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制备锝-99m标记的DTPA-LSA的药盒及制备方法和应用

阅读：1013发布：2020-10-01

专利汇可以提供制备锝-99m标记的DTPA-LSA的药盒及制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种制备锝-99m(99mTc)标记的DTPA-LSA(99mTc-DTPA-LSA)的药盒及制备方法和应用，所述药盒是由以下方法制备得到的：将DTPA-LSA配体溶于充氮二次水中，加入缓冲溶液，混合均匀；再加入还原剂，加入比例按照还原剂比配体的重量比为1∶10～800；全部溶解后，将溶液无菌过滤，分装于容器中。本发明所述的药盒在制备99mTc-DTPA-LSA的方面具有使用简便、标记率高、制备得到的99mTc-DTPA-LSA 生物性能良好及使用成本低等优点，有利于临床广泛应用。利用本发明所述的药盒制备的99mTc-DTPA-LSA配合物可作为一种新型的肝脏显像剂应用在放射性药物化学和临床核医学技术领域中。，下面是制备锝-99m标记的DTPA-LSA的药盒及制备方法和应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种制备锝-99m标记的DTPA-LSA药盒的制备方法，其制备步骤为：
a.将DTPA-LSA配体溶于0.2mol/L pH 3.5酒石酸-酒石酸钾钠缓冲液中；然后按还原剂比配体为1∶10～800的重量比称取还原剂并溶于盐酸溶液中；将两种溶液混合均匀，控制其pH在2.5～4.0之间；
b.在步骤a.得到的溶液用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化；
c.将步骤b.得到的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述用于制备99mTc-DTPA-LSA的冻干药盒。
2.如权利要求1所述制备锝-99m标记的DTPA-LSA的药盒制备方法，其特征在于：上述步骤a.中所述的缓冲液为0.2mol/LpH 3.5酒石酸-酒石酸钾钠缓冲液，所述的还原剂为SnCl2·2H2O。
3.如权利要求1所述制备锝-99m标记的DTPA-LSA的药盒制备方法，其特征在于：上述步骤c.所述分装的容器为管制抗生素瓶。

说明书全文

制备锝-99m标记的DTPA-LSA的药盒及制备方法和应用

所属技术领域

[0001] 本发明涉及到99mTc标记的放射性药物化学和临床核医学技术领域，特别是涉及到99m 99m
一种用于制备锝-99m( Tc)标记的DTPA-LSA( Tc-DTPA-LSA)的药盒及制备方法和应用。

背景技术

[0002] ASGP受体(Asialoglycoprotein receptor，ASGP-R)是去唾液酸糖白蛋白受体的简写，存在于哺乳动物肝细胞膜上，是介导肝脏清除血液中去唾液酸糖蛋白(Asialoglycoprotein，ASGP)的专一位点。除了白蛋白之外几乎所有血浆蛋白都为糖蛋白，在被肝脏合成并释放到血液时，其糖链末端为唾液酸。唾液酸与其它糖基形成较弱的连接，在血液中并不稳定，很易被清除。唾液酸部分被清除，标志着这个糖蛋白寿命的结束。大部分血浆蛋白中半乳糖结构都位于末端的第二位上，因此当末端的糖被酶解后，以半乳糖结尾的糖蛋白就可以作为ASGP受体的作用底物。去唾液酸糖蛋白一旦在细胞表面与ASGP受体结合，所形成的配体-受体复合物迅速内化，5分钟左右进入前溶酶体囊泡后由于pH的作用而解离，受体再循环到质膜，大部分配体经溶酶体酶的作用而被分解代谢，小部分配体则绕过溶酶体的降解而排入胆汁，或穿过细胞膜返回细胞表面仍与受体相结合。这个过程可以维持血浆糖蛋白的动态平衡。ASGP受体可以在一定程度上反映出有效肝细胞功能，在肝炎、肝硬化或肝癌等肝损伤性疾病发生时，其数量和活性均受到损害。肝炎疾病在世界范围内都是一种高发疾病，特别是肝硬化继发肝癌患者众多，严重影响人类健康与生活质量，其重要性现在已经引起广泛关注突现。日本已经利用ASGPR显像剂为核医学肝脏SPECT显像建立了三维肝脏模型，该显像技术可以真实、数字化地反映肝脏功能，这样既可以对肝硬化患者术前肝功能进行正确的评估，帮助预测手术风险、制定治疗方案，降低肝脏手术的围手术期死亡率。1984年Vera等通过化学合成方法将半乳糖结构与人血清白蛋白偶联99m
得到新乳糖白蛋白(galactosyl-neoglycoalbumin，NGA)，并经 Tc标记后进行肝显像研
99m 99m
究。1986年Kubota等研制了一种 Tc标记GSA( Tc-diethylenetriamine pentaacetic acid-galactosyl-human serum albumin)，通过增加双功能连接剂DTPA(二乙烯三胺五乙酸)结构，简化了标记条件，减少了非特异性结合。但GSA是通过2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷与人血清白蛋白反应得到的，其合成步骤相对复杂。2004年，2004年Jeong等报道了通过还原氨化法将乳糖与人血清白蛋白以Schiff碱形式相连得到了新型的配体LSA(neolactosyl human serum albumin)，反应简单温和，用β巯基乙醇
99m
还原LSA得到含有巯基的配体，用 Tc标记后，显示出较好的稳定性和优异的生物性能，但是LSA通过打开二硫键进行标记，这个过程中会破坏蛋白质的结构，会影响到其蛋白的活性，进而影响其生物性能。GSA配体合成步骤较多，药盒制备过程复杂。为了适于生产，简化合成步骤，获得一种新型的可供临床使用、使用简便、易于推广的ASGPR显像剂冻干配套药盒，用于制备一种新型锝-99m标记配合物的的肝脏受体显像剂，是当前本技术领域需要解决的课题。

