瘤、心肌血管生成、冠状和脑血管 侧支、局部缺血性四肢血管生成、局部出血/再灌注损伤、伤口愈合、 消化溃疡性螺杆菌属相关的疾病、病毒引起的血管生成紊乱、骨折、 Crow-Fukase综合征(POEMS)、子痫前期、月经过多、猫抓热、潮红、 新血管性青光眼和视网膜病如与糖尿病性视网膜病有关的眼疾病，早 产儿视网膜病或与年龄有关的视网膜黄斑变性。此外，一些此类化合 物可以用作抗如下疾病的活性剂：实体瘤、恶性腹水、von Hippel Lindau病、造血系统癌症和过度增殖性紊乱如甲状腺增生(特别是格 雷夫司氏(Graves)病)及囊肿(如多囊卵巢综合征(Stein-Leventhal(史雷 二氏)综合征)的卵巢基质血管过多和多囊性肾病。

此外，一些此类化合物可以用作治疗如下疾病的活性剂：烧伤， 慢性肺病，中风，息肉，过敏症，慢性和急性炎性反应，延迟型过 敏症，卵巢高刺激性综合征，与脑瘤有关的脑水肿，高空、外伤或 低氧症诱发的脑或肺水肿，眼和视网膜黄斑水肿，腹水，肾小球性 肾炎和其它其中血管高渗透性、流出、渗出、蛋白溢出或水肿是疾 病病症的疾病。这些化合物还可用于治疗其中蛋白溢出导致血纤维 蛋白和细胞外基质沉积，促进基质增殖的疾病(例如瘢痕疙瘩、纤维 变性疾病、肝硬化和腕管综合征)。VEGF产生的增加强化了炎症过 程如单核细胞募集和活化。本发明的化合物还可用于治疗炎性疾病 如炎性肠疾病(IBD)和克罗恩氏病。

合成

本发明的化合物可使用方案I-XI中描述的方法制备。

方案I

方案II

方案III

方案IV

方案V

方案VI

方案VII

方案VIII

方案IX

方案X

方案XI

一种优选的制备本发明化合物的方法涉及制备4，4，5，5-四甲基- 1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间体(IV)(参见方案XII)。所述方法包 括在非质子碱存在下，使酰氯(II)与(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯胺(III)反应。一般将酰氯(II)和(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二 氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺(III)以大约相等的摩尔量溶解在有机溶剂 中。将约1当量至约2当量的非质子碱加入到所述溶液中。优选在 加入所述碱前将所述溶液冷却至约-10℃至约10℃，再将所述碱滴加 到溶液中。加入碱后，室温下搅拌所述溶液直到反应完全(由薄层层 析、HPLC或其它标准分析技术测定)。一般所述反应在反应约10小 时至约26小时后完成。

方案XII：

4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间体的制备方法

4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间体(IV)可用于制 备式I的化合物，通过在四(三苯基膦)合钯(0)和碳酸钠存在下，使其 与3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(V)反应来完成(参见方案XIII)。

在如乙醚等极性有机溶剂中，用4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼 杂环戊烷-2-基中间体(IV)、四(三苯基膦)合钯(0)和碳酸钠的含水混合 液处理3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(V)。一般4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二 氧杂硼杂环戊烷-2-基中间体(IV)在所述溶液中的存在量为约1当量 约1.5当量，四(三苯基膦)合钯(0)的存在量为约0.01当量至约0.1当 量和碳酸钠的存在量为约1.5当量至约3当量，以上当量值相对于3- 碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(V)计算。将所述溶液加热至约50℃至约100 ℃。由薄层层析、HPLC或其它标准分析技术监测反应，以确定反应 完成时间。一般在反应约16小时至约30小时后完成反应。

方案XIII：

其中Z110-A-Z111为-NHC(O)-的式I化合物的制备方法

式II化合物可通过在非质子碱存在卞使式VI表示的羧酸与草酰 氯反应制备。

在一个优选的实施方案中，在方案XII和XIII的方法中以及在 制备酰氯(II)的方法中，Z100为任选被R1取代的吲哚基。在一个更优 选的实施方案中，在方案XII和XIII的方法中以及在制备酰氯(II)的 方法中，Z100为1-甲基-吲哚-2-基或1-甲基-吲哚-3-基。

在另一个优选的实施方案中，在方案XII和XIII的方法中以及 在制备酰氯(II)的方法中，Z100为任选被R1取代的吲哚基；(4，4，5，5-四 甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺为具有式VII的结构：

和4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间体如式VIII所 示：

所制得的本发明化合物可由式IX所表示：

在一个更优选的实施方案中，在方案XII和XIII的方法中以及 在制备酰氯(II)的方法中，Z100为1-甲基-吲哚-2-基或1-甲基-吲哚-3- 基；(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺如式VII所示； 4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基中间体如式X所示：

所制得的本发明化合物可由式XI所表示：

在一个更优选的实施方案中，在上述任何方法中R2为4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基。

VEGF是已知的造成血管渗透性过高和形成水肿的仅有的血管 生成生长因子，就此而言它们是独一无二的。实际上，与很多其它生 长因子的表达或使用有关的血管渗透性过高和水肿似乎是通过VEGF 的产生来介导的。炎性细胞因子刺激VEGF的产生。低氧症导致很 多组织中VEGF的明显上调。于是，涉及梗塞、闭塞、局部出血、贫 血或循环损伤的情况一般引起VEGF/VPF介导的反应。血管渗透性 过高、相关性水肿、透皮交换的变化和大分子外渗(其常常伴发白血 球渗出)可以导致过量的基质沉积、异常的基质增殖、纤维变性疾病 等。因此，VEGF介导的渗透性过高可显著地造成具有这些病因学特 征的紊乱。

由于胚胞植入、胎盘发育和胚胎发生是血管生成依赖性的，因此 本发明的某些化合物可用作避孕药和抗生育药。

考虑到上述紊乱在很大程度上是由涉及KDR/VEGFR-2和/或 Flt-1/VEGFR-2和/或TIE-2酪氨酸激酶的蛋白酪氨酸激酶活性所介导 的。通过抑制这些酪氨酸激酶的活性，上述紊乱的发展将受到抑制， 这是因为此疾病状态的血管生成或血管渗透性过高因素被严重地缩 减。本发明某些化合物通过对特异性酪氨酸激酶的选择性，最大程度 地降低了在使用低选择性酪氨酸激酶抑制剂时产生的副作用。本发 明的某些化合物还是FGFR、PDGFR、c-Met和IGF-1-R的有效抑制 剂。这些受体激酶可以直接或间接加强多种疾病中的血管生成和过 度增殖反应，因此，它们的抑制可以阻止疾病的恶化。

本发明的化合物对蛋白激酶具有抑制活性，即这些化合物通过 蛋白激酶调节信号传导。本发明的化合物抑制丝氨酸/苏氨酸和酪氨 酸激酶类的蛋白激酶。具体地讲，这些化合物选择性地抑制 KDR/FLK-1/VEGFR-2酪氨酸激酶的活性。本发明的某些化合物还抑 制其它酪氨酸激酶如Flt-1/VEGFR-1、Flt-4、Tie-1、Tie-2、FGFR、 PDGFR、IGF-1R、c-Met，Src-亚类激酶如Lck、Src、hck、fgr、fyn、 yes等的活性。此外，本发明的一些化合物显著抑制丝氨酸/苏氨酸激 酶如PKC、MAP激酶、erk、各种CDK、Plk-1或Raf-1，它们在细胞 增殖和细胞循环过程中扮演了重要的角色。本发明通式化合物对特 定蛋白激酶的效力和特异性常常是可以改变的，并通过取代基(即 R1、R2、R3、A和环1)的性质、数目和排列的改变以及构象限制得以 实现最佳化。此外，某些化合物的代谢物也可以具有显著的蛋白激酶 抑制活性。

当给需要这些化合物的个体使用时，本发明的化合物抑制这些个 体中血管渗透性过高和水肿的形成。据信，这些化合物通过抑制参与 血管渗透性过高和水肿形成过程的KDR酪氨酸激酶的活性而发挥作 用。KDR酪氨酸激酶也可称作FLK-1酪氨酸激酶、NYK酪氨酸激 酶或VEGFR-2酪氨酸激酶。当血管内皮细胞生长因子(VEGF)或其它 活化配体(如VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E或HIV Tat蛋白)结合细胞 内皮细胞表面上的KDR酪氨酸激酶受体时，KDR酪氨酸激酶被激 活。这些KDR酪氨酸激酶活化后，产生血管渗透性过高，并有流体 从血流中通过血管壁进入到组织间隙中，于是形成水肿区域。血细胞 渗出还常常伴发此反应。类似地，过度的血管高渗透性可以阻断跨关 键组织和器官(如肺和肾)中内皮的正常分子交换，引起大分子外渗和 沉积。这种对KDR刺激的急性反应(据信其加速随后的血管生成过程) 后，延长的KDR酪氨酸激酶刺激导致血管内皮细胞的增殖和趋化性 以及新血管的形成。通过抑制KDR酪氨酸激酶活性，或者通过阻断 激活配体的产生，或者通过阻断激活配体与KDR酪氨酸激酶受体结 合，或通过阻止受体二聚化和磷酸根转移作用，或通过抑制KDR酪 氨酸激酶活性(抑制该酶的磷酸化功能)或者通过一些干扰下游信号的 其它机理(D.Mukhopedhyay等，Cancer Res.58：1278-1284(1998)和其 中引用的文献)，渗透性过高及相关的外渗、随后的水肿形成和基质 沉积以及血管生成反应，可以受到抑制或最小化。

本发明一组优选的化合物具有抑制KDR酪氨酸激酶活性而不显 著抑制Flt-1酪氨酸激酶活性(Flt-1酪氨酸激酶也称为VEGFR-1酪氨 酸激酶)的性质。KDR酪氨酸激酶和Flt-1酪氨酸激酶通过VEGF分 别结合KDR酪氨酸激酶受体和Flt-1酪氨酸激酶受体而被激活。本 发明某些优选的化合物是独一无二的，因为它们抑制通过激活配体激 活的一种VEGF受体酪氨酸激酶(KDR)的活性而不抑制其它也被某些 激活配体所激活的受体酪氨酸激酶(如Flt-1)。因此，本发明的某些优 选化合物以此方式在它们的酪氨酸激酶抑制性中是有选择性的。

在一个实施方案中，本发明提供了治疗患者的蛋白激酶介导的病 症的方法，包括给所述患者使用治疗或预防有效量的一种或多种式I 的化合物。

“蛋白激酶介导的病症”或“蛋白激酶活性介导的病症”是一种病症， 如一种疾病或其它不需要的身体症状，其发生或发展至少部分依赖于 至少一种蛋白激酶的活性。所述蛋白激酶可以是如蛋白酪氨酸激酶 或蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。

接受治疗的患者可以是任何动物，优选哺乳动物，如驯养的动物 或家畜。更优选所述患者是人。

“治疗有效量”是完全或部分抑制病症的发展或者至少部分减轻 该病症的一种或多种症状的式I化合物或者两种或多种此类化合物的 联合形式的量。治疗有效量也可以是预防有效的量。治疗有效量依 赖于患者的体形大小、性别、被治疗的病症、该病症的严重性及要 获得的结果。对于指定的患者，治疗有效量可以通过本领域技术人员 已知的方法确定。

本发明的方法用于治疗蛋白激酶介导的病症，如上述病症中的任 何一种。在一个实施方案中，蛋白激酶介导的病症的特征是不需要的 血管生成、水肿或基质沉积。例如，此病症可以是一种或多种溃疡，如 细菌或真菌引起的溃疡、莫伦氏溃疡和溃疡性结肠炎。病症也可以 由微生物感染引起，如莱姆病、败血症、脓毒性休克或单纯性疱疹、 带状疱疹、人类免疫缺陷病毒、原生动物、弓形体病或副痘病毒的 感染；血管生成紊乱，如von Hippel Lindau病、多囊性肾病、类天 疱疮、佩吉特氏病和牛皮癣；生殖系统病症，如子宫内膜异位、卵巢 高刺激性综合征、子痫前期或月经过多；纤维变性和水肿病症，如肉 样瘤病、纤维变性疾病、肝硬化、甲状腺炎、系统性粘滞性过高综 合征、Osler-Weber-Rendu病、慢性梗塞性肺病、哮喘和烧伤、外伤、 辐射、中风、低氧症或局部出血后水肿；或炎性/免疫性病症，如系 统性狼疮、慢性炎症、肾小球性肾炎、滑膜炎、肠炎、克罗恩氏病、 类风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化和移植物排斥。适宜的蛋 白激酶介导的病症还包括镰刀细胞贫血病、骨质疏松、骨硬化病，肿 瘤诱发的血钙过多和骨转移瘤。除了视网膜病和视网膜黄斑变性外， 可以通过本发明方法治疗的其它蛋白激酶介导的病症包括眼部病症， 如眼和视网膜黄斑水肿、眼新血管病、巩膜炎、光角膜切开术、眼 色素层炎、玻璃体炎、近视、眼凹、慢性视网膜脱离、激光治疗后 并发症、结膜炎、遗传性黄斑变性和Eales(伊尔斯氏)病。

本发明的化合物也可以用于治疗心血管病症，如动脉粥样硬化、 再狭窄、血管闭塞和颈动脉梗塞性疾病。

本发明的化合物还可以用于治疗与癌症相关的适应征，如实体瘤， 肉瘤(特别是内皮性骨髓瘤和骨肉瘤)，成视网膜细胞瘤，成横纹肌细 胞肉瘤，成神经细胞瘤，造血系统恶性肿瘤，包括白血病和淋巴瘤， 肿瘤诱发的胸膜或心包渗漏和恶性腹水。

本发明的化合物还可以用于治疗Crow-Fukase(POEMS)综合征和 糖尿病，如青光眼、糖尿病性视网膜病和微血管病。

Src、Tec、Jak、Map、Csk、NFκB和Syk类的激酶在调节免疫 功能中起关键作用。Src类通常包括Fyn、Lck、Fgr、Fes、Lyn、Src、 Yrk、Fyk、Yes、Hck和Blk。Syk类通常理解为只包括Zap和Syk。 TEC类包括Tec、Btk、Rlk和Itk。Janus类激酶涉及生长因子和原炎 性细胞因子信号通过一些受体的传导。虽然Tec类激酶的成员BTK 和ITK在免疫生物学中起的作用还不明确，但抑制剂对它们的调节可 以改善治疗效果。Csk类通常被认为包括Csk和Chk。激酶RIP、 IRAK-1、IRAK-2、NIK、p38MAP激酶、Jnk、IKK-1和IKK-2涉及 关键原炎性细胞因子如TNF和IL-1的信号传导路径。借助它们抑制 一种或多种这些激酶的能力，式I的化合物可以作为免疫调节剂，用 于维持同种移植物、治疗自身免疫性疾病和治疗败血症和脓毒性休 克。通过它们调节T细胞、B细胞、肝细胞、单核细胞和嗜中性白 细胞的迁移或激活，这些化合物可以用来治疗自身免疫性疾病和败血 症。预防移植排斥，或者是固体器官的宿主抗移植物病，或者是骨髓 的移植物抗宿主病，受到目前使用的免疫抑制剂毒性的限制，应得益 于具有改进的治疗指数的有效药物。基因靶向实验已表明了Src在破 骨细胞(负责骨吸收的细胞)的生物学中的重要作用。式I的化合物，通 过它们调节Src的能力，还可以用于治疗骨质疏松、骨硬化病、佩吉 特氏病、肿瘤引起的血钙过多并用于治疗骨转移瘤。

已表明一些蛋白激酶是原致癌基因。染色体破坏(在染色体5上 的ltk激酶断裂位点)、象对Abl基因的情况那样用BCR易位(费城染 色体)、在如c-Kit或EGFR情况下的截短，或突变(例如Met)，导致 调节障碍的蛋白产生，将其从原致癌基因转变为致癌基因产物。在其 它肿瘤中，瘤形成是由自分泌或旁分泌配体/生长因子受体相互作用 驱动的。src类激酶的一些成员一般参与下游信号传导，于是加强了 癌形成，且通过过度表达或突变它们本身可以变成致癌性。通过抑制 这些蛋白的蛋白激酶活性，可以破坏这些疾病过程。血管再狭窄可以 包括FGF和/或PDGF-促进的平滑肌和内皮细胞增殖。对FGFR、 PDGFR、IGFl-R和c-Met在体内的配体刺激是原血管生成性的，并 强化血管生成依赖性的疾病。抑制FGFr、PDGFr、c-Met或IGFl-R 激酶活性，不论针对个别的或是联合的，都可以是抑制这些现象的有 效策略。因此，抑制正常或异常的c-kit、c-met、c-fms、src-类成员、 EGFr、erbB2、erbB4、BCR-Abl、PDGFr、FGFr、IGFl-R和其它受 体或胞质酪氨酸激酶的激酶活性的式I化合物，可能对治疗良性和肿 瘤性增殖疾病是有价值的。

在很多病理症状中(例如原发实体瘤和转移瘤、Kaposi(卡波西) 氏肉瘤、类风湿性关节炎、由于不适当的眼新血管形成导致的失明、 牛皮癣和动脉粥样硬化)，疾病进展伴随持久的血管生成。多肽生长 因子常常由疾病组织或相关炎性细胞产生，而其相应的内皮细胞特异 性受体酪氨酸激酶(例如，KDR/VEGFR-2、Flt-1/VEGFR-1、Flt-4、 Tie-2/Tek和Tie)是刺激内皮细胞生长、迁移、组构、分化及必不可 少的新功能性血管的建立所必需的。根据在介导血管高渗透性中 VEGF的血管渗透性因子活性的结果，人们还确信VEGFR激酶的 VEGF刺激在以下问题的形成中起重要作用：肿瘤腹水，脑和肺水肿， 胸膜和心包渗漏，延迟型过敏反应，外伤、烧伤、局部出血、糖尿病 性并发症、子宫内膜异位、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、心肺搭桥 术后相关低血压和高渗透性后组织水肿和器官功能不全，以及由于不 适当的新血管形成导致青光眼或失明的眼水肿。除VEGF外，最近鉴 定的VEGF-C和VEGF-D，及病毒编码的VEGF-E或HIV-Tat蛋白 也可以通过刺激VEGFR激酶引起血管渗透性过高反应。 KDR/VEGFR-2和/或Tie-2也在造血干细胞的选择群落中表达。此群 落的某些成员本质上是多能的，并可以被生长因子刺激分化为内皮细 胞，并参与血管发生性血管生成过程。为此，这些物质已被人们称为 内皮祖细胞(EPCs)(J.Clin.Investig.103：1231-1236(1999))。在一些 内皮祖细胞中，Tie-2可以在它们的募集、粘附、调节和分化中起一定 作用(Blood，4317-4326(1997))。因此，能阻断内皮细胞特异性激酶的 激酶活性的式I的某些试剂可以抑制涉及这些情形的疾病的发展。

据信Tie-2(Ang2)的拮抗剂配体的血管去稳定作用在内皮中引起 不稳定的“塑料”态。在高VEGF水平的存在下，可以导致强有力的血 管发生反应；但是，在VEGF或VEGF-相关刺激物不存在时，可以发 生直接的血管退化和内皮编程性细胞死亡(Genes和Devel.13：1055- 1066(1999))。在类似的方式中，在VEGF相关刺激物的存在或不存 在下，Tie-2激酶抑制剂分别可以是原血管形成性的或抗血管生成性 的。因此，Tie-2抑制剂可以与适当的原血管生成性刺激子如VEGF 一起使用，以促进某些情形如伤口愈合、梗塞和局部出血中的治疗性 血管生成。

式I的化合物或其盐或含其治疗有效量的药物组合物可用于治 疗蛋白激酶介导的病症，如上述良性和肿瘤性增殖疾病或免疫系统的 紊乱。例如，这些疾病包括自身免疫性疾病如类风湿性关节炎、甲状 腺炎、I型糖尿病、多发性硬化、肉样瘤病、炎性肠疾病、克罗恩氏 病、重症肌无力和系统性红斑狼疮；牛皮癣、器官移植排斥(如肾排 斥、移植物抗宿主病)、良性和肿瘤性增殖疾病、人癌症如肺、乳腺、 胃、膀胱、结肠、胰腺、卵巢、前列腺和直肠癌症以及造血系统恶 性肿瘤(白血病和淋巴瘤)，以及涉及不适当的血管化的疾病例如糖尿 病性视网膜病、早产儿视网膜病、人类的由于与年龄有关的视网膜 黄斑变性引起的脉络膜新血管形成和婴儿血管瘤。此外，这些抑制剂 可以用于治疗涉及VEGF介导的水肿、腹水、渗漏和渗出的疾病，包 括，例如，视网膜黄斑水肿，脑水肿，急性肺损伤和成人呼吸窘迫综 合征(ARDS)。

本发明的化合物还可以用于预防上述疾病。

考虑到上述紊乱很大程度上由涉及VEGF受体(例如KDR、Flt-1 和/或Tie-2)的蛋白酪氨酸激酶活性所介导。通过抑制这些受体酪氨 酸激酶的活性，上述紊乱的进展受到抑制，这是由于此疾病态的血管 生成因素被严重缩减。本发明化合物通过它们对特异性酪氨酸激酶 的选择，最大程度地降低了当使用选择性小的酪氨酸激酶抑制剂时所 产生的副作用。

本发明的另一方面提供了如上所定义的式I化合物用作药物，特 别是用作蛋白激酶活性如酪氨酸激酶活性、丝氨酸激酶活性和苏氨 酸激酶活性的抑制剂的用途。本发明的另一方面提供了如上所定义 的式I化合物在制备用于抑制蛋白激酶活性的药物中的用途。

在本发明中使用了下列定义：

“生理学上可接受的盐”指保留游离碱的生物有效性和性质的那 些盐，其可以通过与无机酸或有机酸反应制备，无机酸例如氢氯酸、 氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸，有机酸如磺酸、羧酸、有机磷酸、甲磺 酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、乳酸、酒石酸等。

药物制剂

本发明的化合物可以直接或以药物组合物形式给予病人服用，在 药物组合物中它们以治疗或改善血管渗透性过高、水肿和相关疾病 的剂量与适宜的载体或赋形剂(一种或多种)混合。这些化合物的混合 物也可以以简单的混合物形式或以适宜的配制药物组合物给予该患 者。治疗有效量还指足以给不适当的新血管形成、过度增殖性疾病、 水肿、VEGF相关性渗透性过高和/或VEGF相关性低血压带来预防 或减轻作用的化合物(一种或多种)的量。有关本申请化合物的配制和 服用技术，请见“Remington′s Pharmaceutical Sciences”Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版本。

给药途径

给药的适宜途径可包括如口服、滴眼、直肠、透粘膜、局部或 肠道给药。非肠道给药，包括肌肉内、皮下、髓内注射，以及鞘内、 直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射。

或可局部使用此化合物，而不是采用全身给药的方式，例如通过 直接给水肿部位注射此化合物，该注射常常采用贮库或缓释制剂的形 式。

此外，可以在靶向药物转运系统中使用此药物，例如在用内皮细 胞特异性抗体包囊的质脂体中。

组合物/制剂

本发明的药物组合物可以以已知的方式制备，例如通过常规混 合、溶解、制粒、制糖衣丸、磨细、乳化、包囊、包载或冻干方法 来制备。

因此，本发明使用的药物组合物可以已常规方式配制，使用一种 或多种生理学上可接受的包括赋形剂和辅剂的载体，它们有利于将活 性化合物加工为可药用的制剂。适宜的制剂依赖于所选择的给药途 径。

对于注射，本发明的试剂可以在水溶液中配制，优选生理相容的 缓冲剂，如Hanks溶液、Ringer氏溶液或生理盐水缓冲剂。对于透粘 膜给药，在该制剂中使用适于所透过屏障的渗透剂。这样的渗透剂一 般是本领域已知的。

对于口服给药，该化合物可以容易地通过将活性化合物与本领域 已知的药用载体混合进行配制。这些载体能使本发明的组合物配制 为片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊剂、溶液剂、凝胶剂、糖浆剂、浆液、 混悬剂等，以使接受治疗的患者口服摄入。口服用药物制剂可以按照 如下方法制备：将活性化合物与固体赋形剂混合，任选研磨所得混合 物，如果需要则加入适宜的辅剂，之后加工颗粒的混合物，以获得片 剂或糖衣丸核芯。具体地讲，适宜的赋形剂为填充剂如糖，包括乳 糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂如玉米淀粉、小麦淀粉、 稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙甲基 纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可 以加入崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、藻酸或其盐如藻酸钠。

对糖衣丸核芯进行适当包衣。为此，可以使用浓糖溶液，这些糖 溶液可任选含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆胶、聚 乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及适宜的有机溶剂或溶剂混合物。 可以向片剂或糖衣丸包衣中加入染料或色素以识别或区别活性化合 物剂量的不同联合形式。

可以口服使用的药物制剂包括明胶制成的推入配合胶囊，以及明 胶和增塑剂如甘油和山梨醇制成的软的密封胶囊。推入配合胶囊可 以含有活性组分，其与填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉和/或润滑剂如 滑石或硬脂酸镁以及任选地存在的稳定剂混合。在软胶囊中，活性化 合物可以溶解于或悬浮于适当的液体如脂肪油、液体石蜡或液体聚 乙二醇中。此外，可以加入稳定剂。口服给药的所有制剂的剂量应适 于此给药方式。

对于颊部给药，组合物可以是以常规方式配制的片剂或锭剂形 式。

对于吸入给药，用于本发明的化合物以从加压包装或喷雾器中提 供的喷雾形式方便地给药，其中使用适宜的抛射剂，例如，二氯二氟 甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适宜的气体。 在加压气雾剂中，剂量单位可以通过提供转运计量量的阀来确定。例 如，用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒可以配制为含有该化合物和适 宜的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物的形式。

可以配制这些化合物以通过注射进行非肠道给药，例如快速浓注 或连续输液。注射剂可以以单位剂型的形式存在，例如在安瓿或多剂 量容器中，其中加入了防腐剂。这些组合物可以采用如在含油或含水 载体的混悬剂、溶液剂或乳液的形式，并可以含有配制试剂如悬浮 剂、稳定剂和/或分散剂。

非肠道给药的药物组合物包括水溶性形式的活性化合物的水溶 液。此外，活性化合物的混悬剂可以制备为适当的含油注射混悬剂。 适宜的亲脂溶剂或载体包括脂肪油如芝麻油，或者合成的脂肪酸酯， 如油酸乙酯或甘油三酯，或者质脂体。含水注射混悬剂可以含有增加 该混悬剂粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖酐。该混 悬剂可以任选地含有适宜的稳定剂或增加这些化合物溶解度的试剂， 以制备高浓度的溶液。

或者，活性组分可以是在使用前，用适宜载体如灭菌无热原的水 重新配制的粉末形式。

这些化合物还可以配制为直肠用组合物，如栓剂或保留灌肠剂， 例如，其中含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯。

除上述制剂外，这些化合物还可以配制为贮库制剂。此类长效制 剂可以通过埋入法给药(例如，透皮或肌内埋入或通过肌内注射)。因 此，例如这些化合物可以与适宜的聚合物或疏水性物质(例如，在可接 受的油中的乳液)或离子交换树脂一起配制，或将其制成溶解度小的 衍生物，例如溶解度小的盐。

用于疏水性的本发明化合物的药物载体的实例是助溶剂系统，包 括苄醇、非极性表面活性剂、与水混溶的有机聚合物以及水相。该 助溶剂系统可以是VPD助溶剂系统。VPD是3％重量/体积的苄醇、 8％重量/体积的非极性表面活性剂吐温80和65％重量/体积的聚乙二 醇300的溶液，在纯乙醇中达到规定的体积。该VPD助溶剂系统 (VPD：5W)由在5％葡萄糖水溶液中进行1∶1稀释的VPD组成。此 助溶剂系统很好地溶解疏水性化合物，而其本身在系统给药时只产生 很低的毒性。当然，在不破坏其溶解性和毒性的前提下，助溶剂系统 的比例可以作很大变化。此外，助溶剂组分的特性可以变化：例如，可 以使用其它低毒非极性表面活性剂代替吐温80；聚乙二醇的馏份大 小可以变化；可以用其它生物相容性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮代替 聚乙二醇；且其它糖或多糖可以代替葡萄糖。

或者，可以使用疏水性药物化合物的其它转运系统。质脂体和乳 液是疏水性药物的转运载体的熟知实例。虽然通常要付出较大毒性 的代价，但是也可以使用某些有机溶剂如二甲基亚砜。此外，这些化 合物可以用缓释系统转运，例如含治疗剂的固体疏水性聚合物的半渗 透性基质。多种缓释物质已得以确认，且它们是本领域技术人员熟知 的。根据其化学性质，缓释胶囊可以在几周至100天以上释放这些化 合物。根据治疗剂的化学性质和生物稳定性，可以使用蛋白稳定化的 其它策略。

这些药物组合物还可以含有适宜的固体或凝胶相载体或赋形 剂。此类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、多种 糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。

本发明的很多化合物可以以与药学相容性相反离子形成的盐的 形式提供。药学相容性盐可以与很多酸形成，包括但不限于氢氯酸、 硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。盐在水或其它质 子溶剂中比相应的游离碱形式更易溶解。

有效剂量

适用于本发明的药物组合物包括含有达到预定目的有效量的活 性组分的组合物。更具体地讲，治疗有效量指有效防止接受治疗对象 的现存症状的发展或减轻该症状的量。有效量的确定在本领域技术 人员的能力范围内。

对于用于本发明方法中的任何化合物，可以先由细胞试验评估此 治疗有效剂量。例如，可以在细胞和动物模型中使用某剂量以达到包 括在细胞试验中测定的IC50(即对指定的蛋白激酶活性达到半数最大 抑制的被测化合物浓度)的循环浓度范围。在一些情况下，适宜在3 至5％血清白蛋白的存在下测定IC50，这是由于这样的检测接近血浆 蛋白对此化合物的结合作用。如此获得的信息可以用来更准确地确 定在人体内的有用的剂量。进一步讲，最优选的系统给药的本发明的 化合物，以在血浆中可以安全达到的浓度，有效地抑制完整细胞中的 蛋白激酶信号。

治疗有效量指减轻患者症状的化合物的量。这些化合物的毒性 和疗效可以提供标准药学方法在细胞培养物或试验动物中测定，例如， 测定最大耐受剂量(MTD)和ED50(产生50％最大反应的有效量)。毒性 和疗效之间的剂量比是治疗指数，且可以以MTD和ED50之比表示。 优选表现出高治疗指数的化合物。由这些细胞培养试验和动物研究 中获得的数据可以用于形成用于人的剂量范围。这些化合物的剂量 优选在包括ED50的循环浓度又几乎没有或没有毒性的范围内。根据 所用剂型和所用给药途径，此剂量可以在此范围内变化。确切的制 剂、给药途径和剂量可以由具体医生基于患者的情况作出选择(参见 如Fingl等，1975，“治疗药学基础(The Pharmacological Basis of Therapeutics)”，第一章，第1页)。在危象的治疗中，可能需要达到 MTD的紧急快速浓注或输液以获得快速反应。

可以具体调整给药剂量和间隔以提供足以为此激酶调节作用的 活性组分的血浆浓度，即最低有效浓度(MEC)。MEC应随各化合物 有所变化，但是可以由体外数据估计；例如，用本文中描述的试验检 测的达到对蛋白激酶50-90％抑制所需要的浓度。获得MEC所需要 的剂量应根据个体的特性和给药的途径变化。但是，可以用HPLC检 测或生物检测来测定血浆浓度。

也可以用MEC值确定给药间隔。化合物应使用的给药方案中，应 为维持此时的血浆水平高于MEC 10-90％，优选30-90％并最优选50- 90％，直到症状获得了所要求程度的减轻。在局部给药或选择性吸收 的情况中，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度不相关。

当然，组合物的给药量应依赖于接受治疗的对象、对象的体重、 疾病的严重性、给药方式和主治医生的诊断。

包装

如果需要，这些组合物可以存在于包装或分配器中，其中可以装 有含有活性组分的一个或多个单位剂型。例如，此包装可以包括金属 或塑料箔片，如凸泡包装。此包装或分配器可以附加给药的说明。含 有在相容药用载体中配制的本发明化合物的组合物，也可以制备并置 于适当的容器，并标示治疗的适应征。

在一些制剂中，以非常小的颗粒形式使用本发明的化合物可能是 有利的，例如，该颗粒可以用流能磨获得。

通过下面的描述举例说明本发明化合物在制备药物组合物中的 用途。在本说明书中，术语“活性化合物”指本发明的任何化合物，但 是特别是指作为上述实施例之一的终产物的化合物。

a)胶囊

在胶囊的制备中，可以将10重量份的活性化合物和240重量份 的乳糖去凝聚化并混合。将此混合物填充入硬明胶胶囊中，每个胶囊 含有单位剂量或部分单位剂量的活性化合物。

b)片剂

可以由下列组分制备片剂。

                                     重量份

活性化合物                            10

乳糖                                  190

玉米淀粉                              22

聚乙烯吡咯烷酮                        10

硬脂酸镁                              3

可以将活性化合物、乳糖和一些淀粉去凝聚化、混合并将所得 混合物用聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液制粒。干燥的颗粒可以与硬脂 酸镁和其余的淀粉混合。然后在制片机中压缩此混合物以获得片剂， 每片含有单位剂量或部分单位剂量的活性化合物。

c)肠溶包衣片剂

可以通过上述(b)描述的方法制备片剂。这些片剂可以按照常规 方式用20％邻苯二甲酸乙酸纤维素和3％邻苯二甲酸二乙酯在乙醇：二 氯甲烷(1:1)的溶液中进行肠溶包衣。

d)栓剂

在栓剂的制备中，100重量份的活性化合物可以掺混在1300重量 份的甘油三酯栓剂基质中，并将此混合物制成栓剂，每个栓剂含有治 疗有效量的活性组分。

在本发明的组合物中，如果需要，这些活性化合物可以与其它相 容的药学活性组分结合。例如，本发明的化合物可以与一种或多种其 它药物试剂联合使用，这些其它的药物能抑制或防止VEGF或血管生 成素产生、减弱对VEGF或血管生成素的细胞内反应、阻断细胞内 信号传导，抑制血管渗透性过高、降低炎症，或者抑制或防止水肿形 成或新血管形成。本发明的化合物可以在其它药剂给药前、后或同 时给药，其中任何一种给药方式都是适当的。其它药剂包括但不限于 抗水肿甾类、NSAIDS、ras抑制剂、抗TNF剂、抗-IL-1剂、抗组胺 药、PAF拮抗剂、COX-1抑制剂、COX-2抑制剂、NO合酶抑制剂、 Akt/PTB抑制剂、IGF-1R抑制剂、PKC抑制剂和PI3激酶抑制剂。 本发明的化合物和其它药剂的作用或者是加和的或者是协同的。因 此，抑制血管生成、血管渗透性过高和/或抑制水肿形成的物质的此 联合给药，与其中任何一种物质单独给药相比，能更大地减轻过度增 殖性疾病、血管生成、血管渗透性过高或水肿的有害作用。在恶性 疾病的治疗中，可先进行与抗增殖或细胞毒化疗或放疗的联合治疗。

本发明还包括式I化合物作为药物的用途。

本发明的另一方面，提供了式I化合物或其盐在制备治疗哺乳动 物特别是人的血管渗透性过高、血管生成依赖性疾病、增殖性疾病 和/或免疫系统紊乱的药物方面的用途。

本发明还提供了治疗血管渗透性过高、不适当的新血管生成、 增殖性疾病和/或免疫系统紊乱的方法，该方法包括给需要的哺乳动 物特别是人使用治疗有效量的式I化合物。

可以通过以下详述的程序测定化合物体外抑制这些蛋白激酶的效 力。

通过一个相对于对照物的试验化合物对一种外源性底物(如合成 肽(Z.Songyang等，Nature.373：536-539)的磷酸化的抑制的量，可以 测定化合物的效力。

使用杆状病毒系统的KDR酪氨酸激酶的产生：

使用从HUVEC细胞分离的cDNAs经聚合酶链反应(PCR)获得人 KDR胞内结构域(aa789-1354)的编码序列。同时将poly-His6序列引 入该蛋白的N-末端。将该片段克隆至转染载体pVL1393的Xba1和 Not1位点。使用BaculoGold转染试剂(PharMingen)通过共转染获得 重组杆状病毒(BV)。通过Western分析对重组杆状病毒进行噬斑纯化 和鉴定。将SF-9细胞以2 x 106/ml生长于SF-900-II培养基中，并以 每细胞0.5空斑形成单位(MOI)进行感染以生成蛋白。在感染48小时 后收集细胞。

KDR的纯化

将50ml Triton X-100溶胞缓冲液(20mM Tris，pH 8.0，137mM氯 化钠，10％甘油，1％ Triton X-100，1mM PMSF，10μg/ml抑肽酶，1μg/ml 亮抑肽酶)加入1L细胞培养液的细胞沉淀物中以溶解表达 (His)6KDR(aa789-1354)的SF-9细胞。用Sorval SS-34转子在4EC中 以19,000转/分钟离心溶胞产物30分钟。将细胞溶解产物加入一个5ml NiCl2螯合的Sepharose柱，以50mM HEPES，pH 7.5，0.3M NaCl进 行平衡。以含有0.25M咪唑的相同缓冲液洗脱KDR。用SDS-PAGE 分析柱部分，并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)(如下所述)分析以测 定激酶活性。将纯化的KDR交换入25mMHEPES，pH7.5，25mM NaCl，5mM DTT缓冲液中并于-80EC下保存。

人Tie-2激酶的产生和纯化

使用从人胎盘分离出的cDNAs作为模板经PCR获得人Tie-2胞 内结构域(aa775-1124)的编码序列。将一个poly-His6序列引入N-末端 并将该结构克隆至转染载体pVL1939的Xba 1和Not 1位点上。使 用BaculoGold转染试剂(PharMingen)通过共转染获得重组杆状病毒 (BV)。通过Western分析对重组杆状病毒进行噬斑纯化和鉴定。将SF-9 昆虫细胞以2 x 106/ml生长于SF-900-II培养基中，并以感染复数(MOI) 0.5进行感染以生成蛋白。用于筛选的His标记的激酶的纯化类似于 所述KDR的纯化。

人Flt-1酪氨酸激酶的产生和纯化

使用杆状病毒表达载体pVL1393(Phar Mingen，Los Angeles， CA)。将编码poly-His6的核苷酸序列置于编码整个人Flt-1(氨基酸 786-1338)胞内激酶结构域的核甘酸区的5’端。使用从HUVEC细胞 分离出的cDNA库经PCR获得编码激酶结构域的核苷酸序列。类似 于KDR和ZAP70的方法，组氨酸残基使该蛋白亲合纯化。将SF-9 昆虫细胞以0.5的感染复数进行感染，并于感染48小时后收集。

EGFR酪氨酸激酶的来源

EGFR购于Sigma(Cat#E-3641；500单位/50μl)，EGF配体来 自Oncogene Research products/Calbiochem(Cat#PF011-100)。

ZAP70的表达

所用杆状病毒表达载体为pVL1393(PharMingen，Los Angeles， CA)。将编码氨基酸M(H)6LVPR9S的核苷酸序列置于编码整个 ZAP70(氨基酸1-619)的区域的5’端。使用从Jurkat无限增殖化T细 胞分离出的cDNA库经PCR获得编码ZAP70编码区的核苷酸序列。 组氨酸残基使该蛋白亲合纯化(参见下文)。LVPR9S桥构成识别序列 通过凝血酶导致蛋白水解裂解，使得该亲合标记从该酶中移出。将 SF-9昆虫细胞以0.5的感染复数进行感染，并于感染48小时后收集。 ZAP70的提取和纯化

将SF-9细胞溶解于由20mM Tris，pH 8.0，137mM氯化钠，10％ 甘油，1％ Triton X-100，1mM PMSF，1μg/ml亮抑肽酶，10μg/ml抑 肽酶和1mM正钒酸钠组成的缓冲液中。将可溶性的溶胞产物加入螯 合的Sepharose HiTrap柱(Pharmacia)上，以50mM HEPES，pH 7.5， 0.3M NaCl进行平衡。以250mM咪唑洗脱融合蛋白。将该酶保存于 含有50mMHEPES，pH7.5，50mM氯化钠，5mM DTT的缓冲液中。

蛋白激酶来源

可购得Lck，Fyn，Src，Blk，Csk和Lyn及其截短的形式(如购 自Upstate Biotechnology Inc.(Saranac Lake，N.Y.)和Santa Cruz Biotechnology Inc.(Santa Cruz，Ca))或采用常规的方法从已知的天然 或重组来源中提纯。

对PTKs的酶联免疫吸附试验(ELISA)

采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测和测量存在的酪氨酸激酶活 性。ELISA根据已知的方法，如描述于Voller等，1980，“酶联免 疫吸附试验，”于《临床免疫手册》，第2版，Rose和Friedman编 辑，359-371页，Am.Soc.of Microbiology，Washington，D.C.中的方 法进行。

采用公布的方法测定涉及特异性PTK的活性。例如，进行ELISA 试验的优选方法提供如下。检测化合物对受体PTK族其他成员，以 及非受体酪氨酸激酶的活性所采用的这些方法，正好均在本领域技 术人员的能力范围之内。为测定抑制剂的选择性，将通用的PTK底 物(如poly(Glu4Tyr)的无规共聚物，平均分子量20,000-50,000)与 ATP(典型的是5μM)一起大约两倍的表观Km值的浓度用于本测定 中。

采用以下程序测定本发明化合物对KDR，Flt-1，Flt-4/VEGFR- 3，Tie-1，Tie-2，EGFR，FGFR，PDGFR，IGF-1-R，c-Met，Lck， Blk，Csk，Src，Lyn，Fyn和ZAP70酪氨酸激酶活性的抑制效果：

缓冲液和溶液

PGTPoly(Glu，Tyr)4:1

在-20℃保存粉末。使粉末溶解于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中制成 50mg/ml溶液。在-20℃保存1ml等分试样。制板时在Gibco PBS中 稀释至250μg/ml。

反应缓冲液：100mM Hepes，20mM氯化镁，4mM氯化锰，5mM DTT，0.02％BSA，200μM NaVO4，pH7.10

ATP：在-20℃保存100mM等分试样。在水中稀释至20μM

洗涤缓冲液：PBS及0.1％吐温20

抗体稀释缓冲液：PBS中的0.1％牛血清白蛋白(BSA)

TMB底物：临用前以9∶1混和TMB底物和过氧化物溶液或使用

Neogen公司的K-Blue底物。

中止溶液：1M磷酸

程序

1.板制备

在PBS中稀释PGT原液(50mg/ml，冷冻)至250μg/ml。在Corning 改良平底高亲合力ELISA板(Corning # 25805-96)上每孔中加入 125μl。将125μl PBS加入空白孔中。用封口带覆盖并在37℃孵化过 夜。以250μl洗涤缓冲液冲洗1次并在37℃的干燥孵化箱中干燥约 2小时。将在密封袋中已包被的板在4℃保存直至使用。

2.酪氨酸激酶反应：

- 在20％DMSO的水溶液中制备4x浓度的抑制剂溶液

- 准备反应缓冲液

- 准备酶溶液以使所需单位为50μl，如将KDR制成1ng/μl，以使反 应中每孔总量为50ng。在冰上保存。

- 由100mM原液加水制成20μM 4 x ATP溶液。在冰上保存。

- 每孔加入50μl酶溶液(典型为5-50ng酶/孔，视激酶的特异活性而定)

- 加入25μl 4x抑制剂

- 加入25μl 4x ATP用于抑制剂测定

- 在室温孵化10分钟

- 每孔加入50μl 0.05N HCl中止反应

- 洗涤板

- **反应终浓度：50μM ATP，5％ DMSO

3.抗体结合

- 通过2个稀释步骤(100x，然后200x)将1mg/ml等分量的PY20- HRP(Pierce)抗体(一种含磷酪氨酸抗体)在0.1％BSA的PBS溶液中稀 释至50ng/ml

- 每孔加入100μl抗体。在室温孵化1小时。在4℃孵化1小时。

- 洗涤板4次

4.色反应

- 制备TMB底物并每孔加入100μl

- 在650nm监测OD值直至达到0.6

- 以1M磷酸中止。在板读出器上摇动。

- 即刻在450nm读出OD值

最优的孵化时间和酶反应条件依酶制剂情况稍有不同，每批均凭 经验判定。

对于Lck，在类似的测定条件下所用的反应缓冲液为100mM MOPSO，pH 6.5，4mM二氯化锰，20mM氯化镁，5mM DTT，0.2％ BSA，200mM NaVO4。

式I的化合物可能在治疗涉及以下两类蛋白酪氨酸激酶的疾病方 面具有治疗效用：已鉴定的蛋白酪氨酸激酶(包括那些在此未提及 的)，以及为式I的化合物所抑制的迄今尚未鉴定的蛋白酪氨酸激酶。 在此例举的所有化合物在50微摩尔浓度或更低浓度时均显著地抑制 FGFR，PDGFR，KDR，Tie-2，Lck，Fyn，BLk，Lyn或Src。本发 明的一些化合物在50微摩尔浓度或更低浓度时也显著地抑制其他酪 氨酸或丝氨酸/苏氨酸激酶如cdc2(cdk1)。

Cdc2来源

人重组酶和测定缓冲液可经市售获得(New England Biolabs， Beverly，MA.USA)或用常规的方法从已知的天然或重组的来源提 纯。

Cdc2测定

该方法使用购得的试剂并稍加改动。简言之，该反应在由50mM Tris pH7.5，100mM氯化钠，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％ Brij， 5％ DMSO和10mM氯化镁(市售缓冲液)并补充有新鲜的300μM ATP(31μ Ci/ml)和终浓度30μg/ml IIIss型组蛋白组成的缓冲液中进 行。反应物体积为80μL，含有单位的酶，于25℃在抑制剂存在或不 存在下进行20分钟。加入120μL 10％乙酸中止反应。通过将混合物 点样于磷酸纤维素纸上，再以75mM磷酸冲洗3次，每次5分钟， 使底物与非结合标记物分离。在液体闪烁剂存在下以beta计数器计 量数值。

本发明的某些化合物在低于50μM的浓度时，显著地抑制cdc2。

PKC激酶来源

PKC催化亚单位可经市售获得(Calbiochem)。

PKC激酶测定

采用下述已公布的程序(Yasuda，I.，Kirshimoto，A.，Tanaka，S.， Tominaga，M.，Sakurai，A.，Nishizuka，Y.，Biochemical and Biophysical Research Communication(生物化学和生物物理研究通讯)3：166， 1220-1227(1990))进行放射性激酶测定。简言之，所有反应在由50mM Tris-HCl pH7.5，10mM氯化镁，2mM DTT，1mM EGTA，100μM ATP，8μM肽，5％ DMSO和33P ATP(8Ci/mM)组成的激酶缓冲液中 进行。将化合物和酶在反应容器中混和，加入ATP和底物混合物以 启动反应。然后加入10μL中止缓冲液(5mM ATP在75mM磷酸中) 中止反应，将混合物的一部分点样于磷酸纤维素滤纸。点样样本以 75mM磷酸在室温下冲洗3次，共5至15分钟。放射性标记的结合 以液体闪烁计数器计量。

Erk2酶来源

重组鼠酶和测定缓冲液可经市售获得(New England Biolabs， Beverly，MA.USA)或以常规的方法从已知的天然或重组的来源中提 纯。

Erk2酶测定

简言之，反应在由50mM Tris pH7.5，1mM EGTA，2mM DTT， 0.01％ Brij，5％ DMSO和10mM氯化镁(市售缓冲液)并补充有新鲜 的100μM ATP(31μ Ci/ml)和30μM髓鞘碱性蛋白组成的缓冲液中， 以供应者推荐的条件进行。反应物体积和放射性结合的测定方法如 同PKC测定中所述(见上)。

T细胞激活的体外模型

经促细胞分裂剂或抗原激活，可诱导T细胞分泌IL-2，这是一 种支持它们的随后的增殖期的生长因子。因此，既可以测量原始T 细胞或适当的T细胞系所产生的IL-2，又可以测量其细胞增殖作为 T细胞激活的替代物。这两种测定方法均已有文献详尽描述且其参数 也已被详细记录(见Current Protocols in Immunology，卷2，7.10.1- 7.11.2)。

简言之，可通过与异源刺激物细胞共培养激活T细胞，该过程称 为单向混和淋巴细胞反应。使用Ficoll-Hypaque梯度(Pharmacia)按制 造商的说明纯化反应者和刺激物外周血单核细胞。经丝裂霉素 C(Sigma)或伽马照射处理使刺激物细胞有丝分裂失激活。在试验化合 物的存在或不存在下，以2:1的比例进行反应者和刺激物细胞的共培 养。通常是将105反应者与5 x 104刺激物混合并置于(200μl容量)U 形底微量滴定板(Costar Scientific)上。在补充有热灭活胎牛血清 (Hyclone Laboratories)或来自男性献血者的库存人AB型血清，5 x 10-5 M 2-巯基乙醇和0.5％ DMSO的RPMI 1640中培养细胞。以0.5μ Ci3H 胸腺嘧啶核苷(Amersham)在收集前一天(通常为第三天)脉冲照射培养 物。收集培养物(使用betaplate收集器，Wallac)并以液体闪烁 (betaplate，Wallac)测定同位素摄取量。

可使用相同培养系统通过测定IL-2产生量评估T细胞活性。培 养开始18-24小时后，去除上清液，按制造商的说明用ELISA(R和 D系统)测定IL-2的浓度。

T细胞激活的体内模型

可在已知可直接测定T细胞激活或已被证实T细胞为效应器的动 物模型上试验化合物的体内功效。可用单克隆抗-CD3抗体(Ab)结合 T细胞受体的固有部分在体内激活T细胞。在该模型中，于抽血前2 小时将10μg抗-CD3抗体腹腔给予BALB/c小鼠。接受测试药物的动 物在抗-CD3抗体给药前一小时已被用一个单剂量的本化合物预处 理。用ELISA测定T细胞激活的指示物：促炎细胞因子干扰素-γ(IFN- γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的血清水平。一个相似的模型使用以 特异的抗原如匙孔血蓝蛋白(KLH)启动，继以相同的抗原进行次级的 引流淋巴结细胞体外激发的体内T细胞。同前，使用细胞因子产量 的测量来评价所培养细胞的激活状态。简言之，在第零天用弗氏完 全佐剂(CFA)乳化的100μgKLH经皮下免疫C57BL/6小鼠。用化合 物在免疫前一天预处理动物，随后于免疫后第一、二、三天处理。 在第四天收集引流的淋巴结，将它们的细胞在组织培养基(RPMI 1640 补充有热灭活的胎牛血清(Hyclone Laboratories)5 x 10-5M 2-巯基乙醇 和0.5％ DMSO)中以每毫升6 x 106培养24至48小时。然后以ELISA 评价培养物上清液的自分泌T细胞生长因子白细胞介素-2(IL-2)和/或 IFN-γ水平。

也可在人类疾病的动物模型中测试先导化合物。这些以实验性自 身免疫脑脊髓炎(EAE)和胶原诱导性关节炎(CIA)为例。模拟人多发 性硬化的EAE模型已在大鼠和小鼠中表达出来(参见FASEB J.5： 2560-2566，1991；鼠科模型：Lab.Invest.4(3)：278，1981；啮齿动 物模型：J.Immunol 146(4)：1163-8，1991)。简言之，用髓鞘碱性蛋 白(MBP)的乳化液或其神经源性肽衍生物和CFA免疫小鼠或大鼠。 加入细菌毒素如百日咳博尔德氏杆菌(bordetella pertussis)可诱导急性 疾病。疾病的复发/缓解由MBP/肽免疫过的动物的T细胞的过继转 移所诱导。

胶原诱导性关节炎(CIA)可用II型胶原免疫DBA/1小鼠诱导产生(J. Immunol：142(7)：2237-2243)。小鼠可早至抗原攻击后10天开始出 现关节炎征象且可在长达免疫后90天的时间里进行评分。在EAE和 CIA模型中，化合物既可预防性给药，又可在疾病发作时给药。有 效的药物应能降低严重程度和/或发病率。

本发明的某些化合物抑制一种或更多血管生成素(angiogenic)受体 PTK，和/或涉及介导炎性反应的蛋白激酶如lck，能够在这些模型中 降低关节炎的严重程度和发病率。

也可在小鼠同种异体移植模型，皮肤(参见Ann.Rev.Immunol.， 10：333-58，1992；Transplantation；57(12)：1701-17D6，1994)或心脏 (Am.J.Anat.：113：273，1963)测试化合物。简言之，将全厚皮片移植 物从C57BL/6小鼠移植到BALB/c小鼠。可从第六天开始每天检查 移植物，观察排斥的迹象。在小鼠新移植的心脏模型中，将新移植 的心脏从C57BL/6小鼠异位移植到成年CBA/J小鼠的耳廓。心脏在 移植后开始跳动四至七天，可用解剖显微镜观察心跳的停止而用肉 眼评价排斥反应。

细胞受体PTK实验

使用以下细胞试验来测定本发明的不同化合物对KDR/VEGFR2 的活性水平和效果。使用一种特异性配体刺激物的相似的受体PTK 试验可沿用在本领域公知的用于其他酪氨酸激酶的相同线路进行设 计。

以WesternBlots法测定在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中VEGF 诱导的KDR磷酸化：

1.将购自Clonetics(San Diego，CA)的HUVEC细胞(来自 库存献血)并依照制造商的说明进行培养。本试验只使用早期的传代 (3-8)。细胞在100mm培养皿(Falcon组织培养皿；Becton Dickinson； Plymouth，England)用完全EBM培养基(Clonetics)培养。

2.将细胞胰蛋白化并以0.5-1.0 x 105细胞/孔接接种于6-孔 cluster板(Costar；Cambridge，MA)的每个孔上，以评价化合物的抑 制活性。

3.接种3-4天后，板90-100％汇合。从所用孔中移去培养 基，以5-10ml PBS冲洗细胞并以5ml EBM碱性培养基不加添加剂(即 血清饥饿)孵化18-24小时。

4.将抑制剂的系列稀释液加入1ml细胞的EBM培养基 (25μM，5μM，或1μM终浓度)并在37℃孵化1小时。然后在所有孔 中加入在2ml EBM培养基中的人重组VEGF165(R & D Systems)，其 终浓度为50ng/ml，在37℃孵化10分钟。未经过或只经过VEGF处 理的对照细胞用于评估本底磷酸化和VEGF诱导的磷酸化。

然后用5-10ml含有1mM正钒酸钠(Sigma)的冷PBS冲洗所有孔， 在含有蛋白酶抑制物(PMSF1mM，抑肽酶1μg/ml，抑肽素1Φg/ml，亮 肽素1μg/ml，钒酸钠1mM，氟化钠1mM)以及1μg/ml Dnase的200 μl RIPA缓冲液(50mM Tris-HCl pH7，150mM NaCl，1％NP-40，0.25％ 脱氧胆酸钠，1mM EDTA)中溶解和移出细胞(所有化学制剂均来自 Sigama Chemical Company，St Louis，MO)。将溶胞产物以14,000转 /分钟旋转30分钟以去除细胞核。

