具有DUB抑制剂活性的取代氰基吡咯烷
阅读：999发布：2020-06-11
专利汇可以提供具有DUB抑制剂活性的取代氰基吡咯烷专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一类式(Ia)、(Ib)和(Ic)的取代氰基吡咯烷，具有充当脱泛素化酶、尤其是泛素C端 水 解 酶30或泛素特异性肽酶30(USP30) 抑制剂 的活性，可用于各种 治疗 领域包括牵涉线粒体功能障碍的病况和癌症。，下面是具有DUB抑制剂活性的取代氰基吡咯烷专利的具体信息内容。
1.式(I)化合物，其选自(Ia)，(Ib)，和(Ic)：
其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
m是0至5；
n是0至5；
各R1独立地选自卤代，氰基，羟基，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，和(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基；
R1a和R1b各自独立地选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，和(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基；
R2选自氢，(C1-C6)烷基，和(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基；
或R1b与R2一起可以形成含有1至2个杂原子的5至6元杂环，所述杂原子独立选自N、O和S，其中至少一个是N；
所述杂环可以任选进一步用1至4个取代基取代，所述取代基独立选自卤代，氰基，羟基，氧代，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷基，和卤代(C1-C6)烷氧基；
R3和R4各自独立地选自氢，氰基和(C1-C6)烷基；或R3和R4一起形成3至6元环烷基环；
R5选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，NH(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)2，C(O)NH(C1-C6)烷基，C(O)N((C1-C6)烷基)2，NHC(O)(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)C(O)(C1-C6)烷基)，C(O)(C1-C6)烷基，C(O)O(C1-C6)烷基，CO2H，CONH2，SO2NH(C1-C6)烷基，和SO2N((C1-C6)烷基)2；和各R6独立地选自卤代，氰基，羟基，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，NH(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)2，C(O)NH(C1-C6)烷基，C(O)N((C1-C6)烷基)2，NHC(O)(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)C(O)(C1-C6)烷基)，C(O)(C1-C6)烷基，C(O)O(C1-C6)烷基，CO2H，CONH2，SO2NH(C1-C6)烷基，和SO2N((C1-C6)烷基)2。
2.根据权利要求1的化合物，其中m是0、1或2。
3.根据权利要求2的化合物，其中R1选自氯，氟，甲基，乙基，和甲氧基。
4.根据权利要求1至3中任一项的化合物，其中R1a选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，甲氧基，和甲氧基甲基。
1b
5.根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中R 选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，甲氧基，和甲氧基甲基。
6.根据权利要求1至5中任一项的化合物，其中R2选自氢和甲基。
7.根据权利要求1至4中任一项的化合物，其中R1b与R2一起形成含有1至2个杂原子的5至6元杂环，所述杂原子独立选自N、O和S，其中至少一个是N；
其中所述杂环可以任选进一步用1至2个取代基取代，所述取代基独立选自氟，氯，氰基，羟基，氧代，甲基，和甲氧基。
8.根据权利要求1至7中任一项的化合物，其中R3选自氢和甲基。
4
9.根据权利要求1至8中任一项的化合物，其中R选自氢，氰基和甲基。
10.根据权利要求1至9中任一项的化合物，其中R5选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，丙基，甲氧基，乙氧基，和甲氧基甲基。
11.根据权利要求1至10中任一项的化合物，其中n是0、1或2；和各R6独立地选自氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，丙基，甲氧基，乙氧基，甲氧基甲基，CF3，和OCF3。
12.根据权利要求11的化合物，其中各R6独立地选自氯和氰基。
13.根据权利要求1的化合物，其选自：
(R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
(S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
N-(((2R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-
3-甲酰胺；
N-(((2R,3S)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-
3-甲酰胺；
(R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
(R)-1-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
(R)-2-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；和(R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
14.根据权利要求1至13中任一项的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，用作药物。
15.根据权利要求1至13中任一项的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，用于在哺乳动物中治疗其中抑制USP30已知或能够显示产生有益效果的障碍或病况。
16.在哺乳动物中治疗其中抑制USP30已知或能够显示产生有益效果的障碍或病况的方法，包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的如权利要求1至13中任一项所定义的化合物，其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
17.如权利要求1至13中任一项所定义的化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗其中抑制USP30已知或能够显示产生有益效果的障碍或病况。
18.根据权利要求15的应用的化合物、根据权利要求16的方法、或根据权利要求17的用途，其中所述障碍或病况选自癌症和牵涉线粒体功能障碍的病况。
19.根据权利要求18的应用的化合物、方法或用途，其中所述牵涉线粒体功能障碍的障碍或病况选自CNS障碍；神经变性疾病；多发性硬化(MS)；线粒体肌病；脑病；乳酸性酸中毒；
似卒中发作(MELAS)综合征；Leber遗传性视神经病变(LHON)；癌症(包括乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，肺癌，肾癌，胃癌，结肠癌，睾丸癌，头颈癌，胰癌，脑癌，黑色素瘤，骨癌或组织器官的其它癌症和血液细胞癌比如淋巴瘤和白血病，多发性骨髓瘤，结直肠癌和非小细胞肺癌)；神经病；共济失调；视网膜色素变性；母系遗传性Leigh综合征(NARP-MILS)；Danon疾病；糖尿病；糖尿病性肾病；代谢性疾病；心力衰竭；导致心肌梗死的缺血性心脏病；精神病学疾病；精神分裂症；多硫酸酯酶缺乏症(MSD)；粘脂病II(ML II)；粘脂病III(ML III)；粘脂病IV(ML IV)；GMl-神经节苷脂沉积症(GM1)；神经元腊样脂褐质症(NCL1)；阿耳珀病；
Barth综合征；Beta-氧化缺陷；卡尼汀-酰基-卡尼汀缺乏症；卡尼汀缺乏症；肌酸缺乏综合征；辅酶Q10缺乏症；复合体I缺乏症；复合体II缺乏症；复合体III缺乏症；复合体IV缺乏症；
复合体V缺乏症；COX缺乏症；慢性进行性外部眼肌麻痹综合征(CPEO)；CPT I缺乏症；CPT II缺乏症；戊二酸尿类型II；Kearns-Sayre综合征；乳酸性酸中毒；长链酰基-CoA脱氢酶缺乏症(LCHAD)；Leigh病或综合征；致死性婴儿心肌病(LIC)；Luft病；戊二酸尿类型II；中链酰基-CoA脱氢酶缺乏症(MCAD)；肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(MERRF)综合征；线粒体细胞病；
线粒体隐性共济失调综合征；线粒体DNA耗尽综合征；肌神经胃肠道障碍和脑病；Pearson综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏症；丙酮酸羧化酶缺乏症；POLG突变；中链/短链3-羟基酰基-CoA脱氢酶(M/SCHAD)缺乏症；超长链酰基-CoA脱氢酶(VLCAD)缺乏症；和年龄依赖性的认知功能和肌肉强度下降。
20.根据权利要求19的应用的化合物、方法或用途，其中神经变性疾病选自帕金森病，阿尔茨海默病，肌萎缩性侧索硬化(ALS)，亨廷顿舞蹈病，缺血，卒中，具有Lewy体的痴呆，额颞性痴呆；和涉及α-突触核蛋白、parkin泛素连接酶和PINK1突变的帕金森病，parkin泛素连接酶突变的常染色体隐性青少年帕金森病(AR-JP)。
21.根据权利要求18的应用的化合物、方法或用途，其中所述癌症选自乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，肺癌，肾癌，胃癌，结肠癌，睾丸癌，头颈癌，胰癌，脑癌，黑色素瘤，骨癌，组织器官癌，血液细胞癌，淋巴瘤，白血病，多发性骨髓瘤，结直肠癌，非小细胞肺癌；其中凋亡途径失调的癌症；和其中BCL-2家族蛋白质突变或过表达或表达不足的癌症。
22.药物组合物，包含根据权利要求1至13中任一项的式(I)化合物或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
23.化合物，其选自式(IIa)，(IIIa)，(IIb)，(IIIb)，(IIc)，和(IIIc)：
其中PG是保护基团，优选BOC或CBZ，和m，n，R1，R1a，R1b，R2，R3，R4，R5，和R6如权利要求1至
16中任一项所定义，其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的盐。
具有DUB抑制剂活性的取代氰基吡咯烷
[0001] 本发明涉及一类取代的氰基吡咯烷，其具有脱泛素化酶、尤其是泛素C端水解酶30或泛素特异性肽酶30(USP30)的抑制剂活性；其用途；制备其的方法和含有所述抑制剂的组合物。这些抑制剂用于包括癌症和牵涉线粒体功能障碍的病况的各种治疗领域。
[0002] 泛素是由76个氨基酸组成的小蛋白质，其对于在细胞中调节蛋白质功能是重要的。泛素化和脱泛素化是酶促介导的过程，其使得泛素通过脱泛素化酶(DUBs)共价结合靶标蛋白质或者从靶标蛋白质裂解，人类细胞中存在大约95种DUBs，基于序列同源性划分为各子家族。USP家族的特征是其共有的Cys和His区，其含有对其DUB活性关键的Cys 和His残基。泛素化和脱泛素化过程已牵涉于许多细胞功能的调节中，包括细胞循环进展，细胞凋亡，细胞表面受体的修饰，DNA转录和DNA 修复的调节。从而，泛素系统已牵涉于许多疾病状态的发病机理中，包括炎症，病毒感染，代谢功能障碍，CNS障碍，和肿瘤生成。
[0003] 泛素是线粒体动力学的主要调节剂。线粒体是动力学细胞器，其生物起源、融合和分裂事件通过翻译后调节经由许多关键因子比如线粒体融合蛋白的泛素化来调节。虽然泛素连接酶比如parkin泛素连接酶已知使得许多线粒体蛋白质泛素化，直至最近脱泛素化酶还是难于把握。 USP30是线粒体外膜中存在的517个氨基酸的蛋白质(Nakamura et al., Mol Biol 19:1903-11,2008)。它是携带线粒体寻址信号且已显示使许多线粒体蛋白质脱泛素化的唯一脱泛素化酶。已展示的是，USP30对抗parkin 泛素连接酶介导的线粒体自噬并且USP30活性的降低能够援救线粒体自噬中parkin泛素连接酶介导的缺陷。
[0004] 线粒体功能障碍能够定义为是减少的线粒体含量(线粒体自噬或线粒体生物起源)，是氧化磷酸化和线粒体活性降低，但还是反应性氧类 (ROS)产生的调节。于是，线粒体功能障碍在很大数量的衰老过程和病理学状况中扮演角色，包括但不限于神经变性疾病(例如帕金森病(PD)，阿尔茨海默病，亨廷顿舞蹈病，肌萎缩性侧索硬化(ALS)，多发性硬化)，癌症，糖尿病，代谢性疾病，心血管病，精神病学疾病(例如精神分裂症)，和骨关节炎。
[0005] 例如，帕金森病在全世界影响大约1千万人(帕金森病基金会)并且特征是黑质中的多巴胺能神经元损失。PD的精确机理是不清楚的；然而线粒体功能障碍越来越多地被认为是PD中多巴胺能神经元易感性的关键决定因素并且是家族和散发病以及毒素诱导的帕金森症的特征。 Parkin泛素连接酶是已牵涉早期发作型PD的许多蛋白质中的一种。虽然绝大多数PD病例与α-突触核蛋白缺陷有关，10％的帕金森症病例与特定基因缺陷有关，其中之一就是泛素E3连接酶parkin泛素连接酶中的缺陷。Parkin泛素连接酶和蛋白质激酶PTEN-诱导的推定激酶1 (PINK1)合作地将受损线粒体的线粒体膜蛋白质泛素化，引起线粒体自噬。线粒体自噬失调引起增加的氧化应激，其已描述为PD的特征。因此抑制USP30可以是治疗PD的有用策略。例如，具有导致活性降低的 parkin泛素连接酶突变的PD患者能通过抑制USP30得到治疗性补偿。
