作为sGC刺激剂的吡唑衍生物
阅读：76发布：2020-05-23
专利汇可以提供作为sGC刺激剂的吡唑衍生物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 所涉及的化合物可用作sGC的刺激剂，尤其是NO-非依赖性、血红素-依赖性刺激剂。这些化合物还用于 治疗 、 预防 或控制本文所公开的各种病症。，下面是作为sGC刺激剂的吡唑衍生物专利的具体信息内容。
1.表1A或表1B中所示化合物或其药学上可接受的盐：
表1A
表1B
2.一种包括权利要求1所述化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种赋形剂的药物组合物。
3.一种将治疗有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，或权利要求2的药物组合物应用于治疗疾病、健康状况或病症中的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自：
·与高血压和冠状动脉血流量减少有关的疾病；急性和慢性冠状动脉血压升高；动脉高血压；由心脏和肾脏并发症引起的血管疾病；由心脏病，中风，脑缺血或肾衰竭引起的血管疾病；耐药性高血压；糖尿病性高血压；原发性高血压；继发性高血压；妊娠期高血压；先兆子痫；门静脉高压；心肌梗死；
·心力衰竭，HFPEF，HFREF；急性和慢性心力衰竭；更具体形式的HF：急性失代偿性HF，右心室衰竭，左心室衰竭，总HF，缺血性心肌病，扩张型心肌病，先天性心脏缺陷，瓣膜缺陷HF，二尖瓣狭窄，二尖瓣闭锁不全，主动脉瓣狭窄，主动脉瓣闭锁不全，三尖瓣狭窄，三尖瓣闭锁不全，肺动脉瓣狭窄，肺动脉瓣闭锁不全，瓣膜瓣合并缺损；糖尿病性心力衰竭；酒精性心肌病或储存性心肌病；舒张性HF，收缩性HF；现有慢性HF(恶化HF)的急性期；舒张或收缩功能障碍；冠状动脉功能不全；心律失常；减少心室负荷；心脏肥大；心力衰竭/心肌综合征；
门静脉高压；内皮功能障碍或损伤；房室节律和传导障碍：I-III级房室传导阻滞(AVBI-III)，室上性心率加快，心房颤动，心房扑动，心室颤动，心室扑动，室性心动过速，扭转性偏头痛心动过速，心房和室性早搏，AV结期外收缩，病态窦综合征，晕厥，AV结再折叠性心动过速；沃尔夫-帕金森-怀特氏(Wolff-Parkinson-White)综合征或急性冠状动脉综合征；拳击手心肌病；早期心室收缩；心肌病；癌症诱导性心肌病；
·血栓栓塞性疾病和缺血；心肌缺血；梗塞；心肌梗死；心脏病；心肌功能不全；内皮功能障碍；中风；短暂性脑缺血发作(TIA)；阻塞性血栓性血管炎；稳定或不稳定型心绞痛；冠状动脉痉挛或外周动脉痉挛；变异型心绞痛；普林兹梅特尔(Prinzmetal)型心绞痛；心脏肥大；先兆子痫；血栓形成性疾病；缺血再灌注损伤；与器官移植相关的缺血再灌注；与肺移植，肺部移植，心脏移植，移植物衰竭相关的缺血再灌注；保留创伤患者的血液取代基；
·周边血管疾病；外周动脉疾病；外周闭塞性动脉疾病；肌张力过高；雷诺氏综合征或现象(原发性和继发性)；雷诺病；临界肢体缺血；外周栓塞；间歇性跛行；血管闭塞性危象；
肌营养不良，杜兴氏肌营养不良，贝克肌营养不良；微循环异常；控制血管渗漏或渗透性；腰椎管狭窄；闭塞性血栓性血管炎；血栓性血管炎；外周灌注障碍；动脉和静脉血栓形成；微量白蛋白尿；外周和自主神经病；糖尿病微血管病；
·水肿；由于心力衰竭引起的肾水肿；
·阿尔茨海默氏病；帕金森病；血管性痴呆；血管性认知障碍；脑血管痉挛；先天性肌无力综合征；蛛网膜下腔出血；创伤性脑损伤；例如发生在轻度认知障碍中的那些认知障碍，年龄相关的学习和记忆障碍，年龄相关的记忆丧失，血管性痴呆，头部损伤，中风，中风后痴呆，创伤后头部损伤，伴有学习和记忆问题的儿童集中一般障碍和集中障碍后的改善认知，集中能力，学习能力或记忆能力；路易体痴呆；包括皮克氏综合征的额叶痴呆；进行性核麻痹；痴呆伴皮质基底变性；肌萎缩性侧索硬化(ALS)；亨廷顿病；脱髓鞘；多发性硬化；丘脑退化；克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob)痴呆；HIV痴呆；伴随痴呆或科萨科夫(Korsakoff)精神病的精神分裂症；多系统萎缩和其他形式的帕金森综合征；运动障碍；神经保护；焦虑，紧张和抑郁或创伤后应激障碍(PTSD)；双相性精神障碍；精神分裂症；CNS相关性功能障碍和睡眠障碍；病理性饮食失调和使用奢侈食品和成瘾药物；控制脑灌注；偏头痛；预防和控制脑梗塞(大脑复发)的后果；预防和控制中风，脑缺血和头部损伤的后果；
·休克；心源性休克；败血症；脓毒性休克；过敏性休克；动脉瘤；控制白细胞活化；抑制或调节血小板聚集；多器官功能障碍综合征(MODS)；多器官衰竭(MOF)；
·肺/呼吸道疾病：肺高压(PH)；肺动脉高压(PAH)和相关的肺血管重塑；以局部血栓形成和右心脏肥大的形式的血管重塑；肺肌张力过高；原发性肺动脉高压；继发性肺动脉高压；家族性肺动脉高压；散发性肺动脉高压；前毛细血管肺动脉高压；特发性肺动脉高压；其他形式的PH；与左心室疾病相关的PH，HIV，SCD，血栓栓塞(CTEPH)，结节病，COPD，肺纤维化，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，急性肺损伤，α-1-抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)，肺气肿，吸烟诱导性肺气肿和囊性纤维化(CF)；血栓性肺动脉病；丛发性肺动脉病；囊性纤维化；支气管收缩或肺支气管收缩；急性呼吸窘迫综合征；肺纤维化，肺移植；哮喘病；
·与下述相关联或有关的肺动脉高压：左心室功能不全，低氧血症，世卫组织I，II，III，IV和V型高血压，二尖瓣疾病，狭窄性心包炎，主动脉瓣狭窄，心肌病，纵隔纤维化，肺纤维化，肺静脉回流异常，肺静脉闭塞性疾病，肺血管炎，胶原血管疾病，先天性心脏病，肺静脉高血压，间质性肺病，睡眠呼吸障碍，睡眠呼吸暂停，肺泡通气不足，长期暴露于高海拔，新生儿肺疾病，毛细血管发育不良，镰状细胞病，其他凝血障碍，慢性血栓栓塞，肺栓塞；由于肿瘤，寄生虫或外来物质引起的肺栓塞；结节组织疾病，狼疮，狼疮肾炎，血吸虫病，结节病，慢性阻塞性肺病，哮喘，肺气肿，慢性支气管炎，肺毛细血管瘤病，组织细胞增多症X，淋巴管瘤病，压缩性肺血管；由于腺病，肿瘤或纤维性纵隔炎引起的压缩性肺血管；
·动脉硬化性疾病或病症：动脉粥样硬化；与内皮损伤，血小板和单核细胞粘附和聚集，平滑肌增殖或迁移有关的动脉粥样硬化；再狭窄；血栓溶解治疗、经皮腔内血管成形术(PTA)、经腔冠状动脉血管成形术(PTCA)、心脏移植、旁路手术或炎症过程后发生的再狭窄；
·微血管和大血管损伤(血管炎)；增加纤维蛋白原水平和低密度DLD；增加纤溶酶原激活物抑制剂1(PA-1)的浓度；
·代谢综合征；代谢疾病或与代谢综合征相关的疾病：肥胖；过度皮下脂肪；过度肥胖；
糖尿病；高血压；脂质相关疾病，高脂血症，血脂异常，高胆固醇血症，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-胆固醇)降低，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-胆固醇)水平适度升高，高甘油三酯血症，高甘油酯血症，低脂蛋白血症，谷甾醇血症，脂肪肝疾病，肝炎；先兆子痫；多囊肾病进展；肝脂肪变性或肝脏中异常脂质蓄积；心脏，肾脏或肌肉的脂肪变性；字母蛋白血症；谷甾醇血症；
黄瘤病；唐吉尔病；高氨血症和相关疾病；肝性脑病；其他中毒性脑病；瑞氏(Reye)综合征；
·性、妇科和泌尿系统疾病：勃起功能障碍；阳痿；早泄；女性性功能障碍；女性性唤起功能障碍；活动性性唤起障碍；阴道萎缩；性感不快；萎缩性阴道炎；良性前列腺增生(BPH)，前列腺肥大，前列腺增生；膀胱出口阻塞；膀胱疼痛综合征(BPS)；间质性膀胱炎(IC)；膀胱过度活动症；神经源性膀胱和失禁；糖尿病肾病；原发性和继发性痛经；下尿路综合征(LUTS)；子宫内膜异位；骨盆疼痛；男性和女性泌尿生殖系统器官的良性和恶性疾病；
·慢性肾病；急性和慢性肾功能不全；急性和慢性肾衰竭；狼疮肾炎；潜在或相关的肾疾病：低灌注，细胞内低血压，阻塞性神经病，肾小球病，肾小球肾炎，急性肾小球肾炎，肾小球硬化，肾小管间质性疾病，肾病，原发性和先天性肾病，肾炎；以异常降低的肌酐和/或水排泄为特征的疾病；以尿素，氮，钾和/或肌酐的血液浓度异常升高为特征的疾病；以肾酶活性改变为特征的疾病，以谷氨酰基合成酶活性改变为特征的疾病；以尿渗透压或尿量变化为特征的疾病；以微量白蛋白尿增加为特征的疾病，以大白蛋白尿为特征的疾病；以肾小球和小动脉损伤，肾小管扩张，高磷酸盐血症和/或需要透析为特征的疾病；肾功能不全的后遗症；肾功能不全相关肺灌注；与HF有关的肾功能不全；与尿毒症或贫血相关的肾功能不全；电解质紊乱(高钾血症，低钠血症)；骨和碳水化合物代谢的紊乱；
·眼部疾病或病症，例如青光眼，视网膜病和糖尿病性视网膜病变。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自与高血压和冠状动脉血流量减少有关的疾病；急性冠状动脉血压升高；慢性冠状动脉血压升高；动脉高血压；
由心脏和肾脏并发症引起的血管疾病；由心脏病，中风，脑缺血或肾衰竭引起的血管疾病；
耐药性高血压；糖尿病性高血压；原发性高血压；继发性高血压；妊娠期高血压；先兆子痫；
门静脉高压和心肌梗死。
5.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自心力衰竭，HFPEF，HFREF；急性和慢性心力衰竭；更具体形式的HF：急性失代偿性HF，右心室衰竭，左心室衰竭，总HF，缺血性心肌病，扩张型心肌病，先天性心脏缺陷，瓣膜缺陷HF，二尖瓣狭窄，二尖瓣闭锁不全，主动脉瓣狭窄，主动脉瓣闭锁不全，三尖瓣狭窄，三尖瓣闭锁不全，肺动脉瓣狭窄，肺动脉瓣闭锁不全，瓣膜瓣合并缺损；糖尿病性心力衰竭；酒精性心肌病或储存性心肌病；
舒张性HF，收缩性HF；现有慢性HF(恶化HF)的急性期；舒张或收缩功能障碍；冠状动脉功能不全；心律失常；减少心室负荷；心脏肥大；心力衰竭/心肌综合征；门静脉高压；内皮功能障碍或损伤；房室节律和传导障碍：I-III级房室传导阻滞(AVBI-III)，室上性心率加快，心房颤动，心房扑动，心室颤动，心室扑动，室性心动过速，扭转性偏头痛心动过速，心房和室性早搏，AV结期外收缩，病态窦综合征，晕厥，AV结再折叠性心动过速；沃尔夫-帕金森-怀特氏(Wolff-Parkinson-White)综合征或急性冠状动脉综合征；拳击手心肌病；早期心室收缩；
心肌病；癌症诱导性心肌病。
6.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自血栓栓塞性疾病和缺血；心肌缺血；梗塞；心肌梗死；心脏病；心肌功能不全；内皮功能障碍；中风；短暂性脑缺血发作(TIA)；阻塞性血栓性血管炎；稳定或不稳定型心绞痛；冠状动脉痉挛或外周动脉痉挛；变异型心绞痛；普林兹梅特尔(Prinzmetal)型心绞痛；心脏肥大；先兆子痫；血栓形成性疾病；缺血再灌注损伤；与器官移植相关的缺血再灌注；与肺移植，肺部移植，心脏移植，移植物衰竭相关的缺血再灌注；保留创伤患者的血液取代基。
7.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自周边血管疾病；外周动脉疾病；外周闭塞性动脉疾病；肌张力过高；雷诺氏综合征或现象(原发性和继发性)；雷诺病；临界肢体缺血；外周栓塞；间歇性跛行；血管闭塞性危象；肌营养不良，杜兴氏肌营养不良，贝克肌营养不良；微循环异常；控制血管渗漏或渗透性；腰椎管狭窄；闭塞性血栓性血管炎；血栓性血管炎；外周灌注障碍；动脉和静脉血栓形成；微量白蛋白尿；外周和自主神经病；糖尿病微血管病。
8.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自水肿和由于心力衰竭引起的肾水肿。
9.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自阿尔茨海默氏病；帕金森病；血管性痴呆；血管性认知障碍；脑血管痉挛；先天性肌无力综合征；蛛网膜下腔出血；创伤性脑损伤；例如发生在轻度认知障碍中的那些认知障碍，年龄相关的学习和记忆障碍，年龄相关的记忆丧失，血管性痴呆，头部损伤，中风，中风后痴呆，创伤后头部损伤，伴有学习和记忆问题的儿童集中一般障碍和集中障碍后的改善认知，集中能力，学习能力或记忆能力；路易体痴呆；包括皮克氏综合征的额叶痴呆；进行性核麻痹；痴呆伴皮质基底变性；
肌萎缩性侧索硬化(ALS)；亨廷顿病；脱髓鞘；多发性硬化；丘脑退化；克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob)痴呆；HIV痴呆；伴随痴呆或科萨科夫(Korsakoff)精神病的精神分裂症；多系统萎缩和其他形式的帕金森综合征；运动障碍；神经保护；焦虑，紧张和抑郁或创伤后应激障碍(PTSD)；双相性精神障碍；精神分裂症；CNS相关性功能障碍和睡眠障碍；病理性饮食失调和使用奢侈食品和成瘾药物；控制脑灌注；偏头痛；预防和控制脑梗塞(大脑复发)的后果；预防和控制中风，脑缺血和头部损伤的后果。
10.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自休克；心源性休克；
败血症；脓毒性休克；过敏性休克；动脉瘤；控制白细胞活化；抑制或调节血小板聚集；多器官功能障碍综合征(MODS)；多器官衰竭(MOF)。
11.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自肺/呼吸道疾病：肺高压(PH)；肺动脉高压(PAH)和相关的肺血管重塑；以局部血栓形成和右心脏肥大的形式的血管重塑；肺肌张力过高；原发性肺动脉高压；继发性肺动脉高压；家族性肺动脉高压；散发性肺动脉高压；前毛细血管肺动脉高压；特发性肺动脉高压；其他形式的PH；与左心室疾病相关的PH，HIV，SCD，血栓栓塞(CTEPH)，结节病，COPD，肺纤维化，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，急性肺损伤，α-1-抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)，肺气肿，吸烟诱导性肺气肿和囊性纤维化(CF)；血栓性肺动脉病；丛发性肺动脉病；囊性纤维化；支气管收缩或肺支气管收缩；急性呼吸窘迫综合征；肺纤维化，肺移植；哮喘病。
12.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自与下述相关联或有关的肺动脉高压：左心室功能不全，低氧血症，世卫组织I，II，III，IV和V型高血压，二尖瓣疾病，狭窄性心包炎，主动脉瓣狭窄，心肌病，纵隔纤维化，肺纤维化，肺静脉回流异常，肺静脉闭塞性疾病，肺血管炎，胶原血管疾病，先天性心脏病，肺静脉高血压，间质性肺病，睡眠呼吸障碍，睡眠呼吸暂停，肺泡通气不足，长期暴露于高海拔，新生儿肺疾病，毛细血管发育不良，镰状细胞病，其他凝血障碍，慢性血栓栓塞，肺栓塞；由于肿瘤，寄生虫或外来物质引起的肺栓塞；结节组织疾病，狼疮，狼疮肾炎，血吸虫病，结节病，慢性阻塞性肺病，哮喘，肺气肿，慢性支气管炎，肺毛细血管瘤病，组织细胞增多症X，淋巴管瘤病，压缩性肺血管；由于腺病，肿瘤或纤维性纵隔炎引起的压缩性肺血管。
13.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自动脉硬化性疾病或病症：动脉粥样硬化；与内皮损伤，血小板和单核细胞粘附和聚集，平滑肌增殖或迁移有关的动脉粥样硬化；再狭窄；血栓溶解治疗、经皮腔内血管成形术(PTA)、经腔冠状动脉血管成形术(PTCA)、心脏移植、旁路手术或炎症过程后发生的再狭窄。
14.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自微血管和大血管损伤(血管炎)；纤维蛋白原水平和低密度DLD升高；纤溶酶原激活物抑制剂1(PA-1)浓度升高。
15.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自与代谢综合征相关的疾病；代谢疾病或与代谢综合征相关的疾病：肥胖；过度皮下脂肪；过度肥胖；糖尿病；高血压；脂质相关疾病，高脂血症，血脂异常，高胆固醇血症，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-胆固醇)降低，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-胆固醇)水平适度升高，高甘油三酯血症，高甘油酯血症，低脂蛋白血症，谷甾醇血症，脂肪肝疾病，肝炎；先兆子痫；多囊肾病进展；肝脂肪变性或肝脏中异常脂质蓄积；心脏，肾脏或肌肉的脂肪变性；字母蛋白血症；谷甾醇血症；黄瘤病；
唐吉尔病；高氨血症和相关疾病；肝性脑病；其他中毒性脑病；瑞氏(Reye)综合征。
16.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自性、妇科和泌尿系统疾病病症：勃起功能障碍；阳痿；早泄；女性性功能障碍；女性性唤起功能障碍；活动性性唤起障碍；阴道萎缩；性感不快；萎缩性阴道炎；良性前列腺增生(BPH)，前列腺肥大，前列腺增生；膀胱出口阻塞；膀胱疼痛综合征(BPS)；间质性膀胱炎(IC)；膀胱过度活动症；神经源性膀胱和失禁；糖尿病肾病；原发性和继发性痛经；下尿路综合征(LUTS)；子宫内膜异位；骨盆疼痛；男性和女性泌尿生殖系统器官的良性和恶性疾病。
17.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自慢性肾病；急性和慢性肾功能不全；急性和慢性肾衰竭；狼疮肾炎；潜在或相关的肾疾病：低灌注，细胞内低血压，阻塞性神经病，肾小球病，肾小球肾炎，急性肾小球肾炎，肾小球硬化，肾小管间质性疾病，肾病，原发性和先天性肾病，肾炎；以异常降低的肌酐和/或水排泄为特征的疾病；以尿素，氮，钾和/或肌酐的血液浓度异常升高为特征的疾病；以肾酶活性改变为特征的疾病，以谷氨酰基合成酶活性改变为特征的疾病；以尿渗透压或尿量变化为特征的疾病；以微量白蛋白尿增加为特征的疾病，以大白蛋白尿为特征的疾病；以肾小球和小动脉损伤，肾小管扩张，高磷酸盐血症和/或需要透析为特征的疾病；肾功能不全的后遗症；肾功能不全相关肺灌注；与HF有关的肾功能不全；与尿毒症或贫血相关的肾功能不全；电解质紊乱(高钾血症，低钠血症)；骨和碳水化合物代谢的紊乱。
18.如权利要求3所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自眼部疾病或病症，例如青光眼，视网膜病和糖尿病性视网膜病变。
19.一种将治疗有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，或权利要求2的药学组合物应用于治疗疾病、健康状况或病症的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自：
·心肌炎症(心肌炎)；慢性心肌炎；急性心肌炎；病毒性心肌炎；
·血管炎；胰腺炎；腹膜炎；类风湿病；
·肾脏的炎性疾病；免疫肾疾病：肾移植排斥，免疫复合物诱导的肾脏疾病，由毒素诱导的肾病，造影剂介导的肾病；糖尿病性和非糖尿病性肾病，肾盂肾炎，肾囊肿，肾硬化，高血压性肾硬化和肾病综合征；
·慢性间质炎症，炎症性肠病(IBD)，克罗恩病，溃疡性结肠炎(UC)；
·炎性皮肤疾病；
·眼睛炎性疾病，眼睑炎，干眼综合征和舍格伦 综合征；眼纤维化。
20.如权利要求19所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自心肌炎症(心肌炎)；慢性心肌炎；急性心肌炎和病毒性心肌炎。
21.如权利要求19所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自血管炎；胰腺炎；
腹膜炎和类风湿病。
22.如权利要求19所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自肾脏的炎性疾病；
免疫肾疾病：肾移植排斥，免疫复合物诱导的肾脏疾病，由毒素诱导的肾病，造影剂介导的肾病；糖尿病性和非糖尿病性肾病，肾盂肾炎，肾囊肿，肾硬化，高血压性肾硬化和肾病综合征。
23.如权利要求19所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自慢性间质炎症，炎症性肠病(IBD)，克罗恩病和溃疡性结肠炎(UC)。
24.如权利要求19所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自炎性皮肤疾病。
25.如权利要求19所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自眼睛炎性疾病，眼睑炎，干眼综合征和舍格伦 综合征和眼纤维化。
26.一种将治疗有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，或权利要求2的药学组合物应用于治疗疾病、健康状况或病症的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自糖尿病患者的伤口或溃疡愈合；微血管灌注改善；损伤后的微血管灌注改善或在围手术期护理中抵消炎症反应；以及肛裂；糖尿病性溃疡；糖尿病足溃疡；骨愈合；破骨细胞骨吸收和重塑；和新骨形成。
27.一种将治疗有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，或权利要求2的药学组合物应用于治疗疾病、健康状况或病症的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自：
·泌尿生殖系统疾病：糖尿病肾病；由慢性肾脏疾病或功能不全引起的肾纤维化和肾衰竭；由累积/沉积和组织损伤引起的肾纤维化和肾衰竭；肾硬化；进行性硬化；肾小球肾炎；局灶性节段性肾小球硬化；肾病综合征；前列腺肥大；肾纤维化；间质性肾纤维化；
·肺系统疾病：肺纤维化；特发性肺纤维化；囊性纤维化；进行性大块纤维化；影响肺的进行性大块纤维化；
·影响心脏的疾病：心内膜心肌纤维化；老年心肌梗死；心房纤维化；心脏间质性纤维化；心脏重塑和纤维化；心脏肥大；
·肝脏和相关器官的疾病：肝硬化症或肝硬化；与慢性肝病有关的肝硬化；肝纤维化；
肝星状细胞活化；肝纤维胶原和总胶原蛋白积累；坏死性炎症和/或免疫原性肝脏疾病；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；其他胆汁淤积性肝病：与肉芽肿性肝病、肝脏恶性肿瘤、妊娠肝内胆汁淤积、肝炎、脓毒症、药物或毒素、移植物抗宿主病、肝移植、胆总管石病、胆管肿瘤、胰腺癌、米里斯综合征、AIDS胆管病或寄生虫、血吸虫病有关的疾病；
·消化疾病或病症：克罗恩病；溃疡性结肠炎；胃肠道的硬化；
·皮肤或眼睛疾病：肾性纤维化；瘢痕疙瘩；纤维化局部或皮肤病或病症；真皮纤维化；
硬皮病，皮肤纤维化；硬斑病；增生性瘢痕；痣；增生性玻璃体视网膜病变；肉状瘤病；肉芽肿；眼纤维化；
·影响神经系统的疾病：肌萎缩性侧索硬化(ALS)；海马硬化，多发性硬化(MS)；局灶性硬化；原发性侧索硬化；
·骨骼疾病；骨硬化；
·耳硬化；其他听力疾病或障碍；听力损伤，部分或全部听力损失；部分或全部耳聋；耳鸣；噪声性听力损失；
·涉及自身免疫，炎症或纤维化的其他疾病：硬皮病；局部硬化皮或外周硬皮病；纵隔纤维化；纤维化纵隔炎；骨髓纤维化；腹膜后纤维化；关节纤维化；佩罗尼病；杜普纯挛缩；地衣硬化；一些形式的粘连性囊膜炎；动脉粥样硬化；结节性硬化；系统性硬化；多发性肌炎；
皮肌炎；多软骨炎；胆红素性筋膜炎；系统性红斑狼疮或红斑狼疮；骨髓纤维化，骨髓纤维变性或骨髓纤维瘤；结节病；子宫肌瘤；子宫内膜异位。
28.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自泌尿生殖系统疾病：糖尿病肾病；由慢性肾脏疾病或功能不全引起的肾纤维化和肾衰竭；由累积/沉积和组织损伤引起的肾纤维化和肾衰竭；肾硬化；进行性硬化；肾小球肾炎；局灶性节段性肾小球硬化；肾病综合征；前列腺肥大；肾纤维化和间质性肾纤维化。
29.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自肺系统疾病：肺纤维化；特发性肺纤维化；囊性纤维化；进行性大块纤维化；和影响肺的进行性大块纤维化。
30.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自影响心脏的疾病：
心内膜心肌纤维化；老年心肌梗死；心房纤维化；心脏间质性纤维化；心脏重塑和纤维化；和心脏肥大。
31.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自肝脏和相关器官的疾病：肝硬化症或肝硬化；与慢性肝病有关的肝硬化；肝纤维化；肝星状细胞活化；肝纤维胶原和总胶原蛋白积累；坏死性炎症和/或免疫原性肝脏疾病；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；其他胆汁淤积性肝病：与肉芽肿性肝病、肝脏恶性肿瘤、妊娠肝内胆汁淤积、肝炎、脓毒症、药物或毒素、移植物抗宿主病、肝移植、胆总管石病、胆管肿瘤、胰腺癌、米里斯综合征、AIDS胆管病或寄生虫；和血吸虫病有关的疾病。
32.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自消化疾病或病症：
克罗恩病；溃疡性结肠炎；和胃肠道的硬化。
33.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自皮肤或眼睛疾病：
肾性纤维化；瘢痕疙瘩；纤维化局部或皮肤病或病症；真皮纤维化；硬皮病，皮肤纤维化；硬斑病；增生性瘢痕；痣；增生性玻璃体视网膜病变；肉状瘤病；肉芽肿和眼纤维化。
34.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自影响神经系统的疾病：肌萎缩性侧索硬化(ALS)；海马硬化，多发性硬化(MS)；局灶性硬化；和原发性侧索硬化。
35.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自骨骼疾病；和骨硬化。
36.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自耳硬化；其他听力疾病或障碍；听力损伤，部分或全部听力损失；部分或全部耳聋；耳鸣；和噪声性听力损失。
37.如权利要求27所述的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自涉及自身免疫，炎症或纤维化的其他疾病：硬皮病；局部硬化皮或外周硬皮病；纵隔纤维化；纤维化纵隔炎；骨髓纤维化；腹膜后纤维化；关节纤维化；佩罗尼病；杜普纯挛缩；地衣硬化；一些形式的粘连性囊膜炎；动脉粥样硬化；结节性硬化；系统性硬化；多发性肌炎；皮肌炎；多软骨炎；胆红素性筋膜炎；系统性红斑狼疮或红斑狼疮；骨髓纤维化，骨髓纤维变性或骨髓纤维瘤；结节病；
子宫肌瘤；和子宫内膜异位。
38.一种将治疗有效量的权利要求1的化合物，或其药学上可接受的盐，或权利要求2的药学组合物应用于治疗疾病、健康状况或病症的方法，其中，所述疾病、健康状况或病症选自某些类型的癌症；镰状细胞病；镰状细胞性贫血；癌转移；骨质疏松症；胃轻瘫；功能性消化不良；糖尿病并发症；脱发或头发减少；与内皮功能障碍相关的疾病；与一氧化氮产生减少相关的神经病症；精氨琥珀酸尿；神经肌肉疾病：杜兴氏肌营养不良(DMD)，贝克肌营养不良(BMD)，四肢肌肉营养不良，远端肌病，I型和II型肌强直性营养不良，表皮肩胛肌营养不良，常染色体和X-连锁遗传的爱德型(Emery-Dreifuss)肌肉营养不良，眼咽肌营养不良，肌萎缩性侧索硬化和脊髓性肌萎缩(SMA)。
作为sGC刺激剂的吡唑衍生物
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求于2014年9月17日提交的美国临时申请号62/051,557和于2015年8月13日提交的美国临时申请号62/204,710的优先权。这些申请中的每一个的全部内容均通过引用并入本文。
技术领域
[0003] 本申请涉及可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的刺激剂/激活剂(Stimulators)，包含它们的药物制剂以及它们单独或与一种或多种其它药物组合用于治疗和/或预防各种疾病的用途，其中一氧化氮(NO)的浓度或者增加环鸟苷酸(cGMP)的浓度的增加是可期望的。
背景技术
[0004] 可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)是体内一氧化氮(NO)的主要受体。sGC可以通过NO-依赖性和NO-非依赖性机制激活。响应于该激活，sGC将GTP转化为第二信使环鸟苷酸(cGMP)。cGMP水平的增加进而调节下游效应分子的活性，该下游效应分子包括蛋白激酶、磷酸二酯酶(PDE)和离子通道。
[0005] 在体内，NO由精氨酸和氧通过各种一氧化氮合成酶(NOS)作用以及通过无机硝酸盐的连续还原反应合成的。目前已鉴别出的NOS亚型有三种：在活化的巨噬细胞中发现的诱导型NOS(iNOS或NOSII)；参与神经传递和长程增强效应的组成性神经元NOS(nNOS或NOSI)；和调节平滑肌松弛和血压的组成性内皮NOS(eNOS或NOSIII)。
[0006] 实验和临床证据表明，内源性NO生物利用度和/或响应性的降低会促使心血管、内皮、肾和肝脏疾病，以及勃起功能障碍和其他性障碍(例如女性性障碍或阴道萎缩)的发展。特别地，NO信号通路在例如全身性和肺动脉高血压，心力衰竭，心绞痛，中风，血栓和其它血栓栓塞性疾病，外周动脉疾病，肝、肺或肾的纤维化以及动脉粥样硬化等多种心血管疾病中都发生改变。
[0007] sGC刺激剂也可用于治疗与脂质相关的疾病，例如血脂异常，高胆固醇血症，高甘油三酯血症，谷甾醇血症，脂肪肝疾病和肝炎。
[0008] 肺高血压(PH)是以肺血管(肺动脉，肺静脉和肺毛细血管)中的血压持续升高为特征的疾病，该疾病会导致右心脏肥大，最终导致右心衰竭和死亡。在PH中，NO和其它血管扩张剂如前列环素的生物活性降低，而内源性血管收缩剂如内皮素的产生增加，导致过度的肺血管收缩。由于sGC刺激剂促进平滑肌松弛，导致血管舒张，因此sGC刺激剂已被用于治疗PH。
[0009] 用NO-非依赖性sGC激活剂处理还可促进健康兔、大鼠和人的阴茎海绵体中的平滑肌松弛，引起阴茎勃起，表明sGC刺激剂可用于治疗勃起功能障碍。
[0010] 如本发明所公开的那些NO-非依赖性、血红素依赖性sGC激活剂具有几个重要的区分特征：包括其活性强烈依赖于还原态血红素辅基的存在，与NO组合时的强协同酶活性，以及不依赖NO而进行的通过直接刺激sGC对cGMP合成产生的刺激。苄基吲唑化合物YC-1是第一个被鉴别出的sGC刺激剂。更多具有更强作用及更高选择性的sGC刺激剂也已被开发。这些化合物均已显示出抗聚集、抗增殖和血管扩张作用。
[0011] 由于以NO-非依赖性方式刺激sGC的化合物相对于其它目前的替代疗法具有显著的优点，因此使开发新型sGC刺激剂成为必要。它们在用于预防、管理和治疗诸如肺动脉高血压，动脉高血压，心力衰竭，动脉粥样硬化，炎症，血栓形成，肾纤维化和衰竭，肝硬化，肺纤维化，勃起功能障碍，女性性唤起障碍和阴道萎缩以及其它心血管疾病等疾病中具有潜力；并在预防、管理和治疗与脂质相关的疾病中具有开放前景。
发明内容
[0012] 本发明涉及用作sGC刺激剂/激活剂(Stimulators)的化合物或其药学上可接受的盐。本发明的化合物描述在表1A或表1B中。
[0013] 表IA
[0014]
[0015]
[0016]
[0017] 表IB
[0018]
[0019]
[0020]
[0021]
[0022]
[0023]
[0024]
[0025]
[0026]
[0027]
[0028]
[0029]
[0030]
[0031] 本发明还涉及药物组合物,该药物组合物包含来自表1A或表1B的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的赋形剂或载体。本发明还涉及包含所述药物组合物的药物制剂或剂型。
[0032] 本发明还提供了一种治疗或预防有需要的受试者的疾病，健康状况或病症的方法，包括单独或联合用药使用有效量的表1A或表1B中的化合物或其药学上可接受的盐进行给药；其中所述疾病，健康状况或病症包括受益于sGC刺激或NO或cGMP浓度的增加的外周的，肺，肝，肾，心脏或脑血管/内皮疾病或病症，泌尿生殖系统或性障碍或病症，血栓栓塞性疾病，纤维化疾病，肺部或呼吸道疾病，肾或肝脏病症，眼部病症，听力障碍，CNS病症，循环障碍，局部或皮肤病症，代谢障碍，动脉粥样硬化，伤口愈合或脂质相关病症。
[0033] 本发明的详细描述
[0034] 现在将详细参考本发明的某些实施例，这些实施例在所附结构和公式中说明。虽然将结合所列举的实施例来描述本发明，但应当理解的是，它们并不旨在将本发明限制于那些实施例。相反，本发明旨在覆盖可以包括在由权利要求限定的本发明的范围内的所有替换，修改和等同物。本发明不限于本文所述的方法和材料，而是包括可被用于实施本发明的与本文所述的那些相似或等同的任何方法和材料。在一个或多个并入的文献参考文献、专利或类似材料与本申请不同或矛盾的情况下，包括但不限于定义的术语，术语使用，所描述的技术等，以本申请为准。
[0035] 定义及通用术语
[0036] 为了本发明的目的，根据元素周期表(CAS版)以及第75版化学和物理手册(Handbook of Chemistry and Physics，75thEd)来标识化学元素。此外，有机化学的一般原理描述在“有机化学(Organic Chemistry)”，Thomas Sorrell，大学科技书籍(University Science Books)，索萨利托(Sausalito)：1999和“March的高级有机化学(March's Advanced Organic Chemistry)”，第5版，Smith，M.B.和March，J.,约翰·威立国际出版公司(John Wiley&Sons)，纽约(New York)：2001中，其全部内容通过引用并入本文。
[0037] 如表1A或表1B的化合物或本文公开的其它化合物的化合物可以以其游离形式(例如无定形形式，或结晶形式或多晶型物)存在。在某些条件下，化合物也可以形成共形式。如本文所用，术语共形式与术语多组分结晶形式同义。当共形式中的一种组分很明显地将质子转移给另一组分时，所得的共形式被称为“盐”。盐的形成由形成混合物的配体之间的pKa的差异有多大决定。为了本发明的目的，化合物包括药学上可接受的盐，即使术语“药学上可接受的盐”没有被明确指出。
[0038] 除非仅仅一种异构体被特别描绘或命名，否则本文描述的结构也意在包括结构的所有立体异构(例如，对映异构体，非对映异构体，阻转异构体和顺式-反式异构体)形式；例如每个不对称中心的R和S构型，每个不对称轴的Ra和Sa构型，(Z)和(E)双键构型，以及顺式和反式构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及外消旋体，以及对映异构体、非对映异构体和顺式-反式异构体的混合物(双键或构象)的混合物在本发明的范围内。除非另有说明，本发明化合物的所有互变异构形式也在本发明的范围内。作为例子，取代基如下：
[0039]
[0040] 其中R可以是氢，将包括以下所示的两种化合物：
[0041]
[0042] 本发明还包括与本文所述的那些相同，但是事实上一个或多个原子被具有不同于自然界中通常存在的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子替代的同位素标记的化合物。所述的任何特定原子或元素的所有同位素及其用途均涵盖在本发明化合物的范围内。本发明化合物中可被替代的示例性同位素包括氢，碳，氮，氧，磷，硫，氟，氯和碘的同位2 3 11 13 14 13 15 15 17 18 32 33 35 18 36 123 125
素，例如分别为H，H，C，C，C，N，N，O，O，O，P，P，S，F，Cl， I和 I。本发明的某些同位素标记的化合物(例如，用3H和14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布测定。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于其易于制备和检测而有用。此外，用更重的同位素例如氘(即2H)取代因其更高的代谢稳定性(例如，更长体内半衰期或更低剂量需
15
求)可以提供某些治疗优势，因此在一些情况下可能是优选的。正电子发射同位素例如 O，13N，11C和18F可用于正电子发射断层摄影(PET)研究以检查底物的受体占有率。本发明的同位素标记的化合物可通常通过以下的类似于本文下述的方案和/或实施例中公开的方法，通过用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。
素，例如分别为H，H，C，C，C，N，N，O，O，O，P，P，S，F，Cl， I和 I。本发明的某些同位素标记的化合物(例如，用3H和14C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布测定。氚化(即3H)和碳-14(即14C)同位素由于其易于制备和检测而有用。此外，用更重的同位素例如氘(即2H)取代因其更高的代谢稳定性(例如，更长体内半衰期或更低剂量需
15
求)可以提供某些治疗优势，因此在一些情况下可能是优选的。正电子发射同位素例如 O，13N，11C和18F可用于正电子发射断层摄影(PET)研究以检查底物的受体占有率。本发明的同位素标记的化合物可通常通过以下的类似于本文下述的方案和/或实施例中公开的方法，通过用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。
[0043] 本发明的化合物在本文中通过它们的化学结构和/或化学名称来定义。当化合物的化学结构和化学名称同时被提及，并且化学结构和化学名称冲突时，以化学结构为准。
[0044] 化合物
[0045] 本发明的化合物选自表1A或表1B中所述的那些。
[0046] 表IA
[0047]
[0048]
[0049]
[0050] 表IB
[0051]
[0052]
[0053]
[0054]
[0055]
[0056]
[0057]
[0058]
[0059]
[0060]
[0061]
[0062]
[0063]
[0064] 化合物的制备方法
[0065] 本发明的化合物可以根据下面所描述和说明的方案和实施例制备。除非另有说明，原料和各种中间体可以从商业来源获得，由市售化合物制备或使用熟知的合成方法制备。
[0066] 下面描述了本发明化合物的一般合成方法。合成方案作为实施例给出，并不以任何方式限制本发明的范围。
[0067] 一般方法A
[0068]
[0069] 步骤1：
[0070] 二酮烯醇化物形成：向冷却至-78℃的酮A的THF溶液中通过注射器滴加LiHMDS(例如，0.9当量，1.0M甲苯溶液)。将反应升温至0℃，然后加入草酸二乙酯(1.2当量)。此时，将反应升温至室温，并在该温度下搅拌，直到反应完成(例如，使用TLC或LC/MS分析)。一旦反应完成(反应时间通常为45分钟)，将产物二酮烯醇化物B“直接”用于步骤2，即环化步骤中，无需任何进一步纯化。
[0071] 步骤2：
[0072] 吡唑形成：用乙醇稀释二酮烯醇化物B，并连续加入HCl(例如，3当量，1.25M乙醇溶液)和芳基肼水合物(例如，1.15当量)。将反应混合物加热至70℃，并在该温度下搅拌，直至环化反应完成
[0073] (例如通过LC/MS分析，通常30分钟)。一旦完成，将反应混合物小心地用固体碳酸氢钠(例如，4当量)处理，并用二氯甲烷和水稀释。分离各层，将水层用水进一步稀释，然后用二氯甲烷(3x)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。然后使用适当梯度的EtOAc/己烷溶液，通过SiO2色谱法纯化得到吡唑C。
[0074] 步骤3：
[0075] 脒形成：向冷却至0℃的NH4Cl(例如，5当量)的甲苯悬浮液中通过注射器滴加AlMe3(例如，5当量，2.0M甲苯溶液)。将反应升温至室温，并在该温度下搅拌直至不再观察到气泡。将吡唑C一次性加入到反应混合物中，加热至110℃，并在该温度下搅拌直至判断反应完成(例如，使用TLC或LC/MS分析)。一旦完成，将反应冷却，用过量甲醇处理，并在室温下剧烈搅拌1小时。过滤粘稠的浆液，将所得的固体滤饼用甲醇洗涤。将滤液真空浓缩，并将所得固体再悬浮于乙酸乙酯：异丙醇体积比为5:1的溶剂混合物中。将反应物进一步用饱和碳酸钠溶液处理，搅拌10分钟，然后分离各层。水层用乙酸乙酯：异丙醇＝5:1的溶剂混合物萃取三次，并将合并的有机层用盐水洗涤。将有机层进一步用MgSO4干燥，过滤，真空除去溶剂。产物脒D无需进一步纯化直接用于后续步骤中。
[0076] 步骤4：
[0077] 嘧啶酮形成：将脒D悬浮在乙醇中，并在23℃下剧烈搅拌以促进完全溶剂化。将反应物进一步用3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(例如，3当量)处理，并且烧瓶配备有回流冷凝器。将反应物置于保持在90℃的预热油浴中并搅拌，直到通过LC/MS观察原料完全消耗(反应时间通常为1小时)。将反应物冷却至23℃，并将反应混合物用HCl(例如，3当量，1.25M EtOH溶液)酸化。将混合物搅拌30分钟，真空除去大部分溶剂。将内容物再悬浮于乙醚和水(1:1混合物)中，将所得浆液搅拌20分钟。将悬浮液真空过滤，并将固体饼用另外的水和乙醚冲洗，并在高真空下干燥过夜。得到的嘧啶酮E无需进一步纯化直接用于后续步骤中。
[0078] 一般方法B
[0079]
[0080] 在90℃下，将氨基亲核试剂(3当量)，三乙胺(10当量)和中间体-1A(1当量)在二恶烷和水(2:1比例)中搅拌，直到通过LC/MS观察原料完全消耗。将溶液用1N盐酸水溶液和二氯甲烷稀释。然后分离各层，并将水层用二氯甲烷萃取。合并有机层，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。纯化得到所需产物。
[0081] 一般方法C
[0082]
[0083] 在中间体-2(该中间体在先前公开的专利申请WO2012/3405A1中已被描述；1当量)和羧酸(1.1当量)的N，N-二甲基甲酰胺溶液中相继加入三乙胺(4当量)和50％的丙基膦酸酐(T3P，1.4当量)的乙酸乙酯溶液。将反应加热至80℃反应24小时，然后将反应物用水和1N盐酸溶液稀释。用二氯甲烷、然后用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。纯化得到所需产物。
[0084] 本发明的药学上可接受的盐
[0085] 在本文所述的所有情况下，术语“化合物”还包括化合物的药学上可接受的盐，无论是否实际使用短语“药学上可接受的盐”。本文所用的短语“药学上可接受的盐”是指表1A或表1B的化合物的药学上可接受的有机盐或无机盐。表1A或表1B的化合物的药学上可接受的盐被用于医学中。然而，不是药学上可接受的盐可用于制备表1A或表1B的化合物或其药学上可接受的盐。药学上可接受的盐可涉及包括另一分子，例如乙酸根离子，琥珀酸根离子或其它反离子。反离子可以是稳定母体化合物上的电荷的任何有机部分或无机部分。此外，药学上可接受的盐在其结构中可以具有不止一个的带电原子。其中，多个带电原子是药学上可接受的盐的一部分的实施例可以具有多个反离子。因此，药学上可接受的盐可以具有一个或多个带电原子和/或一个或多个反离子。
[0086] 本文中所述化合物的药学上可接受的盐包括从具有无机酸、有机酸或碱的化合物中衍生得到的那些盐。在一些实施例中，所述盐可以在化合物的最终分离和纯化期间原位制备。在其它实施例中，所述盐可以在单独的合成步骤中从化合物的游离形式中制备。
[0087] 当表1A或表1B的化合物是酸性的或含有足够酸性的生物电子等排体时，合适的“药学上可接受的盐”是指由药学上可接受的无毒碱制备的盐，该无毒碱包括无机碱和有机碱。从无机碱中衍生的盐包括铝，铵，钙，铜，三价铁，二价铁，锂，镁，锰盐，二价锰，钾，钠，锌等。具体的实施例包括铵，钙，镁，钾和钠盐。从药学上可接受的有机无毒碱中衍生的盐包括伯胺，仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)，环胺和碱性离子交换树脂的盐，该碱性离子交换树脂例如精氨酸，甜菜碱，咖啡因，胆碱，N，N-二苯甲基乙烯基二胺，二乙胺，2-二乙基氨基乙醇，2-二甲基氨基乙醇，乙醇胺，乙二胺，N-乙基吗啉，N-乙基哌啶，葡糖胺，葡萄糖胺，组氨酸，海巴明，异丙胺，赖氨酸，甲基葡萄糖胺，吗啉，哌嗪，哌啶，聚胺树脂，普鲁卡因，嘌呤，可可碱，三乙胺，三甲胺，三丙胺，氨丁三醇等。
[0088] 当表1BA或表1B的化合物是碱性的或含有足够碱性的生物电子等排体时，可以由药学上可接受的无毒酸来制备盐，该无毒酸包括无机酸和有机酸。这些酸包括乙酸，苯磺酸，苯甲酸，樟脑磺酸，柠檬酸，乙磺酸，富马酸，葡萄糖酸，谷氨酸，氢溴酸，盐酸，羟乙磺酸，乳酸，马来酸，苹果酸，扁桃酸，甲磺酸，粘酸，硝酸，扑酸，泛酸，磷酸，琥珀酸，硫酸，酒石酸，对甲苯磺酸等。具体的实施例包括柠檬酸，氢溴酸，盐酸，马来酸，磷酸，硫酸和酒石酸。其它示例性盐包括但不限于硫酸盐，柠檬酸盐，乙酸盐，草酸盐，氯化物，溴化物，碘化物，硝酸盐，硫酸氢盐，磷酸盐，酸式磷酸盐，异烟酸盐，乳酸盐，水杨酸盐，酸式柠檬酸盐，酒石酸盐，油酸盐，鞣酸盐，泛酸盐，酒石酸氢盐，抗坏血酸盐，琥珀酸盐，马来酸盐，龙胆酸盐，富马酸盐，葡糖酸盐，葡萄糖醛酸盐，糖酸盐，甲酸盐，苯甲酸盐，谷氨酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐(即1,1'-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))盐。
[0089] 上述药学上可接受的盐和其它典型的药学上可接受的盐的制备由Berg等人在“药用盐(Pharmaceutical Salts)，”制药科学杂志(J.Pharm.Sci)，1977：66：1-19中被详细说明，其全部内容通过引用并入本文。
[0090] 除了本文所述的化合物之外，它们的药学上可接受的盐也可以用于组合物中以治疗或预防本文所指出的病症。
[0091] 在本文所述的所有情况下，术语“化合物”还包括化合物的药学上可接受的盐，无论是否实际使用短语“药学上可接受的盐”。
[0092] 药物组合物和给药方法
[0093] 本文公开的化合物及其药学上可接受的盐可以配制为药物组合物或“制剂”。
[0094] 通过将表1A或表1B的化合物或其药学上可接受的盐与载体，稀释剂或赋形剂混合来制备典型的制剂。合适的载体，稀释剂和赋形剂对于本领域技术人员是熟知的，并且包括例如碳水化合物，蜡，水溶性和/或可溶胀聚合物，亲水或疏水材料，明胶，油，溶剂，水等的材料。所使用的具体载体，稀释剂或赋形剂将取决于被配制的表1A或表1B的化合物的手段和目的。通常选择基于本领域技术人员认为是安全(GRAS-通常认为安全)的溶剂给药于哺乳动物。一般来说，安全溶剂是无毒的水性溶剂，例如水和其它在水中可溶或混溶的无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水，乙醇，丙二醇，聚乙二醇(例如PEG400，PEG300)等及其混合物。制剂还可包括其它类型的赋形剂，例如一种或多种缓冲剂，稳定剂，抗粘剂，表面活性剂，润湿剂，润滑剂，乳化剂，粘合剂，悬浮剂，崩解剂，填充剂，吸附剂，膜(例如肠溶或缓释)剂，防腐剂，抗氧化剂，遮光剂，助流剂，加工助剂，着色剂，甜味剂，芳香剂，调味剂和其它已知的添加剂以提供药物(即表1A或表1B的化合物或其药物组合物)的完美呈现或有助于药物产品(即药物)的制造。
[0095] 可以使用常规的溶解和混合程序制备制剂。例如，将原料药物(即，表1A或表1B的化合物，其药学上可接受的盐，或化合物的稳定形式，例如与环糊精衍生物或其它已知络合剂的络合物)在一种或多种上述赋形剂的存在下溶于合适的溶剂。具有所需纯度的化合物可选地以冻干制剂，研磨粉末或水溶液的形式与药学上可接受的稀释剂，载体，赋形剂或稳定剂混合。制剂可以通过在环境温度下在适当的pH下和在所需的纯度下与生理学上可接受的载体混合来制备。制剂的pH主要取决于化合物的具体用途和浓度，但可在约3至约8的范围内。当本文所述的试剂是通过溶剂方法形成的固体无定形分散体时，可将添加剂在形成混合物时直接加入到喷雾干燥溶液中，例如将添加剂溶解或悬浮在溶液中作为随后可被喷雾干燥的浆料。或者，可以在喷雾干燥方法之后加入添加剂以帮助形成最终配制的产品。
[0096] 表1A或表1B的化合物或其药学上可接受的盐通常被配制成容易控制药物剂量并使患者能够配合处方使用的药物剂型。此种用表1A或表1B的化合物或其药学上可接受的盐制备的药物剂型能够用于各种途径和类型的给药。由于不同的医学病症需要不同的给药途径，因此相同的化合物可以存在多种剂型。
[0097] 可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的受试者和具体的给药方式而改变。例如，旨在用于人类口服给药的时间释放制剂可以含有约1至1000mg的活性物质以及合适和方便量的载体材料，该载体材料可以为总组合物重量的5％至95％左右(重量：重量)。可以制备药物组合物以提供易于测量的用量。例如，用于静脉内输注的水溶液可以含有每毫升溶液约3至500μg的活性成分，以便能够以约30mL/hr的速率输注合适的体积。作为一般性建议，所给药的抑制剂的初始药学有效量将在约0.01-100mg/kg剂量的范围内，即每天约0.1至20mg/kg患者体重，典型使用的初始化合物范围为0.3-15mg/kg/天。
[0098] 本文所用的术语“治疗有效量”是指在组织，系统，动物或人中引起生物或药物反应的活性化合物或药剂的量，其由研究者，兽医，医生或其他临床医生所探索。待给药的化合物的治疗或药学有效量将受这些考虑所控制，并且是改善，治愈或治疗疾病或病症或其一种或多种症状所需的最小量。
[0099] 表1A或表1B的化合物的药物组合物将以与良好的医疗实践一致数量，浓度，时间表，疗程，载体和给药途径进行配制，定量和给药。本文中考虑的因素包括所治疗的具体疾病，所治疗的特定哺乳动物，个体患者的临床病症，疾病的原因，药剂的递送位点，给药方法，给药安排，以及医疗从业者已知的其他因素，例如个体患者的年龄，体重和反应。
[0100] 术语“预防有效量”是指在罹患疾病或障碍之前或预防或实质上减少罹患疾病或障碍的机会或减轻疾病或障碍的严重程度，或者在其症状显现之前减轻其一种或多种症状的严重程度方面有效的量。粗略而言，预防措施分为一级预防(为了预防疾病的发生)与二级预防(疾病已发生因而保护患者以防止此过程恶化)。
[0101] 可接受的稀释剂，载体，赋形剂和稳定剂是在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒的那些，并且包括缓冲剂，例如磷酸盐，柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲基氯化铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚，丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯类，如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚；蛋白质，例如血清白蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖，例如蔗糖，甘露醇，曲拉多糖或山梨醇；成盐抗衡离子如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂，例如吐温(吐温TM)，普郎尼克(普郎尼克TM)或聚乙二醇(PEG)。活性药物成分还可以包埋在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，例如分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊；在胶体药物递送系统(例如，脂质体，白蛋白微球，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)中或在乳状液中。这些技术公开在2005年雷明顿编著的(Remington's)：药物科学与实践(The Science and Practice of Pharmacy)，第21版，费城科技大学(University of the Sciences in Philadelphia)中(以下称为“Remington's”)。
[0102] “受控药物递送系统”向身体以适于药物和所治疗的病症的精确控制方式提供药物。主要目的是在期望的时间内在作用部位达到治疗药物浓度。术语“控制释放”通常用于指改变剂型中的药物释放的多种方法。该术语包括标记为“延长释放”，“延迟释放”，“改良释放”或“缓释”的制剂。通常，可以通过使用各种各样的聚合物载体和控制释放系统来提供本文所述的试剂的控制释放，该控制释放系统包括可侵蚀和不可侵蚀的基质，渗透控制装置，各种储存装置，肠溶衣和多颗粒控制装置。
[0103] “缓释制剂”是控制释放的最常见的应用。缓释制剂的合适例子包括含有该化合物的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成型制品形式，例如，膜或微胶囊。缓释基质的例子包括聚酯，水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))，聚丙交酯(美国专利3,773,919)，L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸盐的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯，可降解的乳酸-乙醇酸共聚物和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
[0104] 也可以制备“立即释放制剂”。这些制剂的目的是使药物尽可能快地进入血液和作用部位。例如，对于快速溶解，大多数片剂被设计为经历快速崩解成颗粒并随后解聚成细颗粒。这提供了暴露于溶解介质的更大的表面积，导致更快的溶解速率。
[0105] 本文所述的试剂可以掺入到可侵蚀或不可侵蚀的聚合物基质控释装置中。可蚀性基质是指水溶蚀性或水溶胀性或水溶性的，即在纯水中是可溶蚀的或可溶胀的或可溶的，或者需要酸或碱的存在以使聚合物基质充分离子化以引起侵蚀或溶解的试剂。当与使用的水性环境接触时，可侵蚀的聚合物基质吸收水并形成包埋本文所述试剂的水溶胀凝胶或基质。水溶胀基质在使用环境中逐渐腐蚀，溶胀，崩解或溶解，从而控制本文所述化合物向使用环境的释放。该水溶胀基质的一种成分是水溶胀性的、可溶蚀的或可溶性聚合物，其通常可描述为渗透聚合物，水凝胶或水可溶胀聚合物。这样的聚合物可以是直链、支链或交联的。聚合物可以是均聚物或共聚物。在某些实施例中，它们可以是衍生自乙烯基，丙烯酸酯，甲基丙烯酸酯，氨基甲酸酯，酯和氧化物单体的合成聚合物。在其它实施例中，它们可以是天然存在的聚合物的衍生物，例如多糖(例如几丁质，壳聚糖，葡聚糖和支链淀粉；琼脂，阿拉伯树胶，刺梧桐树胶，刺槐豆胶，黄蓍胶，角叉菜胶，茄替胶，瓜尔胶，黄原胶和硬葡聚糖)，淀粉(例如糊精和麦芽糖糊精)，亲水胶体(例如果胶)，磷脂(例如卵磷脂)，藻酸盐(例如藻酸铵，藻酸钠，藻酸钾或藻酸钙，藻酸丙二醇酯)，明胶，胶原和纤维素。纤维素是已经通过糖重复单元上的至少一部分羟基与化合物反应以形成酯连接或醚连接取代基修饰的纤维素聚合物。例如，纤维素乙基纤维素具有连接到糖重复单元的醚连接的乙基取代基，而纤维素乙酸纤维素具有酯连接的乙酸酯取代基。在某些实施例中，供可侵蚀性基质用的纤维素制品包括水溶性和水可侵蚀的纤维素制品，可包括例如乙基纤维素(EC)，甲基乙基纤维素(MEC)，羧甲基纤维素(CMC)，CMEC，羟乙基纤维素(HEC)，羟丙基纤维素(HPC)，醋酸纤维素(CA)，丙酸纤维素(CP)，丁酸纤维素(CB)，醋酸丁酸纤维素(CAB)，CAP，CAT，羟丙基甲基纤维素(HPMC)，HPMCP，HPMCAS，羟丙基甲基纤维素乙酸偏苯三酸酯(HPMCAT)和乙基羟乙基纤维素(EHEC)。在某些实施例中，纤维素包括各种等级的低粘度(MW小于或等于50,000道尔顿，例如美国陶氏化学甲基纤维素(陶氏甲基纤维素TM)系列E5，E15LV，E50LV和K100LY)和高粘度(MW大于50,000道尔顿，例如，E4MCR，E10MCR，K4M，K15M和K100M和甲基纤维素(甲基纤维素TM)K系列)HPMC。其它市售的HPMC类型包括Shin Etsu羟丙甲纤维素90SH系列。
