一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法及应用
专利汇可以提供一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法及应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种酸中心复合物电化学免疫 传感器 的制备方法及应用，属于新型功能材料、 生物 传感检测技术领域。基于酸中心复合物 比表面积 大， 导电性 优异， 生物相容性 好， 氧 化还原性能好等特点，显著提高了免疫传感器的灵敏度和 稳定性 ，对 肿瘤 的早期诊断具有重要的意义。，下面是一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法及应用专利的具体信息内容。
1.一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；将6 µL、0.5 ~ 2 mg/mL 酸中心复合物FA@PANI@CS-HCl分散液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；
（2）依次滴加6 µL的EDC/NHS溶液、6 µL的Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液于电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；所述EDC/NHS溶液是由0.1 mol/L 的EDC和0.1 mol/L 的NHS按照1 ~ 4 : 1的体积比混合制得；
（3）滴加6 µL、质量分数为0.5% ~ 2%的BSA溶液于电极表面，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；
（4）滴加6 µL、0.0001~2 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干，制得一种基于酸中心复合物的免疫传感器。
2.如权利要求1所述的一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法，所述的酸中心复合物FA@PANI@CS-HCl分散液，其特征在于，制备步骤如下：
将0.4~2.0 mg的二茂铁甲酸FA与0.4~2.0 mg的盐酸掺杂的聚苯胺PANI混合，分散于1 mL、0.5~10 mg/mL的壳聚糖盐酸盐CS-HCl水溶液中，震荡超声24 h，混合均匀。
3.如权利要求1所述的一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法，所述Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液，其特征在于，制备步骤如下：
（1）Co3O4纳米片的制备
在磁力搅拌下，将2.0~3.0 g的CoCl2·6H2O溶于50~70 mL 超纯水中，制得CoCl2水溶液；将20 mL、0.1~1.0 mol/L NaOH水溶液逐滴加入到CoCl2水溶液中，继续搅拌5 min，得到棕色沉淀，离心，用超纯水和无水乙醇分别洗涤3次，在60 ℃真空干燥箱中干燥12 h，制得固体沉淀物，将其在300~500℃下煅烧1 h，逐渐降到室温，制得Co3O4纳米片；
（2）氨基化Co3O4的制备
将0.1 g 的Co3O4纳米片加入到10 mL的无水甲苯中，加入0.1~1 mL 的3-氨丙基三乙氧基硅烷，60~80℃回流1.5 h，离心，于110℃下干燥1 h，制得氨基化的Co3O4；
（3）Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液的制备
将50 mg的硝酸银溶于50 mL、质量分数为3~8 %的柠檬酸钠水溶液中，搅拌1 h；逐滴加入1~5 mL、0.1 mmoL/L的硼氢化钠水溶液，搅拌20~30 min，直至变为棕黄色，制得Ag纳米粒子溶液；将1 mg氨基化的Co3O4和30~70 mL的Ag纳米粒子溶液，充分混合，震荡离心，得到Ag@Co3O4；将1 mg的Ag@Co3O4加入到1 mL、0.1~5 µg/mL的抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡24 h，制得Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液。
4.如权利要求1所述的制备方法制备的一种基于酸中心复合物的免疫传感器，其特征在于，用于肿瘤标志物的检测，检测步骤如下：
（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL、50 mmoL/L、pH 6.00 ~8.10的PBS缓冲溶液中进行测试；
（2）用方波伏安法对肿瘤标志物抗原标准溶液进行检测，其电压测试范围为-0.2V ~
0.6V；
（3）当背景电流趋于稳定后，测量抗原加入前后的传感器的峰电流值，然后记录电流变化，绘制工作曲线；
（4）将待测样品溶液代替肿瘤标志物抗原标准溶液进行检测。
5.如权利要求4所述的肿瘤标志物选自下列之一：人核基质蛋白NMP-22，甲胎蛋白AFP，癌胚抗原CEA，乳腺癌易感基因CAl5-3，糖蛋白抗原CA125、 CA19-9、CA72-4和CA242，鳞状细胞相关抗原SCC，细胞角蛋白19(CYFRA21-1)，β2-微球蛋白，铁蛋白，前列腺特异性抗原PSA，神经原特异性烯醇化酶NSE，绒毛膜促性腺激素HCG。
