一种快速检测血细胞压积的方法
阅读：227发布：2020-05-15
专利汇可以提供一种快速检测血细胞压积的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 申请 公开了一种快速检测血细胞压积的方法，在可计量体积的容器内，使用抗血细胞 抗体 对血液进行沉降，然后计算血细胞压积。本申请还提供上述方法在 即时检验 中的应用。本申请提供的方法，尤其适用于即时检验(POCT)时使用，材料便携，反应迅速，简单易操作，结果准确，能够快速得到血细胞压积，便于诊断与后续 治疗 工作的快速进行。，下面是一种快速检测血细胞压积的方法专利的具体信息内容。
1.一种快速检测血细胞压积的方法，其特征在于，在可计量体积的容器内，使用抗血细胞抗体对血液进行沉降，然后计算血细胞压积。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将抗血细胞抗体加入缓冲液中，制备成反应液，对血液进行沉降。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，将反应液置于可计量体积的容器内，再加入血液，混合均匀，静置进行沉降，然后计算血细胞压积。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述缓冲液包括pH稳定剂、表面活性剂、防腐剂、水。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述缓冲液中，所述pH缓冲剂为磷酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、MES缓冲液中的任意一种。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述表面活性剂为Tween类、Poloxamer188、十二烷基苯磺酸钠中的任意一种或多种。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述防腐剂为叠氮化钠、Proclin300、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4,5-三亚甲基-4-异噻唑啉-3-酮中的任意一种或多种。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述血液具体为即取即用的新鲜全血，或抗凝全血。
9.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述可计量体积的容器具体为带有刻度的试管。
10.权利要求1-9中任意一项所述的检测血细胞压积的方法在即时检验中的应用。
一种快速检测血细胞压积的方法
技术领域
[0001] 本申请涉及检测技术领域，特别是涉及一种快速检测血细胞压积的方法。
背景技术
[0002] POCT，即时检验(point-of-care testing)，指在病人旁边进行的临床检测， 通常不一定是临床检验师来进行，是在采样现场即刻进行分析，省去标本在 实验室检验时的复杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法。
[0003] 血细胞压积是指一定量的抗凝全血经离心沉淀后，测得沉降下来的血细 胞占全血的体积比。血液经过抗凝处理之后，在外力作用下会分开成两大部 分，血细胞和血浆。常规血细胞压积的测定方法是将血液放在温氏管中按照 规定的时间和速度进行离心，离心完成后红细胞将完全压实在试管的底端， 各个红细胞之间紧密接触，并尽可能排除细胞间所有血浆，此时血浆会全部 被挤出到血细胞的上层，下层的血细胞所占全血的百分比就是所要得到的血 细胞压积，即压实的血细胞所占的体积分数(或百分比)。
[0004] 血细胞压积是影响部分体外诊断试剂全血检测结果的重要因素之一，在 固定样本体积的POCT体外诊断试剂测试中，全血样本和血清、血浆样本中检 测目标物的浓度是一样的，但是因为在全血样本中血细胞占据了一定的体积， 所以在固定的样本体积内，目标物的总量是少于血清、血浆样本的，因而相 同样本体积下，全血样本的测试结果往往低于血清、血浆样本。每个个体的 血细胞压积情况不同，需要测定不同个体的血细胞压积情况，从而达到消除 血细胞压积影响的目的。
[0005] 常规的血细胞压积测定方法需要特定的设备，需要进行离心，如若应用 于POCT体外诊断试剂，则其存在额外设备投入，样本量增加的缺点，与POCT 快速、简单、便捷的特点不适应。发明内容
[0006] 为解决上述技术问题，本发明的第一个目的为提供一种快速检测血细胞 压积的方法；本发明的第二个目的为提供上述快速检测血细胞压积的方法在 即时检验中的应用，以实现即时检验(POCT)中对于血细胞快速便捷的测定。
[0007] 本发明提供的技术方案如下：
[0008] 一种快速检测血细胞压积的方法，在可计量体积的容器内，使用抗血细 胞抗体对血液进行沉降，然后计算血细胞压积。
