N4-羟基胞苷和衍生物及与其相关的抗病毒用途
阅读：684发布：2021-02-22
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1.一种药物组合物，包含药学上可接受的赋形剂和具有化学式I的化合物，
或其盐，其中
Q是O、-O(C＝O)-、-O(C＝O)脂质、-O(C＝O)V-、NH或NR7；
V是O、NH、NR7、S、CH2或CHR7；
W是CH2、NH、S或O；
X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
Y是N或CR”；
Z是N或CR”；
每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
1
R是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
烷基、卤
素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
Y1是O或S；
Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
Y3是OH或BH3-M+；
R2是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R3是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基
3 20
或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不
20
同的R 取代；
R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R6任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
每个R7独立地选自不存在、氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
14
R 是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
20
R 是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
脂质是C6-22烷基、烷氧基、聚乙二醇或被烷基基团取代的芳基。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中Q-R7是OH。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其中R1是
R8是氢、羟基或苄氧基，并且
R9是(C6-C22)烷基。
4.如权利要求1所述的药物组合物，其中具有化学式I的化合物具有化学式IB，
或其盐，其中
V是不存在、O、NH、NR15、S、CH2或CHR15；
X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
Y是H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
烷基、卤
素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
1
Y是O或S；
Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
Y3是OH或BH3-M+；
R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
14
R 是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
15
R 是氢、脂质、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
脂质是C6-22烷基、烷氧基、聚乙二醇或被烷基基团取代的芳基。
5.如权利要求1所述的组合物，其中该化合物选自：
1-(3，4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-4-((壬酰基氧基)氨基)嘧啶-2-酮、
1-(3，4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-4-((((庚基氧基)羰基)氧基)氨基)嘧啶-2-酮、和
异丙基(((3，4-二羟基-5-(4-(羟基氨基)-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)四氢呋喃-2-基)甲氧基)(苯氧基)磷酰基)丙氨酸酯。
6.如权利要求1所述的药物组合物，其中具有化学式I的化合物具有化学式IC，
或其盐，其中
X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
Y是H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
1
R是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
烷基、卤
素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
Y1是O或S；
Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
Y3是OH或BH3-M+；
R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
15
R 是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的
20
R 取代；
R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
脂质如本文所述。
7.如权利要求1所述的药物组合物，其中具有化学式I的化合物具有化学式ID，
或其盐，其中
W是CH2、NH、S或O；
X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
Y是N或CR”；
Z是N或CR”；
每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
Y1是O或S；
Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
Y3是OH或BH3-M+；
R2是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R3是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰
4
基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R6任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
11
R 是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯
12 20
基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
15
R 是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的
20
R 取代；
R15是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷
7
基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R15和R15′可以形成任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
脂质是C6-22烷基、烷氧基、聚乙二醇或被烷基基团取代的芳基。
8.如权利要求1所述的药物组合物，其中具有化学式I的化合物具有化学式IE，
或其盐，其中
Q是O、-O(C＝O)-、-O(C＝O)脂质、-O(C＝O)V-、NH或NR7；
V是O、NH、NR7、S、CH2或CHR7；
W是CH2、NH、S或O；
X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
Y是N或CR”；
Z是N或CR”；
每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
2
R是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
3
R是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R6任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
每个R7独立地选自不存在、氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R15是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R15’是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R15和R15′可以形成任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
如果Q＝-O(C＝O)V-并且V＝NR7，那么这些R7可以一起形成任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
21
R 是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
脂质是C6-22烷基、烷氧基、聚乙二醇或被烷基基团取代的芳基。
9.如权利要求1所述的药物组合物，其中具有化学式I的化合物具有化学式II，
或其盐，其中
Q是O、-O(C＝O)-、-O(C＝O)脂质、-O(C＝O)V-、NH或NR7；
V是O、NH、NR7、S、CH2或CHR7；
W是CH2、NH、S或O；
X是CH2或O；
Y是N或CR”；
Z是N或CR”；
每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
R1是单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
Y1是O或S；
Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
3 - +
Y是OH或BH3M；
R2是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R3是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R6任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
每个R7独立地选自不存在、氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、
11 20
芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷
14
基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
如果Q＝-O(C＝O)V-并且V＝NR7，那么这些R7可以一起形成任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
20
R 是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
脂质如本文所述。
10.如权利要求1所述的药物组合物，该药物组合物进一步包含推进剂。
11.如根据权利要求10所述的药物组合物，其中该推进剂是压缩空气、乙醇、氮气、二氧化碳、一氧化二氮、氢氟烷烃(HFA)、1，1，1，2-四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷或其组合。
12.一种加压容器，包含如权利要求1所述的药物组合物。
13.如权利要求12所述的容器，该容器是手动泵喷雾器、吸入器、计量剂量吸入器、干粉吸入器、喷雾器、振动筛网喷雾器、喷射喷雾器或超声波喷雾器。
14.一种治疗或预防病毒感染的方法，该方法包括向对其有需要的受试者给予有效量的如权利要求1或9所述的化合物。
15.如权利要求14所述的方法，其中该病毒感染是甲病毒或MERS冠状病毒。
16.如权利要求14所述的方法，其中该病毒选自MERS冠状病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯雅病毒和罗斯河病毒。
17.如权利要求14所述的方法，其中该化合物通过肺给予。
18.一种治疗或预防东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯雅病毒和罗斯河病毒感染、正粘病毒科病毒或副粘病毒病毒或RSV病毒、或流感病毒、或丝状病毒科病毒或埃博拉病毒感染的方法，该方法包括向对其有需要的患者给予有效量的具有以下结构的化合物：
19.一种治疗或预防患者中的人冠状病毒、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯雅病毒和罗斯河病毒感染、正粘病毒科病毒或副粘病毒科病毒或RSV病毒、或流感病毒、或丝状病毒科病毒或埃博拉病毒感染的方法，该方法包括给予有效量的具有以下化学式的化合物：
或其盐，其中
V是不存在、O、NH、NR15、S、CH2或CHR15；
X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
Y是H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
烷基、卤
素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
1
Y是O或S；
Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
Y3是OH或BH3-M+；
R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷
9
基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、
11 20
芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
R15是氢、脂质、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
20
R 是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N，N-二甲基氨基甲酰基、N，N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N，N-二甲基氨磺酰基、N，N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
脂质如本文所述。
20.一种治疗或预防患者中的MERS冠状病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯雅病毒和罗斯河病毒感染、正粘病毒科病毒或副粘病毒科病毒或RSV病毒、或流感病毒、或丝状病毒科病毒或埃博拉病毒感染的方法，该方法包括给予有效量的具有以下化学式的化合物：
或其盐。
21.一种治疗或预防患者中的MERS冠状病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯雅病毒和罗斯河病毒感染、正粘病毒科病毒或副粘病毒科病毒或RSV病毒、或流感病毒、或丝状病毒科病毒或埃博拉病毒感染的方法，该方法包括给予有效量的具有以下化学式的化合物：
或其盐。
22.一种治疗或预防患者中的MERS冠状病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯雅病毒和罗斯河病毒感染、正粘病毒科病毒或副粘病毒科病毒或RSV病毒、或流感病毒、或丝状病毒科病毒或埃博拉病毒感染的方法，该方法包括给予有效量的具有以下化学式的化合物：
或其盐。
N4-羟基胞苷和衍生物及与其相关的抗病毒用途
技术领域
背景技术
[0002] 东方马脑炎、西方马脑炎和委内瑞拉马脑炎(分别为EEE、WEE和VEE)和基孔肯雅热(Chikungunya fever，CHIK)的病原体是载体传播的病毒(披膜病毒科(Togaviridae)，甲病毒属(Alphavirus))，这些病毒可以通过蚊子叮咬传播给人类。马脑炎病毒是CDC B类病原体，并且CHIK病毒是C类。对经由气溶胶递送的VEE病毒的毒性病毒株用作针对作战人员的生物武器非常担忧。动物研究已经表明，通过气溶胶暴露而感染VEE病毒迅速导致脑部大量感染，而且死亡率和发病率高。参见Roy等人，Pathogenesis of aerosolized Eastern equine encephalitis virus infection in guinea pigs[豚鼠中气溶胶东方马脑炎病毒感染的发病机制]，Virol J[病毒学杂志]，2009，6:170。
[0003] Stuyver等人报告发现β-D-N(4)-羟基胞苷(NHC)具有抗瘟病毒和抗肝炎病毒活性。Antimicrob Agents Chemother[抗微生物剂化疗]，2003，47(1):244-54。Constantini等人报告了对2'-C-MeC、2'-F-2'-C-MeC和NHC对抗诺瓦克病毒的功效的评价。还参见Purohit等人，J Med Chem[医用化学杂志]，2012，55(22):9988-9997。Ivanov等人，Collection of Czechoslovak Chemical Communications[捷克斯洛伐克化学通讯集]，2006，71(7):1099-1106。Fox等人，JACS，1959，81:178-87。
[0005] 本披露涉及N4-羟基胞苷和衍生物、药物组合物及与其相关的用途。在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，
[0006]
[0007] 化学式I
[0008] 或其药学上可接受的盐、衍生物或前药，如本文所定义的。
[0009] 在某些实施例中，本披露考虑了本文所披露的化合物的衍生物，例如含有一个或多个、相同或不同的取代基的那些化合物的衍生物。
[0011] 在某些实施例中，该药物组合物包含本文所披露的化合物和推进剂。在某些实施例中，该推进剂是气雾化推进剂，该气雾化推进剂是压缩的空气、乙醇、氮气、二氧化碳、一氧化二氮、氢氟烷烃(HFA)、1,1,1,2-四氟乙烷、1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷或其组合。
[0012] 在某些实施例中，本披露考虑了包含如本文所述的化合物或药物组合物的加压或非加压的容器。在某些实施例中，该容器是手动泵喷雾器、吸入器、计量剂量吸入器、干粉吸入器、喷雾器、振动筛网喷雾器、喷射喷雾器或超声波喷雾器。
[0013] 在某些实施例中，本披露涉及治疗或预防病毒感染的方法，这些方法包括向对其有需要的受试者给予本文所披露的有效量的化合物或药物组合物。
[0014] 在某些实施例中，该病毒感染是甲病毒或冠状病毒和黄病毒。在某些实施例中，该病毒感染是正粘病毒科(orthomyxoviridae)或副粘病毒科(paramyxoviridae)。在某些实施例中，该病毒感染选自MERS冠状病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、罗斯河(Ross River)病毒、玻瓦桑(Powassan)病毒、巴马森林(Barmah Forest)病毒和基孔肯雅病毒。
[0015] 在某些实施例中，将该化合物或药物组合物口服、静脉内或通过肺给予。
[0016] 在某些实施例中，本披露涉及如本文所述的化合物在生产用于治疗或预防病毒感染的药物中的用途。
[0018] 图1展示了β-D-N-羟基胞苷的制备。a.TBSCl、DMAP、DIPEA、DCM；b.(2,4,6-iPr)PhSO2Cl、DIPEA、DMAP、DCM；c.NH2OH-HCl、DIPEA、DCM；d.F-来源；e.水性NH2OH、AcOH，50℃。
[0019] 图2展示了本披露的某些实施例。
[0020] 图3展示了本披露的某些实施例。
[0022] 图5显示了EIDD-01931核苷在小鼠器官中的积累
[0023] 图6显示了EIDD-01931三磷酸酯在小鼠器官中的积累
[0024] 图7显示了用EIDD-01931处理的CHIKV激发的小鼠的足垫肿胀减少
[0025] 图8显示了用EIDD-01931处理的CHIKV激发的小鼠中通过PCR产生的CHIKV RNA拷贝的减少
具体实施方式
[0026] 在更详细地描述本披露之前，应理解的是本披露不限于所描述的具体实施例，因此这些当然可以改变。还应当理解，本文使用的术语仅是为了描述具体实施例的目的，而并不意图是限制性的，因为本披露的范围将仅由所附权利要求书限定。
[0027] 除非另外定义，本文所用的全部技术术语和科学术语具有与本披露所属领域的普通技术人员通常所理解的相同意义。虽然与本文所述的那些方法和材料相似或等同的任意方法和材料也可以用于实施或测试本披露中，但是现在描述优选的方法和材料。
[0028] 在本说明书中引用的所有公开物和专利通过引用结合在此，就好像每个单独的公开物或专利被确切地并单独地指示为通过引用结合，并且通过引用结合在此从而结合引用的公开物披露和描述这些方法和/或材料。任何公开物的引用内容是针对在提交日之前的披露，并且不能理解为承认因为先前披露而本披露不能获得比这些公开物更早的申请日。此外，所提供的公开日期可能与实际的公开日期不同，实际的公开日期可能需要单独地确认。
[0029] 如将对于本领域技术人员清楚的是，在阅读本披露时，本文描述和展示的单独实施例的每一个具有离散的组成部分和特征，这些组成部分和特征可以在不偏离本披露的范围或精神的情况下易于与任何其他一些实施例的特征分离或组合。可以按照所叙述的事件的顺序或按照逻辑上可行的任何其他顺序来进行任何叙述的方法。
[0030] 除非另外说明，本披露的实施例将采用医学、有机化学、生物化学、分子生物学、药理学等的技术，这些技术是在本领域的技术之内。此类技术在文献中得到充分解释。
[0031] 在某些实施例中，可以处于盐或前药的形式的药学试剂按本文所披露的方法给予，该药学试剂规定以重量计。这是指所叙述的化合物的重量。如果处于盐或前药的形式，则该重量是相应的盐或前药的摩尔当量。
[0032] 必须指出，如在说明书和所附权利要求书中所使用，单数形式“一个/一种(a/an)”和“该(the)”包括复数指示物，除非上下文另外清楚地规定。
[0033] “受试者”是指任何动物，优选人类患者、牲畜、或家养宠物。
[0034] 如本文所用的术语“预防”和“预防的”包括复发、传播或发作的预防。并不旨在将本披露限制为完全预防。在一些实施例中，该发作被延缓，或该疾病的严重性被降低。
[0035] 如本文所用的术语“治疗”和“治疗的”并不限于受试者(如患者)被治愈并且疾病被根除的情况。相反，本披露的实施例还考虑了仅减轻症状和/或延缓疾病进展的治疗。
[0036] 如本文所用，当用于描述与另外的治疗一起给予时，术语“与……组合”意指该药剂可以在该另外的治疗之前、与其一起、或之后、或其组合被给予。
[0037] 如本文所用的术语“烷基”意指一种非环状支链或支链的、不饱和或饱和的烃，例如那些包含从1至10个碳原子的烃。“高级烷基”是指具有6个或更多个碳原子的不饱和或饱和的烃。“C6-C16”是指含有6至16个碳原子的烷基。同样地，“C6-C22”是指含有6至22个碳原子的烷基。代表性饱和直链烷基包括甲基、乙基、正丙基、正丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基等；然而饱和支链烷基包括异丙基、仲丁基、异丁基、叔丁基、异戊基等。不饱和烷基包含在相邻碳原子之间的至少一个双键或者三键(分别是指如“烯基”或者“炔基”)。代表性直链和支链烯基包括乙烯基、丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基等。而代表性直链和支链炔基包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基等。
[0038] 非芳香族单环或多环烷基本文被称为“碳环”或“碳环基”基团。代表性的饱和碳环包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等；而不饱和碳环包括环戊烯基和环己烯基等。
[0039] “杂碳环”或“杂碳环基”基团是可能饱和或不饱和(但不为芳香族)、单环或多环的包含从1个至4个独立地选自氮、氧和硫的杂原子的碳环，并且其中这些氮和硫杂原子可任选地被氧化，并且该氮杂原子可任选地被季铵化。杂碳环包括吗啉基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、哌啶基、乙内酰脲基、戊内酰胺基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢苯硫基、四氢硫代吡喃基、四氢嘧啶基、四氢苯硫基、四氢硫代吡喃基等。
[0040] 术语“芳基”是指优选具有6至12个成员、包含芳香族同素环(即，烃)的单环、双环或三环的环的基团，例如苯基、萘基和联苯。苯基是优选的芳基基团。术语“经取代的芳基”是指被一个或多个基团取代的芳基基团，这些基团优选地选自烷基、经取代的烷基、烯基(任选地经取代的)、芳基(任选地经取代的)、杂环(任选地经取代的)、卤素、羟基、烷氧基(任选地经取代的)、芳氧基(任选地经取代的)、烷酰基(任选地经取代的)、芳酰基(任选地经取代的)、烷基酯(任选地经取代的)、芳基酯(任选地经取代的)、氰基、硝基、氨基、经取代的氨基、酰胺基、内酰胺、脲、尿烷、磺酰基等，其中任选地一对或多对取代基与它们所键合的原子一起形成3至7元环。
[0041] 如本文所用的“杂芳基”或“杂芳香族”是指具有1至4个选自氮、氧以及硫的杂原子并且包含至少1个碳原子的一个芳香族杂碳环，包括单环与多环环系统。多环环系统可以(但不必需)包含一个或多个非芳香族环，只要一个环是芳香族即可。代表性的杂芳基是呋喃基、苯并呋喃基、苯硫基、苯并苯硫基、吡咯基、吲哚基、异吲哚基、氮杂吲哚基、吡啶基、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、苯并噁唑基、吡唑基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、噌啉基、酞嗪基、以及喹唑啉基。所考虑的是，术语“杂芳基”的使用包括N-烷基化衍生物，例如1-甲基咪唑-5-基取代基。
[0042] 如本文所用，“杂环”或“杂环基”是指具有1至4个选自氮、氧以及硫的杂原子并且包含至少1个碳原子的单环和多环环系统。这些单环和多环环系统可以是芳香族环、非芳香族环或芳香族环与非芳香族环的混合物。杂环包括杂碳环、杂芳基等。
[0044] “烷氧基”是指通过氧桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基。烷氧基的实例包括，但并不限于，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基以及仲戊氧基。优选的烷氧基是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基以及叔丁氧基。
[0045] “烷基氨基”是指通过氨基桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基。烷基氨基的一个实例是甲基氨基(即，-NH-CH3)。
[0046] “烷酰基”是指通过羰基桥连接的具有指定数目的碳原子的如上文所定义的烷基(即-(C＝O)烷基)。
[0047] “烷基磺酰基”是指通过磺酰基桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基(即-S(＝O)2烷基)，例如甲磺酰基等，并且“芳基磺酰基”是指通过磺酰基桥附接的芳基(即-S(＝O)2芳基)。
[0048] “烷基氨磺酰基”是指通过氨磺酰基桥附接的具有指定数目的碳原子的如上所定义的烷基(即-NHS(＝O)2烷基)，并且“芳基氨磺酰基”是指通过氨磺酰基桥附接的芳基(即-NHS(＝O)2芳基)。
[0049] “烷基亚磺酰基”是指通过亚磺酰基桥连接的具有指定数目的碳原子的如上文所定义的烷基(即-S(＝O)烷基)。
[0050] 术语“环烷基”和“环烯基”是指具有3至15个碳原子的单、双或三同素环环基团，这些环基团分别是完全饱和的和部分不饱和的。术语“环烯基”包括作为整体不是芳香族但含有芳香族部分(例如芴、四氢萘、二氢茚等)的二环和三环环系统。多环环烷基基团的环可以通过一个或多个螺环接稠合、桥接和/或连接。术语“经取代的环烷基”和“经取代的环烯基”分别是指被一个或多个以下基团取代的环烷基和环烯基基团，这些基团优选地选自芳基、经取代的芳基、杂环、经取代的杂环、碳环、经取代的碳环、卤素、羟基、烷氧基(任选地经取代的)、芳氧基(任选地经取代的)、烷基酯(任选地经取代的)、芳基酯(任选地经取代的)、烷酰基(任选地经取代的)、芳酰基(任选地经取代的)、氰基、硝基、氨基、经取代的氨基、酰胺基、内酰胺、脲、尿烷、磺酰基等。
[0051] 术语“卤素”和“卤代”是指氟、氯、溴以及碘。
[0052] 术语“被取代”是指其中至少一个氢原子被取代基置换的分子。当被取代时，一个或多个基团是“取代基”。该分子可以被多重取代。在氧代取代基(“＝O”)的情况下，两个氢原子被置换。在这个背景内的实例取代基可以包括卤素、羟基、烷基、烷氧基、硝基、氰基、氧代、碳环基、碳环烷基、杂碳环基、杂碳环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、-NRaRb、-NRaC(＝O)Rb、-NRaC(＝O)NRaNRb、-NRaC(＝O)ORb、-NRaSO2Rb、-C(＝O)Ra、-C(＝O)ORa、-C(＝O)NRaRb、-OC(＝O)NRaRb、-ORa、-SRa、-SORa、-S(＝O)2Ra、-OS(＝O)2Ra以及-S(＝O)2ORa。这种情形中的Ra和Rb可以相同或不同并且独立地为氢、卤素、羟基、烷基、烷氧基、烷基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、碳环基、碳环烷基、杂碳环基、杂碳环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基以及杂芳基烷基。
[0053] 如本文所用的术语“任选地被取代”意指取代是任选的并且因此指定原子有可能未被取代。
[0054] 化合物
[0055] 在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，
[0056]
[0057] 化学式I，
[0058] 或其盐，其中
[0059] Q是O、-O(C＝O)-、-O(C＝O)脂质、-O(C＝O)V-、NH或NR7；
[0060] V是O、NH、NR7、S、CH2或CHR7；
[0061] W是CH2、NH、S或O；
[0062] X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
[0063] Y是N或CR”；
[0064] Z是N或CR”；
[0065] 每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
[0066] R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
[0067]烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基(carbanoyl)、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0068] Y1是O或S；
[0069] Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
[0070] Y3是OH或BH3-M+；
[0071] R2是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0072] R3是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0073] R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0074] R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0075] R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R6任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0076] 每个R7独立地选自不存在、氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0077] R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰8
基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0078] R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、9
(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0079] R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0080] R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0081] R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-12 20
氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R取代；
氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R取代；
[0082] R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、13
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0083] R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、14
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0084] R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
[0085] R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基或杂环基；
[0086] 如本文所使用的，脂质是C6-22烷基、烷氧基、聚乙二醇或被烷基基团取代的芳基。
[0088] 在某些实施例中，该脂质是衍生自必需和/或非必需脂肪酸的不饱和、多不饱和、ω不饱和或ω多不饱和的脂肪醇、脂肪胺或脂肪硫醇。
[0089] 在某些实施例中，该脂质是衍生自具有一个或多个被氧、氮或硫取代的碳单位的必需和非必需脂肪酸的脂肪醇、脂肪胺或脂肪硫醇。
[0090] 在某些实施例中，该脂质是衍生自具有一个或多个被氧、氮或硫取代的碳单位的必需和/或非必需脂肪酸的不饱和、多不饱和、ω不饱和或ω多不饱和的脂肪醇、脂肪胺或脂肪硫醇。
[0091] 在某些实施例中，该脂质是衍生自任选地被取代的必需和/或非必需脂肪酸的脂肪醇、脂肪胺或脂肪硫醇。
[0092] 在某些实施例中，该脂质是衍生自任选地被取代的必需和/或非必需脂肪酸的不饱和、多不饱和、ω不饱和或ω多不饱和的脂肪醇、脂肪胺或脂肪硫醇。
[0093] 在某些实施例中，该脂质是衍生自任选地被取代的具有一个或多个被氧、氮或硫取代的碳单位的必需和/或非必需脂肪酸的脂肪醇、脂肪胺或脂肪硫醇。
[0094] 在某些实施例中，该脂质是衍生自任选地被取代的具有一个或多个被氧、氮或硫取代的碳单位的必需和/或非必需脂肪酸的不饱和、多不饱和、ω不饱和或ω多不饱和的脂肪醇、脂肪胺或脂肪硫醇。
[0095] 在某些实施例中，该脂质是十六烷氧基丙基。
[0096] 在某些实施例中，该脂质是2-氨基十六烷氧基丙基。
[0097] 在某些实施例中，该脂质是2-氨基二十烷基。
[0098] 在某些实施例中，该脂质是2-苄氧基十六烷氧基丙基。
[0099] 在某些实施例中，该脂质是月桂基、肉豆蔻基、棕榈基、硬脂基、二十烷基、山嵛基或木蜡基。
[0100] 在某些实施例中，该脂质是具有以下化学式的鞘脂：
[0101]
[0102] 其中，
[0103] 该鞘脂的R8是氢、烷基、C(＝O)R12、C(＝O)OR12或C(＝O)NHR12；
[0104] 该鞘脂的R9是氢、氟、OR12、OC(＝O)R12、OC(＝O)OR12或OC(＝O)NHR12；
[0105] 该鞘脂的R10是任选地被一个或多个卤素或羟基或具有以下化学式的结构取代的具有大于6且小于22个碳的饱和或不饱和的烷基链：
[0106]
[0107] n是8至14或者小于或等于8至小于或等于14，o是9至15或者小于或等于9至小于或等于15，m和n的总数是8至14或者小于或等于8至小于或等于14，m和o的总数是9至15或者小于或等于9至小于或等于15；或
[0108]
[0109]
[0110] n是4至10或者小于或等于4至小于或等于10，o是5至11或者小于或等于5至小于或等于11，m和n的总数是4至10或者小于或等于4至小于或等于10，并且m和o的总数是5至11或者小于或等于5至小于或等于11；或
[0111]
[0112] n是6至12或者n是小于或等于6至小于或等于12，m和n的总数是6至12，或者n是小于或等于6至小于或等于12；
[0113] 该鞘脂的R11是OR12、OC(＝O)R12、OC(＝O)OR12或OC(＝O)NHR12；
[0114] 该鞘脂的R12是氢、支链或直链C1-12烷基、C13-22烷基、环烷基或者选自苄基或苯基的芳基，其中该芳基任选地被一个或多个相同或不同的R13取代；并且
[0115] 该鞘脂的R13是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
[0116] 在某些实施例中，该鞘脂的R12是H、烷基、甲基、乙基、丙基、正丁基、支链烷基、异丙基、2-丁基、1-乙基丙基、1-丙基丁基、环烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苄基、苯基、经单取代的苯基、经二取代的苯基、经三取代的苯基、或者饱和或不饱和的C12-C19长链烷基。
[0117] 在某些实施例中，该鞘脂具有以下化学式：
[0118]
[0119] 其中，
[0120] 该鞘脂的R8是氢、羟基、氟、OR12、OC(＝O)R12、OC(＝O)OR12或OC(＝O)NHR12；
[0121] 该鞘脂的R9是氢、羟基、氟、OR12、OC(＝O)R12、OC(＝O)OR12或OC(＝O)NHR12；
[0122] 该鞘脂的R10是任选地被一个或多个卤素或具有以下化学式的结构取代的具有大于6且小于22个碳的饱和或不饱和的烷基链：
[0123]
[0124] n是8至14或者小于或等于8至小于或等于14，m和n的总数是8至14或者小于或等于8至小于或等于14；
[0125] 该鞘脂的R12是氢、支链或直链C1-12烷基、C13-22烷基、环烷基或者选自苄基或苯基的芳基，其中该芳基任选地被一个或多个相同或不同的R13取代；并且
[0126] 该鞘脂的R13是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基。
[0127] 在某些实施例中，该鞘脂的R12是H、烷基、甲基、乙基、丙基、正丁基、支链烷基、异丙基、2-丁基、1-乙基丙基、1-丙基丁基、环烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基、苄基、苯基、经单取代的苯基、经二取代的苯基、经三取代的苯基、或饱和或不饱和C12-C19长链烷基。
[0128] 适合的鞘脂包括但不限于鞘氨醇、神经酰胺或鞘磷脂、或任选地被一个或多个取代基取代的2-氨基烷基。
[0129] 其他适合的鞘脂包括但不限于，2-氨基十八烷-3,5-二醇；(2S,3S,5S)-2-氨基十八烷-3,5-二醇；(2S,3R,5S)-2-氨基十八烷-3,5-二醇；2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；(2S,3R,5S)-2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；2-(二甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；(2R,3S,
5S)-2-(二甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；1-(吡咯烷-2-基)十六烷-1,3-二醇；(1S,3S)-1-((S)-吡咯烷-2-基)十六烷-1,3-二醇；2-氨基-11,11-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3S,5S)-
2-氨基-11,11-二氟十八烷-3,5-二醇；11,11-二氟-2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；(2S,
3S,5S)-11,11-二氟-2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；N-((2S,3S,5S)-3,5-二羟基十八烷-
2-基)乙酰胺；N-((2S,3S,5S)-3,5-二羟基十八烷-2-基)棕榈酸酰胺；1-(1-氨基环丙基)十六烷-1,3-二醇；(1S,3R)-1-(1-氨基环丙基)十六烷-1,3-二醇；(1S,3S)-1-(1-氨基环丙基)十六烷-1,3-二醇；2-氨基-2-甲基十八烷-3,5-二醇；(3S,5S)-2-氨基-2-甲基十八烷-
3,5-二醇；(3S,5R)-2-氨基-2-甲基十八烷-3,5-二醇；(3S,5S)-2-甲基-2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；2-氨基-5-羟基-2-甲基十八烷-3-酮；(Z)-2-氨基-5-羟基-2-甲基十八烷-3-酮肟；(2S,3R,5R)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3S,5R)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3S,5S)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3R,5S)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；和(2S,3S,5S)-2-氨基-18,18,18-三氟十八烷-3,5-二醇；其可以任选地被一个或多个取代基取代。
5S)-2-(二甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；1-(吡咯烷-2-基)十六烷-1,3-二醇；(1S,3S)-1-((S)-吡咯烷-2-基)十六烷-1,3-二醇；2-氨基-11,11-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3S,5S)-
2-氨基-11,11-二氟十八烷-3,5-二醇；11,11-二氟-2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；(2S,
3S,5S)-11,11-二氟-2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；N-((2S,3S,5S)-3,5-二羟基十八烷-
2-基)乙酰胺；N-((2S,3S,5S)-3,5-二羟基十八烷-2-基)棕榈酸酰胺；1-(1-氨基环丙基)十六烷-1,3-二醇；(1S,3R)-1-(1-氨基环丙基)十六烷-1,3-二醇；(1S,3S)-1-(1-氨基环丙基)十六烷-1,3-二醇；2-氨基-2-甲基十八烷-3,5-二醇；(3S,5S)-2-氨基-2-甲基十八烷-
3,5-二醇；(3S,5R)-2-氨基-2-甲基十八烷-3,5-二醇；(3S,5S)-2-甲基-2-(甲基氨基)十八烷-3,5-二醇；2-氨基-5-羟基-2-甲基十八烷-3-酮；(Z)-2-氨基-5-羟基-2-甲基十八烷-3-酮肟；(2S,3R,5R)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3S,5R)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3S,5S)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；(2S,3R,5S)-2-氨基-6,6-二氟十八烷-3,5-二醇；和(2S,3S,5S)-2-氨基-18,18,18-三氟十八烷-3,5-二醇；其可以任选地被一个或多个取代基取代。
[0130] 在某些实施例中，Q是O。
[0131] 在某些实施例中，每个R7独立地选自氢、-(C＝O)O(C6-C16)烷基或-(C＝O)O(C6-C22)烷基。
[0132] 在某些实施例中，R1是
[0133]
[0134] 在某些实施例中，R8是氢、羟基或苄氧基。
[0135] 在某些实施例中，R9是高级烷基、(C6-C16)烷基或(C6-C22)烷基。
[0136] 在某些实施例中，R9是叔丁基或异丁基。
[0137] 在某些实施例中，W是O；
[0138] 在某些实施例中，Z是H。
[0139] 在某些实施例中，R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
[0140] 在某些实施例中，R8是氢、羟基或苄氧基。
[0141] 在某些实施例中，R9是高级烷基、(C6-C16)烷基或(C6-C22)烷基。
[0142] 在某些实施例中，R10是异丙基。
