技术领域

本发明涉及一种通过施用吲哚类似物和药物组合物降低眼内压、治疗眼压过高 并治疗青光眼的方法。

                             发明背景

青光眼是一种通常与眼内压(IOP)的慢性升高有关的缓慢发展的致盲的疾病。 很高且持续的眼内压被认为会在视神经和视网膜的连接处对视神经乳头造成损伤， 导致视网膜的神经节细胞变性并导致青光眼特殊的视觉丧失。然而，IOP升高(也 称为眼高压)导致青光眼的机制还未清楚了解。此外，一部分典型的与青光眼有关 的视野丧失的患者并不显示出异常升高的IOP水平(被称为低眼压性或正常眼压性 青光眼)。

青光眼主要分为开角型、闭角型或先天性，还可进一步分为原发性和继发性。 青光眼是用各种药理学和手术方法治疗的。当青光眼与眼高压有关时，药理学治疗 包括肾上腺素能激动药(肾上腺素、dipevefrin、apraclonidine)、胆碱能激动药(匹 鲁卡品)、β受体阻滞药(倍他洛尔、左布诺洛尔、噻吗洛尔)、碳酸酐酶抑制剂(乙 酰唑胺)或是最近的前列腺素类似物(拉坦前列素(latanoprost)，LumiganTM)和α 肾上腺素能激动药(brimonidine)。这些药理学方法要么通过抑制睫状体产生房水， 要么使小梁或色素层巩膜房水流出比较容易，从而有助于使IOP恢复正常压力。抗 胆碱能药降低原发性青光眼的眼内压，减少对房水流出的阻力。抗胆碱酯酶抑制剂 已经被用来治疗原发性和某些类型的继发性青光眼，比如在白内障摘除后的无晶状 体性青光眼。先天性青光眼很少对治疗有反应，它通常是通过手术治疗的。在狭角 性青光眼中，在巩膜静脉窦处将小梁间隙的入口从虹膜的阻滞中解脱出来可以增加 房水的流出，这是药物诱导的虹膜括约肌收缩的结果。(Taylor，第123-125页，见 The Pharmacological Basis of Therapeutics，第七版，A.G.Gilman，L.S.Goodman， T.W.Rall和R.Murad编，MacMillan出版公司，纽约(1985))。

在宽角性或慢性单纯性青光眼中，小梁的入口未受物理阻碍；小梁这种小直径 孔洞的网状组织失去了它们的开放性。虹膜括约肌和睫状肌的收缩增加了小梁网的 紧张性和排列，从而促进房水通过该网至巩膜静脉窦的吸收和流出 (Watson，Br.J.Opthalmol.56：145-318(1972)；Schwartz，N.Engl.J.Med.， 290：182-186(1978)；Kaufman等，Handbook of Experimental Pharmacology 69：149-192(1984))。

急性充血性(狭角性)青光眼几乎总是医疗急症，这时药物主要是控制急性发作 的，但大范围的控制通常主要是基于手术(周边或全虹膜切除术)。相反，慢性单纯 性(宽角性)青光眼是逐渐的、隐袭性发作的，通常不易以手术改善；眼内压的控制 依赖于长期的治疗。

急性充血性青光眼可因不明智的让40岁以上的患者使用散瞳剂，或因各种会 导致瞳孔扩大或眼内血管充血的因素而引发。征兆和症状包括明显的眼睛发炎、半 开大的瞳孔、剧痛和恶心。治疗的目的是发作时使眼内压降低至正常水平。抗胆碱 酯酶抑制剂和拟副交感神经药构成的组合物被滴入结膜囊以发挥最大的功效。通常 使用的组合物中含有5％的毒扁豆碱水杨酸盐溶液和4％的匹鲁卡品硝酸盐溶液。辅 助的治疗包括静脉施用碳酸酐酶抑制剂(如乙酰唑胺(acetozolamide))以减少房水 的分泌，或渗透性药物(如甘露醇或甘油)以诱导眼内脱水。由于血管充血和前房角 阻滞的增加，长效的有机磷化合物不适用于狭角性青光眼。

对慢性单纯性青光眼和继发性青光眼的治疗包括：(1)拟副交感神经药(如匹鲁 卡品硝酸盐，0.5-0.6％)；(2)短效(如，毒扁豆碱水杨酸盐，0.25-0.5％)或长效(地 美溴铵，0.125-0.25％；二乙氧磷酰硫胆碱的碘化物，0.03-0.25％；异氟磷，0.025 ％)抗胆碱酯酶抑制剂；(3)β肾上腺素能拮抗剂，如噻吗洛尔马来酸盐，这是一种 每12小时施用一次的长效药物，它不直接影响瞳孔但能减少房水的产生(Boger等， Am.J.Opthalmol.86：8-18(1978)；Lotti等，Handbook of Experimental Pharmacology69：249-278(1984))并能避免调节作用的部分阻滞和长效抗胆碱酯 酶药的不良作用；以及反常的，(4)拟交感神经药(如，肾上腺素，0.25-2％，苯肾 上腺素，10％)，当和抗胆碱酯酶抑制剂或胆碱能激动药结合使用时，它们最为有 效。它们通过减少房水的分泌从而降低眼内压，并防止小血管的充血。

由于胆碱能激动药和胆碱酯酶抑制剂阻碍了调节，它们使看远时出现短暂的模 糊，这通常在短时间内施用相对较高剂量后发生。若长期施用胆碱能激动药和胆碱 酯酶抑制剂，则由于乙酰胆碱受体数量减少该反应会减小。

尽管长效抗胆碱酯酶药具有不频繁用药的方便性和高效性，使用长效抗胆碱酯 酶药是和出现晶状体浑浊和对自主神经的不良作用的巨大的风险相连的。有机磷类 药物DFP有最长的作用时间，当局部使用时特别有效；用花生油或芝麻油制成的溶 液需要每天至每周使用一次，且在对其它药物有抗性的严重病例可能控制眼内压。 由于大多数患者不喜欢油性载体，DFP已经被二乙氧磷酰硫胆碱取代。

用有效的长效抗胆碱酯酶药包地美溴胺、二乙氧磷酰硫胆碱和异氟磷)治疗青 光眼6个月或更长时间与出现白内障的高风险是有关的。(Axelsson等，Acta Opthalmol.(Kbh.)44：421-429(1966)；de Roetth，J.A.M.A.195：664-666(1966)； Shaffer等，Am.J.Opthalmol.62：613-618(1966))。尽管白内障的出现在未治疗的 可比年龄群中是常见的，这种情况下晶状体浑浊的发生可以达到50％，其风险与溶 液强度、用药频率、治疗时间和患者年龄成比例地增加。(Laties，Am.J.Opthalmol. 68：848-857(1969)；Kaufman等，第149-192页，见Pharmacology of the Eye， Handbook of Experimental Pharmacology，69卷，M.L.Sears编，Springer-Verlag， 柏林，(1984))。

