胃部疼痛症状出现于许多疾病中，给患者带来极大痛苦，甚至于影响工 作、学习和日常生活。通常的西药止痛药会有依赖性、耐受性，并具有其他 副作用，本申请旨在提供一种止痛效果较好、并可治疗胃溃疡、浅表性胃炎 的药物。

本申请的组合物是由以下重量配比的原料制成的：川楝子3-5，延胡索 (醋制)3-5，红花八角叶1-2，木香1-2，优选的重量配比为：川楝子3， 延胡索(醋制)3，红花八角叶2，木香2，但不完全按以上范围内的配比制 成的组合物也是有效的。其中的木香优选云木香。
本申请的组合物可以采用制剂学的常规方法制成常规剂型，如散剂、片 剂、颗粒剂、冲剂、胶囊剂、口服液等，优选剂型为片剂。
颗粒剂、冲剂、胶囊剂或片剂的制备方法可以为：按比例取原料：川楝 子、延胡索(醋制)、红花八角叶、云木香。将川楝子、云木香加适量水煎 煮，所得滤液合并，浓缩至浸膏备用；延胡索(醋制)、红花八角叶加入适 量40-95％乙醇液回流提取，所得滤液合并，减压回收乙醇，浓缩至浸膏备用。 两步浸膏合并，加入常规赋形剂，干法或湿法制粒，制成颗粒剂、冲剂、胶 囊剂，或进一步压片制成片剂。
每次提取药材所用的溶剂量为药材重量的8-10倍。药材优选提取2次。 提取药材所用的乙醇优选用50％乙醇。
组合物的质量控制方法如下：
其中定性鉴别方法包括对以下木香、槲皮素、延胡索乙素鉴别中的一种 或多种：
(1)取组合物适量，加石油醚(60-90℃)适量提取，分取醚层，浓缩至 小体积，作为供试品溶液；另取木香对照药材粉末适量，加石油醚提取，分 取醚层，浓缩至小体积作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典1995版 一部附录35页)试验，吸取上述两种溶液各适量，分别点于同一硅胶G薄层 板上，以石油醚(60-90℃)—醋酸乙酯一苯(14∶3∶3)为展开剂，展开，取出 晾干，喷以5％香草醛稀硫酸液。加热数分钟后，供试品色谱中在与对照药 材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。
(2)取组合物适量，加乙醇提取，取滤液，挥去乙醇或回收乙醇，用适 量水将残渣混悬或溶解，以醋酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液，除去溶剂， 残渣加10％盐酸10ml于水浴上水解1.5-3小时，优选2小时，滤过，滤液 蒸干；残渣加乙醇溶解，作为供试品溶液；另取槲皮素对照品，加乙醇溶液 作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995版一部附录35页)试验，吸 取供试品溶液及对照品溶液各适量，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯 —甲酸乙酯—甲酸(5∶4∶1)为展开剂展开，晾干。自然光下观察，供试品色 谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色斑点。
(3)取组合物适量，加入少量蒸馏水和等量浓氨水润湿药粉，再加入适 量氯仿提取，收集提取液，浓缩至小体积，作供试液；另取延胡索乙素对照 品，加乙醇适量，制成对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典1995版一部附 录35页)试验，吸取上述两种溶液各适量，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以石油醚—氯仿—甲醇(10∶6∶1)为展开剂，展开、取出、晾干、喷以碘化铋 钾试液。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
以上所述提取包括回流和超声波提取。
质量控制方法中的含量测定步骤：滴定法测定组合物中的延胡索乙素
取组合物适量，精密称定，研细置锥形瓶中，加氨水适量碱化、摇匀、 加苯适量，放置10余小时过滤，残渣再加苯适量，摇匀，放置10余小时， 滤过，合并滤液，将滤液移至分液漏斗中，用0.1-0.5mol/L的硫酸提取三 次，合并提取液，加氨水调至碱性，用氯仿提取数次，合并氯仿，用蒸馏水 洗涤后置水浴蒸干，残渣加氯仿溶解，蒸干，再用少量氯仿溶解，精密加入 0.01mol/L的硫酸25ml，置水浴挥去氯仿，放冷至室温，加甲基红指示剂3 滴，用0.02mol/L的氢氧化钠液滴定，结果用空白试验校正。