[0143] 在某些实施例中，R11是甲基。
[0144] 在某些实施例中，R12是苯基。
[0145] 在某些实施例中，R13是氢。
[0146] 在某些实施例中，R14是氢。
[0147] 在某些实施例中，R2是氢。
[0148] 在某些实施例中，R3是羟基。
[0149] 在某些实施例中，R4是氢、羟基、烷基、卤素或氟。
[0150] 在某些实施例中，R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、甲基、乙炔基或丙二烯基。
[0151] 在某些实施例中，R6是氢。
[0152] 在某些实施例中，每个R7独立地选自氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)S烷基、-(C＝O)O(C6-C16)烷基、-(C＝O)(C6-C16)烷基、-(C＝O)NH(C6-C16)烷基、或-(C＝O)S(C6-C16)烷基。
[0153] 在某些实施例中，该化合物选自：
[0154] 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-4-(羟基氨基)嘧啶-2(1H)-酮、
[0155] 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-4-((壬酰基氧基)氨基)嘧啶-2(1H)-酮、和
[0156] 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-4-((((庚基氧基)羰基)氧基)氨基)嘧啶-2(1H)-酮。
[0157] 在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，该化合物具有化学式IA，[0158]
[0159] 化学式IA，
[0160] 或其盐，
[0161] X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
[0162] Y是H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
[0163] R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
[0164]烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或
1 20
杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
1 20
杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
[0165] Y1是O或S；
[0166] Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
[0167] Y3是OH或BH3-M+；
[0168] R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0169] R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0170] 每个R7独立地选自氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0171] R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0172] R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0173] R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0174] R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0175] R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0176] R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0177] R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0178] R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
[0179] R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基；
[0180] 脂质如本文所述。
[0181] 在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，该化合物具有化学式IB，[0182]
[0183] 化学式IB，
[0184] 或其盐，其中
[0185] V是不存在、O、NH、NR15、S、CH2或CHR15；
[0186] X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
[0187] Y是H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
[0188] R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或
1 20
杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
1 20
杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
[0189] Y1是O或S；
[0190] Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
[0191] Y3是OH或BH3-M+；
[0192] R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0193] R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0194] R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0195] R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0196] R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0197] R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0198] R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0199] R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0200] R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0201] R15是氢、脂质、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0202] R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
[0203] R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基；
[0204] 脂质如本文所述。
[0205] 在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，该化合物具有化学式IC，[0206]
[0207] 化学式IC，
[0208] 或其盐，其中
[0209] X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
[0210] Y是H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
[0211] R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0212] Y1是O或S；
[0213] Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
[0214] Y3是OH或BH3-M+；
[0215] R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0216] R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0217] R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0218] R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0219] R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0220] R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0221] R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0222] R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0223] R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0224] R15是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0225] R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
[0226] R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基；
[0227] 脂质如本文所述。
[0228] 在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，该化合物具有化学式ID，[0229]
[0230] 化学式ID，
[0231] 或其盐，其中
[0232] W是CH2、NH、S或O；
[0233] X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
[0234] Y是N或CR”；
[0235] Z是N或CR”；
[0236] 每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
[0237] R1是氢、单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、羰酰基、酯基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基、磷酰胺基或磷酸酯，其中R1任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0238] Y1是O或S；
[0239] Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
[0240] Y3是OH或BH3-M+；
[0241] R2是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0242] R3是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0243] R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0244] R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0245] R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰6 20
基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
[0246] R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R8任选地被一个或多个相同或不20
同的R 取代；
同的R 取代；
[0247] R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0248] R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0249] R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0250] R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0251] R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、13
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0252] R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、14
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0253] R15是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0254] R15’是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰7
基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0255] R15和R15’可以形成一个任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
[0256] R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
[0257] R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基；
[0258] 脂质如本文所述。
[0259] 在某些实施例中，本披露涉及具有化学式I的化合物，该化合物具有化学式IE，[0260]
[0261] 化学式IE，
[0262] 或其盐，其中
[0263] Q是O、-O(C＝O)-、-O(C＝O)脂质、-O(C＝O)V-、NH或NR7；
[0264] V是O、NH、NR7、S、CH2或CHR7；
[0265] W是CH2、NH、S或O；
[0266] X是CH2、CHMe、CMe2、CHF、CF2或CD2；
[0267] Y是N或CR”；
[0268] Z是N或CR”；
[0269] 每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
[0270] R2是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0271] R3是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0272] R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0273] R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0274] R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R6任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0275] 每个R7独立地选自不存在、氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0276] R15是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R15任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0277] R15’是氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R7任选地被一个或多个相同20
或不同的R 取代；
或不同的R 取代；
[0278] R15和R15’可以形成一个任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
[0279] 如果Q＝-O(C＝O)V-并且V＝NR7，那么R7可以一起形成一个任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
[0280] R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
[0281] R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基；
[0282] 脂质如本文所述。
[0283] 在某些实施例中，本披露涉及具有化学式II的化合物，
[0284]
[0285] 化学式II，
[0286] 或其盐，其中
[0287] Q是O、-O(C＝O)-、-O(C＝O)脂质、-O(C＝O)V-、NH或NR7；
[0288] V是O、NH、NR7、S、CH2或CHR7；
[0289] W是CH2、NH、S或O；
[0290] X是CH2或O；
[0291] Y是N或CR”；
[0292] Z是N或CR”；
[0293] 每个R”独立地选自H、D、F、Cl、Br、I、CH3、CD3、CF3、烷基、酰基、烯基、炔基、羟基、甲酰基或SCH3；
[0294] R1是单磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、
[0295]
[0296] Y1是O或S；
[0297] Y2是OH、OR12、O烷基或BH3-M+；
[0298] Y3是OH或BH3-M+；
[0299] R2是氢、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、叠氮基或杂环基，其中R2任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0300] R3是氢、羟基、烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R3任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0301] R4是氢、羟基、烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R4任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0302] R5是氢、羟基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、乙炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基甲基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R5任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0303] R6是氢、羟基、烷氧基、烷基、乙炔基、丙二烯基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰6 20
基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R 取代；
[0304] 每个R7独立地选自不存在、氢、-(C＝O)O烷基、-(C＝O)烷基、-(C＝O)NH烷基、-(C＝O)N-二烷基、-(C＝O)S烷基、羟基、烷氧基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷7
基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中每个R 任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0305] R8是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、苄氧基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰8
基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0306] R9是氢、甲基、乙基、叔丁基、烷基、高级烷基、(C6-C16)烷基、(C6-C22)烷基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R9任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0307] R10是氢、烷基、支链烷基、环烷基、脂质甲基、乙基、异丙基、环戊基、环己基、丁基、戊基、己基、新戊基、苄基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R10任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0308] R11是氢、氘、烷基、甲基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基，其中R11任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0309] R12是氢、烷基、芳基、苯基、1-萘基、2-萘基、芳香族、杂芳香族、4-经取代的苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、萘基或杂环基，其中R12任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0310] R13是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0311] R14是氢、氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、脂质、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R14任选地被一个或多个相同或不同的R20取代；
[0312] 如果Q＝-O(C＝O)V-并且V＝NR7，那么R7可以一起形成一个任选地被一个或多个相同或不同的R20取代的环；
[0313] R20是氘、烷基、烯基、炔基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、酰胺基、巯基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、叠氮基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、(烷基)2氨基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、碳环基、芳基或杂环基，其中R13任选地被一个或多个相同或不同的R21取代；并且
[0314] R21是卤素、硝基、氰基、羟基、三氟甲氧基、三氟甲基、氨基、甲酰基、羧基、氨基甲酰基、巯基、氨磺酰基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、乙酰基、乙酰氧基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基、乙酰基氨基、N-甲基氨基甲酰基、N-乙基氨基甲酰基、N,N-二甲基氨基甲酰基、N,N-二乙基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲酰基、甲硫基、乙硫基、甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、甲磺酰基、乙基磺酰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、N-甲基氨磺酰基、N-乙基氨磺酰基、N,N-二甲基氨磺酰基、N,N-二乙基氨磺酰基、N-甲基-N-乙基氨磺酰基、碳环基、芳基、或杂环基；
[0315] 脂质如本文所述。
[0316] 在某些实施例中，高级烷基、(C6-C16)烷基的任何引用可以被(C6-C22)烷基取代。
[0317] 在某些实施例中，高级烷基、(C6-C16)烷基或(C6-C22)烷基的任何引用可以被聚乙二醇或-CH2(CH2OCH2)nCH3取代，其中n是2、3、4、5、6、7、8、9、10、11-20或30-100。
[0318] 使用方法
[0319] 在某些实施例中，本披露涉及治疗或预防病毒感染的方法，这些方法包括向对其有需要的受试者给予有效量的本文所披露的化合物。
[0320] 在某些实施例中，病毒感染是甲病毒、黄病毒或冠状病毒、正粘病毒科或副粘病毒科或RSV、流感病毒、玻瓦桑病毒或丝状病毒科或埃博拉病毒(ebola)或由其引起的。
[0321] 在某些实施例中，该病毒感染是选自MERS冠状病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、罗斯河病毒、巴马森林病毒、玻瓦桑病毒和基孔肯雅病毒的病毒或由其引起的。
[0322] 在某些实施例中，该化合物通过肺部吸入给予。
[0323] 在一些实施例中、该受试者处于以下病毒的风险下、展示以下病毒的症状或诊断有以下病毒：甲型流感病毒(包括亚型H1N1、H3N2、H7N9或H5N1)、乙型流感病毒、丙型流感病毒、轮状病毒A、轮状病毒B轮状病毒C、轮状病毒D、轮状病毒E、人冠状病毒、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒、人类腺病毒类型(HAdV-1至55)、人乳头瘤病毒(HPV)类型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58和59、细小病毒B19、触染性软疣病毒、JC病毒(JCV)、BK病毒、默克尔(Merkel)细胞多瘤病毒、甲型柯萨奇病毒、诺如病毒、风疹病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、登革病毒、基孔肯雅、东方马脑炎病毒(EEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)、罗斯河病毒、巴马森林病毒、黄热病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、牛瘟病毒、加利福尼亚脑炎病毒、汉坦病毒、狂犬病病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、单纯性疱疹病毒-1(HSV-1)、单纯性疱疹病毒-2(HSV-2)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)、巨细胞病毒(CMV)、疱疹淋巴细胞病毒、玫瑰疹病毒(roseolovirus)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)相关疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒或人类免疫缺陷病毒(HIV)、I型人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV-1)、弗罗德脾脏病灶形成病毒(Friend spleen focus-forming virus，SFFV)或嗜异性MuLV相关病毒(XMRV)。
[0324] 在某些实施例中、该受试者被诊断有以下病毒：甲型流感病毒(包括亚型H1N1、H3N2、H7N9、H5N1(低致病性)和H5N1(高致病性))、乙型流感病毒、丙型流感病毒、轮状病毒A、轮状病毒B、轮状病毒C、轮状病毒D、轮状病毒E、SARS冠状病毒、MERS-CoV、人类腺病毒类型(HAdV-1至55)、人乳头瘤病毒(HPV)类型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58和59、细小病毒B19、触染性软疣病毒、JC病毒(JCV)、BK病毒、默克尔(Merkel)细胞多瘤病毒、甲型柯萨奇病毒、诺如病毒、风疹病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、黄热病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒1和3、牛瘟病毒、基孔肯雅、东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)、西方马脑炎病毒(WEEV)、加利福尼亚脑炎病毒、日本脑炎病毒、里夫特裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)、汉坦病毒、登革病毒血清型1、2、3和4、西尼罗病毒(West Nile virus)、塔卡里伯病毒(Tacaribe virus)、朱宁出血热(Junin)、狂犬病病毒、埃博拉病毒、马尔堡病毒、腺病毒、单纯性疱疹病毒-1(HSV-1)、单纯性疱疹病毒-2(HSV-2)、水痘带状疱疹病毒(VZV)、EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)、巨细胞病毒(CMV)、疱疹淋巴细胞病毒、玫瑰疹病毒(roseolovirus)、或卡波西氏肉瘤相关疱疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒或人类免疫缺陷病毒(HIV)。
[0325] 在某些实施例中，该受试者被诊断患有肠胃炎、急性呼吸道疾病、重度急性呼吸道综合征、病毒后疲劳综合征、病毒性出血热、获得性免疫缺陷综合征或肝炎。
[0326] 在某些实施例中，本文披露的化合物和药物组合物被考虑与其他一种或多种抗病毒药剂组合给予，该抗病毒药剂是例如阿巴卡韦、阿昔洛韦、阿昔洛韦、阿德福韦、金刚烷胺、安普那韦、安普利近、阿比朵尔、阿扎那韦、立普妥(atripla)、波普瑞韦、西多福韦、双汰芝、达卡他韦(daclatasvir)、地瑞纳韦(darunavir)、达撒布韦(dasabuvir)、地拉韦啶、去羟肌苷、二十二醇、依度尿苷(edoxudine)、依法韦仑、恩曲他滨、恩夫韦地、恩替卡韦、泛昔洛韦、福米韦生、福沙那韦、膦甲酸盐、膦乙酸盐、更昔洛韦、伊巴他滨、伊姆诺韦(imunovir)、碘苷、咪喹莫特、茚地那韦、肌苷、III型干扰素、II型干扰素、I型干扰素、拉米夫定、雷迪帕韦、洛匹那韦、洛韦胺、马拉韦罗、吗啉胍、美替沙腙、奈非那韦、奈韦拉平、奈沙韦(nexavir)、翁比他韦(ombitasvir)、奥司他韦、帕利瑞韦(paritaprevir)、聚乙二醇干扰素α-2a、喷昔洛韦、帕拉米韦、普来可那立、鬼臼毒素、雷特格韦、利巴韦林、金刚乙胺、利托那韦、嘧啶、沙奎那韦、斯密普韦(simeprevir)、索菲布韦、司他夫定、特拉匹韦、替比夫定、替诺福韦、替诺福韦、替拉那韦、三氟尿苷、三协唯、曲金刚胺、特鲁瓦达、伐昔洛韦、缬更昔洛韦、韦克利韦洛克(vicriviroc)、阿糖腺苷、塔利韦林(viramidine)、扎西他滨、扎那米韦或齐多夫定及其组合。
[0327] 配制品
[0328] 本文披露的药物组合物可以呈药学上可接受的盐类的形式，通常如下文所描述的。适合的药学上可接受的有机和/或无机酸的某些优选但非限制性实例是盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、乙酸以及柠檬酸，连同其他本身已知的药学上可接受的酸(在下文提到的引用文件中进行引用)。
[0329] 当本披露的这些化合物包含一个酸基和一个碱基的时候，本披露的这些化合物还可能形成内盐，并且这样的化合物在本披露的范围内。当化合物包含供氢的杂原子(例如NH)的时候，考虑了涵盖通过将所述氢原子在该分子内转移到碱基或原子上而形成的异构体的盐。
[0330] 这些化合物的药学上可接受的盐类包括其酸加成盐以及碱盐。适合的酸加成盐从形成无毒的盐的酸形成。实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯碳酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己烷氨基磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄糖酸盐、葡糖醛酸盐、六氟磷酸盐、羟苯酰苯酸盐、盐酸化物/氯化物、氢溴化物/溴化物、氢碘化物/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酚盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、磷酸盐/磷酸/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、糖质酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、鞣酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐以及昔萘酸盐盐类。适合的碱盐从形成无毒盐的碱形成。实例包括铝、精氨酸、苄星青霉素G、钙、胆碱、二乙胺、二乙醇胺、甘胺酸、细胞溶素、镁、甲基葡胺、环匹罗司乙醇胺、钾、钠、氨丁三醇以及锌盐。也可能形成酸和碱的半盐，例如半硫酸盐和半钙盐。对于适合的盐类的综述，参见Stahl和Wermuth所著的Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use[药用盐手册：特性、选择以及使用](威利出版社(Wiley-VCH)，2002)，通过引用结合在此。
[0331] 本文描述的这些化合物可能以前药的形式给予。前药可以包括共价结合的载体，该载体当给予至哺乳动物受试者时释放该活性母药。前药可以通过修饰存在于这些化合物中的功能基团制备，其方式是使得这些修饰在常规操作中或者在体内是可裂解的，以形成这些母化合物。例如，前药包括羟基结合到任意基团的化合物，当给予到哺乳动物受试者中时，羟基裂解以形成自由的羟基。前药的实例包括但不限于在这些化合物中的醇功能基团的乙酸盐、甲酸盐以及苯甲酸盐衍生物类。将化合物构建为前药的方法可以在Testa和Mayer的书，Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism[药物的水解和前药新陈代谢](威利出版社(Wiley)(2006))中找到。典型的前药通过水解酶转化前药，酰胺、内酰胺、肽、羧酸酯、环氧化合物的水解，或者无机酸类酯的切割形成活性代谢产物。
[0332] 典型地，用于本披露的药物组合物包括有效量的化合物和适合的药学上可接受的载体。这些制剂能以本身已知的方式制备，该方式通常涉及将根据本披露所述的至少一种化合物与一种或多种药学上可接受的载体混合，并且，如果希望的话，与其他药用活性化合物组合，必要时在无菌条件下进行。再次引用美国专利号6,372,778、美国专利号6,369,086、美国专利号6,369,087和美国专利号6,372,733以及以上提及的另外的文件，连同标准手册，如Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]的最新版本。
[0333] 一般来说，对于药物使用，这些化合物可以被配制为药物制剂，该药物制剂包括至少一种化合物以及至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂、以及任选地一种或多种另外的药用活性化合物。
[0334] 被披露的这些药物制剂优选呈单位剂型的形式，并且可以被适当地包装，例如在盒子、疱、小瓶、瓶子、小囊、安瓿或者任何其他适合的单剂量或者多剂量的固定器或者容器中(可以被适当地标记)；可任选地用一个或多个包含产品信息和/或使用说明的宣传单。一般来说，此类单位剂量将包含至少一种本披露的化合物的1mg至1000mg之间，并且通常在5mg至500mg之间，例如每单位剂量约10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、300mg或者400mg。
[0335] 这些化合物可以通过多种途径给予，包括口服、眼睛、直肠、经皮、皮下、静脉内、肌内或者鼻内途径，主要取决于所使用的具体制剂。一般来说，该化合物将以“有效量”给予，由此意味着在适当的给予时，任何量的化合物足以在它给予的受试者中达到所希望的治疗或者预防效果。通常，取决于待预防或者治疗的病症以及给予的途径，这样的有效量将通常为每天每千克患者体重的0.01mg至1000mg之间，更经常在0.1mg至500mg之间，如1mg至250mg，例如每天每千克患者体重的约5mg、10mg、20mg、50mg、100mg、150mg、200mg或250mg，该剂量可以作为被划分成一个或多个日常剂量的单一的日常剂量。给予的量，给予的途径以及进一步的治疗方案可能由治疗的临床医师决定，取决于例如年龄、性别、以及患者的一般病症以及待治疗的疾病/症状的性质和严重性等因素。再次引用美国专利号6,372,778、美国专利号6,369,086、美国专利号6,369,087和美国专利号6,372,733以及以上提及的另外的文件，连同标准手册，如Remington's Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]的最新版本。
[0336] 取决于引入的方式，本文所描述的化合物可以用各种方法进行配制。含有一种或多种化合物的配制品可以按各种药学形式制备，这些药学形式是例如颗粒剂、片剂、胶囊剂、栓剂、粉剂、控释剂、悬浮剂、乳剂、乳膏、凝胶、软膏、油膏、洗剂或气溶胶等。优选地，这些配制品以适合用于简单的并且优选口服给予精确剂量的固体剂型使用。用于口服给予的固体剂型包括但不限于片剂、软或硬明胶或非明胶胶囊、以及囊片。然而，还可以利用液体剂型，例如溶液、糖浆剂、悬浮剂、奶昔(shake)等。在另一个实施例中，局部地给予该配制品。适合的局部配制品包括但不限于洗剂、软膏、乳膏和凝胶。在一个优选实施例中，该局部配制品是凝胶。在另一个实施例中，经鼻给予该配制品。
[0337] 包含一种或多种本文所描述的化合物的配制品可以使用由认为安全且有效的材料组成的药学上可接受的载体进行制备，并且可以在不导致不希望的生物学副作用或不想要的相互作用的情况下给予至个体。该载体是除了一种或多种活性成分外的存在于药物配制品中的所有组分。如本文通常使用的“载体”包括但不限于稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、填充剂、pH改良剂、防腐剂、抗氧化剂、溶解度增强剂和包衣组合物。
[0338] 载体还包括包衣组合物的所有组分，其可以包括增塑剂、颜料、着色剂、稳定剂、和助流剂。延迟释放、延长释放、和/或脉冲释放剂量配制品可以如在标准参考文献中描述的那样制备，例如“Pharmaceutical dosage form tablets[药物剂型片剂]”，编辑Liberman等人(New York,Marcel Dekker,Inc.[纽约马塞尔-德克尔公司],1989)；“Remington–The science and practice of pharmacy[雷明顿-药学的科学和实践]”，第20版(Lippincott Williams&Wilkins,Baltimore,MD[马里兰州巴尔的摩利平科特威廉斯威尔金斯出版公司]，2000)；以及“Pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems[药物剂型和药物递送系统]”，第6版，Ansel等人，(Media,PA:Williams and Wilkins[宾夕法尼亚州梅迪亚：威廉斯威尔金斯出版公司]，1995)。这些参考文献提供了关于用于制备片剂和胶囊以及片剂、胶囊、和颗粒的延迟释放剂型的载体、材料、设备和方法。
[0339] 合适的包衣材料的实例包括但不限于纤维素聚合物如邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯和醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯；聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、丙烯酸聚合物和共聚物、和在商品名(罗斯制药公司(Roth Pharma)，威特斯塔(Westerstadt)，德国)下可商购的
甲基丙烯酸树脂、玉米蛋白、虫胶、以及多糖。
甲基丙烯酸树脂、玉米蛋白、虫胶、以及多糖。
[0340] 另外，包衣材料可以包含常规的载体，例如增塑剂、颜料、着色剂、助流剂、稳定剂、造孔剂以及表面活性剂。
[0341] 存在于包含片剂、珠粒、颗粒剂或微粒中的任选的药学上可接受的赋形剂包括但不限于稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、稳定剂以及表面活性剂。稀释剂(也被称为“填充剂”)通常有必要增加固体剂型的体积，这样使得为片剂的压缩或珠粒和颗粒剂的形成提供实际的大小。适合的稀释剂包括但不限于磷酸二钙二水合物、硫酸钙、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素、微晶纤维素、高岭土、氯化钠、干淀粉、水解淀粉、预糊化淀粉、二氧化硅、氧化钛、硅酸铝镁以及糖粉。
[0342] 使用粘合剂为固体剂量配制品赋予粘合性质，并且因此保证片剂或珠粒或颗粒剂在形成这些剂型后保持完整。适合的粘合剂材料包括但不限于淀粉、预糊化淀粉、明胶、糖类(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖和山梨糖醇)、聚乙二醇、蜡类、天然和合成树胶(例如阿拉伯树胶、黄芪胶、海藻酸钠)、纤维素(包括羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素和维格姆(veegum))、以及合成聚合物(例如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚丙烯酸/聚甲基丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮)。
[0343] 使用润滑剂有助于片剂生产。适合的润滑剂的实例包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、山嵛酸甘油酯、聚乙二醇、滑石矿质矿物油。
[0344] 崩解剂用于在给予后帮助剂型崩解或“瓦解”，并且通常包括但不限于淀粉、淀粉乙醇酸钠、羧甲基淀粉钠、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、预糊化淀粉、粘土、纤维素、藻蛋白碱、树胶或交联聚合物例如交联PVP(来自GAF化学公司的Polyplasdone XL)。
[0345] 稳定剂用于抑制或减缓药物分解反应，此类反应例如包括氧化反应。
[0346] 表面活性剂可以是阴离子、阳离子、两性或非离子表面活性剂。适合的阴离子表面活性剂包括但不限于包含羧酸根、磺酸根和硫酸根离子的那些。阴离子表面活性剂的实例包括钠、钾、铵的长链烷基磺酸盐和烷基芳基磺酸盐，例如十二烷基苯磺酸钠；二烷基磺基琥珀酸钠，例如十二烷基苯磺酸钠；二烷基磺基琥珀酸钠，例如双-(2-乙基亚硫酰)-磺基琥珀酸钠；以及烷基硫酸盐例如十二烷基硫酸钠。阳离子表面活性剂包括但不限于季铵化合物，例如苯扎氯铵、苄索氯铵、西曲溴铵、硬脂酰二甲基苄基氯化铵、聚氧乙烯和椰油胺。非离子表面活性剂的实例包括乙二醇单硬脂酸酯、丙二醇豆蔻酸酯、单硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、聚甘油基-4-油酸酯、山梨醇酐酰化物、蔗糖酰化物、PEG-150月桂酸盐、PEG-400单月桂酸酯、聚氧乙烯单月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、PEG-1000十六烷基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚丙二醇丁醚、 401、硬脂酰单异丙醇酰胺和聚氧乙烯氢化牛脂酰胺。两性表面活性剂的实例包括N-十二烷基-β-丙氨酸钠、N-月桂基-β-亚胺二丙酸钠、豆蔻酰基两性乙酸盐、月桂基甜菜碱和月桂基硫代甜菜碱。
[0347] 如果希望的话，片剂、珠粒、颗粒剂、或微粒还可以包括少量的无毒辅助物质例如润湿剂或乳化剂、染料、pH缓冲剂或防腐剂。
[0348] 化合物对载体和/或其他物质的浓度可以从约0.5wt.％至约100wt.％(重量百分比)变化。对于口服使用，该药物配制品通常将包含按重量计从约5％至约100％的活性材料。对于其他使用，该药物配制品通常将具有从约0.5wt.％至约50wt.％的活性材料。
[0349] 本文描述的组合物可以是用于改变释放或控制释放的配制品。控制释放剂型的实例包括延长释放剂型、延迟释放剂型、脉冲释放剂型及其组合。
[0350] 延长释放配制品通常制备为扩散或渗透系统，例如，如描述于“Remington–The science and practice of pharmacy[雷明顿-药学科学与实践]”(第20版，Lippincott Williams&Wilkins,Baltimore,MD[马里兰州巴尔的摩：利平科特·威廉斯和威尔金斯出版公司，2000))中。典型地，扩散系统由两种类型的装置、贮存室和基质组成，并且在本领域中是熟知的且已有描述。通常地，基质装置通过将药物和缓慢溶解的聚合物载体压缩成片剂形式而制备。用在基质装置制备中的三种主要材料类型是不溶性塑料、亲水性聚合物、和脂类化合物。塑料基质包括但不限于丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯、聚氯乙烯、和聚乙烯。亲水聚合物包括但不限于纤维素聚合物(例如甲基和乙基纤维素)、羟烷基纤维素(例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、羧甲基纤维素钠、以carbopol 934、聚环氧乙烷及其混合物。脂类化合物包括但不限于各种蜡(加诺巴蜡和三硬脂酸甘油酯)以及蜡型物质(包括氢化蓖麻油或氢化植物油)、或其混合物。