当可以用噻吗洛尔、拟副交感神经药、毒扁豆碱或其它药物可以控制青光眼时 则不推荐使用长效抗胆碱酯酶药。尽管如此，由于不适当控制，青光眼会导致不可 逆的视觉缺失，当其它药剂无效时，长效胆碱酯酶抑制剂仍有它们的治疗重要性。

据发现，每天1-5次单用匹鲁卡品(4％)或合用毒扁豆碱(0.2％)治疗，不会使 晶状体浑浊出现率高于在可比年龄组中未治疗患者中的自发出现率(Axelsson， Acta Opthalmol.(Kbh.，Suppl.102，1-37(1969))。因此，匹鲁卡品和其它短效缩 瞳剂可用来控制眼内压。如果无效，在使用有效的长效抗胆碱酯酶药之前必需对白 内障出现的危险与升高眼内压的危险进行权衡。然而，患者必需间隔6个月或更短 时间对晶状体浑浊进行检查。

已经评价了其它的治疗青光眼的新药，包括A3亚型腺苷受体拮抗剂、钙调蛋白 拮抗剂和抗雌激素药(WO00/03741)；寡核苷酸可以对它的磷酸酯、糖或碱基进行 取代或修饰，以便降低眼内压(美国专利5,545,626)；一类被非芳香性氮杂二环系 统和任意被至多另两个取代基取代的吡嗪、嘧啶和哒嗪的衍生物(美国专利 5,219,849)；以及前列环素的类似物拉坦前列素(Higginbotham，Arch.Opthalmol. 114：998-999(1996))。四类可能有临床功效的用来长期控制青光眼的化合物包括有 局部活性的碳酸酐酶抑制剂、选择性α-2肾上腺素能激动药、前列腺素类和利尿 酸(Serle，Drugs Aging5：156-170(1994))。

滴注抗胆碱酯酶抑制剂后可能发生的各种各样的眼副作用有头痛、额痛、视觉 模糊、晶状体刺开(phacodinesis)、角膜周充血、充血性虹膜炎、各种变态反应和 罕见的视网膜剥离。当频繁的在结膜内滴注抗胆碱酯酶抑制剂时，会发生充分的吸 收从而造成各种全身性的作用，这是由于对胆碱酯酶和丁酰-胆碱酯酶的抑制作用 造成的。因此，胆碱能的自主功能会提高，有酯键的局部麻醉剂的作用持续时间延 长了，同时琥珀酰胆碱诱导的神经肌肉阻滞增强并延长了。患有迷走神经过敏和变 态反应的个体特别危险。

拉坦前列素(Xalatan)是一种前列腺素类激动药，据信它通过增加色素层巩膜 的房水流出从而降低IOP。拉坦前列素是异丙酯的前体药物，它在角膜内被酯酶水 解成有生物学活性的酸。Xalatan的处方为每天一次剂量且与每天两次剂量的0.5 ％噻吗洛尔有同样的效果。Xalatan通过增加虹膜中褐色色素的量可以逐渐改变眼 睛的颜色。这种对虹膜的长期作用是未知的。眼睑皮肤变黑也被报道与Xalatan 的使用有关。此外，Xalatan会逐渐增加睫毛的长度、粗细、颜色和数量。黄斑水 肿，包括黄斑囊样水肿会在Xalatan治疗时发生。这些现象主要发生在无晶状体 的患者、在晶状体囊后部撕裂的人工晶状体患者中，或在已知有黄斑水肿致病因素 的患者中。((Ophthalmic PDR，315-316(2001)。)

总之，尽管对于青光眼患者存在各种药物治疗以降低IOP的方法，这些方法无 论是在功效还是副作用方面都是受到限制的。

褪黑素是一种主要由松果体分泌的神经激素，视网膜也少量分泌这种激素。褪 黑素的产生遵照生理周期节律，在夜间水平增加。已知褪黑素能够调节生理周期节 律的许多方面，比如周期性信息的加工。它的作用机制包括褪黑素膜受体(分成三 种类型，MT1(以前被称为mel1a)、MT2(以前被称为mel1b或ML1)和MT3(以前被称为 ML2))的活化，和通过游离基清除活性而抵抗氧化性损伤的抗氧化保护作用。类似 于毒蕈碱受体和嘌呤能(purinergic)受体，MT1和MT2受体属于假定的7种跨膜结 构域G蛋白偶联受体超家族。MT1和MT2受体都已经被克隆并通过百日咳毒素敏感 性G蛋白与腺苷酸环化酶负偶联。MT3还没有被克隆，它似乎与磷脂酶C偶联。 (Mullins等，Cell Signal9，169-173(1997))。研究显示，MT1受体介导大鼠尾动 脉的血管收缩并与催眠(somnogenic)效应相关地抑制神经元引发(firing)，而MT2 受体介导大鼠尾动脉的血管舒张和生理周期节律的阶段性推进。(Marco等， Current Medicinal Chemistry6，501-518(1999))。已经用高亲和性配体5-(甲氧 基羰基氨基)-N-乙酰色胺(5-MCA-NAT)(也被称为GR135531)将MT3受体鉴定 (Molinari等，European J.Pharmacol.301，159-168(1996))，尽管没有报道任何 生理活性。

褪黑素在调节眼内压(IOP)中的作用还不清楚，以前的研究显示，根据物种和 生理周期节律中测量IOP的时间，褪黑素可以提高或降低IOP。(Chiou和 McLaughlin，Ophthalmic Res.16：302-306(1984)；Rohde等，J.Ocul.Pharmacol. 1：235-243(1985)；Chiou等，Ophthalmic Res.17：373-8(1985)；Rohde等， Ophthalmic Res.25：10-15(1993)；Meyer-Bothling等，Invest.Ophthalmol.Vis. Sci 34：3035-3042(1993)；Osborne，ActaNeurobiol.Exp.(Warsz)54Suppl： 57-64(1994)；Aimoto等，J.Ocul.Pharmacol.1：149-160(1985)；Wilsoet等， Ophthalmic Physiol.Opt.13：357-165(1993)；Dkhissi等，J.Neuroendocrimol. 10：863-869(1998)；Ritch，Curr.Opin.Ophthalmol.11：78-84(2000)；Kiuchi等， Curr.Eye Res.12：181-190(1993)；Dubocovich等，FASEB J.12，1211-1220(1998))。 大多数研究显示，褪黑素提高了IOP。然而，美国专利4,654,361揭示了一种通过 施用有效量的褪黑素降低眼内压的方法。在这里全文并入这一专利和这里引用的其 它的美国专利。

