本发明涉及一种新型的脑灌注显像剂99mTcN(CHDT)2及其制备方法，属 于99mTc标记的放射性药物化学领域，同时也涉及到临床核医学领域。

脑、心肌、肿瘤等疾病的诊断与肿瘤的治疗药物是当今放射性药物的 研究热点。在脑显像剂方面，由于99mTc具有半衰期短(6.02h)，γ射线能量 为140kev的优良核性质，能与SPECT配合使用，适于体内显像，人体受到的福 射剂量较低，99mTc以发生器的形式供应，使用方便，价格低廉，因此研究具有 脂溶性、零电荷、能穿透血脑屏障的99mTc脑灌注显像剂就成为人们的研究 热点，并取得了突破性的进展。研究最多的是两类配体，一类是丙撑胺肟 (PnAO)类配体，另一类是二胺二硫醇(DADT)或称双胺硫醇(BAT)N2S2类配体， 均与TcO核络合形成零电荷，能通过血脑屏障的脂溶性99mTc一配合物。其中 多数在脑中滞留时间并不长，限制了它们的实际应用。1985年D.P.Nowotnik 等人合成了99mTc-d.1-HMPAO〔D.P.Nowotnik，et al：Development of a Technetium-99m labelled radiopharmaceutical for cerebral blood flow imaging.Nucl.Med.Commun.6：499(1985)；Holmes P.A，et al： Cerebral uptake and retention，of 99mTc hexamethyl-propylene amine oxime(99mTc-HMPAO)Nucl.Med.Commun.6：443(1985)〕，结构式见 如下：

它在脑中的摄取量很高，滞留时间也很长，适于临床应用〔R，D， Neirinckx，et al：Technet：um-99m d，1-HMPAO：A new radiopharmaceutical for spect imaging of regional cerebral blood perfusion，J.Nucl.Med，28：191(1987)〕，但由于其体外稳定性较 差，放置较长时间不稳定，这是99mTc-d.1-HMPAO在临床应用之中的不足之处， 1988年，美国DU.Pont公司推出了一种新的脑灌注显像剂99mTc-ECD〔 Chessman EH，et al：Technetium-99m-ECD ester-derivatized diamine dithio Tc complexes for imaging brain perfusiom J.Nucl.Med.29： 788(1988)；Holman B.L，et al：Biodistribution，dosimetry and clinical evaluation of Technetium-99m Ethyl cystieinate Dimer in normal subjects and in patients with chronic cerebral infarction.J.Nucl.Med-30：1018(1989).〕其结构式见如下：

这是一种含有两个酯基的中性络合物，它能穿透血脑屏障并且滞留于高 级动物的脑组织中，99mTc-ECD在脑细胞内在特殊水解酶的作用下，很快代谢 为单羧酸单乙酯化合物，从而由原来的脂溶性，零电荷配合物变成离子型配 合物而陷落在正常脑细胞内。由于每个人大脑内的特殊水解酶量的差异， 也给显像质量带来了影响，这也是99mTc-ECD在临床上用的不足之处。目 前，99mTc-ECD在美国、中国等国家广泛应用于临床，而99mTc-d.1-HMPAO 在欧洲等国家应用较广。

我们知道，目前临床上广泛应用的99mTc脑灌注显像剂是99mTc-ECD和 99mTc-d，1-HMPAO.其中99mTc-ECD的显像质量受病人脑内所含特殊水解酶量 的差异影响较大，而99mTc-d，1-HMPAO的体外稳定性较差，放置较长时间容易 分解。

本发明的目的在于提供一种新型脑灌注显像剂99mTcN(CHDT)2及其制备 方法。 99mTcN(CHDT)2(CHDT：二水，N-环己基氨基二硫代甲酸钠， 2H2O)是本发明人经过详细思索而研制出的一类新型的99mTc脑灌注显像剂， 它与99mTc-ECD和99mTc-d，1-HMPAO等显像剂的不同点之一在于上述两个脑 显像剂均是以[99mTc＝O]3+核为中心核的，而99mTcN(CHDT)2是以[99mTc≡N]2+核为中心核，而[99mTc≡N]2+核具有较高的化学稳定性和特殊生物分布性 质，所以99mTcN(CHDT)2为脑显像剂的研制开辟了又一新的领域。根据心肌 灌注显像剂99mTcN(NOET)2的结构〔Pasqualini R，et al：Bis (dithiocarbamato)nitrido technetium-99m radiopharmaceuticals：a class of neutral myocardial imaging agents J.Nucl，Med，35：334 (1994)〕，可以得知99mTcN(CHDT)2的结构为： 该络合物具有一个不规则的正方角锥形的几何构型，其中Tc≡N三重键位于 顶点位置，两个配体CHDT分子提供的四个硫原子位于底面的四个点，整个络 合物呈电中性，这也符合99mTc脑显像剂必须零电荷的基本要求。