然后在最短1小时或最长一整夜的时间里加入冷(-20℃)乙醇(2 体积)以使等量的蛋白沉淀。使沉淀物在含有5％巯基乙醇(BioRad； Hercules，CA)的Laemli样本缓冲液中重新组成并煮沸5分钟。将蛋 白用聚丙烯酰胺凝胶电泳(6％，1.5mm Novex，San Deigo，CA)拆分 并用Novex系统转移到硝基纤维素膜上。以牛血清白蛋白(3％)封闭 后，于4℃，将蛋白与抗-KDR多克隆抗体(C20，Santa Cruz Biotechnology；Santa Cruz，CA)或抗-磷酸酪氨酸单克隆抗体(4G10， Upstate Biotechology，Lake Placid，NY)一起探测过夜。经与HRP- 缀合的F(ab)2的山羊抗兔或山羊抗鼠IgG洗涤和孵化1小时后，使用 发射化学发光(ECL)系统(Amersham Life Sciences，Arlington Height， IL)可观察到该谱带。本发明的某些实施例化合物在低于50μM浓度 时显著地抑制细胞的VEGF诱导的KDR酪氨酸激酶磷酸化。

体内子宫水肿模型

雌激素刺激后头几小时，小鼠子宫的重量急速增加，本试验测量 化合物抑制这种增加的能力。已知子宫脉管系统的渗透性增加导致 水肿，使得早期出现子宫重量的增加。Cullinan-Bove和Koss(内分 泌学(1993)，133：829-837)证实了在雌激素刺激的子宫水肿与子宫内 增高的VEGF mRNA表达的密切的短暂的相关。使用中和抗VEGF 单克隆抗体使得雌激素刺激后子宫重量的急剧增加明显减少，从而 证实了这些结论(WO 97/42187)。因此，该系统可用作一个体内抑制 VEGF的信号和相关的高渗透性和水肿的模型。

材料：所有激素均购自Sigma(St.Louis，MO)或Cal Biochem(La Jolla， CA)的冻干粉并依照供货商的指示进行制备。

媒介物成分(DMSO，Cremaphor EL)购自Sigma(St.Louis，MO)。

小鼠(Balb/c，8-12周龄)购自Taconic(GermantowN，NY)并按照规定的 动物照管方法及使用委员会指南将动物豢养于一个无病原的动物设 施内。

方法：

第1天：给Balb/c小鼠腹膜内注射(i.p.)12.5单位孕母 马血清促性腺激素(PMSG)。

第3天：给小鼠腹膜内注射15单位人绒毛膜促性腺激素 (hCG)。

第4天：将小鼠随机安排，分成5-10组。试验化合物按 照溶解度和媒介物不同而分别通过腹膜内注射、静脉注射或口服途 径给药，剂量范围1-100mg/kg。媒介物对照组仅接受媒介物，并留 置二组未处理。

30分钟后，试验组、媒介物组和未处理组之一均腹膜内注射17- 雌二醇(500g/kg)。2-3小时后，以CO2窒息处死动物。正中线切开后， 游离每只子宫，就在子宫颈下和子宫、输卵管连接处切开并取出子 宫。在称重(湿重)前小心地去除脂肪和结缔组织以免影响子宫的完整 性。将子宫置于两张滤纸之间，以一个装满水的一升玻璃瓶加压以 吸干除去液体。吸干除去液体后再称子宫重量(吸干后重量)。把湿重 和吸干后重量的差值看做子宫的液体含量。将处理组和未处理组或 媒介物处理组的平均液体含量进行比较。用斯氏检验确定显著性差 异。用无刺激的对照组监测雌二醇反应。

结果显示，当本发明的某些特定化合物经不同途径全身给药时可 抑制水肿的形成。

本发明的某些特定化合物是血管生成素受体酪氨酸激酶的抑制 剂，也可在新血管形成的Matrigel移植模型中显示其活性。Matrigel 新血管形成模型涉及在皮下移植的细胞外基质的清晰纹理中的形成 的新血管，由产生肿瘤细胞的前血管新生因子的存在所诱导。(例如 参见：Passaniti，A.等：Lab.Investig.(1992)，67(4)，519-528；Anat.Rec. (1997)，249(1)，63-73；Int.J.Cancer(1995)，63(5)，694-701；Vasc.Biol (1995)，15(11)，1857-6)。该模型优选进行3-4天，终点包括新生血 管形成的目测/图象评分，用显微镜可见的微血管密度测定，以及血 红蛋白定量(Drabkin法)，均在未用抑制物处理的动物中去除移植物 与对照物后进行。该模型可轮流选用bFGF或HGF作为刺激物。

本发明的某些特定化合物抑制一种或多种致癌的，原致癌的，或 增殖-依赖的蛋白激酶，或血管原受体PTK，也在小鼠中抑制原代鼠、 大鼠或人异种移植肿瘤的生长，或抑制鼠模型的代谢。

实施例

中间体1：4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯甲醛

在环境温度下，将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(3.00g，11.5 mmol)和氢化钠(60％，0.506g，12.6mmol)在DMF(50mL)中混合液搅 拌1小时，随后加入4-氟苯甲醛(1.36mL，12.6mmol)。将所得反应 混合液在100℃下加热21小时。将所述反应混合液冷却至环境温度， 过滤收集沉淀物，用DMF(30mL)和乙醚(30mL)洗涤，干燥得到褐 色固体状的4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯甲醛(2.80g， 7.61mmol)：1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 10.03(1H，s)，8.46(2H， d，J＝8.4Hz)，8.39(1H，s)，8.09(2H，d，J＝8.8Hz)；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，100，15cm；在15分钟内用5％-100％乙腈-0.1M乙酸铵， 1mL/min)。Rt 9.71分钟。MS：MH+365.8。

中间体2：N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

将4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯甲醛(0.400g， 1.09mmol)、N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧杂硼杂环戊烷- 2-基)苯基]-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.735g，1.20mmol)、四(三苯 基膦)合钯(0.127g，0.110mmol)和碳酸钠(0.279g，2.63mmol)在 DME(10mL)和水(10mL)中的混合液在85℃下加热1小时。加入其 它的N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.026g，0.059mmol)，将所述反应混 合液在85℃下加热4小时。将所述反应混合液冷却至环境温度并过 滤。将剩余的固体物用甲醇(50mL)和DMF(50mL)洗涤，将合并的 滤液浓缩得到驼色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.402 g，0.730mmol)：

           1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 10.05(1H，s)，9.96(1H，d，J＝ 4.0Hz)，8.62(1H，d，J＝8.4Hz)，8.46(1H，s)，8.39(1H，d，J＝6.8Hz)，8.12(2H，d， J＝8.8Hz)，8.02-8.03(1H，m)，7.84-8.00(1H，m)，7.75-7.77(1H，m)，7.51(1H，s)， 7.43(1H，d，J＝8.0Hz)，3.97(3H，s)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 12.46分钟。MS：MH+551.2。

中间体3：2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-乙醇

往3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.00g，19.1mmol)的DMF(40 mL)的溶液中加入氢化钠(60％，1.53g，38.3mmol)，搅拌所得反应混 合液20分钟。加入2-溴乙醇(1.50mL，21.1mmol)，将所述反应混合 液在50℃下加热18小时。所述反应混合液冷却至环境温度，浓缩得 到棕色淤浆。加入冰水(50mL)，过滤收集所得的沉淀物，用水(50mL) 和乙醚(50mL)漂洗，真空干燥得到驼色固体状的2-(4-氨基-3-碘-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-乙醇(4.30g，14.1mmol)：1H NMR(d6-DMSO， 400MHz)：δH 8.19(1H，s)，4.84(1H，t，J＝5.8Hz)，4.30(1H，t，J＝5.8Hz) 和3.77(2H，app q，J＝5.6Hz)；RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15 cm；在15分钟内用5％-100％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 7.35 分钟。

中间体4：甲磺酸2-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰 基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酯

在30秒内，往0℃下的N2-{4-[4-氨基-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.343g， 0.750mmol)和吡啶(7.5mL)的混合液滴加入甲磺酰氯(0.14mL，1.8 mmol)。0℃下搅拌所述反应混合液2小时，随后加入冰水水(10mL)。 过滤收集沉淀物并真空干燥得到驼色固体状的甲磺酸2-[4-氨基-3-(3- 甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-1-基]乙酯(0.268g，0.500mmol)：

                                                   1H NMR(d6-DMSO，400 MHz)：δH 9.44(1H，s)，8.30(1H，s)，8.13(1H，d，J＝8.0Hz)，7.70(1H，d，J＝8.0 Hz)，7.59(1H，d，J＝8.4Hz)，7.31-7.38(4H，m)，7.15(1H，t，J＝7.6Hz)，4.70(3H， s)，4.04(3H，s)，3.96(3H，s)，3.37(2H，受水峰干扰)，和3.12(2H，s)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％- 100％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 11.22分钟。MS：M+536.2。

实施例1：N1-(4-{4-氨基-1-[4-(吗啉-4-基甲基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

在环境温度下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、吗啉(0.024mL，0.27mmol)和三乙酰氧基硼氢 化钠(0.087g，0.409mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液摇荡16小 时。加入其它部分的吗啉(0.012mL，0.14mmol)、三乙酰氧基硼氢化 钠(0.043g，0.20mmol)和乙酸(0.016mL)，将所述反应混合液在环境 温度下搅拌24小时。加入1N NaOH(1mL)，过滤所述反应混合液得 到灰色固体，产物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300，25cm； 在25分钟内用10-60％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集 从21-23分钟流出的流分，浓缩并低压升华得到白色固体状的N1-(4- {4-氨基-1-[4-(吗啉-4-基甲基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲 氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.007g，0.011mmol)：

                                                         1HNMR(d6- DMSO，400MHz)：δH 9.93(1H，s)，8.34-8.37(2H，m)，8.14-8.18(2H，m)，7.97- 8.02(1H，m)，7.87-7.91(1H，m)，7.73-7.76(1H，m)，7.45-7.51(2H，m)，7.44(1H，s)， 7.38-7.43(1H，m)，3.41-3.59(8H，m)，和3.36(2H，s)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 11.72分钟。MS：MH+622.2。

实施例2：N1-[4-(4-氨基-1-{4-[(4-羟基哌啶子基)甲基]苯基}-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺单乙酸 盐

在环境温度下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、4-羟基哌啶(0.028g，0.27mmol)和三乙酰氧基 硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液摇荡16 小时。加入其它部分的4-羟基哌啶(0.028g，0.27mmol)和乙酸(0.016 mL)，摇荡所述反应混合液24小时。再加入4-羟基哌啶(0.033g，0.33 mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.040g，0.19mmol)，摇荡所述反应混 合液72小时。加入1N NaOH(1.5mL)，过滤收集黄棕色沉淀物，产 物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用 10-60％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从21-23分钟流 出的流分，浓缩并减压升华得到白色固体状的N1-[4-(4-氨基-1-{4-[(4- 羟基哌啶子基)甲基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯 基]-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺单乙酸盐(0.025g，0.039mmol)：

                          1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.95(1H，s)， 8.35-8.99(2H，m)，8.14-8.19(2H，m)，7.99-8.03(1H，m)，7.89-7.93(1H，m)，7.75- 7.80(1H，m)，7.39-7.51(4H，m)，4.55(1H，s)，3.96(3H，s)，3.80(2H，s)，2.68-2.71 (3H，m)，2.04-2.11(2H，m)，1.85(3H，s)，1.71-1.76(2H，m)，和1.39-1.45(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min).Rt 10.56分钟。MS：MH+636.2。

实施例3：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、N-(2-羟乙基)哌嗪(0.035g，0.27mmol)和三 乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中混合液 摇荡14小时。加入其它部分的N-(2-羟乙基)哌嗪(0.010g，0.077mmol) 和三乙酰氧基硼氢化钠(0.020g，0.094mmol)，摇荡所述反应混合液 16小时。加入1N NaOH(1.5mL)，过滤收集沉淀物，将产物经制备 RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用10-60％ 乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从21.9-22.9分钟洗脱出 的流分，浓缩并减压升华得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(2- 羟乙基)哌嗪-1-基]甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯 基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.034g，0.051mmol)：

                                                         1HNMR(d6- DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，s)，8.35-8.37(2H，m)，8.15(2H，d，J＝8.8Hz)， 8.00(1H，t，J＝8.0Hz)，7.90(1H，d，J＝10.4Hz)，7.75(1H，d，J＝8.0Hz)，7.49 (1H，s)，7.46(2H，d，J＝7.2Hz)，7.40(1H，d，J＝8.4Hz)，3.96(3H，s)，3.51(2H，s)， 3.46-3.49(4H，m)，和2.35-2.44(8H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.92分钟。MS：MH+664.7。

实施例4：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(2-羟乙基)哌啶子基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二 乙酸盐

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.075g，0.14 mmol)、4-哌啶乙醇(0.035g，0.27mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.087 g，0.41mmol)和二氯乙烷(1.4mL)的混合液摇荡16小时。加入其它 部分的4-哌啶乙醇(0.040g，0.31mmol))和三乙酰氧基硼氢化钠(0.053 g，0.25mmol)，将所述反应混合液摇荡4天。加入1N NaOH(1mL)， 过滤收集沉淀物，产物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25 cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL1min)纯化； 收集从21.1-23.5分钟洗脱出的流分，浓缩并减压升华得到白色固体 状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(2-羟乙基)哌啶子基]甲基}苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二乙酸 盐(0.015g，0.023mmol)。

                    1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，s)，8.18-8.39 (2H，m)，8.14(2H，d，J＝8.4Hz)，7.99-8.02(1H，m)，7.90(1H，d，J＝10.4Hz)，7.75 (1H，d，J＝7.6Hz)，7.39-7.48(4H，m)，4.31-3.96(3H，s)，3.37(2H，s)，3.37-3.50 (3H，m)，2.80-2.83(2H，m)，1.91(6H，m)，1.61-1.64(2H，m)，1.35-1.37(3H，m)，和 1.15-1.18(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.71分钟。MS：MH+664.2。

实施例5：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[3-(羟甲基)哌啶子基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺单 乙酸盐

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、3-哌啶甲醇(0.031g，0.27mmol)和三乙酰氧 基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液摇荡 16小时。加入其它的3-哌啶甲醇(0.045g，0.39mmol)和三乙酰氧基 硼氢化钠(0.090g，0.42mmol)，在环境温度下摇荡所述反应混合液16 小时。加入1N NaOH(1mL)，过滤收集沉淀物，产物经制备RP- HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用10-60％乙腈 -0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从21-23分钟流出的流分， 浓缩并减压升华得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[3(羟甲基)哌 啶子基]甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2甲氧基苯基}-2-氟- 4-(三氟甲基)苯甲酰胺单乙酸盐(0.007g，0.11mmol)：

                         1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.95(1H，s)， 8.35-8.39(2H，m)，8.14-8.17(2H，m)，8.01-8.03(1H，m)，7.89-7.93(1H，m)，7.75- 7.78(1H，m)，7.40-7.50(4H，m)，4.39-4.42(1H，m)，3.97(3H，s)，3.39-3.53(3H，m)， 3.01-3.21(1H，m)，2.87-2.89(1H，m)，2.75-2.77(1H，m)，1.91(3H，s)，1.61-1.65 (4H，m)，1.47-1.52(1H，m)，和0.89-0.92(1H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.73分钟。MS：MH+650.2。

实施例6：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[2-(羟甲基)哌啶子基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺单 乙酸盐

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.075g，0.14 mmol)、2-哌啶甲醇(0.031g，0.27mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.087 g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液摇荡16小时。加入其 它部分的2-哌啶甲醇(0.031g，0.27mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠 (0.087g，0.41mmol)，摇荡所述反应混合液3天。再次加入2-哌啶 甲醇(0.030g，0.26mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.073g，0.34 mmol)，接着加入乙酸(0.1mL)。摇荡所述反应混合液5天。加入1N NaOH(1mL)，真空浓缩所述反应混合液以除去二氯乙烷。将剩余物 溶解在DMF(2mL)中，经Acrodisc注射器针尖过滤器过滤，并经制 备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用20-80％ 乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从14.6-17.0分钟洗脱出 的流分，浓缩并减压升华得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[2-(羟 甲基)哌啶子基]甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯 基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺单乙酸盐(0.026g，0.040mmol)：

                          1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.91(1H，s)， 8.33-8.37(2H，m)，8.09-8.14(2H，m)，7.96-8.00(1H，m)，7.86-7.89(1H，m)，7.71- 7.74(1H，m)，7.37-7.52(4H，m)，4.46(1H，bs)，4.10-4.15(1H，m)，3.94(3H，s)， 3.64-3.67(1H，m)，3.44-3.48(1H，m)，2.64-2.69(2H，m)，2.00-2.07(1H，m)，1.94 (3H，s)，1.60-1.89(2H，m)，和1.20-1.40(4H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.59分钟。MS：MH+649.7。

实施例7：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(2-吗啉-4-基乙基)氨基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、N-(2-氨基乙基)吗啉(0.035g，0.27mmol)和 三乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混 合液摇荡16小时。加入其它部分的N1-(2-氨基乙基)吗啉(0.030mL， 0.23mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)，摇荡所述反 应混合液4天。加入1N NaOH(1mL)，过滤收集沉淀物，产物经制 备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用20-80％ 乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从16.6-19.0分钟洗脱出 的流分，浓缩并减压升华得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(2- 吗啉-4-基乙基)氨基)甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基 苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.014g，0.021mmol)：

                                                         1HNMR(d6- DMSO，400MHz)：δH 9.88(1H，s)，8.29-8.93(2H，m)，8.11-8.17(2H，m)，7.92- 7.97(1H，m)，7.83-7.86(1H，m)，7.68-7.72(1H，m)，7.46-7.51(2H，m)，7.39(1H，s)， 7.34-7.38(1H，m)，3.90(3H，s)，3.50-3.52(4H，m)，2.61-2.62(2H，m)，2.40-2.50 (2H，受DMSO峰干扰)，和2.27-2.40(6H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.96分钟。MS：MH+665.2。

实施例8：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(羟甲基)哌啶子基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二 乙酸盐

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.075g，0.14 mmol)、4-哌啶甲醇(0.031g，0.27mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.087 g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液摇荡3天。加入其它部 分的4-哌啶甲醇(0.096g，0.83mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.085g， 0.40mmol)，接着加入乙酸(0.1mL)。摇荡所述反应混合液5天。加 入1N NaOH(1mL)，浓缩所述反应混合液，溶解在DMF(2mL)中， 经Acrodisc注射器针尖过滤器过滤，随后经制备RP-HPLC(Rainin C18， 8μm，25cm；在25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21 mL/min)纯化；收集从17.2-18.3分钟洗脱出的流分，浓缩并减压升华 得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(羟甲基)哌啶子基]甲基}苯 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯 甲酰胺二乙酸盐(0.018g，0.028mmol)：

                    1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，s)，8.35-8.37 (2H，m)，8.14(2H，d，J＝8.4Hz)，8.00(1H，t，J＝7.0Hz)，7.90(1H，d，J＝10.4Hz)， 7.75(1H，d，J＝8.0Hz)，7.39-7.64(4H，m)，4.38-4.41(1H，m)，3.96(3H，s)，3.50 (2H，s)，2.83(2H，d，J＝10.8Hz)，1.90(6H，s)，1.63(2H，d，J＝11.6Hz)，1.34-1.35 (2H，m)，和1.12-1.19(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.41分钟。MS：MH+650.2。

实施例9：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基]甲基}苯 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯 甲酰胺

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、1-(2-甲氧基乙基)-哌嗪(0.039g，0.27mmol) 和三乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的 混合液摇荡3天。加入其它部分的1-(2甲氧基乙基)-哌嗪(0.10mL)和 三乙酰氧基硼氢化钠(0.089g，0.41mmol)，摇荡所述反应混合液16 小时。加入1N NaOH(1mL)，所得溶液用两份二氯甲烷(各2mL)萃 取。浓缩合并的有机部分得到棕色固体，所述固体物经制备RP- HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用20-80％乙腈 -0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从16.9-20.2分钟洗脱出的流 分，浓缩并减压升华得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[4-(2-甲 氧基乙基)哌嗪-1-基]甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基 苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.021g，0.031mmol)：

            1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，s)，8.34-8.37(2H，m)， 8.14-8.17(1H，m)，7.98-8.02(1H，m)，7.89(1H，d，J＝10.4Hz)，7.74-7.76(1H，m)， 7.34-7.64(6H，m)，3.96(3H，s)，3.51(2H，s)，3.31-3.43(2H，m)，3.22(3H，s)，和 2.41-2.45(10H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 11.24分钟。MS：MH+678.7。

实施例10：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(3R)-3-羟基四氢-1H-1-吡咯基]甲基} 苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基) 苯甲酰胺

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.075g，0.14 mmol)、(S)-3-羟基吡咯烷(0.024g，0.27mmol)和三乙酰氧基硼氢化 钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液摇荡3天。加 入其它部分的(S)-3-羟基吡咯烷(0.1mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.084 g，0.40mmol)，摇荡所述反应混合液3天。加入乙酸(0.1mL)，摇荡 所述反应混合液4天。加入1N NaOH(1mL)，真空浓缩所述反应混 合液。将剩余物溶解在DMF(2mL)中，经Acrodisc注射器针尖过滤 器过滤并经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25 分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从 16.5-18.4分钟洗脱出的流分，浓缩并减压升华得到白色固体状的N1- {4-[4-氨基-1-(4-{[(3R)-3-羟基四氢-1H-1-吡咯基]甲基}苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.027 g，0.043mmol)：

            1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.89(1H，s)，8.30-8.33(2H， m)，8.13-8.14(2H，m)，7.90-7.80(1H，m)，7.84(1H，d，J＝10.8Hz)，7.70(1H，d，J＝ 7.6Hz)，7.35-7.59(4H，m)，4.64(1H，bs)，4.14-4.23(1H，m)，3.91(3H，s)，3.62(2H， s)，2.61-2.62(2H，m)，2.27-2.28(2H，m)，2.27-2.28(2H，m)，2.02(1H，m)，和1.60 (1H.m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.41分钟。MS：MH+622.2。

实施例11：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(3R)-3-羟基四氢-1H-1-吡咯基]甲基} 苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基) 苯甲酰胺

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、(R)-(+)-3-吡咯烷醇(0.024g，0.27mmol)和三 乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合 液摇荡3天。加入其它部分的(R)-(+)-3-吡咯烷醇(0.1mL)和三乙酰氧 基硼氢化钠(0.084g，0.40mmol)，摇荡所述反应混合液16小时。加 入1N NaOH(1mL)，过滤收集沉淀物，将得自水层的萃取液的剩余 物和一部分二氯甲烷(20mL)合并。所得的粗制混合物经制备RP- HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用20-80％乙腈- 0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化。收集适当的流分，浓缩并冷冻干燥 得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(3R)-3-羟基四氢-1H-1-吡咯 基]甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三 氟甲基)苯甲酰胺(0.034g，0.055mmol)：1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.93(1H，s)，8.34-8.37(2H，m)，8.15-8.19(2H， m)，7.98-8.01(1H，m)，7.85(1H，d，J＝10.4Hz)，7.75(1H，d，J＝8.0Hz)，7.48-7.54 (2H，m)，7.44(1H，s)，7.40(1H，d，J＝8.4Hz)，4.70(1H，bs)，4.22(1H，s)，3.96(3H， s)，3.63(2H，s)，2.49-2.72(3H，m)，2.13-2.41(1H，m)，1.91-2.06(1H，m)，和1.53- 1.61(1H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.53分钟。MS：MH+622.2。

实施例12：N1-(4-{4-氨基-1-[4-{([3-(1H-1-咪唑基)丙基]氨基}甲基)苯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯 甲酰胺

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、1-(3-氨基丙基)咪唑(0.034g，0.27mmol)和 三乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混 合液摇荡3天。加入其它部分的1-(3-氨基丙基)咪唑(0.1mL)和三乙 酰氧基硼氢化钠(0.086g，0.40mmol)，将所述反应混合液摇荡3天。 加入乙酸(0.1mL)，摇荡所述反应混合液4天。加入1N NaOH(1mL)， 浓缩所述反应混合液，溶解在DMF(2mL)中，经Acrodisc注射器针 尖过滤器过滤，并经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 在25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集 从14.0-15.7分钟洗脱出的流分，浓缩并冷冻干燥得到白色固体状的 N1-(4-{4-氨基-1-[4-{([3-(1H-1-咪唑基)丙基]氨基}甲基)苯基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.040 g，0.061mmol)：

           1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，s)，8.35-8.40(2H，m)， 8.16(2H，d，J＝7.6Hz)，7.99(1H，t，J＝7.6Hz)，7.89(1H，d，J＝10.0Hz)，7.75 (1H，d，J＝8.4Hz)，7.59(1H，s)，7.52(2H，d，J＝3.8Hz)，6.45(1H，s)，7.40(1H，d，J ＝8.0Hz)，7.16(1H，s)，6.87(1H，s)，4.04(2H，t，J＝7.0Hz)，3.96(3H，s)，3.77(2H， s)，2.45-2.46(2H，m)，1.91(3H，s)，和1.86-1.90(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.28分钟。MS：MH+660.2。

实施例13：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(4-羟基丁基)氨基]甲基}苯基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺 摇荡N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体2)(0.075g，0.14 mmol)、4-氨基-1-丁醇(0.024g，0.27mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠 (0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液3天。加入其它 部分的4-氨基-1-丁醇(0.1mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.089g，0.42 mmol)，摇荡所述反应混合液3天。加入乙酸(0.1mL)，摇荡所述反 应混合液7天。加入其它部分的三乙酰氧基硼氢化钠(0.098g，0.46 mmol)，摇荡所述反应混合液16小时。加入1N NaOH(1mL)，浓缩 所述反应混合液，溶解在DMF(2mL)中，经Acrodisc注射器针尖过 滤器过滤，并经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在 25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从 12.5-14.8分钟洗脱出的流分，浓缩并冷冻干燥得到白色固体状的N1- {4-[4-氨基-1-(4-{[(4-羟基丁基)氨基]甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.030g，0.048 mmol)：

           1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，d，J＝4.4Hz)，8，35- 8.40(2H，m)，8.17(2H，d，J＝8.0Hz)，8.00(1H，t，J＝7.4Hz)，7.90(1H，d，J＝10.4 Hz)，7.75(1H，d，J＝7.2Hz)，7.53-7.57(2H，m)，7.45(1H，s)，7.40(1H，d，J＝8.8 Hz)，3.96(3H，s)，3.83(2H，s)，3.39(2H，t，J＝6.2Hz)，2.45-2.50(2H，m)，和1.45- 1.51(4H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 9.93分钟。MS：MH+624.3。

实施例14：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(3-甲氧基丙基)氨基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

在室温下，摇荡N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、3-甲氧基丙胺(0.024g，0.27mmol)和三乙酰 氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液3 天。加入其它部分的3-甲氧基丙胺(0.1mL，1mmol)和三乙酰氧基硼 氢化钠(0.085g，0.40mmol)，摇荡所述混合液3天。加入乙酸(0.1mL)， 摇荡所述反应混合液4天。加入其它部分的三乙酰氧基硼氢化钠(0.100 g，0.470mmol)，摇荡所述反应混合液16小时。加入1N NaOH(1mL)， 浓缩所述反应混合液，溶解在DMF(2mL)中，经Acrodisc注射器针 尖过滤器过滤，经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 在25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集 从18.0-19.7分钟洗脱出的流分，浓缩并减压升华得到白色固体状的 N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(3-甲氧基丙基)氨基]甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.009g， 0.014mmol)：1H NMR(d6- DMSO，400MHz)：δH 9.93(1H，s)，8.33-8.38(2H，m)，8.18-8.20(2H，m)，7.97- 8.01(1H，m)，7.87-7.91(1H，m)，7.73-7.76(1H，m)，7.54-7.64(5H，m)，7.31-7.45 (2H，m)，3.95(3H，s)，3.85-3.89(2H，m)，3.38(2H，s)，2.55-2.68(2H，m)，和1.70- 1.74(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.58分钟。MS：MH+624.2。

实施例15：N1-(4-{4-氨基-1-[4-{([3-(二甲氨基)丙基]氨基}甲基)苯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯 甲酰胺单乙酸盐

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体2)(0.075 g，0.14mmol)、N，N-二甲基-1，3-丙二胺(0.028g，0.27mmol)和三乙 酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液 摇荡3天。加入其它部分的N，N-二甲基-1，3-丙二胺(0.1mL)和三乙酰 氧基硼氢化钠(0.085g，0.40mmol)，摇荡所述混合液3天。加入乙 酸(0.1mL)，摇荡所述混合液4天。加入三乙酰氧基硼氢化钠(0.096g， 0.45mmol)，摇荡所述混合液16小时。加入1N NaOH(1mL)，浓缩 所述反应混合液，溶解在DMF(2mL)中，经Acrodisc注射器针尖过 滤器过滤，并经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在 25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从 14.3-14.9分钟洗脱出的流分，浓缩并冷冻干燥得到白色固体状的N1- (4-{4-氨基-1-[4-{([3-(二甲氨基)丙基]氨基}甲基)苯基]-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺单乙酸盐 (0.020g，0.031mmol)：1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.93(1H，s)，8.34-8.37(2H，m)，8.13(2H，d，J＝ 8.4Hz)，8.00(1H，t，J＝7.2Hz)，7.89(1H，d，J＝10.0Hz)，7.75(1H，d，J＝7.6·Hz)， 7.49(2H，d，J＝8.0Hz)，7.44(1H，s)，7.39(1H，d，J＝8.0Hz)，3.96(3H，s)，3.74 (2H，s)，2.21·2.25(2H，t，J＝7.0Hz)，2.09(6H，s)，2.08(3H，s)，1.86-1.87(4H，m)， 和1.54-1.58(2H，t，J＝7.2Hz)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.85分钟。MS：MH+637.3。

实施例16：(2S)-2-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨 基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苄基}氨基)-3-(4H-4-咪 唑基)丙酸甲酯

在室温下，将N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、L-组氨酸甲酯二盐酸盐(0.046g，0.27mmol) 和三乙酰氧基硼氢化钠(0.087g，0.41mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的 混合液摇荡3天。加入其它部分的L-组氨酸甲酯二盐酸盐(0.100g， 0.59mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.085g，0.40mmol)，摇荡所述反 应混合液2天。加入1N NaOH(1mL)，过滤收集棕色的沉淀物。用 二氯甲烷(5mL)萃取滤液，浓缩有机萃取液，并与前述棕色固体合并。 所得的粗制混合物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 在25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min)纯化；收集从 18.9-20.5分钟洗脱出的流分，浓缩并减压升华得到白色固体状的 (2S)-2-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基}-3-甲氧基 苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苄基}氨基)-3-(4H-4-咪唑基)丙酸甲 酯(0.029g，0.041mmol)：

                                 1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H， s)，8.35-8.38(2H，m)，8.13(2H，d，J＝8.0Hz)，7.99-8.02(1H，m)，7.90(1H，d，J＝ 10.8Hz)，7.75(1H，d，J＝8.4Hz)，7.51(1H，s)，7.39-7.45(5H，m)，6.78(1H，bs)， 3.96(3H，s)，3.82(1H，d，J＝14.0Hz)，3.59(3H，s)，3.47(1H，t，J＝6.4Hz)，2.80- 2.89(2H，m)，和1.91(3H，s)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 11.15分钟。MS：MH+704.2。

实施例17：N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(2-甲氧基乙基)氨基]甲基}苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

在室温下，摇荡N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.075g，0.14mmol)、2-甲氧基乙胺(0.018g，0.24mmol)和三乙酰 氧基硼氢化钠(0.106g，0.500mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液24 小时。加入1N NaOH(1mL)，浓缩所述反应混合液，溶解在DMF(2mL) 中，经Acrodisc注射器针尖过滤器过滤，并经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸 铵，21mL/min)纯化；收集从15.0-16.2分钟洗脱出的流分，浓缩并 减压升华得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-{[(2-甲氧基乙基)氨基] 甲基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟 甲基)苯甲酰胺(0.010g，0.016mmol)：

           1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，d，J＝4.0Hz)，8.35- 8.37(2H，m)，8.16(2H，d，J＝8.0Hz)，8.01(1H，t，J＝7.4Hz)，7.90(1H，d，J＝10.0 Hz)，7.75(1H，d，J＝8.0Hz)，7.52(2H，d，J＝8.0Hz)，7.45(1H，s)，7.40(1H，d，J＝ 8.8Hz)，3.96(3H，s)，3.80(2H，s)，3.42-3.45(2H，m)，3.25(2H，m)，和2.70-2.71 (2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.23分钟。MS：MH+610.2。

实施例18：N1-(4-{4-氨基-1-[4-{([2-(二甲氨基)乙基]氨基}甲基)苯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯 甲酰胺

在室温下，摇荡N1-{4-[4-氨基-1-(4-甲酰基苯基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体 2)(0.080g，0.14mmol)、N，N-二甲氨基乙胺(0.03mL)和三乙酰氧基硼 氢化钠(0.100g，0.472mmol)在二氯乙烷(1.4mL)中的混合液24小时。 加入1N NaOH(1mL)，浓缩所述反应混合液，溶解在DMF(2mL)中， 经Acrodisc注射器针尖过滤器过滤，并经RP-HPLC(Rainin C18，8μm， 25cm；在25分钟内用20-80％乙腈-0.05M乙酸铵，21mL/min) 纯化；收集从16.5-17.8分钟洗脱出的流分，浓缩并减压升华得到白 色固体状的N1-(4-{4-氨基-1-[4-{([2-(二甲氨基)乙基]氨基}甲基)苯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯 甲酰胺(0.020g，0.032mmol)：1H NMR(d6- DMSO，400MHz)：δH 9.94(1H，d，J＝4.4Hz)，8.35-8.37(2H，m)，8.15(2H，d，J＝ 8.4Hz)，8.01(1H，t，J＝7.8Hz)，7.90(1H，d，J＝10.4Hz)，7.75(1H，d，J＝7.6Hz)， 7.50(2H，d，J＝8.8Hz)，7.45(1H，s)，7.40(1H，d，J＝8.0Hz)，3.96(3H，s)，3.77 (2H，s)，2.59(2H，t，J＝6.6Hz)，2.35(2H，t，J＝6.6Hz)，和2.12(6H，s)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.85分钟。MS：MH+623.2。

实施例19：N1-{4-[4-氨基-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

在85℃下加热2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-乙 醇(中间体3)(0.120g，0.393mmol)、N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基- 1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.190 g，0.433mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.045g，0.039mmol)和碳酸钠(0.100 g，0.943mmol)在DME(3.9mL)和水(3.9mL)中的混合液3小时。将 所述反应混合液冷却至环境温度，真空除去有机溶剂。过滤收集沉 淀物，用水(20mL)和乙醚(20mL)漂洗，真空干燥得到棕色固体状的 N1-{4-[4-氨基-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯 基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(0.125g，0.254mmol)：

                    1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.89(1H，d，J＝4.0 Hz)，8.31(1H，d，J＝8.0Hz)，8.25(1H，s)，7.99(1H，t，J＝7.4Hz)，7.89(1H，d，J＝ 10.4Hz)，7.75(1H，d，J＝8.0Hz)，7.34(1H，s)，7.31(1H，d，J＝8.4Hz)，4.89(1H， s)，4.40(2H，t，J＝5.6Hz)，3.94(3H，s)，和3.86(2H，t，J＝5.6Hz)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 9.85分钟。MS：MH+491。

实施例20：N2-{4-[4-氨基-1-(2-羟乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

在85℃下加热2-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-乙 醇(中间体3)(0.364g，1.19mol)、N2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.485g，1.19 mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.138g，0.119mmol)和碳酸钠(0.303g，2.86 mmol)在DME(12mL)和水(12mL)中的混合液4小时，随后冷却至环 境温度。真空除去DME，过滤收集所得的沉淀物，用水(50mL)和乙 醚(50mL)漂洗得到黄褐色固体状的N2-{4-[4-氨基-1-(2-羟乙基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺 (0.459g，1.00mmol)：

                                                 1H NMR(d6-DMSO，400 MHz)：δH 9.44(1H，s)，8.26(1H，s)，8.12(1H，d，J＝8.0Hz)，7.70(1H，d，J＝8.0 Hz)，7.59(1H，d，J＝8.4Hz)，7.29-7.41(6H，m)，7.15(1H，t，J＝7.4Hz)，4.90(1H， t，J＝5.8Hz)，4.41(2H，t，J＝5.8Hz)，4.04(3H，s)，3.96(3H，s)，和3.86(2H，q，J＝ 5.9Hz)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.52分钟。MS：MH+458.2。

实施例21：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺三马来酸盐

将甲磺酸2-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基] 氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酯(中间体4)(0.265g，0.495 mmol)、N-甲基哌嗪(0.065mL，0.58mmol)和三乙胺(0.10mL，0.74 mmol)在DMF(5mL)中的混合液在70℃下加热20小时。将所述反应 混合液冷却至环境温度，真空除去溶剂。加入水(25mL)，过滤收集 所得的沉淀物，用水(25mL)和乙醚(50mL)洗涤并真空干燥得到棕色 固体，所得产物经硅胶柱层析纯化。合并适当的流分，并浓缩得到 驼色固体状的N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.084g， 0.16mmol)：

                         1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.44(1H，s)，8.26 (1H，s)，8.11(1H，d，J＝8.4Hz)，7.70(1H，d，J＝8.4Hz)，7.29-7.35(4H，m)，7.15 (1H，t，J＝7.4Hz)，4.46(2H，t，J＝6.8Hz)，4.04(3H，s)，3.96(3H，s)，2.80(2H，t，J ＝6.6Hz)，2.49-2.50(2H，受DMSD峰干扰)，2.23-2.26(4H，m)，2.12(3H， s)，和0.97-0.99(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.24。MS：MH+540.3。

往N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.082g，0.15 mmol)在热乙酸乙酯(2mL)中的混合液内加入马来酸(0.053g，0.46 mmol)在热乙酸乙酯(1mL)中的溶液。立即形成沉淀物。冷却所述反 应混合液至环境温度，并过滤收集沉淀物，用乙酸乙酯(5mL)洗涤并 真空干燥得到驼色固体状的N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲 酰胺三马来酸盐(0.090g，0.10mmol)：

1H NMR(d6-DM[SO，400MHz)：δH 9.45(1H，s)，8.27(1H，s)，8.12(1H，d，J＝8.0 Hz)，7.71(1H，d，J＝8.0Hz)，7.59(1H，d，J＝8.0Hz)，7.29-7.36(4H，m)，7.15(1H， t，J＝7.4Hz)，6.17(6H，s)，4.50(2H，t，J＝6.4Hz)，4.04(3H，s)，3.96(3H，s)，3.10- 3.20(4H，m)，2.92-2.95(4H，m)，2.74(3H，s)，和2.32-2.37(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.48分钟。MS：M+540.3。

实施例22：N2-{4-[4-氨基-1-(2-吗啉-4-基乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐

往甲磺酸2-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基] 氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酯(中间体4)(0.200g，0.373 mmol)、三乙胺(0.052mL，0.37mmol)和碘化钠(0.056g，0.37mmol) 在DMF(5mL)中的混合液内加入吗啉(0.039mL，0.45mmol)。将所 述反应混合液在60℃下加热60小时。加入吗啉(0.100mL，1.15 mmol)，将所述反应混合液在80℃下加热30小时。冷却所述反应混 合液至环境温度并真空浓缩。加入水(5mL)，过滤收集所得的沉淀物， 用水(5mL)和乙醚(10mL)洗涤并真空干燥得到黄褐色固体物，所得 产物经硅胶柱层析纯化两次(采用20％MeOH-CH2Cl2洗脱)；合并适当 的流分，并浓缩得到驼色固体物，将所得固体物与乙醚一起研磨并 真空干燥得到白色固体状的N2-{4-[4-氨基-1-(2-吗啉-4-基乙基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.048 g，0.054mmol)：

                         1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.44(1H，s)，8.26 (1H，s)，8.11(1H，d，J＝8.0Hz)，7.70(1H，d，J＝7.6Hz)，7.58(1H，d，J＝7.6Hz)， 7.29-7.35(4H，m)，7.15(1H，t，J＝7.6Hz)，4.48(2H，t，J＝6.4Hz)，4.04(3H，s)， 3.96(3H，s)，3.50-3.53(4H，m)，2.82(2H，t，J＝6.2Hz)，和2.47-2.51(4H，m)；)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.02分钟。MS：M+527.3。

往N2-{4-[4-氨基-1-(2-吗啉-4-基乙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.048g，0.091mmol)在 热乙酸乙酯(2mL)中的混合液内加入马来酸(0.021g，0.18mmol)在热 乙酸乙酯(1mL)中的溶液。立即形成沉淀物。将所述反应混合液冷却 至环境温度，过滤收集沉淀物，用乙酸乙酯(5mL)洗涤并真空干燥得 到浅棕色固体状的N2-{4-[4-氨基-1-(2-吗啉-4-基乙基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐 (0.030g，0.039mmol)：

                                         1HNMR(d6-DMSO，400Mz)：δH 9.45(1H，s)，8.31(1H，s)，8.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.71(1H，d，J＝8.0Hz)，7.59 (1H，d，J＝8.4Hz)，7.31-7.35(4H，m)，7.16(1H，t，J＝7.4Hz)，6.17(4H，s)，4.72- 4.73(2H，m)，4.04(3H，s)，3.96(3H，s)，3.72-3.79(4H，m)，和3.10-3.30(6H， 受水峰干扰)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 11.08分钟。MS：M+527.3。

实施例23：N2-[4-(4-氨基-1-{2-[(2-羟乙基)氨基]乙基}-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺单马来酸盐

将甲磺酸2-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基] 氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酯(中间体4)(0.080g，0.15 mmol)、乙醇胺(0.05mL，0.82mmol)、三乙胺(0.021mL，0.15mmol) 和碘化钠(0.021g，0.15mmol)在DMF(2.5mL)中的混合液在70℃下 加热15小时。冷却所述反应混合液至环境温度并浓缩；加入水(5 mL)，过滤收集所得的沉淀物，用水(5mL)漂洗。所得的粗制固体物 经硅胶柱层析纯化(洗脱液20％MeOH-CH2Cl2)。合并适当的流分，真 空除去溶剂得到白色固体状的N2-[4-(4-氨基-1-{2-[(2-羟乙基)氨基]乙 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲 酰胺(0.009g，0.02mmol)。RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm； 在15分钟内用5％-100％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 9.39分 钟。MS：M+501.3。

往热的N2-[4-(4-氨基-1-{2-[(2-羟乙基)氨基]乙基}-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.009g， 0.02mmol)在乙酸乙酯(2mL)中的溶液内加入马来酸(0.005g，0.04 mmol)的乙酸乙酯(0.5mL)溶液。将所述反应混合液冷却至环境温度， 过滤收集沉淀物并真空干燥得到白色固体状的N2-[4-(4-氨基-1-{2-[(2- 羟乙基)氨基]乙基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基 -1H-2-吲哚甲酰胺单马来酸盐(0.009g，0.014mmol)：

       1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.45(1H，s)，8.69-8.74(2H，bs)，8.31 (1H，s)，8.14(1H，d，J＝8.0Hz)，7.71(1H，d，J＝8.0Hz)，7.59(1H，d，J＝8.4Hz)， 7.32·7.36(4H，m)，7.15(1H，t，J＝7.4Hz)，6.07(2H，s)，5.28(1H，t，J＝4.2Hz)， 4.71(2H，t，J＝5.8Hz)，4.04(3H，s)，3.96(3H，s)，3.65-3.67(2H，m)，3.50-3.60(2H， m)，和3.10-3.20(2H，m)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 9.97分钟。MS：M+501.3。

实施例24：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(二甲氨基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺单马来酸盐

将甲磺酸2-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基] 氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酯(中间体4)(0.080g，0.15 mmol)、二甲胺(2.0M THF溶液，0.07mL，0.15mmol)、三乙胺(0.021 mL，0.15mmol)和碘化钠(0.021g，0.15mmol)在DMF(2.5mL)中的 混合液在可重复密封的管中，在70℃下加热15小时。加入其它的二 甲胺溶液(0.10mL)，将所述反应混合液在70℃下加热20小时。冷却 所述反应混合液至环境温度并真空浓缩。加入水(5mL)，过滤收集所 得的沉淀物，并经硅胶柱层析纯化(洗脱液20％MeO H:CH2Cl2至 10:30:60 Et3N:MeOH:CH2Cl2)；合并适当的流分，浓缩得到白色固体 状的N2-(4-{4-氨基-1-[2-(二甲氨基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.009g，0.02mmol)。 RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.52。MS：M+485.2。

往热的N2-(4-{4-氨基-1-[2-(二甲氨基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.009g，0.02mmol) 在乙酸乙酯(2mL)中的溶液内加入马来酸(0.005g，0.04mmol)的乙酸 乙酯(1mL)溶液。将所述反应混合液冷却至环境温度，过滤收集沉淀 物并真空干燥得到白色固体状的N2-(4-{4-氨基-1-[2-(二甲氨基)乙基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺 单马来酸盐(0.005g，0.008mmol)：

    1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.46(1H，s)，8.32(1H，s)，8.15(1H，d， J＝8.0Hz)，7.71(1H，d，J＝7.6Hz)，7.59(1H，d，J＝8.4Hz)，7.32-7.35(4H，m)， 7.16(1H，t，J＝7.4Hz)，6.06(2H，s)，4.75(2H，t，J＝6.0Hz)，4.04(3H，s)，3.96(3H， s)，3.65(2H，t，J＝5.6Hz)，和2.88(6H，s)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.08分钟。MS：M+485.2。

实施例25：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(1H-1-咪唑基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺三马来酸盐

将甲磺酸2-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基] 氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙酯(中间体4)(0.080g，0.15 mmol)、咪唑(0.011g，0.15mmol)、三乙胺(0.021mL，0.15mmol)和 碘化钠(0.021g，0.15mmol)在DMF(2.5mL)中的混合液在70℃下加 热15小时。加入咪唑(0.011g，0.15mmol)，将所述反应混合液在70 ℃下加热60小时。冷却所述反应混合液至环境温度并真空浓缩。加 入水(5mL)，过滤收集所得的沉淀物，得到驼色固体物，将所述产 物溶于热乙酸乙酯中，随后缓慢冷却至环境温度。浓缩滤液得到N2- (4-{4-氨基-1-[2-(1H-1-咪唑基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲 氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.034g，0.067mmol)：RP- HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.45分钟。MS：M+508.2。

往热的N2-(4-{4-氨基-1-[2-(1H-1-咪唑基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.034g，0.067 mmol)在乙酸乙酯(2mL)中的混合液内加入马来酸(0.016g，0.13mmol) 的乙酸乙酯溶液(1mL)，立即形成白色沉淀物。将所述反应混合液冷 却至环境温度，过滤收集沉淀物并真空干燥得到黄色固体状的N2-(4- {4-氨基-1-[2-(1H-1-咪唑基)乙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧 基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺三马来酸盐(0.011g，0.011mmol)：

                                       1H NMR(d6-DMSO，400MHz)：δH 9.44 (1H，s)，8.90(1H，s)，8.20(1H，s)，8.12(1H，d，J＝8.0Hz)，7.71(1H，d，J＝8.0Hz)， 7.58-7.63(3H，m)，7.32-7.36(2H，m)，7.24-7.26(2H，m)，7.16(1H，t，J＝7.6Hz)， 6.18(6H，s)，4.85(2H，t，J＝6.8Hz)，4.71(2H，t，J＝5.2Hz)，4.04(3H，s)，和4.00 (3H，s)；

RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，15cm；在15分钟内用5％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 10.35分钟。MS：M+508.2。

实施例26：N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

在0℃下，用5分钟将2-氟-4-三氟甲基-1-苯甲酰氯(0.87g，3.83 mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液加入至吡啶(15mL)和4-[4-氨基-3-(4-氨 基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-环己酮(1.00g，2.56 mmol)在二氯甲烷(5mL)的混合液中。在0℃下搅拌所述混合液10分 钟，并在环境温度下搅拌过夜。减压除去溶剂。将剩余物在水和二 氯甲烷间分配。二氯甲烷层用饱和氯化铵水溶液和饱和氯化钠水溶 液洗涤两次，用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发得到粗产物。所述粗 产物经快速硅胶柱层析(使用Isco系统)纯化得到白色固体状的N1-{4- [4氨基-1-(4-氧代环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}- 2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.95g，1.76mmol)：1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 9.90(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.28(s，1H)，7.99(t，1H)，7.89 (d，1H)，7.75(d，1H)，7.34(s，1H)，7.30(d，1H)，6.90(br，2H)，5.27(m，1H)，3.94(s， 3H)，2.70(m，2H)，2.47(m，4H)，2.17(m，2H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在 10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)。Rt 9.23分钟。 MS：MH+ 543。

实施例27：顺式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺：和

实施例28：反式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将吗啉(0.08mL，0.93mmol)加入N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代环己 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲 酰胺(0.42g，0.78mmol)和乙酸(0.11mL，1.86mmol)在二氯乙烷(25mL) 的混合液中。在环境温度下搅拌所述混合液10分钟。加入三乙酰氧 基硼氢化钠(0.23g，1.09mmol)，在环境温度下搅拌所述混合液过夜。 依次加入水(6mL)和碳酸氢钠(0.38g，4.53mmol)。搅拌所得混合液 1小时，并分离出有机层。用二氯甲烷(20mL)萃取水层。将合并的 有机物用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发得到粗产物。所述粗产物经 快速硅胶柱层析(使用Isco系统)纯化得到白色固体状的顺式-N1-{4-[4- 氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯 基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.23g，0.37mmol)和反式-N1-{4-[4-氨 基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}- 2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.09g，0.14mmol)。

顺式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺的数据：1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.91(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.24(s，1H)，8.00(t，1H)， 7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.33(s，1H)，7.30(d，1H)，6.90(br，2H)，4.83(m，1H)， 3.94(s，3H)，3.62(br，4H)，1.57-2.55(m，10H)；MS：MH+ 614.

反式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺的数据：1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.90(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.24(s，1H)，7.99(t，1H)， 7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.32(s，1H)，7.29(s，1H)，4.67(m，1H)，3.94(s，3H)，3.59 (br，4H)，1.48-2.69(m，10H)；MS：MH+ 614.

实施例29：顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨 基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)环己基}氨基)丙酸乙 酯；和

实施例30：反式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨 基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯

按照制备顺式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺和反式- N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺的类似方法制得白色固体状的 顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲氧基 苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯和反式-3- ({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲氧基苯基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯。

顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}3-甲氧 基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯的数据：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.90(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.23(s，1H)，8.00(t， 1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.33(s，1H)，7.30(d，1H)，6.90(br，2H)，4.37(m， 1H)，4.08(q，2H)，3.94(s，3H)，2.76(m，2H)，2.32(m，2H)，1.88(m，2H)，1.67(m， 4H)，1.16(t，3H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm； 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)。Rt 7.92分 钟。MS：MH+ 644。

反式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲 氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯的数 据：

                                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.89(dd，1H)， 8.30(d，1H)，8.24(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.32(s，1H)，7.29 (d，1H)，6.90(br，2H)，4.68(m，1H)，4.08(q，2H)，3.94(s，3H)，2.82(m，2H)，2.46 (m，5H)，1.91-2.07(m，6H)，1.18(t，3H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm， 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)。Rt 7.69分 钟。MS：MH+ 644。

实施例31：顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基] 氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸

将顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3- 甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯(0.23 g，0.36mmol)、对-二噁烷(15mL)、氢氧化钾(0.10g，1.81mmol)和 水(1.5mL)的混合液在80℃下加热3小时。蒸发溶剂，剩余物经制备 HPLC纯化得到白色固体状的顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲 基苯甲酰基]氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基} 氨基)丙酸(0.11g，0.18mmol)：

                                       1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.91 (dd，1H)，8.31(d，1H)，8.25(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.35(s， 1H)，7.32(s，1H)，6.89(br，2H)，4.79(m，1H)，3.95(s，3H)，2.46-3.00(m，7H)，2.29 (m，2H)，1.91(m，2H)，1.80(m，2H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm； 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)。Rt 6.06分 钟。MS：MH+ 616。

实施例32：反式-3-({4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[2-甲氧基-4-三氟 甲基苯甲酰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基) 丙酸

将反式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3- 甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯(0.04 g，0.06mmol)、对-二噁烷(4mL)、氢氧化钾(0.02g，0.31mmol)、痕 量的甲醇和水(0.4mL)的混合液在80℃下加热1小时。环境温度下 搅拌所述混合液过夜，并在80℃下搅拌4小时。蒸发溶剂，剩余物 经制备HPLC纯化得到白色固体状的反式-3-({4-[4-氨基-3-(3-甲氧基- 4-{[2-甲氧基-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 1-基]环己基}氨基)丙酸(0.04g，0.06mmol)：1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 10.72(s，1H)，8.61(d，1H)，8.28(d，1H)，8.24(s，1H)， 7.61(s，1H)，7.53(d，1H)，7.33(s，1H)，7.29(d，1H)，4.72(m，1H)，4.20(s，3H)，4.05 (s，3H)，1.44-3.61(m，13H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm； 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)。Rt 6.36分 钟。MS：MH+ 628。

实施例33：N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基 苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

A.N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2- 氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.10g，0.19 mmol)、N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.13g，0.29mmol)、四(三苯基膦)合 钯(O)(0.01g，0.01mmol)和一水合碳酸钠(0.06mg，0.48mmol)在水(2 mL)和乙二醇二甲醚(4mL)中的混合液在下85℃加热过夜。减压除去 溶剂。往所得剩余物中加入水，将所得混合液用乙酸乙酯萃取三次。 合并有机物，用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸 发得到棕色固体，所得产物经快速硅胶柱层析(使用Isco系统)纯化得 到白色固体状的N1-[4-(4-氨基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.12g，0.17mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.89(dd，1H)，8.25(d，1H)，8.28(s，1H)，8.00(t，1H)，7.94(s，1H)，7.88 (d，1H)，7.73(d，1H)，7.24(m，15H)，3.90(s，3H)；MS：MH+ 689.

B.N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟 -4-三氟甲基苯甲酰胺

将N1-[4-(4-氨基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧 基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(2.10g，1.75mmol)、6N盐酸溶 液(10mL)、对-二噁烷(10mL)和乙醇(8mL)的混合液在50℃下加热6 小时。过滤所述混合液并将固体物用乙醇洗涤，在真空烘箱中干燥 过周末，固体物经快速硅胶柱层析纯化得到N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.35g， 0.78mmol)。浓缩滤液，产物经快速硅胶柱层析和制备HPLC纯化得 到相同的白色固体状产物N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)- 2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.67g，1.51mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 13.58(s，1H)，9.90(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.23(s，1H)，8.05(t，1H)， 7.90(d，1H)，7.75(d，1H)，7.36(s，1H)，7.24(d，1H)，3.94(s，3H)；MS：MH+ 447.