[0351] 在某些优选的实施例中，塑料材料是药学上可接受的丙烯酸聚合物，包括但不限于丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸甲酯共聚物、乙氧基乙基甲基丙烯酸酯、氰乙基甲基丙烯酸酯、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸)(酐)、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚(甲基丙烯酸酐)、和甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物。
[0352] 在某些优选实施例中，该丙烯酸聚合物由一种或多种铵基甲基丙烯酸酯共聚物组成。铵基甲基丙烯酸酯共聚物在本领域中是熟知的，并且在NF XVII中被描述为丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯与低含量的季铵基的完全聚合的共聚物。
[0353] 在一个优选的实施例中，丙烯酸聚合物是丙烯酸树脂漆，例如从罗姆制药公司(Rohm Pharma)的Tradename商品名 下可商购的丙烯酸树脂漆。在另外的优选实施例中，丙烯酸聚合物包括两种从罗姆制药公司(Rohm Pharma)分别在Tradenames商品名RL30D和 RS30D下可商购的丙烯酸树脂漆的混合物。 RL30D
和 RS30D是丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯与低含量的季铵基的共聚物，铵基相对于剩
余的中性(甲基)丙酸烯的摩尔比率在 RL30D中是1:20并且在 RS30D中
是1:40。平均分子量是约150,000。 S-100和 L-100也是优选的。代码名称
RL(高渗透性)和RS(低渗透性)是指这些物质的渗透特性。 RL/RS的混合物在水中
和消化液中是不可溶的。然而，所形成的、包括所述混合物的多颗粒系统在水性溶液和消化液中是可膨胀且可渗透的。
和 RS30D是丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯与低含量的季铵基的共聚物，铵基相对于剩
余的中性(甲基)丙酸烯的摩尔比率在 RL30D中是1:20并且在 RS30D中
是1:40。平均分子量是约150,000。 S-100和 L-100也是优选的。代码名称
RL(高渗透性)和RS(低渗透性)是指这些物质的渗透特性。 RL/RS的混合物在水中
和消化液中是不可溶的。然而，所形成的、包括所述混合物的多颗粒系统在水性溶液和消化液中是可膨胀且可渗透的。
[0354] 为了最终获得具有所希望的溶解特性的缓释配制品，上述的聚合物例如RL/RS可以按任何希望的比率混合到一起。所希望的缓释多颗粒系统可以从例如100％RL、50％ RL和50％ RS、以及10％ RL和90％ RS
中获得。本领域普通技术人员将意识到还可以使用其他丙烯酸聚合物，例如像 L。
中获得。本领域普通技术人员将意识到还可以使用其他丙烯酸聚合物，例如像 L。
[0355] 可替代地，延长释放配制品可以通过使用渗透系统或通过将半透包衣应用到剂型上而制备。在后者的情况中，所希望的药物释放特性可以通过将低渗透和高渗透包衣材料以合适的比例组合而实现。
[0356] 具有以上描述的不同药物释放机制的装置可以被组合在包括单个单元或多个单元的最终剂型中。多个单元的实例包括但不限于包含片剂、珠粒或颗粒剂的多层片剂和胶囊。可以通过以下手段将即刻释放部分添加到延长释放型系统中：使用包衣或压缩方法将即刻释放层应用到延长释放型芯顶上，或在例如包含延长释放型和即刻释放型珠粒的胶囊的多个单元系统中。
[0357] 包含亲水聚合物的延长释放片剂通过本领域的所熟知的技术(例如直接压片、湿法制粒或干法制粒)来制备。其配制品通常掺入聚合物、稀释剂、粘合剂和润滑剂以及活性药物成分。通常的稀释剂包括惰性粉状物质，例如淀粉、粉状纤维素(尤其是结晶和微晶纤维素)、糖类(例如果糖、甘露醇和蔗糖)、麦面粉和类似的食用粉。典型的稀释剂包括例如不同类型的淀粉、乳糖、甘露醇、高岭土、磷酸钙或硫酸盐、无机盐(例如氯化钠)以及糖粉。粉状纤维素衍生物也是有用的。典型的片剂粘合剂包括以下物质，例如淀粉、明胶和糖(例如乳糖、果糖和葡萄糖)。还可以使用天然和合成树胶，包括阿拉伯树胶、海藻酸盐、甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。聚乙二醇、亲水聚合物、乙基纤维素和蜡也可以作为粘合剂。润滑剂在片剂配制品中是必须的以防止片剂和冲床在模具中粘连。润滑剂选自这样光滑的固体例如滑石、硬脂酸镁和硬脂酸钙、硬脂酸和氢化植物油。
[0359] 通过将固体剂型用聚合物膜包衣来产生延迟释放配制品，该聚合物膜在胃的酸性环境中是不可溶的，并且在小肠的中性环境中是可溶的。
[0360] 延迟释放剂型单元可以例如通过用选择的包衣材料对药物或包含药物的组合物进行包衣而制备。包含药物的组合物可以是例如并入胶囊的片剂、在“包芯”剂型中用作内核的片剂、或用于并入片剂或胶囊的多个包含药物的珠粒、微粒或颗粒剂。优选的包衣材料包括可生物溶蚀的、逐渐水解的、逐渐溶于水的、和/或可酶促降解的聚合物，并且可以是常规的“肠溶”聚合物。如将被本领域的普通技术人员所理解的，肠溶聚合物在胃肠道下部的较高pH环境中变得可溶或当该剂型穿过胃肠道时缓慢溶蚀，然而可酶促降解的聚合物通过存在于胃肠道下部(特别是结肠)中的细菌酶降解。用于影响延迟释放的适合的包衣材料包括但不限于纤维素聚合物，例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素、乙基纤维素、醋酸纤维素、醋酸纤维素邻苯二甲酸酯、醋酸纤维素偏苯三酸酯和羧甲基纤维素钠；优选地从丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸甲酯和/或甲基丙烯酸乙酯形成的丙烯酸聚合物和共聚物，以及其他在商品名 (罗姆制药公司(Rohm Pharma)，威特斯塔，德国)下可商购的甲基丙烯酸树脂，包括 L30D-55和
L100-55(在pH 5.5及以上可溶)、 L-100(在pH 6.0及以上可溶)、 S(在pH
7.0及以上可溶，因为更高程度的酯化作用)、以及 NE、RL和RS(具有不同程度渗透性和可扩展性的水不溶物性聚合物)；乙烯基聚合物和共聚物如聚乙烯吡咯烷酮、醋酸乙烯酯、醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、醋酸乙烯丁烯酸共聚物和乙烯-醋酸乙烯酯共聚物；可酶促降解的聚合物，例如偶氮聚合物、果胶、壳聚糖、直链淀粉及瓜尔胶；玉米蛋白以及虫胶。还可以使用不同包衣材料的组合。还可以应用使用不同聚合物的多层包衣。
L100-55(在pH 5.5及以上可溶)、 L-100(在pH 6.0及以上可溶)、 S(在pH
7.0及以上可溶，因为更高程度的酯化作用)、以及 NE、RL和RS(具有不同程度渗透性和可扩展性的水不溶物性聚合物)；乙烯基聚合物和共聚物如聚乙烯吡咯烷酮、醋酸乙烯酯、醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、醋酸乙烯丁烯酸共聚物和乙烯-醋酸乙烯酯共聚物；可酶促降解的聚合物，例如偶氮聚合物、果胶、壳聚糖、直链淀粉及瓜尔胶；玉米蛋白以及虫胶。还可以使用不同包衣材料的组合。还可以应用使用不同聚合物的多层包衣。
[0361] 对于特殊的包衣材料，优选的包衣重量可以轻易地由本领域的技术人员通过评价用不同量的各种包衣材料制备的片剂、珠粒和颗粒剂的各自的释放特性而确定。本申请的材料、方法和形式的组合产生了仅能从临床研究中确定的期望的释放特征。
[0362] 包衣组合物可以包括常规的添加剂，例如增塑剂、颜料、着色剂、稳定剂、助流剂等。增塑剂通常存在以降低包衣的脆性，并且通常相对聚合物的干重占约10wt.％至50wt.％。典型的增塑剂的实例包括聚乙二醇、丙二醇、三乙酸甘油酯、邻苯二甲酸二甲酯、邻苯二甲酸二乙酯、邻苯二甲酸二丁酯、癸二酸二丁酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰柠檬酸三乙酯、蓖麻油以及乙酰化的单甘油酯。优选使用稳定剂以稳定分散体中的微粒。典型的稳定剂是非离子乳化剂例如脱水山梨醇酯、聚山梨醇酯和聚乙烯吡咯烷酮。推荐助流剂以在膜形成和干燥期间降低粘连影响，并且通常在包衣溶液中代表约25wt.％至
100wt.％的聚合物重量。一种有效的助流剂是滑石。还可以使用其他助流剂，例如硬脂酸镁和单硬脂酸甘油酯。也可以使用颜料例如二氧化钛。还可以在包衣组合物中添加少量的消泡剂，例如硅酮(例如西甲硅油)。
100wt.％的聚合物重量。一种有效的助流剂是滑石。还可以使用其他助流剂，例如硬脂酸镁和单硬脂酸甘油酯。也可以使用颜料例如二氧化钛。还可以在包衣组合物中添加少量的消泡剂，例如硅酮(例如西甲硅油)。
[0363] 该配制品可以提供一种或多种化合物的脉冲递送。“脉冲的”是指以间隔开的时间间隔释放多个药物剂量。通常，在摄入剂型后，初始剂量的释放基本上是即时的，即第一次药物释放“脉冲”发生在摄入约1小时内。该初始脉冲之后是第一时间间隔(延迟时间)，在该时间间隔期间很少药物或没有药物从剂型释放，这之后释放第二剂量。类似地，可以在第二次和第三次药物释放脉冲之间设计一个第二几乎无药物释放的间隔。几乎无药物释放的时间间隔的持续时间将根据剂型设计而变化，例如每天两次的给药型式、每日三次给药型式等。对于提供每天两次剂量型式的剂型，在第一和第二剂量之间的几乎无药物释放的间隔具有大约3小时至14小时的持续时间。对于提供每天三次型式的剂型，在这三个剂量各自之间的几乎无药物释放的间隔具有大约2小时至8小时的持续时间。
[0364] 在一个实施例中，用位于至少两个含有药物“剂量单位”中的封闭并且优选密封的胶囊剂的剂型实现脉冲释放特性，其中胶囊剂内的每个剂量单位都提供一种不同的药物释放特性。通过剂量单位上的控制释放聚合物涂层或通过将活性剂并入控制释放聚合物基质中来实现一个或多个延迟释放剂量单位的控制。每个剂量单位可以包括压缩或模制的片剂，其中胶囊内的每个片剂提供不同的药物释放型式。对于模仿每天两次给药型式的剂型，第一片剂在摄入剂型后基本上立即释放药物，而第二片剂在摄入剂型后约3小时至少于14小时释放药物。对于模仿每天三次给药型式的剂型，第一片剂在摄入剂型后基本上立即释放药物，第二片剂在摄入剂型后约3小时至少于10小时释放药物，并且第三片剂在摄入剂型后至少5小时至约18小时释放药物。该剂型可能包括超过三个片剂。尽管该剂型通常不包括超过第三片剂，但是可以使用容纳超过三个片剂的剂型。
[0365] 可替代地，该胶囊剂内的每个剂量单位都可以包括多个含有药物的珠粒、颗粒剂或微粒。如在本领域已知的，含药“珠粒”是指用药物和一种或多种赋形剂或聚合物制备的珠粒。含有药物的珠粒可以通过将药物应用到惰性载体(例如涂有药物的惰性糖珠粒)中而生产，或通过制造包括药物和一个或多个赋形剂两者的“芯”而生产。还正如所已知的，含有药物的“颗粒剂”和“微粒”包含可以包括或不包括一种或多种另外的赋形剂或聚合物的药物微粒。与含有药物的珠粒相对比，颗粒剂和微粒不包含惰性支持体。颗粒剂通常包括药物微粒并且需要进一步加工。通常，微粒比颗粒剂小，并且不被进一步加工。尽管可以配制珠粒、颗粒剂和微粒来提供立即释放，但是通常利用珠粒和颗粒剂来提供延迟释放。
[0366] 在一个实施例中，该化合物被配制用于局部给予。适合的局部剂型包括洗剂、乳膏、软膏以及凝胶。“凝胶”是一种半固体系统，包含活性剂(即化合物)在液体运载体中的分散体，该液体运载体通过溶解或悬浮于该液体运载体中的增稠剂或高分子材料的作用呈半固体。该液体可以包括亲脂性组分、水性组分或两者。一些乳剂可以是凝胶或者另外包括凝胶组分。然而，一些凝胶不是乳剂，因为它们不含有不混溶组分的均质共混物。用于制备洗剂、乳膏、软膏以及凝胶的方法在本领域是熟知的。
[0367] 本文所述的化合物可以与其他活性化合物辅助地给予。这些化合物包括但不限于镇痛药、消炎药、解热药、抗抑郁药、抗癫痫药、抗组胺药、抗偏头痛药、抗毒蕈碱药、抗焦虑药、镇静药、安眠药、抗精神病药、支气管扩张药、抗哮喘药、心血管药、皮质类固醇、多巴胺能药、电解质类、胃肠药、肌肉松弛剂、营养剂、维生素、拟副交感神经药、兴奋剂、降食欲剂和抗发作性睡眠药。如本文所使用的“辅助给予”是指可以与一种或多种其他活性剂以相同的剂型或分开的剂型给予该化合物。
[0368] 可以与这些化合物一起辅助给予的化合物的具体实例包括但不限于醋氯芬酸、醋氨酚、阿托莫西汀(adomexetine)、阿莫曲坦、阿普唑仑、金刚烷胺、安西奈德、氨基环丙烷、阿米替林、氨氯地平、阿莫沙平、苯丙胺、阿立哌唑、阿司匹林、阿托西汀、阿扎司琼、阿扎他定、倍氯米松、贝那替秦、苯噁洛芬、柏莫洛芬、倍他米松、比西发定、溴隐亭、布地奈德、丁丙诺啡、安非他酮、丁螺环酮、布托啡诺、布替林、咖啡因、卡马西平、卡比多巴、卡立普多、塞来昔布、利眠宁、氯丙嗪、水杨酸胆碱、西酞普兰、氯米帕明、氯硝西泮、可乐定、氯尼他秦、氯氮卓、氯噻西泮、氯噁唑仑、氯氮平、可待因、皮质酮、可的松、环苯扎林、赛庚啶、地美替林、地昔帕明、地索吗啡、地塞米松、地塞比诺、硫酸右苯丙胺、右吗拉胺、右丙氧芬、地佐辛、地西泮、二苯西平、双氯芬酸钠、二氟尼柳、双氢可待因、双氢麦角胺、二氢吗啡、二甲他林、双丙戊酸钠(divalproex)、利扎曲普坦(dizatriptan)、多拉司琼、多奈哌齐、度硫平、多塞平、度洛西汀、麦角胺、依他普仑、艾司唑仑、乙琥胺、依托度酸、法莫克西汀、灭酸酯类、非诺洛芬、芬太尼、氟地西泮、氟西汀、氟非那嗪、氟西泮、氟比洛芬、氟噁唑兰、氟伏沙明、夫罗曲坦、加巴喷丁(gabapentin)、加兰他敏、吉哌隆、银杏(ginko bilboa)、格拉司琼、氟哌啶醇、石杉碱A、氢可酮、氢化可的松、氢吗啡酮、羟嗪、布洛芬、丙咪嗪、茚地普隆、吲哚美辛、吲哚洛芬、伊普吲哚、伊沙匹隆、酮色林、酮洛芬、酮咯酸、来索吡琼、左旋多巴、脂肪酶、洛非帕明、劳拉西泮、洛沙平、马普替林、马吲哚、甲芬那酸、褪黑素、美利曲辛、美金刚、哌替啶、甲丙氨酯、氨水杨酸、美他帕明、美他沙酮、美沙酮、美沙酮、甲基苯丙胺、美索巴莫、甲基多巴、哌醋甲酯、水杨酸甲酯、美西麦角、甲氧氯普胺、米安色林、米非司酮、米那普仑、米那普林、米氮平、吗氯贝胺、莫达非尼(抗发作性睡病药)、吗茚酮、吗啡、吗啡盐酸盐、萘丁美酮、纳多洛尔、萘普生、那拉曲坦、奈法唑酮、加巴喷丁、诺米芬辛、去甲替林、奥氮平、奥沙拉秦、昂丹司琼、奥匹哌醇、奥芬那君、奥沙氟生、奥沙普秦、奥沙西泮、羟色氨酸、羟考酮、羟吗啡酮、胰脂肪酶、帕瑞昔布、帕罗西汀、匹莫林、喷他佐辛、胃蛋白酶、奋乃静、非那西汀、苯甲曲秦、芬美曲秦、保泰松、苯妥英、磷脂酰丝氨酸、匹莫齐特、吡吲哚、吡罗昔康、苯噻啶(pizotifen)、苯噻啶(pizotyline)、普拉克索、泼尼松龙、强的松、普瑞巴林、心得安、丙吡西平、右丙氧芬、普罗替林、夸西泮、奎纽帕明、瑞波西汀、利血平、利培酮、利坦色林、卡巴拉汀、利扎曲坦、罗非昔布、罗匹尼罗、罗替戈汀、双水杨酯、舍曲林、西布曲明、西地那非、柳氮磺胺吡啶、舒林酸、舒马曲坦、他克林、羟基安定、丁苯那嗪(tetrabenazine)、噻嗪类、甲硫哒嗪、氨砜噻吨、硫必利、tiasipirone、替扎尼定、托芬那辛、托美丁、托洛沙酮、托吡酯、曲马多、曲唑酮、三唑仑、三氟拉嗪、曲美苄胺、曲米帕明、托烷司琼、伐地考昔、丙戊酸、文拉法辛、维洛沙秦、维生素E、齐美定、齐拉西酮、佐米曲坦、唑吡坦、佐匹克隆以及其异构体、盐和组合。
[0369] 另外的一种或多种活性剂可以被配制用于立即释放、控制释放或其组合。
[0370] 实例
[0371] 实例1.N4-羟基胞苷或1-(3,4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-4-(羟基氨基)嘧啶-2-酮(EIDD-01931)的合成
[0372] 通过受阻芳基磺酰基基团活化核碱基的4-位后，通过全硅烷化保护尿苷(参见图1)。对该基团用羟胺错位安置在N-4-羟基部分。使用任何数量的可获得的氟化物源之一进行全面脱保护产生所希望的产物。
[0373] 可以通过在pH调节的羟胺溶液中加热而从胞苷在一个步骤中制备该化合物。尽管较短，但该途径倾向于产生较低的产率并且需要通过反相快速柱色谱法进行纯化，限制其用于生产较小的量。
[0374] 实例2.一般方法：所有化学反应均在烤炉烘干的玻璃器皿中在氮气气氛下进行，除标注的情况外。化学品和溶剂是试剂级的，并从商业供应商(通常为奥德里奇公司(Aldrich)、费希尔公司(Fisher)、可乐斯公司(Acros)、Carbosynth有限责任公司和奥克伍德化学品公司(Oakwood Chemical))购买，并且如收到时那样使用，除标注的情况外。具体地，EIDD-1910、EIDD-1993和EIDD-2003购自Carbosynth有限责任公司。用于反应的溶剂(四氢呋喃、甲醇、乙腈、二氯甲烷、甲苯、吡啶、二甲基甲酰胺)在所有情况下均是≥99.9％无水的。除非另有说明，所有反应在薄层层析(TLC)之后完成。在硅胶上进行TLC分析，使用UV灯(254nm)照射或用KMnO4染色并加热。使用40-60微米( 粒度)的RediSep Rf硅胶(购自Teledyne Isco公司)作为固定相进行手动快速柱色谱。在Teledyne Isco CombiFlash Companion上进行自动梯度快速柱色谱；用预包装的RediSep Rf硅胶作为固定相进行正相分离，并且用预包装的RediSep Rf C18高性能黄金固定相进行反相分离。使用离子交换色谱法，用DEAE(二乙基氨基乙酯)Sephadex A-25作为固定相和水性TEAB(三乙铵碳酸氢盐)作为流动相进行三磷酸酯纯化。
[0375] Varian 400MHz仪器上测量1H NMR光谱，并使用MestReNova软件9.0.1版进行处理。相对于适当的溶剂峰测量化学位移：CDCl3(δ7.27)，DMSO-d6(δ2.50)，CD3OD(δ3.31)，D2O(δ4.79)。以下缩写用于描述偶联：s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，p＝五重峰，m＝多重峰，br＝宽峰。在Varian仪器上以100MHz测量13C NMR光谱，其中相对于适当的溶剂峰的化学位移是：CDCl3(δ77.0)，DMSO-d6(δ39.5)，CD3OD(δ49.0)。在Varian仪器上以376MHz测量19F光谱，并且在Varian仪器上以162MHz测量31P光谱。通过MestReNova软件使用相同溶剂中的相应的1H NMR光谱的绝对参考函数来校准19F光谱、31P光谱和13C光谱(仅在D2O中)的化学位移。
[0376] 使用Agilent 1200系列LC(UV吸收检测器，在254nm下)，使用Zorbax Eclipse XDB C18 4.6x50mm、3.5微米柱，用MeOH/水混合物(通常为95/5等梯度的)和Agilent 6120LCMS四极杆仪器洗脱进行标称(低分辨率)液相色谱/质谱。利用赛默公司(Thermo)LTQ-FTMS，使用APCI或ESI，由埃默里大学质谱中心(Emory University Mass Spectrometry Center)进行高分辨质谱。
[0377] 实例3.
[0378]
[0379] S1：向配备由顶置式搅拌器和氮气进气口的2L三颈烧瓶填充尿苷(25g，102mmol)和1L二氯甲烷。将所得溶液冷却至0℃，并顺序地添加4-DMAP(1.251g，10.24mmol)和咪唑(27.9g，409mmol)。经10分钟添加TBSCl(61.7g，409mmol)，并且将所得混合物温热至环境温度并搅拌18小时。将水(300mL)添加到反应混合物中并在室温下搅拌2小时，分离各层，并且用另外的二氯甲烷萃取水层。将合并的有机层用盐水(1x300mL)洗涤，经硫酸钠干燥、过滤并在减压下浓缩以产生75g的透明无色油状物。通过快速色谱法(5％至20％在己烷中的EtOAc梯度)进行纯化以产生呈透明无色油状物的S1(45g，75％)，当在真空中干燥时将其固化：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.09(s,1H),8.02(d,J＝8.2Hz,1H),5.87(d,J＝3.6Hz,1H),5.67(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),4.07(q,J＝3.8,3.3Hz,1H),3.98(dd,J＝11.7,1.7Hz,1H),
3.75(dd,J＝11.7,1.1Hz,1H),0.94(s,9H),0.90(s,9H),0.88(s,9H),0.13(s,3H),0.12(s,
3H),0.08(s,3H),0.07(s,3H),0.07(s,3H),0.06(s,3H)。
3.75(dd,J＝11.7,1.1Hz,1H),0.94(s,9H),0.90(s,9H),0.88(s,9H),0.13(s,3H),0.12(s,
3H),0.08(s,3H),0.07(s,3H),0.07(s,3H),0.06(s,3H)。
[0380] S2：向1L圆底烧瓶填充S1(28g，47.7mmol)和二氯甲烷(700mL)。使用冰浴将溶液冷却至0℃；顺序地添加4-DMAP(0.583g，4.77mmol)和N,N--二异丙基乙胺(41.7mL，239mmol)。将2,4,6-三异丙基苯-1-磺酰氯(28.9g，95mmol)缓慢添加到烧瓶中，并且在添加完成后，将烧瓶温热至环境温度并搅拌18小时。将深橙色溶液用冰浴冷却至0℃，并且经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(24.66g，191mmol)，然后一次性添加固体羟胺盐酸盐(13.26g，
191mmol)。将混合物温热至室温并搅拌3小时。将反应用水(200mL)淬灭，并且分离得到的各层。将水层用二氯甲烷(200mL)萃取，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩以产生深橙色油状物。通过快速色谱法(15％至50％在己烷中的EtOAc梯度)进行纯化以产生呈油状物的S2(19.8g，69％，经2个步骤)，将其在真空中干燥后固化成半固体：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(s,1H),6.31(s,1H),5.91(d,J＝4.6Hz,1H),5.56(dd,J＝
8.2,2.0Hz,1H),4.07(m,2H),4.02(m,1H),3.91(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),3.73(dd,J＝
11.6,2.4Hz,1H),0.95(s,9H),0.92(s,9H),0.89(s,9H),0.12(s,6H),0.098(s,3H),0.083(s,3H),0.063(s,3H),0.057(s,3H)；LRMS m/z 602.3[M+H]+。
191mmol)。将混合物温热至室温并搅拌3小时。将反应用水(200mL)淬灭，并且分离得到的各层。将水层用二氯甲烷(200mL)萃取，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩以产生深橙色油状物。通过快速色谱法(15％至50％在己烷中的EtOAc梯度)进行纯化以产生呈油状物的S2(19.8g，69％，经2个步骤)，将其在真空中干燥后固化成半固体：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.15(s,1H),6.31(s,1H),5.91(d,J＝4.6Hz,1H),5.56(dd,J＝
8.2,2.0Hz,1H),4.07(m,2H),4.02(m,1H),3.91(dd,J＝11.6,2.4Hz,1H),3.73(dd,J＝
11.6,2.4Hz,1H),0.95(s,9H),0.92(s,9H),0.89(s,9H),0.12(s,6H),0.098(s,3H),0.083(s,3H),0.063(s,3H),0.057(s,3H)；LRMS m/z 602.3[M+H]+。
[0381] EIDD-1931：向50mL圆底烧瓶填充S2(23.3g，38.7mmol)和THF(50mL)。一次性添加三乙胺三氢氟酸盐(6.30mL，38.7mmol)，并将混合物在环境温度下搅拌18小时。将该混合物在减压下浓缩，并且将残余物溶解于最少量的MeOH中，并将该溶液缓慢添加到含有快速搅拌的二氯甲烷(500mL)的锥形瓶(Erlenmeyer flask)中以沉淀产物；将混合物在室温下搅拌15分钟。通过真空过滤收集研磨的固体，用二氯甲烷洗涤，然后用醚洗涤。将固体在真空中干燥以产生呈白色固体的标题化合物(7.10g，71％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.16(d,J＝8.2Hz,1H),5.86(d,J＝5.6Hz,1H),5.59(d,J＝8.2Hz,1H),4.19-4.04(m,2H),3.93(q,J＝
3.3Hz,1H),3.77(dd,J＝12.2,2.9Hz,1H),3.68(dd,J＝12.1,2.9Hz,1H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.46(s,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,1H),5.71(d,J＝6.3Hz,1H),5.54(d,J＝7.7Hz,1H),5.23(d,J＝6.0Hz,1H),5.02(d,J＝4.6Hz,1H),4.98(t,J＝5.1Hz,1H),
3.95(q,J＝5.9Hz,1H),3.89(td,J＝4.9Hz,3.0Hz,1H),3.75(q,J＝3.4Hz,1H),3.50(qdd,J＝11.9Hz,5.2Hz,3.5Hz,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ150.0,143.9,130.5,98.89,87.1,
85.0,72.8,70.8,61.8。LRMS m/z260.1[M+H]+。
3.3Hz,1H),3.77(dd,J＝12.2,2.9Hz,1H),3.68(dd,J＝12.1,2.9Hz,1H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.95(s,1H),9.46(s,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,1H),5.71(d,J＝6.3Hz,1H),5.54(d,J＝7.7Hz,1H),5.23(d,J＝6.0Hz,1H),5.02(d,J＝4.6Hz,1H),4.98(t,J＝5.1Hz,1H),
3.95(q,J＝5.9Hz,1H),3.89(td,J＝4.9Hz,3.0Hz,1H),3.75(q,J＝3.4Hz,1H),3.50(qdd,J＝11.9Hz,5.2Hz,3.5Hz,2H)；13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ150.0,143.9,130.5,98.89,87.1,
85.0,72.8,70.8,61.8。LRMS m/z260.1[M+H]+。
[0382] 实例4.
[0383]
[0384] EIDD-2050：将EIDD-1931(124mg，0.478mmol)在无水吡啶(5mL)中的溶液冷却至-20℃，并且经5分钟时间用壬酰氯(95μL，0.528mmol)逐滴处理。将混合物在0℃下搅拌15小时，并且然后用甲醇(2mL)淬灭。在室温下20分钟后，将混合物浓缩至干燥，并且然后通过快速色谱法(1％至5％在DCM中MeOH梯度)进行纯化。将所得的纯化的固体与二氯甲烷(3x10mL)共蒸发，并且然后在高真空下干燥40小时以给出呈白色固体的标题化合物(82mg，
43％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.50(d,J＝8.3Hz,1H),5.88(d,J＝5.1Hz,1H),5.70(d,J＝
8.2Hz,1H),4.19-4.08(m,1H),3.97(q,J＝3.1Hz,1H),3.80(dd,J＝12.2,2.9Hz,1H),3.70(dd,J＝12.2,3.3Hz,1H),2.49(t,J＝7.4Hz,2H),1.67(p,J＝7.4Hz,2H),1.37-1.24(m,
9H),0.93-0.84(m,3H)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ171.4,149.7,149.4,134.6,9597,88.5,
84.9,73.7,70.2,61.1,31.8,31.6,28.9,28.9,28.8,24.6,22.3,13.0；LRMS m/z400.2[M+H]+。
43％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.50(d,J＝8.3Hz,1H),5.88(d,J＝5.1Hz,1H),5.70(d,J＝
8.2Hz,1H),4.19-4.08(m,1H),3.97(q,J＝3.1Hz,1H),3.80(dd,J＝12.2,2.9Hz,1H),3.70(dd,J＝12.2,3.3Hz,1H),2.49(t,J＝7.4Hz,2H),1.67(p,J＝7.4Hz,2H),1.37-1.24(m,
9H),0.93-0.84(m,3H)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ171.4,149.7,149.4,134.6,9597,88.5,
84.9,73.7,70.2,61.1,31.8,31.6,28.9,28.9,28.8,24.6,22.3,13.0；LRMS m/z400.2[M+H]+。
[0385] 实例5.
[0386]
[0387] EIDD-2051：在0℃下，在氮气下，经由注射器向EIDD-1931(0.194g，0.75mmol)在吡啶(4.8mL)中的搅拌溶液中逐滴添加氯甲酸正庚酯(0.15mL，0.825mmol)。将混合物在0℃下搅拌4小时，并且然后通过旋转蒸发进行浓缩。将混合物吸收于具有一滴MeOH的DCM中，并且自动快速色谱(40g柱，0至15％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈粉末状白色固体的标题化合物(0.126g，42％)。NMR分析显示旋转异构体的9:1混合物(在核碱基附近的大多数信号是双重的，或是单个但宽的)：1H NMR(400MHz,CD3OD,仅主要的旋转异构体)δ7.50(d,J＝8.3Hz,1H),5.86(d,J＝5.0Hz,1H),5.69(d,J＝8.2Hz,1H),4.23(t,J＝6.6Hz,2H),4.13(q,J＝
5.1Hz,1H),4.10(q,J＝4.0Hz,1H),3.96(q,J＝3.4Hz,1H),3.79(dd,J＝12.2,2.8Hz,1H),
3.69(dd,J＝12.2Hz,3.2Hz,1H),1.77-1.65(m,2H),1.45-1.25(m,8H),0.90(t,J＝6.9Hz,
3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,仅主要的旋转异构体)δ153.3,149.0,148.7,133.9,94.9,
88.0,84.2,73.1,69.5,68.0,60.5,30.9,28.0,27.7,24.7,21.6,12.4；针对C17H28N3O8[M+H]+的HRMS计算值：402.18709，发现值：402.18774。
5.1Hz,1H),4.10(q,J＝4.0Hz,1H),3.96(q,J＝3.4Hz,1H),3.79(dd,J＝12.2,2.8Hz,1H),
3.69(dd,J＝12.2Hz,3.2Hz,1H),1.77-1.65(m,2H),1.45-1.25(m,8H),0.90(t,J＝6.9Hz,
3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,仅主要的旋转异构体)δ153.3,149.0,148.7,133.9,94.9,
88.0,84.2,73.1,69.5,68.0,60.5,30.9,28.0,27.7,24.7,21.6,12.4；针对C17H28N3O8[M+H]+的HRMS计算值：402.18709，发现值：402.18774。
[0388] 实例6.
[0389]
[0390] S3：在0℃下，在氮气下，向S1(2.20g，3.75mmol)在DCM(37mL)中的搅拌溶液中顺序地添加4-DMAP(0.460g，3.75mmol)、三乙胺(0.78mL，5.62mmol)和2,4,6-三异丙基苯-1-磺酰氯(1.70g，5.62mmol)。将混合物温热至室温并搅拌16小时。将该混合物再冷却至0℃，并且经由注射器添加三乙胺(2.60mL，18.75mmol)，然后一次性添加O-甲基羟胺盐酸盐(1.56g，18.75mmol)。将混合物温热至室温并搅拌3小时，然后通过添加水淬灭。将有机层去除并将该有机层用盐水洗涤。将合并的水层用DCM(2x25mL)萃取，并且将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗品通过快速色谱法(10％至20％在己烷中的EtOAc梯度)进行纯化以给出呈白色泡沫状的S3(1.72g，74％)。所有NMR峰都是宽的，可能是由于N-OMe旋转异构体。该光谱没有进行去卷积。LRMS m/z 617.3[M+H]+。
[0391] EIDD-2052：在0℃下，在氮气下，向S3(0.300g，0.487mmol)在MeOH(5mL)中的搅拌溶液中经由注射器逐滴添加在MeOH中的1.25M HCl溶液(2.3mL，2.92mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时。添加三乙胺(0.70mL，5.05mmol)，并且将混合物搅拌2小时。将该混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并进行快速色谱法(5％至20％在EtOAc中的iPrOH梯度)给出呈灰白色固体的标题化合物(85mg，64％)：1H NMR(400MHz,D2O)δ7.19(d,J＝8.2Hz,1H),5.82(d,J＝5.4Hz,1H),5.55(d,J＝8.2Hz,1H),4.15-4.07(m,2H),3.92(q,J＝3.5Hz,1H),3.76(dd,J＝12.2Hz,2.9Hz,1H),3.76(s,3H),3.67(dd,J＝12.1Hz,3.4Hz,1H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.4,146.2,133.0,98.6,89.8,86.1,74.7,71.7,62.7,61.9,25.2；LRMS m/z +274.1[M+H]。
[0392] 实例7.
[0393]
[0394] S4：向圆底烧瓶填充2'-甲基尿苷(0.850g，3.29mmol)、咪唑(0.896g，13.17mmol)和DCM(6.5mL)，并将混合物在氮气下在搅拌下冷却至0℃。经15分钟经由注射器逐滴添加三甲基甲硅烷基三氟甲磺酸盐(2.24mL，12.34mmol)。将混合物温热至室温且搅拌过夜。在搅拌16小时后，将该混合物用DCM(200mL)稀释并倒入冰冷的水(100mL)中。将有机层去除并且将水层用DCM(1x100mL)萃取。将合并的有机层用冰冷的盐水(1x100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩以给出1.8g粗品。将该物质吸收于己烷中，并且自动快速色谱(40g柱，在己烷中的5％至20％EtOAc梯度)给出了呈白色片状固体的S4(1.50g，96％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(d,J＝8.2Hz,1H),7.92(s,1H),5.92(s,1H),5.64(dd,J＝8.2Hz,2.3Hz,1H),4.05-3.95(m,2H),3.83(d,J＝9.1Hz,1H),3.73(d,J＝11.2Hz,1H),1.21(s,
3H),0.20(s,9H),0.18(s,9H),0.17(s,9H)；LRMS m/z475.2[M+H]+。
3H),0.20(s,9H),0.18(s,9H),0.17(s,9H)；LRMS m/z475.2[M+H]+。
[0395] S5：在0℃下，在氮气下，向S4(1.50g，3.16mmol)和4-DMAP(0.039g，0.316mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(2.75mL，15.80mmol)，然后一次性添加固体2,4,6-三异丙基苯-1-磺酰氯(1.91g，6.32mmol)。允许将该搅拌的混合物温热至室温。在室温下搅拌16小时后，将该混合物冷却至0℃，并用冰冷的饱和水性NaHCO3(3x25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩以给出呈棕色油状物的4.2g粗品。将粗品吸收于己烷中，并且自动快速色谱(80g柱，1％至10％在己烷中的EtOAc梯度)给出了所希望的磺酰基活化的产物(约1.57g，约2.12mmol)，通过LCMS是大部分纯的(通过1H NMR确认推定的身份)。将该混合物全部立即用于下一步骤，不经进一步纯化或分析。
[0396] 在0℃下，在氮气下，向上述新鲜制备的物质(约1.57g，约2.12mmol)在MeCN(21mL)中的搅拌溶液中经由注射器添加三乙胺(0.89mL，6.35mmol)，然后一次性添加呈固体的O-甲基羟胺盐酸盐(0.531g，6.35mmol)。将混合物温热至室温且搅拌过夜。在搅拌16小时后，将该混合物倒入饱和水性NaHCO3(50mL)中并用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。在CombiFlash(80g柱，5％至15％在己烷中的EtOAc梯度)上的自动快速色谱给出了呈透明粘稠油状物的S5(0.571g，36％，经2个步骤)，通过NMR以9:1比率的互变异构体存在：1H NMR(400MHz,CDCl3,仅主要的互变异构体)δ8.01(br s,1H),7.59(d,J＝8.3Hz,1H),5.88(s,1H),5.54(d,J＝8.1Hz,1H),4.03-3.93(m,2H),3.84(s,3H),3.82(d,J＝9.0Hz,1H),3.71(d,J＝12.0Hz,1H),1.20(s,3H),0.23-0.15(m,27H)；LRMS m/z 504.2[M+H]+。
[0397] EIDD-2054：在氮气下，在室温下，向圆底烧瓶填充S5(0.510g，1.01mmol)和搅拌棒。经由注射器添加浓HCl(1％v/v)在MeOH中的溶液(10mL，1.20mmol HCl)，并将混合物在室温下搅拌30分钟。一次性添加固体Na2CO3(1g)，并且将混合物在室温下搅拌30分钟。添加硅藻土，并将混合物通过旋转蒸发进行浓缩以给出固定在固体上的粗品。自动快速色谱(12g柱，0至10％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈白色粉末状固体的标题化合物(0.265g，91％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.36(d,J＝8.3Hz,1H),5.89(s,1H),5.54(d,J＝8.2Hz,1H),
3.95(dd,J＝12.5Hz,2.2Hz,1H),3.86(dt,J＝9.2Hz,2.4Hz,1H),3.82-3.72(m,2H),3.78(s,3H),1.17(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.3,146.2,132.8,98.2,92.6,83.4,79.8,+
73.8,61.9,60.7,20.3；LRMS m/z288.1[M+H]。
3.95(dd,J＝12.5Hz,2.2Hz,1H),3.86(dt,J＝9.2Hz,2.4Hz,1H),3.82-3.72(m,2H),3.78(s,3H),1.17(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.3,146.2,132.8,98.2,92.6,83.4,79.8,+
73.8,61.9,60.7,20.3；LRMS m/z288.1[M+H]。
[0398] 实例8.
[0399]
[0400] S6：在0℃下，在氮气下，向S4(1.67g，3.52mmol)和4-DMAP(0.043g，0.352mmol)在DCM(25mL)中的搅拌溶液中经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(3.06mL，17.59mmol)，然后一次性添加固体2,4,6-三异丙基苯-1-磺酰氯(1.92g，6.33mmol)。允许将该搅拌的混合物温热至室温。在室温下搅拌16小时后，将该混合物冷却至0℃，并用冰冷的饱和水性NaHCO3(3x25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩以给出呈棕色油状物的4.1g粗品。将粗品吸收于己烷中，并且自动快速色谱(80g柱，1％至10％在己烷中的EtOAc梯度)给出了所希望的磺酰基活化的产物(约1.81g，约2.44mmol)，通过LCMS是大部分纯的(通过1H NMR确认推定的身份)。将该混合物全部立即用于下一步骤，不经进一步纯化。
[0401] 在0℃下，在氮气下，向上述新鲜制备的物质(约1.81g，约2.44mmol)在MeCN(25mL)中的搅拌溶液中经由注射器添加三乙胺(1.02mL，7.33mmol)，然后一次性添加呈固体的羟胺盐酸盐(0.509g，7.33mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2小时。将该混合物倒入饱和水性NaHCO3(50mL)中并用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(40g柱，梯度为5％至35％在己烷中的EtOAc)给出了呈白色片状固体的S6(0.931g，54％，经2个步骤)，通过NMR以7:1比率的互变异构体存在：1H NMR(400MHz,DMSO-d6,仅主要互变异构体)δ9.99(s,1H),9.57(d,J＝2.1Hz,1H),7.25(d,J＝8.3Hz,1H),5.72(s,1H),5.45(dd,J＝8.2Hz,2.1Hz,1H),3.92(d,J＝12.0Hz,1H),3.85-
3.75(m,2H),3.66(d,J＝12.0Hz,1H),1.13(s,3H),0.15(s,9H),0.14(s,9H),0.12(s,9H)；
LRMS m/z490.0[M+H]+。
3.75(m,2H),3.66(d,J＝12.0Hz,1H),1.13(s,3H),0.15(s,9H),0.14(s,9H),0.12(s,9H)；
LRMS m/z490.0[M+H]+。
[0402] EIDD-2053：在氮气下，在室温下，向圆底烧瓶填充S6(0.200g，0.408mmol)和搅拌棒。经由注射器添加浓HCl(1％v/v)在MeOH中的溶液(6mL，0.72mmol HCl)，并将混合物在室温下搅拌30分钟。一次性添加固体Na2CO3(0.75g)，并且将混合物在室温下搅拌30分钟。添加硅藻土，并将混合物通过旋转蒸发进行浓缩以给出固定在固体上的粗品。自动快速色谱(4g柱，梯度为5％至25％在DCM中的MeOH)给出了呈白色粉末状固体的标题化合物(0.110g，99％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.30(d,J＝8.3Hz,1H),5.90(s,1H),5.56(d,J＝8.2Hz,1H),
3.95(dd,J＝12.5Hz,2.1Hz,1H),3.86(dt,J＝9.2Hz,2.7Hz,1H),3.80(d,J＝9.2Hz,1H),
3.75(dd,J＝12.5Hz,3.0Hz,1H),1.18(s,3H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ151.6,147.3,131.8,
98.9,91.7,81.9,79.5,73.3,60.4,49.5,19.6；LRMS m/z 274.1[M+H]+。
3.95(dd,J＝12.5Hz,2.1Hz,1H),3.86(dt,J＝9.2Hz,2.7Hz,1H),3.80(d,J＝9.2Hz,1H),
3.75(dd,J＝12.5Hz,3.0Hz,1H),1.18(s,3H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ151.6,147.3,131.8,
98.9,91.7,81.9,79.5,73.3,60.4,49.5,19.6；LRMS m/z 274.1[M+H]+。
[0403] 实例9.
[0404]
[0405] EIDD-2061：向可密封的压力管填充搅拌棒、三磷酸胞苷二钠盐(0.137g，0.260mmol)和调节至pH＝5的2N水性羟胺溶液(2.0mL，4.0mmol)。将这些试剂混合后，测量溶液的pH(pH＝3)，并且添加另外几滴10％w/w水性NaOH溶液重新调节溶液至pH＝5。将管密封并在55℃下在搅拌下加热5小时。将混合物冷却至室温，打开密封的管，并添加100mM三乙铵碳酸氢盐(TEAB)的溶液(2mL)。将该管的内容物转移到圆底烧瓶中，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗物质吸收于100mM TEAB中，并在DEAE上进行色谱，然后冷冻干燥产物，给出所希望的产物的三乙铵盐。
[0406] 将新鲜制备的Dowex(Li+形式)的离子交换柱(17mL CV)用5CV水冲洗。将制备的三乙铵盐吸收于水中并通过离子交换柱洗脱。将含有产物的级分合并并且冻干以给出呈蓬松的褐色固体的标题化合物(0.030g，22％)：1H NMR(400MHz,D2O)δ7.19(d,J＝8.3Hz,1H),5.95(d,J＝6.3Hz,1H),5.82(d,J＝8.3Hz,1H),4.42-4.34(m,2H),4.24-4.10(m,3H)；31P NMR(162MHz,D2O)δ-8.5(br s),-11.2(d,J＝19.6Hz),-22.0(t,J＝19.3Hz)；LRMS m/z498.0[M-H]-。
[0407] 实例10.