美国专利4,803,218揭示了一种通过施用含有[3-(氨基烷基)-1H-吲哚-5-基] 尿素化合物和药学上可接受的载体的药物组合物在动物中治疗高血压的方法。这一 专利还提到了制造N-[3-(2-氨基乙基)-1H-吲哚-5-基]尿素和相关的类似物的方 法。美国专利5,633,276、6,040,451、5,948,804和6,159,998揭示了用取代的 5-(2-咪唑啉-2-基-氨基)吲哚化合物以降低眼内压、老花眼、治疗偏头痛、高血压、 戒酒、药瘾、类风湿性关节炎、局部缺血性疼痛、痉挛状态、腹泻、减轻鼻充血和 小便失禁的方法。美国专利6,004,991、6,140,372、59,998,461和6,071,946揭 示了治疗与褪黑素紊乱有关的不适的方法。这里并入了上述专利中提到的合成取代 吲哚衍生物的方法，以供参考。

PCT国际申请WO96/25397揭示了对cannabinoid受体有活性的吲哚衍生物以 及它们在降低眼内压和治疗青光眼中的应用。PCT国际申请WO96/11685揭示了用 来治疗青光眼和其它病症的吲哚衍生物。上述两个PCT申请中提到的吲哚衍生物与 本发明的那些物质是不同的。

如上所述，通常用来治疗青光眼的药剂可能会造成不良的副作用，比如白内障 的出现。因此需要安全有效的治疗青光眼的药物。

                                发明概述

这里揭示了新的通过施用I、II、III和IV结构的化合物降低眼内压的方法，这 些化合物包括吲哚核或褪黑素型的化学结构。

本发明提供了一种使用此类化合物以降低眼内压的方法，与褪黑素相比，它们 增加了作用持续时间和/或强度。优选的化合物是5-(甲氧基羰基氨基)-N-乙酰色 胺(5-MCA-NAT)，也被称为GR135531，(Molinari等，Eur.J.Pharmacol.301，159- 168(1996))，它是对MT3受体有特异性的高亲和性配体。

本发明提供了降低眼内压的方法和治疗与眼内压有关的疾病(如眼高压和青光 眼)的方法。这一方法包括，向需要治疗的受试者施用有效量的吲哚衍生物以降低 眼内压。如结构式I、II、III和IV所示的吲哚衍生物在降低眼内压时有延长的作 用时间和/或和增强的疗效。

                             附图简述

图1显示了在6小时内，褪黑素对新西兰白兔IOP的作用。

图2显示了10小时内，等量的5-MCA-NAT的作用。

图3对比了5-MCA-NAT和褪黑素降低IOP的剂量-反应。

图4图解说明了褪黑素受体拮抗剂luzindole对5-MCA-NAT和褪黑素的降IOP 作用的逆转。

                             发明详述

本发明提供了一种治疗与升高的眼内压有关的病症的方法。此方法包括和通常 用来治疗或控制升高的眼内压的治疗药和辅助药一起或不一起施用有效量的如结 构式I、II、III和IV的吲哚衍生物。申请人意外发现，采用此类化合物使眼内压 显著并持续降低。有效量是使眼内压降低所必需的此类化合物的量。

本发明进一步提供了一种新的降低与眼高压病症有关的眼内压的方法，因此可 有效用于预防、控制和治疗眼高压。

本发明的方法可有效控制和/或治疗原发性青光眼，它包括两种类型：狭角性 或急性充血性青光眼和宽角性或慢性单纯性青光眼。但本发明的另一实施方案是控 制继发性青光眼的。

本发明的方法可有效提高用来治疗和控制不同类型青光眼的治疗药和辅助药 的效果。用来治疗狭角性或急性充血性青光眼的治疗药包括，例如，毒扁豆碱水杨 酸盐和匹鲁卡品硝酸盐。用来控制狭角性青光眼的辅助药包括，例如，静脉内施用 碳酸酐酶抑制剂，如乙酰唑胺以减少房水的分泌，或是施用渗透性药物，如甘露醇 或甘油以诱导眼内的脱水。用来控制宽角性或慢性单纯性青光眼和继发性青光眼的 治疗药包括，例如，拟副交感神经药(比如匹鲁卡品硝酸盐)，短效抗胆碱酯酶药(如 毒扁豆碱水杨酸盐)，长效抗胆碱酯酶药(如地美溴铵、二乙氧磷酰硫胆碱碘化物、 异氟磷)，β-肾上腺素能拮抗剂(如噻吗洛尔马来酸盐)和拟交感神经药(如肾上腺 素和苯肾上腺素)。最近，前列腺素类似物(拉坦前列素(Xalatan)，LumiganTM)、 α肾上腺素激动药(brimonidine)和Rescula(它可能通过一种未知的机制降低眼 内压)已经被用来控制与眼高压有关的青光眼。

对一些治疗剂，为达到实现目标效应的水平，高剂量是需要的，但这通常会带 来较大频度的与剂量相关的不良反应。因此，将本发明的化合物和通常用来治疗青 光眼的药物结合使用就可以使用相对较低剂量的此类药药，这样就可使与长期施用 此类治疗药有关的不良副作用的频度降低。因此，本发明化合物的另一个作用是， 降低用来治疗青光眼的药物的不良副作用，比如和长效抗胆碱酯酶药(包括地美溴 苯铵、二乙氧磷酰硫胆碱和异氟磷)有关的白内障的出现。

本发明提供了一种有延长的持续时间和/或增强的降低眼内压作用的使用结构 式I、II、III和IV的吲哚衍生物的方法。 化合物的描述

本发明提供了一种使用结构式I-IV： 的吲哚衍生物的方法，其中：

n＝0、1、2、3、4或5；

m＝0或1；

R1和R2是彼此独立的H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔基、 -芳基、-芳烷基、-芳烯基、-芳炔基、R6(CO)-、F、OR5；R1或R2还可以是R6R7N(CO)-；

或者任选地，当R1和R2被放在一起时，可以代表氧代；或是(未)取代的4、5、 6或7元碳环或杂环；

R3和R4是彼此独立的H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔基、 -芳基、-芳烷基、-芳烯基、-芳炔基、R6(CO)-；