实施例34：N1-[4-(4-氨基-1-四氢-2H-4-吡喃基-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将偶氮二甲酸二乙酯(0.07mL，0.45mmol)加入至N1-[4-(4-氨基- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺 (0.10g，0.22mmol)、三苯基膦(0.12g，0.45mmol)和四氢-4H-吡喃-4- 醇(0.04g，0.34mmol)在四氢呋喃(5mL)中的混合液内，将所得混合 液在环境温度下搅拌过夜。加入四氢-4H-吡喃-4-醇(0.01g，0.11 mmol)、三苯基膦(0.04g，0.15mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.02mL， 0.15mmol)，将所得混合液在环境温度下搅拌5小时。蒸发出溶剂， 剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的N1-[4-(4-氨基-1-四氢- 2H-4-吡喃基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟 甲基苯甲酰胺(0.03g，0.06mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.91(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.25(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75 (d，1H)，7.34(s，1H)，7.31(d，1H)，6.90(br，2H)，4.95(m，1H)，4.02(m，2H)，3.95 (s，3H)，3.56(t，2H)，2.22(m，2H)，1.89(m，2H)；MS：MH+ 531.

实施例35：N1-{4-[4-氨基-1-(4-羟基-2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

A.4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-2-环戊烯-1-醇

将四(三苯基膦)合钯(0)(0.04g，0.03mmol)、3-碘-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(0.30g，1.14mmol)和二甲亚砜(3mL)的混合液在环境温度 下及在黑暗中搅拌2分钟，冷却至0℃。0℃下将2，4a-二氢-1aH-环戊 二烯并[b]环氧乙烯(0.14g，1.72mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液加入至 所述混合液中，并在0℃下搅拌3小时。在环境温度下将所得混合液 搅拌过夜，经制备HPLC纯化得到白色固体状的4-(4-氨基-3-碘-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-2-环戊烯-1-醇(0.24g，0.70mmol)：RP HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在10 分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)。Rt 4.23分钟。 MS：MH+ 344。

B.N1-{4-[4-氨基-1-(4-羟基-2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-2-环戊烯-1-醇 (0.12g，0.35mmol)、N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧杂硼 杂环戊烷-2-基)苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.23g，0.53mmol)、 四(三苯基膦)合钯(0)(0.02g，0.02mmol)和一水合碳酸钠(0.11g，0.88 mmol)混合物在乙二醇二甲醚(6mL)和水(3mL)中的混合液在85℃下 及氮气气氛中加热6小时。将所述混合液冷却至环境温度，减压除 去溶剂。剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基- 1-(4-羟基-2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2- 氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.18g，0.34mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.89(dd，1H)，8.31(d，1H)，8.26(s，1H)，8.00(t，1H)，7.88(d，1H)，7.75 (d，1H)，7.32(s，1H)，7.29(d，1H)，6.90(br，2H)，6.09(d，1H)，5.93(d，1H)，5.76(m， 1H)，5.31(m，1H)，4.74(m，1H)，3.94(s，3H)，2.84(m，1H)，2.02(m，1H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm； 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)。Rt 8.50分 钟。MS：MH+ 529。

实施例36：N1-{4-[4-氨基-1-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将N1-{4-[4-氨基-1-(4-羟基-2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.10g，0.19mmol)和 10％披钯碳(0.03g)的乙醇(10mL)混合液在环境温度及一大气压的氢 气下搅拌过夜。过滤所述混合液，滤液经制备HPLC纯化得到白色 固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.07g，0.13mmol)：

                                                       1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.91(dd，1H)，8.31(d，1H)，8.24(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75 (d，1H)，7.34(s，1H)，7.30(d，1H)，6.90(br，2H)，5.17(m，1H)，4.97(m，1H)，4.22 (m，1H)，3.94(s，3H)，1.79-2.41(m，6H)；MS：MH+ 531.

实施例37：乙酸4-(4-氨基-3-{4-[(1H-2-吲哚基羰基)氨基]-3-甲氧基苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)六氢吡啶鎓

0℃下将草酰氯(0.06mL，0.60mmol)加入吲哚-2-甲酸(0.88g， 0.546mmol)的二氯甲烷(5mL)和四氢呋喃(5mL)溶液中。加入N，N- 二甲基甲酰胺(从0.1mL注射器中加入3滴)，0℃下搅拌所得混合液 10分钟，以及在环境温度下搅拌20分钟。减压蒸发出所述溶剂和过 量的反应剂。将剩余物溶于二氯甲烷(2mL)中，将所得溶液(1.25mL) 加入4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]- 1-哌啶甲酸叔丁酯(0.12g，0.27mmol)和吡啶(0.4mL)在二氯甲烷(1mL) 的溶液中。在环境温度下搅拌所得混合液2小时。加入三氟乙酸(1 mL)，在环境温度下搅拌所得混合液2小时。减压蒸发出所述溶剂， 剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的乙酸4-(4-氨基-3-{4- [(1H-2-吲哚基羰基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基) 六氢吡啶鎓(0.07g，0.14mmol)：

               1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.85(br，1H)，9.45(s，1H)，8.24 (d，1H)，8.12(d，1H)，7.68(d，1H)，7.48(d，1H)，7.40(s，1H)，7.35(s，1H)，7.30(d， 1H)，7.24(t，1H)，7.09(t，1H)，4.77(m，1H)，3.97(s，3H)，3.11(m，2H)，2.68(m， 2H)，2.09(m，2H)，1.89(s，3H)，1.84(m，2H)；MS：MH+ 483.

实施例38-53：

使用制备乙酸4-(4-氨基-3-{4-[(1H-2-吲哚基羰基)氨基]-3-甲氧基 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)六氢吡啶鎓的相同方法，制得以下 化合物。

实施例54：乙酸4-[4-氨基-3-(4-{[(1-乙基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}-3- 甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]六氢吡啶鎓

0℃下将60％悬浮在矿物油中的氢化钠(0.006g，0.15mmol)加入 N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯 基}-1H-2-吲哚甲酰胺(0.08g，0.14mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0mL) 溶液中。将所得混合液0℃下搅拌10分钟，以及在环境温度下搅拌 20分钟。加入乙基碘(0.02g，0.14mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(0.5mL) 溶液，将所得混合液在环境温度下搅拌过夜。加入乙基碘(0.01g，0.07 mmol)，将所得混合液在环境温度下搅拌过夜。加入三氟乙酸(3mL)， 将所得混合液在环境温度下搅拌24小时。减压蒸发出溶剂和过量的 反应剂，剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的乙酸4-[4-氨基- 3-(4-{[(1-乙基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-1-基]六氢吡啶鎓(0.05g，0.09mmol)：

            1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.43(s，1H)，8.27(s，1H)，8.14(d， 1H)，7.71(d，1H)，7.61(d，1H)，7.34(s，2H)，7.31(t，2H)，7.15(t，1H)，4.96(m，1H)， 4.62(q，2H)，3.96(s，3H)，3.00(m，2H)，2.28(m，2H)，2.03(m，2H)，1.91(s，3H)， 1.33(t，3H)；MS：MH+ 511.

实施例55和56：

使用制备乙酸4-[4-氨基-3-(4-{[(1-乙基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}- 3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]六氢吡啶鎓的相同方法， 制得以下化合物。

实施例57：1-(1-甲基-3-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺乙酸盐

80℃下将外消旋的3-碘-1-(1-甲基-3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(0.050g，0.00014mol)在二甲氧基乙烷(2.5mL)和水(5mL)中 的溶液用4-苯氧基苯基硼酸(0.033g，0.00015mol)、碳酸钠(0.037g， 0.00037mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.016g，0.000014mol)处理18小 时。真空除去有机溶剂，所得粗制物质经制备RP-HPLC(Rainin C18， 8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用 30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含 水混合液冷冻干燥得到白色固体状的1-(1-甲基-3-哌啶基)-3-(4-苯氧 基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.040g，0.00009mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.24(s，1H)，7.65(d，2H)，7.43(t，2H)，7.10-7.22 (m，5H)，4.74-4.84(m，1H)，2.94(dd，1H)，2.79(d，1H)，2.36(t，1H)，2.22(s，3H)， 1.89(s，3H)，1.86-2.01(m，3H)，1.76-1.84(m，1H)，1.60-1.75(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 13.74分钟；MS：MH+ 401。

实施例58：1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐BSF 4058532F

80℃将外消旋的3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(0.050g，0.00012mol)在二甲氧基乙烷(2.5mL)和水(5 mL)中的溶液用4-苯氧基苯基硼酸(0.029g，0.00014mol)、碳酸钠 (0.033g，0.00031mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.014g，0.00001mol) 处理20小时。真空除去有机溶剂，将所得的粗制产物经制备RP- HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随 后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空 除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白色固体状的1-[1-(2-甲氧基 乙基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐 (0.038g，0.00007mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.24(s，1H)，7.65(d，2H)，7.43(t，2H)，7.09-7.22 (m，5H)，4.71-4.82(m，1H)，3.44(t，2H)，3.21(s，3H)，3.04(dd，1H)，2.91(d，1H)， 2.47-2.60(m，3H)，1.94-2.09(m，3H)，1.89(s，3H)，1.75-1.84(m，1H)，1.57-1.74(m， 1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 14.26分钟；MS：MH+ 445。

实施例59：反式-1-{4-[4-氨基-3-(3-氯-4-{[4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨 基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}-4-甲基六氢吡嗪二鎓二 马来酸盐

A.N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯

使4-溴-2-氯苯胺(5.00g，0.0242mol)的四氢呋喃(50mL)溶液与 1.0M双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠的四氢呋喃(53.2mL，0.0532mol) 溶液反应。将所得混合液在环境温度下搅拌15分钟。加入二碳酸二 叔丁酯(6.34g，0.0290mol)，搅拌所述溶液2小时。真空除去溶剂， 所得粗制物经快速硅胶柱层析(以庚烷/乙酸乙酯(4:1)为洗脱液)纯化。 真空除去溶剂得到白色固体状的N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯 (4.214g，0.0137mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.75(s，1H)，7.71(d，1H)，7.54(d，1H)，7.50(dd， 1H)，1.46(s，9H)；

TLC(庚烷/乙酸乙酯4:1)Rf 0.54。

B.N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基] 氨基甲酸叔丁酯

将N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.10g，0.00685mol)、二 硼酸二频哪醇酯(2.09g，0.00822mol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁] 二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.17g，0.00021mol)的络合物和乙酸钾 (2.02g，0.02055mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的混合液在80℃ 下及在氮气气氛中加热6小时。真空除去溶剂，剩余物与庚烷(70mL) 一起研磨，经521滤垫过滤除去所得固体物。真空除去庚烷得 到灰色固体状的N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(1.93g，0.00546mol)：

                              1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.65(s，1H)， 7.74(d，1H)，7.61(d，1H)，7.56(dd，1H)，1.47(s，9H)，1.29(s，12H).

C.反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯

将反式3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(2.20g，0.00498mol)、N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂 硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(1.93g，0.00548mol)、碳酸 钠(1.32g，0.01245mol)在1，2-二甲氧基乙烷(50mL)和水(100mL)中 的混合液剧烈搅拌，加入四(三苯基膦)合钯(0)(0.345g，0.00030mol)。 80℃下搅拌所述反应混合液，随后加入其它的四(三苯基膦)合钯 (0)(0.345g，0.00030mol)。80℃下再搅拌所述反应混合液16小时。 真空除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液 (200mL)间分配。分离各相，水相用乙酸乙酯(3 x 75mL)萃取。合并 的有机相用硫酸镁干燥，真空除去溶剂。产物经快速硅胶柱层析(以 二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵(90:10:0.5)为洗脱液)纯化。真空除去溶剂， 得到白色固体状的反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.993g， 0.00368mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.76(s，1H)，8.23(s，1H)，7.80(d，1H)，7.68(d， 1H)，7.57(dd，1H)，4.58-4.71(m，1H)，2.15(s，3H)，1.89-2.61(m，15H)，1.49(s， 9H)，1.40-1.48(m，2H)；TLC(二氯甲烷/甲醇＝90:10)Rf0.13，MS：M+ 541.

D.反式3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.993g，0.00368mol)加 入20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液中。环境温度下搅拌所得混合液2 小时。真空除去溶剂，将剩余物溶解在中二氯甲烷(50mL)，用1.0M 氢氧化钠水溶液(2 x 25mL)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，真空除去溶 剂得到白色固体状的反式3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基) 环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.564g，0.00355mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.45(d，1H)，7.31(dd，1H)，6.92(d， 1H)，4.57-4.63(m，1H)，2.23-2.55(m，9H)，2.14(s，3H)，1.89-2.08(m，6H)，1.38- 1.52(m，2H)；TLC(二氯甲烷/甲醇＝90:10)Rf0.08；MS：MH+ 441.

E.反式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-dl嘧啶-3-基}-2-氯苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二马来酸盐

-10℃下，往3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)在吡啶(5mL)中的 混合液内滴加入4-(三氟甲基)-1-苯甲酰氯(0.188g，0.00090mol)，保 持温度低于-5℃。将所得混合液在-10℃下搅拌15分钟，随后在环境 温度下搅拌18小时。加入1N氢氧化钠水溶液(1.0mL)后，搅拌所 得混合液1小时。真空除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯(15mL)和水(30 mL)在间分配。分离各层，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取，合并的有 机层经硫酸镁干燥。真空除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟 内用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈， 将含水混合液冷冻干燥得到经纯化的游离碱(0.032g，0.000052mol)。 将所述游离碱溶解在无水乙醇(4mL)中，加热回流。加入马来酸(0.018 g，0.000156mol)的无水乙醇(1mL)溶液后，再回流所述溶液15分钟。 冷却所得混合液至环境温度，过滤出所得沉淀物，用尽可能少量的 无水乙醇洗涤。真空干燥沉淀物得到白色固体状的反式N1-(4-{4-氨 基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯 基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二马来酸盐(0.020g，0.00002mol)：

            1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ　10.42(s，1H)，8.26(s，1H)，8.20 (d，2H)，7.96(d，2H)，7.80-7.83(m，2H)，7.46(dd，1H)，6.80-7.20(b，2H)，6.13(s， 4H)，4.61-4.73(m，1H)，2.52-2.64(m，4H)，2，23-2.46(m，5H)，2.16(s，3H)，1.90- 2.10(m，6H)，1.42-1.56(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 14.97分钟；MS：MH+ 613。

实施例60：反式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺二马来酸盐

-10℃下往3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)在吡啶(5mL)中的 混合液内滴加入4-(三氟甲氧基)-1-苯甲酰氯(0.203g，0.00091mol)， 保持温度低于-5℃。-10℃下搅拌所得混合液15分钟，随后在环境温 度下搅拌18小时。加入1N氢氧化钠水溶液(1.0mL)后，将所得混合 液搅拌1小时。真空除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯(15mL)和水(30 mL)间分配。分离各层，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取，合并的有机 层经硫酸镁干燥。真空除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，300，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内 用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将 含水混合液冷冻干燥得到经纯化的游离碱(0.034g，0.000054mol)。 将所述游离碱溶解在无水乙醇(4mL)中，加热至回流。加入马来酸 (0.019g，0.000162mol)的无水乙醇(1mL)溶液，回流所述溶液15分 钟。冷却所述混合液至环境温度，过滤出所得的沉淀物，用尽可能 少量的无水乙醇洗涤。真空干燥沉淀物得到白色固体状的反式N1-(4- {4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2 氯苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺二马来酸盐(0.020g，0.00002mol)：

            1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.29(s，1H)，8.26(s，1H)，8.14(d， 2H)，7.78-7.87(m，2H)，7.68(dd，1H)，7.57(d，2H)，6.80-7.20(b，2H)，6.11(s，4H)， 4.65-4.77(m，1H)，2.38-3.60(m，12H)，1.95-2.15(m，6H)，1.51-1.68(m，2H)；

RPHPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 15.41分钟；MS：MH+ 629。

实施例61：反式3-(3-氯-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-[4- (4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

环境温度下使3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)的1，2-二氯乙烷 (20mL)混合液与5-甲基-2-糠醛(0.052g，0.00048mol)、乙酸(0.095g， 0.00159mol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.336g，0.00159mol)反应。间 隔两个24小时加入另外的2当量的三乙酰氧基硼氢化钠(0.672g， 0.00318mol)。真空除去溶剂，使剩余物在氯仿(25mL)和饱和碳酸氢 钠水溶液(50mL)间分配。分离各相，水相用氯仿(2 x 25mL)萃取。 合并的有机相用硫酸镁干燥，真空除去溶剂。剩余物经制备RP- HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随 后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空 除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白色固体状的反式3-(3-氯-4- {[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.129g，0.00022mol)：

                                    1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s， 1H)，7.51(d，1H)，7.39(dd，1H)，6.93(d，1H)，6.20(d，1H)，6.14(t，1H)，5.98(d， 1H)，4.55-4.66(m，1H)，4.38(d，2H)，2.23(s，3H)，2.18-2.61(m，10H)，2.14(s， 3H)，1.91(s，3H)，1.87-2.09(m，5H)，1.37-1.53(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 14.48分钟；MS：MH+ 535。

实施例62：反式3-{3-氯-4-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

使3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)的1，2-二氯乙烷(20mL)混合 液与2-氯-6-氟苯甲醛(0.076g，0.00048mol)、乙酸(0.095g，0.00159mol) 和三乙酰氧基硼氢化钠(0.336g，0.00159mol)在环境温度下反应。间 隔三个24小时加入另外3当量的三乙酰氧基硼氢化钠(1.008g， 0.00477mol)，该段时间后所有原料已消耗完。真空除去溶剂，使剩 余物在氯仿(25mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)间分配。分离各 相，水相用氯仿(2 x 25mL)萃取。合并的有机相用硫酸镁干燥，真空 除去溶剂。剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 白色固体状的反式3-{3-氯-4-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.074g，0.00011 mol)：

                               1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)， 7.52(d，1H)，7.35-7.47(m，4H)，6.99(d，1H)，5.75(t，1H)，4.55-4.66(m，1H)，4.57 (d，2H)，2.25-2.61(m，11H)，2.16(s，3H)，1.91(s，3H)，1.87-2.09(m，4H)，1.37-1.53 (m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 15.97分钟；MS：MH+ 583。

实施例63：反式N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基羰基)-4-哌啶基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰 胺马来酸盐

使N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺(0.200g，0.00041mol)的甲苯(10 mL)混合液与5H，10H-二咪唑并[1，5-a:1，5-d]吡嗪-5，10-二酮(0.040g， 0.00021mol)在回流下反应18小时。加入其它当量的5H，10H-二咪唑 并[1，5-a：1，5-d]吡嗪-5，10-二酮，再回流所得混合液6小时。真空除去 溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％ 恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵， 21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到游离碱 (0.103g，0.00017mol)。将所述游离碱溶解在无水乙醇(10mL)中， 加热至回流。加入马来酸(0.030g，0.00034mol)的无水乙醇(1mL)溶 液后，回流所得溶液15分钟，此后形成沉淀物。冷却所得混合液至 环境温度，过滤所得沉淀物，用尽可能少量的无水乙醇洗涤。真空 干燥沉淀物得到白色固体状的反式N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基羰 基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯 基-1-环丙烷甲酰胺马来酸盐(0.055g，0.00008mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.63(s，1H)，8.26(s，1H)，8.22(d，1H)，8.00(b， 1H)，7.74(b，1H)，7.43-7.48(m，1H)，7.16-7.33(m，7H)，6.21(s，2H)，4.97-5.13(m， 1H)，2.91-3.47(m，4H)，2.53-2.65(m，1H)，2.30-2.45(m，1H)，2.07-2.26(m，2H)， 1.95-2.07(m，2H)，1.45-1.50(m，1H)，1.28-1.32(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 14.17分钟；MS：MH+ 578。

实施例64：顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2-氨基乙基)-4-羟基环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰 胺乙酸盐

A.顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺

将顺式N1-{4-[4-氨基-1-(1-氧杂螺[2.5]辛-6-基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(反式)-2-苯基环丙烷-1-甲酰胺(0.605g， 0.0012mol)、高氯酸锂(0.189g，0.0018mol)和氰化钾(0.116g，0.0018 mol)在乙腈(60ml)中的混合液在80℃下加热2天。冷却至环境温度， 用水(30mL)稀释，用乙醚(3 x 30mL)萃取。将合并的有机相用硫酸镁 干燥。真空除去溶剂，所得的粗制产物经快速硅胶柱层析(以二氯甲 烷/甲醇(95∶5)为洗脱液)纯化。真空除去溶剂，得到白色固体状的顺 式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺(0.602g， 0.0011mol)：

                                   1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64 (s，1H)，8.23(t，2H)，7.31(t，2H)，7.25(s，1H)，7.17-(m，4H)，4.61-4.62(m，1H)， 3.91(s，1H)，2.66(s，2H)，2.55-2.62(m，1H)，2.31·2.45(m，3H)，1.58-1.89(m，6H)， 1.45-1.53(m，1H)，1.28-1.38(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 15.21分钟；MS：MH+ 538。

B.顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2-氨基乙基)-4-羟基环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺 乙酸盐

往顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷-甲酰胺 (0.200g，0.00037mol)在甲醇(20ml)和氢氧化铵(1mL)的溶液中加入 阮内镍(0.5mL)。在氢气气氛(1atm)下，将所得混合液搅拌18小时。 经Celite过滤所述反应混合液，真空除去溶剂。剩余物经制备RP- HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随 后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空 除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白色固体状的顺式N1-(4-{4- 氨基-1-[4-(2-氨基乙基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2- 甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺乙酸盐(0.045g，0.000083 mol)：1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64(s，1H)，8.23(d，1H)，8.22-8.24(m，1H)，7.17- 7.33(m，7H)，4.65-4.67(m，1H)，3.91(s，3H)，2.84-2.91(m，1H)，2.53-2.55(m， 1H)，2.33-2.40(m，4H)，1.85(s，3H)，1.35-1.80(m，9H)，1.30-1.33(m，1H)； RPHPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 13.29分钟；MS：MH+ 444。

实施例65：顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-羟基环己 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙 烷甲酰胺

环境温度下，往良好搅拌的顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲基)- 4-羟基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2- 苯基-1-环丙烷甲酰胺(0.200g，0.00037mol)的二甲亚砜(4mL)溶液中 加入碳酸钾(0.216g，0.00156mol)。滴加入30％的过氧化氢(0.6mL) 水溶液，保持温度恒定。将所得混合液在环境温度下搅拌32小时。 往所得混合液中加入水(20mL)，将形成的沉淀物滤出。将沉淀物用 水洗涤并真空干燥。所得的固体物经制备RP-HPLC(Rainin C18， 8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用 30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含 水混合液冷冻干燥得到白色固体状的顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2氨基 -2-氧代乙基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯 基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺(0.117g，0.00021mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64(s，1H)，8.23(d， 1H)，8.22(s，1H)，7.43-7.48(m，1H)，7.15-7.35(m，7H)，7.05-7.10(m，1H)，4.97(s， 1H)，4.61-4.71(m，1H)，3.91(s，3H)，2.54-2.64(m，1H)，2.30-2.44(m，3H)，2.24(s， 2H)，1.55-1.81(m，6H)，1.45-1.53(m，1H)，1.28-1.36(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 14.05分钟；MS：MH+ 556。

实施例66：顺式N1-[4-(4-氨基-1-(4-[(二甲氨基)甲基]-4-羟基环己 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-(反式)-2-苯基-1-环丙 烷甲酰胺乙酸盐

往顺式N1-{4-[4-氨基-1-(1-氧杂螺[2.5]辛-6-基)-1吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(反式)-2-苯基环丙烷-1-甲酰胺(0.190g， 0.000302mol)的2-丙醇(10mL)的溶液中加入2M的二甲胺的甲醇溶 液(0.91mL)，将所得的混合液将压力管中在65℃下加热18小时。真 空除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 白色固体状的顺式N1-[4-(4-氨基-1-{4-[(二甲氨基)甲基]-4-羟基环己 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-(反式)-2-苯基-1-环丙 烷甲酰胺乙酸盐(0.109g，0.000177mol)：

1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64(s，1H)，8.23(d，1H)，8.22-8.24(m，1H)， 7.17-7.33(m，7H)，4.56-4.68(m，1H)，3.91(s，3H)，2.54-2.64(m，1H)，2.30-2.44 (m，3H)，2.28(s，6H)，2.24(s，2H)，1.91(s，3H)，1.63-1.78(m，4H)，1.44-1.58(m， 3H)，1.28-1.36(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 13.54分钟；MS：MH+ 556。

实施例67：反式N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(2R)四氢-1H-2-吡咯甲酰胺乙酸 盐

在环境温度下，使反式3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌 嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00046mol)的 N，N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液与1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.068g， 0.00050mol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.132g， 0.00069mol)、D-Boc-脯氨酸(0.108g，0.00050mol)和N，N-二异丙基 乙胺(0.184g，0.00142mol)反应24小时。真空除去溶剂，使剩余物 在二氯甲烷(10mL)和5％柠檬酸水溶液(20mL)间分配。分离各层， 水层用二氯甲烷萃取(2 x 10mL)。合并的有机相用饱和碳酸氢钠水溶 液(15mL)洗涤并用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，在环境温度下，将 剩余物在20％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液中搅拌6小时。真空除去 溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8mm，25cm；5％ 恒溶剂洗脱5分钟，随后在20分钟内用5％-40％乙腈0.1M乙酸铵， 21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白色固 体状的反式N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(2R)四氢-1H-2-吡咯甲酰胺乙酸盐 (0.096g，0.00016mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.33(s，1H)，8.45(d，1H)，8.22(s，1H)，7.25(s， 1H)，7.21(d，1H)，4.58-4.69(m，1H)，3.93(s，3H)，3.77(dd，1H)，2.96-3.04(m，1H)， 2.74-2.84(m，1H)，2.47-2.58(m，5H)，2.23-2.45(m，5H)，2.14(s，3H)，1.91(s，3H)， 1.88-2.11(m，7H)，1.78-1.88(m，1H)，1.60-1.69(m，2H)，1.39-1.54(m，2H)；

RPHPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 8.47分钟；MS：MH+ 534。

实施例68：4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1- 吡啶氧化物(pyridiniumolate)

A.4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧化物

使3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.00g，0.019mol)的N，N-二 甲基甲酰胺(50mL)溶液与60％氢化钠在油中的溶液(0.92g，0.023mol) 在环境温度下反应。搅拌所得混合液15分钟，加入4-硝基吡啶-N- 氧化物(5.37g，0.038mol)。在100℃下加热所得混合液18小时。滤 出形成的沉淀物，用N，N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯洗涤得到黄褐色 固体状的4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧化物 (3.79g，0.011mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400Mz)δ 8.38(s，1H)，8.34(d，2H)，8.24(d，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 7.36分钟；MS：MH+ 355。

B.4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡 啶氧化物

80℃下，使4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧 化物(0.140g，0.00040mol)在二甲氧基乙烷(7mL)和水(15mL)中的悬 浮液与4-苯氧基苯基硼酸(0.093g，0.00043mol)、碳酸钠(0.105g， 0.00099mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.046g，0.00004mol)反应18小 时。滤出固体物得到棕色固体状的4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.138g，0.00035mol)。将一部 分产物(0.040g，0.00010mol)经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm， 300，25cm；40％恒溶剂洗脱5分钟，随后在30分钟内用40％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液 冷冻干燥得到白色固体状的产物4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.013g，0.00003mol)。

                                               1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 8.44(s，1H)，8.34-8.41(m，4H)，7.77(d，2H)，7.45(t，2H)，7.13-7.24 (m，5H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.66分钟；MS：MH+ 397。

实施例69：3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺

使4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡 啶氧化物(0.100g，0.00025mol)和10％披钯碳(0.016g，0.00002mol) 在乙酸(3mL)中的悬浮液与一水合次磷酸钠(0.033g，0.00038mol)在 60℃反应。2小时后，加入另外的10％披钯碳(0.016g，0.00002mol)。 将所得混合液搅拌18小时，此后，加入另外的10％披钯碳(0.016g， 0.00002mol)和一水合次磷酸钠(0.033g，0.00038mol)。再搅拌所述 混合物24小时。经521过滤所述混合液，用乙酸洗涤。真空 除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8mm，25cm； 40％恒溶剂洗脱5分钟，随后在30分钟内用40％-100％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 白色固体状的3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺(0.020g，0.00005mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.71(d，2H)，8.46(s，1H)，8.39(dd，2H)，7.78(d， 2H)，7.46(t，2H)，7.13-7.25(m，5H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 17.31分钟；MS：MH+ 381。

实施例70：N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

A.N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

使4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧化物 (0.500g，0.0014mol)在二甲氧基乙烷(15mL)和水(30mL)中的悬浮液 与N2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.631g，0.00155mol)，碳酸钠(0.374g， 0.0035mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.163g，0.00014mol)在80℃下反 应18小时。过滤出固体物并用水洗涤。将所述固体物在乙酸乙酯中 淤浆化18小时，过滤，用乙酸乙酯洗涤。真空干燥固体物得到得到 粗制的棕色固体状的4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-[(1-甲基-1H-2-吲哚基)- 羰基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.523g， 0.0010mol)：RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10 分钟内用5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.92分钟；MS： MH+ 507。

B.N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}苯 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.200g，0.00039mol) 和10％披钯碳(0.042g，0.00004mol)在乙酸(3mL)中的悬浮液与一水 合次磷酸钠(0.063g，0.00059mol)在60℃下反应2小时。加入另外 的10％披钯碳(0.042g，0.00004mol)和次磷酸钠(0.045g，0.00042 mol)，搅拌所得混合液24小时。真空除去溶剂，剩余物在甲醇中淤 浆化4小时。经521过滤所述混合液，用甲醇洗涤。真空除去 溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C 18，8mm，25cm；50％ 恒溶剂洗脱5分钟，随后在25分钟内用50％-100％乙腈-0.1M乙酸 铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白 色固体状的N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.020g，0.00004mol)：

                                                  1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 48(s，1H)8.72(d，2H)，8.47(s，1H)，8.42(d，2H)，8.20(d，1H)，7.72 (d，1H)，7.60(d，1H)，7.48(s，1H)，7.42(d，1H)，7.36(s，1H)7.34(t，1H)，7.16(t， 1H)，4.05(s，3H)，3.99(s，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 19.50分钟；MS：MH+ 491。

实施例71：1-(6-氨基-3-吡啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺；和

实施例72：3-(4-苯氧基苯基)-1-(2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺

使3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00079 mol)在N-甲基吡咯烷酮(10mL)中的溶液与60％氢化钠在油中的溶液 (0.032g，0.00079mol)反应。在停止排出气体后，在环境温度下搅拌 所得混合液30分钟，加入5-溴-2-硝基吡啶(0.161g，0.00079mol)， 在40℃下加热18小时。加入另外的60％氢化钠在油中的溶液(0.032 g，0.00079mol)，再将所得混合液搅拌2小时。真空除去溶剂，使剩 余物在二氯甲烷(15mL)和水(25mL)间分配。分离各层，水层用二氯 甲烷(2x15mL)萃取。合并的有机物用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。真 空除去溶剂，剩余物经快速硅胶柱层析(使用庚烷/乙酸乙酯(1:2)作为 洗脱液)纯化得到两种产物。将较低极性化合物1-(6-硝基-3-吡啶基)- 3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺悬浮在无水乙醇(10mL) 中，加入N，N-二甲基甲酰胺(5mL)和10％披钯碳(0.007g)。在气囊供 应的氢气气氛中将所得混合液搅拌18小时。经521滤垫过滤 所述混合液，用无水乙醇洗涤。真空除去溶剂，得到白色固体状的1-(6 氨基-3-吡啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.007 g，0.00002mol)。

                                    1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.53(d， 1H)8.31(s，1H)，7.97(dd，1H)，7.73(d，2H)，7.44(t，2H)，7.12-23(m，5H)，6.60(d， 1H)，6.20(s，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 15.38分钟；MS：MH+ 396。

将较高极性的化合物3-(4-苯氧基苯基)-1-(5-溴-2-吡啶基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺悬浮在无水乙醇(10mL)中，加入N，N-二甲基甲 酰胺(5mL)和10％披钯碳(0.007g)。在气囊供应的氢气气氛中将所得 混合液搅拌18小时。经521滤垫过滤所述混合液，用无水乙 醇洗涤。真空除去溶剂，得到白色固体状的3-(4-苯氧基苯基)-1-(2-吡 啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.030g，0.00007mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.60-8.64(m，1H)8.37(s，1H)，8.20(d，1H)，8.03- 8.08(m，1H)，7.76(d，2H)，7.41-7.49(m，3H)，7.12-7.23(m，5H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.32分钟；MS：MH+ 381。

实施例73中描述了一种还原胺化的通用方法，采用反式-3-(4- 氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 和醛作为原料。各种其它的醛可被实施例73的2-甲氧基-3-甲酰基- 吡啶取代以连接其它的Z100基团。

实施例73：反式-3-(4-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲 基-哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

将反式-3-(4-氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1当量)、2-甲氧基-3-甲酰基-吡啶(1.05当量)、三 乙酰氧基硼氢化钠(3.4当量)和乙酸(3.4当量)在无水1，2-二氯乙烷中 的混合液搅拌16小时。减压浓缩所述反应混合液，用饱和碳酸氢钠 水溶液猝灭并再次浓缩。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25 cm；在25分钟内用10-60％乙腈0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到 所需产物。按照上述方法制备以下两种化合物：反式-3-(4-[(2-甲氧基 -3-吡啶基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，8.06(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.35(d， 2H)，6.95(dd，1H)，6.69(d，2H)，6.51(t，1H)，4.60(m，1H)，4.26(d，2H)，3.94(s，3H)， 2.64(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.07分钟。MS：MH+ 528。

实施例74：反式-3-{4-[(1H-2-吲哚基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌 嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

按照实施例569的方法制备反式-3-{4-[(1H-2-吲哚基甲基)氨基] 苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸 盐，不同之处在于使用2-甲酰基-吲哚代替2-甲氧基-3-甲酰基-吡啶。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.08(s，1H)，8.19(s，1H)，7，44(d，1H)，7.36(d， 2H)，7.32(d，1H)，7.01(t，1H)，6.95(t，1H)，6.81(d，2H)，6.47(t，1H)，6.35(s，1H)， 4.60(m，1H)，4.45(d，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)， 1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.74分钟。MS：MH+ 536。

实施例75：反式-3-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)甲基]-1，2-二氢-2-吡啶酮二乙酸盐

将反式-3-(4-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌 嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐(0.105g， 0.000199mol)溶于30％溴化氢的乙酸(4mL)溶液中，回流所得混合液 1.5小时。减压除去溶剂，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25 cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到 白色固体状的反式-3-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)甲基]-1，2-二氢-2-吡啶酮二乙酸盐 (0.0204g，0.0000324mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，7.29(m，4H)，6.68(d，2H)，6.40(t，1H)， 6.15(m，1H)，4.60(m，1H)，4.09(d，2H)，2.64(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)， 2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.40分钟。MS：MH+ 514。

实施例76描述了一种还原胺化的通用方法，采用反式-3-(4-氨 基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺和醛作为原料：

实施例76：反式-5-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯胺基)甲基]-4-氯-1，3-噻唑-2-胺二乙 酸盐

将反式-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1当量)、2-氨基-4-氯-5-甲酰基-1，3-噻唑 (1.05当量)、三乙酰氧基硼氢化钠(3.4当量)和乙酸(3.4当量)在无水1，2- 二氯乙烷中的混合液搅拌16小时。减压浓缩所述反应混合液，用饱 和碳酸氢钠水溶液猝灭并再次浓缩。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min) 纯化得到所需产物。

1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.19(s，2H)，7.06(m，3H)，6.68(d，1H)， 5.76(t，1H)，4.60(m，1H)，4.30(d，2H)，3.85(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.17(s，3H)，2.05 (m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.59分钟。MS：MH+ 583。

按照实施例76的方法制备实施例77和78：

实施例77：反式-3-(3-甲氧基-4-[(5-甲基-3-异噁唑基)甲基]氨基苯基)- 1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.04(m，2H)，6.68(d，1H)，6.16(s，1H)， 5.86(t，1H)，4.60(m，1H)，4.37(d，2H)，3.86(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.40(s，3H)，2.13 (s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.53分钟。

MS：MH+ 532。

实施例78：反式-3-{3-甲氧基-4-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]苯基}-1-[4- (4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.08(s，1H)，8.19(s，1H)，7.47(s，1H)，7.06(s，1H)， 7.03(d，1H)，6，68(d，1H)，5.76(t，1H)，4.60(m，1H)，4.52(d，2H)，3.88(s，3H)，2.6-2.2 (br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1，91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.17分钟。

MS：MH+ 534。

实施例79给出一种合成苯并四氢呋喃-衍生物的通用方法，使 用反式-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-4-胺和2-羟基苯甲醛作为原料。

实施例79：反式-3-4-[(4，6-二氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基)氨基]苯基- 1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

将反式-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1当量，范围0.0001-0.0002mol)和2-羟基-4，6-二 氯苯甲醛(1当量)在无水乙醇(5mL)中混合，在环境温度下搅拌48小 时。减压浓缩所述反应混合液，将剩余物干燥过夜得到相应的亚胺， 产物未经纯化直接使用。将碘化三甲基氧化锍(2.5当量)溶于无水二 甲亚砜(2mL)中，一次性加入60％氢化钠在石蜡中的分散体(2.5当 量)。10分钟后，加入所述亚胺的无水二甲亚砜溶液(2mL)，在环境 温度下及在氮气气氛中搅拌所得的混合液2.5小时。将所述溶液倒入 冰水(50mL)中，用二氯甲烷(2 x 40mL)萃取。将合并的有机萃取液用 硫酸镁干燥并减压浓缩。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25 cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到 最终化合物。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.39(d，2H)，7.14(s，1H)，7.07(s， 1H)，6.80(d，2H)，6.56(d，1H)，5.34(m，1H)，4.80(dd，1H)，4.60(m，1H)，4.42(dd， 1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.03分钟。

MS：MH+ 593。

实施例80：反式-3-{4-[(4-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基)氨基]苯基}-1- [4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

使用实施例79的方法制备反式-3-{4-[(4-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃 -3-基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺乙酸盐，不同之处在于采用2-羟基-4-氯苯甲醛代替2-羟基-4，6 二氯苯甲醛。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.39(d，2H)，7.28(t，1H)，6.99(d， 1H)，6.89(d，1H)，6.81(d，2H)，6.53(d，1H)，5.34(m，1H)，4.74(dd，1H)，4.60(m， 1H)，4.38(dd，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46 (m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.42分钟。

MS：MH+ 559。

实施例81：反式-3-4-[(4，6-二氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基)氨基]-3-甲 氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 乙酸盐

使用实施例79的方法制备反式-3-4-[(4，6-二氯-2，3-二氢苯并[b] 呋喃-3-基)氨基]-3-甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐，不同之处在于使用反式-3-(4-氨基-3-甲 氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 代替反式-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.11(m，4H)，6.80(d，1H)，5.45(m， 2H)，4.84(dd，1H)，4.60(m，1H)，4.42(dd，1H)，3.82(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13 (s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.85分钟。

MS：MH+ 623。

中间体5：4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌 啶甲酸叔丁酯

A.4-[4-氨基-3-(4-[(苄氧基)羰基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯

将N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基 甲酸苄酯(9.54g，0.027mol)、4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基)-1-哌啶甲酸叔丁基酯(10.0g，0.0225mol)、四-(三苯基膦)合钯(1.56 g，0.00135mol)和碳酸钠(5.97g，0.0563mol)在乙二醇二甲醚(120mL) 和水(60mL)中的混合液在80℃下及在氮气气氛中加热16小时。冷 却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使剩余物在水(150mL)和 二氯甲烷(150mL)间分配；有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并减压 浓缩。剩余物在乙醚中研磨，过滤收集沉淀物并干燥得到白色固体 状的4-[4-氨基-3-(4-[(苄氧基)羰基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(10.1g，0.0186mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.00(s，1H)，8.23(s，1H)，7.64(d，2H)，7.43(d， 2H)，7.36(m，5H)，5.18(s，2H)，4.90(m，1H)，4.08(br，2H)，3.00(br，2H)，2.02(m， 4H)，1.42(s，9H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt.18.58分钟。

B.4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶 甲酸叔丁酯

往4-[4-氨基-3-(4-[(苄氧基)羰基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(5.0g，0.0092mol)在四氢呋喃(150mL)中 的溶液内加入10％披钯碳(1.0g)，将所述反应混合液在Parr摇动器中 氢化96小时。经Celite滤垫过滤除去催化剂，将滤液减压浓缩。剩 余物在正庚烷中研磨，过滤收集沉淀物并干燥得到灰白色固体状的 4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁 酯(2.51g，0.0061mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.35(d，2H)，6.69(d，2H)，5.42(s， 2H)，4.90(m，1H)，4.08(br，2H)，3.00(br，2H)，2.02(m，4H)，1.42(s，9H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.18分钟。

实施例82-94：

以下给出还原胺化，接着进行BOC脱保护的制备实施例82-94 通用方法。

方案：

将4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶 甲酸叔丁酯(中间体5)(1当量)、醛(1.2当量)、三乙酰氧基硼氢化钠(3.4 当量)和乙酸(3.4当量)在无水1，2-二氯乙烷中的混合液搅拌16小时。 减压浓缩所述反应混合液，在乙酸乙酯中研磨，用4N盐酸水溶液处 理。搅拌所得混合液1小时；水相用饱和碳酸氢钠水溶液中和，分 离各相。减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm， 25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到所需产物。

使用上述方法制备以下化合物：

实施例82：3-{4-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.57(d，1H)，7.53(d，1H)，7.39(d， 2H)，7.23(m，2H)，6.85(d，2H)，6.80(s，1H)，6.66(t，1H)，4.70(m，1H)，4.51(d，2H)， 3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m.2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.37分钟。

MS：MH+ 440。

实施例83：3-(4-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]氨基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，8.06(d，1H)，7.61(d，1H)，7.36(d， 2H)，6.96(dd，1H)，6.69(d，2H)，6.51(t，1H)，4.70(m，1H)，4.27(d，2H)，3.94(s， 3H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.06分钟。

MS：MH+ 431。

实施例84：3-(4-[(5-甲基-2-噻吩基)甲基]氨基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.36(d，2H)，6.85(d，1H)，6.77(d， 2H)，6.64(d，1H)，6.54(t，1H)，4.70(m，1H)，4.41(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m， 2H)，2.38(s，3H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.85分钟。

MS：MH+ 420。

实施例85：3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.59(s，1H)，7.36(d，2H)，6.77(d， 2H)，6.46(t，1H)，6.39(d，1H)，6.34(d，1H)，4.70(m，1H)，4.31(d，2H)，3.07(m， 2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.96分钟。

MS：MH+ 390。

实施例86：3-[4-(苄基氨基)苯基]-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.34(m，6H)，7.24(t，1H)，6.73(d， 2H)，6.60(t，1H)，4.70(m，1H)，4.33(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.32分钟。

MS：MH+ 400。

实施例87：3-{4-[(2-甲氧基苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.35(d，2H)，7.24(m，2H)，7.01(d， 1H)，6.90(t，1H)，6.70(d，2H)，6.41(t，1H)，4.70(m，1H)，4.28(d，2H)，3.85(s，3H)， 3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.73分钟。

MS：MH+ 430。

实施例88：3-{4-[(3-甲氧基苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.35(d，2H)，7.25(t，1H)，6.96(m， 2H)，6.81(d，1H)，6.72(d，2H)，6.59(t，1H)，4.70(m，1H)，4.30(d，2H)，3.74(s， 3H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.38分钟。

MS：MH+ 430。

实施例89：3-{4-[(4-甲氧基苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.35(m，4H)，6.90(d，2H)，6.72(d， 2H)，6.51(t，1H)，4.70(m，1H)，4.25(d，2H)，3.73(s，3H)，3.07(m，2H)，2.65(m， 2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.37分钟。

MS：MH+ 430。

实施例90：1-(4-哌啶基)-3-(4-[3-(三氟甲基)苄基]氨基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.71(m，2H)，7.58(m，2H)，7.36(d， 2H)，6.72(m，3H)，4.70(m，1H)，4.44(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.08分钟。

MS：MH+ 468。

实施例91：1-(4-哌啶基)-3-(4-[4-(三氟甲基)苄基]氨基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.70(d，2H)，7.60(d，2H)，7.36(d， 2H)，6.72(m，3H)，4.70(m，1H)，4.44(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.23分钟。

MS：MH+ 468。

实施例92：3-(4-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基苯基)-1-(4-哌啶基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.41(d，2H)，7.26(s，1H)，6.73(d， 2H)，6.51(t，1H)，4.70(m，1H)，4.36(d，2H)，3.07(m，2H)，2.70(s，3H)，2.65(m， 2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.13分钟。

MS：MH+ 421。

实施例93：3-{4-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.42(m，4H)，7.26(t，1H)，6.83(d， 2H)，6.27(t，1H)，4.72(m，1H)，4.37(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.32分钟。

MS：MH+ 452。

实施例94：3-(4-[2-氟-4-(三氟甲基)苄基]氨基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.61(m，3H)，7.38(d，2H)，6.73(d， 2H)，6.68(t，1H)，4.70(m，1H)，4.47(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.83分钟。

MS：MH+ 486。

实施例95：3-{4-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-(4- 哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

将4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(g，mol)、苯并呋喃-2-甲醛(0.046g，0.000315 mol)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.089g，0.00042mol)和乙酸(0.024mL， 0.00042mol)在无水1，2二氯乙烷中的混合液搅拌16小时。减压浓缩 所述反应混合液，在乙酸乙酯(4mL)中研磨，用4N盐酸溶液(1mL) 处理。搅拌所得混合液1小时；水相用饱和碳酸氢钠水溶液中和， 分离各层。减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm， 25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到3-{4-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-(4-哌啶基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐(0.027g，0.0000457mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.55(m，2H)，7.22(m，2H)，7.06 (m，2H)，6.80(d，1H)，6.75(s，1H)，5.80(t，1H)，4.70(m，1H)，4.57(d，2H)，3.89(s， 3H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用 5％-85％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.83分钟。

MS：MH+ 470。

实施例96：3-[4-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-(4-哌啶基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

水杨醛(0.063g，0.000513mol)和4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.200g，0.000489mol)在 无水乙醇(5mL)中混合，在环境温度下搅拌48小时。减压浓缩所述 反应混合液，将剩余物干燥过夜得到4-[4-氨基-3-(4-{[-1-(2-羟基苯基) 亚甲基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯， 产物未经纯化直接使用。将碘化三甲基氧化锍(0.269g，0.00122mol) 溶于无水二甲亚砜(2mL)中，一次性加入60％氢化钠在石蜡(0.049g， 0.00122mol)中的分散体。10分钟后，加入4-[4-氨基-3-(4-{[1-(2-羟 基苯基)亚甲基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔 丁酯的无水二甲亚砜(2mL)溶液，在环境温度下及在氮气气氛中搅拌 所得的混合液2.5小时。将所述溶液倒入冰水(70mL)中，用二氯甲 烷(2x50mL)萃取。将合并的有机萃取液用硫酸镁干燥，减压浓缩得 到粗制的4-{4-氨基-3-[4-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}-1-哌啶甲酸叔丁酯，产物未经纯化直接使用。 将所述粗制的化合物溶于乙酸乙酯(5mL)中，用4N盐酸水溶液(1.5 mL)处理。

将所得乳液剧烈搅拌1小时；水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和， 分离各层。减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm， 25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到白色固体状的3-[4-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-(4-哌啶 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.038g，0.000078mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.41(m，3H)，7.25(t，1H)，6.89(m， 4H)，6.51(t，1H)，5.35(m，1H)，4.79(m，2H)，4.27(m，1H)，3.07(m，2H)，2.65(m， 2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，3H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.38分钟。

MS：MH+ 428。

实施例97：反式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮乙酸盐

A.3-氯-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮

将糖精(10.0g，0.0546mol)和五氯化磷(12.6g，0.060mol)在170 ℃下加热1.5小时。冷却所述反应混合液至环境温度，并将其悬浮在 乙醚(200mL)中。过滤收集沉淀物，用乙醚充分洗涤并干燥得到白色 固体状的3-氯-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(3.7g，0.0184mol)，产 物未经纯化直接使用。

MS：MH+ 202。

B.3-(4-溴苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮

往3-氯-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.0g，0.00496mol)的丙 酮(20mL)的溶液中一次性加入4-溴苯胺(1.71g，0.00992mol)，搅拌 所述混合液15分钟，减压浓缩所得混合液，将剩余物悬浮在水(100mL) 中。过滤收集沉淀物，用水充分洗涤并干燥得到白色固体状的3-(4- 溴苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.57g，0.00467mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.93(s，1H)，8.47(d，1H)，8.09(d，1H)，7.93(m， 4H)，7.69(d，2H)；

C.3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺基]- 1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮

将3-(4-溴苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.57g，0.00467 mol)，二硼酸二频哪醇酯(1.43g，0.00561mol)、[1.1′-双(二苯基膦基) 二茂铁]-二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.114g，0.00014mol)的络合 物和乙酸钾(1.37g，0.014mol)的N，N-二甲基甲酰胺(35mL)混合液在 80℃下及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度并 减压除去溶剂。往所得剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，经Celite滤 垫过滤除去所得固体物。浓缩滤液得到黄色油状物，将该产物在乙 醚中研磨得到白色固体状的3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环 戊烷-2-基)苯胺基]-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.14g，0.00297 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.92(br，1H)，8.51(d，1H)，8.08(d，1H)，7.91(m， 4H)，7.68(d，2H)，1.29(s，12H).

D.反式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮乙酸盐

将3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺基]- 1H-λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(0.09g，0.000234mol)、反式-3-碘-1-[4- (4-甲基哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.08g，0.00018 mol)、四-(三苯基膦)合钯(0.013g，0.000011mol)和碳酸钠(0.048g， 0.00045mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在80℃下 及在氮气气氛中加热16小时。所得混合液冷却环境温度，减压除去 溶剂。剩余物经制备H)LC(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分钟内 用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色固体状的反式 -3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮乙酸盐(0.075g，0.000119 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.29(d，1H)，8.23(s，1H)，7.91(m，3H)，7.79(m， 2H)，7.66(d，2H)，4.65(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s， 3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用 5％-85％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.27分钟。

MS：MH+ 572。

实施例98：顺式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮二乙酸 盐

按照上述类似的方式，由3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯胺基]-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(0.09g，0.000234 mo1)和顺式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺制备顺式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮二乙酸 盐。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.42(d，1H)，8.23(s，1H)，7.91(m，3H)，7.84(m， 2H)，7.62(d，2H)，4.80(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.07(m，4H)，1.91(s， 6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.59分钟。

MS：MH+ 572。

实施例99：反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

A.N1-(4-溴苯基)-2-氟苯甲酰胺

将2-氟苯甲酰氯(5.82g，0.0367mol)和4-溴苯胺(6.31g，0.0367 mol)在无水二氯甲烷(150mL)中的溶液冷却至0℃，在氮气气氛中滴 加入N，N-二异丙基乙胺(5.21g，0.0407mol)。在环境温度下搅拌所 得的混合液24小时，浓缩并将剩余物在乙酸乙酯(120mL)和水(100 mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。将剩余物悬 浮在冷乙醚(50mL)中，过滤收集沉淀物并干燥得到白色固体状的 N1-(4-溴苯基)-2-氟苯甲酰胺(9.6g，0.0326mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.54(s，1H)，7.66(m，3H)，7.56(m，3H)，7.34(m， 2H).TLC(乙酸乙酯/庚烷1:2)Rf 0.37

B.N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺

将N1-(4-溴苯基)-2-氟苯甲酰胺(3.3g，0.0112mol)和2，4-双-(4- 甲氧基苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂环丁烷-2，4-二硫化物(2.27g， 0.00561mol)在甲苯中的混合液在氮气气氛中加热回流3小时。冷却 所述反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，剩余物经快速硅胶柱 层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:6)为流动相得到黄色固体状的 N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺(3.1g，0.010mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.13(s，1H)，7.93(d，2H)，7.62(m，3H)，7.51 (m，1H)，7.31(m，2H).TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.27

C.N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯偕胺肟

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺(1.56g，0.00505mol)、盐 酸羟胺(0.44g，0.00631mol)和碳酸氢钠(0.53g，0.00631mol)在无水 乙醇(25mL)中的混合液在氮气气氛中加热回流14小时。冷却所述反 应混合液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水 溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸 镁干燥并浓缩。剩余物悬浮在冷乙醚中，过滤收集沉淀物并干燥得 到灰白色固体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯偕胺肟(1.21g，0.00392 mol)。

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.12。

D.N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-(4-溴苯基)胺

往N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯偕胺肟(1.51g，0.00489mol)的N-甲 基吡咯烷酮(25mL)溶液中加入叔丁醇钾(0.54g，0.00513mol)，将所 得溶液在100℃下及在氮气气氛中加热3小时。冷却所述反应混合液 至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水溶液(50mL) 和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓 缩。剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:5)为流 动相得到白色固体状的N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-(4-溴苯基)胺(0.95 g，0.00329mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.72(s，1H)，8.13(d，1H)，7.68(d，2H)，7.61(m， 2H)，7.54(d，2H)，7.37(dd，1H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.26。

E.N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯基]胺

将N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-(4-溴苯基)胺(1.30g，0.0045mol)、 二硼酸二频哪醇酯(1.37g，0.0054mol)、[1.1′-双(二苯基膦基)二茂铁]- 二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.110g，0.000135mol)的络合物和乙酸 钾(1.32g，0.0135mol)在N，N-二甲基甲酰胺(35mL)的混合液在80℃ 及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除 去溶剂。往剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，经Celite滤垫过滤除去 所得固体物。浓缩滤液得到黄色油状物，产物经快速硅胶柱层析纯 化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5)为流动相得到白色固体状的N-苯并[d] 异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基] 胺(0.40g，0.00119mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.74(s，1H)，8.16(d，1H)，7.70(m，4H)，7.61(d， 2H)，7.37(dd，1H)，1.29(s，12H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.21。

F.反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

将N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯基]胺(0.10g，0.000298mol)、反式-3-碘-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.101g，0.000229 mol)、四-(三苯基膦)合钯(0.016g，0.0000137mol)和碳酸钠(0.061g， 0.000573mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在80℃下 及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除 去溶剂。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分 钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色固体状的 反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐(0.102g，0.000175mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.81(s，1H)，8.23(s，1H)，8.19(d，1H)，7.88(d，2H)， 7.65(m，4H)，7.40(m，1H)，4.65(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)， 1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)。Rt 13.66分钟。

MS：MH+ 524。

实施例100：顺式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺二乙酸盐

按照上述类似的方式，由N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四 甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺和顺式-3-碘-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺制备顺式-N3-(4-{4-氨 基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯 并[d]异噁唑-3-胺二乙酸盐。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.86(s，1H)，8.26(s，1H)，8.24(d，1H)，7.93(d，2H)， 7.67(m，4H)，7.43(m，1H)，4.83(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.08(m，4H)， 1.91(s，6H)，1.74(m，2H)，1.62(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.77分钟。

MS：MH+ 524。

实施例101：N3-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯基}苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

将N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯基]胺(0.087g，0.000258mol)、4-(4-氨基-3-碘-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.088g，0.000198mol)、四 -(三苯基膦)合钯(0.014g，0.000012mol)和碳酸钠(0.053g，0.000495 mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在80℃下及在氮气 气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂， 使剩余物在水和二氯甲烷间分配。有机相用硫酸镁干燥，减压浓缩 得到粗制的4-{4-氨基-3-[4-(苯并[d]异噁唑-3-基氨基)苯基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-1-基}-1-哌啶甲酸叔丁酯，产物未经纯化直接使用。将所 述产物溶于乙酸乙酯(5mL)中，用4N盐酸溶液(1mL)处理。将所得 乳液剧烈搅拌1小时；水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和，分离各层。 减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm； 在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色 固体状的N3-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐(0.009g，0.0000185mol)。

                                                 1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.82(s，1H)，8.20(m，2H)，7.89(d，2H)，7.65(m，4H)，7.41(t，1H)， 4.74(m，1H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，3H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.20分钟。MS：MH+ 427。

实施例102：反式-3-[4-(1H-3-吲唑基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基) 环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

A.N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯基亚肼基甲胺 (benzenecarbohydrazonamide)

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺(1.50g，0.00485mol)和1M 肼的四氢呋喃(6.3mL，0.0063mol)溶液在无水乙醇(25mL)中在氮气 气氛中加热回流14小时。加入另外3mL1M的肼在四氢呋喃中的溶 液，再回流搅拌6小时。冷却所述反应混合液至环境温度，减压除 去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL) 间分配。用盐水洗涤有机相，用硫酸镁干燥并浓缩得到黄褐色固体 状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯基亚肼基甲胺(1.54g，0.0050mol)。 TLC(乙酸乙酯/庚烷1:3)Rf 0.10。

B.N-(4-溴苯基)-N-(1H-3-吲唑基)胺

往N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯基亚肼基甲胺(1.2g，0.00391mol)的 N-甲基吡咯烷酮(25mL)的溶液中加入叔丁醇钾(0.50g，0.0041mol)， 将所得溶液在100℃及在氮气气氛中加热3小时。冷却所述反应混合 液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥 并浓缩。剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:5) 为流动相得到白色固体状的N-(4-溴苯基)-N-(1H-3-吲唑基)胺(0.29g， 0.0010mol)。

                   1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.06(s，1H)，9.03(s，1H)， 7.93(d，1H)，7.65(d，2H)，7.35(m，4H)，7.03(dd，1H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:3)Rt 0.26。

C.N-(1H-3-吲唑基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)苯基]胺

将N-(4-溴苯基)-N-(1H-3-吲唑基)胺(0.29g，0.00101mol)、二硼 酸二频哪醇酯(0.31g，0.00121mol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二 氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.025g，0.00003mol)的络合物和乙酸钾 (0.294g，0.003mol)在N，N-二甲基甲酰胺(35mL)中的混合物在80℃ 下及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压 除去溶剂。往剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，经Celite滤垫过滤除 去所得固体物。浓缩滤液得到黄色油状物，产物经快速硅胶柱层析 纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:3)为流动相得到灰白色固体状的N- (1H-3-吲唑基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]胺(0.064g，0.000191mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.09(s，1H)，9.06(s，1H)，7.94(d，1H)，7.64(d， 2H)，7.57(d，2H)，7.35(m，2H)，7.03(dd，1H)，1.28(s，12H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:3)Rf 0.21。

D.反式-3-[4-(1H-3-吲唑基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

将N-(1H-3-吲唑基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)苯基]胺(0.064g，0.000191mol)、反式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪 -1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.070g，0.000159mol)、四 (三苯基膦)合钯(0.011g，0.0000095mol)和碳酸钠(0.042g，0.000398 mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在80℃下及在氮气 气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。 剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分钟内用10- 60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色固体状的反式3-[4- (1H-3-吲唑基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.035g，0.000060mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.09(s，1H)，9.14(s，1H)，8.21(s，1H)，7.99(d， 1H)，7.83(d，2H)，7.55(d，2H)，7.37(m，2H)，7.06(t，1H)，4.64(m，1H)，2.6-2.2(br， 9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.49(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.96分钟。

MS：MH+ 523。

实施例103：反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

A.N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

将2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰氯(5.05g，0.0223mol)和4-溴苯胺 (3.83g，0.0223mol)在无水二氯甲烷(150mL)中的溶液冷却至0℃， 在氮气气氛中滴加入N，N-二异丙基乙胺(4.26mL，0.0245mol)。所得 的混合液在环境温度下搅拌24小时，浓缩并使剩余物在乙酸乙酯(120 mL)和水(100mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。 剩余物悬浮在冷正庚烷(50mL)中，过滤收集沉淀物并干燥得到白色 固体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(7.1g，0.0196 mol)。

    1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.74(s，1H)，7.90(m，2H)，7.74(d，1H)，7.68 (d，2H)，7.56(d，2H).

