技术领域
[0001] 本实用新型涉及一种试剂盒,属于PSA
化学发光免疫分析技术领域。
背景技术
[0002] 前列腺特异性
抗原(PSA)是由前列腺上皮细胞合成分泌至精液中,是精浆的主要成分之一。在上个世纪60年代末,在研究免疫避孕过程中Hare等人发现,在前列腺液及精液中含有一种分子量大约34000的精液特异性
蛋白质。1979年从前列腺组织中提取并纯化了这种蛋白质。由于这种蛋白只在前列腺组织中存在,被命名为
前列腺特异性抗原。
[0003] PSA用于科学研究过程中,对于微量检测要求较高。
[0004] 目前PSA测定方法有胶体金
免疫层析(GICA);蛋白印迹(WB);酶联
免疫吸附试验(ELISA),化学发光法免疫分析(CLIA);其中GICA、ELISA、WB的优点是相对成本低廉,缺点是灵敏度低,PSA含量少的情况下检测不出;而化学发光法CLIA试剂盒检测灵敏度比上述方法试剂盒高,但还是不能满足科研上对PSA超微量检测的需要。实用新型内容
[0005] 本实用新型克服了当前化学发光法试剂盒不能满足对PSA超微量检测的技术问题,提供了一种PSA检测试剂盒,解决目前PSA蛋白超微量检测的问题。
[0006] 本实用新型采用了以下技术方案来解决技术问题:
[0007] 一种PSA检测试剂盒,包括盒体和盒盖,盒体(1)上方连接盒盖(2),盒体(1)的底部放置有2cm厚与盒的尺寸大小相同的海绵托(3),所述海绵托(3)的左半部设有11个第一凹槽、中间区域设有3个第二凹槽、右半部设有2个第三凹槽,第一凹槽内分别装有11个校准品瓶(5),第二凹槽内分别装有
磁性颗粒瓶(6)、
生物素化合物瓶(7)和标记物瓶(8),第三凹槽分别装有化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)。
[0008] 作为本实用新型进一步改进,所述的盒体(1)、盒盖(2)均采用塑化防
水纸质材料制成。
[0009] 作为本实用新型进一步改进,第一凹槽的截面形状与所述校准品瓶(5)的截面形状匹配。
[0010] 作为本实用新型进一步改进,3个第二凹槽的截面形状分别与磁性颗粒瓶(6)、生物素化合物瓶(7)以及标记物瓶(8)的截面形状匹配。
[0011] 作为本实用新型进一步改进,2个第三凹槽的截面形状分别与化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)的截面形状匹配。
[0012] 作为本实用新型进一步改进,所述的校准品瓶(5),磁性颗粒瓶(6),生物素化合物瓶(7),标记物瓶(8),化学发光底物瓶(9)和浓缩洗涤液瓶(10)均采用玻璃瓶。
[0013] 与
现有技术相比,本实用新型的有益效果是发光
信号明显提高,对超微量的PSA检测效果明显优于现有化学发光免疫分析试剂盒,本实用新型试剂盒具有灵敏度高,稳定的特点。
附图说明
[0014] 图1是本实用新型整体结构示意图。
[0015] 图中:1盒体;2盒盖;3海绵托;4第三凹槽;5校准品瓶;6磁性颗粒瓶;7生物素化合物瓶;8标记物瓶;9化学发光底物瓶;10浓缩洗涤液瓶。
具体实施方式
[0016] 如图1所示,为本实用新型PSA检测试剂盒的一种
实施例。该PSA检测试剂盒包括盒体1和盒盖2,盒体1、盒盖2均采用塑化防水纸质材料制成。
[0017] 盒体上方连接盒盖,盒体的底部放置有2cm厚与盒的尺寸大小相同的海绵托3。所述海绵托3的左半部设有11个第一凹槽、中间区域设有3个第二凹槽、右半部设有2个第三凹槽4。
[0018] 第一凹槽内分别装有11个校准品瓶5,并且第一凹槽的截面形状与所述校准品瓶5的截面形状匹配。
[0019] 第二凹槽内分别装有磁性颗粒瓶6、生物素化合物瓶7和标记物瓶8,并且3个第二凹槽的截面形状分别与磁性颗粒瓶6、生物素化合物瓶7以及标记物瓶8的截面形状匹配。
[0020] 第三凹槽4分别装有化学发光底物瓶9和浓缩洗涤液瓶10,并且2个第三凹槽的截面形状分别与化学发光底物瓶9和浓缩洗涤液瓶10的截面形状匹配。
[0021] 在本实施例中,校准品瓶5,磁性颗粒瓶6,生物素化合物瓶7,标记物瓶8,化学发光底物瓶9和浓缩洗涤液瓶10均采用玻璃瓶。
[0022] 制备本实用新型PSA检测试剂盒
[0023] 一、校准品瓶的制备
[0024] 用校准品基质液及PSA纯品配制校准品,浓度分别为0、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10、20、50、100ng/mL,(其中0ng/mL为校准品基质液,不含PSA),配制11种系列浓度校准品,各浓度校准品分别用3mL规格的西林玻璃瓶分装1mL/瓶,冻干处理后,-20℃保存,得到本实用新型校准品瓶5。
[0025] 二、磁性颗粒瓶的制备
[0026] (1)称取250mg
氨基末端磁性颗粒置于烧杯;
[0027] (2)加入甲醇及丙
酮各5mL反复清洗5遍;
[0028] (3)磁性分离,弃去上清;
[0029] (4)加入DMF溶解的10mL0.2%的1,4一苯二异硫氰酸酯(PDITC)溶液,置于恒温
振荡器,反应10h;
[0030] (5)将反应后的磁性颗粒用丙酮及超纯水反复清洗6遍;
[0031] (6)取新制备经PDITC活化的磁性颗粒置于30mL离心管中;
[0032] (7)加入PBS25mL,加入4mg链亲和素,置于恒温振荡器中反应20min;
[0033] (8)磁性分离,测定反应前后溶液在280nm的0D值,以PBS清洗3次,收集,[0034] 加入等量丙三醇,-20℃保存.