[0006] 已报告的是，USP30的耗尽增强线粒体的线粒体自噬清除以及增强parkin泛素连接酶诱导的细胞死亡。USP30也已显示调节BAX/BAK- 依赖性的细胞凋亡，其独立于parkin泛素连接酶过表达。USP30的耗尽使得癌细胞对BH-3模拟物比如ABT-737敏化，而不需要parkin泛素连接酶过表达。从而，USP30的抗凋亡作用已被展示和因此USP30是抗癌疗法的潜在靶标。
[0007] 在批准蛋白酶体抑制剂硼替佐米 用于治疗多发性骨髓瘤之后，泛素-蛋白酶体系统已成为有意义的癌症治疗靶标。用硼替佐米的扩展治疗受到与其有关的毒性和药物抗性的限制。然而，靶向蛋白酶体上游的泛素-蛋白酶体途径的特定方面比如DUBs的治疗策略经预测具有更佳的耐受(Bedford et al.,Nature Rev 10:29-46,2011)。
[0008] 相应地需要化合物，其是USP30抑制剂，用于治疗其中指示抑制 USP30的适应症。
[0009] 一系列氰基取代杂环的衍生物在PCT申请WO 2016/046530，WO 2016/156816，WO 2017/009650，WO 2017/093718，WO 2017/103614， WO 2017/149313，WO 2017/109488，WO
2017/141036，WO 2017/163078，WO 2017/158381，WO 2017/158388，PCT/GB2017/052971， PCT/GB2017/052949，PCT/GB2017/052880，和PCT/GB2017/052882 公开为脱泛素化酶抑制剂。Falgueyret et al.,J.Med.Chem.2001,44, 94-104和PCT申请WO 01/77073提及氰基吡咯烷充当组织蛋白酶K和 L的抑制剂，在治疗骨质疏松症和其它骨吸收有关病况中有潜在效用。 PCT申请WO 2015/179190提及N-酰基乙醇胺水解酸酰胺酶抑制剂，在治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病中有潜在效用。PCT申请WO 2013/030218 提及喹唑啉-4-酮化合物充当泛素特异性蛋白酶比如USP7的抑制剂，在治疗癌症、神经变性疾病、炎性病症和病毒感染中有潜在效用。PCT申请WO 2015/017502和WO 2016/019237提及Bruton酪氨酸激酶的抑制剂，具有在治疗疾病比如自身免疫性疾病，炎性疾病和癌症中的潜在效用。PCT申请WO 2009/
026197，WO 2009/129365，WO 2009/129370 和WO 2009/129371提及氰基吡咯烷充当组织蛋白酶C的抑制剂，在治疗COPD中有潜在效用。美国专利申请US 2008/0300268提及多芳族化合物充当酪氨酸激酶受体PDGFR的抑制剂。
2017/141036，WO 2017/163078，WO 2017/158381，WO 2017/158388，PCT/GB2017/052971， PCT/GB2017/052949，PCT/GB2017/052880，和PCT/GB2017/052882 公开为脱泛素化酶抑制剂。Falgueyret et al.,J.Med.Chem.2001,44, 94-104和PCT申请WO 01/77073提及氰基吡咯烷充当组织蛋白酶K和 L的抑制剂，在治疗骨质疏松症和其它骨吸收有关病况中有潜在效用。 PCT申请WO 2015/179190提及N-酰基乙醇胺水解酸酰胺酶抑制剂，在治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病中有潜在效用。PCT申请WO 2013/030218 提及喹唑啉-4-酮化合物充当泛素特异性蛋白酶比如USP7的抑制剂，在治疗癌症、神经变性疾病、炎性病症和病毒感染中有潜在效用。PCT申请WO 2015/017502和WO 2016/019237提及Bruton酪氨酸激酶的抑制剂，具有在治疗疾病比如自身免疫性疾病，炎性疾病和癌症中的潜在效用。PCT申请WO 2009/
026197，WO 2009/129365，WO 2009/129370 和WO 2009/129371提及氰基吡咯烷充当组织蛋白酶C的抑制剂，在治疗COPD中有潜在效用。美国专利申请US 2008/0300268提及多芳族化合物充当酪氨酸激酶受体PDGFR的抑制剂。
[0010] 根据第一方面，本发明提供式(I)化合物，其选自(Ia)，(Ib)和(Ic)：
[0011]
[0012]
[0013] 其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，其中：
[0014] m是0至5；
[0015] n是0至5；
[0016] 各R1独立地选自卤代，氰基，羟基，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，和(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基；
[0017] R1a和R1b各自独立地选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C6)烷基， (C1-C6)烷氧基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，和(C1-C6)烷氧基 (C1-C6)烷基；
[0018] R2选自氢，(C1-C6)烷基，和(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基；
[0019] 或R1b与R2一起可以形成含有1至2个杂原子的5至6元杂环，所述杂原子独立选自N、O和S，其中至少一个是N；其中所述杂环可以任选进一步用1至4个取代基取代，所述取代基独立选自卤代，氰基，羟基，氧代，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷基，和卤代(C1-C6)烷氧基；
[0020] R3和R4各自独立地选自氢，氰基，和(C1-C6)烷基；或R3和R4一起形成3至6元环烷基环；
[0021] R5选自氢，卤代，氰基，羟基，氧代，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，NH(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)2，C(O)NH(C1-C6)烷基，C(O)N((C1-C6) 烷基)2，NHC(O)(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)C(O)(C1-C6)烷基)， C(O)(C1-C6)烷基，C(O)O(C1-C6)烷基，CO2H，CONH2，SO2NH(C1-C6) 烷基，和SO2N((C1-C6)烷基)2；和
[0022] 各R6独立地选自卤代，氰基，羟基，氧代，(C1-C6)烷基，(C1-C6) 烷氧基，(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷基，卤代(C1-C6)烷氧基，NH(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)2，C(O)NH(C1-C6)烷基， C(O)N((C1-C6)烷基)2，NHC(O)(C1-C6)烷基，N((C1-C6)烷基)C(O)(C1-C6) 烷基)，C(O)(C1-C6)烷基，C(O)O(C1-C6)烷基，CO2H，CONH2， SO2NH(C1-C6)烷基，和SO2N((C1-C6)烷基)2。
[0023] 除非另有指定，烷基和烷氧基(包括相应二价残基)可以是直链或支化的并且含有1至6个碳原子和一般1至4个碳原子。烷基的实例包括甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，异丁基，仲丁基，戊基和己基。烷氧基的实例包括甲氧基，乙氧基，异丙氧基和正丁氧基。环烷基包括例如环丙基。
[0024] 卤代意指氟，氯，溴或碘，尤其是氟或氯。卤代烷基和卤代烷氧基可以含有一个或多个卤代取代基。实例是三氟甲基和三氟甲氧基。杂环可以是饱和的或部分不饱和的。
[0025] 除非另有指定，术语"取代的"意指被一个或多个定义的基团取代。在基团可以选自多于一个备择对象的情况下，所选基团可以是相同或不同的。术语"独立地"意指在多于一个取代基选自多于一种可能取代基的情况下，那些取代基可以是相同或不同的。
[0026] 用于本发明的式(I)化合物的优选实施方式定义如下。
[0027] 优选，m选自0，1，2，3和4。
[0028] 更优选，m是0，1或2。
[0029] 还更优选，m是0或1。
[0030] 最优选，m是0。
[0031] 优选，n选自0，1，2，3和4。
[0032] 更优选，n是0，1或2。
[0033] 最优选，n是1或2。
[0034] 优选地，各R1独立地选自卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3) 烷氧基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3) 烷基；
[0035] 更优选，各R1独立地选自氯，氟，甲基，乙基，和甲氧基。
[0036] 最优选，R1是甲基。
[0037] 优选，R1a选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基。
[0038] 更优选，R1a选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，甲氧基，和甲氧基甲基。
[0039] 还更优选，R1a选自氢和氟。
[0040] 最优选，R1a是氢。
[0041] 在一种优选实施方式中，其中R1b和R2独立地是：
[0042] 优选，R1b选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基。
[0043] 更优选，R1b选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，甲氧基，和甲氧基甲基。
[0044] 还更优选，R1b选自氢，和甲基。
[0045] 最优选，R1b是氢。
[0046] 优选，R2选自氢，(C1-C3)烷基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基。
[0047] 更优选，R2选自氢，甲基，乙基，丙基，和甲氧基乙基。
[0048] 还更优选，R2选自氢，甲基，和乙基。
[0049] 最优选，R2选自氢和甲基。
[0050] 在又一优选实施方式中，R1b与R2一起形成含有1至2个杂原子的5至6元杂环，所述杂原子独立选自N、O和S，其中至少一个是N；
[0051] 其中所述杂环可以任选进一步用1至4个和优选1至2个取代基取代，所述取代基独立选自氟，氯，氰基，羟基，氧代，甲基，和甲氧基。
[0052] 更优选，R1b与R2一起形成含有1个氮原子的5至6元杂环；
[0053] 其中所述杂环可以任选进一步用1至2个取代基取代，所述取代基独立选自氟，氯，氰基，羟基，氧代，甲基，和甲氧基。最优选，所述杂环可以任选进一步用1至2个取代基取代，所述取代基独立选自氟，氧代，和甲基。
[0054] 优选，R3和R4各自独立地选自氢，氰基，甲基，乙基，和丙基；或R3和R4一起形成环丙基环。
[0055] 更优选，R3选自氢和甲基。
[0056] 最优选，R3是氢。
[0057] 更优选，R4选自氢，氰基和甲基。
[0058] 最优选，R4是氢。
[0059] 优选，R5选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基， NH(C1-C3)烷基，N((C1-C3)烷基)2，C(O)NH(C1-C3)烷基，C(O)N((C1-C3) 烷基)2，NHC(O)(C1-C3)烷基，N((C1-C3)烷基)C(O)(C1-C3)烷基)， C(O)(C1-C3)烷基，C(O)O(C1-C3)烷基，CO2H，CONH2，SO2NH(C1-C3) 烷基，和SO2N((C1-C3)烷基)2。
[0060] 更优选，R5选自氢，氯，氟，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3) 烷氧基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷基，和卤代(C1-C3) 烷氧基。
[0061] 还更优选，R5选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，丙基，甲氧基，乙氧基，和甲氧基甲基。
[0062] 最优选，R5选自氢和甲基。
[0063] 优选，各R6独立地选自卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3) 烷氧基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基，NH(C1-C3)烷基，N((C1-C3)烷基)2，C(O)NH(C1-C3)烷基， C(O)N((C1-C3)烷基)2，NHC(O)(C1-C3)烷基，N((C1-C3)烷基)C(O)(C1-C3) 烷基)，C(O)(C1-C3)烷基，C(O)O(C1-C3)烷基，CO2H，CONH2， SO2NH(C1-C3)烷基，和SO2N((C1-C3)烷基)2。
[0064] 更优选，各R6独立地选自氯，氟，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3) 烷氧基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷基，和卤代(C1-C3) 烷氧基。
[0065] 还更优选，各R6独立地选自氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，丙基，甲氧基，乙氧基，甲氧基甲基，CF3，和OCF3。
[0066] 最优选，各R6独立地选自氯和氰基。
[0067] 根据本发明第一方面的一种特别优选的实施方式，式(I)化合物是式(Ia)化合物：