每1ml0.01mol/L硫酸相当于7.1084mg延胡索乙索。
药效学研究证明：本申请的组合物所制备的片剂金红止痛片除具有延缓 胃排空；降低胃液分泌量和总酸排出量，抑制胃蛋白酶分泌的作用外，并具 有镇痛、解痉、抗炎、抗溃疡作用。此结果表明金红止痛片能调节胃肠功能， 起到疏肝理气，和胃止痛之效，可以治疗胃溃疡、胃痛或浅表性胃炎。
主要药效学试验
实验材料
1、药物：金红止痛片：由川楝子、延胡索(醋制)、红花八角叶、云木 香组成(见资料三)，每片含生药2.15g，试验时将药片(素片)研成细末，用 蒸馏水稀释为所需浓度(PH5.5)，用时摇匀。颅通定：40mg/片，贵阳金桥药 厂生产，制备同上，批号881014，盐酸哌替啶注射液(度冷丁)：50mg/ml， 宜昌制药厂，批号881024，36％乙酸、氢氧化钠(AR)成都化学试剂厂，批号 8809160角叉莱胶(carrageenan)及五羟色胺(5-HT)，sigman产品。延胡止 痛片(简称延胡片，由延胡索、白芷组成)安微巢湖制药厂，批号880816，磷 酸组织胺及氯化乙酰胆珍，中国科学院上海生物化学研究所8510212。
2、仪器：721型分光光度计：上海第三分析仪器厂产品。L7-IIIA型自 动恒温离体器官试验仪：川北医学院制造。
3、动物：昆明种健康小白鼠，体重18-22g，wistar健康大白鼠，体 重180-220g，大小鼠雌雄兼用，由贵阳医学院动物室提供。
方法与结果
(一)金红止痛片对小鼠胃排空运动的影响(比色法)
取体重20-22g健康小鼠30只，随机(以下同)分为三组，每组10只， 雌雄各半，禁食12h(但自由饮水)，为避免中药的颜色对比色的干扰均将中 药过滤后给予各组动物，药物用量均为0.1ml/10g(以下小鼠的药物用量均同 此)。给药后40min，每鼠ig0.2m10.1％甲基橙液。20min后拉颈处死动物， 剖腹，摘取胃，置于含10ml蒸馏水的小烧杯中，用小剪刀沿胃大弯剪开， 将胃内容物充分洗于蒸馏水中，以NaHCO3液调PH值到6.0-6.5，倒入刻度 离心管，以2000rpm，离心10min取上清液用721型分光光度计比色(入 420nm)。蒸馏水调零测OD值。以0.1％甲基橙0.2ml加入10ml蒸馏中摇匀， 测OD值，作为基数甲基橙光密度，按下式计算甲基橙胃残留率，并作统计 学“t”检验(以下试验均同)。

结果(表1)表明金红止痛片8g/kg及10g/kg组与对照组比较有显著差 异，可提高甲基橙残留率，具减慢小鼠胃排空作用。
         表1金红止痛片对小鼠胃排空的影响(M±SD)   组别  动物数(n)   剂量(g/kg·d)   甲基橙残留率(％)   NS   金红止痛片   金红止痛片   10   10   10   等体积   8.0   10.0   24.6±4.3   31.1±6.7*   38.3±7.5**
金红止痛片与NS组比较*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001，NS组为给 予蒸馏水的对照组(以下同)。
(二)金红止痛片对大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影响
取体重180±22g鼠24只，随机均分为三组，雌雄各半，单笼喂养，禁 食24h，自由饮水，用乙醚轻度麻酸大鼠后，腹部剪毛，常规消毒皮肤，于 剑突下沿正中线作2.5cm切口。小心提起胃，在幽门与十二指肠结合部分避 开血管用缝线结扎。立即由十二指肠注入金红止痛片液8g/kg及 10g/kg(1ml/100g)，对照组同法给等体积水，缝合伤口后放回笼中，术后禁 食禁水。5h后脱颈椎处死，取胃，收集胃液于刻度离心管以3000rpm离心 15min，吸取上清液计算胃液量，并行胃液分析。
1.胃酸测定：取清晰胃液2ml置小烧杯中加入托佛氏及酚酞指示剂各2 滴。含游离酸时呈樱桃红色。用盛有0.02mol/L NaoH的滴定管滴定，并不 断摇动三角瓶至红色消失，出现姜黄色为止，即为游离酸滴定终点。记录消 耗NaoH液的ml数，再继续用NoaH液滴定至微红色不褪为止，即为总酸度 滴定终点，记两次所消耗的0.02mol/L NaoH的总ml数，结果计算：游离酸 (mEq/L)＝游离酸滴定终点消耗的NoaH液的ml数×10。总酸度(mEq/L＝两 次滴定消耗的NaoH液ml数×10。总酸排出量(meq/h)＝总酸度×每小时的 胃液量，结果表明(表2)金红止痛片10g/kg组对胃液分泌量，总酸排出量有 降低作用，而5g/kg组则无明显影响。