[0408]
[0409] EIDD-2080：向圆底烧瓶填充2'-脱氧-2'-氟-2'-甲基胞苷(120mg，0.463mmol)和调节至pH＝5的2N水性羟胺溶液(1.1mL，2.2mmol)，并且将混合物加热至50℃。16小时后，将该混合物浓缩至干燥，并且然后通过快速色谱法(19mmx170mm柱体积，10％在DCM中的MeOH)进行纯化。将所得胶状物与DCM(3x4mL)共蒸发以给出白色固体，将该白色固体在40℃下在1
高真空下进一步干燥24小时以产生呈白色粉末的标题化合物(94mg，74％)：H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.23(d,J＝8.3Hz,1H),6.07(d,J＝19.8Hz,1H),5.60(d,J＝8.3Hz,1H),
4.04–3.95(m,1H),3.91(d,J＝8.3Hz,2H),3.77(dd,J＝12.5,2.3Hz,1H),1.36(d,J＝
22.2Hz,3H)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ150.0,144.6,129.9,101.4,99.6,98.0,88.7(d,J＝+
46.5Hz),81.5,71.5(d,J＝18.1Hz),58.9,15.5(d,J＝25.8Hz)；针对C10H15FN3O5[M+H]的HRMS计算值：276.09903，发现值：276.09910。
高真空下进一步干燥24小时以产生呈白色粉末的标题化合物(94mg，74％)：H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.23(d,J＝8.3Hz,1H),6.07(d,J＝19.8Hz,1H),5.60(d,J＝8.3Hz,1H),
4.04–3.95(m,1H),3.91(d,J＝8.3Hz,2H),3.77(dd,J＝12.5,2.3Hz,1H),1.36(d,J＝
22.2Hz,3H)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ150.0,144.6,129.9,101.4,99.6,98.0,88.7(d,J＝+
46.5Hz),81.5,71.5(d,J＝18.1Hz),58.9,15.5(d,J＝25.8Hz)；针对C10H15FN3O5[M+H]的HRMS计算值：276.09903，发现值：276.09910。
[0410] 实例11.
[0411]
[0412] EIDD-2085：制备羟胺盐酸盐(3.33g，48.0mmol)在水(24mL)中的约2N溶液，并用少量的水性NaOH(10％w/w)调节至pH＝5。向可密封的压力管填充该溶液和2'-氟-2'-脱氧胞苷(0.736g，3.00mmol)，将烧瓶密封，并在55℃下在搅拌下加热16小时。将混合物冷却至室温，转移到圆底烧瓶中，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗物质悬浮在MeOH中并固定在硅藻土(Celite)上。自动快速色谱(40g柱，5％至25％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈灰白色固体的标题化合物(0.365g，47％)。NMR分析显示该化合物按重量计是约90％纯的，其余的吸藏DCM和MeOH。将样品(103mg)溶解于水中，在干冰浴中冷冻并且冻干以给出无溶剂的91mg标题化1
合物。将该纯化的物质用于所有生物测试：H NMR(400MHz,D2O)δ7.00(d,J＝8.3Hz,1H),
5.91(dd,J＝21.0Hz,2.0Hz,1H),5.71(d,J＝8.2Hz,1H),5.19(ddd,J＝53.1Hz,5.0Hz,
2.0Hz,1H),4.36(ddd,J＝20.0Hz,8.2Hz,5.0Hz,1H),4.08-4.02(br m,1H),3.95(dd,J＝
12.9Hz,2.5Hz,1H),3.78(dd,J＝12.9Hz,4.6Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ150.8,146.7,
132.5,98.4,93.1(d,J＝183.1Hz),89.0(d,J＝35.9Hz),82.1,68.3(d,J＝16.5Hz),
60.2Hz；19F NMR(376MHz,D2O)δ-200.51(dt,J＝53.1Hz,20.4Hz)；针对C9H13FN3O5[M+H]+的HRMS计算值：262.08338，发现值：262.08332。
合物。将该纯化的物质用于所有生物测试：H NMR(400MHz,D2O)δ7.00(d,J＝8.3Hz,1H),
5.91(dd,J＝21.0Hz,2.0Hz,1H),5.71(d,J＝8.2Hz,1H),5.19(ddd,J＝53.1Hz,5.0Hz,
2.0Hz,1H),4.36(ddd,J＝20.0Hz,8.2Hz,5.0Hz,1H),4.08-4.02(br m,1H),3.95(dd,J＝
12.9Hz,2.5Hz,1H),3.78(dd,J＝12.9Hz,4.6Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ150.8,146.7,
132.5,98.4,93.1(d,J＝183.1Hz),89.0(d,J＝35.9Hz),82.1,68.3(d,J＝16.5Hz),
60.2Hz；19F NMR(376MHz,D2O)δ-200.51(dt,J＝53.1Hz,20.4Hz)；针对C9H13FN3O5[M+H]+的HRMS计算值：262.08338，发现值：262.08332。
[0413] 实例12.
[0414]
[0415] EIDD-2086：在0℃下，将EIDD-2054(45mg，0.16mmol)在无水THF(1mL)中的溶液用叔丁基氯化镁的1M THF溶液(0.31mL，0.31mmol)处理。在0℃下1小时后，经5分钟的时间，将该混合物用S7(139mg，0.31mmol)在无水THF(1mL)中的溶液逐滴处理。使该混合物温热至室温并搅拌过夜。将该混合物用饱和水性NH4Cl(5mL)淬灭，并且然后用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机相用饱和水性NaHCO3(2x15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩至干燥。将所得的粗黄色油状物通过快速色谱法(柱体积19mmx170mm，5％至10％在DCM中的MeOH梯度)进行纯化
1
以给出呈灰白色固体的、标题化合物的1:1非对映异构体混合物(49mg，56％)：H NMR(400MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ8.25(s,1H),7.32(t,J＝7.7Hz,2H),7.18(dd,J＝
16.8,8.0Hz,3H),6.81(d,J＝8.2Hz,1H),6.66(d,J＝8.2Hz,1H),5.87(d,J＝14.0Hz,1H),
5.55(d,J＝8.2Hz,1H),5.48(d,J＝8.2Hz,1H),5.00(h,J＝6.3Hz,1H),4.49-4.39(m,2H),
4.34(ddd,J＝11.8,8.3,3.4Hz,1H),4.07-3.86(m,2H),3.82(s,3H),3.74(dd,J＝38.5,
8.4Hz,1H),1.36(d,J＝2.2Hz,3H,),1.35(d,J＝2.2Hz,3H),1.25-1.20(m,6H),1.17(s,
3H),1.11(s,3H)；31P NMR(162MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ3.55,3.19；13C NMR(101MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ173.02,172.95,172.91,172.84,150.49,150.42,
149.28,149.18,144.31,144.22,130.74,130.46,129.87,129.83,125.28,125.16,119.93,
119.88,97.94,91.57,91.18,77.33,73.52,73.03,69.55,69.51,65.05,64.99,64.51,
61.80,50.41,50.32,29.68,21.70,21.67,21.61,21.58,20.93,20.88,20.82,20.46；针对C23H33N4O10PNa[M+Na]+的HRMS计算值：579.18265；发现值：579.18184。
1
以给出呈灰白色固体的、标题化合物的1:1非对映异构体混合物(49mg，56％)：H NMR(400MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ8.25(s,1H),7.32(t,J＝7.7Hz,2H),7.18(dd,J＝
16.8,8.0Hz,3H),6.81(d,J＝8.2Hz,1H),6.66(d,J＝8.2Hz,1H),5.87(d,J＝14.0Hz,1H),
5.55(d,J＝8.2Hz,1H),5.48(d,J＝8.2Hz,1H),5.00(h,J＝6.3Hz,1H),4.49-4.39(m,2H),
4.34(ddd,J＝11.8,8.3,3.4Hz,1H),4.07-3.86(m,2H),3.82(s,3H),3.74(dd,J＝38.5,
8.4Hz,1H),1.36(d,J＝2.2Hz,3H,),1.35(d,J＝2.2Hz,3H),1.25-1.20(m,6H),1.17(s,
3H),1.11(s,3H)；31P NMR(162MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ3.55,3.19；13C NMR(101MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ173.02,172.95,172.91,172.84,150.49,150.42,
149.28,149.18,144.31,144.22,130.74,130.46,129.87,129.83,125.28,125.16,119.93,
119.88,97.94,91.57,91.18,77.33,73.52,73.03,69.55,69.51,65.05,64.99,64.51,
61.80,50.41,50.32,29.68,21.70,21.67,21.61,21.58,20.93,20.88,20.82,20.46；针对C23H33N4O10PNa[M+Na]+的HRMS计算值：579.18265；发现值：579.18184。
[0416] 实例13.
[0417]
[0418] S8：向胞苷(0.972g，4.00mmol)在干的丙酮(50.0mL)中的搅拌悬浮液中逐滴添加催化量的H2SO4(0.13mL，2.439mmol)。将所得反应物在室温下搅拌过夜。过滤后，在稍微加热下，将得到的白色固体重新溶解于MeOH中，然后再蒸发以给出呈所希望的产物的硫酸盐形式的白色固体(>95％产率)，将其不经进一步纯化而使用：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.23(d,J＝7.9Hz,1H),6.09(d,J＝7.9Hz,1H),5.86(d,J＝2.4Hz,1H),4.90(dd,J1＝6.2Hz,J2＝2.3Hz,1H),4.82(dd,J1＝6.1Hz,J2＝2.7Hz,1H),4.35(q,J＝3.4Hz,1H),3.80(dd,J1＝
12.1Hz,J2＝3.2Hz,1H),3.71(dd,J1＝12.1Hz,J2＝4.1Hz,1H),1.54(s,3H),1.35(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ161.33,148.49,147.34,114.86,95.58,94.22,89.56,86.59,82.34,
62.85,27.42,25.41；针对C12H18O5N3[M+H]+的HRMS计算值：284.12410，发现值：284.12424。
12.1Hz,J2＝3.2Hz,1H),3.71(dd,J1＝12.1Hz,J2＝4.1Hz,1H),1.54(s,3H),1.35(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ161.33,148.49,147.34,114.86,95.58,94.22,89.56,86.59,82.34,
62.85,27.42,25.41；针对C12H18O5N3[M+H]+的HRMS计算值：284.12410，发现值：284.12424。
[0419] S9：在0℃下，在氩气下，向S8(0.566g，2.00mmol)在THF(20.0mL)中的悬浮液中经由注射器逐滴添加叔丁基氯化镁在THF中的1M溶液(3.00mL，3.00mmol)，并且将所得混合物在相同温度下搅拌1小时。在0℃下，添加S7(1.33g，3.00mmol)在THF(20mL)中的溶液，在其后使混合物温热至室温并再搅拌27小时。在0℃下，将该反应通过添加饱和水性NH4Cl而小心地淬灭。将所得混合物通过硅藻土垫过滤，并用MeOH洗涤该垫。将滤液通过旋转蒸发进行浓缩以给出棕色固体，将该棕色固体通过快速色谱法(5％在DCM中的MeOH)进行纯化以给出半纯的产物。将混合物通过自动快速色谱法(40g柱，0至25％在DCM中的MeOH梯度)进一步纯化以给出呈白色固体的S9(0.744g，67％，经2个步骤)，该呈白色固体的S9基于31P-NMR的整1
合以比率为1:2的两种非对映异构体的混合物存在：H NMR(400MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ7.61(m,1H),7.34(t,J＝7.9Hz,2H),7.27-7.09(m,3H),5.93-5.69(m,2H),4.95(p,J＝6.3Hz,1H),4.90(dd,J＝6.4Hz,2.2Hz,1H),4.84-4.71(m,1H),4.46-4.20(m,3H),3.88(p,J＝7.8Hz,1H),2.15(s,1H),1.53(s,3H),1.32(m,6H),1.21(m,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,两种非对映异构体)δ210.06,174.62,174.57,174.41,174.35,167.89,157.81,
152.18,152.11,144.64,144.38,130.82,130.78,130.77,126.24,126.22,126.17,126.16,
121.48,121.45,121.43,121.40,115.18,115.08,96.18,95.96,87.13,87.05,86.96,
86.88,86.23,82.48,82.47,70.14,68.02,51.81,51.67,49.64,49.43,49.21,49.00,
48.79,48.57,48.36,30.68,27.46,27.43,25.51,25.46,22.00,21.98,21.90,20.56,
20.49,20.30；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.68,3.45；针对C24H33O9N4NaP[M+Na]+的HRMS计算值：575.18774，发现值：575.18824。
合以比率为1:2的两种非对映异构体的混合物存在：H NMR(400MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ7.61(m,1H),7.34(t,J＝7.9Hz,2H),7.27-7.09(m,3H),5.93-5.69(m,2H),4.95(p,J＝6.3Hz,1H),4.90(dd,J＝6.4Hz,2.2Hz,1H),4.84-4.71(m,1H),4.46-4.20(m,3H),3.88(p,J＝7.8Hz,1H),2.15(s,1H),1.53(s,3H),1.32(m,6H),1.21(m,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,两种非对映异构体)δ210.06,174.62,174.57,174.41,174.35,167.89,157.81,
152.18,152.11,144.64,144.38,130.82,130.78,130.77,126.24,126.22,126.17,126.16,
121.48,121.45,121.43,121.40,115.18,115.08,96.18,95.96,87.13,87.05,86.96,
86.88,86.23,82.48,82.47,70.14,68.02,51.81,51.67,49.64,49.43,49.21,49.00,
48.79,48.57,48.36,30.68,27.46,27.43,25.51,25.46,22.00,21.98,21.90,20.56,
20.49,20.30；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.68,3.45；针对C24H33O9N4NaP[M+Na]+的HRMS计算值：575.18774，发现值：575.18824。
[0420] S10：将S9(0.289g，0.502mmol)在80％水性HCOOH(12.40mL)中的溶液在室温下搅拌3.5小时。将反应通过旋转蒸发进行浓缩，并与MeOH(3x10mL)共蒸发。获得呈棕色玻璃状固体的粗产物S9(0.257g，数量)，将其不经进一步纯化而用于下一步骤：1H NMR(400MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ8.16(s,1H),7.79(d,J＝7.5Hz,1H),7.73(d,J＝7.5Hz,1H),7.50–7.08(m,5H),6.03–5.68(m,2H),4.96(septet,J＝8Hz,1H),4.55-4.24(m,2H),4.23-
4.08(m,2H),4.08-3.99(m,1H),3.97-3.82(m,1H),1.43-1.26(m,4H),1.26-1.10(m,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,两种非对映异构体)δ174.65,174.61,174.38,174.33,166.90,157.46,
152.15,152.08,142.73,130.89,130.88,130.85,130.85,126.28,126.26,121.42,121.40,
121.37,121.36,96.19,92.05,91.97,83.49,83.42,75.90,75.84,70.70,70.64,70.18,
67.14,67.08,51.88,51.87,51.71,51.70,49.64,49.43,49.21,49.00,48.79,48.57,
48.36,21.98,21.91,21.89,21.80,20.61,20.55,20.30；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.91,+
3.76；针对C21H30O9N4P[M+H]的HRMS计算值：513.17449，发现值：513.17413。
4.08(m,2H),4.08-3.99(m,1H),3.97-3.82(m,1H),1.43-1.26(m,4H),1.26-1.10(m,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,两种非对映异构体)δ174.65,174.61,174.38,174.33,166.90,157.46,
152.15,152.08,142.73,130.89,130.88,130.85,130.85,126.28,126.26,121.42,121.40,
121.37,121.36,96.19,92.05,91.97,83.49,83.42,75.90,75.84,70.70,70.64,70.18,
67.14,67.08,51.88,51.87,51.71,51.70,49.64,49.43,49.21,49.00,48.79,48.57,
48.36,21.98,21.91,21.89,21.80,20.61,20.55,20.30；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.91,+
3.76；针对C21H30O9N4P[M+H]的HRMS计算值：513.17449，发现值：513.17413。
[0421] EIDD-2088：向S10(0.257g，0.502mmol)在THF(5mL)中的溶液中添加在pH 6下的2N羟胺(6.27mL，12.54mmol)，并且将所得混合物在37℃下搅拌1.5天。将反应混合物通过旋转蒸发进行浓缩。将获得的黄色固体重新溶解于MeOH中并固定在硅胶上，将其加载到硅胶塞上。用10％在CH2Cl2中的MeOH通过硅胶塞进行洗脱，在旋转蒸发含有产物的级分后，给出浅棕色液体。自动快速色谱(12g柱，2.5％至15％在DCM中的MeOH梯度)提供了呈灰白色泡沫状的标题化合物(0.155mg，59％)：1H NMR(400MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ7.89(d,J＝8.0Hz,0.3H),7.80(d,J＝8.1Hz,0.65H),7.48-7.31(m,2H),7.31-7.13(m,3H),6.02-5.79(m,2H),4.97(hept,J＝8Hz,1H),4.55-4.08(m,6H),3.90(m,1H),1.44-1.26(m,4H),1.22(m,6H)；13CNMR(100MHz,CD3OD,两种非对映异构体)δ174.72,174.68,174.36,174.30,
155.25,152.10,152.03,148.74,148.68,142.86,130.92,130.87,126.33,126.32,121.43,
121.39,91.71,91.63,91.58,84.08,84.02,83.95,75.48,75.41,70.71,70.67,70.20,
67.03,51.90,51.73,51.71,49.64,49.43,49.21,49.00,48.79,48.57,48.36,21.98,
21.92,21.89,21.79,20.59,20.53,20.31；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.98,3.81；针对C21H30O10N4P[M+H]+的HRMS计算值：529.16941，发现值：529.16900。
155.25,152.10,152.03,148.74,148.68,142.86,130.92,130.87,126.33,126.32,121.43,
121.39,91.71,91.63,91.58,84.08,84.02,83.95,75.48,75.41,70.71,70.67,70.20,
67.03,51.90,51.73,51.71,49.64,49.43,49.21,49.00,48.79,48.57,48.36,21.98,
21.92,21.89,21.79,20.59,20.53,20.31；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.98,3.81；针对C21H30O10N4P[M+H]+的HRMS计算值：529.16941，发现值：529.16900。
[0422] 实例14.
[0423]
[0424] EIDD-2101：将5-甲基胞苷(0.257g，1.00mmol)在2N水性羟胺溶液(pH 6)(8mL，16.0mmol)中的溶液在密封管中在搅拌下加热至55℃持续5小时。将溶液冷却至室温，转移至圆底烧瓶中，通过旋转蒸发进行浓缩，并与MeOH(2x20mL)共蒸发。将粗残余物吸收于MeOH中并固定在硅胶上。快速色谱(2％至10％在DCM中的MeOH梯度)提供了呈浅紫色固体的标题化合物(140mg，51％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ6.99(s,1H),5.86(d,J＝5.7Hz,1H),4.23-
4.06(m,2H),3.93(q,J＝3.2Hz,1H),3.78(dd,J＝12.1Hz,2.8Hz,1H),3.70(dd,J＝12.1Hz,
3.4Hz,1H),1.79(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ152.0,146.6,128.4,108.4,89.4,86.1,
74.4,71.8,62.8,12.9；针对C10H16O6N3[M+H]+的HRMS计算值：274.10336，发现值：
274.10350。
4.06(m,2H),3.93(q,J＝3.2Hz,1H),3.78(dd,J＝12.1Hz,2.8Hz,1H),3.70(dd,J＝12.1Hz,
3.4Hz,1H),1.79(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ152.0,146.6,128.4,108.4,89.4,86.1,
74.4,71.8,62.8,12.9；针对C10H16O6N3[M+H]+的HRMS计算值：274.10336，发现值：
274.10350。
[0425] 实例15.
[0426]
[0427] EIDD-2103：制备羟胺盐酸盐(1.11g，16.0mmol)在水(8mL)中的约2N溶液，并用少量的水性NaOH(10％w/w)调节至pH＝5。向可密封的压力管填充该溶液和5-氟胞苷(0.261g，1.00mmol)，将烧瓶密封，并在55℃下在搅拌下加热16小时。将混合物冷却至室温，转移到圆底烧瓶中，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗物质悬浮在MeOH中并固定在硅藻土(Celite)上。
自动快速色谱(40g柱，0至20％在DCM中的MeOH梯度)给出了600mg半纯的粉红色固体。将该固体溶解于2mL水中，并且自动反相色谱(43g柱，5％至100％在水中的MeOH梯度)给出了所希望的产物，该产物不含有机和无机杂质。将该固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈白色絮状固体的标题化合物(0.066g，0.238mmol，24％产率)。1H NMR(400MHz,D2O)δ7.31(d,J＝7.6Hz,1H),5.87(dd,J＝5.5Hz,1.8Hz,1H),4.26(t,J＝5.5Hz,
1H),4.19(t,J＝4.8Hz,1H),4.07(q,J＝3.8Hz,1H),3.85(dd,J＝12.8Hz,3.1Hz,1H),3.77(dd,J＝12.7Hz,4.2Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ150.0,139.7,137.4,115.6(d,J＝
36.1Hz),88.0,84.2,72.8,69.8,61.0；19F NMR(376MHz,D2O)δ-164.70(d,J＝7.6Hz)；针对C9H13FN3O6[M+H]+的HRMS计算值：278.07829，发现值：278.07848。
自动快速色谱(40g柱，0至20％在DCM中的MeOH梯度)给出了600mg半纯的粉红色固体。将该固体溶解于2mL水中，并且自动反相色谱(43g柱，5％至100％在水中的MeOH梯度)给出了所希望的产物，该产物不含有机和无机杂质。将该固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈白色絮状固体的标题化合物(0.066g，0.238mmol，24％产率)。1H NMR(400MHz,D2O)δ7.31(d,J＝7.6Hz,1H),5.87(dd,J＝5.5Hz,1.8Hz,1H),4.26(t,J＝5.5Hz,
1H),4.19(t,J＝4.8Hz,1H),4.07(q,J＝3.8Hz,1H),3.85(dd,J＝12.8Hz,3.1Hz,1H),3.77(dd,J＝12.7Hz,4.2Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ150.0,139.7,137.4,115.6(d,J＝
36.1Hz),88.0,84.2,72.8,69.8,61.0；19F NMR(376MHz,D2O)δ-164.70(d,J＝7.6Hz)；针对C9H13FN3O6[M+H]+的HRMS计算值：278.07829，发现值：278.07848。
[0428] 实例16.
[0429]
[0430] S11：在氮气下，在室温下，经2分钟，向S2(0.903g，1.50mmol)在DCM(15mL)中的搅拌溶液中经由注射器逐滴添加异氰酸庚酯(0.266mL，1.65mmol)。将反应在室温下搅拌6小时，然后通过旋转蒸发进行浓缩以给出粗残余物。自动快速色谱(40g柱，5％至25％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈片状浅粉红色固体的S11(0.930g，83％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.26(br s,1H),7.50(d,J＝8.3Hz,1H),6.29(t,J＝5.8Hz,1H),5.90(d,J＝4.4Hz,1H),
5.57(dd,J＝8.2Hz,2.3Hz,1H),4.10-4.00(m,3H),3.93(dd,J＝11.6Hz,2.3Hz,1H),3.74(d,J＝11.6Hz,1H),3.28(q,J＝6.7Hz,1H),1.62-1.52(m,2H),1.40-1.25(m,8H),0.96(s,
9H),0.91(s,9H),0.91-0.86(m,3H),0.89(s,9H),0.13(s,6H),0.10(s,3H),0.08(s,3H),
0.05(s,6H)。
5.57(dd,J＝8.2Hz,2.3Hz,1H),4.10-4.00(m,3H),3.93(dd,J＝11.6Hz,2.3Hz,1H),3.74(d,J＝11.6Hz,1H),3.28(q,J＝6.7Hz,1H),1.62-1.52(m,2H),1.40-1.25(m,8H),0.96(s,
9H),0.91(s,9H),0.91-0.86(m,3H),0.89(s,9H),0.13(s,6H),0.10(s,3H),0.08(s,3H),
0.05(s,6H)。
[0431] EIDD-2107：在0℃下，在氮气下，向S11(0.910g，1.22mmol)在THF(18mL)和DMF(6mL)中的混合物中的搅拌溶液中添加乙酸(0.350mL，6.12mmol)，然后一次性添加固体四乙铵氟化物(0.877g，5.88mmol)。将混合物温热至室温并搅拌20小时。然后将混合物通过旋转蒸发进行浓缩以给出呈油状物的粗品。将该油状物吸收于DCM中，并且自动快速色谱(40g柱，1％至10％在DCM中的MeOH梯度)给出了300mg的片状白色固体，该固体由所希望的产物和四乙铵乙酸盐组成。将该混合物吸收在MeOH中并固定在硅藻土(Celite)上。第二次自动快速色谱(12g柱，1％至10％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈白色粉末状固体的标题化合物(0.228g，47％产率)。NMR分析显示信号的比率为5:1，最可能的是关于氨基甲酸酯的多个键之一的旋转异构体(与核碱基相关的大多数信号是双重或单一的但变宽的)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6,仅主要的旋转异构体)δ10.30(s,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),6.85(t,J＝5.8Hz,1H),5.75(d,J＝5.8Hz,1H),5.69(dd,J＝8.4Hz,2.2Hz,1H),5.32(d,J＝5.9Hz,1H),5.10-5.00(m,2H),3.99(q,J＝5.6Hz,1H),3.94(q,J＝4.7Hz,1H),3.83-3.76(m,1H),
3.63-3.46(m,2H),3.04(q,J＝6.5Hz,1H),1.46-1.36(m,2H),1.32-1.19(m,8H),0.86(t,J
13
＝7.0Hz,3H)；C NMR(100MHz,CD3OD,仅主要的旋转异构体峰)δ157.5,150.8,149.3,
135.3,97.5,89.9,86.1,75.0,71.5,64.7,62.5,41.9,32.9,30.8,30.1,27.7,23.6,14.4；
针对C17H29N4O7[M+H]+的HRMS计算值：401.20308，发现值：401.20319。
3.63-3.46(m,2H),3.04(q,J＝6.5Hz,1H),1.46-1.36(m,2H),1.32-1.19(m,8H),0.86(t,J
13
＝7.0Hz,3H)；C NMR(100MHz,CD3OD,仅主要的旋转异构体峰)δ157.5,150.8,149.3,
135.3,97.5,89.9,86.1,75.0,71.5,64.7,62.5,41.9,32.9,30.8,30.1,27.7,23.6,14.4；
针对C17H29N4O7[M+H]+的HRMS计算值：401.20308，发现值：401.20319。
[0432] 实例17.
[0433]
[0434] S12：将S8在无水DMF(56mL)中的溶液用1,1-二甲氧基-N,N-二甲基甲胺(9.4mL，70.6mmol)处理。在室温下18小时后，将反应混合物浓缩至干燥，并且将粗的白色固体用醚(3x100mL)研磨。将固体通过过滤收集，并在高真空下干燥12小时以产生呈白色固体的S12(4.52g，95％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.67(s,1H),7.99(d,J＝7.3Hz,1H),6.14(d,J＝
7.2Hz,1H),5.87(d,J＝2.4Hz,1H),4.92(dd,J＝6.3,2.4Hz,1H),4.84(dd,J＝6.3,3.5Hz,
1H),4.25(q,J＝4.7,1H),3.81(dd,J＝11.9,3.6Hz,1H),3.73(dd,J＝11.9,4.6Hz,1H),
3.22(s,3H),3.14(s,3H),1.55(s,3H),1.34(s,3H)。
7.2Hz,1H),5.87(d,J＝2.4Hz,1H),4.92(dd,J＝6.3,2.4Hz,1H),4.84(dd,J＝6.3,3.5Hz,
1H),4.25(q,J＝4.7,1H),3.81(dd,J＝11.9,3.6Hz,1H),3.73(dd,J＝11.9,4.6Hz,1H),
3.22(s,3H),3.14(s,3H),1.55(s,3H),1.34(s,3H)。
[0435] S13：经10分钟的时间，将3-十六烷氧基丙-1-醇(1.58g，5.26mmol)和DIPEA(0.92mL，5.26mmol)在无水乙腈(25mL)中的悬浮液用3-((氯(二异丙基氨基)膦基)氧基)-丙腈(1.2mL，5.26mmol)逐滴处理。在室温下18小时后，将混合物用饱和水性NaHCO3(15mL)淬灭，并用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机相通过旋转蒸发进行浓缩，并且快速色谱(柱体积25mmx140mm，10％-20％在己烷中的EtOAc梯度)提供了呈白色固体的S13(1.40g，53％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.89–3.54(m,6H),3.49(t,J＝6.3Hz,2H),3.39(t,J＝
6.7Hz,2H),2.64(t,J＝6.6Hz,2H),1.87(p,J＝6.3Hz,2H),1.57(p,J＝6.3Hz,2H),1.25(s,
26H),1.18(dd,J＝6.8,3.5Hz,12H),0.87(t,J＝6.6Hz,3H)；31PNMR(162MHz,CDCl3)δ
147.40。
6.7Hz,2H),2.64(t,J＝6.6Hz,2H),1.87(p,J＝6.3Hz,2H),1.57(p,J＝6.3Hz,2H),1.25(s,
26H),1.18(dd,J＝6.8,3.5Hz,12H),0.87(t,J＝6.6Hz,3H)；31PNMR(162MHz,CDCl3)δ
147.40。
[0436] S14：将S12(800mg，2.36mmol)和S13(2.15g，4.29mmol)在无水THF(20mL)中的溶液用四唑(在乙腈中的19mL的0.45M溶液，8.59mmol)溶液逐滴处理。在室温下19小时后，将混合物用叔丁基过氧化氢(1.9mL的5.5M溶液，10.73mmol)的壬烷溶液逐滴处理并再继续搅拌1小时。将过量叔丁基过氧化氢用饱和硫代硫酸钠溶液(50mL)淬灭，将混合物搅拌45分钟，并且然后用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机相通过旋转蒸发进行浓缩，并且快速色谱(25mmx180mm柱体积，0至5％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈泡沫状的非对映异构体的混合物的S14(1.2g，80％)：1H NMR(400MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ7.38(d,J＝7.6Hz,
1H,非对映异构体a),7.37(d,J＝7.6,1H,非对映异构体b),5.78(d,J＝7.3Hz,1H),5.54(d,J＝5.6,1H,非对映异构体a),5.53(d,J＝5.6,1H,非对映异构体b),5.14(ddd,J＝6.5,3.1,
1.4Hz,1H),4.93(dt,J＝7.0,3.6Hz,1H),4.34(td,J＝7.4,6.8,4.8Hz,3H),4.28–4.08(m,
4H),3.48(t,J＝6.1,2H),3.38(t,J＝6.8,2H),2.78(t,J＝6.5Hz,2H,非对映异构体a),
2.75(t,J＝6.5Hz,2H非对映异构体b),1.93(m,2H),1.55(s,5H),1.34(s,3H),1.25(s,
26H),0.87(t,J＝6.8,3H)；13C NMR(101MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ166.26,155.40,
144.20,144.16,116.62,116.59,113.93,97.45,97.38,95.74,95.69,86.73,86.64,86.54,
84.90,84.80,81.87,81.66,71.23,67.84,67.79,67.69,67.64,66.25,66.22,66.03,
65.97,62.08,62.03,31.90,30.51,30.50,30.44,30.43,29.68,29.67,29.64,29.61,
29.52,29.34,27.06,27.04,26.13,25.23,25.21,22.67,19.57,19.50,14.12；31P NMR(162MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ-1.75,-1.83；LRMS m/z 699.4[M+H]+。
1H,非对映异构体a),7.37(d,J＝7.6,1H,非对映异构体b),5.78(d,J＝7.3Hz,1H),5.54(d,J＝5.6,1H,非对映异构体a),5.53(d,J＝5.6,1H,非对映异构体b),5.14(ddd,J＝6.5,3.1,
1.4Hz,1H),4.93(dt,J＝7.0,3.6Hz,1H),4.34(td,J＝7.4,6.8,4.8Hz,3H),4.28–4.08(m,
4H),3.48(t,J＝6.1,2H),3.38(t,J＝6.8,2H),2.78(t,J＝6.5Hz,2H,非对映异构体a),
2.75(t,J＝6.5Hz,2H非对映异构体b),1.93(m,2H),1.55(s,5H),1.34(s,3H),1.25(s,
26H),0.87(t,J＝6.8,3H)；13C NMR(101MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ166.26,155.40,
144.20,144.16,116.62,116.59,113.93,97.45,97.38,95.74,95.69,86.73,86.64,86.54,
84.90,84.80,81.87,81.66,71.23,67.84,67.79,67.69,67.64,66.25,66.22,66.03,
65.97,62.08,62.03,31.90,30.51,30.50,30.44,30.43,29.68,29.67,29.64,29.61,
29.52,29.34,27.06,27.04,26.13,25.23,25.21,22.67,19.57,19.50,14.12；31P NMR(162MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ-1.75,-1.83；LRMS m/z 699.4[M+H]+。
[0437] S15：在50℃下，在搅拌下，将S14(310mg，0.44mmol)在THF(4mL)中的溶液用在pH 5下的羟胺(1.1mL，2.2mmol)的2M水性溶液处理。在19小时后，TLC(10％在二氯甲烷中的甲醇)表明大约50％转化为更多的非极性组分。另外的羟胺和延长的反应时间没有增加转化率超过50％。冷却至室温后，将混合物在乙酸乙酯(100mL)和盐水(10mL)之间进行分配。将有机相浓缩，并且粗品的快速色谱(柱体积19mmx170mm，1％至5％在DCM中的MeOH梯度)产生了呈泡沫状的1:1非对映异构体混合物的S15(70mg，22％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.94(s,1H),6.60(d,J＝8.1,1H,非对映异构体a),6.58(d,J＝8.1,1H,非对映异构体b),5.67(d,J＝8.1,1H,非对映异构体a),5.65(d,J＝8.1,1H,非对映异构体b),5.59(d,J＝2.1Hz,1H,非对映异构体a),5.55(d,J＝2.1Hz,1H,非对映异构体b),4.98(m,1H),4.84(m,1H),4.35-
4.10(m,6H),3.48(t,J＝6.1Hz,2H),3.38(t,J＝6.7,2H),2.76(m,2H),1.94(m,2H),1.59-
1.49(m,5H),1.34(s,3H),1.24(s,26H),0.87(t,J＝6.7Hz,3H)；31P NMR(162MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ-1.57,-1.64。LRMS m/z 715.3[M+H]+。
4.10(m,6H),3.48(t,J＝6.1Hz,2H),3.38(t,J＝6.7,2H),2.76(m,2H),1.94(m,2H),1.59-
1.49(m,5H),1.34(s,3H),1.24(s,26H),0.87(t,J＝6.7Hz,3H)；31P NMR(162MHz,CDCl3,非对映异构体混合物)δ-1.57,-1.64。LRMS m/z 715.3[M+H]+。
[0438] EIDD-2108：将S15(62mg，0.087mmol)在甲醇(4mL)中的溶液用催化量的对甲苯磺酸(3.3mg，0.017mmol)处理。在室温下搅拌16小时后，将混合物用饱和水性氢氧化铵溶液(1.5mL)处理，并允许在室温下再搅拌4小时。将混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并将所得的残余物用5％在甲醇中的乙腈(2x15mL)研磨。将所得的白色固体通过快速色谱法(11mmx45mm柱体积，25％在DCM中的MeOH，2.5％v/v饱和水性NH4OH)进行纯化以给出呈白色固体的标题化合物(25mg，46％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.21(d,J＝8.2Hz,1H),5.95(d,J＝5.5Hz,1H),5.67(d,J＝8.2Hz,1H),4.22-4.16(m,2H),4.07-3.98(m,3H),3.94(q,J＝
6.3Hz,2H),3.52(t,J＝6.3Hz,2H),3.41(t,J＝6.6Hz,2H),1.87(p,J＝6.3Hz,2H),1.53(q,J＝6.9Hz,2H),1.28(s,28H),0.92-0.85(m,3H)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ150.45,144.99,
130.77,98.13,87.51,83.39,83.30,72.98,70.72,70.55,66.89,64.80,62.51,62.46,
31
31.66,30.71,30.63,29.38,29.35,29.24,29.07,25.87,22.33,13.07；P NMR(162MHz,CD3OD)δ0.34；针对C28H51N3O10P[M-H]-的HRMS计算值：620.33175；发现值：620.33205。
6.3Hz,2H),3.52(t,J＝6.3Hz,2H),3.41(t,J＝6.6Hz,2H),1.87(p,J＝6.3Hz,2H),1.53(q,J＝6.9Hz,2H),1.28(s,28H),0.92-0.85(m,3H)；13C NMR(101MHz,CD3OD)δ150.45,144.99,
130.77,98.13,87.51,83.39,83.30,72.98,70.72,70.55,66.89,64.80,62.51,62.46,
31
31.66,30.71,30.63,29.38,29.35,29.24,29.07,25.87,22.33,13.07；P NMR(162MHz,CD3OD)δ0.34；针对C28H51N3O10P[M-H]-的HRMS计算值：620.33175；发现值：620.33205。
[0439] 实例18.