或者任意地，当R3和R4被放在一起时，可以代表氧代；或是(未)取代的4、5、 6或7元碳环或杂环；

或者任意地，当R2和R4被放在一起时，可以代表(未)取代的4、5、6或7元 碳环或杂环；

R5＝H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔基、-芳基、-芳烷基、 -芳烯基、-芳炔基、R6R7N(CO)-、R6(CO)-、R8O(CO)-、R8S(O)2-、R8S(O)-、R8OS(O)2-、 R8OS(O)-、R6R7NP(O)(OR9)-、R8P(O)(OR9)-、(R8O)P(O)(OR9)-、CF3-；

R6和R7是彼此独立的H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔基、 -芳基、-芳烷基、-芳烯基、-芳炔基或杂环；

或当任意地放在一起时，NR6R7可以代表(未)取代的3、4、5、6或7元环；

R8＝(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔基、-芳基、-芳烷基、- 芳烯基、-芳炔基、杂环或CF3-；

R9＝H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔基、-芳基、-芳烷基、 -芳烯基、-芳炔基；或任选地当被放在一起时，R6和R9可以代表5、6或7元环；

R10和R’10是彼此独立的H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔 基、-芳基、-芳烷基、-芳烯基、-芳炔基、杂环、R6R7N(CO)-、R6(CO)-、R8O(CO)-、 R8S(O)2-、R8OS(O)2-、R6R7NS(O)2-、CF3-；

R11＝R6R7N(CO)-、R6(CO)-、R8O(CO)-、R8S(O)2-、R8OS(O)2-、R6R7NS(O)2-，

X1＝O、S、NR9、-CF2-、-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、或不存在；

Z1＝OR5；NR10R11；

Z2和Z3的独立的R6R7N(CO)-、R6(CO)-、R8O(CO)-、R8S(O)2-、R8OS(O)2-、 R6R7NS(O)2-；

A＝卤素、NO2、CN或R5-X1-；

B＝卤素、NO2、CN或R5-X1-；

或任选地，如果B不是卤素、NO2、CN或H，并且当B出现在吲哚的4位时，则 B和R1、或R3、或Z1一起出现时，可以代表(未)取代的5、6或7元碳环或杂环；

D1＝卤素、NO2、CN或R5-X1-；

D2＝H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、卤素、取代或未取代的芳基、或取 代或未取代的芳烷基；

E＝H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、-烯基、-炔基、-芳基、-芳烷基、 -芳烯基、-芳炔基、R8O(CO)-、R8S(O)2-或OR6；

或任选地，E＝R6(CO)-，只要当Z1＝NR10R11时，R10是H；

或任选地，E＝R6(CO)-，只要当Z1＝OR5时，R5不是H、烷基、芳基或芳烷基；

或任选地，E＝R6R7N(CO)-，只要当Z1＝NR10R11时，R10是H；

或任选地，E＝R6R7N(CO)-，只要当Z1＝OR5时，R5不是H、烷基、芳基或芳烷基；

或任选地，当D1＝R5-X1-和E被放在一起时，可以代表(未)取代的4、5、6或7 元杂环；

或任选地，当D1＝R5-X1-和R1被放在一起时，可以代表(未)取代的5、6或7 元的碳环或杂环；

或任选地，当D1＝R5-X1-和R3被放在一起时，可以代表(未)取代的5、6或7 元的碳环或杂环；

或任选地，当D1＝R5-X1-和Z1被放在一起时，可以代表(未)取代的5、6或7 元杂环；

或任选地，当Z1和R1被放在一起时，可以代表(未)取代的4、5、6或7元杂 环；

只要当n＝1，m＝O，R5＝CH3，X1＝O，B＝D1＝E＝R3＝R4＝H时，Z不是-NHAc；

也只要当D2＝H，R5＝CH时3，R6不是CH3；

对映异构体、非对映异构体、顺/反异构体、药学上有效的盐类和它们的混合 物都包括在本发明内。

对本发明有效的优选的化合物是5-(甲氧基羰基氨基)-N-乙酰色胺(MCA-NAT)， 也被称为GR135531。

本发明一个优选的实施方案涉及有II结构的化合物，其中：

Z2和Z3是独立的N R6R7(CO)-、R6(CO)-、R8O(CO)-、R8S(O)2-、R8OS(O)2-、 R6R7NS(O)2-；

或任选地，各个Z2-N-R10和Z3-N-R10单位都是独立的，代表4-7元环；

且结构式I中的D1现在是H。

本发明另一个优选的实施方案涉及有III结构的化合物，其中：

D1如实施例部分定义，或任选地，D1可以和R6形成环，或者，D1和R6可以不存 在，而用羰基在环中连接这两个位置；所有其它的术语都如前定义

本发明一个较优选的实施方案涉及结构式III的如下化合物，其中：

B、D1和E＝H

所有的术语如前定义；

本发明另一个优选的实施方案涉及有IV结构的化合物，其中；

D2＝H、(未)取代的线性-、分支-或环-烷基、卤素、取代或未取代的芳基、或取 代或未取代的芳烷基；

只是当R5＝R6＝CH3时，D2不是H；

本发明另一个优选的实施方案涉及有IV结构的化合物，其中：

R5＝C1-C4烷基、乙酰基、甲酰基或CF3；

R6＝H、C1-C4烷基或CF3；

只是当R5＝CH3，D2＝H时，R6不是H；

定义：(未)取代这一说法涉及烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基、芳 炔基，它是指所述的基团可以被或不被选自同样基团或选自卤素、氮、氧、磷或硫 的基取代。烷基、烯基、炔基这些术语是指含有1-9个碳原子的这种基。芳烷基、 芳烯基、芳炔基这些术语是指含有两个如此定义的基形成的基团。若没有进一步说 明，环这一术语是指(未)取代的3-7元环。杂环这一术语是指含有一个或多个非 碳原子且有任何不饱和度或没有不饱和度的环。例如，芳烯基是指连接到烯基上的 芳基。

提供了本发明化合物的特殊的例子和制造所述化合物的方法。本发明提供了用 于降低眼内压并治疗青光眼的使用含有如结构式I-IV所示的吲哚衍生物(如褪黑 素能类似物)和药学上可接受的载体的药物组合物制剂的方法。本发明的化合物还 包括它们无毒的药学上可接受的盐类，比如(但不限于)氯化物、硫酸盐和乙酸盐类， 以及钠盐、铵盐和吡啶盐。药学上可接受的盐类是保留了母体化合物所需的生物活 性且没有不需要的毒理作用的盐类。本发明还包括这里所述化合物的前体药物。那 些精通此领域的技术人员将知道各种合成法，它们可用来制造无毒的药学上可接受 的化合物的盐类和前体药物。