2.胃蛋白酶测定(麦特氏毛细玻管法)：将内径0.5mm粗细均匀的毛细 玻管裁成10cm长，洗净、烘干，取一枚鸡蛋的蛋清充分搅匀后用纱布过滤， 利用毛细管的虹吸作用，管内灌满蛋清(管内应无气泡)，将其置于85℃水中 使蛋白凝固，贮冰箱备用。
试验时取大鼠胃液1ml放入50ml的三角瓶内(瓶中加0.05mol/L HCL液 15ml，摇匀)，再放入上述蛋白管两根，塞好瓶口，于37℃恒温箱孵育24h， 取出后用尺测量蛋白管两端透明部份的长度(mm)，以四端之值求其平均值。 胃蛋白酶活性单位＝平均值2×16，胃蛋白酶排出量(活性单位/h＝胃蛋白酶 活性单位X每小时的胃液量，结果表明(表3)金红止痛片10g/kg对胃蛋白 酶分泌有抑制作用。
            表2金红止痛片对大鼠胃液、胃酸分泌的影响(M±SD)   组别     剂量(g/kg·d)     胃液量(mEq/L)     游离酸(mEq/L)     总酸度(mEq/L)     总酸排出量   (μmEq/L)   NS   金红止痛片   金红止痛片   等体积(8)   5.0(8)   10.0(8)   9.18±2.41   8.69±2.13   6.21±2.32*   98.6±11.4   102.0±6.2   104.6±11.3   127.6±14.7   130.8±7.1   125.8±12.7   231.4±56.4   218.9±62.7   173.9±53.9**
Δ括号内为动物只数
表3金红止痛片对胃蛋白酶活性及其排出量的影响(M±SD)   组别     剂量(g/kg·d)     胃蛋白酶活性   (活性单位/ml))   胃蛋白酶排出量   (活性单位/ml)   NS   金红止痛片   金红止痛片   等体积(8)   5.0(8)   10.0(8)   223.0±37.0   237.0±51.6   239.8±63.9   438.9±79.8   415.8±96.8   310.2±89.7**
(三)金红止痛片对小鼠肠推进率的影响：取用体重为21.08±0.74g小 鼠30只，雌雄各半，均分为三组，各组每日给药(ig)一次，连续给药3d， 试验前禁食22h后于第4d各组所给药物中按1∶1加入20％活性炭，ig各药 容量均为0.2ml/10g，ig后30min处死，剖腹，小心分离肠系膜，剪取幽门 至回盲部的肠管(4)放于大方盘内，轻轻将肠管拉直，测肠段总长度及从幽门 至墨汁前沿的距离(此距离作为墨汁在肠内推进的距离)，用下列公式计算肠 推进率(％)。结果表明(表4)金红止痛片可显著延缓小肠推进率。

表4金红止痛片对小鼠肠推进率的影响(M±SD)   组别   剂量(g/kg·d)   动物数(只)   肠推进率(％)   NS   金红止痛片   金红止痛片   -   5.0   10.0   10   10   10   79.36±11.56   62.18±10.98*   51.21×11.23**
(四)镇痛试验：1、对乙酸所致小鼠扭体反应的影响：按文献(5)，稍加修改， 小鼠50只，体重为19.8±1.37(SD)雌雄各半，均分为五组，各组ig后1h(im 度冷丁min)立即ip0.6乙酸0.2ml/只，记录给乙酸15min内扭体反应的次 数。结果(表5)表明金红止痛片两剂量组均有显著抑制扭体反应的作用，而 金红止痛片8hg/kg组与颅通定比较有显著差异，与度冷丁组比较则无显著 差异。
表5金红止痛片、颅通定、度冷丁对小鼠扭体反应的影响(M±SD)   组别   剂量(g/kg·d)   15min内扭体反应次数   NS   金红止痛片   金红止痛片   颅通定   度冷丁   -          (10)   4.0        (10)   8.0        (10)   30mg/kg    (10)   20mg/kg·d (10)   46.5±6.32   34.7±13.45*   4.3±1.42***ΔΔ   13.4±10.32***   4.2±1.30***