[0440]
[0441] S16：在0℃下，在氩气下，向2'-脱氧-2',2'-二氟胞苷(0.526g，2.00mmol)和咪唑(0.408g，6.00mmol)在DMF(10mL)中的溶液中添加TBS三氟甲磺酸盐(1.147mL，5.00mmol)。将所得的混合物在0℃下搅拌2小时，然后将其缓慢温热至室温并搅拌过夜。在Et2O和水之间进行分配后，将有机层分离并用H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(24g柱，0至12.5％在DCM中的MeOH梯度)产生了呈透明无色油状物的S16(0.71g，72％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.23(s,1H),7.71(d,J＝7.6Hz,1H),6.72(s,
1H),6.25(dd,J＝10.4Hz,4.2Hz,1H),5.97(d,J＝7.6Hz,1H),4.30(m,1H),3.98(m,1H),
3.89(m,1H),3.79(dd,J＝11.8Hz,2.1Hz,1H),0.93(s,9H),0.90(s,9H),0.11(t,J＝4.1Hz,
12H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.6,154.6,140.8,121.9(t,J＝259Hz),95.7,84.1(dd,J＝40Hz,24Hz),81.3(d,J＝9Hz),77.2,69.7(dd,J＝28Hz,18Hz),60.1,53.4,25.8,25.5,
18.3,18.0,-4.8,-5.3,-5.49,-5.52；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-115.95(dd,J＝238.4Hz,
12.1Hz),-117.55(dt,J＝239.1Hz,10.7Hz)；针对C21H40O4N3F2Si2[M+H]+的HRMS计算值：
492.25199，发现值：492.25172。
1H),6.25(dd,J＝10.4Hz,4.2Hz,1H),5.97(d,J＝7.6Hz,1H),4.30(m,1H),3.98(m,1H),
3.89(m,1H),3.79(dd,J＝11.8Hz,2.1Hz,1H),0.93(s,9H),0.90(s,9H),0.11(t,J＝4.1Hz,
12H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ164.6,154.6,140.8,121.9(t,J＝259Hz),95.7,84.1(dd,J＝40Hz,24Hz),81.3(d,J＝9Hz),77.2,69.7(dd,J＝28Hz,18Hz),60.1,53.4,25.8,25.5,
18.3,18.0,-4.8,-5.3,-5.49,-5.52；19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-115.95(dd,J＝238.4Hz,
12.1Hz),-117.55(dt,J＝239.1Hz,10.7Hz)；针对C21H40O4N3F2Si2[M+H]+的HRMS计算值：
492.25199，发现值：492.25172。
[0442] S17：向S16(0.250g，0.508mmol)在THF(5.1mL)中的溶液中添加在pH 6下的羟胺(6.4mL，12.71mmol)的水性2N溶液，并且将所得的混合物在55℃下搅拌1.5天。在EtOAc和H2O之间进行分配后，将水层分离并用EtOAc(2x15mL)萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(24g柱，0至7.5％在DCM中的MeOH梯度)提供了呈白色固体的S17(0.124g，48％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(s,1H),8.34(s,1H),6.94(d,J＝8.2Hz,1H),6.13(dd,J＝11.0Hz,4.8Hz,1H),5.62(d,J＝8.3Hz,
1H),4.30(dq,J＝12Hz,4Hz,1H),3.95(d,J＝12Hz,1H),3.83(d,J＝4Hz,1H),3.77(dd,J＝
12Hz,4Hz,1H),0.92(s,9H),0.90(s,9H),0.18-0.03(m,12H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ
149.1,144.8,130.2,122.1(t,J＝259Hz),98.4,83.4(dd,J＝40Hz,24Hz),80.8(d,J＝
9Hz),69.8(dd,J＝27Hz,18Hz),77.2,60.0,25.8,25.5,18.3,18.0,4.8,-5.3,-5.5,-5.6；
19
F NMR(376MHz,CDCl3)δ-115.67(dd,J＝239.5Hz,12.4Hz),-117.02(dt,J＝239.4Hz,
10.8Hz)；针对C21H40O5N3F2Si2[M+H]+的HRMS计算值：508.24691，发现值：508.24697。
1H),4.30(dq,J＝12Hz,4Hz,1H),3.95(d,J＝12Hz,1H),3.83(d,J＝4Hz,1H),3.77(dd,J＝
12Hz,4Hz,1H),0.92(s,9H),0.90(s,9H),0.18-0.03(m,12H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ
149.1,144.8,130.2,122.1(t,J＝259Hz),98.4,83.4(dd,J＝40Hz,24Hz),80.8(d,J＝
9Hz),69.8(dd,J＝27Hz,18Hz),77.2,60.0,25.8,25.5,18.3,18.0,4.8,-5.3,-5.5,-5.6；
19
F NMR(376MHz,CDCl3)δ-115.67(dd,J＝239.5Hz,12.4Hz),-117.02(dt,J＝239.4Hz,
10.8Hz)；针对C21H40O5N3F2Si2[M+H]+的HRMS计算值：508.24691，发现值：508.24697。
[0443] EIDD-2133：将S17(0.220g，0.433mmol)和NH4F(0.128g，3.47mmol)在MeOH(22mL)中的混合物在回流下搅拌过夜。将该混合物冷却至室温并通过旋转蒸发进行浓缩。快速色谱(5％至10％在DCM中的MeOH梯度)给出了半纯的产物。在另一个两轮快速色谱纯化(与未知杂质进行所希望的共洗脱，只收集了在TLC上不能被KMnO4瞬间染色的级分)后，获得了呈白色固体的标题化合物(18mg，15％产率)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.05(d,J＝8.3Hz,1H),6.06(m,1H),5.59(d,J＝8.3Hz,1H),4.21(m,1H),3.90(d,J＝12.6Hz,1H),3.81(td,J＝
13
12Hz,4Hz,1H),3.74(dd,J＝12Hz,4Hz,1H)；C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.1,145.7,131.5,
124.1(t,J＝256Hz),99.3,84.8(dd,J＝39Hz,26Hz),82.0(d,J＝9Hz),70.7(dd,J＝26Hz,
21Hz),60.6。19F NMR(376MHz,CD3OD)δ118.62(ddd,J＝240.2Hz,13.4Hz,6.1Hz),-119.67(宽d,J＝240.7Hz)；针对C9H12O5N3F2[M+H]+的HRMS计算值：280.07395，发现值：280.07347。
13
12Hz,4Hz,1H),3.74(dd,J＝12Hz,4Hz,1H)；C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.1,145.7,131.5,
124.1(t,J＝256Hz),99.3,84.8(dd,J＝39Hz,26Hz),82.0(d,J＝9Hz),70.7(dd,J＝26Hz,
21Hz),60.6。19F NMR(376MHz,CD3OD)δ118.62(ddd,J＝240.2Hz,13.4Hz,6.1Hz),-119.67(宽d,J＝240.7Hz)；针对C9H12O5N3F2[M+H]+的HRMS计算值：280.07395，发现值：280.07347。
[0444] 实例19.
[0445]
[0446] S18：在0℃下，在氮气下，向2'-脱氧-2',2'-二氟胞苷(0.526g，1.998mmol)在THF(13.32mL)中的悬浮液中经由注射器逐滴添加叔丁基氯化镁的1M THF溶液(4.00mL，4.00mmol)，并将所得的混合物在相同温度下搅拌30分钟。在0℃下，经由注射器逐滴添加S7(1.770g，4.00mmol)在THF(13.32mL)中的溶液，使该混合物温热至室温并再搅拌24小时。将该反应冷却至0℃并且小心地用饱和水性NH4Cl淬灭。将混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并且将获得的固体重新溶解于MeOH中，并通过硅藻土塞过滤，用MeOH冲洗塞子。将滤液通过旋转蒸发进行浓缩，并且自动快速色谱(40g柱，0至15％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈棕色泡沫状的作为非对映异构体混合物的S18(0.620g，58％)。1H NMR(400MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ7.60(dd,J＝26.1Hz,7.4Hz,1H),7.43-7.30(m,2H),7.31-7.12(m,3H),6.26(q,J＝7.7Hz,1H),5.92(dd,J＝21.2Hz,7.2Hz,1H),4.97(m,1H),4.60-4.30(m,2H),4.29-4.15(m,1H),4.10(m,1H),3.88(m,1H),1.33(t,J＝8.0Hz,3H),1.22(m,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ174.61,174.57,174.35,174.30,167.18,154.42,152.15,
152.08,142.62,142.52,139.86,130.84,130.20,126.30,124.17,121.49,121.44,80.45,
70.18,69.95,66.90,65.69,51.88,51.72,21.97,21.94,21.91,21.89,21.85,21.25,
21.19,20.52,20.45,20.34,20.26,15.44；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ-118.20(dd,J＝
238.6Hz,73.5Hz,),-120.20(d,J＝237.0Hz)；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.81,3.74；针对+
C21H28O8N4F2P[M+H]的HRMS计算值：533.16073，发现值：533.16038。
152.08,142.62,142.52,139.86,130.84,130.20,126.30,124.17,121.49,121.44,80.45,
70.18,69.95,66.90,65.69,51.88,51.72,21.97,21.94,21.91,21.89,21.85,21.25,
21.19,20.52,20.45,20.34,20.26,15.44；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ-118.20(dd,J＝
238.6Hz,73.5Hz,),-120.20(d,J＝237.0Hz)；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.81,3.74；针对+
C21H28O8N4F2P[M+H]的HRMS计算值：533.16073，发现值：533.16038。
[0447] EIDD-2091：向S18(0.266g，0.500mmol)在THF(5mL)中的悬浮液中添加在pH 6下的2N水性羟胺溶液(6.3mL，12.49mmol)，并且将所得的混合物在37℃下搅拌1.5天。将该反应(TLC显示不完全)在EtOAc和H2O之间进行分配。将水层用EtOAc(2x15ml)进行萃取。将合并的有机层用H2O和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(24g柱，0至10％在DCM中的MeOH梯度)提供了呈白色固体的为非对映异构体的混合物的标题化合物(34mg，12％)。1H NMR(400MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ7.36(t,J＝7.7Hz,
2H),7.28-7.12(m,3H),6.78(t,J＝9.0Hz,1H),6.09(q,J＝8Hz,1H),5.55(dd,J＝19.8Hz,
8.3Hz,1H),4.97(sept,J＝6.3Hz,1H),4.63-4.27(m,3H),4.20(m,1H),4.10-3.96(m,1H),
3.95-3.76(m,1H),1.33(t,J＝7.8Hz,3H),1.22(m,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ174.58,174.54,174.36,174.31,152.14,152.07,150.98,145.48,131.51,
131.34,130.83,126.26,121.39,121.37,121.34,121.32,99.77,85.24,84.60,80.02,
79.93,79.88,79.78,71.52,71.30,71.05,70.83,70.18,65.78,65.72,65.49,65.44,
51.79,51.66,49.64,49.43,49.21,49.00,48.79,48.57,48.36,21.97,21.89,20.54,
20.48,20.39,20.31；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ-118.04(dd,J＝240.8,22.2Hz),-119.47(d,J＝242.6Hz)；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.76,3.69；针对C21H27O8N4F2NaP[M+Na]+的HRMS计算值：571.13759，发现值：571.13708。
2H),7.28-7.12(m,3H),6.78(t,J＝9.0Hz,1H),6.09(q,J＝8Hz,1H),5.55(dd,J＝19.8Hz,
8.3Hz,1H),4.97(sept,J＝6.3Hz,1H),4.63-4.27(m,3H),4.20(m,1H),4.10-3.96(m,1H),
3.95-3.76(m,1H),1.33(t,J＝7.8Hz,3H),1.22(m,6H)；13C NMR(100MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ174.58,174.54,174.36,174.31,152.14,152.07,150.98,145.48,131.51,
131.34,130.83,126.26,121.39,121.37,121.34,121.32,99.77,85.24,84.60,80.02,
79.93,79.88,79.78,71.52,71.30,71.05,70.83,70.18,65.78,65.72,65.49,65.44,
51.79,51.66,49.64,49.43,49.21,49.00,48.79,48.57,48.36,21.97,21.89,20.54,
20.48,20.39,20.31；19F NMR(376MHz,CD3OD)δ-118.04(dd,J＝240.8,22.2Hz),-119.47(d,J＝242.6Hz)；31P NMR(162MHz,CD3OD)δ3.76,3.69；针对C21H27O8N4F2NaP[M+Na]+的HRMS计算值：571.13759，发现值：571.13708。
[0448] 实例20.
[0449]
[0450] S19：向磷酸三甲酯(4.68mL，40.0mmol)在MeCN(40.0mL)中的溶液中顺序地添加新戊酸氯甲酯(23mL，160mmol)和NaI(17.98g，120mmol)。在 分子筛存在下，将所得的黄色混合物在回流下搅拌过夜。产物可以通过磷钼酸在TLC板上可见。在冷却至室温后，将该反应通过硅藻土塞过滤并在旋转蒸发仪上浓缩。将获得的黄色残余物重新溶解于Et2O中，用H2O、盐水洗涤，并且最后经Na2SO4干燥。将有机物合并并且在旋转蒸发仪上浓缩以给出棕红色残余物。快速色谱(10％至20％在己烷中的EtOAc梯度)提供了呈淡黄色液体的S19(11.24g，63.8％产率)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.67(s,3H),5.64(s,3H),1.23(s,27H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ176.6,82.7(d,J＝5Hz),38.7,26.8；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ-5.24；针对C18H33O10NaP[M+Na]+的HRMS计算值：463.17035，发现值：463.17022。
[0451] S20：将S19在哌啶(51.0mL，25.5mmol)中的溶液在室温下搅拌7小时。将该反应通过旋转蒸发进行浓缩，并且然后重新溶解于CH2Cl2中。将有机溶液用约0.5N冰冷的HCl(4x200mL)和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。在过滤并通过旋转蒸发进行浓缩后，将黄色残余物冻干以给出呈淡黄色蜡状物的S19(8.1g，97％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ12.20(s,1H),5.61(s,2H),5.57(s,2H),1.21(s,18H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ177.2,82.7,38.7,26.8；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ-3.58；针对C12H24O8P[M+H]+的正模式HRMS计算值：327.12033，发现值：327.12053；针对C12H22O8P[M-H]-的负模式HRMS计算值：325.10578，发现值：325.10568。
[0452] EIDD-2135：通过将三乙胺(0.362mL，2.60mmol)添加到S20(0.782g，2.398mmol)在THF(8mL)中的溶液中来制备三乙铵双(POM)磷酸酯的溶液。在氮气下，在室温下，向EIDD-1931(0.518g，1.998mmol)在THF(32mL)中的溶液中添加三乙铵双(POM)磷酸酯的制备溶液，然后将其冷却至0℃。向该反应中顺序地添加DIPEA(1.392mL，7.99mmol)、BOP-Cl(1.017g，
4.00mmol)和3-硝基-1H-1,2,4-三唑(0.456g，4.00mmol)，并且将所得的混合物在0℃下搅拌6小时，然后温热至室温并搅拌过夜。将该反应混合物在EtOAc和饱和水性NaHCO3之间进行分配。将水层用EtOAc萃取，并且将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(40g柱，0至10％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈白色泡沫状的标题化合物(30mg，2.6％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.25(s,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,
1H),6.83(d,J＝8.1Hz,1H),5.99-5.42(m,6H),4.58-4.00(m,5H),3.89(m,2H),1.21(s,
31 +
18H)；P NMR(162MHz,CDCl3)δ-4.77,-5.16；针对C21H34O13N3NaP[M+Na]的HRMS计算值：
590.17215，发现值：590.17171。
4.00mmol)和3-硝基-1H-1,2,4-三唑(0.456g，4.00mmol)，并且将所得的混合物在0℃下搅拌6小时，然后温热至室温并搅拌过夜。将该反应混合物在EtOAc和饱和水性NaHCO3之间进行分配。将水层用EtOAc萃取，并且将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(40g柱，0至10％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈白色泡沫状的标题化合物(30mg，2.6％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.25(s,1H),7.43(d,J＝8.2Hz,
1H),6.83(d,J＝8.1Hz,1H),5.99-5.42(m,6H),4.58-4.00(m,5H),3.89(m,2H),1.21(s,
31 +
18H)；P NMR(162MHz,CDCl3)δ-4.77,-5.16；针对C21H34O13N3NaP[M+Na]的HRMS计算值：
590.17215，发现值：590.17171。
[0453] 实例21.
[0454]
[0455] EIDD-2159：通过用冰AcOH调节50％w/w水性NH2OH溶液并且然后用水稀释来达到所希望的浓度来制备2N羟胺(30.0mL，60.0mmol)水性溶液。向可密封的压力容器填充以上溶液、L-胞苷(0.486g，2.0mmol)和搅拌棒。将容器密封，并且将混合物在50℃下加热40小时。将该混合物冷却至室温并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗残余物溶解于水中，并且自动反相快速色谱(100g柱，梯度为100％水至100％MeCN)给出了300mg呈黄色片状固体的半纯的物质。将该化合物吸收于MeOH中并固定在硅藻土上。自动快速色谱(12g柱，梯度为10％至25％在DCM中的MeOH)给出了约150mg含有一些吸藏溶剂的白色片状固体。将残余物溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以给出呈灰白色絮状固体的标题化合物(0.128g，
0.494mmol，25％产率)。光谱分析显示90％-95％的纯度；杂质是未知的并且通过色谱不可分离。1H NMR(400MHz,D2O)δ7.04(d,J＝8.3Hz,1H),5.83(d,J＝5.7Hz,1H),5.72(d,J＝
8.2Hz,1H),4.27(t,J＝5.5Hz,1H),4.16(t,J＝4.7Hz,1H),4.03(q,J＝3.9Hz,1H),3.80(dd,J＝12.9Hz,3.0Hz,1H),3.72(dd,J＝12.9Hz,4.2Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ151.1,
146.5,131.2,98.6,87.8,83.9,72.4,69.7,60.9；针对C9H14N3O6[M+H]+的HRMS计算值：
260.08771，发现值：260.08734。
0.494mmol，25％产率)。光谱分析显示90％-95％的纯度；杂质是未知的并且通过色谱不可分离。1H NMR(400MHz,D2O)δ7.04(d,J＝8.3Hz,1H),5.83(d,J＝5.7Hz,1H),5.72(d,J＝
8.2Hz,1H),4.27(t,J＝5.5Hz,1H),4.16(t,J＝4.7Hz,1H),4.03(q,J＝3.9Hz,1H),3.80(dd,J＝12.9Hz,3.0Hz,1H),3.72(dd,J＝12.9Hz,4.2Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ151.1,
146.5,131.2,98.6,87.8,83.9,72.4,69.7,60.9；针对C9H14N3O6[M+H]+的HRMS计算值：
260.08771，发现值：260.08734。
[0456] 实例22.
[0457]
[0458] S21：向圆底烧瓶填充1-β-D-阿拉伯呋喃糖基尿嘧啶(4.88g，20.0mmol)和二氯甲烷(40mL)。将所得的混合物冷却至0℃并且一次性添加4-DMAP(0.244g，2.00mmol)和咪唑(5.45g，80.0mmol)。一次性添加呈固体的TBSCl(12.06g，80.0mmol)，将混合物温热至环境温度，并搅拌16小时。将水(100mL)添加至反应混合物中，分离各层，并且将水层用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(1x100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩以给出约12g粗品。1H NMR和LCMS分析显示双甲硅烷基化的产物与全甲硅烷基化的产物的比率为3:1。将粗品重新溶解于二氯甲烷(40mL)中，并一次性添加咪唑(2.04g，30.0mmol)和4-DMAP(0.122g，1.00mmol)。经由注射器逐滴添加TBS三氟甲磺酸盐(6.89mL，
30.0mmol)，并将混合物在环境温度下搅拌16小时。将水(100mL)添加至反应混合物中，分离各层，并且将水层用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(1x100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩以给出约25g粗品。自动快速色谱(330g柱，5％至60％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈透明无色油状物的S21(2.90g，25％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(br s,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,1H),6.15(d,J＝3.2Hz,1H),5.67(dd,J＝8.2Hz,2.8Hz,1H),4.18(s,1H),4.12(dd,J＝3.2Hz,1.3Hz,1H),3.97(dd,J＝8.6Hz,
5.8Hz,1H),3.82(dd,J＝9.8Hz,5.7Hz,1H),3.74(dd,J＝9.7Hz,8.6Hz,1H),0.92(s,9H),
0.91(s,9H),0.84(s,9H),0.13(s,3H),0.12(s,3H),0.09(s,3H),0.08(s,3H),0.07(s,
3H),-0.06(s,3H)；LRMS m/z 587.3[M+H]+,609.3[M+Na]+。
30.0mmol)，并将混合物在环境温度下搅拌16小时。将水(100mL)添加至反应混合物中，分离各层，并且将水层用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(1x100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩以给出约25g粗品。自动快速色谱(330g柱，5％至60％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈透明无色油状物的S21(2.90g，25％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(br s,1H),7.51(d,J＝8.2Hz,1H),6.15(d,J＝3.2Hz,1H),5.67(dd,J＝8.2Hz,2.8Hz,1H),4.18(s,1H),4.12(dd,J＝3.2Hz,1.3Hz,1H),3.97(dd,J＝8.6Hz,
5.8Hz,1H),3.82(dd,J＝9.8Hz,5.7Hz,1H),3.74(dd,J＝9.7Hz,8.6Hz,1H),0.92(s,9H),
0.91(s,9H),0.84(s,9H),0.13(s,3H),0.12(s,3H),0.09(s,3H),0.08(s,3H),0.07(s,
3H),-0.06(s,3H)；LRMS m/z 587.3[M+H]+,609.3[M+Na]+。
[0459] S22：在0℃下，在氮气下，向S21(2.90g，4.94mmol)和4-DMAP(0.060g，0.49mmol)在二氯甲烷(50mL)中的搅拌溶液中经由注射器添加N,N-二异丙基乙胺(4.30mL，24.70mmol)，然后一次性添加固体2,4,6-三异丙基苯-1-磺酰氯(2.99g，9.88mmol)。将混合物温热至环境温度并搅拌4小时，然后重新冷却至0℃。将该混合物用冰冷的饱和水性NaHCO3(3x50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗的油状物吸收于二氯甲烷中，并且自动快速色谱(80g柱，1％至10％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈透明无色油状物的S22(3.30g，78％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.92(d,J＝7.3Hz,1H),7.20(s,2H),6.10(d,J＝3.0Hz,1H),6.05(d,J＝7.3Hz,1H),4.33-4.23(m,3H),4.14(s,1H),4.01(dd,J＝8.8Hz,
6.2Hz,1H),3.80(dd,J＝9.6Hz,6.2Hz,1H),3.70(t,J＝9.3Hz,1H),2.90(p,J＝7.0Hz,1H),
1.32-1.22(m,21H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.72(s,9H),0.10(s,6H),0.08(s,3H),0.07(s,3H),-0.03(s,3H),-0.34(s,3H)。
6.2Hz,1H),3.80(dd,J＝9.6Hz,6.2Hz,1H),3.70(t,J＝9.3Hz,1H),2.90(p,J＝7.0Hz,1H),
1.32-1.22(m,21H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.72(s,9H),0.10(s,6H),0.08(s,3H),0.07(s,3H),-0.03(s,3H),-0.34(s,3H)。
[0460] S23：在0℃下，在氮气下，向S22(3.30g，3.87mmol)在乙腈(40mL)中的搅拌溶液中经由注射器添加三乙胺(1.08mL，7.73mmol)，然后一次性添加固体羟胺盐酸盐(0.537g，7.73mmol)。将混合物温热至环境温度并搅拌16小时。将该混合物重新冷却至0℃，并且添加饱和水性NaHCO3(80mL)。将混合物用二氯甲烷(3x80mL)萃取，并且将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗品进行自动快速色谱(80g柱，5％至20％在二氯甲烷中的EtOAc梯度)以给出半纯的物质。第二次自动快速色谱(80g柱，5％至50％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈白色片状固体的S23(1.17g，50％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(br s,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),6.42(s,1H),6.12(d,J＝3.4Hz,1H),5.51(dd,J＝8.3Hz,
1.8Hz,1H),4.15(brm,1H),4.07(dd,J＝3.4Hz,1.4Hz,1H),3.91(dd,J＝8.2Hz,6.4Hz,1H),
3.80(dd,J＝9.8Hz,5.6Hz,1H),3.74(dd,J＝9.8Hz,8.6Hz,1H),0.91(s,9H),0.90(s,9H),
0.86(s,9H),0.12(s,3H),0.11(s,3H),0.08(s,3H),0.07(s,6H),-0.02(s,3H)；LRMS m/z +
602.3[M+H]。
1.8Hz,1H),4.15(brm,1H),4.07(dd,J＝3.4Hz,1.4Hz,1H),3.91(dd,J＝8.2Hz,6.4Hz,1H),
3.80(dd,J＝9.8Hz,5.6Hz,1H),3.74(dd,J＝9.8Hz,8.6Hz,1H),0.91(s,9H),0.90(s,9H),
0.86(s,9H),0.12(s,3H),0.11(s,3H),0.08(s,3H),0.07(s,6H),-0.02(s,3H)；LRMS m/z +
602.3[M+H]。
[0461] EIDD-02200：在室温下，在氮气下，向S23(0.602g，1.00mmol)在THF(8mL)中的搅拌溶液中经由注射器逐滴添加三乙胺三氢氟酸盐(0.163mL，1.00mmol)。将混合物在环境温度下搅拌4天。将硅藻土添加到反应混合物中，并且旋转蒸发将粗品固定在硅藻土上。自动快速色谱(24g柱，在二氯甲烷中的5％至25％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出了600mg半纯的产物。将混合物吸收于水中，并且自动反相快速色谱(43g柱，0至15％在水中的乙腈梯度)给出了不含杂质的所希望的产物。将固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈白色絮状固体的标题化合物(0.164g，63％产率)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.13(d,J＝8.3Hz,1H),6.07(d,J＝4.4Hz,1H),5.51(d,J＝8.3Hz,1H),4.10(dd,J＝4.5Hz,1.3Hz,1H),
4.03(t,J＝3.4Hz,1H),3.87-3.72(m,3H)；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.08(d,J＝8.3Hz,1H),
6.09(d,J＝5.6Hz,1H),5.67(d,J＝8.3Hz,1H),4.33(t,J＝5.4Hz,1H),4.06(t,J＝5.6Hz,
1H),3.89-3.86(m,2H),3.76(dd,J＝13.1Hz,6.1Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ150.9,
146.8,132.8,97.0,84.1,82.1,75.8,74.8,60.4；LRMS m/z260.1[M+H]+。
4.03(t,J＝3.4Hz,1H),3.87-3.72(m,3H)；1H NMR(400MHz,D2O)δ7.08(d,J＝8.3Hz,1H),
6.09(d,J＝5.6Hz,1H),5.67(d,J＝8.3Hz,1H),4.33(t,J＝5.4Hz,1H),4.06(t,J＝5.6Hz,
1H),3.89-3.86(m,2H),3.76(dd,J＝13.1Hz,6.1Hz,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ150.9,
146.8,132.8,97.0,84.1,82.1,75.8,74.8,60.4；LRMS m/z260.1[M+H]+。
[0462] 实例23.
[0463]
[0464] S24：在氮气下，在室温下，向EIDD-1931(1.25g，4.82mmol)在干的丙酮(60mL)中的搅拌悬浮液中添加浓H2SO4(0.05mL，0.964mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。通过添加三乙胺(0.27mL，1.93mmol)来中和酸，并将混合物通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(80g柱，0至10％在二氯甲烷中的甲醇梯度)给出了呈白色固体的S24(0.831g，58％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.03(d,J＝8.2Hz,1H),5.81(d,J＝3.2Hz,1H),5.58(d,J＝8.2Hz,1H),4.86(dd,J＝6.5Hz,3.2Hz,1H),4.79(dd,J＝6.4Hz,3.6Hz,1H),4.10(q,J＝4.0Hz,
1H),3.75(dd,J＝11.9Hz,3.7Hz,1H),3.70(dd,J＝12.0Hz,4.5Hz,1H),1.54(s,3H),1.35(s,3H)。
1H),3.75(dd,J＝11.9Hz,3.7Hz,1H),3.70(dd,J＝12.0Hz,4.5Hz,1H),1.54(s,3H),1.35(s,3H)。
[0465] S25：在室温下，在氮气下，向S24(0.831g，2.78mmol)在二氯甲烷(14mL)中的搅拌悬浮液中添加三乙胺(0.58mL，4.16mmol)和4-DMAP(3.4mg，0.028mmol)，并将混合物在室温下搅拌15分钟。逐滴添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(0.988g，2.92mmol)在二氯甲烷(14mL)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物用盐水(1x30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。快速色谱(9:1己烷:EtOAc，2.5％v/v Et3N)给出了呈黄色泡沫状的S25(1.39g，83％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.35-7.20(m,10H),7.01(d,J＝8.3Hz,1H),6.85-6.80(m,4H),5.80(d,J＝3.0Hz,1H),5.52(d,J＝8.2Hz,1H),4.84(dd,J＝
6.4Hz,3.0Hz,1H),4.77(dd,J＝6.4Hz,3.6Hz,1H),4.10(q,J＝4.0Hz,1H),3.73(dd,J＝
11.9Hz,3.6Hz,1H),3.68(dd,J＝12.0Hz,4.6Hz,1H),1.53(s,3H),1.34(s,3H)。
6.4Hz,3.0Hz,1H),4.77(dd,J＝6.4Hz,3.6Hz,1H),4.10(q,J＝4.0Hz,1H),3.73(dd,J＝
11.9Hz,3.6Hz,1H),3.68(dd,J＝12.0Hz,4.6Hz,1H),1.53(s,3H),1.34(s,3H)。
[0466] S27：在0℃下，在氮气下，向S26(0.523g，2.56mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.46mL，2.64mmol)在乙腈(5mL)中的搅拌溶液中添加S25(0.300g，0.499mmol)。将所得的混合物温热至室温并搅拌22小时，然后用EtOAc(50mL)稀释，用盐水(2x50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗的残余物不进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0467] EIDD-2207：将在上一步中制备的全部粗品S27与80％w/w水性甲酸(10mL)混合，并将混合物在室温下搅拌20小时。将混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并且自动快速色谱(40g柱，0至15％在二氯甲烷中的甲醇梯度)给出了呈黄色泡沫状的标题化合物(0.104g，48％，经2个步骤)，该标题化合物在磷下为约1:1非对映异构体混合物：1H NMR(400MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ7.41-7.35(m,1H),7.26-7.18(m,2H),7.12(d,J＝8.3Hz,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,0.5x1H),6.69(d,J＝8.3Hz,0.5x1H),5.79(d,J＝4.8Hz,0.5x1H),5.75(d,J＝4.8Hz,0.5x1H),5.54-5.42(m,2H),5.46(d,J＝8.2Hz,0.5x1H),5.32(d,J＝8.2Hz,
0.5x1H),4.56-4.25(m,2H),4.13-4.02(m,3H)；31P NMR(162MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ-9.13,-9.33；针对C16H18N3O9PNa[M+Na]+的HRMS计算值：450.06729；发现值：
450.06777。
0.5x1H),4.56-4.25(m,2H),4.13-4.02(m,3H)；31P NMR(162MHz,CD3OD,非对映异构体混合物)δ-9.13,-9.33；针对C16H18N3O9PNa[M+Na]+的HRMS计算值：450.06729；发现值：
450.06777。
[0468] 实例24.
