使用雄激素靶向疗法用于治疗肿瘤性疾病的生物标记物
阅读：749发布：2020-05-16
专利汇可以提供使用雄激素靶向疗法用于治疗肿瘤性疾病的生物标记物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 所述的用于 治疗 需治疗对象的 前列腺癌 的方法和组合物。所述前列腺癌可以是对去势治疗有抗性的和对雄 激素 受体拮抗剂有抗性的前列腺癌。该方法可以包括向对象给予式II的CYP17裂解酶 抑制剂 。，下面是使用雄激素靶向疗法用于治疗肿瘤性疾病的生物标记物专利的具体信息内容。
1.一种治疗需治疗患者体内疾病的方法，所述方法包括：
a.获取来自所述患者的样品，
b.确定所述样品中是否存在雄激素受体的改变形式；以及，
c.如果存在所述雄激素受体的改变形式，对所述对象给予一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的式I化合物，
或其药学上可接受/的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物；其中R1是氢或乙酰基；并且R2是苯并咪唑。
2.根据权利要求1所述的方法，其中R1是乙酰基。
3.根据权利要求1所述的方法，其中R1是H并且R2是苯并咪唑。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病是前列腺疾病。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述前列腺疾病是前列腺癌。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述前列腺癌是对去势治疗有抗性的前列腺癌。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病是癌症。
8.根据权利要求5所述的方法，其中所述癌症是膀胱癌，胰腺癌，卵巢癌或乳腺癌。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述疾病是雄激素依赖性的。
10.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述疾病或癌症对治疗物有抗性。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品是全血样品，组织样品，肿瘤组织样品，或活组织检查样品。
12.根据权利要求10所述的方法，其中所述治疗物是抗雄激素剂。
13.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗雄激素剂是雄激素受体拮抗剂。
14.根据权利要求10所述的方法，其中所述抗雄激素剂是恩杂鲁胺(enzalutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)或ARN-509。
15.根据权利要求10所述的方法，其中所述治疗物是阿比特龙(abiraterone)。
16.根据权利要求10所述的方法，其中所述治疗物是紫杉烷。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述紫杉烷是多西他赛(docetaxel)。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述紫杉烷是卡巴他赛(cabazitaxel)。
19.根据权利要求4所述的方法，其中所述前列腺癌对去势治疗有抗性。
20.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述对象已经经历过去势治疗。
21.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述对象已经经历过雄激素受体拮抗剂治疗。
22.根据前述任意一项权利要求所述的方法，其中所述对象已经经历过去势治疗和雄激素受体拮抗剂治疗。
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述突变的雄激素受体是截短的AR的变体。
24.根据权利要求23所述的方法，其中所述截短的AR是ARV-7(AR3)。
25.根据权利要求23所述的方法，其中所述截短的AR是AR-V567es。
26.根据权利要求1所述的方法，其中所述突变的AR携带点突变。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述点突变是F876L。
28.一种优化对需治疗患者体内疾病的治疗的方法，所述方法包括：
a.识别患者患者正使用治疗方案对疾病进行治疗的患者，其中所述治疗方案包括给予式I的化合物：
或其药学上可接受的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物；其中R1是氢或乙酰基；并且R2是苯并咪唑；
b.获取来自患者的样品，并测定所述样品中至少一个生物标记物的状态；以及c.基于对所述生物标记物的测定，维持或修改治疗方案。
29.根据权利要求28所述的方法，其中R1是H并且R2是苯并咪唑。
30.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是雄激素受体的表达或功能。
31.根据权利要求28所述的方法，其中所述雄激素受体是野生型的AR。
32.根据权利要求28所述的方法，其中所述雄激素受体是突变的AR。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述突变的AR是剪接变体和/或截短的AR。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述剪接变体和/或截短的AR为AR-V1、AR-V2、AR-V3、AR-V4、AR-V5、AR-V567es、AR-V6、AR-V7或AR-V12。
35.根据权利要求26所述的方法，其中所述截短的AR是ARV-7。
36.根据权利要求27所述的方法，其中所述截短的AR是AR-V12。
37.根据权利要求25所述的方法，其中所述突变的AR携带点突变。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述点突变选自以下组：D879G(D878G)、W741C、W741L、M749L、R629Q、G142V、P533S、T575A、H874Y和F876L。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述点突变是F876L。
40.根据权利要求28所述的方法，其中所述疾病是前列腺癌。
41.根据权利要求28所述的方法，其中所述疾病或癌症被确定为对抗雄激素剂有抗性。
42.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是循环肿瘤细胞(CTC)在数量上的减少。
43.根据权利要求42所述的方法，其中在盖乐特龙(galeterone)治疗至少一周之后确定循环肿瘤细胞的数量。
44.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是细胞凋亡的CTC的增加。
45.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是PSA的减少或PSA倍增时间的降低。
46.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是PSMA表达的增加。
47.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是肿瘤18F-DHT-PET信号的降低。
48.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是基于组织活检的测试，例如ProMark。
49.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是蛋白酶体降解途径成员的存在或表达。
50.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是5激肽释放酶组。
51.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是治疗前的和治疗后的睾酮血浓度。
52.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是在治疗方案开始后至少一种类固醇水平的变化。
53.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是代谢标记物，例如，在P450酶的水平。
54.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是CYP17蛋白的突变物或变体。
55.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是确定CTLA-4阻断。
56.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是前列腺健康指数。
57.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是PCA3的存在或水平。
58.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是由前列腺核有丝分裂(mitomic)测试测定的。
59.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是在细胞循环进展基因中突变的存在。
60.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物是通过血清学测试测定的血红蛋白、乳酸脱氢酶、或碱性磷酸酶的水平。
61.根据权利要求28所述的方法，其中所述生物标记物对治疗有抗性。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述治疗包括恩杂鲁胺(enzalutamide))、比卡鲁胺(bicalutamide)或ARN-509。
63.根据权利要求61所述的方法，其中所述治疗包括阿比特龙(abiraterone)。
使用雄激素靶向疗法用于治疗肿瘤性疾病的生物标记物
[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求2013年8月12日递交的美国临时专利申请61/865,038，2014年5月8日递交的美国临时专利申请61/990,570和2014年5月22日递交的美国临时专利申请62/002,
110的优先权，其全部内容在此通过引用并入本申请。
110的优先权，其全部内容在此通过引用并入本申请。
[0003] 发明背景
[0004] 癌症是人类健康的主要负担，估计占每年全部死亡人数的13％。特别是，几种常见的癌症和疾病都与雄激素激素信号相关联，例如，前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、胰腺癌和多囊卵巢病。例如，前列腺癌(PCa)是男性的第二大常见癌症。大多数前列腺癌导致的死亡是由于转移性疾病的发展，其对常规雄激素剥夺疗法没有响应。自1940年以来，雄激素剥夺疗法一直是患有前列腺癌的对象的标准治疗方法。尽管阻断了雄激素，大多数对象最终仍出现病情恶化。多年来该疾病的晚期阶段被称为“激素不敏感性前列腺癌”或“雄激素非依赖性前列腺癌”。已经很清楚，雄激素剥夺治疗后出现的前列腺癌仍依赖于雄激素。存活的前列腺癌细胞获得了导入低水平的循环雄激素(从肾上腺表达)的能力，变得对这些低
水平的睾酮敏感得多，并且在前列腺癌细胞本身内部实际上合成了睾酮。前列腺癌的这个
阶段，现在被称为“去势抵抗性前列腺癌”或CRPC。
水平的睾酮敏感得多，并且在前列腺癌细胞本身内部实际上合成了睾酮。前列腺癌的这个
阶段，现在被称为“去势抵抗性前列腺癌”或CRPC。
[0005] 识别对前列腺癌的治疗可能会有响应或正在响应的那些患者是对这种疾病进行医疗管理的目标。虽然目前的临床指导原则都集中在症状、前列腺特异性抗原(PSA)的血液水平和成像研究上，但其它生物标记物也可能对临床决策有用。仍需要针对该疾病的生物
标记物和它们与识别治疗性化合物的功效或毒性之间的关系，和可以提供关于最可能对治
疗剂有响应的患者的识别信息的生物标记物，或用以识别正在接收治疗剂却没有响应的患
者(无论是通过原生性或获得性耐药机制)，或预测那些可能会产生不良副作用的患者。
标记物和它们与识别治疗性化合物的功效或毒性之间的关系，和可以提供关于最可能对治
疗剂有响应的患者的识别信息的生物标记物，或用以识别正在接收治疗剂却没有响应的患
者(无论是通过原生性或获得性耐药机制)，或预测那些可能会产生不良副作用的患者。
[0006] 发明简述
[0007] 下面所列的各生物标记物可以用于，例如，在治疗患者的过程中各个点评估治疗方案。例如，可以使用生物标记物在不同的癌症治疗转变点通过对一个或多个生物标记物
或生物标记物群组的分析以识别和优化治疗选择，从而评估治疗方案。生物标记物也可以
用于预测在同一患者体内对现有抗癌治疗无反应或缺乏反应以及对盖乐特龙
(galeterone)的响应。在一个实施方案中，在前列腺癌的治疗中进行生物标记物检测并将
其与盖乐特龙(galeterone)的功效相关联。
或生物标记物群组的分析以识别和优化治疗选择，从而评估治疗方案。生物标记物也可以
用于预测在同一患者体内对现有抗癌治疗无反应或缺乏反应以及对盖乐特龙
(galeterone)的响应。在一个实施方案中，在前列腺癌的治疗中进行生物标记物检测并将
其与盖乐特龙(galeterone)的功效相关联。
[0008] 提供了一种治疗需治疗患者体内疾病的方法，包括：a)确定该疾病是否以雄激素受体的改变形式为特征；和b)如果所述雄激素受体的改变形式存在时，给予所述对象包含
治疗有效量的式I化合物的药物组合物，
治疗有效量的式I化合物的药物组合物，
[0009]
[0011] 例如，R1是乙酰基，所述化合物是盖乐特龙的前药。
[0012] 例如，R1是H并且R2是苯并咪唑，该化合物为盖乐特龙。
[0013] 本发明提供了在需治疗的患者中治疗癌症的方法，其包括：a)从所述患者获得样品，例如循环肿瘤细胞的样品；b)确定雄激素受体的截短形式是否是存在于样品中，例如
ARV-7或AR-V567es；和c)如果所述雄激素受体的改变形式存在时，给予所述对象包含治疗
有效量的式I化合物的药物组合物，
ARV-7或AR-V567es；和c)如果所述雄激素受体的改变形式存在时，给予所述对象包含治疗
有效量的式I化合物的药物组合物，
[0014]
[0015] 或其药学上可接受的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物；其中R1是H或乙酰基；R2是苯并咪唑。例如，R1是H，R2是苯并咪唑，化合物是盖乐特龙。在一些实施方案中，雄激素受体的改变形式是缺乏配体结合域的截短的AR，例如ARV-7。所述确定可以包括，例如，使用能结合雄激素受体的配体结合域的抗体，从而所述抗体结合的缺失导致信号缺失。所述确定还可以包括使用两种抗体，例如一个用于AR的NH2端并且另一个用于AR的COOH端
(配体结合域)，以区分或获得存在NH2端与不存在COOH端(配体结合)的比率。在一个优选的实施方案中，分析结果是相同的对象样品中的NH2端和C-端的抗体检测信号的比率。所述确定还可以包括通过定量或定性的核酸扩增或通过基因表达分析来检测缺乏配体结合域的
截短的AR。在一个实施方案中，对缺乏配体结合域的截短AR的检测是来自患者或对象的样
品，例如其中已经对所述患者/对象样品进行了循环肿瘤细胞富集。在另一个实施方案中，对患者/对象样品进行了循环DNA富集。在又一个优选实施方案中，所述患者/对象样品是肿瘤活检或组织样品。
(配体结合域)，以区分或获得存在NH2端与不存在COOH端(配体结合)的比率。在一个优选的实施方案中，分析结果是相同的对象样品中的NH2端和C-端的抗体检测信号的比率。所述确定还可以包括通过定量或定性的核酸扩增或通过基因表达分析来检测缺乏配体结合域的
截短的AR。在一个实施方案中，对缺乏配体结合域的截短AR的检测是来自患者或对象的样
品，例如其中已经对所述患者/对象样品进行了循环肿瘤细胞富集。在另一个实施方案中，对患者/对象样品进行了循环DNA富集。在又一个优选实施方案中，所述患者/对象样品是肿瘤活检或组织样品。
[0016] 在一些实施方案中，所述疾病是前列腺疾病，例如前列腺癌。前列腺癌可以是去势抗性的。在某些情况下，对象已经经历过去势治疗，例如化学去势或外科去势，或已经历雄激素受体拮抗剂治疗或减少新生雄激素产生的治疗，例如干扰类固醇通路，例如CYP-17裂解酶抑制剂，或联合治疗。在一些实施方案中，所述疾病是癌症，诸如卵巢癌、膀胱癌、胰腺癌或乳腺癌。所述癌症可以是对抗雄激素剂(如雄激素受体拮抗剂)有抗性的，例如对恩杂
鲁胺(enzalutamide)或比卡鲁胺(bicalutamide)或ARN-509有抗性。所述癌症可以是对
CYP17裂解酶抑制剂有抗性的，例如，对阿比特龙(abiraterone)有抗性。所述癌症可以是对紫杉烷有抗性，例如多西紫杉醇或卡巴他赛。在一些实施方案中，所述疾病对雄激素依赖。
鲁胺(enzalutamide)或比卡鲁胺(bicalutamide)或ARN-509有抗性。所述癌症可以是对
CYP17裂解酶抑制剂有抗性的，例如，对阿比特龙(abiraterone)有抗性。所述癌症可以是对紫杉烷有抗性，例如多西紫杉醇或卡巴他赛。在一些实施方案中，所述疾病对雄激素依赖。
[0017] 患者可以确定为具有突变的雄激素受体，例如截短的AR如AR-V1、AR-V2、AR-V3、AR-V4、AR-V5、AR-V567es、AR-V6、或AR-V7。突变的AR可以携带点突变，例如T877A(T878A)、D879G(D878G)、W741C、W741L、M749L、R629Q、G142V、P533S、T575A、H874Y或F876L。
[0018] 本发明还提供一种优化对需治疗患者体内疾病的治疗的方法，包括：识别正使用治疗方案对疾病进行治疗的患者，其中所述治疗方案包括给予式I的化合物：
[0019]
[0020] 或其药学上可接受的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物；其中R1是H或乙酰基；R2是苯并咪唑；确定至少一个生物标记物的状态；以及基于对所述生物标记物的确定，维持或修改治疗方案。在一个优选的实施方案中，R1是H并且R2是苯并咪唑。
[0021] 例如，所述生物标记物是雄激素受体的表达水平或功能，例如野生型或突变的AR。突变的AR可以是剪接变体和/或截短的AR，包括AR-V1、AR-V2、AR-V3、AR-V4、AR-V5、AR-V567es、AR-V6、或AR-V7。突变的AR可以是具有点突变的AR，包括但不限于，T877A(T878A)、D879G(D878G)、W741C、W741L、M749L、R629Q、G142V、P533S、T575A、H874Y、F876L。
[0022] 在一些实施方案中，所述疾病是前列腺疾病，例如前列腺癌。前列腺癌可以是去势抗性的。在一些实施方案中，所述疾病是癌症，诸如卵巢癌、膀胱癌、胰腺癌或乳腺癌。所述癌症可以是对抗雄激素剂(如雄激素受体拮抗剂)有抗性的，例如对恩杂鲁胺(enzalutamide)或比卡鲁胺或ARN-509有抗性。所述癌症可以是对紫杉烷类有抗性的，例如多西紫杉醇或卡巴他赛。在某些情况下，对象已经经历过去势治疗或已经经历过雄激素受
体拮抗剂治疗，或两者同时治疗。在一些实施方案中，所述疾病是雄激素依赖性疾病。
体拮抗剂治疗，或两者同时治疗。在一些实施方案中，所述疾病是雄激素依赖性疾病。
[0023] 生物标记物也可以是循环肿瘤细胞数量的减少，例如其中所述循环肿瘤细胞数量是在盖乐特龙(galeterone)治疗至少一周之后确定的。合适的生物标记物包括，但不限于：