B.N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-硫代苯甲酰胺

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(7.1g，0.0196mol) 和2，4-双-(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂环丁烷-2，4-二硫化物 (3.97g，0.0098mol)在甲苯中的混合液在氮气气氛中加热回流3小 时。冷却所述反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，剩余物经快 速硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:8)为流动相得到黄色固 体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-硫代苯甲酰胺(6.0g，0.0159 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.33(s，1H)，7.94(d，2H)，7.81(m，2H)，7.65(m， 3H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.61。

C.N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-苯偕胺肟

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-硫代苯甲酰胺(2.50g， 0.00663mol)、盐酸羟胺(0.65g，0.00928mol)和碳酸氢钠(0.78g， 0.00928mol)在无水乙醇(25mL)中的混合液在氮气气氛中加热回流14 小时。冷却所述反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物 在饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用 盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。剩余物悬浮在冷正庚烷中，过滤 收集沉淀物并干燥得到灰白色固体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲 基)-1-苯偕胺肟(2.35g，0.00625mol)。

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.12。

D.N-(4-溴苯基)-N-[6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺

往N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-苯偕胺肟(2.25g，0.00598 mol)的N-甲基吡咯烷酮(30mL)溶液中加入叔丁醇钾(0.71g，0.00628 mol)，将所得溶液在100℃下及在氮气气氛中加热3小时。冷却所述 反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠 水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫 酸镁干燥并浓缩。剩余物悬浮在冷正庚烷中，过滤收集沉淀物并干 燥得到灰白色固体状的N-(4-溴苯基)-N-[6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑- 3-基]胺(1.75g，0.0049mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.95(s，1H)，8.37(d，1H)，8.14(s，1H)，7.78(d，1H)， 7.68(d，2H)，7.58(d，2H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:5)Rf 0.31。

E.N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N-[6- (三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺

将N-(4-溴苯基)-N-[6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺(1.75g， 0.0049mol)、二硼酸二频哪醇酯(1.49g，0.0059mol)、[1，1′-双(二苯 基膦基)二茂铁]-二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.120g，0.000147mol) 的络合物和乙酸钾(1.44g，0.0144mol)在N，N-二甲基甲酰胺(10mL) 中的混合液在80℃下及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液 至环境温度，减压除去溶剂。往剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，经 Celite滤垫过滤除去所得固体物。浓缩滤液得到黄色油状物，产物经 快速硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:6)为流动相得到白色 固体状的N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N- [6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺(0.065g，0.000161mol)。

                                      1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.97(s， 1H)，8.39(d，1H)，8.14(s，1H)，7.77(d，1H)，7.71(s，4H)，1.29(s，12H).

F.反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

将N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N- [6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺(0.062g，0.000153mol)、反式-3- 碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.065 g，0.000146mol)、四-(三苯基膦)合钯(0.010g，0.0000087mol)和碳 酸钠(0.039g，0.000365mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混 合液在80℃下及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境 温度，减压除去溶剂。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm； 在30分钟内用10-70％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色 固体状的反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐 (0.026g，0.0000398mol)。

          1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.05(s，1H)，8.44(d，1H)，8.23(s， 1H)，8.16(s，1H)，7.88(d，2H)，7.79(d，1H)，7.69(d，2H)，4.67(m，1H)，2.6-2.2(br， 9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.18分钟。MS：MH+ 592。

实施例104：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺

室温下，往3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二盐酸 盐(0.4g，0.00096mol)和碳酸钾(0.40g，0.0029mol)在N，N-二甲基甲 酰胺(25mL)中的混合液内加入2-溴乙基甲基醚(0.09mL，0.00096 mol)。60℃下，在氮气气氛中搅拌所得的多相混合液7小时。冷却所 述反应混合液至室温，加入2-溴乙基甲基醚(0.045mL，0.00048mol)。 将所得混合液在60℃下及在氮气气氛中搅拌16小时。为完成反应， 室温下往所得混合液中加入2-溴乙基甲基醚(0.019mL，0.00019mol) 和碘化钾(0.008g，0.000048mol)。将所得混合液在70℃及在氮气气 氛中搅拌7小时。减压除去溶剂。使剩余物在水和二氯甲烷间分配。 水层用二氯甲烷(4 x 50mL)萃取。将合并的有机萃取液用水和盐水洗 涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂。剩余物经RP- HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；在30分钟内用 5％-50％的0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙 基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.2g，0.0005mol)。RP- HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 6.4分钟。MS：MH+ 403。

B.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

将3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺(0.2g，0.0005mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.28g，0.00078mol)、 四(三苯基膦)合钯(0.029g，0.000025mol)和碳酸钠(0.13g，0.00125mol) 在乙二醇二甲醚(25mL)和水(5mL)中的混合液在80℃下及在氮气气 氛中加热5小时。加入另外的N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N- [4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.14g， 0.00039mol.)和四(三苯基膦)合钯(0.015g，0.0000125mol)，将所得 混合液在80℃下搅拌16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除 去溶剂。使剩余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二氯甲烷(2 x 50mL) 萃取。将合并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水 洗涤，用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到褐色固体物，该产物 经快速硅胶柱层析纯化，使用5％-20％甲醇/二氯甲烷作为流动相得 到N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.14g，0.00027mol)。

                                                              1HNMR (TFA-d，400MHz)δ 8.53(s，1H)，7.88(m，2H)，7.81(m，2H)，7.14(s，2H)，5.40 (br，1H)，4.05(m，2H)，3.98(m，2H)，3.66(m，2H)，3.56(s，3H)，3.47(m，2H)，2.96 (m，2H)，2.54(br，2H)，2.50(s，3H)，2.43(s，3H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.6分钟。MS：MH+ 513。

实施例105：N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

室温下，往3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二盐酸 盐(0.5g，0.0012mol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.36g，0.00168mol)在 二氯乙烷(40mL)中的混合液内加入甲醛溶液(37％的水溶液，0.037 mL，0.00132mol)。在室温下及在氮气气氛中搅拌所得混合液4小时。 往所述混合液中加入5N氢氧化钠水溶液(2mL)。减压除去溶剂。 使剩余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二氯甲烷(3 x 150mL)萃取。 将合并的有机萃取液用水和盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除 去溶剂得到固体物。使所述固体物经受上述同样的反应和后处理条 件处理，得到3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.3 g，0.00084mol)。TLC(甲醇/二氯甲烷＝10:90)Rf0.63MS：MH+ 359。

B.N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.2g， 0.00056mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5四甲基- 1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.2g，0.00056mol)、四(三苯 基膦)合钯(0.032g，0.000028mol)和碳酸钠(0.15g，0.0014mol)在乙 二醇二甲醚(20mL)和水(5mL)中的混合液在80℃下及在氮气气氛中 加热3小时。加入另外的N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.2g，0.00056 mol)和四(三苯基膦)合钯(0.032g，0.000028mol)，将所得混合液在80 ℃下搅拌16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使 剩余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二氯甲烷(2 x 50mL)萃取。将 合并的有机萃取液依次用水，饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并用 硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到褐色固体物，该产物经快速硅 胶柱层析纯化，使用5％-25％甲醇/二氯甲烷作为流动相得到N2-{4- [4-氨基-1-(1-甲基-4哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二 甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.16g，0.00034mol)。

                            1H NMR(TFA-d，400MHz)δ 8.50(s，1H)，7.85 (m，2H)，7.80(m，2H)，7.10(s，2H)，5.45(br，1H)，3.95(br，2H)，3.75(br，1H)，3.45 (br，1H)，3.10(s，3H)，2.85(br，1H)，2.65(br，1H)，2.49(br，2H)，2.40(s，3H)，2.42 (s，3H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.7分钟。MS：MH+ 469。

实施例106：N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺

室温下，往搅拌着的3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(10.44g， 0.04mol)、3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯(12.0g，0.0596mol)和三苯基膦 (20.98g，0.08mol)在四氢呋喃(600mL)的悬浮液中加入偶氮二甲酸 二乙酯(12mL，0.08mol)。19小时后，加入另外的偶氮二甲酸二乙 酯(12mL，0.08mol)，继续反应2小时。加入另外的3-羟基-1-哌啶 甲酸叔丁酯(2.0g)和三苯基膦(20.98g，0.08mol)，继续反应72小时。

真空浓缩反应液，加入丙酮(200mL)和5N的盐酸水溶液(100 mL)，将所得溶液在40℃下加热2小时。减压除去丙酮，水层用二 氯甲烷(3 x 200mL)洗涤。随后用氢氧化钠水溶液(1N)碱化水层至pH 11，将产物用二氯甲烷(3 x 200mL)萃取。合并的有机层用无水硫酸 钠干燥并浓缩得到橙色固体物。将所述固体物在乙酸乙酯中一起研 磨得到黄色固体状的3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺 (3.82g，25％)；RP-HPLC Rt 4.792分钟，92％纯度(5％至85％乙 腈/0.1M乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254 nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；

1H NMR(400MHz，d6-DMSO)1.54(1H，m)，1.71(1H，m)，2.01(2H，m)，2.46(1H， m)，2.81(2H，m)，3.01(1H，dd，J11.8和3.4Hz)，4.58(1H，m)，和8.19(1H，s).

B.3-碘-1-(1-甲基-3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

室温下，往3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(04g， 0.00116mol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.34g，0.00162mol)在二氯乙烷 (30mL)中的混合液内加入甲醛溶液(37％水溶液，0.035mL，0.00128 mol，1.1当量)。在室温下及在氮气气氛中搅拌所得混合液18小时。 加入另外的甲醛溶液(37％的水溶液，0.035mL，0.00128mol，1.1当 量)，在室温下搅拌所得混合液2小时。往所述混合液中加入5N的 氢氧化钠水溶液(5mL)。减压除去溶剂。使剩余物在水和二氯甲烷间 分配。水层用二氯甲烷(3 x 150mL)萃取。将合并的有机萃取液用水 和盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂，将所得混合液 冷冻干燥得到3-碘-1-(1-甲基-3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 (0.41g，0.0011mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm； 在10分钟内用5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 6.0分钟。MS： MH+ 359。

C.N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

将3-碘-1-(1-甲基-3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.35g， 0.001mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5四甲基- 1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.44g，0.0012mol)、四(三苯 基膦)合钯(0.058g，0.00005mol)和碳酸钠(0.27g，0.0025mol)在乙二 醇二甲醚(30mL)和水(6mL)中的混合液在80℃下及在氮气气氛中加 热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使剩余物 在水和二氯甲烷间分配。水层用二氯甲烷(2 x 50mL)萃取。将合并的 有机萃取液用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并用硫酸镁干燥。 减压蒸发除去溶剂得到褐色固体物，该产物经快速硅胶柱层析纯化， 使用2％-10％甲醇/二氯甲烷作为流动相得到N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基 -3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑 -2-胺(0.055g，0.00012mol)。

                             1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.80(s，1H)， 8.22(s，1H)，7.95(d，2H)，7.65(d，2H)，7.15(s，1H)，6.80(s，1H)，4.80(br，1H)， 2.95(br，1H)，2.85(br，1H)，2.45(br，1H)，2.40(s，3H)，2.35(s，3H)，2.25(s，3H)， 2.00(br，3H)，1.80(br，1H)，1.70(br，1H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.7分钟。MS：MH+ 469。

实施例107：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺

室温下，往3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.4g， 0.00116mol)和碳酸钾(0.48g，0.00348mol)的N，N二甲基甲酰胺(25mL) 混合液中加入2-溴乙基甲基醚(0.11mL，0.00116mol)和碘化钾(0.010 g，0.000058mol)。将所得混合液在65℃及在氮气气氛中搅拌16小 时。冷却所述反应混合液至室温，加入另外的2-溴乙基甲基醚(0.025 mL，0.00027mol)。将所得混合液在65℃下及在氮气气氛中搅拌16 小时。减压除去溶剂。使剩余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二 氯甲烷(4 x 50mL)萃取。将合并的有机萃取液用水和盐水洗涤并用硫 酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂。剩余物经RP-HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；在30分钟内采用5％-50％ 0.1M乙酸铵， 21mL/min)纯化得到3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(0.2g，0.0005mol)。TLC(甲醇/二氯甲烷＝10:90)Rf 0.5MS：MH+ 403。

B.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

将3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺(0.16g，0.0004mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.17g，0.00048mol)、 四(三苯基膦)合钯(0.023g，0.00002mol)和碳酸钠(0.11g，0.001mol) 在乙二醇二甲醚(25mL)和水(5mL)的混合液在80℃下及在氮气气氛 中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使剩 余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二氯甲烷(3 x 50mL)萃取。将合 并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并用硫 酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到褐色固体物，该产物经快速硅胶 柱层析纯化，使用2％-10％甲醇/二氯甲烷作为流动相得到N2-(4-{4- 氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯 基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.17g，0.00033mol)。

                                        1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.85 (s，1H)，8.22(s，1H)，7.95(d，2H)，7.65(d，2H)，7.14(s，1H)，6.80(s，1H)，4.79(br， 1H)，3.50(m，2H)，3.25(s，3H)，3.10(br，1H)，2.90(br，1H)，2.55(br，2H)，2.54(br， 1H)，2.40(s，3H)，2.35(s，3H)，2.05(br，3H)，1.80(br，1H)，1.70(br，1H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.9分钟。MS：MH+ 513。

实施例108：N2-{4-[4-氨基-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺乙酸盐

A.3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯

往3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基胺(3.00g， 0.00872mol)和碳酸钠(3.23g，0.0305mol)在1，4-二噁烷(50mL)和水(50 mL)的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(2.093g，0.00959mol)。在室温下 搅拌所得混合液2小时，过滤收集所得白色沉淀物。固体物用水(10mL) 洗涤并在空气中干燥得到白色固体状的3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(3.40g，88％)；RP-HPLC Rt 12.532 分钟，纯度98％(5％至85％的乙腈/0.1M乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm， 150 x 3.9mm柱)；

1H NMR(400MHz，d6-DMSO)1.34(9H，br s)，1.50(2H，m)，2.02(1H，m)，2.13 (1H，m)，2.97(2H，m)，3.85(2H，m)，4.59(1H，m)，和8.21(1H，s).

B.3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯

将3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯 (0.6g，0.00135mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.59g，0.00162mol)、 四(三苯基膦)合钯(0.078g，0.000068mol)和碳酸钠(0.36g，0.00338mol) 在乙二醇二甲醚(50mL)和水(10mL)的混合液在80℃下及在氮气气氛 中加热16小时。将所述混合液冷却至室温后，再加入N-(5，7-二甲基 -1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]胺(0.24g，0.00066mol)、四(三苯基膦)合钯(0.078g，0.000068 mol)，将所得混合液在80℃下搅拌5小时。冷却所得混合液至环境 温度，减压除去溶剂。使剩余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二 氯甲烷(3 x 50mL)萃取。将合并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢 钠水溶液和盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到褐色 油状物，该产物经快速硅胶柱层析纯化，使用5％-25％异丙醇/二氯 甲烷作为流动相，将产物在N，N-二甲基甲酰胺中研磨得到3-(4-氨基- 3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.28g，0.00051mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％乙腈-0.1M乙酸 铵，1mL/min)Rt 11.9分钟。

MS：MH+ 555。

C.N2-{4-[4-氨基-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}- 5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺乙酸盐

室温下，往3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基] 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.28g，0.00051 mol)在丙酮(10mL)中的混合液内加入6N的盐酸水溶液(3mL)。将所 得混合液在45℃下搅拌1小时。除去溶剂，所得混合液用5N氢氧 化钠水溶液碱化。水层用二氯甲烷(3 x 80mL)萃取。减压除去溶剂， 剩余物经RP-HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；在 20分钟内用5％-100％ 0.1M的乙酸铵，21ml/min)纯化得到N2-{4-[4- 氨基-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3- 苯并噁唑-2-胺乙酸盐(0.06g，0.00012mol)。

                            1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.85(s，1H)，8.22 (s，1H)，7.95(d，2H)，7.65(d，2H)，7.05(s，1H)，6.80(s，1H)，4.75(br，1H)，3.15(br， 2H)，2.95(m，2H)，2.40(s，3H)，2.35(s，3H)，2.05(br，1H)，2.00(br，1H)，1.90(s， 3H)，1.80(br，1H)，1.60(br，1H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.4分钟。

MS：MH+ 455。

实施例109：1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基] 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-(二甲氨基)-1-乙酮乙酸 盐

将N2-{4-[4-氨基-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺乙酸盐(0.04g，0.000078mol)、二 甲基甘氨酸(0.01g，0.000097mol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二 亚胺盐酸盐(0.019g，0.000097mol)、N，N-二异丙基乙胺(0.033g，0.00026 mol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.011g，0.000078mol)在无水二氯甲 烷(5mL)中的混合液在室温下搅拌18小时。减压除去溶剂。使剩余 物在水和二氯甲烷间分配。水层用二氯甲烷萃取，将合并的有机溶 剂用盐水洗涤。减压除去溶剂，剩余物经RP-HPLC(Hypersilprep HS C 18，8μm，250 x 21.1mm；在35分钟内采用5％-100％ 0.1M的乙酸 铵，21mL/min)纯化得到1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑- 2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-(二甲氨基)- 1-乙酮乙酸盐(0.015g，0.00003mol)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.85(s，1H)，8.27(d，1H)，7.94(d，2H)，7.67(d， 2H)，7.11(s，1H)，6.51(s，1H)，4.81-1.91(br，11H)，2.40(s，3H)，2.34(s，3H)， 2.26(s，3H)，2.22(s，3H)，1.91(s，3H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.7分钟。

MS：MH+ 540。

实施例110：1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基] 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-甲基-2-(甲基氨基)-1- 丙酮

A.3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐

室温下，往3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲 酸叔丁酯(1.2g，0.0027mol)的丙酮(20mL)混合液中加入6N盐酸水 溶液(8mL)。将所得混合液在45℃下搅拌1.5小时，随后在室温下搅 拌16小时。滤出沉淀物并用丙酮洗涤。干燥固体物得到3-碘-1-(3-哌 啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐(1g，0.0024mol)。TLC(甲 醇/二氯甲烷＝5:95)Rf 0.14MS：MH+ 345。

B.N-{2-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]- 1，1-二甲基-2-氧代乙基}-N-甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲酯

将3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二盐酸盐 (0.17g，0.00042mol)、2-[[(9H-9-芴基甲氧基)羰基](甲基)氨基]-2-甲 基丙酸(0.175g，0.00052mol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺 盐酸盐(0.1g，0.00052mol)、N，N-二异丙基乙胺(0.23g，0.0018mol) 和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.057g，0.00042mol)在无水二氯甲烷(7mL) 中的混合液在室温下搅拌18小时。往所述反应液中加入另外的2- [[(9H-9-芴基甲氧基)羰基](甲基)氨基]-2-甲基丙酸(0.044g，0.00013 mol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.025g，0.00013 mol)并搅拌16小时。减压除去溶剂。使剩余物在盐水和乙酸乙酯间 分配。水层用乙酸乙酯萃取，减压除去合并的有机溶剂，剩余物经 RP-HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；在20分钟内 用5％-100％ 0.1M的乙酸铵，21mL/min)纯化得到N-{2-[3-(4-氨基-3- 碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-1，1-二甲基-2-氧代乙基}-N- 甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲酯(0.030g，0.00005mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-85％乙腈-0.1M乙 酸铵，1mL/min)Rt 11.2分钟。MS：MH+ 666。

C.N-2-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-1，1-二甲基-2-氧代乙基-N- 甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲酯

将N-{2-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]- 1，1-二甲基-2-氧代乙基}-N-甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲基酯(0.03g， 0.000045mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲 基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.02g，0.000054mol)、四(三 苯基膦)合钯(0.003g，0.000002mol)和碳酸钠(0.0126g，0.00011mol) 在乙二醇二甲醚(4mL)和水(1mL)中的混合液在80℃下及在氮气气氛 中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使剩 余物在水和乙酸乙酯间分配。水层用乙酸乙酯(3 x 30mL)萃取。将合 并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并用硫 酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到褐色固体物，该产物直接用于下 一步反应。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分 钟内用5％-85％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.4分钟。

TLC(甲醇/二氯甲烷＝5:95)Rf 0.80。

D.1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-甲基-2-(甲基氨基)-1-丙酮

将粗制的N-2-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-1，1-二甲基-2-氧代乙 基-N-甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲酯(0.037g，0.00005mol)在25％哌 啶的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中的混合液在室温下及在氮气气 氛中搅拌16小时。除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯和水间分配。合 并的有机层用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。除去溶剂，剩余物经RP- HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；在30分钟内采用 5％-100％ 0.1M的乙酸铵，21mL/min)纯化得到1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7- 二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌 啶子基]-2-甲基-2-(甲基氨基)-1-丙酮(0.011g，0.00002mol)。

                                            1H NMR(氯仿-d，400 MHz)δ 8.35(s，1H)，7.75(m，2H)，7.40(m，2H)，7.10(s，1H)，6.78(s，1H)，4.98- 1.70(br，9H)，2.49(s，3H)，2.48(s，3H)，2.40(s，3H)，2.10(s，6H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.0分钟。MS：MH+ 554。

实施例111：N2-4-[4-氨基-1-(3-氮杂环丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]苯基-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-氮杂环丁烷甲酸 叔丁酯

将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.73g，0.0028mol)、3-[(甲 基磺酰基)氧基]-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯(1.05g，0.0042mol)和碳酸 铯(1.4g，0.0042mol)在N，N-二甲基甲酰胺(25mL)中的混合液在70 ℃及在氮气气氛中搅拌16小时。冷却所得混合液至室温。往所述混 合液中加入另外的3-[(甲基磺酰基)氧基]-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯 (0.35g，0.0014mol)和碳酸铯(0.46g，0.0014mol)。将所得混合液在 70℃及在氮气气氛中搅拌16小时。减压除去溶剂。使剩余物在水和 乙酸乙酯间分配。水层用二氯甲烷(3 x 70mL)萃取。将合并的有机萃 取液用水和盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂。剩余物 在二氯甲烷(2 x 3mL)中研磨得到3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基)-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯(0.57g，0.0014mol)。RP- HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.4分钟。MS：MH+ 417。

B.3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁基酯

将3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-氮杂环丁烷甲酸 叔丁酯(0.15g，0.00036mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N- [4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.16g， 0.00045mol)、四(三苯基膦)合钯(0.021g，0.000018mol)和碳酸钠(0.095 g，0.0009mol)在乙二醇二甲醚(5mL)和水(2mL)中的混合液在80℃ 下及在氮气气氛中加热16小时。将所述反应液冷却至室温。往所述 混合液中加入另外的四(三苯基膦)合钯(0.021g，0.000018mol)。80℃ 下搅拌所述反应液3小时。冷却所述混合液至环境温度，减压除去 溶剂。使剩余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二氯甲烷(3 x 50mL) 萃取。将合并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水 洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到褐色固体物，该产物 经快速硅胶柱层析纯化，使用5％-50％甲醇/二氯甲烷作为流动相得 到3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁酯(0.033g，0.00006 mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内 用5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.6分钟。MS：MH+ 527。

C.N2-4-[4-氨基-1-(3-氮杂环丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

室温下，往3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基] 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-氮杂环丁烷甲酸叔丁基酯(0.033 g，0.000063mol)的丙酮(4mL)混合液中加入6N盐酸水溶液(0.3mL)。 将所得混合液在45℃下搅拌2小时，随后在室温下搅拌16小时。滤 出从所述反应液得到的固体物，用丙酮洗涤。为了除去部分杂质， 使固体物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液间分配。水层用乙酸乙 酯萃取，有机层用盐水洗涤。除去溶剂得到N2-4-[4-氨基-1-(3-氮杂 环丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 胺(0.004g，0.00001mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.85(s，1H)，8.45(s，1H)，8.00(d，2H)，7.75(d， 2H)，7.09(s，1H)，6.80(s，1H)，5.90(br，1H)，5.20(m，4H)，2.40(s，3H)，2.20(s，3H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.1分钟。MS：MH+ 427。

实施例112：N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-3-氮杂环丁基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.1-(3-氮杂环丁基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

室温下，往3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-氮杂环 丁烷甲酸叔丁酯(0.41g，0.00099mol)的丙酮(5mL)混合液中加入6N 盐酸水溶液(1mL)。将所得混合液在45℃下搅拌2小时。减压除去 溶剂，0℃下将剩余物用5N氢氧化钠水溶液碱化。水层用二氯甲烷(3 x 50mL)萃取，有机层用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂。 将水层和来自有机层的剩余物合并。除去溶剂，将剩余物悬浮在N，N- 二甲基甲酰胺、甲醇和乙酸中，经RP-HPLC(Hypersilprep HS C18， 8μm，250 x 21.1mm；在30分钟内采用5％-100％ 0.1M的乙酸铵， 21mL/min)纯化得到1-(3-氮杂环丁基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺二乙酸盐(0.165g，0.0005mol)。

TLC(甲醇/二氯甲烷5:95)Rf 0.29。MS：MH+ 317。

B.3-碘-1-(1-甲基-3-氮杂环丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

室温下，往1-(3-氮杂环丁基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二 乙酸盐(0.165g，0.0005mol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.15g，0.00073mol) 在二氯乙烷(15mL)中的混合液内加入37％的甲醛溶液(0.016mL， 0.000572mol)。在室温下及在氮气气氛中搅拌所得混合液16小时。 加入另外的甲醛(37％的水溶液，0.016mL，0.000572mol)和三乙酰 氧基硼氢化钠(0.15g，0.00073mol)，将所得混合液在室温下搅拌2 天。往所述混合液中加入5N的氢氧化钠水溶液(1mL)。减压除去溶 剂。使剩余物在水和乙酸乙酯间分配。水层用乙酸乙酯(2 x 50mL)萃 取。将合并的有机萃取液用水和盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸 发除去溶剂。主要产物仍保留在水层中。将水层和来自有机层的剩 余物合并。除去溶剂，剩余物未经纯化直接用于下一步骤中。TLC(甲 醇/二氯甲烷＝10:90)Rf0 .48MS：MH+ 331。

C.N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-3-氮杂环丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

将3-碘-1-(1-甲基-3-氮杂环丁基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.17 g，0.00052mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四 甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.23g，0.000624mol)、 四(三苯基膦)合钯(0.030g，0.000026mol)和碳酸钠(0.14g，0.0013mol) 在乙二醇二甲醚(20mL)和水(15mL)中的混合液在80℃下及在氮气气 氛中加热16小时。冷却所述反应液至室温。冷却所述混合液至环境 温度并减压除去溶剂。使剩余物在水和二氯甲烷间分配。水层用二 氯甲烷(3 x 50mL)萃取。将合并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢 钠水溶液和盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到褐色 固体物，该产物经快速硅胶柱层析纯化，使用5％-50％甲醇/二氯甲 烷作为流动相得到N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-3-氮杂环丁基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.13g，0.0003 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.85(s，1H)，8.15(s，1H)，7.90(d，2H)，7.70(d， 2H)，7.09(s，1H)，6.85(s，1H)，5.40(br，1H)，3.90(m，2H)，3.70(m，2H)，2.40(s， 3H)，2.39(s，3H)，2.30(s，3H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.5分钟。MS：MH+ 441。

实施例113：顺式-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-腈

A.3-氨基-4-羟基苄腈

室温下，往4-羟基-3-硝基苄腈(4g，0.0244mol)在乙醇(180mL) 和水(90mL)的混合液中加入硫代硫酸钠(17g，0.0976mol)。在80℃ 及在氮气气氛中搅拌所得多相混合液1小时。冷却所述反应混合液 至室温，减压除去乙醇。滤出黄色固体物，用水洗涤并减压干燥得 到3-氨基-4-羟基苄腈(1.46g，0.011mol)。

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用 5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 4.5分钟。MS：MH-：133。

B.2-(4-溴苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-腈

室温下，往3-氨基-4-羟基苄腈(1.84g，0.0137mol)的乙腈(140mL) 混合液中加入4-溴苯基异硫氰酸酯(2.93g，0.0137mol)。在室温下搅 拌所述混合液16小时。往所述反应混合液中加入氯化亚铜(1.36g， 0.0137mol)和三乙胺(1.9mL，0.0137mol)。在室温下搅拌所述混合 液16小时。减压除去溶剂，将固体物悬浮在甲醇中。经Celite滤垫 过滤所述混合液，使用甲醇洗涤。将所得的褐色滤液保持在4℃下3 天。滤出沉淀物并用甲醇洗涤得到2-(4-溴苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-腈 (2.4g，0.0076mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm； 在10分钟内用5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.1分钟。 MS：MH-：313。

C.2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺基]- 1，3-苯并噁唑-5-腈

将2-(4-溴苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-腈(1.8g，0.0058mol)、二硼酸 二频哪醇酯(1.8g，0.007mol)、[1.1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯合 钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.47g，0.00058mol)的络合物和乙酸钾(1.7g， 0.0174mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中的混合液在80℃下及在氮 气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。 剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用0％-40％乙酸乙酯/正庚烷作为 流动相得到2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺 基]-1，3-苯并噁唑-5-腈(0.80g，0.0022mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18， 5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min) Rt 16.9分钟。MS：MH+ 362。

D.顺式-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-腈

将3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺(0.15g，0.00034mol)、2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)苯胺基]-1，3-苯并噁唑-5-腈(0.153g，0.000425mol)、四(三苯 基膦)合钯(0.028g，0.0000238mol)和碳酸钠(0.090g，0.00085mol)在 乙二醇二甲醚(3mL)和水(1mL)中的混合液在80℃下加热16小时。 加入另外的2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺 基]-1，3-苯并噁唑-5-腈(0.072g，0.0002mol)、四(三苯基膦)合钯(0.012 g，0.000010mol，0.03当量)，将所得混合液在80℃下及在氮气气氛 中搅拌16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使剩 余物在水和乙酸乙酯间分配。水层用乙酸乙酯(2 x 50mL)萃取。将合 并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并用硫 酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂，剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使 用2％氢氧化铵水溶液/5％-20％甲醇/二氯甲烷作为流动相。减压除 去溶剂，剩余物经RP-HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1 mm；在30分钟内采用5％-50％ 0.1M的乙酸铵，21mL/min)纯化得 到顺式-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-腈(0.15g，0.00027mol)。

                                              1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.25(s，1H)，8.53(s，1H)，8.00(s，1H)，7.95(d，2H)，7.70(m，4H)，4.80(br，1H)， 2.49(s，3H)，2.20(br，8H)，2.10(br，3H)，1.75(br，2H)，1.60(br，4H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.2分钟。MS：MH+ 549。

实施例114：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯酚

-50℃下，往4-(三氟甲氧基)苯酚(4g，0.0225mol)在乙二醇二甲 醚(90mL)的混合液中加入0.5M四氟硼酸硝鎓的环丁砜(46mL， 0.0229mol)溶液。将所得混合液在-50℃及在氮气气氛中搅拌6小时。 经硅胶滤垫过滤所述混合液，并将所述滤垫用25％乙酸乙酯/正庚烷 洗涤。减压除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯和水间分配。水层用乙 酸乙酯萃取。有机层用水和盐水洗涤。减压除去溶剂，剩余物经快 速硅胶柱层析纯化，使用0％-50％乙酸乙酯/正庚烷作为流动相得到 2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯酚(2.5g，0.011mol)。TLC(乙酸乙酯/正庚烷＝ 25：75)Rf 0.50MS：MH-：222。

B.2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯酚

室温下往2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯酚(2g，0.0089mol)在乙醇(50 mL)和水(25mL)的混合液中加入硫代硫酸钠(6.2g，0.0356mol)。在 80℃及在氮气气氛中搅拌所述多相混合液1小时。冷却所述反应混 合液至室温，减压除去乙醇。水层用乙酸乙酯(3 x 70mL)萃取，有机 层用盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂得到黄色固体状的2- 氨基-4-(三氟甲氧基)苯酚(0.9g，0.005mol)。TLC(甲醇/二氯甲烷＝ 5:95)Rf 0.29MS：MH+：194。

C.N2-(4-溴苯基)-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺

室温下往2-氨基-4-(三氟甲氧基)苯酚(0.9g，0.0047mol)在四氢 呋喃(60mL)的混合液中加入4-溴苯基异硫氰酸酯(1g，0.0047mol)。 在室温下搅拌所述混合液16小时。往所述反应混合液中加入无水硫 酸铜(7.1g，0.0443mol，9.43当量)、三乙胺(0.67mL，0.0047mol，1 当量)和硅胶(8.5g)。室温下搅拌所述混合液4小时。减压除去溶剂。 经硅胶滤垫过滤所述混合液，使用25％乙酸乙酯/正庚烷作为流动相 得到橙色的固体物。所述固体物经快速硅胶柱层析纯化，使用0％-25 ％乙酸乙酯/正庚烷作为流动相。除去溶剂，将剩余物在正庚烷中研 磨得到N2-(4-溴苯基)-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.9g，0.0024 mol)。

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用 5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.2分钟。MS：MH+：373。

D.N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5- (三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺

将N2-(4-溴苯基)-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.9g，0.0024 mol)、二硼酸二频哪醇酯(0.73g，0.0029mol)、[1，1′-双(二苯基膦基) 二茂铁]二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.2g，0.00024mol)的络合物和 乙酸钾(0.71g，0.0072mol)在N，N-二甲基甲酰胺(25mL)中的混合液 在80℃及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度， 减压除去溶剂。剩余物经硅胶滤垫过滤，以25％乙酸乙酯/正庚烷作 为流动相。除去溶剂，将剩余物在正庚烷中研磨得到N2-[4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并 噁唑-2-胺(0.68g，0.0016mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm， 15cm；在20分钟内用5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 18.8 分钟。MS：MH+：421。

E.顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺

将3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺(0.06g，0.00014mol)、N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)苯基]-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.071g，0.00017 mol)、四(三苯基膦)合钯(0.011g，0.00001mol)和碳酸钠(0.037，0.00035 mol)在乙二醇二甲醚(3mL)和水(1mL)中的混合液在80℃下加热16 小时。加入另外的N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.030g，0.00007mol)和 四(三苯基膦)合钯(0.005g，0.000004mol)，将所得混合液在80℃下 及在氮气气氛中搅拌5小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除 去溶剂。使剩余物在水和乙酸乙酯间分配。水层用乙酸乙酯(2 x 50mL) 萃取。将合并的有机萃取液依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水 洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂，剩余物经快速硅胶柱层 析纯化，使用2％氢氧化铵水溶液/5％-25％甲醇/二氯甲烷作为流动 相。减压除去溶剂得到顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-(三氟甲氧基)-1，3-苯并噁唑 -2-胺(0.065g，0.00011mol)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.25(s，1H)，8.20(s，1H)，7.95(d，2H)，7.65(m， 3H)，7.50(s，1H)，7.15(s，1H)，4.80(br，1H)，2.60(br，9H)，2.49(s，3H)，2.20(br， 3H)，2.10(br，1H)，1.75(br，2H)，1.60(br，2H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.7分钟。MS：MH+ 608。

实施例115：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.4-乙基-2-硝基苯酚

在-50℃下，往4-乙基苯酚(4g，0.0328mol)的乙二醇二甲醚(100 mL)混合液中加入0.5M四氟硼酸硝鎓的环丁砜(67mL，0.0335mol) 溶液。将所得混合液在-50℃下及在氮气气氛中搅拌6小时。经硅胶 滤垫过滤所述混合液，所述滤垫用25％乙酸乙酯/正庚烷洗涤。减压 除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯和水间分配。水层用乙酸乙酯萃取。 有机层用水和盐水洗涤。减压除去溶剂得到约10g的粗制4-乙基-2- 硝基苯酚。所得粗产物未经纯化直接用于下一步骤中。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.68(s，1H)，7.71(s，1H)，7.40(d，1H)，7.07(d， 1H)，2.60(q，2H)，1.20(t，3H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.2分钟。

B.2-氨基-4-乙基苯酚

室温下往4-乙基-2-硝基苯酚(5.5g，0.032mol)在乙醇(180mL)和 水(90mL)的混合液中加入硫代硫酸钠(23g，0.131mol)。在80℃及 在氮气气氛中搅拌所述多相混合液16小时。冷却所述反应混合液至 室温，减压除去乙醇。水层用乙酸乙酯(3 x 100mL)萃取，有机层用 盐水洗涤并用硫酸钠干燥。减压除去溶剂，剩余物经快速硅胶柱层 析纯化，使用0％-25％甲醇/二氯甲烷作为流动相(x2)。减压除去溶 剂得到2-氨基-4-乙基苯酚(0.89g，0.006mol)。

                                                                 1HNMR (DMSO-d6，400MHz)δ 8.61(br，2H)，6.47(d，1H)，6.37(s，1H)，6.18(d，1H)，2.17 (q，2H)，1.08(t，3H).MS：MH-：137

C.N2-(4-溴苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺

室温下往2-氨基-4-乙基苯酚(0.89g，0.0065mol)的四氢呋喃(80 mL)混合液中加入4-溴苯基异硫氰酸酯(1.4g，0.0065mol)。在室温下 搅拌所述混合液2小时，往其中加入无水硫酸铜(6.2g，0.039mol)、 三乙胺(0.9mL，0.0065mol)和硅胶(11.7g)。室温下搅拌所述混合液 4小时。减压除去溶剂。经硅胶滤垫过滤所述混合液，使用25％乙 酸乙酯/正庚烷作为流动相得到棕色固体物。固体物经快速硅胶柱层 析纯化，使用0％-25％乙酸乙酯/正庚烷作为流动相。除去溶剂，将 剩余物在正庚烷中研磨得到N2-(4-溴苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺 (0.96g，0.003mol)。RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm； 在10分钟内用5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.1分钟。 MS：MH+：318。

D.N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5- 乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺

将N2-(4-溴苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.86g，0.0027mol)、 二硼酸二频哪醇酯(0.84g，0.0033mol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁] 二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.22g，0.00027mol)的络合物和乙酸钾 (0.8g，0.0081mol)在N，N-二甲基甲酰胺(30mL)中的混合液在80℃ 下及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压 除去溶剂。使剩余物在乙酸乙酯和水间分配。水层用乙酸乙酯(3 x 50 mL)萃取，有机层用盐水洗涤。减压除去溶剂，所得的粗制物经快速 硅胶柱层析纯化，使用0％-25％乙酸乙酯/正庚烷作为流动相得到 N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5-乙基-1，3- 苯并噁唑-2-胺(0.82g，0.002mol)。

TLC(乙酸乙酯/正庚烷＝25:75)Rf 0.30。MS：MH+：365。

E.顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺

3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 (0.06g，0.00014mol)、N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷 -2-基)苯基]-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.062g，0.00017mol)、四(三 苯基膦)合钯(0.011g，0.00001mol)和碳酸钠(0.037，0.00035mol)在乙 二醇二甲醚(3mL)和水(1mL)中的混合液在80℃下加热16小时。冷 却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使剩余物在水和乙酸乙 酯间分配。水层用乙酸乙酯(2 x 25mL)萃取。将合并的有机萃取液依 次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸 发除去溶剂，剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用2％氢氧化铵水溶 液/5％-25％甲醇/二氯甲烷作为流动相。减压除去溶剂得到顺式-N2- (4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基} 苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.065g，0.00012mol)。

(DMSO-d6，400MHz)δ 11.25(s，1H)，8.65(s，1H)，8.37(d，2H)，8.09(d，2H)，7.84 (d，1H)，7.76(s，1H)，7.42(d，1H)，5.22(br，1H)，3.13(q，2H)，2.52(br，7H)，2.69 (br，4H)，2.64(s，3H)，2.49(br，2H)，2.11(br，2H)，2.01(br，2H)，1.63(t，3H).

RPHPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.3分钟。MS：MH+ 552。

实施例116：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(二甲氨基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺；和

实施例117：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(二甲氨基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.顺式-和反式-1-[4-(二甲氨基)环己基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺

室温下，往4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己酮 单盐酸盐(2.00g，5.08mmol)、二甲胺(2M在四氢呋喃中的溶液，7.62 mL，15.24mmol)和乙酸(0.87mL，15.24mmol)在1，2-二氯乙烷(200mL) 的溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.40g，6.61mmol)。将所述反应 液搅拌24小时，加入另外的三乙酰氧基硼氢化钠(0.40g)。再过24小 时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和CH2Cl2(200mL)，分离出 有机层，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。产物经柱层析纯化，使用 1:5:94的氢氧化铵水溶液：MeOH:CH2Cl2至1:20:79 94的氢氧化铵水 溶液：MeOH:CH2Cl2梯度溶液作为洗脱液得到白色晶体状的顺式-和反 式-1-(4-(二甲氨基)环己基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.87g，44 ％)的混合物；对于反式-异构体：RP-HPLC Rt 5.458分钟，33％纯度； 对于顺式-异构体Rt 5.621分钟，67％纯度(5％ to 85％乙腈/0.1M的 乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm； Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；顺式-和反式-异构体 的观察值均为m/z 387(MH+)。

B.顺式-和反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(二甲氨基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

将顺式-和反式-1-[4-(二甲氨基)环己基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(0.50g，1.29mmol)、N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.565g，1.55 mmol)、碳酸钠(0.34g，3.24mmol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.075g，0.06 mmol)在乙二醇二甲醚(150mL)和水(25mL)中的混合液在80℃下加 热16小时。加入另外的Pd催化剂(0.075g)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基- 1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺 (0.40g)，将所述反应液在80℃下再加热16小时。再加入Pd催化剂 (0.020g)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]- 5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.12g)，将所述反应液在80℃下再加 热16小时。将所述反应液真空浓缩，将剩余物溶解在二氯甲烷(200mL) 中，用水(50mL)洗涤。用无水硫酸钠干燥有机层并减压浓缩。剩余 物经硅胶柱层析纯化，使用1％氢氧化铵水溶液和10％甲醇的CH2Cl2 溶液作为洗脱液得到顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(二甲氨基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.08g)， 混合流分(0.24g)和反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(二甲氨基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.030g)； RP-HPLC Rt 11.326分钟，100％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵 水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内用1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 497(MH+)；1H NMR(400 MHz，d6-DMSO)1.49(2H，m)，2.01(6H，m)，2.33(7H，m)，2.35(3H，s)，2.40(3H， s)，4.67(1H，m)，6.80(1H，s)，7.11(1H，s)，7.65(2H，d，J8.5Hz)，7.92(2H，d，J8.5 Hz)，8.23(1H，s)，和10.85(1H，s).

顺式-流分需要进一步通过RPHPLC纯化得到顺式-N2-(4-{4-氨基-1- [4-(二甲氨基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基- 1，3-苯并噁唑-2-胺(0.050g)，RP-HPLC Rt 11.337分钟，100％纯度(5％ 至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为 1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；

           1H NMR(400MHz，d6-DMSO)1.61(4H，m)，2.08(2H，m)，2.27(9H， m)，2.34(3H，s)，2.40(3H，s)，4.81(1H，m)，6.80(1H，s)，7.11(1H，s)，7，65(2H，d，J 8.5Hz)，7.92(2H，d，J 8.5Hz)，8.23(1H，s)，和10.85(1H，s).

实施例614-620

以下为合成顺式-N2-4-[4-氨基-1-(4-氨基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]苯基-1，3-苯并噁唑-2-胺类似物的通用方法。使用该方法制 备实施例118-124的化合物。

A.N2-(4-溴苯基)-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺

往2-氨基-4-氯苯酚(2.441g，17.00mmol)的乙腈(20mL)溶液中 加入4-溴苯基异硫氰酸酯(3.639g，17.00mmol)，室温下搅拌所得反 应液2小时。随后将所得的棕色溶液经滴液漏斗滴加至用冰浴预冷 至0℃的过氧化钾(6.04g，85.0mmol)的乙腈(20mL)悬浮液中。20分 钟后，初始的放热平息后，将所述反应液温热至室温下40分钟。滴 加入水(120mL)，过滤收集所得的灰白色固体物，用另外的水(60mL) 洗涤并在冷冻干燥器中干燥过夜得到灰白色固体状的N2-(4-溴苯基)- 5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺(4.06g，74％)；RP-HPLC Rt 17.229分钟，99％ 纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20 分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9 mm柱)；m/z 321(M-H)-和323(M-H)-；1H NMR(400MHz，d6-DMSO) 7.17(1H，dd，J 8.5和1.9Hz)，7.53(4H，m)，7.71(2H，d，J 8.8Hz) 和10.95(1H，s)。

B.N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5- 氯-1，3-苯并噁唑-2-胺

将含N2-(4-溴苯基)-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺(4.00g，12.36 mmol)、二硼酸二频哪醇酯(3.77g，14.83mmol)、乙酸钾(3.64g，37.09 mmol)和[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯合钯(II)与二氯甲烷 (1:1)(0.61g，0.74mmol)的络合物的二甲基甲酰胺(200mL)混合液在 80℃及氮气气氛中加热16小时。加入另外的Pd催化剂(0.61g)，继 续反应6小时。随后加入另外的二硼酸酯(3.0g)，再反应16小时。 往所述反应混合液中加入硅胶(20mL)，减压除去溶剂。随后经硅胶 滤垫纯化所得的固体物，使用10％至20％乙酸乙酯的庚烷梯度液作 为洗脱液。所得的固体物在庚烷中研磨得到膏状固体的N2-[4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺 (2.40g，52％)；RP-HPLC Rt 18.164分钟，99％纯度(5％至85％乙 腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min； λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；

           1HNMR(400MHz，d6-DMSO)1.29(12H，s)，7.17(1H，dd，J 8.5和 2.1Hz)，7.56(2H，m)，7.68(2H，m)，7.75(2H，m)，和10.96(1H，s).

C.N2-(4-溴苯基)-5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

往4-溴苯基异硫氰酸酯(2.00g，9.34mmol)的四氢呋喃(35mL) 溶液中加入2-氨基-4-甲基苯酚(1.15g，9.34mmol)。室温下搅拌所述 反应液16小时。加入无水硫酸铜(II)(14.06g，88.10mmol)，硅胶(14.06 g)和三乙胺(1.3mL，9.34mmol)。室温下搅拌所得混合液24小时。 减压浓缩所述反应液，随后经硅胶滤垫纯化，使用1:5乙酸乙酯： 庚烷(2L)，接着采用乙醚作为洗脱液得到浅棕色固体状的N2-(4-溴苯 基)-5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(2.30g，81％)；RP-HPLC Rt 16.437分 钟，94％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5， 在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150 x 3.9mm柱)；

                                                  1HNMR(400MHz，d6- DMSO)2.37(3H，s)，6.94(1H，d，J 8.1Hz)，7.27(1H，s)，7.36(1H，d，J 8.1Hz)，7.54 (2H，d，J 8.4Hz)，7.72(2H，d，J 8.4Hz)，和10.72(1H，s).

D.N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5- 甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

使用制备N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺所描述的方法，由N2-(4-溴苯基)-5-甲基- 1，3-苯并噁唑-2-胺(1.5g，4.95mmol)制备N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺。所形成的 产物为白色絮凝状固体(0.79g，46％)；RP-HPLC Rt 17.382分钟，98％ 纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH4.5，在20分 钟内用1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm 柱)；

                                             1H NMR(400MHz，d6- DMSO)1.29(12H，s)，2.38(3H，s)，6.94(1H，d，J 8.1Hz)，7.30(1H，s)，7.36(1H，d， J 8.1Hz)，7.67(2H，d，J 8.5Hz)，7.75(2H，d，J 8.5Hz)，和10.74(1H，s).