[0106] 可用作可侵蚀基质材料的其它材料包括但不限于支链淀粉，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，聚乙酸乙烯酯，甘油脂肪酸酯，聚丙烯酰胺，聚丙烯酸，乙基丙烯酸或甲基丙烯酸的共聚物( 美国罗门哈斯有限公司(RohmAmerica，Inc.)，皮斯卡塔韦(Piscataway)，新泽西(NewJersey))和其它丙烯酸衍生物，例如甲基丙烯酸丁酯，甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸乙酯，丙烯酸乙酯，(2-二甲基氨基乙基)甲基丙烯酸酯和(三甲基氨基乙基)甲基丙烯酸酯氯化物的均聚物和共聚物。
[0107] 可选的，本发明的试剂可以通过非侵蚀性基质施用或掺入到非侵蚀性基质装置中给药。在这种装置中，本文所述的试剂分布在惰性基质中。该试剂通过惰性基质扩散而释放。适合于惰性基质的材料的例子包括不溶性塑料(例如丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸甲酯共聚物，聚氯乙烯，聚乙烯)，亲水性聚合物(例如乙基纤维素，乙酸纤维素，交联聚乙烯吡咯烷酮(也称为交聚维酮))和脂肪族化合物(例如巴西棕榈蜡，微晶蜡和甘油三酯)。这样的装置在雷明顿：药物科学与实践(Remington：The Science and Practice of Pharmacy)，第20版(2000)中进一步描述。
[0108] 如上所述，本文所述的试剂也可以并入渗透控制装置中。这种装置通常包括含有如本文所述的一种或多种试剂的核以及围绕核的水可渗透、不溶解和非侵蚀性涂层，其控制水从使用的水性环境流入核中，以通过将核的一些或全部挤出到使用环境中的方式引起药物释放。在某些实施例中，涂层是聚合的、水可渗透的，并且具有至少一个递送端口。渗透装置的核可选的包括一种通过半透膜从周围环境吸收水的渗透剂。该装置的核中包含的渗透剂可以是水溶胀性亲水性聚合物，或者是渗透原(osmogene)，也称为渗透剂(osmagent)。在装置内产生压力迫使试剂其经由孔口(其尺寸被设计为在防止静液压头的建立的同时使溶质扩散最小化)离开装置。渗透控制装置的非限制性实施例公开于美国专利申请序列号
09/495,061中。
09/495,061中。
[0109] 存在于芯中的水可溶胀的亲水性聚合物的量可以在约5至80重量％(包括例如10至50重量％)的范围内。芯材料的非限制性实例包括亲水乙烯基和丙烯酸聚合物，多糖如藻酸钙，聚环氧乙烷(PEO)，聚乙二醇(PEG)，聚丙二醇(PPG)，聚(甲基丙烯酸2-羟乙酯)，聚(丙烯酸)，聚(甲基丙烯酸)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和交联PVP，聚乙烯醇(PVA)，PVA/PVP共聚物和具有疏水单体的PVA/PVP共聚物，如甲基丙烯酸甲酯，乙酸乙烯酯等，包括长PEO嵌段的亲水性聚氨酯，交联羧甲纤维素钠，角叉菜胶，羟乙基纤维素(HEC)，羟丙基纤维素(HPC)，羟丙基甲基纤维素(HPMC)，羧甲基纤维素(CMC)和羧乙基纤维素(CEC)，藻酸钠，聚卡波非，明胶，黄原胶和羟基乙酸淀粉钠。其它材料包括包含可通过加成或通过缩聚形成的聚合物的互穿网络的水凝胶，其组分可包含亲水性和疏水性单体，例如刚刚提及的那些。水溶胀性亲水性聚合物包括但不限于PEO，PEG，PVP，交联羧甲基纤维素钠，HPMC，羟基乙酸淀粉钠，聚丙烯酸和其交联形式或混合物。
[0110] 核还可以包括渗透原(或渗透剂)。核中存在的渗透原的量可以为约2至70重量％(包括例如10至50重量％)。典型类型的合适的渗透剂是水溶性有机酸，盐和糖，其能够吸收水，从而在周围涂层的阻挡层上产生渗透压梯度。典型的有用的渗透原包括但不限于硫酸镁，氯化镁，氯化钙，氯化钠，氯化锂，硫酸钾，碳酸钠，亚硫酸钠，硫酸锂，氯化钾，硫酸钠，甘露醇，木糖醇，尿素，山梨醇，肌醇，棉子糖，蔗糖，葡萄糖，果糖，乳糖，柠檬酸，琥珀酸，酒石酸及其混合物。在某些实施例中，渗透原是葡萄糖，乳糖，蔗糖，甘露醇，木糖醇，氯化钠，包括其组合。
[0111] 药物递送的速率由诸如涂层的渗透性和厚度，含药层的渗透压、水凝胶层的亲水性程度以及装置的表面积等因素控制。本领域技术人员将理解，增加涂层的厚度将降低释放速率，而以下任何一种将增加释放速率：增加涂层的渗透性；增加水凝胶层的亲水性；增加含药层的渗透压；或增加装置的表面积。
[0112] 在某些实施例中，期望本文所述剂的粒子在此种渗透装置的操作期间被夹带在挤出流体中。为了使粒子能被充分地夹带，在粒子具有在片芯中沉降的机会之前便使剂剂型分散在流体中。实现这一点的一种方法是通过添加用于将压缩芯破碎成其颗粒组分的崩解剂。标准崩解剂的非限制性例子包括诸如羟基乙酸淀粉钠(例如淀粉钠TM CLV)，微晶纤维素(例如微晶纤维素TM)，微晶硅化纤维素(例如粟醇TM)和交联羧甲基纤维素钠(例如Ac-Di-SolTM)和本领域技术人员已知的其它崩解剂。根据具体的制剂，一些崩解剂比其它崩解剂更好。一些崩解剂由于遇水膨胀形成凝胶，从而会阻碍药物从装置中递送。当水进入核时，非胶凝、非溶胀性崩解剂提供芯内药物粒子的更快速分散。在某些实施例中，非胶凝、非溶胀性崩解剂是树脂，例如离子交换树脂。在一个实施例中，树脂是安博莱特TM IRP 88(购自罗门哈斯，费城(Rohm and Haas，Philadelphia)，PA)。当使用时，崩解剂以约1-25％的核剂的量存在。
[0113] 渗透装置的另一个例子是渗透胶囊。胶囊壳或胶囊壳的一部分可以是半透性的。胶囊可以由粉末或液体填充，所述粉末或液体由本文所述的试剂，吸收水以提供渗透势的赋形剂和/或水可溶胀的聚合物，或任选的增溶赋形剂组成。胶囊芯还可以这样制成：其具有类似于上述的双层，三层或同心几何形状的双层或多层试剂。
[0114] 可用于本发明的另一类渗透装置包括例如EP378404中所述的包衣的可膨胀片剂。包衣的可溶胀片剂包括包含本文所述试剂的片核和用膜包衣的溶胀材料，优选亲水性聚合物，所述膜包含洞，或孔，在水性使用环境中，亲水性聚合物可通过所述洞或孔挤出并运载药剂。或者，膜可含有聚合的或低分子量水溶性致孔剂。致孔剂溶解在水性环境中，产生亲水性聚合物和试剂可以通过并被挤出的孔。致孔剂的例子是水溶性聚合物如HPMC，PEG和低分子量化合物如甘油，蔗糖，葡萄糖和氯化钠。另外，通过使用激光或其它机械方法在涂层中钻孔也可以在涂层中形成孔。在这类渗透装置中，膜材料可包括任何成膜聚合物，包括水可渗透的或不可渗透的聚合物，条件是沉积在片核上的膜是多孔的或含有水溶性致孔剂或具有水侵入和药物释放的宏观孔。这种类型的持续释放装置的实施例也可以是多层的，例如，如EP378404中所述。
[0115] 当本文所述的试剂是液体或油，例如WO05/011634中所述的脂质媒介物制剂，渗透性控释装置可包含形成有复合壁并包含液体制剂的软凝胶或明胶胶囊，其中所述壁包括在所述胶囊的外表面上形成的阻挡层，在所述阻挡层上形成的可膨胀层，以及在所述可膨胀层上形成的半渗透层。递送端口将液体制剂与含水使用环境连接。这样的装置在例如US6419952，US6342249，US5324280，US4672850，US4627850，US4203440和US3995631中描述。
[0116] 如上文进一步指出的，本文所述的试剂可以以微粒的形式提供，通常尺寸范围为约10μm至2mm(包括例如直径为约100μm至1mm)。这种多颗粒可以包装在例如胶囊(如明胶胶囊或由水溶性聚合物如HPMCAS，HPMC或淀粉形成的胶囊)中；作为液体中的悬浮液或浆液定量给药；或者它们可通过压制或本领域已知的其它方法形成片剂，囊片或丸剂。这种多颗粒可以通过任何已知的方法制备，例如湿法和干法制粒法，挤出/滚圆，辊压，熔融凝固或通过喷涂包衣种子核。例如，在湿法和干法制粒方法中，本文所述的试剂和任选的赋形剂可以被制粒以形成所需尺寸的多颗粒。
[0117] 所述试剂可以掺入微乳液中，所述微乳液通常是通过表面活性剂分子的界面膜稳定的两种不混溶液体(例如油和水)的热力学稳定的、各向同性透明分散体(制剂技术百科全书(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology)，纽约(New York)：Marcel Dekker，1992，第9卷)。对于微乳液的制备，需要表面活性剂(乳化剂)，辅助表面活性剂(助乳化剂)，油相和水相。合适的表面活性剂包括可用于制备乳液的任何表面活性剂，例如通常用于制备乳膏的乳化剂。辅助表面活性剂(或“共乳化剂”)通常选自聚甘油衍生物，甘油衍生物和脂肪醇。优选的乳化剂/辅助乳化剂组合通常并不一定选自以下组：单硬脂酸甘油酯和聚氧乙烯硬脂酸酯；聚乙二醇和棕榈酸硬脂酸乙二醇酯；和辛酸和癸酸甘油三酯和油酰基聚乙二醇甘油酯。水相不仅包括水，还通常包括缓冲液，葡萄糖，丙二醇，聚乙二醇，优选低分子量聚乙二醇(例如PEG300和PEG400)和/或甘油等，而油相将通常包括例如脂肪酸酯，改性植物油，硅油，单甘油酯、二甘油酯和三甘油酯的混合物，PEG的单酯和二酯(例如油酰聚乙二醇甘油酯)等。
[0118] 本文所述的化合物可以掺入到药学上可接受的纳米颗粒、纳米球和纳米胶囊制剂中(Delie和Blanco-Prieto，2005，分子(Molecule)10：65-80)。纳米胶囊通常可以以稳定和可再现的方式捕获化合物。为了避免由于细胞内聚合物过载造成的副作用，可以使用能够在体内降解的聚合物(例如可生物降解的聚烷基氰基丙烯酸酯纳米颗粒)设计超细颗粒(尺寸为约0.1μm)。这样的颗粒在现有技术中被描述。
[0119] 本发明的另一个实施例是涂有本发明化合物的可植入装置。所述化合物还可以涂覆在可植入的医疗装置上，例如珠粒，或与聚合物或其它分子共同配制，以提供“药物贮库”，从而允许药物在比给药药物水溶液长的时间段内被释放。合适的涂层和涂覆的可植入装置的一般制备描述于美国专利No.6,099,562；5,886,026；和5,304,121中。涂层通常是生物相容性聚合材料，例如水凝胶聚合物，聚甲基二硅氧烷，聚己内酯，聚乙二醇，聚乳酸，乙烯-乙酸乙烯酯及其混合物。涂层可以任选地被氟硅氧烷，多糖，聚乙二醇，磷脂或其组合的合适的面涂层进一步覆盖，从而为组合物中赋予控释特性。
[0120] 制剂包括适合本文详述的给药途径的那些制剂。制剂可以方便地以单位剂型存在，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。技术和制剂通常可见于雷明顿(Remington's)。这样的方法将活性成分与由一种或多种辅助成分构成的的载体相结合的步骤。通常，制剂通过将活性成分与液体载体和/或细碎的固体载体均匀且密切地混合，然后如果需要，使产品成型来制备。
[0121] 关于本发明的化合物，组合物或制剂的术语“给药(“administer”“administering”或“administration”)是指将化合物引入需要治疗的动物系统中。当本发明的化合物与一种或多种其它活性剂组合提供时，“给药”及其变型各自被理解为包括同时和/或顺序引入化合物和其它活性剂。
[0122] 本文所述的组合物可以全身或局部给药，例如：口服(例如使用胶囊，粉末，溶液，悬浮液，片剂，舌下片剂等)，通过吸入(例如使用气溶胶，气体，吸入器，喷雾器等)，耳用的(例如使用滴耳剂)，局部使用(例如使用乳膏，凝胶，搽剂，洗剂，软膏，糊剂，透皮贴剂等)，眼用的(例如用滴眼剂，眼用凝胶，眼用软膏)，直肠的(例如使用灌肠剂或栓剂)，经鼻，经颊，经阴道(例如使用灌洗器，子宫内装置，阴道栓剂，阴道环或片剂等)，经由植入的储库等或非肠道的，其它取决于所治疗疾病的严重性和类型的方式。本文所用的术语“肠胃外”包括但不限于皮下，静脉内，肌内，关节内，滑膜内，胸骨内，鞘内，肝内，病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物经口，腹膜内或静脉内给药。
[0123] 本文所述的药物组合物可以以任何口服可接受的剂型口服给药，包括但不限于胶囊，片剂，水性悬浮液或溶液。用于口服给药的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳剂，微乳剂，溶液剂，混悬剂，糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型可以含有本领域通常使用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苄基醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油(特别是棉籽油，花生油，玉米油，胚芽油，橄榄油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇和山梨糖醇酐的脂肪酸酯及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括佐剂，例如润湿剂，乳化剂和悬浮剂，甜味剂，调味剂和芳香剂。
[0124] 用于口服给药的固体剂型包括胶囊，片剂，丸剂，粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体相混合，所述惰性的药学上可接受的赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或a)填充剂或增量剂，如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇和硅酸，b)粘合剂，例如羧甲基纤维素，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂如甘油，d)崩解剂如琼脂，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，藻酸，某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶解阻滞剂，例如石蜡，f)吸收促进剂，例如季铵化合物，g)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h)吸附剂，如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，如滑石，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，月桂基硫酸钠及其混合物。片剂可以是未包衣的，或者可以通过包括微囊包封的已知技术包衣，以掩盖令人不快的味道或延迟在胃肠道中的崩解和吸附，从而提供更长时间的持续作用。例如，可以使用延时材料，例如单独使用单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或将其与蜡一起使用。可以使用水溶性掩味材料，例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素。
[0125] 适合于口服给药的表1A或表1B中的化合物的制剂可以制备为独立单元，例如片剂，丸剂，糖锭，锭剂，水性或油性悬浮液，可分散粉末或颗粒，乳液，硬或软胶囊，例如明胶胶囊，糖浆或酏剂。用于口服使用的化合物的制剂可以根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法制备。
[0126] 压制片可通过在合适的机器中压制自由流动形式的活性成分来制备，该自由流动形式如粉末或颗粒，任选地混合有粘合剂，润滑剂，惰性稀释剂，防腐剂，表面活性剂或分散剂。模制片剂可以通过在合适的机器中对惰性液体稀释剂润湿的粉末状活性成分的混合物压膜来制备。
[0127] 用于口服使用的制剂也可以是硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙，磷酸钙或高岭土混合；或者是软明胶胶囊，其中活性成分与水溶性载体如聚乙二醇或油介质，例如花生油，液体石蜡或橄榄油混合。
[0128] 活性化合物也可以与一种或多种如上所述的赋形剂形成微胶囊化形式。
[0129] 当需要水性混悬剂用于口服使用时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂组合。如果需要，可以加入某些甜味剂和/或调味剂。糖浆和酏剂可以用甜味剂例如甘油，丙二醇，山梨醇或蔗糖配制。这样的制剂还可以含有缓和剂，防腐剂，调味剂，着色剂和抗氧化剂。
[0130] 本文所述的组合物的无菌可注射形式(例如用于胃肠外给药)可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的载体和溶剂是水，林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，因为它们是天然药学上可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油，特别是其聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的通常在制备包括乳剂和混悬剂的药学上可接受的剂型中使用的分散剂。其它常用的表面活性剂也可用于注射制剂的目的，该表面活性剂例如吐温，司盘和通常用于制备药学上可接受的固体，液体或其它剂型的其它乳化剂或生物利用度增强剂。
[0131] 油性悬浮液可以通过将表1A或表1B中的化合物悬浮在植物油(例如花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油)中或在矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油性悬浮液可以含有增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或鲸蜡醇。可以加入如上所述的甜味剂和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂如丁基化羟基茴香醚或α-生育酚来保存。
[0132] 表1A或表1B中的化合物的水性悬浮液含有与适于制备水性悬浮液的赋形剂混合的活性物质。这样的赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，交联羧甲基纤维素，聚维酮，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍胶和阿拉伯树胶；以及分散剂或润湿剂如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，环氧烷与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七碳乙烯氧鲸蜡醇)，环氧乙烷与衍生自脂肪酸的偏酯和己糖醇酐的缩合产物(例如，聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯)。水性悬浮液还可以含有一种或多种防腐剂(例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸丙酯)，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。
[0133] 可注射制剂可例如通过细菌截留过滤器过滤或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂来灭菌，所述无菌固体组合物可以溶解或分散在无菌水或其他无菌可注射介质中以供使用。
[0134] 为了拓展本文所述的化合物的效果，通常希望减慢皮下或肌内注射中化合物的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。这样化合物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体尺寸和晶体形式。或者，胃肠外给药的化合物形式的延迟吸收通过将化合物溶解或悬浮在油性载体中来实现。可注射的贮库形式通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微囊化基质来制备。根据化合物与聚合物的比例和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物释放的速率。其它可生物降解的聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。贮库型可注射制剂也可通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备。
[0135] 可注射溶液或微乳液可通过局部推注注射到患者的血流中。可选地，可能有利的是，以维持本发明化合物的恒定循环浓度的方式施用溶液或微乳液。为了保持这样的恒定浓度，可以使用连续静脉内递送装置。这种装置的例子是Deltec CADD-PLUSTM模型5400静脉内泵。
[0136] 用于直肠或阴道给药的组合物优选为栓剂，其可通过将本文所述的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体(例如可可脂，蜂蜡，聚乙二醇或栓剂蜡)混合来制备，所述赋形剂或载体在环境温度下为固体，但在身体温度下是液体，因此在直肠或阴道腔中融化并释放活性化合物。适合于阴道给药的其它制剂可以为阴道栓剂，棉塞，霜剂，凝胶剂，糊剂，泡沫剂或喷雾剂。
[0137] 本文所述的药物组合物还可以局部给药，特别是当治疗的靶标包括通过局部应用容易接近的区域或器官，包括眼睛，耳朵，皮肤或下肠道疾病时。为这些区域或器官中的每一个制备合适的局部制剂是容易实现的。
[0138] 用于本文所述化合物的局部或透皮给药的剂型包括软膏，糊剂，乳膏，洗剂，凝胶，粉剂，溶液，喷雾剂，吸入剂或贴剂。将活性组分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂或缓冲剂混合可能是需要的。眼用制剂，滴耳剂和滴眼剂也在本发明的范围内。另外，本发明考虑使用透皮贴剂，其具有向身体提供化合物的受控递送的优势。这样的剂型可以通过将化合物溶解或分散在适当的介质中来制备。吸收增强剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。下肠道的局部应用可以在直肠栓剂制剂(见上文)或合适的灌肠剂制剂中进行。也可以使用局部透皮贴剂。
[0139] 对于局部应用，药物组合物可以配制成含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性成分的合适软膏剂。用于局部给药本发明化合物的载体包括但不限于矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯化合物，乳化蜡和水。或者，可将药物组合物配制成含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分的合适的洗剂或霜剂。合适的载体包括但不限于矿物油，脱水山梨醇单硬脂酸酯，聚山梨酯60，鲸蜡酯蜡，鲸蜡硬脂醇，2-辛基十二烷醇，苄醇和水。
[0140] 对于眼科用途，可以将药物组合物配制成等渗的，pH可调节的无菌盐水中的微粉化悬浮液，或者优选地，制成等渗的，pH可调节的无菌盐水中的溶液，具有或不具有防腐剂，例如苄基烷基氯化铵。或者，对于眼科用途，药物组合物可配制成软膏剂，如凡士林。为了治疗眼睛或其它外部组织，例如口腔和皮肤，制剂可作为含有例如0.075至20％重量比的活性成分的局部软膏或乳膏应用。当配制在软膏中时，活性成分可以与油基，石蜡基或水混溶性软膏基质一起使用。
[0141] 或者，活性成分可以与水包油乳膏基质一起配制成乳膏。如果需要，乳膏基质的水相可以包括多元醇，即具有两个或多个羟基的醇，例如丙二醇，丁-1,3-二醇，甘露醇，山梨醇，甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)和它们的混合物。理想地，局部制剂可以包括能够增强活性成分通过皮肤或其它受影响区域的吸收或渗透的化合物。这种皮肤渗透增强剂的例子包括二甲基亚砜和相关的类似物。
[0142] 使用表1A或表1B中的化合物制备的乳剂的油相可以以已知方式由已知成分构成。尽管所述相可仅包含乳化剂(或称为乳化剂)，其理想状况下应包含至少一种乳化剂与脂肪、油或脂肪和油两者的混合物。亲水性乳化剂可以与作为稳定剂的亲脂性乳化剂一起包含。在一些实施例中，乳化剂包括油和脂肪。同时，具有或不具有稳定剂的乳化剂一起构成所谓的乳化蜡，并且蜡与油和脂肪一起构成所谓的乳化软膏基质，由其形成霜剂的油性分散相制剂。适用于表1A或表1B中的化合物的制剂的乳化剂和乳液稳定剂包括吐温TM-60，司TM
盘 -80，鲸蜡硬脂醇，苄醇，肉豆蔻醇，单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
盘 -80，鲸蜡硬脂醇，苄醇，肉豆蔻醇，单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。
[0143] 药物组合物也可以通过鼻气雾剂或通过吸入给药。这样的组合物根据药物制剂领域熟知的技术制备，并且可以使用苯甲醇或其它合适的防腐剂，增强生物利用度的吸收促进剂，碳氟化合物和/或其它常规的增溶剂或分散剂制备为盐水溶液。适于肺内或鼻内给药的制剂具有例如在0.1至500微米范围内的粒度(包括在0.1微米与500微米之间的范围内的粒子，增量为微米，例如0.5，1，30，35微米等)，其通过经鼻通道快速吸入或经口吸入以达到肺泡囊给药。
[0144] 供使用的药物组合物(或制剂)可以多种方式包装，具体取决于施用药物所用的方法。通常，用于分配的制品包括以适当形式沉积在容器中的药物制剂。合适的容器是本领域技术人员公知的，并且包括诸如瓶(塑料和玻璃)，小袋，安瓿，塑料袋，金属圆筒等材料。容器还可以包括防干扰装置以防止不慎触碰包装的内容物。此外，容器上标识有描述容器内容物的标签。标签还可以包括适当的警告。
[0145] 制剂可以包装在单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶中，并且可以在仅需要加入无菌液体载体(例如水)的冷冻干燥(冻干)条件下储存，用于注射立即使用。临时注射溶液和悬浮液由前述类型的无菌粉末，颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是含有活性成分的如上文所述的每日剂量或单位每日亚剂量或其适当部分的那些。
[0146] 在另一方面，表1A或表1B中的化合物或其药学上可接受的盐可以配制在包含兽医用载体的兽医用组合物中。兽医用载体是用于给药组合物目的的材料，并且可以是固体，液体或气体材料，其在兽医领域中是惰性的或可接受的，并且与活性成分相容。这些兽医用组合物可以通过肠胃外，口服或任何其它所需途径给药。
[0147] 治疗方法
[0148] 在另一方面，本发明涉及通过在有需要的患者中单独或组合使用sGC刺激剂，或其药学上可接受的盐或包含它们的药物组合物来治疗某些疾病。
[0149] 本文涉及可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的刺激剂，其药物制剂及其单独或与一种或多种另外的试剂组合用于治疗和/或预防各种疾病的用途，其中NO的浓度或cGMP的浓度的增加是可期望的。
[0150] 组织中产生的NO增加或cGMP浓度增加可导致血管舒张，从而抑制血小板聚集和粘附，产生抗高血压作用，抗重塑作用，抗纤维化，抗凋亡作用，抗炎作用和神经元信号传输效应等。
[0151] 在其它实施例中，本文公开的化合物是sGC刺激剂，其可用于预防和/或治疗生物系统(例如人体)中以NO的生物利用度和/或对NO敏感性不期望降低为特征的疾病和病症，例如那些与氧化应激或亚硝化应激相关的病症。
[0152] 本文所用的术语“心血管疾病”(或“心血管病症”)是指基于循环器官如心脏，血管(动脉，毛细血管和静脉)或心脏和血管的异常症状的疾病。该术语还包括通常影响心血管系统的任何疾病，包括心脏疾病，脑血管疾病，肾脏、肝脏和相关器官的血管疾病，或肺和外周动脉疾病等。
[0153] “sGC相关的心血管疾病”是一种已知或怀疑涉及NO/sGC/cGMP系统的心血管疾病，并且是可以通过sGC活化/刺激，通过激活NO合成酶，或通过添加NO或NO-供体或NO前体如L-精氨酸或L-瓜氨酸，或通过抑制负责分解cGMP的PDE(磷酸二酯酶)酶，或上述方法的任意组合来治疗或预防的心血管疾病。
[0154] 本文所用的术语“血管舒张”是指血管变宽。它源自血管壁内的平滑肌细胞的松弛，特别是在大静脉，大动脉和更小的小动脉中。实质上，该过程与“血管收缩”相反，“血管收缩”是血管变窄。当血管扩张时，血液的流动因血管阻力的降低而增加。因此，动脉血管(主要是小动脉)的扩张降低了血压。响应可以是内在的(周围组织中的局部过程)或外在的(激素或神经系统)。此外，响应可以定位于特定器官(取决于特定组织的代谢需要，如在剧烈运动期间)，或者其可以是全身的(整个系统循环)。
[0155] 如本文所用的术语“血管收缩”是指由于肌肉收缩导致的血管变窄。血管收缩是身体调节和维持平均动脉压(MAP)的一种机制。全身性血管收缩通常导致体循环血压的增加，但它也可能发生在特定组织中，导致血流量的局部减少。
[0156] 如本文所使用的，术语“支气管收缩”用于定义肺中气道的收缩，这是由于周围平滑肌的收紧，随之发生咳嗽，喘息和气短。该病症有多种原因，最常见的是哮喘。运动和过敏可以导致无症状个体中的其它病症。其他病症如慢性阻塞性肺病(COPD)也可以伴随支气管收缩。
[0157] 在本文中，术语“高血压”，“动脉高血压”或“高血压(HBP)”可互换使用，并且是指极其常见且高度可预防的慢性病症，其中动脉中的血压高于正常的或期望的。如果没有适当控制，它代表了几种严重的心血管和肾脏疾病的重要危险因素。高血压可以是称为“原发性高血压”或“特发性高血压”的原发疾病，或者其可以由其他疾病引起或与其他疾病相关，在这种情况下，其被分类为“继发性高血压”。原发性高血压占所有病例的90-95％。
[0158] 如本文所使用的术语“顽固高血压”是指即便同时使用属于不同抗高血压药物类别的三种抗高血压药物，仍然保持高于目标血压的高血压(通常小于140/90mmHg，尽管对于同时患有糖尿病或肾脏疾病的患者推荐的目标低于130/80mmHg)。需要四种或更多种药物来控制其血压的人也被认为具有顽固高血压。高血压是糖尿病中极为常见的共病病症，根据肥胖、种族和年龄，影响着约20-60％的糖尿病患者。这种类型的高血压在本文中被称为“糖尿病性高血压”。在2型糖尿病中，胰岛素抗性代谢综合征(也包括向心性肥胖和血脂异常)的一部分而存在。在1型糖尿病中，高血压可反映糖尿病肾病的发病。
[0159] 如本文所使用的，“肺高血压(PH)”是以肺血管(肺动脉，肺静脉和肺毛细血管)中血压的持续升高为特征的疾病，其可导致右心肥大，最终导致右心衰竭和死亡。PH的常见症状包括呼吸急促，头晕和昏厥，所有这些都因劳累而加剧。在不治疗的情况下，确诊后的平均预期寿命为2.8年。PH存在许多不同的形式，其根据它们的病因分类，类别包括肺动脉高压(PAH)，具有左心脏病的PH，与肺部疾病和/或低氧血症相关的PH，由于慢性血栓形成和/或栓塞性疾病的PH和杂项PH。PAH在一般人群中是罕见的，但流行性会与某些常见病症例如HIV感染，硬皮病和镰状细胞病相关性的增加。其他形式的PH通常比PAH更常见，并且例如，PH与慢性阻塞性肺病(COPD)的关联尤其引人关注。肺动脉高压的当前治疗取决于疾病的阶段和机制。
[0160] 术语“冠状动脉疾病”是指供向心肌的血液供应被部分或完全阻断的状况(心肌或心肌的缺血)。这种供向心肌的血液减少可能导致许多“急性心肌综合征”：胸痛(“心绞痛”，稳定或不稳定)和不同类型的心脏病发作(“心肌梗塞”或MI)。冠状动脉疾病的一个常见原因是“动脉粥样硬化”，指由于动脉壁中的脂肪沉积而导致的动脉硬化，然后通过动脉粥样硬化斑块的形成而发展，缩窄并最终阻塞动脉中的血流。这种动脉粥样硬化的过程也可能影响其他动脉，而不仅仅是心脏的动脉。血凝块是动脉阻塞的最常见原因，通常是动脉由于动脉粥样硬化斑块(动脉粥样化)而已经部分阻塞，粥样斑块可能破裂或撕裂，最终导致凝块形成。偶尔地，冠状动脉疾病是由冠状动脉的痉挛引起的，其可以自发地或作为使用某些药物(例如可卡因，尼古丁)的结果而发生。罕见的，冠状动脉疾病的原因是出生缺陷，病毒感染(例如，川崎病)，系统性红斑狼疮(红斑狼疮)，动脉炎症(动脉炎)，从心室转移到冠状动脉的血凝块或物理损伤(例如，来自损伤或放射治疗)产生的血凝块。
[0161] 本文所用的“不稳定心绞痛”是指心绞痛症状模式的变化，包括长期或恶化的心绞痛和严重症状的新发作。
[0162] MI可以分为两种类型：“非ST段抬高”MI和“ST段抬高”MI。急性冠状动脉综合征的并发症取决于冠状动脉阻塞的程度，时间和位置。如果阻塞影响大量的心肌，则心脏将不能有效地泵送。如果阻塞阻断了血液流向心脏的电系统，心脏节律可能受到影响。当心脏病发作时，心肌的一部分死亡。死亡组织和代替它的瘢痕组织不收缩。当心脏的其余部分试图收缩时，瘢痕组织有时甚至扩张或凸起。因此，只有较少的肌肉来泵血。如果足够多的肌肉死亡，心脏的泵送能力可能被降低，使得心脏不能满足身体对氧气和血液的需求，心力衰竭，低血压或两者都会发生。如果一半以上的心肌损伤或死亡，心脏通常不能发挥功能，导致严重的功能丧失或死亡。
[0163] 如本文所使用的，“心力衰竭”(HF)是左心室(LV)心肌重塑的进行性病症，最终导致复杂的临床综合征，其中受损的心脏功能和循环充血是确定的特征，并且造成到达身体组织的血液和营养物质递送不足。当心脏受损或过度工作并且不能从体循环泵出所有返回的血液时，这种情况就会发生。随着较少的血液被抽出，返回到心脏的血液倒流，并且体液积聚在身体的其他部分。心力衰竭也损害肾脏处理钠和水的能力，进一步并发液体潴留。心力衰竭以自主神经功能障碍，神经激素激活和细胞因子的过度产生为特征，导致进行性循环衰竭。心力衰竭的症状包括：由于突然的呼吸困难而在夜间运动或休息和醒来时的呼吸困难(呼吸急促)，两者都表现为肺水肿；一般疲劳或虚弱；脚、脚踝和腿水肿；快速增重；慢性咳嗽，包括产生粘液或血液。根据其临床表现，心力衰竭被分类为新发，短暂，急性，急性后期或慢性。急性心力衰竭(即，需要紧急治疗的症状的快速或逐渐发作)可以为新发的或作为转化为失代偿性的慢性心力衰竭的结果而发生。术语“心力衰竭”通常用于表示“慢性心力衰竭”。术语“充血性心力衰竭(CHF)”或“充血性心脏衰竭(CCF)”通常与慢性心力衰竭互换使用。心力衰竭的常见原因包括冠状动脉疾病，包括先前的心肌梗塞(心脏病发作)，高血压，心房颤动，瓣膜性心脏病和心肌病。这些是通过心脏的结构或功能改变而导致的心力衰竭。
[0164] 存在两种主要类型的心力衰竭：“由于减少射血分数(HFREF)导致的心力衰竭”，也称为“由于左心室收缩功能障碍导致的心力衰竭”或“收缩性心力衰竭”；和“具有保留射血分数(HFPEF)的心力衰竭”，也称为“舒张性心力衰竭”或“具有正常射血分数的心力衰竭(HFNEF)”。射血分数是在单次收缩期间从心脏泵出的心脏中的血液比例。它是一个正常值在50％和75％之间的百分比。
[0165] 术语“急性”(如在“急性HF”中)用于表示快速发作，而“慢性”指长持续时间。慢性心力衰竭是一种长期情况，通常具有稳定的治疗症状。“急性失代偿性”心力衰竭是恶化或代偿失调的心力衰竭，指一个人可以被表征为具有导致需要紧急治疗或住院的心力衰竭体征和症状的变化的发作。心力衰竭也可在高输出(其被称为“高输出心脏衰竭”)的情况下发生，其中心室收缩功能是正常的，但是心脏不能处理血液体积的增加这一重要情况。
[0166] 在心血管生理学中，术语“射血分数(EF)”定义为在每个心跳或心动周期中泵出的左心室和右心室中的血液分数。在医学成像允许的有限数学中，EF被应用于右心室，其通过肺动脉瓣将血液喷射到肺循环中；或左心室，其通过主动脉瓣将血液喷射到脑和系统循环中。
[0167] 术语“具有保留射血分数(HFPEF)的心力衰竭”通常被理解为是指射血分数大于55％的心力衰竭的体征和症状的表现。其特征在于左心室顺应性的降低，导致左心室中的压力增加。由于左心室功能不良，HFPEF常常增加左心房大小。对于充血性心力衰竭，心房颤动和肺动脉高压的风险增加。危险因素是高血压，高脂血症，糖尿病，吸烟和阻塞性睡眠呼吸暂停。在这种类型的心力衰竭中，心肌很好地收缩，但是心室在舒张期没有充满血液。
[0168] 术语“具有减少射血分数(HFREF)的心力衰竭”是指其中射血分数小于40％的心力衰竭。
[0169] 糖尿病是患有心力衰竭的患者的常见并发症，并且与较差的预后以及潜在地影响治疗效果相关。其他重要的并发症包括系统性高血压，慢性气流阻塞，睡眠呼吸暂停，认知功能障碍，贫血，慢性肾脏疾病和关节炎。慢性左心衰竭经常与肺动脉高压的发展相关。某些并发症的频率因性别而异：在女性中，高血压和甲状腺疾病更常见，而男性更常见患有慢性阻塞性肺病(COPD)，外周血管疾病，冠状动脉疾病和肾功能不全。抑郁症是心力衰竭的常见并发症，并且这两种情况可以并且常常使彼此复杂化。恶病质长期以来被认为是心力衰竭的严重且频繁的并发症，影响高达15％的心力衰竭患者并与不良预后相关。心脏恶病质被定义为在6个月的期间内非水肿性、非自愿性的至少6％的体重损失。
[0170] 本文所用的术语“心律失常”是指在超过90％的已患有心脏病发作的人中发生的异常心律。有时，问题在于心脏触发心跳的那一部分，心率可能太慢，或者心脏跳动太快或不规则。有时，脉冲信号不是从心脏的一部分传导到另一部分，并且心跳可能减慢或停止。此外，心肌的未死亡但血流量差的区域可能是易激活的。这导致心脏节律问题，例如室性心动过速或心室纤维性颤动。如果心脏完全停止泵送，这可能导致心跳骤停。
[0171] “心包膜”是围绕心脏的袋或膜。该膜的“心包炎”或炎症可能发展为心脏病发作，并可能会导致发热，心包积液，覆盖肺部(胸膜)的膜炎症，胸腔积液和关节疼痛。心脏病发作后的其他并发症可以包括二尖瓣故障，心脏肌肉的断裂，心室(室瘤)壁上的凸起，血块和低血压。
[0172] 术语“心肌病”是指心脏腔室肌肉壁的结构和功能的逐渐损害。心肌病的主要类型是扩张，肥厚和限制性。心肌病常常引起心脏衰竭的症状，它们也可能会引起胸痛，昏厥和猝死。
[0173] 术语“二尖瓣回流”，“二尖瓣反流”，“二尖瓣关闭不全”或“二尖瓣功能不全”是指心脏的二尖瓣不能紧密闭合，允许血液在心脏内回流的情况。结果，血液不能有效地流动通过心脏或身体的其余部分，导致疲劳或呼吸短促。
[0174] 术语“睡眠呼吸暂停”是指最常见的睡眠障碍性呼吸障碍。该病症特征在于气流的间歇性，周期性减少或完全停止，其可以涉及或不涉及上呼吸道的阻塞。有三种类型的睡眠呼吸暂停：阻塞性睡眠呼吸暂停(最常见的形式)，中枢性睡眠呼吸暂停和混合性睡眠呼吸暂停。
[0175] “中枢性睡眠呼吸暂停(CSA)”是由大脑中的呼吸正常信号故障引起的，而不是气道的物理阻塞。呼吸运作的缺乏导致血液中二氧化碳的增加，这可能使患者发热。CSA在一般人群中是罕见的，但是在收缩性心力衰竭患者中是相对常见的。
[0176] 本文中所用的术语“代谢综合征”，“胰岛素抵抗综合征”或“综合征X”是指代谢病症(腹部肥胖，升高的空腹血糖，“血脂异常”，(即升高的脂质水平)和升高的血压(HBP))的组或群，其一起发生比偶然地单独发生更常见，并且同时促进2型糖尿病和心血管疾病的发展。代谢综合征的特征在于增加的甘油三酯，降低的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-胆固醇)和在一些情况下中等升高的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-胆固醇)水平的特定脂质谱，以及由于组成部分危险因素的压力引起的加速发展的“动脉粥样硬化疾病”。有几种类型的血脂异常：“高胆固醇血症”是指升高的胆固醇水平；家族性高胆固醇血症是由于染色体19(19p13.1-13.3)上的缺陷引起的高胆固醇血症的特定形式。“高甘油酯血症”是指升高的甘油酯水平(例如，“高甘油三酯血症”涉及升高的甘油三酯水平)；“高脂蛋白血症”是指升高的脂蛋白(通常是LDL，除非另有说明)水平。
[0177] 术语“脂肪变性”是指细胞内脂质的异常保留。它通常反映甘油三酯的合成和消除的正常过程的损害。过量的脂肪积累在置换细胞的细胞质的囊泡中。在严重的情况下，细胞可能爆裂。由于肝是主要与脂肪代谢相关的器官，因此通常在肝脏中观察到脂肪变性。它也可以在心脏，肾脏和肌肉组织中观察到。
[0178] 本文所用的术语“外周血管疾病(PVD)”，通常也称为“外周动脉疾病(PAD)”或“外周动脉闭塞性疾病(PAOD)”，是指冠状动脉，主动脉弓脉管系统或脑内以外的大动脉的阻塞。PVD可由导致狭窄，栓塞，血栓形成或其它类型闭塞的动脉粥样硬化、炎症过程引起。它导致急性或慢性“缺血(缺血供应)”。通常，PVD是用于指在下肢中发现的动脉粥样硬化阻塞的术语。PVD还包括归类为由动脉的发作性狭窄(例如，“雷诺现象”)或其扩张(红斑性肢痛症)即血管痉挛引起的微血管疾病的一类疾病。外周动脉疾病包括闭塞性血栓性血管炎，外周动脉闭塞性疾病，雷诺氏病和雷诺氏综合征。常见的症状为冷腿或冷脚，间歇性跛行，下肢疼痛和严重肢体缺血(下肢溃疡和坏死)。外周动脉疾病的诊断和治疗指南可以在欧洲血管与血管外科杂志(Eur.J.Vasco Endovasc.Surg)，2007，33(1)，S1中找到。
[0179] 如本文所用的术语“狭窄”是指血管或其他管状器官或结构中的异常变窄。它有时也被称为“狭窄”(如在尿道狭窄中)。术语“缩窄”是同义词，但通常仅在主动脉缩窄的上下文中使用。术语“再狭窄”是指手术后狭窄的复发。
[0180] 术语“血栓形成”是指血管内的血块(“血栓”)形成，阻碍血液通过循环系统的流动。当血管损伤时，身体使用血小板(凝血细胞)和纤维蛋白形成血凝块以防止失血。或者，即使血管没有受伤，如果适当的条件存在，在身体中也可能形成血块。如果凝血过于严重并且凝块断裂，则移动的凝块被称为“栓塞”。术语“血栓栓塞”是指血栓形成及其主要并发症“栓塞”的组合。当血栓占据动脉管腔表面积的75％以上时，由于氧气减少(缺氧)和代谢产物如乳酸的积累(“痛风”)，提供给组织的血流减少到足以引起症状。超过90％的阻塞可导致缺氧，氧完全耗竭和“梗死”，是细胞死亡的模式。
[0181] “栓塞”(多种栓塞)是栓塞物(在远离其起点的位置处能够阻塞动脉毛细血管床的脱离的血管内物质)进入动脉床的窄毛细管中的事件，其导致身体的远端阻塞(血管闭塞)。这不能与在原发部位阻塞的血栓混淆。形成栓塞的材料可能具有许多不同的来源：如果材料是血液，则“栓塞”被称为“血栓”；固体材料还可以包括脂肪，细菌残渣，感染的组织等。
[0182] “缺血”是对组织的血液供应的限制，导致细胞代谢(以保持组织存活)所需的氧和葡萄糖不足。缺血通常由血管的问题引起，导致组织损伤或组织功能障碍。它还意味着有时由充血(例如血管收缩，血栓形成或栓塞)引起的身体特定部分中的局部贫血。如果“缺血”发生在心肌(或“心肌”)中，则缺血被称为心肌缺血。其他类型的缺血包括例如脑缺血，严重肢体缺血等。
[0183] 当在一段时间的缺血后血液供应返回组织时，发生“再灌注”。在恢复到组织的循环时，可以发展炎症和氧化应激过程。这种事件链的一个例子是与器官移植相关的缺血再灌注。
[0184] “再灌注损伤”是在缺血和炎症之后血液供应返回组织时引起的组织损伤，并且随后发生氧化损伤而不是正常功能的恢复。缺血性再灌注问题通常与微血管损伤相关，特别是由于毛细血管和小动脉的渗透性增加，导致跨越组织的扩散和流体过滤的增加。活化的内皮细胞在再灌注后产生更多的活性氧、更少的NO，该不平衡导致炎症反应。通过新返回的血流携带到该区域的白细胞响应于组织损伤释放许多炎性因子和自由基。恢复的血流带来损伤细胞蛋白，DNA和质膜的氧。缺血再灌注的这种过程也被认为是造成伤口愈合缓慢(例如，压疮或糖尿病性溃疡)和失败的原因。
[0185] 本文使用的术语“血管病”是血管(动脉，静脉和毛细血管)疾病的通用术语。最常见和最普遍的血管病是“糖尿病血管病”，慢性糖尿病的常见并发症。另一种常见的血管病是“大脑淀粉样血管病”(CAA)，也称为嗜神经血管病，其中淀粉样沉积物形成在中枢神经系统的血管壁中。使用术语嗜刚果红是因为淀粉样蛋白的异常聚集的存在可以通过应用称为刚果红的特殊染色剂之后的脑组织的显微镜检查来说明。淀粉样蛋白物质仅存在于脑中，因此该疾病与其它形式的淀粉样变性无关。
[0186] “中风”或脑血管意外(CVA)是由于对脑的血液供应的干扰而导致的脑功能的快速损失。这可能是由于阻塞(血栓形成，动脉栓塞，脂肪积聚或痉挛)或出血(血液渗漏)引起的“缺血”(血流缺乏，由此导致组织中氧和葡萄糖供应不足)。结果，大脑的受影响的区域不能起作用，这可能导致身体的一侧、一个或多个肢体不能移动，不能理解或形成语音，或者不能看到视野的一侧。中风的危险因素包括年龄增加，高血压，既往中风或短暂性脑缺血发作(TIA)，糖尿病，高胆固醇，吸烟和心房颤动。高血压是中风的最重要的可控的危险因素。“缺血性中风”有时在医院中通过血栓溶解(也称为"凝块溶解剂")加以治疗，并且一些出血性中风受益于神经外科手术。预防复发可能涉及施用抗血小板药物(例如阿司匹林和双嘧达莫)以及使用他汀类药物控制和降低高血压。一些患者可能受益于颈动脉内膜切除术和使用抗凝剂。
[0187] “血管性痴呆”是老年人痴呆的第二常见原因。它在男性中更常见，通常在70岁后开始。在患有血管风险因素(例如高血压，糖尿病，高脂血症，吸烟)和有几次中风的人中更常见。许多人同时患有血管性痴呆和阿尔茨海默病。血管性痴呆通常发生在多种小脑梗死(或有时出血)引起足够的神经元或轴突损失以脑功能损害时。血管性痴呆包括以下类型：多腔隙性梗死(其中小血管受影响，并且在半球白质和灰质深处出现梗死)；多梗塞性痴呆(其中中型血管受影响)；战略性单梗死性痴呆(其中单个梗死发生在脑的关键区域，例如角回或丘脑；宾斯万格(Binswanger)痴呆或皮质下动脉硬化性脑病(其中小血管性痴呆与严重的控制不佳的高血压和全身血管性疾病相关，并且其导致轴突和髓鞘的弥漫性和不规则损失，伴随着广泛的神经胶质增生，由于梗塞引起的组织死亡，或者脑部白质的血液供应损失)。
[0188] 术语“神经胶质瘤”是指始于脑或脊髓中的一种类型的肿瘤。由于它起源于神经胶质细胞，因此被称为神经胶质瘤。胶质瘤的最常见部位是脑。胶质瘤构成所有脑和中枢神经系统肿瘤的约30％和所有恶性脑肿瘤的80％。
[0189] 根据美国精神病学会的精神障碍的诊断和统计手册，第四版(American Psychiatric Association's Diagnostic and Statistical Manual of Mental
Disorders，Fourth Edition)(DSM-IV)，术语“性功能障碍”包括一系列病症，其特征在于与性反应周期相关的心理生理学上的性欲和失调变化”；而这种类型的问题是常见的，当问题对患者造成痛苦时，性功能障碍才被认为存在。性功能障碍可以是身体或心理原因。它可以作为主要病症存在，通常是激素性质的，尽管最常见的是继发于其他医学病症或用于所述病症的药物治疗。所有类型的性功能障碍可以进一步分类为终生，获得性，情境性或全身性(或其组合)。
Disorders，Fourth Edition)(DSM-IV)，术语“性功能障碍”包括一系列病症，其特征在于与性反应周期相关的心理生理学上的性欲和失调变化”；而这种类型的问题是常见的，当问题对患者造成痛苦时，性功能障碍才被认为存在。性功能障碍可以是身体或心理原因。它可以作为主要病症存在，通常是激素性质的，尽管最常见的是继发于其他医学病症或用于所述病症的药物治疗。所有类型的性功能障碍可以进一步分类为终生，获得性，情境性或全身性(或其组合)。
[0190] DSM-IV-TR指“女性性功能障碍”的五个主要类别：性欲/兴趣障碍；“性唤起障碍(包括生殖器，主观和综合)”；性高潮障碍；性交疼痛和阴道炎；和持续性性唤起障碍。
[0191] “女性性唤起障碍(FSAD)”定义为持续或重复无法获得或维持足够水平的性兴奋，导致个人痛苦。FSAD包括缺乏主观感觉的兴奋(即主观性性唤起障碍)和缺乏体细胞反应如润滑和肿胀(即生殖器/身体性唤起障碍)。FSAD可能是严格的心理原因，尽管它通常是由医学或生理因素引起或复杂化。雌激素降低是与FSAD相关的最常见的生理病症，其导致泌尿生殖器萎缩和阴道润滑的减少。
[0192] 如本文所使用的，“勃起功能障碍(ED)”是男性性功能障碍，其特征在于在性表现期间不能发展或保持阴茎勃起。阴茎勃起是血液进入和保留在阴茎内的海绵状体中的水力作用。当信号从大脑传递到阴茎中的神经时，该过程通常由于性唤起而引发。当勃起难以产生时，指示勃起功能障碍。最重要的有机原因是心血管疾病和糖尿病，神经学问题(例如，来自前列腺切除术手术的创伤)，激素不足(性腺功能减退)和药物副作用。
[0193] 在一个实施例中，作为sGC刺激剂的表1A或表1B中的化合物及其药学上可接受的盐因此可用于预防和/或治疗与循环相关的下列类型的心脏，肺，外周，肝，肾或脑血管/内皮疾患、病症和疾病：
[0194] ·与高血压和冠状动脉血流量减少有关的疾病；急性和慢性冠状动脉血压升高；动脉高血压；由心脏和肾脏并发症引起的血管疾病；由心脏病，中风，脑缺血或肾衰竭引起的血管疾病；耐药性高血压；糖尿病性高血压；原发性高血压；继发性高血压；妊娠期高血压；先兆子痫；门静脉高压；心肌梗死；
[0195] ·心力衰竭，HFPEF，HFREF；急性和慢性心力衰竭；更具体形式的HF：急性失代偿性HF，右心室衰竭，左心室衰竭，总HF，缺血性心肌病，扩张型心肌病，先天性心脏缺陷，瓣膜缺陷HF，二尖瓣狭窄，二尖瓣闭锁不全，主动脉瓣狭窄，主动脉瓣闭锁不全，三尖瓣狭窄，三尖瓣闭锁不全，肺动脉瓣狭窄，肺动脉瓣闭锁不全，瓣膜瓣合并缺损；糖尿病性心力衰竭；酒精性心肌病或储存性心肌病；舒张性HF，收缩性HF；现有慢性HF(恶化HF)的急性期；舒张或收缩功能障碍；冠状动脉功能不全；心律失常；减少心室负荷；心脏肥大；心力衰竭/心肌综合征；门静脉高压；内皮功能障碍或损伤；房室节律和传导障碍：I-III级房室传导阻滞(AVBI-III)，室上性心率加快，心房颤动，心房扑动，心室颤动，心室扑动，室性心动过速，扭转性偏头痛心动过速，心房和室性早搏，AV结期外收缩，病态窦综合征，晕厥，AV结再折叠性心动过速；沃尔夫-帕金森-怀特氏(Wolff-Parkinson-White)综合征或急性冠状动脉综合征；拳击手心肌病；早期心室收缩；心肌病；癌症诱导性心肌病；
[0196] ·血栓栓塞性疾病和缺血；心肌缺血；梗塞；心肌梗死；心脏病；心肌功能不全；内皮功能障碍；中风；短暂性脑缺血发作(TIA)；阻塞性血栓性血管炎；稳定或不稳定型心绞痛；冠状动脉痉挛或外周动脉痉挛；变异型心绞痛；普林兹梅特尔(Prinzmetal)型心绞痛；心脏肥大；先兆子痫；血栓形成性疾病；缺血再灌注损伤；与器官移植相关的缺血再灌注；与肺移植，肺部移植，心脏移植，移植物衰竭相关的缺血再灌注；保留创伤患者的血液取代基；
[0197] ·周边血管疾病；外周动脉疾病；外周闭塞性动脉疾病；肌张力过高；雷诺氏综合征或现象(原发性和继发性)；雷诺病；临界肢体缺血；外周栓塞；间歇性跛行；血管闭塞性危象；肌营养不良，杜兴氏肌营养不良，贝克肌营养不良；微循环异常；控制血管渗漏或渗透性；腰椎管狭窄；闭塞性血栓性血管炎；血栓性血管炎；外周灌注障碍；动脉和静脉血栓形成；微量白蛋白尿；外周和自主神经病；糖尿病微血管病；
[0198] ·水肿；由于心力衰竭引起的肾水肿；
[0199] ·阿尔茨海默氏病；帕金森病；血管性痴呆；血管性认知障碍；脑血管痉挛；先天性肌无力综合征；蛛网膜下腔出血；创伤性脑损伤；例如发生在轻度认知障碍中的那些认知障碍，年龄相关的学习和记忆障碍，年龄相关的记忆丧失，血管性痴呆，头部损伤，中风，中风后痴呆，创伤后头部损伤，伴有学习和记忆问题的儿童集中一般障碍和集中障碍后的改善认知，集中能力，学习能力或记忆能力；路易体痴呆；包括皮克氏综合征的额叶痴呆；进行性核麻痹；痴呆伴皮质基底变性；肌萎缩性侧索硬化(ALS)；亨廷顿病；脱髓鞘；多发性硬化；丘脑退化；克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob)痴呆；HIV痴呆；伴随痴呆或科萨科夫(Korsakoff)精神病的精神分裂症；多系统萎缩和其他形式的帕金森综合征；运动障碍；神经保护；焦虑，紧张和抑郁或创伤后应激障碍(PTSD)；双相性精神障碍；精神分裂症；CNS相关性功能障碍和睡眠障碍；病理性饮食失调和使用奢侈食品和成瘾药物；控制脑灌注；偏头痛；预防和控制脑梗塞(大脑复发)的后果；预防和控制中风，脑缺血和头部损伤的后果；
[0201] ·肺/呼吸道疾病：肺高压(PH)；肺动脉高压(PAH)和相关的肺血管重塑；以局部血栓形成和右心脏肥大的形式的血管重塑；肺肌张力过高；原发性肺动脉高压；继发性肺动脉高压；家族性肺动脉高压；散发性肺动脉高压；前毛细血管肺动脉高压；特发性肺动脉高压；其他形式的PH；与左心室疾病相关的PH，HIV，SCD，血栓栓塞(CTEPH)，结节病，COPD，肺纤维化，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，急性肺损伤，α-1-抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)，肺气肿，吸烟诱导性肺气肿和囊性纤维化(CF)；血栓性肺动脉病；丛发性肺动脉病；囊性纤维化；支气管收缩或肺支气管收缩；急性呼吸窘迫综合征；肺纤维化，肺移植；哮喘病。
[0202] ·与下述相关联或有关的肺动脉高压：左心室功能不全，低氧血症，世卫组织I，II，III，IV和V型高血压，二尖瓣疾病，狭窄性心包炎，主动脉瓣狭窄，心肌病，纵隔纤维化，肺纤维化，肺静脉回流异常，肺静脉闭塞性疾病，肺血管炎，胶原血管疾病，先天性心脏病，肺静脉高血压，间质性肺病，睡眠呼吸障碍，睡眠呼吸暂停，肺泡通气不足，长期暴露于高海拔，新生儿肺疾病，毛细血管发育不良，镰状细胞病，其他凝血障碍，慢性血栓栓塞，肺栓塞；由于肿瘤，寄生虫或外来物质引起的肺栓塞；结节组织疾病，狼疮，狼疮肾炎，血吸虫病，结节病，慢性阻塞性肺病，哮喘，肺气肿，慢性支气管炎，肺毛细血管瘤病，组织细胞增多症X，淋巴管瘤病，压缩性肺血管；由于腺病，肿瘤或纤维性纵隔炎引起的压缩性肺血管；
[0203] ·动脉硬化性疾病或病症：动脉粥样硬化；与内皮损伤，血小板和单核细胞粘附和聚集，平滑肌增殖或迁移有关的动脉粥样硬化；再狭窄；血栓溶解治疗、经皮腔内血管成形术(PTA)、经腔冠状动脉血管成形术(PTCA)、心脏移植、旁路手术或炎症过程后发生的再狭窄；
[0204] ·微血管和大血管损伤(血管炎)；纤维蛋白原水平和低密度DLD升高；纤溶酶原激活物抑制剂1(PA-1)浓度升高；
[0205] ·代谢综合征；代谢疾病或与代谢综合征相关的疾病：肥胖；过度皮下脂肪；过度肥胖；糖尿病；高血压；脂质相关疾病，高脂血症，血脂异常，高胆固醇血症，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-胆固醇)降低，低密度脂蛋白胆固醇(LDL-胆固醇)水平适度升高，高甘油三酯血症，高甘油酯血症，低脂蛋白血症，谷甾醇血症，脂肪肝疾病，肝炎；先兆子痫；多囊肾病进展；肝脂肪变性或肝脏中异常脂质蓄积；心脏，肾脏或肌肉的脂肪变性；字母蛋白血症；谷甾醇血症；黄瘤病；唐吉尔病；高氨血症和相关疾病；肝性脑病；其他中毒性脑病；瑞氏(Reye)综合征；
[0206] ·性、妇科和泌尿系统疾病：勃起功能障碍；阳痿；早泄；女性性功能障碍；女性性唤起功能障碍；活动性性唤起障碍；阴道萎缩；性感不快；萎缩性阴道炎；良性前列腺增生(BPH)，前列腺肥大，前列腺增生；膀胱出口阻塞；膀胱疼痛综合征(BPS)；间质性膀胱炎(IC)；膀胱过度活动症；神经源性膀胱和失禁；糖尿病肾病；原发性和继发性痛经；下尿路综合征(LUTS)；子宫内膜异位；骨盆疼痛；男性和女性泌尿生殖系统器官的良性和恶性疾病；
[0207] ·慢性肾病；急性和慢性肾功能不全；急性和慢性肾衰竭；狼疮肾炎；潜在或相关的肾疾病：低灌注，细胞内低血压，阻塞性神经病，肾小球病，肾小球肾炎，急性肾小球肾炎，肾小球硬化，肾小管间质性疾病，肾病，原发性和先天性肾病，肾炎；以异常降低的肌酐和/或水排泄为特征的疾病；以尿素，氮，钾和/或肌酐的血液浓度异常升高为特征的疾病；以肾酶活性改变为特征的疾病，以谷氨酰基合成酶活性改变为特征的疾病；以尿渗透压或尿量变化为特征的疾病；以微量白蛋白尿增加为特征的疾病，以大白蛋白尿为特征的疾病；以肾小球和小动脉损伤，肾小管扩张，高磷酸盐血症和/或需要透析为特征的疾病；肾功能不全的后遗症；肾功能不全相关肺灌注；与HF有关的肾功能不全；与尿毒症或贫血相关的肾功能不全；电解质紊乱(高钾血症，低钠血症)；骨和碳水化合物代谢的紊乱；