细胞凋亡的CTC增加；PSA的减少或PSA倍增时间的降低；PSMA表达的增加；肿瘤18F-DHT-PET信号的降低；基于组织活检的测试，例如ProMark；蛋白体降解通路成员的存在或表达；5-激肽释放酶组；治疗前的和治疗后的睾酮血浓度；在治疗方案开始后的至少一个类固醇的水
平的变化；代谢标记物，例如P450酶的水平；CYP17蛋白的突变或变体；CTLA-4阻断的确定；
前列腺健康指数；PCA3的存在或水平；前列腺核有丝分裂测试；在细胞循环进展基因中的突变的存在；由血清学试验来确定的血红蛋白、乳酸脱氢酶、或碱性磷酸酶的水平；和对化学疗法的抗性(包括恩杂鲁胺或阿比特龙、比卡鲁胺或ARN-509)。
细胞凋亡的CTC增加；PSA的减少或PSA倍增时间的降低；PSMA表达的增加；肿瘤18F-DHT-PET信号的降低；基于组织活检的测试，例如ProMark；蛋白体降解通路成员的存在或表达；5-激肽释放酶组；治疗前的和治疗后的睾酮血浓度；在治疗方案开始后的至少一个类固醇的水
平的变化；代谢标记物，例如P450酶的水平；CYP17蛋白的突变或变体；CTLA-4阻断的确定；
前列腺健康指数；PCA3的存在或水平；前列腺核有丝分裂测试；在细胞循环进展基因中的突变的存在；由血清学试验来确定的血红蛋白、乳酸脱氢酶、或碱性磷酸酶的水平；和对化学疗法的抗性(包括恩杂鲁胺或阿比特龙、比卡鲁胺或ARN-509)。
[0024] 通过引用并入
[0028] 图1描绘了雄激素受体(AR)及其可变剪接变体。
[0029] 图2表明了盖乐特龙(galeterone)下调全长和剪接变体AR，并减少CWR22rv1细胞系的细胞增殖。
[0030] 图3表明了盖乐特龙(galeterone)克服由于AR剪接变体产生的对阿比特龙和恩杂鲁胺(enzalutamide)的抗性。盖乐特龙，而不是恩杂鲁胺(enzalutamide)，降低了全长和剪接变体AR-V7蛋白。
[0031] 图4表明了盖乐特龙(galeterone)在CWR22rv1细胞系中同时降低了全长和AR-V7蛋白。
[0032] 图5表明了盖乐特龙(galeterone)在用AR-V7剪接变体转染的DU145细胞中降低了AR-V7。
[0033] 图6表明了在72小时的曝露时间内，盖乐特龙(galeterone)减小全长和剪接变体AR-V7。
[0034] 图7描绘了对去势有抗性和对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系的增殖。
[0035] 图8描绘了对去势有抗性和对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系对盖乐特龙(galeterone)的响应。
[0037] 图9B描绘了盖乐特龙(galeterone)在对恩杂鲁胺(enzalutamide)有响应和对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的LNCaP细胞中对AR和PSA蛋白水平的作用。
[0038] 图10描绘了在存在或不存在恩杂鲁胺(enzalutamide)的情况下，用合成雄激素处理的细胞内雄激素受体的定位。
[0039] 图11描绘了在恩杂鲁胺(enzalutamide)或盖乐特龙(galeterone)存在或不存在的情况下，用合成雄激素处理的CPRC细胞系内雄激素受体的定位。
[0040] 图12描绘了在恩杂鲁胺(enzalutamide)或盖乐特龙(galeterone)存在或不存在的情况下，用合成雄激素处理的对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系中雄激素受体
的定位。
的定位。
[0041] 图13描绘了在恩杂鲁胺(enzalutamide)或盖乐特龙(galeterone)存在或不存在的情况下，用合成雄激素处理的对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系中雄激素受体
的定位。
的定位。
[0042] 图14描绘了用恩杂鲁胺(enzalutamide)或盖乐特龙(galeterone)处理的细胞系中AR荧光素酶报告基因的活动。
[0043] 图15A表明了免疫荧光实验的设计，以使得所使用的测试化合物的核定位可视化。
[0044] 图15B描述了图15A中描述的实验的结果，并显示了盖乐特龙(galeterone)，而不是恩杂鲁胺(enzalutamide)，降低AR核易位。
[0045] 图16表明了对去势有抗性的表达AR-V7的肿瘤对盖乐特龙(galeterone)的响应。采用RT-PCR在LuCaP136去势抗性的异种移植肿瘤中检测到了AR-V7。
[0046] 图17表明了盖乐特龙(galeterone)下调携带AR-T878A突变的雄激素受体。
[0047] 图18表明了盖乐特龙(galeterone)对野生型AR和AR点突变的结合测定结果。
[0048] 图19表明了盖乐特龙(galeterone)降低在具有野生型AR的细胞中和具有AR点突变的细胞中的AR-依赖性基因表达。这些细胞也表达具有F876L突变的AR受体。
[0049] 图20表明了由PSA引起的在CRPC和恩杂鲁胺(enzalutamide)抗性细胞系中的PSA减少。
[0050] 图21描绘的方案示出对AR变体的检测，其中C-末端域已丢失。
[0051] 图22表明了一个研究的结果，其中用盖乐特龙(galeterone)治疗的具有丢失C-末端AR的患者(4/4)显示最大的PSA响应(>50％)。
[0052] 发明详述
[0053] 定义
[0054] 本发明所用的“对象”指的是临床试验的患者或对象和更广泛地含有表达的遗传材料的生物实体。也包括组织(包括活组织检查材料)、细胞和来自对象体内或体外培养获
得的它们的后代。
得的它们的后代。
[0055] “样品”是指从对象中移除的流体、固体或组织，并且包括全血、血清、血浆、组织、精液、细胞、组织活检、粘液、粪便、骨、牙齿、鼻或喉或脸颊拭子、尿、皮肤、眼泪、器官活检(肝、肾、结肠、肺、胰腺)、肿瘤活检、或肿瘤组织、循环肿瘤细胞、来自原发肿瘤或转移组织的外来体(exosomes)。样品还可以包括所收集的来自对象的流体、固体或组织的一部分，例如循环肿瘤细胞或分析物。“经处理的样品”是指来自对象的流体、固体或组织通过实验室技术进行处理、处置、或管理以富集分析物。“经处理的全血样品”是指该全血样品通过体外实验室技术进行处理来分析全血样品的组成部分包括细胞、DNA、RNA、蛋白质、肽、或如下所述的分析物；例如，在全血样品中发现的细胞可被富集、洗涤、并单独分析；更具体地，循环肿瘤细胞可以从全血样品中富集并用于生物标记分析，并且这些生物标记物可以包括雄激素受体的突变形式。另一例子是富集全血样品中的DNA(例如循环DNA或肿瘤细胞DNA)，其可用于生物标记物分析，并且这些生物标记物可以包括雄激素受体的突变形式。
[0056] 所谓“分析物”是指待分析的样品的物质或组成。示例性的分析物包括一种或多种以下的一种或多种物质：蛋白质、肽、多肽、氨基酸、核酸、寡核苷酸、mRNA、RNA、微小RNA、长的非编码RNA、DNA、循环DNA、cDNA、抗体、碳水化合物、多糖、葡萄糖、脂质、气体(例如，氧气或二氧化碳)、电解质(例如，钠、钾、氯化物、碳酸氢盐、BUN、镁、磷酸盐、钙、氨、乳酸、锌、柠檬酸盐)、脂蛋白、胆固醇、脂肪酸、糖蛋白、蛋白聚糖、脂多糖、细胞表面标记物(例如，CD3、CD4、CD8、IL2R、或CD35)、肿瘤标记物(BCL-2、Ki-67、ERK5)、前列腺特异性抗原(PSA)、胞质标记物、治疗剂、治疗剂的代谢物、细胞(例如，全细胞、肿瘤细胞、循环肿瘤细胞、干细胞、白血细胞、T细胞(例如，显示CD3、CD4、CD8、IL2R、CD35、或其他表面标记物)、或用一个或多个具体的标记物识别的另一细胞)。如本发明所用，术语“小分子”是指一种药、药物、药品、或其它被考虑用于人类治疗用途的化学合成的化合物。如本发明所用，术语“生物的”是指来源于生物源而非合成的物质，且其被预期用于人类治疗用途。生物标记物可以用作生物体的特定疾病状态或特定的生理状态的指标的生物物质，通常生物标记物是体液中测量的蛋
白质或其它天然化合物，其浓度反映疾病状态或机能障碍的存在与否或严重程度或所处阶
段，可用于监测治疗疾病或病症或功能障碍的治疗进展，或可作为临床结果或进展的替代
测量。如本发明所用，术语“代谢生物标记”是指一种物质、分子、或合成的或生物衍生的化合物，其用于确定患者或对象的肝或肾功能的状态。如本发明所用，“基因分型”指的是确定在特定基因中可能会影响或不影响该特定基因表型的遗传差异的能力。如本发明所用，术
语“表型”是指由基因型设定的作为(代谢或生理的)结果的蛋白质的生物表达。如本发明所用，术语“基因表达图谱”是指以时间或空间的方式，确定生产的基因产物的速率或量，或在特定组织中基因转录的活性的能力。如本发明所用，术语“蛋白质组分析”是指蛋白质图样或阵列，以确定在正常和病变组织中的蛋白质或肽的关键差异。另外的示例性分析物也在
本发明中有所描述。术语分析物还包括样品的组分，所述组分是初始靶分析物用生化方法
扩增的直接产物，如核酸扩增反应的产物。
白质或其它天然化合物，其浓度反映疾病状态或机能障碍的存在与否或严重程度或所处阶
段，可用于监测治疗疾病或病症或功能障碍的治疗进展，或可作为临床结果或进展的替代
测量。如本发明所用，术语“代谢生物标记”是指一种物质、分子、或合成的或生物衍生的化合物，其用于确定患者或对象的肝或肾功能的状态。如本发明所用，“基因分型”指的是确定在特定基因中可能会影响或不影响该特定基因表型的遗传差异的能力。如本发明所用，术
语“表型”是指由基因型设定的作为(代谢或生理的)结果的蛋白质的生物表达。如本发明所用，术语“基因表达图谱”是指以时间或空间的方式，确定生产的基因产物的速率或量，或在特定组织中基因转录的活性的能力。如本发明所用，术语“蛋白质组分析”是指蛋白质图样或阵列，以确定在正常和病变组织中的蛋白质或肽的关键差异。另外的示例性分析物也在
本发明中有所描述。术语分析物还包括样品的组分，所述组分是初始靶分析物用生化方法
扩增的直接产物，如核酸扩增反应的产物。
[0057] 联合治疗：如本发明所用的术语“联合治疗”，是指的那些情形：两个或更多不同的药物试剂以重叠方案施用使得对象同时暴露于两种或多种试剂，或使用时间方案施用从而使得对象依次暴露于两个或多个试剂。
[0058] 给药方案：在本发明中使用的术语“给药方案”，是指一组单位剂量(通常超过一个)，其通过时间周期分隔开单独施用。特定药剂的推荐剂量的集合(即，量、时间、给药途径等)构成其给药方案。
[0059] 起始：如本发明所用术语“起始”，当其应用于给药方案时，可以被用来指第一次施用药剂给先前没有接受过所述药物试剂的对象。或者或另外，术语“起始”可被用来指在对象的治疗期间，施用特定单位剂量的药物试剂。
[0060] 药物试剂：如本发明中所使用的，短语“药物试剂”是指当施用于对象，具有治疗作用和/或得到所需的生物和/或药理学作用的任何试剂。
[0062] 治疗有效量：术语药物试剂或试剂组合的“治疗有效量”是指试剂以任何医学治疗的合理益处/风险比，赋予经受治疗的对象治疗效果的量。治疗效果可以是客观的(即，可通过一些测试或标记物测量的)或主观的(即对象给出的表示或感觉到效果)。治疗有效量通常以给药方案施用，其可以包括多个单位剂量。对于任何特定的药物试剂，治疗有效量(和/或有效给药方案中的适当单位剂量)可以变化，例如，根据给药途径，与其它药剂组合。同时，具体的治疗有效量(和/或单位剂量)对于任何特定对象可能取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所使用的具体药剂的活性；所使用的具体组合物；对象的年
龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径、和/或所用特定药剂的排泄或代谢的速率；治疗的持续时间；以及在医学领域众所周知的类似因素。
龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药时间、给药途径、和/或所用特定药剂的排泄或代谢的速率；治疗的持续时间；以及在医学领域众所周知的类似因素。
[0063] 治疗：如本发明中所使用的，术语“治疗”(也称为“医治”或“医疗”)是指药剂、治疗、或药物的任何施用，其部分或完全缓解、改善、减轻、抑制特定疾病、病症、综合征和/或病况的一种或多种症状或特征，延迟其发病，降低其严重程度和/或减少其发生率。这种治疗可以针对不呈现相关疾病、病症和/或病况的迹象的对象，和/或仅呈现所述疾病、病症和/或病状的早期迹象的对象。或者或另外，这样的治疗可以针对呈现相关疾病、病症和/或病况的一个或更多已确定迹象的对象。
[0064] 如本发明所用的术语“无响应”或“差响应”指的是经治疗后，患者或对象的临床或医疗表现、预后、症状、诊断指标、特征、存活或输出结果缺少变化或变化极小，它进一步暗示和推断治疗并未部分或完全缓解、改善、减轻、抑制特定疾病、病症、综合征和/或病况的一种或多种症状或特征、延迟其发病、降低其严重程度和/或减少其发生率。无反应可以与“缺乏疗效”，“缺乏响应”互换使用。相反，对治疗的“响应”或“响应度”是指治疗后患者的临床或医疗表现、预后、症状、诊断指标、特征、生存或结果的改变，并且它进一步暗示和推断治疗部分或完全缓解、改善、减轻、抑制特定疾病、病症、综合征和/或病况的一种或多种症状或特征、延迟其发病、降低其严重程度和/或减少其发生率。响应可以与“疗效”互换使用，作为治疗或补救产生所需的结果或效果的能力，并作为治疗或补救产生预期结果的质量反映。因此，本发明的生物标记物被用于协助医疗决策。例如，在评估治疗过程中，分析来自患者的样品中生物标记物或生物标记物组，确定生物标记物或生物标记物组存在/不存在或
其水平，然后基于生物标记物的分析结果向患者施用式I的化合物或式II的化合物。
其水平，然后基于生物标记物的分析结果向患者施用式I的化合物或式II的化合物。
[0065] 单位剂量：如本发明所用的术语“单位剂量”或“剂量”，是指一种药剂的非连续施用，一般在给药方案的上下文中。
[0066] 标准化学术语的定义可参考著作，包括Carey和Sundberg的“高等有机化学第4版”A卷(2000)和B卷(2001)，Plenum出版社，纽约，其整体通过引用并入本发明。除非另外指出，使用本领域技术范围内的质谱，NMR，HPLC，蛋白质化学，生物化学，重组DNA技术和药理学的常规方法。
[0067] 固体分散体：本发明所使用的术语“固体分散体”，是指包含两种不同组分的组合物，通常为固体基质与分散在其中的第二物质(如活性药物成分)。
[0068] 固体基质：术语“固体基质”是指第二物质的分子(如活性药物成分)被嵌入或分散在其中的固体相。
[0069] 治疗方法
[0070] 一旦前列腺癌被确诊并分期，临床管理的选择包括预期的、定期或间隔管理和监控、手术、放射治疗、冷冻治疗、激素治疗、化学治疗、免疫治疗和疫苗治疗。通常情况下，包括年龄和预期寿命以及其他随之而来的健康状况都在治疗方案选择中与肿瘤分期和分级
一起予以考虑。因为前列腺癌是雄激素依赖性疾病，激素疗法或雄激素剥夺疗法(ADT)或雄激素抑制疗法具有减少雄激素在体内的水平或防止它们接触前列腺癌细胞(化学去势)的
总体目标。激素治疗包括LHRH激动剂(醋酸亮丙瑞林(Lupron)，亮丙瑞林醋酸盐注射液
(eligard)，戈舍瑞林(goserelin)，曲普瑞林(tripterelin)，组氨瑞林(histrelin))；LHRH拮抗剂(firmagon)。激素治疗可以与手术切除肿瘤、睾丸切除术(手术去势)、或放射治疗或放射药物(镭223二氯化物，Xofigo(镭223二氯化物))联用。治疗旨在减少雄激素(包括阿比特龙(CYP17抑制剂))的产生。抗雄激素治疗的目的是抑制雄激素受体，例如氟他胺、比卡鲁胺、尼鲁米特、ARN-509和恩杂鲁胺(enzalutamide)。抗雄激素治疗可以与睾丸切除术或
LHRH类似物作为一线激素疗法进行组合。这称为联合雄激素阻断(CAB)。其他雄激素抑制药物包括雌激素和酮康唑。因此靶向雄激素受体信号传导通路一直是药物开发的主题，广义
上包括CYP17抑制剂或调节剂、抗雄激素剂、伴侣抑制剂(靶向热休克蛋白，Hsp-27抑制剂)、雄激素受体调节剂(阻断受体的反式激活域)。疫苗治疗(目前的Sipuleucel)意在提高人体
的免疫系统以识别前列腺肿瘤以及引入抗肿瘤免疫应答。这种形式的疗法不是“工业上可
行的”，因为每个疫苗是由来自于每个独立的患者的独特的白细胞在实验室暴露于前列腺
酸性磷酸酶(PAP)后制成的。另一个免疫治疗包括易普利姆玛(一种CTLA-4拮抗剂)。去势抗性前列腺癌(CRPC)这一术语是用于那些雄激素剥夺或雄激素抑制治疗不再对减缓前列腺
肿瘤增殖或转移扩散有效的患者，而且它是疾病的一个阶段，该阶段与对治疗方案原发性
或获得性有抗性相关，并且对这一阶段只有很少的治疗可选方案，其中之一是广泛的癌症
化疗(以多西他赛和卡巴他赛为例子)。
一起予以考虑。因为前列腺癌是雄激素依赖性疾病，激素疗法或雄激素剥夺疗法(ADT)或雄激素抑制疗法具有减少雄激素在体内的水平或防止它们接触前列腺癌细胞(化学去势)的
总体目标。激素治疗包括LHRH激动剂(醋酸亮丙瑞林(Lupron)，亮丙瑞林醋酸盐注射液
(eligard)，戈舍瑞林(goserelin)，曲普瑞林(tripterelin)，组氨瑞林(histrelin))；LHRH拮抗剂(firmagon)。激素治疗可以与手术切除肿瘤、睾丸切除术(手术去势)、或放射治疗或放射药物(镭223二氯化物，Xofigo(镭223二氯化物))联用。治疗旨在减少雄激素(包括阿比特龙(CYP17抑制剂))的产生。抗雄激素治疗的目的是抑制雄激素受体，例如氟他胺、比卡鲁胺、尼鲁米特、ARN-509和恩杂鲁胺(enzalutamide)。抗雄激素治疗可以与睾丸切除术或
LHRH类似物作为一线激素疗法进行组合。这称为联合雄激素阻断(CAB)。其他雄激素抑制药物包括雌激素和酮康唑。因此靶向雄激素受体信号传导通路一直是药物开发的主题，广义
上包括CYP17抑制剂或调节剂、抗雄激素剂、伴侣抑制剂(靶向热休克蛋白，Hsp-27抑制剂)、雄激素受体调节剂(阻断受体的反式激活域)。疫苗治疗(目前的Sipuleucel)意在提高人体
的免疫系统以识别前列腺肿瘤以及引入抗肿瘤免疫应答。这种形式的疗法不是“工业上可
行的”，因为每个疫苗是由来自于每个独立的患者的独特的白细胞在实验室暴露于前列腺
酸性磷酸酶(PAP)后制成的。另一个免疫治疗包括易普利姆玛(一种CTLA-4拮抗剂)。去势抗性前列腺癌(CRPC)这一术语是用于那些雄激素剥夺或雄激素抑制治疗不再对减缓前列腺
肿瘤增殖或转移扩散有效的患者，而且它是疾病的一个阶段，该阶段与对治疗方案原发性
或获得性有抗性相关，并且对这一阶段只有很少的治疗可选方案，其中之一是广泛的癌症
化疗(以多西他赛和卡巴他赛为例子)。
[0071] 目前，可用于治疗前列腺癌患者的有下列化合物：醋酸阿比特龙、比卡鲁胺、卡巴他赛、康士得(比卡鲁胺)、地加瑞克、多西紫杉醇、恩杂鲁胺(enzalutamide)、醋酸戈舍瑞林、Jevtana(卡巴他赛)、醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate)、利普安(醋酸亮丙瑞林)、利普安混悬剂(醋酸亮丙瑞林)、利普安混悬剂-3个月(醋酸亮丙瑞林)、利普安混悬剂-4个月(醋酸亮丙瑞林)、利普安混悬剂-Ped(醋酸亮丙瑞林)、强的松、Provenge(Sipuleucel-T)、镭223二氯乙物、Sipuleucel-T、泰索帝(多西他赛)、Viadur(醋酸亮丙瑞林)、Xofigo(镭223二氯化物)、Xtandi(恩杂鲁胺)、诺雷得(醋酸戈舍瑞林)、Zytiga(醋酸阿比特龙)。
[0072] 盖乐特龙(galeterone)(式II的化合物)，正在被开发作为针对雄激素敏感癌症的治疗药物。盖乐特龙(galeterone)已被证明是在类固醇生成通路中CYP17酶的有效抑制剂