一种基于酸中心复合物的免疫传感器的制备方法及应用
技术领域
背景技术
发明内容
（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；将6 µL、0.5 ~ 2 mg/mL 酸中心复合物FA@PANI@CS-HCl分散液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；
（2）依次滴加6 µL的EDC/NHS溶液、6 µL的Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液于电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；所述EDC/NHS溶液是由0.1 mol/L 的EDC和0.1 mol/L 的NHS按照1 ~ 4 : 1的体积比混合制得；
（3）滴加6 µL、质量分数为0.5% ~ 2%的BSA溶液于电极表面，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；
（4）滴加6 µL、0.0001~2 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干，制得一种基于酸中心复合物的免疫传感器。
在磁力搅拌下，将2.0~3.0 g的CoCl2·6H2O溶于50~70 mL 超纯水中，制得CoCl2水溶液；将20 mL、0.1~1.0 mol/L NaOH水溶液逐滴加入到CoCl2水溶液中，继续搅拌5 min，得到棕色沉淀，离心，用超纯水和无水乙醇分别洗涤3次，在60 ℃真空干燥箱中干燥12 h，制得固体沉淀物，将其在300~500℃下煅烧1 h，逐渐降到室温，制得Co3O4纳米片；
（2）氨基化Co3O4的制备
将0.1 g 的Co3O4纳米片加入到10 mL的无水甲苯中，加入0.1~1 mL 的3-氨丙基三乙氧基硅烷，60~80℃回流1.5 h，离心，于110℃下干燥1 h，制得氨基化的Co3O4；
（3）Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液的制备
将50 mg的硝酸银溶于50 mL、质量分数为3~8 %的柠檬酸钠水溶液中，搅拌1 h；逐滴加入1~5 mL、0.1 mmoL/L的硼氢化钠水溶液，搅拌20~30 min，直至变为棕黄色，制得Ag纳米粒子溶液；将1 mg氨基化的Co3O4和30~70 mL的Ag纳米粒子溶液，充分混合，震荡离心，得到Ag@Co3O4；将1 mg的Ag@Co3O4加入到1 mL、0.1~5 µg/mL的抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡24 h，制得Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液。
（2）用方波伏安法对肿瘤标志物抗原标准溶液进行检测，其电压测试范围为-0.2V ~
0.6V；
（3）当背景电流趋于稳定后，测量抗原加入前后的传感器的峰电流值，然后记录电流变化，绘制工作曲线；
（4）将待测样品溶液代替肿瘤标志物抗原标准溶液进行检测。
具体实施方式
（2）依次滴加6 µL的EDC/NHS溶液、6 µL的Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液于电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；所述EDC/NHS溶液是由0.1 mol/L 的EDC和0.1 mol/L 的NHS按照1 : 1的体积比混合制得；
（3）滴加6 µL、质量分数为0.5%的BSA溶液于电极表面，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；
（4）滴加6 µL、0.0001~2 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干，制得一种基于酸中心复合物的免疫传感器。
（2）依次滴加6 µL的EDC/NHS溶液、6 µL的Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液于电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；所述EDC/NHS溶液是由0.1 mol/L 的EDC和0.1 mol/L 的NHS按照2 : 1的体积比混合制得；
（3）滴加6 µL、质量分数为1%的BSA溶液于电极表面，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；
（4）滴加6 µL、0.0001~2 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干，制得一种基于酸中心复合物的免疫传感器。
（2）依次滴加6 µL的EDC/NHS溶液、6 µL的Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液于电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；所述EDC/NHS溶液是由0.1 mol/L 的EDC和0.1 mol/L 的NHS按照4: 1的体积比混合制得；