[0469]
[0470] EIDD-2216：制备羟胺盐酸盐(4.71g，67.8mmol)在水(13.5mL)中的约5N溶液，并用少量的水性NaOH(10％w/w)调节至pH＝6。向可密封的压力管填充该溶液和[1’,2’,3’,4’,5’-13C5]胞苷(0.661g，2.26mmol)，将烧瓶密封，并在37℃下在搅拌下加热16小时。将混合物冷却至室温，转移至圆底烧瓶中，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗物质吸收于水中，并且自动反相快速色谱(240g C18柱，0至100％在水中的乙腈梯度)去除了大量杂质以给出1.4g湿固体。将该固体溶解于水中，并且第二次自动反相色谱(240g C18柱，0至100％在水中的乙腈梯度)去除了更多杂质以给出400mg半纯的物质。将该物质溶解在MeOH中并固定在硅藻土上。自动快速色谱(24g柱，5％至25％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出了约200mg的将近纯的产物。将该固体溶解于水中，并且最终的自动反相色谱(48g C18柱，0至100％在水中的乙腈梯度)给出了所希望的不含有机和无机杂质的产物。将该固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈浅紫色絮状固体的标题化合物(0.119g，20％)，通过NMR/LCMS分析是约95％纯的：1H NMR(400MHz,D2O)δ7.03(dd,J＝8.2Hz,2.2Hz,1H),5.82(ddd,J＝
167.5Hz,5.3Hz,2.9Hz,1H),5.70(d,J＝8.2Hz,1H),4.47-4.30(br m,1H),4.23-4.03(brm,
1H),4.00-3.80(br m,2H),3.65-3.50(br m,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ151.3,146.6,
131.3,98.7,87.9(dd,J＝43.1Hz,4.0Hz),84.0(dd,J＝41.5Hz,38.0Hz),72.5(dd,J＝
43.3Hz,37.8Hz),69.8(td,J＝37.9Hz,3.9Hz),61.1(d,J＝41.5Hz)；LRMS m/z 265.1[M+H]+。
167.5Hz,5.3Hz,2.9Hz,1H),5.70(d,J＝8.2Hz,1H),4.47-4.30(br m,1H),4.23-4.03(brm,
1H),4.00-3.80(br m,2H),3.65-3.50(br m,1H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ151.3,146.6,
131.3,98.7,87.9(dd,J＝43.1Hz,4.0Hz),84.0(dd,J＝41.5Hz,38.0Hz),72.5(dd,J＝
43.3Hz,37.8Hz),69.8(td,J＝37.9Hz,3.9Hz),61.1(d,J＝41.5Hz)；LRMS m/z 265.1[M+H]+。
[0471] 实例25.
[0472]
[0473] S28：向可密封的压力管填充尿苷(1.00g，4.09mmol)、K2CO3(0.679g，4.91mmol)和氧化氘(8.2mL)。将混合物用氮气吹扫15分钟，将该管密封，并且将内容物在95℃下在搅拌下加热16小时。将混合物冷却至室温，将该管开封，并且将混合物转移到圆底烧瓶中并通过旋转蒸发进行浓缩。将所得放入粗品与MeOH(x 3)共蒸发以除去水。NMR分析显示在核碱基上的5-位处的>95％的氘掺入。将浅棕色固体S28(1.00g，100％)不经进一步纯化而用于下一步骤：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.76(s,1H),5.88(d,J＝4.2Hz,1H),4.17-4.12(m,2H),4.00-3.96(m,1H),3.84(dd,J＝12.3Hz,2.8Hz,1H),3.72(dd,J＝12.3Hz,3.5Hz,1H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ185.6,177.4,160.4,141.1,91.8,85.8,75.9,71.2,62.4。
[0474] S29：在氮气下，向圆底烧瓶填充S28(1.00g，4.09mmol)和二氯甲烷(8mL)。将所得的混合物冷却至0℃并且一次性添加4-DMAP(0.050g，0.408mmol)和咪唑(1.11g，16.3mmol)。一次性添加呈固体的TBSCl(2.15g，14.3mmol)，将混合物温热至环境温度，并搅拌16小时。将水(25mL)添加至反应混合物中，分离各层，并且将水层用二氯甲烷(2x25mL)萃取。将合并的有机层用盐水(1x25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。
自动快速色谱(40g柱，0至35％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈灰白色泡沫状的S29(2.52g，84％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(br s,1H),8.03(s,1H),5.89(d,J＝3.6Hz,
1H),4.12-4.06(m,3H),3.99(dd,J＝11.5Hz,1.8Hz,1H),3.76(d,J＝12.0Hz,1H),0.96(s,
9H),0.92(s,9H),0.90(s,9H),0.14(s,3H),0.13(s,3H),0.10(s,3H),0.09(s,3H),0.08(s,
3H),0.07(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.7,150.3,140.3,89.0,84.3,76.1,70.5,
61.6,26.0(3C),25.8(3C),25.7(3C),18.4,18.3,17.9,-4.2,-4.6,-4.8,-4.9,-5.4,-5.6；
+
针对C27H54N2NaO6Si[M+Na]的HRMS计算值：610.32446，发现值：610.32482。
自动快速色谱(40g柱，0至35％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈灰白色泡沫状的S29(2.52g，84％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.08(br s,1H),8.03(s,1H),5.89(d,J＝3.6Hz,
1H),4.12-4.06(m,3H),3.99(dd,J＝11.5Hz,1.8Hz,1H),3.76(d,J＝12.0Hz,1H),0.96(s,
9H),0.92(s,9H),0.90(s,9H),0.14(s,3H),0.13(s,3H),0.10(s,3H),0.09(s,3H),0.08(s,
3H),0.07(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.7,150.3,140.3,89.0,84.3,76.1,70.5,
61.6,26.0(3C),25.8(3C),25.7(3C),18.4,18.3,17.9,-4.2,-4.6,-4.8,-4.9,-5.4,-5.6；
+
针对C27H54N2NaO6Si[M+Na]的HRMS计算值：610.32446，发现值：610.32482。
[0475] S30：在0℃下，在氮气下，向S29(0.840g，1.43mmol)在乙腈(14.3mL)中的搅拌溶液中顺序地添加对甲苯磺酰氯(0.545g，2.86mmol)、4-DMAP(0.175g，1.43mmol)和三乙胺(0.80mL，5.71mmol)。将混合物在0℃下搅拌2.5小时，此时一次性添加呈固体的羟胺盐酸盐(0.993g，14.3mmol)。将混合物在50℃下加热3天，然后冷却至室温。将该反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，然后用水(2x100mL)和盐水(1x100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(40g柱，5％至35％在己烷中的EtOAc梯度)产生了起始物质和所希望的产物的混合物。第二次自动快速色谱(24g柱，10％至40％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈灰白色泡沫状的S30(0.332g，39％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(br s,1H),5.92(d,J＝4.6Hz,1H),4.10-4.05(m,2H),4.04-4.00(m,1H),3.91(dd,J＝11.6Hz,2.4Hz,
1H),3.73(dd,J＝11.6Hz,1.8Hz,1H),0.95(s,9H),0.92(s,9H),0.89(s,9H),0.12(s,6H),
0.10(s,3H),0.08(s,3H),0.06(s,3H),0.05(s,3H)。
1H),3.73(dd,J＝11.6Hz,1.8Hz,1H),0.95(s,9H),0.92(s,9H),0.89(s,9H),0.12(s,6H),
0.10(s,3H),0.08(s,3H),0.06(s,3H),0.05(s,3H)。
[0476] EIDD-2261：在氮气下，在0℃下，向圆底烧瓶填充S30(0.332g，0.551mmol)、四甲基氟化铵(0.196g，2.64mmol)、THF(8.25mL)和DMF(2.75mL)。经由注射器一次性添加乙酸(0.157mL，2.75mmol)。将混合物温热至45℃，并在搅拌下加热4天，然后通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(40g柱，0至20％在DCM中的MeOH梯度)给出了呈白色固体的标题化合物(0.106g，74％)。最终的NMR分析显示在核碱基的5位处的>95％的氘掺入：1H NMR(400MHz,D2O)δ7.16(s,1H),5.85(d,J＝5.6Hz,1H),4.14(t,J＝5.5Hz,1H),4.10(dd,J＝5.6Hz,3.8Hz,1H),3.93(q,J＝3.4Hz,1H),3.77(dd,J＝12.2Hz,2.9Hz,1H),3.68(dd,J＝12.2Hz,
3.4Hz,1H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.8,146.3,132.1,89.7,86.1,74.6,71.8,62.8；针对C9H13DN3O6[M+H]+的HRMS计算值：261.09399，发现值：261.09371。
3.4Hz,1H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.8,146.3,132.1,89.7,86.1,74.6,71.8,62.8；针对C9H13DN3O6[M+H]+的HRMS计算值：261.09399，发现值：261.09371。
[0477] 实例26.
[0478]
[0479] S31：在氮气下，向圆底烧瓶填充S8(3.13g，11.0mmol)和二氯甲烷(75mL)。在室温下，向该搅拌混合物中顺序地添加重铬酸吡啶鎓(8.28g，22.0mmol)、乙酸酐(10.4mL，110mmol)和叔丁醇(21.1mL，220mmol)。将混合物在室温下搅拌22小时，然后用水(1x75mL)洗涤。将水层用二氯甲烷(2x75mL)萃取，并且将合并的有机层用盐水(1x100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。将获得的残余物吸收于EtOAc中并通过硅藻土塞过滤，然后用EtOAc洗涤。将滤液通过旋转蒸发进行浓缩，并且自动快速色谱(120g柱，
40％至80％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈灰白色泡沫状的S31(3.10g，72％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(br s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),5.76(dd,J＝8.0Hz,2.3Hz,1H),
5.59(s,1H),5.27(dd,J＝6.0Hz,1.8Hz,1H),5.19(d,J＝6.0Hz,1H),4.62(d,J＝1.8Hz,
1H),1.56(s,3H),1.48(s,9H),1.39(s,3H)。
40％至80％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈灰白色泡沫状的S31(3.10g，72％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(br s,1H),7.42(d,J＝8.0Hz,1H),5.76(dd,J＝8.0Hz,2.3Hz,1H),
5.59(s,1H),5.27(dd,J＝6.0Hz,1.8Hz,1H),5.19(d,J＝6.0Hz,1H),4.62(d,J＝1.8Hz,
1H),1.56(s,3H),1.48(s,9H),1.39(s,3H)。
[0480] S32：在室温下，在氮气下，向S31(2.61g，7.37mmol)在EtOD(75mL)中的搅拌溶液中一次性添加NaBD4(1.234g，29.5mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，加热至55℃持续6小时，然后在室温下过夜。将混合物冷却至0℃，并且将过量的试剂用AcOD淬灭。将混合物通过旋转蒸发进行浓缩以给出粗品S32(2.57g)，将该粗品S32不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0481] S33：在0℃向粗品S32(2.00g不纯的物质，约5.74mmol)在二氯甲烷(70mL)中的搅拌悬浮液中添加固体咪唑(1.90g，27.9mmol)和4-DMAP(0.171g，1.40mmol)。添加固体叔-丁基二甲基甲硅烷基氯化物(2.11g，14.0mmol)，并且将混合物温热至室温并搅拌4天。将混合物顺序地用水和盐水(1x70mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(120g柱，0至35％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈白色固体的S33(1.42g，66％，经2个步骤)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.30(br s,1H),7.72(m,1H),5.99(d,J＝2.8Hz,1H),5.69(dd,J＝8.2Hz,2.3Hz,1H),4.77(dd,J＝6.1Hz,2.9Hz,1H),4.69(dd,J＝6.2Hz,2.8Hz,1H),4.33(d,J＝3.0Hz,1H),1.60(s,3H),1.37(s,3H),0.91(s,9H),0.11(s,3),0.10(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ162.7,149.9,140.5,114.1,102.1,91.9,86.5,85.4,80.3,27.4,25.9(3C),25.4,18.4,-5.4,-5.5；针对C18H29D2N2O6Si[M+H]+的HRMS计算值：401.20714，发现值：
401.20663。
401.20663。
[0482] S34：在0℃下，在氮气下，向S33(1.42g，3.55mmol)在乙腈(35mL)中的搅拌溶液中顺序地添加对甲苯磺酰氯(1.35g，7.09mmol)、4-DMAP(0.433g，3.55mmol)和三乙胺(9.88mL，70.9mmol)。将所得的混合物在0℃下搅拌2.5小时。添加羟胺盐酸盐(2.46g，35.5mmol)，并且将混合物在50℃下在搅拌下加热2天。将混合物重新冷却至室温并用EtOAc(100mL)稀释，然后用水(2x50mL)和盐水(1x50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(120g柱，1％至3.5％在二氯甲烷中的甲醇梯度)给出了呈灰白色固体的S34(0.416g，28％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.36(br s,1H),7.00(m,1H),5.97(d,J＝3.1Hz,1H),5.58(d,J＝8.2Hz,1H),4.77(dd,J＝6.2Hz,3.2Hz,1H),4.68(dd,J＝6.3Hz,
3.2Hz,1H),4.22(d,J＝3.2Hz,1H),1.59(s,3H),1.36(s,3H),0.92(s,9H),0.11(s,3H),
0.10(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ149.0,145.4,131.4,114.1,98.3,90.8,85.5,84.5,
80.2,27.4,25.9(3C),25.5,18.4,-5.4,-5.5；针对C18H29D2N3O6Si[M+H]+的HRMS计算值：
416.21804，发现值：416.21827。
3.2Hz,1H),4.22(d,J＝3.2Hz,1H),1.59(s,3H),1.36(s,3H),0.92(s,9H),0.11(s,3H),
0.10(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ149.0,145.4,131.4,114.1,98.3,90.8,85.5,84.5,
80.2,27.4,25.9(3C),25.5,18.4,-5.4,-5.5；针对C18H29D2N3O6Si[M+H]+的HRMS计算值：
416.21804，发现值：416.21827。
[0483] S35：在0℃下，在氮气下，向S34(0.416g，1.00mmol)在THF(5mL)中的搅拌溶液中添加TBAF的1.0M THF溶液(1.50mL，1.5mmol)，并且将所得的混合物在0℃下保持24小时。将反应混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并且自动快速色谱(40g柱，0至8％在二氯甲烷中的甲醇梯度)给出了呈白色固体的S35(0.257g，85％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.02(m,1H),5.81(d,J＝3.2Hz,1H),5.58(d,J＝8.2Hz,1H),4.86(dd,J＝6.4Hz,3.2Hz,1H),4.79(dd,J＝6.5Hz,3.6Hz,1H),4.09(d,J＝3.7Hz,1H),1.54(s,3H),1.34(s,3H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ151.3,146.2,133.4,115.2,99.4,92.9,87.2,84.9,82.1,27.6,25.6；针对C12H16D2N3O6[M+H]+的HRMS计算值：302.13157，发现值：302.13130。
[0484] EIDD-2345：在室温下，向S35(0.140g，0.465mmol)在甲醇(8.4mL)和水(0.93mL)中的搅拌溶液中添加Dowex 50WX8氢形式(0.30g)，并将该混合物在室温下搅拌24小时。将反应混合物过滤，并且将滤液通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(40g柱，5％至20％在二氯甲烷中的甲醇梯度)给出了呈灰白色固体的标题化合物(0.050g，41％)：1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.17(m,1H),5.86(d,J＝5.6Hz,1H),5.60(d,J＝8.2Hz,1H),4.15(t,J＝5.5Hz,1H),4.11(dd,J＝5.6Hz,3.5Hz,1H),3.94(d,J＝3.8Hz,1H)；13C NMR(100MHz,CD3OD)δ
151.8,146.3,132.2,99.3,89.7,86.0,74.6,71.7,针对C9H10D2N3O6[M+H]+的HRMS计算值：
260.08571，发现值：260.08578。
151.8,146.3,132.2,99.3,89.7,86.0,74.6,71.7,针对C9H10D2N3O6[M+H]+的HRMS计算值：
260.08571，发现值：260.08578。
[0485] 实例27.
[0486]
[0487] S36：在氮气下，在室温下，经2分钟，向S2(0.090g，0.150mmol)在DCM(1.5mL)中的搅拌溶液中经由注射器逐滴添加十六烷基异氰酸酯(0.051mL，0.165mmol)。将反应在室温下搅拌4小时，然后通过旋转蒸发进行浓缩以给出粗残余物。自动快速色谱(12g柱，0至20％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈灰白色泡沫状的S36(0.120g，92％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(br s,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,1H),6.29(t,J＝5.8Hz,1H),5.90(d,J＝4.5Hz,1H),5.57(dd,J＝8.2Hz,2.2Hz,1H),4.09-4.02(m,3H),3.93(dd,J＝11.7Hz,2.2Hz,1H),
3.73(dd,J＝11.6Hz,1.6Hz,1H),3.27(q,J＝6.6Hz,2H),1.56(m,2H),1.26(br s,28H),
0.95(s,9H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.89(m,3H),0.13(s,3H),0.12(s,3H),0.09(s,3H),
0.08(s,3H),0.05(s,3H),0.04(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ154.6,147.9,146.9,
134.0,96.0,91.2,87.9,85.1,75.5,71.7,62.5,41.2,31.9,29.73,29.70,29.69(2C,意外的等时性),29.67,29.65(2C,意外的等时性),29.60,29.5,29.4,29.3,26.8,26.0(3C),
25.8(3C),25.7(3C),22.7,18.4,18.1,17.9,14.1,-4.4,-4.6,-4.7,-4.8,-5.5,-5.6；针对+
C44H89N4O7Si3[M+H]的HRMS计算值：869.60336，发现值：869.60408。
3.73(dd,J＝11.6Hz,1.6Hz,1H),3.27(q,J＝6.6Hz,2H),1.56(m,2H),1.26(br s,28H),
0.95(s,9H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.89(m,3H),0.13(s,3H),0.12(s,3H),0.09(s,3H),
0.08(s,3H),0.05(s,3H),0.04(s,3H)；13C NMR(100MHz,CDCl3)δ154.6,147.9,146.9,
134.0,96.0,91.2,87.9,85.1,75.5,71.7,62.5,41.2,31.9,29.73,29.70,29.69(2C,意外的等时性),29.67,29.65(2C,意外的等时性),29.60,29.5,29.4,29.3,26.8,26.0(3C),
25.8(3C),25.7(3C),22.7,18.4,18.1,17.9,14.1,-4.4,-4.6,-4.7,-4.8,-5.5,-5.6；针对+
C44H89N4O7Si3[M+H]的HRMS计算值：869.60336，发现值：869.60408。
[0488] EIDD-2356：在氮气下，在0℃下，向S36(0.120g，0.138mmol)在THF(2.75mL)中的搅拌溶液中添加TBAF在THF中的1M溶液(0.483mL，0.483mmol)。将溶液在0℃下搅拌5小时，然后通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(12g柱，0至10％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出1
了呈灰白色固体的标题化合物(0.055g，76％)：H NMR(400Mhz,具有一滴CD3OD的CDCl3)δ
7.26(d,J＝8.2Hz,1H),5.62(d,J＝4.4Hz,1H),5.55(d,J＝8.2Hz,1H),4.14-4.06(m,2H),
3.96-3.92(m,1H),3.82-3.76(m,1H),3.65(m,1H,被MeOH-d4遮盖),3.15(t,7.0Hz,2H),
1.56(m,2H),1.30-1.11(br s,28H),0.79(t,J＝6.9Hz,3H)；针对C26H47N4O7[M+H]+的HRMS计算值：527.34393，发现值：527.34396。
了呈灰白色固体的标题化合物(0.055g，76％)：H NMR(400Mhz,具有一滴CD3OD的CDCl3)δ
7.26(d,J＝8.2Hz,1H),5.62(d,J＝4.4Hz,1H),5.55(d,J＝8.2Hz,1H),4.14-4.06(m,2H),
3.96-3.92(m,1H),3.82-3.76(m,1H),3.65(m,1H,被MeOH-d4遮盖),3.15(t,7.0Hz,2H),
1.56(m,2H),1.30-1.11(br s,28H),0.79(t,J＝6.9Hz,3H)；针对C26H47N4O7[M+H]+的HRMS计算值：527.34393，发现值：527.34396。
[0489] 实例28.
[0490]
[0491] S37：在氮气下，在室温下，经2分钟，向S2(0.090g，0.150mmol)在DCM(1.5mL)中的搅拌溶液中经由注射器逐滴添加十八烷基异氰酸酯(0.057mL，0.165mmol)。将反应在室温下搅拌6小时，然后通过旋转蒸发进行浓缩以给出粗残余物。自动快速色谱(12g柱，0至20％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈灰白色泡沫状的S37(0.128g，95％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(br s,1H),7.51(d,J＝8.3Hz,1H),6.29(t,J＝5.8Hz,1H),5.90(d,J＝4.4Hz,1H),5.57(dd,J＝8.2Hz,2.2Hz,1H),4.10-4.00(m,3H),3.93(dd,J＝11.6Hz,2.1Hz,1H),
3.73(dd,J＝11.7Hz,1.5Hz,1H),3.28(q,J＝6.6Hz,2H),1.55(m,2H),1.26(br s,30H),
0.95(s,9H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.89(m,3H),0.13(s,3H),0.12(s,3H),0.09(s,3H),
13
0.08(s,3H),0.05(s,3H),0.04(s,3H)；C NMR(100MHz,CDCl3)δ154.6,147.9,146.9,
134.0,96.0,91.2,87.9,85.1,75.5,71.7,62.5,41.2,31.9,29.73,29.70(5C,意外的等时性),29.67,29.66(2C,意外的等时性),29.60,29.5,29.4,29.3,26.8,26.0(3C),25.8(3C),
25.7(3C),22.7,18.4,18.1,17.9,14.1,-4.4,-4.6,-4.7,-4.8,-5.5,-5.6；针对
+
C46H93N4O7Si3[M+H]的HRMS计算值：897.63466，发现值：897.63589。
3.73(dd,J＝11.7Hz,1.5Hz,1H),3.28(q,J＝6.6Hz,2H),1.55(m,2H),1.26(br s,30H),
0.95(s,9H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.89(m,3H),0.13(s,3H),0.12(s,3H),0.09(s,3H),
13
0.08(s,3H),0.05(s,3H),0.04(s,3H)；C NMR(100MHz,CDCl3)δ154.6,147.9,146.9,
134.0,96.0,91.2,87.9,85.1,75.5,71.7,62.5,41.2,31.9,29.73,29.70(5C,意外的等时性),29.67,29.66(2C,意外的等时性),29.60,29.5,29.4,29.3,26.8,26.0(3C),25.8(3C),
25.7(3C),22.7,18.4,18.1,17.9,14.1,-4.4,-4.6,-4.7,-4.8,-5.5,-5.6；针对
+
C46H93N4O7Si3[M+H]的HRMS计算值：897.63466，发现值：897.63589。
[0492] EIDD-2357：在氮气下，在0℃下，向S37(0.128g，0.143mmol)在THF(2.85mL)中的搅拌溶液中添加TBAF在THF中的1M溶液(0.499mL，0.499mmol)。将溶液在0℃下搅拌5小时，然后通过旋转蒸发进行浓缩。自动快速色谱(12g柱，0至10％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出了呈灰白色固体的标题化合物(0.059g，74％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.70(br s,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),6.56(t,J＝6.2Hz,1H),5.76(s,1H),5.60(d,J＝8.2Hz,1H),4.32-
4.20(brm,2H),4.12-4.02(br m,2H),3.90(d,J＝11.7Hz,1H),1.56(m,2H),1.26(br s,
30H),0.89(t,J＝7.0Hz,3H)；针对C28H51N4O7[M+H]+的HRMS计算值：555.37523，发现值：
555.37531。
4.20(brm,2H),4.12-4.02(br m,2H),3.90(d,J＝11.7Hz,1H),1.56(m,2H),1.26(br s,
30H),0.89(t,J＝7.0Hz,3H)；针对C28H51N4O7[M+H]+的HRMS计算值：555.37523，发现值：
555.37531。
[0493] 实例29.
[0494]
[0495] S38：在-15℃下，向三光气(0.297g，1.00mmol)和碳酸氢钠(0.370g，4.40mmol)在乙腈(5mL)中的剧烈搅拌混合物中经由注射器逐滴添加甲胺(在THF中的2.0M，0.600mL，1.20mmol)和三乙胺(0.488mL，3.50mmol)的混合溶液。将该混合物温热至环境温度，并搅拌
6小时。制备S2(0.662g，1.10mmol)和4-DMAP(0.024g，0.200mmol)在乙腈(5mL)和DCM(5mL)中的溶液，并且经由注射器将该溶液逐滴添加到反应混合物中。将全部混合物在环境温度下搅拌16小时，用二氯甲烷(50mL)稀释，用饱和水性NaHCO3和盐水(各1x25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗品吸收于二氯甲烷中，并且自动快速色谱(24g柱，5％至35％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈白色蜡状固体的S38(0.340g，52％)。
NMR分析显示旋转异构体的比率为约8:1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6,主要的旋转异构体)δ
10.53(d,J＝2.2Hz,1H),7.30(d,J＝8.2Hz,1H),6.83(q,J＝4.9Hz,1H),5.80(d,J＝6.5Hz,
1H),5.67(dd,J＝8.3Hz,2.2Hz,1H),4.18(dd,J＝6.4Hz,4.3Hz,1H),4.05(m,1H),3.92(m,
1H),3.82(dd,J＝11.6Hz,4.0Hz,1H),3.70(dd,J＝11.5Hz,2.9Hz,1H),2.64(d,J＝4.7Hz,
3H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.83(s,9H),0.10(s,6H),0.09(s,3H),0.08(s,3H),0.02(s,
3H),-0.03(s,3H)。
6小时。制备S2(0.662g，1.10mmol)和4-DMAP(0.024g，0.200mmol)在乙腈(5mL)和DCM(5mL)中的溶液，并且经由注射器将该溶液逐滴添加到反应混合物中。将全部混合物在环境温度下搅拌16小时，用二氯甲烷(50mL)稀释，用饱和水性NaHCO3和盐水(各1x25mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗品吸收于二氯甲烷中，并且自动快速色谱(24g柱，5％至35％在己烷中的EtOAc梯度)给出了呈白色蜡状固体的S38(0.340g，52％)。
NMR分析显示旋转异构体的比率为约8:1：1H NMR(400MHz,DMSO-d6,主要的旋转异构体)δ
10.53(d,J＝2.2Hz,1H),7.30(d,J＝8.2Hz,1H),6.83(q,J＝4.9Hz,1H),5.80(d,J＝6.5Hz,
1H),5.67(dd,J＝8.3Hz,2.2Hz,1H),4.18(dd,J＝6.4Hz,4.3Hz,1H),4.05(m,1H),3.92(m,
1H),3.82(dd,J＝11.6Hz,4.0Hz,1H),3.70(dd,J＝11.5Hz,2.9Hz,1H),2.64(d,J＝4.7Hz,
3H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.83(s,9H),0.10(s,6H),0.09(s,3H),0.08(s,3H),0.02(s,
3H),-0.03(s,3H)。
[0496] EIDD-2422：在0℃下，向S38(0.330g，0.500mmol)在THF(3.75mL)和DMF(1.25mL)中的搅拌溶液中添加乙酸(0.143mL，2.50mmol)，然后一次性添加四乙基氟化铵(0.359g，2.40mmol)。将该混合物温热至环境温度，并搅拌24小时。将该混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并且将粗品吸收于二氯甲烷中。自动快速色谱(12g柱，1％至25％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出了80mg半纯的物质。将该物质吸收于水中，并且自动反相快速色谱(30g柱，0至
100％在水中的乙腈梯度)给出了不含杂质的所希望的产物。将该固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈白色絮状固体的标题化合物(0.057g，36％产率)。NMR分析显示信号的比率在D2O中为13:1并且在MeOH-d4中为8:1，指示了单一纯化合物的溶剂依赖性旋转异构体比率：1H NMR(400MHz,CD3OD,主要的旋转异构体)δ7.45(d,J＝8.2Hz,1H),5.86(d,J＝5.1Hz,1H),5.69(d,J＝8.2Hz,1H),4.16-4.08(m,2H),3.96(q,J＝3.2Hz,1H),3.79(dd,J＝12.2Hz,2.8Hz,1H),3.69(dd,J＝12.2Hz,3.3Hz,1H),2.79(s,3H)；1H NMR(400MHz,D2O,主要的旋转异构体)δ7.27(d,J＝8.2Hz,1H),5.84(d,J＝5.4Hz,1H),5.80(d,J＝
8.2Hz,1H),4.28(t,J＝5.2Hz,1H),4.17(t,J＝5.2Hz,1H),4.05(q,J＝4.2Hz,1H),3.82(dd,J＝12.8Hz,3.1Hz,1H),3.73(dd,J＝12.8Hz,4.6Hz,1H),2.76(s,3H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ157.6,150.2,148.8,134.0,97.1,88.4,84.1,73.1,69.7,61.0,26.9；LRMS m/z
315.1[M-H]-。
100％在水中的乙腈梯度)给出了不含杂质的所希望的产物。将该固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈白色絮状固体的标题化合物(0.057g，36％产率)。NMR分析显示信号的比率在D2O中为13:1并且在MeOH-d4中为8:1，指示了单一纯化合物的溶剂依赖性旋转异构体比率：1H NMR(400MHz,CD3OD,主要的旋转异构体)δ7.45(d,J＝8.2Hz,1H),5.86(d,J＝5.1Hz,1H),5.69(d,J＝8.2Hz,1H),4.16-4.08(m,2H),3.96(q,J＝3.2Hz,1H),3.79(dd,J＝12.2Hz,2.8Hz,1H),3.69(dd,J＝12.2Hz,3.3Hz,1H),2.79(s,3H)；1H NMR(400MHz,D2O,主要的旋转异构体)δ7.27(d,J＝8.2Hz,1H),5.84(d,J＝5.4Hz,1H),5.80(d,J＝
8.2Hz,1H),4.28(t,J＝5.2Hz,1H),4.17(t,J＝5.2Hz,1H),4.05(q,J＝4.2Hz,1H),3.82(dd,J＝12.8Hz,3.1Hz,1H),3.73(dd,J＝12.8Hz,4.6Hz,1H),2.76(s,3H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ157.6,150.2,148.8,134.0,97.1,88.4,84.1,73.1,69.7,61.0,26.9；LRMS m/z
315.1[M-H]-。
[0497] 实例30.
[0498]
[0499] S39：在氮气下，在0℃下，经5分钟，向S2(1.10g，1.82mmol)在吡啶(12mL)中的剧烈搅拌溶液中经由注射器逐滴添加二甲基氨基甲酰氯(0.184mL，2.00mmol)。将混合物在0℃下搅拌4小时，然后温热至环境温度并再搅拌16小时。添加甲醇(2mL)，将混合物在室温下再搅拌15分钟，然后通过旋转蒸发进行浓缩。将粗品吸收于二氯甲烷中，并且自动快速色谱(40g柱，5％至50％在己烷中的EtOAc梯度)提供了呈蓬松白色固体的S39(1.16g，95％)。NMR1
分析显示旋转异构体的比率为约10:1：H NMR(400MHz,DMSO-d6,主要的旋转异构体)δ10.76(d,J＝2.2Hz,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,1H),5.80(d,J＝6.3Hz,1H),5.70(dd,J＝8.2Hz,
2.2Hz,1H),4.20(dd,J＝6.3Hz,4.6Hz,1H),4.05(dd,J＝4.3Hz,2.3Hz,1H),3.92(q,J＝
3.1Hz,1H),3.83(dd,J＝11.5Hz,4.0Hz,1H),3.70(dd,J＝11.5Hz,2.8Hz,1H),2.96(br s,
3H),2.83(br s,3H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.83(s,9H),0.10(s,6H),0.09(s,3H),0.08(s,3H),0.02(s,3H),-0.01(s,3H)。
分析显示旋转异构体的比率为约10:1：H NMR(400MHz,DMSO-d6,主要的旋转异构体)δ10.76(d,J＝2.2Hz,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,1H),5.80(d,J＝6.3Hz,1H),5.70(dd,J＝8.2Hz,
2.2Hz,1H),4.20(dd,J＝6.3Hz,4.6Hz,1H),4.05(dd,J＝4.3Hz,2.3Hz,1H),3.92(q,J＝
3.1Hz,1H),3.83(dd,J＝11.5Hz,4.0Hz,1H),3.70(dd,J＝11.5Hz,2.8Hz,1H),2.96(br s,
3H),2.83(br s,3H),0.91(s,9H),0.89(s,9H),0.83(s,9H),0.10(s,6H),0.09(s,3H),0.08(s,3H),0.02(s,3H),-0.01(s,3H)。
[0500] EIDD-2423：在0℃下，向S39(1.16g，1.72mmol)在THF(12.9mL)和DMF(4.3mL)中的搅拌溶液中添加乙酸(0.493mL，8.62mmol)，然后一次性添加四乙基氟化铵(1.24g，8.27mmol)。将该混合物温热至环境温度，并搅拌16小时。将该混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并且将粗品吸收于二氯甲烷中。自动快速色谱(80g柱，1％至15％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出了400mg半纯的物质。将该物质吸收于水中，并且自动反相快速色谱(100g柱，0至
100％在水中的乙腈梯度)给出了不含杂质的所希望的产物。将该固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈白色絮状固体的标题化合物(0.200g，35％产率)。NMR分析显示信号的比率在D2O中为9:1并且在MeOH-d4中为5:1，指示了单一纯化合物的溶剂依赖性旋转异构体比率：1H NMR(400MHz,CD3OD,主要的旋转异构体)δ7.46(d,J＝8.3Hz,1H),5.85(d,J＝4.8Hz,1H),5.72(d,J＝8.2Hz,1H),4.18-4.11(m,2H),3.97(q,J＝3.5Hz,1H),3.80(dd,J＝12.1Hz,2.8Hz,1H),3.70(dd,J＝12.2Hz,3.2Hz,1H),3.05(br s,3H),2.98(br s,
3H)；1H NMR(400MHz,D2O,主要的旋转异构体)δ7.27(d,J＝8.3Hz,1H),5.84(d,J＝5.4Hz,
1H),5.80(d,J＝8.3Hz,1H),4.28(t,J＝5.4Hz,1H),4.17(d,J＝5.2Hz,1H),4.05(q,J＝
4.3Hz,1H),3.82(dd,J＝12.7Hz,3.2Hz,1H),3.73(dd,J＝12.7Hz,4.5Hz,1H),2.99(br s,
3H),2.91(br s,3H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ156.2,150.1,149.4,133.9,97.2,88.3,84.1,
73.0,69.7,61.0,36.5,35.7；LRMS m/z 329.0[M-H]-。
100％在水中的乙腈梯度)给出了不含杂质的所希望的产物。将该固体溶解于水中，在干冰/丙酮浴中冷冻并且冻干以提供呈白色絮状固体的标题化合物(0.200g，35％产率)。NMR分析显示信号的比率在D2O中为9:1并且在MeOH-d4中为5:1，指示了单一纯化合物的溶剂依赖性旋转异构体比率：1H NMR(400MHz,CD3OD,主要的旋转异构体)δ7.46(d,J＝8.3Hz,1H),5.85(d,J＝4.8Hz,1H),5.72(d,J＝8.2Hz,1H),4.18-4.11(m,2H),3.97(q,J＝3.5Hz,1H),3.80(dd,J＝12.1Hz,2.8Hz,1H),3.70(dd,J＝12.2Hz,3.2Hz,1H),3.05(br s,3H),2.98(br s,
3H)；1H NMR(400MHz,D2O,主要的旋转异构体)δ7.27(d,J＝8.3Hz,1H),5.84(d,J＝5.4Hz,
1H),5.80(d,J＝8.3Hz,1H),4.28(t,J＝5.4Hz,1H),4.17(d,J＝5.2Hz,1H),4.05(q,J＝
4.3Hz,1H),3.82(dd,J＝12.7Hz,3.2Hz,1H),3.73(dd,J＝12.7Hz,4.5Hz,1H),2.99(br s,
3H),2.91(br s,3H)；13C NMR(100MHz,D2O)δ156.2,150.1,149.4,133.9,97.2,88.3,84.1,
73.0,69.7,61.0,36.5,35.7；LRMS m/z 329.0[M-H]-。
[0501] 实例31.