[0009] 优选地，将抗血细胞抗体加入缓冲液中，制备成反应液，对血液进行沉 降。
[0010] 优选地，将反应液置于可计量体积的容器内，再加入血液，混合均匀， 静置进行沉降，然后计算血细胞压积。
[0013] 优选地，所述表面活性剂为Tween类、Poloxamer188、十二烷基苯磺酸 钠中的任意一种或多种。
[0014] 优选地，所述防腐剂为叠氮化钠、Proclin300、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3- 酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4,5-三亚甲基-4-异噻唑啉-3-酮中的任意 一种或多种。
[0015] 优选地，所述血液具体为即取即用的新鲜全血，或抗凝全血。
[0016] 优选地，所述可计量体积的容器具体为带有刻度的试管。
[0017] 本发明还提供上述任意一项所述的检测血细胞压积的方法在即时检验中 的应用。
[0018] 本发明提供一种快速检测血细胞压积的方法，在可计量体积的容器内， 将血液(例如即取即用的新鲜全血，或抗凝全血)与抗血细胞抗体混合进行 反应，利用抗体与血细胞的特异性结合反应，使血细胞发生凝集、沉淀，从 而使得血细胞沉淀在可计量体积的容器底部，血浆被挤出到血细胞的上层， 此时通过可计量体积的容器对血细胞、全血的体积分别进行计量，通过计算， 即可获得血细胞压积(即下层的血细胞所占全血的百分比)。由于抗体与血细 胞反应速度很快，可以在短时间内使血细胞沉淀，从而快速进行血细胞压积 的检测。而且，使用抗血细胞抗体，只需要在检测时携带可计量体积的容器， 以及抗血细胞抗体即可进行血细胞压积的检测，无需配置离心机等设备，便 于在各种场合，尤其是在病人床边进行快速检测，节约时间，节约就医成本。附图说明
[0019] 为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实 施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面 描述中的附图仅仅是本申请中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员 来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020] 图1为本发明实施例1不同压积的标准曲线图；
[0021] 图2为本发明实施例2中使用本发明的方法与常规测试方法的比对图。
具体实施方式
[0022] 为了使本技术领域的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合 本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描 述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施 例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前 提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
[0023] 请如图1至图2所示，本发明实施例提供一种快速检测血细胞压积的方 法，在可计量体积的容器内，使用抗血细胞抗体对血液进行沉降，然后计算 血细胞压积。
[0024] 本发明提供一种快速检测血细胞压积的方法，在可计量体积的容器内， 将血液(例如即取即用的新鲜全血，或抗凝全血)与抗血细胞抗体混合进行 反应，利用抗体与血细胞的特异性结合反应，使血细胞发生凝集、沉淀，从 而使得血细胞沉淀在可计量体积的容器底部，血浆被挤出到血细胞的上层， 此时通过可计量体积的容器对血细胞、全血的体积分别进行计量，通过计算， 即可获得血细胞压积(即下层的血细胞所占全血的百分比)。由于抗体与血细 胞反应速度很快，可以在短时间内使血细胞沉淀，从而快速进行血细胞压积 的检测。而且，使用抗血细胞抗体，只需要在检测时携带可计量体积的容器， 以及抗血细胞抗体即可进行血细胞压积的检测，无需配置离心机等设备，便 于在各种场合，尤其是在病人床边进行快速检测，节约时间，节约就医成本。
[0025] 优选地，将抗血细胞抗体加入缓冲液中，制备成反应液，对血液进行沉 降。
[0026] 将抗血细胞抗体加入缓冲液中，制备成反应液，更加便于操作人员使用。 可以由工厂直接制备标准反应液，由操作人员携带，使用时直接与血液进行 反应，进一步节省时间。同时，加入缓冲液的抗血细胞抗体可以在较长储存 期内稳定保存，避免变质影响检测结果。
[0027] 优选地，将反应液置于可计量体积的容器内，再加入血液，混合均匀， 静置进行沉降，然后计算血细胞压积。
[0028] 按照本发明的方法检测血细胞压积时，现将反应液置于可计量体积的容 器内，然后加入血液，混合均匀(例如将容器密封后反复颠倒混匀)，静置使 血细胞沉降，然后计算血细胞压积。通常静置3-10min、优选5-7min。