[0068]
[0069] 其中m，n，R1，R1a，R1b，R2，R3，R4，R5，和R6如本发明第一方面和其优选实施方式中定义；其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0070] 根据本发明第一方面的优选实施方式的一种实例，式(I)化合物是式(Ia)化合物，其中：
[0071] m是0、1或2；
[0072] n是0、1或2；
[0073] 各R1独立地选自卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基；
[0074] R1a选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基；
[0075] R1b选自氢，卤代，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基，卤代(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷氧基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基；
[0076] R2选自氢，(C1-C3)烷基，和(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基；
[0077] 或R1b与R2一起可以形成含有1至2个杂原子的5至6元杂环，所述杂原子独立选自N、O和S，其中至少一个是N；
[0078] 所述杂环可以任选进一步用1至4个和优选1至2个取代基取代，所述取代基独立选自氟，氯，氰基，羟基，氧代，甲基，和甲氧基；
[0079] R3和R4各自独立地选自氢，氰基，甲基，乙基，和丙基；或R3和R4一起形成环丙基环；
[0080] R5选自氢，氯，氟，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基， (C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷基，和卤代(C1-C3)烷氧基；和
[0081] 各R6独立地选自氯，氟，氰基，羟基，(C1-C3)烷基，(C1-C3)烷氧基，(C1-C3)烷氧基(C1-C3)烷基，卤代(C1-C3)烷基，和卤代(C1-C3)烷氧基；
[0082] 其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0083] 根据本发明第一方面的更优选实施方式的又一实例，式(I)化合物是式(Ia)化合物，其中：
[0084] m是0或1；
[0085] n是1或2；
[0086] R1选自氯，氟，甲基，乙基，和甲氧基；
[0087] R1a选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，甲氧基，和甲氧基甲基；
[0088] R1b选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，甲氧基，和甲氧基甲基；
[0089] R2选自氢，甲基，乙基，丙基，和甲氧基乙基；
[0090] 或R1b与R2一起形成含有1个氮原子的5至6元杂环；
[0091] 所述杂环可以任选进一步用1至2个取代基取代，所述取代基独立选自氟，氯，氰基，羟基，氧代，甲基，和甲氧基；
[0092] R3和R4各自独立地选自氢，氰基，甲基，乙基，和丙基；或R3和R4一起形成环丙基环；
[0093] R5选自氢，氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，丙基，甲氧基，乙氧基，和甲氧基甲基；和[0094] 各R6独立地选自氯，氟，氰基，羟基，甲基，乙基，丙基，甲氧基，乙氧基，甲氧基甲基，CF3，和OCF3；
[0095] 其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0096] 根据本发明第一方面的还更优选实施方式的又一实例，式(I)化合物是式(Ia)化合物，其中：
[0097] m是0或1；
[0098] n是1或2；
[0099] R1是甲基；
[0100] R1a选自氢和氟；
[0101] R1b选自氢和甲基；
[0102] R2选自氢和甲基；
[0103] R3选自氢和甲基；
[0104] R4选自氢，氰基和甲基；
[0105] R5选自氢和甲基；和
[0106] 各R6独立地选自氯和氰基；
[0107] 其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0108] 根据本发明第一方面的又一特别优选实施方式，式(I)化合物是式 (Ib)化合物：
[0109]
[0110] 其中m，n，R1，R1a，R1b，R2，R3，R4，R5，和R6如本发明第一方面和其优选实施方式中定义；其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0111] 式(Ib)化合物优选实施方式的实例对应式(Ia)化合物优选实施方式的上述实例。
[0112] 根据本发明第一方面的又一特别优选实施方式，式(I)化合物是式 (Ic)化合物：
[0113]
[0114] 其中m，n，R1，R1a，R1b，R2，R3，R4，R5和R6如本发明第一方面和其优选实施方式中定义；其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0115] 式(Ic)化合物优选实施方式的实例对应式(Ia)化合物优选实施方式的上述实例。
[0116] 本发明所用的优选式(I)化合物选自：
[0117] 1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0118] (R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3- 甲酰胺；
[0119] (S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3- 甲酰胺；
[0120] 1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0121] (R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4- 三唑-3-甲酰胺；
[0122] (S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4- 三唑-3-甲酰胺；
[0123] N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0124] (R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0125] (S)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0126] N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0127] N-(((2R,3S)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0128] N-(((2S,3S)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0129] N-(((2S,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0130] N-(((2R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(实施例4)；
[0131] N-(((2S)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺；
[0132] 1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
[0133] (R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4- 甲酰胺；
[0134] (S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4- 甲酰胺；
[0135] 1-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
[0136] (R)-1-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
[0137] (S)-1-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
[0138] 2-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
[0139] (R)-2-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；和
[0140] (S)-2-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺；
[0141] 其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0142] 本发明所用的最优选式(I)化合物选自：
[0143] (R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3- 甲酰胺(实施例1)；
[0144] (S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4- 三唑-3-甲酰胺(实施例2)；
[0145] N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(实施例3)；
[0146] N-(((2R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(实施例4)；
[0147] N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(实施例4的非对映异构体)；
[0148] N-(((2R,3S)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(实施例4的非对映异构体)；
[0149] (R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4- 甲酰胺(实施例5)；
[0150] (R)-1-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(实施例6)；
[0151] (R)-2-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(实施例7)；和
[0152] (R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺 (实施例8)；
[0153] 其互变异构体，或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0154] 式(I)化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成和碱盐(包括二- 盐)。
[0155] 适宜的酸加成盐形成自形成非毒性盐的酸。实例包括乙酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，碳酸氢盐/碳酸盐，硫酸氢盐，樟脑磺酸盐，柠檬酸盐，乙二磺酸盐，乙磺酸盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，葡糖酸盐，葡糖醛酸盐，羟苯酰苯酸盐，盐酸盐/氯化物，氢溴酸盐/溴化物，氢碘酸盐/碘化物，磷酸氢盐，羟乙基磺酸盐，D-和L-乳酸盐，苹果酸盐，马来酸盐，丙二酸盐，甲磺酸盐，甲基硫酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，乳清酸盐，棕榈酸盐，磷酸盐，糖质酸盐，硬脂酸盐，琥珀酸盐硫酸盐，D-和L-酒石酸盐，和甲苯磺酸盐。
[0156] 适宜的碱盐形成自形成非毒性盐的碱。实例包括铝盐，铵盐，精氨酸盐，N,N'-二苄基乙二胺盐，钙盐，胆碱盐，二乙胺盐，二乙醇胺盐，甘氨酸盐，赖氨酸盐，镁盐，葡甲胺盐，乙醇胺盐，钾盐，钠盐，氨丁三醇盐和锌盐。
[0157] 适宜盐的综述可参见Stahl and Wermuth,Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,Wiley-VCH, Weinheim,Germany(2002)。
[0159] 按照本发明的药物可接受的溶剂化物包括水合物和溶剂化物，其中结晶溶剂可以是同位素取代的，例如D2O、丙酮-d6、DMSO-d6。
[0160] 本发明范围还包括包合物、药物-主体包合配合物，其中与前述溶剂化物不同的是药物和主体以非化学计量的量存在。复合物综述可参见 J.Pharm Sci,64(8),1269-1288by Haleblian(August 1975)。
[0161] 下文全部提及式(I)化合物之处都包括其盐和式(I)化合物及其盐的溶剂化物和包合物。
[0162] 本发明包括前文定义的式(I)化合物的全部多晶型物。
[0163] 本发明范围还包括式(I)化合物的所谓"前药"。从而，式(I)化合物的不具有或几乎不具有药理学活性的某些衍生物本身能够在给药至体内或体表后代谢的情况下产生具有希望活性的式(I)化合物。这种衍生物称为"前药"。
[0164] 按照本发明的前药能够例如制备如下：将式(I)化合物中存在的适当官能团替换为本领域技术人员已知为"前药部分"的某些部分，描述于例如"Design of Prodrugs"by H Bundgaard(Elsevier,1985)。
[0165] 最终，某些式(I)化合物可以本身充当其它式(I)化合物的前药。
[0166] 式(I)化合物的含有氮原子的某些衍生物还可以形成相应N-氧化物，并且所述化合物在本发明范围以内。