（3）滴加6 µL、质量分数为2%的BSA溶液于电极表面，封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干；
（4）滴加6 µL、0.0001~2 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4℃冰箱中晾干，制得一种基于酸中心复合物的免疫传感器。
在磁力搅拌下，将2.0 g的CoCl2·6H2O溶于50 mL 超纯水中，制得CoCl2水溶液；将20 mL、0.1 mol/L NaOH水溶液逐滴加入到CoCl2水溶液中，继续搅拌5 min，得到棕色沉淀，离心，用超纯水和无水乙醇分别洗涤3次，在60 ℃真空干燥箱中干燥12 h，制得固体沉淀物，将其在300℃下煅烧1 h，逐渐降到室温，制得Co3O4纳米片；
（2）氨基化Co3O4的制备
将0.1 g 的Co3O4纳米片加入到10 mL的无水甲苯中，加入0.1 mL 的3-氨丙基三乙氧基硅烷，60℃回流1.5 h，离心，于110℃下干燥1 h，制得氨基化的Co3O4；
（3）Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液的制备
将50 mg的硝酸银溶于50 mL、质量分数为3 %的柠檬酸钠水溶液中，搅拌1 h；逐滴加入1 mL、0.1 mmoL/L的硼氢化钠水溶液，搅拌20 min，直至变为棕黄色，制得Ag纳米粒子溶液；将1 mg氨基化的Co3O4和30 mL的Ag纳米粒子溶液，充分混合，震荡离心，得到Ag@Co3O4；将1 mg的Ag@Co3O4加入到1 mL、0.1 µg/mL的抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡24 h，制得Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液。
在磁力搅拌下，将2.5 g的CoCl2·6H2O溶于60 mL 超纯水中，制得CoCl2水溶液；将20 mL、0.5 mol/L NaOH水溶液逐滴加入到CoCl2水溶液中，继续搅拌5 min，得到棕色沉淀，离心，用超纯水和无水乙醇分别洗涤3次，在60 ℃真空干燥箱中干燥12 h，制得固体沉淀物，将其在400℃下煅烧1 h，逐渐降到室温，制得Co3O4纳米片；
（2）氨基化Co3O4的制备
将0.1 g 的Co3O4纳米片加入到10 mL的无水甲苯中，加入0.5 mL 的3-氨丙基三乙氧基硅烷，70℃回流1.5 h，离心，于110℃下干燥1 h，制得氨基化的Co3O4；
（3）Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液的制备
将50 mg的硝酸银溶于50 mL、质量分数为6 %的柠檬酸钠水溶液中，搅拌1 h；逐滴加入3 mL、0.1 mmoL/L的硼氢化钠水溶液，搅拌25 min，直至变为棕黄色，制得Ag纳米粒子溶液；将1 mg氨基化的Co3O4和50 mL的Ag纳米粒子溶液，充分混合，震荡离心，得到Ag@Co3O4；将1 mg的Ag@Co3O4加入到1 mL、2 µg/mL的抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡24 h，制得Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液。
在磁力搅拌下，将3.0 g的CoCl2·6H2O溶于70 mL 超纯水中，制得CoCl2水溶液；将20 mL、1.0 mol/L NaOH水溶液逐滴加入到CoCl2水溶液中，继续搅拌5 min，得到棕色沉淀，离心，用超纯水和无水乙醇分别洗涤3次，在60 ℃真空干燥箱中干燥12 h，制得固体沉淀物，将其在500℃下煅烧1 h，逐渐降到室温，制得Co3O4纳米片；
（2）氨基化Co3O4的制备
将0.1 g 的Co3O4纳米片加入到10 mL的无水甲苯中，加入1 mL 的3-氨丙基三乙氧基硅烷，80℃回流1.5 h，离心，于110℃下干燥1 h，制得氨基化的Co3O4；
（3）Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液的制备
将50 mg的硝酸银溶于50 mL、质量分数为8 %的柠檬酸钠水溶液中，搅拌1 h；逐滴加入5 mL、0.1 mmoL/L的硼氢化钠水溶液，搅拌30 min，直至变为棕黄色，制得Ag纳米粒子溶液；将1 mg氨基化的Co3O4和70 mL的Ag纳米粒子溶液，充分混合，震荡离心，得到Ag@Co3O4；将1 mg的Ag@Co3O4加入到1 mL、5 µg/mL的抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡24 h，制得Ab-Ag@Co3O4抗体孵化物溶液。
（2）用方波伏安法对肿瘤标志物抗原标准溶液进行检测，其电压测试范围为-0.2V ~
0.6V；
（3）当背景电流趋于稳定后，测量抗原加入前后的传感器的峰电流值，然后记录电流变化，绘制工作曲线；
（4）将待测样品溶液代替肿瘤标志物抗原标准溶液进行检测。
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