[0029] 优选地，所述缓冲液包括pH稳定剂、表面活性剂、防腐剂、水。
[0030] 优选地，所述缓冲液中，所述pH缓冲剂为磷酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、 硼酸-硼砂缓冲液、MES缓冲液中的任意一种
[0031] 所述表面活性剂为Tween类、Poloxamer188、十二烷基苯磺酸钠中的任 意一种或多种。
[0032] 所述防腐剂为叠氮化钠、Proclin300、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲 基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4,5-三亚甲基-4-异噻唑啉-3-酮中的任意一种或多 种。
[0033] 缓冲液可以保持抗血细胞抗体在较长时间的储存期内性质稳定，不发生 变质，避免对沉降反应产生影响，从而保证检测结果的准确。缓冲液通常包 括pH稳定剂、表面活性剂、防腐剂，余量为水。
[0034] 缓冲液中，pH缓冲剂为磷酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、 MES缓冲液中的任意一种，使用浓度通常为0.01M-0.2M，优选0.1M；优选 使用磷酸缓冲液，通常将磷酸缓冲液配置成0.1mol/L的浓度使用，同时将pH 控制在7.2-7.6之间，优选pH为7.4。表面活性剂为Tween类、Poloxamer188、 十二烷基苯磺酸钠中的任意一种或多种，使用浓度通常为0.05％-1％，优选 0.5％。表面活性剂优选Tween类，更优选Tween20。表面活性剂可以强化抗 体反应的效果，同时使血细胞表面残留的血浆减少，使血细胞与血浆的分离 更为彻底，已获得较准的血细胞压积数据。防腐剂通常采用叠氮化钠、 Proclin300、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4,5- 三亚甲基-4-异噻唑啉-3-酮中的任意一种或多种，使用浓度通常为 0.05％-0.5％，优选0.1％。优选使用市售的Proclin300。防腐剂也可以采用市 售成品，如Proclin300。
[0035] 优选地，所述血液具体为即取即用的新鲜全血，或抗凝全血。
[0036] 即取即用的新鲜全血，是指刚采集还未外层凝血反应的新鲜血液。新鲜 全血(即取即用)还未完成凝血反应，抗红细胞抗体与之结合会阻碍凝血反 应，也会产生同样的沉降等反应，同样可以计算血细胞压积。本发明的方法 可以用于即取即用的新鲜全血的血细胞压积的检测，制成检测装置或其他装 置，可便于在病人旁边进行的临床检测，或由病人及家属自行进行检测时使 用。
[0037] 抗凝全血主要是在采集的血液中加入抗凝剂，以抑制凝血酶的作用，维 持血液的液体状态，从而使得血细胞沉淀反应能够发生。优选使用不干扰血 液沉淀或其他生化检测的抗凝剂。抗凝剂为肝素、肝素的碱金属盐、乙二胺 四乙酸盐、枸橼酸盐、草酸盐中的任意一种。如肝素、肝素钠、乙二胺四乙 酸钠、乙二胺四乙酸钾、枸橼酸钠、枸橼酸钾、草酸钠等。
[0038] 优选地，所述可计量体积的容器具体为带有刻度的试管。
[0039] 本发明中使用的可计量体积的容器可以为任意容器，只要能容纳血液与 反应液，并计量血细胞、全血体积即可。如可使用有刻度的试管或离心管等。
[0040] 本发明还提供上述任意一项所述的检测血细胞压积的方法在即时检验中 的应用。
[0041] 本发明的方法，尤其适用于即时检验(POCT)时使用，材料便携，反应 迅速，简单易操作，结果准确，能够快速得到血细胞压积，便于诊断与后续 治疗工作的快速进行。
[0042] 实施例1血细胞压积标准曲线的测定
[0043] 抗血细胞抗体缓冲液配制：
[0044] 配制0.1M pH7.4的PB缓冲液，配制完成后取10ml加入到100ml容量瓶 中；称取0.9g的氯化钠加入到同一100ml容量瓶中；称取0.5g的Tween20到 烧杯中，加入少量超纯水让其溶解，溶解后加入到同一100ml容量瓶中，再 用少量的超纯水涮洗烧杯，将涮洗液加入到同一100ml容量瓶中；量取100ul 的Proclin300，加入到同一100ml容量瓶中；取5mg的抗血细胞抗体加入到 同一100ml容量瓶中；往容量瓶中加超纯水定容到100ml。
[0045] 抗血细胞抗体缓冲液预装：
[0046] 将1000ul抗血细胞抗体缓冲液预装到一个带有刻度的圆柱管(离心管) 中，备用。
[0047] 测试方法：
[0048] 1、配制30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％血细胞压积的全血样 本。
[0049] 2、取1000ul全血样本，加入到预装了抗血细胞抗体缓冲液的带刻度的圆 柱管(离心管)中，颠倒混匀后将圆柱管放置到管架上，同时计时5分钟，5 分钟计时完成后，读取血细胞在圆柱管上所占的刻度，每个压积的样本测试5 次。
[0050] 3、以样本的压积数为Y值，读取的刻度平均值为X值拟合曲线方程。