尽管本发明的化合物主要是用来治疗人类患者的，它们也可用于兽医目的，用 来治疗其它的哺乳类患者，比如狗类和猫类。

根据用Xomed(杰克逊维尔，佛罗里达州，美国)提供的TONOPEN接触型眼压计 测得的IOP的改变确定了本发明化合物的药效。这些化合物的功效反映在它们活化 褪黑素受体以实现目标反应的能力上。目标反应是降低与青光眼有关的眼内压。有 效剂量将依赖于各个患者的特征、所用特殊化合物的活性、用药方式和疾病或病症 的特征，并且可由那些精通此领域的人员决定。

所需的剂量和/或浓度水平是从约10-12M至约10-3M，较好的是在约10-11M至约 10-4M的范围内，最好是从约10-10至约10-5M。 新型化合物的施用

可以用任何此领域的熟练技术人员已知的方法施用本发明的化合物以治疗眼 疾。吲哚衍生物是以含有活性化合物或其药学上可接受的盐类和药学上可接受的赋 形剂或载体的无菌制剂的形式施用。

可以通过任何合适的方法将这里叙述的活性化合物施用到患者的眼中，但最好 制成活性化合物的液体或凝胶悬浮液，以滴眼液、洗眼液、喷雾剂、软膏剂或凝胶 剂的形式施用。或者，可通过脂质体或其它载体(如环糊精)将活性化合物加到眼中。 此外，可以通过泵-导管系统将活性化合物输注入泪膜。本发明的另一个实施方案 涉及含在连续释放或选择性释放装置中的活性化合物，这些装置有膜，比如(但不 限于)用在OcusertTM系统(Alza公司，帕洛阿尔托，加利福尼亚州)的那些膜。在 另外的实施方案中，这些活性化合物可含在、装载于或附着在放在眼上的隐性眼 镜。本发明的另一个实施方案涉及可敷在眼表面的含在棉签或海绵中的活性化合 物。本发明的另一个实施方案涉及可用于眼表面的含在液体喷雾中的活性化合物。 本发明的另一个实施方案涉及直接注射进入泪腺组织或注射在于眼表面，或玻璃体 内注射的活性化合物的注射剂。

含有活性化合物的局部溶液还可以含有生理上相容的赋形剂，精通眼科技术的 人员可用常规的标准进行选择。赋形剂可选自己知的眼科赋形剂，包括(但不限于) 盐水和含水的电解质溶液、含水的聚醚类(如聚乙二醇)、聚乙烯类(如聚乙烯醇和 聚吡咯烷酮)、纤维素衍生物类(如甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素)、石油衍生物 类(如矿物油和白凡士林)、动物脂肪(如羊毛脂)、丙烯酸的聚合物(如羧基聚亚甲 基凝胶)、植物脂肪(如花生油)和多糖类(如葡聚糖)和糖胺聚糖类(如透明质酸钠盐) 和盐类(如氯化钠和氯化钾)。

除了上述局部用药的方法，还有许多全身性施用本发明的活性化合物的方法， 这样，化合物就可以通过全身吸收和循环到达眼部。这类方法之一涉及一种被受试 者吸入的含有活性化合物的可吸入颗粒的气溶胶悬浮液。活性化合物将通过肺被吸 收进血液，或经过鼻泪管与眼组织接触，随后再以药物有效量与眼内细胞接触。可 吸入的颗粒可以是液体或固体，粒径应该足够小以被吸入时通过口腔和喉；通常， 粒径在约1-10微米，但最好在1-5微米，这一范围内的颗粒被认为是可吸入的。

另一种向受试者的眼全身性施用活性化合物的方法包括以液态制剂的眼药水 或洗眼液或滴鼻药水形式，或以受试者吸入的可吸入颗粒的鼻喷雾剂的形式施用液 /液悬浮液。可以用精通此领域的技术人员已知的方法，将活性化合物与合适的赋 形剂，如无菌无热原的水或无菌盐水混合，以制备用来制造鼻喷雾剂或滴鼻或滴眼 液的活性化合物的液态药物组合物。

其它全身性施用活性化合物的方法包括口服施用，其中含有I、II、III和IV 结构化合物的药物组合物是片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散的粉剂或颗粒 剂、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆剂或酏剂的形式。可以根据此领域中已知的用来制 造药物组合物的任何方法来制造供口服的组合物，且这种组合物可以含有一种或多 种选自：甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的物质以提供好看且美味的药物制剂。 与无毒的药学上可接受的赋形剂混合的含有活性成分的片剂是适宜于制造片剂的。 这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸 钠；成粒剂和崩解剂，如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶； 和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣或可用已知的技术进行包 衣以延迟它们在肠胃道中的崩解和吸收，从而在较长的时间内提供持续的活性。例 如，可以使用单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯之类的缓释材料。供口服的制剂可 以硬明胶胶囊的形式提供，其中活性成分与惰性固体稀释剂(如，碳酸钙、磷酸钙 或高岭土)混合，或作为软明胶胶囊的形式，其中活性成分与水或油性介质(如，花 生油、液态石蜡或橄榄油)混合。

其它向受试者的眼全身性使用活性成分的方法包括活性成分的栓剂形式，以通 过全身性吸收和循环使治疗有效量的化合物到达眼部。

进一步的全身性施用活性化合物的方法包括在外科手术时直接滴注凝胶、乳 膏、粉末、泡沫、晶体、脂质体、喷雾或液态悬浮液形式的化合物，这样治疗有效 量的活性化合物就通过全身性吸收和循环与所述受试者的眼组织接触。通过以下实 施例进一步阐述了本发明，这些实施例不能理解为将本发明限制在它们所描述的特 定步骤的范围内。

                            实施例1

5-硝基-色胺

这一方法是根据Macor等，Synth.Comm.23：65-72(1993)类似的方法改进的。 向5-硝基吲哚(6.2mmol)和苯邻二甲酰亚胺(0.4g)的乙醚(30mL)悬浮液中逐滴 加入草酰氯(19.2mmol)，将反应混合物在24℃下搅拌48小时。然后将反应容器和 Dewar冷凝器连接，冷却至0℃，并向混合物中鼓入无水氨1.5小时。在真空下除 去气体和溶剂。和水一起研磨所得黄色固体、过滤、并用甲苯洗涤残余物。固体被 干燥，得到2-氨基-1-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙-1，2-二酮。将一部分化合物 (0.59mmol)加到THF(15mL)中并用硼烷-THF(2.4mL1M的溶液)在28℃下处理16小 时。用碳酸氢钠中和反应物并用乙酸乙酯萃取。在真空下干燥乙酸乙酯的萃出物， 重新溶解在乙醇中(10mL)并在氟化铯(360mg)和碳酸钠(312mg)存在时回流。通过硅 藻土过滤混合物，蒸发，在硅胶上对残余物进行层析并用氯仿-甲醇-氨(8∶2∶0.2) 作为洗脱剂得到标题化合物(20mg)。