并且特别地还拮抗雄激素剂同雄激素受体的结合，并下调雄激素受体。对雄激素信号传导
通路的这些作用的整体结果是对前列腺癌生长的抑制。(参见US 7,875,599，其通过引用并入本发明。)
并且特别地还拮抗雄激素剂同雄激素受体的结合，并下调雄激素受体。对雄激素信号传导
通路的这些作用的整体结果是对前列腺癌生长的抑制。(参见US 7,875,599，其通过引用并入本发明。)
[0073] 本发明还提供了一些方法以协助对雄激素依赖性疾病、病症、综合征和病况的医疗决策，以作为提高评估和评价治疗并优化治疗的预测过程的手段，并且优化式I的化合物的使用和更优选式II的化合物的使用。在本发明中描述并提供了鉴定更可能响应盖乐特龙
(galeterone)治疗的患者或鉴定不响应该药物的患者的方法。通过前瞻性筛选更可能对药
物(盖乐特龙(galeterone))有响应的患者，或通过对来自患者样品的生物标记物或生物标
记物组进行分析以临床评估治疗方案，如果患者被选择为对盖乐特龙(galeterone)更可能
有响应，则该前列腺癌患者会受益，它们会有降低的肿瘤进展和转移的风险并且可能获得
更好的总体结果。此外，确定正在对药物(盖乐特龙(galeterone))产生响应的患者的诊断
方法，也会使不产生响应的患者受益，因为相同的方法可以在比经验性治疗管理早得多的
时间识别出这些通过更换成不同的治疗方法而有可能受益的患者。由于其三种机制优势，
例如抑制雄激素的产生、拮抗并向下调节雄激素受体活性，盖乐特龙(galeterone)是在已
观察到前列腺癌治疗抗性情况下的潜在候选选择。例如，如果抗雄激素剂已经失去了通过
受体上的配体结合位点来抑制雄激素受体活性的能力，盖乐特龙(galeterone)是一个可选
的疗法，因为它已被证明能够用作对抗雄激素剂有抗性的细胞内的抗增殖剂。此外，如果紫杉烷已经失去了它阻止肿瘤细胞内细胞分裂或消融肿瘤增殖的能力，盖乐特龙
(galeterone)是治疗方案的潜在候选选择，因为它具有作为对紫杉烷有抗性的细胞内抗增
殖剂(例如多西他赛或卡巴他赛)的潜能。因此，鉴定治疗抗性生物标记物可以优化对已知
能通过规避这些耐药机制而有效的疗法的选择。
(galeterone)治疗的患者或鉴定不响应该药物的患者的方法。通过前瞻性筛选更可能对药
物(盖乐特龙(galeterone))有响应的患者，或通过对来自患者样品的生物标记物或生物标
记物组进行分析以临床评估治疗方案，如果患者被选择为对盖乐特龙(galeterone)更可能
有响应，则该前列腺癌患者会受益，它们会有降低的肿瘤进展和转移的风险并且可能获得
更好的总体结果。此外，确定正在对药物(盖乐特龙(galeterone))产生响应的患者的诊断
方法，也会使不产生响应的患者受益，因为相同的方法可以在比经验性治疗管理早得多的
时间识别出这些通过更换成不同的治疗方法而有可能受益的患者。由于其三种机制优势，
例如抑制雄激素的产生、拮抗并向下调节雄激素受体活性，盖乐特龙(galeterone)是在已
观察到前列腺癌治疗抗性情况下的潜在候选选择。例如，如果抗雄激素剂已经失去了通过
受体上的配体结合位点来抑制雄激素受体活性的能力，盖乐特龙(galeterone)是一个可选
的疗法，因为它已被证明能够用作对抗雄激素剂有抗性的细胞内的抗增殖剂。此外，如果紫杉烷已经失去了它阻止肿瘤细胞内细胞分裂或消融肿瘤增殖的能力，盖乐特龙
(galeterone)是治疗方案的潜在候选选择，因为它具有作为对紫杉烷有抗性的细胞内抗增
殖剂(例如多西他赛或卡巴他赛)的潜能。因此，鉴定治疗抗性生物标记物可以优化对已知
能通过规避这些耐药机制而有效的疗法的选择。
[0074] 此外，由于前列腺癌是一种多因素疾病，优化的盖乐特龙(galeterone)疗法的生物标记物的形式可以是作为疾病状况、治疗优化和结果指示物的一组生物标记物或一个生
物标记物组。盖乐特龙(galeterone)可以单独开处方或与另一种疗法结合开处方，因此一
个生物标记物，多个生物标记物，或一个生物标记物组可以帮助预测效用、有效性、安全性或毒性，并可以帮助指导不止单一盖乐特龙(galeterone)，还有盖乐特龙(galeterone)与
其他疗法结合的优化的医疗决策。
物标记物组。盖乐特龙(galeterone)可以单独开处方或与另一种疗法结合开处方，因此一
个生物标记物，多个生物标记物，或一个生物标记物组可以帮助预测效用、有效性、安全性或毒性，并可以帮助指导不止单一盖乐特龙(galeterone)，还有盖乐特龙(galeterone)与
其他疗法结合的优化的医疗决策。
[0075] 生物标记可以是预后的、预测的、药效学/机理的、或替代的。预后生物标记物是与治疗无关的对疾病的可能结果的预测。在前列腺癌中，预后标记物包括PSA水平、Gleason评分、对疾病扩散模式的监控、CTCs的存在/不存在/形貌/数量、乳酸脱氢酶的水平、以及疼痛。预测性生物标记物以疾病或宿主特性的形式出现，其会涉及使用特定治疗后结果的改善；前列腺癌预测性生物标记物包括：当活检时、重新活检时、开始治疗时、改变治疗时的PSA水平。药效学生物标记物能够揭示药物干预的行为或结果的机制，并且在前列腺癌中这些可以包括雄激素(睾酮或DHT)的损失、AR特异性基因表达向上或向下的调节(即蛋白质分
析)、免疫反应性(检测抗体或特定的免疫细胞)、PSA水平、或更广泛地肿瘤收缩。替代性生物标记物作为黄金标准结果(例如，存活)的中间端点，用来估计治疗效果。在PCa中，替代性生物标记物包括CTC计数、PSA降低、放射影像无进展存活。总体而言，生物标记物提供合理的方法来解决目前的临床挑战，包括何时、在哪些患者中进行活检或再次活检、提供介入治疗(手术等等)、或改变/组合疗法。伴随着盖乐特龙(galeterone)治疗，识别生物标记物或生物标记物组将提供对疾病治疗管理的强大决策能力。而预测性和替代性生物标记物具有
更大程度的治疗管理和决策的重要性，其中之一或全部两个与预后生物标记物结合可提供
更大的临床管理价值。
析)、免疫反应性(检测抗体或特定的免疫细胞)、PSA水平、或更广泛地肿瘤收缩。替代性生物标记物作为黄金标准结果(例如，存活)的中间端点，用来估计治疗效果。在PCa中，替代性生物标记物包括CTC计数、PSA降低、放射影像无进展存活。总体而言，生物标记物提供合理的方法来解决目前的临床挑战，包括何时、在哪些患者中进行活检或再次活检、提供介入治疗(手术等等)、或改变/组合疗法。伴随着盖乐特龙(galeterone)治疗，识别生物标记物或生物标记物组将提供对疾病治疗管理的强大决策能力。而预测性和替代性生物标记物具有
更大程度的治疗管理和决策的重要性，其中之一或全部两个与预后生物标记物结合可提供
更大的临床管理价值。
[0076] 治疗后的预后因素包括相对于治疗前PSA的水平下降、疼痛的改善、生活质量改进(对患者直接测量)、CTC计数改变(例如每毫升血液样品大于5个至小于5个)和CTC特征的变
化(例如，CTC的大小)、PSA无进展存活(PFS)、放射影像PFS、肿瘤抗原免疫诱导
(sipuleucel-T)。前列腺癌具有高的骨转移倾向，据推测这是通过获得骨拟态或粘附分子
作为媒介，使其附着于骨微环境。试剂(例如唑来膦和狄诺塞麦)可以干扰肿瘤骨基质的相
互作用，从而限制骨骼相关问题(SREs)，如骨折、对骨头的辐射/手术和脊髓压迫。前列腺癌骨转移效果可以间接地与骨转换标记物相关如骨1型胶原分解产物的N-端肽(尿/血清Ntx)
和其他，如抗酒石酸酸性磷酸酶5b、血清型1C端肽、骨桥蛋白。其他生物标记物可以包括破骨细胞活化剂，如骨碱性磷酸酶(BAP，或总碱性磷酸酶的一个组分)，或更广泛地一种或多种OPG/RANKL/RANK系统，破骨细胞生成的显性的最终介体。前列腺癌的另一个临床后果是
骨髓抑制带来的贫血。而贫血可能是由于雄激素剥夺疗法、肾疾病、化疗毒性、慢性疾病的贫血、失血造成的铁缺乏、骨髓浸润或其他共同存在的疾病的结果，血红蛋白水平和贫血已被证明是在列线图CRPC风险分级(贫血、骨扫描进展、内脏转移、疼痛)的一种预后因子。贫血属于反映前列腺癌的两个负担以及宿主反应的类别。
化(例如，CTC的大小)、PSA无进展存活(PFS)、放射影像PFS、肿瘤抗原免疫诱导
(sipuleucel-T)。前列腺癌具有高的骨转移倾向，据推测这是通过获得骨拟态或粘附分子
作为媒介，使其附着于骨微环境。试剂(例如唑来膦和狄诺塞麦)可以干扰肿瘤骨基质的相
互作用，从而限制骨骼相关问题(SREs)，如骨折、对骨头的辐射/手术和脊髓压迫。前列腺癌骨转移效果可以间接地与骨转换标记物相关如骨1型胶原分解产物的N-端肽(尿/血清Ntx)
和其他，如抗酒石酸酸性磷酸酶5b、血清型1C端肽、骨桥蛋白。其他生物标记物可以包括破骨细胞活化剂，如骨碱性磷酸酶(BAP，或总碱性磷酸酶的一个组分)，或更广泛地一种或多种OPG/RANKL/RANK系统，破骨细胞生成的显性的最终介体。前列腺癌的另一个临床后果是
骨髓抑制带来的贫血。而贫血可能是由于雄激素剥夺疗法、肾疾病、化疗毒性、慢性疾病的贫血、失血造成的铁缺乏、骨髓浸润或其他共同存在的疾病的结果，血红蛋白水平和贫血已被证明是在列线图CRPC风险分级(贫血、骨扫描进展、内脏转移、疼痛)的一种预后因子。贫血属于反映前列腺癌的两个负担以及宿主反应的类别。
[0077] 前列腺癌的另一个主要的预后指标是乳酸脱氢酶(LDH)。LDH升高被认为是潜在的肿瘤负担或侵袭性的肿瘤表型的反映。据认为，LDH水平对于随机化患者的临床试验的临床分层有用并且用于预后决策。
[0078] 已经研究了在前列腺癌中雄激素受体的活性和基因表达谱。为寻找一种生物标记物，首先识别上调基因，之后测试该基因产物是否可以作为候选生物标记物。
Holzbeierlein等人(Am.J.Path.164(1),pp 217-2272004)描述了基因表达谱并将该表达
与治疗抗性机制联系起来。虽然已经识别了某些基因增强或减弱的表达，某些基因中的基
因组改变也可能发生在前列腺癌中，它们包括：重排(ETS转录因子，RAF、KRAS)；突变(雄激素受体，PIK3CA、AKT、RAF、KRAS)；扩增(雄激素受体，PIK3CA、MYC、AURKA)；损失(PTEN、RB1)。
其他已知的基因改变发生在SPOP、FOXA1、AURKA、MED12、MAGI-1和CHD1基因中。可以在50％以上的前列腺癌中发现ETS融合，靶向治疗或生物标记物可能是有用的，例如靶向抑制PARP或DNAPK或分析患者样品的ETS融合。癌基因表达，RAS/RAF、MYC，以及肿瘤抑制基因RB1可能是有用的生物标记物。
Holzbeierlein等人(Am.J.Path.164(1),pp 217-2272004)描述了基因表达谱并将该表达
与治疗抗性机制联系起来。虽然已经识别了某些基因增强或减弱的表达，某些基因中的基
因组改变也可能发生在前列腺癌中，它们包括：重排(ETS转录因子，RAF、KRAS)；突变(雄激素受体，PIK3CA、AKT、RAF、KRAS)；扩增(雄激素受体，PIK3CA、MYC、AURKA)；损失(PTEN、RB1)。
其他已知的基因改变发生在SPOP、FOXA1、AURKA、MED12、MAGI-1和CHD1基因中。可以在50％以上的前列腺癌中发现ETS融合，靶向治疗或生物标记物可能是有用的，例如靶向抑制PARP或DNAPK或分析患者样品的ETS融合。癌基因表达，RAS/RAF、MYC，以及肿瘤抑制基因RB1可能是有用的生物标记物。
[0079] 已知雄激素受体可调节一大批对前列腺癌细胞的特性和行为重要的基因。长的非编码RNA(例如PCGEM1和PRNCR1)的过度表达与前列腺癌的易感性相关，并且已经与之相联
系起来。最近有报道PCGEM1和PRNCR1在CRPC中高度过度表达，并且它们与配体依赖性和配
体独立的AR介导的基因活化程序结合并将其激活，并且可以导致前列腺癌细胞不加抑制的
增殖。(Yang等人，Nature 2013，500(7464)：598-602)
系起来。最近有报道PCGEM1和PRNCR1在CRPC中高度过度表达，并且它们与配体依赖性和配
体独立的AR介导的基因活化程序结合并将其激活，并且可以导致前列腺癌细胞不加抑制的
增殖。(Yang等人，Nature 2013，500(7464)：598-602)
[0080] 前列腺癌的生物状态从局部限制的低复发风险的肿瘤到高发展风险的肿瘤各有不同。目前，很少对前列腺癌患者使用生物标记物。例如，分别使用Gleason评分和血清前列腺特异性抗原(PSA)水平来预测局部前列腺癌患者的病理阶段。由于肿瘤分化程度对血清
PSA的表达会产生深远的影响，血清PSA水平本身并不能准确反映肿瘤负荷。CTC可以有潜力准确并独立的预测前列腺癌的特征，并且研究已将识别CTC与CRPC总体存活相关联。其他的研究已经指向开发生物标记物组，如某些生物学相关蛋白的表达模式与临床相关的评分的
关联，例如雄激素受体(AR)的共活化剂、赖氨酸特异性组蛋白脱甲基酶-1(LSD1)和四个半
LIM域蛋白2(FHL2)、AR、p53连同Gleason评分、Gleason分级和PSA水平。
PSA的表达会产生深远的影响，血清PSA水平本身并不能准确反映肿瘤负荷。CTC可以有潜力准确并独立的预测前列腺癌的特征，并且研究已将识别CTC与CRPC总体存活相关联。其他的研究已经指向开发生物标记物组，如某些生物学相关蛋白的表达模式与临床相关的评分的
关联，例如雄激素受体(AR)的共活化剂、赖氨酸特异性组蛋白脱甲基酶-1(LSD1)和四个半
LIM域蛋白2(FHL2)、AR、p53连同Gleason评分、Gleason分级和PSA水平。
[0081] 针对CRPC(几乎没有治疗选择存在的前列腺癌阶段)的生物标记物包括：内脏转移性疾病的发展(如肾、脑、肠、胰腺、结肠、肺、肾上腺、乳腺、肝脏转移)、表现状态、疼痛、血红蛋白、贫血、碱性磷酸酶(骨)、疼痛、RT-PCR检测的PSA和PSA、PSA动力学、CTC计数、乳酸脱氢酶、白蛋白、进展的类型(即，骨、可测量的疾病或者只有PSA升高)、VEGF水平、IL-6水平、嗜铬粒蛋白-A水平、血清TRAP 5b和其它骨转换标记物(sCTX、P1NP、及其他)、原发肿瘤内的总Gleason以及尿N-端肽。
[0082] 生物标记物或生物标记物组是可测量的特征、物质或分析物，或可以作为正常的生物过程、致病过程、或对治疗干预的药理反应的指标被客观测量并评估的一组特征、物
质、或分析物。癌症分期，包括确认和/或定位肿瘤、节点、和/或转移(TNM)，可能是最广泛应用的临床生物标记物组。生物标记物可以从常规监测患者样品中轻易获得，因此在全血、血清或血浆、尿液、黏液、粪便、泪液、精液等中被分析的生物标记物是最容易获得的。然而，在某些情况下，生物标记物可以在需要更侵入性操作的患者样品中分析，例如活检或组织采
样，例如肿瘤、骨、皮肤、牙齿、器官活检(肝、肾、结肠、肺胰腺)。或者，循环肿瘤细胞，或来自前列腺肿瘤或转移细胞的外切体可用于进行生物标记物测试。生物标记物包括生物或生理
的分子、化合物、物质或分析物，并且被分析以确定其不存在/存在、水平、浓度、值、强度、活性、或尺寸。
质、或分析物。癌症分期，包括确认和/或定位肿瘤、节点、和/或转移(TNM)，可能是最广泛应用的临床生物标记物组。生物标记物可以从常规监测患者样品中轻易获得，因此在全血、血清或血浆、尿液、黏液、粪便、泪液、精液等中被分析的生物标记物是最容易获得的。然而，在某些情况下，生物标记物可以在需要更侵入性操作的患者样品中分析，例如活检或组织采
样，例如肿瘤、骨、皮肤、牙齿、器官活检(肝、肾、结肠、肺胰腺)。或者，循环肿瘤细胞，或来自前列腺肿瘤或转移细胞的外切体可用于进行生物标记物测试。生物标记物包括生物或生理
的分子、化合物、物质或分析物，并且被分析以确定其不存在/存在、水平、浓度、值、强度、活性、或尺寸。
[0083] 最好能够使用最少的侵入性操作来分析生物标记物，如可以使用成像方法和利用成像分析的特异性检测或评估，如生物标记物特异性的纳米颗粒或磁性纳米颗粒，放射性
物质，或其他工具，以在体内对生物标记物特异性成像。生物标记物可以使用本领域中已知的标准方法进行检测，包括：免疫检测、PCR(实时PCR、RT-PCR、qPCR、TaqMan PCR)、色谱法、质谱法、NMR等。使用分离自或源自对象样品的RNA进行的基因表达分析所获得的生物标记
物，可以包括RNA定量、RNA QC和反转录、DNase1治疗和基于PCR的定量基因表达分析和微小RNA分析。基因表达分析可包括高、中或低密度阵列或基因表达阵列的组合，这些分析都集中在考虑基因的基因表达模式的识别，该等基因覆盖许多已知会通过雄激素受体的活化诱
导的基因。生物标记物可以是致病过程的特性，并且可以包括生活健康质量，如疼痛、排尿容易度和次数、性功能等。
物质，或其他工具，以在体内对生物标记物特异性成像。生物标记物可以使用本领域中已知的标准方法进行检测，包括：免疫检测、PCR(实时PCR、RT-PCR、qPCR、TaqMan PCR)、色谱法、质谱法、NMR等。使用分离自或源自对象样品的RNA进行的基因表达分析所获得的生物标记
物，可以包括RNA定量、RNA QC和反转录、DNase1治疗和基于PCR的定量基因表达分析和微小RNA分析。基因表达分析可包括高、中或低密度阵列或基因表达阵列的组合，这些分析都集中在考虑基因的基因表达模式的识别，该等基因覆盖许多已知会通过雄激素受体的活化诱
导的基因。生物标记物可以是致病过程的特性，并且可以包括生活健康质量，如疼痛、排尿容易度和次数、性功能等。
[0084] 作为生物标记物的雄激素受体和雄激素受体变体
[0085] 雄激素受体基因的细胞遗传学位置在Xq12上，并且其分子位置是在X染色体上的从67,544,031到67,730,618的碱基。雄激素受体目前被理解为包含8个外显子(参照图1)。
外显子1编码含有转录活化位点的氨基末端域(NTD)；外显子2-4编码DNA结合域(DBD)；同时外显子5-8编码配体结合域(LBD)。存在备选的剪接变体，例如，缺乏LBD。这样的变体可以是组成型活性的。缺乏LBD的剪接变体可以，例如，定位于细胞核中，在那里结合DNA并独立地激活配体的转录。
外显子1编码含有转录活化位点的氨基末端域(NTD)；外显子2-4编码DNA结合域(DBD)；同时外显子5-8编码配体结合域(LBD)。存在备选的剪接变体，例如，缺乏LBD。这样的变体可以是组成型活性的。缺乏LBD的剪接变体可以，例如，定位于细胞核中，在那里结合DNA并独立地激活配体的转录。
[0086] 在外显子1中雄激素受体基因含有两个多态三核苷酸微随体。第一微随体(最靠近5'端)含有8～60个重复的谷氨酰胺密码子“CAG”，并因此被称为多聚谷氨酰胺。第二微随体包含4～31个重复的甘氨酸密码子“GGC”，并被称为多聚甘氨酸。通常在多聚谷氨酰胺中，在AR基因中CAG重复的数量范围从不到10至约36，在白种人男性中平均数目为21，在黑人男性中平均数量为18。在前列腺癌中，研究表明具有短CAG重复的男性前列腺癌风险升高，并且该基因在癌细胞中的额外复制可能与疾病的进展相关。脊髓和延髓萎缩(肯尼迪氏病)是在
AR基因中CAG三核苷酸重复的增多导致的。在肯尼迪氏病中，CAG非正常地重复38到60多次。
在乳腺癌中已经提示一个长CAG重复区与妇女的乳腺癌的风险增加有关，而较短的CAG重复
区与降低风险相关联。其它的研究表明，较短的CAG重复区可能与乳腺癌和良性乳房疾病的风险增加有关。较短的CAG重复区也与乳腺癌的更具侵略性的形式相关联。另外，在AR基因中较长CAG重复区可能会增加妇女子宫内膜癌的危险性。尽管增长的CAG区域改变雄激素受
体的结构，但还不清楚改变的蛋白如何破坏细胞和雄激素-AR介导的胞内反应。含有CAG重
复的雄激素受体蛋白质的片段在细胞内出现累积，这种累积会干扰正常细胞的功能。这种
堆积会导致细胞凋亡，以及在肯尼迪氏病中，会导致在脑和脊髓中控制肌肉运动的神经细
胞损失。与此相对，前列腺癌细胞，或在AR基因产物中具有低CAG重复的细胞，已通过在AR基因中低数量的CAG重复以及从而更可能的AR蛋白表达和功能性过程来避免AR蛋白片段堆
积。因此，鉴定在AR基因产物中CAG重复的数量，可提供雄激素依赖性疾病强大的生物标记物或雄激素依赖性疾病的治疗方案。
AR基因中CAG三核苷酸重复的增多导致的。在肯尼迪氏病中，CAG非正常地重复38到60多次。
在乳腺癌中已经提示一个长CAG重复区与妇女的乳腺癌的风险增加有关，而较短的CAG重复