[0209] 术语“炎症”是指血管组织对有害刺激如病原体，受损细胞或刺激物产生的复杂生物反应。急性炎症的典型体征是疼痛，发热，发红，肿胀和功能丧失。炎症是生物体去除有害刺激和启动愈合过程的保护性尝试。炎症不是感染的同义词，即使两者常常是相关的(前者通常是后者的结果)。炎症也可以发生在没有感染的情况下，尽管这种类型的炎症通常是适应不良的(例如在动脉粥样硬化中)。炎症是模式化反应，因此与对每种病原体特异的适应性免疫相比，它被认为是先天免疫的机制。在没有炎症的情况下，组织的进行性破坏会损害生物体的存活。另一方面，慢性炎症可能导致许多疾病，例如花粉症，牙周炎，动脉粥样硬化，类风湿性关节炎，甚至癌症(例如胆囊癌)。正是由于这个原因，炎症通常被身体紧密调节。炎症可以分为急性或慢性。“急性炎症”是身体对有害刺激的初始反应，并且通过血浆和白细胞(特别是粒细胞)从血液到损伤组织中的运动增加来实现。生化事件的级联传播和成熟炎性反应，涉及局部血管系统，免疫系统和损伤组织内的各种细胞。被称为“慢性炎症”的长期炎症导致存在于炎症部位的细胞类型的进行性变化，并且其特征在于来自炎性过程的组织的同时破坏和愈合。
[0210] 在另一个实施例中，作为sGC刺激剂的表1A或表1B中的化合物及其药学上可接受的盐因此可用于预防和/或治疗可能涉及炎症或炎症过程的下列类型的心脏，肺，外周，肝，肾，消化道或中枢神经系统疾患，病症和疾病：
[0211] ·心肌炎症(心肌炎)；慢性心肌炎；急性心肌炎；病毒性心肌炎；
[0212] ·血管炎；胰腺炎；腹膜炎；类风湿病；
[0213] ·肾脏的炎性疾病；免疫肾疾病：肾移植排斥，免疫复合物诱导的肾脏疾病，由毒素诱导的肾病，造影剂介导的肾病；糖尿病性和非糖尿病性肾病，肾盂肾炎，肾囊肿，肾硬化，高血压性肾硬化和肾病综合征；
[0214] ·慢性间质炎症，炎症性肠病(IBD)，克罗恩病，溃疡性结肠炎(UC)；
[0215] ·炎性皮肤疾病；
[0216] ·眼睛炎性疾病，眼睑炎，干眼综合征和舍格伦 综合征；眼纤维化。
[0217] 术语“伤口愈合”是指皮肤(或另一器官或组织)在损伤后修复其自身的复杂过程。例如，在正常皮肤中，表皮(最外层)和真皮(内层或更深层)以稳态平衡存在，形成对外部环境的保护屏障。一旦保护屏障破裂，伤口愈合的正常(生理)过程立即开始启动。伤口愈合的经典模型分为三个或四个连续但重叠的阶段：(1)止血(某些作者不认为这是一个阶段)，(2)炎症，(3)增殖和(4)重塑。在皮肤损伤时，在紧密配合的级联中发生一组复杂的生化事件以修复损伤。在损伤后的最初几分钟内，血小板粘附到损伤部位，变得活化并聚集(结合在一起)，随后激活凝血级联反应，在交联纤维蛋白蛋白网中形成聚集血小板的凝块。这种凝块阻止活动性出血(“止血”)。在炎症期，细菌和细胞碎片被吞噬并通过白细胞从伤口移除。血小板衍生的生长因子(存储在血小板的α颗粒中)被释放到伤口中，这在增殖期期间会引起细胞的迁移和分裂。增殖期的特征在于血管生成，胶原沉积，肉芽组织形成，上皮形成和伤口收缩。在“血管生成”中，血管内皮细胞形成新的血管。在“纤维增生”和肉芽组织形成中，成纤维细胞通过分泌胶原和纤连蛋白生长并形成新的临时细胞外基质(ECM)。同时，发生表皮的“再上皮化”，其中上皮细胞在伤口床上方增殖和“爬行”，为新组织提供覆盖。在伤口收缩期间，肌成纤维细胞通过握持伤口边缘并使用类似于平滑肌细胞中的机制收缩来减小伤口的大小。当细胞的作用接近完成时，不需要的细胞经历细胞凋亡。在成熟和重塑期间，胶原蛋白被重塑并沿着张力线重排，而不再需要的细胞通过凋亡去除。然而，该方法不仅复杂、脆弱，并且易于中断或失败，导致形成不愈合的慢性伤口(一个例子包括糖尿病性伤口或溃疡，特别是糖尿病足溃疡)。造成不愈合的慢性伤口的因素是糖尿病，静脉或动脉疾病，感染和老年代谢缺陷。
[0218] 术语“骨愈合”或“骨折愈合”是指增生性生理过程，其中身体促进骨折的修复。在骨折愈合过程中，几个恢复阶段促进了围绕骨折和位错区域的增殖和保护。该过程的长度取决于损伤的程度，并且通常需要两至三周的余量用于修复大多数上部身体骨折；任何较低的身体伤害需要超过四周。愈合过程主要由“骨膜”(覆盖骨的结缔组织膜)决定。骨膜是前体细胞的一个来源，其发展为对骨愈合必不可少的“成软骨细胞”和成骨细胞。骨髓(当存在时)，内皮，小血管和成纤维细胞是前体细胞的其他来源。
[0219] 在另一个实施例中，作为sGC刺激剂的表1A或表1B中的化合物及其药学上可接受的盐因此可用于治疗下列类型的疾病，疾患或病症，其中刺激伤口或骨愈合的过程是可期望的：
[0220] ·糖尿病患者的伤口或溃疡愈合；微血管灌注改善；损伤后的微血管灌注改善或在围手术期护理中抵消炎症反应；肛裂；糖尿病性溃疡；糖尿病足溃疡；骨愈合；破骨细胞骨吸收和重塑；和新骨形成。
[0221] 术语“结缔组织”(CT)是指支撑、连接或分离身体的不同类型的组织和器官的一种动物组织。它是动物组织的四种一般类别中的一种，其余是上皮，肌肉和神经组织。结缔组织无处不在，包括在中枢神经系统中。它位于其他组织之间。所有CT具有三种主要成分：基质，纤维和细胞，所有这些成分都浸在体液中。
[0222] 术语“结缔组织病况或病症”是指涉及身体的一个或多个部分中的结缔组织异常的任何病症。某些病症的特征在于免疫系统的过度活动，导致组织炎症和全身性损伤，通常用结缔组织替换正常组织(例如某个器官的正常组织)。其他疾病涉及结缔组织本身的生化异常或结构缺陷。这些疾病中的一些是遗传性的，一些病因未知。
[0223] 当结缔组织疾病是自身免疫性起源时，它们被分类为“风湿性病症”，“自身免疫性风湿性病症”或“自身免疫性胶原-血管性病症”。
[0224] 在“自身免疫性病症”中，由身体产生的抗体或其他细胞攻击身体自身的组织。许多自身免疫性疾病影响各种器官中的结缔组织。在自身免疫性疾病中，炎症和免疫应答可导致周围关节的以及其它组织中的结缔组织损伤，该其它组织包括重要器官，例如肾脏或胃肠道器官，围绕心脏的囊(心包膜)，覆盖肺的膜(胸膜)，纵隔(胸腔中的被松散的结缔组织包围的无序的结构组，包含心脏，心脏的大血管，食管，气管，膈神经，心脏神经，胸导管，胸腺和中央胸部的淋巴结)，甚至脑都可能受影响。
[0225] 如本文所用的术语“纤维化”是指结缔组织或纤维组织(瘢痕组织，胶原)在身体的某个器官或部分中的积累。如果纤维化来自单个细胞系，则称为“纤维瘤”。纤维化发生在身体试图修复和替换受损细胞时，因此可以是反应性，良性或病理状态。生理性纤维化与瘢痕形成的过程相似。当所讨论的组织被重复且连续地损坏时，形成病理状态。单次损伤，即使严重，通常不会引起纤维化。如果伤害是重复或连续地(例如发生在慢性肝炎中)，身体试图修复损伤，但尝试反而导致疤痕组织的过度积累。疤痕组织开始替代执行瘢痕组织不能执行的某些功能的器官的常规组织；它也可以干扰血流量并限制对其他细胞的血液供应。结果，这些其他功能细胞开始死亡，形成更多的瘢痕组织。当这在肝脏中发生时，携带从肠到肝脏(门静脉)的血液的静脉中的血压增加，导致被称为“门静脉高压”的状况。
[0226] 术语“硬化”是指通常是柔性的组织或结构或器官的硬化，通常用结缔组织来代替正常器官特异性组织。
[0227] 有许多类型的纤维或纤维化疾病，包括但不限于肺纤维化(特发性肺纤维化，囊性纤维化)，肝纤维化(或“肝硬化”)，心内膜心肌纤维化，老年心肌梗塞，心房纤维化，纵隔纤维化，骨髓纤维化(影响骨髓)，腹膜后纤维化，进行性大块纤维化(影响肺)，肾源性纤维化(影响皮肤)，克罗恩病，关节纤维化，佩罗尼病(影响阴茎)，杜普纯(Dupuytren)挛缩(影响手和手指)，一些形式的粘连性囊炎(影响肩膀)。
[0228] 存在许多类型的硬化或“硬化性疾病”，包括但不限于肌萎缩性侧索硬化(ALS)；动脉粥样硬化；局灶性节段性肾小球硬化和肾病综合征；海马硬化(影响大脑)；苔藓硬化症(阴道和阴茎的结缔组织的硬化疾病)；肝硬化(肝硬化)；多发性硬化或局灶性硬化(影响协调的疾病)；骨硬化(其中骨密度显著降低的疾病)；耳硬化(影响耳朵的疾病)；结节性硬化(影响多系统的罕见遗传疾病)；原发性硬化性胆管炎(胆管硬化)；原发性侧索硬化(随意肌的进行性肌无力)；和瘢痕疙瘩。
[0229] 术语“硬皮病”或“系统性硬化症”或“进行性系统性硬皮病”是指涉及关节，皮肤和内脏器官瘢痕化以及血管异常的病症。系统性硬化症有时可以以有限的形式发生，例如有时仅影响皮肤或主要仅影响皮肤的某些部分或作为CREST综合征(其中涉及皮肤的周围区域，但不涉及躯干)。系统性硬化症的通常初始症状是肿胀，然后增厚和收紧手指末端的皮肤。在“雷诺现象”中，手指突然和临时地变得非常苍白和刺痛或变得麻木，痛苦或麻木和痛苦是常见的。
[0230] 术语“多发性肌炎”是指肌肉炎症。术语“皮肌炎”是指伴随皮肤炎症的肌肉炎症。术语“多软骨炎”是指软骨炎症。
[0231] 术语“嗜酸性筋膜炎”是指嗜酸性免疫细胞被释放并导致“筋膜”的炎症和硬化的罕见病症，该“筋膜”是皮肤下面、肌肉之上和肌肉之间的坚韧纤维组织层。筋膜变得疼痛地发炎和肿胀并且在手臂和腿中逐渐硬化。随着手臂和腿部的皮肤逐渐硬化，它们变得难以移动，最终变得卡在不寻常的位置。有时，如果涉及手臂，该人可能发展为腕管综合征。
[0232] 在另一个实施例中，可通过施用作为sGC刺激剂的表1A或表1B中的sGC刺激剂及其药学上可接受的盐来治疗和/或预防的疾病的具体病症包括但不限于以下类型的，涉及炎症，自身免疫或纤维化(即纤维化疾病)的疾病：
[0233] ·泌尿生殖系统疾病：糖尿病肾病；由慢性肾脏疾病或功能不全引起的肾纤维化和肾衰竭；由累积/沉积和组织损伤引起的肾纤维化和肾衰竭；肾硬化；进行性硬化；肾小球肾炎；局灶性节段性肾小球硬化；肾病综合征；前列腺肥大；肾纤维化；间质性肾纤维化；
[0234] ·肺系统疾病：肺纤维化；特发性肺纤维化；囊性纤维化；进行性大块纤维化；影响肺的进行性大块纤维化；
[0235] ·影响心脏的疾病：心内膜心肌纤维化；老年心肌梗死；心房纤维化；心脏间质性纤维化；心脏重塑和纤维化；心脏肥大；
[0236] ·肝脏和相关器官的疾病：肝硬化症或肝硬化；与慢性肝病有关的肝硬化；肝纤维化；肝星状细胞活化；肝纤维胶原和总胶原蛋白积累；坏死性炎症和/或免疫原性肝脏疾病；原发性胆汁性肝硬化；原发性硬化性胆管炎；其他胆汁淤积性肝病：与肉芽肿性肝病、肝脏恶性肿瘤、妊娠肝内胆汁淤积、肝炎、脓毒症、药物或毒素、移植物抗宿主病、肝移植、胆总管石病、胆管肿瘤、胰腺癌、米里斯综合征、AIDS胆管病或寄生虫、血吸虫病有关的疾病；
[0237] ·消化疾病或病症：克罗恩病；溃疡性结肠炎；胃肠道的硬化；
[0238] ·皮肤或眼睛疾病：肾性纤维化；瘢痕疙瘩；纤维化局部或皮肤病或病症；真皮纤维化；硬皮病，皮肤纤维化；硬斑病；增生性瘢痕；痣；增生性玻璃体视网膜病变；肉状瘤病；肉芽肿；眼纤维化；
[0239] ·影响神经系统的疾病：肌萎缩性侧索硬化(ALS)；海马硬化，多发性硬化(MS)；局灶性硬化；原发性侧索硬化；
[0240] ·骨骼疾病；骨硬化；
[0241] ·耳硬化；其他听力疾病或障碍；听力损伤，部分或全部听力损失；部分或全部耳聋；耳鸣；噪声性听力损失；
[0242] ·涉及自身免疫，炎症或纤维化的其他疾病：硬皮病；局部硬化皮或外周硬皮病；纵隔纤维化；纤维化纵隔炎；骨髓纤维化；腹膜后纤维化；关节纤维化；佩罗尼病；杜普纯挛缩；地衣硬化；一些形式的粘连性囊膜炎；动脉粥样硬化；结节性硬化；系统性硬化；多发性肌炎；皮肌炎；多软骨炎；胆红素性筋膜炎；系统性红斑狼疮或红斑狼疮；骨髓纤维化，骨髓纤维变性或骨髓纤维瘤；结节病；子宫肌瘤；子宫内膜异位。
[0243] 在另一个实施例中，可以通过施用作为sGC刺激剂的表1A或表1B中的sGC刺激剂及其药学上可接受的盐来治疗和/或预防的疾病的具体病症包括但不限于：某些类型的癌症；镰状细胞病；镰状细胞性贫血；癌转移；骨质疏松症；胃轻瘫；功能性消化不良；糖尿病并发症；脱发或头发减少；与内皮功能障碍相关的疾病；与一氧化氮产生减少相关的神经病症；
精氨琥珀酸尿；神经肌肉疾病：杜兴氏肌营养不良(DMD)，贝克肌营养不良(BMD)，四肢肌肉营养不良，远端肌病，I型和II型肌强直性营养不良，表皮肩胛肌营养不良，常染色体和X-连锁遗传的爱德型(Emery-Dreifuss)肌肉营养不良，眼咽肌营养不良，肌萎缩性侧索硬化和脊髓性肌萎缩(SMA)。
精氨琥珀酸尿；神经肌肉疾病：杜兴氏肌营养不良(DMD)，贝克肌营养不良(BMD)，四肢肌肉营养不良，远端肌病，I型和II型肌强直性营养不良，表皮肩胛肌营养不良，常染色体和X-连锁遗传的爱德型(Emery-Dreifuss)肌肉营养不良，眼咽肌营养不良，肌萎缩性侧索硬化和脊髓性肌萎缩(SMA)。
[0244] 在一些实施例中，本发明涉及治疗受试者的疾病，健康状况或病症的方法，包括将治疗有效量的表1A或表1B中的化合物或其药学上可接受的盐给药于需要治疗的受试者，其中所述疾病，健康状况或病症选自上文列出的疾病中一种。
[0245] 在另一个实施例中，本发明的化合物可以以植入装置例如支架的形式递送。支架是插入到身体中天然通道/导管中的以防止或抵抗疾病诱发的、局部流动收缩的网状“管”。该术语还可以指用于暂时保持这种天然导管打开以允许手术使用的管。
[0246] 药物洗脱支架(DES)是放置在狭窄的，患病的外周或冠状动脉中的外周或冠状动脉支架(架子)，其缓慢释放药物以阻断细胞增殖，通常是平滑肌细胞增殖。这可以防止支架后的动脉的纤维化与凝块(血栓)阻塞，即再狭窄过程。在血管成形术过程中，支架通常由介入性心脏病专家或介入放射科医生放置在外周或冠状动脉内。通常用于DES用以阻断细胞增殖的药物包括紫杉醇或雷帕霉素类似物。
[0247] 在本发明的一些实施例中，本发明所述的sGC刺激剂可以通过涂覆有所述sGC刺激剂的药物洗脱支架来递送。涂覆有本发明所述的sGC刺激剂的药物洗脱支架可用于预防经皮冠状动脉介入术中的支架再狭窄和血栓形成。涂覆有本发明所述的sGC刺激剂的药物洗脱支架可以防止平滑的细胞增殖以及帮助插入有支架的动脉的内皮组织的再血管化和再生。
[0248] 用于治疗由冠状动脉闭塞性疾病引起的顽固性心绞痛的经皮冠状动脉介入疗法的替代方案是名为冠状动脉旁路移植术(CABG)的方法。CABG仅提供因移植物动脉粥样硬化的快速发展而进一步复杂化的正在进行过程的缓解。隐静脉移植物是CABG手术中最常用的导管。阻碍静脉CABG的长期临床试验成功的三个主要原因为：移植动脉粥样硬化加速，不完全内皮化和血栓形成。
[0249] 在一些实施例中，本发明所述的sGC刺激剂可用于CABG期间预防隐形移植物衰竭。本发明所述的化合物可以帮助内皮化过程并帮助防止血栓形成。在该实施例中，sGC刺激剂以凝胶的形式局部递送。
[0250] 术语“疾病”，“症状”和“病症”在本文中可互换使用，是指sGC，cGMP和/或NO介导的医学或病理学病症。
[0251] 如本文所使用的，术语“受试者”和“患者”可互换使用。术语“受试者”和“患者”是指动物(例如鸟，如鸡，鹌鹑或火鸡或哺乳动物)，特别是“哺乳动物”，包括非灵长类动物(例如牛，猪，马，羊，兔，豚鼠，大鼠，猫，狗和小鼠)和灵长类动物(例如猴，黑猩猩和人)，更具体地是指人。在一些实施例中，受试者是非人动物，例如农场动物(例如马，牛，猪或绵羊)或宠物(例如狗，猫，豚鼠或兔)。在一些实施例中，受试者是人。
[0252] 本发明还提供了用于治疗受试者的上述疾病，病症和症状之一的方法，其包括将治疗有效量的表1A或表1B中的化合物或其药学上可接受的盐给药于需要治疗的受试者。或者，本发明提供了表1A或表1B中的化合物或其药学上可接受的盐在治疗需要治疗的受试者中的这些疾病，病症和症状之一中的用途。本发明还提供了配制或制备用于治疗这些疾病，病症和症状之一的药物的方法，该药物包括使用表1A或表1B中的化合物或其药学上可接受的盐。
[0253] 本文所用的术语“生物样品”是指体外或离体样品，包括但不限于细胞培养物或其提取物；从哺乳动物中获得的活检材料或其提取物；血液，唾液，尿液，粪便，精液，眼泪，淋巴液，眼液，玻璃体液，或其它体液或其提取物。
[0254] 关于病症或疾病的“治疗(Treat，treating，treatment)”是指减轻或消除病症或疾病的起因和/或影响。如本文所用，术语“治疗(Treat，treating，treatment)”是指减少或改善sGC，cGMP和/或NO介导的病症的进展，严重性和/或持续时间，或因给予一种或多种治疗(例如一种或多种治疗剂，例如本发明的化合物或组合物)引起的所述病症的一种或多种更多症状(优选，一种或多种可辨别的症状)的改善(即，“控制”而不是“治愈”病症)。在具体实施例中，术语“治疗”是指改善sGC，cGMP和/或NO介导的病症的至少一个可测量的物理参数。在其它实施例中，术语“治疗”是指在身体上通过例如使可辨别症状稳定或者在生理学上通过例如使物理参数稳定或两者来抑制sGC、cGMP和/或NO介导的病症的进展。
[0255] 本文所用的术语“预防”是指预先给予药物以避免或预防疾病或病症的一种或多种症状的出现。医学领域的普通技术人员认识到术语“预防”不是绝对术语。在医学领域中，应理解为预防性施用药物以基本上减少病症的可能性或严重性或病症的症状，这是本文中意指的意义。该领域的标准文本-医师桌面参考(Physician's Desk Reference)使用术语“预防”数百次。如本文所使用的，关于病症或疾病的术语“预防(prevent)”，“预防(preventing，prevention)”是指在疾病或病症完全显现出来之前避免疾病或病症的引起，作用，症状或进展。
[0256] 在一个实施例中，本发明的方法对于倾向(例如，遗传倾向)患有sGC，cGMP和/或NO相关疾病，病症或症状的患者，特别是人的预防，或“先发制人”。
[0257] 在其它实施例中，本发明的方法对于具有患有sGC，cGMP或NO相关疾病，病症或症状的风险的患者，特别是人的预防，或“先发制人”。
[0258] 本文所述的化合物和药物组合物可单独使用或在组合治疗中使用用于治疗或预防由sGC，cGMP和/或NO介导，调节或影响的疾病或病症。
[0259] 本文公开的化合物和组合物还可用于伴侣动物，珍奇动物和农场动物的兽医治疗，其包括但不限于狗，猫，小鼠，大鼠，仓鼠，沙鼠，豚鼠，兔，马，猪和牛。
[0260] 在其它实施例中，本发明提供了刺激生物样品中sGC活性的方法，包括将所述生物样品与本发明的化合物或组合物接触。在生物样品中使用sGC刺激剂对于本领域技术人员已知的多种目的是有用的。这样的目的的例子包括但不限于生物测定和生物样品储存。联合疗法
[0261] 本文所述的化合物和药物组合物可以与一种或多种另外的治疗剂联合使用。对于与多于一种活性剂的组合治疗，当活性剂是分开的剂量制剂时，活性剂可以单独或联合给药。此外，一种成分的给药可以在另一种药剂给药之前、同时或之后。
[0262] 当与其它药剂共同给药时，例如当与另一种止痛药物共同给药时，第二药剂的“有效量”将取决于所用药物的类型。合适的剂量对于经批准的试剂是已知的，并且可以由本领域技术人员根据受试者的条件，待治疗的病症的类型和所使用的化合物的量进行调整。在没有明确注明数量的情况下，应采用有效剂量。例如，本文所述的化合物可以以约0.01至约10,000mg/kg体重/天，约0.01至约5000mg/kg体重/天，约0.01至约3000mg/kg体重/天，约
0.01至约1000mg/kg体重/天，约0.01至约500mg/kg体重/天，约0.01至约300mg/kg体重/天，约0.01至约100mg/kg体重/天的剂量范围给药于受试者。
0.01至约1000mg/kg体重/天，约0.01至约500mg/kg体重/天，约0.01至约300mg/kg体重/天，约0.01至约100mg/kg体重/天的剂量范围给药于受试者。
[0263] 当使用“联合疗法”时，可以使用第一量的表1A或表1B中的化合物或其药学上可接受的盐和第二量的另外合适的治疗剂来达到有效量。
[0264] 在本发明的一个实施例中，表1A或表IB中的化合物和另外的治疗剂各自以有效量(即如果单独每个量都为治疗有效量)给药。在另一个实施例中，表1A或表1B中的化合物和另外的治疗剂各自以不能提供治疗效果(次治疗剂量)的量给药。在另一个实施例中，表1A或表1B中的化合物可以以有效量给药，而另外的治疗剂以次治疗剂量给药。在另一个实施例中，表1A或表1B的化合物可以以次治疗剂量施用，而另外的治疗剂如合适的癌症治疗剂以有效量给药。
[0265] 如本文所用，术语“联合”或“联合给药”可以互换使用以指多于一种疗法(例如一种或多种预防和/或治疗剂)的使用。术语的使用并不限制给予受试者治疗方法(例如，预防和/或治疗剂)的顺序。
[0266] 共同给药包括以基本同时的方式施用第一量和第二量的化合物，例如在单一药物组合物中，例如具有固定比例的第一量和第二量的胶囊或片剂，或多个、独立的胶囊或片剂。此外，这种共同给药还包括以任何顺序依次使用每种化合物。当共同给药涉及第一量的表1A或表1B中的化合物和第二量的另外的治疗剂的分开给药时，化合物在时间上足够接近地给药以具有期望的治疗效果。例如，可以产生所需治疗效果的每次给药之间的时间段可以从几分钟到几小时，并且可以考虑每种化合物的性质，如效力，溶解度，生物利用度，血浆半衰期和动力学特征。例如，表1A或表1B中的化合物和第二治疗剂可以在彼此相隔约24小时内、在彼此相隔约16小时内、在彼此相隔约8小时内、在彼此相隔约4小时内、在彼此相隔约1小时内或在彼此相隔约30分钟内的以任意顺序给药。
[0267] 更具体地，可以在将第二治疗疗法(例如，预防或治疗剂如抗癌剂)给予受试者之前(例如5分钟，15分钟，30分钟，45分钟，1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时，48小时，72小时，96小时，1周，2周，3周，4周，5周，6周，8周或12周之前)、同时或者之后(例如5分钟，15分钟，30分钟，45分钟，1小时，2小时，4小时，6小时，12小时，24小时，48小时，72小时，96小时，1周，2周，3周，4周，5周，6周，8周或12周之后)给予第一治疗方法(例如，预防或治疗剂，例如本文所述的化合物)。
[0268] 单独给药或以相同的药物组合物给药的可以与本文的化合物组合的其它治疗剂的例子包括但不限于：
[0269] (1)内皮衍生释放因子(EDRF)；
[0270] (2)NO供体，例如亚硝基硫醇，亚硝酸盐，希德明胺，NONO亲核复合体，N-亚硝基胺，N-羟基亚硝胺，亚硝基亚胺，硝基酪氨酸，二氮杂二环，氧杂三唑5-亚胺，肟，羟胺，N-羟基胍，羟基脲或呋喃糖。这些类型化合物的一些例子包括：三硝酸甘油酯(也称为GTN，硝酸甘油，硝化甘油和三硝基甘油)，甘油的硝酸酯；硝普钠(SNP)，其中一氧化氮分子与形成正方形双锥体复合体的铁金属配位；3-吗啉代二亚胺(SIN-1)，通过吗啉和希德明胺的组合形成的两性离子化合物；S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(SNAP)，具有亚硝基硫醇官能团的N-乙酰化氨基酸衍生物；二亚乙基三胺/NO(DETA/NO)，与二亚乙基三胺共价连接的一氧化氮的化合物；和NCX4016，乙酰水杨酸的间硝基甲基苯基酯。NO供体的一些这些类别的更具体的例子包括：经典的硝基血管扩张剂，如有机硝酸盐和亚硝酸酯，包括硝酸甘油，亚硝酸戊酯，硝酸异山梨酯，5-硝酸异山梨醇和尼可地尔；异山梨酯( -SR，
)，FK409(NOR-3)；FR144420(NOR-4)；3-吗啉代不饱和亚胺氯代水合二氯化物
(“SIN-1”)；S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(“SNAP”)；AZD3582(CINOD铅化合物)，NCX4016，NCX701，NCX1022，HCT1026，NCX1015，NCX950，NCX1000，NCX1020，AZD4717，NCX1510/NCX1512，NCX2216和NCX404(全部可从NicOx S.A.获得)，S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)，硝普钠，S-亚硝基谷胱甘肽单乙酯(GSNO-酯)，6-(2-羟基-1-甲基-亚硝基肼基)-N-甲基-1-己胺(NOC-9)或二乙胺NONO亲核复合体。一氧化氮供体也如美国专利No.5,155,137,5,366,997,
5,405,919,5,650,442,5,700,830,5,632,981,6,290,981,5,691,423,5,721,365,5,714,
511,6,511,911和5,814,666，Chrysselis等人(2002)药物化学杂志，45：5406-9(例如NO供体14和17)所公开的，以及药物和生物研究中的一氧化氮供体，作者：王鹏，丁薇薇，谷口奈谷；威利，2005；
)，FK409(NOR-3)；FR144420(NOR-4)；3-吗啉代不饱和亚胺氯代水合二氯化物
(“SIN-1”)；S-亚硝基-N-乙酰青霉胺(“SNAP”)；AZD3582(CINOD铅化合物)，NCX4016，NCX701，NCX1022，HCT1026，NCX1015，NCX950，NCX1000，NCX1020，AZD4717，NCX1510/NCX1512，NCX2216和NCX404(全部可从NicOx S.A.获得)，S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)，硝普钠，S-亚硝基谷胱甘肽单乙酯(GSNO-酯)，6-(2-羟基-1-甲基-亚硝基肼基)-N-甲基-1-己胺(NOC-9)或二乙胺NONO亲核复合体。一氧化氮供体也如美国专利No.5,155,137,5,366,997,
5,405,919,5,650,442,5,700,830,5,632,981,6,290,981,5,691,423,5,721,365,5,714,
511,6,511,911和5,814,666，Chrysselis等人(2002)药物化学杂志，45：5406-9(例如NO供体14和17)所公开的，以及药物和生物研究中的一氧化氮供体，作者：王鹏，丁薇薇，谷口奈谷；威利，2005；
[0271] (3)提高cGMP浓度的其他物质，如原卟啉IX，花生四烯酸和苯肼衍生物；
[0272] (4)一氧化氮合酶底物：例如，N-羟基胍碱基类似物，如N[G]-羟基-L-精氨酸(NOHA)，1-(3,4-二甲氧基-2-氯亚苄基氨基)-3-羟基胍和PR5(1-(3,4-二甲氧基-2-氯亚苄基氨基)-3-羟基胍)；L-精氨酸衍生物(如同型Arg，均一NOHA，N-叔丁氧基和N-(3-甲基-2-丁烯基)氧基-L-精氨酸，刀豆氨酸，ε-肉豆蔻酸，胍丁胺，羟基-马丁和L-酪氨酰-L-精氨酸)；N-烷基-N'-羟基胍(如N-环丙基-N'-羟基胍和N-丁基-N'-羟基胍)，N-芳基-N'-羟基胍(如N-苯基-N'-羟基胍和其分别用-F，-Cl，-甲基，-OH取代基对位取代的衍生物)；胍衍生物，如3-(三氟甲基)丙基胍；Cali等人(2005，药物化学课程5：721-736)总结的和本文中引用的参考文献中公开的其它物质；
[0273] (5)增强eNOS转录的化合物：例如WO 02/064146，WO02/064545，WO 02/064546和WO 02/064565中所述的那些，以及相应的专利文献如US2003/0008915，US2003/0022935，US2003/0022939和US2003/0055093。包括US20050101599中描述的其它eNOS转录增强剂(例如2,2-二氟苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-羧酸茚满-2-基酰胺和4-氟-N-(茚满-2-基)-苯甲酰胺)和赛诺菲-安万特化合物AVE3085和AVE9488(CA注册号NO.916514-70-0；
等人，血栓形成与止血术杂志，2005；卷3，补充版1：摘要号P1487)；
等人，血栓形成与止血术杂志，2005；卷3，补充版1：摘要号P1487)；
[0274] (6)NO非依赖性血红素非依赖性sGC刺激剂，包括但不限于：BAY 58-2667(参见专利公开DE19943635)
[0275]
[0276] HMR-1766(阿特西呱钠，参见专利公开WO2000002851)
[0277]
[0278] S 3448
[0279] (2-(4-氯-苯基磺酰基氨基)-4,5-二甲氧基-N-(4-(硫代吗啉-4-磺酰基)-苯基)-苯甲酰胺(参见专利公开DE19830430和WO2000002851)
[0280]
[0281] 和HMR-1069(赛诺菲-安万特)。
[0282] (7)血红素依赖性sGC刺激剂，包括但不限于：
[0283] YC-1(参见专利公开EP667345和DE19744026)
[0284]
[0285] 利奥西呱(BAY 63-2521，利奥西呱，商业产品，描述于DE19834044)
[0286]
[0287] 耐里西呱(BAY 60-4552，描述于WO 2003095451)
[0288]
[0289] 维利西呱(BAY 1021189，临时备份到利奥西呱)，
[0290] BAY 41-2272(描述于DE19834047和DE19942809)
[0291]
[0292] BAY 41-8543(描述于DE19834044)
[0293]
[0294] 依曲西呱(描述于WO 2003086407)
[0295]
[0296] CFM-1571(参见专利公开WO2000027394)
[0297]
[0298] A-344905，其丙烯酰胺类似物A-350619和氨基嘧啶类似物A-778935。
[0299]
[0300] A350-619；
[0301]
[0302] A-344905；
[0303]
[0304] A-778935；
[0305] 在下列公开物中公开的化合物：US20090209556，US8455638，US20110118282(WO2009032249)，US20100292192，US20110201621，US7947664，US8053455(WO2009094242)，US20100216764，US8507512，(WO2010099054)，US20110218202(WO2010065275)，US20130012511(WO2011119518)，US20130072492(WO2011149921)，US20130210798(WO2012058132)以及在四面体(2003)，44(48)：8661-8663中公开的其它化合物。
[0306] (8)抑制cGMP降解的化合物，例如：
[0307] PDE5抑制剂，例如西地那非 和其它相关药物，例如阿伐那非，罗特那非，米罗那非，柠檬酸西地那非 他达拉非( 或 )，伐
地那非 和乌地那非；前列地尔和双嘧达莫；PF-00489791；PDE9抑制剂，例如
PF-04447943；
地那非 和乌地那非；前列地尔和双嘧达莫；PF-00489791；PDE9抑制剂，例如
PF-04447943；
[0308] (9)钙通道阻断剂如：
[0309] 二氢吡啶类钙通道阻滞剂：氨氯地平(氨氯地平)，阿拉尼平(阿雷地平)，阿泽尼地平(卡波洛克)，巴尼地平(海波卡)，贝尼地平(康伲尔)，西尼地平(阿泰勒克，希纳龙，西斯卡)，氯维地平(丁酸氯维地平)，地尔硫卓，依福地平(连德尔)，菲洛地平(波依定)，拉西地平(莫司汀，拉西替尼)，乐西地平(乐卡地平)，马尼地平(卡斯罗特，麦地平)，尼卡地平(尼卡地平，卡登SR)，硝苯地平(利心平，心痛定)，尼伐地平(尼瓦替尼)，尼莫地平(尼莫通)，尼索地平(贝麦卡，尼索地平，尼索地平薄膜包衣控释片剂)，尼群地平(加迪夫，尼特瑞平，贝勒汀辛)，普拉地平(阿卡勒斯)，依拉地平(洛米尔)；
[0310] 苯基烷基胺钙通道阻滞剂：维拉帕米(卡兰，异搏定)
[0311]
[0312] 格洛帕米(加洛帕米，D600)；
[0313] 地尔硫卓类：地尔硫卓(恬尔心)；
[0314]
[0315] 非选择性钙通道抑制剂，如：咪拉地尔，苄普地尔和氟司必林，芬太尼；
[0316] (10)内皮素受体拮抗剂(ERA)：例如双重(ETA和ETB)内皮素受体拮抗剂波生坦西他生坦，以 命名销售；安立生坦在美国销售为双重/非选择性内皮素拮抗剂爱秦隆-1，于2008年进入临床试验；
[0317] (11)前列环素衍生物或类似物：例如前列环素(前列腺素I2)，依前列醇(合成的前列环素，以 销售)；曲前列环素 伊洛前列素伊洛前列素(市售为 )；口服和吸入形式的 正在开发中；贝拉前
列素，日本和韩国的口服前列腺素；
列素，日本和韩国的口服前列腺素；
[0318] (12)抗高血脂药，如：胆汁酸多价螯合剂(如胆碱胺，考来替泊，考来替兰和考来维仑)；他汀类药物，如阿托伐他汀，辛伐他汀，洛伐他汀，氟伐他汀，匹伐他汀，罗苏伐他汀和普伐他汀；胆固醇吸收抑制剂，如依泽替米贝；其它降脂药，如二十五碳五烯酸乙酯，ω-3-酸乙酯，瑞达醇；纤维酸衍生物，如布洛贝特，贝扎贝特，克利贝特，吉非贝齐，罗非贝特，二非昔洛芬，芬诺非拉特，环丙贝特，胆碱非诺贝特；烟酸衍生物，如阿昔莫司和烟酸；他汀类药物，烟酸，肠胆固醇吸收抑制补充剂(依泽替米贝等)和纤维酸类的组合；抗血小板治疗药物，如氯吡格雷硫酸氢盐；
[0319] (13)抗凝剂，如下列类型：
[0320] ·香豆素(维生素K拮抗剂)： (可麦丁)，主要用于美国和英国；和 主要用于其他国家；
[0322] ·直接凝血酶抑制剂，如：阿加曲班，洛培丁，比伐卢定和达比加群；西美加仑未经美国批准；
[0323] ·组织纤维蛋白溶酶原激活剂，用于溶解凝块以及解除动脉阻塞，如阿梯普酶；
[0324] (14)抗血小板药物：例如噻吩并吡啶类，如洛哌肽和噻氯匹定；双嘧达莫阿司匹林；
[0325] (15)ACE抑制剂，例如以下类型：
[0326] ·含巯基的药物，如卡托普利(商品名 )，第一种ACE抑制剂和佐芬普利；
[0327] ·含二羧酸盐的药物，如依那普利(依那普利/ )；雷米普利(雷米普利/心达舒/瑞马舒/ )；喹诺酮 培哚普利(比奥法玛尔/
)；赖诺普利(栗塞卓/乐普利/诺瓦蒂/赖诺普利/ )和贝那普利
)；赖诺普利(栗塞卓/乐普利/诺瓦蒂/赖诺普利/ )和贝那普利
[0328] ·含膦酸的药物，如：福辛普利；
[0329] ·天然存在的ACE抑制剂，如：卡斯科尼和莱特科尼，它们是摄取乳制品、尤其是培养的牛奶后天然产生的酪蛋白和乳清的分解产物；由益生菌瑞士乳杆菌或源自酪蛋白产生的乳酸三肽Val-Pro-Pro和Ile-Pro-Pro也具有ACE抑制和抗高血压功能；
[0330] ·其他ACE抑制剂，如阿拉司琼，德利普利，西拉普利，咪达普利，群多普利，替莫普利，莫昔普利，螺普利，
[0331] (16)辅助氧疗；
[0332] (17)β受体阻滞剂，如下列类型：
[0333] ·非选择性药物：(具有其他α-阻断活性)， (具有其他α-阻断活性)，
(具有内在的交感神经活性)， (具有内在的交感神经活性)，奥克斯任洛尔，醋
丁洛尔，索他洛尔，甲吲洛尔，塞利洛尔，阿罗洛尔，特他洛尔，氨磺洛尔，尼普洛尔，和
(具有内在的交感神经活性)， (具有内在的交感神经活性)，奥克斯任洛尔，醋
丁洛尔，索他洛尔，甲吲洛尔，塞利洛尔，阿罗洛尔，特他洛尔，氨磺洛尔，尼普洛尔，和
[0335] ·选择性β2-受体阻滞剂： (α-肾上腺素能激动剂活性弱)；
[0336] (18)抗心律失常药，如下列类型：
[0337] ·I型(钠通道阻断剂)：奎尼丁，利多卡因，苯妥英，普罗帕酮；
[0338] ·III型(钾通道阻滞剂)：胺碘酮，多非替特，索他洛尔；
[0339] ·V型：腺苷，地高辛；
[0340] (19)利尿剂，例如：噻嗪类利尿剂，例如氯噻嗪，氯噻酮和氢氯噻嗪，扁氟噻嗪，环戊噻嗪，甲基噻嗪，聚噻嗪，喹硫酮，西帕胺，美托拉宗，吲达帕胺，西来他林；环路利尿剂，如呋塞米和托瑞司林；保钾利尿剂，如阿米洛利，螺内酯，坎利酸钾，依普利酮和氨苯蝶啶；这些药物的组合；其他利尿剂，如乙酰唑胺和卡培立肽；
[0341] (20a)直接作用的血管扩张药，如盐酸肼屈嗪，二氮嗪，硝普钠，卡他嗪；其他血管扩张药，如硝酸异山梨酯和5-硝酸异山梨酯；
[0342] (20b)外源血管扩张剂，如：
[0343] · 腺苷激动剂，主要用作抗心律失常药；
[0344] ·阿尔法阻断剂(阻断肾上腺素的血管收缩作用)：
[0345] α-1-肾上腺素能受体拮抗剂，如哌唑嗪，吲哚满胺，乌拉地尔，布那唑嗪，特拉唑嗪，多沙唑嗪
[0346] ·心房钠尿肽(ANP)；
[0347] ·乙醇；
[0348] ·组胺诱导剂，其通过引发组织胺从肥大细胞和嗜碱性粒细胞释放使补充蛋白C3a，C4a和C5a起作用；
[0349] ·四氢大麻酚(THC)，大麻主要活性化学物质，具有轻微的血管扩张作用；
[0350] ·罂粟碱，罂粟花罂粟中发现的生物碱；b
[0351] (21)支气管扩张剂：有两种主要类型的支气管扩张剂，β2激动剂和抗胆碱能药物，如下所示：
[0352] ·β2激动剂： 或沙丁胺醇(通用品牌名：万托林)和 是快速缓解COPD症状的短效β2激动剂。长效β2激动剂(LABA)如 和
[0353] ·抗胆碱能药物： 是最广泛使用的短效抗胆碱能药物。 是COPD中最常用的长效抗胆碱能药物；
[0354] · 支气管扩张剂和磷酸二酯酶抑制剂；
[0355] (22)皮质类固醇：例如倍氯米松，甲基泼尼松龙，倍他米松，强的松，泼尼松龙，曲安奈德，地塞米松，氟替卡松，氟尼缩松和氢化可的松，和皮质类固醇如布地奈德；
[0356] (23)膳食补充剂，例如：ω-3油；叶酸，烟酸，锌，铜，韩国红参，银杏，松树皮，刺蒺藜提取物，精氨酸，燕麦，淫羊藿，马卡根，铁青树碱，锯棕榈和瑞典花粉；维生素C，维生素E，维生素K2；睾酮补充剂，睾酮透皮贴剂；克拉维酸，纳曲酮，布雷默浪丹(以前称为PT-141)，美拉诺坦II，h马克西-K；瑞勒克斯：天然成分L-精氨酸天冬氨酸和碧萝芷的专有混合物/组合物；
[0357] (24)PGD2受体拮抗剂，包括但不限于在美国公开的申请US200200222218，US20010051624和US20030055077，PCT公开的申请WO9700853，WO9825919，WO03066046，WO03066047，WO03101961，WO03101981，WO04007451，WO0178697，WO04032848，WO03097042，WO03097598，WO03022814，WO03022813和WO04058164，欧洲专利申请EP945450和EP944614中描述的具有PGD2拮抗活性的化合物，以及Torisu等人，2004，生物有机化学与医药化学14：4557；Torisu等人，2004，生物有机化学与医药化学14：4891以及Torisu等人，2004，生物有机化学与医药化学2004，12：4685中列出的那些；
[0358] (25)免疫抑制剂，如环孢菌素(环孢菌素A， )，他克莫司(FK-506， )，雷帕霉素(西罗莫司， )和其他FK-506型免疫抑制剂，
和霉酚酸酯，例如霉酚酸酯
和霉酚酸酯，例如霉酚酸酯
[0359] (26)非甾体抗哮喘药，如β2-受体激动剂(例如特布他林，偏高宁，非诺特罗，异月桂醇，沙丁胺醇，沙美特罗，苦参醇和吡布特罗)和β2-激动剂-皮质类固醇组合(如沙美特罗-氟替卡松 福莫特罗-布地奈德 )，茶碱，色甘酸，色甘酸钠，奈多罗米，阿托品，异丙托铵，异丙托溴铵，白三烯生物合成抑制剂(齐流通，BAY1005)；
[0360] (27)非甾体抗炎药物(NSAID)，如丙酸衍生物(例如，阿利洛芬，苯普洛芬，布洛芬酸，卡洛芬，芬布芬，非诺洛芬，氟洛芬，氟比洛芬，布洛芬，吲哚洛芬，酮洛芬，咪丙洛芬，萘普生，奥沙普秦，吡咯布洛芬，普拉洛芬，舒洛芬，塞洛芬酸和硫恶洛芬)，醋酸衍生物(例如吲哚美辛，阿西美辛，阿氯芬酸，环氯茚酸，双氯芬酸，芬氯酸，芬克洛酸，芬替酸，呋洛芬酸，异丁芬酸，伊索克酸，氧联磷，舒林酸，硫平酸，托美丁，奇多美辛和佐美酸)，芬那酸衍生物(例如氟芬那酸，甲氯芬那酸，甲芬那酸，尼氟酸和托芬那酸)，联苯羧酸衍生物(例如二氟尼柳和氟苯柳)，昔康类(例如异威昔康，吡罗昔康，舒多昔康和特那昔康)，水杨酸盐类(例如乙酰水杨酸和柳氮磺吡啶)和吡唑酮类(例如阿帕酮，比皮派瑞松，氟吡喹酮，吗啡保罗酮，氧保泰松和保泰松)。
[0361] (28)环加氧酶-2(COX-2)抑制剂，如塞来昔布 罗非昔布伐地考昔，依托昔昔，帕瑞昔布和罗西考布；(阿片样镇痛药，如可待因，芬太尼，氢吗啡酮，左啡诺，哌替啶，美沙酮，吗啡，羟考酮，羟吗啡酮，丙氧芬，丁丙诺啡，布托啡诺，替佐宾，奈泊芬和喷他佐辛；和
[0362] (29)抗糖尿病药物，如胰岛素和胰岛素模拟物，磺酰脲类(例如格列吡脲，格列本脲，格列吡嗪，格列齐特，格列喹酮，格列美脲，格列奈肽，甲苯磺丁脲，氯磺丙脲，醋酸己脲，妥拉磺脲)，双胍类，例如二甲双胍 α-葡萄糖苷酶(如阿卡波糖，依帕司他坦，伏格列波糖，米格列醇)，噻唑烷酮化合物，例如罗格列酮 曲格列酮
环格列酮，吡格列酮 和恩格列酮；胰岛素敏化剂，如吡格列
酮和罗格列酮；胰岛素促分泌素，如瑞格列奈，那格列奈和米格列奈；肠降血糖素模拟物，如伊萨那肽和利拉鲁肽；胰岛淀粉样多肽类似物，如普兰林肽；葡萄糖降低剂，如吡啶甲酸铬(光合作用生物素)；二肽类肽酶IV抑制剂，如西他列汀，维格列汀，沙格列汀，阿格列汀和林格列汀；目前正在开发的用于治疗糖尿病的疫苗；AVE-0277，矾-GAD，BHT-3021，IBC-VS01；
开发的用于治疗糖尿病的细胞因子靶向治疗药物，例如阿那白滞素，卡纳单抗，双醋瑞因，格物单抗，LY-2189102，MABP-1，GIT-027；开发的用于治疗糖尿病的药物：
环格列酮，吡格列酮 和恩格列酮；胰岛素敏化剂，如吡格列
酮和罗格列酮；胰岛素促分泌素，如瑞格列奈，那格列奈和米格列奈；肠降血糖素模拟物，如伊萨那肽和利拉鲁肽；胰岛淀粉样多肽类似物，如普兰林肽；葡萄糖降低剂，如吡啶甲酸铬(光合作用生物素)；二肽类肽酶IV抑制剂，如西他列汀，维格列汀，沙格列汀，阿格列汀和林格列汀；目前正在开发的用于治疗糖尿病的疫苗；AVE-0277，矾-GAD，BHT-3021，IBC-VS01；
开发的用于治疗糖尿病的细胞因子靶向治疗药物，例如阿那白滞素，卡纳单抗，双醋瑞因，格物单抗，LY-2189102，MABP-1，GIT-027；开发的用于治疗糖尿病的药物：
[0363]
[0364]
[0365]
[0366]
[0367] (30)HDL胆固醇增加剂，如安塞曲匹，MK-524A，CER-001，DRL-17822，达塞曲匹，JTT-302，RVX-000222，TA-8995；
[0368] (31)减肥药物，如盐酸甲基苯丙胺，盐酸安非他酮 苯丁胺盐酸苄非他明 酒石酸苯甲曲秦
马吲哚 奥利司他 盐酸西布曲明一水合物
利莫那班 安非拉酮，吡啶甲酸铬，RM-493，TZP-301；组合如苯丁胺/托
吡酯，安非他酮/纳曲酮，西布曲明/二甲双胍，安非他酮SR/唑尼沙胺SR，沙美特罗，昔萘酸/丙酸氟替卡松；盐酸洛卡色林，苯丁胺/托吡酯，安非他酮/纳曲酮，西替利他曲，艾塞那肽，KI-0803，利拉鲁肽，盐酸二甲双胍，西布曲明/二甲双胍，876167，ALS-L-1023，安非他酮SR/唑尼沙胺SR，CORT-108297，卡那利芬，吡啶甲酸铬，GSK-1521498，LY-377604，美曲普汀，奥尼匹肽，P-57AS3，PSN-821，硫酸沙美特罗酯/丙酸氟替卡松，钨酸钠，生长激素(重组体)，TM-30339，TTP-435，替沙莫林，特索芬辛，韦利贝特，唑尼沙胺，BMS-830216，ALB-127158，AP-1030，ATHX-105，AZD-2820，AZD-8329，波拉瑞尼和米雷特(Beloranib hemioxalate)，CP-404，HPP-404，ISIS-FGFR4Rx，胰岛激素，KD-3010PF，05212389，PP-1420，PSN-842，肽YY3-36，白藜芦醇，S-234462；S-234462，色比特米(Sobetirome)，TM-38837，四氢万古培南，ZYO-1，β-拉帕酮；
马吲哚 奥利司他 盐酸西布曲明一水合物
利莫那班 安非拉酮，吡啶甲酸铬，RM-493，TZP-301；组合如苯丁胺/托
吡酯，安非他酮/纳曲酮，西布曲明/二甲双胍，安非他酮SR/唑尼沙胺SR，沙美特罗，昔萘酸/丙酸氟替卡松；盐酸洛卡色林，苯丁胺/托吡酯，安非他酮/纳曲酮，西替利他曲，艾塞那肽，KI-0803，利拉鲁肽，盐酸二甲双胍，西布曲明/二甲双胍，876167，ALS-L-1023，安非他酮SR/唑尼沙胺SR，CORT-108297，卡那利芬，吡啶甲酸铬，GSK-1521498，LY-377604，美曲普汀，奥尼匹肽，P-57AS3，PSN-821，硫酸沙美特罗酯/丙酸氟替卡松，钨酸钠，生长激素(重组体)，TM-30339，TTP-435，替沙莫林，特索芬辛，韦利贝特，唑尼沙胺，BMS-830216，ALB-127158，AP-1030，ATHX-105，AZD-2820，AZD-8329，波拉瑞尼和米雷特(Beloranib hemioxalate)，CP-404，HPP-404，ISIS-FGFR4Rx，胰岛激素，KD-3010PF，05212389，PP-1420，PSN-842，肽YY3-36，白藜芦醇，S-234462；S-234462，色比特米(Sobetirome)，TM-38837，四氢万古培南，ZYO-1，β-拉帕酮；
[0369] (32)血管紧张素受体阻断剂，如氯沙坦，缬沙坦，坎地沙坦酯，伊泼沙坦，厄贝沙坦，替米沙坦，奥美沙坦酯，阿齐唑烷酯；
[0370] (33)肾素抑制剂，如阿利吉仑半假单胞菌；
[0371] (34)中枢作用的α-2-肾上腺素受体激动剂，如甲基多巴，可乐定，胍法辛；
[0372] (35)肾上腺素能神经元阻断剂，如胍乙啶，胍那肽；
[0373] (36)咪唑啉I-1受体激动剂，如磷酸二环磷酸盐和盐酸莫可尼定水合物；
[0374] (37)醛固酮拮抗剂，如安体舒酮和依普利酮；
[0375] (38)钾通道激活剂，如吡那地尔；
[0376] (39)多巴胺D1激动剂，如甲氟芬广泛；其他多巴胺激动剂，如波波胺，多西他赛和多卡巴胺；
[0377] (40)5-HT2拮抗剂，如酮丹宁；
[0378] (41)目前正在开发的用于治疗动脉高血压的药物：
[0379]
[0380]
[0381]
[0382] (42)加压素拮抗剂，如托伐普坦；
[0383] (43)钙通道增敏剂，如左西孟旦或激动剂，如尼可地尔；
[0384] (44)PDE-3抑制剂，如氨吡酮，甲氰吡酮，依诺昔酮，维斯纳力酮，匹莫苯丹，奥普力农；
[0385] (45)腺苷酸环化酶激活剂，如盐酸多巴普丁盐酸盐；
[0386] (46)正性肌力药，如地高辛和米氏毒素；代谢强心剂如泛癸利酮；脑性质肽，如奈西立肽；
[0387] (47)目前正在开发的用于治疗心力衰竭的药物：
[0388]
[0389]
[0390]
[0391] (48)目前开发的用于治疗肺动脉高血压的药物
[0392]
[0393]
[0394] (49)目前开发的用于治疗女性性障碍的药物
[0395]
[0396]
[0397] (50)用于治疗勃起功能障碍的药物，如前列地尔，阿维立丁，甲磺酸酚妥拉明，维格，前列地尔；
[0398] (51)目前开发的用于治疗男性性功能障碍的药物：
[0399]
[0400]
[0401] (51)开发的用于治疗睡眠呼吸暂停的药物：
[0402]
[0403] (52)目前开发的用于代谢综合征的药物：
[0404]
[0405] (53)减肥药物：
[0406]
[0407] (54)用于治疗阿尔茨海默氏病的药物：例如用于轻度至中度阿尔茨海默氏病的胆碱酯酶抑制剂，包括 (加兰他敏)， (卡巴拉汀)和 (多奈哌齐)， (他克林)； (美金刚)，N-甲基D-天冬氨酸(NMDA)拮抗剂和
用于治疗中度至重度阿尔茨海默氏病；维生素E(抗氧化剂)。
用于治疗中度至重度阿尔茨海默氏病；维生素E(抗氧化剂)。
[0408] (55)抗抑郁药：三环抗抑郁药，如阿米替林 地昔帕明丙咪嗪 阿莫沙平 去甲替林；选择性5-羟色胺再摄取抑制剂
(SSRI's)，如帕罗西汀 氟西汀 舍曲林 和柠檬普兰
其他如多塞平 和曲唑酮 SNRIs(例如文拉法辛
和瑞波西汀)；多巴胺能抗抑郁药(如安非他酮和氨肽)。
(SSRI's)，如帕罗西汀 氟西汀 舍曲林 和柠檬普兰
其他如多塞平 和曲唑酮 SNRIs(例如文拉法辛
和瑞波西汀)；多巴胺能抗抑郁药(如安非他酮和氨肽)。
[0409] (56)神经保护剂：例如美金刚，左旋多巴，溴隐亭，百戈高，他利克索，普拉克索，卡麦角林，目前正在研究的神经保护剂，包括抗凋亡药物(CEP1347和CTCT346)，拉扎洛依，生物能疗法，抗谷氨酸能药物和多巴胺受体。其他临床评估的神经保护剂例如单胺氧化酶B抑制剂司来吉兰和雷沙吉兰，多巴胺激动剂和复合物I线粒体增强剂辅酶Q10。
[0410] (57)抗精神病药物：例如齐拉西酮(齐拉西酮TM)，利培酮(利培酮TM)和奥氮平(奥氮平TM)。
[0411] (58)NEP抑制剂如沙库必曲，奥帕曲拉。
[0412] (59)亚甲基蓝(MB)
[0413] 试剂盒
[0414] 本文所述的化合物和药物制剂可以包含在试剂盒中。试剂盒可以包括单个或多个剂量的两种或更多种试剂，每种试剂单独包装或单独配制，或组合包装或配制单次或多次剂量的两种或多种的试剂。因此，一种或多种试剂可以存在于第一容器中，并且试剂盒可任选地包括在第二容器中的一种或多种试剂。将容器或多个容器放置在包装内，并且包装可任选地包括给药或剂量说明书。试剂盒可以包括另外的组分，例如注射器或用于给药试剂以及稀释剂的其它工具或用于制剂的其它工具。因此，试剂盒可以包括：a)包含本文所述的化合物和药学上可接受的载体，媒介或稀释剂的药物组合物；和b)容器或包装。试剂盒可以任选地包括描述使用本文所述的一种或多种方法(例如预防或治疗本文所述的一种或多种疾病和病症)中的药物组合物的方法的说明书。试剂盒可任选地包含第二药物组合物，其包含本文所述的用于共同治疗使用的一种或多种另外的药物，药学上可接受的载体，媒介或稀释剂。包含本文所述化合物和试剂盒中所含的第二药物组合物的药物组合物可任选地以相同的药物组合物组合。
[0415] 试剂盒包括用于容纳药物组合物的容器或包装，并且还可以包括分开的容器，例如分开的瓶子或分割的箔包装袋。容器可以是例如纸或纸板箱，玻璃或塑料瓶或罐，可重新密封的袋(例如，以盛放可放置于不同容器中的片剂的填充物)，或泡罩包装，其中每个剂量按照治疗方案压出包装。可以在单个包装中一起使用多个容器以销售单个剂型。例如，片剂可以包含在瓶子中，而瓶子又包含在盒子内。
[0416] 试剂盒的实例是所谓的泡罩包装。泡罩包装在包装行业中是众所周知的，并且被广泛用于药物单位剂型(片剂，胶囊等)的包装。泡罩包装通常由用优选透明塑料材料的箔覆盖的相对刚硬的材料制成。在包装过程中，在塑料箔中形成凹部。这些凹部具有要包装的各个片剂或胶囊的尺寸和形状，或者可以具有尺寸和形状以容纳要包装的多个片剂和/或胶囊。接下来，将片剂或胶囊相应地放置在凹部中，并且将相对刚性的材料片密封在与形成凹部的方向相反的箔的表面处的塑料箔上。因此，根据需要，片剂或胶囊单独地或共同地被密封在塑料箔和片材之间的凹部中。优选地，片材的强度使得可以通过在凹部上手动施加压力来将片剂或胶囊从泡罩包装中移去，由此在凹部位置的片材中形成开口。然后可以经由所述开口移去片剂或胶囊。
[0417] 可能有利的是提供书面记忆辅助物，其包含关于何时服用药物的医师，药剂师或受试者的信息和/或指令。“每日剂量”可以是在给定日期摄取的单个片剂或胶囊或数个片剂或胶囊。当试剂盒含有单独的组合物时，试剂盒的一种或多种组合物的日剂量可以由一个片剂或胶囊组成，而该试剂盒的另一种或多种组合物的日剂量可以由多个片剂或胶囊组成。试剂盒可以采用分配器的形式，以按照其预期用途的顺序一次一个地分配每日剂量。分配器可配备记忆助剂，以进一步促进符合该方案。这种记忆助剂的一个例子是机械计数器，其显示已经分配的每日剂量的数量。这种记忆助剂的另一个例子是与液晶读出装置耦合的电池供电的微芯片存储器或可听见的提醒信号，例如，读出最后一次日剂量已被提取的日期和/或提醒下一剂量被提取的日期。实施例
[0418] 实施例中提供的所有参考文献通过引用并入本文。如本文所使用的，所有缩写，符号和约定与当代科学文献中使用的一致。参见，例如Janet S.Dodd编著的“ACS风格指南：作者和编辑手册”，第2版，华盛顿D.C.：美国化学学会，1997，其全部内容通过引用并入本文。
[0419] 实施例1:表IA或表IB中的化合物的合成
[0420] 一般方法A
[0421]
[0422] 步骤1：
[0423] 二酮烯醇化物形成：向冷却至-78℃的酮A的THF溶液中通过注射器滴加LiHMDS(例如，0.9当量，1.0M甲苯溶液)。将反应升温至0℃，然后加入草酸二乙酯(1.2当量)。将反应升温至室温，并在该温度下搅拌，直到判断反应完成(例如，使用TLC或LC/MS分析)。一旦反应完成(反应时间通常为45分钟)，将产物二酮烯醇化物B“直接”用于步骤2，即环化步骤中，无需任何进一步纯化。
[0424] 步骤2：
[0425] 吡唑形成：用乙醇稀释二酮烯醇化物B，并连续加入HCl(例如3当量，1.25M乙醇溶液)和芳基肼水合物(例如1.15当量)。将反应混合物加热至70℃，并在该温度下搅拌，直至认为环化完成(例如通过LC/MS分析，通常30分钟)。一旦完成，将反应混合物小心地用固体碳酸氢钠(例如，4当量)处理，并用二氯甲烷和水稀释。分离各层，将水层用水进一步稀释，然后用二氯甲烷萃取三次。将合并的有机物用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。然后使用适当梯度的EtOAc的己烷溶液，通过SiO2色谱法纯化得到吡唑C。
[0426] 步骤3：
[0427] 脒形成：向冷却至0℃的NH4Cl(例如5当量)的甲苯悬浮液中通过注射器滴加AlMe3(例如5当量，2.0M甲苯溶液)。将反应升温至室温，并在该温度下搅拌直至不再观察到气泡。将吡唑C一次性加入到反应混合物中，加热至110℃，并在该温度下搅拌直至判断反应完成(例如，使用TLC或LC/MS分析)。一旦完成，将反应冷却，用过量甲醇处理，并在室温下剧烈搅拌1小时。过滤粘稠的浆液，将所得的固体滤饼用甲醇洗涤。将滤液真空浓缩，并将所得固体再悬浮于乙酸乙酯：异丙醇＝5:1的溶剂混合物中。将反应物进一步用饱和碳酸钠溶液处理，搅拌10分钟，然后分离各层。水层用乙酸乙酯：异丙醇＝5:1的溶剂混合物(3x)萃取，并将合并的有机物用盐水洗涤。将有机物进一步用MgSO4干燥，过滤，真空除去溶剂。产物脒D无需进一步纯化直接用于后续步骤中。
[0428] 步骤4：
[0429] 嘧啶酮形成：将脒D悬浮在乙醇中，并在23℃下剧烈搅拌以促进完全溶剂化。加入3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(例如3当量)，并且烧瓶配备有回流冷凝器。将反应物置于保持在90℃的预热油浴中并搅拌，直到通过LC/MS观察原料完全消耗(反应时间通常为1小时)。将反应冷却至23℃，并将反应混合物用HCl
[0430] (例如3当量，1.25MEtOH溶液)酸化。将混合物搅拌30分钟，真空除去大部分溶剂。将反应物再悬浮于乙醚和水(1:1混合物)中，将所得浆液搅拌20分钟。将悬浮液真空过滤，并将固体饼用另外的水和乙醚冲洗，并在高真空下干燥过夜。得到的嘧啶酮E无需进一步纯化直接用于后续步骤中。
[0431] 一般方法B
[0432]
[0433] 在90℃下，将氨基亲核试剂(3当量)，三乙胺(10当量)和中间体-1A(1当量)的溶液在二恶烷和水(2:1比例)中搅拌，直到通过LC/MS观察原料完全消耗。将溶液用1N盐酸水溶液和二氯甲烷稀释。然后分离各层，并将水层用二氯甲烷萃取。合并有机物，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。纯化得到所需产物。
[0434] 一般方法C
[0435]
[0436] 在中间体-2(该中间体在先前公开的专利申请WO2012/3405A1中已被描述；1当量)和羧酸(1.1当量)的N，N-二甲基甲酰胺混合物相继加入三乙胺(4当量)和50％的丙基膦酸酐(T3P，1.4当量)的乙酸乙酯溶液。将反应加热至80℃反应24小时，然后将反应物用水和1N盐酸溶液稀释。用二氯甲烷、然后用乙酸乙酯萃取稀释后的反应物。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。纯化得到所需产物。
[0437] 中间体-1A的合成
[0438]
[0439] 将5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-嘧啶-4-醇(中间体-5A；使用步骤1中的1-(异恶唑-3-基)乙酮和步骤2中的2-氟苄基肼11.5g，32.4mmol，1当量，通过一般方法A产生)和磷酰三氯(60.3mL，647mmol，20当量)的混合物在60℃下反应3小时。将溶液冷却至23℃，并在搅拌下在15分钟内分批滴入冰水(800mL)中。加完后，将混合物再搅拌15分钟，用二氯甲烷(500mL)稀释。分离各层，水层用二氯甲烷(2×200mL)萃取。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到中间
[0440] 体-1A(12.5g，产率103％)，为黄褐色固体。
[0441] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.11(d,1H),9.04(s,1H),7.71–7.68(m,1H),7.37–7.30(m,2H),7.25–7.20(m,1H),7.12(t,1H),6.92(td,1H),5.95(s,2H).