99mTcN(CHDT)2的制备及相关性质从以下的实施方案可以得到。

①配体CHDT的合成：

合成路线为： (其中： 为化学纯，北京化学试剂公司经销；CS2为分析纯，北京大力活性炭厂；NaOH为分析纯，北京化工厂)。

合成步骤：将 加入到一个100ml三口烧瓶中， 所得溶液用冰水浴冷却，在搅拌条件下加入含0.1mol NaOH(4.0g)的水溶液 50ml，然后缓慢滴加0.1mol CS2(6.01ml)，在冰水浴条件下反应1.5小时，蒸 除溶剂，用异丙醇-乙醚混合溶剂重结晶，得到12.0g白色针状晶体，产率 51.5％，γ(IR)/cm-1：3350(-OH)、3200(-NH)、2940(-CH2)、1480(C-N)、 990(C＝S)；元素分析： 中各元素质量分数W的理论值为： C：36.05％，H：6.87％，N：6.01％；W的实验值为：C＝36.04％，H：6.74％，N：5.93％。

②99mTcN(CHDT)2的制备：

99mTcN(CHDT)2的制备采用配体交换反应，〔Kennedy O，et al： Influence of a 99mTcN core on the biological and physicochemical behavior of 99mTc complexes of L，L-EC and LL-ECD.Nucl.Med.Biol， 23：987(1996)〕：

99mTcO4-+SDH+SnCl2・2H2O+PDTA→[99mTcN]2+int

[99mTcN]2+int+CHDT→99mTcN(CHDT)2

(其中SnCl2.2H2O为分析纯，北京化工厂；PDTA(1，2-丙二胺四乙酸)为分 析纯，Aldrich；丁二酰二酰肼(SDH)，Aldrich)。

[1]〔99mTcN〕2+int中间体的制备：将1ml含有10mg SDH和5mg PDTA的 水溶液，0.1ml SnCl2.2H2O的HCl溶液(0.2mol，L-1HCl中SnCl22H2O的质量 浓度为0.5g，L-1)依次加入到一青霉素小瓶中，调节溶液PH为7.5，然后加入 1ml99mTcO4-淋洗液，室温下反应15分钟。

[2]99mTcN(CHDT)2的制备：将1.0ml(4g.L-1)的CHDT的水溶液加入到上 述中间体溶液，室温下反应10分钟。

③99mTcN(CHDT)2的层析鉴定：

用聚酰胺薄膜作支持体，分别用生理盐水和二氯甲烷∶甲醇＝9∶1(体积比) 的混合溶剂作展开剂，测定的层析结果见表1。

表1各组分的层析结果(Rf值)

由以上层析体系鉴定所测得的标记物的放化纯大于90％。

④99mTcN(CHDT)2的分配系数测定

取0.1ml99mTcN(CHDT)2于一个10ml离心试管中，然后向离心试管中加入 2ml正辛醇和2ml PH＝7.4的磷酸盐缓冲液，充分振摇，离心5min(3000r/min)， 将两相分开计数，计算其分配系数P ，测得分 配系数logP＝1.50，说明99mTcN(CHDT)2是一脂溶性较好的配合物，使其易于 通过血脑屏障，被脑组织吸收。

⑤99mTcN(CHDT)2的稳定性测定：

将标记好的99mTcN(CHDT)2在室温下放置6小时后测其放化纯，稳定性实 验测得99mTcN(CHDT)2在放置6小时后放化纯仍达到97.0％，说明99mTcN(CHDT)2 的体外稳定性好，适于临床应用的需要。