[0035] 通过实验检测效价,在根据最近效价稀释比例配制链亲和素化固相磁性颗粒工作液。用5mL规格西林玻璃瓶分装1mL/瓶,冻干处理后,-20℃保存,得到本实用新型磁性颗粒瓶6。
[0036] 三、生物素化合物瓶的制备
[0037] (1)将生物素-N-羟基磺酸基琥珀酰亚胺酯(Sulfo-NHS-Biotin)
冰箱取出平衡至室温;
[0038] (2)0.01M的PBS稀释PSA单克隆
抗体至浓度2mg/mL;
[0039] (3)称取Sulfo-NHS-Biotin2mg于西林瓶中加超纯水300μL,轻轻摇匀活化。
[0040] (4)立即将活化的生物素溶液54μL缓慢加入2mLPSA单克隆抗体溶液中,室温反应30min;
[0041] (5)反应液用0.01M的PBS
透析4℃8h(换液4次),收集,加入等量丙三醇,-20℃保存。
[0042] 通过实验检测效价,在根据最近效价稀释比例配制PSA单克隆抗体生物素化工作液。用5mL规格西林玻璃瓶分装1mL/瓶,冻干处理后,-20℃保存,得到本实用新型生物素化合物瓶7。
[0043] 四、标记物瓶的制备
[0044] (1)将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)
碳酰二亚胺(EDC)冰柜取出平衡至室温;
[0045] (2)取10mg5,10,15-三(4-吡啶基)-20-对苯乙酸卟啉和20mgEDC分别溶于1ml超纯水中使其溶解;
[0046] (3)将上述5,10,15-三(4-吡啶基)-20-对苯乙酸卟啉溶液和EDC溶液,在4℃混合搅拌反应30min;
[0047] (4)然后向此
混合液中缓慢滴加入含30mg/mL PSA单克隆抗体溶液,室温搅拌反应2h,层析纯化后,-20℃保存。
[0048] 通过实验检测效价,在根据最近效价稀释比例配制5,10,15-三(4-吡啶基)-20-对苯乙酸卟啉偶联标记PSA单克隆抗体化工作液。用5mL规格西林玻璃瓶分装1mL/瓶,冻干处理后,-20℃保存,得到本实用新型标记物瓶8。
[0049] 五、化学发光底物瓶的制备
[0050]
[0052] 用20mL规格西林玻璃瓶分装20mL/瓶,得到本实用新型化学发光底物瓶9。
[0053] 六、浓缩洗涤液瓶的制备
[0054]
[0055] 用30mL规格西林玻璃瓶分装30mL/瓶,得到本实用新型浓缩洗涤液瓶10。
[0056] 七、半成品及成品组成
[0057] 上述步骤所得产品即为半成品。将盒体,盒盖,海绵托,校准品瓶,磁性颗粒瓶,生物素化合物瓶,标记物瓶,化学发光底物瓶,浓缩洗涤液瓶组装成品“PSA检测试剂盒”。
[0058] 本实用新型PSA检测试剂盒的使用方法
[0059] (1)从冰箱取出PSA检测试剂盒平衡至室温;
[0060] (2)将浓缩洗涤液瓶中得浓缩洗涤液配制用50倍纯化水稀释的洗涤工作液;
[0061] (3)向校准品瓶(冻干状态),每瓶加入1mL纯化水进行溶解;
[0062] (4)向磁性颗粒瓶(冻干状态)中加入5mL纯化水进行溶解;
[0063] (5)向生物素化合物瓶(冻干状态)中加入5mL纯化水进行溶解;
[0064] (6)向标记物瓶(冻干状态)中加入5mL纯化水进行溶解;
[0065] (7)在反应杯中分别加入校准品、待测样本各50μL;
[0066] (8)在每个反应杯中依次加入磁性颗粒瓶复溶液各50μL,生物素化合物瓶复溶液各50μL,及标记物瓶复溶液各50μL;
[0067] (9)37℃温育30分钟;
[0068] (10)
磁场吸附,吸去上清液,用300μL洗涤缓冲液冲洗,再次磁场吸附,吸取上清液,重复4遍;
[0069] (11)在每个反应杯中依次加入化学发光底物瓶溶液200μL;
[0070] (12)在化学发光测量仪上依序测量各孔的发光强度(RLU);
[0071] (13)分别对校准品浓度和对应RLU取对数,在双对数坐标图上建立标准曲线,以校准品浓度为横坐标,RLU值为纵坐标绘出标准曲线,以待测样本的RLU值在标准曲线上查出该样本的浓度值。