[0167] 含有一个或多个不对称碳原子的式(I)化合物能够作为两个或更多个旋光异构体存在。在式(I)化合物含有烯基或亚烯基的情况下，可能存在几何顺式/反式(或Z/E)异构体，而在化合物含有例如酮基或肟基团的情况下，可以发生互变异构现象('互变异构')。从而，单个化合物可以展示多于一种类型的异构现象。
[0168] 本发明范围内包括式化合物的全部旋光异构体、几何异构体和互变异构体形式，包括展示多于一种类型异构现象的化合物，及其一种或多种的混合物。
[0169] 顺式/反式异构体可以通过本领域技术人员熟知的常规技术例如分步结晶和色谱法来分离。
[0170] 制备/分离单独对映体的常规技术包括从适宜光学纯前体手性合成或者用例如手性高效液相色谱(HPLC)拆分外消旋体(或盐或衍生物的外消旋体)。另选地，外消旋体(或外消旋前体)可以与适宜的光学活性化合物例如醇反应，或在其中式(I)化合物含有酸性或碱性部分的情况下与碱或酸比如1-苯基乙基胺或酒石酸反应。所得非对映体的混合物可以通过色谱和/或分步结晶来分离和非对映异构体之一或者两种通过技术人员熟知的手段转化为相应纯对映体。本发明手性化合物(及其手性前体)可以以富对映体形式获得，使用色谱法、一般是HPLC，在不对称树脂上进行，流动相组成是烃、一般是庚烷或己烷，含有0至50％体积异丙醇，一般2％至20％和0至5％体积的烷基胺、一般是0.1％二乙胺。浓缩洗脱物提供富集的混合物。本发明包括式(I)化合物的全部晶型，包括外消旋体和其外消旋混合物(混合体)。立体异构混合体可以通过本领域技术人员已知的常规技术分离-参见例如"Stereochemistry of Organic Compounds"by E.L.Eliel and S.H.Wilen(Wiley,New York,1994)。
[0171] 尤其是，式(I)化合物含有在被R1a取代的吡咯烷环碳原子位置的手性中心，从而所述立体中心能够以(R)或(S)构型存在。立体异构体绝对构型(R)和(S)的命名按照IUPAC命名，其取决于取代基的性质和序列规则程序的应用。式(I)化合物从而可以以下述对映体构型之一存在：
[0172]
[0173] 在优选方面，式(I)化合物具有绝对立体化学构型：
[0174]
[0175] 在又一优选的方面，式(I)化合物具有绝对立体化学构型：
[0176]
[0177] 本发明范围包括式(I)化合物的各自这些(R)和(S)立体异构体，呈单独形式；式(I)(i)，式(I)(ii)，或其混合物。在式(I)化合物分离为单个立体异构体的情况下，化合物可以以至少80％，优选至少90％，更优选至少 95％，例如96％、97％、98％、99％或100％的对映体过量存在。
[0178] 本发明也包括式(I)化合物的全部药学上可接受的同位素变型。同位素变型定义为其中至少一个原子被具有相同原子数但原子质量不同于自然界通常存在的原子质量的原子替换。
[0179] 适于包含入本发明化合物的同位素的实例包括氢同位素比如2H和3H，碳同位素比如13C和14C，氮同位素比如15N，氧同位素比如17O和18O，磷同位素比如32P，硫同位素比如35S，氟同位素比如18F，和氯同位素比如36Cl。
[0181] 式(I)化合物的某些同位素变型，例如掺入放射性同位素的那些，用于药物和/或底物组织分布研究。放射性同位素氚和14C对于该目的特别有用，原因是它们易于掺入和便于检测。
[0182] 式(l)化合物的同位素变型能够一般通过本领域技术人员已知的常规技术制备或通过与所附实施例和制备例中描述的那些类似的方法用适宜试剂的适当同位素变型制备。
[0183] 式(I)化合物是脱泛素化酶USP30的抑制剂。
[0184] 根据又一方面，本发明提供如本文所定义的式(I)化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，用作药物。
[0185] 根据又一方面，本发明提供在哺乳动物中治疗其中抑制USP30已知或能够显示产生有益效果的障碍或病况的方法，包括向所述哺乳动物给药治疗有效量的如本文所定义的式(I)化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐。
[0186] 根据又一方面，本发明提供如本文所定义的式(I)化合物、其互变异构体、或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗其中抑制USP30已知或能够显示产生有益效果的障碍或病况。
[0187] 得益于USP30活性的障碍或病况选自牵涉线粒体功能障碍的病况和癌症。
[0188] 在本发明全部方面的一个优选实施方式中，得益于USP30活性的障碍或病况是牵涉线粒体功能障碍的病况。
[0189] 线粒体缺陷导致线粒体功能障碍，线粒体是存在于除了红血细胞以外的每一种细胞体内的专门腔室。在线粒体失效的情况下，细胞内产生越来越少的能量并且随之而来的是细胞损伤或甚至细胞死亡。如果该过程在整个身体中重复，则该过程所发生于其中的受试者的生命受到严重危害。线粒体疾病最通常出现在能量要求很高的器官比如脑、心脏、肝、骨骼肌肉、肾和内分泌系统和呼吸系统中。
[0190] 牵涉线粒体功能障碍的病况可以选自牵涉线粒体自噬缺陷的病况，牵涉线粒体DNA突变的病况，牵涉线粒体氧化应激的病况，牵涉线粒体膜电势缺陷的病况，线粒体生物起源，牵涉线粒体形状或形态缺陷的病况，和牵涉溶酶体贮藏缺陷的病况。
[0191] 尤其是，牵涉线粒体功能障碍的病况可以选自神经变性疾病；多发性硬化(MS)；线粒体肌病；脑病；乳酸性酸中毒；似卒中发作(MELAS) 综合征；Leber遗传性视神经病变(LHON)；癌症(包括例如乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，肺癌，肾癌，胃癌，结肠癌，睾丸癌，头颈癌，胰癌，脑癌，黑色素瘤，骨癌或组织器官的其它癌症和血液细胞癌比如淋巴瘤和白血病，多发性骨髓瘤，结直肠癌，和非小细胞肺癌)；神经病，共济失调，视网膜色素变性，母系遗传性Leigh综合征(NARP-MILS)；Danon 病；糖尿病；糖尿病性肾病；代谢性疾病；心力衰竭；导致心肌梗死的缺血性心脏病；精神病学疾病例如精神分裂症；多硫酸酯酶缺乏症 (MSD)；粘脂病II(ML II)；粘脂病III(ML III)；粘脂病IV(ML IV)； GMl-神经节苷脂沉积症(GM1)；神经元腊样脂褐质症(NCL1)；阿耳珀病； Barth综合征；Beta-氧化缺陷；卡尼汀-酰基-卡尼汀缺乏症；卡尼汀缺乏症；肌酸缺乏综合征；辅酶Q10缺乏症；复合体I缺乏症；复合体II 缺乏症；复合体III缺乏症；复合体IV缺乏症；复合体V缺乏症；COX 缺乏症；慢性进行性外部眼肌麻痹综合征(CPEO)；CPT I缺乏症；CPT II缺乏症；戊二酸尿类型II；Kearns-Sayre综合征；乳酸性酸中毒；长链酰基-CoA脱氢酶缺乏症(LCHAD)；Leigh病或综合征；致死性婴儿心肌病(LIC)；Luft病；戊二酸尿类型II；中链酰基-CoA脱氢酶缺乏症 (MCAD)；肌阵挛性癫痫伴破碎红纤维(MERRF)综合征；线粒体细胞病；线粒体隐性共济失调综合征；线粒体DNA耗尽综合征；肌神经胃肠道障碍和脑病；Pearson综合征；丙酮酸脱氢酶缺乏症；丙酮酸羧化酶缺乏症；POLG突变；中链/短链3-羟基酰基-CoA脱氢酶(M/SCHAD)缺乏症；超长链酰基-CoA脱氢酶(VLCAD)缺乏症；和年龄依赖性的认知功能和肌肉强度下降。
[0192] 牵涉线粒体功能障碍的病况可以是CNS障碍，例如神经变性疾病。
[0193] 神经变性疾病包括但不限于帕金森病，阿尔茨海默氏病，肌萎缩性侧索硬化(ALS)，亨廷顿舞蹈病，缺血，卒中，具有Lewy体的痴呆，和额颞性痴呆。
[0194] 尤其是，本发明化合物可以用于治疗帕金森病，包括但不限于涉及α-突触核蛋白、parkin泛素连接酶和PINK1中突变的PD，其中parkin 泛素连接酶突变的常染色体隐性青少年帕金森病(AR-JP)。
[0195] 在用于治疗牵涉线粒体功能障碍的病况的情况下，本发明化合物或如本文描述的其药物组合物可以与一种或多种额外试剂相组合。化合物可以与一种或多种额外试剂相组合，所述试剂选自左旋多巴，多巴胺激动剂，一氨基加氧酶(MAO)B抑制剂，儿茶酚O-甲基转移酶(COMT) 抑制剂，抗胆碱能药，利鲁唑，金刚烷胺，胆碱酯酶抑制剂，美金刚，丁苯那嗪，抗精神病药，地西泮，氯硝西泮，抗抑郁药，和抗惊厥药。
[0196] 在本发明全部方面的又一优选实施方式中，得益于USP30活性的障碍或病况是癌症。癌症可以与线粒体功能障碍有关联。优选的癌症包括例如乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，肺癌，肾癌，胃癌，结肠癌，睾丸癌，头颈癌，胰癌，脑癌，黑色素瘤，骨癌或组织器官的其它癌症和血液细胞癌比如淋巴瘤和白血病，多发性骨髓瘤，结直肠癌，和非小细胞肺癌。
[0197] 尤其是，本发明化合物可以用于治疗其中凋亡途径失调的癌症和更特别是其中BCL-2家族蛋白质突变、或过表达或表达不足的癌症。
[0198] 提及‘治疗’之处包括治愈性、治标性和预防性，和包括针对命名障碍或病况改善、减轻症状，暂时或持久消除症状起因，或预防或减缓症状出现的手段。本发明化合物用于治疗人类和其它哺乳动物。
[0199] 根据又一方面，本发明提供药物组合物，包含如本文所定义的式(I) 化合物或所述化合物或互变异构体的药学上可接受的盐，以及药学上可接受的稀释剂或载体。
[0200] 本发明药物组合物包含任何本发明化合物和与之组合的任何药学上可接受的载体，助剂或媒介物。药学上可接受的载体的实例是本领域技术人员已知的和包括但不限于防腐剂，填料，崩解剂，润湿剂，乳化剂，助悬剂，甜味剂，矫味剂，芳香剂，抗菌剂，抗真菌剂，润滑剂和分散剂，取决于给药模式和剂型的性质。组合物可以呈例如下述形式：片剂，胶囊，粉末，颗粒，酏剂，糖锭，栓剂，糖浆剂和包括悬浮液和溶液的液体制剂。术语"药物组合物"在本发明的上下文中意指组合物，包含活性剂和额外包含一种或多种药学上可接受的载体。组合物可以还含有选自例如下述的成分：稀释剂，助剂，赋形剂，媒介物，防腐剂，填料，崩解剂，润湿剂，乳化剂，助悬剂，甜味剂，矫味剂，芳香剂，抗菌剂，抗真菌剂，润滑剂和分散剂，取决于给药模式和剂型的性质。
[0201] 本发明化合物或如本文描述的其药物组合物，可以单独或与一种或多种额外药物试剂组合使用。化合物可以与额外的抗肿瘤治疗剂例如化疗药或其它调节蛋白的抑制剂相组合。在一种实施方式中，额外的抗肿瘤治疗剂是BH-3模拟物。在又一实施方式中，BH-3模拟物可以选自但不限于ABT-737，ABT-199，ABT-263和奥巴克拉中的一种或多种。在又一实施方式中，额外的抗肿瘤试剂是化疗药剂。化疗药剂可以选自但不限于奥拉帕尼，丝裂霉素C，顺铂，卡铂，奥沙利铂，离子化辐射(IR)，喜树碱，伊立替康，托泊替康，替莫唑胺，紫杉类药物，5-氟嘧啶，吉西他滨，和多柔比星。
[0202] 本发明药物组合物可以以任何适宜有效的方式给予，比如口服，肠胃外，局部，吸入，鼻内，直肠，阴道内，眼和andial。适于递送本发明化合物的药物组合物和及其制备方法将对本领域技术人员来说是明显的。所述组合物和及其制备方法可以参见例如"Remington's Pharmaceutical Sciences",19th Edition(Mack Publishing Company, 1995)。
[0203] 口服给药
[0204] 本发明化合物可以口服给予。口服给药可以牵涉吞咽，从而化合物进入胃肠道，或可以使用颊给药或舌下给药，从而化合物直接从口进入血流。
[0206] 液体配制剂包括悬浮液，溶液，糖浆剂和酏剂。所述配制剂可以用作软胶囊或硬胶囊中的填料和一般包含载体例如水、乙醇、丙二醇、甲基纤维素或适宜的油，和一种或多种乳化剂和/或助悬剂。液体配制剂还可以通过例如从小袋重构固体来制备。
[0207] 本发明化合物还可以用于快速溶解，快速崩解剂型中比如描述于 Expert Opinion in Therapeutic Patents,11(6),981-986by Liang and Chen(2001)的那些。
[0209] 适于口服给药的赋形剂的实例包括载体，例如纤维素、碳酸钙、磷酸氢钙、甘露醇和枸橼酸钠，造粒粘合剂，例如聚乙烯吡咯烷、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素和明胶，崩解剂，例如羟乙酸淀粉钠和硅酸盐，润滑剂，例如硬脂酸镁和硬脂酸，润湿剂，例如月桂基硫酸钠，防腐剂，抗氧化剂，调味剂和着色剂。
[0210] 口服给药的固体配制剂可以配制以立即释放和/或调节释放。调节释放配制剂包括延缓、维持、脉冲、受控双重、靶向和程序释放。适宜的调节释放技术的细节比如高能分散、渗透和包覆的颗粒可参见Verma et al,Pharmaceutical Technology On-line,25(2),1-14(2001)。其它调节释放配制剂描述于US专利号6,106，864。
[0211] 肠胃外给药
[0212] 本发明化合物还可以直接给予至血流、至肌肉或至内脏器官。肠胃外给药的适宜手段包括静脉内，动脉内，腹腔内，鞘内，心/脑室内，尿道内，胸骨内，颅内，肌内和皮下。肠胃外给药的适宜装置包括针(包括显微针)注射器，无针式注射器和输注技术。
[0213] 肠胃外配制剂一般是水溶液，其可以含有赋形剂比如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选缓冲至pH 3至9)，但是对于某些应用，它们可以更适宜地配制为无菌非水溶液或干燥形式从而与适宜媒介物比如无菌、无热原水结合使用。
[0214] 在无菌条件下例如通过冻干制备肠胃外配制剂，可以用本领域技术人员熟知的标准药物技术容易地实现。
[0215] 用于制备肠胃外溶液的式(I)化合物的溶解度可以通过适宜处理增加，例如使用高能喷雾-干燥分散液(参见WO 01/47495)和/或使用适当的配制技术比如使用溶解度-增强剂。
[0216] 用于肠胃外给药的配制剂可以配制以立即释放和/或调节释放。调节释放配制剂包括延缓、维持、脉冲、受控双重、靶向和程序释放。
[0217] 本发明药物组合物也包括组合物和方法，其在本领域中已知绕过血脑屏障或能够直接注射至脑中。适宜的注射区域包括大脑皮质，小脑，中脑，脑干，下丘脑，脊髓和室组织，和PNS区域包括颈动脉体和肾上腺髓质。
[0218] 剂量