                             实施例2

N-[2-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-乙酰胺

将5-硝基色胺(6mmol)溶于吡啶(15ml)，并用乙酸酐(7mmol)在27℃下处理20 分钟。在真空下除去溶剂，将残余物溶于少量甲醇并通过短的硅胶塞以含有5％甲 醇-氯仿洗脱剂洗脱。收集含有的产物的级分，蒸发并于＜0.1mm Hg彻底干燥。

                             实施例3

N-[2-(5-氨基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-乙酰胺

将实施例2的产物(0.05mmol)溶于乙醇(3mL)，并在3个大气的H2压力下在催 化量的10％Pd/C上氢化6小时。通过硅藻土过滤除去催化剂并在真空下将溶剂除 去，得到了标题化合物。这种产物对空气略微敏感，应立即用于以后的反应。

                             实施例4

{3-[2-(2-羟基-苄基氨基)-乙基]-1H-吲哚-5-基}-氨基甲酸甲酯

将5-硝基色胺(6mmol)和水杨醛(7mmol)溶解在用氢氧化钾(0.15g)缓冲的乙醇 (35mL)中，并用硼氢化钠(18mmol)在24℃下处理8小时。在真空下除去乙醇并将 残余物在乙醚和水之间分配，将乙醚相干燥，蒸发，并将油在硅胶上进行层析以乙 酸乙酯-己烷洗脱得到2-{[2-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙基氨基]-甲基}-苯酚。同 上在Pd/C上氢化之后，将残余物溶解在吡啶(12mL)中并用氯甲酸甲酯(9mmol)处 理。在加入氯甲酸酯后立即形成了带褐色的沉淀，它在20分钟内又溶解了。短时 间后进行硅胶TLC(5％甲醇-氯仿洗脱)后判断反应的完成。将混合物蒸发至干并在 ＜0.1mmHg的真空下至少保持2小时。然后将其溶解在少量甲醇中，并通过反相HPLC 用水-甲醇梯度进行纯化。

                             实施例5

[3-(2-丙酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸甲酯

将5-硝基色胺(6mmol)溶解在吡啶(15ml)中并用丙酸酐(7mmol)在27℃下处理 20分钟。在真空下除去溶剂，将残余物于＜0.1mm Hg的压力彻底干燥。然后将残余 物氢化并如前面的实施例将其转变成氨基甲酸甲酯。通过短的硅胶塞过滤并以5％ 甲醇-氯仿作为洗脱剂将标题化合物纯化。

                             实施例6

N-[2-(5-二甲基氨基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-乙酰胺

将N-[2-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙基]乙酰胺(0.6mmol)溶于乙腈(1mL)中并 和催化量的DMAP和焦碳酸-二-叔丁酯(0.7mmol)一起搅拌1小时。在真空下除去溶 剂并对残留的油进行层析用乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂。将产物溶解于乙醇(10ml) 并如上述方法进行氢化。将残余物溶解于DMF(2mL)，加入二异丙基乙胺(1.4mmol) 然后再加入甲基碘(1.4mmol)。将混合物在25℃下搅拌3小时，然后过滤，蒸发至 干，溶解在乙醇中并用活性炭脱色。将残余物溶解于三氟乙酸和1当量的苯硫酚， 并在20℃下搅拌1小时。除去溶剂，将化合物溶解于异丙醇-水(5∶1)并用2当量 (w/w)氢氧化物型的Dowex AG1-X8离子交换树脂进行处理。蒸发掉溶剂，然后结晶， 得到标题化合物。

                             实施例7

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-2-苯基-1H-吲哚-5-基)-氨基甲酸甲酯

将2-[2-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-异吲哚-1，3-二酮(1mmol)溶解于THF/ 氯仿(1∶1)，并用吡啶氢溴化物过溴化物在0℃下处理90分钟，然后从硅胶柱上用 氯仿-甲醇洗脱。将产物溶解在甲苯-乙醇(1∶1)中并用苯基硼酸(1.5当量)、碳酸 钠(2.5当量)、氯化锂(3当量)和四(三苯膦)钯(5mol％)处理。将混合物回流4小时， 在真空下浓缩，并在硅胶上将油进行层析，以乙酸乙酯-己烷洗脱得到2-[2-(5-硝 基-2-苯基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-异吲哚-1，3-二酮。将这一化合物溶解在乙醇 (6mL)中，并和乙二胺(3当量)一起回流18小时。在真空下除去溶剂，并用吡啶- 乙酸酐(1∶1，6mL)将该物质乙酰化。在真空下除去溶剂，将残余物在硅脑上层析， 并以乙酸乙酯-己烷洗脱。将产物氢化并如以上实施例转变成氨基甲酸甲酯。通过 反相HPLC分离出纯的产物。

                             实施例8

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-2-甲基-1H-吲哚-5-基)-氨基甲酸甲酯

在2-甲基-5-硝基吲哚(1.4mmol)和苯邻二甲酰亚胺(0.1g)的乙醚(10mL)悬浮 液中逐滴加入草酰氯(4.4mmol)，将反应混合物在24℃下搅拌48小时。然后将反 应容器和Dewar冷凝器连接，冷却至0℃，并向混合物中通入无水氨1.5小时。在 真空下除去气体和溶剂。和水一起研磨所得褐色固体、过滤、并用甲苯洗涤残余物。 固体被干燥，得到2-氨基-1-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙-1，2-二酮。将一部分化 合物(0.59mmol)溶于THF(15mL)中并用硼烷-THF(2.4mL1M的溶液)在28℃下处理 16小时。用碳酸氢钠中和反应物并用乙酸乙酯萃取。在真空下干燥乙酸乙酯的萃 出物，重新溶解在乙醇中(10mL)并在氟化铯(360mg)和碳酸钠(312mg)存在时回流。 通过硅藻土过滤化合物，蒸发，在硅胶上对残余物进行层析并用氯仿-甲醇-氨 (8∶2∶0.2)洗脱得到2-(2-甲基-5-硝基-1H-吲哚-3-基)-乙胺。这一化合物被乙酰 化、氢化并被转化成如上所述的氨基甲酸甲酯。