[0442] 中间体-9的合成
[0443]
[0444] 除了5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-甲酸乙酯(4当量)是胺反应物外，按照一般方法B，由中间体-1A制备目标化合物，反应在THF中进行。用二氯甲烷和盐水进行后处理。粗产物通过硅胶色谱法纯化使用0-10％甲醇/二氯甲烷流动相梯度洗脱，得到所需固体中间体-9(42mg，产率37％)。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,1H),8.35(d,1H),7.40(s,1H),7.21-7.16(m,1H),7.01(t,1H),6.95(t,1H),6.84(t,1H),6.65(d,1H),5.98(s,2H),5.35(s,2H),4.59(t,2H),4.48(q,2H),4.30(t,2H),1.44(t,3H).
[0445] 中间体-8的合成
[0446]
[0447] 除了3-氨基-2,2-二氟丙酸是胺反应物外，按照一般方法B，由中间体-1A制备目标化合物。在二恶烷/水(10:1)的溶液中将反应物在110℃下加热18小时。将反应物真空浓缩，1
加入甲醇，粗产物经反相HPLC纯化，得到所需中间体-8(20mg，产率22％)。H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78(d,1H),8.22(d,1H),7.61(s,1H),7.25-7.31(m,1H),7.07-7.12(m,1H),
7.05(t,1H),6.96(d,1H),6.89(t,1H),6.00(s,2H),4.35(t,2H).
加入甲醇，粗产物经反相HPLC纯化，得到所需中间体-8(20mg，产率22％)。H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78(d,1H),8.22(d,1H),7.61(s,1H),7.25-7.31(m,1H),7.07-7.12(m,1H),
7.05(t,1H),6.96(d,1H),6.89(t,1H),6.00(s,2H),4.35(t,2H).
[0448] 中间体-13的合成
[0449]
[0450] 2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5-硝基嘧啶-4-醇(该起始材料在先前公开的专利申请WO2012/3405A1中描述)(25mg，1当量)用POCl3(457μl，75当量)处理，并在回流下搅拌1.5小时。真空浓缩反应物，残余物与甲苯(x2)共沸。将残余物再溶解于THF(0.7mL)中并加入吗啉(171μl，30当量)。将反应物加热至40℃，并在该温度下搅拌反应1.5小时。将残余物转移到乙酸乙酯和水的1:1混合物中。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取3次。合并有机部分，用盐水洗涤。将有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到所需化合物(30mg，97％)，为浅黄色固体。
[0451] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(d,1H),8.36(d,1H),8.09-8.16(m,1H),7.69(dd,1H),7.41(d,1H),7.20(t,1H),6.66-6.70(m,1H),6.45(d,1H),6.06(s,2H),3.79-3.86(m,
4H),3.74(m,4H).
4H),3.74(m,4H).
[0452] 中间体-3的合成
[0453] 目标化合物由3个步骤合成：
[0454] 步骤1：2-(三氟甲基)环氧乙烷-2-甲酰胺的合成
[0455]
[0456] 向2-(溴甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺(1当量)的丙酮溶液中加入碳酸钾(2当量)。将混合物加热回流2小时。将混合物真空浓缩。将所得残余物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到2-(三氟甲基)环氧乙烷-2-甲酰胺(1.44g，产率76％)，为黄色胶状物。
[0457] 1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 3.17(dd,2H).
[0458] 步骤2：2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺的合成
[0459]
[0460] 将氨[7M的甲醇溶液](10当量)和2-(三氟甲基)环氧乙烷-2-甲酰胺(1当量)的混合物在密封的小瓶中在80℃下搅拌24小时。将混合物真空浓缩，得到2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺(1.3g，产率84％)，为棕色胶状物。
[0461] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ3.01-3.11(m,1H),2.84(d,1H).
[0462] 步骤3：中间体-3的合成
[0463]
[0464] 除了2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺(4当量)是胺反应物，按照一般方法B，由中间体-1A制备目标化合物。使用4当量的三乙胺，将反应物的二恶烷/水(3:1)溶液在90℃加热24小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到固体。将固体通过硅胶色谱(梯度为0至80％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到所需中间体-3(262mg，产率40％)，为白色固体。
[0465] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.08-9.13(m,1H),8.33(d,1H),7.49-7.55(m,1H),7.28-7.37(m,1H),7.17-7.25(m,2H),7.10(t,1H),6.98(t,1H),5.86-5.92(m,2H),3.92-
4.04(m,2H).
4.04(m,2H).
[0466] 中间体-5D的合成
[0467] 目标化合物由3个步骤合成：
[0468] 步骤1：1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成
[0469]
[0470] 向3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯的DMF溶液中加入氢化钠(60wt％，在矿物油中，1.2当量)。10分钟后，加入2-氟苄基溴(1.2当量)，将反应搅拌20小时。加入水，所得混合物用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(梯度为10-40％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(产率79％)和1-(2-氟苄基)-3-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(产率9％)。
[0471] 步骤2：1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸的合成
[0472]
[0473] 向1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的THF/MeOH/水(3:1:1比例)溶液中加入氢氧化锂水合物(1.5当量)。反应23小时后，真空除去挥发性有机物，所得混合物用1N HCl酸化至pH＝3。通过真空过滤得到1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(产率
92％)。
92％)。
[0474] 步骤3：1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲腈的合成
[0475]
[0476] 向1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸，2-甲基丙-2-胺(3当量)和三乙胺(2当量)的乙酸乙酯悬浮液中加入正丙基膦酸酐(T3P，50wt％的乙酸乙酯溶液，3当量)。将所得黄色溶液在65℃加热反应2.5小时。真空除去溶剂。加入三氯化磷(12当量)，将所得混合物在70℃下搅拌1小时40分钟。将其小心地倾入水和冰的混合物中来淬灭反应，通过加入饱和碳酸氢钠溶液中和至pH＝7，并用二氯甲烷萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(梯度为10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-腈(产率49％)。
[0477] 步骤4：1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲脒的合成
[0478]
[0479] 将1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-腈的甲醇溶液中加入甲醇钠(25wt％MeOH溶液，5当量)，并搅拌24小时。加入氯化铵(10当量)。26小时后，将反应混合物真空浓缩并用半饱和碳酸氢钠和乙酸乙酯稀释。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。由于反应不完全，起始原料剩余。将该混合物再次按上述条件处理，得到1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲脒(产率92％)。
[0480] 步骤5：中间体-5D的合成
[0481]
[0482] 将(Z)-3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(参见一般方法A，步骤4，3.0当量)加入1-(2-氟苄基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲脒的悬浮液，并在90℃下加热1小时。冷却至室温后，通过加入HCl(1.25M的EtOH溶液)中和反应混合物。将所得褐色悬浮液真空浓缩。将残余物用二氯甲烷和水稀释，水层用二氯甲烷萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。用二氯甲烷打浆，得到目标化合物(206mg，产率62％)，为白色固体。
[0483] 1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.9(br s,1H),8.07(br s,1H),7.38(app.q,1H),7.25(m,1H),7.18(app.t,1H),7.11(m,1H),6.72(s,1H),5.44(s,2H),2.30(s,3H).
[0484] 中间体-12的合成
[0485] 目标化合物由2个步骤制备：
[0486] 步骤1：2-(二氰基甲基)-2-甲基丙二酸二乙酯的合成
[0487]
[0488] 将2-溴-2-甲基丙二酸二乙酯(1当量)，丙二腈(1当量)和叔丁醇钾(1当量)的THF溶液加热至回流15小时。将混合物用乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液稀释，分离各相。水相用乙酸乙酯萃取两次。合并的有机相用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到油状物。通过硅胶色谱(梯度为10-15％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化油状物，得到2-(二氰基甲基)-2-甲基丙二酸二乙酯(5.76g，产率32％)，为无色油状物。
[0489] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 4.53(s,1H),4.27-4.39(m,4H),1.81(s,3H),1.33(t,6H).
[0490] 步骤2：中间体-12的合成
[0491]
[0492] 将1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒盐酸盐(由一般方法A的步骤3，通过在步骤1中使用1-(异恶唑-3-基)乙酮和在步骤2中使用2-氟苄基肼制备)(1当量)，
2-(二氰基甲基)-2-甲基丙二酸二乙酯(等当量)和碳酸氢钾(2当量)的t-BuOH溶液加热回流5小时。冷却后，向反应混合物中加入水并搅拌30分钟。过滤沉淀，用最少量的水和乙醚洗涤，在高真空下干燥过夜，得到中间体-12(385mg，产率52％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.30(s,1H),9.10(d,1H),7.38(s,1H),7.29-7.36(m,1H),7.18-7.26(m,
2H),7.08-7.14(m,1H),6.81-6.90(m,1H),6.65(br.s.,2H),5.88(s,2H),4.04-4.16(m,
2H),1.59(s,3H),1.11(t,3H).
2-(二氰基甲基)-2-甲基丙二酸二乙酯(等当量)和碳酸氢钾(2当量)的t-BuOH溶液加热回流5小时。冷却后，向反应混合物中加入水并搅拌30分钟。过滤沉淀，用最少量的水和乙醚洗涤，在高真空下干燥过夜，得到中间体-12(385mg，产率52％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.30(s,1H),9.10(d,1H),7.38(s,1H),7.29-7.36(m,1H),7.18-7.26(m,
2H),7.08-7.14(m,1H),6.81-6.90(m,1H),6.65(br.s.,2H),5.88(s,2H),4.04-4.16(m,
2H),1.59(s,3H),1.11(t,3H).
[0493] 中间体-11的合成
[0494]
[0495] 将氨(7.0M，在MeOH中)(200当量)加入到中间体-12(1当量)中。将反应混合物在50℃加热16小时。然后将所得溶液真空浓缩，并将残余物通过反相HPLC(含有1％TFA的5-60％乙腈水溶液)纯化，得到为白色固体的中间体-11(24mg，产率63％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 11.35(br.s.,1H),9.08-9.13(m,1H),7.47(s,1H),7.43(s,1H),7.28-7.38(m,1H),7.23-7.27(m,1H),7.17-7.23(m,2H),7.06-7.14(m,1H),6.77-7.00(m,3H),5.91(s,
2H),1.56(s,3H)。
2H),1.56(s,3H)。
[0496] 中间体-5B的合成
[0497]
[0498] 将中间体-5A和甲醇钠在甲醇(0.5M溶液，4当量)中的悬浮液在微波容器中在130℃加热4小时。将反应用1N HCl溶液淬灭至pH＝2，并将所得残余物过滤。固体用甲醇洗涤并真空干燥，得到所需化合物(1.45g，68％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.04(d,1H),7.71(s,1H),7.23-7.36(m,1H),7.00-7.18(m,2H),6.90(t,1H),5.94(s,2H),2.56(s,3H).
[0499] 中间体-1B的合成
[0500]
[0501] 向中间体-5B中加入三氯氧磷(60当量)，所得混合物在45℃下搅拌，直到通过LC/MS判断反应完成。然后将反应物小心地倒在冰上，用4:1二氯甲烷/异丙醇萃取，分离各层。合并有机相，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。该物质无需进一步纯化即可用于下一步骤。
[0502] 中间体-6的合成
[0503]
[0504] 按照一般方法B，用1-((甲基氨基)甲基)环丙烷甲酸作为胺反应物制备目标化合物，使用中间体-1B代替中间体-1A，并将反应物的二恶烷溶液在100℃下加热36小时。将粗产物经反相HPLC纯化，得到所需中间体-6(50mg，产率69％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 12.53(br.s,1H),8.19(d,1H),7.65(s,1H),7.33(d,1H),7.17-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.86(t,1H),5.81(s,2H),4.00(s,2H),3.24(d,3H),2.57(s,3H),1.03(d,
2H),0.74-0.91(m,2H).
2H),0.74-0.91(m,2H).
[0505] 中间体-4的合成
[0506] 目标化合物由3个步骤合成：
[0507] 步骤1：2-(溴甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酸的合成
[0508]
[0509] 将2-(溴甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙腈(1当量)，水(1当量)和浓硫酸(4当量)的混合物在密封小瓶加热至110℃反应1小时。将混合物倒在冰上，用乙醚萃取。将有机层用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到透明油状的2-(溴甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酸(1.3g，产率33％)。
[0510] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.89(d,1H),3.63-3.69(m,1H).
[0511] 步骤2：2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酸的合成
[0512]
[0513] 将氢氧化铵[28％水溶液](10当量)和2-(溴甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酸(1当量)的混合物在23℃下搅拌24小时。将混合物真空浓缩。将所得固体用最少量的乙醇处理。通过过滤收集沉淀，并在真空下干燥，得到2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酸(412mg，产率43％)，为白色固体。
[0514] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 2.86-3.27(m,2H).
[0515] 步骤3：中间体-4的合成
[0516]
[0517] 除了2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酸(4当量)是胺反应物，按照一般方法B制备目标化合物。使用6当量的三乙胺，并将反应物的1,4-二恶烷/水(4:1)溶液加热至85℃，持续反应24小时。将混合物冷却至23℃并用乙酸乙酯稀释。有机层用饱和氯化铵溶液洗涤，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得到粗产物。粗产物使用硅胶色谱法用梯度为0-100％乙酸乙酯/己烷溶液洗脱纯化，得到白色固体状的中间体-4(50mg，步骤3的产率为7％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.28(d,1H),7.59(t,1H),7.46(s,1H),7.30-7.36(m,1H),7.16-7.24(m,2H),7.10(t,1H),6.91(t,1H),5.88(s,2H),4.24(dd,1H),3.84(dd,1H).[0518] 中间体-7的合成
[0519]
[0520] 将1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒盐酸盐(通过一般方法A的步骤3制备，1当量)，4-氧代四氢噻吩-3–甲酸叔丁酯(3当量)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(1当量)的吡啶溶液加热至80℃反应12小时。将反应物真空浓缩，使用甲醇打浆，真空浓缩，再次使用甲醇打浆。将沉淀物过滤并干燥，得到所需的环硫化物中间体(190mg，产率45％)，为淡褐色固体。向该硫化物中间体(1当量)的二氯甲烷溶液中加入过乙酸(2.3当量)。反应30分钟后，将反应物真空浓缩，用水打浆，过滤，得到所需中间体-7(148.8mg，产率73％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ10.2(br.s,1H),8.56(s,1H),7.31–7.34(m,
1H),7.30(s,1H),7.07–7.12(m,3H),6.64(m,1H),5.93(s,2H),4.36(s,2H),4.35(s,2H).[0521] 中间体-10的合成
1H),7.30(s,1H),7.07–7.12(m,3H),6.64(m,1H),5.93(s,2H),4.36(s,2H),4.35(s,2H).[0521] 中间体-10的合成
[0522]
[0523] 目标化合物由2个步骤合成：
[0524] 步骤1：
[0525] 按照一般方法B，使用中间体-13代替中间体-1A，2-(氨基甲基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(1.5当量)为胺反应物，使用3当量的三乙胺，反应物的二恶烷：水(3:1)溶液在30℃加热1小时。将反应冷却并用乙酸乙酯稀释。将有机层用水(2次)和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。使用梯度为0-100％乙酸乙酯/己烷通过硅胶色谱法纯化粗产品，以得到所需中间体
[0526] (77mg，产率73％)，为白色固体的。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.36(s,1H),8.59(m,1H),8.55(d,1H),7.64(br s,1H),
[0527] 7.42(s,1H),7.28(m,1H),7.08(m,1H),7.06(m,1H),6.64(d,1H),5.98(s,2H),4.27,(d,2H).
[0528] 步骤2：中间体-10的合成
[0529] 将步骤1中得到的中间体(1当量)的甲醇溶液在23℃下加入10％钯/碳(0.2当量)，置换氢气。将混合物在正H2压力下搅拌1小时，并通过硅藻土过滤。用甲醇冲洗滤饼，并将合并的洗液真空浓缩。所得粗残余物通过硅胶色谱法使用乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱纯化，得到所需的中间体-10(53mg，产率66％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.39(s,1H),7.92(br s,1H),7.19(m,1H),7.13(m,2H),7.98(m,1H),6.92(m,2H),6.52(s,1H),5.85(s,2H),4.01,(s,2H).
[0530] 中间体-5C的合成
[0531] 目标化合物由4个步骤合成：
[0532] 步骤1：(3,3,3-三氟丙基)肼盐酸盐的合成
[0533]
[0534] 将3-溴-1,1,1-三氟丙烷(1当量)和水合肼(10当量)溶于无水乙醇中，并在80℃下加热18小时。将溶液冷却至23℃并在15℃下真空浓缩。将油状粗产物用水和二氯甲烷稀释，然后加入固体碳酸钾以饱和水层。将各相混合并分离，然后将水相用另外的二氯甲烷萃取2次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，并在真空下浓缩，得到无色油状物。取出一小部分中性肼产物用于NMR进行表征。将剩余物溶于乙醚中并用盐酸(2.5M乙醇溶液)处理，真空浓缩得到所需中间体(3,3,3-三氟丙基)肼盐酸盐(2.02g，产率43％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ ppm 3.18(br s,4H),3.02(m,2H),2.36(m,2H).
[0535] 步骤2：3-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯的合成[0536]
[0537] 将(3,3,3-三氟丙基)肼盐酸盐(1当量)的乙醇/水(9:1)溶液,在23℃下加入碳酸钾(0.6当量)，然后加入4-(异恶唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(2当量，通过在步骤1中使用1-(异恶唑-3-基)乙酮，经过一般方法A的步骤1生成)。将溶液在23℃下搅拌2天，然后向反应中滴加6N盐酸(1.5当量)。真空除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯中。将有机物用水洗涤5次，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用乙酸乙酯/二氯甲烷梯度洗脱，得到所需的吡唑酯，3-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.34g，产率36％)，为浅黄色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.55(d,1H),7.15(s,1H),6.63(d,1H),4.95(m,2H),4.46(q,2H),2.85(m,2H),1.44(t,3H).
[0538] 步骤3：5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑-3-甲脒的合成
[0539]
[0540] 使用3-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯作为起始酯，按照一般方法A的步骤3中所述的方法制备所需的脒中间体。将反应物在110℃加热4小时。将反应混合物在冰中冷却，然后在5分钟内连续加入甲醇(14当量)和盐酸水溶液(17当量)。
将该混合物在80℃加热30分钟，然后在冰中冷却并过滤。滤饼用甲苯洗涤2次，空气干燥，得到粗产物脒盐酸盐。将该物质在饱和碳酸钠水溶液中搅拌，并用乙酸乙酯/异丙醇(5:1混合物)萃取。有机相用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到所需的中性脒，5-
1
(异恶唑-3-基)-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑-3-甲脒，为浅黄色固体。H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.45(d,1H),6.99(s,1H),6.55(d,1H),5.61(br.s.,3H),4.83–4.74(m,2H),
2.81–2.65(m,2H).
将该混合物在80℃加热30分钟，然后在冰中冷却并过滤。滤饼用甲苯洗涤2次，空气干燥，得到粗产物脒盐酸盐。将该物质在饱和碳酸钠水溶液中搅拌，并用乙酸乙酯/异丙醇(5:1混合物)萃取。有机相用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到所需的中性脒，5-
1
(异恶唑-3-基)-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑-3-甲脒，为浅黄色固体。H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.45(d,1H),6.99(s,1H),6.55(d,1H),5.61(br.s.,3H),4.83–4.74(m,2H),
2.81–2.65(m,2H).
[0541] 步骤4：中间体-5C的合成
[0542]
[0543] 使用5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,3-三氟丙基)-1H-吡唑-3-甲脒作为起始脒，目标产物按照一般方法A的步骤4制备。使用2.5当量的(Z)-3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠，并将反应物在90℃下加热2小时。将反应冷却至23℃，真空除去溶剂。将残余物再溶解于二氯甲烷中，并用盐酸(2.5M，在乙醇中，3当量)处理。将所得固体过滤，用二氯甲烷洗涤2次，空气干燥，得到所需化合物(0.43g，产率110％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.84(d,1H),8.03(d,1H),7.40(s,1H),6.95(d,1H),4.96(t,2H),2.92(m,2H).
[0544] 中间体-16的合成
[0545] 目标化合物由2个步骤制备：
[0546] 步骤1：(E)-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5-(苯基二氮烯基)嘧啶-4,6-二胺的合成
[0547] 将1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒(通过一般方法A的步骤3制备中间体1A的方法制备，1当量)，(E)-2-(苯基二氮烯基)丙二腈(1.2当量)和碳酸氢钾(2当量)的t-BuOH溶液加热回流18小时。冷却后，将反应混合物真空浓缩，无需进一步纯化即可用于下一步骤。
[0548] 步骤2：中间体-16的合成
[0549]
[0550] 将(E)-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5-(苯基二氮烯基)嘧啶-4,6-二胺(1当量)和20％钯碳(0.5当量)的DMF溶液使用氢气保护，在23℃下搅拌18小时。然后将反应混合物通过硅藻土过滤，残余物用DMF洗涤，然后用少量甲醇洗涤。将滤液真空浓缩，将残余物悬浮于含有一滴甲醇的乙酸乙酯中并剧烈搅拌。过滤沉淀，用乙酸乙酯洗涤，真空干燥，得到所需的三氨基嘧啶中间体，2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-嘧啶-4,5,6-三胺(278mg，2步收率为46％)，为暗黄色固体。
[0551] 中间体-14的合成
[0552]
[0553] 将哌啶-4-甲酸(3当量)，三乙胺(10当量)和中间体-1A的四氢呋喃和水(1:1比例)溶液在100℃下搅拌，直到通过LC/MS判断起始原料消耗完全，按照一般方法B，将溶液用1N盐酸水溶液和乙酸乙酯稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯和5:1二氯甲烷/异丙醇萃取。合并有机物，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过反相HPLC(含有0.1％三氟乙酸的5-75％乙腈水溶液，20分钟梯度)纯化，得到中间体-14(11mg，产率44％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.79(m,1H),8.23(d,1H),7.57(m,1H),7.31-7.26(m,1H),7.12-7.03(m,2H),6.96(m,1H),6.90(t,1H),5.99(s,2H),4.70(d,2H),3.51-3.45(m,2H),2.79-2.74(m,
1H),2.15-2.11(m,2H),1.90-1.80(m,2H).
1H),2.15-2.11(m,2H),1.90-1.80(m,2H).
[0554] 化合物25
[0555]
[0556] 将中间体-3(1当量)和NBS(1.2当量)的DMF溶液在23℃下搅拌24小时。将反应物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物。通过柱色谱法纯化油状物，得到所需化合物(27mg，产率4％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.24(d,1H),8.37(d,1H),7.86(br.s.,1H),7.31-7.37(m,1H),7.09-7.20(m,3H),5.68(s,
2H),4.04(d,2H).
2H),4.04(d,2H).
[0557] 化合物52
[0558] 目标化合物由3个步骤合成：
[0559] 步骤1：3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼合成
[0560]
[0561] 将含有(重氮甲基)三甲基硅烷(2当量)和中间体-4(1当量)的THF(3.0ml)溶液在80℃加热4小时。将混合物冷却至23℃，真空浓缩，得到所需的中间体酯。将中间体(1当量)与水(11当量)，无水肼(130当量)和甲醇合并，并加热至50℃反应2小时。反应完成后，使用甲醇和苯作为共沸物除去过量的肼。将所得残余物进一步真空干燥，得到所需中间体，3,3,
3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)
1
甲基)-2-羟基丙酰肼(257mg，产率64％)，为浅黄色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm
9.11(d,1H),8.33(d,1H),7.52(s,1H),7.27-7.41(m,1H),7.18-7.26(m,2H),7.11(t,1H),
6.96(t,1H),5.90(s,2H),3.98(br.s.,2H).
3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)
1
甲基)-2-羟基丙酰肼(257mg，产率64％)，为浅黄色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm
9.11(d,1H),8.33(d,1H),7.52(s,1H),7.27-7.41(m,1H),7.18-7.26(m,2H),7.11(t,1H),
6.96(t,1H),5.90(s,2H),3.98(br.s.,2H).
[0562] 步骤2：N'-乙酰基-3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基))嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼的合成
[0563]
[0564] 向含有碳酸钾(5当量)和3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼(1当量)的THF/水(1:1)溶液中加入乙酰氯(1.5当量)。将混合物在23℃下搅拌1小时。混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤，并真空浓缩，得到固体粗产物。将固体通过硅胶色谱法纯化，得到所需的中间体，N'-乙酰基-3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-
1H-吡唑-3-基))嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼(190mg，产率64％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm9.08-9.12(m,1H),8.06(s,1H),7.50-7.56(m,1H),7.32(d,
1H),7.17-7.26(m,2H),7.10(t,1H),6.89-6.99(m,1H),5.84-5.96(m,2H),3.91-4.17(m,
2H),1.85(s,3H).
1H-吡唑-3-基))嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼(190mg，产率64％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm9.08-9.12(m,1H),8.06(s,1H),7.50-7.56(m,1H),7.32(d,
1H),7.17-7.26(m,2H),7.10(t,1H),6.89-6.99(m,1H),5.84-5.96(m,2H),3.91-4.17(m,
2H),1.85(s,3H).
[0565] 步骤3：化合物52的合成
[0566]
[0567] 向0℃冷却的N'-乙酰基-3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基))嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼(1当量)的吡啶溶液中加入三氟甲磺酸酐(5当量)。将混合物从冰浴中移出并在23℃下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物，将其通过硅胶色谱法纯化。将该物质进一步用最小量的甲醇和二氯甲烷冲洗，通过过滤收集，并真空干燥，得到所需化合物(48mg，产率26％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.11(d,1H),8.26(d,1H),7.40(s,1H),7.31-7.37(m,1H),7.22(d,1H),7.19(d,1H),7.12(t,1H),6.94(t,
1H),5.84-5.92(m,2H),4.29(dd,1H),4.17(dd,1H),2.25(s,3H).
1H),5.84-5.92(m,2H),4.29(dd,1H),4.17(dd,1H),2.25(s,3H).
[0568] 化合物69
[0569] 目标化合物经2步合成：
[0570] 步骤1：N'-(3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰基)环丙烷甲酰肼的合成
[0571]
[0572] 向含有碳酸氢钾(5当量)和3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼(如化合物52，步骤1的合成中所述)(1当量)的THF和水的1:1混合溶液中加入环丙烷甲酰氯(5当量)。将混合物在23℃下搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到所需中间体，N'-(3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰基)环丙烷甲酰肼(206mg，产率51％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm9.10(d,1H),8.32(d,1H),7.52(s,1H),7.33(s,1H),7.16-7.26(m,2H),7.09(t,1H),6.93(s,1H),5.90(s,2H),4.07-4.14(m,2H),1.59(d,1H),0.66-
0.76(m,4H).
0.76(m,4H).
[0573] 步骤2：2-(5-环丙基-1,3,4-恶二唑-2-基)-1,1,1-三氟-3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙-2-醇的合成
[0574]
[0575] 向冷的N'-(3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰基)环丙烷碳酰肼(1当量)的吡啶溶液中加入三氟甲磺酸酐(4当量)。反应完成后，混合物用乙酸乙酯稀释，用1N HCl溶液洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物。通过硅胶色谱法纯化油状物，得到所需化合物(9mg，产率9％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.08-9.13(m,1H),8.27(d,1H),7.37(s,1H),7.28-7.36(m,1H),7.19-7.25(m,1H),7.17(d,1H),7.11(t,1H),6.93(t,1H),5.87(s,2H),4.08-4.16(m,2H),1.97-2.08(m,1H),0.93(dd,2H),0.74(dd,2H).
[0576] 化合物61
[0577] 目标化合物经3步合成：
[0578] 步骤1：1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酰肼的合成
[0579]
[0580] 向1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒盐酸盐(通过一般方法A的步骤3中所述的方法，在步骤1中使用1-(异恶唑-3-基)乙酮，在步骤2中使用2-氟苄基肼制备，1当量)的乙醇悬浮液中加入三乙胺(4当量)。向该混合物中加入一水合肼(1当量)。将混合物在23℃下搅拌24小时并真空浓缩。所得残余物用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到所需中间体，1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酰肼(461mg，产率99％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.75(d,1H),7.18-7.40(m,
1H),6.97-7.15(m,3H),6.79-6.92(m,2H),5.82-5.97(m,2H).
1H),6.97-7.15(m,3H),6.79-6.92(m,2H),5.82-5.97(m,2H).
[0581] 步骤2：2-(3-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5-羟基-1,2,4-三嗪-6-基)-2-甲基丙酸乙酯(化合物110)的合成
[0582]
[0583] 将含有1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-碳酰亚胺(1当量)，碳酸氢钾(1.2当量)和2,2-二甲基-3-氧代琥珀酸二乙酯(1.2当量)的乙醇溶液在80℃加热24小时并真空浓缩。将所得残余物用乙酸乙酯稀释，并用盐水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状物。通过柱色谱法纯化，得到所需的中间体，2-(3-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5-羟基-1,2,4-三嗪-6-基)-2-甲基丙酸乙酯(400mg，产率34％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.80(d,1H),8.77(d,1H),7.53(s,1H),7.36(s,1H),
7.26-7.33(m,3H),6.03(s,2H),4.11-4.17(m,2H),1.53(s,6H),1.22-1.27(m,3H).
7.26-7.33(m,3H),6.03(s,2H),4.11-4.17(m,2H),1.53(s,6H),1.22-1.27(m,3H).
[0584] 步骤3：化合物61的合成
[0585]
[0586] 将含有2-(3-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5-羟基-1,2,4-三嗪-6-基)-2-甲基丙酸乙酯(化合物110)和三氯氧化磷(10当量)的混合物在23℃下搅拌2小时。将混合物真空浓缩。向该混合物中加入7N氨的甲醇溶液(4当量)和另外的甲醇。将反应在23℃下搅拌30分钟。过滤，得到所需化合物(8.3mg，产率8％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78-8.80(m,1H),7.64(s,1H),7.26-7.32(m,1H),7.08-7.14(m,1H),7.05(t,1H),6.95-6.98(m,1H),6.87(t,1H),6.00-6.05(m,2H),4.17(s,3H),4.15(q,
2H),1.66(s,6H),1.15-1.21(m,3H).
2H),1.66(s,6H),1.15-1.21(m,3H).
[0587] 化合物70
[0588]
[0589] 将含有麝香醌(1.5当量)，三甲胺(1.5当量)和中间体-1B(1当量)的1,4-二恶烷/水(3:1)溶液加热至70℃反应24小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物。通过硅胶色谱(0至100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化油状物，得到所需化合物(13mg，产率21％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.26(d,1H),7.68(s,1H),7.29-7.36(m,1H),7.18-7.26(m,2H),7.11(t,1H),6.85(t,1H),
5.82(s,2H),3.31(s,2H),2.57(d,3H).
5.82(s,2H),3.31(s,2H),2.57(d,3H).
[0590] 化合物71
[0591]
[0592] 将含有2-(三氟甲基)哌嗪(3当量)，三乙胺(3当量)和中间体-1B(1当量)的1,4-二恶烷/水(3:1)溶液加热至80℃反应1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释。有机层用水洗涤，干燥，过滤并蒸发，得到粗油状物。通过硅胶色谱(0至100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化油状物，得到所需化合物(40mg，产率60％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.24(d,1H),7.66(s,1H),7.20-7.39(m,1H),7.03-7.15(m,2H),6.83(t,1H),5.84(s,2H),4.67(d,
1H),4.42(d,1H),3.58(t,1H),3.37-3.48(m,2H),3.15(d,1H),2.87-3.02(m,1H),2.58(s,
3H).
1H),4.42(d,1H),3.58(t,1H),3.37-3.48(m,2H),3.15(d,1H),2.87-3.02(m,1H),2.58(s,
3H).
[0593] 化合物72
[0594]
[0595] 将含有(S)-2-(氨基甲基)-3-甲基丁酸盐酸盐(4当量)，三乙胺(2当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的1,4-二恶烷/水溶液加热至70℃反应24小时。将混合物用乙酸乙酯稀释。有机层用1N HCl洗涤，干燥，过滤并蒸发，得到固体。将固体通过硅胶色谱法(0至10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到所需化合物(14mg，产率29％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.04(d,1H),7.63-7.69(m,1H),7.27(q,1H),7.00-7.15(m,2H),6.83(t,1H),5.86-5.95(m,2H),
3.70-3.93(m,2H),2.63-2.74(m,1H),2.56(s,3H),1.93-2.07(m,1H),1.02-1.15(m,6H).[0596] 化合物73和化合物74
3.70-3.93(m,2H),2.63-2.74(m,1H),2.56(s,3H),1.93-2.07(m,1H),1.02-1.15(m,6H).[0596] 化合物73和化合物74
[0597] 目标化合物经3步合成：
[0598] 步骤1：
[0599]
[0600] (S)-2-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-3-甲基丁酸的合成
[0601] 将含有二碳酸二叔丁酯(2当量)，三乙胺(1当量)和(S)-2-(氨基甲基)-3-甲基丁酸(1当量)的甲醇溶液在23℃下搅拌24小时。将混合物真空浓缩。将所得残余物用乙酸乙酯稀释，并用1N HCl溶液洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到所需中间体，(S)-2-(((叔丁氧基羰基)-氨基)甲基)-3-甲基丁酸(730mg，产率100％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.39-3.55(m,1H)3.06-3.31(m,1H)2.40-2.58(m,1H)1.86-2.10(m,1H)1.38-1.52(m,9H)0.94-1.05(m,6H).
[0602] 步骤2：
[0603]
[0604] (S)-2-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)-3-甲基丁酸的合成
[0605] 在0℃向(S)-2-(((叔丁氧基羰基)氨基)甲基)-3-甲基丁酸(1当量)的THF溶液中加入氢化钠[60％矿物油分散液](10当量)。将混合物在0℃下搅拌15分钟。向该混合物中加入碘甲烷(10当量)。将混合物从冰浴中移出并在23℃下搅拌24小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用1N HCl溶液洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状物。通过柱色谱法(0至30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化油状物，得到所需中间体，(S)-2-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)-3-甲基丁酸(186mg，产率25％)，为黄色油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.50-3.61(m,1H)3.29-3.41(m,1H)2.87(s,3H)2.47-2.68(m,1H)1.91(d,1H)1.46(s,9H)
0.96-1.06(m,6H).
0.96-1.06(m,6H).
[0606] 步骤3：化合物73和化合物74的制备
[0607]
[0608] 将含有1.25M HCl(10当量)和(S)-2-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)-3-甲基丁酸(1当量)的乙醇溶液在23℃下搅拌24小时。将混合物真空浓缩。向该混合物中加入三乙胺(3当量)，1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)，1,4-二恶烷和水(3:1)。将混合物加热至40℃反应4小时。混合物用乙酸乙酯稀释，用1N HCl溶液洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状物。通过柱色谱法(0至100％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化油状物，得到两种产物，为白色固体的化合物73(5mg，产率4％)和为浅黄色油状物的化合物74(44mg，产率36％)。
[0609] 化合物73：1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.12(d,1H)7.65(s,1H),7.24-7.32(m,1H),7.10(s,1H),7.04(t,1H),6.82(t,1H),5.85-5.99(m,2H),4.17(dd,1H),3.84(dd,1H),
3.36(d,3H),2.66-2.74(m,1H),2.55(s,3H),1.90-1.99(m,1H),0.99-1.15(m,6H).
3.36(d,3H),2.66-2.74(m,1H),2.55(s,3H),1.90-1.99(m,1H),0.99-1.15(m,6H).
[0610] 化合物74：1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.12(d,1H),7.64(s,1H),7.23-7.32(m,1H),7.08-7.14(m,1H),7.04(t,1H),6.83(t,1H),5.90(s,2H),3.99-4.10(m,3H),3.91(dd,
1H),3.31(d,3H),2.68-2.77(m,1H),2.56(s,3H),1.90-2.03(m,1H),1.07-1.16(m,6H),
0.99(d,3H).
1H),3.31(d,3H),2.68-2.77(m,1H),2.56(s,3H),1.90-2.03(m,1H),1.07-1.16(m,6H),
0.99(d,3H).
[0611] 化合物4
[0612]
[0613] 在23℃向中间体-2(1当量)的二氯甲烷悬浮液中加入草酰氯(3当量)的2M二氯甲烷溶液，然后加入三乙胺(3当量)。10分钟后，将反应混合物真空浓缩，用四氢呋喃稀释，并用饱和氢氧化铵溶液处理。反应混合物变成金色，然后用1N盐酸溶液酸化反应，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用1N盐酸溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，使用5-95％乙腈的水溶液梯度洗脱，得到所需化合物，化合物4(2.3mg，产率4％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 10.19(s,1H),9.07(d,1H),8.82(d,1H),
8.52(s,1H),8.17(s,1H),7.95(d,1H),7.69(s,1H),7.28–7.32(m,1H),7.24(d,1H),7.18–
7.22(m,1H),7.07–7.10(m,1H),6.85–6.88(m,1H),5.91(s,2H).
8.52(s,1H),8.17(s,1H),7.95(d,1H),7.69(s,1H),7.28–7.32(m,1H),7.24(d,1H),7.18–
7.22(m,1H),7.07–7.10(m,1H),6.85–6.88(m,1H),5.91(s,2H).
[0614] 化合物17
[0615]
[0616] 室温下向中间体-2(1当量)的二氯甲烷溶液中加入3-氯-3-氧代丙酸甲酯(1.15当量)，然后加入三乙胺(1.5当量)。在23℃下搅拌1小时后，将反应混合物倒入1N盐酸溶液中，用二氯甲烷，然后用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到固体。粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用1-8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到所需中间体，3-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3-氧代丙酸甲酯(173mg，产率65％)，为灰白色固体。
[0617] 向3-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3-氧代丙酸甲酯(1当量)的甲醇悬浮液中加入7M氨水的甲醇溶液(7当量)。将反应混合物在室温下搅拌12小时，然后将反应混合物用水稀释，然后过滤，得到灰白色固体。将所得固体溶于乙酸乙酯中，用1N盐酸溶液洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过反相HPLC纯化，使用5-95％乙腈的水溶液梯度洗脱，得到所需化合物(4.1mg，产率2％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78(d,1H),8.69(d,1H),8.13(d,1H),7.54(s,1H),7.26–7.31(m,1H),7.06–7.12(m,1H),7.03–7.06(m,1H),6.87–6.92(m,2H,2重叠位移),5.98(s,2H),3.31(s,2H,与CD3OD峰同步).
[0618] 化合物27
[0619]
[0620] 使用3-羟基异恶唑-5-甲酸(1.3当量)为酸性反应物，按照一般方法C，从中间体-2制备目标化合物。使用2.5当量的T3P，并且在后处理期间使用乙酸乙酯萃取。粗产物通过反相HPLC纯化，使用5-95％乙腈/水梯度洗脱，得到所需化合物(5.8mg，产率5％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.90(br.s,1H),11.65(s,1H),9.12(d,1H),8.84(d,1H),8.09(d,1H),7.71(s,1H),7.32–7.36(m,1H),7.28(d,1H),7.22–7.26(m,1H),7.21(s,
1H),7.10–7.13(m,1H),6.86–6.90(m,1H),5.94(s,2H).
1H),7.10–7.13(m,1H),6.86–6.90(m,1H),5.94(s,2H).
[0621] 化合物45
[0622]
[0623] 室温下向2-(3-羟基-1H-吡唑-4-基)乙酸(1当量)二氯甲烷悬浮液中加入乙酸酐(2当量)，然后加入三乙胺(2当量)。将反应混合物搅拌1小时，然后加入中间体-2(1当量)，三乙胺(2当量)，和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(1.15当量)的50％乙酸乙酯溶液。将反应在50℃下搅拌6小时，然后在室温下再搅拌12小时，之后将反应混合物使用1N盐酸溶液稀释，并用二氯甲烷萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过硅胶色谱法纯化，利用3-30％的7:1乙腈/甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，然后转换为15％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到所需中间体，4-(2-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)乙酸1H-吡唑-3-基酯和紧密存在的杂质1-乙酰基-4-(2-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-氧代乙基)-1H-吡唑-3-基乙酸酯(32.1mg，产率33％)为灰白色固体。
[0624] 向该乙酸酯(1当量)的四氢呋喃/水溶液中加入1M氢氧化钠水溶液(2当量)。将反应混合物在23℃下搅拌24小时，之后加入另外的氢氧化钠(2当量)。搅拌36小时后，加入另外的氢氧化钠溶液(2当量)。40小时后，真空浓缩反应混合物以除去四氢呋喃并加入1M盐酸溶液酸化，形成沉淀。将该固体过滤并干燥，得到所需化合物(12.9mg，产率44％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78(s,1H),8.67(d,1H),8.12(d,1H),7.54(s,1H),7.45(s,1H),7.26–7.30(m,1H),7.08–7.12(m,1H),7.03–7.07(m,1H),6.86–6.90(m,2H,2重叠位移),5.97(s,2H),3.58(s,2H).
[0625] 化合物48
[0626]
[0627] 向2,2-二甲基丙酰胺(1当量)的四氢呋喃悬浮液中加入1M的双(三甲基甲硅烷基)氨基钾(1当量)的四氢呋喃溶液。将反应搅拌30分钟，然后真空浓缩，得到褐色固体。向该固体中加入中间体-1A的二甲基亚砜溶液，并将反应在23℃下搅拌。10分钟后，将反应用3M盐酸溶液稀释，过滤，干燥，得到固体。将粗产物通过反相HPLC，使用10-95％乙腈/水梯度洗脱纯化，得到两种产物的混合物。将该混合物通过硅胶色谱法进一步纯化，使用3-8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到所需化合物(2.2mg，产率4％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 10.35(br.s,1H),8.55(d,1H),7.94(d,1H),7.30–7.34(m,1H),7.26(s,1H),7.08–7.11(m,3H),6.63(d,1H),5.91(s,2H),1.26(s,6H)；2N-H质子未观察到。
[0628] 化合物66
[0629]
[0630] 按照一般方法C，从中间体-2制备目标化合物，使用3-乙氧基-2,2-二甲基-3-氧代丙酸(1当量)作为酸性反应物，使用1.5当量的T3P，并且使用二氯甲烷用于提取。粗产物通过硅胶色谱法，使用3-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到所需化合物(54.0mg，产率42％)，为胶状固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.92(br.s,1H),8.74(d,1H),8.47(s,1H),
8.13(d,1H),7.47(s,1H),7.27(s,1H),7.18–7.24(m,1H),7.02–7.06(m,1H),6.96–7.01(m,
1H),6.80–6.85(m,1H),6.04(s,2H),4.26(q,2H),1.58(s,6H),1.30(t,3H).
8.13(d,1H),7.47(s,1H),7.27(s,1H),7.18–7.24(m,1H),7.02–7.06(m,1H),6.96–7.01(m,
1H),6.80–6.85(m,1H),6.04(s,2H),4.26(q,2H),1.58(s,6H),1.30(t,3H).
[0631] 化合物49
[0632]
[0633] 向化合物66(1当量)在四氢呋喃/水溶液中加入1M氢氧化钠水溶液(1.08当量)。将反应在23℃下搅拌1.5小时，然后将反应混合物浓缩以除去四氢呋喃，然后加入1M盐酸水溶液酸化。将所得沉淀物过滤并干燥，得到所需化合物(36.2mg，产率75％)，为浅褐色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 10.84(s,1H),9.11(d,1H),8.74(d,1H),8.01(d,1H),7.67(s,1H),7.31–7.36(m,1H),7.27(d,1H),7.21–7.25(m,1H),7.10–7.13(m,1H),6.83–6.86(m,1H),5.93(s,2H),1.44(s,6H)；1N-H质子未观察到。
[0634] 化合物51
[0635]
[0636] 0℃下向化合物49(1当量)的二氯甲烷溶液中加入2M草酰氯(2.5当量)的二氯甲烷溶液。将反应在0℃下搅拌15分钟，然后温热至23℃。1小时后，将反应混合物真空浓缩，加入四氢呋喃，并用饱和氢氧化铵溶液处理。2小时后，将反应物用水稀释，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，使用5-95％乙腈的水溶液梯度洗脱，得到所需化合物(9.2mg，产率29％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 9.63(br.s,1H),8.79(d,1H),8.49(s,1H),8.13(s,1H),7.49(s,1H),7.20–7.25(m,1H),7.02–7.06(m,1H),6.98–7.02(m,1H),6.88–6.93(m,1H),6.64(d,1H),6.21(br.s,1H),6.03(s,
2H),5.78(br.s,1H),1.26(s,6H).
2H),5.78(br.s,1H),1.26(s,6H).
[0637] 化合物35
[0638]
[0639] 0℃下向2-甲基丙二酸(1.0当量)的二氯甲烷悬浮液中加入草酰氯(2.9当量)，然后加入3滴N，N-二甲基甲酰胺。将反应在0℃下搅拌1小时，之后将反应升温至23℃并搅拌30分钟。将反应混合物真空浓缩，得到棕色油状物，不经纯化即用于随后的步骤中。
[0640] 向中间体-2(1当量)的二氯甲烷悬浮液中加入2-甲基丙二酰二氯(1.5当量)，然后加入三乙胺(1.1当量)。将反应搅拌2小时，之后通过加入饱和氢氧化铵淬灭反应。再搅拌2小时后，将反应混合物用1M盐酸溶液稀释，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，利用10-90％乙腈/水梯度洗脱，得到所需化合物(3.3mg，产率3％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 9.66(br.s,1H),8.77(d,1H),8.50(d,1H),8.11(d,1H),7.48(s,1H),7.21–7.26(m,1H),7.03–7.08(m,1H),6.99–7.03(m,1H),
6.90–6.93(m,1H),6.64(d,1H),6.36(br.s,1H),6.13(br.s,1H),6.02(s,2H),3.44(q,1H),
1.61(d,3H).
6.90–6.93(m,1H),6.64(d,1H),6.36(br.s,1H),6.13(br.s,1H),6.02(s,2H),3.44(q,1H),
1.61(d,3H).
[0641] 化合物36
[0642] 目标化合物经3步合成：
[0643] 步骤1：甲基3-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙酸乙酯的合成
[0644]
[0645] 向中间体-2(1当量)和3-甲氧基-2-甲基-3-氧代丙酸(1.3当量)的N，N-二甲基甲酰胺溶液中加入三乙胺(4当量)，然后加入50％1-丙烷膦酸环酐的乙酸乙酯(2.5当量)溶液。24小时后，将反应混合物用水稀释，形成棕褐色沉淀。将固体过滤并干燥，得到所需中间体，甲基3-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙酸乙酯(246mg，产率93％)，为黄褐色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.91(br.s,1H),8.75(d,1H),8.48(d,1H),8.10(d,1H),7.47(s,1H),7.19–7.23(m,1H),7.03–7.07(m,1H),6.96–7.00(m,1H),6.81–6.84(m,1H),6.62(d,1H),6.04(s,2H),3.81(s,3H),
3.52(q,1H),1.56(d,3H).
3.52(q,1H),1.56(d,3H).
[0646] 步骤2：1-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基-2-甲基-苯甲酸1,3-二氧代丙-2-基酯的合成
[0647]
[0648] 向0℃的3-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基-3-氧代丙酸乙酯(1当量)的四氢呋喃溶液中加入1M双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1当量)的四氢呋喃溶液。在0℃下搅拌20分钟后，加入过氧化苯甲酰(1.05当量)的四氢呋喃溶液。将反应混合物温热至23℃并搅拌12小时。然后将反应混合物用饱和氯化铵溶液稀释，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，利用5-95％乙腈/水梯度洗脱，得到所需的中间体，1-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基-2-甲基-苯甲酸1,3-二氧代丙-2-基酯(48.3mg，产率73％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 11.23(br.s,1H),10.59(s,1H),8.84(d,1H),8.51(d,1H),8.21(d,1H),8.13(d,1H),7.64–7.68(m,1H),7.50–7.54(m,3H),7.21–
7.26(m,1H),7.01–7.06(m,3H),6.65(m,1H),6.00(s,2H),3.87(s,3H),2.01(s,3H).[0649] 步骤3：化合物36的合成
7.26(m,1H),7.01–7.06(m,3H),6.65(m,1H),6.00(s,2H),3.87(s,3H),2.01(s,3H).[0649] 步骤3：化合物36的合成
[0650]
[0651] 将1-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3-甲氧基-2-甲基-1,3-二氧代丙-2-基苯甲酸酯(1当量)在1:1四氢呋喃/饱和氢氧化铵溶液中的溶液在23℃下搅拌。3小时后，将反应混合物用水稀释，通过加入1N盐酸溶液酸化，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，使用5-95％乙腈的水溶液梯度洗脱，得到所需化合物(13mg，产率45％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.79(s,1H),8.74(d,1H),8.17(d,1H),7.57(s,1H),7.27–7.31(m,1H),7.09–7.12(m,1H),7.04–7.07(m,1H),6.92(s,1H),6.89–6.92(m,1H),6.00(s,2H),1.70(s,3H).[0652] 化合物38和化合物39
[0653]
[0654] 向中间体-1A(1当量)和2-(3-氧代-2,3-二氢-1H-吡唑-4-基)乙酸(1.2当量)的1,4-二恶烷中溶液中加入三乙胺(4当量)。将反应混合物加热至70℃反应88小时，然后将反应混合物用水和1N盐酸溶液稀释，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过反相HPLC，使用5-95％乙腈/水梯度洗脱，纯化粗产物，得到所需化合物，为白色固体，化合物38(20.5mg，产率25％)和化合物39(6.1mg，产率8％)。
[0655] 化合物38：1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.43(s,1H),11.24(s,1H),9.12(d,1H),8.89(d,1H),8.51(s,1H),7.74(s,1H),7.32–7.36(m,1H),7.27(d,1H),7.21–7.26(m,
1H),7.10–7.14(m,1H),6.86–6.90(m,1H),5.95(s,2H),3.42(s,2H).
1H),7.10–7.14(m,1H),6.86–6.90(m,1H),5.95(s,2H),3.42(s,2H).
[0656] 化合物39：1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.74(d,1H),8.68(d,1H),7.72(s,1H),7.24–7.28(m,1H),7.21(s,1H),7.06–7.10(m,1H),7.01–7.06(m,1H),6.83–6.86(m,2H,2重叠位移),5.92(s,2H),3.44(s,2H).
[0657] 化合物40
[0658]
[0659] 向化合物39(1当量)的二氯甲烷悬浮液中加入HATU(1.2当量)，N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3当量)和0.5M的氨的二恶烷溶液(6当量)。2小时后，将反应混合物真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，利用5-95％乙腈/水梯度洗脱，得到所需化合物，化合物40(0.7mg,产率8％)为白色固体.1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.74(s,1H),8.69(br.s,1H),7.72(s,1H),7.26–7.29(m,1H),7.25(s,1H),7.05–7.10(m,1H),7.01–7.05(m,1H),6.87(s,1H),6.83–
6.86(m,1H),5.92(s,2H),3.34(s,2H).
6.86(m,1H),5.92(s,2H),3.34(s,2H).
[0660] 化合物56和化合物57
[0661]
[0662] 向化合物38(1当量)的二乙醚/甲醇(1:1)悬浮液中加入2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷(1.5当量)的二乙醚溶液。反应完成后，将反应混合物真空浓缩，得到酯的混合物(19.2mg，0.038mmol)，为黄色残余物，其不经纯化即用于下一步骤。
[0663] 向该酯的混合物(1当量)中加入7M氨的甲醇溶液(222当量)。将反应混合物在室温下搅拌12小时，然后真空浓缩反应混合物。通过反相HPLC，使用5-95％乙腈/水梯度洗脱，纯化粗产物，得到白色固体的两种所需化合物，化合物56(2.9mg，产率16％)和化合物57(0.9mg，产率5％)。
[0664] 化合物56：1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.79(m,2H,2位移重叠),8.28(s,1H),7.53(s,1H),7.26–7.30(m,1H),7.08–7.11(m,1H),7.03–7.06(m,1H),6.96(s,1H),6.90–6.94(m,1H),5.98(s,2H),3.72(s,3H),3.34(s,2H).
[0665] 化合物57：1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.71(d,1H),8.56(s,1H),8.51(s,1H),7.44(s,1H),7.24–7.27(m,1H),7.05–7.08(m,1H),7.00–7.05(m,1H),6.88–6.93(m,1H),
6.67(s,1H),6.04(s,2H),5.83(br.s,1H),5.43(br.s,1H),4.12(s,3H),3.47(s,2H).[0666] 化合物41
6.67(s,1H),6.04(s,2H),5.83(br.s,1H),5.43(br.s,1H),4.12(s,3H),3.47(s,2H).[0666] 化合物41
[0667]
[0668] 向化合物38和化合物39(1当量)的二氯甲烷/乙腈(1:1)溶液中加入HATU(1.2当量)，N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3当量)，4-二甲基氨基吡啶(0.1当量)和0.5M的氨的二恶烷中溶液(6当量)。12小时后，将反应混合物用水和1M盐酸溶液稀释，用乙酸乙酯萃取，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。向该混合物中加入甲醇，得到灰白色沉淀。将固体通过反相HPLC进一步纯化，使用5-95％乙腈的水溶液梯度洗脱，得到所需化合物(4.1mg，产率3％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.28(s,1H),9.12(s,1H),8.88(d,1H),8.47(s,1H),7.73(s,1H),7.48(br.s,1H),7.30–7.37(m,1H),7.27(s,1H),7.20–7.25(m,1H),7.09–
7.14(m,1H),7.02(br.s,1H),6.85–6.91(m,1H),5.95(s,2H),3.26(s,2H).
7.14(m,1H),7.02(br.s,1H),6.85–6.91(m,1H),5.95(s,2H),3.26(s,2H).
[0669] 化合物59
[0670]
[0671] 按照一般方法C，使用中间体-2制备目标化合物，使用3-甲基-2-氧代吡咯烷-3-甲酸(1.05当量)作为酸性反应物，使用1.5当量的T3P，将反应物在50℃下搅拌12小时，然后在80℃下搅拌36小时，并在后处理期间使用乙酸乙酯萃取。粗产物通过反相HPLC纯化，使用
10-95％乙腈的水溶液梯度洗脱，得到所需化合物(1.6mg，产率2％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78(d,1H),8.71(d,1H),8.12(d,1H),7.56(s,1H),7.26–7.30(m,
1H),7.08–7.12(m,1H),7.03–7.07(m,1H),6.93(d,1H),6.86–6.90(m,1H),5.99(s,2H),
3.36–3.46(m,2H),2.72–2.78(m,1H),2.10–2.15(m,1H),1.58(s,3H).
10-95％乙腈的水溶液梯度洗脱，得到所需化合物(1.6mg，产率2％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78(d,1H),8.71(d,1H),8.12(d,1H),7.56(s,1H),7.26–7.30(m,
1H),7.08–7.12(m,1H),7.03–7.07(m,1H),6.93(d,1H),6.86–6.90(m,1H),5.99(s,2H),
3.36–3.46(m,2H),2.72–2.78(m,1H),2.10–2.15(m,1H),1.58(s,3H).
