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一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基

阅读：1024发布：2020-10-09

专利汇可以提供一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基，包括液体培养基和固体培养基，液体培养基由PPLO、葡萄糖、酚红、酵母浸膏、马血清、丙酮酸钠、青霉素、谷氨酰胺、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、蒸馏水制备而成，固体培养基包含以上的成分以及琼脂粉。将成分混合均匀后，加蒸馏水补足，调节pH值，湿热灭菌，冷却后加入其他原料，再冷藏。本发明从基因学的角度对培养基进行了改良，可使羊传染性胸膜肺炎支原体快速生长，提高培养效率，为羊传染性胸膜肺炎支原体的大量培养和灭活疫苗研究提供基础。，下面是一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基，包括液体培养基和固体培养基，其特征在于，所述液体培养基以1L计算，包括以下浓度或用量的成分：

所述固体培养基以1L计算，包括以下成分，各成分的浓度或用量：

2.根据权利要求1所述的羊传染性胸膜肺炎支原体培养基，其特征在于，
所述液体培养基的制备步骤为：将PPLO、葡萄糖混合均匀，加入0.4wt％酚红、25wt％酵母浸膏，混合均匀后，加蒸馏水补足到800mL；用NaOH或HCl溶液将pH值调整至7.2～7.6，120～122℃下湿热灭菌18～22min；将灭菌后的培养基冷却至54～56℃，依次加入马血清、丙酮酸钠、青霉素、谷氨酰胺、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶，充分混合均匀后，放入
4℃，冷藏，即可；
所述固体培养基的制备步骤为：将PPLO、葡萄糖混合均匀，加入0.4wt％酚红、25wt％酵母浸膏，混合均匀，边搅拌边加入琼脂粉，然后加蒸馏水补足到800mL；用NaOH或HCl溶液将pH值调整至7.2～7.6，120～122℃下湿热灭菌18～22min；将灭菌后的培养基冷却至54～56℃，然后依次加入马血清、丙酮酸钠、青霉素、谷氨酰胺、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶，充分混合均匀，倒入厚90mm平皿中，每个平皿15mL，冷却待用，4℃保藏，即可。

说明书全文

一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基

技术领域

[0001] 本发明涉及培养基领域，具体是一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基。

背景技术

[0002] 目前，应用比较广泛的支原体液体培养基如改良Hayflick’s、牛心汤培养基和KM2培养基以及在此基础上对培养基成分进行的微调整，但效果均不理想。究其原因是因为支原体基因组比较小，其在进化过程中存在着严重的基因组缩减现象，许多基因序列的全部或部分丢失，导致基因组功能缺失，很多生物合成能力丧失，包括必需物质在内很多成分都得从宿主细胞中摄取。

[0003] 专利号为CN103060221A的一种连续增菌培养鸡毒支原体培养基及制备方法，公开了包括PPLO、酵母浸出粉、葡萄糖等组成，使用前加入健康猪血清。该培养基能够既保证半成品生长滴度高而且稳定，用本发明方法制备的半成品菌液高达1012CCU/ml；同时该培养基采用连续增菌培养工艺培养鸡毒支原体，使得鸡毒支原体繁殖菌体延长生长稳定期时段，最大限度地利用消耗培养基中的有效成分，从而使得鸡毒支原体有效抗原大大增值增量，最终菌液可直接或稀释后制备灭活疫苗，菌液无需浓缩，不仅简化了生产工艺，而且降低了生产成本。

[0004] 专利号为CN104560835A的一种猪肺炎支原体的培养方法，公开了由基础培养基和辅助培养基制成，采用先配制基础培养基，再配制辅助培养基，然后混合，调整pH，过滤除菌，即得到猪肺炎支原体液体或固体培养基。本发明所述的猪肺炎支原体培养基培养猪肺炎支原体CJ株的生长时间为2-3日，含菌量为1.0×109-10CCU/ml，达到最终含菌量的测定时间为9-10日，说明本发明制备的培养基培养猪肺炎支原体CJ株含菌量高于现有技术的培养基，具有生长迅速，含菌量高的特点；该培养基制备方法工艺简单，适合工业化大生产，适用于培养猪肺炎支原体CJ株生长。