                             实施例9

[3-(3-乙酰氨基-丙-1-基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸甲酯

于THF-HMPA(9∶3，11mL)中在0℃下用氢化钠(7mmol)将氰基甲烷膦酸二乙酯 (7mmol)处理10分钟。然后加入1-乙酰-5-硝基吲哚-3-甲醛(6mmol)，并在室温下 将溶液搅拌3小时。将混合物倒进冰水中并将pH调至5。蒸发去溶剂并和甲醇一 起研磨残余物，得到固态的3-(1-乙酰-5-硝基-1H-吲哚-3-基)-丙烯腈。将其溶于 被氨饱和的乙醇(75mL)，并在3个大气的H2压力下在Raney镍上氢化16小时。除 去催化剂，然后按上述方法乙酰化，制得N-[3-(5-硝基-1H-吲哚-3-基)-丙-1-基] 乙酰胺，用上述方法将其氢化、氨基甲酰化并用反相HPLC纯化。

                             实施例10

[3-(3-苯磺酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸甲酯

将5-硝基色胺(6mmol)溶解于吡啶(15ml)并在25℃下用苯磺酰氯处理4小时。 将混合物倒进冰水中并用乙醚(3×50mL)萃取。用1M HCl(2×50mL)洗涤乙醚萃出 物，然后用饱和的碳酸氢钠(2×50mL)洗涤，用硫酸镁干燥并在减压下蒸发。如前 面的实施例，将所得固体氢化并转化成氨基甲酸甲酯。

                             实施例11

N-[2-(5-脲基-1H-吲哚-3-乙基]-乙酰胺

将实施例3的产物溶解于乙酸-水(1∶2，3mL)并加入氰酸钠(2mmol)。搅拌直至 有带棕色的胶状物沉淀出。用氯仿(3×30mL)萃取混合物，并用饱和的碳酸氢钠洗 涤有机萃取液，用硫酸镁干燥并在真空下蒸发去溶剂。按上述方法，用反相HPLC 纯化所得产品。

                             实施例12

N-[2-(5-甲氧羰基氨基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-琥珀酰胺酸

在5-硝基色胺(6mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入三乙胺(12mmol)、 DMAP(0.6mmol)和琥珀酸酐(9mmol)。将混合物搅拌4小时，在真空下除去溶剂，将 残余物在硅胶上进行层析，用含1％乙酸的10％甲醇-氯仿作为洗脱剂。然后如前面 的实施例，将产物氢化并转变成氨基甲酸甲酯。按上述方法，用反相HPLC纯化产 物。

                             实施例13

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸烯丙酯

然后用氯甲酸烯丙酯，以与上面同样的方法处理实施例3的产物(5mmol)，并 以硅胶纯化，用5％甲醇的氯仿溶液作为洗脱剂。

                             实施例14

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸3-羟基-丙-1-基酯

将[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸烯丙酯(1mmol)溶解于 THF(27mL)，并滴入硼烷-THF(2mmol)。2小时后，加入氢氧化钠(4mL，3M)和过氧 化氢(4mL，30％)并将溶液继续搅拌1小时。将溶液浓缩至一半体积，加入10mL水 并用乙酸乙酯(4×25mL)萃取。用盐水洗涤合并的萃出物，干燥，在真空下除去溶 剂，在硅胶上层析产物，并以5％甲醇的氯仿溶液作为洗脱剂。

                             实施例15

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸2，3-二羟基-烯丙酯

将[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸烯丙酯(1mmol)溶解于吡 啶(7mL)并在25℃下用四氧化锇(0.01mmol)和H2O2(1mL，30％的水溶液)处理15小 时。在真空下除去溶剂并在硅胶上层析产物，以10％甲醇的氯仿溶液作为洗脱剂。

                             实施例16

N-[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1H-吲哚-5-基]-乙酰胺

将实施例1的产物(0.05mmol)溶解于乙醇(3mL)中，并在3个大气的H2压下在 催化量的10％Pd/C上氢化过夜。通过硅藻土过滤除去催化剂并在真空下将溶剂除 去。如上所述，用吡啶/乙酸酐进行乙酰化制得标题化合物。

                             实施例17

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-2-溴-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸甲酯

在25℃下，用N-溴琥珀酰亚胺(0.05mmol)处理5-甲氧羰基氨基-N-乙酰色胺 (0.05mmol)的乙酸(0.5mL)溶液3.5小时。然后用50％的氢氧化钠溶液中和此溶液 并用乙酸乙酯萃取。将有机萃液蒸发，在硅胶上进行层析，用2％的甲烷-氯仿作 为洗脱剂得到纯化的产品。

                             实施例18

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1-苄基-1H-吲哚-5-基]-氨基甲酸甲酯

在实施例2产物(0.04mmol)的DMF(0..7mL)溶液中加入氢化钠(0.1mmol)。混合 物立即由黄色变为红色。搅拌20分钟后，加入苄基溴(0.1mmol)并将混合物再搅拌 2小时。然后在水和乙酸乙酯之间将反应物进行分配，分离各层，在真空下蒸发乙 酸乙酯相并在高真空下将产物干燥。然后将残余物溶解在少量的甲醇中，采用水- 甲醇的梯度进行反相HPLC将产物分离。用以前实施例中的方法，通过氢化并转化 成氨基甲酸甲酯，将产物转化成标题化合物。

                             实施例19

(1-氧代-2，3，4，9-四氢-1H-β-咔啉-6-基)-氨基甲酸甲酯

用以前实施例中施用的方法，通过氢化并转化成氨基甲酸甲酯，将6-硝基- 2，3，4，9-四氢-β-咔啉-1-酮(0.05mmol)转化成标题化合物。

                             实施例20

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-1-甲基-1H-吲哚-5-基]-甲基-氨基甲酸甲酯

在5-(甲氧羰基氨基)-N-乙酰色胺(0.03mmol)的DMF(0.7mL)溶液中加入氢化钠 (0.1mmol)，并在室温下将混合物搅拌20分钟。然后加入碘甲烷(0.1mmol)并将混 合物继续搅拌2小时。在水和乙酸乙酯间将反应混合物进行分配，在真空下蒸发乙 酸乙酯相并在高真空下将产物干燥。然后将残余物溶解在少量的甲醇中，采用水- 甲醇的梯度进行反相HPLC将产物分离。用以前实施例中的方法，通过氢化并转化 成氨基甲酸甲酯，将产物转化成标题化合物。