[0219] 化合物有效剂量的大小当然随着待治疗病况的严重性和给药途径而变化。适当剂量的选择属于医师的能力。日剂量范围是约10μg至约 100mg每kg人类和非人类动物体重，和通常可以是约10μg至30mg每 kg体重每剂。上述剂量可以每天给予1次至3次。
[0220] 例如，口服给药可以需要5mg至1000mg比如5至500mg的总日剂量，而静脉内给药可以仅需要0.01至30mg/kg体重比如0.1至10 mg/kg体重更优选0.1至1mg/kg体重。总日剂量可以以单次给药或分开给药给予。
[0221] 技术人员也将理解，在某些病况的治疗中，本发明化合物可以"视需要"(也即需要或希望)按单次给药服用。
[0222] 合成方法
[0223] 式(I)化合物可以用下文一般反应方案和代表性实施例描述的方法制备。视情况，方案中的单个转化可以以不同顺序完成。
[0224] 根据又一方面，本发明提供制备如本文所定义的式(I)化合物[(Ia)， (Ib)，(Ic)]的方法，包括视情况将式(IVa)，(IVb)或(IVc)化合物，其中X 是OH与式(V)胺反应，其中PG是保护基团比如BOC或CBZ，提供式 (IIIa)，(IIIb)或(IIIc)酰胺(方案1)。该酰胺-偶联反应能够用标准方法例如通过使用偶联试剂比如DCC，HATU，HBTU，EDC或经由混合酸酐的反应进行。另选地，酸(IVa)，(IVb)或(IVc)，其中X是OH，能够用 SOCl2，PCl3或PCl5转化为酰氯(IVa)，(IVb)或(IVc)，其中X是Cl，其能够然后与胺(V)反应，优选在适宜溶剂中在适宜碱存在下进行。另选地，化合物(IVa)，(IVb)或(IVc)，其中X形成酯，能够直接与胺(V)反应，优选在适宜溶剂中进行。
[0225] 额外地，一种式(IIIa)，(IIIb)或(IIIc)化合物可以被转化为又一式 (IIIa)，(IIIb)或(IIIc)化合物，例如经由溴-芳基或溴-杂芳基Suzuki偶联进行。式(IIIa)，(IIIb)或(IIIc)化合物可以用标准方法脱保护提供胺(IIa)， (IIb)或(IIc)，其可以然后与溴化氰反应提供相应的式(I)化合物。方案1 举例说明可以使用的一种方法，其适用于用式(IVa)化合物制备式(Ia)化合物，也同样适用于用适当的相应式(IVb)和(IVc)化合物制备式(Ib)和式 (Ic)化合物。
[0226]
[0227] 在又一方面，本发明提供化合物，其选自式(IIa)，(IIIa)，(IIb)， (IIIb)，(IIc)和(IIIc)：
[0228]
[0229]
[0231] 在进一步优选的方面，本发明提供化合物，其选自如本文描述的式 (IIa)，(IIIa)，(IIb)，(IIIb)，(IIc)和(IIIc)，其绝对立体化学构型对应式 (I)化合物，及其优选实施方式。
[0232] 额外的代表性化合物和其立体异构体，外消旋混合物，非对映体和对映体可以用中间体制备，所述中间体按照本领域技术人员已知的一般方案和其它物质、化合物和试剂制备。对映体可以用标准技术比如手性 HPLC，例如柱CHIRALART SA 250x4.6mm 5μm分离。
[0233] 本发明通过下述非限制性实例说明，其中使用下述缩写和定义。
[0234] 缩写
[0235] ACN 乙腈
[0236] d 二重峰(NMR信号)
[0237] DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯
[0238] DCM 二氯甲烷
[0239] DIPEA N,N-二异丙胺
[0240] DMF N,N-二甲基甲酰胺
[0241] DMS 二甲基硫醚
[0242] DMSO 二甲亚砜
[0243] EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
[0244] ES 电喷雾
[0245] EtOAc 乙酸乙酯
[0246] h 小时
[0247] HATU 1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
[0248] LCMS 液相色谱-质谱
[0249] m 多重峰(NMR信号)
[0250] MeOH 甲醇
[0251] min 分钟
[0252] NMR 核磁共振
[0253] rt 室温
[0254] s 单峰(NMR信号)
[0256] TBD 1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]癸-5-烯
[0257] TFA 三氟乙酸
[0258] THF 四氢呋喃
[0259] 分析方法
[0260] LCMS方法：
[0261]
[0262]
[0263]
[0264]
[0265]
[0266]
[0267] 长时间LCMS方法：
[0268]
[0269]
[0270]
[0271]
[0272]
[0273] 实施例1
[0274] (R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3- 甲酰胺
[0275]
[0276] 步骤a.在室温向搅拌的3-碘苄腈(0.500g，2.18mmol)和1H-1,2,4- 三唑-3-羧酸甲酯(CAS号4928-88-5；0.277g，2.18mmol)的DMSO(6mL) 溶液加入L-脯氨酸(0.050g，0.44mmol)，Cu(I)I(0.083g，0.44mmol) 和K2CO3(0.602g，4.34mmol)。溶液在80℃加热18小时。反应混合物冷却至室温，倾至冰冷水(100mL)中并用EtOAc(4x 50mL)萃取。经合并的有机萃取物在无水硫酸钠上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(化合物在
35％EtOAc/己烷中洗脱)产生1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(0.105g，
0.46mmol)。LCMS：方法H， 1.517分钟，MS：ES+229.19。
35％EtOAc/己烷中洗脱)产生1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(0.105g，
0.46mmol)。LCMS：方法H， 1.517分钟，MS：ES+229.19。
[0277] 步骤b.在0℃向搅拌的1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯 (0.100g，0.44mmol)和(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS号 199174-29-3；0.106g，
0.53mmol)的THF(4mL)溶液加入1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]癸-5-烯(CAS号5807-14-7；
0.092g，0.66mmol)的THF(1mL) 溶液。所得混合物在室温搅拌18h。反应混合物倾至水中(50mL)并用 EtOAc(2x 50mL)萃取。合并的有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤和减压浓缩。
残余物通过快速柱色谱法纯化(化合物在5％MeOH/DCM中洗脱)产生(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)-吡咯烷 -1-羧酸叔丁酯。(0.083g，0.21mmol)，LCMS：方法H，1.789分钟， MS：ES+[M-100]297.26。
0.53mmol)的THF(4mL)溶液加入1,5,7-三氮杂二环[4.4.0]癸-5-烯(CAS号5807-14-7；
0.092g，0.66mmol)的THF(1mL) 溶液。所得混合物在室温搅拌18h。反应混合物倾至水中(50mL)并用 EtOAc(2x 50mL)萃取。合并的有机层在无水硫酸钠上干燥，过滤和减压浓缩。
残余物通过快速柱色谱法纯化(化合物在5％MeOH/DCM中洗脱)产生(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)-吡咯烷 -1-羧酸叔丁酯。(0.083g，0.21mmol)，LCMS：方法H，1.789分钟， MS：ES+[M-100]297.26。
[0278] 步骤c.在0℃向搅拌的(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)-甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.075g，0.189mmol)的DCM(4mL) 溶液加入TFA(0.37mL)和搅拌1.5小时。减压蒸除挥发物和残余物与 DCM(3x 50mL)共沸蒸馏和在高真空下干燥，产生(S)-1-(3-氰基苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺TFA盐，0.110g，粗制。 LCMS：方法H，1.331分钟，MS：ES+297.26。
[0279] 步骤d.在0℃向搅拌的(S)-1-(3-氰基苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺TFA盐(0.100g，来自先前步骤的粗制物)的 THF(5mL)溶液加入K2CO3(0.100g，0.73mmol)。在0℃搅拌15分钟之后，加入溴化氰(0.026g，0.24mmol)和再继续搅拌1小时。所得混合物倾至水中(50mL)和用EtOAc(2x 50mL)萃取。经合并的有机萃取物在无水硫酸钠上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化 (化合物在95％EtOAc/己烷中洗脱)产生(R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.030g，0.09mmol)。LCMS：方法J，2.767分钟，MS：ES-320.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm： 9.49(s，1H)，8.93-8.96(t，J＝6.0Hz，1H)，8.44(s，1H)，8.23-8.25 (m，1H)，7.93-
7.95(d，J＝7.6Hz 1H)，7.78-7.82(m，1H)，3.34-3.42 (m，3H)，3.14-3.29(m，4H)，1.89-
1.94(m，1H)，1.63-1.68(m， 1H)。
7.95(d，J＝7.6Hz 1H)，7.78-7.82(m，1H)，3.34-3.42 (m，3H)，3.14-3.29(m，4H)，1.89-
1.94(m，1H)，1.63-1.68(m， 1H)。
[0280] 实施例2
[0281] (S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4- 三唑-3-甲酰胺
[0282]
[0283] 步骤a.在0℃向搅拌的(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)-甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(描述于实施例1步骤a和b；0.100g，0.25mmol)的DMF(2mL)溶液分批加入NaH(60％，在矿物油中；0.008 g，0.30mmol)。在搅拌15分钟之后，加入碘甲烷(0.035g，0.25mmol)，所得反应混合物在室温搅拌1h。反应倾至冰水(50mL)中和用EtOAc(2x 50mL)萃取。经合并的有机相在无水硫酸钠上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物通过快速柱色谱法纯化(在2％MeOH/DCM中洗脱)产生 (R)-3-((1-(3-氰基苯基)-N-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)-吡咯烷 -1-羧酸叔丁酯(0.095g，0.23mmol)。LCMS：方法H，1.755分钟，MS： ES+411.4。
[0284] 步骤b.在0℃向搅拌的(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-N-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.090g，0.22mmol)的DCM (5mL)溶液加入TFA(0.45mL)。在0℃至室温搅拌反应混合物1.5h。减压浓缩所得反应混合物。所得残余物与DCM(3x 50mL)共沸蒸馏和在高真空下干燥，产生(S)-1-(3-氰基苯基)-N-甲基-N-(吡咯烷-3-基甲基)-
1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺TFA盐，0.110g，粗制。LCMS：方法H， 1.325分钟，MS：ES+311.28。
1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺TFA盐，0.110g，粗制。LCMS：方法H， 1.325分钟，MS：ES+311.28。
[0285] 步骤c.在0℃向搅拌的(S)-1-(3-氰基苯基)-N-甲基-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺TFA盐(0.100g，来自先前步骤的粗制物) 的THF(5mL)溶液加入K2CO3(0.097g，0.71mmol)。在搅拌10分钟之后，加入溴化氰(0.024g，0.24mmol)，在室温继续搅拌
1h。所得混合物倾至水中(50mL)和用EtOAc(2x 50mL)萃取。经合并的有机相在无水硫酸钠上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(化合物在2％MeOH/DCM中洗脱)产生(S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3- 基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.028g，0.08mmol)。LCMS：方法J，2.723分钟，MS：ES+336.15；1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm：9.48(s，1H)，8.42-8.43(d，J＝4.0Hz，1H)，8.19- 8.23(m，1H)，7.92-7.94(d，J＝