[0672] 化合物3
[0673]
[0674] 将中间体-7(1当量)的磷酰氯(62当量)悬浮液在90℃加热2小时，然后将反应混合物真空浓缩，得到所需的氯中间体，4-氯-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5,7-二氢噻吩并[3,4-d]二氧化物(155mg，产率100％)，为黄褐色固体。向该氯中间体(1当量)的四氢呋喃溶液中加入乙酸(2当量)和锌粉(2当量)。将所得悬浮液在70℃加热24小时，之后将反应物通过硅藻土过滤，用饱和氯化铵溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，利用5-95％乙腈/水梯度洗脱，得到所需化合物，化合物3(4.0mg，产率4％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.80(s,1H),8.49(d,1H),7.49(s,1H),7.20–7.25(m,1H),7.03–7.07(m,1H),6.97–7.00(m,1H),6.83–6.86(m,1H),6.61(d,1H),6.05(s,2H),4.56(s,2H),4.51(s,2H).
[0675] 化合物75
[0676]
[0677] 向2-(5-羟基异恶唑-3-基)乙酸(2.0当量)的乙腈溶液中加入乙酸酐(2.0当量)，然后加入三乙胺(2.0当量)。30分钟后，加入中间体-2(1.0当量)，然后加入另外的三乙胺(2.0当量)，和1-丙烷膦酸环酐的50％乙酸乙酯溶液(2.0当量)。将反应在室温下搅拌24小时，然后将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用3-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到所需中间体，3-(2-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)异恶唑-5-基乙酸酯(34.1mg，产率9％)，为奶油色固体。
[0678] 向3-(2-((2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-氧代乙基)异恶唑-5-基乙酸酯(1.0当量)的四氢呋喃/水溶液中加入1M氢氧化钠水溶液(3.0当量)。5分钟后，通过加入1M盐酸溶液淬灭反应混合物并真空浓缩。粗产物通过反相HPLC纯化，使用10-95％乙腈/水梯度洗脱，得到所需化合物(2.1mg，产率7％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,丙酮-d6)δppm 10.29(s,1H),8.92(s,1H),8.75(d,1H),8.03(d,1H),7.55(d,1H),7.32–7.37(m,1H),7.16–7.20(m,1H),7.09–7.13(m,2H,2重叠位移),6.94–
6.98(m,1H),6.01(s,2H),4.00(s,2H),3.88(s,1H),2.53(s,1H).
6.98(m,1H),6.01(s,2H),4.00(s,2H),3.88(s,1H),2.53(s,1H).
[0679] 化合物11
[0680]
[0681] 向5-(三氟甲基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(1当量)和中间体-1A(1当量)的DMF溶液中加入Cs2CO3(3当量)，混合物在90℃下搅拌24小时。将反应物冷却至23℃并用乙酸乙酯稀释。有机相用水和盐水洗涤，真空浓缩，通过反相HPLC纯化，得到所需化合物，化合物11(8mg，产率13％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.15-9.17(m,1H),8.76(d,1H),7.64(s,1H),7.32-7.40(m,2H),7.30(d,1H),7.17-7.25(m,2H),7.09-7.15(m,1H),5.95(s,2H).[0682] 化合物12
[0683]
[0684] 向中间体-1A(1当量)的DMF/水(2:3)溶液中加入Cs2CO3(2当量)，并将所得混合物在80℃下搅拌2小时。将反应物冷却至23℃，将固体过滤并在高真空下干燥。然后通过硅胶色谱法(乙酸乙酯的己烷溶液，5-35％梯度)纯化残余物，得到所需化合物(15mg，产率21％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.11-9.16(m,2H),8.29(s,2H),7.73(s,
1H),7.33-7.39(m,1H),7.32(d,1H),7.22-7.28(m,1H),7.15(t,1H),7.03(t,1H),5.94(s,
2H).
1H),7.33-7.39(m,1H),7.32(d,1H),7.22-7.28(m,1H),7.15(t,1H),7.03(t,1H),5.94(s,
2H).
[0685] 化合物13
[0686]
[0687] 向5-(三氟甲基)-1,3,4-恶二唑-2-胺(2当量)的THF溶液中加入LiHMDS(2当量)，将所得混合物在0℃下搅拌10min。然后加入中间体-1A(1当量)的THF溶液，将混合物搅拌过夜。真空除去溶剂，所得残余物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(5mg，产率7％)，为白色固1
体。H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.85(br.s.,1H),8.56(d,1H),8.53(d,1H),7.25-7.34(m,
4H),7.03-7.13(m,3H),6.63(d,1H),5.93(s,2H).
体。H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.85(br.s.,1H),8.56(d,1H),8.53(d,1H),7.25-7.34(m,
4H),7.03-7.13(m,3H),6.63(d,1H),5.93(s,2H).
[0688] 化合物14
[0689]
[0690] 向5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-胺(2当量)和中间体-1A(1当量)的DMF溶液中加入Cs2CO3(3当量)。将混合物在80℃下搅拌4小时，然后过滤。将滤液真空浓缩，并将残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(22mg，产率36％)，为棕色固体状。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm9.12(d,1H),8.62(br.s.,1H),7.56(br.s.,1H),7.31-7.38(m,1H),7.19-7.27(m,2H),7.12(t,1H),6.96(t,1H),5.92(s,2H),2.48(s,3H).
[0691] 化合物15
[0692]
[0693] 向中间体-8(1当量)的二氯甲烷溶液中加入HATU(1.1当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3当量)。将混合物在0℃下搅拌15分钟，然后温热至23℃并再搅拌1小时。将氨(5当量)加入到反应中，并将混合物在23℃下搅拌4小时。将反应用饱和NH 4Cl溶液和水稀释，并用乙酸乙酯萃取3次。有机层用盐水洗涤2次，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。所得残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(16mg，产率30％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.80(d,1H),8.31(d,1H),7.61-7.67(m,1H),7.24-7.34(m,1H),7.02-7.14(m,2H),6.97(d,1H),6.92(t,1H),6.01(s,2H),4.42(t,2H).
[0694] 化合物16
[0695]
[0696] 按照一般方法B，从中间体-1A出发制备目标合物，使用异恶唑烷盐酸盐作为胺反应物，并将反应物的二恶烷/水(10:1)溶液在110℃加热24小时。将反应冷却至23℃，真空除1
去溶剂，所得残余物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(38mg，产率69％)，为白色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm9.03(d,1H),8.44(d,1H),7.54(s,1H),7.23-7.29(m,1H),7.20(d,1H),7.13-7.19(m,1H),7.04(t,1H),6.77(t,1H),5.86(s,2H),3.95(t,2H),3.83-3.89(m,2H),2.23(q,2H).
去溶剂，所得残余物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(38mg，产率69％)，为白色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm9.03(d,1H),8.44(d,1H),7.54(s,1H),7.23-7.29(m,1H),7.20(d,1H),7.13-7.19(m,1H),7.04(t,1H),6.77(t,1H),5.86(s,2H),3.95(t,2H),3.83-3.89(m,2H),2.23(q,2H).
[0697] 化合物34
[0698]
[0699] 按照一般方法B制备目标化合物，使用1,2-恶嗪烷盐酸盐为胺反应物，并将反应物的二恶烷/水(10:1)溶液在110℃下加热24小时。将反应物冷却至23℃，真空除去溶剂，所得残余物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(36mg，产率63％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.03(d,1H),8.41(d,1H),7.56(s,1H),7.22-7.30(m,1H),7.20(d,1H),7.15(dd,1H),7.00-7.07(m,1H),6.77(t,1H),5.86(s,2H),4.02(br.s.,2H),3.90(br.s.,2H),1.73(br.s.,4H).
[0700] 化合物42
[0701] 步骤1：甲基3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酸乙酯的合成
[0702]
[0703] 向中间体-4(1当量)的THF悬浮液中加入(重氮甲基)三甲基硅烷(2当量)，将混合物在80℃下搅拌4小时。将反应物冷却至23℃，真空除去溶剂，得到所需的中间体，甲基3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酸乙酯(80mg，产率97％)，为棕色固体。
[0704] 步骤2：3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼的合成
[0705]
[0706] 向甲基3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酸乙酯(1当量)的乙醇溶液中加入水合肼(15当量)，并将混合物搅拌过夜。真空除去溶剂，残余物用己烷打浆并过滤。将所得固体在高真空下干燥，得到所需中间体，3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼(80mg，产率100％)，为白色固体。
[0707] 步骤3：2-(3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰基)肼基硫代酰胺的合成
[0708]
[0709] 将异硫氰酸根合三甲基硅烷(2当量)加入3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰肼(1当量)的异丙醇溶液。将混合物在90℃加热3小时，冷却至23℃，过滤。收集固体，在高真空下干燥，得到所需中间体，2-(3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰基)肼基硫代酰胺(80mg，产率90％)，为白色固体。
[0710] 步骤4：化合物42的合成
[0711]
[0712] 向2-(3,3,3-三氟-2-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基丙酰基)肼基硫代酰胺(1当量)的THF溶液中加入4-甲基苯-1-磺酰氯(1.5当量)和吡啶(2当量)。将混合物通过微波在150℃下加热30分钟。除去溶剂，残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(5.5mg，产率28％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.71(s,1H),8.20(d,1H),7.35(s,1H),7.16-7.24(m,1H),6.93-7.05(m,2H),6.81-6.89(m,2H),5.90(s,2H),4.40(d,1H),4.21(d,1H).
[0713] 化合物43
[0714]
[0715] 向中间体-1A(1当量)和5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-醇1当量)的DMF溶液中加入加入Cs2CO3(2当量)，并将混合物在80℃下搅拌2小时。将反应物冷却至23℃，过滤，并将滤液真空浓缩。残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(5mg，产率7％)，1
为白色固体。H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.95(d,1H),8.77-8.80(m,1H),7.58(s,1H),
7.24-7.31(m,1H),7.07-7.13(m,1H),7.01-7.07(m,1H),6.85-6.91(m,2H),5.98(s,2H),
4.48(s,2H),3.97(t,2H),3.69-3.75(m,2H).
为白色固体。H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.95(d,1H),8.77-8.80(m,1H),7.58(s,1H),
7.24-7.31(m,1H),7.07-7.13(m,1H),7.01-7.07(m,1H),6.85-6.91(m,2H),5.98(s,2H),
4.48(s,2H),3.97(t,2H),3.69-3.75(m,2H).
[0716] 化合物44
[0717]
[0718] 向中间体-1A(1当量)和5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-3-醇(1当量)的DMF溶液中加入Cs2CO3(2当量)，并将混合物在80℃下搅拌2小时。将反应物冷却至23℃，过滤，并将滤液真空浓缩。残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(6mg，产率8％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.64(s,1H),9.08-9.12(m,1H),8.43(d,1H),7.63(s,1H),7.30-7.36(m,1H),7.26(d,1H),7.19-7.25(m,1H),7.11(t,1H),6.84(t,1H),5.85-
5.97(m,2H),4.90(s,2H),4.17(t,2H),3.68(t,2H).
5.97(m,2H),4.90(s,2H),4.17(t,2H),3.68(t,2H).
[0719] 化合物65
[0720]
[0721] 向中间体-4(1当量)的二氯甲烷溶液中加入PyAOP(2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(2当量)，将混合物搅拌30分钟。将环丙胺(1.5当量)加入到反应中，并将反应物再搅拌
24小时。真空除去溶剂，残余物通过HPLC纯化，得到所需化合物(5mg，产率22％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.80(d,1H),8.25(d,1H),7.54(s,1H),7.26-7.33(m,1H),
7.02-7.13(m,2H),6.92-6.97(m,2H),5.99(s,2H),4.35(d,1H),4.07(d,1H),2.61(br,1H),
0.51-0.72(m,2H),0.29-0.49(m,2H).
24小时。真空除去溶剂，残余物通过HPLC纯化，得到所需化合物(5mg，产率22％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.80(d,1H),8.25(d,1H),7.54(s,1H),7.26-7.33(m,1H),
7.02-7.13(m,2H),6.92-6.97(m,2H),5.99(s,2H),4.35(d,1H),4.07(d,1H),2.61(br,1H),
0.51-0.72(m,2H),0.29-0.49(m,2H).
[0722] 化合物76
[0723]
[0724] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用2-氨基乙磺酰胺(1.5当量)作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热12小时。所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(12mg，产率48％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.25(d,1H),7.99(br.s.,1H),7.73(s,1H),7.30-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),7.03(s,2H),6.84(t,1H),5.83(s,2H),3.84-3.91(m,2H),3.34(t,2H),2.56(s,3H).
[0725] 化合物77
[0726]
[0727] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用哌嗪-2-酮(1.5当量)作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热12小时。将所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(13mg，产率55％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.36(d,1H),8.22(br.s.,1H),7.75(s,1H),7.33(q,1H),7.19-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.78-6.84(m,1H),5.83(s,2H),4.33(s,2H),3.98(t,2H),3.35(br.s,2H),
2.58(s,3H).
2.58(s,3H).
[0728] 化合物78
[0729]
[0730] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用硫代吗啉1,1-二氧化物(1.5当量)作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热12小时。将所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(11mg，产率43％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.42(d,1H),7.76(s,1H),7.33(q,1H),7.19-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.83(s,2H),4.21(br.s.,4H),3.33(br.s.,4H),2.58(s,3H).
[0731] 化合物79
[0732]
[0733] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用3,3-二氟哌啶(1.5当量)作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热12小时。将所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(14mg，产率56％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.38(d,1H),7.75(s,1H),7.33(q,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.82(t,1H),5.83(s,2H),4.14(t,2H),3.82-3.88(m,2H),2.58(s,3H),2.10-2.21(m,2H),1.81(br.s.,2H).
[0734] 化合物80
[0735]
[0736] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用3-甲氧基吡咯烷(1.5当量)作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热12小时。所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(12mg，产率51％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.27(d,1H),7.73(s,1H),7.30-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,1H),7.09-7.14(m,1H),6.82(t,1H),5.83(s,2H),4.09(br.s.,1H),3.64-3.91(m,4H),3.28(s,3H),2.58(s,3H),1.97-2.15(m,2H).
[0737] 化合物1
[0738] 目标化合物经5步制备：
[0739] 步骤1：5-((双-(叔丁氧基羰基))氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成
[0740]
[0741] 向4-二甲基氨基吡啶(0.05当量)，5-氨基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1当量)和三乙胺(2当量)的四氢呋喃溶液中加入Boc酸酐(1.5当量)。搅拌96小时后，将溶液倒入乙酸乙酯和水中。分离各层，有机层用5％硫酸氢钾溶液(3次)，饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤。将溶液用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。将粗产物与来自前述反应的粗产物合并，并通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到所需中间体，5-((双-(叔丁氧基羰基))氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(236mg，总收率
63％)，为油状物。
63％)，为油状物。
[0742] 步骤2：5-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成[0743]
[0744] 将碳酸钾(3当量)和5-((双-(叔丁氧基羰基))氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1当量)的乙醇悬浮液在60℃加热3小时。真空除去溶剂，将残余物用二氯甲烷和饱和氯化铵水溶液(1:1)稀释。分离各层，水层用二氯甲烷萃取2次。将有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱(0-35％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到所需中间体，5-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(137mg，产率79％)，为透明油状物。
[0745] 步骤3：5-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成
[0746]
[0747] 在0℃下向5-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-(2-氟苄基)-1-H-吡唑-3-甲酸乙酯(1当量)的N，N-二甲基甲酰胺溶液中加入在矿物油中的60％分散体的氢化钠(1.5当量)。在0℃下搅拌15分钟后，一次性加入碘甲烷(2.5当量)。将溶液立即温热至23℃。30分钟后，将溶液冷却至0℃，加入饱和氯化铵水溶液。然后将溶液升温至23℃并用乙酸乙酯和水(1:1)稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取2次。有机物用水(3次)和饱和氯化钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。将粗产物与来自前述反应的粗产物合并，通过硅胶色谱法(乙酸乙酯在己烷中)纯化，得到所需中间体，5-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-1-(2-氟苄基)-
1H-吡唑-3-甲酸乙酯(105mg，总收率76％)，为透明油状物。
1H-吡唑-3-甲酸乙酯(105mg，总收率76％)，为透明油状物。
[0748] 步骤4：
[0749]
[0750] 1-(2-氟苄基)-5-(甲基氨基)-1H-吡唑-3-甲脒的合成
[0751] 在5分钟内向氯化铵(5.5当量)的甲苯悬浮液中滴加2M三甲基铝(5当量)的庚烷溶液。搅拌30分钟后，鼓泡减少，将铝试剂加入到5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1当量)的甲苯溶液中。将溶液加热至90℃并在该温度下反应20小时。然后将溶液冷却至0℃，加入甲醇(10当量)。立即将溶液从冰浴中取出并升温至23℃。搅拌30分钟后，将悬浮液通过硅藻土过滤，用甲醇洗涤，得到所需中间体，1-(2-氟苄基)-5-(甲基氨基)-1H-吡唑-3-甲脒(43mg，产率55％)，为白色固体。步骤5：化合物1的合成[0752]
[0753] 向1-(2-氟苄基)-5-(甲基氨基)-1H-吡唑-3-甲脒(1当量)的乙醇悬浮液中加入3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(3当量)。将溶液在90℃下在密封的小瓶中搅拌16小时。然后加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(200μL)，将所得溶液在90℃下搅拌17小时。真空除去溶剂，通过硅胶色谱法(0-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需化合物，化合物1(1.2mg，产率2％)，为黄色膜状物。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 7.99(br s,1H),7.35-7.31(m,1H),7.16-7.11(m,2H),6.94-6.91(m,1H),6.10(s,1H),5.35(s,2H),2.84(s,3H).
[0754] 化合物81
[0755] 目标化合物经3步合成：
[0756] 步骤1：5-(二甲基氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成
[0757]
[0758] 向0℃的5-氨基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(1当量)的N，N-二甲基甲酰胺溶液中加入在矿物油中的60％分散体的氢化钠(2.5当量)。将所得悬浮液在0℃下搅拌20分钟，然后加入碘甲烷(3当量)，将溶液立即升温至23℃。搅拌1.25小时后，将溶液冷却至0℃，加入饱和氯化铵。温热至23℃后，将悬浮液用乙酸乙酯和水(1:1)稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取。将有机物用水(3次)和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物通过硅胶色谱(0-20％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到所需中间体，5-(二甲基氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(69mg，产率62％)，为透明油状物。
[0759] 步骤2：5-(二甲基氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲脒的合成
[0760]
[0761] 在2分钟内将2M三甲基铝(5当量)的庚烷溶液逐滴加入氯化铵(5.5当量)的甲苯悬浮液中。搅拌30分钟后，加入5-(二甲基氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1当量)的甲苯溶液。将所得溶液在80℃加热15小时，然后冷却至0℃。加入甲醇(10当量)，将反应混合物升温至室温并搅拌30分钟。加入另外的甲醇并将悬浮液通过硅藻土过滤。真空除去溶剂，得到所需中间体，5-(二甲基氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲脒(51mg，产率82％)，为黄色固体。
[0762] 步骤3：化合物81的合成
[0763]
[0764] 将3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(3当量)，5-(二甲基氨基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-甲脒(1当量)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(1当量)的乙醇溶液在90℃下加热2.5小时。然后真空除去溶剂，将所得残余物溶于二氯甲烷中并过滤。将所得固体悬浮于二氯甲烷中并再过滤。合并来自两次过滤的溶质，并通过柱色谱法(二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到所需化合物(25mg，产率39％)，为黄色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm8.00(d,1H),7.36-7.32(m,1H),7.16-7.09(m,3H),6.62(s,1H),5.45(s,2H),2.70(s,6H).
[0765] 化合物50
[0766]
[0767] 按照一般方法C，从中间体-2出发制备目标化合物，使用1-(甲基磺酰基)环丙烷甲酸(2当量)作为酸性反应物，使用6当量的三乙胺和4当量的丙基膦酸酐(T3P)，将溶液加热至65℃反应2小时。将溶液倒入1N盐酸水溶液和二氯甲烷(1:1)中。分离各层，水层用二氯甲烷萃取2次。将有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(20-100％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到所需化合物(30mg，产率28％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.81(d,1H),8.50(d,1H),8.05(d,1H),7.54(s,1H),7.25-7.21(m,1H),7.07-7.04(m,1H),7.01-6.98(s,1H),6.90-6.87(m,1H),6.66(d,1H),6.05(s,2H),3.17(s,3H),
1.89-1.83(m,4H).
1.89-1.83(m,4H).
[0768] 化合物54
[0769]
[0770] 将中间体-9(1当量)的甲醇溶液用7N氨(100当量)的甲醇溶液处理，并在50℃下加热1.5小时。在0℃下储存过夜后，加入另外的7N氨(150当量)的甲醇溶液，将溶液加热至50℃反应1小时。加入另外125当量的氨的甲醇溶液并将所得溶液在50℃加热2小时。在冷冻器中储存两夜后，过滤悬浮液，用二氯甲烷洗涤，得到所需化合物(8mg，产率47％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.11(s,1H),8.44(d,1H),8.26(s,1H),7.82(s,1H),7.66(s,1H),7.35-7.31(m,1H),7.28(m,1H),7.24-7.21(m,1H),7.11(t,1H),6.85(t,1H),5.92(s,2H),5.23(s,2H),4.48-4.46(m,2H),4.23-4.21(m,2H).
[0771] 化合物19
[0772]
[0773] 将中间体-16(1当量)和3,3,3-三氟丙烷-1-磺酰氯(1.1当量)的吡啶和二氯甲烷(1:2)溶液在23℃下搅拌5小时。然后向反应混合物中加入1N NaOH并继续搅拌1.5小时，之后用二氯甲烷和水稀释，然后用1N HCl溶液酸化至pH 3。分离各相，水相用二氯甲烷萃取两次。合并的有机相用无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩。粗产物通过反相HPLC(C18柱，使用含有0.1％TFA的30％至60％乙腈的水溶液梯度洗脱，经过20分钟)纯化，得到所需化合物(11mg，产率24％)，为黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.13(d,1H),8.83-8.93(m,1H),
7.47(s,1H),7.32-7.38(m,1H),7.21-7.27(m,2H),7.11(t,1H),6.84(t,1H),5.94(s,2H),
3.52-3.56(m,2H),2.71-2.79(m,2H).
7.47(s,1H),7.32-7.38(m,1H),7.21-7.27(m,2H),7.11(t,1H),6.84(t,1H),5.94(s,2H),
3.52-3.56(m,2H),2.71-2.79(m,2H).
[0774] 化合物29
[0775]
[0776] 在0℃下通过注射器向中间体-11(1当量)的吡啶溶液中滴加三氯氧磷(8当量)。将反应混合物缓慢升温至23℃，连续搅拌2小时。在真空下除去挥发物，将残余物溶于乙酸乙酯，用水，盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。然后将粗固体通过反相HPLC(C18柱，使用含有0.1％TFA 20％至60％乙腈的水溶液梯度洗脱，20分钟)纯化，得到所需化合物(10mg，产率9％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.78(s,1H)9.10(d,1H)7.40(s,1H)7.30-7.37(m,1H)7.25-7.30(m,2H)7.23(d,2H)7.08-7.13(m,1H)6.84-6.89(m,1H)5.89(s,2H)1.80(s,3H).
[0777] 化合物64
[0778]
[0779] 按照一般方法B，从中间体-1A出发制备目标化合物，使用2-(3-氨基-1,1,1-三氟-2-羟基丙-2-基)-1-甲基-1H-咪唑-1-氯化物(1.5当量)作为胺反应物，使用5当量的三乙胺，将反应物的二恶烷/水(3:1)溶液加热至90℃反应15小时。将反应物冷却至23℃，在氮气保护下除去挥发物。将所得粗产物通过反相HPLC(C18柱，使用含有0.1％TFA的5％至95％乙腈的水溶液梯度洗脱，经过20分钟)纯化，得到所需化合物(32mg，产率83％)，为白色粉末。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.11(s,1H),8.31(d,1H),7.95(br.s.,1H),7.52(s,1H),
7.29-7.38(m,2H),7.19-7.26(m,2H),7.11(t,2H),6.94(t,1H),5.92(s,2H),4.25-4.40(m,
2H),3.88(s,3H),2.54(s,1H).
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.11(s,1H),8.31(d,1H),7.95(br.s.,1H),7.52(s,1H),
7.29-7.38(m,2H),7.19-7.26(m,2H),7.11(t,2H),6.94(t,1H),5.92(s,2H),4.25-4.40(m,
2H),3.88(s,3H),2.54(s,1H).
[0780] 化合物32
[0781]
[0782] 在0℃下，将氯乙酰氯(3当量)加入中间体-2(1当量)和三乙胺(5当量)的二氯甲烷溶液中，然后升温至23℃，历时20分钟。加入饱和NaHCO3和1:1的乙酸乙酯/THF淬灭反应。过滤，得到所需化合物(28mg，89％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 11.21-11.36(m,1H),9.11(d,1H),8.74(d,1H),8.56(t,1H),7.97(d,1H),7.66(s,1H),7.30-7.38(m,1H),7.27(d,1H),7.19-7.25(m,1H),7.12(t,1H),6.89(t,1H),5.93(s,2H),4.18(s,
2H),4.01-4.10(m,2H).
2H),4.01-4.10(m,2H).
[0783] 中间体-15
[0784] 目标化合物经3步合成：
[0785] 步骤1：(3-(三氟甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-6-基)甲醇的合成
[0786]
[0787] 在0℃下，将三氟乙酸酐(10当量)加入到(5-肼基吡嗪-2-基)甲醇(1当量)中。加完后，将反应物升温至23℃，搅拌20分钟，真空除去溶剂。然后将多磷酸(过量)加入到反应中，将反应物在100℃加热2小时。将热悬浮液倒在冰上并用氢氧化铵碱化至pH＝11。将混合物用乙酸乙酯萃取，浓缩并通过硅胶色谱法纯化，得到所需中间体，(3-(三氟甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-6-基)甲醇(2.035g，43％)，为黄色固体。
[0788] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.53-9.73(m,1H),8.32(d,1H),5.82(t,1H),4.70(dd,2H).
[0789] 步骤2：6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(三氟甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪的合成
[0790]
[0791] 将叔丁基二苯基甲硅烷基氯(2当量)加入到(3-(三氟甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-6-基)甲醇(1当量)和咪唑(3当量)的二氯甲烷溶液。将反应在23℃下搅拌20分钟，加入水淬灭，用乙酸乙酯萃取，浓缩，并通过硅胶色谱法纯化，得到所需的中间体，6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪(0.414g，94％)，为黄色油状物。
[0792] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.58-9.71(m,1H),8.44(s,1H),7.61-7.76(m,4H),7.34-7.53(m,6H),4.93(d,2H),1.00-1.12(m,9H).
[0793] 步骤3：6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪的合成
[0794]
[0795] 将6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(三氟甲基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪(1当量)与10％Pd/C(0.05当量)一起置于乙醇中并在氢气气球压力下在23℃下氢化40小时。将反应混合物过滤，浓缩，并通过硅胶色谱法纯化，得到所需中间体，6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪(0.16g，38％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 7.63(ddd,4H),7.39-7.52(m,6H),4.18-4.28(m,2H),3.95-4.02(m,1H),3.84-3.91(m,1H),3.71-3.83(m,2H),3.23-
3.32(m,1H),2.79(td,1H),1.00(s,9H).
3.32(m,1H),2.79(td,1H),1.00(s,9H).
[0796] 步骤4：中间体-15的合成
[0797]
[0798] 将四丁基氟化铵(2当量)加入中间体-1A(1当量)，6-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪(2当量)和三乙胺(2当量)的二恶烷/水(10:1)悬浮液中，在100℃下搅拌48小时。然后将反应混合物冷却至23℃，真空浓缩，通过反相HPLC纯化，得到所需化合物中间体-15(6mg，36％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm9.11(d,1H),8.46(d,1H),7.67(s,1H),7.30-7.38(m,1H),7.28(d,1H),7.19-7.25(m,1H),7.11(t,1H),6.85(t,1H),5.88-5.98(m,2H),5.61(d,1H),5.20(t,1H),5.13(br.s.,1H),4.82(d,1H),4.38-4.51(m,2H),3.64(dt,1H),3.50-3.59(m,1H).[0799] 化合物62
[0800]
[0801] 在23℃下，将中间体-15(1当量)和NMO(10当量)的乙腈和水(10当量)悬浮液中加入四丙基铵钌酸盐(0.1当量)。通过LCMS监测反应完成，过滤并通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(9mg，12％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm8.72-8.85(m,1H),8.50(d,1H),7.54-7.70(m,1H),7.20-7.36(m,1H),7.07-7.15(m,1H),7.04(t,1H),6.94(d,1H),
6.86(t,1H),6.28(br.s.,1H),6.00(s,2H),5.70(d,1H),5.08-5.21(m,1H),5.01(d,1H),
4.60(dd,1H).COOH质子交换。
6.86(t,1H),6.28(br.s.,1H),6.00(s,2H),5.70(d,1H),5.08-5.21(m,1H),5.01(d,1H),
4.60(dd,1H).COOH质子交换。
[0802] 化合物83
[0803]
[0804] 将2-(1-(2,3-二氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-5-氟嘧啶-4-醇(描述于先前的专利：WO2013/101830A1)(1当量)和甲醇钠的甲醇(2.2当量)溶液在二甘醇二甲醚中制成悬浮液，在封管中在150℃下加热1小时。将反应物过滤，残余物用甲醇洗涤，滤液通过硅胶色谱法纯化，得到所需化合物(355mg，75％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.04(d,1H),7.67-7.79(m,1H),7.14-7.25(m,1H),7.01-7.11(m,1H),6.66-6.77(m,1H),5.96(s,2H),2.56(s,3H).OH质子交换。
[0805] 化合物84
[0806]
[0807] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，氢氧化铵作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃下加热65小时。所得粗产物经反相HPLC1
纯化，得到所需化合物(4.2mg，13.5％)，为白色固体。H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.12(d,
1H),7.65(s,1H),7.23-7.32(m,1H),7.02-7.14(m,2H),6.77-6.86(m,1H),5.90(s,2H),
2.55(s,3H).NH2质子交换。
纯化，得到所需化合物(4.2mg，13.5％)，为白色固体。H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.12(d,
1H),7.65(s,1H),7.23-7.32(m,1H),7.02-7.14(m,2H),6.77-6.86(m,1H),5.90(s,2H),
2.55(s,3H).NH2质子交换。
[0808] 化合物85
[0809]
[0810] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热65小时。所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(3.5mg，7.6％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.12(d,1H),7.68(s,1H),7.23-7.35(m,1H),7.02-7.15(m,2H),6.93(t,1H),5.91(s,2H),4.16-4.26(m,1H),4.04-4.12(m,1H),2.58(s,3H).NH,OH和NH2质子交换。
[0811] 化合物86
[0812]
[0813] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用甘氨酸作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃下加热65小时。将所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(1mg，2.7％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.27(d,1H),7.74(s,1H),7.23-7.35(m,1H),7.01-7.17(m,2H),6.88(t,1H),5.94(s,2H),4.43(s,
2H),2.58(s,3H).NH和COOH质子交换。
2H),2.58(s,3H).NH和COOH质子交换。
[0814] 化合物87
[0815]
[0816] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用5-氨基戊酸作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热65小时。所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(43mg，10.6％)，为黄褐色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.25(d,1H),7.90(s,1H),7.27-7.36(m,1H),7.04-7.16(m,2H),6.96(t,1H),5.97(s,2H),
3.80(t,2H),2.62(s,3H),2.43(t,2H),1.68-1.87(m,4H).NH和COOH质子交换。
3.80(t,2H),2.62(s,3H),2.43(t,2H),1.68-1.87(m,4H).NH和COOH质子交换。
[0817] 化合物88
[0818]
[0819] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用哌啶-4-磺酰胺作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热65小时。所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(19mg，42％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.32(d,1H),7.87(s,1H),7.31(q,1H),7.02-7.16(m,2H),6.92(t,1H),5.96(s,2H),5.02(d,2H),3.36-3.45(m,3H),2.61(s,3H),2.37(d,2H),1.88-2.02(m,2H).NH2质子交换。
[0820] 化合物89
[0821]
[0822] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用4-甲基吡咯烷-3-甲酸作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热65小时。所得粗产1
物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(10mg，24％)，为黄色固体。H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.32(d,1H),7.88(s,1H),7.27-7.40(m,1H),7.05-7.20(m,2H),6.90-7.03(m,1H),
5.99(s,2H),4.32-4.48(m,2H),4.07-4.30(m,1H),3.53-3.74(m,1H),2.83-3.08(m,1H),
2.67-2.79(m,1H),2.63(s,3H),1.23-1.40(m,3H).COOH质子交换。
物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(10mg，24％)，为黄色固体。H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.32(d,1H),7.88(s,1H),7.27-7.40(m,1H),7.05-7.20(m,2H),6.90-7.03(m,1H),
5.99(s,2H),4.32-4.48(m,2H),4.07-4.30(m,1H),3.53-3.74(m,1H),2.83-3.08(m,1H),
2.67-2.79(m,1H),2.63(s,3H),1.23-1.40(m,3H).COOH质子交换。
[0823] 化合物90
[0824]
[0825] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用1-((甲基氨基)甲基)环戊烷甲酸(HBr盐)作为胺反应物，并将反应物的二恶烷溶液在90℃加热65小时。所得粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物，为褐色固体(9.5mg，21％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.31(d,1H),7.80(s,1H),7.27-7.36(m,1H),7.02-7.16(m,2H),6.90-7.00(m,1H),5.96(s,2H),4.30(s,2H),3.53(d,3H),2.60(s,3H),2.18-2.35(m,2H),
1.74-1.86(m,2H),1.64-1.74(m,4H).COOH质子交换。
1.74-1.86(m,2H),1.64-1.74(m,4H).COOH质子交换。
[0826] 化合物91
[0827]
[0828] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用二甲基胺(60当量)作为胺反应物，不使用三乙胺，将反应物的二恶烷溶液在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至23℃，用二氯甲烷稀释，依次用1N HCl溶液，水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到所需化合物(13mg，80％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.22(d,1H),7.69(s,1H),7.28-7.38(m,1H),7.18-7.26(m,1H),
7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.81(s,2H),3.24(d,6H),2.57(s,3H).
7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.81(s,2H),3.24(d,6H),2.57(s,3H).
[0829] 化合物92
[0830]
[0831] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用吡咯烷(60当量)作为胺反应物，不使用三乙胺，将反应物的二恶烷溶液在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至23℃，用二氯甲烷稀释，依次用1N HCl溶液，水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(9mg，49％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.25(d,1H),7.83(s,1H),7.25-7.41(m,1H),7.02-7.18(m,2H),6.90-7.00(m,1H),4.02(d,4H),5.97(s,2H),2.61(s,3H),1.99-2.24(m,4H).[0832] 化合物93
[0833]
[0834] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用哌啶(60当量)作为胺反应物，不使用三乙胺，将反应物的二恶烷溶液在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至23℃，用二氯甲烷稀释，依次用1N HCl溶液，水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到所需化合物(0.012g，63％)，为黄褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.26(d,1H),7.69(s,1H),7.33(q,1H),7.19-7.27(m,1H),7.11(t,1H),6.80(t,1H),5.82(s,2H),3.72-3.83(m,4H),2.92-3.06(m,2H),2.57(s,3H),1.65-1.70(m,2H),1.52-1.57(m,1H),1.42-1.50(m,1H).
[0835] 化合物94
[0836]
[0837] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用哌嗪(60当量)作为胺反应物，不使用三乙胺，将反应物的二恶烷溶液在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至23℃，用二氯甲烷稀释，依次用1N HCl溶液，水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到所需化合物(10mg，55％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.27(d,1H),7.70(s,1H),7.33(q,1H),7.16-7.26(m,1H),7.10(t,1H),6.79(t,1H),5.82(s,2H),3.67-3.76(m,4H),2.75-2.86(m,4H),2.57(s,3H).NH质子交换。
[0838] 化合物95
[0839]
[0840] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用吗啉(60当量)作为胺反应物，不使用三乙胺，将反应物的二恶烷溶液在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至23℃，用二氯甲烷稀释，依次用1N HCl溶液，水和盐水洗涤。然后将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到所需化合物(13mg，72％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.33(d,1H),7.73(s,1H),7.33(q,1H),7.16-7.27(m,1H),7.10(t,1H),6.79(t,1H),5.82(s,2H),3.77-3.85(m,4H),3.69-3.75(m,4H),2.57(s,3H).[0841] 化合物96
[0842]
[0843] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用3,3,3-三氟丙烷-1-磺酰胺(4当量)作为胺反应物，使用碳酸钾(4当量)代替三乙胺，并将反应物的DMSO溶液通过微波在150℃加热15分钟。将反应混合物冷却至23℃，过滤并通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(0.004g，9.7％)，为黄褐色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm
8.40-8.47(m,1H),7.70(s,1H),7.25-7.34(m,1H),7.03-7.15(m,2H),6.89(t,1H),5.91(s,
2H),3.93-4.02(m,2H),2.79-2.92(m,2H),2.57(s,3H).NH质子交换。
8.40-8.47(m,1H),7.70(s,1H),7.25-7.34(m,1H),7.03-7.15(m,2H),6.89(t,1H),5.91(s,
2H),3.93-4.02(m,2H),2.79-2.92(m,2H),2.57(s,3H).NH质子交换。
[0844] 化合物97
[0845]
[0846] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用丙烷-1-磺酰胺(4当量)作为胺反应物，使用碳酸钾(4当量)代替三乙胺，并将反应物的DMSO溶液通过微波在150℃加热15分钟。将反应混合物冷却至23℃，过滤并通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(5mg，13.7％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.44-8.54(m,1H),7.63-7.73(m,1H),7.26-7.35(m,1H),7.04-7.14(m,2H),6.91(t,1H),5.92(s,2H),3.69-
3.78(m,2H),2.58(s,3H),1.85-1.96(m,2H),1.08(t,3H).NH质子交换。
3.78(m,2H),2.58(s,3H),1.85-1.96(m,2H),1.08(t,3H).NH质子交换。
[0847] 化合物98
[0848]
[0849] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1B(1当量)代替中间体-1A，使用苯磺酰胺(4当量)作为胺反应物，使用碳酸钾(4当量)代替三乙胺，将反应物的DMSO溶液中通过微波在150℃加热15分钟。将反应混合物冷却至23℃，过滤并通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(4mg，9.6％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ ppm 8.36-8.46(m,1H),8.27(d,2H),7.58-7.63(m,1H),7.45-7.53(m,3H),7.29-7.36(m,1H),7.06-7.18(m,2H),6.90(t,1H),5.92-5.99(m,2H),2.59-2.65(m,3H).NH质子交换。
[0850] 化合物99
[0851]
[0852] 在0℃下，向中间体-6(1当量)的二氯甲烷溶液加入DAST(2.2当量)，并使其在2小时内升温至23℃。然后将反应用7M NH3的甲醇溶液稀释并搅拌30分钟。将反应混合物浓缩，并将残余物用甲醇稀释，过滤，得到所需化合物(11mg，47％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.24(d,1H),7.69(s,1H),7.27-7.41(m,1H),7.15-7.27(m,2H),7.11(t,1H),6.80-6.96(m,2H),5.81(s,2H),4.00(s,2H),3.24(d,3H),2.57(s,3H),1.01-1.06(m,
2H),0.83-0.89(m,2H).
2H),0.83-0.89(m,2H).
[0853] 化合物28
[0854]
[0855] 按照一般方法B制备目标化合物，使用5-(氨基甲基)异恶唑-3-醇作为胺反应物，并将反应物在100℃加热16小时。将反应物冷却至室温，用水稀释并用1N HCl溶液酸化至pH＝3。将所得沉淀物过滤并真空干燥，得到所需化合物(68mg，产率94％，1:1二氯甲烷溶剂合物)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 11.2(s,1H),9.10(d,1H),8.34(br.t,1H),8.27(d,1H),7.51(s,1H),7.33(m,1H),7.24-7.18(m,2H),7.10(app.t,1H),6.87(app.t,1H),6.00(s,1H),5.89(s,2H),4.68(d,2H),3.57(s,8H,二恶烷).
[0856] 化合物26
[0857]
[0858] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1E(描述于专利申请公开WO2014/047325中)代替中间体-1A，使用2-(氨基甲基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇作为胺反应物，将反应物在100℃加热15小时。将反应物冷却至23℃，用水稀释，用1N HCl溶液酸化至pH＝
4，并用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用15-30％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到所需化合物(45mg，产率66％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.07(s,1H),8.97(d,1H),8.34(d,1H),8.29(br.t,
1H),8.22(s,1H),7.27-7.21(m,2H),7.14(m,1H),7.06(m,1H),7.04(d,1H),4.32(s,2H),
4.13(d,2H).
4，并用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用15-30％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到所需化合物(45mg，产率66％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.07(s,1H),8.97(d,1H),8.34(d,1H),8.29(br.t,
1H),8.22(s,1H),7.27-7.21(m,2H),7.14(m,1H),7.06(m,1H),7.04(d,1H),4.32(s,2H),
4.13(d,2H).
[0859] 化合物30
[0860]
[0861] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1E代替中间体-1A，使用2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺作为胺反应物，将反应物在100℃加热16小时。将反应物冷却至23℃，用水稀释，用1N HCl溶液酸化至pH＝4，并用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用在二氯甲烷中的5-15％乙腈-甲醇(7:1)梯度洗脱，得到所需化合物(47mg，产率67％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.14(s,1H),8.96(d,1H),8.28(d,1H),8.01(br.t,1H),7.76(br.s,1H),7.61(br.s,1H),7.25(s,1H),7.27-7.19(m,2H),7.15(m,1H),7.06(app.t,1H),7.03(d,
1H),4.34(s,2H),4.11(dd,1H),3.89(dd,1H).
1H),4.34(s,2H),4.11(dd,1H),3.89(dd,1H).
[0862] 化合物102
[0863] 目标化合物经两步合成：
[0864] 步骤1：中间体-1F的合成
[0865]
[0866] 将5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(恶唑-2-基)-1H-吡唑-3-基)-嘧啶-4-醇(中间体-5F，描述于专利申请公开WO2012/3405A1中)的三氯氧磷(67当量)悬浮液在65℃加热2小时。
将反应混合物冷却至23℃，在氮气流下干燥，然后从甲苯中浓缩两次。将所得浅黄色固体真空干燥，并且不经进一步处理用于下一步骤。
将反应混合物冷却至23℃，在氮气流下干燥，然后从甲苯中浓缩两次。将所得浅黄色固体真空干燥，并且不经进一步处理用于下一步骤。
[0867] 步骤2：化合物102的合成
[0868]
[0869] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1F代替中间体-1A，使用2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺作为胺反应物，并且将反应物在100℃下加热2天。将反应物冷却至23℃，用水稀释，然后用1N HCl溶液酸化至pH＝6。将所得沉淀物过滤并真空干燥，得到所需化合物(59mg，产率91％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.32(m,2H),7.84(br.t,1H),7.75(br.s,1H),7.72(s,1H),7.62(br.s,1H),7.49(s,1H),7.42(s,
1H),7.34(m,1H),7.21(m,1H),7.11(app.t,1H),7.02(app.t,1H),6.04(s,2H),4.01(m,
2H).
1H),7.34(m,1H),7.21(m,1H),7.11(app.t,1H),7.02(app.t,1H),6.04(s,2H),4.01(m,
2H).
[0870] 化合物103
[0871]
[0872] 按照一般方法B制备目标化合物，使用中间体-1F代替中间体-1A，使用2-(氨基甲基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇作为胺反应物，并将反应物在90-100℃加热5天。将内容物冷却至23℃，用水稀释，用1N HCl溶液酸化至pH＝4，并用二氯甲烷萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用15-50％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，以得到所需化合物(38mg，产率55％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ ppm 8.27(m,2H),7.73(s,1H),7.45(s,1H),7.23(m,1H),7.14(app.t,1H),7.05-7.00(m,2H),
6.10(s,2H),5.72(br.s,1H),4.15(d,2H).没有观察到可交换的OH质子。
6.10(s,2H),5.72(br.s,1H),4.15(d,2H).没有观察到可交换的OH质子。
[0873] 化合物109
[0874]
[0875] 将乙酸(5.5当量)加入中间体-1A(1当量)和锌粉(3.4当量)的THF悬浮液中，并将反应物在75℃下加热72小时。反应完成后，通过加入1N HCl溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥并浓缩，得到所需化合物(47mg，产率82％)，为棕色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.05-9.18(m,1H),8.96(s,2H),7.60-7.71(m,1H),7.31-7.38(m,1H),7.28(d,1H),7.19-7.26(m,1H),7.12(t,1H),6.91-6.99(m,1H),5.93(s,2H).
[0876] 化合物37
[0877]
[0878] 将化合物109(1.0当量)，吗啉(7.0当量)无水DMSO溶液加热至120℃反应18小时。将内容物冷却至23℃，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用在二氯甲烷中的30-50％乙腈-甲醇(7:1)溶液梯度洗脱，得到所需化合物(34mg，产率57％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm
9.09(d,1H),8.54(s,2H),7.55(s,1H),7.34(m,1H),7.27(d,1H),7.22(m,1H),7.11(app.t,
1H),6.90(app.t,1H),5.89(s,2H),3.77(m,4H),3.29(m,4H).
9.09(d,1H),8.54(s,2H),7.55(s,1H),7.34(m,1H),7.27(d,1H),7.22(m,1H),7.11(app.t,
1H),6.90(app.t,1H),5.89(s,2H),3.77(m,4H),3.29(m,4H).
[0879] 化合物8
[0880]
[0881] 将化合物109(1.0当量)，2-氨基乙醇(7.0当量)的无水DMSO溶液加热至120℃反应22小时。将反应物冷却至23℃，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用在二氯甲烷中的25-50％乙腈-甲醇
1
(7:1)溶液梯度洗脱，得到所需化合物(36mg，产率65％)，浅黄色固体。H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.08(d,1H),8.21(s,2H),7.46(s,1H),7.33(m,1H),7.25(d,1H),7.22(m,
1H),7.11(app.t,1H),6.88(app.t,1H),6.27(t,1H),5.87(s,2H),4.80(t,1H),3.59(dt,
2H),3.21(dt,2H).
1
(7:1)溶液梯度洗脱，得到所需化合物(36mg，产率65％)，浅黄色固体。H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.08(d,1H),8.21(s,2H),7.46(s,1H),7.33(m,1H),7.25(d,1H),7.22(m,
1H),7.11(app.t,1H),6.88(app.t,1H),6.27(t,1H),5.87(s,2H),4.80(t,1H),3.59(dt,
2H),3.21(dt,2H).
[0882] 化合物9
[0883]
[0884] 将化合物109(1.0当量)，乙烷-1,2-二胺(7.0当量)的无水DMSO溶液加热至120℃反应8小时。将反应物冷却至23℃，倒入饱和碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。使用30-80％乙腈/水(含有0.1％TFA)梯度洗脱，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到所需化合物(33mg，产率51％，TFA盐)，为浅黄色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.10(d,1H),8.24(s,2H),7.79(br.s,2H),7.47(s,1H),7.34(m,1H),7.25(d,1H),7.22(m,1H),7.11(app.t,1H),6.90(app.t,1H),6.37(br.s,1H),5.88(s,
2H),3.40(m,2H),3.01(m,2H).
2H),3.40(m,2H),3.01(m,2H).
[0885] 化合物6
[0886]
[0887] 将化合物109(1.0当量)，甘氨酰胺盐酸盐(7.0当量)和碳酸氢钠(7.0当量)无水DMSO悬浮液在120-130℃下加热2天。再加入甘氨酰胺盐酸盐(7.0当量)和碳酸氢钠(7.0当量)，将反应在130℃下再加热2天。将反应物冷却至23℃，倒入半饱和碳酸氢钠溶液中，用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用在二氯甲烷中的20-60％乙腈-甲醇(7:1)溶液梯度洗脱，随后使用反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈/水(具有0.1％TFA)梯度洗脱，得到所需的化合物(2.0mg，产率3.4％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.77(d,1H),8.26(s,2H),7.41(s,1H),7.27(m,1H),7.09(m,1H),7.03(app.t,1H),6.89(d,1H),6.87(app.t,1H),5.96(s,2H),3.94(s,2H).[0888] 化合物21
[0889]
[0890] 将化合物109(1.0当量)，3-氨基丙烷-1,2-二醇(7.0当量)无水DMSO溶液加热至120℃反应18小时。将反应物冷却至23℃，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用在二氯甲烷中的30-50％乙腈-甲醇(7:1)溶液梯度洗脱，得到所需化合物(34mg，产率57％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm9.08(d,1H),8.22(s,2H),7.46(s,1H),7.33(m,1H),7.24(d,1H),
7.22(m,1H),7.11(app.t,1H),6.88(app.t,1H),6.22(t,1H),5.87(s,2H),4.91(d,1H),
4.68(t,1H),3.65(m,1H),3.39(m,2H),3.27(m,1H),3.03(m,1H).
7.22(m,1H),7.11(app.t,1H),6.88(app.t,1H),6.22(t,1H),5.87(s,2H),4.91(d,1H),
4.68(t,1H),3.65(m,1H),3.39(m,2H),3.27(m,1H),3.03(m,1H).
[0891] 化合物22
[0892]
[0893] 将化合物109(1.0当量)，2-(甲基磺酰基)乙胺盐酸盐(7.0当量)和三乙胺(7.0当量)的无水DMSO溶液在120℃下加热4天。加入额外量的2-(甲基磺酰基)乙胺盐酸盐(7.0当量)和三乙胺(7.0当量)，将反应在120-130℃下加热另外7天。将反应物冷却至23℃，用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用70-100％乙酸乙酯/己烷溶液梯度洗脱，得到所需化合物(23mg，产率33％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm9.08(d,1H),8.24(s,2H),7.49(s,1H),7.34(m,1H),7.25(d,1H),7.22(m,1H),7.11(app.t,1H),6.88(app.t,1H),6.47(t,1H),5.88(s,2H),3.61(dt,2H),3.41(t,2H),3.05(s,3H).
[0894] 化合物24
[0895]
[0896] 将化合物9(1.0当量，TFA盐)的二氯甲烷溶液在0℃下加入三乙胺(5.0当量)和甲磺酰氯(1.1当量)。将反应混合物加热至23℃，并在该温度下搅拌3小时。将反应物倒入半饱和碳酸氢钠溶液中，用二氯甲烷和乙酸乙酯萃取。将有机相用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用在二氯甲烷中的25％乙腈-甲醇(7:1)溶液洗脱，得到所需化合物(9.5mg，产率75％)，为浅黄色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.45(d,1H),8.14(s,2H),7.30(s,1H),7.18(m,1H),7.01(m,1H),6.95(app.t,1H),6.84(app.t,
1H),6.60(d,1H),5.97(s,2H),5.53(br.s,1H),3.43-3.35(m,4H),2.98(s,3H).未观察到可交换的磺酰胺NH质子。
1H),6.60(d,1H),5.97(s,2H),5.53(br.s,1H),3.43-3.35(m,4H),2.98(s,3H).未观察到可交换的磺酰胺NH质子。
[0897] 化合物7
[0898]
[0899] 向中间体-13(1.0当量)的无水二恶烷溶液中加入2-氨基乙醇(4.0当量)。反应混合物变成橙色悬浮液。20小时后，加入水，过滤固体，真空干燥，得到所需化合物(160mg，产率89％)，为黄褐色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm9.19(s,1H),9.12(d,1H),8.83(t,1H),7.73(s,1H),7.34(m,1H),7.28(d,1H),7.23(m,1H),7.11(app.t,1H),6.87(app.t,
1H),5.95(s,2H),4.96(t,1H),3.80(dt,2H),3.67(dt,2H).
1H),5.95(s,2H),4.96(t,1H),3.80(dt,2H),3.67(dt,2H).
[0900] 化合物82
[0901]
[0902] 在氮气保护下，向化合物7的MeOH/乙酸乙酯(1:1)悬浮液中加入10％钯/碳(0.2当量)。用氢气(使用气球)保护，将所得混合物搅拌1小时40分钟。然后用氮气冲洗反应容器，并将内容物通过硅藻土过滤。真空除去溶剂，得到所需中间体，2-((5-氨基-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)乙醇(化合物82),其不经进一步处理而用于下一步骤。
[0903] 化合物10
[0904]
[0905] 将三乙胺(2.0当量)加入2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4,5-二胺(在先前的专利中描述的WO2012/3405A1,WO2013/101830A1)(1.0当量)的无水THF悬浮液中，然后加入1,3,2-二氧硫杂环戊烷-2,2(1.2当量)。18小时后，加入额外量的1,3,2-二氧硫杂环戊烷-2,2-二氧化物(0.30当量)，将反应物搅拌5小时。然后将反应混合物真空浓缩，再悬浮于6N HCl的THF/水(3:1v/v)溶液中，在60℃下加热18小时。冷却至23℃后，将反应物倒入半饱和碳酸氢钠溶液中，用二氯甲烷/iPrOH(4:1)萃取。将有机层用硫酸钠干燥，过滤并真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，使用在二氯甲烷中的70-
100％乙腈-甲醇(7:1)溶液洗脱，得到所需化合物(31mg，产率62％)，为米色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.19(d,1H),8.83(br.s,1H),8.10(br.s,1H),7.58(s,1H),7.46(s,1H),7.39(m,1H),7.26(d,1H),7.24(m,1H),7.19-7.10(m,2H),5.99(s,1H),5.89(s,
2H),5.07(t,1H),4.50(m,2H),3.62(m,2H).
100％乙腈-甲醇(7:1)溶液洗脱，得到所需化合物(31mg，产率62％)，为米色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.19(d,1H),8.83(br.s,1H),8.10(br.s,1H),7.58(s,1H),7.46(s,1H),7.39(m,1H),7.26(d,1H),7.24(m,1H),7.19-7.10(m,2H),5.99(s,1H),5.89(s,
2H),5.07(t,1H),4.50(m,2H),3.62(m,2H).
[0906] 化合物60
[0907]
[0908] 在0℃向中间体-14(1.0当量)的二氯甲烷悬浮液中一次性加入DAST(2.2当量)。将混合物加热至23℃并搅拌24小时。真空除去溶剂，残余物溶于氢氧化铵(浓)中，在100℃加热24小时，在氮气保护下除去溶剂。将粗产物经反相HPLC纯化，得到所需化合物(1.6mg，产率3％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.83(m,1H),8.32(m,1H),7.67(m,1H),7.32(m,1H),
[0909] 7.11(m,2H),6.98(m,2H),6.04(m,2H),4.96(m,2H),3.47(m,2H),2.75(m,1H),2.09(m,2H),1.91(m,2H).
[0910] 化合物105
[0911] 该化合物由5个步骤制备：
[0912] 步骤1：3-(乙氧基羰基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-羧酸的合成
[0913]
[0914] 向1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3,5-二羧酸二乙酯(先前在文献中描述的)(1当量)的乙醇悬浮液中缓慢加入氢氧化钾，历时1.5小时，因为并非所有原料完全进入溶液。在23℃下搅拌15小时后，LCMS指示起始原料仍然存在。加入另外20mol％的氢氧化钾，在23℃下继续搅拌1.5小时，然后再加入30mol％的氢氧化钾，再搅拌2小时。将溶液倒入饱和NH4Cl溶液中，用二氯甲烷(6x)萃取。合并的有机相用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到所需的中间体3-(乙氧基羰基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-羧酸(2.98g，产率108％)，为白色固体。粗产物无需进一步纯化即可用于下一步骤。
[0915] 步骤2：1-(2-氟苄基)-5-(羟甲基)-1H-吡唑-3-羧酸的合成
[0916]
[0917] 0℃向3-(乙氧基羰基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-羧酸(1当量)的THF溶液中滴加10M硼烷-甲基硫化物络合物(3当量)。气体停止逸出(15分钟)后，将溶液缓慢加热至23℃，然后在65℃下搅拌4小时。将反应冷却至23℃，用1N HCl(水溶液)淬灭并搅拌1小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到所需中间体，(2-氟苄基)-
5-(羟甲基)-1H-吡唑-3-羧酸(0.59g，产率74％)，为无色油状物。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.67(m,1H),7.37(m,1H),7.24(m,1H),7.16(m,1H),7.03(m,1H),6.65(m,1H),5.46(s,2H),4.52(m,2H).
5-(羟甲基)-1H-吡唑-3-羧酸(0.59g，产率74％)，为无色油状物。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.67(m,1H),7.37(m,1H),7.24(m,1H),7.16(m,1H),7.03(m,1H),6.65(m,1H),5.46(s,2H),4.52(m,2H).
[0918] 步骤3：1-(2-氟苄基)-5-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯的合成
[0919]
[0920] 在0℃下向1-(2-氟苄基)-5-(羟甲基)-1H-吡唑-3-甲酸(1当量)在DMF中的溶液中加入氢化钠(2.1当量)。将溶液在0℃下搅拌30分钟，在23℃下搅拌30分钟。向该溶液中加入甲基碘(4.2当量)，并搅拌18小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物，将其通过硅胶色谱法纯化，得到所需中间体(2-氟苄基)-5-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(260mg，产率42％)，为透明无色油状物。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 7.34(m,1H),7.22(m,1H),7.13(m,1H),6.90(m,2H),5.76(m,2H),4.37(s,2H),3.81(m,3H),3.25(s,3H).
[0921] 步骤4：1-(2-氟苄基)-5-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-3-甲脒(中间体-19)的合成[0922]
[0923] 在0℃向盐酸氨(5.3当量)的甲苯悬浮液中加入三甲基铝2M的甲苯溶液(5.3当量)。将混合物从冰浴中取出并在23℃下搅拌，直到鼓泡停止。向该混合物中加入1-(2-氟苄基)-5-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(1当量)的甲苯溶液，并在80℃下搅拌24小时。将混合物在冰浴中冷却，并用甲醇缓慢淬灭，通过硅藻土过滤除去所得白色沉淀。将滤液浓缩并真空干燥，得到所需中间体，1-(2-氟苄基)-5-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-3-甲脒(258mg，产率100％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm7.29(m,6H),6.85(m,1H),5.55(s,2H),4.36(s,2H),3.34(s,1H),3.26(s,3H).
[0924] 步骤5：化合物105的合成
[0925]
[0926] 将含有1-(2-氟苄基)-5-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-3-甲脒(中间体-19，4当量)的乙醇混合物在100℃下搅拌1小时。将混合物冷却，真空除去溶剂。将粗产物经反相色谱纯化，得到所需化合物(11mg，产率20％)，为灰白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.18(m,1H),7.31(d,1H),7.18(t,1H),7.10(m,2H),6.93(t,1H),5.87(s,2H),4.37(s,2H),3.27(s,
3H).
3H).