[0502]
[0503] S40：在氮气下，将在圆底烧瓶中的S25(0.50g，0.83mmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的溶液用冰浴冷却至0℃，并且用吡啶(0.14mL，1.66mmol)和DMAP(10mg，0.083mmol)处理，然后逐滴添加氯甲酸庚酯(0.165mL，0.914mmol)。将混合物温热至室温并搅拌2小时。在反应完成后，将该反应混合物用二氯甲烷(25mL)稀释，并用5％水性盐酸(25mL)和水性碳酸氢钠(25mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并通过旋转蒸发进行浓缩以给出S40。将粗产物不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0504] EIDD-2474：将如上制备的全部粗品S40用甲酸(10mL)在室温下搅拌12小时。通过旋转蒸发去除溶剂，并且使用甲醇和二氯甲烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色固体的标题化合物(0.140g，42％，经2个步骤)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.61(s,1H),6.85(d,J＝8.1Hz,1H),5.75(d,J＝5.8Hz,1H),5.57(d,J＝8.1Hz,1H),
5.42(d,J＝5.8Hz,1H),5.30(d,J＝5.0Hz,1H),4.31(dd,J＝11.7Hz,3.2Hz,1H),4.20(dd,J＝11.8Hz,5.4Hz,1H),4.14-4.08(m,1H),4.02(q,J＝5.7Hz,1H),3.97-3.90(m,2H),3.10(m,1H),1.61-1.18(m,10H),0.90-0.86(m,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ154.9,149.9,
143.6,130.3,99.2,87.9,81.0,72.1,70.4,68.2,67.8,45.9,31.6,28.5,25.6,22.5,14.4；
LRMS m/z402.1[M+H]+。
5.42(d,J＝5.8Hz,1H),5.30(d,J＝5.0Hz,1H),4.31(dd,J＝11.7Hz,3.2Hz,1H),4.20(dd,J＝11.8Hz,5.4Hz,1H),4.14-4.08(m,1H),4.02(q,J＝5.7Hz,1H),3.97-3.90(m,2H),3.10(m,1H),1.61-1.18(m,10H),0.90-0.86(m,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ154.9,149.9,
143.6,130.3,99.2,87.9,81.0,72.1,70.4,68.2,67.8,45.9,31.6,28.5,25.6,22.5,14.4；
LRMS m/z402.1[M+H]+。
[0505] 实例32.
[0506]
[0507] S41：在氮气下，将在50mL圆底烧瓶中的S25(0.40g，0.66mmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的溶液用冰浴冷却至0℃，并且用吡啶(0.10mL，1.33mmol)和DMAP(0.080g，0.66mmol)处理，然后添加异氰酸庚酯(0.16mL，0.99mmol)并在40℃下搅拌12小时。在反应完成后，将该反应混合物用二氯甲烷(25mL)稀释，并用5％水性盐酸(25mL)和水性碳酸氢钠(25mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并通过旋转蒸发进行浓缩以给出粗品S41。将粗产物不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0508] EIDD-2475：将如上所制备的全部粗品S41用甲酸(10mL)在室温下搅拌12小时。通过旋转蒸发去除溶剂，并且使用甲醇和二氯甲烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色固体的标题化合物(0.150g，56％，经2个步骤)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.98(s,1H),9.53(s,1H),7.26(t,J＝5.5Hz,1H),6.83(d,J＝8.2Hz,1H),5.71(d,J＝6.3Hz,1H),
5.52(d,J＝8.2Hz,1H),4.19-3.77(m,5H),2.94(q,J＝6.2Hz,2H),1.48-1.10(m,10H),0.83
13
(t,J＝6.6Hz,3H)；C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ156.3,150.0,143.7,130.4,99.1,87.4,
81.9,72.1,70.6,64.2,31.7,29.9,28.9,26.6,22.5,14.4；LRMS m/z 401.1[M+H]+。
5.52(d,J＝8.2Hz,1H),4.19-3.77(m,5H),2.94(q,J＝6.2Hz,2H),1.48-1.10(m,10H),0.83
13
(t,J＝6.6Hz,3H)；C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ156.3,150.0,143.7,130.4,99.1,87.4,
81.9,72.1,70.6,64.2,31.7,29.9,28.9,26.6,22.5,14.4；LRMS m/z 401.1[M+H]+。
[0509] 实例33.
[0510]
[0511] S42：在氮气下，将在50mL圆底烧瓶中的S25(0.25g，0.41mmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的溶液用冰浴冷却至0℃，并且用吡啶(0.068mL，0.83mmol)和DMAP(0.073g，0.41mmol)处理，然后添加壬酰氯(0.082mL，0.45mmol)并在40℃下搅拌12小时。在反应完成后，将该反应混合物用二氯甲烷(15mL)稀释，并用5％水性盐酸(20mL)和水性碳酸氢钠(20mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并通过旋转蒸发进行浓缩以给出粗品S42。将粗产物不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0512] EIDD-2476：将如上制备的全部粗品S42用甲酸(5mL)在室温下搅拌12小时。通过旋转蒸发去除溶剂，并且使用甲醇和二氯甲烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色固体的标题化合物(0.080g，54％，经2个步骤)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.99(s,1H),9.54(s,1H),6.81(d,J＝8.3Hz,1H),5.69(d,J＝5.6Hz,1H)(dd,J＝8.2Hz,1.8Hz,1H),5.35(d,J＝5.8Hz,1H),5.22(d,J＝5.1Hz,1H),4.25-4.02(m,2H),4.03-3.78(m,3H),2.35-2.20(m,2H),1.58-1.42(m,2H),1.22(m,10H),0.83(t,J＝3.3Hz,3H)；13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ173.2,149.9,143.7,130.3,99.2,88.0,81.1,72.3,70.4,64.3,33.8,31.7,29.1,29.0,+
28.9,24.9,22.5,14.4；LRMS m/z 400.2[M+H]。
28.9,24.9,22.5,14.4；LRMS m/z 400.2[M+H]。
[0513] 实例34.
[0514]
[0515] S43：在0℃下，在氮气下，向S8(5.87g，20.7mmol)在吡啶(20mL)中的搅拌溶液中经由注射器逐滴添加氯磷酸二乙酯(2.99mL，20.7mmol)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后温热至环境温度并再搅拌30分钟。将混合物再冷却至0℃，添加MeOH(20mL)，将混合物温热至环境温度并搅拌15分钟。将混合物通过旋转蒸发进行浓缩并吸收于二氯甲烷中。自动快速色谱(120g柱，1％至10％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出了呈灰白色片状固体的S43(4.25g，49％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.28(br s,1H),8.39(br s,1H),7.95(d,J＝7.7Hz,1H),6.04(d,J＝7.6Hz,1H),5.80(d,J＝1.7Hz,1H),5.07(dd,J＝6.4Hz,1.7Hz,1H),
4.79(dd,J＝6.4Hz,3.7Hz,1H),4.30-4.24(m,1H),4.21-4.07(m,2H),4.01(dq,J＝8.2Hz,
7.1Hz,4H),1.49(s,3H),1.29(s,3H),1.22(tq,J＝7.0Hz,0.8Hz,6H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ-1.21；LRMS m/z420.1[M+H]+。
4.79(dd,J＝6.4Hz,3.7Hz,1H),4.30-4.24(m,1H),4.21-4.07(m,2H),4.01(dq,J＝8.2Hz,
7.1Hz,4H),1.49(s,3H),1.29(s,3H),1.22(tq,J＝7.0Hz,0.8Hz,6H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ-1.21；LRMS m/z420.1[M+H]+。
[0516] S44：制备羟胺盐酸盐(12.7g，182mmol)在水中的约5N溶液(36.4mL溶液体积)，并用少量的水性NaOH(10％w/w)调节至pH＝6。向可密封的压力管填充该溶液、S43(3.82g，9.11mmol)和THF(18mL)，将烧瓶密封，并且将混合物在37℃下在搅拌下加热5天。将混合物冷却至室温，转移至圆底烧瓶中，并通过旋转蒸发进行浓缩。将粗物质吸收在甲醇中并固定在硅藻土上。自动快速色谱(80g柱，0至10％在二氯甲烷中的MeOH梯度)给出了呈片状白色固体的S44(2.28g，58％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.58(br s,1H),7.72(br s,1H),6.68(d,J＝8.2Hz,1H),5.69(d,J＝2.5Hz,1H),5.63(dd,J＝7.8Hz,1.1Hz,1H),4.93(dd,J＝6.4Hz,
2.4Hz,1H),4.85(dd,J＝6.5Hz,3.6Hz,1H),4.30-4.20(m,3H),4.20-4.10(m,5H),1.57(s,
3H),1.35(s,3H),1.35(tdd,J＝7.0Hz,4.1Hz,1.0Hz,6H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ-1.09；
LRMS m/z436.1[M+H]+。
2.4Hz,1H),4.85(dd,J＝6.5Hz,3.6Hz,1H),4.30-4.20(m,3H),4.20-4.10(m,5H),1.57(s,
3H),1.35(s,3H),1.35(tdd,J＝7.0Hz,4.1Hz,1.0Hz,6H)；31P NMR(162MHz,CDCl3)δ-1.09；
LRMS m/z436.1[M+H]+。
[0517] EIDD-2503：在氮气下，将S44(0.25g，0.57mmol)的溶液用甲酸(5mL)在室温下搅拌12小时。反应完成后，通过旋转蒸发去除溶剂，并且使用甲醇和二氯甲烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色固体的标题化合物(0.180g，79％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.00(s,1H),9.57(s,1H),6.83(d,J＝8.2Hz,1H),5.71(d,J＝5.9Hz,1H),5.54(dd,J＝8.2Hz,2.0Hz,1H),5.38(d,J＝5.8Hz,1H),5.24(d,J＝4.7Hz,1H),4.16-3.86(m,8H),
1.30-1.15(m,5H)。13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ149.9,143.7,130.3,110.0,99.1,87.8,
82.0,72.1,70.2,67.2,63.9,16.4；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ-1.12；LRMS m/z 396.1[M+H]+。
1.30-1.15(m,5H)。13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ149.9,143.7,130.3,110.0,99.1,87.8,
82.0,72.1,70.2,67.2,63.9,16.4；31P NMR(162MHz,DMSO-d6)δ-1.12；LRMS m/z 396.1[M+H]+。
[0518] 实例35.
[0519]
[0520] S45：在氮气下，在搅拌下，将2',3'-异亚丙基尿苷(4.00g，14.0mmol)在无水二氯甲烷(50mL)中的溶液冷却至0℃。向该溶液中添加三乙胺(3.92mL，28.1mmol)和4-DMAP(0.172g，1.40mmol)，然后逐滴添加甲磺酰氯(1.32mL，16.9mmol)。将反应混合物温热至室温并搅拌2小时。反应完成后，将混合物用碎冰淬灭，并用5％水性盐酸、水性碳酸氢钠和盐水(各1x50mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥并通过旋转蒸发进行浓缩。使用乙酸乙酯和己烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色泡沫状的S45(3.99g，78％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.97(s,1H),7.27(d,J＝8.2Hz,1H),5.74(d,J＝8.0Hz,1H),5.60(d,J＝1.8Hz,1H),5.06(d,J＝8.2Hz,1H),4.88(dd,J＝6.4Hz,3.9Hz,1H),4.45(d,J＝5.2Hz,2H),
4.37(m,1H),3.03(s,3H),1.54(s,3H),1.34(s,3H)；LRMS m/z 363.0[M+H]+。
4.37(m,1H),3.03(s,3H),1.54(s,3H),1.34(s,3H)；LRMS m/z 363.0[M+H]+。
[0521] S46：在室温下，在氮气下，向S45(3.00g，8.28mmol)在无水四氢呋喃(60mL)中的溶液中添加溴化锂(1.44g，16.56mmol)，并且将反应混合物回流6小时。在反应完成后，将混合物通过旋转蒸发进行浓缩并将粗产物在二氯甲烷(60mL)和水(60mL)之间进行分配。除去水层，并且将有机层用盐水(60mL)洗涤，经Na2SO4干燥并通过旋转蒸发进行浓缩。使用乙酸乙酯和己烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色固体的S45(2.30g，80％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.24(s,1H),7.34(d,J＝8.2Hz,1H),5.76(d,J＝8.2Hz,1H),5.66(d,J＝2.2Hz,1H),5.01(dd,J＝6.5Hz,2.3Hz,1H),4.88(dd,J＝6.5Hz,3.7Hz,1H),4.38(td,J＝5.7Hz,3.8Hz,1H),3.68(dd,J＝10.6Hz,6.2Hz,1H),3.56(dd,J＝10.6Hz,5.2Hz,1H),1.57(s,3H),1.36(s,3H)；LRMS m/z 348.9[M+H]+。
[0522] S47：在室温下，在氮气下，向S46(2.0g，5.76mmol)在无水甲苯(40mL)中的悬浮液中添加乙醇(5mL)，然后添加三丁基氢化锡(3.11mL，11.52mmol)和AIBN(0.94g，5.76mmol)。将反应混合物回流6小时。在反应完成后，在减压下去除溶剂，并且将粗产物溶解于二氯甲烷(50mL)中并通过玻璃熔块真空过滤。将滤液通过旋转蒸发进行浓缩，并且使用乙酸乙酯和己烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色泡沫状的S47(1.10g，71％)：1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.81(s,1H),7.26(d,J＝8.0Hz,1H),5.73(d,J＝8.0Hz,1H),5.62(d,J＝2.2Hz,1H),4.94(dd,J＝6.5Hz,2.2Hz,1H),4.54(dd,J＝6.5Hz,4.6Hz,1H),4.19(qd,J＝
6.4Hz,4.7Hz,1H),1.54(s,3H),1.37(d,J＝6.5Hz,3H),1.32(s,3H)。LRMS m/z 269.1[M+H]+。
6.4Hz,4.7Hz,1H),1.54(s,3H),1.37(d,J＝6.5Hz,3H),1.32(s,3H)。LRMS m/z 269.1[M+H]+。
[0523] S48：在氮气下，在搅拌下，将S47(1.00g，3.73mmol)在无水二氯甲烷(30mL)中的溶液冷却至0℃。向该溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(3.25mL，18.64mmol)和4-DMAP(46mg，0.37mmol)，然后添加2,4,6-三异丙基苯磺酰氯(1.69g，5.59mmol)。在起始物质消失后，添加羟胺盐酸盐(0.648g，9.32mmol)，并将混合物在室温下再搅拌12小时。在反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷(70mL)稀释，并用5％水性盐酸(100mL)洗涤，然后用水性碳酸氢钠(100mL)和盐水(100mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤，并通过旋转蒸发进行浓缩。使用乙酸乙酯和己烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色固体的S48(0.59g，
55.9％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),9.62(d,J＝1.8Hz,1H),6.85(d,J＝
8.2Hz,1H),5.66(d,J＝2.8Hz,1H),5.55(dd,J＝8.1Hz,2.1Hz,1H),4.86(dd,J＝6.6Hz,
2.8Hz,1H),4.47(dd,J＝6.5Hz,4.9Hz,1H),3.97-3.84(m,1H),1.44(s,3H),1.30-1.15(m,
5H)；LRMS m/z 284.1[M+H]+。
55.9％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.03(s,1H),9.62(d,J＝1.8Hz,1H),6.85(d,J＝
8.2Hz,1H),5.66(d,J＝2.8Hz,1H),5.55(dd,J＝8.1Hz,2.1Hz,1H),4.86(dd,J＝6.6Hz,
2.8Hz,1H),4.47(dd,J＝6.5Hz,4.9Hz,1H),3.97-3.84(m,1H),1.44(s,3H),1.30-1.15(m,
5H)；LRMS m/z 284.1[M+H]+。
[0524] EIDD-2524：将S48(0.250g，0.88mmol)在甲酸(5mL)中的溶液在室温下搅拌12小时。在反应完成后，将混合物通过旋转蒸发进行浓缩，并且使用甲醇和二氯甲烷通过快速柱色谱法将粗产物进行纯化以产生呈无色固体的标题化合物(0.150g，70％)：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),9.46(s,1H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),5.59(d,J＝5.1Hz,1H),5.51(d,J＝8.2Hz,1H),5.20(s,1H),4.98(s,1H),3.94(s,1H),3.78-3.65(m,1H),3.59(dd,J＝5.5Hz,3.9Hz,1H),1.17(d,J＝6.4Hz,3H)。13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δ149.9,
143.8,130.8,99.1,88.5,79.0,74.8,72.5,19.3；LRMS m/z244.1[M+H]+。
143.8,130.8,99.1,88.5,79.0,74.8,72.5,19.3；LRMS m/z244.1[M+H]+。
[0525] 实例36.
[0526] 测定方案
[0527] (1)DENV、JEV、POWV、WNV、YFV、PTV、RVFV、CHIKV、EEEV、VEEV、WEEV、TCRV、PCV、JUNV、MPRLV的筛选测定
[0528] 原发性细胞病变效应(CPE)降低测定。进行四个浓度的CPE抑制测定。在96孔一次性微孔板中制备融合或接近融合的细胞培养物单层。将细胞维持在补充有FBS的MEM或DMEM中，如对于每个细胞系所需的。对于抗病毒测定，使用相同的培养基，但FBS减少至2％或更少，并补充有50μg/ml庆大霉素。制备在四个log10最终浓度下的测试化合物，通常为0.1、1.0、10和100μg/ml或μM。在每个微孔板上有病毒对照孔和细胞对照孔。并行地，使用与应用于测试化合物相同的方法将已知的活性药物作为阳性对照药物进行测试。将阳性对照在每个测试运行下进行测试。首先通过从细胞的96孔板中去除生长培养基来建立该测定。然后将在0.1mL体积中的测试化合物以2X浓度应用到孔中。通常将<10050％细胞培养物感染剂量(CCID50)的在0.1mL体积中的病毒置于指定用于病毒感染的那些孔中。将没有病毒的培养基置于毒性对照孔和细胞对照孔中。将病毒对照孔与病毒进行类似处理。将板在37℃下在
5％CO2下孵育直到在病毒对照孔中观察到最大CPE。然后在37℃下，在5％CO2培养箱中，将板用0.011％中性红染色大约2小时。通过完全抽吸去除中性红培养基，并且可以将细胞用磷酸盐缓冲溶液(PBS)冲洗1次以去除残留的染料。将PBS完全去除，并将掺入的中性红用50％Sorensen’s柠檬酸盐缓冲液/50％乙醇(pH 4.2)洗脱至少30分钟。将中性红染料渗透到活细胞中，因此，红色越强烈，存在于孔中的活细胞的数量越大。使用96孔分光光度计在540nm波长下定量每个孔中的染料含量。使用基于Microsoft Excel计算机的电子表格将每组孔中的染料含量转化为存在于未处理的对照孔中的染料的百分比。然后通过线性回归分析来计算50％有效(EC50，病毒抑制)浓度和50％细胞毒性(CC50，细胞抑制)浓度。CC50除以EC50的商给出选择性指数(SI)值。
5％CO2下孵育直到在病毒对照孔中观察到最大CPE。然后在37℃下，在5％CO2培养箱中，将板用0.011％中性红染色大约2小时。通过完全抽吸去除中性红培养基，并且可以将细胞用磷酸盐缓冲溶液(PBS)冲洗1次以去除残留的染料。将PBS完全去除，并将掺入的中性红用50％Sorensen’s柠檬酸盐缓冲液/50％乙醇(pH 4.2)洗脱至少30分钟。将中性红染料渗透到活细胞中，因此，红色越强烈，存在于孔中的活细胞的数量越大。使用96孔分光光度计在540nm波长下定量每个孔中的染料含量。使用基于Microsoft Excel计算机的电子表格将每组孔中的染料含量转化为存在于未处理的对照孔中的染料的百分比。然后通过线性回归分析来计算50％有效(EC50，病毒抑制)浓度和50％细胞毒性(CC50，细胞抑制)浓度。CC50除以EC50的商给出选择性指数(SI)值。
[0529] 继发性CPE/病毒产量降低(VYR)测定。该测定涉及与使用细胞的96孔微板在前面段落中描述的方法类似的方法。在本节中记下差异。针对抗病毒活性和细胞毒性，测试八个半-log10抑制剂浓度。在发生足够的病毒复制后，如果需要，从每个受感染的孔(将三个重复孔合并)中取出上清液样本并保留用于该测试的VYR部分。可替代地，可以制备单独的板，并且可以将该板冷冻用于VYR测定。在观察到最大CPE后，将存活的板用中性红染料染色。将掺入的染料含量如上所述进行定量。从该测试的这部分产生的数据是中性红EC50、CC50和SI值。将以上观察到有活性的化合物通过VYR测定进行进一步评估。VYR测试是对该测试化合物抑制多少病毒复制的直接测定。将在测试化合物存在下复制的病毒进行滴定并与来自未处理的感染对照的病毒进行比较。通过终点稀释进行合并的病毒样品(如上所述收集)的滴定。这是通过终点稀释、在新鲜单层细胞上的每次稀释使用3或4个微孔、通过滴定病毒的log10稀释物来实现的。在观察到明显的CPE(通过中性红吸收来测量)后，针对病毒存在或不存在对孔进行评分。对抑制剂浓度的log10与在每个浓度下产生的病毒的log10的绘图允许通过线性回归计算90％(一个log10)有效浓度。在测定的第1部分中获得的EC90除以CC50给出了用于该测试的SI值。
[0530] 实例37.
[0531] (2)拉沙热病毒(LASV)的筛选测定
[0532] 原发性拉沙热病毒测定。在12孔一次性细胞培养板中制备融合或接近融合的细胞培养物单层。将细胞维持在补充有10％FBS的DMEM中。对于抗病毒测定，使用相同的培养基，但FBS减少至2％或更少，并补充1％青霉素/链霉素。制备在四个log10最终浓度下的测试化合物，通常为0.1、1.0、10和100μg/ml或μM。使用每个测试化合物并行运行病毒对照和细胞对照。此外，使用与对于病毒和细胞对照所述相同的实验设置，将已知的活性药物作为阳性对照药物进行测试。将阳性对照在每个测试运行下进行测试。首先通过从细胞的12孔板中去除生长培养基，并用0.01MOI的LASV菌株Josiah感染细胞来建立该测定。在37℃、5％CO2下，在持续的轻轻摇动下，将细胞孵育90分钟：500μl接种物/M12孔。接种物将被去除，并且细胞将用培养基洗涤2次。然后将测试化合物应用于1mL总体积的培养基中。组织培养上清液(TCS)将在适当的时间点收集。然后，TCS将被用于确定这些化合物对病毒复制的抑制作用。将在测试化合物存在下复制的病毒进行滴定并与来自未处理的感染对照的病毒进行比较。对于TCS的滴定，将制备连续十倍稀释液并将其用于感染新鲜单层细胞。细胞将用补充有10％FBS和1％青霉素的、与2X MEM以1:1混合的1％琼脂糖覆盖，并确定斑块数。对抑制剂浓度的log10与在每个浓度下产生的病毒的log10的绘图允许通过线性回归计算90％(一个log10)有效浓度。
[0533] 继发性拉沙热病毒测定。该继发性测定涉及与使用细胞的12孔板的前面段落中描述的方法类似的方法。在本节中记下差异。将细胞如上所述进行感染，但是这次使用用2X MEM以1:1稀释的并且补充有2％FBS和1％青霉素/链霉素并补充有相应药物浓度的1％琼脂糖覆盖。细胞将在37℃下在5％CO2下孵育6天。然后将覆盖物去除，并在室温下用在10％缓冲福尔马林中的0.05％结晶紫将板染色大约二十分钟。然后将板洗涤、干燥并计数斑块数。将每组化合物稀释液中的斑块数转化为相对于未处理的病毒对照的百分比。然后通过线性回归分析来计算50％有效(EC50，病毒抑制)浓度。
[0534] 实例38.
[0535] (3)埃博拉病毒(EBOV)和尼帕病毒(NIV)的筛选测定
[0536] 原发性埃博拉/尼帕病毒测定。进行四个浓度的斑块数降低测定。在12孔一次性细胞培养板中制备融合或接近融合的细胞培养物单层。将细胞维持在补充有10％FBS的DMEM中。对于抗病毒测定，使用相同的培养基，但FBS减少至2％或更少，并补充1％青霉素/链霉素。制备在四个log10最终浓度下的测试化合物，通常为0.1、1.0、10和100μg/ml或μM。使用每个测试化合物并行运行病毒对照和细胞对照。此外，使用与对于病毒和细胞对照所述相同的实验设置，将已知的活性药物作为阳性对照药物进行测试。将阳性对照在每个测试运行下进行测试。首先通过从细胞的12孔板中去除生长培养基来建立该测定。然后将在0.1mL体积中的测试化合物以2X浓度应用到孔中。通常将在0.1mL体积中的、约200个斑块形成单位的病毒置于指定用于病毒感染的那些孔中。将没有病毒的培养基置于毒性对照孔和细胞对照孔中。将病毒对照孔与病毒进行类似处理。将板在37℃下在5％CO2下孵育一小时。病毒-化合物接种物将被去除，将细胞洗涤并使用用2X MEM以1:1稀释的、并补充有2％FBS和1％青霉素/链霉素并补充有相应药物浓度的1.6％黄芪胶覆盖。细胞将在37℃下在5％CO2下孵育10天。然后将覆盖物去除，并在室温下用在10％缓冲福尔马林中的0.05％结晶紫将板染色大约二十分钟。然后将板洗涤、干燥并计数斑块数。将每组化合物稀释液中的斑块数转化为相对于未处理的病毒对照的百分比。然后通过线性回归分析来计算50％有效(EC50，病毒抑制)浓度。
[0537] 具有VYR组分的继发性埃博拉/尼帕病毒测定。该继发性测定涉及与使用细胞的12孔板的前面段落中描述的方法类似的方法。在本节中记下差异。针对抗病毒活性，测试八个半-log10抑制剂浓度。每批评估的化合物测试一种阳性对照药物。对于该测定，将细胞用病毒感染。将细胞如上所述进行感染，但是这次用补充有2％FBS和1％青霉素/链霉素并补充相应药物浓度的DMEM进行孵育。细胞将在37℃下在5％CO2下孵育10天，每天在显微镜下观察绿色荧光细胞的数量。每天取出来自受感染细胞的上清液的等分试样，并合并三个重复孔。然后将合并的上清液用于确定这些化合物对病毒复制的抑制作用。将在测试化合物存在下复制的病毒进行滴定并与来自未处理的感染对照的病毒进行比较。对于合并的病毒样品的滴定，将制备连续十倍稀释液并将其用于感染新鲜单层细胞。将细胞用黄芪胶覆盖并确定斑块数。对抑制剂浓度的log10与在每个浓度下产生的病毒的log10的绘图允许通过线性回归计算90％(一个log10)有效浓度。
[0538] 实例39.
[0539] 抗登革病毒细胞保护测定：
[0540] 细胞制备-在用于抗病毒测定中之前，将BHK21细胞(叙利亚金仓鼠肾细胞，ATCC目录号CCL-I 0)、Vero细胞(非洲绿猴肾细胞，ATCC目录号CCL-81)或Huh-7细胞(人肝细胞癌)在T-75烧瓶中在补充有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM中进行传代。在测定前一天，将细胞以1:2分开以确保它们在感染时处于指数生长期。使用血细胞计数器和台盼蓝染料排除法来进行总细胞和活力定量。将用于测定中的细胞的
3 5
细胞活力大于95％。将细胞以3x10个(对于Vero细胞和Huh-7细胞为5x10 个)细胞/孔重新悬浮于组织培养基中，并以100μL的体积添加到平底微量滴定板中。将板在37℃/5％C02下孵育过夜来允许细胞粘附。观察到单细胞层为大约70％融合。
3 5
细胞活力大于95％。将细胞以3x10个(对于Vero细胞和Huh-7细胞为5x10 个)细胞/孔重新悬浮于组织培养基中，并以100μL的体积添加到平底微量滴定板中。将板在37℃/5％C02下孵育过夜来允许细胞粘附。观察到单细胞层为大约70％融合。
[0541] 病毒制备-登革病毒2型新几内亚C菌株获得自ATCC(目录号VR-1584)，并在LLC-MK2(恒河猴肾细胞；目录号CCL-7.1)细胞中生长用于生产储备病毒池。从冰箱(-80℃)中取出在BHK21细胞中预滴定的病毒等分试样，并允许其在生物学安全工作橱中缓慢解冻至室温。将病毒重新悬浮并稀释到测定培养基(补充有2％热灭活的FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM)中，使得每个孔中添加的在100μL体积中的病毒的量是在感染后6天确定的产生85％至95％细胞杀伤的量。
[0542] 板格式-每个板包含细胞对照孔(仅细胞)、病毒对照孔(细胞加病毒)、每种化合物一式三份的药物毒性孔(仅细胞加药物)、以及一式三份的实验孔(药物加细胞加病毒)。
[0543] 功效和毒性XTT-在37℃下在5％C02培养箱中孵育之后，将这些测试板用四氮唑染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯基氨基)羰基]-2H-四氮唑氢氧化物)进行染色。XTT-四氮唑被代谢活性细胞的线粒体酶代谢为可溶性甲腊产物，这允许快速定量分析由抗病毒测试物质产生的对病毒诱导的细胞杀伤的抑制。在RPMI 1640中每天将XTT溶液制备为1mg/mL的储备液。在PBS中以0.15mg/mL制备吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，并且在-20℃下将其储存在黑暗中。在使用前立即通过添加40μL的PMS/ml的XTT溶液来制备XTT/PMS储备液。向板的每个孔中添加五十微升的XTT/PMS，并将板在37℃下重新孵育4小时。将板用胶粘板密封材料密封并轻轻摇动或反转数次以混合可溶性甲腊产物，并用分子装置公司(Molecular Devices)Vmax读板仪在450/650nm下用分光光度法读取该板。
[0544] 数据分析-从Softmax Pro 4.6软件收集原始数据，并将其输入到Microsoft Excel电子表格中进行分析。针对每种化合物计算与未处理的病毒对照相比的病毒细胞病变效应的百分比降低。比较药物处理的未感染细胞与在单独的培养基中的未感染细胞，针对每种化合物计算百分比细胞对照值。
[0545] 实例40.
[0546] 抗RSV细胞保护测定：
[0547] 细胞制备-在用于抗病毒测定中之前，将HEp2细胞(人上皮细胞，ATCC目录号CCL-23)在T-75烧瓶中在补充有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、
1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM中进行传代。在测定前一天，将细胞以1:2分开以确保它们在感染时处于指数生长期。使用血细胞计数器和台盼蓝染料排除法来进行总细胞和活力定量。将用于测定中的细胞的细胞活力大于95％。将细胞以1x104个细胞/孔重新悬浮于组织培养基中，并以100μL的体积添加到平底微量滴定板中。将板在37℃/5％C02下孵育过夜来允许细胞粘附。病毒制备-从ATCC(分别为目录号VR-26和目录号VR-955)获得RSV菌株Long和RSV菌株9320，并在HEp2细胞中生长用于产生储备病毒池。从冰箱(-80℃)中取出预滴定的病毒等分试样，并允许其在生物学安全工作橱中缓慢解冻至室温。将病毒重新悬浮并稀释到测定培养基(补充有2％热灭活的FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM)中，使得每个孔中添加的在100μL体积中的病毒的量是在感染后6天确定的产生85％至95％细胞杀伤的量。功效和毒性XTT-如先前针对登革细胞保护测定所述的，将板进行染色和分析。
1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM中进行传代。在测定前一天，将细胞以1:2分开以确保它们在感染时处于指数生长期。使用血细胞计数器和台盼蓝染料排除法来进行总细胞和活力定量。将用于测定中的细胞的细胞活力大于95％。将细胞以1x104个细胞/孔重新悬浮于组织培养基中，并以100μL的体积添加到平底微量滴定板中。将板在37℃/5％C02下孵育过夜来允许细胞粘附。病毒制备-从ATCC(分别为目录号VR-26和目录号VR-955)获得RSV菌株Long和RSV菌株9320，并在HEp2细胞中生长用于产生储备病毒池。从冰箱(-80℃)中取出预滴定的病毒等分试样，并允许其在生物学安全工作橱中缓慢解冻至室温。将病毒重新悬浮并稀释到测定培养基(补充有2％热灭活的FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM)中，使得每个孔中添加的在100μL体积中的病毒的量是在感染后6天确定的产生85％至95％细胞杀伤的量。功效和毒性XTT-如先前针对登革细胞保护测定所述的，将板进行染色和分析。
[0548] 实例41.
[0549] 抗流感病毒细胞保护测定：
[0550] 细胞制备-在用于抗病毒测定中之前，将MOCK细胞(犬肾细胞，ATCC目录号CCL-34)在T-75烧瓶中在补充有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM中进行传代。在测定前一天，将细胞以1:2分开以确保它们在感染时处于指数生长期。使用血细胞计数器和台盼蓝染料排除法来进行总细胞和活力定量。将用于测定中的细胞的细胞活力大于95％。将细胞以1x104个细胞/孔重新悬浮于组织培养基中，并以100μL的体积添加到平底微量滴定板中。将板在37℃/5％C02下孵育过夜来允许细胞粘附。
[0551] 病毒制备-流感A/PR/8/34(ATCC#VR-95)、A/CA/05/09(CDC)、A/NY/18/09(CDC)和A/NWS/33(ATCC#VR-219)菌株从ATCC或疾病控制中心(Center of Disease Control)获得，并在MDCK细胞中生长用于产生储备病毒池。从冰箱(-80℃)中取出预滴定的病毒等分试样，并允许其在生物学安全工作橱中缓慢解冻至室温。将病毒重新悬浮并稀释到测定培养基(补充有0.5％BSA、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、1mM丙酮酸钠、0.1mM NEAA和1μg/ml TPCK-处理的胰蛋白酶的DMEM)中，使得每个孔中添加的在100μL体积中的病毒的量是在感染后4天确定的产生85％至95％细胞杀伤的量。功效和毒性XTT-如先前针对登革细胞保护测定所述的，将板进行染色和分析。
[0552] 实例42.