8.0Hz，1H)，7.77-7.81(t，J＝8Hz 1 H)，3.44-3.58(m，3H)，3.36-3.41(m，1H)，3.23-3.27(m，1H)， 2.99-3.10(m，4H)，2.59-2.65(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，1.64- 1.69(m，1H)。
1h。所得混合物倾至水中(50mL)和用EtOAc(2x 50mL)萃取。经合并的有机相在无水硫酸钠上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(化合物在2％MeOH/DCM中洗脱)产生(S)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3- 基)甲基)-N-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.028g，0.08mmol)。LCMS：方法J，2.723分钟，MS：ES+336.15；1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm：9.48(s，1H)，8.42-8.43(d，J＝4.0Hz，1H)，8.19- 8.23(m，1H)，7.92-7.94(d，J＝
8.0Hz，1H)，7.77-7.81(t，J＝8Hz 1 H)，3.44-3.58(m，3H)，3.36-3.41(m，1H)，3.23-3.27(m，1H)， 2.99-3.10(m，4H)，2.59-2.65(m，1H)，1.86-1.89(m，1H)，1.64- 1.69(m，1H)。
[0286] 实施例3
[0287] N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
[0288]
[0289] 用与本文描述的那些类似的程序制备。
[0290] 实施例4
[0291] N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺和N-(((2R,3S)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
[0292]
[0293] 步骤a.在室温向乙酰乙酸甲酯(200g，1724.13mmol)和1,2-二溴乙烷(179.2mL，2068.95mmol)的丙酮(2000mL)溶液加入K2CO3(356.8g， 2586.19mmol)。于70℃加热反应混合物24小时。将所得混合物冷却至室温，过滤通过C盐和用丙酮(2x 100mL)洗涤。减压浓缩滤液，提供粗制油状物，将其通过柱色谱法纯化(4％EtOAc/己烷)，产生1-乙酰基环丙烷-1-羧酸甲酯(100g，704.22mmol)。LCMS：方法C，1.47分钟， MS：ES+143.14。
[0294] 步骤b.将1-乙酰基环丙烷-1-羧酸甲酯(82.0g，577.46mmol)和 (R)-1-苯基乙-1-胺(69.87g，577.46mmol)的甲苯(820mL)溶液加入dean stark玻璃组件。将反应混合物加热至130℃持续24小时(释放的水收集于dean stark组件中)。反应混合物冷却至rt和减压浓缩。所得残余物通过柱色谱法纯化(1.5％EtOAc/己烷)，产生(R)-2-甲基-1-(1-苯基乙基)-4,5-二氢-1H-吡咯-3-羧酸甲酯(51.0g，208.16mmol)。LCMS：方法 C，1.409分钟，MS：ES+
246.40。
246.40。
[0295] 步骤c.在0℃向NaBH4(35.5g，936.73mmol)仔细地滴加乙酸(765 mL，15vol)和于0℃搅拌45分钟。然后于0℃加入(R)-2-甲基-1-(1-苯基乙基)-4,5-二氢-1H-吡咯-3-羧酸甲酯(51.0g，208.16mmol)的乙腈(765mL) 溶液和在室温搅拌反应混合物4小时。所得混合物用水(4000mL)稀释和用固体Na2CO3碱化。水层用EtOAc(2x 3000mL)萃取。收集经合并的有机相，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。所得残余物溶于己烷和过滤除去不溶固体。减压蒸发滤液，产生非对映体的混合物(51.0g， 208.16mmol)。LCMS：方法D-NH3，28.96分钟(92％，主要非对映体) 和29.114分钟(7％，次要非对映体)，MS：ES+248.2；将非对映体的混合物溶于n-己烷(500mL)形成透明溶液，将其在-78℃搅拌2小时。过滤除去所得沉淀和用冷己烷洗涤，产生(2R,3R)-2-甲基-1-((R)-1-苯基乙基) 吡咯烷-3-羧酸甲酯(28g，113.36mmol)。LCMS：方法D-NH3，28.819 分钟，方法D-FA：12.098分钟，MS：ES+248.2；1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm：7.29-7.35(m，4H)，7.22-7.24(m，1H)，3.60(s， 3H)，3.55-3.58(m，1H)，
3.34-3.37(m，1H)3.06-3.09(m，1H)，2.58 -2.61(m，1H)，2.43-2.47(m，1H)，1.92-1.99(m，
1H)，1.80-1.83 (m，1H)，1.27(d，J＝6.71Hz，3H)，0.71(d，J＝6.40Hz，3H)。
3.34-3.37(m，1H)3.06-3.09(m，1H)，2.58 -2.61(m，1H)，2.43-2.47(m，1H)，1.92-1.99(m，
1H)，1.80-1.83 (m，1H)，1.27(d，J＝6.71Hz，3H)，0.71(d，J＝6.40Hz，3H)。
[0296] 步骤d.
[0297]
[0298] 将(2R,3R)-2-甲基-1-((R)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-羧酸甲酯(26.0g， 105.263mmol)溶于DBU(47.99g，315.723mmol)和于100℃在密封管中加热24小时。将反应混合物倾至水中(800mL)和用乙酸乙酯(3x 700mL) 萃取。经合并的有机层用水(100mL)洗涤，在Na2SO4上干燥和减压蒸发，提供粗制产品，将其通过柱色谱法纯化(于30％乙酸乙酯/己烷洗脱)，产生(2R,3R)-2-甲基-1-((R)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-羧酸甲酯和(2R,3S)-2-甲基-
1-((R)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-羧酸甲酯的混合物(22g，89.068mmol)。 LCMS：方法D-FA，
1
11.94分钟(21.72％)&12.68分钟(77.01％)，MS： ES+248.4；H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：
7.25-7.40(m，5H)， 3.85-3.87(m，1H)，3.74(s，3H)，3.00-3.30(m，1H)，2.56-2.81(m，3H)，
1.93-2.08(m，2H)，1.41(m，3H)，1.04(dd，J＝6.4Hz，3H)。
1-((R)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-羧酸甲酯的混合物(22g，89.068mmol)。 LCMS：方法D-FA，
1
11.94分钟(21.72％)&12.68分钟(77.01％)，MS： ES+248.4；H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：
7.25-7.40(m，5H)， 3.85-3.87(m，1H)，3.74(s，3H)，3.00-3.30(m，1H)，2.56-2.81(m，3H)，
1.93-2.08(m，2H)，1.41(m，3H)，1.04(dd，J＝6.4Hz，3H)。
[0299] 步骤e.
[0300]
[0301] 向(2R,3S)-2-甲基-1-((R)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-羧酸甲酯和 (2R,3R)-2-甲基-1-((R)-1-苯基乙基)吡咯烷-3-羧酸甲酯(10g，40.485 mmol)的甲醇(100mL)溶液加入1g(10％Pd/C，50％水分)。在室温在氢(40巴)下搅拌反应混合物24小时。所得混合物过滤通过C盐，用甲醇 (50mL)洗涤和减压浓缩滤液，产生(2R,3S)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸甲酯和 (2R,3R)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸甲酯的混合物(5.3g，37.062mmol)。 LCMS：方法C，0.31分钟，MS：ES+144.1；1H NMR(400MHz， CDCl3)δppm：3.74(s，3H)，3.40-3.43(m，1H)，3.10-3.20(m，2H)， 2.53-2.63(m，1H)，2.13-2.19(m，2H)，2.04-2.08(m，1H)，1.37(dd， J＝6.4Hz，
3H)。
3H)。
[0302] 步骤f.
[0303]
[0304] 于0℃在N2下向(2R,3S)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸甲酯和(2R,3R)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸甲酯(5.3g，37.062mmol)的THF(53mL)溶液加入4- 二甲基氨基吡啶(0.53g，0.1w/w)和二碳酸二叔丁酯(9.69g，44.449 mmol)。让反应混合物温热至室温和再搅拌16小时。所得混合物用水(200 mL)稀释和用乙酸乙酯(3x 200mL)萃取。经合并的有机层用水(200mL) 洗涤，在Na2SO4上干燥和减压蒸发，提供粗制产品，将其通过柱色谱法纯化(于10％乙酸乙酯/己烷洗脱)，产生1-(叔丁基)3-甲基(2R,3S)-2- 甲基吡咯烷-1,3-二羧酸酯和1-(叔丁基)3-甲基(2R,3R)-2-甲基吡咯烷 -1,3-二羧酸酯的混合物(8.0g，32.92mmol)。LCMS：方法C，
1.665分钟，MS：ES+(-56)188；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：4.00-4.30(m， 1H)，3.74(s，3H)，
3.52-3.56(m，1H)，3.35-3.39(m，1H)，2.71-2.72(m， 1H)，2.11-2.16(m，2H)，1.50(s，9H)，
1.32(dd，J＝5.6Hz，3H)。
1.665分钟，MS：ES+(-56)188；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：4.00-4.30(m， 1H)，3.74(s，3H)，
3.52-3.56(m，1H)，3.35-3.39(m，1H)，2.71-2.72(m， 1H)，2.11-2.16(m，2H)，1.50(s，9H)，
1.32(dd，J＝5.6Hz，3H)。
[0305] 步骤g.
[0306]
[0307] 于0℃向1-(叔丁基)3-甲基(2R,3S)-2-甲基吡咯烷-1,3-二羧酸酯和 1-(叔丁基)3-甲基(2R,3R)-2-甲基吡咯烷-1,3-二羧酸酯(8.0g，32.921 mmol)的THF：水(5:1)溶液(12mL)加入一水合氢氧化锂(2.07g，49.381 mmol)。将所得反应混合物温热至室温和搅拌6小时。混合物倾至水中 (300mL)和用乙酸乙酯(3x 300mL)洗涤。水层用1M HCl溶液(～
200mL) 酸化和用乙酸乙酯(3x 300mL)萃取。经合并的有机层在Na2SO4上干燥和减压蒸发，产生(2R,3R)-1-(叔丁氧羰基)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸和 (2R,3S)-(叔丁氧羰基)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸的混合物(6.5g，28.384 mmol)。LCMS：方法D-AA，8.770分钟(18.63mmol)和
9.105分钟(81.37 分钟)，MS：ES+(-56)156.25；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm： 12.47(s，
1H)，3.8-4.1(m，1H)，3.25-3.37(m，2H)，2.60-2.75(m，1H)， 2.05-2.12(m，1H)，1.89-1.97(m，1H)，1.40(s，9H)，1.18(dd，J＝5.6Hz， 3H)。
200mL) 酸化和用乙酸乙酯(3x 300mL)萃取。经合并的有机层在Na2SO4上干燥和减压蒸发，产生(2R,3R)-1-(叔丁氧羰基)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸和 (2R,3S)-(叔丁氧羰基)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸的混合物(6.5g，28.384 mmol)。LCMS：方法D-AA，8.770分钟(18.63mmol)和
9.105分钟(81.37 分钟)，MS：ES+(-56)156.25；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm： 12.47(s，
1H)，3.8-4.1(m，1H)，3.25-3.37(m，2H)，2.60-2.75(m，1H)， 2.05-2.12(m，1H)，1.89-1.97(m，1H)，1.40(s，9H)，1.18(dd，J＝5.6Hz， 3H)。
[0308] 步骤h.