[0927] 化合物20
[0928]
[0929] 将化合物105(1当量)的三氯化磷(过量)溶液在65℃下加热2小时。将溶液冷却并在氮气保护下除去溶剂。将所得残余物溶于二恶烷和水(3:1)中，加入2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺(10当量)和三乙胺(20当量)。将溶液在100℃下搅拌18小时。蒸发溶剂，通过反相色谱法纯化粗产物，得到所需化合物(6.7mg，产率47％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.16(m,1H),7.22(m,1H),7.13(m,1H),7.05(s,3H),6.80(m,1H),6.29(m,1H),6.08(d,2H),4.58(s,2H),4.19(m,2H),3.47(m,3H).
[0930] 化合物5
[0931] 目标化合物由2步合成：
[0932]
[0933] 步骤1：2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-甲基丙酸的合成
[0934] 将含有碳酸钠(3当量)，2-氨基-2-甲基丙酸(1.0当量)和氯甲酸苄酯(1.1当量)的水和1,4-二恶烷(2:1)溶液在23℃下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用1N HCl溶液洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到所需的中间体，2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-甲基丙酸(825mg，产率72％)，为透明油状物。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.32-7.38(m,5H),5.03-5.09(m,2H),1.43-1.50(m,6H).
[0935]
[0936] 步骤2：化合物5的合成
[0937] 按照一般方法C制备目标化合物，使用2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-甲基丙酸(1当量)为酸反应物，使用2.5当量的T3P，将反应物在70℃下加热24小时，并且在后处理中使用乙酸乙酯萃取。将粗产物通过硅胶色谱法纯化，得到所需化合物(87mg，产率7％)，为棕色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.79(s,1H),8.68(d,1H),8.09-8.20(m,1H),7.98(s,1H),7.52(s,1H),7.21-7.39(m,4H),7.17(br.s.,1H),7.02-7.15(m,2H),6.85-6.92(m,2H),
5.99(s,2H),5.06(s,2H),1.48-1.51(m,6H).
5.99(s,2H),5.06(s,2H),1.48-1.51(m,6H).
[0938] 化合物33
[0939]
[0940] 将包含钯碳(0.1当量)和化合物5(1当量))的乙醇溶液在环境温度下和氢气保护下氢化24小时。将混合物通过Acro盘过滤，真空浓缩滤液，得到所需化合物(66mg，产率99％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.68-8.74(m,1H),8.46(s,1H),8.14-8.18(m,1H),7.44-7.48(m,1H),7.19(q,1H),7.00-7.09(m,1H),6.96(t,1H),6.81(t,1H),6.58-
6.63(m,1H),6.02(s,2H),1.44-1.48(m,6H).
6.63(m,1H),6.02(s,2H),1.44-1.48(m,6H).
[0941] 化合物46
[0942] 目标化合物由2步合成：
[0943]
[0944] 步骤1：2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-甲基丁酸的合成
[0945] 将含有2-氨基-2-甲基丁酸盐酸盐(1当量)，碳酸钠(3当量)和氯甲酸苄酯(1.1当量)的1,4-二恶烷和水(2:1)溶液在23℃下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯稀释并用1N HCl溶液洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到所需的中间体，2-(((苄氧基)羰基)氨基)-2-甲基丁酸(499mg，产率99％)，为透明油状物。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 7.30-7.38(m,
5H),5.01-5.09(m,2H),1.85-1.95(m,2H),1.43-1.50(m,3H),0.86(t,3H).
5H),5.01-5.09(m,2H),1.85-1.95(m,2H),1.43-1.50(m,3H),0.86(t,3H).
[0946]
[0947] 步骤2：化合物46的合成
[0948] 按照一般方法C制备目标化合物，使用2-((((苄氧基)羰基)氨基)-2-甲基丁酸(1当量)作为酸反应物，使用2.5当量的T3P，将反应物在70℃下加热3天，并在后处理中使用乙酸乙酯萃取。将粗产物通过硅胶色谱法(0至100％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需化合物(40mg，产率5％)。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.78(s,1H),8.67(d,1H),8.12(br.s.,1H),7.51(s,1H),7.22-7.36(m,4H),7.17(d,1H),7.06-7.13(m,1H),7.04(t,1H),6.82-6.96(m,3H),5.98(s,2H),5.05(br.s.,2H),1.84-2.04(m,2H),1.46-1.51(m,3H),
0.85-0.94(m,3H).
0.85-0.94(m,3H).
[0949] 化合物47
[0950]
[0951] 将含有钯碳(0.1当量)和化合物46(1当量)溶液在23℃下氢化24小时。将混合物通过Acro盘过滤，真空浓缩滤液，得到所需化合物(25mg，产率100％)，为透明油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.71(d,1H),8.46(s,1H),8.18(d,1H),7.47(s,1H),7.17-7.24(m,1H),7.04(d,1H),6.97(t,1H),6.82(t,1H),6.61(s,1H),6.03(s,2H),1.91-2.02(m,2H),
1.44(s,3H),0.92-0.97(m,3H).
1.44(s,3H),0.92-0.97(m,3H).
[0952] 化合物55
[0953]
[0954] 按照一般方法B制备目标化合物，使用2-甲基丁烷-1,2-二胺(1.1当量)作为胺反应物，使用1当量的三乙胺，并将反应物的DMF溶液在23℃下搅拌，直到通过LC/MS监测原料完全消耗。将反应用乙酸乙酯和水稀释。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物通过硅胶色谱法纯化(0-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱)，得到所需化合物(67mg，产率15％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.67-8.74(m,1H),8.02(d,1H),7.38(s,1H),7.21(q,1H),7.01-7.08(m,1H),6.97(t,1H),6.84(s,1H),6.77(t,1H),5.87-5.94(m,
2H),3.25-3.29(m,2H),1.45-1.55(m,2H),1.07-1.12(m,3H),0.90-0.97(m,3H).
2H),3.25-3.29(m,2H),1.45-1.55(m,2H),1.07-1.12(m,3H),0.90-0.97(m,3H).
[0955] 化合物67
[0956]
[0957] 按照一般方法B制备目标化合物，使用2-环丙基丙烷-1,2-二胺二盐酸盐(2当量)作为胺反应物，使用4当量的三乙胺，并将反应物的DMF溶液在23℃下搅拌，直到通过LC/MS监测原料完全消耗。将反应用乙酸乙酯和水稀释。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物通过硅胶色谱法(0至10％甲醇/二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需化合物(81mg，产率67％)，为透明油状物。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.75(s,1H),8.08(d,1H),7.44(s,1H),7.21-7.30(m,1H),7.08(t,1H),7.01(t,1H),6.89(s,1H),6.79(t,1H),5.95(s,2H),3.35(s,2H),1.03-1.09(m,1H),1.02(s,3H),0.37-0.51(m,4H).
[0958] 化合物68
[0959]
[0960] 按照一般方法B制备目标化合物，使用1-(氨基甲基)环丙胺(作为2HCl盐，2当量)作为胺反应物，使用8当量的三乙胺，并将反应物的DMF溶液中在23℃下搅拌，直到通过LC/MS监测原料完全消耗。将反应用乙酸乙酯和水稀释。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物通过硅胶色谱法(0至10％甲醇/二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需化合物(54mg，产率40％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.75(s,1H),8.05(d,1H),7.42(s,1H),7.17-7.33(m,1H),7.05-7.15(m,1H),7.02(t,1H),6.89(s,1H),6.81(t,1H),
5.95(s,2H),3.69(s,2H),0.59-0.77(m,4H).
5.95(s,2H),3.69(s,2H),0.59-0.77(m,4H).
[0961] 化合物106
[0962]
[0963] 按照一般方法B制备目标化合物，使用(R)-3,3,3-三氟-2-甲基丙烷-1,2-二胺二盐酸盐作为胺反应物，使用6当量的三乙胺，并将反应物的DMF溶液在23℃下搅拌，直到通过LC/MS监测原料完全消耗。溶液用乙酸乙酯和水稀释。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱(0至10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化残余物，得到所需化合物(108mg，产率84％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.76(d,1H),8.11(d,1H),7.41(s,1H),7.19-7.36(m,1H),7.06-7.13(m,1H),7.03(t,1H),6.89(d,1H),6.85(t,1H),
5.95(s,2H),3.80-3.98(m,2H),1.32(s,3H).
5.95(s,2H),3.80-3.98(m,2H),1.32(s,3H).
[0964] 化合物107
[0965]
[0966] 按照一般方法B制备目标化合物，使用(R)-2-(((S)-3-氨基-1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)氨基)-2-苯基乙醇作为胺反应物，使用6当量的三乙胺，并将反应物的DMF溶液在23℃下搅拌，直到通过LC/MS监测原料完全消耗。溶液用乙酸乙酯和水稀释。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(0至10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化残余物，得到所需化合物(72mg，产率70％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm
8.67-8.78(m,1H),8.12(d,1H),7.40(s,1H),7.09-7.33(m,6H),7.01-7.07(m,1H),6.97(t,
1H),6.87(d,1H),6.82(t,1H),
8.67-8.78(m,1H),8.12(d,1H),7.40(s,1H),7.09-7.33(m,6H),7.01-7.07(m,1H),6.97(t,
1H),6.87(d,1H),6.82(t,1H),
[0967] 5.92(s,2H),4.12(dd,1H),3.80-3.99(m,2H),3.48(dd,1H),3.31(d,1H),1.10(s,3H).
[0968] 化合物108
[0969]
[0970] 按照一般方法B制备目标化合物，使用(S)-3,3,3-三氟-2-甲基丙烷-1,2-二胺二盐酸盐作为胺反应物外，使用6当量的三乙胺，并将反应物的DMF溶液在23℃下搅拌，直到通过LC/MS监测原料完全消耗。溶液用乙酸乙酯和水稀释。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱(0至10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化残余物，得到所需化合物(58mg，产率46％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.75(s,1H),8.10(d,1H),7.40(s,1H),7.26(q,1H),7.08(s,1H),7.02(s,1H),6.87(d,1H),6.84(t,1H),5.94(s,2H),
3.88-3.99(m,1H),3.80-3.88(m,1H),1.31(s,3H).
3.88-3.99(m,1H),3.80-3.88(m,1H),1.31(s,3H).
[0971] 化合物111
[0972] 目标化合物由5步制备：
[0973] 步骤1：N-甲氧基-N-甲基异噻唑-3-甲酰胺的合成
[0974]
[0975] 在0℃向异噻唑-3-羧酸(2g，15.49mmol)的DCM悬浮液中加入草酰氯(1.3当量)，然后加入3滴DMF。开始出现气泡，10分钟后将反应升温至23℃。将混合物搅拌3小时，然后冷却至0℃。将N，O-二甲基羟胺盐酸盐(1.3当量)加入到反应中，然后将三乙胺(3.5当量)经10分钟通过注射器滴加。将反应缓慢加热至23℃过夜，并搅拌总共15小时。反应混合物用1N HCl溶液和二氯甲烷(1:1比例)稀释。分离各层，水层用DCM萃取2次。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。粗品通过硅胶色谱纯化(使用己烷/乙酸乙酯混合物作为洗脱剂)，得到所需中间体，N-甲氧基-N-甲基异噻唑-3-甲酰胺(1g，产率38％)，为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.67(d,1H),7.69(br s,1H),3.80(s,3H),3.46(br s,3H).[0976] 步骤2：(E)-4-(异噻唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯的合成
[0977]
[0978] 在-55℃(2:1乙醇/水/干冰)下，向N-甲氧基-N-甲基异噻唑-3-甲酰胺(200mg，1.161mmol)和丙炔酸乙酯(1.5当量)的THF溶液中，在5分钟内加入双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(1.4当量，1N的THF溶液)。反应在15分钟内升温至-45℃，然后在15分钟内升温至30℃，然后再搅拌15分钟。反应用1N HCl水溶液处理，在-30℃下搅拌3分钟，然后用10％柠檬酸水溶液酸化至pH＝2。将混合物温热至23℃，然后在二氯甲烷和水之间分配。分离各层，水层用二氯甲烷萃取2次，再用乙酸乙酯萃取1次。将合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。将粗残余物通过硅胶色谱纯化(使用己烷/乙酸乙酯混合物作为洗脱剂)，以得到所需中间体，(E)-4-(异噻唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(234mg，产率
75％)，为油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.58(d,1H),7.78(d,1H),6.43(s,1H),4.42(q,2H),3.70(s,3H),3.16(s,3H),1.35(t,3H).
75％)，为油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.58(d,1H),7.78(d,1H),6.43(s,1H),4.42(q,2H),3.70(s,3H),3.16(s,3H),1.35(t,3H).
[0979] 步骤3：1-(2-氟苄基)-5-(异噻唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成
[0980]
[0981] 向(2-氟苄基)肼盐酸盐(1.1当量)的乙醇/水(10:1比例)溶液中加入碳酸钾(0.55当量)的水溶液，随后立即加入(E)-4-(异噻唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(1当量)的乙醇溶液。将反应物在23℃下搅拌3小时，然后用二氯甲烷和1N HCl水溶液(3:1比例)稀释。分离各层，水层用二氯甲烷萃取2次。将合并的有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱(利用己烷/乙酸乙酯混合物作为洗脱剂)纯化粗产物，以得到所需中间体，1-(2-氟苄基)-5-(异噻唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(166mg，产率57.9％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.66(d,1H),7.44(d,1H),7.18(s,
1H),7.11-7.17(m,1H),6.90-7.02(m,2H),6.76(td,1H),6.10(s,2H),4.41(q,2H),1.39(t,
3H).
1H),7.11-7.17(m,1H),6.90-7.02(m,2H),6.76(td,1H),6.10(s,2H),4.41(q,2H),1.39(t,
3H).
[0982] 步骤4：1-(2-氟苄基)-5-(异噻唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒的合成
[0983]
[0984] 向氨盐酸盐(5.5当量)的甲苯悬浮液中加入2M三甲基铝(5当量)的甲苯溶液。鼓泡停止后，向溶液中直接加入1-(2-氟苄基)-5-(异噻唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1当量)。将反应混合物在密闭的小瓶中加热至100℃(随着温度升高而定期释放压力)反应3小时。将反应冷却至0℃，然后加入甲醇(10当量)。升温至23℃，搅拌15分钟后，用甲苯稀释，用硅藻土过滤。固体用5mL甲醇洗涤，然后将滤液真空浓缩，得到所需的中间体，1-(2-氟苄基)-5-(异噻唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒(130mg，收率86％)，为黄色固体。产物不经进一步纯化即可使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.27(d,1H),7.85(s,1H),7.74(d,1H),7.30-7.37(m,1H),7.19-7.24(m,1H),7.11(td,1H),6.91(td,1H),6.09(s,2H).
[0985] 步骤5：化合物111的合成
[0986]
[0987] 将3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇酸酯(3当量)和1-(2-氟苄基)-5-(异噻唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒(1当量)的乙醇悬浮液在90℃下搅拌1小时30分钟。真空除去溶剂，将黑色固体悬浮于二氯甲烷中。将固体过滤，然后通过硅胶色谱法(利用己烷/乙酸乙酯混合物作为洗脱剂)纯化，以得到所需化合物(53mg，产率33.1％)，为褐色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 9.00(d,1H),8.04(d,1H),7.74(d,1H),7.45(s,1H),7.22-7.30(m,1H),6.99-7.12(m,2H),6.89(br t,1H),6.17(s,2H).
[0988] 化合物112
[0989]
[0990] 将8-氧杂-2-氮杂螺[4.5]癸烷(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的二恶烷溶液在130℃下搅拌3小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(15mg，产率54.8％)，为灰白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm8.28(d,1H),7.74(s,1H),7.34(q,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.82(t,1H),5.83(s,2H),3.83(br.s.,2H),3.58-3.66(m,6H),2.58(s,3H),
1.91(br.s.,2H),1.57-1.64(m,2H),1.50-1.57(m,2H).
1.91(br.s.,2H),1.57-1.64(m,2H),1.50-1.57(m,2H).
[0991] 化合物113
[0992]
[0993] 将2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的二恶烷溶液在130℃下搅拌3小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(17mg，产率64.1％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm8.28-8.33(m,1H),7.71-7.75(m,1H),7.30-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.82(s,2H),4.37(s,4H),3.70-3.76(m,4H),
2.58(s,3H),1.88-1.93(m,4H).
2.58(s,3H),1.88-1.93(m,4H).
[0994] 化合物114
[0995]
[0996] 将3,3-二氟氮杂环丁烷(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌3小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(11mg，产率45.0％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.41(d,1H),7.72(s,1H),7.30-7.36(m,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.79(t,1H),5.83(s,2H),4.72(t,4H),2.57(s,3H).
[0997] 化合物115
[0998]
[0999] 将2,2-二甲基硫代吗啉1,1-二氧化物(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌3小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(9mg，产率31.4％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.42(d,1H),7.76(s,1H),7.31-7.37(m,1H),7.19-7.25(m,1H),7.12(t,1H),6.86(t,1H),5.82(s,2H),4.25(br.s.,2H),4.00(br.s.,2H),3.43(t,
2H),2.59(s,3H),1.30(s,6H).
2H),2.59(s,3H),1.30(s,6H).
[1000] 化合物116
[1001]
[1002] 将(3R，4S)-哌啶-3,4-二醇(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌3小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(14mg产率，54.0％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.29(dd,1H),7.73(d,1H),7.30-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,
1H),7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.83(s,2H),4.06(br.s.,1H),3.86-3.95(m,1H),3.71-3.71(m,1H),3.64-3.80(m,2H),3.51-3.59(m,1H),2.58(s,3H),1.75-1.85(m,1H),1.66(d,1H).[1003] 化合物117
1H),7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.83(s,2H),4.06(br.s.,1H),3.86-3.95(m,1H),3.71-3.71(m,1H),3.64-3.80(m,2H),3.51-3.59(m,1H),2.58(s,3H),1.75-1.85(m,1H),1.66(d,1H).[1003] 化合物117
[1004]
[1005] 将4-(羟基甲基)哌啶-4-醇(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌3小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(16mg，产率59.8％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.30(t,1H),7.74-7.78(m,1H),7.30-7.36(m,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.83(s,2H),4.38(br.s.,2H),3.41(t,2H),3.22(s,2H),
2.58(s,3H),1.68(t,2H),1.49(d,2H).
2.58(s,3H),1.68(t,2H),1.49(d,2H).
[1006] 化合物118
[1007]
[1008] 将2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌3小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(8mg，产率32.2％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.27(d,1H),7.67(s,1H),7.33(q,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.79(t,1H),5.83(s,2H),4.73(s,4H),4.47(br.s.,4H),2.57(s,3H).
[1009] 化合物119
[1010]
[1011] 将异噻唑烷1,1-二氧化物(1.2当量)，碳酸铯(1.5当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF悬浮液在130℃下搅拌
2小时。溶液用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。将有机物合并，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。将粗残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(11mg，产率42.0％)，为白色固体
1
。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.80(d,1H),7.78(s,1H),7.31-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,
1H),7.11(t,1H),6.84(t,1H),5.85(s,2H),4.15(t,2H),3.64(t,2H),2.59(s,3H),2.50(t,
2H).
2小时。溶液用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤。将有机物合并，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。将粗残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(11mg，产率42.0％)，为白色固体
1
。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.80(d,1H),7.78(s,1H),7.31-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,
1H),7.11(t,1H),6.84(t,1H),5.85(s,2H),4.15(t,2H),3.64(t,2H),2.59(s,3H),2.50(t,
2H).
[1012] 化合物120
[1013]
[1014] 将1-(甲基磺酰基)-哌嗪(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌3小1
时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(14mg，产率48.7％)，为白色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.38(d,1H),7.76(s,1H),7.30-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,1H),
7.11(t,1H),6.80(t,1H),5.83(s,2H),3.93(br.s.,4H),3.28(d,4H),2.91(s,3H),2.58(s,
3H).
时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(14mg，产率48.7％)，为白色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.38(d,1H),7.76(s,1H),7.30-7.37(m,1H),7.20-7.26(m,1H),
7.11(t,1H),6.80(t,1H),5.83(s,2H),3.93(br.s.,4H),3.28(d,4H),2.91(s,3H),2.58(s,
3H).
[1015] 化合物121
[1016]
[1017] 将氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌1小时。将溶液用乙酸乙酯稀释，并用1N HCl水溶液、水和盐水洗涤。将溶液真空浓缩，再溶解于DCM中，加入三氟乙酸酐(1当量)，并在23℃下搅拌2小时。真空除去溶剂，粗产物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(12mg，产率27.6％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 10.11(d,1H)8.31(d,1H)7.69(s,1H)7.30-7.36(m,1H)7.20-7.26(m,1H)
7.11(t,1H)6.80(t,1H)5.83(s,2H)4.77(dq,1H)4.59(br.S,2H)4.30(d,2H)2.57(s,3H).[1018] 化合物122
7.11(t,1H)6.80(t,1H)5.83(s,2H)4.77(dq,1H)4.59(br.S,2H)4.30(d,2H)2.57(s,3H).[1018] 化合物122
[1019]
[1020] 将N-(氮杂环丁烷-3-基)-1-羟基环丙烷甲酰胺(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌2小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(11mg，产率39％)，1
为白色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.75(d,1H),8.28(d,1H),7.69(s,1H),7.30-
7.37(m,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.80(t,1H),5.83(s,2H),4.73-4.81(m,1H),
4.51(br.s.,2H),4.29(br.s.,2H),2.57(s,3H),1.00-1.05(m,2H),0.82-0.88(m,2H).[1021] 化合物123
为白色固体。H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.75(d,1H),8.28(d,1H),7.69(s,1H),7.30-
7.37(m,1H),7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.80(t,1H),5.83(s,2H),4.73-4.81(m,1H),
4.51(br.s.,2H),4.29(br.s.,2H),2.57(s,3H),1.00-1.05(m,2H),0.82-0.88(m,2H).[1021] 化合物123
[1022]
[1023] 将2-氨基环己烷羧酸(1.2当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在110℃下搅拌1小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(3.4mg，产率12％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.22(d,1H),7.65(s,1H),7.30-7.37(m,1H),7.18-7.29(m,2H),7.11(t,1H),6.84(t,1H),5.82(s,2H),4.57(br.s.,1H),2.90(d,1H),2.58(s,3H),2.04(d,
1H),1.81-1.92(m,1H),1.61-1.74(m,2H),1.36-1.55(m,4H).
1H),1.81-1.92(m,1H),1.61-1.74(m,2H),1.36-1.55(m,4H).
[1024] 化合物124
[1025] 目标化合物由2步制备：
[1026] 步骤1：1-(3-(4-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮的合成
[1027]
[1028] 将氮杂环丁烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的DMF溶液在130℃下搅拌1小时。将粗产物通过反相HPLC纯化以得到所需的中间体1-(3-(4-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(33mg，产率99％)，为固体。化合物不经进一步纯化而进入下一步骤。
[1029] 步骤2：化合物124的合成
[1030]
[1031] 向搅拌的异氰酸乙酯(1.5当量)的甲苯溶液中加入三乙胺(1当量)和1-(3-(4-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮。将混合物在90℃搅拌并加热48小时，然后真空浓缩。将所得粗残余物通过反相HPLC纯化，得到所需化合物(6.0mg，产率15％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.91(br s,1H),7.30(br s,1H),7.10(br t,1H),6.91-7.04(m,3H),5.83(br d,2H),4.81(br s,1H),4.42-4.58(m,
1H),4.32(br s,2H),3.14-3.22(m,2H),2.45-2.50(m,2H),2.45(s,3H),1.12-1.19(m,1H),
1.08(br t,3H).
1H),4.32(br s,2H),3.14-3.22(m,2H),2.45-2.50(m,2H),2.45(s,3H),1.12-1.19(m,1H),
1.08(br t,3H).
[1032] 化合物125
[1033]
[1034] 将2-氨基乙醇(10当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的1,4-二恶烷溶液在90℃下搅拌5小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物(19.5mg，产率91％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.23(d,1H),7.97(br.s.,1H),7.71(s,1H),7.30-7.36(m,1H),
7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.82(t,1H),5.83(s,2H),3.57-3.63(m,4H),2.58(s,3H).[1035] 化合物126
7.20-7.26(m,1H),7.11(t,1H),6.82(t,1H),5.83(s,2H),3.57-3.63(m,4H),2.58(s,3H).[1035] 化合物126
[1036]
[1037] 将5-(三氟甲基)-1,3,4-噻二唑-2-胺(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的1,4-二恶烷溶液在90℃下搅拌5小时。将粗产物通过反相HPLC纯化以得到所需化合物(10.4mg，产率
38％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm8.76(br.s.,1H),7.80(s,1H),7.31-7.40(m,2H),7.16-7.23(m,2H),7.10-7.15(m,1H),5.89(s,2H),2.63(s,3H).
38％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm8.76(br.s.,1H),7.80(s,1H),7.31-7.40(m,2H),7.16-7.23(m,2H),7.10-7.15(m,1H),5.89(s,2H),2.63(s,3H).
[1038] 化合物193
[1039]
[1040] 将3-氨基-2-羟基-2-甲基丙酰胺(1.5当量)，三乙胺(10当量)和1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)的1,4-二恶烷溶液在90℃下搅拌5小时。将粗产物通过反相HPLC纯化得到所需化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.24(d,1H),7.69(s,1H),7.38(br.s.,1H),7.30-7.35(m,2H),7.19-7.26(m,2H),7.11(t,1H),6.84(t,1H),5.83(s,2H),3.76(dd,1H),3.59(dd,1H),2.57(s,3H),1.29(s,3H).[1041] 化合物128
[1042] 目标化合物由5步制备：
[1043] 步骤1：N-甲氧基-N-甲基异恶唑-3-甲酰胺的合成
[1044]
[1045] 0℃冷却下向异恶唑-3-羧酸(2.0g，1.0当量)的二氯甲烷(80ml)溶液中加入草酰氯(2.0ml，1.3当量)，然后加入两滴DMF。将混合物在室温下搅拌1小时。向该混合物中加入N，O-二甲基羟胺盐酸盐(2.2g，1.3当量)，然后加入三乙胺(8.6ml，3.5当量)。将混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用1N HCl(50mL)淬灭并用DCM(50ml)稀释。分离各层，水层用DCM(2×50mL)萃取。将有机物合并，用水(2×50mL)，盐水(50mL)洗涤，用MgSO4干燥，过滤。真空除去溶剂，得到粗产物。通过硅胶色谱法纯化，使用EtOAc/己烷梯度洗脱得到为黄色油状的N-甲氧基-N-甲基异恶唑-3-甲酰胺(3.21g，产率93％)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.46-8.51(m,1H),6.67-6.76(m,1H),3.80(br.s.,3H),3.39(br.s.,3H).
[1046] 步骤2：4-(异恶唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯的合成[1047]
[1048] 在-55℃下向冷却的N-甲氧基-N-甲基异恶唑-3-甲酰胺(0.31g，1.0当量)和丙酸乙酯(0.39g，2.0当量)的无水THF(10mL)溶液中加入作为1M的双(三甲基甲硅烷基)在THF中的溶液(3.8mL，1.9当量)。将混合物在-40℃下搅拌20分钟。得到黑色溶液。将混合物用1N HCl(4mL)淬灭并升温至室温。将混合物在EtOAc(10mL)和H2O(6mL)之间分配。有机层用15％NaCl洗涤，真空浓缩，得到油状物。通过柱色谱纯化，使用0至100％EtOAc/己烷梯度洗脱得1
到4-(异恶唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(769mg，产率43％)；H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.42(d,1H),6.77(d,1H),6.19(s,1H),4.47(q,2H),3.76(s,3H),3.22(s,3H),1.41(t,3H).
到4-(异恶唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(769mg，产率43％)；H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.42(d,1H),6.77(d,1H),6.19(s,1H),4.47(q,2H),3.76(s,3H),3.22(s,3H),1.41(t,3H).
[1049] 步骤3：5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,4,4,4-五氟丁基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成[1050]
[1051] 将含有4-(异恶唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(67mg，1.0当量)和(3,3,4,4,4-五氟丁基)肼盐酸盐(56mg，1.0当量)的乙醇(1.3ml)溶液在65℃下搅拌1小时。将混合物真空浓缩。残余油状物通过柱色谱纯化，使用0至10％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱得到5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,4,4,4-五氟丁基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(49mg，收率53％)，为淡黄色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.54(d,1H),7.27(s,1H),6.62(d,1H),
4.96-5.01(m,2H),4.42-4.48(m,2H),2.73-2.86(m,2H),1.41-1.45(m,3H).
4.96-5.01(m,2H),4.42-4.48(m,2H),2.73-2.86(m,2H),1.41-1.45(m,3H).
[1052] 步骤4：5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,4,4,4-五氟丁基)-1H-吡唑-3-甲脒的合成[1053]
[1054] 在40ml小瓶中，在氩气保护下，将氯化铵(218mg，6.5当量)的甲苯(2.1ml)悬浮液在0℃冷却30分钟。向该混合物中加入2.0M三甲基铝的甲苯溶液(2.0ml，6.5当量)。将混合物从冰浴中取出并在室温下搅拌直到起泡停止。混合物变得清澈。向该混合物中加入5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,4,4,4-五氟丁基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(223mg，1.0当量)的甲苯(2.0ml)溶液。将混合物在110℃加热24小时。反应过程中产生的气体被释放。将混合物冷却至0℃，用甲苯稀释并用甲醇淬灭。将混合物剧烈搅拌，并使用布氏漏斗过滤除去形成的沉淀物。将滤液转移到圆底烧瓶中并真空浓缩，得到固体。然后用5:1的EtOAc:IPA混合物(60ml)和饱和碳酸氢钠溶液(40ml)处理固体。水层用5:1的EtOAc:IPA混合物(50ml)反萃取。将有机层合并，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。将固体干燥，得到5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,4,4,4-五氟丁基)-1H-吡唑-3-甲脒(230mg，定量收率)，为褐色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.18(d,1H)7.54(s,1H)7.08(d,1H)4.88(t,2H)2.76-3.04(m,2H).
[1055] 步骤5：化合物128的合成
[1056]
[1057] 将5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,4,4,4-五氟丁基)-1H-吡唑-3-甲脒(106mg，1.0当量)，DBU(87μl，1.8当量)和3-(二甲基氨基)-2-氟丙烯酸乙酯(133mg，2.5当量)的EtOH(1.6mL)溶液在70℃加热24小时。将混合物真空浓缩，得到油状粗产物。通过柱色谱法纯化，使用0至100％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到5-氟-2-(5-(异恶唑-3-基)-1-(3,3,4,4,4-五氟丁基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4(3H)-酮(4.5mg，产率4％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.86(d,1H),8.05(d,1H),7.43(s,1H),6.98(d,1H),5.00-5.09(m,2H),2.83-3.01(m,2H).
[1058] 化合物129
[1059]
[1060] 将含有三乙胺(3.0当量)，1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，32mg，1.0当量)和2-甲基丁烷-1,2-二胺(3.0当量)的NMP(0.5ml)溶液在室温下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用水(50ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物。油状物通过柱色谱纯化，使用0至10％MeOH/DCM梯度洗脱，得到1-(3-(4-((2-氨基-2-甲基丁基)氨基)-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-
5-基)乙酮(12mg，产率32％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,METHANOL-d4)δppm 8.24(d,1H)
7.77(s,1H)7.28-7.36(m,1H)7.25(d,1H)7.13-7.19(m,1H)7.08(t,1H)5.94(s,2H)3.72(s,
2H)2.56-2.61(m,3H)1.72-1.83(m,2H)1.37(s,3H)1.08(t,3H).
5-基)乙酮(12mg，产率32％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,METHANOL-d4)δppm 8.24(d,1H)
7.77(s,1H)7.28-7.36(m,1H)7.25(d,1H)7.13-7.19(m,1H)7.08(t,1H)5.94(s,2H)3.72(s,
2H)2.56-2.61(m,3H)1.72-1.83(m,2H)1.37(s,3H)1.08(t,3H).
[1061] 化合物130
[1062]
[1063] 将含有3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-1A，100mg，1.0当量)，三乙胺(8.0当量)和2-(((S)-3-氨基-1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)氨基)-2-苯基乙醇盐酸盐(3.0当量)的DMF(1.3ml)溶液在室温下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用水(50ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物。油状物通过柱色谱纯化，使用0至100％EtOAc/己烷梯度洗脱，得到2-苯基-2-(((S)-1,1,1-三氟-3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基丙-2-基)氨基)乙醇(132mg，产率82％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm
8.25(d,1H)7.76(br.s.,1H)7.45(s,1H)7.32(d,3H)7.17-7.24(m,4H)7.11-7.16(m,1H)
7.09(t,1H)6.88(t,1H)5.88(s,2H)5.24(t,1H)3.85(dd,1H)3.70(dd,1H)3.21(td,1H)2.91(d,1H)1.04(s,3H).
8.25(d,1H)7.76(br.s.,1H)7.45(s,1H)7.32(d,3H)7.17-7.24(m,4H)7.11-7.16(m,1H)
7.09(t,1H)6.88(t,1H)5.88(s,2H)5.24(t,1H)3.85(dd,1H)3.70(dd,1H)3.21(td,1H)2.91(d,1H)1.04(s,3H).
[1064] 化合物131
[1065]
[1066] 将含有3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-1A，420mg，1.0当量)，三乙胺(6.0当量)和2-(((R)-3-氨基-1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)氨基)-2-苯基乙醇盐酸盐(3.0当量)的混合物。)的DMF(5.6ml)溶液在室温下搅拌24小时。将混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用水(50ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状粗产物。油状物通过柱色谱纯化，使用0至100％EtOAc/己烷梯度洗脱，得到2-苯基-2-(((R)-1,1,1-三氟-3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基丙-2-基)氨基)乙醇(348mg，产率52％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.76(s,1H)8.08(d,1H)7.32-7.46(m,3H)7.24(t,3H)7.18(d,2H)7.06-7.12(m,1H)7.02(s,1H)6.88(s,1H)5.96(s,2H)4.17(dd,1H)3.82-4.09(m,2H)3.48-3.56(m,1H)
3.36(d,1H)1.08-1.18(m,3H).
3.36(d,1H)1.08-1.18(m,3H).
[1067] 化合物132
[1068]
[1069] 将含有3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-1A，364mg，1.0当量)，(4R，6R)-叔丁基-6-(2-氨基乙基)-2,2-二甲基-1,3-二恶烷-4-乙酸酯(3.0当量)和三乙胺(3.0当量)的1,4-二恶烷(3.7ml)和水(1.3ml)溶液在60℃加热2小时。将混合物用乙酸乙酯(50ml)稀释，并用水(50ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并真空蒸发，得到油状粗产物。油状物通过柱色谱纯化，使用0至50％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到所需化合物，为白色固体(536mg，产率90％)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 8.34(s,1H)7.97(s,1H)7.23(s,1H)7.01-7.08(m,1H)6.86-6.91(m,1H)6.83(t,1H)6.72(t,1H)6.46(s,1H)5.87(s,2H)4.00(qd,2H)3.73-3.82(m,1H)3.46-3.54(m,1H)2.29-2.36(m,1H)2.18-2.25(m,1H)
1.64-1.81(m,2H)1.43-1.52(m,2H)1.30-1.37(m,15H).
1.64-1.81(m,2H)1.43-1.52(m,2H)1.30-1.37(m,15H).
[1070] 化合物133
[1071]
[1072] 向化合物132(0.575g，1.0当量)的DCM(100mL)溶液中加入TFA(14mL，200当量)。将混合物在室温下搅拌1小时。将混合物真空浓缩。将所得残余物在DCM(50ml)和1N碳酸氢钠(50ml)之间分配。将有机层干燥，过滤并蒸发，得到油状物。油状物通过柱色谱纯化，使用0至100％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱，得到(4R，6R)-6-(2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)乙基)-4-羟基四氢-2H-吡喃-2-酮(365mg，产率78％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δppm 8.45-8.48(m,1H)8.10(d,1H)7.36(s,
1H)7.17-7.24(m,1H)7.01-7.07(m,1H)6.98(td,1H)6.88(td,1H)6.71(d,1H)5.92-6.03(m,
2H)5.59(br.s.,1H)4.86-4.93(m,1H)3.68-3.97(m,2H)2.53-2.73(m,2H)2.32(dt,1H)
2.06-2.11(m,1H)1.97-2.04(m,1H)1.72(ddd,1H).
1H)7.17-7.24(m,1H)7.01-7.07(m,1H)6.98(td,1H)6.88(td,1H)6.71(d,1H)5.92-6.03(m,
2H)5.59(br.s.,1H)4.86-4.93(m,1H)3.68-3.97(m,2H)2.53-2.73(m,2H)2.32(dt,1H)
2.06-2.11(m,1H)1.97-2.04(m,1H)1.72(ddd,1H).
[1073] 化合物134
[1074]
[1075] 将化合物133(173mg，1.0当量)和氢氧化钠(1.0当量)的THF(0.9ml)和MeOH(0.9ml)溶液在室温下搅拌1小时。将混合物真空浓缩，得到(3R，5R)-7-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3,5-二羟基庚酸钠盐(187mg，产率100％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.72(d,1H),7.98(d,1H),7.40(s,1H),7.18-7.27(m,1H),7.01-7.08(m,1H),6.98(t,1H),6.88(d,1H),6.74(t,1H),5.91(s,2H),
4.08-4.15(m,1H),3.93(dt,1H),3.64-3.86(m,2H),2.25-2.40(m,2H),1.82-1.97(m,2H),
1.62-1.80(m,2H).
4.08-4.15(m,1H),3.93(dt,1H),3.64-3.86(m,2H),2.25-2.40(m,2H),1.82-1.97(m,2H),
1.62-1.80(m,2H).
[1076] 化合物135
[1077]
[1078] 将1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)，4-氨基丁酸(2当量)和三乙胺(10当量)的无水二恶烷溶液在90℃下加热1天。将所得混合物浓缩，粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，得到4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丁酸(2.2mg，产率9％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.27(d,1H),7.96(s,1H),
7.32(m,1H),7.10(s,2H),6.97(s,1H),5.99(s,2H),3.85(t,2H),2.65(m,3H),2.49(s,2H),
2.07(m,2H).
7.32(m,1H),7.10(s,2H),6.97(s,1H),5.99(s,2H),3.85(t,2H),2.65(m,3H),2.49(s,2H),
2.07(m,2H).
[1079] 化合物136
[1080]
[1081] 将1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，1当量)，4,4-二甲基吡咯烷-3-甲酸(2当量)和三乙胺(10当量)的无水二恶烷溶液在90℃下加热1天。将所得混合物浓缩，粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，得到1-(2-(5-乙酰基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)-4,4-二甲基吡咯烷-3-甲酸(2.7mg，产率10％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.20(m,
1H),7.77(s,1H),7.31(m,1H),7.10(m,2H),6.88(m,1H),5.95(s,2H),4.22(m,2H),3.94(m,
1H),3.72(m,1H),3.03(m,1H),2.61(s,3H),1.38(s,3H),1.17(s,3H).
1H),7.77(s,1H),7.31(m,1H),7.10(m,2H),6.88(m,1H),5.95(s,2H),4.22(m,2H),3.94(m,
1H),3.72(m,1H),3.03(m,1H),2.61(s,3H),1.38(s,3H),1.17(s,3H).
[1082] 化合物137
[1083]
[1084] 将1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(1当量)，(1R，2R)-2-氨基环己烷甲酸(2当量)和三乙胺(10当量)的无水二恶烷溶液在90℃下加热1天。将所得混合物浓缩，粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度，得到(1R，2R)-2-((2-(5-乙酰基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)环己烷甲酸(2.8mg，产率10％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.00(m,1H),7.74(m,1H),7.29(m,1H),7.08(m,2H),6.80(m,1H),5.92(s,2H),4.54(m,1H),2.60(s,3H),2.49(m,1H),2.10(m,2H),1.84(m,2H),1.69(m,1H),1.56(m,1H),1.37(m,2H).
[1085] 化合物138
[1086]
[1087] 将1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(1当量)，(S)-3-氨基-4-甲基戊酸(2当量)和三乙胺(10当量)的无水二恶烷溶液在90℃下加热1天。将所得混合物浓缩，粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，得到(S)-3-((2-(5-乙酰基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-4-甲基戊酸(5.4mg，产率20％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.00(m,1H),7.72(m,
1H),7.28(m,1H),7.09(m,2H),6.81(m,1H),5.92(s,2H),4.73(m,1H),2.59(s,5H),2.07(m,
1H),1.04(t,6H).
1H),7.28(m,1H),7.09(m,2H),6.81(m,1H),5.92(s,2H),4.73(m,1H),2.59(s,5H),2.07(m,
1H),1.04(t,6H).
[1088] 化合物139
[1089]
[1090] 将1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(1当量)，4-苯基哌啶-4-甲酸(3当量)和三乙胺(10当量)的无水二恶烷溶液在90℃下加热1天。将所得混合物浓缩，粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，得到1-(2-(5-乙酰基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)-4-苯基哌啶-4-羧酸(7.9mg，产率27％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.31(m,1H),7.92(m,1H),7.51(m,2H),7.39(m,2H),7.32(m,2H),7.11(m,2H),6.95(m,1H),5.98(m,2H),4.83(m,2H),
3.70(m,2H),2.81(m,2H),2.64(s,3H),2.16(m,2H).
3.70(m,2H),2.81(m,2H),2.64(s,3H),2.16(m,2H).
[1091] 化合物185
[1092] 目标化合物由5步制备：
[1093] 步骤1：氰基嘧啶
[1094]
[1095] 将氰化锌(II)(10.8g，92mmol)和2-氯-5-氟-4-甲氧基嘧啶(15.0g，92mmol)的二甲基甲酰胺(200mL)溶液在室温下通过氮气鼓泡10分钟。加入四(三苯基膦)钯(0)(10.0g，8.65mmol)，继续脱气10分钟，反应物在90℃下加热2天。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(150mL)，盐水(50mL)和浓氢氧化铵水溶液(10mL)稀释。混合后，分离各层，并用另一部分乙酸乙酯(150mL)萃取水相。合并的有机相用2×20mL盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并通过在60℃下旋转蒸发浓缩。在SiO2上纯化，用使用己烷/乙酸乙酯梯度洗脱得到回收的氯嘧啶原料和5.5g所需的氰基嘧啶，为无色油状物。将回收的原料按上述再处理，得到3.0g所述中间体(总产率8.5g，收率60％)。
[1096] 1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.41(s,1H),4.17(s,3H)ppm.
[1097] 步骤2：嘧啶酯
[1098]
[1099] 将步骤1中获得的氰基嘧啶(8.1g，52.9mmol)在冰中冷却，在5分钟内加入1N氢氧化钠(水溶液)(63.5mL，63.5mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入3N盐酸(水溶液)至pH 3，同时在冰中重新冷却。将混合物浓缩至干，首先通过旋转蒸发，然后高真空，得到12.8g粗羧酸，为白色固体，直接进行酯化。将粗产物固体在无水甲醇(150mL)中在室温下搅拌，并加入浓硫酸(1.5mL，29.1mmol)。将混合物搅拌过夜，然后在冰中冷却，然后加入10％NaHCO3水溶液(100mL)，然后在室温下再搅拌1小时。真空除去溶剂，残余物在水(100mL)和乙酸乙酯(300mL)之间分配。有机相用3×20mL H2O洗涤，然后将合并的水相用200mL乙酸乙酯反萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩。在SiO2上纯化，用己烷/乙酸乙酯作为梯度洗脱剂，得到酯嘧啶中间体为白色固体(4.5g，从氰基嘧啶得到产率
46％)。
46％)。
[1100] 1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.45(s,1H),4.20(s,3H),4.03(s,3H)ppm.
[1101] 步骤3和步骤4：中间体-17
[1102]
[1103] 步骤3：将1-(异恶唑-3-基)乙酮(4.0g，36.3mmol)的THF(200mL)溶液在干冰/丙酮中冷却。在10分钟内加入双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(1M甲苯溶液，33.8mL，33.8mmol)，然后在-65℃至-70℃搅拌30分钟。将上述得到的酯嘧啶(4.5g，24.2mmol)的THF(20mL)溶液在5分钟内滴入戊酸溶液中，并在室温下继续搅拌过夜。真空除去溶剂，然后将残余物溶解在乙醚(100mL)中并过滤。将滤饼用乙醚(20mL)洗涤并空气干燥，得到8.2g粗二酮异恶唑，将其直接进行下一反应，无需进一步纯化。LCMS(m/e)266(M+H).
[1104] 步骤4：将粗二酮异恶唑(理论值6.4g，24.2mmol)溶于甲醇(100mL)中，然后加入冰醋酸(11.4mL，199mmol)和水合肼(4.0mL，83mmol)，将溶液在60℃加热30分钟。在真空下除去溶剂，然后将残余物用乙酸乙酯(50mL)和10％NaHCO3水溶液(200mL)溶解，并在室温下搅拌，直到观察不到更多的气体逸出。加入己烷(80mL)，并将两相混合物搅拌30分钟并过滤。滤饼用2×50mL H2O，1:1己烷/乙酸乙酯(50mL)洗涤并在真空下干燥，得到2.69g中间体-
17，为浅棕色固体。发现有机滤液中含有不纯的产物。使用二氯甲烷/乙酸乙酯作为梯度洗脱剂将该混合物在SiO2上色谱分离纯化，得到0.39g中间体-17(总产率：3.1g，来自酯嘧啶的71％)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ8.76(s,1H),8.49(s,1H),7.40(s,1H),6.94(s,1H),4.23(s,3H)ppm.LCMS(m/e)262(M+H).
17，为浅棕色固体。发现有机滤液中含有不纯的产物。使用二氯甲烷/乙酸乙酯作为梯度洗脱剂将该混合物在SiO2上色谱分离纯化，得到0.39g中间体-17(总产率：3.1g，来自酯嘧啶的71％)。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ8.76(s,1H),8.49(s,1H),7.40(s,1H),6.94(s,1H),4.23(s,3H)ppm.LCMS(m/e)262(M+H).
[1105] 步骤5：化合物185
[1106]
[1107] 将叔丁基3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-17，1当量)和叔丁醇锂(2当量)的二甲氧基乙烷(2ml)溶液在60℃下搅拌5分钟。向其中加入1-(溴甲基)-4-甲苯(1.1当量)，并在60℃下搅拌反应过夜。冷却至室温后，在氮气保护下除去溶剂。将所得固体溶于甲醇(0.5ml)和浓HCl水溶液(140ul)，并在60℃下搅拌过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂。粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，以得到化合物185(1.5mg，产率5％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.75(m,1H),7.95(m,1H),7.35(s,1H),7.11(m,4H),6.85(m,1H),5.84(s,2H),2.28(s,3H).[1108] 化合物187
[1109]
[1110] 将叔丁基3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-17，1当量)和叔丁醇锂(3当量)的二甲氧基乙烷(2ml)溶液在60℃下搅拌5分钟。向其中加入2-(溴甲基)吡啶，HBr(1.1当量)，并在60℃下搅拌反应过夜。冷却至室温后，在氮气保护下除去溶剂。将所得固体溶于甲醇(0.5ml)和浓HCl水溶液(140ul)，并在60℃下搅拌过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂。粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，得到化合物187(1.5mg，产率5％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.78(s,1H),8.70(d,1H),8.19(t,1H),8.07(d,1H),7.69(t,1H),7.56(s,1H),7.52(d,1H),6.92(s,
1H),6.20(s,2H).
1H),6.20(s,2H).
[1111] 化合物189
[1112]
[1113] 将叔丁基3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-17，1当量)和叔丁氧基锂(3当量)的二甲氧基乙烷(2ml)溶液在60℃下搅拌5分钟。向其中加入3-(溴甲基)吡啶，HBr(1.1当量)，并在60℃下反应搅拌过夜。冷却至室温后，在氮气保护下除去溶剂。将所得固体溶于甲醇(0.5ml)和浓HCl水溶液(140ul)，并在60℃下搅拌过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂。粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，以得到化合物189(12.9mg，产率40％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.90(s,1H),8.86(d,1H),8.77(d,1H),8.50(d,1H),8.08(d,1H),7.96(br.s.,1H),7.52(s,
1H),7.00(d,1H),6.14(s,2H)
1H),7.00(d,1H),6.14(s,2H)
[1114] 化合物190
[1115]
[1116] 将叔丁基3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-17，1当量)和叔丁氧基锂(2当量)的二甲氧基乙烷(2ml)溶液在60℃下搅拌5分钟。向其中加入5-(溴甲基)-3-甲基异恶唑(1.1当量)，并在60℃下搅拌反应过夜。冷却至室温后，在氮气保护下除去溶剂。将所得固体溶于甲醇(0.5ml)和浓HCl水溶液(140ul)，并在60℃下搅拌过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂。粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，得到化合物190(13.2mg，产率42％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm
8.84(d,1H),8.04(m,1H),7.47(s,1H),6.97(d,1H),6.15(m,1H),6.06(s,2H),2.22(m,3H).[1117] 化合物141和化合物140的合成
8.84(d,1H),8.04(m,1H),7.47(s,1H),6.97(d,1H),6.15(m,1H),6.06(s,2H),2.22(m,3H).[1117] 化合物141和化合物140的合成
[1118]
[1119] 将2-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)恶唑，2-(氨甲基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(中间体-1F，3.0当量)和三乙胺(10当量)的二恶烷-水(2:1)溶液在90-100℃加热5天。反应混合物用水稀释，用1N HCl溶液酸化至pH＝4，用二氯甲烷萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(10-25％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)纯化，得到白色固体的化合物141(38mg，收率为5％，2步为55％)，和白色固体的化合物140(11mg，21％，2步)；
[1120] 化合物141：1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ ppm 8.27(m,2H),7.73(s,1H),7.45(s,1H),7.23(m,1H),7.14(app.t,1H),7.05-7.00(m,2H),6.10(s,2H),5.72(br s,1H),4.15(d,
2H).没有观察到可交换的OH质子。
2H).没有观察到可交换的OH质子。
[1121] 化合物140：1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.13(d,1H),7.68(s,1H),7.48(s,1H),7.21(s,1H),7.18(m,1H),7.01(app.t,1H),6.95(app.t,1H),6.87(app.t,1H),6.09(s,
2H),3.68(q,4H),1.29(t,6H).
2H),3.68(q,4H),1.29(t,6H).
[1122] 化合物142的合成
[1123]
[1124] 向3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2,3-二氟苄基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-1G，使用已经在专利申请公开WO2013/101830中描述的相应的2-(1-(2,3-二氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基作为起始原料，类似于中间体1F的制备)和锌粉(2.5当量)的THF灰黄色悬浮液中加入乙酸(2.8当量)，并在75℃下加热2天。冷却至室温后，将反应混合物倒入1N NaOH溶液中，用乙酸乙酯萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法(10-50％乙酸乙酯/己烷溶液梯度洗脱)纯化，得到化合物142(39mg，74％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.12(s,1H),8.97(s,2H),7.69(s,1H),
7.38(m,1H),7.30(s,1H),7.14(m,1H),6.78(app.t,1H),5.97(s,2H).
7.38(m,1H),7.30(s,1H),7.14(m,1H),6.78(app.t,1H),5.97(s,2H).
[1125] 化合物143
[1126] 目标化合物由5步合成：
[1127]
[1128] 步骤1：1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯和[1129] 1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-3-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯的合成[1130] 向3-氟-2-(肼基甲基)吡啶盐酸盐(1.0当量)和碳酸钾(0.5当量)的乙醇/水(10:1)悬浮液加入4-(异恶唑-3-基)-2-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁-2-烯酸乙酯(1当量)。
所得橙色悬浮液在60℃加热24小时。将粗混合物真空浓缩。加入水，水相用乙酸乙酯萃取。
合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法纯化(10-25％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)，得到1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(47％)和1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-3-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(9.7％)。
所得橙色悬浮液在60℃加热24小时。将粗混合物真空浓缩。加入水，水相用乙酸乙酯萃取。
合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法纯化(10-25％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)，得到1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(47％)和1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-3-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(9.7％)。
[1131] 步骤2：1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸的合成[1132] 向1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的THF/水(3:1比例)溶液中加入氢氧化锂(2.0当量)。5小时后，将反应混合物真空浓缩以除去大部分THF。将所得混合物用水稀释并加入1N HCl溶液酸化至pH 4-5。通过真空过滤收集产物，1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸。滤液用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂，得到另外的产物(96％)。
[1133] 步骤3：1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲腈的合成[1134] 向1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲酸，2-甲基丙-2-胺(3.0当量)和三乙胺(2.0当量)的乙酸乙酯悬浮液中加入正丙基膦酸酐(T3P，50重量％乙酸乙酯溶液，3.0当量)。将所得黄色溶液在65℃下加热3小时。真空除去溶剂。加入三氯化磷(20当量)，将所得混合物在70℃下搅拌2小时。通过小心倒入水和冰的混合物中淬灭反应，加入饱和碳酸氢钠溶液/固体碳酸氢钠中和至pH＝7，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂，得到1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲腈(>99％)。
[1135] 步骤4：1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒(中间体-18)的合成
[1136] 向1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲腈的甲醇溶液中加入甲醇钠(0.5N的MeOH溶液，4.0当量)，搅拌4小时。加入氯化铵(10当量)。将反应混合物在环境温度下搅拌36小时，在50℃下搅拌6.5小时。将反应物真空浓缩并在半饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂，得到1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒(98％)，其不经进一步操作即可使用。
[1137] 步骤5：化合物143的合成
[1138] 向1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒(中间体-18)的乙醇溶液中加入(Z)-3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(4.0当量)，并在90℃下加热2小时。冷却至室温后，通过加入HCl(1.25M的EtOH溶液)中和反应混合物。将所得悬浮液真空浓缩。将残余物在二氯甲烷/异丙醇(7:1)和水之间分配，并通过加入1N NaOH溶液将pH调节至6。水层用二氯甲烷/异丙醇(7:1)反萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(5-20％乙腈/甲醇(7:1)的二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化，得到化合物143(220mg，60％)，为浅棕色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 13.2(br s,1H),9.07(s,
1H),8.23(d,1H),8.12(br s,1H),7.76(app.t,1H),7.63(s,1H),7.40(m,1H),7.23(s,1H),
6.05(s,2H).
1H),8.23(d,1H),8.12(br s,1H),7.76(app.t,1H),7.63(s,1H),7.40(m,1H),7.23(s,1H),
6.05(s,2H).
[1139] 化合物144
[1140] 目标化合物由2步合成：
[1141] 步骤1：3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑的合成
[1142]
[1143] 将以三氯化磷(85当量)作为溶剂的5-氟-2-(1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4(3H)-酮的溶液在65℃加热2小时。将反应混合物冷却至环境温度，在氮气保护下吹干，然后从甲苯中浓缩两次。将所得的黄棕色固体3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑，真空干燥，无需进一步操作用于下一步骤中。
[1144] 步骤2：化合物144的合成
[1145] 将3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑和锌粉(1.7当量)在THF中制成灰黄色悬浮液，加入乙酸(2.8当量)，并在75℃下加热3小时。加入额外量的锌粉(2.8当量)和乙酸(2.8当量)，将反应物在75℃加热20小时。冷却至室温后，过滤反应混合物，滤液在半饱和碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间分配。有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。粗产物通过硅胶色谱法(30-60％乙酸乙酯/己烷梯度洗脱)纯化，得到化合物144(30mg，35％，2步)，为浅黄色固体。
[1146] 1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.06(s,1H),8.95(s,2H),8.25(d,1H),7.76(app.t,1H),7.64(s,1H),7.40(m,1H),7.28(s,1H),6.06(s,2H).
[1147] 化合物145
[1148]
[1149] 将1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒(中间体-18)的吡啶溶液中加入1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU，4.0当量)和3-乙氧基丙腈(2.5当量)，并在110℃加热46小时。将反应混合物冷却至环境温度，真空浓缩，并在半饱和碳酸氢钠溶液和二氯甲烷之间分配。有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。将粗产物通过硅胶色谱法(10-25％乙腈/甲醇(7:1)的二氯甲烷梯度洗脱)纯化，然后通过制备型HPLC(5-75％乙腈/含有0.1％三氟乙酸的水梯度洗脱)纯化，得到化合物I-145(17mg，21％，TFA盐)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 14.1(br s,1H,TFA),9.11(s,1H),8.78(br s,
2H),8.24(d,1H),8.10(d,1H),7.78(app.t,1H),7.61(s,1H),7.42(m,1H),7.28(s,1H),
6.63(d,1H),6.11(s,2H).
2H),8.24(d,1H),8.10(d,1H),7.78(app.t,1H),7.61(s,1H),7.42(m,1H),7.28(s,1H),
6.63(d,1H),6.11(s,2H).
[1150] 化合物146
[1151] 目标化合物由2步合成：
[1152] 步骤1：3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑的合成
[1153]
[1154] 将5-氟-2-(1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4(3H)-酮的磷酰三氯(100当量)溶液在65℃加热3小时。将反应混合物冷却至环境温度，在氮气保护下吹干，然后从甲苯中浓缩两次。将所得的黄棕色固体3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑，真空干燥，无需进一步操作用于下一步骤中。
[1155] 步骤2：化合物146的合成
[1156] 将3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-((3-氟吡啶-2-基)甲基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑和氢氧化铵(35当量，29％水溶液)的二恶烷溶液在60℃加热22小时。所得黄色悬浮液用水稀释。通过过滤收集产物，用水洗涤并真空干燥，得到化合物146(37mg，2步的产率为98％)，为浅棕色固体。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 9.04(s,1H),8.25(d,1H),8.21(d,
1H),7.75(app.t,1H),7.44(s,1H),7.42-7.34(m,3H),7.22(s,1H),6.00(s,2H).
1H),7.75(app.t,1H),7.44(s,1H),7.42-7.34(m,3H),7.22(s,1H),6.00(s,2H).
[1157] 化合物147
[1158]
[1159] 将中间体-1A(50.0mg，0.134mmol)，4-甲氧基-1H-吡咯-2(5H)-酮(18.2mg，0.161mmol)和碳酸铯(65.4mg，0.201mmol)的二恶烷(2mL)悬浮液在95℃加热2小时，然后在
70℃下加热12小时。然后将反应混合物在水中稀释，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到残余物。通过反相HPLC，利用5至95％乙腈/水(含有0.1％三氟乙酸)溶液梯度洗脱，在25分钟内进行纯化，得到1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-
1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-4-甲氧基-1H-吡咯-2(5H)-酮，化合物147(2.0mg，产率3％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.64(d,1H),8.49(d,1H),7.36(s,1H),7.20–7.23(m,1H),7.02–7.07(m,1H),6.98–7.01(m,1H),6.87–6.90(m,1H),6.61(d,1H),5.99(s,2H),
5.26(s,1H),4.70(s,2H),3.94(s,3H).
70℃下加热12小时。然后将反应混合物在水中稀释，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到残余物。通过反相HPLC，利用5至95％乙腈/水(含有0.1％三氟乙酸)溶液梯度洗脱，在25分钟内进行纯化，得到1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-
1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-4-甲氧基-1H-吡咯-2(5H)-酮，化合物147(2.0mg，产率3％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.64(d,1H),8.49(d,1H),7.36(s,1H),7.20–7.23(m,1H),7.02–7.07(m,1H),6.98–7.01(m,1H),6.87–6.90(m,1H),6.61(d,1H),5.99(s,2H),
5.26(s,1H),4.70(s,2H),3.94(s,3H).