E.顺式-1-(4-氨基环己基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的环 己胺类似物的通用合成方法

氮气气氛中，将4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环 己酮单盐酸盐(浓度范围5.08-7.62mmol)悬浮在二氯乙烷(200-300mL) 中。加入适当的胺(3.0当量)、冰醋酸(3.0当量)和三乙酰氧基硼氢化 钠(1.3当量)，在环境温度下搅拌所述反应液1-2天。在反应未完成 前，加入另外的三乙酰氧基硼氢化钠(1.3当量)，继续反应1或2天。 用饱和碳酸钠溶液(50-75mL)猝灭所述反应液，用二氯甲烷(200-300 mL)萃取。分离出有机相，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩得到白色固 体状的顺式-和反式产物的混合物。粗产物经快速柱层析纯化，使用 2％甲醇和0.2％氢氧化铵的二氯甲烷溶液至5％甲醇和0.5％氢氧化铵 的二氯甲烷梯度溶液作为洗脱液。将含纯顺式产物的流分合并，减 压浓缩并在冷冻干燥器中干燥得到白色固体状的顺式-1-(4-氨基环己 基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺环己胺类似物(参见表1的详细分 析数据和拆分产率)。

表1

RP-HPLC分析条件：5％至85％乙腈/0.1M乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm， 150 x 3.9mm柱。

F.顺式-N2-4-[4-氨基-1-(4-氨基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]苯基-1，3-苯并噁唑-2-胺类似物的通用合成方法

将顺式-1-(4-氨基环己基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的环己 胺类似物(浓度范围0.10-0.52mmol)溶于乙二醇二甲基乙醚(5-10mL) 和水(2.5-5mL)中。加入适当的取代或未取代的N-(1，3-苯并噁唑-2- 基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(1.25 当量)、四(三苯基膦)合钯(O)(0.05当量)和碳酸钠(2.5当量)，在80℃ 下加热所述反应液20小时。在反应未完成前，加入另外的硼酸酯(1.25 当量)和钯催化剂(0.05当量)。同时往所述反应液中加入DME/H2O 2∶1(5mL)，发生沉淀，再将反应液在80℃下加热22-40小时。往所 述反应液中加入硅胶(5-8mL)，减压浓缩所得混合液。经硅胶快速柱 层析纯化，使用2％至50％含0.5M氢氧化铵的二氯甲烷溶液的甲醇 梯度溶液洗脱得到顺式-N2-4-[4-氨基-1-(4-氨基环己基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]苯基-1，3-苯并噁唑-2-胺类似物。产物纯度不符合要 求，将试样进一步经RP-HPLC纯化(Waters PrepLC 4000，流速：10mL/ 分钟，λ＝254nm，梯度：在40分钟内用15％至35％乙腈/0.1M乙酸 铵水溶液，随后在150分钟内用35％至90％乙腈/0.1M乙酸铵水溶液； Deltapak C18，15μm，40 x 100mm柱)。将含所需产物流分 合并并真空浓缩，随后在冷冻干燥器中干燥得到白色或黄褐色固体 状的产物(参见表2的分析数据和拆分产率)。

表2

RP-HPLC分析条件：5％至85％乙腈/0.1M乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm， 150 x 3.9mm柱。

实施例125：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-(2-硝基苯基)-1，3-噻唑-2-胺

采用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺的方法，不同之 处在于使用2-溴-2′-硝基苯乙酮(0.126g，0.516mmol)作为所述烷基化 剂。所得产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵中 的溶液，在20分钟内为21mL/min，使用8μ的Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 7.0-8.0min)纯化得到黄色泡沫状的顺式-N2-(4-{4-氨 基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)- 4-(2-硝基苯基)-1，3-噻唑-2-胺(0.088g，0.144mmol)；RPHPLC(25至 100％乙腈在0.1M含水乙酸铵中的溶液，在10min为1mL/min， 使用5μ的Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 7.72min；MS(MH)+ 611。

实施例126：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噻唑-2-胺

将三溴化吡啶鎓(0.894g，2.80mmol)和3，5-二甲基环己酮(0.180 mL，1.27mmol)悬浮在二氯甲烷(5mL)中。在环境温度下搅拌所述反 应混合液24h，随后用二氯甲烷(60mL)稀释。有机层依次用水(10mL) 和碳酸氢钠(10mL)萃取，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。产物经快速 柱层析纯化(7.5％乙酸乙酯/庚烷)，得到2，6-二溴-3，5-二甲基-1-环己酮 的非对映异构体混合物(0.243g，0.855mmol)：TLC Rf(20％乙酸乙酯 /庚烷)：0.35。

2，6-二溴-3，5-二甲基-1-环己酮(0.243g，0.855mmol)的烷基化使 用在制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺中描述的烷基化方 法，不同之处在于所述烷基化在75℃下进行，得到N-(4-溴苯基)-N- (5，7-二甲基-1，3-苯并噻唑-2-基)胺(0.251g，0.754mmol)；RP-HPLC(25 至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵中的溶液，在10min内为1mL/min 使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 14.8分钟。

采用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺的方法，将N-(4- 溴苯基)-N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噻唑-2-基)胺(0.251g，0.754mmol)转 化为题述化合物。所得产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M 含水乙酸铵中的溶液，在20分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 8.8-10.5min)纯化得到白色粉末状的顺式- N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噻唑-2-胺(0.081g，0.143mmol)；RP HPLC(25-100％乙腈在0.1M含水乙酸铵中的溶液，在10min内为1 mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 8.75min； MS(MH)+ 568。

实施例127：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，6-二氢-4H-环戊二烯并[d][1，3]噻唑-2- 胺

将环戊酮(200uL，2.26mmol)和三溴化吡啶鎓(0.723g，2.26mmol) 悬浮在二氯甲烷(5mL)中。在环境温度下搅拌所述反应混合液过夜， 随后用乙醚/石油醚(1:1，60mL)稀释。有机相依次用水(10mL)和碳酸 氢钠水溶液(10mL)萃取，随后干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。产物经 快速柱层析纯化(25％乙醚/石油醚)得到无色油状的2-溴环戊酮(0.220 g，1.35mmol)；TLC(25％乙醚/石油醚)Rf：0.35。

使用在制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-(2-硝基苯基)-1，3-噻唑-2-胺中描 述的方法，将2-溴环戊酮(0.220g，1.35mmol)转化为题述化合物， 不同之处在于所述烷基化反应在60℃下进行。所得产物经制备 HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在20分钟内为 21mL/min使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 7.8-8.8min) 纯化得到黄褐色粉末状的顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基) 环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，6-二氢-4H-环戊二烯并 [d][1，3]噻唑-2-胺(0.009g，0.017mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈 在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内用1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 7.23min；MS(MH)+ 530。

实施例128：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-苯基-1，3-噻唑-2-胺

使用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，6-二氢-4H-环戊二烯并[d][1，3]噻唑-2- 胺的方法，将丁酰苯(436μL，3.00mmol)转化为题述化合物。所得产 物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在20 分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 8.9-11.1min)纯化得到白色粉末状的顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-苯基- 1，3-噻唑-2-胺(0.022g，0.037mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1 M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250x4.6mm柱)Rt 9.27min；MS(MH)+ 594。

实施例129：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-胺

使用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，6-二氢-4H-环戊二烯并[d][1，3]噻唑-2- 胺中描述的方法将环己酮(310uL，3.00mmol)转化为题述化合物。所 得产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液， 在20分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm 柱，Rt 6.8-8.6min)纯化得到橙色粉末状的顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4- 甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4，5，6，7-四氢 -1，3-苯并噻唑-2-胺(0.022g，0.040mmol)；RP-HPLC(25至100％乙 腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 7.62min；MS(MH)+ 544。

实施例130：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-异丙基-4-苯基-1，3-噻唑-2-胺

使用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，6-二氢-4H-环戊二烯并[d][1，3]噻唑-2- 胺中描述的方法将异戊酰苯(0.484g，2.98mmol)转化为题述化合物。 所得产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液， 在20分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm 柱，Rt 9.5-11.7min)纯化得到粉红色粉末状的顺式-N2-(4-{4-氨基-1- [4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-异丙 基-4-苯基-1，3-噻唑-2-胺(0.060g，0.099mmol)；RP-HPLC(25至100％ 乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 9.82min；MS(MH)+ 608。

实施例131：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-苯基-5-丙基-1，3-噻唑-2-胺

使用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，6-二氢-4H-环戊二烯并[d][1，3]噻唑-2- 胺中描述的方法将戊酰苯(0.488g，3.01mmol)转化为题述化合物。 所得产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液， 在20分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm 柱，Rt 9.6-11.8min)纯化得到黄色粉末状的顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4- 甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-苯基-5-丙 基-1，3-噻唑-2-胺(0.135g，0.222mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈 在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 10.08min；MS(MH)+ 608。

实施例132：3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基甲基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1- 基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将2-氨基苯酚(0.257g，2.36mmol)和4-溴苯基乙酸(0.500g，2.36 mmol)直接在密封管中在200℃下加热4h，冷却所述反应混合液至环 境温度，用甲醇/二氯甲烷(5％，60mL)稀释。有机相用碳酸钠水溶液 (1M，10mL)萃取，干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。剩余物经快速柱层 析纯化(15％乙酸乙酯/庚烷)得到棕色固体状的N-(1，3-苯并噁唑-2-基)- N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.347g， 1.20mmol)；(MH)+ 290。

采用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-氯-1，3-苯并噻唑-2-胺的方法，将N- (1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]胺转化为2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苄基]-1，3-苯并噁唑，随后转化为题述化合物。所得产物经制备 HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液在20分钟内为21 mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 5.6-7.3min) 纯化得到白色粉末状的3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基甲基)苯基]-1-[4-(4-甲 基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.102g，0.195 mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10 分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 6.83 min；MS(MH)+ 523。

实施例133：N1-[2-(二甲氨基)乙基]-2-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2- 基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}丙酰胺

采用制备N1-[2-(二甲氨基)乙基]-2-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3- 苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)丙酰胺的方 法，不同之处在于Suzuki偶合方法采用N-(1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺。产物经制备 HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液在20分钟内为21 mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 5.5-7.0min) 纯化得到灰白色固体状的N1-[2-(二甲氨基)乙基]-2-(4-氨基-3-[4-(1，3- 苯并噁唑-2-基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}丙酰胺(0.003 g，0.006mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的 溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm 柱)Rt 6.70min；MS(MH)+ 486。

实施例134：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-(4-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺

将硼酸对甲苯酯(0.150g，1.10mmol)、四(三苯基膦)合钯(0)(0.064 g，0.055mmol)和碳酸铯(1.80g，5.52mmol)悬浮在甲苯(25mL)中。 采用剧烈氮气流将所述反应混合液鼓泡15分钟。加入丁酰氯(0.344 mL，3.31mmol)，在100℃及在氮气气氛中加热所述反应混合液24 小时。冷却所述反应混合液至环境温度，用乙醚(100mL)稀释。有机 层依次用水(10mL)、碳酸氢钠水溶液(10mL)和氯化钠水溶液(10mL) 萃取。将有机层干燥(硫酸镁)，过滤并浓缩。剩余物经快速柱层析纯 化(7.5％乙醚/石油醚)得到无色油状的1-(4-甲基苯基)-1-丁酮(0.134 g，0.827mmol)：

                    1H NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.86(d，2H)，7.25(d，2H)， 2.92(t，2H)，2.41(s，3H)，1.76(sx，2H)，1.00(t，3H).

采用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，6-二氢-4H-环戊二烯并[d][1，3]噻唑-2- 胺的方法将1-(4-甲基苯基)-1-丁酮(0.134g，0.827mmol)转化为题述 化合物。所得产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸 铵的溶液在20分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21 mm柱，Rt 10.0-12.0min)纯化得到灰白色固体状的顺式-N2-(4-{4-氨 基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)- 5-乙基-4-(4-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺(0.036g，0.059mmol)；RP- HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为 1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 10.13min； MS(MH)+ 608。

实施例135：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-(2-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺

使用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-(4-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺中 描述的方法将硼酸邻甲苯酯(0.200g，1.47mmol)转化为题述化合物。 产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在20 分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 9.8-11.7min)纯化得到灰白色固体状的顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲 基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-(2-甲 基苯基)-1，3-噻唑-2-胺(0.075g，0.123mmol)；RP-HPLC(25至100％ 乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 9.83min；MS(MH)+ 608。

实施例138：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-(3-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺

使用制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-4-(4-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺中 描述的方法将硼酸间甲苯酯(0.175g，1.29mmol)转化为题述化合物。 所得产物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液， 在20分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm 柱，Rt 10.0-12.0min)纯化得到灰白色固体状的顺式-N2-(4-{4-氨基-1- [4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基 -4-(3-甲基苯基)-1，3-噻唑-2-胺(0.051g，0.084mmol)；RP-HPLC(25至 100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为1mL/min， 使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 10.13min；MS(MH)+ 608。

实施例139：顺式-N2-{4-(4-氨基-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基}-1H-2-吲哚甲酰胺双马来酸盐

将顺式-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.50g，1.15mmol)在二氯甲烷(4mL)和吡 啶(4mL)中的混合液冷却至0℃，随后用1H-2-吲哚甲酰氯(0.27g，1.49 mmol)的二氯甲烷溶液(4mL)处理。将所得混合液温热至环境温度并 搅拌1小时。减压蒸发除去溶剂，随后使剩余物在二氯甲烷(50mL) 和1N氢氧化钠水溶液间分配。分离各层，随后将有机溶液用硫酸 镁干燥，过滤并将滤液减压浓缩得到剩余物，将该剩余物经快速硅 胶柱层析纯化，使用二氯甲烷-甲醇(7:3)为流动相。通过温热至60℃ 而将固体物(0.53g)溶于乙酸乙酯(60mL)和乙醇(35mL)中。加入马来 酸(0.32g，2.75mmol)的乙酸乙酯(5mL)溶液。随后冷却所得混合液 至0℃。过滤收集所形成的固体物，得到顺式-N2-{4-(4-氨基-1-(4-(4- 甲基哌嗪-1-基)环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基}- 1H-2-吲哚甲酰胺双马来酸盐(0.70g，0.86mmol)：

                                                1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 11.82(s，1H)，9.46(s，1H)，8.26(s，1H)，8.10(d，1H)，7.68(d，1H)，7.48 (d，1H)，7.40(s，1H)，7.33(s，1H)，7.30(d，1H)，7.24(t，1H)，7.09(t，1H)，6.14(s， 4H)，4.88(m，1H)，3.97(s，3H)，2.3-3.3(m，14H)，2.09(m，2H)，1.7-1.8(m，4H)；

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6 mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.22 min；MS：MH+ 580.3。

实施例140：顺式-N2-{4-4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺双马来 酸盐

按照制备顺式-N2-{4-(4-氨基-1-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基}-1H-2-吲哚甲酰胺双马来酸盐 中所描述的相同方法，由顺式-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺和1-甲基-1H-2-吲哚甲 酰氯制备题述化合物：

         1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.47(s，1H)，8.26(s，1H)，8.09(d， 1H)，7.71(d，1H)，7.59(d，1H)，7.17-7.36(m，4H)，7.16(t，1H)，6.16(s，4H)，4.88 (m，1H)，3.96(s，3H)，2.3-3.3(m，14H)，2.09(m，2H)，1.7-1.8(m，4H)； RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6 mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.98 min；MS：MH+ 594.3。

实施例141：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

A.2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺

将N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯基]氨基甲酸叔丁酯(45.0g，.129mol)的混合物溶于二氯甲烷(270 mL)中，随后将所得溶液用冰浴冷却至5℃。在1小时内滴加入20％ 三氟乙酸的二氯甲烷混合液，同时保持所述混合液的温度低于5℃。 将所述反应混合液温热至环境温度并搅拌2小时。减压除去溶剂， 随后将所得油状物溶于二氯甲烷(250mL)中，依次用2.5N氢氧化钠 水溶液(300mL)和盐水(100mL)小心萃取。将有机溶液用硫酸镁干 燥，过滤并将滤液减压浓缩得到浅棕色固体状的2-甲氧基-4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺(21.7g，67.5％)双马来酸 盐：

                                      1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 7.06(d， 1H)，6.98(s，1H)，8.09(d，1H)，6.59(d，1H)，5.13(bs，2H)，3.76(s，3H)，1.26(s， 12H)；

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6 mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 10.85 分钟。

B.4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]-1-哌啶甲酸叔丁酯

将4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯 (0.50g，11.26mmol)、2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯胺(3.10g，12.39mmol)、碳酸钠(2.90g，27.0mmol) 和四(三苯基膦)合钯(0.78g，0.67mmol)在乙二醇二甲醚(90mL)和水 (45mL)中的混合液85℃下加热18小时。将所得混合液冷却并减压 蒸发，随后在水(50mL)和二氯甲烷(150mL)间分配。水层进一步用 二氯甲烷(2X50mL)萃取，随后将合并的有机溶液用硫酸镁干燥， 接着过滤。将滤液浓缩并经快速硅胶柱层析纯化，使用二氯甲烷/甲 醇(96∶4)作为洗脱液得到黄褐色固体状的题述化合物(4.51g，91％)：

                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.04(s，1H)， 6.98(d，1H)，6.76(d，1H)，5.06(bs，1H)，4.86(m，1H)，4.08(m，2H)，3.83(s，3H)， 2.90(m，2H)，2.03(m，2H)，1.90(m，2H)，1.43(s，9H)；

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6 mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 9.70 分钟。

C.N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

将4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.10g，0.228mmol)在二氯甲烷(2mL)和吡啶(1 mL)中的混合液用2-氟-4-三氟甲基苯甲酰氯(0.057g，0.251mmol)处 理，随后搅拌1小时。蒸发除去溶剂，随后将剩余物用三氟乙酸(1mL) 的二氯甲烷(2mL)溶液处理。在环境温度下搅拌所述混合液1小时， 随后减压蒸发除去溶剂，剩余物经RP制备HPLC(C18柱，使用乙 腈-0.05M乙酸铵作为流动相)纯化。冷冻干燥得到纯的题述化合物：

          1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.90(d，1H)，8.31(d，1H)，8.24(s， 1H)，7.99(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.33(s，1H)，7.30(d，1H)，4.78(m， 1H)，3.94(s，3H)，3.10(m，2H)，2.69(m，2H)，2.08(m，2H)，1.85-2.0(m，5H)；

RPHPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6 mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.33 min；MS：MH+ 530.2。

按照制备N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐中描述的相同 方法，由4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]-1-哌啶甲酸叔丁酯和适当的酰氯制备实施例142-216的化合物。 在多种情况下，需要使用标准有机化学技术来对官能团进行操作得 到所需的化合物。经制备HPLC纯化后，通过使所得物质在氢氧化 钠水溶液和二氯甲烷间分配得到游离碱。用硫酸镁干燥有机层，随 后过滤并浓缩滤液得到所需产物。

实施例143：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-3-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.12min；MS：MH+ 530.2。

实施例144：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 3-基]-2-甲氧基苯基}苯甲酰胺乙酸盐 RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.20min；MS：MH+ 444.1。

实施例145：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-3-苯基丙酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.97min；MS：MH+ 472.2。

实施例146：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-3-环戊基丙酰胺二乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.95min；MS：MH+ 464.2。

实施例147：N5-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-1，3-二甲基-1H-5-吡唑甲酰胺二乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 11.62min；MS：MH+ 462.2。

实施例148：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-(2-噻吩基)乙酰胺二乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.17min；MS：MH+ 464.2。

实施例149：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-苯基乙酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.63min；MS：MH+ 458.2。

实施例150：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.20min；MS：MH+ 518.3。

实施例151：N1{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-苯氧基丙酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.43min；MS：MH 488.2。

实施例152：N5-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-5-异噁唑甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 10.93min；MS：MH+ 433.1。

实施例153：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- -2-甲氧基苯基}-2-吡啶甲酰胺三乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.52min；MS：MH+ 445.2。

实施例154：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2，4-二氟苯甲酰胺二乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.65min；MS：MH+ 480.1。

实施例155：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2，5-二氟苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.75min；MS：MH+ 480.2。

实施例156：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-糠酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.40min；MS：MH+ 434.2。

实施例157：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2，2-二甲基丙酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.53min；MS：MH+ 424.2。

实施例158：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-氰基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.68min；MS：MH+ 469.2。

实施例159：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-1-环丙烷甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 11.05min；MS：MH+ 408.2。

实施例160：N3-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-甲基烟酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 11.53min；MS：MH+ 459.1。

实施例161：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-氟-3-甲基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.32min；MS：MH+ 476.2。

实施例162：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-3-(二甲氨基)苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.63min；MS：MH+ 487.2。

实施例163：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2，3-二氟-4-甲基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.03min；MS：MH+ 494.2。

实施例164：N4-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}异烟酰胺二乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.77min；MS：MH+ 445.1。

实施例165：N3-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}烟酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.50min；MS：MH+ 445.1。

实施例166：N2-{-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吡咯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-50％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 22.20 min；MS：MH+ 447.2。

实施例167：N3-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-6-甲基烟酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.97min；MS：MH+ 459.2。

实施例168：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-吡嗪甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.63min；MS：MH+ 446.1。

实施例169：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-碘苯甲酰胺二乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.08min；MS：MH+ 570.1。

实施例170：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-溴苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.42min；MS：MH+ 524.1。

实施例171：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-苯氧基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.17min；MS：MH+ 536.2。

实施例172：N1-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基-4-氟苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.65min；MS：MH+ 462.1。

实施例173：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-氯苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.57min；MS：MH+ 478.2。

实施例174：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-甲氧基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.62min；MS：MH+ 474.2。

实施例175：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.30min；MS：MH+ 528.2。

实施例176：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-硝基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.77min；MS：MH+ 489.2。

实施例177：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}苯并[b]噻吩-2-甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.12min；MS：MH+ 500.2。

实施例178：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}苯并[b]呋喃-2-甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.70min；MS：MH+ 484.2。

实施例179：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-甲基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.47min；MS：MH+ 458.2。

实施例180：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-(叔丁基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.93min；MS：MH+ 500.2。

实施例181：4-{(4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯胺基}羰基)苯甲酸甲酯乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.70min；MS：MH+ 502.1。

实施例182：4-{(4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯胺基}羰基)苯甲酸

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 10.02min；MS：MH+ 478.1。

实施例183：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氯苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 7.28min；MS：MH+ 478.1。

实施例184：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-溴苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 7.42min；MS：MH+ 524.1。

实施例185：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-甲氧基苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 7.87min；MS：MH+ 474.2。

实施例186：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-苯基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 8.27min；MS：MH+ 520.2。

实施例187：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18　Hypersil HS C18，5μm，250　X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.07min；MS：MH+ 512.2。

实施例188：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-(三氟甲氧基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.77min；MS：MH+ 528.2。

实施例189：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-3-甲氧基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.43min；MS：MH+ 474.2。

实施例190：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-3-(三氟甲基)苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 8.15min；MS：MH+ 512.2。

实施例191：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟-3-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 8.50min；MS：MH+ 530.2。

实施例192：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟-6-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.30min；MS：MH+ 530.2。

实施例193：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟-5-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.68min；MS：MH+ 530.2。

实施例194：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟-5-甲基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.32min；MS：MH+ 476.2。

实施例195：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-氯-2-氟苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.50min；MS：MH+ 496.1。

实施例196：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-苯甲酰基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.33min；MS：MH+ 548.2。

实施例197：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-乙酰基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.77min；MS：MH+ 486.2。

实施例198：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-异丙基苯甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.10min；MS：MH+ 486.2。

实施例199：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-乙基苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.85min；MS：MH+ 472.2。

实施例200：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-丙基苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.02min；MS：MH+ 486.2。

实施例201：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-环己基苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 19.55min；MS：MH+ 526.2。

实施例202：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-乙氧基苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.28min；MS：MH+ 488.2。

实施例203：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-(甲基磺酰基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.01min；MS：MH+ 527.2。

实施例204：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-异丙氧基苯甲酰胺二乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.20min；MS：MH+ 502.2。

实施例205：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-4-(1H-1-咪唑基)苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.02min；MS：MH+ 510.2。

实施例206：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟苯甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.60min；MS：MH+ 462.3。

实施例207：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-5-甲氧基苯并[b]呋喃-2-甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 15.38min；MS：MH+ 514.3。

实施例208：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-5-溴苯并[b]呋喃-2-甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 17.03min；MS：MH+ 564.1。

实施例209：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-5-甲基苯并[b]呋喃-2-甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.27min；MS：MET 498.3。

实施例210：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-3-甲基苯并[b]呋喃-2-甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 16.67min；MS：MH+ 498.3。

实施例211：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 3-基]-2-甲氧基苯基}-5-硝基苯并[b]呋喃-2-甲酰胺

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr15. 33min；MS：MH+ 529.2.

实施例212：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-5-氨基苯并[b]呋喃-2-甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 11.93min；MS：MH+ 499.3。

实施例213：N2-{4-[4-(乙酰基氨基)-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-5-(乙酰基氨基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 12.47min；MS：MH+ 583.2。

实施例214：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-5-(乙酰基氨基)苯并[b]呋喃-2-甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 11.95min；MS：MH+ 541.2。

实施例215：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-7-甲基苯并[b]呋喃-2-甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 14.23min；MS：MH+ 498.3。

实施例216：N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-7-甲氧基苯并[b]呋喃-2-甲酰胺乙酸盐

RP-HPLC(Hypersil HS C18 Hypersil HS C18，5μm，250 X 4.6mm；在25分钟内用5％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)tr 13.03min；MS：MH+ 514.3。

实施例217：外消旋-N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.外消旋-3-羟基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯

往3-吡咯烷-1-醇(3.144g，3.00mL，36.09mmol)在1，4-二噁烷(50

mL)和水(50mL)的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(8.664g，39.70mmol) 和碳酸氢钠(10.612g，126.3mmol)。在室温下搅拌所得混合液18小 时得到在黄色溶液中的白色悬浮体。过滤所述反应混合液并将滤液 用乙酸乙酯(2 x 50mL)萃取。合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸 镁干燥，过滤并浓缩得到浅黄色油状的外消旋-3-羟基-1-吡咯烷甲酸 叔丁酯(6.039g，89％)。

                                                             1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 1.51(s，9H)，1.84-2.05(m，2H)，2.28(d，1H)，3.33-3.48 (m，4H)，4.43(s，1H).

B.外消旋-3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 单盐酸盐

往3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.610g，21.49mmol)的四氢 呋喃(200mL)溶液中加入外消旋-3-羟基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(6.039 g，32.25mmol)、三苯基膦(11.273g，42.98mmol)和偶氮二甲酸二乙 酯(7.485g，6.77mL，42.98mmol)。在室温下搅拌所述反应混合液6 天，随后浓缩得到橙棕色油状物。加入丙酮(100mL)和5N盐酸(50 mL)，将所得溶液在40℃下加热18h，随后冷至室温。将所得的黄 色沉淀物过滤，将滤饼用乙醚洗涤并干燥得到灰白色固体状的外消 旋-3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺单盐酸盐 (5.153g，65％)。RP-HPLC Rt 4.079分钟，99％纯度(5％至85％乙腈/0.1M 的乙酸铵水溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1mL/min；λ＝254nm； Deltapak C18，300，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 331(MH+)。

C.外消旋-3-碘-1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺

往外消旋-3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 单盐酸盐(0.400g，1.09mmol)的二氯乙烷(10mL)溶液中加入甲醛 (37％水溶液，0.12mL，1.63mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.578g，2.73 mmol)和乙酸(0.37mL，6.55mmol)。在室温下搅拌所述反应混合液3 天，随后加入另外的甲醛(37％水溶液，0.12mL，1.63mmol)、三乙酰 氧基硼氢化钠(0.578g，2.73mmol)和乙酸(0.37mL，6.55mmol)。再 搅拌所述反应混合液3h，随后浓缩得到浅黄色固体状的外消旋-3-碘 -1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯，基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.639g)，该 产物未经纯化直接用于随后的反应中。RP-HPLC Rt 4.226分钟，96％ 纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分 钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm D.N2-(4-溴苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

往4-溴苯胺(1.000g，5.813mmol)的二氯甲烷(50mL)的溶液中 加入1，1′-硫代羰基二-2-(1H)-吡啶酮(1.418g，6.104mmol)。在室温下 搅拌所得的紫色溶液30分钟，随后用水(50mL)和0.5N盐酸(50mL) 洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到紫色固体物。加入6-氨 基-2，4-二甲苯酚(0.837g，6.104mmol)和甲苯(50mL)，在80℃下加 热所得混合液30分钟。加入1，3-二环己基碳二亚胺(1.799g，8.720 mmol)，80℃下加热所述溶液48小时，随后冷至室温。过滤出所得 的沉淀物，滤饼用二氯甲烷(50mL)洗涤得到浅橙色固体状的N2-(4- 溴苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(1.215g，66％)。RP-HPLC Rt 17.643分钟，86％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲 至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18， 5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 317(MH+)。

E.N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基-5，7- 二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方法，由N2-(4-溴苯基)-5，7-二 甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(1.215g，3.831mmol)制备N2-[4-(4，4，5，5-四甲 基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 胺。形成了黄褐色粉末状的化合物(0.880g，63％)。RP-HPLC(25至100 ％CH3CN在0.1N的含水乙酸铵中的溶液，在10分钟内为1mL/min， 使用Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt＝14.48分钟，81％；m/z 365(MH+)。

F.外消旋-N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由外消旋-3-碘-1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(0.200g，0.581mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼 杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.265g，0.726 mmol)制备外消旋-N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成白色 粉末状的化合物(0.062g，23％)。

                     1H NMR(DMSO-d6，400MHz)2.39(s，3H)，2，32·2.40(m， 3H)，2.40(s，3H)，2.75-2.80(m，2H)，3.08(t，1H)，3.26(s，3H)，5.40(m，1H)， 6.80(s，1H)，7.11(s，1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2H)，8.24(s，1H)，10.85(s，1H)；

RP-HPLC Rt 10.905分钟，96％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 455(MH+)。

实施例218：外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡 咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.外消旋-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺

往外消旋-3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 单盐酸盐(0.350g，1.09mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加 入2-溴乙基甲基醚(0.159g，0.11mL，1.15mmol)、碳酸钾(0.462g，3.34 mmol)和碘化钾(0.008g，0.05mmol)。将所述反应混合液在65℃下搅 拌18小时，随后加入另外的2-溴乙基甲基醚(0.066g，0.040mL，0.48 mmol)、碳酸钾(0.130g，0.940mmol)和碘化钾(0.008g，0.05mmol)。 再搅拌所述反应混合液18小时，随后浓缩。使剩余物在二氯甲烷(10 mL)和水(10mL)间分配。分离出有机相，用盐水洗涤，用无水硫酸 镁干燥，过滤并浓缩得到黄色固体状的外消旋-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙 基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.313g，84％)，该 产物未经纯化直接用于随后的反应中。RP-HPLC Rt 5.089分钟，80％ 纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH4.5，在20分 钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm 柱)；m/z 389(MH+)。

B.外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由外消旋-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(0.250g，0.515mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.235 g，0.644mmol)制备外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢- 1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并 噁唑-2-胺。形成黄色粉末状的化合物(0.185g，72％)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)2.30-2.49(m，2H)， 2.41(s，3H)，2.49(s，3H)，2.66(m，2H)，2.78(m，2H)，3.17(m.2H)，3.24(s，3 H)，3.45(t，2H)，5.40(m，1H)，6.80(s，1H)，7.11(s，1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2 H)，8.24(s，1H)，10.85(s，1H)；

RP-HPLC Rt 11.477分钟，96％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 499(MH+)。

实施例219：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.N2-(4-溴-2-氟苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备N2-(4-溴苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类 似方法，由4-溴-2-氟苯胺(2.000g，10.53mmol)制备N2-(4-溴-2-氟苯 基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成粉红色固体状的化合物(1.916 g，54％)。RP-HPLC Rt 17.96分钟，95％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的 乙酸铵水溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm； Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 337(MH+)。

B.N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方法，由N2-(4-溴-2-氟苯基)- 5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(6.500g，19.39mmol)制备N2-[2-氟-4- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯 并噁唑-2-胺。形成粉红色固体状的化合物(3.549g，48％)。RP-HPLC(25 至100％CH3CN在0.1N含水乙酸铵中的溶液，在10分钟内为1 mL/min，使用Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt＝15.50分钟，78％； m/z 383(MH+)。

C.顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由顺式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(0.200g，0.453mmol)和N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧 杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.216g，0.566

mmol)制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺。形成 浅黄色粉末状的化合物(0.111g，43％)。

                          1H NMR(DMSO-d6，400MHz)1.56-1.83(m，4H)， 2.15(s，3H)，2.22-2.55(m，12H)，2.34(s，3H)，2.41(s，3H)，3.22-3.53(m，1H)， 4.78-4.83(m，1H)，6.81(s，1H)，7.10(s，1H)，7.45-7.53(m，2H)，8.23(s，1H)， 8.49(t，1H)，10.59(s，1H)；

RP-HPLC Rt 11.873分钟，95％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 570(MH+)。

实施例220：顺式-3-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪 -1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

A.2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]咪唑 并[1，2-a]吡啶

按照制备N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方法，由2-(4-溴苯基)咪唑并 [1，2-a]吡啶(0.273g，1.00mmol)制备2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧 杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]咪唑并[1，2-a]吡啶。形成白色固体状的化合 物(0.250g，78％)。RP-HPLC(25至100％ CH3CN的0.1N乙酸铵水 溶液，在10分钟内为1mL/min，使用Hypersil HS C18，250 x 4.6mm 柱)Rt＝11.35分钟，87％；m/z 321(MH+)。

B.顺式-3-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基) 环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由顺式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(0.200g，0.453mmol)和2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼 杂环戊烷-2-基)苯基]咪唑并[1，2-a]吡啶(0.250g，0.679mmol)制备顺 式-3-(4-咪唑并[1，2-a]吡啶-2-基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。形成白色粉末状的化合物(0.021g，9％)。

   1H NMR(DMSO-d6，400MHz)1.57-1.73(m，4H)，2.08-2.50(m，12H)，2.16 (s，3H)，3.37(m，1H)，4.82(m，1H)，6.92(t，1H)，7.27(t，1H)，7.61(d，1H)，7.74 (d，2H)，8.15(d，2H)，8.24(s，1H)，8.56(d，1H)；

RP-HPLC Rt 8.16分钟，97％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶 液，缓冲至pH4.5，在20分钟内用1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18， 5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 508(MH+)。

实施例221：外消旋-1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-2-(二甲 氨基)-1-乙酮

A.外消旋-1-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢- 1H-1-吡咯基]-2-(二甲氨基)-1-乙酮

往外消旋-3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 单盐酸盐(0.367g，1.00mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入2-(二甲 氨基)乙酸(0.134g，1.30mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.150g，1.10 mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.249g，1.30mmol) 和二异丙基乙胺(0.65g，0.87mL，5.0mmol)。室温下搅拌所述反应 混合液18小时，随后倒入水(10mL)中。分离出有机相，用盐水洗涤 (10mL)，用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到黄橙色固体状的外消 旋-1-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]- 2-(二甲氨基)-1-乙酮(0.278g，67％)，该产物未经纯化直接用于随后 的反应中。RP-HPLC Rt 4.881分钟，80％纯度(5％至85％乙腈/0.1M 的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm； Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 416(MH+)。

B.外消旋-1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-2-(二甲氨 基)-1-乙酮

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由外消旋-1-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H- 1-吡咯基]-2-(二甲氨基)-1-乙酮(0.278g，0.669mmol)和N2-[4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑- 2-胺(0.305g，0.837mmol)制备外消旋-1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基- 1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1- 吡咯基]-2-(二甲氨基)-1-乙酮。形成白色粉末状的化合物(0.219g， 62％)。

    1H NMR(DMSO-d6，400MHz)2.17(s，3H)，2.23(s，3H)，2.3-2.50(m，4 H)，2.34(s，3H)，2.40(s，3H)，2.99-4.26(m，4H)，5.44-5.49(m，1H)，6.80(s，1H)， 7.11(s，1H)，7.65(d，2H)，7.92(d，2H)，8.26(s，1H)，10.86(s，1H)；

RP-HPLC Rt 10.765分钟，96％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 526(MH+)。

实施例222：外消旋-1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-2-甲基- 2-(甲基氨基)-1-丙酮

A.外消旋-N-{2-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢 -1H-1-吡咯基]-1，1-二甲基-2-氧代乙基}-N-甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲 酯

往外消旋-3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 单盐酸盐(0.100g，0.273mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入2-[[(9H- 9-芴基甲氧基)羰基](甲基)氨基]-2-甲基丙酸(0.120g，0.354mmol)、1- 羟基-7-氮杂苯并三唑(0.041g，0.30mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐(0.068g，0.35mmol)和二异丙基乙胺(0.18g，0.24 mL，1.4mmol)。在室温下搅拌所述反应混合液5小时，随后倒入水(10 mL)中。分离出有机相，用盐水洗涤(10mL)，用无水硫酸镁干燥， 过滤并浓缩得到黄色固体状的外消旋-N-{2-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-1，1-二甲基-2-氧代乙基}-N-甲 基氨基甲酸9H-9-芴基甲酯(0.223g)，该产物未经纯化直接用于随后 的反应中。RP-HPLC Rt 13.688分钟，63％纯度(5％至85％乙腈/0.1M 的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm； Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 652(MH+)。

B.外消旋-1-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-2-甲基-2-(甲 基氨基)-1-丙酮

往外消旋-N-{2-[3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢- 1H-1-吡咯基]-1，1-二甲基-2-氧代乙基}-N-甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲 酯(0.178g，0.273mmol)在乙二醇二甲醚(6mL)和水(3mL)的溶液中 加入N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5，7-二 甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.124g，0.341mmol)、四(三苯基膦)合钯 (0)(0.016g，0.014mmol)和碳酸钠(0.072g，0.683mmol)。在80℃下 加热所述溶液18小时，随后冷至室温。使所述反应混合液在乙酸乙 酯(10mL)和水(10mL)间分配。分离出有机层，用盐水洗涤(10mL)， 用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到浅棕色油状的外消旋-N-2-[3-(4- 氨基-3-4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-1，1-二甲基-2-氧代乙基-N-甲基氨基甲酸 9H-9-芴基甲酯(0.223g)，该产物未经纯化直接用于下一步骤中。

将外消旋-N-2-[3-(4-氨基-3-4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-1，1-二甲基-2- 氧代乙基-N-甲基氨基甲酸9H-9-芴基甲酯(0.223g)的N，N-二甲基甲酰 胺(4mL)溶液用哌啶(0.8mL)处理，在室温下搅拌所述反应混合液18 小时。使绿色溶液在二氯甲烷(10mL)和水(10mL)间分配。分离出有 机相，用盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到深绿色油 状物。经制备RP-HPLC(25至100％CH3CN的0.1N乙酸铵水溶液， 在20分钟内为21mL/min，使用8μm Hypersil HS C18，250 x 21mm 柱，Rt＝6.7-8.1min)纯化得到灰白色固体状的外消旋-1-[3-(4-氨基-3- {4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 1-基)四氢-1H-1-吡咯基]-2-甲基-2-(甲基氨基)-1-丙酮(0.085g，58％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)主要旋转异构体：1.20(s，6H)，1.96(s，3H)，2.3-2.50(m， 3H)，2.34(s，3H)，2.40(s，3H)，3.17-4.44(m，4H)，5.42(s，1H)，6.80(s，1H)， 7.11(s，1H)，7.63(d，2H)，7.91(d，2H)，8.26(s，1H)，10.85(s，1H)；次要旋转异构体：

1.15(s，6H)，2.15(s，3H)，2.3-2.50(m，3H)，2.34(s，3H)，2.40(s，3H)， 3.17-4.44(m，4H)，5.42(s，1H)，6.80(s，1H)，7.11(s，1H)，7.63(d，2H)，7.91(d，2 H)，8.26(s，1H)，10.85(s，1H)；

RP-HPLC Rt 10.994分钟，95％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 540(MH+)。

实施例223：外消旋-N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.外消旋-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡咯烷 甲酸叔丁酯

在室温下搅拌外消旋-3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺单盐酸盐(0.500g，1.36mmol)、碳酸氢钠(0.401g，4.77mmol) 和二碳酸二叔丁酯(0.327g，1.50mmol)在1，4二噁烷(8mL)和水(8mL) 中的溶液3小时。将所得的灰白色悬浮液过滤，滤饼用水(10mL)洗 涤，干燥得到灰白色固体状的外消旋-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-1-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(0.412g，70％)。RP-HPLC Rt 11.540 分钟，100％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm， 150 x 3.9mm柱)；m/z 431(MH+)。

B.外消旋-N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基)苯基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

往外消旋-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡咯烷甲 酸叔丁酯(0.412g，0.958mmol)在乙二醇二甲醚(6mL)和水(3mL)中 的溶液内加入N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.436g，1.20mmol)、四(三苯基膦) 合钯(0)(0.055g，0.048mmol)和碳酸钠(0.254g，2.39mmol)。在80℃ 下加热所述溶液18小时，随后冷至室温。使所述反应混合液在乙酸 乙酯(10mL)和水(10mL)间分配。分离出有机层，用盐水洗涤(10mL)， 用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到橙色固体状的外消旋-3-(4-氨基- 3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁基酯(1.029g)，该产物未经纯化直接用于 下一步骤中。

往外消旋-3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(1.029g)的丙酮 (10mL)溶液中加入6N盐酸(10mL)，在45℃下搅拌所述反应混合液 5小时。将所述反应混合液过滤，浓缩所得的不透明滤液得到橙色固 体物。经制备RP-HPLC(25至100％CH3CN在0.1N含水乙酸铵中的 溶液，在20分钟内为21mL/min，使用8μm Hypersil HS C18，250 x 21 mm柱，tr＝6.2-7.5min)纯化得到灰白色固体状的外消旋-N2-[4-(4-氨 基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)苯基]-5，7-二甲基- 1，3-苯并噁唑-2-胺(0.148g，35％)。

                           1H NMR(DMSO-d6，400MHz)2.15-2.22(m，2H)， 2.40(s，3H)，2.50(s，3H)，2.93-4.04(m，5H)，5.31(m，1H)，6.79(s，1H)，7.11(s， 1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2H)，8.24(s，1H)，10.85(s，1H)；

RP-HPLC Rt 10.603分钟，99％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 441(MH+)。

实施例224：顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-异丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺二乙酸盐

A.2-氨基-6-异丙基苯酚

在80℃下搅拌6-异丙基-2-硝基苯酚(3.000g，16.56mmol)和连 二亚硫酸钠(11.53g，66.23mmol)在乙醇(180mL)和水(90mL)中的溶 液20小时，随后冷至室温。浓缩所得的橙色溶液，随后在二氯甲烷(50 mL)和水(50mL)间分配。分离出有机相，用盐水洗涤(25mL)，用无 水硫酸镁干燥，过滤并浓缩得到橙色固体状的2-氨基-6-异丙基苯酚 (1.792g，72％)。RP-HPLC Rt 8.171分钟，92％纯度(5％至85％乙腈 /0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254 nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 150(M-H)-。

B.N2-(4-溴苯基)-7-异丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺

在室温下搅拌2-氨基-6-异丙基苯酚(0.354g，2.34mmol)和4-溴 苯基异硫氰酸酯(0.500g，2.34mmol)的四氢呋喃(35mL)溶液3小时。 加入无水硫酸铜(II)(3.361g，21.06mmol)、硅胶(3.361g)和三乙胺 (0.236g，0.33mL，2.34mmol)，在室温下搅拌所得混合液18小时。 经Celite滤垫过滤所述反应混合液，用乙醚(3 x 50mL)洗涤。浓缩滤 液得到棕色固体物。将所述固体物施加至硅胶上，并与乙酸乙酯(3x 50mL)一起经硅胶滤垫过滤。浓缩滤液得到N2-(4-溴苯基)-7-异丙基- 1，3-苯并噁唑-2-胺(0.702g，91％)。RP-HPLC Rt 18.066分钟，86％ 纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH4.5，在20分 钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm 柱)；m/z 333(MH+)。

C.N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-7 异丙基-1，3-苯并嘧唑-2-胺

按照制备N2-[2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方法，由N2-(4-溴苯基)-7-异 丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.412g，1.24mmol)制备N2-[4-(4，4，5，5-四甲 基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-7-异丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺。 形成灰白色固体状的化合物(0.346g，74％)。RP-HPLC Rt 18.964分 钟，79％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水溶液，缓冲至pH4.5， 在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 379(MH+)。

D.顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-异丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺二乙酸盐

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由顺式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(0.250g，0.566mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼 杂环戊烷-2-基)苯基]-7-异丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.339g，0.708mmol) 制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-异丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺二乙酸盐。形成 灰白色固体状的化合物(0.205g，64％)。

                 1H NMR(DMSO-d6，400MHz)1.36(d，6H)，1.56-2.50(m， 16H)，1.90(6H)，2.15(s，3H)，3.23-3.28(m，2H)，4.80(m，1H)，7.04(d，1H)， 7.18(t，1H)，7.34(d，1H)，7.66(d，2H)，7.96(d，2H)，8.24(s，1H)；

RP-HPLC Rt 12.508分钟，100％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵 水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 566(MH+)。

实施例225：N2-(4-{4-氨基-1-[(3S)-1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺单 乙酸盐

按照制备外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3- 吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 胺所用的类似方法，由(R)-(+)-3-吡咯烷-1-醇制备N2-(4-{4-氨基-1- [(3S)-1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基} 苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺单乙酸盐。形成粉红色固体状的 化合物(0.103g，53％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)1.89(s，3H)，2.28-2.31(m，2H)，2.35(s，3H)，2.40(s， 3H)，2.65(t，2H)，2.73-2.87(m，2H)，3.17(t，2H)，3.24(s，3H)，3.45(t，2H)，5.37 (m，1H)，6.79(s，1H)，7.11(s，1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2H)，8.24(s，1H)，10.59 (s，2H)；

RP-HPLC Rt 11.607分钟，95％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 499(MH+)。

实施例226：外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡 咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺单 乙酸盐

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由外消旋-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.319mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.145g， 0.399mmol)制备外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H- 3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2- 胺单乙酸盐。形成白色固体状的化合物(0.082g，52％)。

                                   1HNMR(DMSO-d6，400MHz)1.23(t，3 H)，1.90(s，3H)，2.33-3.47(m，10H)，2.66(q，2H)，3.25(s，3H)，5.40(m，1H)， 6.99(d，1H)，7.33(s，1H)，7.40(d，1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2H)，8.25(s，1H)， 10.81(s，1H)；

RP-HPLC Rt 11.781分钟，93％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 499(MH+)。

实施例228：外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡 咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺单 乙酸盐

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由外消旋-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.319mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.145g， 0.399mmol)制备外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H- 3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基-5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-胺 单乙酸盐。形成灰白色固体状的化合物(0.038g，16％)。

                                        1H NMR(DMSO-d6，400MHz)1.91 (s，3H)，2.33(m，2H)，2.39(s，3H)，2.66(m，2H)，2.75-2.83(m，3H)，3.17(t，1H)， 3.29(s，3H)，3.45(t，2H)，5.37(m，1H)，6.96(d，1H)，7.30(s，1H)，7.38(d，1H)， 7.67(d，2H)，7.93(d，2H)，8.24(s，1H)，10.80(s，1H)；

RP-HPLC Rt 10.756分钟，100％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵 水溶液，缓冲至pH4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 485(MH+)。

实施例229：N2-(4-{4-氨基-1-[(3R)-1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺二 乙酸盐

按照制备外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3- 吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 胺所用的类似方法，由(S)-(-)-3-吡咯烷-1-醇制备N2-(4-{4-氨基-1- [(3R)-1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基} 苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺二乙酸盐。形成灰白色固体状的 化合物(0.214g，39％)。

                                                             1H NMR (DMSO-d6，400MHz)1.89(s，6H)，2.28-2.31(m，2H)，2.35(s，3H)，2.40(s，3H)， 2.65(t，2H)，2.73-2.87(m，2H)，3.17(t，2H)，3.24(s，3H)，3.45(t，2H)，5.37(m，1 H)，6.79(s，1H)，7.11(s，1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2H)，8.24(s，1H)；

RP-HPLC Rt 11.674分钟，97％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内用1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 499(MH+)。

实施例230：外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡 咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺单乙 酸盐

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由外消旋-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.319mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.148g，0.399 mmol)制备外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5-氯-1，3-苯并噁唑-2-胺单乙酸 盐。形成灰白色固体状的化合物(0.080g，50％)。

                                        1H NMR(DMSO-d6，400MHz)1.91 (s，3H)，2.33(m，2H)，2.66(m，2H)，2.75-2.85(m，3H)，3.17(t，1H)，3.24(s，3H)， 3.45(t，2H)，5.37(m，1H)，7.18(d，1H)，7.55(d，2H)，7.68(d，2H)，7.92(d，2H)， 8.24(s，1H)，9.80(s，1H)；

RP-HPLC Rt 11.337分钟，97％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵 水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 505(MH+)。

实施例231：反式-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺

0℃下，将反式-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基) 环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.700g，1.6mmol)的吡啶(11mL) 溶液用氢化肉桂酰氯(0.324g，1.92mmol)处理。0℃搅拌所述反应混 合液20分钟，除去冰浴，在室温下搅拌。5.5小时后完成反应。加 入氢氧化钠溶液(1N，20mL)，搅拌30分钟。减压除去有机层。加 入二氯甲烷(20mL)使发生层分离。水层用二氯甲烷(80mL)萃取。合 并的有机层用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。粗产物经 快速硅胶柱层析(使用梯度溶液：5％甲醇的二氯甲烷溶液至50％甲醇 的二氯甲烷溶液，35g ISCO硅胶柱)纯化得到0.569g(63％)反式-N1- (4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基丙酰胺。将反式-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-3-苯基 丙酰胺(0.569g，1mmol)在热乙酸乙酯中的溶液用热马来酸(0.384g， 3mmol)的乙酸乙酯溶液处理。在氮气气氛中，将形成的沉淀物过滤 并高真空干燥得到三马来酸盐。

                                          1H NMR(d6-DMSO)δ 9.238(s， 1H)，8.2216(s，1H)，8.1991-8.1786(d，1H，J＝8.2Hz)，7.3147-7.2664(m，4H)， 7.2366-7.2330(m，1H)，7.2026-7.1732(dd，2H)，6.171(s，6H)，4.6649-4.6083(m， 1H)，4.0948-4.0697(m，1H)，3.8916(s，3H)，3.1750-3.1632(d，2H，J＝4.72Hz)， 2.9364-2.8984(m，2H)，2.7885-2.7506(m，2H)，2.5290(s，2H)，2.3905-2.3231(m， 4H)，2.1489(s，3H)，2.0549-1.9243(m，6H)，1.4821-1.4457(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，3μm粒径， 33 x 4.6mm；在6分钟内用70％50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈， 0.8至0.5mL/min)Rt 1.75分钟(100％)，M+ 569.4。

实施例232：反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐 (0.200g，0.242mmol)在二氯甲烷(15mL)中的悬浮液用1N氢氧化钠 溶液处理。室温下搅拌所述反应混合液1小时。使用Empore萃取柱 使各层分离，通过在溶剂顶部通入氮气除去有机层得到0.072g(50％) 反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                                                  1H NMR(d6-DMSO) δ 9.4355(s，1H)，8.2464(s，1H)，8.1241-8.1037(d，1H，J＝8.16Hz)，7.7186-7.6987 (d，1H，J＝7.96Hz)，7.6005-7.5795(d，1H，J＝8.4Hz)，7.3532-7.2795(m，4H)， 7.1717-7.1343(t，1H)，4.6833(m，1H)，4.0560(s，3H)，3.9573(s，3H)，2.6704(m， 6H)，2.4404(m，2H)，2.2953(s，6H)，2.1282-1.9889(m，5H)，1.5124(m，2H).

所得化合物未经纯化直接用于随后的反应中。

实施例233：反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二甲 磺酸盐

将热的反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.072 g，0.12mmol)的乙酸乙酯(20mL)溶液用甲磺酸(0.012g，0.12mmol) 处理。缓慢形成沉淀，在氮气气氛中过滤得到0.051g反式-N2-(4-{4- 氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲 氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二甲磺酸盐。测得熔点范围为 345.5至348.1℃。

                                                           1H NMR(d6- DMSO)6 9.4353(s，1H)，8.2461(s，1H)，8.1239-8.1035(d，1H，J＝8.16Hz)， 7.7182-7.6985(d，1H，J＝7.88Hz)，7.6004-7.5792(d，1H，J＝8.48Hz)，7.3442- 7.2794(m，4H)，7.1718-7.1349(t，1H)，4.6829(m，1H)，4.0396(s，3H)，3.9570(s， 3H)，2.6703(m，6H)，2.5(s，3H)，2.2949(s，6H)，2.0891-2.9086(m，7H)，1.5179 (m，2H).

实施例234：3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺

A.3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(500mg，1.45 mmol)、甲醛(30％的水溶液，0.16mL，1.60mmol)和三乙酰氧基硼氢 化钠(430mg，2.03mmol)在1，2-二氯乙烷(5mL)中混合。在室温下搅 拌所述反应混合液4小时。加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至约8。 分离各层，水层用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫 酸镁干燥，过滤并蒸发得到3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-4-胺(275mg，53％)。1H NMR(DMSO-d6)δ 1.85(m，2H)， 2.09(m，4H)，2.22(s，3H)，2.88(m，2H)，4.75(m，1H)，8.19(s，1H)， 8.32(s，1H)。LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC- 柱：Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+ 359.0，Rt＝0.46分钟。

B.N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁酯

将3-碘-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(270 mg，0.754mmol)、N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环 戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(290mg，0.829mmol)、四(三苯基膦) 合钯(52mg，0.045mmol)和碳酸钠(192mg，1.81mmol)在乙二醇二 甲醚(8mL)和水(4mL)中混合。在氮气气氛中将所述反应混合液加热 回流过夜。减压除去有机溶剂，水层用二氯甲烷萃取。将合并的有 机层依次用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。剩余物经 快速柱层析纯化，使用二氯甲烷/甲醇(90:10至70:30)为流动相得到 N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧 基苯基}氨基甲酸叔丁酯(250mg，73％)。

                                                        1H NMR(DMSO- d6)δ 1.48(s，9H)，1.88(m，2H)，2.10(m，2H)，2.24(m，5H)，2.92(m，2H)，3.69(s， 3H)，4.64(m，1H)，7.21(m，2H)，7.91(d，J＝8.16Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.23(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝454.2，Rt＝1.67分钟。

C.3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺

0℃下往N-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 3-基]-2-甲氧基苯基}氨基甲酸叔丁酯(240mg，0.529mmol)的二氯甲 烷(4mL)溶液中加入三氟乙酸/二氯甲烷(20:80，7mL)混合液。15分钟 后，除去冰浴，在室温下搅拌所述反应混合液4小时。蒸发出溶剂， 将剩余物溶解在二氯甲烷中。加入氢氧化钠(1.0N)调节pH至约10。 分离各层，水层用二氯甲烷萃取四次。合并的有机层用盐水洗涤， 用硫酸镁干燥，过滤并蒸发得到3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(1-甲基-4- 哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(178mg，95％)。HPLC(Waters 486- 柱：delta pak，C18，5μm，150 x 3.9mm。洗脱液：10分钟内 用5％B/A至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，1.0 mL/分钟)Rt＝6.45分钟。

实施例235：N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反式-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺

0℃下，往3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(60mg，0.17mmol)的吡啶(1.2mL)溶液中加入 反式-2-苯基-1-环丙烷甲酰氯(31mg，0.170mmol)的二氯甲烷(0.3mL) 溶液。5分钟后，移去冰浴，在室温下搅拌所述反应混合液1小时， 随后再加入反式-2苯基-1-环丙烷甲酰氯(15mg，0.083mmol)。2小 时后，蒸发除去溶剂，剩余物经快速柱层析纯化(使用二氯甲烷/甲醇 (95∶5至70∶30)为流动相)得到N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-反式-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺 (75mg，89％)。1H NMR(CDCl3)δ 1.42(m，1H)，1.77(m，1H)，1.85(m，1H)，2.03(m，1H)，2.24(m， 2H)，2.37(s，3H)，2.46(m，2H)，2.62(m，1H)，3.05(m，2H)，3.96(s，3H)，4.77(m， 1H)，5.69(s，2H)，7.24(m，7H)，8.11(s，1H)，8.35(m，1H)，8.45(d，J＝8.38Hz，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝498.3，Rt＝1.84分钟。

实施例236：N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

0℃下，往3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺(60mg，0.17mmol)的吡啶(1.2mL)溶液中加入4-(三 氟甲基)-1-苯甲酰氯(35mg，0.170mmol)的二氯甲烷(0.3mL)溶液。5 分钟后，移去冰水浴，在室温下搅拌所述反应混合液1小时，随后 再加入4-(三氟甲基)-1-苯甲酰氯(18mg，0.086mmol)。2小时后，蒸 发除去溶剂，剩余物经快速柱层析纯化，使用二氯甲烷/甲醇(95:5至 70∶30)为流动相得到N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(85mg， 95％)。

                                                        1H NMR(CDCl3) δ 2.10(m，2H)，2.37-2.59(m，7H)，3.15(m，2H)，4.02(s，3H)，4.83(m，1H)，5.68(s， 2H)，7.34(m，2H)，7.80(d，J＝8.21Hz，2H)，8.04(d，J＝8.10Hz，2H)，8.38(s，1H)， 8.67(m，2H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝526.3，Rt＝1.93分钟。

实施例237：N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺

0℃下，往3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺(60mg，0.17mmol)的吡啶(1.2mL)溶液中加入4-(三 氟甲氧基)-1-苯甲酰氯(38mg，0.170mmol)的二氯甲烷(0.3mL)溶液。 5分钟后，移去冰水浴，在室温下搅拌所述反应混合液1小时，随后 再加入4-(三氟甲基)-1-苯甲酰氯(19mg，0.085mmol)。2小时后，蒸 发除去溶剂，剩余物经快速柱层析纯化，使用二氯甲烷/甲醇(95∶5至 70:30)为流动相得到N1-{4-[4-氨基-1-(1-甲基-4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(70mg， 76％)。

1H NMR(CDCl3)δ 2.06(d，J＝11.79Hz，2H)，2.28(m，2H)，2.40(s，3H)，2.50(m， 2H)，3.07(d，J＝10.8Hz，2H)，4.02(s，3H)，4.80(m，1H)，5.71(s，2H)，7.27(m，2H)， 7.36(d，J＝8.20Hz，2H)，7.98(d，J＝6.20Hz，2H)，8.37(s，1H)，8.59(s，1)，8.67(d， J＝8.55Hz，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝542.3，Rt＝1.98分钟。

实施例238：顺式-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-3-[4-(1，3-噁唑-5-基) 苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

A.4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}苯甲醛

将顺式-3-甲基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(3.0g，6.80mmol)、4-甲酰基苯基硼酸(1.22g，8.16mmol)、 四(三苯基膦)合钯(0.47g，0.41mmol)和碳酸钠(1.73g，16.31mmol) 在乙二醇二甲醚(70mL)和水(35mL)中混合。在氮气气氛中将所述反 应混合液加热回流过夜。减压除去有机溶剂，将水层过滤并用水洗 涤。在冷冻干燥器中干燥后，剩余物经快速柱层析纯化，使用二氯 甲烷/甲醇(90:10至70:30)为流动相得到4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1- 基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲醛(1.55g，54％)。

             1H NMR(DMSO-d6)δ 1.60(m，2H)，1.72(m，2H).2.07(m，2H)， 2.15(s，3H)，2.22-2.46(m，11H)，4.83(m，1H)，7.88(d，J＝8.13Hz，2H)，8.07(d， J＝8.10Hz，2H)，8.21(s，1H)，10.11(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM的乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/ 分钟)：MH+＝420.2，Rt＝0.70分钟。

B.顺式-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-3-[4-(1，3-噁唑-5-基)苯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

往4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}苯甲醛(300mg，0.715mmol)的甲醇(20rnL)混合液中分次加 入甲醇钠(130mg，2.41mmol)。5分钟后，分次加入(对甲苯磺酰基) 甲基胩(tosmic)(167mg，0.858mmol)。加热回流所述溶液5小时。在 溶液仍为热溶液时加入水(10mL)。在冰浴中冷却5分钟后，过滤出 固体物并用甲醇/水(50/50，2mL)混合液洗涤，随后干燥。蒸发滤液以 除去有机溶剂，收集固体物，用水洗涤。首先将合并的固体物经快 速柱层析纯化，使用二氯甲烷/甲醇(90:10至70:30)为流动相。接着 从DMF中重结晶两次得到顺式-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-3-[4- (1，3-噁唑-5-基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(90mg，27％)。

                                                         1H NMR (DMSO-d6)δ 1.61(m，2H)，1.71(m，2H)，2.10(m，2H)，2.15(s，3H)，2.44(m，11H)， 4.82(m，1H)，7.78(m，3H)，7.79(m，2H)，8.24(s，1H)，8.51(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝459.2，Rt＝0.72分钟。

实施例239：反式-N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟-2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰 胺

往反式-3-(4-氨基-2-氟-5-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(80mg，0.176mmol)的吡啶(1.5mL) 溶液中加入2，2-二甲基-3-苯基丙酰氯(52mg，0.264mmol)。5小时后， 蒸发除去溶剂，首先将剩余物经快速柱层析纯化(使用二氯甲烷/甲醇 (95:5至85:15)为流动相)，接着经制备性LC/MS得到反式-N1-(4-{4- 氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-5-氟 -2-甲氧基苯基)-2，2-二甲基-3-苯基丙酰胺(22mg，19％)。

                               1H NMR(CDCl3-d)δ 1.33(s，6H)，1.57(m， 2H)，1.92(m，2H)，2.15(m，6H)，2.30(s，3H)，2.49(m，4H)，2.66(m，3H)，2.95(s， 2H)，3.84(s，3H)，4.76(m，1H)，5.51(bs，2H)，6.98(d，J＝6.86Hz，1H)，7.15(m，2H)， 7.23(m，3H)，8.01(s，1H)，8.35(s，1H)，8.47(d，J＝11.88，1H).