                             实施例21

[3-(2-乙酰氨基-乙基)-4-(1-甲氧基-乙基)-1-甲基-1H-吲哚-5-基]-氨基甲 酸甲酯

在1-(1H-吲哚-4-基)-乙醇(4mmol)的DMF(7mL)溶液中加入氢化钠(10mmol)。 搅拌20分钟后，加入碘甲烷(10mmol)并将混合物继续搅拌2小时。然后在水和乙 酸乙酯之间将反应物进行分配，分离各层，在真空下蒸发乙酸乙酯相并在高真空下 将产物干燥。然后将残余物溶解在少量的甲醇中，在硅胶上进行层析，以氯仿-甲 醇作为洗脱剂将4-(1-甲氧基-乙基)-1-甲基-1H-吲哚分离。将产物(2mmol)溶解于 乙醚(40mL)，逐滴加入草酰氯(8mmol)，并将混合物在24℃下搅拌8小时。然后将 反应容器和Dewar冷凝器连接，冷却至0℃，并向混合物中通入无水氨1.5小时。 在真空下除去气体和溶剂。将所得固体溶解在乙酸乙酯中，用盐水萃取，并用硫酸 镁干燥乙酸乙酯相并将其蒸发。将该物质溶解在THF(15mL)中并在25℃下用硼烷- THF(3mL，1M的溶液)处理16小时。用碳酸氢钠中和反应物并用乙酸乙酯萃取。然 后在真空下干燥乙酸乙酯萃出物，重新溶解在乙醇中(10mL)并在氟化铯(380mg)和 碳酸钠(350mg)存在下回流。通过硅藻土过滤化合物，蒸发，在硅胶上对残余物进 行层析并用氯仿-甲醇-氨(9∶1∶0.1)作为洗脱剂得到2-[4-(1-甲氧基-乙基)-1-甲 基-1H-吲哚-3-基]-乙基胺。将这一物质溶解于吡啶(6mL)并用乙酸酐(3mL)处理以 得到N-{2-[4-(1-甲氧基-乙基)-1-甲基-1H-吲哚-3-基]-乙基}-乙酰胺。在 ＜0.1mmHg下干燥24小时后，将化合物(1mmol)溶于二氯甲烷(2mL)。加入硝酸铵 (1.7mmol)，然后加入三氟醋酐(3mmol)。将混合物搅拌过夜，然后将其在冷的饱和 碳酸氢钠和氯仿之间分配。用水洗涤有机相，用硫酸镁干燥并蒸发至干。在硅胶上 层析，用乙酸乙酯-己烷作为洗脱剂分离出N-{2-[4-(1-甲氧基-乙基)-1-甲基-5- 硝基-1H-吲哚-3-基]-乙基}-乙酰胺，用以前实施例中的方法，通过氢化和氨基甲 酸甲酯的形成将其最终转变成标题化合物。

                             实施例22

褪黑素和5-(甲氧基羰基氨基)-N-乙酰色胺(5-MCA-NAT)对兔眼内压的作用

在新西兰白兔中研究了褪黑素和5-(甲氧基羰基氨基)-N-乙酰色胺(5-MCA- NAT)，也被称为GR135531对眼内压(IOP)的作用

眼内压的测量：IOP是用Xomed(杰克逊维尔，佛罗里达州，美国)提供的TONOPEN 接触型眼压计测得的。向一侧角膜局部施用10微升药物，而向对侧的眼睛施用同 样体积的盐水溶液。将角膜麻醉以避免任何与应用眼压计有关的不适。在施用药物 之前进行两次测量。

药理学研究：在DMSO中将褪黑素(Sigma，圣路易斯)和5-MCA-NAT(Tocris，布 里斯托尔，英国)制成10-100倍的高浓度并用盐水稀释。采用了10pg/10μL- 1mg/10μL(褪黑素相当于43fmol-43μmol，5-MCA-NAT相当于34fmol-34μmol)的剂 量，在用药后第0.5、1、2、3、4、5和6小时测量眼内压。每天对一个动物试验 一个剂量。在用褪黑素或5-MCA-NAT之前30分钟，以100μg/10μL或342nM的剂 量加入非特异性的褪黑素拮抗剂luzindole。

褪黑素和5-MCA-NAT对兔IOP的作用：褪黑素和5-MCA-NAT(10pg/10μL- 1mg/10μL)引起了IOP剂量依赖性的降低，在10μg/10μL时这一值最大，降低了24 ±4.4％(n＝8)。在1小时后观察到了最大效果并保持了3小时(图1)。5-MCA- NAT(10pg/10μL-1mg/10μL)也引起了IOP剂量依赖性的降低，它在100μg/10μL时 最大，降低了43.1±3.65％(n＝8)。在2小时后观察到了最大效果并保持了10小时 (图2)。对5-MCA-NAT的最大响应在统计学上显著高于对褪黑素的响应。褪黑素和 5-MCA-NAT的IC50值分别为363±23.0ng/10μL和423±30ng/10μL，这分别相当于 1.6±0.1nmol和1.8±0.1nmol的剂量(图3)。这些值彼此之间没有显著差异。

用非特异性的褪黑素受体拮抗剂luzindole(100μg/10μL)预先处理可以消除褪 黑素和5-MCA-NAT的作用(图4)，但当单独使用时，在6小时之后就没有作用了。

这些结果显示，褪黑素和选择性的MT3受体激动剂5-MCA-NAT都对IOP引起剂 量依赖性的降低，而5-MCA-NAT引起的最大响应约为褪黑素引起的响应的两倍。这 些结果说明，假定存在一组褪黑素受体，则褪黑素似乎就成为部分激动剂，而5- MCA-NAT则成为完全激动剂。非特异性的褪黑素受体拮抗剂luzindole消除褪黑素 和5-MCA-NAT作用的能力说明，褪黑素和5-MCA-NAT的作用是通过褪黑素受体介导 的。

现在已经用完整、清楚、简洁且准确的术语描述了本发明以及制造和使用它的 方式和方法，这就使得精通此领域的任何技术人员都可以制造和使用它。应该理解 的是，上面描述了本发明优选的实施方案，并可以在不背离如权利要求所列出的本 发明范围的情况下对其作出改进。为特别指出并明确要求本发明的主题，用以下的 权利要求结束本说明书。

本申请要求提交于2000年7月28日的西班牙申请第P200001916号的优先权。 本申请还要求提交于2001年3月16日的美国临时申请60/276,885号的优先权。