区与降低风险相关联。其它的研究表明，较短的CAG重复区可能与乳腺癌和良性乳房疾病的风险增加有关。较短的CAG重复区也与乳腺癌的更具侵略性的形式相关联。另外，在AR基因中较长CAG重复区可能会增加妇女子宫内膜癌的危险性。尽管增长的CAG区域改变雄激素受
体的结构，但还不清楚改变的蛋白如何破坏细胞和雄激素-AR介导的胞内反应。含有CAG重
复的雄激素受体蛋白质的片段在细胞内出现累积，这种累积会干扰正常细胞的功能。这种
堆积会导致细胞凋亡，以及在肯尼迪氏病中，会导致在脑和脊髓中控制肌肉运动的神经细
胞损失。与此相对，前列腺癌细胞，或在AR基因产物中具有低CAG重复的细胞，已通过在AR基因中低数量的CAG重复以及从而更可能的AR蛋白表达和功能性过程来避免AR蛋白片段堆
积。因此，鉴定在AR基因产物中CAG重复的数量，可提供雄激素依赖性疾病强大的生物标记物或雄激素依赖性疾病的治疗方案。
[0087] 前列腺癌是雄激素受体依赖性疾病。如上所述，治疗往往针对雄激素受体、与受体结合的配体、或雄激素介导的细胞内信号传导通路。前列腺癌通过选择性和治疗压力过程，突变了参与肿瘤增殖和“健康”的关键蛋白质，从而已经显示出对这些治疗通路的规避(抗性，对治疗产生抗性，治疗失败)。突变或遗传改变可能导致功能的获得或丧失、增加或减少的配体结合、增加或减少的基因表达(改变雄激素受体本身或参与类固醇受体活性的基因产品的基因表达或选择性表达)、类固醇受体DNA结合的增加或降低、受体组成型活性或配
体响应的损失、该受体的二聚化能力的改变、在效应蛋白上的配体结合位点的变化，例如辅因子成为增强剂或抑制剂、拮抗剂成为激动剂、配体混交(例如孕酮、可的松氢氧化物、雌激素、和皮质醇在正常条件下不结合雄激素受体，而雄激素受体中的配体结合突变会允许被
这些其他生理相关类固醇结合和激活)。因此，“改变的”或“突变的”或“突变”雄激素受体被用来指相对于其野生型形式已经改变的雄激素受体。例如，改变的雄激素受体表型上表达
一种或多种上述的功能获得或丧失。变化包括，但不限于包括外显子跳跃的剪接变体、隐藏的剪接供体/受体的使用、以及隐藏的外显子包含；氨基酸取代、缺失、或插入；转录后的变化和/或翻译后处理(即，糖基化、折叠、磷酸化、泛素化等)。
体响应的损失、该受体的二聚化能力的改变、在效应蛋白上的配体结合位点的变化，例如辅因子成为增强剂或抑制剂、拮抗剂成为激动剂、配体混交(例如孕酮、可的松氢氧化物、雌激素、和皮质醇在正常条件下不结合雄激素受体，而雄激素受体中的配体结合突变会允许被
这些其他生理相关类固醇结合和激活)。因此，“改变的”或“突变的”或“突变”雄激素受体被用来指相对于其野生型形式已经改变的雄激素受体。例如，改变的雄激素受体表型上表达
一种或多种上述的功能获得或丧失。变化包括，但不限于包括外显子跳跃的剪接变体、隐藏的剪接供体/受体的使用、以及隐藏的外显子包含；氨基酸取代、缺失、或插入；转录后的变化和/或翻译后处理(即，糖基化、折叠、磷酸化、泛素化等)。
[0088] 在已建立的细胞系或从肿瘤活组织检查中已经发现了用于前列腺癌的生物标记物，包括雄激素受体和已知突变的表达变体。突变可以是氨基酸置换、插入或缺失。另外，有一些已确定的剪接变体。示例性的突变包括，例如，E43G、L54S、Q58L、L57Q、Q64R、ΔQ86、Q112H、G142V、E166S、K180R、L192F、Q198G、E211E、D221H、N222D、T227C、M266T、P269S、A251V、E253K、S296R、P334F、P340L、A356V、P390L、G414S、W433L、T438P、T438I、L444S、G449D、G451D、G456S、G457D、R484C、T497I、A498T、P499P、V508L、G524S、G524D、D528G、ΔL547、ΔP554、T573A、L574P、K580R、A586V、A587S、L594M、K609E、R629Q、K630T、S646D、S647N、E665D、Q670R、I672T、G683A、V716M、V715M、L701H、L720E、A721T、V730M、R726L、L744V、A748V、M749I、G750S、F754L、T755A、V757A、S759P、Y763C、W741C、F747L、N756A、V757I、R760K、W741X、ΔG743、W751X、S782N、R786X、W796O、L797P、Q798E、S791P、I799P、L830P、R846G、Q867X、H874Y、T877A、T877S、V866M、L880Q、L872P、D879G、M886I、A896T、Q902R、F891L、G909Q、Q919R、D890N、M895V和K910R。例如，所述氨基酸取代是：T877A
(T878A)、D879G(D878G)、W741C、W741L、M749L、R629Q、G142V、P533S、T575A、H874Y或F876L。
这些点突变可以被分类为类固醇受体蛋白的三个主要区域1)LBD突变体(T877A、D879G、
W741C、W741L、M749L、H874Y、F876L)以及LBD内的突变会具有改变的配体结合，这是由于在配体结合口袋中的氨基酸R基团中受体蛋白质构象的变化或改变，或者构型导致的配体结
合损失、配体识别的丧失、拮抗剂同激动剂的切换和/或配体混交；2)可能影响受体反式激活的能力，与转录机制或辅因子/调节子的相互作用，并导致受体功能，如DNA结合，调控基因表达，或核易位的改变的NTD或铰链区的突变体(R629Q，G142V，P533S)；或3)可能影响该受体调节基因表达能力的DBD突变体(T575A)。实例包括：在雄激素受体中的H874Y突变已经显示允许在22RV1和CWR22RV1细胞中雌二醇、孕酮、氢化可的松、氟他胺、比卡鲁胺的结合；
D878G已显示引起DHT、睾酮结合和活性的损失；W741C突变使比卡鲁胺和氟他胺成为激动
剂；F876L将ARN-509和恩杂鲁胺(enzalutamide)从拮抗剂改变为激动剂；M749L赋予雌二醇过敏性；T575A导致对AR-非特异性基序即GRE的优先结合；R629Q导致与DHT的功能获得。
(T878A)、D879G(D878G)、W741C、W741L、M749L、R629Q、G142V、P533S、T575A、H874Y或F876L。
这些点突变可以被分类为类固醇受体蛋白的三个主要区域1)LBD突变体(T877A、D879G、
W741C、W741L、M749L、H874Y、F876L)以及LBD内的突变会具有改变的配体结合，这是由于在配体结合口袋中的氨基酸R基团中受体蛋白质构象的变化或改变，或者构型导致的配体结
合损失、配体识别的丧失、拮抗剂同激动剂的切换和/或配体混交；2)可能影响受体反式激活的能力，与转录机制或辅因子/调节子的相互作用，并导致受体功能，如DNA结合，调控基因表达，或核易位的改变的NTD或铰链区的突变体(R629Q，G142V，P533S)；或3)可能影响该受体调节基因表达能力的DBD突变体(T575A)。实例包括：在雄激素受体中的H874Y突变已经显示允许在22RV1和CWR22RV1细胞中雌二醇、孕酮、氢化可的松、氟他胺、比卡鲁胺的结合；
D878G已显示引起DHT、睾酮结合和活性的损失；W741C突变使比卡鲁胺和氟他胺成为激动
剂；F876L将ARN-509和恩杂鲁胺(enzalutamide)从拮抗剂改变为激动剂；M749L赋予雌二醇过敏性；T575A导致对AR-非特异性基序即GRE的优先结合；R629Q导致与DHT的功能获得。
[0089] 剪接变体包括外显子跳跃，隐蔽剪接供体/受体的使用，以及隐蔽外显子的包含。已经确定的变体包括AR-V1、AR-V2、AR-V3、AR-V4、AR-V5、AR-V6、ARV7、AR-V567es、AR-V7、AR-V9、AR-V12、AR-V13和AR-V14。例如参见美国专利申请号2011/0110926、美国专利号8,
133,724、和美国专利申请号2013/0130241)。通常，雄激素受体的变体缺少一些或全部LBD和/或赋予配体结合的雄激素受体蛋白质羧基末端的部分。
133,724、和美国专利申请号2013/0130241)。通常，雄激素受体的变体缺少一些或全部LBD和/或赋予配体结合的雄激素受体蛋白质羧基末端的部分。
[0090] 在去势抗性前列腺癌的临床研究中(Antonarakis E，Lu C，Wang H，等。雄激素受体剪接变体-7预测患有对去势抗性的前列腺癌的患者对恩杂鲁胺的抗性，2014年AACR年会，摘要2910，2014年4月7日发表)，39％的患者在循环肿瘤细胞中表达AR-V7mRNA。这类患者预后较差并且对抗雄激素治疗反应较差。具体地，这些患者当用恩杂鲁胺
(enzalutamide)处理时没有显示出PSA下降，且相对于AR-V7阴性患者的进展时间缩短(2.1
个月)，在53％的AR-V7阴性患者中PSA水平降至50％，且有较长的进展时间(6.1个月)。在一些实施方案中，雄激素AR-V7变体的存在与抗雄激素剂(如恩杂鲁胺(enzalutamide))的抗
性有关(Efstathiou等欧洲泌尿2014)。在一些实施方案中，将盖乐特龙(galeterone)施用
给鉴定为患有肿瘤的对象，在其中表达AR-V7。在其他实施方案中，将盖乐特龙
(galeterone)施用给鉴定为患有肿瘤的对象，在其中表达具有羧基末端损失的雄激素受
体。
(enzalutamide)处理时没有显示出PSA下降，且相对于AR-V7阴性患者的进展时间缩短(2.1
个月)，在53％的AR-V7阴性患者中PSA水平降至50％，且有较长的进展时间(6.1个月)。在一些实施方案中，雄激素AR-V7变体的存在与抗雄激素剂(如恩杂鲁胺(enzalutamide))的抗
性有关(Efstathiou等欧洲泌尿2014)。在一些实施方案中，将盖乐特龙(galeterone)施用
给鉴定为患有肿瘤的对象，在其中表达AR-V7。在其他实施方案中，将盖乐特龙
(galeterone)施用给鉴定为患有肿瘤的对象，在其中表达具有羧基末端损失的雄激素受
体。
[0091] 已知的另一种变体AR-V12，其已显示出在雄激素受体阳性转移性样本中40％的患病率。因为已经提出近60％的雄激素受体阳性转移样品表达一种或多种雄激素受体剪接变
体，因此从而得出很大百分比的肿瘤会有AR-V12剪接变体。此外，从来自那些表现出阿比特龙抗性的男性的样品中已观察到AR-V12(Mostaghel等，2011)。AR-V12变体已被证明是组成型活性的，因为它缺乏配体结合域。
体，因此从而得出很大百分比的肿瘤会有AR-V12剪接变体。此外，从来自那些表现出阿比特龙抗性的男性的样品中已观察到AR-V12(Mostaghel等，2011)。AR-V12变体已被证明是组成型活性的，因为它缺乏配体结合域。
[0092] 另一种这样的变体是AR点突变T878A(或者“T877A”)，在33％的激素难治的肿瘤中对其有报道。此突变增加AR混乱，允许在经阿比特龙治疗的患者体内升高的孕酮激活AR-T878A。因此，尽管持续进行雄激素阻断，通过这种突变AR变异体的表达，肿瘤仍然成长并且被赋予阿比特龙抗性。突变也改变了受体的结合特异性，使得在携带这种突变的肿瘤中，氟他胺成为激动剂，而比卡鲁胺失去其活性。AR-T878A相对于野生型AR活性增加了6倍。在一些实施方案中，雄激素AR-T878A变体的存在与对抗雄激素剂(如恩杂鲁胺(enzalutamide)
和阿比特龙)的抗性有关。在一些实施方案中，将盖乐特龙(galeterone)施用给鉴定为患有肿瘤的对象，在所述肿瘤中表达AR-T878A。
和阿比特龙)的抗性有关。在一些实施方案中，将盖乐特龙(galeterone)施用给鉴定为患有肿瘤的对象，在所述肿瘤中表达AR-T878A。
[0093] 另一个这样的变体是AR点突变F876L。此单氨基酸突变是在AR LBD内，它已被证明同时影响恩杂鲁胺(enzalutamide)和ARN-509结合，并最终可能介导肿瘤对这两种化合物
的抗性。在大约10％经ARN-509治疗的患者中鉴定出了F876L突变。据推测，该F876L突变将拮抗剂转变为激动剂效应，因此所述突变驱动对抗雄激素化合物的抗性。
的抗性。在大约10％经ARN-509治疗的患者中鉴定出了F876L突变。据推测，该F876L突变将拮抗剂转变为激动剂效应，因此所述突变驱动对抗雄激素化合物的抗性。
[0094] 在一些实施方案中，在从对象中分离出的肿瘤样品中检测到AR变体。例如，从对象中分离循环肿瘤血细胞，检测所述细胞中是否存在AR变体。在一个实施方案中，检测细胞抗体结合AR蛋白的C-末端部分(例如配体结合域)的免疫反应性。例如，使用具有配体结合域特异性的抗体。缺乏免疫反应性说明存在缺乏配体结合域的AR变体，而免疫反应性的存在
表示存在具备配体结合域的AR蛋白，包括野生型AR蛋白。也可以使用对AR蛋白的NH2部分具有特异性的抗体进行该分析，从而它可以检测所有AR蛋白的存在，无论有或没有C-末端截
短。在另一个实施方案中，通过检测编码该AR变体的核酸(包括DNA或RNA)的存在或水平进
行对AR变体的检测。通过使用例如核酸扩增反应、基因表达分析、或通过使用基于测序的方法执行检测。在一些实施方案中，按照2011年1月18日提交的美国专利申请号2011/0110926的申请中所描述的内容进行对ARV-7的检测，在此通过引用整体并入本发明。例如，使用设计用于扩增截短的ARV-7转录物的引物进行RNA转录物的PCR扩增。在一些实施方案中，进行定量PCR扩增。
表示存在具备配体结合域的AR蛋白，包括野生型AR蛋白。也可以使用对AR蛋白的NH2部分具有特异性的抗体进行该分析，从而它可以检测所有AR蛋白的存在，无论有或没有C-末端截
短。在另一个实施方案中，通过检测编码该AR变体的核酸(包括DNA或RNA)的存在或水平进
行对AR变体的检测。通过使用例如核酸扩增反应、基因表达分析、或通过使用基于测序的方法执行检测。在一些实施方案中，按照2011年1月18日提交的美国专利申请号2011/0110926的申请中所描述的内容进行对ARV-7的检测，在此通过引用整体并入本发明。例如，使用设计用于扩增截短的ARV-7转录物的引物进行RNA转录物的PCR扩增。在一些实施方案中，进行定量PCR扩增。
[0095] 已观察到在前列腺癌中紫杉烷抗性与抗雄激素剂不敏感性相关。此外，紫杉烷类已经显示出对表达临床相关的剪接变体ARv567VS ARv7的前列腺癌细胞有差异性效果。约
59％来自具有CRPC并且对ADT或阿比特龙疗法产生响应的患者的前列腺癌的肿瘤样品中出
现ARv567，ARv567看来对动态微管和动力运动蛋白有作用。因此，AR变体ARv567被隔离在细胞质中，因此在紫杉烷疗法的存在下对促进转录无效。与此相反，ARv7同时存在于良性和恶性前列腺组织中，但已被描述为在转移性疾病中富集。在最近的研究中，缺乏铰链区的变体ARv7没有与微管共沉积(co-sediment)或与动力运动蛋白共沉淀(co-precipitate)，并且
ARv7的核积累和转录活性不受紫杉烷类存在的影响(Thadani-Mulero等人，Cancer Res.74
(8)：2270-2282)。在一些实施方案中，盖乐特龙(galeterone)施用给对象，通过分析对象中一个或多个突变的生物标记物而确定所述对象患有对紫杉烷类有抗性的肿瘤。
59％来自具有CRPC并且对ADT或阿比特龙疗法产生响应的患者的前列腺癌的肿瘤样品中出
现ARv567，ARv567看来对动态微管和动力运动蛋白有作用。因此，AR变体ARv567被隔离在细胞质中，因此在紫杉烷疗法的存在下对促进转录无效。与此相反，ARv7同时存在于良性和恶性前列腺组织中，但已被描述为在转移性疾病中富集。在最近的研究中，缺乏铰链区的变体ARv7没有与微管共沉积(co-sediment)或与动力运动蛋白共沉淀(co-precipitate)，并且
ARv7的核积累和转录活性不受紫杉烷类存在的影响(Thadani-Mulero等人，Cancer Res.74
(8)：2270-2282)。在一些实施方案中，盖乐特龙(galeterone)施用给对象，通过分析对象中一个或多个突变的生物标记物而确定所述对象患有对紫杉烷类有抗性的肿瘤。
[0096] CYP17抑制剂阿比特龙，其通过抑制肿瘤内的雄激素降低CRPC生长。通过上调CYP17A1和/或诱导赋予与配体无关的信号传导的雄激素受体和AR剪接变体可以产生对阿
比特龙的抗性。在一些实施方案中，盖乐特龙(galeterone)施用给鉴定为患有对阿比特龙
有抗性的肿瘤的对象。
比特龙的抗性。在一些实施方案中，盖乐特龙(galeterone)施用给鉴定为患有对阿比特龙
有抗性的肿瘤的对象。
[0097] 上皮-间叶细胞转换(EMT)在胚胎形态中作为关键步骤发生，并且现在与由原发肿瘤向转移的进展密切相关。在前列腺癌中的EMT是向CRPC进展的合理的候选。最新进展已经促进了对在肿瘤进展中管理EMT的分子机制和网络更详细的了解。除了TGFβ和RTK/Ras信号传导，自分泌因素和Wnt-、Notch、Hedgehog-和NF-κB依赖性通路被发现有助于EMT。通过转录调节因子(如Snail或Twist)抑制E-钙粘蛋白作为一个驱动EMT的关键步骤出现，而这个
阶段目前正在与许多新成员分子连接起来。越来越多的证据表明，EMT在细胞从原发性肿瘤向循环的迁移中扮演着特定角色，并且可以为开发更有效的癌症治疗或理解转移提供理论
基础。
阶段目前正在与许多新成员分子连接起来。越来越多的证据表明，EMT在细胞从原发性肿瘤向循环的迁移中扮演着特定角色，并且可以为开发更有效的癌症治疗或理解转移提供理论
基础。
[0098] 治疗评估转移性前列腺癌的主要限制之一是不能使用现有临床成像模式来评估骨内的治疗反应，而骨在85％至90％的患者中是主要的并且往往是唯一的转移位点。骨转
移的传统临床评估是通过放射性核素骨显像实现的。虽然在进行治疗的前列腺癌患者体内
使用骨显像(骨扫描)、超声、正电子发射断层扫描(PET)、(18)F-16β氟5α-二氢睾酮((18)F-FDHT)PET，但是计算机断层扫描(CT)、直肠内线圈磁共振成像和磁共振成像(MRI)在识别和表征疾病的程度上起着显著的作用。使用用于评估对抗癌疗法的响应的扩散MRI是基于其
量化水的随机或布朗运动的能力。在细胞膜存在下肿瘤内水的扩散减弱，细胞膜的作用在
于阻止水分子的随机运动。在成功的治疗过程中，发生肿瘤细胞和/或肿瘤细胞膜完整性的损失，并随后导致妨碍水分子流动性的障碍减少。扩散MRI可用于通过定量在经历细胞密度损失的肿瘤区域增加的表观扩散系数(ADC)值，来评估治疗效果。因此，正如通过增加的MRI量化的ADC值表示的那样，有效治疗后水在肿瘤内的流动性将随着随时间增加，并且具有与治疗有效性相关的变化幅度。开发被称为官能扩散地图(fDM)的替代的后处理方法是为了
标准化临床扩散MRI数据的处理，以提供一个灵敏的、可量化的方法，用于早期评估癌症治疗结果。监控抗癌疗法的fDM方法允许通过空间，体素追踪水在肿瘤内的扩散值随时间的变化。通过染色编码由于治疗而改变(无论是增加或减少ADC值)的肿瘤扩散体素，在fDM图像
中描绘扩散值的变化，从而允许单个病灶内ADC的空间分辨分析。
移的传统临床评估是通过放射性核素骨显像实现的。虽然在进行治疗的前列腺癌患者体内
使用骨显像(骨扫描)、超声、正电子发射断层扫描(PET)、(18)F-16β氟5α-二氢睾酮((18)F-FDHT)PET，但是计算机断层扫描(CT)、直肠内线圈磁共振成像和磁共振成像(MRI)在识别和表征疾病的程度上起着显著的作用。使用用于评估对抗癌疗法的响应的扩散MRI是基于其
量化水的随机或布朗运动的能力。在细胞膜存在下肿瘤内水的扩散减弱，细胞膜的作用在
于阻止水分子的随机运动。在成功的治疗过程中，发生肿瘤细胞和/或肿瘤细胞膜完整性的损失，并随后导致妨碍水分子流动性的障碍减少。扩散MRI可用于通过定量在经历细胞密度损失的肿瘤区域增加的表观扩散系数(ADC)值，来评估治疗效果。因此，正如通过增加的MRI量化的ADC值表示的那样，有效治疗后水在肿瘤内的流动性将随着随时间增加，并且具有与治疗有效性相关的变化幅度。开发被称为官能扩散地图(fDM)的替代的后处理方法是为了