⑥99mTcN(CHDT)2在小鼠体内生物分布实验：

选雄性昆明小白鼠9只，18-20克，分为3组，通过尾静脉注入0.1ml 99m TcN(CHDT)2标记液(约7.4×105Bq)，在注射后5、30、60分钟后断头处死小 白鼠，取出心、脑、肝、肺、肾、血液等脏器，称重后，测量各脏器的放射 性计数，换算成每克组织中含量占总注射量的百分比％ID/g，99mTcN(CHDT)2 在小鼠体内生物分布结果如表2所示。

表2 99mTcN(CHDT)2在小鼠体内生物分布(n＝3)，(％ID/g)

                    t(min) 脏器

               5             30             60 心           23.74±1.81    18.72±0.80    12.51±0.19 肝           63.17±2.17    55.60±5.08    45.39±1.03 肺           23.94±2.14    12.33±2.39    11.09±1.16 肾           22.78±1.40    20.93±0.10    15.19±0.05 脑           2.91±0.14     5.88±0.27     5.91±0.02 血           7.15±0.20     4.04±0.14     2.82±0.12

从表2中可以看出99mTcN(CHDT)2在心脑中的摄取与滞留均较好，而脑的 摄取值在5min时就达到2.91±0.14(％ID/g)，到60min时高达5.91±0.02 (％ID/g)，说明99mTcN(CHDT)2在脑组织中的摄取与滞留都很好，脑/血比值较 高(60min时脑/血比值为2.10)。

⑦冻干品药盒的制备及标记

为了便于临床使用，我们将99mTcN(CHDT)2的制备实现了药箱化，操作方 便，制备99mTcN(CHDT)2需要由两个药盒组成，一个药盒是SDH药盒，它的用途 是用来产生[99mTcN]2+int中间体，以便与配体CHDT发生配体交换反应制备 得到99mTcN(CHDT)2。另外一个药盒是CHDT药盒，它的用途是用来与 [99mTcN]2+int中间体发生配体交换反应从而制备得到99mTcN(CHDT)2而必需的 配体。

(1)SDH冻干药盒(以1000支为例)

SDH10000mg

PDTA5000mg            混匀              1.0ml分装  冷冻干燥

SnCl2·2H2O 50mg—————→无菌过滤————→ ————→加盖、封口、贴标签

充氮气的二次水 全溶，定容l000ml         10ml西林瓶 充氮密封

调节PH＝7.5

(2)CHDT冻干药盒(以1000支为例)

CHDT 4000mg    混匀           1.0ml分装  冷冻干燥   

甘露醇2000mg————→无菌过滤————→————→加盖、封口、贴标签

充氮二次水     全溶           l0ml西林瓶 充氮密封

1000ml

标记时，取适当放射性强度的99mTcO4-淋洗液1-2ml，注入SDH冻干药盒 中，摇匀使内容物溶解，室温下放置l5分钟。另将少量的无菌生理盐水注入 到CHDT冻干药盒中，使其完全溶解然后将其注入到上述标记好的SDH药盒中， 摇匀，室温下反应10分钟即可。

⑧99mTcN(CHDT)2的动物异常毒性试验

依照中国药典95版二部附录XI异常毒性检查项下要求对99mTcN(CHDT)2 标记液进行了动物异常毒性试验，将制备好的99mTcN(CHDT)2(总体积为3ml， 总活度为111MBq)标记液，取0.5ml缓慢注射于体重为24g昆明小白鼠的尾静 脉，共5只，按药典规定观察48小时，未见异常反应，并且无一死亡。按给药量 换算(每公斤体重)相当于人体(以50公斤为例)最大可能用量的347倍，说明 99mTcN(CHDT)2的毒性低，可以确保临床的安全使用。

6.发明的效果

99mTcN(CHDT)2的制备经药盒化后操作方便，有利于临床推广使用。从 小鼠生物分布数据来看，99mTcN(CHDT)2很有希望发展成为一类具有我国自 已知识产权的99mTc脑灌注显像剂，与临床上现广泛使用的99mTc-d，1-HMPAO 〔常逢春等：脑显像剂99mTc-HMPAO的研制，中华核医学杂志，8：1(1988)〕和 99mTc-ECD(陈方等：脑血流灌注显像剂99mTc-ECD一步法药盒的研究，中华核 医学杂志11：163(1991)〕的小鼠体内生物分布数据比较，99mTcN(CHDT)2的 效果最好，现将三者的生物分布数据比较如下：

(％ID/g)

可以看出99mTcN(CHDT)2在小鼠体内生物分布数据脑摄取与滞留以及 脑/血比值均较好。