[0051] 测试结果：
[0052]
[0053] 根据测试结果，制得不同压积的标准曲线，并得到标准方程为：y＝ 0.0003x2+0.0028x+0.1719，R2＝0.9997。标准曲线见附图1。
[0054] 不同批次的抗血细胞抗体的活性有不同，因此使用不同批次的抗血细胞 抗体其测定血细胞压积的标准方程会有差异，不同批次之间使用不同的方程。 市售商品每一批次都会提供一个标准方程，此实施例同现有诊断产品试剂盒 的调码是一样的，每个批次都有一个调码，对应于每个批次的方程，以电子 标签或IC芯片的方式提供。
[0055] 实施例2血细胞压积实际样本检测
[0056] 样本准备：
[0057] 收集20名志愿者的血液样本，使用常规方法(温氏管)测定每个样本的 血细胞压积值。
[0058] 测试及计算方法：
[0059] 使用实施例1中的方法确定压积值的计算方程，然后对每个样本进行压 积测试，将样本的测试值带入计算方程计算出压积值，并与常规方法的测定 值比较。
[0060] 测试结果：
[0061]样本序号 压积值 常规方法测试值 偏差
1 46.6％ 45％ 3.60％
2 42.9％ 43％ -0.14％
3 48.6％ 48％ 1.15％
4 39.5％ 40％ -1.25％
5 44.8％ 43％ 4.07％
6 37.9％ 39％ -2.90％
7 41.2％ 42％ -1.93％
8 42.9％ 43％ -0.14％
9 44.8％ 44％ 1.70％
10 36.3％ 37％ -1.89％
11 41.2％ 41％ 0.46％
12 46.6％ 47％ -0.81％
13 44.8％ 43％ 4.07％
14 39.5％ 40％ -1.25％
15 44.8％ 45％ -0.56％
16 50.5％ 49％ 3.14％
17 41.2％ 42％ -1.93％
18 41.2％ 42％ -1.93％
19 46.6％ 46％ 1.35％
20 44.8％ 45％ -0.56％
1 46.6％ 45％ 3.60％
2 42.9％ 43％ -0.14％
3 48.6％ 48％ 1.15％
4 39.5％ 40％ -1.25％
5 44.8％ 43％ 4.07％
6 37.9％ 39％ -2.90％
7 41.2％ 42％ -1.93％
8 42.9％ 43％ -0.14％
9 44.8％ 44％ 1.70％
10 36.3％ 37％ -1.89％
11 41.2％ 41％ 0.46％
12 46.6％ 47％ -0.81％
13 44.8％ 43％ 4.07％
14 39.5％ 40％ -1.25％
15 44.8％ 45％ -0.56％
16 50.5％ 49％ 3.14％
17 41.2％ 42％ -1.93％
18 41.2％ 42％ -1.93％
19 46.6％ 46％ 1.35％
20 44.8％ 45％ -0.56％
[0062] 适用本发明提供的方法所检测的测试结果与常规测试方法的结果进行比 对，可以得到标准方程为y＝0.8185x+0.0774，R2＝0.9521。比对图请见附图 2。
[0063] 由此可见，本发明提供的方法测试计算出来的血细胞压积值与常规方法 测试的相对偏差不超过5％，其测试结果与常规方法测试结果的相关性较好。
[0064] 实施例3计算血细胞压积的测试结果与血浆的测试结果比较
[0065] 样本准备：
[0066] 收集一定量的志愿者血液样本，使用迈瑞的C反应蛋白检测试剂盒测定 血浆C反应蛋白含量，挑选20例样本。
[0067] 测试及计算方法：
[0068] 先使用该法测试其血细胞压积值，然后使用荧光免疫侧向层析试条及仪 器(以血浆样本测试模式)测试其C反应蛋白含量后，使用测得的血细胞压积值 进行校正(校正值＝血浆模式测试值/(1-压积值))，再将结果与迈瑞的C反应 蛋白检测试剂盒测试血浆结果和荧光免疫侧向层析试条及仪器(以全血样本测 试模式)的结果进行比较。
[0069] 检测结果如下：
[0070]
[0071]
[0072] 从上述结果来看，进行血细胞压积校正的结果与血浆测试的结果偏差较 小，而且与全血模式相比，其准确度更优。(全血模式测试一般是以正常生理 压积值的中值作为压积数，然后提高样本加样量使其结果与血浆血清结果相 匹配。)
[0073] 对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用 本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易 见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下， 在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例， 而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
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