标准化临床扩散MRI数据的处理，以提供一个灵敏的、可量化的方法，用于早期评估癌症治疗结果。监控抗癌疗法的fDM方法允许通过空间，体素追踪水在肿瘤内的扩散值随时间的变化。通过染色编码由于治疗而改变(无论是增加或减少ADC值)的肿瘤扩散体素，在fDM图像
中描绘扩散值的变化，从而允许单个病灶内ADC的空间分辨分析。
[0099] 通过采血和肿瘤活检，或者使用成像技术，有可能确定特定的标记物，例如一个或多个生物学相关物种，在对其进行分析时具有预测患者是否会响应盖乐特龙(galeterone)的潜力。这些生物标记物包括细胞和分子标记物，并包括：
[0100] a.来自患者的肿瘤细胞或CTC内的特定基因的基因组测序(例如，TP53，ZFHX3，RP1，PTEN，TMPRSS2融合，APC，wnt信号传导，AR突变和截短，AR扩增，hepsin，PIM-1)
[0101] b.PTEN是肿瘤抑制基因，其参与细胞周期调控，并始终与前列腺癌预后不良相关。PTEN缺失与较高Gleason分级、进展的风险、进展的局部或转移性疾病、以及治疗后复发相关联。一般地通过荧光原位杂交(FISH)测量，该测试一般被安排结合活检测试，以指示基因的部分(半合子)或完整(纯合子)缺失。
[0102] c.雄激素受体内的突变：
[0103] i.导致氨基酸取代的点突变，包括：T877A(T878A)、D879G(D878G)、W741C、W741L、M749L、R629Q、G142V、P533S、T575A、H874Y、F876L
[0104] ii.剪接变体，包括AR-V1、AR-V2、AR-V3、AR-V4、AR-V5、AR-V567es、AR-V6、AR-V7、ARV7、AR-V9、AR-V12、AR-V13、AR-V14。(参见专利US2011/0110926、US8,133,724、US2013/0130241)。
[0105] d.循环肿瘤细胞(CTC)
[0106] e.在基线或在开始治疗后的某段时间的计数(有特性的循环细胞：CK+，CD45-)
[0107] f.CTC子组的计数，所述CTC在基线或在开始治疗后的某个时间尺寸变小或特征表现为另一细胞形状/尺寸
[0108] g.在基线或开始治疗后的某段时间的CK-，CD45-CTC候选计数
[0109] h.在基线或开始治疗后的某段时间在CTC或肿瘤活检中雄激素受体(AR)的表达
[0110] i.在基线或开始治疗后的某段时间在CTC或肿瘤活检(核质比)内AR蛋白的亚细胞定位
[0111] j.在基线或开始治疗后的某段时间通过FISH(例如，PTEN缺失，TMPRSS2融合)评估CTC和肿瘤活组织中的缺失和基因重排
[0112] k.TMPRSS2-ERG是跨膜蛋白酶丝氨酸2基因和v-ets成红细胞增多症病毒E26癌基因同源基因之间的融合(禽(ERG)基因。该基因融合是在约40-80％的前列腺癌中的主要变
体。其基于Epstein条件，在尿中TMPRSS2–ERG的定量水平看来与临床显著的前列腺癌相关联，Epstein条件是一种疾病侵略性的分级，其使用PSA强度和患者活检的特征(Gleason评
分)、所观察到的肿瘤与正常组织的百分比、以及具有肿瘤的核数。已显示尿中TMPRRSS2-
ERG检测联合PCA3检测可用于预测前列腺癌的严重性。
体。其基于Epstein条件，在尿中TMPRSS2–ERG的定量水平看来与临床显著的前列腺癌相关联，Epstein条件是一种疾病侵略性的分级，其使用PSA强度和患者活检的特征(Gleason评
分)、所观察到的肿瘤与正常组织的百分比、以及具有肿瘤的核数。已显示尿中TMPRRSS2-
ERG检测联合PCA3检测可用于预测前列腺癌的严重性。
[0113] l.绝对前列腺特异性抗原(PSA)血液水平和治疗前PSA倍增时间
[0114] m.由成像模态(例如PSMA的放射性标记的配体或结合PSMA的抗体)确定的前列腺特异性膜抗原(PSMA)表达。
[0115] n.5激肽释放酶组(总PSA、游离PSA、完整PSA、激肽释放酶2)
[0116] o.治疗前血液睾酮水平
[0117] p.开始治疗后的某段时间类固醇水平的改变。类固醇包括：雄激素(睾酮、DHT)、雄激素前体(DHEA、DHEA-硫酸盐、雄烯二酮)、皮质类固醇、孕激素、盐皮质激素、和在“后门”通路中的雄激素前体。
[0118] q.通过Gleason评分对前列腺肿瘤的分期(1-5活检分级标准；较低的Gleason分级与小的、紧密排列的腺体有关，随着Gleason分级的增加细胞分散并失去腺体架构)
[0119] r.可以被用来确定高、中、低代谢的代谢标记物，如P450酶
[0120] s.可以改变盖乐特龙(galeterone)功效的CYP17突变
[0121] t.免疫检查点阻断和免疫学方法(CTLA-4阻断)
[0122] u.免疫调节剂、程序性死亡配体1和2(PD-L1和PD-L2)和它们的受体，例如，PD-1。
[0123] v.前列腺健康指数-pro-PSA与游离PSA的比率
[0124] w.PCA3-一种非编码mRNA，其已显示出在>90％的患有前列腺癌的男性中有所升高。在尿中测定PCA3。
[0125] x.前列腺核有丝分裂测试–识别线粒体DNA的大规模消耗，其表明与未确诊的前列腺癌相关的细胞变化，并检测在跨越扩展区域的正常表现的前列腺组织中恶性细胞的存
在。
在。
[0126] y.CCP基因-细胞周期进展基因突变
[0127] z.血清学试验包括：血红蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酯酶。
[0128] aa.抗性的交叉活性-化疗抗性和恩杂鲁胺(enzalutamide)抗性看来在CRPC中很常见，因此显示化疗抗性的生物标记物可能也显示出对恩杂鲁胺(enzalutamide)或更广泛
类的抗雄激素化合物的抗性。
类的抗雄激素化合物的抗性。
[0129] 通过采样血液和肿瘤活检，或者使用成像技术，有可能确定患者是否对盖乐特龙(galeterone)疗法响应。所测量的标记物包括：
[0130] a.CTC数量的减少(特别是在盖乐特龙(galeterone)治疗1周后)
[0131] b.细胞凋亡的CTC的增加
[0132] c.PSA的减少或PSA倍增时间的降低
[0133] d.用成像模式(例如PSMA的放射性标记的配体或结合PSMA的抗体)确定的PSMA表达的增加。因为阻断雄激素信号传导导致PSMA表达增加，所以PSMA信号的增加是抗雄激素
活性的指标。
活性的指标。
[0134] e.肿瘤18F-DHT-PET信号的降低，这表明雄激素受体的拮抗作用
[0136] g.蛋白体降解通路成员-即抑制标记或从细胞中去除雄激素受体
[0137] 在某些实施方案中，本发明所描述的是，化合物、制备这类化合物的方法、包含这类化合物的药物组合物和药物、以及使用这类化合物治疗雄激素受体介导的疾病或病症(包括但不限于，前列腺癌和良性前列腺增生)的方法。在一些实施方案中，所述雄激素受体介导的疾病或病症是前列腺癌。在一些实施方案中，所述前列腺癌是对去势治疗有抗性的
前列腺癌。
前列腺癌。
[0138] 在一些实施方案中，所述疾病是对抗雄激素剂有抗性的疾病。例如，对抗雄激素剂有抗性的疾病可能先前已通过提供抗雄激素疗法(例如，去势、用雄激素受体拮抗剂的治疗、或其组合)治疗过。所述疾病可能最初曾对抗雄激素疗法响应，但后来变得对该治疗不敏感(例如，尽管持续抗雄激素治疗病情仍恶化)。在一些实施方案中，所述疾病可能一直对抗雄激素疗法不敏感。
[0139] 在一些实施方案中，所述疾病是雄激素依赖性疾病并被标记为男性的肾上腺腺瘤、癌、或增生、睾丸间质细胞瘤，以及女性的卵巢男性细胞瘤(arrhenoblastomas)和多囊卵巢综合症过量表达肾上腺或性腺雄激素。雄激素依赖性疾病包括肯尼迪氏病、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、卵巢癌、粉刺、化脓性汗腺炎、雄激素性脱发、毛发角化病、良性前列腺增生、多毛症。
[0140] 在一些实施方案中，本发明提供了化合物、药物组合物和包含这类化合物的药物、以及使用这类降低雄激素生物合成、减少雄激素受体信号传导和降低雄激素受体敏感性的化合物的方法。
[0141] 本发明还设想通过将组合疗法施用给需要治疗的对象以治疗疾病的方法，所述组合疗法包含抗雄激素疗法和式I、II和/或III的化合物。所述抗雄激素疗法可以是，例如，去势，用雄激素受体拮抗剂治疗，例如，恩杂鲁胺(enzalutamide)、ARN-509、乙烯菌核利、腐霉利、利谷隆、DDT的代谢产物二氯二苯二氯乙烯(p.p'-DDE)、酮康唑、杀螟松、二-正丁基邻苯二甲酸酯(DBP)、邻苯二甲酸二异丁酯(DiBP)、苄基丁基邻苯二甲酸酯(BBP)、双(2-乙基己基)邻苯二甲酸酯(DEHP)和二-正戊基邻苯二甲酸酯(DPP)、尼泊金酯(例如对羟基苯甲酸丁
酯)、3,3'-二吲哚甲烷(DIM)、黄芩、N-丁基苯磺酰胺(NBBS)、atraric酸(atraric acid)、比卡鲁胺、氟他胺、螺内酯、醋酸环丙孕酮、非那雄胺、度他雄胺、尼鲁米特、多西紫杉醇、卡巴他赛、紫杉烷、或它们的任何组合。
酯)、3,3'-二吲哚甲烷(DIM)、黄芩、N-丁基苯磺酰胺(NBBS)、atraric酸(atraric acid)、比卡鲁胺、氟他胺、螺内酯、醋酸环丙孕酮、非那雄胺、度他雄胺、尼鲁米特、多西紫杉醇、卡巴他赛、紫杉烷、或它们的任何组合。
[0142] 在一些实施方案中，依次、同时、单独、或组合施用式I或式II的化合物和抗雄激素治疗。在一些实施方案中，将式I的化合物和抗雄激素疗法(例如，雄激素受体拮抗剂)配制成用于施用给对象的同一药物组合物。
[0143] 在一个方面，化合物、药物组合物和包含这类化合物的药物、以及使用这种化合物的方法降低雄激素的生物合成。在一些实施方案中，本发明公开的化合物抑制控制雄激素产生的酶的活性。在某些实施方案中，本发明公开的化合物抑制细胞色素C17α-羟化酶/
C17,20-裂解酶(CYP17)的活性。
C17,20-裂解酶(CYP17)的活性。
[0144] 在一个方面，化合物、药物组合物和包含这类化合物的药物、以及使用这种化合物的方法降低雄激素受体信号传导。在一些实施方案中，本发明公开的化合物与AR结合并且是睾酮结合的竞争性抑制剂。
[0145] 在一个方面，化合物、药物组合物和包含这类化合物的药物、以及使用这种化合物的方法降低雄激素受体的敏感性。在一些实施方案中，本发明公开的化合物降低细胞内AR蛋白的含量并降低细胞以低水平的雄激素生长信号维持的能力。
[0146] 化合物
[0147] 在一个方面，本发明提供包含式I的化合物的组合物
[0148]
[0149] 或其药学上可接受/的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物；其中R1是H或乙酰基；并且R2是吡啶基或苯并咪唑。
[0150] 在一些实施方案中，化合物是式II的化合物(也称为“盖乐特龙(galeterone)”；“TOK-001”；或“VN/124-1”)：
[0151]
[0152] 或其药学上可接受的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物。
[0153] 在其他实施方案中，化合物是式III的化合物：
[0154]
[0155] 或其药学上可接受的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物；
[0156] 式I-III的化合物、其药学上可接受的盐、药学上可接受的N-氧化物、药学上的活性代谢物、药学上可接受的前药、药学上可接受的多晶型物以及药学上可接受的溶剂化物，调节类固醇激素核受体的活性，并因此可用于治疗雄激素受体介导的疾病或病症。
[0157] 化合物的示例性合成
[0158] 式(II)化合物(也记作化合物(1)或3-β-羟基17-(1H-苯并咪唑-1-基)雄(甾)5,16二烯)或TOK-001或盖乐特龙(Galeterone))可以使用本领域人员已知的标准合成技术或使
用本领域已知的方法结合本发明描述的方法来合成。式(III)的化合物可以通过类似的方
法来合成。本领域技术人员应理解，本发明中所示出的溶剂、温度和反应条件可以根据本领域技术人员的实践和知识改变。
用本领域已知的方法结合本发明描述的方法来合成。式(III)的化合物可以通过类似的方
法来合成。本领域技术人员应理解，本发明中所示出的溶剂、温度和反应条件可以根据本领域技术人员的实践和知识改变。
[0159] 用于合成化合物(1)的起始原料可以从商业来源获得(如Aldrich化学公司(Milwaukee，Wis.)、Sigma化学公司(St.Louis，Mo.))、或可以合成起始原料。本发明所述的化合物和具有不同取代基的其它相关化合物可使用本领域中技术人员已知的技术和材料
来合成，例如在三月份的，高等有机化学第4版(Wiley 1992)；Carey和Sundberg，高等有机化学第4版，卷A和B(Plenum 2000，2001年)，以及Green和Wuts，有机合成中的保护基团，第3版(Wiley 1999)中所描述的(所有这些都通过引用整体并入本发明)。本发明所公开的化合
物制备的一般方法可以来源于该领域已知的反应，并且如本领域技术人员所公认的那样，
可使用适当的试剂和条件来修饰反应以引入如本发明所提供的化学式中所示的各种结构
部分。
来合成，例如在三月份的，高等有机化学第4版(Wiley 1992)；Carey和Sundberg，高等有机化学第4版，卷A和B(Plenum 2000，2001年)，以及Green和Wuts，有机合成中的保护基团，第3版(Wiley 1999)中所描述的(所有这些都通过引用整体并入本发明)。本发明所公开的化合
物制备的一般方法可以来源于该领域已知的反应，并且如本领域技术人员所公认的那样，
可使用适当的试剂和条件来修饰反应以引入如本发明所提供的化学式中所示的各种结构
部分。
[0160] 式I-III的化合物可通过将该化合物的游离碱形式与药学上可接受的无机酸或有机酸进行反应来制备成药学上可接受的酸加成盐(其是一类药学上可接受的盐)，所述无机
酸或有机酸包括，但不限于，无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；和有机酸，如乙酸、丙酸、已酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、对甲苯磺酸、酒石酸、三氟酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、芳基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲基二环-[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、4,4'-亚甲基二(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、和粘康酸。
酸或有机酸包括，但不限于，无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、偏磷酸等；和有机酸，如乙酸、丙酸、已酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、对甲苯磺酸、酒石酸、三氟酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、芳基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲基二环-[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、4,4'-亚甲基二(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、和粘康酸。
[0161] 式I-III化合物可制备成前药。前药一般是药物前体，其在施用于对象并接下来被吸收后，通过一些过程(如通过代谢通路转化)被转化为有活性的、或活性更高的种类。有些前药具有存在于前药上使得其活性变低和/或赋予药物溶解性或其他性质的化学基团。一
旦化学基团从前药上被裂解和/或修饰则产生活性药物。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可以比母体药物更容易施用。例如，前药可以通过口服给药实现生物相容，而母体则不可以。该前药还可能在药物组合物中具有超过母体药物的改善的溶解度。例如，但不限于，前药是式(I-III)的衍生物，其以亲水酯(“前药”)的形式施用以促进在胃肠道中的吸收(在其中改善的水溶解度是有利的)，但其随后代谢水解为羧酸和式(I-III)的活性实体。
前药的另一个实例是键合到化合物(1)的羟基基团的短肽，其中所述肽被代谢以提供式I、
II、或III的化合物。
旦化学基团从前药上被裂解和/或修饰则产生活性药物。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可以比母体药物更容易施用。例如，前药可以通过口服给药实现生物相容，而母体则不可以。该前药还可能在药物组合物中具有超过母体药物的改善的溶解度。例如，但不限于，前药是式(I-III)的衍生物，其以亲水酯(“前药”)的形式施用以促进在胃肠道中的吸收(在其中改善的水溶解度是有利的)，但其随后代谢水解为羧酸和式(I-III)的活性实体。
前药的另一个实例是键合到化合物(1)的羟基基团的短肽，其中所述肽被代谢以提供式I、
II、或III的化合物。
[0162] 前体药物可以被设计为可逆的药物衍生物以用作增强药物输送至位点特异性组织的改性剂。迄今为止的前药设计已经增加了治疗性化合物的有效水溶性以用于靶向至水
是主要溶剂的区域。参见，例如，Fedorak等，Am.J Physiol.,269:G210-218(1995)；McLoed等，Gastroenterol，106：405-413(1994)；Hochhaus等，Biomed.Chrom.,6:283-286(1992)；
J.Larsen and H.Bundgaard,Int.J.Pharmaceutics,37,87(1987)；J.Larsen等，Int.J
Pharmaceutics,47,103(1988)；Sinkula等,J.Pharm.Sci.,64:181-210(1975)；T.Higuchi
和V.Stella,作为新传输系统的前药,A.C.S.研讨会系列卷14；以及Edward B.Roche,药物
设计中的生物可逆载体,美国医药协会和帕加马(Pergamon)出版社，所有在此整体并入本
发明。
是主要溶剂的区域。参见，例如，Fedorak等，Am.J Physiol.,269:G210-218(1995)；McLoed等，Gastroenterol，106：405-413(1994)；Hochhaus等，Biomed.Chrom.,6:283-286(1992)；
J.Larsen and H.Bundgaard,Int.J.Pharmaceutics,37,87(1987)；J.Larsen等，Int.J
Pharmaceutics,47,103(1988)；Sinkula等,J.Pharm.Sci.,64:181-210(1975)；T.Higuchi
和V.Stella,作为新传输系统的前药,A.C.S.研讨会系列卷14；以及Edward B.Roche,药物
设计中的生物可逆载体,美国医药协会和帕加马(Pergamon)出版社，所有在此整体并入本
发明。
[0163] 此外，式I-III化合物的前药衍生物可通过本领域普通技术人员公知的方法制备(例如，进一步的细节参见Saulnier等，(1994)，生物有机和药物化学快报第4卷，第1985
页)。本发明所述的化合物的前药形式都包括在权利要求的范围之内，其中所述前药在体内被代谢以产生如本发明所阐述的衍生物。事实上，某些本发明所述的化合物可以是另一衍
生物或活性化合物的前药。
页)。本发明所述的化合物的前药形式都包括在权利要求的范围之内，其中所述前药在体内被代谢以产生如本发明所阐述的衍生物。事实上，某些本发明所述的化合物可以是另一衍