ΔΔ与颅通定比较P＜0.01
2、对小鼠热板法的影响：雌性小鼠若干，体重18-22g，逐只放于55 ±0.5℃热板上筛选(以舔后足潜伏期为疼痛指标(6))，潜伏期超过30秒(S) 或喜跳跃者剔除)，选出合格小鼠40只，ig后测1h及2h舔后足潜伏期。结 果(表6)表明NS组与金红止痛片两剂量组有显著差异。延胡片组与NS组比 较则无显著差异，但其与金红止痛片组有显著差异。
表6金红止痛片、延胡片对小鼠舔后足潜伏期的影响(M±SD)     组别     剂量(g/kg·d)               后足潜伏期(S)     1h   2h   NS   金红止痛片   金红止痛片   延胡片   -   5.0   10.0   10.0   20.71±7.14   32.26±9.81*   36.95±8.18Δ**   25.16±5.17   19.84±6.07   28.11±8.93*Δ   34.18±6.44*Δ   20.67±4.53
Δ金红止痛片与延胡片比较P＜0.05
(五)解痉试验—对家兔小肠活动的影响：
将体重为1.8-2.4kg家兔4只(雌雄各半)，禁食16h后处死，剖腹取出 距十二指肠约5cm处之小肠2-3段，每段约3cm，制备离体肠肌标本18个， 逐个试验，先将小肠标本用冷台氏液冲干净后，置于38.0±0.5℃离体器官 恒温装置的麦氏浴槽中(容积20ml，负荷1g)。开动电动记纹鼓记录一段肠 肌收缩曲线(7)。等肠肌收缩稳定后加入试药。每次试验完毕后即用台氏液冲 洗三次，待肠肌收缩恢复至给药前水平再作下一次试验，每个标本作3-5 次试验，每一药物试验6-10次，试验如下：
(1)加入金红止痛片8×10-2-16×10-3g/ml，肠肌缓缓松弛，随剂量的增 加松弛作用也明显增强，经6次试验肠肌松弛至基线下0.45± 0.2Cm(P＜0.001)。收缩频率稍减小(每分钟减少2-3次)，收缩幅度稍减弱(幅 度减小1-2.0mm)，共作12次试验。
(2)用乙酰胆碱(ACh)4×10-3mg/ml，待肠肌收缩高达顶峰4.15±1.9cm 时，给予8×10-2g/ml的金红止痛片后，肠肌缓缓松弛，收缩曲线降低2.56 ±0.35cm(P＜0.01)。10次试验中，有4次试验全部对抗ACh收缩作用(肠肌 收缩为一直线)。
(3)给予磷酸组织胺5×10-3mg/ml，肠肌收缩曲线高达2.3×0.8cm，当 收缩至顶峰时给予金红止痛片2×10-3g/ml，肠肌渐渐松弛。收缩曲线降低至 1.02±0.27cm(P＜0.01)。8次试验中，有4次试验全部显示对抗组织胺的作 用(肠肌收缩成一直线)。
(4)加入5×10-2mg/ml的氯化钡后肠肌收缩高达3.21±0.16cm，此时给 予4×10-3-8×10-3g/ml的金红止痛片8次试验均未影响肠肌收缩的高度 (P＞0.05)。
(六)抗炎试验
1、对角叉菜胶(Carrageenan)致大鼠足肿的影响：
大鼠32只、体重190-220g雌雄各半，每组8只。分四组，专人用千分卡 尺测右后足足垫厚度后，各组分别igNS0.2ml/100g、金红止痛片8.0g/kg、 10.0g/kg(容量0.2ml/10g)及肌注(im)氢化考的松20mg/kg。im15min、 ig30min后于右后足足垫部皮下注射(SC)1％角叉菜胶0.1ml(8)。测给药后1h、 2h、3l、4h、6h、8h足垫厚度，并计算其肿胀值(致炎后足垫厚度—致炎前 足垫厚度)。结果金红止痛片两剂量组及氢考组与NS组比较均有显著差异， 氢考组与金红止痛片组2-6h无明显差异，但8h则有显著差异(表7)。
表7金红止痛片与氢考对角叉菜胶致大鼠足肿胀值的影响(X±SD)   药物                                                          足肿胀值(mm)   1h   2h   3h   4h   6h   8h   NS   金红止痛片I   金红止痛片II   氢考   1.60±0.75   1.59±0.38   1.36±0.52   1.12±0.53   2.35±0.79   1.69±0.81   1.40±0.64*   1.32±0.63*   3.55±0.56   2.43±0.73**   2.23±0.81**   1.98±0.48**   3.08±0.64   2.04±0.80*   2.05±0.63**   1.92±0.60***   3.15±0.67   2.90±0.68   2.48±0.80*   2.41±0.34*   3.09±0.44   2.97±0.53   2.12±0.62***Δ     1.57±0.42