发明内容

[0003] 本发明的目的是提供一种用于制备99mTc-DTPA-LSA(99mTc-diethylenetriaminepentaacetic acid-neolactosylated human serum albumin，锝-99m乳糖基人血清白蛋白喷替酸)冻干配套药盒，该药盒使标记简单、标记率高成本低，并且能使制备的配合物同样具有良好的生物性能，而另一个目的是提供所述药盒的制备方法。

[0004] 为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种制备锝-99m(99mTc)标记的DTPA-LSA的药盒，所制备的配体DTPA-LSA的分子结构为：

[0005]

[0006] 其中的还原剂：DTPA-LSA配体的重量比为0.01～0.2∶2～8；DTPA-LSA配体的含量为3mg；还原剂优选SnCl2·2H2O，还原剂用量为0.02mg。

[0007] 所述还原剂为将99mTc7+(99mTcO4-)还原为99mTc5+的常规化学试剂。

[0008] 上述所述药盒的制备方法，包括以下步骤：

[0009] a.将DTPA-LSA配体溶于0.2mol/L pH 3.5酒石酸-酒石酸钾钠缓冲液中；然后按还原剂比配体为1∶10～800的重量比称取还原剂并溶于盐酸溶液中；将两种溶液混合均匀，控制其pH在2.5～4.0之间；

[0010] b.在步骤a.得到的溶液用充氮二次水定容；其中，充氮二次水中充氮量要足以保证还原剂不被氧化；

[0011] c.将步骤b.得到的溶液无菌过滤后，分装于容器中，经冷冻干燥后，加塞密封，即得到所述用于制备99mTc-DTPA-LSA的冻干药盒。

[0012] 步骤a.所述的缓冲液优选0.2mol/L pH 3.5酒石酸-酒石酸钾钠缓冲液，所述的还原剂优选SnCl2·2H2O；步骤c.所述分装的容器优选管制抗生素瓶。

[0013] 上述药盒制备方法中用到的DTPA-LSA配体为自行合成，所述的缓冲液、还原剂和辅剂等试剂均可以从市场购得。

[0014] 本发明所述药盒的使用方法：将从医用99Mo-99mTc发生器中淋洗获得的99mTcO4-淋洗液加入上述冻干药盒中，摇匀后室温反应5～30分钟，得到产物即为锝-99m标记的DTPA-LSA配合物。

[0015] 对上述用本发明药盒制备得到的99mTc-DTPA-LSA的性能测定如下：

[0016] 1.正常小鼠体内生物分布。

[0017] 取体质量约18～22g的昆明小白鼠15只，尾静脉注射0.1mL(约0.37MBq)药盒法标记的99mTc-DTPA-LSA(1.3×10-9mol/kg)。分别在注射后5、30和120min后断头处死。取出心、肝、肺、肾、肌肉、骨、血等组织，称量并在锝分析仪内测其放射性计数。计算各单位质量组织的摄取剂量占总注射剂量的百分数(％ID/g)，结果见表1。

[0018] 表1.99mTc-DTPA-LSA在正常小鼠单位质量组织剂量分布(％ID/g±SD，n＝5)[0019]99m

[0020] 生物分布的结果显示， Tc-DTPA-LSA在正常小鼠肝脏中有较高的初始摄取和一定的保留。注射后5min肝脏摄取可达到96.99％ID/g。并随着时间推移而从肝脏中清除。99m
Tc-DTPA-LSA主要通过肝胆消化道代谢。30min时在小肠有较高的摄取。其在血液中清除较快，骨、肉中摄取均较低。在肾脏中的摄取略高。其在小鼠体内的生物分布结果与临床
99m
使用的 Tc-GSA相似。