生物或活性化合物的前药。
[0164] 在式I-III化合物的芳环部分上的位点易于进行各种代谢反应，因此在芳环结构上加入适当的取代基(例如，卤素)，可减少、最小化或消除此代谢通路。
[0165] 可考虑制备式I-III化合物的各种方法，并且提供下面的说明作为非限制性例子。在一些实施方案中，在惰性气氛(例如氮气或氩气)中进行以下一种或多种化学反应。在一
些实施方案中，监测反应的温度。在一些实施方案中，用HPLC或TLC监测反应。在一些实施方案中，监控反应的pH。在一些实施方案中，控制反应温度。在一些实施方案中，通过HPLC确定产品的纯度。在一些实施方案中，以小规模、中等规模、大规模、分析规模、或制造规模进行试验。在一些实施方案中，该产品是通过使用包含一种或多种硅胶和硅藻土的滤片来过滤
加以净化。
些实施方案中，监测反应的温度。在一些实施方案中，用HPLC或TLC监测反应。在一些实施方案中，监控反应的pH。在一些实施方案中，控制反应温度。在一些实施方案中，通过HPLC确定产品的纯度。在一些实施方案中，以小规模、中等规模、大规模、分析规模、或制造规模进行试验。在一些实施方案中，该产品是通过使用包含一种或多种硅胶和硅藻土的滤片来过滤
加以净化。
[0166] 在一些实施方案中，大规模进行合成。在一些实施方案中，大规模包括约1至约10公斤的规模。在一些实施方案中，合成是以生产规模进行。在一些实施方案中，生产规模包括大于约10公斤的规模。在一些实施方案中，生产规模包括约10至约1,000公斤的规模。在一些实施方案中，生产规模包括约10至约100公斤的规模。在一些实施方案中，生产规模包括约10至约50公斤的规模。在一些实施方案中，生产规模包括约33.4千克的规模。
[0167] 在一些实施方案中，以较小规模进行实验以收集信息用于以计划生产规模或进行生产规模的合成。在一些实施方案中，所述较小规模得到的结果预计在生产规模中是可复
制的。在一些实施方案中，所述较小规模得到的结果预计在生产规模中是不可复制的。在一些实施方案中，生产规模获得的产率大于较小规模获得的产率。在一些实施方案中，生产规模获得的产率低于较小规模获得的产率。
制的。在一些实施方案中，所述较小规模得到的结果预计在生产规模中是不可复制的。在一些实施方案中，生产规模获得的产率大于较小规模获得的产率。在一些实施方案中，生产规模获得的产率低于较小规模获得的产率。
[0168]
[0169] 在一个实施方案中，制备式i化合物在溶剂中的溶液。然后将式ii的化合物与该溶液接触，并将所得的混合物在碱存在下加热足够的一段时间以提供式iii的化合物。在一些实施方案中，所述一段时间为约1小时、约2小时、约4小时、约8小时、约12小时、或约24小时。
在一些实施方案中，所述时间为约1小时至约24小时。在一些实施方案中，所述碱包括碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、磷酸钠、或磷酸钾。在一些实施方案中，所述溶剂包括DMF。在一些实施方案中，所述温度为约50℃、约70℃、约100℃、约150℃、或有效维持回流条件的温度。在一些实施方案中，所述温度为约50℃至约200℃。式iii的化合物可以从反应混合物中分离出来，并通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，将水性混合物倒入反应混合物中，从而使得化合物iii沉淀为固体。分离的式iii的化合物
可以任选地通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，用水研磨。
在一些实施方案中，所述时间为约1小时至约24小时。在一些实施方案中，所述碱包括碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、磷酸钠、或磷酸钾。在一些实施方案中，所述溶剂包括DMF。在一些实施方案中，所述温度为约50℃、约70℃、约100℃、约150℃、或有效维持回流条件的温度。在一些实施方案中，所述温度为约50℃至约200℃。式iii的化合物可以从反应混合物中分离出来，并通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，将水性混合物倒入反应混合物中，从而使得化合物iii沉淀为固体。分离的式iii的化合物
可以任选地通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，用水研磨。
[0170]
[0171] 在一个实施方案中，制备式iii化合物在溶剂中的溶液，并将该溶液与催化剂接触足够的一段时间以提供式iv的化合物。在一些实施方案中，所述一段时间段约1小时、约2小时、约4小时、约8小时、约12小时、或约24小时。在一些实施方案中，所述时间为约1小时至约
24小时。在一些实施方案中，所述催化剂包含在碳上的钯、在碳上的铂、过渡金属盐或过渡金属配合物。在一些实施方案中，所述溶剂包括N-甲基吡咯烷酮。在一些实施方案中，所述温度为约50℃、约70℃、约100℃、约150℃、约190℃、约200℃、或有效维持回流条件的温度。
在一些实施方案中，所述温度为约50℃至约250℃。式iv的化合物可以从反应混合物中分离出来，并通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，直流过滤。分离的式iv的化合物可以任选地通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。
24小时。在一些实施方案中，所述催化剂包含在碳上的钯、在碳上的铂、过渡金属盐或过渡金属配合物。在一些实施方案中，所述溶剂包括N-甲基吡咯烷酮。在一些实施方案中，所述温度为约50℃、约70℃、约100℃、约150℃、约190℃、约200℃、或有效维持回流条件的温度。
在一些实施方案中，所述温度为约50℃至约250℃。式iv的化合物可以从反应混合物中分离出来，并通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，直流过滤。分离的式iv的化合物可以任选地通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。
[0172]
[0173] 在一个实施方案中，制备式iv化合物在溶剂中的溶液，并将该溶液与碱接触足够的一段时间以提供式v的化合物(即化合物(1))。在一些实施方案中，所述一段时间为约1小时、约2小时、约4小时、约8小时、约12小时、或约24小时。在一些实施方案中，所述时间为约1小时至约24小时。在一些实施方案中，所述碱包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、磷酸钠、或磷酸钾。在一些实施方案中，所述溶剂包括水、甲醇、乙醇、2-丙醇、叔丁醇、或它们的混合物。在一些实施方案中，所述溶剂包括甲醇并且所述碱包括甲醇钠。在一些实施方案中，所述温度为约35℃、约
50℃、约70℃、约100℃、或有效维持回流条件的温度。在一些实施方案中，所述温度是从约
25℃至约100℃。式v的化合物可以从反应混合物中分离出来，并通过本领域技术人员已知
的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，萃取。分离的式v的化合物可以任选地通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，研磨。
50℃、约70℃、约100℃、或有效维持回流条件的温度。在一些实施方案中，所述温度是从约
25℃至约100℃。式v的化合物可以从反应混合物中分离出来，并通过本领域技术人员已知
的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，萃取。分离的式v的化合物可以任选地通过本领域技术人员已知的任何方法进行纯化。这样的方法包括，但不限于，研磨。
[0174] 示例性药物组合物/制剂
[0175] 如本发明所用的药物组合物是指式I化合物与其它化学组分(例如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂)的混合物。所述药物组合物有利于将所述化合物施用给生物体。含有式I化合物的药物组合物可以作为药物组合物以治疗有效量通过
任何本领域中已知的常规形式和途径施用，包括但不限于：静脉内、口服、直肠、气雾剂、肠胃外、眼、肺、经皮、阴道、耳部、经鼻、和局部给药。
任何本领域中已知的常规形式和途径施用，包括但不限于：静脉内、口服、直肠、气雾剂、肠胃外、眼、肺、经皮、阴道、耳部、经鼻、和局部给药。
[0176] 可以以局部而非全身方式施用所述化合物，例如，通过注射化合物直接进入器官的方式，通常以持久或缓释释放的制剂形式。此外，可以以靶向药物递送系统施用含有式I的化合物的药物组合物，例如，在涂有器官特异性抗体的脂质体中。所述脂质体将被靶向至器官并被选择性地吸收。另外，可以以快速释放制剂的形式、以缓释制剂的形式、或者以中间释放制剂的形式提供含有式I化合物的药物组合物。在一些实施方案中，缓释制剂释放所述化合物超过1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时以上、24小时以上、或更久。在一些实施方案中，缓释制剂以稳定的速率释放所述化合物超过1小时、2小时、3小时、4小时、6小时、12小时以上、24小时以上、或更久。
[0177] 对于口服给药，式I化合物可以通过将活性化合物与本领域中公知的药学上可接受的载体或赋形剂组合来容易地配制。这样的载体使得本发明所述的化合物能够被配制成
片剂、粉末、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、酏剂、浆液、悬浮液等，用于治疗对象的口服摄入。通常，赋形剂(如填充剂、崩解剂、助流剂、表面活性剂、再结晶抑制剂、润滑剂、色素、粘合剂、调味剂等等)可按惯例使用并以不影响组合物性质的通常用量使用。
片剂、粉末、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、酏剂、浆液、悬浮液等，用于治疗对象的口服摄入。通常，赋形剂(如填充剂、崩解剂、助流剂、表面活性剂、再结晶抑制剂、润滑剂、色素、粘合剂、调味剂等等)可按惯例使用并以不影响组合物性质的通常用量使用。
[0180] 助流剂的非限制性实例包括硬脂酸镁、胶体二氧化硅、淀粉和滑石粉。
[0181] 表面活性剂的非限制性实例包括月桂基硫酸钠、脱水山梨醇酯、泊洛沙姆、PEG嵌段共聚物、以及聚山梨醇酯。
[0182] 重结晶抑制剂的非限制性实例包括泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、聚维酮K-90或羟丙甲纤维素。
[0183] 润滑剂的非限制性的例子包括硬脂酸镁和硬脂酸钙。
[0184] 可以通过如下方法制备用于口服用途的药物产品，将一种或多种固体赋形剂与本发明所述的一种或多种化合物混合，如果需要，加入合适的助剂后，任选地研磨所得混合
物，并加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸芯。合适的包衣与糖衣丸芯一起提供。为了这个目的，可以使用浓缩的糖溶液，其可选地含有阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇、和/或二氧化钛、漆溶液，和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或色素可加入片剂或糖衣丸包衣中用于辨识或表征不同活性化合物剂量的组合。
物，并加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸芯。合适的包衣与糖衣丸芯一起提供。为了这个目的，可以使用浓缩的糖溶液，其可选地含有阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇、和/或二氧化钛、漆溶液，和合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或色素可加入片剂或糖衣丸包衣中用于辨识或表征不同活性化合物剂量的组合。
[0185] 可以口服使用的药物产品包括由明胶制成的推入配合胶囊，以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨糖醇)制成的软密封胶囊。在一些实施方案中，所述胶囊包括包含一种或多
种制药的、牛和植物明胶的硬明胶胶囊。在某些情况下，明胶经碱性处理。推入配合胶囊可以包含与填充剂例(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石粉或硬脂酸镁)和任选
的稳定剂形成混合物的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体
中，例如脂肪油、液体石蜡、或液体聚乙二醇。另外，可以加入稳定剂。所有用于口服给药的制剂剂量应该适合这种给药方式的剂量。
种制药的、牛和植物明胶的硬明胶胶囊。在某些情况下，明胶经碱性处理。推入配合胶囊可以包含与填充剂例(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石粉或硬脂酸镁)和任选
的稳定剂形成混合物的活性成分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体
中，例如脂肪油、液体石蜡、或液体聚乙二醇。另外，可以加入稳定剂。所有用于口服给药的制剂剂量应该适合这种给药方式的剂量。
[0186] 对于口腔或舌下给药，组合物可以采取以常规方式配制的片剂、锭剂或凝胶的形式。肠胃外注射可能涉及快速浓注或连续输注。化合物(1)的药物组合物可以是适合于肠胃外注射的无菌悬浮液、溶液或在油性或水性载体中的乳液的形式，并且可含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。用于肠胃外给药的药物制剂包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的悬浮液可制备成适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油(如芝麻油)、或合成脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)、或脂质体。含水注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，悬浮液还可以含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂以允许高度浓缩溶液的制备。或
者，活性成分在使用之前可以是粉末形式，用于与合适的载体(例如，无热源菌的水)配合。
者，活性成分在使用之前可以是粉末形式，用于与合适的载体(例如，无热源菌的水)配合。
[0187] 本发明描述的组合物可以局部给药，并且可以配制成各种局部给药的组合物，如溶液、悬浮液、洗剂、凝胶、糊剂、药棒、香脂、乳膏或软膏组合物。这样的药物组合物可以含有增溶剂、稳定剂、张力增强剂、缓冲剂和防腐剂。
[0188] 适合用于具有通式(1)结构的化合物透皮给药的制剂可以采用透皮递送装置和透皮递送贴剂，并且可以是亲脂性乳剂或缓冲的水溶液，溶解和/或分散在聚合物或粘合剂
中。可以构建这样的贴剂用于连续、脉冲的或根据需要递送药物试剂。更进一步地，式I化合物的经皮递送可以通过离子电渗贴剂等方式来实现。另外，透皮贴剂可以提供式I化合物的控制递送。吸收速率可以通过使用速率控制膜或通过将化合物捕集在聚合物基质或凝胶内
来减慢。相反，吸收促进剂可用于增加吸收。吸收增强剂或载体可以包括可吸收的药学上可接受的溶剂以协助通过皮肤。例如，透皮装置采取绷带的形式，其包含支持部件、含有化合物并任选带有载体的贮器、任选的速率控制屏障以控制的和预定的速率在比较长的一段时
间递送化合物至宿主皮肤、以及将该装置固定在皮肤上的装置。
中。可以构建这样的贴剂用于连续、脉冲的或根据需要递送药物试剂。更进一步地，式I化合物的经皮递送可以通过离子电渗贴剂等方式来实现。另外，透皮贴剂可以提供式I化合物的控制递送。吸收速率可以通过使用速率控制膜或通过将化合物捕集在聚合物基质或凝胶内
来减慢。相反，吸收促进剂可用于增加吸收。吸收增强剂或载体可以包括可吸收的药学上可接受的溶剂以协助通过皮肤。例如，透皮装置采取绷带的形式，其包含支持部件、含有化合物并任选带有载体的贮器、任选的速率控制屏障以控制的和预定的速率在比较长的一段时
间递送化合物至宿主皮肤、以及将该装置固定在皮肤上的装置。
[0189] 对于吸入给药，本发明的组合物可以采用气溶胶、雾或粉末的形式。使用合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体，式(I)的药物组合物得以方便地从加压包装或喷雾器中以气溶胶喷雾的形式递送。在加压气溶胶的情况下，可提供用以递送计量量的阀来确定剂量单位。例如，仅作为示例，在吸入器或吹入器中的明胶胶囊和药筒可配制成包含化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末
混合物。
混合物。
[0190] 式I化合物也可配制于直肠组合物中，如灌肠剂、直肠凝胶、直肠泡沫、直肠气溶胶、栓剂、胶冻栓剂或驻留灌肠剂，含有常规栓剂基质如可可脂或其它甘油酯、以及合成聚合物如聚乙烯吡咯烷酮、PEG等。在栓剂形式的组合物中，首先熔化低熔点蜡(例如但不限于脂肪酸甘油酯的混合物)以及任选地其与可可脂的组合。
[0191] 在实施本发明提供的治疗或使用方法时，本发明提供的治疗有效量的式I化合物以药物组合物的形式施用至患有疾病或病症的待治疗的哺乳动物。在一些实施方案中，所
述哺乳动物是人。根据病情的严重性、对象的年龄和相对健康状况、所用的化合物的效力以及其他因素，治疗有效量可以有比较大的差异。该化合物可单独使用或作为混合物的组分
与一种或多种治疗剂组合使用。
述哺乳动物是人。根据病情的严重性、对象的年龄和相对健康状况、所用的化合物的效力以及其他因素，治疗有效量可以有比较大的差异。该化合物可单独使用或作为混合物的组分
与一种或多种治疗剂组合使用。
[0192] 可以以常规方式使用一种或多种生理学上可接受的载体配制药物组合物，所述载体包括赋形剂和助剂，其有助于将活性化合物加工成药学上可以使用的制剂。适合的制剂
取决于所选择的给药途径。制药本领域认为合适的并能够理解，任何众所周知的技术、载体和赋形剂均可使用。包括式(I)的化合物的药物组合物可以以常规方式生产，例如，仅作为示例，通过常规的混合、溶解、制粒、制糖衣、研磨、乳化、封装胶囊、包埋或压缩的过程。
取决于所选择的给药途径。制药本领域认为合适的并能够理解，任何众所周知的技术、载体和赋形剂均可使用。包括式(I)的化合物的药物组合物可以以常规方式生产，例如，仅作为示例，通过常规的混合、溶解、制粒、制糖衣、研磨、乳化、封装胶囊、包埋或压缩的过程。
[0193] 药物组合物可以包括至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂和作为活性成分的游离碱形式或药学上可接受盐形式的本发明所述式(I)的化合物。此外，本发明描述的方法和药物组合物包括使用N-氧化物、结晶形式(也称为多晶型)、以及这些化合物的具
有相同类型活性的活性代谢物。
有相同类型活性的活性代谢物。
[0194] 制备包括本发明所述化合物的组合物的方法包括将化合物与一种或多种惰性的、药学上可接受的赋形剂或载体一起配制，以形成固体、半固体或液体。固体组合物包括但不限于粉末、片剂、可分散颗粒、胶囊、扁囊剂和栓剂。液体组合物包括溶解有化合物的溶液、包含化合物的乳剂、或含有脂质体、胶束、或包含如本发明所公开化合物的纳米颗粒的溶
液。半固体组合物包括但不限于，凝胶、悬浮液和乳膏。该组合物可以以液体溶液或悬浮液、适合于溶液或使用前悬浮于液体中的固体形式、或以乳液形式。这些组合物还可以含有少