[1160] 化合物148
[1161]
[1162] 将中间体-1A(70.0mg，0.187mmol)，(R)-2-氨基-3-甲基丁-1-醇(0.0250mL，0.225mmol)和三乙胺(0.104ml，0.749mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃下搅拌
16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到(R)-2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3-甲基丁-
1-醇，化合物148(69.4mg，产率95％)，为白色固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.75(s,1H),8.05(d,1H),7.40(s,1H),7.24-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.01-
7.04(m,1H),6.90(s,1H),6.79-6.82(m,1H),5.96(s,2H),4.34-4.37(m,1H),3.80(dd,1H),
3.72(dd,1H),2.03-2.09(m,1H),1.05(d,3H),1.00(d,3H).
16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到(R)-2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-3-甲基丁-
1-醇，化合物148(69.4mg，产率95％)，为白色固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.75(s,1H),8.05(d,1H),7.40(s,1H),7.24-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.01-
7.04(m,1H),6.90(s,1H),6.79-6.82(m,1H),5.96(s,2H),4.34-4.37(m,1H),3.80(dd,1H),
3.72(dd,1H),2.03-2.09(m,1H),1.05(d,3H),1.00(d,3H).
[1163] 化合物149
[1164]
[1165] 将中间体-1A(70.0mg，0.187mmol)，(R)-2-氨基-4-甲基戊-1-醇(0.0290mL，0.225mmol)和三甲胺(0.104mL，0.749mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃下搅拌
16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到(R)-2-((5-氟-2-(1-(2--5-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲基戊-1-醇，化合物149(67.3mg，产率79％)，为白色固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.09(s,1H),8.14(d,1H),7.43(s,1H),7.28-7.34(m,2H),7.19-7.23(m,2H,2重叠位移),7.08-7.11(m,1H),6.86-6.89(m,1H),5.91(d,1H),5.84(d,1H),4.74(m,1H),4.44(br.s,1H),3.46-3.50(m,1H),3.40-3.45(m,1H),1.56-1.62(m,1H),1.45-1.51(m,1H),
1.36-1.41(m,1H),0.90(d,3H),0.88(d,3H).
16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到(R)-2-((5-氟-2-(1-(2--5-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-4-甲基戊-1-醇，化合物149(67.3mg，产率79％)，为白色固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.09(s,1H),8.14(d,1H),7.43(s,1H),7.28-7.34(m,2H),7.19-7.23(m,2H,2重叠位移),7.08-7.11(m,1H),6.86-6.89(m,1H),5.91(d,1H),5.84(d,1H),4.74(m,1H),4.44(br.s,1H),3.46-3.50(m,1H),3.40-3.45(m,1H),1.56-1.62(m,1H),1.45-1.51(m,1H),
1.36-1.41(m,1H),0.90(d,3H),0.88(d,3H).
[1166] 化合物150
[1167]
[1168] 将中间体-1A(70.0mg，0.187mmol)，(R)-(+)-甲硫醇(30.4mg，0.225mmol)和三乙胺(0.104mL，0.749mmol)在二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃下反应16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成黄色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到(R)-2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)-4-(甲硫基)丁-1-醇，化合物150(47.5mg，收率54％)，为淡黄色蜡状固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):
9.09(d,1H),8.17(d,1H),7.49(s,1H),7.39(d,1H),7.31-7.34(m,1H),7.23(s,1H),7.19-
7.23(m,1H),7.08-7.11(m,1H),6.81-6.84(m,1H),5.90(d,1H),5.87(d,1H),4.80-4.82(m,
1H),4.35-4.42(m,1H),3.51-3.55(m,1H),3.45-3.50(m,1H),2.50-2.54(m,2H),2.02(s,
3H),1.90-1.95(m,1H),1.80-1.85(m,1H).
9.09(d,1H),8.17(d,1H),7.49(s,1H),7.39(d,1H),7.31-7.34(m,1H),7.23(s,1H),7.19-
7.23(m,1H),7.08-7.11(m,1H),6.81-6.84(m,1H),5.90(d,1H),5.87(d,1H),4.80-4.82(m,
1H),4.35-4.42(m,1H),3.51-3.55(m,1H),3.45-3.50(m,1H),2.50-2.54(m,2H),2.02(s,
3H),1.90-1.95(m,1H),1.80-1.85(m,1H).
[1169] 化合物151
[1170]
[1171] 将中间体-1A(75.0mg，0.201mmol)，(R)-2-氨基己-1-醇(28.2mg，0.241mmol)和三乙胺(0.104mL，0.749mmol)在二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃下反应16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到(R)-2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)己-1-醇，化合物151(83.2mg，产率91％)，为白色固体。不需要进一步纯化。
[1172] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.09(d,1H),8.15(d,1H),7.46(s,1H),7.29-7.34(m,2H),7.20-7.23(m,2H,2重叠位移),7.08-7.11(m,1H),6.81-6.85(m,1H),5.91(d,
1H),5.87(d,1H),4.71-4.74(m,1H),4.29-4.34(m,1H),3.48-3.52(m,1H),3.42-3.48(m,
1H),1.61-1.68(m,1H),1.46-1.53(m,1H),1.19-1.36(m,4H),0.81(t,3H).
1H),5.87(d,1H),4.71-4.74(m,1H),4.29-4.34(m,1H),3.48-3.52(m,1H),3.42-3.48(m,
1H),1.61-1.68(m,1H),1.46-1.53(m,1H),1.19-1.36(m,4H),0.81(t,3H).
[1173] 化合物152
[1174]
[1175] 将中间体-1A(75.0mg，0.201mmol)，(R)-2-氨基戊烷-1-醇(24.8mg，0.241mmol)和三乙胺(0.104mL，0.749mmol)的二恶烷1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃下搅拌16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到(R)-2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)戊-1-醇，化合物152(47.1mg，收率53％)，为白色固体。不需要进一步纯化。
[1176] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.09(s,1H),8.15(d,1H),7.46(s,1H),7.29-7.35(m,2H),7.20-7.23(m,2H,2重叠位移),7.08-7.11(m,1H),6.83-6.86(m,1H),5.91(d,
1H),5.87(d,1H),4.73(m,1H),4.32-4.38(m,1H),3.48-3.52(m,1H),3.43-3.47(m,1H),
1.58-1.65(m,1H),1.46-1.53(m,1H),1.26-1.40(m,2H),0.88(t,3H).
1H),5.87(d,1H),4.73(m,1H),4.32-4.38(m,1H),3.48-3.52(m,1H),3.43-3.47(m,1H),
1.58-1.65(m,1H),1.46-1.53(m,1H),1.26-1.40(m,2H),0.88(t,3H).
[1177] 化合物127
[1178]
[1179] 将中间体-1A(82.0mg，0.219mmol)，2-氨基-6,6,6-三氟己醇-1-醇(45.0mg，0.263mmol)和三乙胺(0.122mL，0.876mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃加热72小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷中溶解并用水(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到6,6,6-三氟-2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)己-1-醇，化合物127(80.1mg，产率72％)，为白色固体。不需要进一步纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.08(s,1H),8.18(d,1H),7.49(s,1H),7.38(d,1H),7.30-7.34(m,1H),7.20-
7.24(m,2H,2重叠位移),7.07-7.10(m,1H),6.78-6.81(m,1H),5.88(s,2H),4.80(m,1H),
4.33-4.38(m,1H),3.50-3.55(m,1H),3.45-3.49(m,1H),2.40-2.48(m,1H),2.20-2.29(m,
1H),1.70-1.76(m,1H),1.54-1.63(m,2H),1.46-1.52(m,1H).
7.24(m,2H,2重叠位移),7.07-7.10(m,1H),6.78-6.81(m,1H),5.88(s,2H),4.80(m,1H),
4.33-4.38(m,1H),3.50-3.55(m,1H),3.45-3.49(m,1H),2.40-2.48(m,1H),2.20-2.29(m,
1H),1.70-1.76(m,1H),1.54-1.63(m,2H),1.46-1.52(m,1H).
[1180] 化合物153
[1181]
[1182] 将中间体-1A(74.5mg，0.199mmol)，2-乙基丁烷-1,2-二胺(27.8mg，0.239mmol)和三乙胺(0.111mL，0.797mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃加热16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并真空干燥，得到2-乙基-N1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)丁烷-1，2-二胺，化合物153(76.8mg，产率85％)，为灰白色固体。不需要进一步纯化。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.77(s,1H),8.15-8.19(m,1H),7.46-7.49(m,1H),7.26-7.30(m,1H),7.10-7.13(m,1H),7.02-7.06(m,1H),6.90(s,1H),6.76-6.80(m,1H),5.98(s,2H),3.66(s,2H),
1.59-1.72(m,4H),0.96-1.03(m,6H).
1.59-1.72(m,4H),0.96-1.03(m,6H).
[1183] 化合物154
[1184]
[1185] 中间体-1A(70.0mg，0.187mmol)，2,3-二甲基丁烷-1,2-二胺(26.1mg，0.225mmol)和三乙胺(0.104mL，0.749mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃加热16小时。然后将反应混合物冷却至室温并在水中稀释，形成白色沉淀，将其过滤并真空干燥，得到N1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-2,3-二甲基丁烷-1，2-二胺，化合物154(70.7mg，产率83％)，为灰白色固体。不需要进一步纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.09(m,1H),8.18(d,1H),7.45(s,1H),7.31-7.35(m,1H),7.25-
7.29(m,1H),7.19-7.23(m,2H),7.09-7.12(m,1H),6.88-6.91(m,1H),5.87(s,2H),3.41-
3.49(m,2H),1.57-1.63(m,1H),0.91(d,3H),0.90(s,3H),0.88(s,3H),[2N-H质子未被观察到].
7.29(m,1H),7.19-7.23(m,2H),7.09-7.12(m,1H),6.88-6.91(m,1H),5.87(s,2H),3.41-
3.49(m,2H),1.57-1.63(m,1H),0.91(d,3H),0.90(s,3H),0.88(s,3H),[2N-H质子未被观察到].
[1186] 化合物155
[1187]
[1188] 将中间体-1A(113mg，0.303mmol)，2-甲基戊烷-1,2-二胺(42.3mg，0.364mmol)和三乙胺(0.169mL，1.21mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温，用水稀释，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩至粘稠油状物，静置固化，得到N1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-2-甲基戊烷-1,2-二胺(117mg，产率85％)，为白色泡沫状固体。不需要进一步纯化。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.76(s,1H),8.07(d,1H),7.43(s,1H),7.24-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.90(s,1H),6.80-6.83(m,1H),5.96(s,2H),
3.67(d,1H),3.60(d,1H),1.42-1.50(m,4H),1.15(s,3H).
3.67(d,1H),3.60(d,1H),1.42-1.50(m,4H),1.15(s,3H).
[1189] 化合物156
[1190]
[1191] 将中间体-1A(101mg，0.271mmol)，2,4-二甲基戊烷-1,2-二胺(42.4mg，0.326mmol)和三乙胺(0.151mL，1.21mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)溶液在85℃加热16小时。将反应混合物冷却，在水中稀释，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并真空浓缩，得到N1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-2,4-二甲基戊烷-1，2-二胺，化合物156(109.7mg，产率86％)，为灰白色粘稠胶状物。不需要进一步纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.09(s,1H),8.18(d,1H),7.47(s,1H),
7.31-7.34(m,1H),7.19-7.23(m,2H,2重叠位移),7.08-7.11(m,1H),6.85-6.88(m,1H),
5.88(s,2H),3.36-3.44(m,2H),1.78-1.85(m,1H),1.58(br.s,2H),1.23-1.31(m,2H),1.01(s,3H),0.92(d,3H),0.88(d,3H),[2N-H质子未被观察到].
7.31-7.34(m,1H),7.19-7.23(m,2H,2重叠位移),7.08-7.11(m,1H),6.85-6.88(m,1H),
5.88(s,2H),3.36-3.44(m,2H),1.78-1.85(m,1H),1.58(br.s,2H),1.23-1.31(m,2H),1.01(s,3H),0.92(d,3H),0.88(d,3H),[2N-H质子未被观察到].
[1192] 化合物157
[1193]
[1194] 向(2R，3S)-1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-2-甲酸(该化合物先前描述在专利申请公开WO2014144100中，25.0mg，
0.0520mmol)的二氧六环(1mL)溶液中加入4-(2-溴乙基)吗啉氢溴酸盐(15.7mg，
0.0570mmol)，然后加入铯碳酸酯(25.4mg，0.0780mmol)。将反应混合物在90℃下加热2小时，然后将反应混合物用DMSO(1mL)和水(0.5mL)稀释，并通过反相HPLC直接纯化，在25分钟内使用5至95％乙腈水溶液(掺有0.1％三氟乙酸)梯度洗脱，得到(2R，3S)-2-吗啉代乙基1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-2-甲酸乙酯，化合物157(16.7mg，产率54％)，为白色泡沫状固体。1H NMR(500MHz,CD3CN)δ(ppm):
8.69(s,1H),8.24(d,1H),7.47(s,1H),7.30-7.34(m,1H),7.11-7.15(m,1H),7.08-7.11(m,
1H),6.96-6.99(m,1H),6.90(s,1H),5.88(s,2H),5.32(d,1H),4.39-4.47(m,3H,2重叠位移),3.62-3.79(m,4H),3.50-3.55(m,2H),3.28-3.34(m,4H),2.84-2.93(m,2H),1.85-1.88(m,1H),1.68-1.75(m,2H),1.50-1.56(m,1H),1.16(d,3H).
0.0520mmol)的二氧六环(1mL)溶液中加入4-(2-溴乙基)吗啉氢溴酸盐(15.7mg，
0.0570mmol)，然后加入铯碳酸酯(25.4mg，0.0780mmol)。将反应混合物在90℃下加热2小时，然后将反应混合物用DMSO(1mL)和水(0.5mL)稀释，并通过反相HPLC直接纯化，在25分钟内使用5至95％乙腈水溶液(掺有0.1％三氟乙酸)梯度洗脱，得到(2R，3S)-2-吗啉代乙基1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)-3-甲基哌啶-2-甲酸乙酯，化合物157(16.7mg，产率54％)，为白色泡沫状固体。1H NMR(500MHz,CD3CN)δ(ppm):
8.69(s,1H),8.24(d,1H),7.47(s,1H),7.30-7.34(m,1H),7.11-7.15(m,1H),7.08-7.11(m,
1H),6.96-6.99(m,1H),6.90(s,1H),5.88(s,2H),5.32(d,1H),4.39-4.47(m,3H,2重叠位移),3.62-3.79(m,4H),3.50-3.55(m,2H),3.28-3.34(m,4H),2.84-2.93(m,2H),1.85-1.88(m,1H),1.68-1.75(m,2H),1.50-1.56(m,1H),1.16(d,3H).
[1195] 化合物158
[1196]
[1197] 向氨基甲酸2-吗啉代乙酯(134mg，0.769mmol)的甲醇(4mL)溶液中加入叔丁醇钾(86.0mg，0.769mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后将其浓缩，得到白色固体。将所得固体在DMSO(4mL)中溶解，之后加入中间体-1A(287mg，0.769mmol)。将反应混合物在室温下搅拌72小时，然后真空除去二恶烷。在25分钟内使用5至95％乙腈/水(掺有0.1％三氟乙酸)梯度洗脱，通过反相HPLC纯化粗产物混合物，得到两种化合物的混合物。通过硅胶色谱法在50分钟内利用3至15％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱进一步纯化，得到2-吗啉代乙基(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基甲酸酯，化合物158(28.7mg，产率7％)，为白色结晶固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.78(s,1H),8.64(d,1H),7.53(s,1H),7.26-7.30(m,1H),7.08-7.12(m,1H),7.02-7.06(m,1H),6.89(s,1H),
6.85-6.89(m,1H),5.97(s,2H),4.51-4.56(m,2H),3.78-3.86(m,4H),3.33-3.37(m,2H),[4H未观察到，与CD3OD同步].
6.85-6.89(m,1H),5.97(s,2H),4.51-4.56(m,2H),3.78-3.86(m,4H),3.33-3.37(m,2H),[4H未观察到，与CD3OD同步].
[1198] 化合物159
[1199]
[1200] 将中间体-1A(281mg，0.751mmol)，2-氨基-5-(氨基甲基)苯酚二盐酸盐(182mg，0.864mmol)和三乙胺(0.524mL，3.76mmol)的二恶烷(3mL)和水(1.5mL)溶液在90℃加热16小时。然后将反应混合物冷却至室温，在1N盐酸水溶液和水中稀释，过滤并真空干燥，得到粗固体。使用硅胶色谱法在60分钟内使用3至10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，进行纯化，得到产物的混合物。通过硅胶色谱进一步纯化，在45分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到2-氨基-5-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)苯酚，化合物159(135mg，产率38％)，为橙黄色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.09(s,1H),8.93(br.s,1H),8.17(d,1H),8.11(m,1H),7.49(s,
1H),7.31-7.35(m,1H),7.24(s,1H),7.20-7.24(m,1H),7.10-7.13(m,1H),6.85-6.88(m,
1H),6.67(s,1H),6.62(d,1H),6.50(d,1H),5.90(s,2H),4.51(d,2H),4.42(br.s,2H).[1201] 化合物160
1H),7.31-7.35(m,1H),7.24(s,1H),7.20-7.24(m,1H),7.10-7.13(m,1H),6.85-6.88(m,
1H),6.67(s,1H),6.62(d,1H),6.50(d,1H),5.90(s,2H),4.51(d,2H),4.42(br.s,2H).[1201] 化合物160
[1202]
[1203] 向化合物159(49.5mg，0.104mmol)的吡啶(1mL)溶液中加入环丙烷磺酰氯(0.0120mL，0.115mmol)。16小时后，使用硅胶色谱法，在60分钟内使用1至8％甲醇/二氯甲烷的梯度洗脱，直接纯化反应混合物，得到N-(4-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基苯基)环丙烷磺酰胺，化合物160(41.9mg，产率69％)，为橙色固体。1H NMR(500MHz,CD3CN)δ(ppm):8.65(s,1H),8.10(d,1H),
7.49(br.s,1H),7.36(s,1H),7.27-7.30(m,1H),7.27(d,1H),7.10-7.13(m,1H),7.05-7.09(m,1H),7.02(m,2H),6.91-6.94(m,2H),6.84(s,1H),6.60-6.62(m,1H),5.86(s,2H),4.70(d,2H),2.43-2.48(m,1H),0.89-0.94(m,2H),0.85-0.89(m,2H).
7.49(br.s,1H),7.36(s,1H),7.27-7.30(m,1H),7.27(d,1H),7.10-7.13(m,1H),7.05-7.09(m,1H),7.02(m,2H),6.91-6.94(m,2H),6.84(s,1H),6.60-6.62(m,1H),5.86(s,2H),4.70(d,2H),2.43-2.48(m,1H),0.89-0.94(m,2H),0.85-0.89(m,2H).
[1204] 化合物161
[1205]
[1206] 向化合物159(40.8mg，0.086mmol)的吡啶(1mL)溶液中加入甲磺酰氯(7.36μL，0.0940mmol)。16小时后，将反应混合物浓缩至其体积的约10％，通过反相HPLC，在25分钟内使用5至95％乙腈/水(掺有0.1％三氟乙酸)梯度洗脱，进行纯化，得到N-(4-(((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)甲基)-2-羟基苯基)甲磺酰胺，化合物161(5.8mg，收率12％)，为褐色固体。1H NMR(500MHz,CD3CN)δ(ppm):8.69(s,
1H),8.10(d,1H),7.61(m,1H),7.49(s,1H),7.26-7.30(m,1H),7.26(d,1H),7.16(br.s,
1H),7.03-7.11(m,3H,3化学位移重叠),6.94-6.97(m,2H),6.88(s,1H),5.86(s,2H),4.77(d,2H),2.89(s,3H),[1N-H质子未观察到].
1H),8.10(d,1H),7.61(m,1H),7.49(s,1H),7.26-7.30(m,1H),7.26(d,1H),7.16(br.s,
1H),7.03-7.11(m,3H,3化学位移重叠),6.94-6.97(m,2H),6.88(s,1H),5.86(s,2H),4.77(d,2H),2.89(s,3H),[1N-H质子未观察到].
[1207] 化合物162
[1208]
[1209] 将3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸(中间体-22，50.0mg，0.117mmol，该中间体描述于专利申请公开WO2014144100中)，4-(2-溴乙基)吗啉氢溴酸盐(35.5mg，0.129mmol)和碳酸铯(57.3mg，0.176mmol)的二恶烷(1mL)悬浮液在90℃加热16小时。将反应混合物冷却至室温，然后通过硅胶色谱法纯化，在
45分钟内使用3至7％甲醇的二氯甲烷溶液进行梯度洗脱，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸(2-吗啉代)乙酯，化合物162(34.8mg，产率55％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.76(s,1H),8.07(d,1H),
7.44(s,1H),7.25-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.02-7.05(m,1H),6.91(s,1H),6.81-
6.84(m,1H),5.96(s,2H),4.22(t,2H),3.91(t,2H),3.63(t,4H),2.76(t,2H),2.59(t,2H),
2.45-2.50(m,4H).
45分钟内使用3至7％甲醇的二氯甲烷溶液进行梯度洗脱，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸(2-吗啉代)乙酯，化合物162(34.8mg，产率55％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.76(s,1H),8.07(d,1H),
7.44(s,1H),7.25-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.02-7.05(m,1H),6.91(s,1H),6.81-
6.84(m,1H),5.96(s,2H),4.22(t,2H),3.91(t,2H),3.63(t,4H),2.76(t,2H),2.59(t,2H),
2.45-2.50(m,4H).
[1210] 化合物163
[1211]
[1212] 向3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸(中间体-22，52.1mg，0.122mmol)的二乙醚(4mL)和甲醇(1mL)混合溶液中加入2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷(183μL，0.367mmol)的乙醚溶液。30分钟后，将反应混合物浓缩，然后通过硅胶色谱法，在45分钟内使用1至8％甲醇/二氯甲烷溶液梯度洗脱，进行纯化，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸甲酯，化合物163(27.1mg，产率50％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.76(s,
1H),8.06(d,1H),7.43(s,1H),7.25-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.02-7.05(m,1H),
6.90(s,1H),6.80-6.83(m,1H),5.96(s,2H),3.89(t,2H),3.66(s,3H),2.74(t,2H).[1213] 化合物164
1H),8.06(d,1H),7.43(s,1H),7.25-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.02-7.05(m,1H),
6.90(s,1H),6.80-6.83(m,1H),5.96(s,2H),3.89(t,2H),3.66(s,3H),2.74(t,2H).[1213] 化合物164
[1214]
[1215] 向3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸(中间体-22，68.6mg，0.161mmol)的二氯甲烷(4mL)和乙腈(2mL)混合溶液在0℃加入2M的草酰氯(0.201mL，0.402mmol))。加入三滴N，N-二甲基甲酰胺，将所得反应混合物在0℃下搅拌10分钟，然后升温至室温。30分钟后，加入另外的草酰氯溶液(0.8mL)，然后将反应混合物搅拌15分钟，然后浓缩至干，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酰氯(72mg，0.162mmol，产率101％)，为蜡状灰白色固体。
[1216] 向3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酰氯(36mg，0.081mmol)的二氯甲烷(7.5mL)溶液中加入丙-2-醇(0.616ml，8.09mmol)。将反应混合物搅拌15分钟，然后真空除去溶剂，得到粗产物。通过硅胶色谱法，在45分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，进行纯化，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸异丙酯，化合物164(11mg，产率29％)，为灰白色蜡状固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.46(s,1H),8.15(s,1H),7.35(s,1H),7.18-7.22(m,1H),7.01-7.05(m,1H),6.96-6.99(m,1H),6.83-6.86(m,1H),6.60(s,1H),5.98(s,2H),5.74(br.s,1H),5.08(m,1H),3.93-3.96(m,2H),2.70(t,2H),1.27(d,
6H).
6H).
[1217] 化合物165
[1218]
[1219] 向3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸(中间体-22，68.6mg，0.161mmol)的二氯甲烷(4mL)和乙腈(2mL)混合溶液中在0℃加入2M的草酰氯(0.201mL，0.402mmol))。加入三滴N，N-二甲基甲酰胺，将所得反应混合物在0℃下搅拌10分钟，然后升温至室温。30分钟后，加入另外的草酰氯溶液(0.8mL)，然后将反应混合物搅拌15分钟，然后浓缩至干，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酰氯(72mg，0.162mmol，产率101％)，为蜡状灰白色固体。
[1220] 向3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酰氯(36mg，0.081mmol)的二氯甲烷(7.5mL)溶液中加入无水乙醇(0.473mL，8.09mmol)。将反应混合物搅拌15分钟，然后真空除去溶剂，得到粗产物。通过硅胶色谱法，在45分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，进行纯化，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丙酸乙酯，化合物165(8.0mg，产率22％)，为灰白色蜡状固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.46(s,1H),8.16(s,1H),
7.39(br.s,1H),7.18-7.22(m,1H),7.01-7.05(m,1H),6.96-6.99(m,1H),6.84-6.87(m,
1H),6.61(s,1H),5.98(s,2H),4.20(q,2H),3.95-3.98(m,2H),2.74(t,2H),1.29(t,3H),[1NH质子未观察到].
7.39(br.s,1H),7.18-7.22(m,1H),7.01-7.05(m,1H),6.96-6.99(m,1H),6.84-6.87(m,
1H),6.61(s,1H),5.98(s,2H),4.20(q,2H),3.95-3.98(m,2H),2.74(t,2H),1.29(t,3H),[1NH质子未观察到].
[1221] 化合物166
[1222]
[1223] 将中间体-1A(294mg，0.787mmol)和N-甲基丙-2-烯-1-胺(0.187mL，1.98mmol)的二恶烷(2mL)和水(1mL)混合溶液在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至室温，然后用1N盐酸溶液和水稀释，沉淀物形成。将该固体过滤并真空干燥，得到N-烯丙基-5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-N-甲基嘧啶-4-胺，化合物166(288mg，产率90％)，为浅黄色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.45(d,1H),8.16(d,1H),7.29(s,
1H),7.17-7.21(m,1H),7.00-7.05(m,1H),6.95-6.98(m,1H),6.83-6.87(m,1H),6.59(d,
1H),5.97(s,2H),5.87-5.96(m,1H),5.25-5.28(m,1H),5.23(s,1H),4.23(d,2H),3.28(d,
3H).
1H),7.17-7.21(m,1H),7.00-7.05(m,1H),6.95-6.98(m,1H),6.83-6.87(m,1H),6.59(d,
1H),5.97(s,2H),5.87-5.96(m,1H),5.25-5.28(m,1H),5.23(s,1H),4.23(d,2H),3.28(d,
3H).
[1224] 化合物167
[1225]
[1226] 将3-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-1A，195mg，0.521mmol)和反式-吡咯烷-3,4-二醇(113mg，1.10mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)混合溶液在90℃加热2小时。然后将反应混合物冷却至室温，并用1N盐酸和水稀释，形成白色沉淀，将其过滤并干燥。将粗产物在二氯甲烷/异丙醇(5:1)中溶解并用水(2×
30mL)，饱和氯化钠溶液(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到反式-1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-3,4-二醇，化合物
167(226mg，产率98％)，为灰白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.08(d,1H),8.22(d,1H),7.52(s,1H),7.31-7.35(m,1H),7.24(d,1H),7.20-7.23(m,1H),7.09-7.12(m,1H),
6.83-6.86(m,1H),5.90(s,2H),5.21(d,2H),4.05(br.s,2H),3.79-3.83(br.m,2H),3.68(d,2H).
30mL)，饱和氯化钠溶液(2×30mL)洗涤，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到反式-1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-3,4-二醇，化合物
167(226mg，产率98％)，为灰白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.08(d,1H),8.22(d,1H),7.52(s,1H),7.31-7.35(m,1H),7.24(d,1H),7.20-7.23(m,1H),7.09-7.12(m,1H),
6.83-6.86(m,1H),5.90(s,2H),5.21(d,2H),4.05(br.s,2H),3.79-3.83(br.m,2H),3.68(d,2H).
[1227] 化合物168
[1228]
[1229] 将中间体-1A(122mg，0.326mmol)，4-(1-羟基-2-甲基氨基-乙基)-苯-1,2-二醇(62.1mg，0.339mmol)和三乙胺(0.182mL，1.31mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)混合溶液在90℃加热2小时。然后将反应混合物冷却至室温，在1N盐酸水溶液和水中稀释，过滤并干燥，得到粗产物，为棕褐色固体。该物质通过硅胶色谱法纯化，在60分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷溶液进行梯度洗脱，得到4-(2-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)(甲基)氨基)-1-羟乙基)苯-1,2-二醇，化合物168(24.4mg，产率
1
14％)，为褐色固体。H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.75(d,1H),8.07(d,1H),7.38(s,1H),
7.24-7.28(m,1H),7.06-7.10(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.90(d,1H),6.87-6.89(m,1H),
6.84-6.86(m,1H),6.73-6.75(m,1H),6.72(d,1H),5.96(s,2H),4.89-4.93(m,1H),3.82-
3.93(m,2H),3.30(d,3H).
1
14％)，为褐色固体。H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.75(d,1H),8.07(d,1H),7.38(s,1H),
7.24-7.28(m,1H),7.06-7.10(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.90(d,1H),6.87-6.89(m,1H),
6.84-6.86(m,1H),6.73-6.75(m,1H),6.72(d,1H),5.96(s,2H),4.89-4.93(m,1H),3.82-
3.93(m,2H),3.30(d,3H).
[1230] 化合物169
[1231]
[1232] 将中间体-1A(115mg，0.308mmol)，顺式-吡咯烷-3,4-二醇(41.2mg，0.400mmol)和三乙胺(0.214mL，1.538mmol)的二恶烷(1mL)和水(0.5mL)混合溶液在90℃加热2小时。然后将反应混合物冷却至室温，用1N盐酸水溶液和水稀释，过滤并真空干燥，得到粗产物顺式-1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)吡咯烷-3,4-二醇，化合物169(104.6mg，0.219mmol，产率71.0％)，为灰白色固体。不需要进一步纯化。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm):9.08(d,1H),8.21(d,1H),7.51(s,1H),7.30-7.35(m,1H),
7.24(d,1H),7.20-7.23(m,1H),7.09-7.12(m,1H),6.82-6.86(m,1H),5.90(s,2H),5.01(d,
2H),4.12-4.15(m,2H),3.80-3.84(m,2H),3.55-3.59(m,2H).
7.24(d,1H),7.20-7.23(m,1H),7.09-7.12(m,1H),6.82-6.86(m,1H),5.90(s,2H),5.01(d,
2H),4.12-4.15(m,2H),3.80-3.84(m,2H),3.55-3.59(m,2H).
[1233] 化合物170
[1234]
[1235] 将中间体-1A(65.5mg，0.175mmol)和2-(哌嗪-1-基)乙醇(0.0860mL，0.701mmol)的二恶烷(2mL)和水(1mL)混合溶液在85℃加热12小时。然后将反应混合物冷却至室温，用1N盐酸水溶液和水稀释，过滤并真空干燥，得到2-(4-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-
3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙醇，化合物170(40.8mg，产率50％)，为白色固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.74(d,1H),8.15(d,1H),7.42(s,1H),
7.24-7.28(m,1H),7.06-7.10(m,1H),7.00-7.03(m,1H),6.89(d,1H),6.79-6.82(m,1H),
5.94(s,2H),3.96(t,4H),3.72(t,2H),2.67(t,4H),2.59(t,2H).
3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)乙醇，化合物170(40.8mg，产率50％)，为白色固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.74(d,1H),8.15(d,1H),7.42(s,1H),
7.24-7.28(m,1H),7.06-7.10(m,1H),7.00-7.03(m,1H),6.89(d,1H),6.79-6.82(m,1H),
5.94(s,2H),3.96(t,4H),3.72(t,2H),2.67(t,4H),2.59(t,2H).
[1236] 化合物171
[1237]
[1238] 将中间体-1A(70.0mg，0.187mmol)和4-哌啶甲酸甲酯(0.0760mL，0.562mmol)的二恶烷(2mL)和水(1mL)混合溶液在90℃下加热12小时。将反应混合物冷却至室温，然后用水稀释，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱法，在60分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，进行纯化，得到1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基))-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)哌啶-4-甲酸乙酯，化合物171(73.8mg，产率82％)，为透明粘稠油状物，其在静置后固化成白色胶状物。1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.75(d,1H),8.14(d,1H),7.42(s,1H),7.24-7.29(m,1H),7.08-7.10(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.90(d,1H),6.80-6.83(m,1H),5.95(s,2H),4.58-4.61(m,2H),
3.70(s,3H),3.27-3.31(m,2H),2.72-2.78(m,1H),2.03-2.06(m,2H)1.74-1.82(m,2H).[1239] 化合物172
3.70(s,3H),3.27-3.31(m,2H),2.72-2.78(m,1H),2.03-2.06(m,2H)1.74-1.82(m,2H).[1239] 化合物172
[1240]
[1241] 向3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)(甲基)氨基)丙酸(中间体-23，25.6mg，0.0580mmol，该中间体描述于专利申请公开WO2014144100中)的二乙醚(0.75mL)和甲醇(0.25mL)溶液中加入2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷(0.035mL，0.070mmol)的乙醚溶液。1小时后，反应通过硅胶色谱法纯化，在60分钟内使用
1至8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)(甲基)氨基)丙酸甲酯，化合物172(7.2mg，产率27％)，为透明油状物，其在静置后固化为白色蜡状固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.45(d,1H),
8.18(d,1H),7.30(s,1H),7.18-7.21(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.95-6.99(m,1H),6.85-
6.89(m,1H),6.59(d,1H),5.96(s,2H),4.00(t,2H),3.69(s,3H),3.35(d,3H),2.76(t,2H).[1242] 化合物173
1至8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)(甲基)氨基)丙酸甲酯，化合物172(7.2mg，产率27％)，为透明油状物，其在静置后固化为白色蜡状固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.45(d,1H),
8.18(d,1H),7.30(s,1H),7.18-7.21(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.95-6.99(m,1H),6.85-
6.89(m,1H),6.59(d,1H),5.96(s,2H),4.00(t,2H),3.69(s,3H),3.35(d,3H),2.76(t,2H).[1242] 化合物173
[1243]
[1244] 向1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)哌啶-4-醇(中间体-24，15mg，0.034mmol，该中间体描述于专利申请公开WO2014144100中)的二氯甲烷溶液(1mL)中加入N-α-t-Boc-甘氨酸(7.8mg，0.044mmol)，然后加入N，N-二甲基氨基吡啶(2.1mg，0.017mmol)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(8.5mg，0.044mmol)。将反应混合物在室温下搅拌72小时，然后通过硅胶色谱法，在60分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷梯度洗脱，纯化反应混合物，得到1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)哌啶-4-基2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸酯(21.0mg，产率103％)为白色固体。
[1245] 向1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)哌啶-4-基2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸酯(21.0mg，0.035mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入三氟乙酸(0.30mL，3.9mmol)。将反应混合物在60℃下加热1小时，然后将反应混合物冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液中和，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到1-(5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)哌啶-4-基2-氨基乙酸酯，化合物173(12.7mg，产率73％)，为粉红色固体。
[1246] 1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.75(d,1H),8.16(d,1H),7.42(s,1H),7.25-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.90(d,1H),6.80-6.83(m,1H),5.95(s,2H),5.12-5.16(m,1H),4.18-4.24(m,2H),3.76-3.82(m,2H),3.43(s,2H),2.05-2.10(m,2H)
1.77-1.84(m,2H).
1.77-1.84(m,2H).
[1247] 化合物174
[1248]
[1249] 向4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丁酸(中间体-24，8.6mg，0.020mmol，该中间体描述于专利申请公开WO2014144100中)的二乙醚(0.50mL)和甲醇(0.167mL)混合溶液中加入2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷(9.8μL，0.020mmol)的二乙醚溶液。1小时后，将反应物浓缩，然后使用反相HPLC纯化，在25分钟内使用5至95％乙腈/水(掺有0.1％三氟乙酸)的梯度洗脱纯化，得到4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丁酸甲酯，化合物174(2.8mg，产率
32％)，为透明无色油状物。
32％)，为透明无色油状物。
[1250] 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.52(d,1H),8.38(d,1H),7.48(s,1H),7.23-7.27(m,1H),7.14-7.18(m,1H),7.04-7.07(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.66(d,1H),5.93(s,2H),3.81(m,2H),3.72(s,3H),2.54(t,2H),2.07-2.12(m,2H),[1N-H未观察到].
[1251] 化合物175
[1252]
[1253] 向5-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)戊酸(37.2mg，0.0820mmol，该中间体先前在专利申请公开WO2014144100中描述)的二乙醚(0.75mL)和甲醇(0.250mL)混合溶液中加入2M三甲基甲硅烷基重氮甲烷的二乙醚溶液(0.045mL，0.090mmol)。1小时后，反应通过硅胶色谱法直接纯化，在60分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷溶液进行梯度洗脱，得到5-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)戊酸甲酯，化合物175(12.8mg，产率33％)，为透明无色蜡状胶。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm):8.45(d,1H),8.14(d,1H),7.34(s,1H),7.17-7.22(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.95-6.98(m,1H),6.84-6.87(m,1H),6.65(d,1H),5.98(s,2H),
5.17(m,1H),3.68(s,3H),3.62-3.67(m,2H),2.43(t,2H),1.74-1.81(m,4H).
5.17(m,1H),3.68(s,3H),3.62-3.67(m,2H),2.43(t,2H),1.74-1.81(m,4H).
[1254] 化合物176
[1255]
[1256] 将中间体-1A(124mg，0.332mmol)和4-氨基丁-1-醇(0.122mL，1.33mmol)的二恶烷(2mL)和水(1mL)混合溶液在70℃下加热2小时。将反应混合物用水稀释，形成白色沉淀。将该产物过滤并真空干燥，得到4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丁-1-醇，化合物176(98.8mg，产率70％)，为白色固体。不需要纯化。
[1257] 1H NMR(500MHz,CD3OD)δ(ppm):8.74(s,1H),8.01(d,1H),7.40(s,1H),7.24-7.28(m,1H),7.06-7.10(m,1H),7.01-7.04(m,1H),6.89(m,1H),6.81-6.84(m,1H),5.95(s,2H),3.61-3.66(m,4H),1.74-1.80(m,2H)1.62-1.68(m,2H).
[1258] 化合物177
[1259]
[1260] 向3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)-嘧啶-4-基)氨基)丙-1-醇(中间体-27，98.5mg，0.239mmol，该中间体描述于专利申请公开WO2014144100中)，N-α-t-Boc-甘氨酸(50.2mg，0.287mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(8.8mg，0.072mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(54.9mg，0.287mmol)。将反应物在室温下搅拌16小时，然后通过硅胶色谱法直接纯化反应混合物，在
60分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸丁酯中间体(98.8mg)。
60分钟内使用1至8％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱，得到4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸丁酯中间体(98.8mg)。
[1261] 向4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸丁酯二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(0.50mL，6.5mmol)。将反应混合物在60℃加热30分钟，然后脱保护完成。然后通过加入饱和碳酸钠溶液中和反应混合物，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并真空浓缩，得到3-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)2-氨基乙酸丙酯，化合物177(68.6mg，产率61％)，为蜡状白色固体。不需要纯化。1H NMR(500MHz,CD3OD):δ(ppm)8.75(s,1H),8.04(d,1H),7.41(s,1H),7.24-7.29(m,1H),7.07-7.11(m,
1H),7.02-7.05(m,1H),6.90(m,1H),6.82-6.85(m,1H),5.95(s,2H),4.28(t,2H),3.72(t,
2H),3.36(s,2H),2.02-2.09(m,2H).
1H),7.02-7.05(m,1H),6.90(m,1H),6.82-6.85(m,1H),5.95(s,2H),4.28(t,2H),3.72(t,
2H),3.36(s,2H),2.02-2.09(m,2H).
[1262] 化合物178
[1263]
[1264] 向4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)丁-1-醇(化合物176，69.1mg，0.162mmol)，N-α-t-Boc-甘氨酸(34.1mg，0.194mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(5.9mg，0.049mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(37.3mg，0.194mmol)。将反应在室温下搅拌16小时，然后通过硅胶色谱法，在60分钟内使用1至8％甲醇/二氯甲烷溶液梯度洗脱，直接纯化反应混合物，得到4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸丁酯(64.9mg)。
[1265] 向4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸丁酯(64.9mg)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(0.50mL，6.5mmol)。将反应混合物在60℃加热30分钟，然后脱保护完成。将反应混合物冷却至室温，通过加入饱和碳酸钠溶液中和，用二氯甲烷(3×30mL)萃取，干燥(硫酸钠)，过滤并浓缩，得到4-((5-氟-2-(1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-基)氨基)2-氨基乙酸丁酯，化合物178(35.4mg，产率45％)，为透明胶状物。不需要进一步纯化。
[1266] 化合物179
[1267]
[1268] 通过1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，0.02，0.057mmol)，4-异丙基哌啶-4-甲酸(0.054g，0.315mmol)和作为碱的三乙胺(10当量)在二恶烷(0.5mL)中反应，得到化合物179。反应在100℃下进行15小时后完成。在水处理后，使用RP-HPLC纯化产物，得到产物，为棕褐色固体(0.012g，39％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm12.62(br.s.,1H),8.29(d,1H),7.33(q,1H)7.75(s,1H),7.18-7.27(m,1H),7.11(t,1H),6.81(t,1H),5.82(s,2H),4.53(d,2H),3.02(t,2H),2.58(s,3H),2.12(d,2H),1.72(dt,1H),1.41-1.55(m,2H),0.87(d,6H).
[1269] 化合物180
[1270]
[1271] 通过1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，0.02，0.057mmol)，3-氨基丙烷-1,2-二醇(0.052g，0.57mmol)和作为碱的三乙胺(10当量)在二恶烷中反应，得到目标产物(0.5mL)。反应在100℃下进行15小时后完成。在水处理后，使用RP-HPLC纯化产物，然后快速色谱用0-30％7:1ACN:MeOH的DCM溶液洗脱，得到白色
1
固体产物(0.014g，54％)。H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.08(d,1H),7.27(q,1H)7.68(s,
1H),7.07-7.14(m,1H),7.04(t,1H),6.79(t,1H),5.90(s,2H),2.56(s,3H)3.87(quintet,
1H),3.75-3.81(m,1H),3.61-3.68(m,1H),3.58(d,2H),-NH和-OH质子与溶剂交换.
1
固体产物(0.014g，54％)。H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.08(d,1H),7.27(q,1H)7.68(s,
1H),7.07-7.14(m,1H),7.04(t,1H),6.79(t,1H),5.90(s,2H),2.56(s,3H)3.87(quintet,
1H),3.75-3.81(m,1H),3.61-3.68(m,1H),3.58(d,2H),-NH和-OH质子与溶剂交换.
[1272] 化合物181
[1273]
[1274] 通过1-(3-(4-氯-5-氟嘧啶-2-基)-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-5-基)乙酮(中间体-1B，0.02，0.057mmol)，4-甲基哌啶-4-甲酸(0.045g，0.315mmol)和作为碱的三乙胺(10当量)在二恶烷(0.5mL)中反应得到目标产物。反应在100℃下进行15小时后完成。水处理后，使用RP-HPLC纯化产物，得到棕褐色固体产物(0.025g，86％)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm；1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.34-12.73(br.s,1H),8.30(d,1H),7.74(s,1H),
7.28-7.39(m,1H),7.17-7.27(m,1H),7.06-7.15(m,1H),6.81(t,1H),5.82(s,2H),4.20(d,
2H),3.36(t,2H),2.58(s,3H),2.07(d,2H),1.50(t,2H),1.19(s,3H).
7.28-7.39(m,1H),7.17-7.27(m,1H),7.06-7.15(m,1H),6.81(t,1H),5.82(s,2H),4.20(d,
2H),3.36(t,2H),2.58(s,3H),2.07(d,2H),1.50(t,2H),1.19(s,3H).
[1275] 中间体-30
[1276] 中间体由两步制备：
[1277]
[1278] 步骤1：在室温下，将市售的3-氟-2-甲基苯酚(2.0g，15.9mmol)和叔丁基氯二甲基硅烷(3.6g，23.8mmol)在二氯甲烷(20mL)中反应。加入三乙胺(5.5mL，39.6mmol)和4-二甲基氨基甲基吡啶(0.1g，0.8mmol)，并在室温下继续搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释，用水(3×30mL)和盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩，得到产物中间体-29，为无色油状物(3.85g，产率101％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ6.77(q,1H),6.43(t,1H),6.36(d,1H),1.90(d,3H),0.80(s,9H),0.00(s,6H)ppm.
[1279] 步骤2：在室温下，将中间体-29(3.6g，15.0mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(2.8g，15.7mmol)在四氯化碳(20mL)中混合。加入AIBN(0.2g，1.5mmol)，将溶液在80℃加热2小时。
将混合物冷却至室温并过滤。滤饼用CCl4洗涤，合并的滤液通过旋转蒸发浓缩。残余物通过SiO2色谱纯化，使用己烷/乙酸乙酯梯度洗脱，得到中间体-30(4.9g，产率102％)，为无色油状物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ6.96(q,1H),6.50(t,1H),6.46(d,1H),4.38(s,2H),0.88(s,
9H),0.12(s,6H)ppm.
将混合物冷却至室温并过滤。滤饼用CCl4洗涤，合并的滤液通过旋转蒸发浓缩。残余物通过SiO2色谱纯化，使用己烷/乙酸乙酯梯度洗脱，得到中间体-30(4.9g，产率102％)，为无色油状物。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ6.96(q,1H),6.50(t,1H),6.46(d,1H),4.38(s,2H),0.88(s,
9H),0.12(s,6H)ppm.
[1280] 中间体-31和中间体-32
[1281] 上述化合物从通用的中间体-17制备：
[1282]
[1283] 在室温下，将3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(中间体-17，50mg，0.19mmol)溶于二甲氧基乙烷(3mL)。依次加入叔丁醇钾的叔丁醇溶液(1.0M，
0.38mL，0.38mmol)和中间体-30(92mg，0.29mmol)，将混合物在60℃下反应1小时。将冷却的溶液用乙酸乙酯(80mL)稀释，用水(2×10mL)，盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩。用己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂在SiO2上进行色谱分离，得到两种浓稠浆状产品。中间体-31(21mg，产率22％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.38(d,1H),8.35(d,1H),7.53(s,
1H),7.14(q,1H),6.6-6.7(m,3H),6.09(s,2H),4.13(s,3H),0.93(s,9H),0.23(s,6H)ppm.中间体-32(24mg,产率25％).1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.47(d,1H),8.35(d,1H),7.28(s,
1H),7.10(q,1H),6.55-6.65(m,3H),5.91(s,2H),4.14(s,3H),0.95(s,9H),0.26(s,6H)ppm.
0.38mL，0.38mmol)和中间体-30(92mg，0.29mmol)，将混合物在60℃下反应1小时。将冷却的溶液用乙酸乙酯(80mL)稀释，用水(2×10mL)，盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩。用己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂在SiO2上进行色谱分离，得到两种浓稠浆状产品。中间体-31(21mg，产率22％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.38(d,1H),8.35(d,1H),7.53(s,
1H),7.14(q,1H),6.6-6.7(m,3H),6.09(s,2H),4.13(s,3H),0.93(s,9H),0.23(s,6H)ppm.中间体-32(24mg,产率25％).1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.47(d,1H),8.35(d,1H),7.28(s,
1H),7.10(q,1H),6.55-6.65(m,3H),5.91(s,2H),4.14(s,3H),0.95(s,9H),0.26(s,6H)ppm.
[1284] 化合物182
[1285]
[1286] 向中间体-32(21mg，0.04mmol)的甲醇(1mL)溶液中加入浓盐酸水溶液(0.3mL，3.0mmol)，将混合物在密封的小瓶中于60℃加热过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂，得到产物，为白色固体(15mg，收率96％)。LCMS(m/e)372(M+H).
[1287] 化合物183
[1288] 该化合物由两步制备：
[1289]
[1290] 步骤1：将化合物182(15mg，0.04mmol)与磷酰氯(0.50mL，5.4mmol)的混合物在60℃下反应2小时，然后在真空下除去溶剂。通过SiO2色谱法，以己烷/乙酸乙酯梯度洗脱，获得纯中间体-33(2mg，收率16％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ10.31(br s,1H),8.66(s,1H),8.60(d,1H),7.32(s,1H),7.19(q,1H),6.85(d,1H),6.70(d,1H),6.62(t,1H),
5.97(s,2H)ppm.
5.97(s,2H)ppm.
[1291] 步骤2：将中间体-33(2mg，0.005mmol和2-(氨甲基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(10mg，0.05mmol)溶于二甲基亚砜(1mL)中，在密封的小瓶中125℃加热过夜，反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水(3×5mL)，盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并旋转蒸发，得到残留物，用己烷/乙酸乙酯作为洗脱液，经SiO2色谱纯化，得到化合物183，为白色固体(2mg，产率64％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ9.59(br s,1H),8.27(s,1H),8.24(br s,1H),7.18(s,1H),
7.17(q,1H),6.83(s,1H),6.81(s,1H),6.68(s,1H),6.61(t,1H),5.93(s,2H),5.58(br t,
1H),4.18(d,2H)ppm.
7.17(q,1H),6.83(s,1H),6.81(s,1H),6.68(s,1H),6.61(t,1H),5.93(s,2H),5.58(br t,
1H),4.18(d,2H)ppm.
[1292] 中间体-34
[1293]
[1294] 使用合成中间体-30所用的相同条件，以3-氟-4-甲基苯酚为原料制备中间体-34(无色油)，总收率为44％。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ7.25(t,1H),6.63(dd,1H),6.58(dd,1H),4.53(s,2H),1.00(s,9H),0.24(s,6H)ppm.
[1295] 中间体-36
[1296] 该中间体从中间体-17经两步制备：
[1297]
[1298] 步骤1：在室温下，将3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(90mg，0.34mmol)溶于二甲氧基乙烷(3mL)中。依次加入叔丁醇钾的叔丁醇溶液(1.0M，0.69mL，0.69mmol)和中间体-35(165mg，0.52mmol)，将混合物在60℃下加热1小时。将冷却的溶液用乙酸乙酯(80mL)稀释，用水(2×10mL)，盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩。用己烷/乙酸乙酯作为洗脱剂的SiO2色谱法纯化得到无色玻璃状的产物(38mg，产率22％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ8.47(s,1H),8.40(d,1H),7.33(s,1H),6.80(t,
1H),6.52(dd,1H),6.46(dd,1H),5.88(s,2H),4.18(s,3H),0.94(s,9H),0.15(s,6H)ppm.[1299] 步骤2：向中间体-35(60mg，0.12mmol)的甲醇(1mL)溶液中加入浓盐酸水溶液(0.3mL，3.0mmol)，将混合物在密封的小瓶中于60℃加热过夜。在真空下除去溶剂，将去甲基化残余物(44mg，产率99％)直接进行下一步反应。LCMS(m/e)370(M-H)。将残余物(44mg，
0.12mmol)在磷酰氯(1.0mL，10.7mmol)中在50℃加热5小时，然后在真空下除去溶剂。残余物用乙醚/己烷摩擦并重新干燥，得到粗的中间体-36，为白色固体(14mg，产率20％)。在没有表征的情况下进行到下一个反应。
1H),6.52(dd,1H),6.46(dd,1H),5.88(s,2H),4.18(s,3H),0.94(s,9H),0.15(s,6H)ppm.[1299] 步骤2：向中间体-35(60mg，0.12mmol)的甲醇(1mL)溶液中加入浓盐酸水溶液(0.3mL，3.0mmol)，将混合物在密封的小瓶中于60℃加热过夜。在真空下除去溶剂，将去甲基化残余物(44mg，产率99％)直接进行下一步反应。LCMS(m/e)370(M-H)。将残余物(44mg，
0.12mmol)在磷酰氯(1.0mL，10.7mmol)中在50℃加热5小时，然后在真空下除去溶剂。残余物用乙醚/己烷摩擦并重新干燥，得到粗的中间体-36，为白色固体(14mg，产率20％)。在没有表征的情况下进行到下一个反应。
[1300] 化合物184
[1301]
[1302] 将中间体-36(14mg，0.036mmol)和2-(氨基甲基)-1,1,1,3,3,3-六氟丙-2-醇(28mg，0.14mmol)溶于二甲基亚砜(1mL)中，将溶液在125℃下加热过夜，反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，用水(3×5mL)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并旋转蒸发，得到残余物，通过制备型反相HPLC纯化，使用梯度的水/乙腈(0.1％三氟乙酸)作为洗脱剂，得到产物，为1
白色固体(2mg，产率8％)。H-NMR(500MHz,d6-丙酮)δ9.00(br s,1H),8.93(s,1H),8.33(d,
1H),7.80(br t,1H),7.40(s,1H),7.21(t,1H),7.05(s,1H),6.59(dd,1H),6.55(dd,1H),
5.83(s,2H),4.18(d,2H)ppm.
白色固体(2mg，产率8％)。H-NMR(500MHz,d6-丙酮)δ9.00(br s,1H),8.93(s,1H),8.33(d,
1H),7.80(br t,1H),7.40(s,1H),7.21(t,1H),7.05(s,1H),6.59(dd,1H),6.55(dd,1H),
5.83(s,2H),4.18(d,2H)ppm.
[1303] 化合物207
[1304] 目标化合物由两步制备：
[1305] 步骤1：N'-(氰基甲基)-1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-碳酰肼(中间体-28)的合成
[1306]
[1307] 向1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒盐酸盐(1当量，该中间体在先前的专利申请公开WO2013/101830中描述)的DMF悬浮液中加入水合肼(1.5当量)，反应物在23℃下搅拌1个小时。随后加入2-溴乙腈(4当量)和三乙胺(5当量)，并在23℃下搅拌反应2小时。溶液用1:1乙酸乙酯和水的混合物稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取(2次)。合并有机层，用水(3次)和盐水洗涤。将有机相用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱(利用DCM/甲醇溶液)纯化所得残余物，得到期望的中间体，N'-(氰基甲基)-1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-碳酰肼(397mg，产率75％)，为黄色泡沫。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.41-8.47(m,1H),7.17-7.28(m,1H),6.92-7.11(m,3H),6.75-6.87(m,1H),6.50-6.63(m,1H),5.86(s,2H),5.02(s,2H),3.90-4.06(m,3H).
[1308] 步骤2：化合物207的合成
[1309]
[1310] 将N'-(氰基甲基)-1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-基)碳酰肼(1当量，中间体-28)的乙醇溶液在70℃加热40分钟。将反应混合物倒入乙酸乙酯和饱和氯化铵1:1的混合物中。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取2次。将有机物合并，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过反相HPLC纯化所得残余物，得到所需化合物(9mg，产率7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.82(d,1H),8.31(s,1H),7.62(s,1H),7.23-7.35(m,1H),
6.88-7.16(m,4H),5.96-6.08(m,2H).
6.88-7.16(m,4H),5.96-6.08(m,2H).
[1311] 化合物198
[1312]
[1313] 将乙醇钠(7.8当量)和化合物207(1当量)在甲醇中制成悬浮液，在150℃下微波处理30分钟。真空除去溶剂，将粗残余物用乙酸乙酯和饱和氯化铵水溶液稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取2次，用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过反相HPLC(5-75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸，20分钟梯度洗脱)纯化，得到所需化合物，化合物198(6mg，产率23％)，为褐色固体。1H-NMR(500MHz,MeOD)δ ppm 8.36(s,1H),7.89(s,1H),7.36-7.32(m,1H),7.16-7.09(m,2H),7.00-6.97(s,1H),6.01(s,2H),2.61(s,3H).
[1314] 化合物199
[1315]
[1316] 在0℃下，将中间体-20(1当量，该化合物的合成描述于专利申请公开WO2014/144100)，4-二甲基氨基吡啶(0.1当量)，和2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酸(1.5当量)在二氯甲烷中制成悬浮液，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.9当量)。10分钟后，将溶液升温至23℃，然后搅拌15小时。将反应混合物用二氯甲烷稀释，并用1N盐酸水溶液洗涤。将有机物用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。将残余物加入二氯甲烷中并冷却至0℃。加入三氟乙酸，所得溶液在2小时内升温至23℃。然后真空除去溶剂，通过反相HPLC(5-
75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸20分钟梯度洗脱)纯化，得到化合物199(43mg，产率54％)，为白色固体(以TFA盐的形式)。1H-NMR(500MHz,MeOD)δppm8.84(s,1H),8.31(d,1H),7.66(s,
1H),7.34-7.30(m,1H),7.14-7.06(m,2H),6.98-6.95(m,2H),6.03(s,2H),4.58(t,2H),
4.08(t,2H),3.90(s,2H).
75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸20分钟梯度洗脱)纯化，得到化合物199(43mg，产率54％)，为白色固体(以TFA盐的形式)。1H-NMR(500MHz,MeOD)δppm8.84(s,1H),8.31(d,1H),7.66(s,
1H),7.34-7.30(m,1H),7.14-7.06(m,2H),6.98-6.95(m,2H),6.03(s,2H),4.58(t,2H),
4.08(t,2H),3.90(s,2H).
[1317] 化合物I-200
[1318]
[1319] 在0℃,向中间体-20(1当量，该化合物在先前的专利申请公开WO2014/144100中描述)，2-(哌啶-1-基)乙酸(1.5当量)和4-二甲基氨基吡啶(0.1当量)的二氯甲烷(13mL)溶液中,一次性加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.3当量)。将溶液立即升温至23℃并搅拌15小时。真空除去溶剂，通过反相HPLC(5-75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸20分钟梯度洗脱)纯化，得到化合物I-200(55mg，产率69％)，为白色固体(以TFA盐的形式获得)。1H-NMR(500MHz,MeOD)δ ppm 8.85(s,1H),8.30(d,1H),7.64(s,1H),7.35-7.31(m,1H),7.15-7.07(m,2H),7.00-6.98(m,2H),6.03(s,2H),4.59(t,2H),4.14(s,2H),4.09(t,
2H),4.58(br s,2H),3.02(br s,2H),1.95-1.78(m,5H),1.52(br s,1H).
2H),4.58(br s,2H),3.02(br s,2H),1.95-1.78(m,5H),1.52(br s,1H).
[1320] 化合物I-201
[1321]
[1322] 在150℃，将中间体-37(1当量，该中间体先前在专利申请公开WO2014/144100中描述)和乙醇钠(5当量)在甲醇中制成悬浮液，加入一滴水并微波处理30分钟。真空除去溶剂，将残余物用饱和氯化铵水溶液和乙酸乙酯(1:1比例)稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取2次。将有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过反相HPLC(5-75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸20分钟梯度洗脱)纯化，得到化合物201(15mg，产率20％)，为黄色固体。
[1323] 1H-NMR(500MHz,MeOD)δ ppm 7.84(s,1H),7.83(s,1H),7.35-7.31(m,1H),7.15-7.08(m,1H),6.95-6.92(m,1H),5.98(s,2H),2.60(s,3H).