[0309]
[0310] 于0℃在N2下向(2R,3R)-1-(叔丁氧羰基)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸和 (2R,3S)-1-(叔丁氧羰基)-2-甲基吡咯烷-3-羧酸(5.5g，24.017mmol)的 THF(50mL)溶液加入EDC.HCl(5.50g，28.795mmol)和1-羟基苯并三唑水合物(3.67g，23.986mmol)。将三乙胺(16.16mL，120.087mmol) 和NH4Cl(6.42g，120.000mmol)加入反应混合物和在室温搅拌16小时。所得反应混合物倾至饱和的NaHCO3溶液(400mL)中和用乙酸乙酯(3x 400mL)萃取。经合并的有机层在Na2SO4上干燥和减压蒸发，提供粗制产品，将其通过柱色谱法纯化(2％MeOH/DCM)，产生(2R,3R)-3-氨基甲酰基-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯和(2R,3S)-3-氨基甲酰基-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4.8g，21.056mmol)。LCMS：方法C，1.380分钟， MS：ES+(-56)173.2；
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：5.57(br，2H)， 3.95-4.12(m，1H)，3.42-3.63(m，2H)，2.42-
2.61(m，1H)，2.09-2.11(m， 2H)，1.47(s，9H)，1.30(dd，J＝5.6Hz，3H)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：5.57(br，2H)， 3.95-4.12(m，1H)，3.42-3.63(m，2H)，2.42-
2.61(m，1H)，2.09-2.11(m， 2H)，1.47(s，9H)，1.30(dd，J＝5.6Hz，3H)。
[0311] 步骤i.
[0312]
[0313] 于0℃在N2下向(2R,3R)-3-氨基甲酰基-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯和(2R,3S)-3-氨基甲酰基-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(4.8g，21.052 mmol)的THF(20mL)溶液滴加BH3.DMS(2M，在THF中)(15.78mL， 31.57mmol)。让反应混合物温热至室温和在70℃搅拌16小时。然后将混合物冷却至室温和加入甲醇(50mL)。混合物进一步在80℃加热2小时然后冷却至室温，用1N HCl溶液(240mL)酸化和用乙酸乙酯(3x 400 mL)萃取。水层用碳酸氢钠溶液(50mL)碱化和用乙酸乙酯(3x 300mL) 萃取，减压浓缩，产生(2R,3R)-3-(氨基甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯和(2R,3S)-3-(氨基甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.137g，0.640 mmol)。LCMS：方法C，1.322分钟，MS：ES-56+159.31；1H NMR(400 MHz，DMSO-d6)δppm：3.28-3.48(m，3H)，3.15-3.26(m，1H)，2.41-2.44 (m，1H)，1.65-2.05(m，2H)，
1.41-1.60(m，3H)，1.34(s，9H)，0.95(dd， J＝6.4Hz，3H)。
1.41-1.60(m，3H)，1.34(s，9H)，0.95(dd， J＝6.4Hz，3H)。
[0314] 步骤j.
[0315]
[0316] 在室温向搅拌的1H-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(1.66g，13.1004mmol) 和3-碘苄腈(2g，8.733mmol)的DMSO(10mL)溶液加入K2CO3(3.6g， 26.200mmol)。反应混合物用N2吹扫15分钟。在室温加入L-脯氨酸(0.2 g，1.746mmol)和CuI(0.33g，1.746mmol)并将混合物加热至85℃持续 16小时。然后将混合物倾至水(200mL)中和用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取。水层用1M HCl溶液(150mL)酸化和用乙酸乙酯(4x 100mL)萃取。经合并的有机层用水(100mL)洗涤，在Na2SO4上干燥和减压蒸发，产生 1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(0.522g，63.11mmol)。LCMS：方法C，1.29分钟，MS：ES+215.23；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm： 12.8(br，1H)，7.35(t，J＝8Hz，1H)，7.02(d，J＝7.6Hz，1H)，6.83(s， 1H)，6.77-6.80(dd，J＝
8.4Hz，2H)。
8.4Hz，2H)。
[0317] 步骤k.
[0318]
[0319] 在0℃在N2下向1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(0.156.g， 0.728mmol)的THF(7mL)溶液加入HATU(0.319g，0.841mmol)和DIPEA(0.232g，1.682mmol)。搅拌反应混合物30分钟并加入 (2R,3R)-3-(氨基甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯和(2R,3S)-3-(氨基甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.120g，0.560mmol)。反应混合物变为透明黄色溶液并在室温搅拌16小时。向所得反应混合物加水(100mL) 和用乙酸乙酯(3x 25mL)萃取。经合并的有机层用饱和NaHCO3溶液 (100mL)洗涤，在Na2SO4上干燥和减压蒸发，提供粗制产品，将其通过 Combi-快速色谱法纯化(于0.2％MeOH/DCM洗脱)，产生 (2R,3R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯和(2R,3S)-
3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.106g，0.258mmol)。LCMS：方法C，1.627分钟，MS：ES+(-100)311.48。
3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.106g，0.258mmol)。LCMS：方法C，1.627分钟，MS：ES+(-100)311.48。
[0320] 步骤l.
[0321]
[0322] 在0℃在N2气氛下向(2R,3S)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3- 甲酰胺基)甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯和(2R,3R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺基)甲基)-2-甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.103 g，0.251mmol)的DCM(5mL)溶液加入TFA(0.2mL，2.512mmol)。让反应混合物温热至室温和搅拌2小时然后减压浓缩，产生1-(3-氰基苯基)-N-(((2R,3R)-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺三氟乙酸盐和1-(3-氰基苯基)-N-(((2R,3S)-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺三氟乙酸盐(0.140g，0.267mmol)。LCMS：方法C，1.286分钟，MS：ES+311.5。
[0323] 步骤m.
[0324]
[0325] 向1-(3-氰基苯基)-N-(((2R,3S)-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,4- 三唑-3-甲酰胺三氟乙酸盐和1-(3-氰基苯基)-N-(((2R,3R)-2-甲基吡咯烷 -3-基)甲基)-1H-1,
2,4-三唑-3-甲酰胺三氟乙酸盐(0.139g，0.327mmol)的 THF(5mL)溶液加入K2CO3(0.090g，
0.654mmol)和搅拌混合物10分钟。在室温加入CNBr(0.034g，0.392mmol)和在室温搅拌反应混合物30分钟。向所得反应混合物加水(50mL)和混合物用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。经合并的有机层用水(50mL)洗涤，在Na2SO4上干燥和减压蒸发，提供粗制产品。粗制产品通过Combi-快速色谱法纯化(于0.4％ MeOH/DCM洗脱)，产生N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.052g，0.155mmol)，其进一步通过制备型TLC(3％MeOH/DCM)、然后制备型HPLC(MeOH： ACN，用0.1％氨)纯化，然后与n-戊烯(2x 3mL)研磨，产生N-(((2R,3S)-1- 氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺和N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.0028g，0.0083mmol)；LCMS：方法M， 17.82(25.34％),18.29分钟(68.88％)，MS：ES+336；MS：ES+336.2。
2,4-三唑-3-甲酰胺三氟乙酸盐(0.139g，0.327mmol)的 THF(5mL)溶液加入K2CO3(0.090g，
0.654mmol)和搅拌混合物10分钟。在室温加入CNBr(0.034g，0.392mmol)和在室温搅拌反应混合物30分钟。向所得反应混合物加水(50mL)和混合物用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。经合并的有机层用水(50mL)洗涤，在Na2SO4上干燥和减压蒸发，提供粗制产品。粗制产品通过Combi-快速色谱法纯化(于0.4％ MeOH/DCM洗脱)，产生N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.052g，0.155mmol)，其进一步通过制备型TLC(3％MeOH/DCM)、然后制备型HPLC(MeOH： ACN，用0.1％氨)纯化，然后与n-戊烯(2x 3mL)研磨，产生N-(((2R,3S)-1- 氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺和N-(((2R,3R)-1-氰基-2-甲基吡咯烷-3-基)甲基)-1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.0028g，0.0083mmol)；LCMS：方法M， 17.82(25.34％),18.29分钟(68.88％)，MS：ES+336；MS：ES+336.2。
[0326] 非对映异构体可以通过标准方法分离。
[0327] 实施例5
[0328] (R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4- 甲酰胺
[0329]
[0330] 步骤a.在室温向搅拌的叠氮化钠(0.424g，6.535mmol)和CuSO4 (0.086g，0.544mmol)的MeOH(8mL)溶液加入(3-氰基苯基)取代硼酸 (0.8g，5.445mmol)(CAS号
150255-96-2，可获自Combi-Blocks)。在室温搅拌反应混合物16小时。将丙酸乙酯(0.587g，
5.99mmol)和L-(+)- 抗坏血酸钠(0.539g，0.272mmol)的水(2mL)溶液加入反应混合物，将其在室温再搅拌1小时。过滤所得反应混合物，用水(3x 5mL)洗涤和减压干燥固体，产生1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙酯(0.25g，1.033 mmol)。LCMS：方法C，1.579分钟；
MS：ES+243.4。
150255-96-2，可获自Combi-Blocks)。在室温搅拌反应混合物16小时。将丙酸乙酯(0.587g，
5.99mmol)和L-(+)- 抗坏血酸钠(0.539g，0.272mmol)的水(2mL)溶液加入反应混合物，将其在室温再搅拌1小时。过滤所得反应混合物，用水(3x 5mL)洗涤和减压干燥固体，产生1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙酯(0.25g，1.033 mmol)。LCMS：方法C，1.579分钟；
MS：ES+243.4。
[0331] 步骤b.在0℃向搅拌的1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙酯 (0.2g，0.826mmol)和(R)-3-(氨基甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.165g， 0.826mmol)(CAS号
199174-29-3，可获自Synthonix)的THF(5mL)溶液滴加TBD(0.23g，1.653mmol)的THF(1mL)溶液。在80℃加热反应混合物16小时。所得反应混合物用水(40mL)稀释和用EtOAc(3x
40mL) 萃取。经合并的有机相在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。粗制物质通过快速柱色谱法纯化(69％EtOAc/己烷)，产生(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺基)-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.13g，0.328 mmol)。LCMS：方法C，1.659分钟；MS：ES+
397.48。
199174-29-3，可获自Synthonix)的THF(5mL)溶液滴加TBD(0.23g，1.653mmol)的THF(1mL)溶液。在80℃加热反应混合物16小时。所得反应混合物用水(40mL)稀释和用EtOAc(3x
40mL) 萃取。经合并的有机相在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。粗制物质通过快速柱色谱法纯化(69％EtOAc/己烷)，产生(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺基)-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.13g，0.328 mmol)。LCMS：方法C，1.659分钟；MS：ES+