量无毒的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH值缓冲剂等等。
液。半固体组合物包括但不限于，凝胶、悬浮液和乳膏。该组合物可以以液体溶液或悬浮液、适合于溶液或使用前悬浮于液体中的固体形式、或以乳液形式。这些组合物还可以含有少
量无毒的辅助物质，如润湿剂或乳化剂、pH值缓冲剂等等。
[0195] 在一些实施方案中，所述药物组合物是固体分散递送系统。
[0196] 在一些实施方案中，所述固体分散递送系统包括羟丙基甲基纤维素(HPMC)。
[0197] 在一些实施方案中，所述固体分散递送系统包括羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)。
[0198] 在一些实施方案中，所述固体分散递送系统包括羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)。
[0199] 在一些实施方案中，所述固体分散递送系统包括泊洛沙姆188。
[0200] 在一些实施方案中，所述固体分散递送系统包括泊洛沙姆407。
[0201] 在一些实施方案中，所述固体分散递送系统包括聚维酮K-90。
[0202] 在一些实施方案中，所述药物组合物是物理混合物。
[0203] 药物组合物类型的概述可见于，例如，雷明顿：药学科学与实践，第19版(Easton,Pa.:Mack出版公司，1995年)；Hoover,John E.，雷明顿的药物科学，Mack出版公司，Easton,Pennsylvania 1975年；Liberman,H.A.和Lachman，L编辑，药物剂型，Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；和药物剂型和药物递送系统，第7版。(Lippincott Williams&Wilkins 1999)，其中每个的全部内容通过引用并入本发明。
[0204] 喷雾干燥的组合物和方法
[0205] 在一些实施方案中，本发明提供了包含式I化合物的固体分散组合物：
[0206]
[0207] 或其药学上可接受的盐、N-氧化物、活性代谢物、前药、或溶剂化物；其中R1是H或乙酰基；R2是吡啶基或苯并咪唑；和固体基质。在一些实施方案中，式I化合物分散在所述固体基质中。
[0208] 在一些实施方式中，固体基质由聚合物组成。在一些实施方案中，聚合物为水溶性聚合物。在固体分散体中使用的水溶性聚合物的非限制性实例包括羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙烯吡咯烷酮(环氧乙烷和环氧丙烷的PVP嵌段共聚物((K-25、50、30、90；PVP)、羟丙基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、和聚乙二醇(PEG)。在其他实施方案中，聚合物可溶于水溶液。在具体实施方案中，聚合物可溶于pH为5.5或更高的水溶液。可溶于pH为5.5或更高的水溶液的聚合物的非限制性实例包括羧甲基纤维素钠(NaCMC，乙醇酸钠纤维素)和羟
丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸(HPMCAS)。其它适合用于固体分散体的聚合物的非限制性的例
子包括，例如，3，4-二甲基苯基甲基氨基甲酸酯(MPMC)、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯
(HPMCP)、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、聚维酮K-90、聚(甲基)丙烯酸酯(丙烯酸树脂)、N-乙烯基-2-吡咯烷酮的均聚物、聚维酮、共聚维酮(聚乙烯吡咯酮)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、醋酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、甲基丙烯酸共聚物LD(L30D55)、甲基丙烯酸共聚物S(S-
100)、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物E(胃包衣基质)、聚(乙烯醇缩醛)二乙基氨基乙酸酯
(AEA)、乙基纤维素(EC)、甲基丙烯酸共聚物RS(RS 30D)、聚乙烯醇(PVA)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC 2208(Metolose 90SH)、HPMC 2906(Metolose 65SH)、HPMC(Metolose
60SH)、糊精、普鲁兰多糖、金合欢、黄芪胶、藻酸钠、藻酸丙二醇酯、琼脂粉末、明胶、淀粉、加工淀粉、磷脂、卵磷脂、葡甘露聚糖、聚乙二醇(PEG)醋酸纤维素偏苯三酸(CAT)、羟丙基甲基纤维素乙酸偏苯三酸酯(HPMCAT)、和羧甲基纤维素乙酸丁酸盐(CMCAB)。
丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸(HPMCAS)。其它适合用于固体分散体的聚合物的非限制性的例
子包括，例如，3，4-二甲基苯基甲基氨基甲酸酯(MPMC)、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯
(HPMCP)、泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、聚维酮K-90、聚(甲基)丙烯酸酯(丙烯酸树脂)、N-乙烯基-2-吡咯烷酮的均聚物、聚维酮、共聚维酮(聚乙烯吡咯酮)、羧甲基乙基纤维素(CMEC)、醋酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、甲基丙烯酸共聚物LD(L30D55)、甲基丙烯酸共聚物S(S-
100)、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物E(胃包衣基质)、聚(乙烯醇缩醛)二乙基氨基乙酸酯
(AEA)、乙基纤维素(EC)、甲基丙烯酸共聚物RS(RS 30D)、聚乙烯醇(PVA)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC 2208(Metolose 90SH)、HPMC 2906(Metolose 65SH)、HPMC(Metolose
60SH)、糊精、普鲁兰多糖、金合欢、黄芪胶、藻酸钠、藻酸丙二醇酯、琼脂粉末、明胶、淀粉、加工淀粉、磷脂、卵磷脂、葡甘露聚糖、聚乙二醇(PEG)醋酸纤维素偏苯三酸(CAT)、羟丙基甲基纤维素乙酸偏苯三酸酯(HPMCAT)、和羧甲基纤维素乙酸丁酸盐(CMCAB)。
[0209] 在一些实施方案中，在基质中的化合物的固体分散体可以通过形成均匀的溶液或药物和聚合物的熔体，随后固化该混合物来制备，得到分散在固体基质中的化合物的固体
组合物。在一些实施方案中，固体分散体的制备包括形成包含化合物、聚合物和溶剂的均匀溶液，接着通过除去溶剂固化该混合物。在一些实施方案中，溶剂是有机溶剂或多于一种有机溶剂的混合物。有机溶剂的非限制性实例包括二甲基甲酰胺(DMF)、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、正丙醇、异丙醇、丁醇、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、醋酸丙酯、乙腈、二氯甲烷、甲苯、1,1,1-三氯乙烷、二甲基乙酰胺和二甲基亚砜。在具体的实施方案中，溶剂是甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、四氢呋喃、2:1的丙酮：甲醇、2:1的甲醇：四氢呋喃、2:1的甲醇：丙酮、6:1的DMF：水、14:7:2:1的丙酮：甲醇：DMF：水、4:1:1的甲醇：水：丙酮、8:1的乙醇：水。
组合物。在一些实施方案中，固体分散体的制备包括形成包含化合物、聚合物和溶剂的均匀溶液，接着通过除去溶剂固化该混合物。在一些实施方案中，溶剂是有机溶剂或多于一种有机溶剂的混合物。有机溶剂的非限制性实例包括二甲基甲酰胺(DMF)、丙酮、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、正丙醇、异丙醇、丁醇、甲基乙基酮、甲基异丁基酮、醋酸丙酯、乙腈、二氯甲烷、甲苯、1,1,1-三氯乙烷、二甲基乙酰胺和二甲基亚砜。在具体的实施方案中，溶剂是甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、四氢呋喃、2:1的丙酮：甲醇、2:1的甲醇：四氢呋喃、2:1的甲醇：丙酮、6:1的DMF：水、14:7:2:1的丙酮：甲醇：DMF：水、4:1:1的甲醇：水：丙酮、8:1的乙醇：水。
[0211] 在具体实施方案中，通过喷雾干燥除去溶剂。术语“喷雾干燥”一般泛指将溶液雾化成小液滴喷雾并使用能够促进溶剂从液滴迅速蒸发的喷雾干燥装置快速将溶剂从液滴中除去。佩里的化学工程师手册，20-54页到20-57页(第六版，1984年)对喷雾干燥方法和喷雾干燥设备进行了大致描述。溶剂蒸发可以通过，例如，将喷雾干燥装置中的压力保持在部分真空(例如，0.01～0.50大气压)，用温暖的干燥气体接触液滴，或这些措施的组合来实
现。在一些实施方案中，喷雾干燥包括用干燥气体接触液滴喷雾。
现。在一些实施方案中，喷雾干燥包括用干燥气体接触液滴喷雾。
[0212] 在一些实施方案中，通过喷雾干燥除去溶剂形成以颗粒形式的固体分散体的组合物。所述颗粒可具有约100微米或更小、约95微米或更小、约90微米或更小、约85微米或更小、约80微米或更小、约75微米或更小、约70微米或更小、约65微米或更小、约60微米或更小、约55微米或更小、约50微米或更小、约45微米或更小、约40微米或更小、约35微米或更小、约30微米或更小、约25微米或更小、或约20微米或更小的平均直径。在一些实施方案中，颗粒具有约50-100微米、约30-75微米、约25-50微米、约20-30微米、约10-25微米、或约15-
20微米的平均直径。粒径可以使用为本领域技术人员已知的粒径测量技术来测量。粒径测
量技术的非限制性实例包括沉降场流分级、光子相关光谱、激光衍射或圆盘离心。通过雾化器所产生的液滴的另一个有用的特征直径为D90，该液滴直径对应于构成90％的总液体体
积的液滴直径。在一些实施方案中，组合物颗粒的直径跨越大约10-20微米的D90、15-20微米的D90、或17-19微米的D90。
20微米的平均直径。粒径可以使用为本领域技术人员已知的粒径测量技术来测量。粒径测
量技术的非限制性实例包括沉降场流分级、光子相关光谱、激光衍射或圆盘离心。通过雾化器所产生的液滴的另一个有用的特征直径为D90，该液滴直径对应于构成90％的总液体体
积的液滴直径。在一些实施方案中，组合物颗粒的直径跨越大约10-20微米的D90、15-20微米的D90、或17-19微米的D90。
[0213] 在一些实施方案中，喷雾干燥得到组合物，在所述组合物中式I的化合物是无定形的。无定形性的方法和表征如本发明所述。
[0214] 给药和治疗方法的示例性方法
[0215] 包含式I-III的化合物的组合物可以用于制备治疗疾病或病症的药物，在所述疾病或病症中类固醇激素核受体活性有助于所述疾病的病理学和/或症状。此外，用于治疗本发明所述的需要此治疗的对象的任何疾病或病症的方法，包括将治疗有效量的含有至少一
种式(1)化合物、或其药学上可接受的盐、药学上可接受的N-氧化物、药学活性代谢物、药学上可接受的前药或药学上可接受的溶剂化物的药物组合物施用给所述对象。
种式(1)化合物、或其药学上可接受的盐、药学上可接受的N-氧化物、药学活性代谢物、药学上可接受的前药或药学上可接受的溶剂化物的药物组合物施用给所述对象。
[0216] 含有本发明描述的化合物的组合物可以被施用于预防性的和/或治疗性的治疗。在治疗应用中，将组合物施用给已经患有疾病或病症的对象，其量足以治愈或至少部分阻
止疾病或病症的症状、或治愈、愈合、改善或减轻病情本身。用于这种用途的有效量将取决于疾病或病症的严重性和进程、先前的治疗、对象的健康状况，体重和对药物的反应、以及治疗医师的判断。
止疾病或病症的症状、或治愈、愈合、改善或减轻病情本身。用于这种用途的有效量将取决于疾病或病症的严重性和进程、先前的治疗、对象的健康状况，体重和对药物的反应、以及治疗医师的判断。
[0217] 一旦对象的症状有所改善，如果需要，可施用维持剂量。随后，可以依据症状，将施用的剂量或频率或两者减少到使得改善的疾病或症状得以维持的水平。但是，依据任何症状复发的情况，对象可以接受长期间歇性治疗。
[0218] 在某些情况下，治疗有效量的至少一种本发明所述的化合物(或其药学上可接受的盐、药学上可接受的N-氧化物、药学活性代谢物、药学上可接受的前药、和药学上可接受的溶剂化物)可以与另一种治疗试剂联合施用。仅作为示例，当对象由于接受本发明所述的化合物之一而产生的副作用之一为炎症时，那么应当与初始治疗剂一起联合施用抗炎症药
剂。或者，仅作为示例，本发明所述的化合物之一的治疗有效性可以通过施用佐剂来增强
(即，佐剂自身可能仅具有很小的治疗益处，但与另一治疗剂组合时，对对象的整体治疗益处增强)。或者，仅作为示例，可以通过将本发明所述的化合物之一与另一种具有治疗益处的治疗剂(也包括治疗方案)一起施用来增加对象产生的益处。在任何情况下，无论被治疗
的疾病或病症如何，所述对象获得的整体益处可以简单地是两种治疗剂的加和，或者对象
可能获得协同益处。当本发明所述的化合物与其它治疗联合施用时，共同施用的化合物的
剂量将取决于使用的联合药物的类型、取决于所使用的特定药物、取决于被治疗的疾病或
病症等而显然有所不同。此外，当与一种或多种生物活性剂共同施用时，本发明提供的化合物可以同时或依次与生物活性剂施用。如果依次施用，主治医师将决定蛋白质和生物活性
剂联合施用的合适的顺序。
剂。或者，仅作为示例，本发明所述的化合物之一的治疗有效性可以通过施用佐剂来增强
(即，佐剂自身可能仅具有很小的治疗益处，但与另一治疗剂组合时，对对象的整体治疗益处增强)。或者，仅作为示例，可以通过将本发明所述的化合物之一与另一种具有治疗益处的治疗剂(也包括治疗方案)一起施用来增加对象产生的益处。在任何情况下，无论被治疗
的疾病或病症如何，所述对象获得的整体益处可以简单地是两种治疗剂的加和，或者对象
可能获得协同益处。当本发明所述的化合物与其它治疗联合施用时，共同施用的化合物的
剂量将取决于使用的联合药物的类型、取决于所使用的特定药物、取决于被治疗的疾病或
病症等而显然有所不同。此外，当与一种或多种生物活性剂共同施用时，本发明提供的化合物可以同时或依次与生物活性剂施用。如果依次施用，主治医师将决定蛋白质和生物活性
剂联合施用的合适的顺序。
[0219] 在任何情况下，多种治疗剂(其中之一是本发明所述的化合物之一)可以以任何顺序或甚至同时施用。如果同时施用，多种治疗剂可以以单一、一致的形式、或以多种形式提供(仅作为示例，既可以作为单一丸剂或作为两种独立的丸剂)。治疗剂中的一种可以以多
剂量给药、或者两者都可以以多剂量给药。在不是同时的情况下，多剂量之间的时间可从多于零周到小于四周不等。此外，组合方法、组合物和制剂不限于仅两种试剂的使用。可设计多种治疗组合。
剂量给药、或者两者都可以以多剂量给药。在不是同时的情况下，多剂量之间的时间可从多于零周到小于四周不等。此外，组合方法、组合物和制剂不限于仅两种试剂的使用。可设计多种治疗组合。
[0220] 此外，式I-III的化合物还可以与可以提供给对象额外的或协同的益处的流程结合使用。仅作为示例，对象可预期在本发明描述的方法找到治疗和/或预防益处，其中式(I)的药物组合物和/或与其它治疗剂的组合与基因检测相结合，以确定该个体是否是一个突
变基因的载体，所述突变基因已知与某些疾病或病症相关。
变基因的载体，所述突变基因已知与某些疾病或病症相关。
[0221] 式I-III的化合物和组合疗法可以在疾病或病症发作前、发作中或发作后施用，并且施用含有化合物的组合物的时间可以不同。因此，例如，该化合物可以用作预防剂，可以连续施用给具有病症或疾病倾向的对象以预防疾病或病症发作。化合物和组合物可以在症
状发作期间或尽快施用给对象。该化合物的施用可以在症状发作的最初48小时内开始，优
选地在症状发作的48个小时内，更优选的症状发作的最初6个小时内，并且最优选的在症状发作的3个小时内。初始给药可以通过任何可实现的途径，如，例如，静脉内注射、快速浓注、输液5分钟至约5小时、丸剂、胶囊、透皮贴剂、口腔给药等等、或它们的组合。优选地，应在疾病或病症的发作或疑似发作后尽早施用化合物，而且时间的长度应当必须能治疗该疾病，
如，例如，约1个月到约3个月。治疗的长度对每个对象可以不同，并且此长度可以使用公知的标准来确定。例如，该化合物或含有该化合物的制剂可以施用至少2周，优选约1个月至约
3年，并在一些实施方案中约1个月到约10年。在其他实施方案中，该化合物从90天至2年每天施用一次。
状发作期间或尽快施用给对象。该化合物的施用可以在症状发作的最初48小时内开始，优
选地在症状发作的48个小时内，更优选的症状发作的最初6个小时内，并且最优选的在症状发作的3个小时内。初始给药可以通过任何可实现的途径，如，例如，静脉内注射、快速浓注、输液5分钟至约5小时、丸剂、胶囊、透皮贴剂、口腔给药等等、或它们的组合。优选地，应在疾病或病症的发作或疑似发作后尽早施用化合物，而且时间的长度应当必须能治疗该疾病，
如，例如，约1个月到约3个月。治疗的长度对每个对象可以不同，并且此长度可以使用公知的标准来确定。例如，该化合物或含有该化合物的制剂可以施用至少2周，优选约1个月至约
3年，并在一些实施方案中约1个月到约10年。在其他实施方案中，该化合物从90天至2年每天施用一次。
[0222] 本发明所述的药物组合物可以是适于精确剂量的单次给药的单位剂型。在单位剂型中，制剂被分成含有适量的一种或多种化合物的单位剂量。单位剂量可以是含有不连续
量的制剂的包装形式。非限制性实例是包装在小瓶或安瓿中的片剂或胶囊和粉剂。水性悬
浮液组合物可以包装在单剂量不可再封闭的容器中。替代地，可以使用多剂量可再封闭容
器，在这种情况下，通常在组合物中包含防腐剂。仅作为示例，用于胃肠外注射的制剂可呈单位剂型(包括但不限于安瓿)、或在添加有防腐剂的多剂量容器中。
量的制剂的包装形式。非限制性实例是包装在小瓶或安瓿中的片剂或胶囊和粉剂。水性悬
浮液组合物可以包装在单剂量不可再封闭的容器中。替代地，可以使用多剂量可再封闭容
器，在这种情况下，通常在组合物中包含防腐剂。仅作为示例，用于胃肠外注射的制剂可呈单位剂型(包括但不限于安瓿)、或在添加有防腐剂的多剂量容器中。
[0223] 本发明的任何所述化合物的适当的日用剂量是约0.03至60毫克/公斤体重。较大的哺乳动物(包括但不限于人类)的标示日剂量是在范围为约1毫克至约4000毫克，方便以
一个或多个剂量施用，包括但不限于，高达每天五次或以延缓形式施用。用于口服给药的合适的单位剂量形式包括约1毫克至约4000毫克的活性成分。在一些实施方案中，式(1)化合
物的单次剂量是在约50毫克至约3500毫克的范围内。在一些实施方案中，式(1)的化合物的单次剂量为约90毫克、约200毫克、约250毫克、约325毫克、约500毫克、约650毫克、约975毫克、约1300毫克、约1625毫克、约1950年毫克、约2600毫克或约3250毫克。在一些实施方案中，以多剂量施用约90毫克、约325毫克、约500毫克、约650毫克、约975毫克、约1300毫克、约
1625毫克、约1950毫克、约2600毫克或约3250毫克的式(1)化合物。
一个或多个剂量施用，包括但不限于，高达每天五次或以延缓形式施用。用于口服给药的合适的单位剂量形式包括约1毫克至约4000毫克的活性成分。在一些实施方案中，式(1)化合
物的单次剂量是在约50毫克至约3500毫克的范围内。在一些实施方案中，式(1)的化合物的单次剂量为约90毫克、约200毫克、约250毫克、约325毫克、约500毫克、约650毫克、约975毫克、约1300毫克、约1625毫克、约1950年毫克、约2600毫克或约3250毫克。在一些实施方案中，以多剂量施用约90毫克、约325毫克、约500毫克、约650毫克、约975毫克、约1300毫克、约