注：金红止痛片I系8/g/kg，金红止痛片2系10g/kg，氢考系20mg/kg。
Δ金红止痛片与氢考组比较P＜0.05
2、对5-HT致大鼠足肿的影响：
雄性大鼠，每组8只，第一组igNS，第二组ig金红止痛片10.0g/kg， 第三组ig氢化考的松20mg/kg。按上法于右后足足垫部SC0.01％5- HT0.1ml。
结果表明金红止痛片于1-6h均有显著抑制大鼠足肿的作用(表8)，8h 后作用不显著。
表8金红止痛片对5-HT致大鼠足肿胀值的影响(X±SD)   药物                                                              足肿胀值(mm)   1h   2h   3h   4h   6h   8h   NS   金红止痛片   氢考   3.23±0.75   2.41±0.38*   2.10±0.21*   2.46±0.34   1.81±0.42*   1.57±0.37**   2.18±0.51   1.20±0.48**   1.18±0.36**   1.94±0.42   1.04±0.40**   0.98±0.39**   1.88±0.56   1.00±0.44**   0.83±0.40   1.39±0.62   0.90±0.58Δ   0.68±0.32**
Δ氢考与金红止痛片比较P＜0.05
3、对大鼠棉球肉芽肿的影响：选用体重182±21.5g♂大鼠27只，ip 戊巴比妥钠30mg/kg麻醉后，于各鼠双铡鼠蹊部常规消毒后，切开1cm长小 口，将灭菌称重为20mg的棉球(加青、链霉素混合液0.2ml，每ml含青霉素 800mg，链霉素650mg从切口植入皮下，缝合皮肤后，每日各组igNS，金红 止痛片5g/kg及10g/kg，连续6d后，于第7天打开切口，将棉球同其周围 结缔组织一并取出，剔去脂肪组织，放烘箱烘干(过夜)称重，称重量减去棉 球原重量即得肉芽肿重量，从表9知金红止痛片10g、kg组对棉球肉芽肿有 显著抑制作用，而5g/kg组无显著抑制作用。
表9金红止痛片对大鼠棉球肉芽肿重量的影响(M±SD)   组别   剂量(g/kg·d)   鼠数(只)   肉芽肿重(mg)   NS   金红止痛片   金红止痛片   -   5.0   10.0   9   9   9   188.4±59.8   171.5±67.4   89.6±24.5**
(七)对大鼠实验性胃溃疡的作用(醋酸法)(10)：大鼠22只，雌雄各半， 于半空腹状态，下随机分为两组，逐只放入含乙醚的钟罩内，麻醉后取出， 仰卧位固定于手术台上，剪去腹毛，作常规皮肤消毒。于剑突下腹正中部切 口约2.5cm，轻轻勾出十二指肠，将腺胃部轻轻拉于腹外，于胃体与胃幽门 窦交界处，将内盛10％醋酸0.05ml的微量注射器平刺入浆膜下约0.5mm， 形成丘疹，将胃轻轻送回。缝合腹壁，肌层及皮肤(在整个手术期间均用含 乙醚的棉球不时置胃动物鼻部作维持麻醉用)。术后次日igNS，金红止痛片 10g/kgd，连续给12d，于第13d处死，开腹，结扎幽门和贲门，取胃浸于1 ％甲醛液中，固定10min，沿胃大弯剪开，将胃外翻倒掉内容物，轻轻冲掉 食物残渣，观察各组溃疡情况。溃疡呈圆形或椭圆形，中心凹陷，四周微隆 起，密布毛细血管。若溃疡已愈合，则周围稍有隆起，表面红润，有放射状 细纹，用溃疡最长径和最短径表示溃疡指数。溃疡愈合百分率计算公式：

从表10知金红止痛片10g/kg组与NS组比较有显著差异，有促进大鼠 溃疡愈合的作用。
表10金红止痛片对实验性胃溃疡(醋酸法)的影响(M±SD)   组别     剂量   (g/kg·d)   动物数   (只)   溃疡指数   (mm)   愈合率   (％)   NS   金红止痛片   -   10.0   9   10   5.36±1.32   2.47±1.07**   53.92