LCMS LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝615.3，Rt＝2.18分钟。

实施例240：顺式-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲醇

A.1H-苯并[d]咪唑-1-基甲醇

往1H-苯并[d]咪唑(1.57g，13.3mmol)的THF(60ml)溶液中加入 甲醛(37％的水溶液，1mL，13.3mmol)。10分钟后，除去溶剂并干燥 得到棕色固体状的1H-苯并[d]咪唑-1-基甲醇，该产物未经任何纯化 直接使用。1H NMR(DMSO-d6)δ 5.60(d，J＝7.09Hz，2H)，6.70(m，1H)， 7.25(m，2H)，7.65(d，J＝9.13Hz，2H)，8.26(s，1H)。

B.顺式-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲醇

-78℃下，将N-丁基锂(1.34M，3.0mL，4mmol)缓慢加入1H-苯 并[d]咪唑-1-基甲醇(296mg，2.0mmol)在THF(9.0mL)的混合液中。 将所述反应混合液温热升温至-20℃并在-20℃下保持30分钟，随后 再次冷却至-78℃。缓慢加入顺式-4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯甲醛(420mg，1mmol)的THF(5 mL)溶液。20分钟后，移去干冰浴，在室温下搅拌所述反应混合液 过夜。依次加入饱和氯化铵溶液和乙醚。分离各层，水层用氢氧化 钠(1.0N)中和，用二氯甲烷萃取。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥， 过滤并蒸发。剩余物首先经快速柱层析纯化，使用二氯甲烷/甲醇(95:5 至85:15)为流动相，接着经反相制备HPLC(RaininHPLC，柱： Thermoquest，hyperprep HS C18，8μm，250 x 21.2mm。洗脱液：在25 分钟内用5％B/A至100％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/分钟)纯化得到顺式-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)(1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲醇(2 mg，0.4％)。1H NMR(CDCl3)δ 1.68(m，2H)，1.81(m，2H)，2.01(m，2H)，2.13(m，2H)，2.33(s， 3H)，2.42(m，2H)，2.64(m，7H)，4.68(bs，3H)，4.93(m，1H)，5.77(bs，2H)，6.06(s， 1H)，7.20(m，2H)，7.52(m，2H)，7.58(m，4H)，8.32(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝538.3，Rt＝3.80分钟。

实施例241-252

使用以下方法，由4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-1-基]苯甲醛制备实施例241-252的化合物：

将4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]苯甲 醛(50mg，0.123mmol)、适当的胺(0.246mmol)、三乙酰氧基硼氢化 钠(78mg，0.368mmol)和冰醋酸(32mg，0.540mmol)在THF(3mL)中 混合。在室温下摇荡后，在J-Kem摇荡器上摇荡过夜，再加入更多 量的所述胺(0.246mmol)，三乙酰氧基硼氢化钠(78mg，0.368mmol) 和冰醋酸(32mg，0.540mmol)，在室温下摇荡所述反应液过夜。蒸 发除去溶剂，依次加入二氯甲烷和氢氧化钠(1.0N)。经Empore萃取 柱分离各层。蒸发有机层，剩余物经反相制备LC/MS(Micromass-柱： Hypersil BDS，C18，5μm，100 x 21.2mm.洗脱液：在7分钟内用15％B/A 至100％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，PH 4.5)，25mL/ 分钟)纯化。除去溶剂后，将所得固体物溶于二氯甲烷/氢氧化钠(1.0N) 的混合液中。分离各层，蒸发有机层得到相应的产物，详见下表。

实施例253：N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二马来酸盐

将N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(380mg，0.717mmol)溶于热 乙酸乙酯(70mL)中，加入马来酸(167mg，1.435mmol)在热乙酸乙酯 (3mL)中的溶液。在室温下搅拌所述反应混合液3小时。过滤收集固 体物得到N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二马来酸盐(489mg，90％)。

                                                            1H NMR (DMSO-d6)δ 2.15(m，2H)，2.41(m，2H)，3.23(m，2H)，3.94(s，3H)，5.09(m，1H)， 6.14(m，s，4H)，7.33(m，2H)，7.76(m，1H)，7.88(m，1H)，7.99(m，1H)，8.28(s， 1H)，8.33(m，2H)，8.70(bs，1H)，9.92(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8ml/min)： MH+＝530.2，Rt＝2.03分钟。

中间体6：N1-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

A.4-[4-氨基-3-(4-[2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基-3-甲氧基苯 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯

0℃下，往4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(8.77g，20.0mmol)的吡啶(50mL)溶液 中加入2-氟-4-(三氟甲基)-1-苯甲酰氯(3.05mL，20.2mmol)的二氯甲 烷(25mL)溶液。5分钟后，移去冰水浴，在室温下搅拌所述反应混 合液1小时。加入2-氟-4-(三氟甲基)-1-苯甲酰氯(0.5mL，3.31mmol)， 再搅拌反应混合液30分钟。蒸发除去溶剂，将剩余物溶解在二氯甲 烷中。有机层用水和盐水洗涤，随后用硫酸镁干燥。蒸发除去溶剂， 剩余物经快速柱层析纯化，使用乙酸乙酯/二氯甲烷(80∶20至100∶0) 为流动相得到4-[4-氨基-3-(4-[2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基-3-甲 氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(11.2g， 89％)。

                                     1H NMR(CDCl3-d)δ 1.48(s，9H)，2.04 (m，2H)，2.30(m，2H)，2.98(m，2H)，4.05(s，3H)，4.32(m，2H)，4.95(m，1H)，5.89 (bs，2H)，7.33(m，2H)，7.51(d，J＝11.62Hz，1H)，7.61(d，J＝8.21Hz，1H)，8.36(m， 2H)，8.72(d，J＝8.18Hz，1H)，9.32(d，J＝14.39Hz，1H).

B.N1-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧 基苯基-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

0℃下，往4-[4-氨基-3-(4-[2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基-3-甲 氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(11.2，17.79 mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入三氟乙酸/二氯甲烷(20:80，100 mL)混合溶液。15分钟后，移去冰水浴，在室温下搅拌所述反应混 合液3小时。蒸发出溶剂，将剩余物溶解在二氯甲烷中。加入饱和 碳酸氢钠溶液调节pH至约8。将所得悬浮液冷冻干燥。加入水(100 ml)，水相用二氯甲烷重复萃取得到N1-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(9.12 g，97％)。

                                              1H NMR(DMSO-d6)δ 1.85(m， 2H)，2.12(m，2H)，2.70(m，2H)，3.14(m，2H)，3.94(s，3H)，4.77(m，1H)，7.32(m， 2H)，7.75(d，J＝8.02Hz，1H)，7.89(d，J＝10.31Hz，1H)，8.00(m，1H)，8.24(s，1H)， 8.31(d，J＝8.16Hz，1H)，9.90(s，1H).

实施例254-293

使用方法A或方法B，由N1-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(中间体6) 制得实施例254-293的化合物：

方法A：将N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(100mg，0.189 mmol)、适当的醛(0.378mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(120mg，0.567 mmol)和冰醋酸(48mg，0.378mmol)在1，2二氯乙烷(4mL)中混合。 在室温下摇荡过夜后，再加入更多量的醛(0.378mmol)、三乙酰氧基 硼氢化钠(120mg，0.567)和冰醋酸(48mg，0.378mmol)，室温下摇荡 反应混合液过夜。蒸发除去溶剂，剩余物经快速柱层析(使用二氯甲 烷/甲醇(95∶5至70∶30))或经反相制备HPLC(Rainin HPLC，柱： Thermoquest，hyperprep HS C18，8μm，250 x 21.2mm。洗脱液：25 分钟内用5％B/A至100％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/分钟)纯化得到相应的产物，详见下表。

方法B：将N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(100mg，0.189 mmol)、适当的酮或一些较低活性的醛(0.378mmol)、三乙酰氧基硼 氢化钠(120mg，0.567mmol)和冰醋酸(48mg，0.378mmol)在1，2-二 氯乙烷(4mL)中混合。70℃下摇荡所述反应混合液4小时。蒸发除去 溶剂，剩余物经快速柱层析(使用二氯甲烷/甲醇(95:5至70:30))或经 反相制备HPLC(Rainin HPLC，柱：Thermoquest，hyperprep HS C18，8 μm，250 x 21.2mm。洗脱液：25分钟内用5％B/A至100％B/A(B：乙 腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/分钟)得到相应的产 物，详见下表。

实施例294：2-4-[4-氨基-3-(4-[2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基-3-甲 氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基乙酸甲酯

将N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(122g，0.230mmol)、2-溴乙酸 甲酯(33μL，0.346mmol)和碳酸铯(150mg，0.461mmol)与DMF(2mL) 混合。所得混合液在85℃下加热2小时。LC/MS显示出形成了两个 新的峰，其中一个为双-烷基化峰，另一个为所需产物。将粗制混合 物经反相制备HPLC(Rainin HPLC，柱：Thermoquest，hyperprep HS C18，8μm，250 x 21.2mm。洗脱液：在25分钟内用5％B/A至100％B/A (B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/分钟)纯化得到 2-4-[4-氨基-3-(4-[2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨基-3-甲氧基苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]哌啶子基乙酸甲酯(60mg，43％)。

                                            1H NMR(DMSO-d6)δ 1.91(m， 2H)，2.27(m，2H)，2.42(m，2H)，2.98(m，2H)，3.32(s，2H)，3.64(s，3H)，3.95(s， 3H)，4.67(m，1H)，7.32(m，2H)，7.75(d，J＝7.96Hz，1H)，7.89(d，J＝10.35Hz，1H)， 8.00(s，1H)，8.24(s，1H)，8.30(d，J＝8.13Hz，1H)，9.89(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝602.2，Rt＝2.80分钟。

实施例295：反式-3-[4-(1H-苯并[d]咪唑-1-基甲基)-3-甲氧基苯基]-1- [4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

A.1-(4-溴苄基)-1H-苯并[d]咪唑

将1-溴-4-(溴甲基)苯(2.50g，10mmol)、1H-苯并[d]咪唑(1.181g， 10.0mmol)、氢氧化钾(0.561g，10.0mmol)、碳酸钾(1.382g，10.0mmol) 和溴化四丁基铵(0.161g，0.5mmol)在二甲苯(60mL)中混合。将所述 反应混合液在139℃下加热过夜。将所述热反应混合液过滤并用热二 甲苯洗涤。蒸发除去溶剂，剩余物经快速柱层析纯化，使用二氯甲 烷/甲醇(95∶5至80∶20)为流动相得到1-(4-溴苄基)-1H-苯并[d]咪唑 (1.193g，42％)。

1H NMR(CDCl3) δ 5.31(s，2H)，7.05(m，2H)，7.28(m，3H)，7.46(m，2H)，7.82(m，1H)，7.95(s，1H).

B.1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苄基]-1H- 苯并[d]咪唑

将1-(4-溴苄基)-1H-苯并[d]咪唑(1.193mg，4.15mmol)、二硼酸 二频哪醇酯(1.27g，4.98mmol)、[1.1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯合 钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.10g，0.12mol)的络合物和乙酸钾(1.22g，12.46 mol)在N，N-二甲基甲酰胺(25mL)中的混合液在85℃下及在氮气气氛 中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。往剩 余物中加入二氯甲烷(20mL)，经Celite滤垫过滤除去所得固体物。 浓缩滤液并将剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用二氯甲烷/甲醇(98:2 至95:5)为流动相得到1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苄基]-1H-苯并[d]咪唑(1.38g，100％)：

         1H NMR(CDCl3)δ 1.27(s，12H)，5.33(s，2H)，7.06(d，J＝8.24Hz，2H)， 7.28(d，J＝8.34Hz，2H)，7.84(d，J＝7.70Hz，1H)，8.01(s，1H).

C.反式-3-[4-(1H-苯并[d]咪唑-1-基甲基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4- 甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将反式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(200mg，0.453mmol)、1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苄基]-1H-苯并[d]咪唑(303mg，0.906mmol)、四(三苯基 膦)合钯(0.31mg，0.027mmol)和碳酸钠(155mg，1.09mmol)与乙二 醇二甲醚(5mL)和水(2.5mL)一起混合。将所述反应混合液在氮气气 氛中加热回流过夜。除去溶剂，剩余物经反相制备HPLC(Rainin HPLC，柱：Thermoquest，hyperprep HS C18，8μm，250 x 21.2mm。 洗脱液：25分钟内用5％B/A至100％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸 铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/分钟)纯化得到反式-3-[4-(1H-苯并[d]咪唑 -1-基甲基)-3-甲氧基苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(35mg，15％)。

1H NMR(DMSO-d6)δ 1.46(m，2H)，1.95(m，10H)，2.13(s，(3H)，2.32(m，5H)， 4.62(m，1H)，5.78(s，2H)，7.22(m，2H)，7.49(m，2H)，7.62(m，4H)，8.22(s，1H)， 8.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝522.3，Rt＝0.82分钟。

实施例296：N1-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐

将N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(100g，0.189mmol)、2-溴乙基 甲基醚(20μL，0.208mmol)和碳酸钾(52mg，0.378mmol)在DMF(2mL) 中混合。将所得混合液在65℃下加热过夜。将粗制混合液经反相制 备HPLC(Rainin HPLC，柱：Thermoquest，hyperprep HS C18，8μm， 250 x 21.2mm。洗脱液：25分钟内用5％B/A至100％B/A(B：乙腈， A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/分钟)纯化得到N1-(4-{4-氨 基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧 基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐(75mg，68％)。

                                                1H NMR(DMSO-d6)δ 1.90 (m，2H)，2.22(m，4H)，2.54(m，2H)，3.02(m，2H)，3.26(s，3H)，3.46(m，2H)，3.94 (m，s，3H)，4.66(m，1H)，7.30(d，J＝8.19Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.74(d，J＝7.84Hz， 1H)，7.90(d，J＝10.33Hz，1H)，7.99(m，1H)，8.24(s，1H)，8.30(d，J＝8.23Hz，1H)， 9.89(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：MH+＝587.2，Rt＝2.17分钟。

实施例297：N1-(4-{4-氨基-1-[1-(氰基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

将N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧 基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(100g，0.189mmol)、2-溴乙腈(14 μL，0.208mmol)和碳酸铯(52mg，0.378mmol)在DMF(2mL)中混合。 在室温下搅拌所得混合液过夜。将粗制的混合液经反相制备

HPLC(Rainin HPLC-柱：Thermoquest，hyperprep HS C18，8μm， 250 x 21.2mm。洗脱液：25分钟内用5％B/A至100％B/A(B：乙腈， A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/min)纯化得到N1-(4-{4-氨 基-1-[1-(氰基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯 基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(68mg，64％)。

                      1H NMR(DMSO-d6)δ 1.99(m，2H)，2.27(m，2H)，2.45 (m，2H)，2.99(m，2H)，3.80(s，2H)，3.94(s，3H)，4.68(m，1H)，7.30(d，J＝8.21Hz， 1H)，7.34(s，1H)，7.75(d，J＝8.26Hz，1H)，7.90(d，J＝10.51Hz，1H)，7.99(m，1H)， 8.25(s，1H)，8.30(d，J＝8.18Hz，1H)，9.90(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：4.5分钟内用30％B/A至 95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分钟)： MH+＝569.2，Rt＝3.03分钟。

实施例298：N1-(4-{4-氨基-1-[1-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-哌啶基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙 酸盐

将N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(100g，0.189mmol)、2-溴乙酰 胺(28mg，0.208mmol)和碳酸铯(123mg，0.378mmol)在DMF(2mL) 中混合。在室温下搅拌所得混合液过夜。将粗制的混合液经反相制 备HPLC(Rainin HPLC-柱：Thermoquest，hyperprep HS C18，8μm， 250 x 21.2mm。洗脱液：25分钟内用5％B/A至100％B/A(B：乙腈， A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，21mL/分钟)纯化得到N1-(4-{4-氨 基-1-[1-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2- 甲氧基苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺乙酸盐(70mg，63％)。

1HNMR(DMSO-d6)δ 1.90 (m，5H)，2.34(m，4H)，2.93(s，2H)，2.99(m，2H)，3.94(s，3H)，4.69(m，1H)，7.12(s， 1H)，7.25(s，1H)，7.30(d，J＝8.15Hz，1H)，7.34(s，1H)，7.75(d，J＝8.15Hz，1H)，7.87 (d，J＝10.30Hz，1H)，7.99(m，1H)，8.25(s，1H)，8.31(d，J＝8.14Hz，1H)，9.90(s， 1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：4.5分钟内用30％B/A至 95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分钟)： MH+＝587.2，Rt＝2.17分钟。

实施例299：1-(1-甲基-3-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺乙酸盐

80℃下，将外消旋的3-碘-1-(1-甲基-3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(0.050g，0.00014mol)在二甲氧基乙烷(2.5mL)和水(5mL) 中的溶液用4-苯氧基苯基硼酸(0.033g，0.00015mol)、碳酸钠(0.037 g，0.00037mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.016g，0.000014mol)处理18 小时。真空除去有机溶剂，粗产物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm， 300，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％ 乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液 冷冻干燥得到白色固体状的1-(1-甲基-3-哌啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.040g，0.00009mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.24(s，1H)，7.65(d，2H)，7.43(t，2H)，7.10-7.22(m， 5H)，4.74-4.84(m，1H)，2.94(dd，1H)，2.79(d，1H)，2.36(t，1H)，2.22(s，3H)，1.89(s， 3H)，1.86-2.01(m，3H)，1.76-1.84(m，1H)，1.60-1.75(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.74分钟；MS：MH+ 401。

实施例300：1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

80℃下，将外消旋的3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.050g，0.00012mol)在二甲氧基乙烷(2.5mL) 和水(5mL)中的溶液用4-苯氧基苯基硼酸(0.029g，0.00014mol)、碳 酸钠(0.033g，0.00031mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.014g，0.00001mol) 处理20小时。真空除去有机溶剂，粗产物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟 内用30％-60％乙腈0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈， 将含水混合液冷冻干燥得到白色固体状的1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶 基]-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.038g， 0.00007mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.24(s，1H)，7.65(d，2H)，7.43(t，2H)，7.09-7.22(m， 5H)，4.71-4.82(m，1H)，3.44(t，2H)，3.21(s，3H)，3.04(dd，1H)，2.91(d，1H)，2.47-2.60 (m，3H)，1.94-2.09(m，3H)，1.89(s，3H)，1.75-1.84(m，1H)，1.57-1.74(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.26分钟；MS：MH+ 445。

实施例301：反式1-{4-[4-氨基-3-(3-氯-4-{[4-(三氟甲基)苯甲酰基]氨 基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}-4-甲基六氢吡嗪二鎓二 马来酸盐

A.N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯

使4-溴-2-氯苯胺(5.00g，0.0242mol)的四氢呋喃(50mL)溶液与 1.0M的双(三甲基甲硅烷基)氨基化钠的四氢呋喃(53.2mL，0.0532mol) 溶液反应。环境温度下将所得混合液搅拌15分钟。加入二碳酸二叔 丁酯(6.34g，0.0290mol)，搅拌所得溶液2小时。真空除去溶剂，将 所得粗制物经快速硅胶柱层析纯化，以庚烷/乙酸乙酯(4:1)为洗脱液。 真空除去溶剂，得到白色固体状的N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯 (4.214g，0.0137mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.75(s，1H)，7.71(d，1H)，7.54(d，1H)，7.50(dd， 1H)，1.46(s，9H)；

TLC(庚烷/乙酸乙酯4:1)Rf 0.54。

B.N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基] 氨基甲酸叔丁酯

N-(4-溴-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯(2.10g，0.00685mol)、二硼 酸二频哪醇酯(2.09g，0.00822mol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二 氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.17g，0.00021mol)的络合物和乙酸钾 (2.02g，0.02055mol)在N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的混合液在80℃ 及在氮气气氛中加热6小时。真空除去溶剂。将剩余物在庚烷(70mL) 中研磨，所得的固体物经521滤垫过滤除去。真空除去庚烷得 到灰色固体状的N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2- 基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(1.93g，0.00546mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.65(s，1H)，7.74(d，1H)，7.61(d，1H)，7.56(dd， 1H)，1.47(s，9H)，1.29(s，12H).

C.反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯

将反式3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(2.20g，0.00498mol)、N-[2-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂 硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸叔丁酯(1.93g，0.00548mol)和碳酸 钠(1.32g，0.01245mol)在1，2-二甲氧基乙烷(50mL)和水(100mL)中 的混合液剧烈搅拌，加入四(三苯基膦)合钯(0)(0.345g，0.00030mol)。 80℃下搅拌所述反应混合液6小时，随后加入另外的四(三苯基膦)合 钯(0)(0.345g，0.00030mol)。80℃下再搅拌所述反应混合液16小时。 真空除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯(100mL)和饱和碳酸氢钠水溶液 (200mL)间分配。分离各相，水层用乙酸乙酯(3 x 75mL)萃取。将合 并的有机相用硫酸镁干燥，真空除去溶剂。产物经快速硅胶柱层析 纯化，以二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵(90:10:0.5)为洗脱液。真空除去溶 剂，得到白色固体状的反式N-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基甲酸叔丁酯(1.993g， 0.00368mol)：

1H NMR(DMSO-d6.400MHz)δ 8.76(s，1H)，8.23(s，1H)，7.80(d，1H)，7.68(d，1H)， 7.57(dd，1H)，4.58-4.71(m，1H)，2.15(s，3H)，1.89-2.61(m，15H)，1.49(s，9H)，1.40- 1.48(m，2H)；TLC(二氯甲烷/甲醇＝90:10)Rf 0.13，MS：M+ 541.

D.反式3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

往20％三氟乙酸的二氯甲烷溶液中加入反式N-(4-{4-氨基-1-[4- (4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)氨基 甲酸叔丁酯(1.993g，0.00368mol)。环境温度下搅拌所述混合液2小 时。真空除去溶剂，将剩余物溶解在二氯甲烷(50mL)中，用1.0M 氢氧化钠水溶液(2 x 25mL)洗涤。有机层用硫酸镁干燥，真空除去溶 剂，得到白色固体状的反式3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1- 基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.564g，0.00355mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.45(d，1H)，7.31(dd，1H)，6，92(d， 1H)，4.57-4.63(m，1H)，2.23-2.55(m，9H)，2.14(s，3H)，1.89-2.08(m，6H)，1.38-1.52 (m，2H)；

TLC(二氯甲烷/甲醇＝90:10)Rf 0.08；MS：MH+ 441。

E.反式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二马来酸盐

-10℃下往3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)的吡啶(5mL)混合 液中滴加入4-(三氟甲基)-1-苯甲酰氯(0.188g，0.00090mol)，保持温 度低于-5℃。将所得混合液在-10℃下搅拌15分钟，随后在环境温度 下搅拌18小时。加入1N氢氧化钠水溶液(1.0mL)后，将所得混合液 搅拌1小时。真空除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯(15mL)和水(30mL) 间分配。分离各层，水层用乙酸乙酯(15mL)萃取，将合并的有机层 经硫酸镁干燥。真空除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18， 8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用 30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含 水混合液冷冻干燥得到经纯化的游离碱(0.032g，0.000052mol)。将 所述游离碱溶解在无水乙醇(4mL)中，加热至回流。加入马来酸(0.018 g，0.000156mol)的无水乙醇(1mL)溶液后，再回流所述溶液15分钟。 将所得混合液冷却至环境温度，过滤所得的沉淀物，用尽可能少量 的无水乙醇洗涤。真空干燥沉淀物得到白色固体状的反式N1-(4-(4- 氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯 苯基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺二马来酸盐(0.020g，0.00002mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.42(s，1H)，8.26(s，1H)，8.20(d，2H)，7.96(d， 2H)，7.80-7.83(m，2H)，7.46(dd，1H)，6.80-7.20(b，2H)，6.13(s，4H)，4.61-4.73(m， 1H)，2.52-2.64(m，4H)，2，23-2.46(m，5H)，2.16(s，3H)，1.90-2.10(m，6H)，1.42-1.56 (m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.97分钟；MS：MH+ 613。

实施例302：反式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氯苯基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺二马来酸 盐

-10℃下往3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)的吡啶(5mL)混合 液中滴加入4-(三氟甲氧基)-1-苯甲酰氯(0.203g，0.00091mol)，保持 温度低于-5℃。-10℃下将所得混合液搅拌15分钟，随后在环境温度 下搅拌18小时。加入1N氢氧化钠水溶液(1.0mL)后，将所得混合液 搅拌1小时。真空除去溶剂，使剩余物在乙酸乙酯(15mL)和水(30mL) 间分配。分离各层，水相用乙酸乙酯(15mL)萃取，合并的有机层经 硫酸镁干燥。真空除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18， 8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用 30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含 水混合液冷冻干燥得到经纯化的游离碱(0.034g，0.000054mol)。将 所述游离碱溶解在无水乙醇(4mL)中，加热至回流。加入马来酸(0.019 g，0.000162mol)的无水乙醇(1mL)溶液，回流所述溶液15分钟。冷 却所得混合液至环境温度，将所得的沉淀物过滤，用尽可能少量的 无水乙醇洗涤。真空干燥沉淀物得到白色固体状的反式N1-(4-{4-氨 基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2氯苯 基)-4-(三氟甲氧基)苯甲酰胺二马来酸盐(0.020g，0.00002mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.29(s，1H)，8.26(s，1H)，8.14(d，2H)，7.78-7.87 (m，2H)，7.68(dd，1H)，7.57(d，2H)，6.80-7.20(b，2H)，6.11(s，4H)，4.65-4.77(m，1H)， 2.38-3.60(m，12H)，1.95-2.15(m，6H)，1.51-1.68(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 15.41分钟；MS：MH+ 629。

实施例303：反式3-(3-氯-4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1- [4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

在环境温度下，使3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)的1，2-二氯乙 烷(20mL)混合液与5-甲基-2-糠醛(0.052g，0.00048mol)、乙酸(0.095 g，0.00159mol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.336g，0.00159mol)反应。 在两个24小时的间隔中，加入另外2当量的三乙酰氧基硼氢化钠 (0.672g，0.00318mol)。真空除去溶剂，使剩余物在氯仿(25mL)和 饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)间分配。分离各相，水相用氯仿(2 x 25mL) 萃取。合并的有机相用硫酸镁干燥，真空除去溶剂。剩余物经制备 RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟， 随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真 空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白色固体状的反式3-(3-氯- 4-{[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基}苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.129g，0.00022mol)：

1H NMR(DMSO-d6.400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.51(d，1H)，7.39(dd，1H)，6.93(d， 1H)，6.20(d，1H)，6.14(t，1H)，5.98(d，1H)，4.55-4.66(m，1H)，4.38(d，2H)，2.23(s， 3H)，2.18-2.61(m，10H)，2.14(s，3H)，1.91(s，3H)，1.87-2.09(m，5H)，1.37-1.53(m， 2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.48分钟；MS：MH+ 535。

实施例304：反式3-{3-氯-4-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

在环境温度下，使3-(4-氨基-3-氯苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00045mol)的1，2-二氯乙 烷(20mL)混合液与2-氯-6-氟苯甲醛(0.076g，0.00048mol)、乙酸(0.095 g，0.00159mol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.336g，0.00159mol)反应。 在3个24小时的间隔中，加入另外3当量的三乙酰氧基硼氢化钠(1.008 g，0.00477mol)，此后所有的原料均消耗完全。真空除去溶剂，使剩 余物在氯仿(25mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)间分配。分离各 相，水相用氯仿(2 x 25mL)萃取。合并的有机相用硫酸镁干燥，真空 除去溶剂。剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 白色固体状的反式3-{3-氯-4-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.074g，0.00011 mol)：

1H NMR(DMSO-d6.400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.52(d，1H)，7.35-7.47(m，4H)，6.99 (d，1H)，5.75(t，1H)，4.55-4.66(m，1H)，4.57(d，2H)，2.25-2.61(m，11H)，2.16(s， 3H)，1.91(s，3H)，1.87-2.09(m，4H)，1.37-1.53(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 15.97分钟；MS：MH+ 583。

实施例305：反式N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪唑基羰基)-4-哌啶基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰 胺马来酸盐

使N1-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺(0.200g，0.00041mol)的甲苯(10 mL)溶液混合物与5H，10H-二咪唑并[1，5-a:1，5-d]吡嗪-5，10-二酮(0.040 g，0.00021mol)在回流下反应18小时。再加入等当量的5H，10H-二 咪唑并[1，5-a:1，5-d]吡嗪-5，10-二酮，并再回流所得混合液6小时。真 空除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 游离碱(0.103g，0.00017mol)。将所述游离碱溶解在无水乙醇(10mL) 中，加热至回流。加入马来酸(0.030g，0.00034mol)的无水乙醇(1mL) 溶液后，回流所述溶液15分钟，随后形成沉淀。将所得混合液冷却 至环境温度，过滤所得沉淀物，用尽可能少量的无水乙醇洗涤。真 空干燥沉淀物，得到白色固体状的反式N1-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-2-咪 唑基羰基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反 式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺马来酸盐(0.055g，0.00008mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.63(s，1H)，8.26(s，1H)，8.22(d，1H)，8.00(b，1H)， 7.74(b，1H)，7.43-7.48(m，1H)，7.16-7.33(m，7H)，6.21(s，2H)，4.97-5.13(m，1H)， 2.91-3.47(m，4H)，2.53-2.65(m，1H)，2.30-2.45(m，1H)，2.07-2.26(m，2H)，1.95-2.07 (m，2H)，1.45-1.50(m，1H)，1.28-1.32(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.17分钟；MS：MH+ 578。

实施例306：顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2-氨基乙基)-4-羟基环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰 胺乙酸盐

A.顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺

80℃下将顺式N1-{4-[4-氨基-1-(1-氧杂螺[2.5]辛-6-基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(反式)-2-苯基环丙烷-1-甲酰胺 (0.605g，0.0012mol)、高氯酸锂(0.189g，0.0018mol)和氰化钾(0.116 g，0.0018mol)在乙腈(60ml)中的混合液加热2天。冷至环境温度， 用水(30mL)稀释，用乙醚(3 x 30mL)萃取。将合并的有机相用硫酸镁 干燥。真空除去溶剂，所得的粗制产物经快速硅胶柱层析纯化，使 用二氯甲烷/甲醇(95:5)为洗脱液。真空除去溶剂，得到白色固体状的 顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺(0.602g， 0.0011mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64(s，1H)，8.23(t，2H)，7.31(t，2H)，7.25(s，1H)， 7.17-(m，4H)，4.61-4.62(m，1H)，3.91(s，1H)，2.66(s，2H)，2.55-2.62(m，1H)，2.31- 2.45(m，3H)，1.58-1.89(m，6H)，1.45-1.53(m，1H)，1.28-1.38(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 15.21分钟；MS：MH+ 538。

B.顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2-氨基乙基)-4-羟基环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷甲酰胺 乙酸盐

往顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1-环丙烷-甲酰胺 (0.200g，0.00037mol)在甲醇(20ml)和氢氧化铵(1mL)的溶液中加入 阮内镍(0.5mL)。在氢气气氛(1atm)下将所得混合液搅拌18小时。 经Celite过滤所述反应混合液，真空除去溶剂。剩余物经制备RP- HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟， 随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真 空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白色固体状的顺式N1-(4-{4- 氨基-1-[4-(2-氨基乙基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2- 甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基-1环丙烷甲酰胺乙酸盐(0.045g，0.000083 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64(s，1H)，8.23(d，1H)，8.22-8.24(m，1H)， 7.17-7.33(m，7H)，4.65-4.67(m，1H)，3.91(s，3H)，2.84·2.91(m，1H)，2.53-2.55 (m，1H)，2.33-2.40(m，4H)，1.85(s，3H)，1.35-1.80(m，9H)，1，30-1.33(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.29分钟；MS：MH+ 444。

实施例308：顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-羟 基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基- 1-环丙烷甲酰胺

环境温度下，往良好搅拌着的顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(氰基甲 基)-4-羟基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)- 2-苯基-1-环丙烷甲酰胺(0.200g，0.00037mol)的二甲亚砜(4mL)溶液 中加入碳酸钾(0.216g，0.00156mol)。滴加入30％过氧化氢水溶液(0.6 mL)，保持温度恒定。将所得混合液在环境温度下搅拌32小时。往 所述混合液中加入水(20mL)，滤出所形成的沉淀物。将沉淀物用水 洗涤并真空干燥。固体物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm， 25cm；30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M 乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥， 得到白色固体状的顺式N1-(4-{4-氨基-1-[4-(2-氨基-2-氧代乙基)-4-羟 基环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(反式)-2-苯基- 1-环丙烷甲酰胺(0.117g，0.00021mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64(s，1H)，8.23(d，1H)，8.22(s，1H)，7.43-7.48 (m，1H)，7.15-7.35(m，7H)，7.05-7.10(m，1H)，4.97(s，1H)，4.61-4.71(m，1H)，3.91 (s，3H)，2.54-2.64(m，1H)，2.30-2.44(m，3H)，2.24(s，2H)，1.55-1.81(m，6H)，1.45- 1.53(m，1H)，1.28-1.36(m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.05分钟；MS：MH+ 556。

实施例308：顺式N1-[4-(4-氨基-1-{4-[(二甲氨基)甲基]-4-羟基环己 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-(反式)-2-苯基-1-环丙 烷甲酰胺乙酸盐

往顺式N1-{4-[4-氨基-1-(1-氧杂螺[2.5]辛-6-基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-(反式)-2-苯基环丙烷-1-甲酰胺(0.190g， 0.000302mol)的2-丙醇(10mL)溶液中加入2M的二甲胺的甲醇(0.91 mL)溶液，将所得的混合液在65℃的耐压管中加热18小时。真空除 去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 30％恒溶剂洗脱5分钟，随后在15分钟内用30％-60％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 白色固体状的顺式N1-[4-(4-氨基-1-{4-[(二甲氨基)甲基]-4-羟基环己 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-(反式)-2-苯基-1-环丙 烷甲酰胺乙酸盐(0.109g，0.000177mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.64(s，1H)，8.23(d，1H)，8.22-8.24(m，1H)，7.17- 7.33(m，7H)，4.56-4.68(m，1H)，3.91(s，3H)，2.54-2.64(m，1H)，2.30-2.44(m，3H)， 2.28(s，6H)，2.24(s，2H)，1.91(s，3H)，1.63-1.78(m，4H)，1.44-1.58(m，3H)，1.28-1.36 (m，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.54分钟；MS：MH+ 556。

实施例310：反式N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-(2R)四氢-1H-2-吡咯甲酰胺乙 酸盐

使反式3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00046mol)的N，N-二甲基甲酰 胺(10mL)溶液与1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.068g，0.00050mol)、1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.132g，0.00069mol)、D-Boc- 脯氨酸(0.108g，0.00050mol)和N，N-二异丙基乙胺(0.184g，0.00142 mol)在环境温度下反应24小时。真空除去溶剂，使剩余物在二氯甲 烷(10mL)和5％柠檬酸水溶液(20mL)间分配。分离各层，水层用二 氯甲烷(2x10mL)萃取。合并的有机相用饱和碳酸氢钠水溶液(15mL) 洗涤并用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，环境温度下将剩余物在20％ 三氟乙酸的二氯甲烷溶液中搅拌6小时。真空除去溶剂，剩余物经 制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；5％恒溶剂洗脱5 分钟，随后在20分钟内用5％-40％乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯 化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到白色固体状的反式 N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 3-基}-2-甲氧基苯基)-(2R)四氢-1H-2-吡咯甲酰胺乙酸盐(0.096g， 0.00016mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.33(s，1H)，8.45(d，1H)，8.22(s，1H)，7.25(s， 1H)，7.21(d，1H)，4.58-4.69(m，1H)，3.93(s，3H)，3.77(dd，1H)，2.96-3.04(m，1H)， 2.74-2.84(m，1H)，2.47-2.58(m，5H)，2.23-2.45(m，5H)，2.14(s，3H)，1.91(s，3H)， 1.88-2.11(m，7H)，1.78-1.88(m，1H)，1.60-1.69(m，2H)，1.39-1.54(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 8.47分钟；MS：MH+ 534。

实施例311：4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]- 1-吡啶氧化物

A.4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧化物

环境温度下，使3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.00g，0.019mol) 的N，N-二甲基甲酰胺(50mL)溶液与60％氢化钠在油(0.92g，0.023mol) 中的溶液反应。搅拌所述混合液15分钟，加入4-硝基吡啶-N-氧化物 (5.37g，0.038mol)。在100℃下加热所得混合液18小时。滤出所形 成的沉淀物，用N，N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯洗涤得到黄褐色固体 状的4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧化物(3.79 g，0.011mol)。

1H NMR(DMSO-d6 400MHHz)δ 8.38(s，1H)，8.34(d，2H)，8.24(d，2H)； RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 7.36分钟；MS：MH+ 355。

B.4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡 啶氧化物

将4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧化物 (0.140g，0.00040mol)在二甲氧基乙烷(7mL)和水(15mL)中的悬浮液 与4-苯氧基苯基硼酸(0.093g，0.00043mol)、碳酸钠(0.105g，0.00099 mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.046g，0.00004mol)在80℃下反应18 小时。过滤固体物得到棕色固体状的4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.138g，0.00035mol)。将一 部分产物(0.040g，0.00010mol)经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm， 300，25cm；40％恒溶剂洗脱5分钟，随后在30分钟内用40％-100％ 乙腈-0.1M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液 冷冻干燥得到白色固体状的产物4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.013g，0.00003mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.44(s，1H)，8.34-8.41(m，4H)，7.77(d，2H)，7.45 (t，2H)，7.13-7.24(m，5H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.66分钟；MS：MH+ 397。

实施例312：3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺

将4-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡 啶氧化物(0.100g，0.00025mol)和10％披钯碳(0.016g，0.00002mol) 在乙酸(3mL)中的悬浮液与一水合次磷酸钠(0.033g，0.00038mol)在 60℃下反应2小时后，加入另外的10％披钯碳(0.016g，0.00002mol)。 将所得混合液搅拌18小时，随后加入另外的10％披钯碳(0.016g， 0.00002mol)和一水合次磷酸钠(0.033g，0.00038mol)。再搅拌所述 混合液24小时。经521过滤所述混合液，用乙酸洗涤。真空 除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 40％恒溶剂洗脱5分钟，随后在30分钟内用40％-100％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 白色固体状的3-(4-苯氧基苯基)-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺(0.020g，0.00005mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.71(d，2H)，8.46(s，1H)，8.39(dd，2H)，7.78(d， 2H)，7.46(t，2H)，7.13-7.25(m，5H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 17.31分钟；MS：MH+ 381。

实施例313：N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

A.N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡啶氧化物 (0.500g，0.0014mol)在二甲氧基乙烷(15mL)和水(30mL)中的悬浮液 与N2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.631g，0.00155mol)，碳酸钠(0.374g， 0.0035mol)和四(三苯基膦)合钯(0)(0.163g，0.00014mol)在80℃下反 应18小时。过滤出固体物并用水洗涤。固体物在乙酸乙酯中淤浆化 18小时，过滤，用乙酸乙酯洗涤。真空干燥固体物得到得到粗制的 棕色固体状的4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-[(1-甲基-1H-2-吲哚基)-羰基]氨 基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.523g，0.0010 mol)：RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用 5％-95％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.92分钟；MS：MH+ 507。

B.N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[(1-甲基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}苯 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-吡啶氧化物(0.200g，0.00039mol) 和10％披钯碳(0.042g，0.00004mol)在乙酸(3mL)中的悬浮液与一水 合次磷酸钠(0.063g，0.00059mol)在60℃下反应2小时。加入另外 的10％披钯碳(0.042g，0.00004mol)和次磷酸钠(0.045g，0.00042 mol)，搅拌所述混合液24小时。真空除去溶剂，剩余物在甲醇中淤 浆化4小时。经521过滤过滤所述混合液，用甲醇洗涤。真空 除去溶剂，剩余物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm； 50％恒溶剂洗脱5分钟，随后在25分钟内用50％-100％乙腈-0.1M乙 酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻干燥得到 白色固体状的N2-{4-[4-氨基-1-(4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.020g，0.00004mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.48(s，1H)8.72(d，2H)，8.47(s，1H)，8.42(d，2H)， 8.20(d，1H)，7.72(d，1H)，7.60(d，1H)，7.48(s，1H)，7.42(d，1H)，7.36(s，1H)7.34(t， 1H)，7.16(t，1H)，4.05(s，3H)，3.99(s，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 19.50分钟；MS：MH+ 491。

实施例314：1-(6-氨基-3-吡啶基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺；和

实施例315：3-(4-苯氧基苯基)-1-(2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺

将3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.00079 mol)的N-甲基吡咯烷酮(10mL)溶液与60％氢化钠的油溶液(0.032g， 0.00079mol)反应。停止排放出气体后，将所得混合液在环境温度下 搅拌30分钟，加入5-溴-2-硝基吡啶(0.161g，0.00079mol)，在40℃ 下加热18小时。加入另外的60％氢化钠油溶液(0.032g，0.00079mol)， 再搅拌所得混合液2小时。真空除去溶剂，使剩余物在二氯甲烷(15mL) 和水(25mL)间分配。分离各层，水层用二氯甲烷(2 x 15mL)萃取。 合并的有机物用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，剩余物 经快速硅胶柱层析纯化，使用庚烷/乙酸乙酯(1:2)作为洗脱液得到两 种产物。将较低极性的化合物1-(6-硝基-3-吡啶基)-3-(4-苯氧基苯基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺悬浮在无水乙醇(10mL)和N，N-二甲基甲酰 胺(5mL)中，加入10％披钯碳(0.007g)。在氢气气囊供应的氢气气氛 中将所得混合液搅拌18小时。经521过滤所述混合液，用无 水乙醇洗涤。真空除去溶剂，得到白色固体状的1-(6氨基-3-吡啶 基)-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.007g，0.00002 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.53(d，1H)8.31(s，1H)，7.97(dd，1H)，7.73(d，2H)， 7.44(t，2H)，7.12-23(m，5H)，6.60(d，1H)，6.20(s，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 15.38分钟；MS：MH+ 396。

将较高极性的化合物3-(4-苯氧基苯基)-1-(5-溴-2-吡啶基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺悬浮在无水乙醇(10mL)和N，N-二甲基甲酰胺(5 mL)中，加入10％披钯碳(0.007g)。在氢气气囊供应的氢气气氛中将 将所得混合液搅拌18小时。经521滤垫过滤所述混合液，用 无水乙醇洗涤。真空除去溶剂，得到白色固体状的3-(4-苯氧基苯基)- 1-(2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.030g，0.00007mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.60-8.64(m，1H)8.37(s，1H)，8.20(d，1H)，8.03- 8.08(m，1H)，7.76(d，2H)，7.41-7.49(m，3H)，7.12-7.23(m，5H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.32分钟；MS：MH+ 381。

以下给出一种以反式-3-(4-氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺和醛作为原料的还原胺化方法。实 施例316和317使用这种方法。

方案：

将反式-3-(4-氨基-苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1当量)、相应的醛(1.05当量)、三乙酰氧基硼氢 化钠(3.4当量)和乙酸(3.4当量)在无水1，2-二氯乙烷中的混合液搅拌16 小时。减压浓缩所述反应混合液，用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭并再 次浓缩。剩余物经制备HPLC纯化(Hypersil C18，8μm，25cm；在25 分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)得到所需产物。按照 该方法，实施例316的化合物使用醛2-甲氧基-3-甲酰基-吡啶制备， 实施例317的化合物使用醛2-甲酰基-吲哚制备。

实施例316：反式-3-(4-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4- 甲基-哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，8.06(dd，1H)，7.61(d，1H)，7.35(d， 2H)，6.95(dd，1H)，6.69(d，2H)，6.51(t，1H)，4.60(m，1H)，4.26(d，2H)，3.94(s，3H)， 2.64(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.07分钟。MS：MH+ 528。

实施例317：反式-3-{4-[(1H-2-吲哚基甲基)氨基]苯基}-1-[4-(4-甲基哌 嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.08(s，1H)，8.19(s，1H)，7.44(d，1H)，7.36(d， 2H)，7.32(d，1H)，7.01(t，1H)，6.95(t，1H)，6.81(d，2H)，6.47(t，1H)，6.35(s，1H)，4.60 (m，1H)，4.45(d，2H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46 (m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.74分钟。MS：MH+ 536。

实施例318：反式-3-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)甲基]-1，2-二氢-2-吡啶酮二乙酸盐

将反式-3-(4-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌 嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐(0.105g， 0.000199mol)溶于30％溴化氢的乙酸(4mL)溶液中，回流所得混合液 1.5小时。减压除去溶剂，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm， 25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到白色固体状的反式-3-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)甲基]-1，2-二氢-2-吡啶酮二乙酸盐 (0.0204g，0.0000324mol)。

1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.18(s，1H)，7.29(m，4H)，6.68(d，2H)，6.40(t，1H)， 6.15(m，1H)，4.60(m，1H)，4.09(d，2H)，2.64(s，3H)，2.6·2.2(br，9H)，2.13(s，3H)， 2.05(m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.40分钟。MS：MH+ 514。

以下给出一种以反式-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪- 1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺和醛作为原料的还原胺化通 用方法。

实施例319-321的化合物使用该方法进行制备。

方案：

将反式-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-(1当量)、相应的醛(1.05当量)、三乙酰氧基 硼氢化钠(3.4当量)和乙酸(3.4当量)在无水1，2-二氯乙烷中的混合液 搅拌16小时。减压浓缩所述反应混合液，用饱和碳酸氢钠水溶液猝 灭并再次浓缩。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在 25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到所需产 物。

实施例319的化合物使用醛2-氨基-4-氯-5-甲酰基-1，3-噻唑制 备。实施例320的化合物使用醛5-甲基-3-甲酰基异噁唑制备。实施 例321的化合物使用醛4-甲酰基-1，3-噻唑制备。

实施例319：反式-5-[(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯胺基)甲基]-4-氯-1，3-噻唑-2-胺二乙 酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.19(s，2H)，7.06(m，3H)，6.68(d，1H)， 5.76(t，1H)，4.60(m，1H)，4.30(d，2H)，3.85(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.17(s，3H)，2.05 (m，6H)，1.91(s，6H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.59分钟。MS：MH+ 583。

实施例320：反式-3-(3-甲氧基-4-[(5-甲基-3-异噁唑基)甲基]氨基苯 基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.04(m，2H)，6.68(d，1H)，6，16(s，1H)， 5.86(t，1H)，4.60(m，1H)，4.37(d，2H)，3.86(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.40(s，3H)，2.13 (s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.53分钟。MS：MH+ 532。

实施例321：反式-3-{3-甲氧基-4-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]苯基}-1- [4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.08(s，1H)，8.19(s，1H)，7.47(s，1H)，7.06(s，1H)， 7.03(d，1H)，6.68(d，1H)，5.76(t，1H)，4.60(m，1H)，4.52(d，2H)，3.88(s，3H)，2.6-2.2 (br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.17分钟。MS：MH+ 534。

以下给出采用反式-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺和适当的2-羟基-苯甲醛作为原料制备 苯并四氢呋喃-衍生物的通用方法。使用该方法制备实施例322和323 的化合物。

方案：

将反式-3-(4-氨基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1当量，浓度范围0.0001-0.0002mol)和相应的2- 羟基-苯甲醛(1当量)在无水乙醇(5mL)中合并，并在环境温度下搅拌 48小时。减压浓缩所述反应混合液，将剩余物干燥过夜得到相应的 亚胺，产物未经纯化直接使用。

将碘化三甲基氧化锍(2.5当量)溶于无水二甲亚砜(2mL)中，一 次性加入60％氢化钠在石蜡(2.5当量)中的悬浮液。10分钟后，加 入所述亚胺在无水二甲亚砜(2mL)中的溶液，在环境温度下及在氮气 气氛中搅拌所得的混合液2.5小时。将所述溶液倒入冰水中(50mL)， 用二氯甲烷(2x40mL)萃取。将合并的有机萃取液用硫酸镁干燥并减 压浓缩。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分 钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到最终化合物。

实施例322的化合物使用2-羟基-4，6-二氯苯甲醛制备，实施例323 的化合物使用2-羟基-4-氯苯甲醛制备。

实施例322：反式-3-4-[(4，6-二氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基)氨基]苯基 -1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.39(d，2H)，7.14(s，1H)，7.07(s，1H)， 6.80(d，2H)，6.56(d，1H)，5.34(m，1H)，4.80(dd，1H)，4.60(m，1H)，4.42(dd，1H)， 2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.03分钟。MS：MH+ 593。

实施例323：反式-3-{4-[(4-氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基)氨基]苯基}- 1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.39(d，2H)，7.28(t，1H)，6.99(d，1H)， 6.89(d，1H)，6.81(d，2H)，6.53(d，1H)，5.34(m，1H)，4.74(dd，1H)，4.60(m，1H)，4.38 (dd，1H)，2.6-2，2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.42分钟。MS：MH+ 559。

实施例324：反式-3-4-[(4，6-二氯-2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基)氨基]-3- 甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺乙酸盐

使用制备实施例322和323化合物的方法，以反式-3-(4-氨基-3- 甲氧基苯基)-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺和2-羟基-4，6-二氯苯甲醛作为原料制备反式-3-4-[(4，6-二氯-2，3-二 氢苯并[b]呋喃-3-基)氨基]-3-甲氧基苯基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.11(m，4H)，6.80(d，1H)，5.45(m， 2H)，4.84(dd，1H)，4.60(m，1H)，4.42(dd，1H)，3.82(s，3H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13 (s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.85分钟。MS：MH+ 623。

中间体7：4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌 啶甲酸叔丁酯

A.4-[4-氨基-3-(4-[(苄氧基)羰基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯

在80℃下及在氮气气氛中，将N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂 硼杂环戊烷-2-基)苯基]氨基甲酸苄酯(9.54g，0.027mol)、4-(4-氨基-3- 碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(10.0g，0.0225 mol)、四-(三苯基膦)合钯(1.56g，0.00135mol)和碳酸钠(5.97g，0.0563 mol)在乙二醇二甲醚(120mL)和水(60mL)中的混合液加热16小时。 冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。使剩余物在水(150mL) 和二氯甲烷(150mL)间分配；有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并减 压浓缩。剩余物在乙醚中研磨，过滤收集沉淀物并干燥得到白色固 体状的4-[4-氨基-3-(4-[(苄氧基)羰基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(10.1g，0.0186mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.00(s，1H)，8.23(s，1H)，7.64(d，2H)，7.43(d， 2H)，7.36(m，5H)，5.18(s，2H)，4.90(m，1H)，4.08(br，2H)，3.00(br，2H)，2.02(m， 4H)，1.42(s，9H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 18.58分钟。