[0021] 2.正常小鼠体内抑制试验

[0022] 另取5只先尾静脉注射200μg NGA作为抑制剂，5min后注射0.1mL(约99m
0.37MBq) Tc-DTPA-LSA，在注射后5min后断头处死。取出心、肝、肺、肾、肌肉、骨、血等组织，称量并在锝分析仪内测其放射性计数。计算各单位质量组织的摄取剂量占总注射剂量的百分数(％ID/g)，结果见表2。
99m

[0023] 表2. Tc-DTPA-LSA在正常小鼠抑制试验结果(注射后5min，％ID/g±SD，n＝5)

[0024]

[0025] 通过预注射NGA可明显抑制其在肝脏中的摄取，抑制后5min的肝脏摄取仅为99m
23％，证明了其通过ASGP受体介导的机制。抑制后没有进入肝脏的 Tc-DTPA-LSA滞留在血液中，并通过血液循环进入其它脏器。

[0026] 通过性能测定表明，本发明所述药盒制备得到的99mTc-DTPA-LSA具有优良的生物性能，能够满足作为肝细胞受体显像剂的条件。

[0027] 本发明所提供的制备99mTc-DTPA-LSA的药盒具有以下有益效果：

[0028] 配体合成步骤简单。本发明的DTPA-LSA配体合成步骤简单，药盒制备更加快捷、成本更低，适于大量生产。

[0029] 使用方法简单，适合临床应用。使用本发明的药盒制备99mTc-DTPA-LSA的方法简99m
单便捷：只需一个简单的步骤即可制备出满足临床使用要求的 Tc-DTPA-LSA，更加适合临床推广应用。

[0030] 标记率高。制备得到的99mTc-DTPA-LSA纯度高，本发明的药盒在制备99m 99m -
Tc-DTPA-LSA方面具有很高的标记率，本发明药盒在加入 TcO4 淋洗液后反应10分钟，通过层析及HPLC鉴定，放射化学纯度大于95％，可满足临床的使用需求。

[0031] 制备得到的99mTc-DTPA-LSA生物性能优良。实验验证，本发明药盒制备得到的99m
Tc-DTPA-LSA在小鼠肝脏中有很高的摄取和很好的滞留，且具有较高的靶/非靶比值，生物性能优良，完全可以满足用作肝细胞受体显像剂的要求。
具体实施方式：

[0032] 下面通过实施例详述本发明，一种用于制备锝-99m(99mTc)标记DTPA-LSA的药盒及其制备方法。

[0033] 实施例1

[0034] 制备DTPA-LSA

[0035] 取人血清白蛋白67.5mg溶于5mLpH 8.0的磷酸缓冲液，加入200mg的乳糖，室温搅拌2h。加入200mg氰基硼氢化钠，混合均匀后，通过0.22μm的无菌滤膜过滤后，37℃反应7天。反应结束后，通过0.22μm的无菌滤膜过滤后于无菌的二次水中透析3天。冷冻干燥。得到LSA。

[0036] 取所得LSA 60mg，溶于新制的4mL pH 7.0的HEPES缓冲液中，加入DTPA环酐10mg，室温下温和搅拌，反应20min。反应结束后，通过0.22μm的无菌滤膜过滤后于无菌的二次水中透析3天。得到DTPA-LSA。

[0037] 制备75支DTPA-LSA冻干药盒

[0038] a.将225mg DTPA-LSA配体溶于37.5mL pH 3.5酒石酸-酒石酸钾钠缓冲液中，然后加入0.4mL 3.8mg/mL的SnCl2·2H2O盐酸溶液(1mol/L)；将溶液混合均匀，控制其pH在2.5～4.0之间；

[0039] b.在步骤a.得到的溶液中加入充氮二次水定容至75mL；

[0040] c.将步骤b.制备的溶液无菌过滤后，分装于75支管制抗生素瓶中，然后置于冷冻99m
干燥机中冷冻干燥24小时，加塞密封，即得到本发明所述用于制备 Tc-DTPA-LSA的冻干药盒。

[0041] 实施例2

[0042] 制备DTPA-LSA步骤同实施例1

[0043] 制备100支DTPA-LSA冻干药盒

[0044] a.将200mg DTPA-LSA配体溶于50mL pH 3.5酒石酸-酒石酸钾钠缓冲液中，然后加入1mL 10mg/mL的SnCl2·2H2O盐酸溶液(1mol/L)；将溶液混合均匀，控制其pH在2.5～

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