小结：经药效学试验表明，金红止痛片除具有延缓胃排空；降低胃液分 泌量和总酸排出量，抑制胃蛋白酶分泌的作用外，并具有镇痛、解痉、抗炎、 抗溃疡作用。此结果表明金红止痛片能调节胃肠功能，起到疏肝理气，和胃 止痛之效。

实施例1：
取制备1000片片剂所需的原料：川楝子645g，延胡索(醋制)645g， 红花八角叶430g，云木香430g。按以下工艺制备：
1、取川楝子、云木香，称量后，加入不超出10倍量的水煮沸1.5小时， 过滤，药渣再加入8倍量水煮沸1.5小时，过滤。合并2次滤液，浓缩至浸 膏备用。
2、取延胡索(醋制)及红花八角叶，称量后，加入8倍量50％乙醇回流 提取1.5小时，滤过，药渣再加入8倍量乙醇回流提取1.5小时滤过，合并 滤液，减压回收乙醇得浸膏备用。
3、将1和2步的浸膏合并，减压干燥成干浸膏，称重，加入淀粉、糊 精拌匀，制粒后压片，得到每片重0.5克的片剂1000片，每片含生药2.15g。
本片剂口服，一次3-5片，一日3-4次。
实施例2：
薄层色谱法定性鉴别上述制备的金红止痛片：
(1)取本品5片，研细后置锥形瓶中，加石油醚(60-90℃)20ml，充分 振摇后超声提取1小时。分出醚层，置蒸发皿中浓缩至0.5ml作为供试品 溶液，另取木香对照药材粉末0.5g，加石油醚6ml，充分振摇后超声提取1 小时，分出醚层，浓缩至0.5ml作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药 典1995版一部附录35页)试验，吸取上述两种溶液各20μl分别点于同一 硅胶G薄层板上，以石油醚(60-90℃)—醋酸乙酯一苯(14∶3∶3)为展开剂， 展开，取出晾干，喷以5％香草醛稀硫酸液。加热数分钟后，供试品色谱中 在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色斑点。
(2)取本品15片，研细，加乙醇35ml充分振摇，超声提取半小时后， 过滤，滤液挥去乙醇，用10ml水将残渣转移至分液漏斗中，以醋酸乙酯20ml 分两次萃取，每次10分钟；合并萃取液，蒸干。残渣加10％盐酸10ml于水 浴上水解2小时滤过，滤液蒸干；残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。 另取槲皮素对照品，加乙醇制成2mg/ml的溶液为对照品溶液。照薄层色谱 法(中国药典1995版一部附录35页)试验，吸取供试品溶液30μl及对照品 溶液10μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—甲酸乙酯—甲酸(5∶4∶1) 为展开剂展开，晾干。自然光下观察，供试品色谱中在与对照品色谱相应的 位置上，显相同的黄色斑点。
(3)取本品15片，碾碎置入圆底瓶中，加入2ml蒸馏水和2ml浓氨水、 润湿药粉，再加入40ml氯仿(分析纯)，回流提取1小时、滤过、将氯仿浓 缩至5ml，作供试液进行薄层层析。另取延胡索乙素对照品，加乙醇制成每 1ml相当1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995版一部 附录35页)试验，吸取上述两种溶液各20μl分别点于同一硅胶G薄层板上， 以石油醚—氯仿—甲醇(10∶6∶1)为展开剂、展开、取出、晾干、喷以碘化铋 钾试液。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
实施例3测定金红止痛片中延胡索乙素的含量
取本品10片，精密称定，研细置锥形瓶中，加氨水2ml碱化、摇匀、 加苯30ml，放置12小时过滤，残渣再加苯30ml，摇匀，放置12小时，滤 过，合并滤液，将滤液移至分液漏斗中，用0.25mol/L的硫酸提取三次，每 次30ml，合并提取液，加氨水调至碱性，用氯仿提取三次，每次20ml，合 并氯仿，用蒸馏水10ml洗涤后置水浴蒸干，残渣加氯仿5ml溶解，蒸干， 再用少量氯仿溶解，精密加入0.01mol/L的硫酸25ml，置水浴挥去氯仿，放 冷至室温，加甲基红指示剂3滴，用0.02mol/L的氢氧化钠液滴定，结果用 空白试验校正。
每1ml 0.01mol/L硫酸相当于7.1084mg延胡索乙索。
本品含总生物碱，以延胡索乙素(C21H26O4N)计算，每片不少于0.5mg。