B.4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶 甲酸叔丁酯

往4-[4-氨基-3-(4-[(苄氧基)羰基]氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(5.0g，0.0092mol)的四氢呋喃(150mL)溶 液中加入10％披钯碳(1.0g)，在Parr摇荡器中将所述反应混合液氢化 96小时。经Celite滤垫将所述催化剂过滤除去，减压浓缩滤液。剩 余物在正庚烷中研磨，过滤收集沉淀物并干燥得到灰白色固体状的 4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁 酯(2.51g，0.0061mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.20(s，1H)，7.35(d，2H)，6.69(d，2H)，5.42(s， 2H)，4.90(m，1H)，4.08(br，2H)，3.00(br，2H)，2.02(m，4H)，1.42(s，9H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.18分钟。

使用以下的还原胺化，接着进行BOC脱保护的通用方法制备实 施例325-337的化合物。以4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯和适当的醛作为原料。

方案：

将4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶 甲酸叔丁酯(1当量)、醛(1.2当量)、三乙酰氧基硼氢化钠(3.4当量)和 乙酸(3.4当量)在无水1，2-二氯乙烷中的混合液搅拌16小时。减压浓 缩所述反应混合液，在乙酸乙酯中研磨并用4N盐酸水溶液处理。搅 拌所得混合液1小时；水相用饱和碳酸氢钠水溶液中和，分离各相。 减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm； 在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到所需 产物。

使用上述方法制备以下化合物：

实施例325：3-{4-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.57(d，1H)，7.53(d，1H)，7.39(d， 2H)，7.23(m，2H)，6.85(d，2H)，6.80(s，1H)，6.66(t，1H)，4.70(m，1H)，4.51(d， 2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.37分钟。MS：MH+ 440。

实施例326：3-(4-[(2-甲氧基-3-吡啶基)甲基]氨基苯基)-1-(4-哌啶基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，8.06(d，1H)，7.61(d，1H)，7.36(d， 2H)，6.96(dd，1H)，6.69(d，2H)，6.51(t，1H)，4.70(m，1H)，4.27(d，2H)，3.94(s， 3H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.06分钟。MS：MH+ 431。

实施例327：3-(4-[(5-甲基-2-噻吩基)甲基]氨基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.36(d，2H)，6.85(d，1H)，6.77(d， 2H)，6.64(d，1H)，6.54(t，1H)，4.70(m，1H)，4.41(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m， 2H)，2.38(s，3H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.85分钟。MS：MH+ 420。

实施例328：3-{4-[(2-呋喃基甲基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1HNMR(DMSO-d6，400MHHz)δ 8.19(s，1H)，7.59(s，1H)，7.36(d，2H)，6.77(d， 2H)，6.46(t，1H)，6.39(d，1H)，6.34(d，1H)，4.70(m，1H)，4.31(d，2H)，3.07(m， 2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.96分钟。MS：MH+ 390。

实施例329：3-[4-(苄基氨基)苯基]-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.34(m，6H)，7.24(t，1H)，6.73(d， 2H)，6.60(t，1H)，4.70(m，1H)，4.33(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.32分钟。MS：MH+ 400。

实施例330：3-{4-[(2-甲氧基苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.35(d，2H)，7.24(m，2H)，7.01(d， 1H)，6.90(t，1H)，6.70(d，2H)，6.41(t，1H)，4.70(m，1H)，4.28(d，2H)，3.85(s，3H)， 3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.73分钟。MS：MH+ 430。

实施例331：3-{4-[(3-甲氧基苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.35(d，2H)，7.25(t，1H)，6.96(m， 2H)，6.81(d，1H)，6.72(d，2H)，6.59(t，1H)，4.70(m，1H)，4.30(d，2H)，3.74(s， 3H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.38分钟。MS：MH+ 430。

实施例332：3-{4-[(4-甲氧基苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.35(m，4H)，6.90(d，2H)，6.72(d， 2H)，6.51(t，1H)，4.70(m，1H)，4.25(d，2H)，3.73(s，3H)，3.07(m，2H)，2.65(m， 2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.37分钟。MS：MH+ 430。

实施例333：1-(4-哌啶基)-3-(4-[3-(三氟甲基)苄基]氨基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.71(m，2H)，7.58(m，2H)，7.36(d， 2H)，6.72(m，3H)，4.70(m，1H)，4.44(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.08分钟。MS：MH+ 468。

实施例334：1-(4-哌啶基)-3-(4-[4-(三氟甲基)苄基]氨基苯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.70(d，2H)，7.60(d，2H)，7.36(d， 2H)，6.72(m，3H)，4.70(m，1H)，4.44(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.23分钟。MS：MH+ 468。

实施例335：3-(4-[(2-甲基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基苯基)-1-(4-哌啶 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.41(d，2H)，7.26(s，1H)，6.73(d， 2H)，6.51(t，1H)，4.70(m，1H)，4.36(d，2H)，3.07(m，2H)，2.70(s，3H)，2.65(m， 2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.13分钟。MS：MH+ 421。

实施例336：3-{4-[(2-氯-6-氟苄基)氨基]苯基}-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.42(m，4H)，7.26(t，1H)，6.83(d， 2H)，6.27(t，1H)，4.72(m，1H)，4.37(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.32分钟。MS：MH+ 452。

实施例337：3-(4-[2-氟-4-(三氟甲基)苄基]氨基苯基)-1-(4-哌啶基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.61(m，3H)，7.38(d，2H)，6.73(d， 2H)，6.68(t，1H)，4.70(m，1H)，4.47(d，2H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m， 2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.83分钟。MS：MH+ 486。

实施例338：3-{4-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-(4- 哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐

将4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(g，mol)、苯并呋喃-2-甲醛(0.046g，0.000315 mol)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.089g，0.00042mol.)和乙酸(0.024mL， 0.00042mol)在无水1，2二氯乙烷中的混合液搅拌16小时。减压浓缩 所述反应混合液，在乙酸乙酯(4mL)中研磨，用4N盐酸水溶液(1mL) 处理。搅拌所得混合液1小时；水相用饱和碳酸氢钠水溶液中和， 分离各相。减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm， 25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到3-{4-[(苯并[b]呋喃-2-基甲基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1-(4-哌啶基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺二乙酸盐(0.027g，0.0000457mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.55(m，2H)，7.22(m，2H)，7.06 (m，2H)，6.80(d，1H)，6.75(s，1H)，5.80(t，1H)，4.70(m，1H)，4.57(d，2H)，3.89(s， 3H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，6H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 14.83分钟。MS：MH+ 470。

实施例339：3-[4-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-(4-哌啶基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

将水杨醛(0.063g，0.000513mol)和4-[4-氨基-3-(4-氨基苯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.200g，0.000489mol)在 无水乙醇(5mL)中合，并在环境温度下搅拌48小时。减压浓缩所述 反应混合液，将剩余物干燥过夜，得到4-[4-氨基-3-(4-{[-1-(2-羟基苯 基)亚甲基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔丁 酯，产物未经纯化直接使用。将碘化三甲基氧化锍(0.269g，0.00122mol) 溶于无水二甲亚砜(2mL)中，一次性加入60％氢化钠在石蜡(0.049g， 0.00122mol)中的悬浮液。10分钟后，加入4-[4-氨基-3-(4-{[-1-(2-羟 基苯基)亚甲基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶甲酸叔 丁酯在无水二甲亚砜(2mL)的溶液，将所得的混合液在环境温度下及 在氮气气氛中搅拌2.5小时。将所述溶液倒入冰水中(70mL)，用二 氯甲烷(2 x 50mL)萃取。将合并的有机萃取液用硫酸镁干燥，减压浓 缩得到粗制的4-{4-氨基-3-[4-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基}-1-哌啶甲酸叔丁酯，产物未经纯化直接 使用。将粗制的化合物溶于乙酸乙酯(5mL)中，用4N盐酸溶液(1.5mL) 处理。剧烈搅拌所得乳液1小时；水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和， 分离各层。减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm， 25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到白色固体状的3-[4-(2，3-二氢苯并[b]呋喃-3-基氨基)苯基]-1-(4-哌啶 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.038g，0.000078mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.19(s，1H)，7.41(m，3H)，7.25(t，1H)，6.89(m， 4H)，6.51(t，1H)，5.35(m，1H)，4.79(m，2H)，4.27(m，1H)，3.07(m，2H)，2.65(m， 2H)，2.04(m，2H)，1.90(s，3H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.38分钟。MS：MH+ 428。

实施例340：反式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮乙酸盐

A.3-氯-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮

将糖精(10.0g，0.0546mol)和五氯化磷(12.6g，0.060mol)在170 ℃下加热1.5小时。冷却所述反应混合液至环境温度，悬浮在乙醚(200 mL)中。过滤收集沉淀物，用乙醚充分洗涤并干燥得到白色固体状的 3-氯-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(3.7g，0.0184mol)，产物未经纯 化直接使用。

MS：MH+ 202。

B.3-(4-溴苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮

往3-氯-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.0g，0.00496mol)的丙 酮(20mL)溶液中一次性加入4-溴苯胺(1.71g，0.00992mol)。搅拌所 述混合液15分钟。减压浓缩所得混合液，将剩余物悬浮在水(100mL) 中。过滤收集沉淀物，用水充分洗涤并干燥得到白色固体状的3-(4- 溴苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.57g，0.00467mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.93(s，1H)，8.47(d，1H)，8.09(d，1H)，7.93(m， 4H)，7.69(d，2H)；

C.3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺基]- 1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮

将3-(4-溴苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.57g，0.00467 mol)、二硼酸二频哪醇酯(1.43g，0.00561mol)、[1，1′-双(二苯基膦基) 二茂铁]-二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)的络合物(0.114g，0.00014mol) 和乙酸钾(1.37g，0.014mol)在N，N-二甲基甲酰胺(35mL)中的混合液 在80℃及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度， 减压除去溶剂。往剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，经Celite滤垫过 滤除去所得固体物。浓缩滤液得到黄色油状物，将该产物在乙醚中 研磨得到白色固体状的3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷- 2-基)苯胺基]-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(1.14g，0.00297mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.92(br，1H)，8.51(d，1H)，8.08(d，1H)，7.91(m， 4H)，7.68(d，2H)，1.29(s，12H).

D.反式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮乙酸盐

将3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺基]- 1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(0.09g，0.000234mol)、反式-3-碘-1- [4-(4-甲基哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.08g， 0.00018mol)、四-(三苯基膦)合钯(0.013g，0.000011mol)和碳酸钠 (0.048g，0.00045mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液 在80℃下、在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度， 减压除去溶剂。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在 25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色固体 状的反式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮乙酸盐(0.075g， 0.000119mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.29(d，1H)，8.23(s，1H)，7.91(m，3H)，7.79(m， 2H)，7.66(d，2H)，4.65(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s， 3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.27分钟。MS：MH+ 572。

实施例341：顺式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮二乙酸 盐

按照上述类似的方式，由3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯胺基]-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮(0.09g，0.000234 mo1)和顺式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺制备顺式-3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1H-1λ6-苯并[d]异噻唑-1，1-二酮二乙酸 盐。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.42(d，1H)，8.23(s，1H)，7.91(m，3H)，7.84(m， 2H)，7.62(d，2H)，4.80(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.07(m，4H)，1.91(s， 6H)，1.65(m，2H)，1.58(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.59分钟。MS：MH+ 572。

实施例342：反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

A.N1-(4-溴苯基)-2-氟苯甲酰胺

将2-氟苯甲酰氯(5.82g，0.0367mol)和4-溴苯胺(6.31g，0.0367 mol)在无水二氯甲烷(150mL)中的溶液冷却至0℃。在氮气气氛中滴 加入N，N-二异丙基乙胺(5.21g，0.0407mol)。在环境温度下搅拌所 得的混合液24小时，浓缩并将剩余物在乙酸乙酯(120mL)和水(100 mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。将剩余物悬 浮在冷乙醚(50mL)中，过滤收集沉淀物并干燥得到白色固体状的 N1-(4-溴苯基)-2-氟苯甲酰胺(9.6g，0.0326mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.54(s，1H)，7.66(m，3H)，7.56(m，3H)，7.34(m， 2H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:2)Rf 0.37。

B.N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺(benzenecarbothioamide)

将N1-(4-溴苯基)-2-氟苯甲酰胺(3.3g，0.0112mol)和2，4-双-(4- 甲氧基苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂环丁烷-2，4-二硫化物(2.27g， 0.00561mol)在甲苯中的混合液在氮气气氛中加热回流3小时。冷却 所述反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，剩余物经快速硅胶柱 层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:6)为流动相得到黄色固体状的 N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺(3.1g，0.010mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.13(s，1H)，7.93(d，2H)，7.62(m，3H)，7.51(m， 1H)，7.31(m，2H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.27。

C.N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯偕胺肟

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺(1.56g，0.00505mol)、盐 酸羟胺(0.44g，0.00631mol)和碳酸氢钠(0.53g，0.00631mol)在无水 乙醇(25mL)中的混合液在氮气气氛中加热回流14小时。冷却所述反 应混合液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水 溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸 镁干燥并浓缩。将剩余物悬浮在冷乙醚中，过滤收集沉淀物并干燥 得到灰白色固体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯偕胺肟(1.21g，0.00392 mol)。

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.12。

D.N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-(4-溴苯基)胺

往N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯偕胺肟(1.51g，0.00489mol)的N-甲 基吡咯烷酮(25mL)溶液中加入叔丁醇钾(0.54g，0.00513mol)，将所 得溶液在100℃下、在氮气气氛中加热3小时。冷却所述反应混合液 至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水溶液(50mL) 和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓 缩。剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:5)为流 动相得到白色固体状的N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-(4-溴苯基)胺(0.95 g，0.00329mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.72(s，1H)，8.13(d，1H)，7.68(d，2H)，7.61(m， 2H)，7.54(d，2H)，7.37(dd，1H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.26。

E.N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯基]胺

将N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-(4-溴苯基)胺(1.30g，0.0045mol)、 二硼酸二频哪醇酯(1.37g，0.0054mol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]- 二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.110g，0.000135mol)的络合物和乙酸 钾(1.32g，0.0135mol)在N，N-二甲基甲酰胺(35mL)中的混合液在80 ℃下、在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减 压除去溶剂。往剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，经Celite滤垫过滤 除去所得固体物。浓缩滤液得到黄色油状物，产物经快速硅胶柱层 析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:5)为流动相得到白色固体状的N-苯 并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯基]胺(0.40g，0.00119mol)

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.74(s，1H)，8.16(d，1H)，7.70(m，4H)，7.61(d， 2H)，7.37(dd，1H)，1.29(s，12H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.21。

F.反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

将N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯基]胺(0.10g，0.000298mol)、反式-3-碘-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.101g，0.000229 mol)、四-(三苯基膦)合钯(0.016g，0.0000137mol)和碳酸钠(0.061g， 0.000573mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在80℃ 下、在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压 除去溶剂。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在25 分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色固体状 的反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐(0.102g，0.000175mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.81(s，1H)，8.23(s，1H)，8.19(d，1H)，7.88(d，2H)， 7.65(m，4H)，7.40(m，1H)，4.65(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)， 1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.66分钟。

MS：MH+ 524。

实施例343：顺式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯并[d]异噁唑-3-胺二乙酸盐

按照上述类似的方式，由N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四 甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺和顺式-3-碘-1-[4-(4-甲基 哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺制备顺式-N3-(4-{4-氨 基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)苯 并[d]异噁唑-3-胺二乙酸盐。

1H NMR(DMSo-d6，400MHz)δ 9.86(s，1H)，8.26(s，1H)，8.24(d，1H)，7.93(d，2H)， 7.67(m，4H)，7.43(m，1H)，4.83(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s，3H)，2.08(m，4H)， 1.91(s，6H)，1.74(m，2H)，1.62(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 13.77分钟。

MS：MH+ 524。

实施例344：N3-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯基}苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

将-N-苯并[d]异噁唑-3-基-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂 环戊烷-2-基)苯基]胺(0.087g，0.000258mol)、4-(4-氨基-3-碘-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.088g，0.000198mol)、四 -(三苯基膦)合钯(0.014g，0.000012mol)和碳酸钠(0.053g，0.000495 mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在80℃下、在氮气 气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂， 使剩余物在水和二氯甲烷间分配。有机相用硫酸镁干燥，减压浓缩 得到粗制的4-{4-氨基-3-[4-(苯并[d]异噁唑-3-基氨基)苯基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-1-基}-1-哌啶甲酸叔丁酯，产物未经纯化直接使用。

将上述产物溶于乙酸乙酯(5mL)中，用4N盐酸溶液(1mL)处理。 将所得乳液剧烈搅拌1小时；水层用饱和碳酸氢钠水溶液中和，分 离各层。减压浓缩有机相，剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm， 25cm；在25分钟内用10-60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到白色固体状的N3-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]苯基}苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐(0.009g，0.0000185mol)。

1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.82(s，1H)，8.20(m，2H)，7.89(d，2H)，7.65(m， 4H)，7.41(t，1H)，4.74(m，1H)，3.07(m，2H)，2.65(m，2H)，2.04(m，2H)，1.90(s， 3H)，1.79(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.20分钟。

MS：MH+ 427。

实施例345：反式-3-[4-(1H-3-吲唑基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1- 基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

A.N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯基亚肼基甲胺

(benzenecarbohydrazonamide)

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-硫代苯甲酰胺(1.50g，0.00485mol)和1M 肼的四氢呋喃(6.3mL，0.0063mol)溶液在无水乙醇(25mL)中、在氮 气气氛中加热回流14小时。加入另外3mL的1M肼的四氢呋喃溶 液，再回流搅拌6小时。冷却所述反应混合液至环境温度，减压除 去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL) 间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩得到黄褐色固体 状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯基亚肼基甲胺(1.54g，0.0050mol)。

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:3)Rf 0.10。

B.N-(4-溴苯基)-N-(1H-3-吲唑基)胺

往N1-(4-溴苯基)-2-氟-1-苯基亚肼基甲胺(1.2g，0.00391mol)的 N-甲基吡咯烷酮(25mL)溶液中加入叔丁醇钾(0.50g，0.0041mol)， 将所得溶液在100℃下、在氮气气氛中加热3小时。冷却所述反应混 合液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥 并浓缩。剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1∶5) 为流动相得到白色固体状的N-(4-溴苯基)-N-(1H-3-吲唑基)胺(0.29g， 0.0010mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.06(s，1H)，9.03(s，1H)，7.93(d，1H)，7.65(d， 2H)，7.35(m，4H)，7.03(dd，1H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1∶3)Rf 0.26。

C.N-(1H-3-吲唑基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷 -2-基)苯基]胺

将N-(4-溴苯基)--N-(1H-3-吲唑基)胺(0.29g，0.00101mol)、二硼 酸二频哪醇酯(0.31g，0.00121mol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]-二 氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.025g，0.00003mol)的络合物和乙酸钾 (0.294g，0.003mol)在N，N-二甲基甲酰胺(35mL)中的混合液在80℃ 下、在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压 除去溶剂。往剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，所得的固体物经Celite 滤垫过滤除去。浓缩滤液得到黄色油状物，产物经快速硅胶柱层析 纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:3)为流动相得到灰白色固体状的N- (1H-3-吲唑基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]胺(0.064g，0.000191mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.09(s，1H)，9.06(s，1H)，7.94(d，1H)，7.64(d， 2H)，7.57(d，2H)，7.35(m，2H)，7.03(dd，1H)，1.28(s，12H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:3)Rf 0.21。

D.反式-3-[4-(1H-3-吲唑基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环 己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

将N-(1H-3-吲唑基)-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)苯基]胺(0.064g，0.000191mol)、反式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪 -1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.070g，0.000159mol)、 四-(三苯基膦)合钯(0.011g，0.0000095mol)和碳酸钠(0.042g，0.000398 mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在80℃下、在氮气 气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。 剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm；在25分钟内用10- 60％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色固体状的反式-3-[4- (1H-3-吲唑基氨基)苯基]-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.035g，0.000060mol)。

-1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.09(s，1H)，9.14(s，1H)，8.21(s，1H)，7.99(d， 1H)，7.83(d，2H)，7.55(d，2H)，7.37(m，2H)，7.06(t，1H)，4.64(m，1H)，2.6-2.2(br， 9H)，2.13(s，3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.49(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 12.96分钟。

MS：MH+ 523。

实施例346：反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

A.N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺

将2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰氯(5.05g，0.0223mol)和4-溴苯胺 (3.83g，0.0223mol)在无水二氯甲烷(150mL)中的溶液冷却至0℃， 在氮气气氛中滴加入N，N-二异丙基乙胺(4.26mL，0.0245mol)。在环 境温度下搅拌所得的混合液24小时，浓缩并使剩余物在乙酸乙酯(120 mL)和水(100mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。 将剩余物悬浮在冷正庚烷(50mL)中，过滤收集沉淀物并干燥得到白 色固体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(7.1g，0.0196 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.74(s，1H)，7.90(m，2H)，7.74(d，1H)，7.68(d， 2H)，7.56(d，2H).

B.N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-硫代苯甲酰胺

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(7.1g，0.0196mol) 和2，4-双-(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂环丁烷-2，4-二硫化物 (3.97g，0.0098mol)在甲苯中的混合液在氮气气氛中加热回流3小 时。冷却所述反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，剩余物经快 速硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1:8)为流动相得到黄色固 体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-硫代苯甲酰胺(6.0g，0.0159 mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 12.33(s，1H)，7.94(d，2H)，7.81(m，2H)，7.65(m， 3H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.61。

C.N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-苯偕胺肟

将N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-硫代苯甲酰胺(2.50g， 0.00663mol)、盐酸羟胺(0.65g，0.00928mol)和碳酸氢钠(0.78g， 0.00928mol)在无水乙醇(25mL)中的混合液在氮气气氛中加热回流14 小时。冷却所述反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物 在饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用 盐水洗涤，用硫酸镁干燥并浓缩。将剩余物悬浮在冷正庚烷中，过 滤收集沉淀物并干燥得到灰白色固体状的N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟 甲基)-1-苯偕胺肟(2.35g，0.00625mol)。

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:4)Rf 0.12。

D.-N-(4-溴苯基)-N-[6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺

往N1-(4-溴苯基)-2-氟-4-(三氟甲基)-1-苯偕胺肟(2.25g，0.00598 mol)的N-甲基吡咯烷酮(30mL)溶液中加入叔丁醇钾(0.71g，0.00628 mol)，将所得溶液在100℃下、在氮气气氛中加热3小时。冷却所述 反应混合液至环境温度，减压除去溶剂，使剩余物在饱和碳酸氢钠 水溶液(50mL)和乙酸乙酯(50mL)间分配。有机相用盐水洗涤，用硫 酸镁干燥并浓缩。将剩余物悬浮在冷正庚烷中，过滤收集沉淀物并 干燥得到灰白色固体状的N-(4-溴苯基)-N-[6-(三氟甲基)苯并[d]异噁 唑-3-基]胺(1.75g，0.0049mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.95(s，1H)，8.37(d，1H)，8.14(s，1H)，7.78(d，1H)， 7.68(d，2H)，7.58(d，2H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:5)Rf 0.31。

E.N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N-[6- (三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺

将N-(4-溴苯基)-N-[6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺(1.75g， 0.0049mol)、二硼酸二频哪醇酯(1.49g，0.0059mol)、[1，1′-双(二苯 基膦基)二茂铁]-二氯合钯(II)与二氯甲烷(1:1)(0.120g，0.000147mol) 的络合物和乙酸钾(1.44g，0.0144mol)在N，N-二甲基甲酰胺(10mL) 中的混合液在80℃及在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至 环境温度，减压除去溶剂。往剩余物中加入二氯甲烷(70mL)，经Celite 滤垫过滤除去所得固体物。浓缩滤液得到黄色油状物，产物经快速 硅胶柱层析纯化，使用乙酸乙酯/正庚烷(1∶6)为流动相得到白色固体 状的-N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N-[6- (三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺(0.065g，0.000161mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.97(s，1H)，8.39(d，1H)，8.14(s，1H)，7.77(d，1H)， 7.71(s，4H)，1.29(s，12H).

F.反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐

将N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-N- [6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-基]胺(0.062g，0.000153mol)、反式-3- 碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.065 g，0.000146mol)、四-(三苯基膦)合钯(0.010g，0.0000087mol)和碳 酸钠(0.039g，0.000365mol)在乙二醇二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混 合液在80℃下、在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至环境 温度，减压除去溶剂。剩余物经制备HPLC(Hypersil C18，8μm，25cm； 在30分钟内用10-70％乙腈-0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到白色 固体状的反式-N3-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-6-(三氟甲基)苯并[d]异噁唑-3-胺乙酸盐 (0.026g，0.0000398mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.05(s，1H)，8.44(d，1H)，8.23(s，1H)，8.16(s， 1H)，7.88(d，2H)，7.79(d，1H)，7.69(d，2H)，4.67(m，1H)，2.6-2.2(br，9H)，2.13(s， 3H)，2.05(m，6H)，1.91(s，3H)，1.46(m，2H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-85％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 16.18分钟。

MS：MH+ 592。

实施例347：N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(2-甲基-1H-4-咪唑基)甲基]-4-哌啶 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲 酰胺二马来酸盐

A.N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(6.75g， 17.73mmol)、N2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊 烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(7.571g，18.63mmol)、四(三 苯基膦)合钯(1.23g，1.06mmol)和碳酸钠(8.27g，78.03mmol)与乙 二醇二甲醚(180mL)和水(90mL)混合。将所述反应混合液加热回流 过夜。减压除去有机溶剂，将含水悬浮液用大量的二氯甲烷萃取。 将合并的有机层依次用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。 剩余物经快速柱层析纯化，以二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵(90:10:0.5至 60:40:0.5)为流动相得到N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(4.38g)。将含水 悬浮液过滤，用水洗涤并干燥得到N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(2.77 g)。合并固体物(7.15g，81％)。

                               1H NMR(DMSO-d6)δ 1.85(m，2H)，2.08(m， 2H)，2.64(m，2H)，3.10(m，2H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.77(m，1H)，7.13(m， 1H)，7.33(m，4H)，7.58(d，J＝8.45Hz，1H)，7.71(d，J＝7.94Hz，1H)，8.12(d，J＝8.15 Hz，1H)，8.25(s，1H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：4.5分钟内用30％B/A至 95％B/A(B∶乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，PH 4.5)，0.8mL/分钟)： RT＝1.97分钟MH+＝497.3。

B.N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(2-甲基-1H-4-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(250mg，0.503mmol)、2-甲基- 1H-4-咪唑甲醛(83mg，0.755mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(159mg， 0.755mmol)和冰醋酸(30mg，0.554mmol)在1，2-二氯乙烷(6mL)中混 合。在室温下搅拌所述反应混合液过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液， 调节pH至约8。分离各层，水层用二氯甲烷萃取。将合并的有机层 用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发。剩余物经快速柱层析纯 化，以二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵(95:5:0.5至80:20:05)为流动相得到 N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(2-甲基-1H-4-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(215mg， 72％)。

                                                           1HNMR (DMSO-d6)δ 1.91(m，2H)，2.23(m，7H)，3.00(m，2H)，3.41(s，2H)，3.96(s，3H)， 4.04(s，3H)，4.78(m，1H)，6.72(s，1H)，7.15(m，1H)，7.32(m，4H)，7.78(d，J＝8.43 Hz，1H)，7.70(d，J＝7.92Hz，1H)，8.11(d，J＝7.92Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.44(s， 1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm.洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝2.00分钟MH+＝591.3。

C.N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(2-甲基-1H-4-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺 二马来酸盐

将N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(2-甲基-1H-4-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺 (210mg，0.355mmol)溶于热乙酸乙酯(25mL)和几滴乙醇中。加入马 来酸(83mg，0.711mmol)在热乙酸乙酯(3mL)中的溶液。在室温下搅 拌所述反应混合液3小时。过滤收集固体物得到N2-[4-(4-氨基-1-{1- [(2-甲基-1H-4-咪唑基)甲基]-4-哌啶基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2- 甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐(255mg，87％)。

1H NMR(DMSO-d6)δ 2.12(m，2H)，2.43(m，5H)，2.92(m，2H)，3.38(m，2H)，3.96 (s，3H)，3.99(s，2H)，4.04(s，3H)，4.93(m，1H)，6.13(s，4H)，7.16(m，1H)，7.34(m， 5H)，7.60(d，J＝8.43Hz，1H)，7.70(d，J＝7.92Hz，1H)，7.72(d，J＝8.15Hz，1H)，8.27 (s，1H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝1.98分钟MH+＝591.3。

实施例348：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-4-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来 酸盐

A.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-4-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二乙酸盐

将N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(250mg，0.503mmol)、1H-4-咪 唑甲醛(73mg，0.755mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(159mg，0.755mmol) 和冰醋酸(30mg，0.554mmol)在1，2二氯乙烷(6mL)中混合。在室温 下搅拌所述反应混合液过夜。加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH至约8。 分离各层，水层用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用 硫酸镁干燥，过滤并蒸发。剩余物首先经快速柱层析纯化，以二氯 甲烷/甲醇/氢氧化铵(95:5:0.5至80:20:05)为流动相，随后再经反相制 备HPLC纯化，使用乙腈/水(50mM乙酸铵缓冲液)为流动相得到N2- (4-{4-氨基-1-[1-(1H-4-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二乙酸盐(170mg， 49％)。

                   1H NMR(DMSO-d6)δ 1.90(m，8H)，2.20(m，4H)，2.99(m， 2H)，3.47(s，2H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.67(m，1H)，7.15(m，1H)，7.31(m， 5H)，7.54(s，1H)，7.58(d，J＝8.43Hz，1H)，7.70(d，J＝7.95Hz，1H)，8.10(d，J＝8.14 Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝1.97分钟MH+＝577.3。

B.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-4-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐

将N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-4-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二乙酸盐 (170mg，0.244mmol)溶于热乙酸乙酯(25mL)和几滴乙醇中。加入马 来酸(103mg，0.884mmol)在热乙酸乙酯(3mL)中的溶液。在室温下 搅拌所述反应混合液3小时。过滤收集固体物得到N2-(4-{4-氨基-1- [1-(1H-4-咪唑基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧 基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐(153mg，76％)。

    1H NMR(DMSO-d6)δ 2.19(m，2H)，2.49(m，2H)，3.19(m，2H)，3.52(m， 2H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.21(s，2H)，5.02(m，1H)，6.15(s，4H)，7.16(m， 1H)，7.32(m，5H)，7.40(s，1H)，7.59(d，J＝8.45Hz，1H)，7.71(d，J＝7.95Hz，1H)， 7.98(bs，1H)，8.13(d，J＝8.16Hz，1H)，8.27(s，1H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝1.98分钟MH+＝577.3。

实施例349：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐

A.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(250mg，0.503mmol)、1-溴-2-氟 乙烷(47ul，0.629mmol)、碳酸钾(87mg，0.629mmol)和碘化钠(10mg， 0.066mmol)在DMF(3mL)中混合。将所述反应混合液在80℃下加热 过夜。粗制的反应混合液经反相制备HPLC纯化，使用乙腈/水(50mM 乙酸铵缓冲液)为流动相得到N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-氟乙基)-4-哌啶 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲 酰胺(221mg，81％)。

                                           1HNMR(DMSO-d6)δ 1.91(m， 2H)，2.26(m，4H)，2.66(m，1H)，2.73(m，1H)，3.05(m，2H)，3.97(s，3H)，4.04(s， 3H)，4.61(m，1H)，4.61(m，1H)，4.64(m，1H)，7.15(m，1H)，7.33(m，4H)，7.58(d， J＝8.46Hz，1H)，7.70(d，J＝7.95Hz，1H)，8.11(d，J＝8.14Hz，1H)，8.25(s，1H)，9.44 (s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝2.17分钟MH+＝543.3。

B.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐

将N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(221mg，0.407mmol) 溶于热乙酸乙酯(25mL)和几滴乙醇中。加入马来酸(94mg，0.814mmol) 在热乙酸乙酯(3mL)中的溶液。在室温下搅拌所述反应混合液过夜。 没有形成沉淀。除去有机溶剂。将固体物在乙酸乙酯中研磨。过滤 收集固体物得到N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-氟乙基)-4哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐 (252mg，80％)。

                                              1H NMR(DMSO-d6)δ 2.34(m， 2H)，2.54(m，2H)，3.49-3.67(m，6H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.81(m，1H)，4.92 (m，1H)，5.06(m，1H)，6.14(s，4H)，7.16(m，1H)，7.34(m，4H)，7.60(d，J＝8.32Hz， 1H)，7.70(d，J＝7.95Hz，1H)，8.14(d，J＝8.15Hz，1H)，8.29(s，1H)，9.45(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱：Genesis， C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：4.5分钟内用30％B/A至95％B/A(B： 乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，PH 4.5)，0.8mL/分钟)：RT＝2.17分 钟MH+＝543.3。

实施例350：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2，2-二氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐

A.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2，2-二氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(250mg，0.503mmol)、2-溴-1，1- 二氟乙烷(91mg，0.629mmol)、碳酸钾(87mg，0.629mmol)和碘化 钠(10mg，0.066mmol)在DMF(3mL)中混合。在80℃下加热所述反 应混合液过夜。HPLC检测仅显示发生了约50％的转化。降低浴温至 55℃，加入更多的2-溴-1，1-二氟乙烷(0.1mL)。在55℃下搅拌过夜后， 加入更多的2-溴-1，1-二氟乙烷(0.1mL)，在55℃下搅拌所述反应混合 液过夜。HPLC检测显示大部分的原料已转化为产物。粗制的反应混 合液经反相制备HPLC纯化，使用乙腈/水(50mM乙酸铵缓冲液)为流 动相得到N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2，2-二氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(227mg， 81％)。

                                                            1H NMR (DMSO-d6)δ 1.89(m，2H)，2.27(m，2H)，2.42(m，2H)，2.80(m，1H)，3.05(m，2H)， 3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.69(m，1H)，6.17(tt，J＝55.81Hz，J＝4.35Hz，1H)，7.15 (m，1H)，7.33(m，4H)，7.78(d，J＝7.94Hz，1H)，7.70(d，J＝7.94Hz，1H)，8.11(d， J＝8.19Hz，1H)，8.25(s，1H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：4.5分钟内用30％B/A至 95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，PH 4.5)，0.8mL/分钟)： RT＝3.32分钟MH+＝561.3。

B.N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2，2-二氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐

将N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2，2-二氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(227mg，0.405 mmol)溶于热乙酸乙酯(25mL)中。加入马来酸(94mg，0.810mmol) 在热乙酸乙酯(3mL)中的溶液。在室温下搅拌所述反应混合液过夜。 没有形成沉淀物。在室温下搅拌4天后，在烧瓶底部形成了沉淀物。 倾析出溶剂。固体物用乙酸乙酯洗涤并干燥得到N2-(4-{4-氨基-1-[1- (2，2-二氟乙基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)- 1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺二马来酸盐(220mg，68％)。

1H NMR(DMSO-d6)δ 2.05(m，2H)，2.40(m，2H)，2.84-3.32(bm，6H)，3.96(s， 3H)，4.04(s，3H)，4.85(m，1H)，6.22(s，4H)，6.34(t，J＝56.07Hz，1H)，7.15(m，1H)， 7.33(m，4H)，7.59(d，J＝8.45Hz，1H)，7.70(d，J＝7.94Hz，1H)，8.12(d，J＝8.19Hz， 1H)，8.28(s，1H)，9.45(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝3.32分钟MH+＝561.3。

实施例351：N2-{4-[4-氨基-1-(1-乙基-4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲 氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(250mg，0.503mmol)、乙醛(44 mg，1.007mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(212mg，1.007mmol)在1，2- 二氯乙烷(6mL)中混合。在室温下搅拌所述反应混合液过夜。除去溶 剂，剩余物经反相制备HPLC纯化，使用乙腈/水(50mM乙酸铵缓冲 液)为流动相，得到N2-{4-[4-氨基-1-(1-乙基-4哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(247mg，93％)。

                              1H NMR(DMSO-d6)δ 1.04((t，J＝7.15Hz，3H)， 1.92(m，2H)，2.08(m，2H)，2.25(m，2H)，2.40(q，J＝7.15Hz，2H)，3.03(m，2H)， 3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.68(m，1H)，7.13(m，1H)，7.33(m，4H)，7.58(d， J＝8.00Hz，1H)，7.70(d，J＝7.95Hz，1H)，8.11(d，J＝8.15Hz，1H)，8.25(s，1H)，9.44 (s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：4.5分钟内用30％B/A至 95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，PH 4.5)，0.8mL/分钟)： RT＝2.08分钟MH+＝525.3。

使用实施例351描述的方法制备实施例352-356的化合物。 实施例352：N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(3-甲基-1H-4-吡唑基)甲基]-4-哌啶 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲 酰胺乙酸盐

产率：187mg，63％

1H NMR(DMSO-d6)δ 1.91(m，2H)，2.09(m，2H)，2.19(m，5H)，2.96(m，2H)，3.35 (s，2H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.67(m，1H)，7.17(m，1H)，7.31(m，5H)，7.58(d， J＝8.46Hz，1H)，7.70(d，J＝7.94Hz，1H)，8.10(d，J＝8.15Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.44 (s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝2.03分钟MH+＝591.3。

实施例353：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(3-呋喃基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

产率：233mg，80％

1H NMR(DMSO-d6)δ 1.91(m，2H)，2.13-2.23(m，4H)，3.00(m，2H)，3.39(s，2H)， 3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.68(m，1H)，6.47(s，1H)，7.31(m，4H)，7.60(m，3H)， 7.70(d，J＝7.94Hz，1H)，8.11(d，J＝8.05Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝2.37分钟MH+＝577.3。

实施例354：N2-{4-[4-氨基-1-(1-四氢-2H-4-吡喃基-4-哌啶基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

按照实施例351描述的方法，但反应在70℃下进行过夜，而非 在室温下进行过夜。

产率：176mg，71％。

1H NMR(DMSO-d6)δ 1.46(m，2H)，1.71(m，2H)，1.91(m，2H)，2.20(m，2H)，2.30 (m，2H)，3.07(m，3H)，3.27(m，2H)，3.91(m，2H)，3.96(s，3H)，4.04(s，3H)，4.67 (m，1H)，7.15(m，1H)，7.33(m，4H)，7.58(d，J＝8.44Hz，1H)，7.70(d，J＝7.94Hz， 1H)，8.10(d，J＝8.04Hz，1H)，8.24(s，1H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝2.08分钟MH+＝581.3。

实施例355：N2-(4-{4-氨基-1-[(1-乙酰基哌啶-4-基)-哌啶-4-基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

按照实施例351描述的方法，但反应在70℃下进行过夜，而非 在室温下进行过夜。

产率：223mg，71％。

1H NMR(DMSO-d6)δ 1.28(m，1H)，1.43(m，1H)，1.75(m，2H)，1.91(m，2H)，1.99 (s，3H)，2.19(m，2H)，2.34(m，2H)，2.54(m，2H)，3.01(m，3H)，3.83(m，1H)，3.96 (s，3H)，4.04(s，3H)，4.38(m，1H)，4.66(m，1H)，7.15(m，1H)，7.31(m，4H)，7.78 (d，J＝7.94Hz，1H)，7.70(d，J＝7.94Hz，1H)，8.11(d，J＝8.15Hz，1H)，8.24(s，1H)， 9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝1.97分钟MH+＝622.3。

实施例356：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(4-吡啶基甲基)-4-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

产率：57mg，18％。

1H NMR(DMSO-d6)δ 1.91(m，2H)，2.28(m，4H)，3.95(m，2H)，3.59(s，2H)，3.96 (s，3H)，4.04(s，3H)，4.71(m，1H)，7.17(m，1H)，7.34(m，6H)，7.59(d，J＝8.03Hz， 1H)，7.71(d，J＝7.94Hz，1H)，8.11(d，J＝8.14Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.52(d，J＝5.78 Hz，2H)，9.44(s，1H).

LCMS(Thermoquest AQA single Quad MS，Finnigan HPLC-柱： Genesis，C18，3μm，33 x 4.6mm。洗脱液：在4.5分钟内用30％B/A 至95％B/A(B：乙腈，A：50mM乙酸铵缓冲液，pH 4.5)，0.8mL/分 钟)：RT＝2.50分钟MH+＝588.3。

实施例357：N2-(4-{4-氨基-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

A.1-(3-溴丙基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(10.00g，38.31mmol)在四氢 呋喃(150mL)中的悬浮液用3-溴-1-丙醇(15.98g，114.93mmol)和三 苯基膦(20.1g，76.62mmol)处理。往所述反应混合液中缓慢加入偶 氮二甲酸二乙酯(13.34g，76.62mmol)。将所述反应混合液在0℃下 搅拌30分钟，随后移去冰浴，在室温下搅拌30分钟。将所述反应 混合液部分浓缩，加入乙酸乙酯(200mL)。滤出沉淀物并浓缩滤液至 干燥。粗制的化合物经快速硅胶柱层析纯化，使用100％乙酸乙酯作 为洗脱液，得到7.8g(53％)1-(3-溴丙基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺。

                               1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.230(s，1H)， 4.419-4.385(t，2H)，3.530-3.498(t，2H)，2.370-2.304(q，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；在6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈， 0.8至0.5mL/min)Rt 2.05分钟(100％)，MH+ 422.9。

B.3-碘-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将1-(3-溴丙基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.31 mmol)在二甲基甲酰胺(10mL)中的悬浮液用1-甲基哌嗪(0.157g， 1.572mmol)和三乙胺(0.133g，1.31mmol)处理。70℃下搅拌所述反 应混合液66.25小时。减压除去溶剂。加入二氯甲烷(15mL)和1N 盐酸(20mL)。分离各层，水层用二氯甲烷(100mL)洗涤。将水层中 和至pH 13，随后用二氯甲烷(250mL)萃取。有机层用硫酸镁干燥， 过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用逐步梯度溶 液：在55分钟内用20％甲醇的二氯甲烷溶液至50％甲醇的二氯甲烷 溶液，35g ISCO柱。得到0.238g(45％)纯的3-碘-1-[3-(4-甲基哌嗪-1- 基)丙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。

    1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.191(s，1H)，4.308-4.273(t，2H)，2.262- 2.228(m，10H)，1.944-1.877(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；在6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈， 0.8至0.5mL/min)Rt 0.75分钟(100％)，MH+ 402.1。

C.N2-(4-{4-氨基-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将3-碘-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 (0.188g，0.469mmol)的乙二醇二甲醚(16mL)溶液用N2-[2-甲氧基-4- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚 甲酰胺(0.209g，0.516mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.033g，0.028mmol) 和碳酸钠(0.119g，1.13mmol)的水溶液(8mL)处理。80℃下搅拌所述 反应混合液4.5小时。减压除去有机溶剂，加入乙酸乙酯(200mL)。 分离各层，水层用乙酸乙酯(400mL)萃取。合并的有机层经硫酸镁干 燥。过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用逐步梯 度溶液：20％甲醇的二氯甲烷溶液至50％甲醇的二氯甲烷溶液。得到 0.078g(30％)纯的N2-(4-{4-氨基-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                             1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.442(s，1H)， 8.258(s，1H)，8.122-8.1076(d，1H，J＝8.16Hz)，7.719-7.6991(d，1H，J＝7.96Hz)， 7.6005-7.5793(d，1H，J＝8.48Hz)，7.349-7.294(m，4H)，7.172-7.135(t，1H)， 4.405-4.371(m，2H)，4.04(s，3H)，3.958(s，3H)，3.291(m，2H)，2.5(m，3H)，2.45- 2337(m，5H)，2.30-2.10(m，3H)，2.022-2.005(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；在6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈， 0.8至0.5mL/分钟)Rt 2.05min(100％)，MH+ 554.3。

实施例358：N2-{4-[4-氨基-1-(3-吗啉-4-基丙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

A.3-碘-1-(3-吗啉-4-基丙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将1-(3-溴丙基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.31 mmol)在二甲基甲酰胺(10mL)中的悬浮液用吗啉(0.137g，1.572mmol) 和三乙胺(0.133g，1.31mmol)处理。将所述反应混合液在70℃下搅 拌66.25小时。减压除去溶剂。加入二氯甲烷(15mL)和1N盐酸(20 mL)。分离各层，水层用二氯甲烷(100mL)洗涤。中和水层至pH14， 随后用二氯甲烷(250mL)萃取。有机层用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸 发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用逐步梯度溶液：在58分钟 内用10％甲醇的二氯甲烷溶液至50％甲醇的二氯甲烷溶液；使用35g ISCO柱。得到0.244g(48％)纯的3-碘-1-(3-吗啉-4-基丙基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺。

                                                               1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.194(s，1H)，4.327-4.293(t，2H)，3.485-3.364(m， 4H)，2.253-2.238(m，6H)，1.963-1.895(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA singlequad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 0.71分钟(100％)，MH+ 389.0。

B.N2-{4-[4-氨基-1-(3-吗啉-4-基丙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将3-碘-1-(3-吗啉-4-基丙基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.244 g，0.629mmol)的乙二醇二甲醚(16mL)溶液用N2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5- 四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺 (0.281g，0.692mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.044g，0.038mmol)和碳 酸钠(0.160g，1.51mmol)的水溶液(8mL)处理。80℃下搅拌所述反应 混合液4.5小时。减压除去有机溶剂，加入乙酸乙酯(200mL)。分离 各层，水层用乙酸乙酯(400mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥。 过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用逐步梯度溶 液：10％甲醇的二氯甲烷溶液至50％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱 液。得到0.191g(56％)纯的N2-{4-[4-氨基-1-(3-吗啉-4-基丙基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                 1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.440(s，1H)， 8.260(s，1H)，8.1229-8.1026(d，1H，J＝8.12Hz)，7.7184-7.6986(d， 1H，J＝7.92Hz)，7.5983-7.578(d，1H，J＝8.08Hz)，7.345-7.290(m， 4H)，7.172-7.133(m，1H)，4.421-4386(m，2H)，4.04(s，3H)，3.958(s， 3H)，3.521-3.500(m，4H)，2.349-2.314(m，6H)，2.035-2.001(m， 2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.05分钟(100％)，MH+ 541.3。

实施例359：N2-(4-{4-氨基-1-[3-(1H-1-咪唑基)丙基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

A.1-[3-(1H-1-咪唑基)丙基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

将1-(3-溴丙基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.500g，1.31 mmol)在二甲基甲酰胺(10mL)中的悬浮液用咪唑(0.107g，1.572mmol) 和三乙胺(0.133g，1.31mmol)处理。70℃下搅拌所述反应混合液25.5 小时。减压除去溶剂。加入二氯甲烷(15mL)和1N盐酸(20mL)。分 离各层和水层用二氯甲烷(100mL)洗涤。中和水层至pH14，随后用 二氯甲烷(250mL)萃取。有机层用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。粗 产物经快速硅胶柱层析纯化，使用10％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗 脱液。得到0.086g(18％)纯的1-[3(1H-1-咪唑基)丙基]-3-碘-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-4-胺。

                                                              1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 8.211(s，1H)，7.896(s，1H)，7.264(s，1H)，6.96(s，1H)， 4.32-4.227(m，2H)，4.011-3.977(m，2H)，2.329-2.215(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 0.46分钟(100％)，MH+ 370.0。

B.N2-(4-{4-氨基-1-[3-(1H-1-咪唑基)丙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将1-[3-(1H-1-咪唑基)丙基]-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 (0.086g，0.233mmol)在乙二醇二甲醚(4mL)中的悬浮液用N2-[2-甲 氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-甲基- 1H-2-吲哚甲酰胺(0.104g，0.256mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.016g， 0.014mmol)和碳酸钠(0.059g，0.56mmol)水溶液(2mL)处理。80℃ 下搅拌反应混合液24小时。减压除去有机溶剂，加入二氯甲烷(25 mL)。分离各层和水层用二氯甲烷(100mL)萃取。合并的有机层经硫 酸镁干燥，过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用 逐步梯度溶液：5％甲醇的二氯甲烷溶液至50％甲醇的二氯甲烷溶液； 采用10g ISCO柱。得到0.06g(49％)纯的N2-(4-{4-氨基-1-[3-(1H-1- 咪唑基)丙基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H- 2-吲哚甲酰胺。

                                                    1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.443(s，1H)，8.278(s，1H)，8.1324-8.1121(d，1H，J＝8.12Hz)，7.744- 7.699(m，2H)，7.6-7.579(d，1H，J＝8.4Hz)，7.365-7.283(m，5H)，7.172-7.135(m， 1H)，6.939(s，1H)，4.36-4.326(m，2H)，4.079-4.019(m，5H)，3.964(s，3H)，2.324- 2.309(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.25分钟(100％)，MH+ 522.3。

实施例360：N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

A.3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁 酯

将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(5.0g，19.15mmol)在四氢呋 喃(100mL)中的悬浮液用3-羟基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(5.38g，28.73 mmol)和三苯基膦(7.53g，28.73mmol)处理。在冰浴中将所述反应混 合液冷却至0℃。往所述反应混合液中缓慢加入偶氮二甲酸二乙酯(5.0 g，28.73mmol)。6天后减压除去溶剂。所得的粗制油状物未经进一 步分析直接用于随后的反应中。

B.3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐

将粗制的3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-吡咯烷甲 酸叔丁酯的丙酮(100mL)悬浮液用6N盐酸(50mL)处理。在40℃下 搅拌所述反应混合液15小时。过滤出初始时产生的沉淀物，经LCMS 确认为杂质。将所述反应混合液在室温下静置，使产生的沉淀过夜。 滤出沉淀物并用乙醚洗涤。过滤得到2.186g(31％)纯的3-碘-1-四氢- 1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐。

                                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.8815(s， 1H)，8.9923(br.s，1H)，8.4803(s，1H)，7.82(br.s，1H)，5.5908-5.5295(m，1H)， 3.7131-3.6706(m，1H)，3.5590-3.5003(m，1H)，3.4466-3.4174(m，2H)，2.4592- 2.4255(m，1H)，2.4064-2.3146(m，1H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 1.09分钟(100％)，MH+ 331.0。

C.N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将3-碘-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐 (2.186g，5.96mmol)在乙二醇二甲醚(50mL)中的悬浮液用N2-[2-甲 氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-甲基- 1H-2-吲哚甲酰胺(2.66g，6.56mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.413g，0.358 mmol)和碳酸钠(2.65g，25.03mmol)水溶液(25mL)处理。80℃下搅 拌反应混合液24小时。减压除去有机溶剂。加入二氯甲烷(100mL) 和1N氢氧化钠(50mL)。在水层中沉淀出产物。减压蒸发除去水层。 所得固体物用大量的二氯甲烷和乙酸乙酯洗涤。减压除去有机溶剂 得到2.218g(77％)纯的N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                   1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.443(s，1H)，8.256(s， 1H)，8.1168-8.0965(d，1H，J＝8.12Hz)，7.7181-7.6983(d，1H，J＝7.92Hz)，7.598- 7.5778(d，1H，J＝8.08Hz)，7.349-7.291(m，4H)，7.171-7.132(m，1H)，5.332-5.313 (m，1H)，4.041(s，3H)，3.96(s，3H)，3.224-3.058(m，3H)，2.926-2.910(m，1H)， 2.213-2.158(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.09分钟(100％)，MH+ 483.3。

实施例361：N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(1-甲基-1H-2-咪唑基)甲基]四氢-1H- 3-吡咯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲 哚甲酰胺

将N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.250g，0.518mmol)在 二氯乙烷(5mL)中的悬浮液用1-甲基-2-咪唑甲醛(0.115g，1.04mmol) 和三乙酰氧基硼氢化钠(0.220g，1.04mmol)处理。在室温下及氮气 气氛中搅拌所述反应混合液18小时。往所述反应混合液中加入氢氧 化钠(1N，15mL)并搅拌1小时。减压除去有机层，加入二氯甲烷。 分离各层，水层用二氯甲烷(200mL)萃取。合并的有机层经硫酸镁干 燥，过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用10％甲 醇的二氯甲烷溶液(15min)、15％甲醇的二氯甲烷溶液(15min)、20％ 甲醇的二氯甲烷溶液(20min)和50％甲醇的二氯甲烷溶液(5min)作为 洗脱液。得到0.060g(20％)纯的N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(1-甲基-1H-2-咪 唑基)甲基]四氢-1H-3-吡咯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基 苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                                              1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ□9.446(s，1H)，8.249(s，1H)，8.1312-8.1108(d，1H，J＝8.16Hz)，7.7207- 7.7008(d，1H，J＝7.96Hz)，7.6023-7.5812(d，1H，J＝8.44Hz)，7.356-7.293(m， 4H)，7.174-7.120(m，2H)，6.822(s，1H)，5.425-5.391(m，1H)，4.044(s，3H)，3.962 (s，3H)，3.693(m，2H)，3.651(s，3H)，2.86-2.797(m，3H)，2.368-2.323(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.34分钟(100％)，MH+ 577.3。

实施例362：N2-{4-[4-氨基-1-(1-异丙基四氢-1H-3-吡咯基)-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.250g，0.518mmol)在 二氯乙烷(5mL)中的悬浮液用丙酮(1.96g，33.15mmol)和三乙酰氧基 硼氢化钠(0.220g，1.04mmol)处理。在室温下及氮气气氛中搅拌所 述反应混合液18小时。往所述反应混合液中加入氢氧化钠(1N，15mL) 并搅拌1小时。减压除去有机层，加入二氯甲烷。分离各层，水层 用二氯甲烷(200mL)萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并减压 蒸发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用10％甲醇的二氯甲烷溶 液(15min)、15％甲醇的二氯甲烷溶液(15min)、20％甲醇的二氯甲烷 溶液(20min)和50％甲醇的二氯甲烷溶液(5min)作为洗脱液，得到 0.123g(44％)纯的N2-{4-[4-氨基-1-(1-异丙基四氢-1H-3-吡咯基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                 1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.449(s，1H)，8.265(s，1H)， 8.127-8.1068(d，1H，J＝8.08Hz)，7.7196-7.6999(d，1H，J＝7.88Hz)，7.6013- 7.5803(d，1H，J＝8.4Hz)，7.351-7.299(m，4H)，7.173-7.135(m，1H)，5.394(m， 1H)，4.042(s，3H)，3.961(s，3H)，2.793(m，3H)，2.337(m，3H)，1.068(br.s，6H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.38分钟(100％)，MH+ 525.3。

实施例363：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.250g，0.518mmol)在 二甲基甲酰胺(5mL)中的悬浮液用2-溴乙基甲基醚(0.079g，0.569 mmol)和碳酸钾(0.143g，1.04mmol)处理。在65℃下及氮气气氛中搅 拌所述反应混合液18小时。往所述反应混合液中加入水(25mL)。将 所形成的沉淀物过滤并在冷冻干燥器中干燥。粗产物经快速硅胶柱 层析纯化，使用10％甲醇的二氯甲烷溶液(15min)、15％甲醇的二氯 甲烷溶液(15min)、20％甲醇的二氯甲烷溶液(20min)和50％甲醇的二 氯甲烷溶液(5min)作为洗脱液，得到0.082g(29％)纯的N2-(4-{4-氨基 -1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}- 2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                                             1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)δ 9.447(s，1H)，8.265(s，1H)，8.1278-8.1075(d，1H，J＝8.12Hz)，7.7192- 7.6993(d，1H，J＝7.96Hz)，7.5996-7.5799(d，1H，J＝7.88Hz)，7.349-7.295(m， 4H)，7.172-7.133(m，1H)，5.42(m，1H)，4.042(s，3H)，3.96(s，3H)，3.479(m，2H)， 3.266-3.258(m，3H)，2.95-2.60(m，4H)，2.332(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33x4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.34分钟(100％)，MH+ 541.3。