397.48。
[0332] 步骤c.在0℃向搅拌的(R)-3-((1-(3-氰基苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺基)-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.12g，0.303mmol)的DCM(3mL) 溶液滴加TFA(1.2mL，10体积)和在室温搅拌2小时。减压浓缩所得反应混合物和残余物进一步从DCM(3x 5mL)浓缩，产生(S)-1-(3-氰基苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐(0.14g， 0.341mmol)。LCMS：方法C，1.249分钟；MS：ES+297.43。
[0333] 步骤d.在0℃向搅拌的(S)-1-(3-氰基苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐(0.13g，0.317mmol)的THF(4 mL)溶液加入K2CO3(0.131g，0.951mmol)和搅拌10分钟。在0℃分批加入溴化氰(0.04g，0.380mmol)和在室温搅拌1.5小时。所得反应混合物用水(30mL)稀释，用EtOAc(3x 30mL)萃取。经合并的有机相在 Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。粗制物质通过快速柱色谱法纯化(72％ EtOAc/己烷)，产生(R)-1-(3-氰基苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(0.12g，
0.374mmol)。LCMS：方法H，2.97 分钟，MS：ES-320.2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：8.61(s，
1H)， 8.18(s，1H)，8.05(m，1H)，7.86-7.75(m，2H)，7.41-7.36(m，1H)，3.65-3.47(m，4H)，
3.31-3.27(m，1H)，2.71-2.64(m，1H)，2.22-2.12 (m，1H)，1.87-1.78(m，1H)。手性HPLC：
100％纯度，保留时间： 5.67分钟
0.374mmol)。LCMS：方法H，2.97 分钟，MS：ES-320.2；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：8.61(s，
1H)， 8.18(s，1H)，8.05(m，1H)，7.86-7.75(m，2H)，7.41-7.36(m，1H)，3.65-3.47(m，4H)，
3.31-3.27(m，1H)，2.71-2.64(m，1H)，2.22-2.12 (m，1H)，1.87-1.78(m，1H)。手性HPLC：
100％纯度，保留时间： 5.67分钟
[0334] 用于标题化合物的手性SFC分析方法：
[0335] 手性化合物在Waters SFC Investigator和PDA(光电二极管阵列) 检测器上分析。使用的柱是Chiralcel OX-H 250*4.6mm，5微米，柱流速是4.0mL/min和ABPR(自动化的反压调节器)设定为100巴。所用流动相是(A)液体二氧化碳(Liq.CO2)和(B)0.1％二乙胺/丙-2-醇:乙腈 (50:50)。
[0336] UV谱图于246nm Lambda max记录。梯度比率如下描述。
[0337]％B开始 ％B结束 持续时间(min)
5 50 5
50 50 5
5 50 5
50 50 5
[0338] 实施例6
[0339] (R)-1-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺[0340]
[0341] 步骤a.在0℃向搅拌的1-(3-氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸(0.15g， 0.671mmol)(CAS号944901-58-0，可获自Synthonix)和(R)-3-(氨基甲基) 吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.134g，0.671mmol)(CAS号199174-29-3，可获自Astatech)的吡啶(5mL)溶液滴加POCl3(0.307g，0.19mL，2.013mmol) 和在0℃搅拌40分钟。所得反应混合物倾至冷水(30mL)中和用EtOAc(3 x 30mL)萃取。经合并的有机相在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(70％EtOAc/己烷)，产生(R)-3-((1-(3-氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺基)-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.235g， 0.580mmol)。LCMS：方法C，1.734分钟；
MS：ES+406.49。
MS：ES+406.49。
[0342] 步骤b.在0℃向搅拌的(R)-3-((1-(3-氯苯基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺基)-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.23g，0.568mmol)的DCM(5mL) 溶液滴加TFA(2.3mL，10体积)和在室温搅拌1.5小时。减压浓缩所得反应混合物，粗制品从DCM(3x 5mL)进一步浓缩，产生(S)-1-(3-氯苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐(0.35g， 0.835mmol)。LCMS：方法C，1.341分钟，MS：ES+306.36。
[0343] 步骤c.在0℃向搅拌的(S)-1-(3-氯苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐(0.34g，0.811mmol)的THF(7 mL)溶液加入K2CO3(0.335g，2.434mmol)和在0℃搅拌10分钟。将溴化氰(0.103g，0.974mmol)分批加入反应混合物。在室温搅拌反应混合物1.5h。所得反应混合物用水(50mL)稀释，用EtOAc(3x 50mL)萃取。经合并的有机相在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法纯化(80％EtOAc/己烷)，产生(R)-1-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)-甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺(0.13g，0.394mmol)。LCMS：方法H，3.59分钟；MS：ES+331.10；1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm：9.38(s，1H)，8.97-8.94(m，1H)，8.14(s，1H)，8.01 -7.99(d，J＝8.0Hz，1H)，7.69-7.61(m，2H)，3.48-3.19(m，7H)， 2.00-1.92(m，1H)，1.75-1.66(m，1H)。手性HPLC(方法如前文显示)：100％纯度，保留时间：4.42分钟
[0344] 实施例7
[0345] (R)-2-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺[0346]
[0347] 步骤a.在0℃向搅拌的2-(3-氯苯基)-2H-1,2,3-三唑-4-羧酸(0.15g， 0.671mmol)(CAS号90839-69-3，可获自Enamine)和(R)-3-(氨基甲基) 吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.134g，0.671mmol)(CAS号199174-29-3，可获自Astatech)的吡啶(3mL)溶液滴加POCl3(0.307g，0.19mL，2.013mmol) 和搅拌混合物30分钟。将所得反应混合物倾倒入水(100mL)中和用 EtOAc(3x 50mL)萃取。经合并的有机相用水洗涤(100mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。粗制物质通过快速柱色谱法纯化(42％EtOAc/ 己烷)，产生(R)-3-((2-(3-氯苯基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺基)-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.175g，0.432mmol)。
LCMS：方法C，2.014分钟； MS：ES+350.38(M-56)。
LCMS：方法C，2.014分钟； MS：ES+350.38(M-56)。
[0348] 步骤b.在0℃向搅拌的(R)-3-((2-(3-氯苯基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺基)-甲基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.17g，0.419mmol)的DCM(10mL) 溶液滴加TFA(0.478g，0.3mL，4.197mmol)。在室温搅拌反应混合物 2h。减压浓缩所得反应混合物，粗制品从DCM(3x 5mL)进一步浓缩，产生(S)-2-(3-氯苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐(0.339g，0.809mmol)。LCMS：方法C，1.374分钟；MS： ES+306.31。
[0349] 步骤c.向(S)-2-(3-氯苯基)-N-(吡咯烷-3-基甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺三氟乙酸盐(0.335g，0.799mmol)的THF(10mL)溶液加入K2CO3 (0.22g，1.599mmol)，在0℃搅拌混合物10分钟。将溴化氰(0.102g， 0.959mmol)分批加入反应混合物，在室温搅拌45分钟。所得反应混合物用水(50mL)稀释，用EtOAc(3x 25mL)萃取。经合并的有机相用水洗涤(50mL)，在Na2SO4上干燥，过滤和减压浓缩。残余物通过快速柱色谱法(45％EtOAc/己烷)和通过与n-己烷(2x 15mL)研磨纯化，产生 (R)-2-(3-氯苯基)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)-甲基)-2H-1,2,3-三唑-4-甲酰胺 (0.094g，0.284mmol)。LCMS：方法J，3.99分钟，MS：ES+
331.4；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：8.31(s，1H)，8.17(s，1H)，8.05- 8.03(m，1H)，7.52-
7.44(m，2H)，7.08-6.99(m，1H)，3.65-3.47(m， 5H)，3.32-3.27(m，1H)，2.73-2.66(m，1H)，
2.20-2.13(m，1H)， 1.88-1.79(m，1H)。手性HPLC：100％纯度，保留时间：14.05分钟。手性化合物在Agillent 1200系列HPLC和PDA检测器上分析。所用的柱是Chiralcel OJ-H 250*
4.6mm，5微米，柱流速1.0mL/min。所用的流动相是(A)0.1％二乙胺/己烷和(B)0.1％二乙胺/丙-2-醇:甲醇(50:50)。 UV谱图于272nm Lambda max记录。梯度比率如下描述。
331.4；1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm：8.31(s，1H)，8.17(s，1H)，8.05- 8.03(m，1H)，7.52-
7.44(m，2H)，7.08-6.99(m，1H)，3.65-3.47(m， 5H)，3.32-3.27(m，1H)，2.73-2.66(m，1H)，
2.20-2.13(m，1H)， 1.88-1.79(m，1H)。手性HPLC：100％纯度，保留时间：14.05分钟。手性化合物在Agillent 1200系列HPLC和PDA检测器上分析。所用的柱是Chiralcel OJ-H 250*
4.6mm，5微米，柱流速1.0mL/min。所用的流动相是(A)0.1％二乙胺/己烷和(B)0.1％二乙胺/丙-2-醇:甲醇(50:50)。 UV谱图于272nm Lambda max记录。梯度比率如下描述。
[0350] 时间 ％A ％B0.01 90 10
5 85 15
10 65 35
15 45 55
20 35 65
25 35 65
25.01 90 10
30 90 10
5 85 15
10 65 35
15 45 55
20 35 65
25 35 65
25.01 90 10
30 90 10
[0351] 实施例8
[0352] (R)-N-((1-氰基吡咯烷-3-基)甲基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
[0353]
[0354] 可以用与本文描述的那些类似的程序制备。
[0355] 本发明化合物的生物学活性
[0356] 缩写：
[0357] TAMRA 羧基四甲基若丹明
[0358] PCR 聚合酶链反应
[0359] PBS 磷酸缓冲盐水
[0360] EDTA 乙二胺四乙酸
[0361] Tris 2-氨基-2-(羟基甲基)-1,3-丙二醇
[0362] NP-40 Nonidet P-40，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇
[0364] PNS 周围神经系统
[0365] BH3 Bcl-2同源性区域3
[0366] PTEN 磷酸酶和张力蛋白(tensin)同系物
[0367] USP30生物化学IC50测试
[0368] 在96孔聚丙烯V底板(Greiner#651201)中以最终浓度的21倍在 50％DMSO中制备稀释板(2100μM，最终浓度100μM)。典型8点稀释系列将是100，30，10，3，1，0.3，0.1，0.03μM(最终)。在黑色384孔板(小体积，Greiner 784076)中以21μl的最终反应体积重复进行反应。将1μl 50％DMSO或稀释化合物加至板。将USP30在反应缓冲剂(40mM Tris，pH 7.5，0.005％吐温20，0.5mg/ml BSA，5mMβ-巯基乙醇)中稀释至0.05μl/孔的当量和将10μl稀释USP30加至化合物。将酶和化合物在室温温育30分钟。加入作为荧光偏振底物的50nM的TAMRA标记的肽引发反应，所述肽经由异肽键连接至泛素。在加入底物之后立即和在室温下温育2小时之后读取反应。读数在Pherastar Plus(BMG Labtech)上进行。激发λ为540nm；发射λ为590nm。
[0369] 在USP30生物化学IC50测试中示范性化合物的活性
[0370] 范围：
[0371] A*<0.01μM；
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