1625毫克、约1950毫克、约2600毫克或约3250毫克的式(1)化合物。
[0224] 在一些实施方案中，式(a)化合物的单次剂量是90至3500毫克之间，并且对对象施用该化合物90天至两年。
[0225] 这样的剂量会取决于一系列变量来改变，不仅限于所用化合物的活性、待治疗的疾病或病症、给药方式、各个对象的要求、待治疗的疾病或病症的严重性、以及医生的判断。
[0226] 提供治疗的示例性方法
[0227] 本发明提供用于治疗对象体内癌症或其它疾病的治疗策略。在一些实施方案中，所述疾病是多囊卵巢病。在一些实施方案中，所述癌症是前列腺癌。在其他实施方案中，所述癌症是乳腺癌。在其它实施方案中，所述癌症是卵巢癌。在一些实施方案中，所述对象是人。在其他实施方案中，所述对象是非人类。
[0228] 在具体实施方案中，本发明提供了产品和式I或式II的化合物用于前列腺癌治疗的使用方案。在一些实施方案中，所述前列腺癌是对去势治疗有抗性的前列腺癌。在一些实施方案中，所述前列腺癌是未经过化疗治疗(chemotherary )的前列腺癌。
[0229] 在一些实施方案中，本发明提供了涉及式I或式II的化合物的口服给药的治疗方案。
[0230] 在一些实施方案中，本发明提供了涉及施用多剂量的式I或式II化合物的治疗方案。在一些实施方案中，不同剂量在时间上间隔开。在一些实施方案中，所有给药含有相同量的式I或式II化合物。在一些实施方案中，不同给药含有不同量的式I或式II的化合物。在一些实施方案中，在时间上分隔的不同给药通过相同的时间量彼此间隔开；在一些实施方
案中，在时间上分隔的不同给药通过不同的时间量彼此间隔开。在一些实施方案中，本发明提供了包括多次剂量施用的给药方案，所述多次剂量由一个固定的时间间隔(或多个间隔)
分隔，随后是休息期，任选地之后是由一个固定的时间间隔(或多个间隔)所分隔的再一次
多剂量。
案中，在时间上分隔的不同给药通过不同的时间量彼此间隔开。在一些实施方案中，本发明提供了包括多次剂量施用的给药方案，所述多次剂量由一个固定的时间间隔(或多个间隔)
分隔，随后是休息期，任选地之后是由一个固定的时间间隔(或多个间隔)所分隔的再一次
多剂量。
[0231] 在一些实施方案中，施用至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、
44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、
69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、
94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、
114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、
133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、
152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168或更多剂量的式I或式II的化合物。在一些实施方案中，施用至少7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、
84、91、98、105、112、119、126、133、140、147、154、161、168、或更多剂量的式I或式II的化合物。
实施例
44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、
69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、
94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、
114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、
133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、
152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168或更多剂量的式I或式II的化合物。在一些实施方案中，施用至少7、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、
84、91、98、105、112、119、126、133、140、147、154、161、168、或更多剂量的式I或式II的化合物。
实施例
[0232] 盖乐特龙(Galeterone)是一种表现出三种抑制AR活性的作用机制的新型药物，其抑制雄激素的从头合成、阻断配体结合域以防止雄激素结合、并诱导AR降解。因此，在本发明中，我们评估了此药物的作用机制及各种生物标记物的用途之间的关系，包括在被治疗
的肿瘤中雄激素受体的状况。
的肿瘤中雄激素受体的状况。
[0233] 实施例1盖乐特龙(Galeterone)同时下调野生型和突变型的AR
[0234] 在同时组成型表达AR和AR-V7的CWR22rv1细胞系中进行检测全长AR和AR-V7变体蛋白的表达的实验。如图2所示，盖乐特龙(Galeterone)下调全长和剪接变体AR并减少该细胞系中的细胞增殖。同时参照图4。进一步，盖乐特龙(Galeterone)成功克服了由于AR剪接变体而产生的对阿比特龙(abiraterone)和恩杂鲁胺(enzalutamide)的抗性(图3)。盖乐特
龙(Galeterone)，而不是恩杂鲁胺(enzalutamide)，减少了全长和剪接变体AR-V7蛋白。此外，盖乐特龙(Galeterone)减少了在AR-V7剪接变体转染的DU145细胞中的AR-V7(图5)。同
样，较低水平的盖乐特龙(Galeterone)通过72小时的暴露减少全长和剪接变体AR-V7(图
6)。
龙(Galeterone)，而不是恩杂鲁胺(enzalutamide)，减少了全长和剪接变体AR-V7蛋白。此外，盖乐特龙(Galeterone)减少了在AR-V7剪接变体转染的DU145细胞中的AR-V7(图5)。同
样，较低水平的盖乐特龙(Galeterone)通过72小时的暴露减少全长和剪接变体AR-V7(图
6)。
[0235] 实施例2盖乐特龙(Galeterone)在对恩杂鲁胺(enzalutamide)具有抗性的模型中有效
[0236] 作为对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的临床前模型，耐药性和CRPC细胞系来自于连续传代的对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的三代，或经对照载体处理的LNCaP异种
移植物。抗性细胞(“49C”和“49F”)保存在体外，保持暴露于10μM的恩杂鲁胺
(enzalutamide)中并被用来研究在对恩杂鲁胺(enzalutamide)抗性的背景下盖乐特龙
(Galeterone)的抗癌和AR靶向效果。发现49F和49C的细胞系有AR-V7的低表达。用结晶紫和MTT测定法，我们发现，盖乐特龙(Galeterone)在LNCaP细胞中、在CRPC细胞中、并且最重要的是，在那些对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞中有抗增殖作用(图7)。在LNCaP细
胞和对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系中的盖乐特龙(Galeterone)的剂量响应
研究显示：与在恩杂鲁胺(enzalutamide)响应LNCaP细胞中的盖乐特龙(Galeterone)的
EC50相比，盖乐特龙(Galeterone)在对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系49F和49C
中在降低细胞活力方面有相似的EC50(图8)。恩杂鲁胺(enzalutamide)治疗降低了在LNCaP
细胞中的AR和PSA蛋白表达水平，但却没有降低在恩杂鲁胺(enzalutamide)抗性细胞系中
的AR和PSA蛋白表达水平(图9A)。相比恩杂鲁胺(enzalutamide)治疗，盖乐特龙
(Galeterone)产生了AR和前列腺特异性抗原(PSA)的蛋白表达(图9B)更大的减少。令人吃
惊的是，盖乐特龙(Galeterone)的效果在有抗性的细胞中仍然能观察到(图9B)，其在AR蛋
白表达或PSA蛋白的表达(图9A)方面没有显示降低。为了确定恩杂鲁胺(enzalutamide)和
盖乐特龙(Galeterone)对AR核易位的影响，用合成雄激素R1881和/或恩杂鲁胺
(enzalutamide)处理LNCaP和对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系。用免疫细胞化
学对AR定位进行可视化处理。单独的R1881引起强烈的AR易位至对LNCaP和恩杂鲁胺
(enzalutamide)有抗性的细胞系的核中(图10-13)。在LNCaP细胞而非对恩杂鲁胺
(enzalutamide)有抗性的细胞中，相比于单独用R1881治疗，R1881和恩杂鲁胺
(enzalutamide)联合治疗降低了AR核易位(图10-13)。为了确定恩杂鲁胺(enzalutamide)
和盖乐特龙(Galeterone)对AR活性的影响，在对恩杂鲁胺(enzalutamide)响应的CPRC细胞
系中以及对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系49C和49F中进行AR萤光素酶测定。所
有未处理的细胞系表现出高的AR活性水平(图14)。恩杂鲁胺(enzalutamide)治疗在对恩杂
鲁胺(enzalutamide)响应的细胞系中降低了AR活性，但在抗性细胞系49C或49F中并没有降
低AR活性(图14)。相比之下，盖乐特龙(Galeterone)在所有三个细胞系中均降低了AR活性
(图14)。图15A示出了设计来使所使用的测试化合物的核定位可视化的免疫荧光实验，而图
15B表明盖乐特龙(Galeterone)，而不是恩杂鲁胺(enzalutamide)，降低AR核易位(与对照
或恩杂鲁胺(enzalutamide)相比，可看到增加的绿色细胞质染色和较少核绿染色)。同时，该数据表明，盖乐特龙(Galeterone)在体外强烈抑制AR活性并抑制对去势治疗有抗性的
LNCaP的生长以及对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞生长。
移植物。抗性细胞(“49C”和“49F”)保存在体外，保持暴露于10μM的恩杂鲁胺
(enzalutamide)中并被用来研究在对恩杂鲁胺(enzalutamide)抗性的背景下盖乐特龙
(Galeterone)的抗癌和AR靶向效果。发现49F和49C的细胞系有AR-V7的低表达。用结晶紫和MTT测定法，我们发现，盖乐特龙(Galeterone)在LNCaP细胞中、在CRPC细胞中、并且最重要的是，在那些对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞中有抗增殖作用(图7)。在LNCaP细
胞和对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系中的盖乐特龙(Galeterone)的剂量响应
研究显示：与在恩杂鲁胺(enzalutamide)响应LNCaP细胞中的盖乐特龙(Galeterone)的
EC50相比，盖乐特龙(Galeterone)在对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系49F和49C
中在降低细胞活力方面有相似的EC50(图8)。恩杂鲁胺(enzalutamide)治疗降低了在LNCaP
细胞中的AR和PSA蛋白表达水平，但却没有降低在恩杂鲁胺(enzalutamide)抗性细胞系中
的AR和PSA蛋白表达水平(图9A)。相比恩杂鲁胺(enzalutamide)治疗，盖乐特龙
(Galeterone)产生了AR和前列腺特异性抗原(PSA)的蛋白表达(图9B)更大的减少。令人吃
惊的是，盖乐特龙(Galeterone)的效果在有抗性的细胞中仍然能观察到(图9B)，其在AR蛋
白表达或PSA蛋白的表达(图9A)方面没有显示降低。为了确定恩杂鲁胺(enzalutamide)和
盖乐特龙(Galeterone)对AR核易位的影响，用合成雄激素R1881和/或恩杂鲁胺
(enzalutamide)处理LNCaP和对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系。用免疫细胞化
学对AR定位进行可视化处理。单独的R1881引起强烈的AR易位至对LNCaP和恩杂鲁胺
(enzalutamide)有抗性的细胞系的核中(图10-13)。在LNCaP细胞而非对恩杂鲁胺
(enzalutamide)有抗性的细胞中，相比于单独用R1881治疗，R1881和恩杂鲁胺
(enzalutamide)联合治疗降低了AR核易位(图10-13)。为了确定恩杂鲁胺(enzalutamide)
和盖乐特龙(Galeterone)对AR活性的影响，在对恩杂鲁胺(enzalutamide)响应的CPRC细胞
系中以及对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞系49C和49F中进行AR萤光素酶测定。所
有未处理的细胞系表现出高的AR活性水平(图14)。恩杂鲁胺(enzalutamide)治疗在对恩杂
鲁胺(enzalutamide)响应的细胞系中降低了AR活性，但在抗性细胞系49C或49F中并没有降
低AR活性(图14)。相比之下，盖乐特龙(Galeterone)在所有三个细胞系中均降低了AR活性
(图14)。图15A示出了设计来使所使用的测试化合物的核定位可视化的免疫荧光实验，而图
15B表明盖乐特龙(Galeterone)，而不是恩杂鲁胺(enzalutamide)，降低AR核易位(与对照
或恩杂鲁胺(enzalutamide)相比，可看到增加的绿色细胞质染色和较少核绿染色)。同时，该数据表明，盖乐特龙(Galeterone)在体外强烈抑制AR活性并抑制对去势治疗有抗性的
LNCaP的生长以及对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的细胞生长。
[0237] 实施例3在对去势治疗有抗性的表达突变雄激素受体的异种移植肿瘤中盖乐特龙(Galeterone)的活性
[0238] 在小鼠的CRPC异种移植模型中对盖乐特龙(Galeterone)进行测试。图16显示表达AR-V7的去势治疗抗性的肿瘤对盖乐特龙(Galeterone)有响应。采用RT-PCR在LuCaP136去
势治疗抗性的异种移植肿瘤中检测AR-V7。
势治疗抗性的异种移植肿瘤中检测AR-V7。
[0239] 实施例4盖乐特龙(Galeterone)下调突变的雄激素受体
[0240] AR点突变AR-T878A通常存在于激素难治的肿瘤中，并且由于突变是在雄激素结合位点，突变的AR与类固醇和药物的结合会非常不同。特别地，AR-T878A突变体结合在阿比特龙(abiraterone)治疗中升高的黄体酮，因此表达该突变的肿瘤是对阿比特龙
(abiraterone)有抗性的。图17进行的实验表明盖乐特龙(Galeterone)下调携带AR-T878A
突变的雄激素受体。这种效果在已由AR-T878A转染的LNCaP细胞或AR阴性PC3细胞中可见。
(abiraterone)有抗性的。图17进行的实验表明盖乐特龙(Galeterone)下调携带AR-T878A
突变的雄激素受体。这种效果在已由AR-T878A转染的LNCaP细胞或AR阴性PC3细胞中可见。
[0241] 实施例5具有雄激素受体剪接变体的CRPC患者对盖乐特龙(Galeterone)治疗有响应
[0242] 对一组患者每日施用盖乐特龙(Galeterone)2550毫克，持续12周。针对AR状况对一组先前未进行CRPC治疗的6位患者进行了分析。通过评估相对于N-末端雄激素受体表达
的C末端雄激素受体表达，6位患者中的4位被确定为具有C-末端缺失的AR受体。图22显示了该实验的结果。所有四个具有此AR变体的患者具有最大的PSA水平的减少(减少至少50％)。
另外两个不具有C-末端域缺失的AR受体的患者没有强烈响应盖乐特龙(Galeterone)，这一
点由PSA的降低较小得以证明。
的C末端雄激素受体表达，6位患者中的4位被确定为具有C-末端缺失的AR受体。图22显示了该实验的结果。所有四个具有此AR变体的患者具有最大的PSA水平的减少(减少至少50％)。
另外两个不具有C-末端域缺失的AR受体的患者没有强烈响应盖乐特龙(Galeterone)，这一
点由PSA的降低较小得以证明。
[0243] 因此，盖乐特龙(Galeterone)是AR通路的有效抑制剂，并可以代表针对患有不仅对CRPC而且对恩杂鲁胺(enzalutamide)有抗性的疾病的患者的下一代激素疗法。此外，由
于盖乐特龙(Galeterone)是AR通路的有效抑制剂，它可以作为阿比特龙(abiraterone)或
对阿比特龙(abiraterone)治疗有抗性的患者的另外选择。虽然本发明优选的实施例已在
此示出和描述，但是对于本领域技术人员来说，很明显这样的实施例仅作为示例的方式提
供。本领域技术人员在不背离本发明的情况下将会想到许多变化、改变和替换。应当理解的是，这里所描述的本发明的实施方式的各种替代可以用于实践本发明。其意图是随后的权
利要求定义本发明的范围，并涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
于盖乐特龙(Galeterone)是AR通路的有效抑制剂，它可以作为阿比特龙(abiraterone)或
对阿比特龙(abiraterone)治疗有抗性的患者的另外选择。虽然本发明优选的实施例已在
此示出和描述，但是对于本领域技术人员来说，很明显这样的实施例仅作为示例的方式提
供。本领域技术人员在不背离本发明的情况下将会想到许多变化、改变和替换。应当理解的是，这里所描述的本发明的实施方式的各种替代可以用于实践本发明。其意图是随后的权
利要求定义本发明的范围，并涵盖这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。
[0244] 实施例6通过扩增检测突变的AR
[0245] 可通过PCR检测患者样品中突变的AR。定量实时PCR方法在文献中是已知的，尤其如在Luo等，US2011/0110926中所描述的。如癌症研究2009年，69：16-22所描述的，对于RT-PCR分析，分离总RNA并逆转录形成cDNA并在RT-PCR分析中使用。如上所述设计PCR引物以特异性地扩增在NH2末端(5'引物)(例如引物P6/P7/P9)中已知的并且在AR蛋白(即AR-V7特异
性)mRNA的突变形式(截短的，例如P7)内的转录序列，并可以在约30(特别是28)个PCR扩增
循环以内很容易地检测出来。使用如本发明中所述的方法，将有可能从来自患有前列腺癌
的患者的样品中检测截短的AR的表达水平。在这种分析中，由于患者样品中不同的表达水
平，基因SF3A3被用作用于标准化的参考基因。
性)mRNA的突变形式(截短的，例如P7)内的转录序列，并可以在约30(特别是28)个PCR扩增
循环以内很容易地检测出来。使用如本发明中所述的方法，将有可能从来自患有前列腺癌
的患者的样品中检测截短的AR的表达水平。在这种分析中，由于患者样品中不同的表达水
平，基因SF3A3被用作用于标准化的参考基因。
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