实施例364：N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-4-咪唑基甲基)四氢-1H-3-吡咯 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲 酰胺

将N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.200g，0.415mmol)在 二氯乙烷(5mL)中的悬浮液用4-甲酰基咪唑(0.08g，0.83mmol)和三 乙酰氧基硼氢化钠(0.176g，0.83mmol)处理。在室温下、氮气气氛 中搅拌所述反应混合液24小时。往所述反应混合液中加入氢氧化钠 (1N，15mL)并搅拌1小时。减压除去有机层，加入二氯甲烷。分离 各层，水层用二氯甲烷(200mL)萃取。将合并的有机层经硫酸镁干燥， 过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用10％甲醇的 二氯甲烷溶液(20min)、15％甲醇的二氯甲烷溶液(10min)、20％甲醇 的二氯甲烷溶液(10min)和50％甲醇的二氯甲烷溶液(8min)作为洗脱 液。得到0.074g(25％)纯的N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1H-4-咪唑基甲基)四 氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基- 1H-2-吲哚甲酰胺。

                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.446(s，1H)，8.252(s，1H)， 8.126-8.1082(d，1H，J＝8.16Hz)，7.7198-7.7(d，1H，J＝7.92Hz)，7.6-7.569(m， 2H)，7.35-7.298(m，4H)，7.171-7.134(m，1H)，6.946(s，1H)，5.422-5.385(m，1H)， 4.043(s，3H)，3.961(s，3H)，3.691(s，2H)，3.175-3.162(m，2H)，2.9-2.883(m，3H)， 2.385-2.332(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％5 0mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.13分钟(100％)，MH+ 563.3。

实施例365：N2-[4-(4-氨基-1-{1-[(3-甲基-1H-4-吡唑基)甲基]四氢-1H- 3-吡咯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲 哚甲酰胺

将N2-[4-(4-氨基-1-四氢-1H-3-吡咯基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.200g，0.415mmol)在 二氯乙烷(5mL)中的悬浮液用3-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(0.091g，0.83 mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(0.176g，0.83mmol)处理。在室温下及 在氮气气氛中搅拌所述反应混合液24小时。往所述反应混合液中加 入氢氧化钠(1N，15mL)并搅拌1小时。减压除去有机层，加入二氯 甲烷。分离各层，水层用二氯甲烷(100mL)和乙酸乙酯(100mL)萃取。 将合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅 胶柱层析纯化，使用10％甲醇的二氯甲烷溶液(15min)、15％甲醇的 二氯甲烷溶液(10min)、20％甲醇的二氯甲烷溶液(10min)和50％甲醇 的二氯甲烷溶液(8min)作为洗脱液。得到0.106g(44％)纯的N2-[4-(4- 氨基-1-{1-[(3-甲基-1H-4-吡唑基)甲基]四氢-1H-3-吡咯基}-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                                                              1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 9.446(s，1H)，8.247(s，1H)，8.1275-8.1071(d，1H，J＝8.16 Hz)，7.72-7.7003(d，1H，J＝7.96Hz)，7.6004-7.5793(d，1H，J＝8.44Hz)，7.398- 7.286(m，5H)，7.172-7.134(m，1H)，5.379(m，1H)，4.0443(s，3H)，3.962(s，3H)， 3.492(m，2H)，3.1(m，1H)，2.75(m，3H)，2.352-2.335(m，2H)，1.909(s，3H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％ 50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.17分钟(100％)，MH+ 577.3。

实施例366：N2-(4-{4-氨基-1-[(3R)-1-甲基四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备外消旋-N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类 似方法，由(S)-(-)-3-吡咯烷-1-醇制备N2-(4-(4-氨基-1-[(3R)-1-甲基四 氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯 并噁唑-2-胺。形成白色固体状的化合物(0.195g，53％)。

                                       1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)2.31-2.35(m，2H)，2.32(s，3H)，2.35(s，3 H)，2.40(s，3H)，2.70-2.77(m，3H)，3.05(t，1H)，5.40(m，1H)，6.80(s，1H)，7.11 (s，1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2H)，8.24(s，1H)，10.85(s，1H)；

RP-HPLC Rt 11.090分钟，99％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵水 溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 455(MH+)。

实施例367：N2-(4-{4-氨基-1-[(3S)-1-甲基四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

按照制备外消旋-N2-{4-[4-氨基-1-(1-甲基四氢-1H-3-吡咯基)-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类 似方法，由(R)-(-)-3-吡咯烷-1-醇制备N2-{4-氨基-1-[(3S)-1-甲基四氢- 1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并 噁唑-2-胺。形成白色固体状的化合物(0.126g，20％)。

                                       1H NMR(DMSO-d6，400 MHz)1H NMR(DMSO-d6，400MHz)2.31-2.35(m，2H)，2.31(s，3H)，2.35(s，3 H)，2.40(s，3H)，2.67-2.76(m，3H)，3.05(t，1H)，5.40(m，1H)，6.80(s，1H)，7.11 (s，1H)，7.66(d，2H)，7.93(d，2H)，8.24(s，1H)，10.84(s，1H)；

RP-HPLC Rt 11.129分钟，100％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵 水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内用1mL/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 455(MH+)。

实施例368：外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡 咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-异丙基-5-甲基-1，3-苯并噁 唑-2-胺

按照制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-氟苯基)-1，3-苯并噁唑-2-胺所用的类似方 法，由外消旋-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H-3-吡咯基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(0.200g，0.515mmol)和N2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2- 二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-7-异丙基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.244g， 0.644mmol)制备外消旋-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)四氢-1H- 3-吡咯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-7-异丙基-1，3-苯并噁唑- 2-胺。形成灰白色固体状的化合物(0.067g，25％)。

                       1H NMR(DMSO-d6，400MHz)1.361(d，6H)，2.30(m， 2H)，2.66(m，2H)，2.76-2.83(m，3H)，3.17(t，1H)，3.24(s，3H)，3.38(m，1H)， 3.45(t，2H)，5.37(m，1H)，7.04(d，1H)，7.18(t，1H)，7.32(d，2H)，7.67(d，2H)， 7.95(d，2H)，8.24(s，1H)，10.88(s，1H)；

RP-HPLC Rt 12.337分钟，94％纯度(5％至85％乙腈/0.1M的乙酸铵 水溶液，缓冲至pH 4.5，在20分钟内为1ml/min；λ＝254nm；Deltapak C18，300，5μm，150 x 3.9mm柱)；m/z 513(MH+)。

实施例369：顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸乙酯

将3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.52g，2.0mmol)、4-羟基环 己烷甲酸乙酯(0.806mL，5.0mmol)、三苯基膦(1.05g，4.0mmol)和 偶氮二甲酸二乙酯(0.628mL，4.0mmol)悬浮在四氢呋喃(15mL)中， 将所得混合液在环境温度下及在温和的氮气流中搅拌48小时。所得 混合液用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3 x 50mL)萃取。合并有机流 分，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。剩余物部分经快速柱层析(100％乙 酸乙酯)纯化得到4-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[3，4-d]嘧啶-7-基)-1-环己 烷甲酸乙酯的顺式-和反式-非对映异构体，以及三苯基氧化膦的混合 物。再次将所得混合液经快速硅胶柱层析(用三乙胺钝化，0.5％甲醇/ 二氯甲烷作为洗脱液)纯化得到所需的黄色固体状的顺式-4-(4-氨基-5- 碘-7H-吡咯并[3，4-d]嘧啶-7-基)-1-环己烷甲酸乙酯(0.260g，0.625 mmol)：RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10 分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 9.55 分钟；MS(MH)+ 416。

将顺式-4-(4-氨基-5-碘-7H-吡咯并[3，4-d]嘧啶-7-基)-1-环己烷甲酸 乙酯(0.10g，0.24mmol)与N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)-N-[4- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.088g，0.24 mmol)、碳酸钠(0.064g，0.60mmol)、四(三苯基膦)合钯(0)(0.014g， 0.012mmol)、乙二醇二甲醚(2mL)和水(1mL)混合，将所得混合液在 可再密封的Schlenk管中在85℃下加热14小时。冷却所述反应混合 液至环境温度，用水(10mL)稀释，用10％甲醇的二氯甲烷溶液萃取(3 x20mL)。合并有机流分，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。产物经快速 硅胶柱层析纯化(三乙胺钝化，2.5％甲醇/二氯甲烷作为洗脱液)得到 白色固体状的顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸乙酯(0.040g， 0.076mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液， 在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm 柱)Rt 12.63分钟；

                                                           1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 10.85(s，1H)，8.23(s，1H)，7.92(d，2H)，7.64(d，2H)，7.11 (s，1H)，6.80(s，1H)，4.66(m，1H)，4.10(qt，2H)，3.27(m，1H)，2.40(s，3H)，2.35(s， 3H)，2.08(m，6H)，1.61(m，2H)，1.20(t，3H).

实施例370：顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸甲酯

将顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸乙酯(0.030g，0.057 mmol)、甲醇钠(0.0033g，0.063mmol)和甲醇(2mL)混合，并在可再 密封的Schlenk管中在75℃下加热48小时。所得产物经制备HPLC(25 至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在20分钟内为21mL/min， 使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 15.6-16.5min)纯化得 到白色粉末状的顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基) 氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸甲酯(0.010g， 0.020mmol)：RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液， 在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 11.82分钟；

                                                                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.85(s，1H)，8.23(s，1H)，7.92(d，2H)，7.65(d， 2H)，7.12(s，1H)，6.80(s，1H)，4.67(m，1H)，3.63(s，3H)，3.27(m，1H)，2.40(s， 3H)，2.35(s，3H)，2.07(m，6H)，1.61(m，2H).

实施例371：顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸

将顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸乙酯(0.10g，0.19 mmol)、氢氧化钠水溶液(1M，2mL，2mmol)和甲醇(2mL)合并， 在70℃下加热14小时，采用空气冷凝管冷凝。剩余物用盐酸水溶液 (3M，2mL，6mmol)酸化，用10％甲醇/二氯甲烷(3 x 20mL)萃取。 将合并的有机流分用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。所得产物经制备 HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在20分钟内为 21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 8.8-10.9min) 纯化得到奶黄色粉末状的顺式-4-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并 噁唑-2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-环己烷甲酸 (0.026g，0.052mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸 铵的溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 9.03分钟；MS(MH)+ 498。

实施例372：顺式-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-3-[4-(2-嘧啶基氨基) 苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

在25mL烧瓶中将4-溴苯胺(0.300g，1.74mmol)和2-氯嘧啶 (0.200g，1.74mmol)在150℃下直接加热2小时。冷却所述反应混合 液至环境温度，剩余物经制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水 乙酸铵的溶液，在20分钟内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18， 250 x 21mm柱，Rt 13.8-15.9min)纯化得到黄色固体状的N-(4-溴苯 基)-N-(2-嘧啶基)胺(0.135g，0.54mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈 在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 11.08分钟；

                    1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.78(s，1H)，8.50(d，2H)， 7.76(d，2H)，7.45(d，2H)，6.87(t，1H).

使用类似于制备顺式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-4-乙基-1，3-噻唑-2-胺所描述的 方法将N-(4-溴苯基)-N-(2-嘧啶基)胺转化为题述化合物。所得产物经 制备HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在20分钟 内为21mL/min，使用8μ Hypersil HS C18，250 x 21mm柱，Rt 4.0- 5.0min)纯化得到白色粉末状的顺式-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-3- [4-(2-嘧啶基氨基)苯基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.095g，0.196 mmol)；RP-HPLC(25至100％乙腈在0.1M含水乙酸铵的溶液，在10 分钟内为1mL/min，使用5μ Hypersil HS C18，250 x 4.6mm柱)Rt 5.38 分钟；MS(MH)+ 485。

实施例373：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐

A.1-(2-氯-4-吡啶基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺

使3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(4.12g，0.016mol)的N，N-二 甲基甲酰胺(50mL)溶液与60％氢化钠的油溶液(0.75g，0.019mol)在 环境温度中反应。搅拌所述混合液15分钟，加入2-氯-4-硝基吡啶(3.00 g，0.019mol)。在100℃下加热所得混合液18小时。冷却所得混合 液至室温，过滤出沉淀物，用N，N-二甲基甲酰胺(20mL)洗涤，随后 在乙酸乙酯(50mL)中淤浆化4小时。过滤出固体物并真空干燥得到 黄褐色固体状的1-(2-氯-4-吡啶基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 (2.39g，0.009mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 8.52(d，1H)，8.43(s，1H)，8.40(d，1H)，8.25(dd， 1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.29分钟；MS：MH+ 373。

B.N2-{4-[4-氨基-1-(2-氯-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

使1-(2-氯-4-吡啶基)-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.95g， 0.00256mol)在二甲氧基乙烷(30mL)和水(60mL)中的悬浮液与N2-[2- 甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基-1-甲基- 1H-2-吲哚甲酰胺(1.14g，0.00281mol)、碳酸钠(0.68g，0.00640mol) 和四(三苯基膦)合钯(0)(0.30g，0.00026mol)在80℃下反应3天。过 滤出固体物并用水洗涤。将固体物在乙酸乙酯(75mL)研磨中6小时， 过滤，用乙酸乙酯(20mL)洗涤。固体物随后在甲醇(75mL)研磨中6 小时，过滤，用甲醇(20mL)洗涤。真空干燥固体物得到黄褐色固体 状的粗制的N2-{4-[4-氨基-1-(2-氯-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.672g，0.00128mol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.48(s，1H)8.55-8.58(m，2H)，8.50(s，1H)，8.44(dd， 1H)，8.21(d，1H)，7.72(d，1H)，7.60(d，1H)，7.49(d，1H)，7.43(dd，1H)，7.31-7.38(m， 2H)，7.16(t，1H)，4.05(s，3H)，4.00(s，1H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，接着用95％的恒溶剂洗脱3分钟，1mL/min)Rt 12.70 分钟；MS：MH+ 525。

CN2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐

将N2-{4-[4-氨基-1-(2-氯-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.120g，0.00023mol)在1- 甲基哌嗪(5mL)中的悬浮液在120℃下加热5天。真空除去溶剂，剩 余物在乙醚(25mL)中淤浆化4小时。过滤所述混合液，用乙醚(105mL) 洗涤并真空干燥。粗产物经制备RP-HPLC(Rainin C18，8μm， 25cm；40％恒溶剂洗脱5分钟，随后在30分钟内用40％-100％乙腈- 0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化。真空除去乙腈，将含水混合液冷冻 干燥得到白色固体状的N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-吡啶 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸 盐(0.030g，0.00005mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.47(s，1H)，8.44(s，1H)，8.12(d，1H)，7.77(s，1H)， 7.72(d，1H)，7.68(d，1H)，7.60(d，1H)，7.30-7.37(m，3H)，7.26(d，1H)，7.15(t，1H)， 4.06(s，3H)，3.50-3.58(m，4H)，2.38-2.46(m，4H)，2.24(s，3H)，1.91(s，3H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 15.33分钟；MS：MH+ 575。

实施例374：N2-{4-[4-氨基-1-(2-吗啉-4-基-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将N2-{4-[4-氨基-1-(2-氯-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺(0.120g，0.00023mol)和吗啉 (10mL)的悬浮液在100℃下加热6天。真空除去溶剂，将剩余物在 水(25mL)中淤浆化4小时。过滤所述混合液，将粗制的固体物经制 备RP-HPLC(Rainin C18，8μm，25cm；在20分钟内用35％- 80％乙腈-0.050M乙酸铵，21ml/min)纯化。真空除去乙腈，将含水 混合液冷冻干燥得到白色固体状的N2-{4-[4-氨基-1-(2-吗啉-4-基-4-吡 啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚 甲酰胺(0.048g，0.00008mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.48(s，1H)，8.44(s，1H)，8.27(d，1H)，8.18(d，1H)， 7.82(d，1H)，7.74(dd，1H)，7.72(d，1H)，7.60(d，1H)，7.46(d，1H)，7.41(dd，1H)，7.36 (s，1H)，7.34(t，1H)，7.16(t，1H)，4.05(s，3H)，3.99(s，3H)，3.72-3.78(m，4H)，3.49- 3.56(m，4H)；

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在20分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 17.89分钟；MS：MH+ 576。

实施例375：(S)-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

A.(R)-3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯

将(R)-3-羟基哌啶盐酸盐(10g，0.073mol)、二碳酸二叔丁酯(20 g，0.091mol)和碳酸钠(19g，0.182mol)在二噁烷(80mL)和水(80mL) 中的混合液在室温下、在氮气气氛中搅拌18小时。减压除去有机溶 剂。水层用乙醚(2 x 200mL)萃取。有机层用盐水洗涤并用硫酸镁干 燥。减压除去溶剂得到(R)-3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯(17.6g，0.087mol) 的透明油状物。所得粗产物用于下一步反应中。

1H NMR(Chloroform-d，400MHz)δ 3.76(m，1H)，3.67(br，1H)，3.55(br，1H)，2.92 (m，2H)，2.75(s，1H)，1.85(br，1H)，1.72(br，1H)，1.46(br，11H) GC-MS：MH+ 202

B.(S)-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲酸叔 丁酯

0℃下，往3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(2g，0.0077mol)、(R)-3- 羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯(2.3g，0.012mol)和三苯基膦(3g，0.012mol) 在四氢呋喃(70mL)中的混合液中加入偶氮二甲酸二乙酯(2g，0.012 mol)。在室温下、在氮气气氛中搅拌所得混合液2天。为了使反应完 全，再往所述混合液中加入(R)-3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯(0.62g，0.003 mol)、三苯基膦(0.81g，0.012mol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.6g，0.003 mol)。在室温下、在氮气气氛中再搅拌所得混合液18小时。减压除 去溶剂，得到粗制的(S)-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1- 哌啶甲酸叔丁酯，该产物直接用于下一步反应中。

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用 5％-85％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 10.0分钟。MS：MH+ 445。

C.(S)-3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐

室温下，往(S)-3-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌 啶甲酸叔丁酯(3.4g，0.0077mol)在丙酮(80mL)的混合液中加入6N 盐酸溶液(20mL)。将所得混合液在45℃下搅拌4小时，随后在室温 下搅拌18小时。减压除去丙酮，水层用甲苯(2x20mL)和二氯甲烷(2 x 20mL)洗涤。0℃将水层用5N氢氧化钠水溶液(25mL)碱化。浓缩 水层至干燥，剩余物经RP-HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；15分钟内用2％-30％ 0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到 (S)-3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.75g，0.0019 mol)。RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在10分钟内用 5％-85％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 8.2分钟。

MS：MH+ 345。

D.(S)-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 4-胺

室温下，往(S)-3-碘-1-(3-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙 酸盐(0.75g，0.0019mol)和碳酸钾(0.77g，0.00568mol)在N，N-二甲 基甲酰胺(30mL)中的混合液内加入2-溴乙基甲基醚(0.27g，0.0019 mol)和碘化钾(0.0016g，0.000095mol)。将所得混合液在65℃下及氮 气气氛中搅拌16小时。冷却所述反应混合液至室温，加入2-溴乙基 甲基醚(0.27g，0.0019mol)和碘化钾(0.0016g，0.000095mol)。将所 得混合液在65℃及在氮气气氛中搅拌4小时。减压除去溶剂。使剩 余物在饱和碳酸氢钠溶液(25mL)和二氯甲烷(50mL)间分配。水层用 二氯甲烷(4x 5 0mL)萃取。减压蒸发除去溶剂，剩余物经RP- HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；在15分钟内用 2％-30％ 0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得到(S)-3-碘-1-[1-(2-甲氧基 乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺乙酸盐(0.64g，0.0014 mol)。RP-HPLC(Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在10分钟内用 5％-85％乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 8.9分钟。

MS：MH+ 403。

E.(S)-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

将(S)-3-碘-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶- 4-胺乙酸盐(0.64g，0.0014mol)、N-(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)- N-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]胺(0.64g， 0.00175mol，1.2当量)、四(三苯基膦)合钯(0.081g，0.00007mol)和碳 酸钠(0.37g，0.0035mol)在N，N-二甲基甲酰胺(15mL)和水(7mL)中 的混合液在80℃下、在氮气气氛中加热16小时。冷却所得混合液至 环境温度，减压除去溶剂。使剩余物在水(25mL)和二氯甲烷(50mL) 间分配。水层用二氯甲烷(3 x 50mL)萃取。将合并的有机萃取液用盐 水洗涤并用硫酸镁干燥。减压蒸发除去溶剂得到棕色油状物，该产 物经快速硅胶柱层析纯化，使用2％-10％甲醇/二氯甲烷作为流动相 得到(S)-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-甲氧基乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺(0.60g，0.0012mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 10.85(s，1H)，8.25(s，1H)，7.93(d，2H)，7.65(d， 2H)，7.11(s，1H)，6.80(s，1H)，4.77(br，1H)，3.36(m，2H)，3.25(s，3H)，3.04(br， 1H)，2.90(br，1H)，2.55(br，2H)，2.54(br，1H)，2.40(s，3H)，2.35(s，3H)，2.02(br， 3H)，1.80(br，1H)，1.70(br，1H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 11.9分钟。

MS：MH+ 513

实施例376：顺式-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-甲酰胺三乙酸盐

往顺式-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-腈三乙酸盐(0.18g，0.00025 mol)在二噁烷(2mL)中的混合液内加入2N氢氧化钠水溶液(1.25 mL，0.0025mol)和水(0.75mL)。所得混合液在室温下及在氮气气氛 中搅拌2分钟，随后加入30％过氧化氢溶液(0.2mL)。回流所得混合 液5小时，随后在室温下搅拌18小时。往所得混合液中加入更多量 的30％过氧化氢溶液(0.2mL)，接着再回流6小时，随后在室温下搅 拌2天。减压除去有机溶剂，加入5％柠檬酸溶液以维持pH为7。 减压除去水层，粗产物经RP-HPLC(Hypersilprep HS C18，8μm，250 x 21.1mm；25分钟内用5％-100％ 0.1M乙酸铵，21mL/min)纯化得 到顺式-2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}苯胺基)-1，3-苯并噁唑-5-甲酰胺三乙酸盐(0.11g，0.00015 mol)。

1H NMR(DMSO-d6.400MHz)δ 8.30(s，1H)，8.15(s，1H)，8.00(m，3H)，7.75(m， 1H)，7.70(m，2H)，7.60(d，1H)，7.35(br，1H)，4.80(br，1H)，2.50(br，2H)，2.40(br， 4H)，2.25(br，4H)，2.15(s，3H)，2.10(br，3H)，1.90(s，9H)，1.70(br，2H)，1.60(br， 2H).

RP-HPLC(Delta Pak C18，5μm，15cm；在10分钟内用5％-95％ 乙腈-0.1M乙酸铵，1mL/min)Rt 8.2分钟。MS：MH+ 567。

实施例377：N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

在0℃下，在5分钟内将2-氟-4-三氟甲基-1-苯甲酰氯(0.87g，3.83 mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液加入吡啶(15mL)和4-[4-氨基-3-(4-氨基- 3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]-1-环己酮(1.00g，2.56 mmol)在二氯甲烷(5mL)中的混合液内。将所得混合液在0℃下搅拌 10分钟，随后在环境温度下搅拌过夜。减压除去溶剂。使剩余物在 水和二氯甲烷间分配。二氯甲烷层用饱和氯化铵水溶液洗涤两次和 用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发得到粗 产物。所得粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用Isco体系得到白色 固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.95g，1.76mmol)：

                                                                 1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 9.90(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.28(s，1H)，7.99(t，1H)，7.89 (d，1H)，7.75(d，1H)，7.34(s，1H)，7.30(d，1H)，6.90(br，2H)，5.27(m，1H)，3.94(s， 3H)，2.70(m，2H)，2.47(m，4H)，2.17(m，2H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersi1 C18，5μm，250 x 4.6mm； 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 9.23分钟。 MS：MH+ 543。

实施例378：顺式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺；和

实施例379：反式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将吗啉(0.08mL，0.93mmol)加入N1-{4-[4-氨基-1-(4-氧代环己 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲 酰胺(0.42g，0.78mmol)和乙酸(0.11mL，1.86mmol)在二氯乙烷(25mL) 中的混合液内。将所得混合液在环境温度下搅拌10分钟。加入三乙 酰氧基硼氢化钠(0.23g，1.09mmol)，将所得混合液在环境温度下搅 拌过夜。依次加入水(6mL)和碳酸氢钠(0.38g，4.53mmol)。搅拌所 述混合液1小时，分离出有机层。水层用二氯甲烷(20mL)萃取。将 合并的有机液用硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发得到粗产物。将所得 粗产物经快速硅胶柱层析纯化，使用Isco体系得到白色固体状的顺 式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]- 2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.23g，0.37mmol)和反式- N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.09g，0.14mmol)。

顺式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺的数据：

                                                                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.91(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.24(s，1H)，8.00(t，1H)， 7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.33(s，1H)，7.30(d，1H)，6.90(br，2H)，4.83(m，1H)， 3.94(s，3H)，3.62(br，4H)，1.57·2.55(m，10H)；MS：MH+ 614.

反式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺的数据：

                         1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.90(dd，1H)，8.30(d， 1H)，8.24(s，1H)，7.99(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.32(s，1H)，7.29(s，1H)， 4.67(m，1H)，3.94(s，3H)，3.59(br，4H)，1.48-2.69(m，10H)；MS：MH+ 614.

实施例380：顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨 基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙 酯；和

实施例381：反式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨 基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯

按照制备顺式-N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺和反式- N1-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基环己基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺的类似方法制得白色固体状的 顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲氧基 苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯和反式-3- ({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲氧基苯基)- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯。

顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲 氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯的数 据：

                                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.90(dd，1H)， 8.30(d，1H)，8.23(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.33(s，1H)，7.30 (d，1H)，6.90(br，2H)，4.37(m，1H)，4.08(q，2H)，3.94(s，3H)，2.76(m，2H)，2.32 (m，2H)，1.88(m，2H)，1.67(m，4H)，1.16(t，3H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在 10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 7.92分钟。 MS：MH+ 644。

反式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲 氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯的数 据：

                                1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.89(dd，1H)， 8.30(d，1H)，8.24(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.32(s，1H)，7.29 (d，1H)，6.90(br，2H)，4.68(m，1H)，4.08(q，2H)，3.94(s，3H)，2.82(m，2H)，2.46 (m，5H)，1.91-2.07(m，6H)，1.18(t，3H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm， 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 7.69分钟。 MS：MH+ 644。

实施例382：N1-[4-(4-氨基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2- 甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将3-碘-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(0.10g，0.19 mmol)、N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.13g，0.29mmol)、四(三苯基膦)合 钯(0)(0.01g，0.01mmol)和一水合碳酸钠(0.06mg，0.48mmol)在水(2 mL)和乙二醇二甲醚(4mL)中的混合液在85℃下加热过夜。减压除去 溶剂。往剩余物中加入水，所得混合液用乙酸乙酯萃取三次。合并 的有机物用饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发得 到棕色固体物，该产物经快速硅胶柱层析纯化，使用Isco体系得到 白色固体状的N1-[4-(4-氨基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)- 2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.12g，0.17mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.89(dd，1H)，8.25(d，1H)，8.28(s，1H)，8.00(t，1H)，7.94(s，1H)，7.88 (d，1H)，7.73(d，1H)，7.24(m，15H)，3.90(s，3H)；MS；MH+ 689.

实施例383：顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨 基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸

将顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3- 甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯(0.23 g，0.36mmol)、对-二噁烷(15mL)、氢氧化钾(0.10g，1.81mmol)和 水(1.5mL)的混合液在80℃下加热3小时。蒸发出溶剂，剩余物经制 备HPLC纯化得到白色固体状的顺式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三 氟甲基苯甲酰基]氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环 己基}氨基)丙酸(0.11g，0.18mmol)：

                                       1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.91 (dd，1H)，8.31(d，1H)，8.25(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75(d，1H)，7.35(s， 1H)，7.32(s，1H)，6.89(br，2H)，4.79(m，1H)，3.95(s，3H)，2.46-3.00(m，7H)，2.29 (m，2H)，1.91(m，2H)，1.80(m，2H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm； 在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 6.06分钟。 MS：MH+ 616。

实施例384：反式-3-({4-[4-氨基-3-(3-甲氧基-4-{[2-甲氧基-4-三氟甲 基苯甲酰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙 酸

将反式-3-({4-[4-氨基-3-(4-{[2-氟-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}-3- 甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]环己基}氨基)丙酸乙酯(0.04 g，0.06mmol)、对-二噁烷(4mL)、氢氧化钾(0.02g，0.31mmol)、痕 量的甲醇和水(0.4mL)的混合液在80℃下加热1小时。将所得混合液 在环境温度下搅拌过夜和在80℃下搅拌4小时。蒸发出溶剂，剩余 物经制备HPLC纯化得到白色固体状的反式-3-({4-[4-氨基-3-(3-甲氧 基-4-{[2-甲氧基-4-三氟甲基苯甲酰基]氨基}苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-1-基]环己基}氨基)丙酸(0.04g，0.06mmol)：

                                                                 1H NMR (DMSO-d6，400MHz)δ 10.72(s，1H)，8.61(d，1H)，8.28(d，1H)，8.24(s，1H)， 7.61(s，1H)，7.53(d，1H)，7.33(s，1H)，7.29(d，1H)，4.72(m，1H)，4.20(s，3H)，4.05 (s，3H)，1.44-3.61(m，13H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在 10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 6.36分钟。 MS：MH+ 628。

实施例385：N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯 基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将N1-[4-(4-氨基-1-三苯甲基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧 基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(2.10g，1.75mmol)、6N盐酸水溶 液(10mL)、对-二噁烷(10mL)和乙醇(8mL)的混合液在50℃下加热6 小时。过滤所述混合液，固体物用乙醇洗涤，在真空烘箱中干燥过 周末，并经快速硅胶柱层析纯化得到N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.35g，0.78 mmol)。浓缩滤液并经快速硅胶柱层析纯化和制备HPLC纯化得到相 同的白色固体状产物N1-[4-(4-氨基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲 氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.67g，1.51mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 13.58(s，1H)，9.90(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.23(s，1H)，8.05(t，1H)， 7.90(d，1H)，7.75(d，1H)，7.36(s，1H)，7.24(d，1H)，3.94(s，3H)；MS：MH+ 447.

实施例386：N1-[4-(4-氨基-1-四氢-2H-4-吡喃基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将偶氮二甲酸二乙酯(0.07mL，0.45mmol)加入N1-[4-(4-氨基-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺 (0.10g，0.22mmol)、三苯基膦(0.12g，0.45mmol)和四氢-4H-吡喃-4- 醇(0.04g，0.34mmol)在四氢呋喃(5mL)中的混合液内，将所得混合 液在环境温度下搅拌过夜。加入四氢-4H-吡喃-4-醇(0.01g，0.11 mmol)、三苯基膦(0.04g，0.15mmol)和偶氮二甲酸二乙酯(0.02mL， 0.15mmol)，将所得混合液在环境温度下搅拌5小时。蒸发出溶剂， 剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的N1-[4-(4-氨基-1-四氢- 2H-4-吡喃-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-2-氟-4-三氟甲 基苯甲酰胺(0.03g，0.06mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.91(dd，1H)，8.30(d，1H)，8.25(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75 (d，1H)，7.34(s，1H)，7.31(d，1H)，6.90(br，2H)，4.95(m，1H)，4.02(m，2H)，3.95 (s，3H)，3.56(t，2H)，2.22(m，2H)，1.89(m，2H)；MS：MH+ 531.

实施例387：N1-{4-[4-氨基-1-(4-羟基-2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基)-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

A.4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-2-环戊烯-1-醇

将四(三苯基膦)合钯(0)(0.04g，0.03mmol)、3-碘-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(0.30g，1.14mmol)和二甲亚砜(3mL)的混合液在环境温度 下、在黑暗中搅拌2分钟，冷至0℃。0℃下，将2，4a-二氢-1aH-环戊 二烯并[b]环氧乙烯(0.14g，1.72mmol)的四氢呋喃(3mL)溶液加入所 得混合液中，在0℃下搅拌3小时。将所得混合液在环境温度下搅拌 过夜，经制备HPLC纯化得到白色固体状的4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-1-基)-2-环戊烯-1-醇(0.24g，0.70mmol)：RP- HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在10 分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 4.23分钟。MS： MH+ 344。

B.N1-{4-[4-氨基-1-(4-羟基-2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将4-(4-氨基-3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-2-环戊烯-1-醇 (0.12g，0.35mmol)、N1-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼 杂环戊烷-2-基)苯基]-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.23g，0.53mmol)、 四(三苯基膦)合钯(0)(0.02g，0.02mmol)和一水合碳酸钠(0.11g，0.88 mmol)在乙二醇二甲醚(6mL)和水(3mL)中的混合液在85℃下、在氮 气气氛中加热6小时。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。 剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(4-羟基- 2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟 甲基苯甲酰胺(0.18g，0.34mmol)：

                                                        1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.89(dd，1H)，8.31(d，1H)，8.26(s，1H)，8.00(t，1H)，7.88(d，1H)，7.75 (d，1H)，7.32(s，1H)，7.29(d，1H)，6.90(br，2H)，6.09(d，1H)，5.93(d，1H)，5.76(m， 1H)，5.31(m，1H)，4.74(m，1H)，3.94(s，3H)，2.84(m，1H)，2.02(m，1H)；

RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，250 x 4.6mm；在 10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 8.50分钟。 MS：MH+ 529。

实施例388：N1-{4-[4-氨基-1-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺

将N1-{4-[4-氨基-1-(4-羟基-2-环戊烯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.10g，0.19mmol)和 10％披钯碳(0.03g)在乙醇(10mL)中的混合液在环境温度下、在1个 大气压的氢气气氛中搅拌过夜。过滤所述混合液，滤液经制备HPLC 纯化得到白色固体状的N1-{4-[4-氨基-1-(3-羟基环戊基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-2-氟-4-三氟甲基苯甲酰胺(0.07g， 0.13mmol)：

                                                       1H NMR(DMSO-d6， 400MHz)δ 9.91(dd，1H)，8.31(d，1H)，8.24(s，1H)，8.00(t，1H)，7.89(d，1H)，7.75 (d，1H)，7.34(s，1H)，7.30(d，1H)，6.90(br，2H)，5.17(m，1H)，4.97(m，1H)，4.22 (m，1H)，3.94(s，3H)，1.79-2.41(m，6H)；MS：MH+ 531.

实施例389：4-(4-氨基-3-{4-[(1H-2-吲哚基羰基)氨基]-3-甲氧基苯基}- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)六氢吡啶鎓乙酸盐

在0℃下将草酰氯(0.06mL，0.60mmol)加入吲哚-2-甲酸(0.88g， 0.546mmol)的二氯甲烷(5mL)和四氢呋喃(5mL)溶液中。加入N，N- 二甲基甲酰胺(从0.1mL注射器中加入3滴)，将所得混合液在0℃下 搅拌10分钟和在环境温度下搅拌20分钟。减压蒸发除去溶剂和过 量的反应剂。将剩余物溶于二氯甲烷(2mL)中，将所得溶液(1.25mL) 加入4-[4-氨基-3-(4-氨基-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]- 1-哌啶甲酸叔丁酯(0.12g，0.27mmol)和吡啶(0.4mL)在二氯甲烷(1mL) 的溶液中。将所得混合液在环境温度下搅拌2小时。加入三氟乙酸(1 mL)，将所得混合液在环境温度下搅拌2小时。减压蒸发除去溶剂， 剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的4-(4-氨基-3-{4-[(1H-2-吲 哚基羰基)氨基]-3-甲氧基苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)六氢吡啶 鎓乙酸盐(0.07g，0.14mmol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.85(br，1H)，9.45(s，1H)，8.24 (d，1H)，8.12(d，1H)，7.68(d，1H)，7.48(d，1H)，7.40(s，1H)，7.35(s，1H)，7.30(d， 1H)，7.24(t，1H)，7.09(t，1H)，4.77(m，1H)，3.97(s，3H)，3.11(m，2H)，2.68(m， 2H)，2.09(m，2H)，1.89(s，3H)，1.84(m，2H)；MS：MH+ 483.

实施例390-410：

使用制备4-(4-氨基-3-{4-[(1H-2-吲哚基羰基)氨基]-3-甲氧基苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)六氢吡啶鎓乙酸盐(实施例881)的相 同方案制备实施例390-410的化合物。

实施例411：4-[4-氨基-3-(4-{[(1-乙基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}-3-甲氧 基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]六氢吡啶鎓乙酸盐

0℃下，将60％氢化钠在矿物油中的悬浮液(0.006g，0.15mmol) 加入N2-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧 基苯基}-1H-2-吲哚甲酰胺(0.08g，0.14mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(1.0 mL)溶液中。将所得混合液在0℃下搅拌10分钟和在环境温度下搅 拌20分钟。加入乙基碘(0.02g，0.14mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(0.5 mL)溶液，将所得混合液在环境温度下搅拌过夜。加入乙基碘(0.01g， 0.07mmol)并将所得混合液在环境温度下搅拌过夜。加入三氟乙酸(3 mL)，将所得混合液在环境温度下搅拌24小时。减压蒸发出溶剂和 过量的反应剂，剩余物经制备HPLC纯化得到白色固体状的4-[4-氨 基-3-(4-{[(1-乙基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}-3-甲氧基苯基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-1-基]六氢吡啶鎓乙酸盐(0.05g，0.09mmol)：

            1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.43(s，1H)，8.27(s，1H)，8.14(d， 1H)，7.71(d，1H)，7.61(d，1H)，7.34(s，2H)，7.31(t，2H)，7.15(t，1H)，4.96(m，1H)， 4.62(q，2H)，3.96(s，3H)，3.00(m，2H)，2.28(m，2H)，2.03(m，2H)，1.91(s，3H)， 1.33(t，3H)；MS：MH+ 511.

实施例412至416：

使用制备4-[4-氨基-3-(4-{[(1-乙基-1H-2-吲哚基)羰基]氨基}-3-甲 氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]六氢吡啶鎓乙酸盐(实施例903) 相同的方案制备实施例412-416的化合物。

实施例417：N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基-5-羟基-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐

将N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧 基苯基-5-(苄氧基)-1H-2-吲哚甲酰胺(0.08g，0.14mmol)、10％披钯碳 (0.03g)和三氟乙酸(一滴)在乙醇(12mL)和四氢呋喃(12mL)中的混合 液在1个大气压的氢气气氛中氢化过夜。过滤所述混合液，滤液经 制备HPLC纯化得到白色固体状的N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-5-羟基-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐 (0.02g，0.03mmol)：

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.55(s，1H)，9.29(s，1H)，8.88(s，1H)，8.28(s， 1H)，8.18(d，1H)，7.31(m，3H)，7.18(s，1H)，6.94(s，1H)，6.78(dd，1H)，5.06(m， 1H)，3.97(s，3H)，3.44(m，2H)，3.17(m，2H)，2.39(m，2H)，2.11(m，2H)，1.91(s， 3H)；MS：MH+ 499.

实施例418：N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基-4-羟基-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐

使用制备N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基-5-羟基-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐相同的方案制备 N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基- 4-羟基-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐。RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，100，250 x 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M 乙酸铵，1mL/min)Rt 4.60分钟。MS：MH+ 499。

实施例419：N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基-7-氨基-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐

将连二亚硫酸钠(0.07g，0.41mmol)加入N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-7-硝基-1H-2-吲哚甲酰 胺乙酸盐(0.04g，0.07mmol)在水(2mL)和乙醇(2mL)的热溶液中。 冷却所得混合液至环境温度。加入一滴浓盐酸，所得混合液经制备 HPLC纯化得到白色固体状的N2-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-7-氨基-1H-2-吲哚甲酰胺乙酸盐(0.004 g，0.01mmol)：RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm，100， 250 x 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 6.60分钟。MS：MH+ 498。

实施例420：N3-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基-1H-3-吲哚甲酰胺乙酸盐

A.N3-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯基]-1H-3-吲哚甲酰胺

0℃下，将草酰氯(0.07mL，0.79mmol)加入吲哚-3羧酸(0.12g， 0.72mmol)的二氯甲烷(4mL)和四氢呋喃(3mL)溶液中。加入N，N-二 甲基甲酰胺(从0.1mL注射器中加入3滴)，将所得混合液在0℃下搅 拌10分钟和在环境温度下搅拌20分钟。减压蒸发除去溶剂和过量 的反应剂。将剩余物溶于二氯甲烷(2mL)中，将所得的溶液(1.5mL) 加入2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺 (0.09g，0.36mmol)和吡啶(1mL)的二氯甲烷(2mL)溶液中。将所得 混合液在环境温度下搅拌过夜。加入酰氯的二氯甲烷溶液(0.3mL)， 将所得混合液搅拌过夜。加入水(一滴)。减压蒸发除去挥发性组分。 使剩余物水和乙酸乙酯在间分配。分离出水层，用乙酸乙酯萃取。 将有机萃取液合并，用饱和氯化钠水溶液洗涤并用硫酸镁干燥。过 滤所述混合液，蒸发出滤液的溶剂得到粗产物，该产物经快速硅胶 柱层析纯化，使用正庚烷：乙酸乙酯(2/1)作为流动相得到白色固体状 的N3-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯 基]-1H-3-吲哚甲酰胺(0.11g，0.28mmol)：

                                                               1HNMR (CDCl3，400MHz)δ 8.65(m，3H)，8.13(d，1H)，7.95(s，1H)，7.50(m，2H)，7.33(m， 3H)，4.02(s，3H)，1.36(s，12H)；MS：MH+ 393.

B.N3-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧 基苯基-1H-3-吲哚甲酰胺乙酸盐

将N3-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯基]-1H-3-吲哚甲酰胺(0.11g，0.28mmol)、3-碘-1-(4-哌啶基)-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺盐酸盐(0.10g，0.27mmol)、四(三苯基膦)合钯 (0)(0.02g，0.02mmol)和一水合碳酸钠(0.13g，1.07mmol)在乙二醇 二甲醚(4mL)和水(2mL)中的混合液在85℃下、在1个大气压的氮气 气氛中加热过夜。冷却所得混合液至环境温度，减压除去溶剂。剩 余物经制备HPLC纯化，得到白色固体状的N3-4-[4-氨基-1-(4-哌啶 基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-1H-3-吲哚甲酰胺乙酸 盐(0.09g，0.16mmol)：

                         1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 11.83(br，1H)，8.92 (s，1H)，8.31(m，3H)，8.14(dd，1H)，7.50(dd，1H)，7.31(m，2H)，7.20(m，2H)，4.82 (m，1H)，3.99(s，3H)，3.16(m，2H)，2.73(m，2H)，2.15(m，2H)，1.91(s，3H)，1.88 (m，2H)；MS：MH+ 483.

实施例421：N4-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2- 甲氧基苯基-1H-4-吲哚甲酰胺乙酸盐

按照制备N3-4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基苯基-1H-3-吲哚甲酰胺乙酸盐的相同方案制备N4-4-[4- 氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基-1H-4-吲 哚甲酰胺乙酸盐。RP-HPLC(Hitachi HPLC，Hypersil C18，5μm， 250 x 4.6mm；在10分钟内用25％-100％乙腈-0.05M乙酸铵，1mL/min)Rt 4.80分钟。MS：MH+ 483。

实施例422：反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

A.1-甲基-1H-2-吲哚甲酰氯

将1-甲基吲哚-2-甲酸(9.87g，56.4mmol)的二氯甲烷溶液(150mL) 与草酰氯(8.58g，67.63mmol)反应。加入DMF(0.2mL)，随即发生 剧烈的反应。将所得混合液在环境温度下搅拌4小时。真空除去溶 剂，得到浅黄色固体状的1-甲基-1H-2-吲哚甲酰氯(10.69g，98％)。

1H NMR(CDCl3，400MHz)δ 7.70(d，1H)，7.66(s，1H)，7.44(t，1H)，7.35(d，1H)， 7.18(t，1H)，3.98(s，3H).

B.N2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基) 苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

0℃下，往含1-甲基-1H-2-吲哚甲酰氯(5.44g，0.0281mol)和2- 甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯胺(7.00g， 0.0281mol)的无水二氯甲烷(150mL)溶液中滴加入N-乙基-N，N-二异 丙基胺(4.9mL，0.0309mol)，将所得的溶液在环境温度下、在1个 大气压的氮气气氛中搅拌18小时。减压浓缩所述反应混合液，使剩 余物在水(150mL)和乙酸乙酯(150mL)间分配，有机相用盐水洗涤， 用硫酸镁干燥并减压浓缩。剩余物经快速硅胶柱层析纯化，使用乙 酸乙酯/正庚烷(1:6)为流动相得到白色固体状的N2-[2-甲氧基-4- (4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚 甲酰胺(8.0g，0.0197mol)。

1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ 9.35(s，1H)，8.03(d，1H)，7.69(d，1H)，7.57(d，1H)， 7.33(m，3H)，7.29(s，1H)，7.14(t，1H)，4.02(s，3H)，3.91(s，3H)，1.31(s，12H).

TLC(乙酸乙酯/庚烷1:3)Rf 0.44。

C.反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

将反式-3-碘-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-4-胺(0.100g，0.227mmol)的乙二醇二甲醚(8mL)悬浮液用N2-[2- 甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]-1-甲基- 1H-2-吲哚甲酰胺(0.097g，0.238mmol)、四(三苯基膦)合钯(0.016g， 0.014mmol)和碳酸钠(0.057g，0.538mmol)的水溶液(4mL)处理。80 ℃下搅拌反应混合液21.5小时。滤出沉淀物并减压蒸发有机层。加 入二氯甲烷(15mL)，分离各层。水层用二氯甲烷(200mL)萃取。合 并的有机层经硫酸镁干燥，过滤并减压蒸发。粗产物经快速硅胶柱 层析纯化，使用逐步梯度溶液：10％甲醇的二氯甲烷溶液至50％甲醇 的二氯甲烷溶液，在Sq 16x ISCO CombiFlash上实施。得到0.083 g(68％)反式-N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)环己基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺。

                                               1H NMR(d6-DMSO) δ 9.4316(s，1H)，8.2427(s，1H)，8.1207-8.1003(d，1H，J＝8.16Hz)，7.7173- 7.6974(d，1H，J＝7.96Hz)，7.5979-7.5769(d，1H，J＝8.4Hz)，7.3507-7.2758(m， 4H)，7.1695-7.1321(t，1H)，4.6893-4.6324(m，1H)，4.0400(s，3H)，3.9571(s，3H)， 2.5(m，3H)，2.4055-2.3279(m，5H)，2.1606(s，3H)，2.1094-1.9367(m，6H)，1.5214- 1.4624(m，2H)；

LCMS(Thermoquest AQA single-quad MS，Genesis C18柱，粒径3μm， 33 x 4.6mm；6分钟内用70％50mM乙酸铵水溶液至95％乙腈，0.8 至0.5mL/min)Rt 2.12分钟(100％)，MH+ 594.3。

实施例423：N2-{4-[4-氨基-1-(2-氨基-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基-}1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例424：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(甲基氨基)-4-吡啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例425：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(二甲氨基)-4-吡啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例426：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例427：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)-4-吡啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例428：N2-{4-[4-氨基-1-(2-吗啉-4-基-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例429：N2-[4-(4-氨基-1-{2-[(2-羟乙基)氨基]-4-吡啶基}-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例430：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(氨基甲基)-4-吡啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例431：N2-(4-{4-氨基-1-[2-(氨基羰基)-4-吡啶基]-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例432：3-吗啉-4-基-1-(2-吗啉-4-基-4-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺

实施例433：N2-{4-[4-氨基-1-(4-氨基-2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例434：N2-{4-[4-氨基-1-(2-氧代-1，2-二氢-4-吡啶基)-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例435：N2-{4-[4-氨基-1-(4-吗啉-4-基-2-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例436：N2-(4-{4-氨基-1-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-吡啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例437：N2-[4-(4-氨基-1-{4-[(2-羟乙基)氨基]-2-吡啶基}-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基)-2-甲氧基苯基]-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例438：N2-{4-[4-氨基-1-(6-氨基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例439：N2-{4-[4-氨基-1-(6-吗啉-4-基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基苯基}-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例440：N2-(4-{4-氨基-1-[6-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-吡啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}-2-甲氧基苯基)-1-甲基-1H-2-吲哚甲酰胺

实施例441：顺式-4-[4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-基) 氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)环己基]-2-哌嗪酮

实施例442：反式-4-[4-(4-氨基-3-{3-氟-4-[(5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-基) 氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)环己基]-2-哌嗪酮

实施例443：顺式-4-[4-(4-氨基-3-{4-[(5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基] 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)环己基]-2-哌嗪酮

实施例444：反式-4-[4-(4-氨基-3-{4-[(5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基] 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)环己基]-2-哌嗪酮

实施例445：R-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲氧基-1-甲基乙基)-3-哌啶基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例446：S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲氧基-1-甲基乙基)-3-哌啶基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例447：R/S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(1-甲氧基-1-甲基乙基)-3-哌啶 基]-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例448：R-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(3-甲氧基丙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例449：S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(3-甲氧基丙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例450：R/S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(3-甲氧基丙基)-3-哌啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例451：R-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-羟乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例452：S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-羟乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例453：R/S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-羟乙基)-3-哌啶基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例454：R-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-{1，3-二羟基丙基})-3-哌啶基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例455：S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-{1，3-二羟基丙基})-3-哌啶基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例456：R/S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-{1，3-二羟基丙基})-3-哌啶基]- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例457：R-2-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]乙腈

实施例458：S-2-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基] 苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]乙腈

实施例459：R/S-2-[3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨 基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]乙腈

实施例460：R-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-(甲硫基)乙基)-3-哌啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例461：S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-(甲硫基)乙基)-3-哌啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例462：R/S-N2-(4-{4-氨基-1-[1-(2-(甲硫基)乙基)-3-哌啶基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例463：R-N-甲氧基-3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲脒

实施例464：S-N-甲氧基-3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2- 基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲脒

实施例465：R/S-N-甲氧基-3-(4-氨基-3-{4-[(5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑- 2-基)氨基]苯基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)-1-哌啶甲脒

实施例466：R-N2-(4-4-氨基-1-[1-(1-2，2，2-三氟乙基)-3-哌啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例467：S-N2-(4-4-氨基-1-[1-(1-2，2，2-三氟乙基)-3-哌啶基]-1H-吡 唑并[3，4-d]嘧啶-3-基苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例960：R/S-N2-(4-4-氨基-1-[1-(1-2，2，2-三氟乙基)-3-哌啶基]-1H- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例468：N2-{4-[4-氨基-1-(1H-4-咪唑基甲基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧 啶-3-基]苯基}-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例469：N2-(4-{4-氨基-1-[1H-4-(2-甲基-咪唑基)甲基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例470：N2-(4-{4-氨基-1-[1H-4-(2-氨基-咪唑基)甲基]-1H-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例471：N2-4-[4-氨基-1-(1H-4-咪唑基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]苯基-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例472：N2-(4-{4-氨基-1-[1H-4-(2-氨基-咪唑基)]-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例473：N2-(4-{4-氨基-1-[1H-4-(2-甲基-咪唑基)]-1H-吡唑并[3，4- d]嘧啶-3-基}苯基)-5，7-二甲基-1，3-苯并噁唑-2-胺

实施例474：1-(4-{4-氨基-3-[4-(1，3-苯并噁唑-2-基氨基)苯基]-1H-吡唑 并[3，4-d]嘧啶-1-基}哌啶子基)-2-甲基-2-(甲基氨基)-1-丙酮

实施例475：1-[4-(4-氨基-3-{4-[(5-甲基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-甲基-2-(甲基氨基)-1-丙 酮

实施例476：1-[4-(4-氨基-3-{4-[(5-乙基-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯 基}-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-甲基-2-(甲基氨基)-1-丙 酮

实施例477：1-[4-(4-氨基-3-{4-[(5-氯-1，3-苯并噁唑-2-基)氨基]苯基}- 1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)哌啶子基]-2-甲基-2-(甲基氨基)-1-丙酮

实施例478：{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}(1H-4-吡唑基)甲酮

实施例479：1-(4-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯甲酰基}-1H-1-吡唑基)-1-乙酮

实施例480：{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}(1-甲基-1H-4-吡唑基)甲酮

实施例481：{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}(1-苄基-1H-4-吡唑基)甲酮

实施例482：{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}(1-苯甲酰基-1H-4-吡唑基)甲酮

实施例482：{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}(5-异噁唑基)甲酮

实施例484：{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}(3-甲基-5-异噁唑基)甲酮

实施例485：{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯 基}(3-苯基-5-异噁唑基)甲酮

实施例486：N5-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯基}-3-苯基-5-异噁唑胺

实施例487：N5-{4-[4-氨基-1-(4-哌啶基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基] 苯基}-3-(三氟甲基)-5-异噁唑胺

实施例488

实施例489

其它实施例包括以下化合物：

相关专利内容
标题 发布/更新时间 阅读量
一种角膜脱细胞系统及脱细胞方法 2020-05-12 553
一种角膜自动检测系统及方法 2020-05-12 46
对角膜轮廓进行再加工的方法和器械 2020-05-13 479
一种角膜自动定位及检测系统及方法 2020-05-12 697
一种角膜的脱细胞方法 2020-05-11 586
一种角膜的脱细胞方法 2020-05-11 829
一种脱细胞角膜基质及其制备方法 2020-05-12 731
人工角膜 2020-05-12 55
一种角膜脱细胞系统 2020-05-11 406
人工角膜 2020-05-13 832
高效检索全球专利

专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。

我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。

申请试用

分析报告

专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。

申请试用

角膜热门专利
热门分类
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈
提交反馈
使用该功能遇到问题

该功能需要专业版企业版VIP权限，您可以：

购买VIP 申请VIP试用
您也可以联系官方QQ: 2157717237     电话: 13264338900
关于PatentHub
关于我们 使命宗旨 加入我们 联系我们 帮助中心
PatentHub产品
专利百科 专利交易 业务平台 专利交易大厅 专利需求大厅
 
API接口 数据定制 专利资讯 最新中国发明专利 最新美国发明专利 看视频学检索 技术领域 专利库 专利分类库 国际专利分类库
 
历年真题 模拟考试 资料库 问答专区 专栏文章 知识分享 求职 招聘 代理所排行榜 代理人排行榜 代理所地域排行榜 找代理所 找代理人
PatentHub联系方式
官方Q群：924368187 官方Q群：931673531 官方Q群：529775260 商务QQ：2157717237 运营QQ：3307693423 电话：13264338900