[1324] 化合物202
[1325]
[1326] 在0℃，向中间体-20(1当量，在先前的专利申请WO2014/144100中描述)，4-二甲基氨基吡啶(0.1当量)和1-(叔丁氧基羰基)哌啶-2-甲酸(1.5当量)的二氯甲烷悬浮液中加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.8当量)。将溶液立即升温至23℃并再搅拌24小时。将溶液倒入二氯甲烷和1N盐酸水溶液(2:1比例)中。分离各层，有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。将残余物加入二氯甲烷中，冷却至0℃，加入三氟乙酸(1/3体积的DCM)。将溶液在0℃下搅拌1小时，之后真空除去溶剂，通过反相HPLC纯化(5-75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸20分钟梯度洗脱)，得到所需化合物，化合物202(76mg，收率97％)，为白色固体(TFA盐形式)。1H-NMR(500MHz,MeOD)δppm 8.86(s,1H),8.35(d,1H),7.68(s,1H),
7.35-7.31(m,1H),7.15-7.07(m,2H),7.02-6.99(m,2H),6.04(s,2H),4.65-4.60(m,1H),
4.58-4.53(m,1H),4.16-4.03(m,3H),3.43-2.99(m,1H),3.04-2.99(m,1H),2.29-2.26(m,
1H),1.87-1.81(m,2H),1.76-1.57(m,3H).
7.35-7.31(m,1H),7.15-7.07(m,2H),7.02-6.99(m,2H),6.04(s,2H),4.65-4.60(m,1H),
4.58-4.53(m,1H),4.16-4.03(m,3H),3.43-2.99(m,1H),3.04-2.99(m,1H),2.29-2.26(m,
1H),1.87-1.81(m,2H),1.76-1.57(m,3H).
[1327] 化合物204
[1328]
[1329] 将乙醇钠(5.2当量)和中间体-38(1当量，在先前的专利申请公开WO2014/144100中描述)在甲醇中制成悬浮液，加入一滴水，150℃微波处理40分钟。真空除去溶剂，将所得残余物加入二氯甲烷和水(1:1比例)中。分离各层，水层用二氯甲烷萃取2次。将有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过反相HPLC纯化(5-75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸，20分1
钟梯度洗脱)，得到所需化合物，化合物204(6mg，产率7％)，为白色膜状物。H-NMR(500MHz,MeOD)δppm 8.28(d,1H),7.78(s,1H),7.32-7.28(m,1H),7.14-7.10(m,1H),7.08-7.05(t,
1H),6.86-6.83(t,1H),5.94(s,2H),4.48(q,2H),2.60(s,3H).
钟梯度洗脱)，得到所需化合物，化合物204(6mg，产率7％)，为白色膜状物。H-NMR(500MHz,MeOD)δppm 8.28(d,1H),7.78(s,1H),7.32-7.28(m,1H),7.14-7.10(m,1H),7.08-7.05(t,
1H),6.86-6.83(t,1H),5.94(s,2H),4.48(q,2H),2.60(s,3H).
[1330] 化合物205
[1331]
[1332] 将N-(3-(二甲基氨基)-2-(三氟甲基)亚烯丙基)-N-甲基甲基铵六氟磷酸盐(2.4当量)，1-(2-氟苄基)-5-(异恶唑-3-基)-1H-吡唑-3-甲脒盐酸盐(1当量，该中间体在先前的专利申请公开WO2013/101830和WO2014/144100中描述)和三乙胺(2.4当量)在乙腈中制成悬浮液，在23℃下搅拌3小时。将反应混合物倒入水和二氯甲烷(1:1比例)中。分离各层，水层用二氯甲烷萃取2次。将有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法纯化(0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)，得到所需化合物，化合物205(55mg，产率91％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 9.08(s,2H),8.51(s,1H),7.55(s,1H),7.25-7.21(m,1H),7.08-7.04(m,1H),7.00(t,1H),6.91-6.88(m,1H),6.64(s,1H),6.06(s,2H).[1333] 化合物206
[1334]
[1335] 将吡啶甲酸(1.46当量)，1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1.3当量)，N，N-二甲基氨基吡啶(0.1当量)和中间体-20(1当量，在前一专利申请公开WO2014/144100中描述)的二氯甲烷溶液在室温下搅拌20小时。在真空中除去溶剂，通过硅胶色谱法(0-10％甲醇的二氯甲烷溶液梯度洗脱)纯化所需化合物，化合物206(59mg，产率93％)，为白色固体。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm 9.29(br s,1H),8.78(br s,1H),8.50(s,1H),8.37(br s,1H),8.24(br s,1H),7.49(br s,1H),7.43(br s,1H),7.24-7.21(m,1H),7.07-6.99(m,2H),6.91(br s,1H),6.66(s,1H),5.99(s,2H),4.71(br s,2H),4.16(br s,2H).[1336] 化合物217
[1337] 该化合物由下述步骤制成：
[1338] 步骤1：2-(2-氟苯基)-N-羟基亚胺酰胺的合成
[1339]
[1340] 向盐酸羟胺(2.2当量)和2-(2-氟苯基)乙腈(1当量)的甲醇和水(5:1比例)的溶液中加入碳酸氢钠(2.4当量)。在70℃下搅拌20小时后，真空除去甲醇，所得溶液用水和二氯甲烷(1:2比例)稀释。分离各层，有机层用饱和氯化钠水溶液洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂，得到所需的中间体，2-(2-氟苯基)-N-羟基亚胺酰胺(1.13g，产率90％)，为白色固体。
[1341] 步骤2：2-(2-氟苄基)-1H-咪唑-5-甲酸乙酯的合成
[1342]
[1343] 将丙炔酸乙酯(1.08当量)和2-(2-氟苯基)-N-羟基亚胺酰胺(1当量)的乙醇溶液在80℃加热5小时，此时真空除去溶剂。将所得残余物加入二苯醚中并在170℃加热14小时。将黑色反应混合物倒入己烷(4x体积的二苯基醚)中并搅拌24小时。然后将己烷轻轻倒出得到粗产物。通过硅胶色谱法(0-5％二氯甲烷中的甲醇)纯化，得到所需的中间体，2-(2-氟苄基)-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(1.8g，产率27％)，为黑色固体。
[1344] 步骤3：2-(2-氟苄基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯的合成
[1345]
[1346] 将2-(2-氟苄基)-1H-咪唑-5-甲酸乙酯(1当量)和碳酸铯(1.2当量)在乙腈中制成悬浮液，加入碘甲烷(1当量)。在室温下搅拌2小时后，真空除去溶剂，黑色残余物用二氯甲烷和水(4:3比例)稀释。分离各层，水层用二氯甲烷萃取2次。将有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(0-80％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需的中间体，2-(2-氟苄基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯(375mg，产率36％)，为黑色油状物。
[1347] 步骤4：2-(2-氟苄基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲脒盐酸盐(中间体-21)的合成[1348]
[1349] 在10分钟内，将三甲基铝(5当量，2N甲苯溶液)加入氯化铵(5.5当量)的甲苯悬浮液中。搅拌40分钟后，将溶液加入到2-(2-氟苄基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸乙酯(1当量)中，将得到的悬浮液在80℃加热6小时。将反应混合物冷却至0℃，并滴加甲醇。将反应混合物升温至23℃并再搅拌1小时。所得浆液通过硅藻土过滤，然后用4:1乙醚/甲醇洗涤，然后用1:1二氯甲烷/甲醇洗涤，得到所需的中间体，2-(2-氟苄基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲脒盐酸盐(240mg，73％)，为固体。
[1350]
[1351] 步骤5：化合物217的合成
[1352] 将1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯(1当量)，3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇酸钠(3.06当量)和2-(2-氟苄基)-1-甲基-1H-咪唑-4-甲脒盐酸盐(1当量))的乙醇溶液在密封的小瓶中在80℃加热15小时。真空除去溶剂，将残余物悬浮于甲醇中，滤出固体，通过反相HPLC纯化滤液(5-75％乙腈/水/0.1％三氟乙酸，20分钟梯度洗脱)，得到所需化合物(29mg，收率63％)，为褐色固体。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δppm 8.17(d,1H),8.00(s,1H),7.42-7.37(m,1H),7.34-7.30(m,1H),7.24-7.16(m,2H),4.42(s,2H),3.79(s,3H).
[1353] 化合物196
[1354] 该化合物由5步制备：
[1355] 步骤1：1-(2-氟苄基)-5-巯基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成
[1356]
[1357] 将1-(2-氟苄基)-5-羟基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1.8当量)和劳氏试剂(1当量)在甲苯(10mL)中制成悬浮液，在120℃加热2小时。真空除去溶剂，将残余物加入二氯甲烷中。滤出所得固体，滤液通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需的中间体，1-(2-氟苄基)-5-巯基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(305mg，收率55％)，为油状物。
[1358] 步骤2：1-(2-氟苄基)-5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯的合成
[1359]
[1360] 将碳酸钾(2当量)和1-(2-氟苄基)-5-巯基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1当量)在四氢呋喃中制成悬浮液，加入碘甲烷(1当量)。1.5小时后，溶液用乙酸乙酯和水(1.5:1比例)稀释。分离各层，水层用乙酸乙酯萃取2次。将有机物用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需的中间体，1-(2-氟苄基)-5-(甲硫基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(32mg，产率61％)，为油状物。
[1361] 步骤3：1-(2-氟苄基)-5-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
[1362]
[1363] 在0℃，向A(1当量)的二氯甲烷溶液中加入70％的3-氯苯过氧酸(3当量)。将溶液立即升温至23℃。3.5小时后，将反应混合物倒入乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液中。分离各层，有机层用饱和硫代硫酸钠水溶液洗涤。将有机层用硫酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脱)纯化，得到所需的中间体，1-(2-氟苄基)-5-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(180mg，产率89％)，为一种透明的油，静置后固化。
[1364] 步骤4：1-(2-氟苄基)-5-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-3-甲脒盐酸盐
[1365]
[1366] 向氯化铵(5.5当量)的甲苯悬浮液中加入2M三甲基铝(5.1当量)的甲苯溶液。搅拌30分钟后，鼓泡沉降，将溶液加入到1-(2-氟苄基)-5-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(1当量)中。所得溶液在90℃下搅拌14小时。将溶液冷却至0℃，并在3分钟内滴加甲醇(5.5当量)。然后将悬浮液立即升温至23℃并搅拌1小时。在通过硅藻土过滤悬浮液后，将滤饼用
5mL 50:50甲醇/二氯甲烷洗涤，以得到所需的中间体，1-(2-氟苄基)-5-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-3-甲脒(52mg，产率28％，HCl盐)，为白色固体。
5mL 50:50甲醇/二氯甲烷洗涤，以得到所需的中间体，1-(2-氟苄基)-5-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-3-甲脒(52mg，产率28％，HCl盐)，为白色固体。
[1367] 步骤5：化合物196的合成
[1368]
[1369] 将1-(2-氟苄基)-5-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-3-甲脒盐酸盐(1当量)，3-乙氧基-2-氟-3-氧代丙-1-烯-1-醇钠(3.1当量)和1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(1当量)的乙醇溶液在90℃加热4小时。真空除去溶剂，将所得残余物加入二氯甲烷中，滤出固体。通过硅胶色谱法(0-5％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化滤液，得到所需化合物，化合物196(27mg，产率47％)，为白色固体。
[1370] 1H-NMR(500MHz,DMSO)δppm 13.42(br s,1H),8.15(br s,1H),7.60(s,1H),7.43-7.39(m,1H),7.29-7.25(m,1H),7.21-7.18(m,1H),7.14-7.12(m,1H),5.80(s,2H),3.41(s,
3H).
3H).
[1371] 化合物I-188
[1372]
[1373] 将叔丁基3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(1当量)和叔丁醇锂(2当量)的二甲氧基乙烷(2ml)溶液在60℃下搅拌5分钟。向其中加入4-(溴甲基)-2-氟-1-甲基苯(1.1当量)，并在60℃下搅拌反应过夜。冷却至室温后，在氮气流下除去溶剂。将所得固体溶于甲醇(0.5ml)和浓HCl水溶液(140ul)中，并在60℃下搅拌过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂。粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，得到化合物I-188(2.2mg，产率6％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.81(m,
1H),8.06(m,1H),7.45(m,1H),7.17(m,1H),6.97(m,2H),6.91(m,1H),5.89(s,2H),2.22(m,
3H).
1H),8.06(m,1H),7.45(m,1H),7.17(m,1H),6.97(m,2H),6.91(m,1H),5.89(s,2H),2.22(m,
3H).
[1374] 化合物I-208
[1375]
[1376] 使用与合成化合物I-188相同的方法合成该化合物，除了使用1-(溴甲基)-2-氟-4-甲苯作为烷基化剂，得到产物(7.2mg，产率30％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.79(s,1H),8.04(m,1H),7.43(s,1H),6.90(d,4H),5.93(s,2H),2.30(s,3H).[1377] 化合物I-197
[1378]
[1379] 使用与合成化合物I-188相同的方法合成该化合物，除了使用1-(溴甲基)-3-氟苯作为烷基化剂，得到产物(3.5mg，产率15％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.81(d,1H),8.04(d,1H),7.46(s,1H),7.32(d,1H),7.09(d,1H),7.02(m,2H),6.92(d,1H),
5.94(s,2H)
5.94(s,2H)
[1380] 化合物I-213
[1381]
[1382] 使用与合成化合物I-188相同的方法合成该化合物，除了使用1-(溴甲基)-4-氟苯作为烷基化剂，得到产物(2mg，产率8％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.81(d,1H),8.03(d,1H),7.42(s,1H),7.34(m,2H),7.03(s,2H),6.90(m,1H),5.90(s,2H).[1383] 化合物I-186
[1384]
[1385] 使用与合成化合物I-188相同的方法合成该化合物，除了使用4-(溴甲基)-1-甲基-1H-吡唑作为烷基化剂，得到产物(6.5mg，产率20％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm13.12(m,1H),9.15(d,1H),8.12(br.s.,1H),7.70(s,1H),7.52(s,1H),7.45(s,1H),7.22(d,1H),5.65(s,2H),3.75(s,3H).
[1386] 化合物I-212
[1387]
[1388] 使用与合成化合物I-188相同的方法合成该化合物，除了使用5-(溴甲基)-1-甲基-1H-吡唑作为烷基化剂，得到产物(1.8mg，产率6％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm13.18(m,1H),9.15(d,1H),8.10(m,1H),7.58(s,1H),7.26(dd,2H),6.05(s,1H),5.90(s,2H),3.96(s,3H).
[1389] 化合物I-211
[1390]
[1391] 使用与合成化合物I-188相同的方法合成该化合物，除了使用5-(溴甲基)异恶唑作为烷基化剂，得到产物(5.1mg，产率16％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 13.16(m,1H),9.15(d,1H),8.53(d,1H),8.06(m,1H),7.61(s,1H),7.27(d,1H),6.41(s,
1H),6.04(s,2H).
1H),6.04(s,2H).
[1392] 化合物I-214
[1393]
[1394] 使用与化合物I-188相同的方法合成该化合物，除了使用2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯作为烷基化剂，得到产物(8.5mg，产率27％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 8.88(d,1H),8.07(d,1H),7.52(s,1H),7.02(d,1H),5.60(d,2H).
[1395] 化合物I-216
[1396]
[1397] 将叔丁基3-(3-(5-氟-4-甲氧基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)异恶唑(1当量)，三苯基膦(1.5当量)和嘧啶-5-基甲醇(1.5当量)的二氯甲烷/THF(1:1，2ml)溶液冷却至0℃。向其中加入偶氮二羧酸二乙酯(1.5当量)，并将反应升温至室温过夜。将反应物在氮气流下浓缩，并通过反相HPLC，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，纯化甲氧基中间体。将所需馏分浓缩至干，将所得固体溶于甲醇(0.5ml)和浓HCl水溶液(140ul)中，并在60℃下搅拌过夜。冷却至室温后，真空除去溶剂。粗产物通过反相HPLC纯化，使用30-80％乙腈水0.1％甲酸梯度洗脱，以得到产物(1.9mg，产率10％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δppm 9.07(s,1H),8.83(m,3H),8.02(d,1H),7.46(s,1H),6.96(d,1H),5.98(s,2H).
[1398] 化合物I-215
[1399]
[1400] 使用与合成化合物I-216相同的方法合成该化合物，除了使用嘧啶-2-基甲醇作为烷基化剂，得到产物(1.4mg，产率4.3％)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 13.13(m,1H),9.04(d,1H),8.73(d,2H),8.07(m,1H),7.65(s,1H),7.41(t,1H),7.23(s,
1H),6.07(s,2H).
1H),6.07(s,2H).
[1401] 化合物191和192
[1402]
[1403] 将中间体-39(2.0g，6.7mmol，在中间体-28合成期间加入肼后获得的)，2,2-二甲基-3-氧代琥珀酸二乙酯(4.3g，20.0mmol)和NaHCO3(1.7g，20.0mmol)的甲苯(50mL)溶液在100℃下加热过夜，然后冷却至室温并通过硅藻土过滤。滤饼用乙酸乙酯冲洗，通过旋转蒸发除去溶剂。使用SiO2纯化，用己烷/乙酸乙酯梯度洗脱，得到两种位置异构体产物，为固体。化合物191(0.82g，产率27％).1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ10.95(br s,1H),8.56(d,1H),
7.48(s,1H),7.3-7.4(m,1H),7.0-7.1(m,3H),6.65(d,1H),5.97(s,2H),4.18(q,2H),1.57(s,6H),1.22(t,3H)ppm.化合物192(0.27g，产率9％).1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ11.05(br s,
1H),8.52(d,1H),7.28(s,1H),7.2-7.3(m,1H),7.0-7.1(m,2H),6.94(t,1H),6.63(d,1H),
6.00(s,2H),4.21(q,2H),1.66(s,6H),1.22(t,3H)ppm.
7.48(s,1H),7.3-7.4(m,1H),7.0-7.1(m,3H),6.65(d,1H),5.97(s,2H),4.18(q,2H),1.57(s,6H),1.22(t,3H)ppm.化合物192(0.27g，产率9％).1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ11.05(br s,
1H),8.52(d,1H),7.28(s,1H),7.2-7.3(m,1H),7.0-7.1(m,2H),6.94(t,1H),6.63(d,1H),
6.00(s,2H),4.21(q,2H),1.66(s,6H),1.22(t,3H)ppm.
[1404] 化合物209
[1405]
[1406] 步骤1：将化合物191(0.13g，0.28mmol)溶于磷酰氯(2.0mL，21.5mmol)中，将溶液在105℃加热1小时。在真空下除去溶剂，将残余物溶于乙酸乙酯中，用3×5mL水，盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥。滤出干燥剂后，粗品经SiO2纯化，用己烷/乙酸乙酯梯度洗脱，得到氯化中间体，为白色固体(100mg，产率77％)。
[1407] 1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,1H),7.62(s,1H),7.2-7.3(m,2H),7.07(t,1H),6.64(d,1H),6.07(s,2H),4.22(q,2H),1.82(s,6H),1.23(t,3H)ppm.
[1408] 步骤2：将在步骤1中制备的氯化中间体(100mg，0.22mmol)与氨的二恶烷溶液(0.5M，10mL，10mmol)在密封的小瓶中，在105℃下加热2.5天。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用水(3×5mL)，盐水洗涤，用Na2SO4干燥。滤出干燥剂，将溶液真空浓缩，残余物用SiO2色谱纯化，使用二氯甲烷/乙酸乙酯梯度为洗脱剂。得到产物(19mg，产率20％)，为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ8.47(s,1H),7.68(br s,1H),7.20(q,1H),7.04(t,1H),6.96(t,1H),6.76(t,1H),6.62(br s,1H),6.07(s,2H),6.02(br s,2H),4.17(q,
2H),1.72(s,6H),1.20(t,3H)ppm.
2H),1.72(s,6H),1.20(t,3H)ppm.
[1409] 化合物195
[1410]
[1411] 将中间体-36(35mg，0.09mmol)，(R)-2-(氨基甲基)-3,3,3-三氟-2-羟基丙酰胺(60mg，0.35mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(0.10mL，0.56mmol)在二甲基亚砜(1.5mL)中混合，并在95℃下加热8小时。将溶液冷却至室温，用水(2mL)稀释，用1N HCl水溶液将pH调至2-3。将溶液与乙酸乙酯(50mL)混合，有机相用水(2×5mL)，盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并通过旋转蒸发浓缩。将残余物用制备型反相HPLC纯化，使用水/乙腈(0.1％三氟乙酸)梯度洗脱，得到产物为白色固体(11mg，产率23％)。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ8.83(br s,1H),8.27(br s,1H),7.49(br s,1H),6.9-7.0(m,2H),6.5-6.6(m,2H),5.86(s,2H),4.35(d,1H),4.16(d,1H)ppm.注意：可交换质子全部在4.91ppm在残留HOD峰的情况下出现。
[1412] 化合物194
[1413]
[1414] 按照一般方法B，由中间体-1B制备目标化合物，并且使用(S)-2-氨基-3-羟基丙酰胺作为胺反应物，将反应物的二恶烷溶液在90℃加热5小时。将粗产物通过反相HPLC纯化以得到所需化合物，(S)-2-((2-(5-乙酰基-1-(2-氟苄基)-1H-吡唑-3-基)-5-氟嘧啶-4-基)氨基)-3-羟基丙酰胺(8mg，0.019mmol，产率34％)。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ ppm 8.29(d,1H)7.71(s,1H)7.62(s,1H)7.30-7.36(m,1H)7.19-7.25(m,2H)7.11(t,1H)6.81(t,1H)5.83(s,2H)4.72(d,1H)3.77-3.86(m,2H),2.57(s,3H).
[1415] 实施例2A：利用LC/MS检测的sGC-HEK-cGMP试验测定生物活性
[1416] 使用内源性的表达可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)的人胚胎肾细胞(HEK293)来评价测试化合物的活性。刺激sGC酶的化合物应当引起细胞内的cGMP浓度的增加。在聚-D-赖氨酸覆盖的384孔平底板中，将HEK293细胞以1.5×104细胞/孔的密度接种在50μL体积的补充有胎牛血清(10％终浓度)和青霉素(100U/mL)/链霉素(100μg/mL)的达尔伯克改良伊格尔培养基中。将细胞在37℃下在具有5％CO2的湿润室中温育过夜。吸出培养基，并用1倍汉克氏(Hank's)缓冲盐水溶液(50μL)洗涤细胞。然后将细胞与50μL的0.5mM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)溶液在37℃温育15分钟。然后将测试样品和二亚乙基三胺NONOate(DETA-NONOate)溶液(测试样品溶液的浓度为xμM，DETA-NONOate溶液的浓度为10μM；其中x是以下浓度之一)加入到试验混合物中，并将所得混合物在37℃下温育20分钟。20分钟温育后，吸出试验混合物，向细胞中加入含有150ng/mL+3-cGMP(LCMS的内标)(50μL)的10％乙酸。将板在4℃下在乙酸溶液中温育30分钟以终止反应并裂解细胞。然后将板在4℃下以1,000g离心3分钟，并将上清液转移至干净的反应板用于LCMS分析。
[1417]
[1418] 使用下面的LCMS条件(表2)检测每个样品的cGMP浓度，并计算标准曲线。在具有150ng/mL+3cGMP(具有比野生型高3个单位的同位素标记的cGMP)的10％乙酸中、利用随后的以ng/mL计的cGMP最终浓度：1,5,10,50，100，250，500，1000，2000制备标准曲线。
[1419] 表2：LC/MS条件，实施例2
[1420]
[1421]
[1422] 使用以下方程将数据通过对比高对照进行标准化：100*(样品-低对照)/(高对照-低对照)，其中低对照是用1％DMSO处理的16个样品的平均值，高对照是用30μM下述的化合物Y处理的16个样品的平均值。数据使用GraphPad Prism v.5软件进行4参数拟合(log(激动剂)对比反应-可变斜率)，所有化合物的拟合次数为n＝2。根据曲线拟合计算绝对EC50，并将其定义为给定的化合物引起50％高对照反应时的浓度。未能引起50％的最小反应的化合物报告为>30μM。对于重复或n高于2运行的化合物，本文给出的结果是所获得的几个结果的几何平均值。表3总结了在该试验中对于所选择的本发明化合物所获得的结果。
[1423]
[1424] 表3A.利用LC/MS检测的HEK试验中的全细胞活性(更新的测定条件，实施例2A)[1425]
[1426]
[1427]
[1428] (～)sGC酶活性值的代码定义表示为绝对EC50，其定义为给定化合物引起50％高对照反应(化合物Y)时的浓度。未能引起50％的最小反应的化合物报告为>30μM或ND。EC50Abs≤100nM＝A；100nM
[1429] 实施例2B：利用384孔板通过基于cGMP GloSensor细胞试验测定生物活性
[1430] 使用表达GloSensorTM40F cGMP(部件号：CS182801，Promega)的人胚胎肾细胞(HEK293)来评价测试化合物的活性。掺入这些细胞的发光生物传感器(工程荧光素酶)检测由刺激sGC酶的化合物形成的cGMP并发出荧光。
[1431] 将cGMP GloSensor细胞维持在补充有胎牛血清(FBS)(最终10％)和潮霉素(200ug/ml)的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)中。在试验前一天，将细胞以1.5×104细胞/孔的密度接种在聚-D-赖氨酸覆盖的384孔平白底-底板(Corning Cat No 35661)中的
50μL体积中的含有10％FBS的DMEM中。将细胞在37℃下在具有5％CO2的湿润室中温育过夜。
第二天，除去培养基，并用40μl/孔的GloSensorTM，2mM(Promega Cat No E1291)替换细胞。
将细胞在25℃处理90分钟，以使底物在细胞中平衡。将测试化合物和二亚乙基三胺NONOate(DETA-NONOate)在无血清CO2非依赖性培养基中稀释至3mM(20x)，并以4x稀释度连续稀释以产生5X剂量曲线，向孔中加入10μl该溶液(测试化合物溶液浓度为xμM，DETA-NONOate溶液浓度为10μM；其中x是以下最终浓度之一)。
50μL体积中的含有10％FBS的DMEM中。将细胞在37℃下在具有5％CO2的湿润室中温育过夜。
第二天，除去培养基，并用40μl/孔的GloSensorTM，2mM(Promega Cat No E1291)替换细胞。
将细胞在25℃处理90分钟，以使底物在细胞中平衡。将测试化合物和二亚乙基三胺NONOate(DETA-NONOate)在无血清CO2非依赖性培养基中稀释至3mM(20x)，并以4x稀释度连续稀释以产生5X剂量曲线，向孔中加入10μl该溶液(测试化合物溶液浓度为xμM，DETA-NONOate溶液浓度为10μM；其中x是以下最终浓度之一)。
[1432]
[1433] 对于动力学研究，使用Envision(Perkin Elmer模型型号)立即测量0.2秒/孔的荧光。对于终点SAR筛选，在室温下温育55分钟后收集数据。
[1434] 如上文实施例2A中所示进行数据分析。
[1435] 表3B.以384-孔板通过基于GloSensor细胞试验测量全细胞活性(实施例2B)。
[1436]
[1437]
[1438] (～)sGC酶活性值的代码定义表示为绝对EC50，其定义为给定化合物引起50％高对照反应(化合物Y)时的浓度。未能引起50％的最小反应的化合物报告为>30μM或ND。EC50Abs≤100nM＝A；100nM
[1439] 实施例3A：通过胸主动脉环试验测定生物活性
[1440] 从重量为275-299g麻醉(异氟烷)雄性Sprague-Dawley大鼠中解剖胸主动脉环。将组织立即转移至已经用95％O2和5％CO2充气30分钟的冰冷的克雷布斯-汉斯莱特(Krebs-Henseleit)溶液中。在除去结缔组织后，将主动脉切片切成4个环(每个～2mm)并悬挂在2个L形钩上，其中一个钩固定在组织浴(斯科勒器官浴，哈弗仪器)的底部，另一个连接到力传感器(F30力传感器，哈佛仪器)。将含有Krebs Henseleit溶液(10mL)的浴加热至37℃，并用95％O2和5％CO2充气。使环达到0.3-0.5g的初始张力，并在60分钟内逐渐升高至1.0g的静止张力。用Krebs Henseleit溶液(加热至37℃并用95％O2和5％CO2充气)以15分钟的间隔冲洗环，直到获得稳定的基线。在保持1.0g的静止张力(大约10分钟)而不需要调节之后，认为环是稳定的。然后通过加入100μl的10μg/mL苯肾上腺素储备溶液利用100ng/mL苯肾上腺素使环收缩。然后以累积的、剂量依赖性的方式用二甲基亚砜(DMSO)中制备的试验化合物处理实现稳定收缩的组织。在一些情况下，用Krebs-Heinseleit's溶液(加热至37℃并用95％O2和5％CO2充气)在5分钟时间内漂洗组织三次，使其在基线处稳定，然后用于表征其他测试样品或DMSO效应。使用由哈弗仪器提供的HSE-ACAD软件收集所有数据。在Microsoft Excel中使用记录的100ng/mL苯肾上腺素处理作为0％抑制与100μM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤处理作为100％抑制的张力值计算松弛效应百分比。使用GraphPad Prism软件生成的浓度-响应曲线计算EC50值。
[1441] 实施例3B：利用备选方法通过胸主动脉环试验测定生物活性
[1442] 作为备选的胸主动脉环试验，除了在Microsoft Excel中使用记录的100ng/mL苯肾上腺素处理作为0％抑制，以及在用缓冲液冲洗组织后，使用组织的原始静止张力作为100％抑制的张力值计算松弛效应百分比外，使用实施例3的步骤。
[1443] 实施例4：Sprague-Dawley大鼠的血压变化
[1444] 将雄性大鼠(250-350g体重，由哈伦实验室提供)使用填充植入在右股动脉的导管中的氯胺酮/赛拉嗪和肝素化盐水麻醉。将导管外置于肩胛骨之间，加盖，并且在任何化合物测试之前允许动物在手术后恢复至少7天。在测试之前，将动物维持在正常饮食下，在12小时光照-黑暗循环下自由饮用饮用水。
[1445] 在实验当天，在吸入异氟烷麻醉下，将导管打开盖并连接到系绳(Instech实验室)和压力传感器(哈弗仪器)。随后用专用数据捕获系统(PowerLab，AD仪器)捕获并分析血压和心率。数据采样率设置为每秒1个周期。一旦连接，允许每只大鼠从麻醉中恢复，并且在这些有意识的、自由移动的动物中建立基线血压和心率水平。一旦建立基线，就口服(PO，10mg/kg)给药载体(0.5％甲基纤维素或100％PEG400)或测试样品，并监测对血压和心率的影响达24小时。
[1446] 数据以小时平均值报告，并且从每小时中减去单独基线计算血压变化(表4)[1447] 表4
[1448]
[1449] @对于10mpk时基线中的大鼠平均动脉压峰变化的代码定义：
[1450] A＝-10<3或10mpk时的基线中的峰变化<0
[1451] B＝-20≤3或10mpk时的基线中的峰变化≤-10
[1452] C＝3或10mpk时的基线中的峰变化<-20
[1453] 实施例5：在二亚乙基三胺NONOate(DETA-NONOate)(一氧化氮供体)的存在下进行的纯化的人重组sGCα1β1酶试验
[1454] 使用获自Enzo生命科学(P/N：ALX-201-177)的纯化的人重组可溶性鸟苷酸环化酶α1β1(h sGC)来评价测试化合物的活性。测试反应含有0.1M Tris(pH8.0)，0.5mg/mL BSA，2mM DTT，4mM MgCl2，30μM DETA NONOate(Enzo生命科学P/N：ALX-430-014)和12.5ng/ml人可溶性鸟苷酸环化酶。然后加入DMSO中的测试化合物(在以30uM终浓度开始的10-点曲线上
3倍滴定化合物，所有样品具有3％DMSO终浓度)。加入鸟苷5'-三磷酸(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)P/N：G8877)至终浓度为300μM，并将酶反应在37℃下温育20分钟(100μL，
384孔板形式)。对照含有3％DMSO(低对照)或30uM化合物Y(高对照)。在20分钟温育后，通过加入100μL冰冷的20％乙酸终止反应。
3倍滴定化合物，所有样品具有3％DMSO终浓度)。加入鸟苷5'-三磷酸(西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)P/N：G8877)至终浓度为300μM，并将酶反应在37℃下温育20分钟(100μL，
384孔板形式)。对照含有3％DMSO(低对照)或30uM化合物Y(高对照)。在20分钟温育后，通过加入100μL冰冷的20％乙酸终止反应。
[1455] 使用cGMP HTRF(Cisbio P/N：62GM2PEC)试验根据制造商的说明书测定所有样品中的cGMP浓度。使用GraphPad Prism v.6软件、使用4-参数拟合(log(抑制剂)对比响应-可变斜率)拟合cGMP标准曲线。适当地稀释样品以确保数值落在标准曲线的线性范围内。
[1456] 使用GraphPad Prism v.6软件、使用4-参数拟合(log(激动剂)对比反应-可变斜率)拟合数据。在曲线拟合中计算EC50，并将EC50定义为化合物引起30μM化合物Y(高对照化合物)的最大反应的50％时的浓度。
[1457] 表5.酶数据
[1458]
[1459]
[1460] EC50Abs<100nM＝A
[1461] ≤100nM
[1462] ≤1000nM＝C
[1463] 实施例6：动物模型描述：
[1464] 使用吸入sGC刺激剂的肺血液动力学的Lamb模型
[1465] (“吸入的可溶性鸟苷酸环化酶激动剂诱导选择性肺血管舒张”，Oleg V.等人，美国呼吸和重症监护医学杂志，第176卷，2007，第1138页)
[1466] 可以通过下面公开的方法测试吸入的含有sGC刺激剂的新型干粉微粒制剂是否将在患有急性肺动脉高压的羔羊中产生选择性肺血管舒张。还可以评价sGC刺激剂的微粒和吸入的一氧化氮(iNO)在该系统中的联合给药。最后，可以检查当对iNO(诱导型一氧化氮合酶)的响应受损时吸入sGC刺激剂的微粒是否会产生肺血管舒张。
[1467] 方案：在清醒的、用血管导管和气管造口管装置的自发呼吸的羔羊中，静脉输注U-46619以将平均肺动脉压增加至35mm Hg。吸入由BAY 41-2272，BAY 41-8543或BAY 58-2667和赋形剂(二棕榈酰磷脂酰胆碱，白蛋白，乳糖)组成的微粒产生剂量依赖性肺血管舒张和增加的经肺cGMP释放，而对平均动脉压没有显著影响。吸入含有BAY 41-8543或BAY 58-
2667的微粒增加了全身动脉氧合。由iNO诱导的肺血管舒张的量值和持续时间在吸入BAY
41-8543微粒后增加。静脉给药氧化sGC的修复血红素基团的1H-[1,2,4]恶二唑并[4,3-a]喹喔啉-1-酮(ODQ)显著降低iNO的肺血管扩张剂作用。相比之下，用ODQ处理后，通过吸入BAY 58-2667微粒诱导的肺血管舒张和经肺cGMP释放大大增强。因此，吸入含有sGC激动剂的微粒可以为肺高血压患者提供有效的新治疗，特别是当对iNO的反应性被sGC氧化损伤时。注意：BAY 41-2272，BAY 41-8543是sGC刺激剂，而BAY 58-2667是sGC激活剂。
2667的微粒增加了全身动脉氧合。由iNO诱导的肺血管舒张的量值和持续时间在吸入BAY
41-8543微粒后增加。静脉给药氧化sGC的修复血红素基团的1H-[1,2,4]恶二唑并[4,3-a]喹喔啉-1-酮(ODQ)显著降低iNO的肺血管扩张剂作用。相比之下，用ODQ处理后，通过吸入BAY 58-2667微粒诱导的肺血管舒张和经肺cGMP释放大大增强。因此，吸入含有sGC激动剂的微粒可以为肺高血压患者提供有效的新治疗，特别是当对iNO的反应性被sGC氧化损伤时。注意：BAY 41-2272，BAY 41-8543是sGC刺激剂，而BAY 58-2667是sGC激活剂。
[1469] 可以通过使用下述系统评估sGC刺激剂的支气管扩张作用。该系统允许我们确定几个sGC刺激剂的作用的效力、功效和持续时间，以及评估潜在的副作用，例如血压或心率变化。
[1470] 动物：豚鼠，顿金哈德莱(Dunkin Hartley)，雄性，完全屏障培养并证实在实验日收到体重为525-609g无特定微生物，哈伦UK有限公司。豚鼠以4只每组被安置在受控环境(气流，温度和湿度)中，环境中有带有金箔片的固体底盘的金箔片床垫。食物(FD1，特殊饮食服务)和水随意提供。
[1471] 豚鼠气管平滑肌收缩对EFS的响应。化合物效力和功效的评估：
[1472] 在每个实验日，通过暴露于升高浓度的CO2来杀死豚鼠，并除去气管。气管被清除外部组织，并在与肌肉相对的线上纵向切开，打开并切成2-3个软骨环宽。棉花环附接到每个气管条的一端，一段棉花附接到另一端。然后使用组织保持器在Myobath系统(世界精密仪器斯蒂夫尼奇，UK)中将气管条悬挂在两个铂电极之间。该环附接在组织保持器的底部的钩上，另一端附接到FORT10力传感器(世界精密仪器斯蒂夫尼奇，UK)的臂，确保组织位于两个铂电极之间。然后将整个组件在37℃下从高处放入到用高氧鼓泡的10ml含有改良的Kreb's-Henseleit缓冲液的组织浴中。对每片组织施加1g张力，洗涤组织，然后1小时的稳定期。一旦组织稳定，用于电场刺激的装置被设置为使用DS8000 8通道数字刺激器(世界精密仪器斯蒂夫尼奇，UK)每隔2分钟利用门控的单极性脉冲递送频率80Hz、脉冲宽度0.1ms的刺激。在2,4,6,7,8,10,12V对每个气管条进行电压响应曲线，然后选择次最大电压，以在实验的其余部分期间应用于每个组织。使用次最大电场刺激(EFS)诱导豚鼠气管平滑肌(GPTSM)收缩(还可以通过使用痉挛原物质，如Coleman等人所述的乙酰甲胆碱或组胺诱导-2收缩)。将化合物以3×10 M溶于100％DMSO中，并等分储存于-20℃。每个实验使用单独的等分试样。用Kreb's缓冲液洗涤组织，并使用先前确定的次最大电压刺激1小时，以在评估化合物活性之前建立稳定的基线收缩。
[1473] 然后进行每种测试物质的累积剂量响应曲线(DRC)测定，并测量平滑肌收缩的变化。每个实验中每种测试物质的效果表示为基线收缩的百分比抑制，归一化为相关的载体对照。使用来自三种不同动物的组织进行三次实验。将所有三次实验的数据合并，绘制DRC，并测定测试物质的效力和功效。与试验化合物一起评估了溴化异丙托品的效力，与该系统中先前产生的数据一致，IC50确定为0.86nM(95％Cl，0.78-0.94)。
[1474] 新型多功能灌肠系统，其用于评估使用豚鼠分离的气管平滑肌的一些痉挛和解散剂，R.A.Coleman等，药理学方法杂志，21，71-86，1989。
[1475] 改变CFTR功能因素涉及的疾病的小鼠模型
[1476] 这些疾病包括囊性纤维化，胰腺疾病，胃肠道疾病，肝脏疾病，囊性纤维化相关糖尿病(CFRO)，干眼症，口干和干燥(Sjoegren)综合征。
[1477] 通过使用表达或不表达ΔF508CFTR通道的转基因小鼠，可以通过使用下述文献方案(参见WO 2011095534)来测量在测试sGC刺激剂存在下的鼻电位差和唾液分泌的不同。
[1478] Δ(.6.)50S-CFTR小鼠的唾液分泌试验
[1479] 试验中使用了15对雄性和雌性纯合杂合的.6.50S-CFTR(原始获自鹿特丹伊拉斯姆斯大学，10-14周龄，体重为1S-36g的两性的FVB遗传背景回交超过12代的)。在无菌盐水中制备浓度为0.07,0.14和0.42mg/kg BW的伐地那非溶液，而sGC刺激剂BAY 41-2272溶解于0.01,0.03,0.1和0.3mg/kg BW含有50％ddH2O，40％PEG400(聚乙二醇400)和10％乙醇的溶剂中。在唾液分泌测定前60分钟，通过腹膜内注射(5ml/kg BW)向小鼠给药物质或合适的载体。60分钟后，将小鼠用25支氯胺酮和地西泮的组合麻醉。制备含有1毫升5mg/ml地西泮和1毫升100mg/ml氯胺酮的8毫升无菌盐水溶液。通过腹膜内注射溶液(10ml/kg BW)诱导麻醉。麻醉后，将小鼠皮下注射1mM阿托品(50 1-11)到左脸颊中预处理以避免交叉刺激胆碱能受体。将沃特曼过滤器5纸的小条放置在先前注射的面颊内4分钟以吸收注射阿托品后分泌的任何唾液。取出第一片滤纸并用第二片预称重的滤纸代替。此后，将含有100I-IM异丙肾上腺素和1mM阿托品的溶液的50 1-11以相同部位注射到左脸颊中，以通过肾上腺素能机制诱导唾液分泌。将10支异丙肾上腺素注射的时间作为时间零，并且每10分钟更换滤纸条，总共收集时间为30分钟。将每片滤纸立即放置并密封在预先称重的小瓶中。收集所有样品后，重新测量每个小瓶，记录所有样品的重量。将收集唾液15之前和之后测量的小瓶加纸的总重量的差异作为收集期间分泌的唾液的净重。唾液分泌的总量计算为唾液的重量除以每次收集所需的分钟数，然后归一化为小鼠的质量(克)。结果表示为与安慰剂治疗相比，n小鼠的平均百分比增加。统计学通过单因素ANOVA测试20后进行分析，随后进行事后邦费罗尼(Bonferoni)分析；*/**/***表示统计学显著性，p值<0.05/<0.01/0.001，n.s.代表着不显著。
[1480] 用许多sGC刺激剂，sGC激活剂和PDE5抑制剂来进行这些动物研究。结果表明，本发明的化合物可用于治疗囊性纤维化，胰腺疾病，胃肠道疾病，肝脏疾病，囊性纤维化相关性糖尿病(CFRO)，干眼症，口干和干燥(Sjoegren)综合征。
[1481] 神经肌肉疾病
[1482] 先前已经显示，在与受损的运动状态和分解代谢应激相关的广泛范围的非营养性神经肌肉状况中均观察到从肌膜到肌浆的神经元一氧化氮合酶(nNOS)的错误定位。评估nNOS的肌电图定位是用于评估各种遗传性和获得性神经肌肉疾病形式的患者的肌肉活检的一个工具。肌膜的nNOS水平与移动性和功能状态相关。
[1483] 可以使用类似的评估来确定非营养性肌病的动物模型中的nNOS定位，遵循下述文献方案(“获得性和遗传性神经肌肉疾病中常见的肌膜nNOS损伤”)；E.L.Finanger Hedderick等人，神经学，2011，76(11)，960-967)。
[1484] 获得性肌肉萎缩的小鼠模型中的nNOS错误定位
[1485] 一下描述了两种显示肌肉萎缩而没有受损的移动性的小鼠模型：高剂量皮质类固醇治疗和短期饥饿。用类固醇或饥饿48小时治疗的小鼠显示总身体质量和归一化湿骨骼肌质量显著降低。两种模型的骨骼肌标本的形态分析显示肌肉萎缩(定义为：与年龄匹配对照相比，平均最小Feret纤维直径地显著降低(每组n＝5))。肌营养不良蛋白，α-肌聚糖蛋白和α-1-合成蛋白的免疫荧光染色显示肌营养不良蛋白定位正常，表明了DGC复合物的完整。然而，类固醇治疗和饥饿的小鼠都显示没有或严重降低的肌膜nNOS染色。NOS家族蛋白(nNOS，eNOS，iNOS)的实时PCR显示在类固醇治疗的小鼠中3个转录物中的任何一个的表达水平没有显著差异(每组n＝8)。此外，nNOS，iNOS和eNOS的Western印迹分析在蛋白质水平显示没有差异。
[1486] 这些鼠动物模型可用于评估sGC刺激剂(例如本发明的sGC刺激剂)对肌肉萎缩症状和相关疾病状态的影响。
[1487] 与野生型小鼠相比，饥饿小鼠表现出nNOS和iNOS转录物表达的1倍降低(对照组n＝9，饥饿组n＝7)。然而，nNOS，iNOS和eNOS的蛋白质水平显示对照组和饥饿小鼠没有差异(每组n＝4)。这些数据表明，nNOS的异常定位发生在总体移动性虽然保持不变、但具有严重肌肉萎缩的小鼠中，也支持了除了受损的移动性之外，如分解代谢应激的其他触发因素可能与nNOS的肌膜损失有关的概念。
[1488] 冬眠期间保持骨骼肌nNOS定位(用松鼠研究)
[1489] 已使用来自冬眠的13排地松鼠的骨骼肌标本来评估在保持肌肉内稳态和完整性的背景下不移动和分解代谢应激对nNOS定位的影响。这些动物是冬眠期间保护免受骨骼肌萎缩的冬眠哺乳动物。尽管休眠5个月，几乎完全不动，没有热量摄入，但nNOS的肌膜表达得以保留。这些数据与患者和小鼠数据一起表明，nNOS定位的生物化学控制是复杂的，并且重要的是，保留的肌膜nNOS在维持肌肉内稳态中可能是重要的。
[1490] 这些结果还表明，靶向异常NO信号传导(例如用sGC刺激剂，如本文所述的那些)可能被证明对广泛的神经肌肉疾病患者是有益的。
[1491] 肌营养不良(BMD和DMD)的小鼠模型
[1492] 以进行性骨骼肌消耗为特征的贝克肌营养不良症(BMD)是由肌肉蛋白质肌营养不良蛋白的突变引起的。在人类研究中，Martin等(参见“他达拉非缓解患有贝克肌营养不良症的患者的肌肉缺血”；Elizabeth A.Martin等，科学转化医学期刊，4,162期，155(2012)；“杜氏肌营养不良的血管靶向治疗”；Ennen等，骨骼肌，2013，3：9)评估了运动诱发的10例BMD患者和7名年龄匹配的健康男性对照的肌肉反射交感神经血管收缩的衰减。这是一种优化骨骼肌灌注以满足运动代谢需求的保护机制。反射血管收缩是由模拟的直立应力引起的，并且是以节奏手柄的形式通过前臂肌肉休息或轻度锻炼来测量。首先，研究者显示，10例BMD患者中9例的运动诱发的反射血管收缩减弱是有缺陷的，其中常见的肌营养不良蛋白突变破坏了神经元NO合成酶(nNOS)对肌肉肌膜的靶向。然后，在双盲随机安慰剂对照交叉试验中，作者表明，通过单剂口服20mg他达拉非(特异性PDE5抑制剂)，9例患者中8例恢复正常血流调节。
[1493] 通过使用杜氏肌营养不良(DMD)相关的肌营养不良蛋白缺陷型mdx小鼠模型，可以评估作用于NO途径的药物的作用。该模型还显示，磷酸二酯酶5(PDE5)的抑制剂缓解了营养不良表型的一些特征，包括可导致肌肉损伤和疲劳的骨骼肌微血管的血管痉挛。
[1494] 随着健康骨骼肌的运动，肌膜nNOS衍生的NO减轻了局部α-肾上腺素能血管收缩，从而优化灌注以满足活动肌肉的代谢需求。在mdx小鼠(BMD和DMD的模型)中，nNOS无效小鼠和DMD引起功能性肌肉缺血的男孩中，这种保护机制(称为功能性交感)丢失。功能性缺血的重复发作可加速由于肌营养不良蛋白缺乏已减弱的肌纤维的使用依赖性损伤。
[1495] 在mdx小鼠中，营养不良表型的许多特征可以通过增强NO信号的多种策略来改善，所述策略包括nNOS的转基因表达，恢复肌膜nNOS(从而恢复功能性交感神经)的肌营养不良蛋白小基因的转基因表达，NOS底物L-精氨酸(24,25)的给药，用NO供体药物治疗，和药物他达拉非或西地那非对磷酸二酯酶5A(PDE5A)的抑制。在短暂的运动后，这些延长了血管平滑肌中NO的下游靶点-肌苷3'，5'-单磷酸(cGMP)的半衰期的PDE5A抑制剂在mdx小鼠中显示出了减轻肌肉缺血以及损伤和疲劳的效果。此外，这些药物显示了对mdx小鼠的心脏动力学的改善，并且营养了营养不良的骨骼肌，并延长了肌营养不良蛋白缺陷型斑马鱼的存活。
[1496] 这些发现支持了肌膜nNOS在调节人类骨骼肌中的交感神经血管收缩中的重要作用，并且表明靶向异常NO途径(例如通过使用本发明的sGC刺激剂)对于治疗人类BMD和DMD可能是有用的治疗方法。
[1497] 镰状细胞病
[1498] 镰状细胞病(SCD)或镰状细胞性贫血(SCA)或复发性细胞增多症是遗传性血液病，其特征在于呈现异常、刚性镰刀形状的红细胞。镰状化会降低细胞的灵活性，并导致各种并发症的风险。镰状化是由于血红蛋白基因突变而发生的。具有一个失效基因拷贝的个体可显示正常和异常血红蛋白两种表型。这是共显性的一个例子。在1994年，在美国，患有该病症的患者的平均预期寿命为男性42岁，女性48岁，但今天，由于病情管理较好，患者可以生活到70岁以上。
[1499] 镰状细胞性贫血是镰状细胞疾病的一种形式，其中引起HbS的突变具有纯合性。镰状细胞性贫血也称为“HbSS”，“SS疾病”，“血红蛋白S”或这些名称的排列。在杂合子中，也就是那些有一个镰状基因和一个正常的成年血红蛋白基因的例子中，这种病症被称为“HbAS”或“镰刀细胞特征”。其他罕见的镰状细胞病是复合的杂合状态，病人的HbS只由一个拷贝的突变引起，另一个拷贝存在另一个异常的血红蛋白等位基因。它们包括镰状血红蛋白C疾病(HbSC)，镰状β-加-地中海贫血(HbS/β+)和镰状β-0-地中海贫血(HbS/β0)。
[1500] 尽管红细胞(RBC)镰刀状和流变学异常是镰状细胞病变的病理生理学的核心，但由镰状红细胞(sRBC)，内皮细胞，血小板和白细胞之间的复杂相互作用引起的血管功能障碍起着同样重要的作用。在镰状细胞疾病中，内皮激活与镰状细胞介导的缺氧再灌注事件有关(参见例如“对镰状细胞性贫血中脑血管性血管病变发病机理的了解进展”，P.Connes等，英国血液学杂志，2013，161，484-98)。红细胞镰刀和对内皮的粘附通过损害血流来引发血管闭塞。随后炎症介质的激增和内皮激活引起一系列事件，导致血管损伤。来自这些血管闭塞事件的间歇性缺氧再灌注的病理生理反应通过细胞因子的增加产生、白细胞上调和促凝血剂和粘附分子的活化以及同时抑制细胞保护介质来表征。
[1501] 白细胞增多与镰状细胞病的几乎每一种表现相关，强调炎症在镰状血管病变的病理生理学中的影响作用。即使在基线水平时，镰状细胞病患者也出现促炎细胞因子升高，包括C反应蛋白(CRP)，肿瘤坏死因子(TNF)，白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-8(IL-8)。体外研究表明，sRBC可促进TNF-α和IL-1-β(8-10)的内皮上调。活化单核细胞的微阵列研究已经显示参与炎症、血红素代谢、细胞周期调节、抗氧化反应和血管发生的基因的差异表达。最近，已显示活化的B细胞(NFκB/p65)，Kruppel样因子2(KLF2)的核因子κ-轻链增强子以及在镰状细胞疾病患儿中调节炎症途径的其他转录因子的差异表达增加了中风风险。
[1502] 在转基因小鼠模型中(参见“靶向镰状细胞病中内皮细胞的新疗法”，C.C.Hoppe，血红蛋白，35(5-6)：530-546(2011)及其中引用的参考文献)，镰状病变包括氧化应激已经显示出对导致内皮激活和夸张的炎症和亲胶反应的微血管调节机制的影响。氧化应激通过活性氧(ROS)的形成而发生。NO的消耗通过血红蛋白(Hb)介导的清除、ROS的消耗和精氨酸酶介导的底物消耗而发生。在镰状细胞病中，通常去除循环游离Hb的清除系统是饱和的。游离的Hb消耗NO，导致内皮功能障碍。因此，血管收缩和血管舒张的正常平衡倾向于血管收缩，内皮激活，氧化应激和增殖性血管病变。
[1503] 针对恢复NO稳态的疗法在对镰状细胞病患者的初步研究中显示出希望。以前的体外研究和其他患者群体的研究显示NO介导的内皮粘附分子表达的下调。根据这些观察结果，在呈现VOE的镰状细胞病患儿中研究了吸入NO的使用情况，并发现疼痛评分降低，镇痛要求降低和住院时间缩短的相关趋势。
[1504] 在最近的随机安慰剂对照试验中再现了这些发现，该试验评估了吸入NO用于治疗镰状细胞病的成年患者的急性VOE，结果显示与安慰剂相比，吸入的NO显著降低了疼痛评分，并且与胃肠外吗啡使用减少的趋势相关。来自急性VOE吸入NO治疗的成年镰状细胞病患者的完整II期试验的结果尚未提供(临床实验，政府编号NCT00023296)。在镰状细胞病儿童中进行VOE治疗的吸入NO的另一个II期试验将要完成(美国牙科与颅面研究所，政府编号NCT00094887)。吸入NO对镰状细胞疾病的ACS的可能治疗作用目前正通过针对儿童和成人在法国进行两项独立的临床II/III期试验进行评估，试验比较了ACS患儿中吸入NO与安慰剂或标准护理的使用效果(美国牙科与颅面研究所，政府编号NCT01089439和NCT00748423)。
[1505] NO合酶底物L-精氨酸的膳食补充作为增加NO生物利用度的手段，在镰状细胞疾病中被广泛研究。在镰刀小鼠中，高剂量的口服L-精氨酸已经显示降低加多斯(Gardos)通道活性、致密细胞形成和溶血，以及血管反应性的功能改善的效果。
[1506] 西地那非，这一旨在通过抑制NO的下游介导物PDE5扩增内源性NO的作用的药剂广泛用于一般人群以治疗初期PHT。针对严重PHT的镰状细胞病患者中的初步研究报道了用西地那非治疗后PAP和运动能力的改善。测试西地那非在多普勒定义的PHT的镰状细胞病患者中的安全性和有效性的一个多中心试验(西地那非治疗治疗肺动脉高压和镰状细胞疾病，Walk-PHaSST)由于较高频率和严重副作用(包括治疗组中VOE，头痛和视力障碍的增长率)而过早地停止了。
[1507] 亚硝酸盐和烟酸的直接NO供体特性也被研究。在试验阶段的I/II临床试验中，成年镰状细胞病患者的亚硝酸钠输注增强了前臂血流量，与NO供体作用机制一致。现在正在进行大型I/II期试验，研究在急性VOE期间作为辅助治疗的亚硝酸盐输注是否将会改善微血管血流和组织氧合(美国牙科与颅面研究所，政府编号NCT01033227)。烟酸对内皮依赖性血管舒张改善的影响也在II期随机对照试验(美国牙科与颅面研究所，政府编号NCT00508989)中进行评估。
[1508] 上述结果表明，靶向细胞疾病中的异常NO途径(例如通过使用本发明的sGC刺激剂)可能是治疗该疾病的有效的治疗方法。在血液，2001，98(5)，1577-84；临床研究杂志，2004,114(8)，1136-45；和英国血液学杂志2004,124(3)，391-402中描述了可用于评估sGC刺激剂(例如本发明的sGC刺激剂)在该疾病状态中作用的镰状细胞性贫血的鼠模型。
[1509] 膀胱功能障碍
[1510] 研究证明sGC活化剂BAY 60-2770改善了肥胖小鼠中的膀胱过度活跃(参见“可溶性鸟苷酸环化酶活化剂BAY 60-2770改善肥胖小鼠膀胱过度活动”，Luiz O Leiria等人，泌尿学杂志，2013，doi：10.1016/j.juro.2013.09.020.)。本出版物中描述的动物模型可以类似地用于评估sGC刺激剂(例如本发明的sGC刺激剂)对膀胱过度活跃的影响。
[1511] 同一组研究人员还描述了膀胱功能障碍的大鼠模型(NO-有效大鼠，F Z Monica等人，神经病学和尿流动力学，30,456-60，2011)，并且已证明BAY-2272(sGC激活剂)在该模型中的保护作用。本出版物中描述的动物模型可类似地用于评估sGC刺激剂(例如本发明的sGC刺激剂)对与逼尿肌平滑肌过度活动相关的膀胱功能障碍的影响。
[1512] 已经描述了许多实施例。然而，应当理解的是，在不脱离本发明的精神和范围的情况下可以进行各种修改。
[1513] 本文使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，而不意在限制本发明。如本文所使用的，单数形式“一”和“该”也旨在包括复数形式，除非上下文另有明确指示。进一步理解，术语“包括”(以及包括的任何形式，例如“包括”和“包含”)，“具有”(以及具有的任何形式，例如“具有”和“具有”)，“包含”(以及任何形式的包括，如“包括”和“包含”)，“包含”(和任何形式包含，如“包含”和“包含”)及其任何其他语法变体都是开放的连接动词。结果，“包括”，“具有”，“包括”或“包含”一个或多个步骤或元素的方法或装置具有这些一个或多个步骤或元素，但不限于仅具有那些一个或多个步骤或元素。类似地，“包括”，“具有”，“包括”或“包含”一个或多个特征的方法的步骤或装置的元素具有这些一个或多个特征，但不限于仅具有那些一个或多个特征。此外，以某种方式配置的装置或结构至少以这种方式配置，但也可以以未列出的方式进行配置。
[1514] 如本文所使用的，术语“包括”，“具有”，“包括”，“包含”和其他语法变体包括术语“由...组成”和“基本上由...组成”。
[1515] 当本文中使用的短语“基本上由...组成”或其语法变体被认为是指定的所述特征，整体，步骤或组分，但不排除添加一个或多个附加特征，整体，步骤，组分或其组合，但是仅当其附加特征，整体，步骤，组分或组合不会实质性改变要求保护的组合物，装置或方法的基础和新颖特征时。
[1516] 本说明书中引用的所有出版物通过引用并入本文，如同每个单独的出版物被具体和单独地指出通过引用并入本文，如同完全阐述一样。
[1517] 除非另有明确说明，否则通过引用并入的主题不被认为是任何权利要求限制的替代。
[1518] 在整个说明书中提及一个或多个范围的情况下，每个范围旨在作为用于呈现信息的速记格式，其中该范围被理解为包括该范围内的每个离散点，如同在此完全阐述的那样。
[1519] 虽然本文已经描述和描绘了本发明的几个方面和实施例，但是本领域技术人员可能会影响替代方面和实施例来实现相同的目的。因此，本发明和所附权利要求旨在涵盖落入本发明的真实精神和范围内的所有这样的进一步和替代方面和实施例。
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