[0553] 抗丙型肝炎病毒测定：
[0554] 细胞培养-报告基因细胞系Huh-luc/neo-ET通过ImQuest BioSciences公司通过特定的许可协议从Dr.Ralf Bartenschlager(Department of Molecular Virology,Hygiene Institute,University of Heidelberg,Germany[德国海德堡大学卫生研究所分子病毒学系])获得。这种细胞系具有持续地复制I389luc-ubi-neo/NS3-3'/Et的复制子(其含有萤火虫萤光素酶基因-泛素-新霉素磷酸转移酶融合蛋白)和驱动NS3-5B HCV编码序列的EMCV IRES(含有ET组织培养适应性突变(E1202G、Tl2081和K1846T))。通过在补充有I 0％FCS、2mM谷氨酰胺、青霉素(100μU/mL)/链霉素(100μg/mL)和I X非必需氨基酸加1mg/mL G418的DMEM中扩大培养Huh-luc/neo-ET的储备培养物。将细胞以1:4分开并在相同的培养基加250μg/mL G418中培养两代。将细胞用胰蛋白酶处理，并通过用台盼蓝染色来对这些细胞进行计数，并以7.5x103个细胞/孔的细胞培养物密度接种到96孔组织培养板中，并且在
37℃、5％ C02下孵育24小时。在24小时孵育后，将培养基去除并用相同的培养基减去G418加上一式三份的测试化合物进行替换。每个板中的六个孔只接受培养基作为无处理对照。
将细胞在37℃、5％ C02下再培养72小时，然后通过荧光素酶终点来测量抗HCV活性。处理重复的板，并将其平行地孵育用于通过XTT染色来评估细胞毒性。
37℃、5％ C02下孵育24小时。在24小时孵育后，将培养基去除并用相同的培养基减去G418加上一式三份的测试化合物进行替换。每个板中的六个孔只接受培养基作为无处理对照。
将细胞在37℃、5％ C02下再培养72小时，然后通过荧光素酶终点来测量抗HCV活性。处理重复的板，并将其平行地孵育用于通过XTT染色来评估细胞毒性。
[0555] 细胞活力-将来自处理的细胞的细胞培养物单层用四氮唑染料XTT进行染色，以便评估在这些化合物存在下的Huh-luc/neo-ET报告基因细胞系的细胞活力。
[0556] 病毒复制的测量-根据制造商的说明书(康涅狄格州谢尔顿市铂金埃尔默公司(Perkin Elmer，Shelton，CT))，使用britelite加上发光报告基因试剂盒，通过荧光素酶活性来测量来自复制子测定系统的HCV复制。简言之，将一小瓶的britelite加冻干底物溶解在10mL的britelite重构缓冲液中，并通过反转轻轻混合。在室温下孵育5分钟后，将britelite加上试剂以100μL/孔添加到96孔板中。将板用胶粘膜密封，并在室温下孵育大约10分钟以裂解细胞。将孔内容物转移到白色96孔板中，并使用Wallac 1450Microbeta Trilux液体闪烁计数器在15分钟内测量发光。将数据输入到定制的Microsoft Excel 2007电子表格中用于确定50％病毒抑制浓度(EC50)。
[0557] 实例43.
[0558] 抗副流感-3细胞保护测定：
[0559] 细胞制备-在用于抗病毒测定中之前，将HEp2细胞(人上皮细胞，ATCC目录号CCL-23)在T-75烧瓶中在补充有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、
1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM中进行传代。在测定前一天，将细胞以1:2分开以确保它们在感染时处于指数生长期。使用血细胞计数器和台盼蓝染料排除法来进行总细胞和活力定量。将用于测定中的细胞的细胞活力大于95％。将细胞以1x104个细胞/孔重新悬浮于组织培养基中，并以100μL的体积添加到平底微量滴定板中。将板在37℃/5％C02下孵育过夜来允许细胞粘附。
1mM丙酮酸钠和0.1mM NEAA的DMEM中进行传代。在测定前一天，将细胞以1:2分开以确保它们在感染时处于指数生长期。使用血细胞计数器和台盼蓝染料排除法来进行总细胞和活力定量。将用于测定中的细胞的细胞活力大于95％。将细胞以1x104个细胞/孔重新悬浮于组织培养基中，并以100μL的体积添加到平底微量滴定板中。将板在37℃/5％C02下孵育过夜来允许细胞粘附。
[0560] 病毒制备-副流感病毒3型SF4菌株从ATCC(目录号VR-281)获得，并使其在HEp2细胞中生长用于生产储备病毒池。从冰箱(-80℃)中取出预滴定的病毒等分试样，并允许其在生物学安全工作橱中缓慢解冻至室温。将病毒重新悬浮并稀释到测定培养基(补充有2％热灭活的FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的DMEM)中，使得每个孔中添加的在100μL体积中的病毒的量是在感染后6天确定的产生85％至95％细胞杀伤的量。
[0561] 板格式-每个板包含细胞对照孔(仅细胞)、病毒对照孔(细胞加病毒)、每种化合物一式三份的药物毒性孔(仅细胞加药物)、以及一式三份的实验孔(药物加细胞加病毒)。功效和毒性XTT-在37℃下在5％C02培养箱中孵育之后，将这些测试板用四氮唑染料XTT(2,3-双(2-甲氧基-4-硝基-5-磺苯基)-5-[(苯基氨基)羰基]-2H-四氮唑氢氧化物)进行染色。XTT-四氮唑被代谢活性细胞的线粒体酶代谢为可溶性甲腊产物，这允许快速定量分析由抗病毒测试物质产生的对病毒诱导的细胞杀伤的抑制。在RPMI 1640中每天将XTT溶液制备为
1mg/mL的储备液。在PBS中以0.15mg/mL制备吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，并且在-20℃下将其储存在黑暗中。在使用前立即通过添加40μL的PMS/ml的XTT溶液来制备XTT/PMS储备液。向板的每个孔中添加五十微升的XTT/PMS，并将板在37℃下重新孵育4小时。将板用胶粘板密封材料密封并轻轻摇动或反转数次以混合可溶性甲腊产物，并用分子装置公司
(MolecularDevices)Vmax读板仪在450/650nm下用分光光度法读取该板。
1mg/mL的储备液。在PBS中以0.15mg/mL制备吩嗪硫酸甲酯(PMS)溶液，并且在-20℃下将其储存在黑暗中。在使用前立即通过添加40μL的PMS/ml的XTT溶液来制备XTT/PMS储备液。向板的每个孔中添加五十微升的XTT/PMS，并将板在37℃下重新孵育4小时。将板用胶粘板密封材料密封并轻轻摇动或反转数次以混合可溶性甲腊产物，并用分子装置公司
(MolecularDevices)Vmax读板仪在450/650nm下用分光光度法读取该板。
[0562] 数据分析-从Softmax Pro 4.6软件收集原始数据，并将其输入到Microsoft Excel电子表格中进行分析。针对每种化合物计算与未处理的病毒对照相比的病毒细胞病变效应的百分比降低。比较药物处理的未感染细胞与在单独的培养基中的未感染细胞，针对每种化合物计算百分比细胞对照值。
[0563] 实例44.
[0564] 流感聚合酶抑制测定：
[0565] 病毒制备-纯化的流感病毒A/PR/8/34(1mL)从先进生物技术公司(Advanced Biotechnologies，Inc.)(哥伦比亚，马里兰州)获得，将其解冻并分配成五个等分试样以在-80℃下储存直到使用。在建立测定的当天，将20μL的2.5％Triton N-101添加到180μL的纯化病毒中。将破裂的病毒以1:2稀释于含有0.25％Triton和PBS的溶液中。破裂提供了含有流感RNA依赖性RNA聚合酶和模板RNA的流感核糖核蛋白(RNP)的来源。将样品储存在冰上直到在测定中使用。
[0566] 聚合酶反应-每个50μL聚合酶反应包含如下各项：5μL的破裂的RNP、100mM Tris-HCl(pH 8.0)、100mM KCl、5mM MgCl2。1mM二硫苏糖醇、0.25％Triton N-101、5μCi的[α-32P]GTP、100μM ATP、各50μM(CTP、UTP)、1μM GTP和200μM腺嘌呤(3'-5')鸟苷。为了测试抑制剂，这些反应含有该抑制剂，并且对含有阳性对照(2'-脱氧-2'-氟代鸟苷-5'-三磷酸酯)的反应进行相同处理。其他对照包括RNP+反应混合物以及RNP+I％DMSO。将不具有ApG引物和NTP的反应混合物在30℃下孵育20分钟。一旦将ApG和NTP添加到反应混合物中，然后立即将样品在30℃下孵育1小时，然后将反应转移到玻璃纤维滤板上，并且随后用10％三氯乙酸(TCA)沉淀。然后将板用5％TCA洗涤五次，然后用95％乙醇洗涤一次。一旦过滤器已干燥，使用液体闪烁计数器(Microbeta)测量[α-32P]GTP的掺入。
[0567] 板格式-除了RNP+反应混合物(单独的RNP)、RNP+1％DMSO和单独的反应混合物(无RNP)的一式三份样品之外，每个测试板均含有三种化合物(6个浓度)的一式三份样品。
[0568] 数据分析-从Micro Beta闪烁计数器收集原始数据。放射性GTP的掺入与聚合酶活性的水平直接相关。通过将每种测试化合物的平均值除以RNP+1％DMSO对照获得“百分比抑制值”。将在每个浓度的2DFGTP下获得的平均值与RNP+反应对照进行比较。然后将数据输入Microsoft Excel电子表格以通过线性回归分析来计算IC50值。
[0569] 实例45.
[0570] HCV聚合酶抑制测定：
[0571] 使用先前描述的方法来评估用于抑制HCV聚合酶的化合物的活性(Lam等人，2010.Antimicrobial Agents and Chemotherapy[抗微生物剂与化学疗法]54(8):3187-
3196)。在96孔反应板中，在20μL体积进行HCV NS5B聚合酶测定。每个反应含有在50mM HEPES缓冲液(pH 7.5)中的40ng/μL纯化的重组体NS5BΔ22基因型-1b聚合酶、20ng/μL的HCV基因型-1b互补的IRES模板、各1μM的四种天然核糖核苷酸、1U/mL Optizyme RNA酶抑制剂(威斯康星州麦迪逊市普洛麦格公司(Promega,Madison,WI))、1mM MgCl2、0.75mM MnCl2和2mM二硫苏糖醇(DTT)。将反应混合物分两步在冰上组合。步骤1由在聚合酶反应混合物中组合除天然核苷酸和标记的UTP之外的所有反应组分组成。在冰上将十微升(10μL)的聚合酶混合物分配到96孔反应板的各个孔中。因为无酶对照，所以包括不具有NS5B聚合酶的聚合酶反应混合物。在水中制备测试化合物2'-O-甲基-CTP和对照化合物2'-O-甲基-GTP(加利福尼亚州圣地亚哥市曲林克公司(Trilink，San Diego，CA))的连续半对数稀释液，并且将5μL的连续稀释的化合物或单独的水(无化合物对照)添加到含有聚合酶混合物的孔中。
然后将五微升的核苷酸混合物(天然核苷酸和标记的UTP)添加到反应板孔中，并将该板在
27℃下孵育30分钟。将反应用添加80μL终止溶液(12.5mM EDTA、2.25M NaCl和225mM柠檬酸钠)来淬灭，并使用斑点印迹装置在真空压力下将RNA产物应用到Hybond-N+膜(新泽西州皮斯卡塔韦市GE医疗集团(GE Healthcare，Piscataway，NJ))上。从斑点印迹装置中取出膜，并将该膜用4X SSC(0.6M NaCl和60mM柠檬酸钠)洗涤4次，并且然后用水冲洗一次并用
100％乙醇冲洗一次。将膜进行空气干燥并暴露于磷酸成像屏幕下，并且使用Typhoon 8600 Phospho成像仪捕获图像。在捕获图像后，将膜与闪烁液一起置于Micro beta盒中，并将每个反应中的CPM在Micro beta 1450上计数。将CPM数据输入到定制的Excel电子表格中用于确定化合物IC50。
3196)。在96孔反应板中，在20μL体积进行HCV NS5B聚合酶测定。每个反应含有在50mM HEPES缓冲液(pH 7.5)中的40ng/μL纯化的重组体NS5BΔ22基因型-1b聚合酶、20ng/μL的HCV基因型-1b互补的IRES模板、各1μM的四种天然核糖核苷酸、1U/mL Optizyme RNA酶抑制剂(威斯康星州麦迪逊市普洛麦格公司(Promega,Madison,WI))、1mM MgCl2、0.75mM MnCl2和2mM二硫苏糖醇(DTT)。将反应混合物分两步在冰上组合。步骤1由在聚合酶反应混合物中组合除天然核苷酸和标记的UTP之外的所有反应组分组成。在冰上将十微升(10μL)的聚合酶混合物分配到96孔反应板的各个孔中。因为无酶对照，所以包括不具有NS5B聚合酶的聚合酶反应混合物。在水中制备测试化合物2'-O-甲基-CTP和对照化合物2'-O-甲基-GTP(加利福尼亚州圣地亚哥市曲林克公司(Trilink，San Diego，CA))的连续半对数稀释液，并且将5μL的连续稀释的化合物或单独的水(无化合物对照)添加到含有聚合酶混合物的孔中。
然后将五微升的核苷酸混合物(天然核苷酸和标记的UTP)添加到反应板孔中，并将该板在
27℃下孵育30分钟。将反应用添加80μL终止溶液(12.5mM EDTA、2.25M NaCl和225mM柠檬酸钠)来淬灭，并使用斑点印迹装置在真空压力下将RNA产物应用到Hybond-N+膜(新泽西州皮斯卡塔韦市GE医疗集团(GE Healthcare，Piscataway，NJ))上。从斑点印迹装置中取出膜，并将该膜用4X SSC(0.6M NaCl和60mM柠檬酸钠)洗涤4次，并且然后用水冲洗一次并用
100％乙醇冲洗一次。将膜进行空气干燥并暴露于磷酸成像屏幕下，并且使用Typhoon 8600 Phospho成像仪捕获图像。在捕获图像后，将膜与闪烁液一起置于Micro beta盒中，并将每个反应中的CPM在Micro beta 1450上计数。将CPM数据输入到定制的Excel电子表格中用于确定化合物IC50。
[0572] 实例46.
[0573] NS5B RNA依赖性RNA聚合酶反应条件
[0574] 测定化合物对来自HCV GT-1b Con-1的NS5B-δ21的抑制。反应包括纯化的重组酶、32 32
1u/μL负链HCV IRES RNA模板、以及1μM包括[ P]-CTP或[ P]-UTP的NTP底物。将测定板在
27℃下孵育1小时，然后淬灭。通过过滤结合来评估[32P]掺入大分子产物。
1u/μL负链HCV IRES RNA模板、以及1μM包括[ P]-CTP或[ P]-UTP的NTP底物。将测定板在
27℃下孵育1小时，然后淬灭。通过过滤结合来评估[32P]掺入大分子产物。
[0575] 实例47.
[0576] 人类DNA聚合酶抑制测定：
[0577] 人类DNA聚合酶α(目录号1075)、β(目录号1077)和γ(目录号1076)购自CHIMERx(威斯康星州麦迪逊市(Madison，WI))。在微量滴定板中在50μL反应混合物(含有50mM Tris-HCl(pH 8.7)、KCl(对于β为10mM，且对于γ为100mM)、10mM MgCl2、0.4mg/mL BSA、1mM DTT、15％甘油、0.05mM的dCTP、dTTP和dATP、10uCi[32P]-α-dGTP(800Ci/mmol)、20μg活化的小牛胸腺DNA以及指定浓度下的测试化合物)中测定β和γDNA聚合酶活性的抑制。在每个样品50μL体积中的αDNA聚合酶反应混合物如下：20mM Tris-HCl(pH 8)、5mM乙酸镁、0.3mg/mL BSA、1mM DTT、0.1mM精胺、0.05mM的dCTP、dTTP和dATP、10uCi[32P]-α-dGTP(800Ci/mmol)、20μg活化的小牛胸腺DNA以及指定浓度下的测试化合物。对于每个测定，允许酶反应在37℃下进行30分钟，然后转移到玻璃纤维滤板上，并且随后用10％三氯乙酸(TCA)沉淀。然后将板用5％TCA洗涤，然后用95％乙醇洗涤一次。一旦过滤器已干燥，使用液体闪烁计数器(Microbeta)测量放射性的掺入。
[0578] 实例48.
[0579] HIV感染的PBMC测定：
[0580] 新鲜的人外周血单核细胞(PBMC)获得自商业来源(生物专业公司(Biological Specialty))并确定为对HIV和HBV呈血清反应阴性。取决于接受的供体血液的体积，将去除白细胞的血细胞用PBS洗涤数次。洗涤后，将去除白细胞的血液用杜尔贝科氏(Dulbecco’s)磷酸盐缓冲盐水(PBS)以1:1稀释，并在50mL锥形离心管中经15mL的Ficoll-Hypaque密度梯度进行分层。将这些管以600g离心30分钟。从所得界面轻轻抽出带状PBMC，并用PBS洗涤3次。在最终洗涤后，通过台盼蓝染料排除法确定细胞数量，并将细胞以1x10^6个细胞/mL在RPMI 1640(具有15％胎牛血清(FBS)、2mmol/L L-谷氨酰胺、2μg/mL PHA-P、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素)中重新悬浮并允许在37℃下孵育48-72小时。孵育后，将PBMC离心并重新悬浮于组织培养基中。通过每3天用含有组织培养基的新鲜IL-2的的半体积培养物更换，将培养物保持直至使用。在PHA-P刺激后72小时，用PBMC开始测定。
[0581] 为了最小化由于供体变异性引起的影响，测定中使用的PBMC是来自3个供体的细胞的混合物。在使用前立即将靶细胞以1x10^6个细胞/mL重新悬浮于新鲜组织培养基中，并以50uL/孔置于96孔圆底微量滴定板的内孔中。然后，将100μL的2X浓度的含化合物的培养基转移到在50μL培养基中含有细胞的96孔板中。将AZT用作内部测定标准。
[0582] 向孔中添加测试化合物后，添加50μL预定稀释度的HIV病毒(由最终希望的孔内浓度的4倍制备)，并充分混合。对于感染，每孔添加50-150TCID50的每种病毒(最终MOI为大约0.002)。将PBMC以一式三份暴露于病毒，并在96孔微量滴定板中在如上所述的不同浓度下在测试物质存在或不存在的情况下进行培养。培养7天后，通过测量逆转录酶(RT)活性，在组织培养上清液中定量HIV-1复制。具有细胞和病毒的孔只充当病毒对照。相同地制备没有病毒的单独的板用于药物细胞毒性研究。
[0583] 逆转录酶活性测定-使用标准放射性掺入聚合测定法在无细胞的上清液中测量逆转录酶活性。以1Ci/mL购买氚化胸苷三磷酸酯(TTP；新英格兰核公司(New England Nuclear))，并且每个酶反应使用1uL。通过将0.5mg/mL聚rA和1.7U/mL寡核苷酸dT在蒸馏水中混合来制备rAdT储备溶液并储存在-20℃下。每天新鲜制备RT反应缓冲液，并且该RT反应缓冲液由125ul的1mol/L EGTA、125uL的dH2O、125μL的20％Triton X-100、50μL的1mol/L Tris(pH 7.4)、50μL的1mol/L DTT和40μL的1mol/L MgCl2组成。对于每个反应，将1uL的TTP、4uL的dH2O、2.5uL的rAdT和2.5uL的反应缓冲液进行混合。将该反应混合物的十微升置于圆底微量滴定板中，并添加15μL含病毒的上清液并混合。将板在37℃下在潮湿的培养箱中孵育90分钟。孵育后，将10μL的反应体积以适当的板格式点样到DEAE滤垫上，在5％磷酸钠缓冲液中洗涤5次(每次5分钟)，在蒸馏水中洗涤2次(每次1分钟)，在70％乙醇中洗涤2次(每次1分钟)，并且然后风干。将干燥的滤垫放置在塑料套管中，并将4mL的Opti-Fluor O添加到该套筒中。使用Wallac 1450Microbeta Trilux液体闪烁计数器来对掺入的放射性进行定量。
[0584] 实例49.
[0585] HBV：
[0586] 将在具有10％胎牛血清的RPMI1640培养基中的HepG2.2.15细胞(100μL)以1x104个细胞/孔的密度添加到96孔板的所有孔中，并将该板在37℃下在5％CO2的环境中孵育24小时。孵育后，将在具有10％胎牛血清的RPMI1640培养基中制备的测试化合物的六十倍连续稀释液一式三份添加到板的各个孔中。该板中的六个孔只接受培养基作为病毒唯一对照。将板在37℃下在5％CO2的环境中孵育6天。将培养基在第3天用含有指定浓度的各化合物的培养基进行更换。从每个孔中收集一百微升上清液用于通过qPCR分析病毒DNA，并且在第六天通过将细胞培养单层进行XTT染色来评价细胞毒性。
[0587] 将在第六天收集的十微升细胞培养上清液在qPCR稀释缓冲液(40μg/mL剪切的鲑鱼精子DNA))中稀释并煮沸15分钟。使用应用生物系统公司7900HT序列检测系统(Applied Biosystems 7900HT Sequence Detection System)和辅助的SDS 2.4软件，在386孔板中进行实时定量PCR。使用铂定量PCR SuperMix-UDG(英杰公司(Invitrogen))和特异性DNA寡核苷酸引物(爱达荷州科拉尔维尔市IDT公司(IDT,Coralville,ID))HBV-AD38-qF1(5’-CCG TCT GTG CCT TCT CAT CTG-3’)、HBV-AD38-qR1(5’-AGT CCA AGA GTY CTC TTA TRY AAG ACC TT-3’)和HBV-AD38-qP1(5’-FAM CCG TGT GCA/ZEN/CTT CGC TTC ACC TCT GC-3’BHQ1)，以终浓度为每个引物0.2μM、在15μL的总反应体积中将每个样品的煮沸的DNA和定量DNA标准品的连续10倍稀释液的五微升(5μL)进行实时Q-PCR。从由SDS.24软件得到的标准曲线内推每个样品中的HBV DNA拷贝数，并将数据输入Excel电子表格进行分析。
[0588] 通过测量经处理的组织培养板中四氮唑染料XTT的降低，得到了测试物质的50％细胞毒性浓度。XTT由线粒体酶NADPH氧化酶代谢为代谢活性细胞中的可溶性甲腊产物。在PBS中每天以1mg/mL的储备液制备XTT溶液。在PBS中以0.15mg/mL制备吩嗪硫酸甲酯(PMS)储备溶液，并且在-20℃下将其储存在黑暗中。在使用前立即通过每1ml的XTT溶液添加40μL的PMS来制备XTT/PMS溶液。向板的每个孔中添加五十微升的XTT/PMS，并将板在37℃下孵育2-4小时。每个测定用指定数量的细胞，根据经验确定2-4小时的孵育在XTT染料减少的线性响应范围内。将胶粘板密封材料用于代替盖子，将密封的板反转数次以混合可溶性甲腊产物，并用分子装置公司(Molecular Devices)SpectraMax Plus 384分光光度计在450nm(650nm参考波长)下读取该板。通过Softmax 4.6软件收集数据并将该数据输入Excel电子表格进行分析。
[0589] 实例50.
[0590] 登革RNA依赖性RNA聚合酶反应条件
[0591] 在30℃下，在1.5mL管中使用100μl反应混合物进行RNA聚合酶测定。最终反应条件为50mM Hepes(pH 7.0)、2mM DTT、1mM MnCl2、10mM KCl、100nM UTR-PolyA(自退火引物)、10μM UTP、26nM RdRp酶。将该反应混合物与不同化合物(抑制剂)在30℃下孵育1小时。为了评估在聚合酶反应期间产生的焦磷酸的量，将30μl聚合酶反应混合物与荧光素酶偶联酶反应混合物(70μl)进行混合。荧光素酶反应的最终反应条件为5mM MgCl2、50mM Tris-HCl(pH
7.5)、150mM NaCl、200μU ATP硫酸化酶、5μM APS、10nM荧光素酶、100μM D-荧光素。将含有反应样品(100μl)的白色板立即转移到光度计Veritas(加利福尼亚州特纳生物系统公司(Turner Biosystems，CA))中用于检测光信号。
7.5)、150mM NaCl、200μU ATP硫酸化酶、5μM APS、10nM荧光素酶、100μM D-荧光素。将含有反应样品(100μl)的白色板立即转移到光度计Veritas(加利福尼亚州特纳生物系统公司(Turner Biosystems，CA))中用于检测光信号。
[0592] 实例51.
[0593] 细胞孵育和分析的程序
[0594] 将Huh-7细胞以0.5x10^6个细胞/孔接种在12孔组织培养处理板中的1mL完全培养基中。允许细胞在37℃/5％CO2下粘附过夜。在100％DMSO中制备40μM试验品的储备溶液。从40μM储备溶液制备在25mL完全DMEM培养基中的20μM试验品的溶液。对于化合物处理，从各孔中吸出培养基，并将在完全DMEM培养基中的1mL的20μM溶液添加至适当的孔中。还制备“没有”添加化合物的单独的细胞板。将板在37℃/5％CO2下孵育持续以下时间点：1、3、6和
24小时。在所希望的时间点孵育后，将细胞用1mL的DPBS洗涤2次。通过向用试验品处理的每个孔中添加掺有内标的500μl的70％甲醇/30％水来萃取细胞。将未处理的空白板用500μl的70％甲醇/30％水/孔来萃取。将样品在4℃下以16,000rpm离心10分钟。使用具有Hypercarb(PGC)柱的ABSCIEX 5500 QTRAP LC-MS/MS系统，通过LC-MS/MS来分析样品。
24小时。在所希望的时间点孵育后，将细胞用1mL的DPBS洗涤2次。通过向用试验品处理的每个孔中添加掺有内标的500μl的70％甲醇/30％水来萃取细胞。将未处理的空白板用500μl的70％甲醇/30％水/孔来萃取。将样品在4℃下以16,000rpm离心10分钟。使用具有Hypercarb(PGC)柱的ABSCIEX 5500 QTRAP LC-MS/MS系统，通过LC-MS/MS来分析样品。
[0595] 实例52：
[0596] 啮齿动物药物代谢动力学实验的程序
[0597] 使DBA-1J小鼠(6-8周龄，雌性)在接收后适应≥2天。在剂量给予前一天将小鼠称重以计算给药体积。通过口服强饲法向小鼠给予30mg/kg、100mg/kg和300mg/kg的药物。在8个时间点对小鼠进行取样：0.5、1、2、3、4、8和24小时(每个时间点3只小鼠用于测试药物)。将小鼠进行安乐死并收集其器官(见下文)。为了收集血液，在以上列出的适当时间点将小鼠通过CO2进行安乐死。在每个时间点通过心脏穿刺获得血液(0.3mL)。在血液收集后，从小鼠中取出器官(见下文)。通过将具有血液的Li-Heparin管轻轻反转2次或3次以充分混合来处理血液。然后将管置于冰水中的架中直至能够离心(≤1小时)。一旦切实可行，将血液在冷冻离心机中以约2000x g离心10分钟以获得血浆。然后，使用200μL移液管，将血浆转移到在冰水中的标记的1.5mL微量离心管(Eppendorf tube)中。然后将血浆在冰箱中或在干冰上冷冻。在分析前，将样品储存在-80℃下。从安乐死的小鼠收集器官。将器官(肺、肝、肾、脾和心脏)取出，置于管中，并立即在液氮中冷冻。然后将管转移到干冰上。将样品保存在低温组织小瓶中。使用具有Hypercarb(PGC)柱的ABSCIEX 5500QTRAP LC-MS/MS系统，通过LC-MS/MS来分析样品。
[0598] 药物代谢动力学参数：
[0599] ·口服给药后的Tmax是0.25-0.5小时
[0600] ·在30、100和300mg/kg的PO给药后，Cmax是3.0、7.7和11.7ng/ml；
[0601] ·生物利用度(相对I.P.递送)在30mg/kg PO给药下为65％，并且在100和300mg/kg PO给药下为39％-46％；
[0602] ·EIDD-1931血浆T1/2在IV给药后是2.2小时，并且在PO给药后是4.1-4.7小时[0603] ·24小时血浆水平在300mg/kg P.O.剂量后是约0.4μM；在100mg/kg剂量后是约0.1μM
[0604] 实例53：
[0605] 基孔肯雅感染的小鼠模型的方案
[0606] 将C57BL-6J小鼠在足垫上注射100pfu CHIK病毒。这些试验组由以下各项组成：未感染和未处理的组、感染和未处理的组、接受高剂量的35mg/kg i.p.的EIDD-01931的感染组、和接受低剂量的25mg/kg i.p.EIDD-01931的感染组。在激发前12小时使接受EIDD-01931的两个测试组接受化合物，并且然后每天接受持续7天。每天对足垫评估炎症(爪厚度)持续7天。7天后，使用PCR在踝关节中评估CHIK病毒诱导的关节炎(组织学)。
[0607] 实例54：
[0608] 用于预防和治疗甲病毒感染的N(4)-羟基胞苷
[0609] Vero细胞细胞病变效应(CPE)感染模型中的活性测试已经显示，核糖核苷类似物N(4)-羟基胞苷(EIDD-01931)具有对抗罗斯河、EEE、WEE、VEE和CHIK病毒的活性，其中EC50值分别为2.45μM、1.08μM、1.36μM、1.00μM和1.28μM。该化合物的细胞毒性特征是可接受的，其中选择性指数范围从CEM细胞中的低至8到Huh7(肝)细胞中的高达232。
[0610] 实例55：
[0611] 考虑到高效价的VEE病毒在气溶胶暴露的几小时内在脑中发育，如果它能够在脑中快速达到药物的治疗水平，则直接作用的抗病毒剂是令人满意的。在通过口服强饲法给予5和50mg/kg EIDD-01931的雄性SD大鼠中进行试验性药物代谢动力学研究，以确定化合物进入包括脑在内的关键器官系统的药物代谢动力学参数和组织分布特征。EIDD-01931是可口服的并且是剂量成比例的，其中计算的生物利用度(％F)为28％。在从50mg/kg剂量组给药后2.5和24小时，收集器官样品(脑、肺、脾、肾和肝)。将EIDD-01931充分分布到所有测试的组织中；特别值得注意的是，根据来自细胞数据的估计，其以药物的治疗水平容易地分布到脑组织中。一旦在脑中，EIDD-01931就被快速代谢为其有活性的5'-三磷酸酯形式，以在2.5小时和24小时下分别给出526ng/g和135ng/g的脑水平。即使在24小时后，脑中EIDD-01931及其5'-三磷酸酯的水平相当可观，表明每日一次口服给药可能足够用于治疗。
[0612] 可替代地，通过气雾剂(鼻腔喷雾)给予的药物递送可以立即实现药物在鼻粘膜和脑中的治疗水平。在小鼠中每天四次(q.d.)腹膜内(IP)注射6天后，EIDD-01931具有可接受的毒理学特征，其中NOEL(NO效应水平)为33mg/kg；在测试的最高剂量(100mg/kg)下观察到体重减轻，其在停止给药时逆转。
[0613] 实例56：
[0614] EIDD-01931的几种衍生物已经显示出在筛选各种病毒方面的抗病毒活性。活性数据显示在以下各表中。
[0615]
[0616]
[0617]
[0618]
[0619]
[0620] 实例57：在CHIKV CPE测定中筛选的化合物
[0621]
[0622] 实例58：
[0623] 在CHIKV CPE测定中筛选的化合物
[0624]EIDD- EC50 CC50 SI
01931-04 0.6 15.3 25.5
02053-01 72 >500 >6.9
02054-01 >75 >500 >6.7
02080-01 >75 >500 >6.7
02085-01 >75 >500 >6.7
02107-01 29 165 5.7
02107-02 38 165 4.3
01931-04 0.6 15.3 25.5
02053-01 72 >500 >6.9
02054-01 >75 >500 >6.7
02080-01 >75 >500 >6.7
02085-01 >75 >500 >6.7
02107-01 29 165 5.7
02107-02 38 165 4.3
[0625] 实例59：
[0626] 在CHIKV CPE测定中筛选的化合物
[0627]
[0628]
[0629] 实例60：
[0630]EIDD- EC50 CC50 SI
01931-04 0.7 >500 >714
01910-01 >78 >500 N/D
02339-01 >78 >500 N/D
02340-01 >78 >500 N/D
02356-01 >78 211 <2.7
02357-01 >78 90 <1.2
02422-01 32 >500 >15.6
02423-01 25 >500 >20
02474-01 0.07 184 2628.6
02475-01 >78 >500 N/D
02476-01 0.3 154 513.3
01931-04 0.7 >500 >714
01910-01 >78 >500 N/D
02339-01 >78 >500 N/D
02340-01 >78 >500 N/D
02356-01 >78 211 <2.7
02357-01 >78 90 <1.2
02422-01 32 >500 >15.6
02423-01 25 >500 >20
02474-01 0.07 184 2628.6
02475-01 >78 >500 N/D
02476-01 0.3 154 513.3
[0631] 实例61：
[0632] 在CHIKV CPE测定中筛选的化合物
[0633]
[0634]
[0635] 实例62：
[0636]EIDD- EC50 CC50 SI
01931-04 1.8 >500 >277
02504-01 >78 >500 N/A
02416-01 27 53 2.0
02345-01 1.5 >500 >333
02261-01 1.5 >500 >333
02427-01 58 355 6.1
02207-01 10.8 >500 >46.3
02108-03 34.5 98 2.8
02503-01 >78 >500 N/D
02110-03 56 387 6.9
01872-01 >78 >500 N/D
02200-01 >78 >500 N/D
02290-01 64.4 274 4.3
01931-04 1.8 >500 >277
02504-01 >78 >500 N/A
02416-01 27 53 2.0
02345-01 1.5 >500 >333
02261-01 1.5 >500 >333
02427-01 58 355 6.1
02207-01 10.8 >500 >46.3
02108-03 34.5 98 2.8
02503-01 >78 >500 N/D
02110-03 56 387 6.9
01872-01 >78 >500 N/D
02200-01 >78 >500 N/D
02290-01 64.4 274 4.3
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