[0005] 但是，到目前为止，尚未有人能从基因学的角度进行研究，得出其缺乏的营养物质或影响其代谢的关键因素，从而对培养基进行改良。

[0006] 由于羊传染性胸膜肺炎支原体，人工培养非常困难，菌产量低，目前还没有适合的培养基，限制了常规鉴定方法及优质抗原的制备，致使到目前仍无有效的检疫手段和广泛有效的疫苗，为该病的防控工作带来很大困难。因此，羊传染性胸膜肺炎支原体的培养成为亟待解决的问题。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于提供一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基，以解决上述背景技术中提出的问题。

[0008] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0009] 一种羊传染性胸膜肺炎支原体培养基，包括液体培养基和固体培养基，[0010] 所述液体培养基以1L计算，包括以下浓度或用量的成分：

[0011]

[0012] 所述固体培养基以1L计算，包括以下成分，各成分的浓度或用量：

[0013]

[0014]

[0015] 作为本发明进一步的方案：所述液体培养基的制备步骤为：将PPLO、葡萄糖混合均匀，加入0.4wt％酚红、25wt％酵母浸膏，混合均匀后，加蒸馏水补足到800mL；用NaOH或HCl溶液将pH值调整至7.2～7.6，120～122℃下湿热灭菌18～22min；将灭菌后的培养基冷却至54～56℃，依次加入马血清、丙酮酸钠、青霉素、谷氨酰胺、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶，充分混合均匀后，放入4℃，冷藏，即可；

[0016] 所述固体培养基的制备步骤为：将PPLO、葡萄糖混合均匀，加入0.4wt％酚红、25wt％酵母浸膏，混合均匀，边搅拌边加入琼脂粉，然后加蒸馏水补足到800mL；用NaOH或HCl溶液将pH值调整至7.2～7.6，120～122℃下湿热灭菌18～22min；将灭菌后的培养基冷却至54～56℃，然后依次加入马血清、丙酮酸钠、青霉素、谷氨酰胺、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶，充分混合均匀，倒入厚90mm平皿中，每个平皿15mL，冷却待用，4℃保藏，即可。

[0017] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0018] 本发明从基因学的角度对培养基进行了改良，可使羊传染性胸膜肺炎支原体快速生长，提高培养效率，为羊传染性胸膜肺炎支原体的大量培养和灭活疫苗研究提供基础。

具体实施方式

[0019] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0020] 本发明对羊传染性胸膜肺炎支原体基因组学及KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，京都基因与基因组百科全书)代谢通路进行了研究，发现抑制其生长的主要原因存在于核酸代谢。羊传染性胸膜肺炎支原体核酸代谢通路极其不完整，因此，本发明通过添加核酸代谢中最基本的5种碱基，对培养基进行了改良。

[0021] 羊传染性胸膜肺炎支原体培养基，包括液体培养基和固体培养基。

[0022] 液体培养基以1L计算，包括以下浓度或用量的成分：

[0023]

[0024] 液体培养基的制备步骤为：将PPLO、葡萄糖混合均匀，加入0.4wt％酚红、25wt％酵母浸膏，混合均匀后，加蒸馏水补足到800mL；用NaOH或HCl溶液将pH值调整至7.2～7.6，120～122℃下湿热灭菌18～22min；将灭菌后的培养基冷却至54～56℃，依次加入马血清、丙酮酸钠、青霉素、谷氨酰胺、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶，充分混合均匀后，放入4℃，冷藏，即可；

[0025] 固体培养基以1L计算，包括以下成分，各成分的浓度或用量：

[0026]

[0027] 固体培养基的制备步骤为：将PPLO、葡萄糖混合均匀，加入0.4wt％酚红、25wt％酵母浸膏，混合均匀，边搅拌边加入琼脂粉，然后加蒸馏水补足到800mL；用NaOH或HCl溶液将pH值调整至7.2～7.6，120～122℃下湿热灭菌18～22min；将灭菌后的培养基冷却至54～56℃，然后依次加入马血清、丙酮酸钠、青霉素、谷氨酰胺、腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶，充分混合均匀，倒入厚90mm平皿中，每个平皿15mL，冷却待用，4℃保藏，即可。

[0028] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

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