一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒及其应用
专利汇可以提供一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒及其应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及 生物 和医学检测技术领域，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测胃癌 肿瘤 标志物指标CA724、CEA、CA199的时间分辨 荧光 免疫检测 试剂 盒 ，同时还涉及该试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199中的应用。该试剂盒包括：分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆 抗体 混合抗体包被的微孔板；用Eu3+标记的抗CA724、Tb3+标记的抗CA199、Sm3+标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。本发明提供的试剂盒可用于胃癌的临床辅助诊断、疗效观察及 预后 判断，对胃癌肿瘤的 治疗 和 预防 具有重要意义，同时检测三个肿瘤标志物，简化了检测步骤，提高了检测数据综合分析的特异性和灵敏性。，下面是一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒及其应用专利的具体信息内容。
1.一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，把三种胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，其特征在于：该
3+
试剂盒包括：分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu
3+ 3+
标记的抗CA724、Tb 标记的抗CA199、Sm 标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。
2.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于：所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为：把分别抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入100μl的所述抗体包被液，于37℃包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入200μl的封板液，于室温封闭2小时或于4℃封闭过夜，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得混合抗体包被的微孔板。
3.根据权利要求2所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于：所述抗体包被液中，分别抗CA724、CEA、CA199的第一株单克隆抗体的浓度均为0.010～0.019g/L。
4.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于：所述用
3+ 3+ 3+
Eu 标记的抗CA724、Tb 标记的抗CA199、Sm 标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体
3+ 3+ 3+
中，用Eu 标记的抗CA724抗体、Tb 标记的抗CA199抗体、Sm 标记的抗CEA抗体的质量配
3+ 3+ 3+
比为：Eu 标记的抗CA724抗体:Tb 标记的抗CA199抗体:Sm 标记的抗CEA抗体=（3～
6）:（3～7）:（5～9）。
5.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于：所述共用荧光增强剂的制备方法为：解离部分：将70～200μmol的PTA、2～7μmol的氧化钇、
0.6g的Triton X-100和300ml的乙醇混合，用水定容至1升，用乙酸调pH值至3.5，制得解离部分；增强部分：将0.1～0.4mmol的邻菲罗啉和0.2mol的Tris混合，用水定容至1L，制得增强部分。
6.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于：所述洗涤液的制备方法为：在浓度为0.01mol/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入吐温-20，混匀，制得吐温-20质量百分比浓度为0.05%的PBS溶液，然后用质量百分比浓度为0.2%的NaN3溶液防腐处理，制得洗涤液。
7.根据权利要求1所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒，其特征在于：所述质控品为CA724、CEA、CA199标准品的混合物。
8.一种权利要求1-7任一所述的时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199中的应用。
9.根据权利要求8所述的试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199中的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）用分析缓冲液稀释质控品，制成具有系列浓度梯度包含有CA724、CEA、CA199标准品的混合溶液；
（2）将待测样品与步骤（1）制备的标准品混合溶液分别加入抗CA724、CEA、CA199第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的不同孔中，然后再向孔中加入能分别与CA724、CEA、CA199结合的标记有稀土离子螯合物的第二株单克隆抗体混合抗体，之后加入共用荧光增强剂，进行时间分辨荧光免疫检测，得到发光值；
（3）根据测定的具有系列浓度梯度的包含CA724、CEA、CA199标准品的混合溶液的发光值做标准曲线；
（4）以测定的待测样品中的CA724、CEA、CA199发光值和标准品中CA724、CEA、CA199各自的标准曲线的发光值做比较，得出待测样品中CA724、CEA、CA199各自的含量。
10.根据权利要求9所述的试剂盒在综合检测胃癌肿瘤标志物CA724、CEA、CA199中的应用，其特征在于：所述待测样品为人体血清。
一种时间分辨荧光法综合检测胃癌试剂盒及其应用
技术领域
背景技术
发明内容
抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu 标记的抗CA724、Tb 标记的抗CA199、Sm 标记的抗CEA第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。
隆抗体混合抗体中，用Eu 标记的抗CA724抗体、Tb 标记的抗CA199抗体、Sm 标记的抗
3+ 3+ 3+
CEA抗体的质量配比为：Eu 标记的抗CA724抗体:Tb 标记的抗CA199抗体:Sm 标记的抗CEA抗体=（3～6）:（3～7）:（5～9）。
具体实施方式
克隆抗体组成的混合抗体包被的微孔板；用Eu 标记的C7164抗体（抗CA724的抗体）、用
3+ 3+
Tb 标记的ab116024抗体（抗CA199的抗体）、用Sm 标记的MAM02-881抗体（抗CEA的抗体）三种单克隆抗体组成的混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；CA724、CEA、CA199三种标准品混合组成的质控品。该试剂盒还包括阴性对照、阳性对照、底物等其它相关试剂。
抗体三种单克隆抗体组成的混合抗体的制备方法为：将Eu 标记的C7164抗体、Tb 标记的
3+ 3+ 3+
ab116024抗体、Sm 标记的MAM02-881抗体以质量比：Eu 标记的C7164抗体:Tb 标记的
3+
ab116024抗体:Sm 标记的MAM02-881抗体=5:5:7混合，制得混合抗体。
均匀；置于摇床上4℃过夜，制得标记好的抗体C7164，即用Eu 标记的C7164抗体；
器吸取用Eu 标记的C7164抗体缓慢上样，用洗脱液进行洗脱，流速控制在1ml/min，蛋白检测仪检测到蛋白峰收集样品，将收集的目的产物经过0.22μm滤膜除菌；用比活度测定方法对标记抗体进行标记率的计算与分析。长期储存标记抗体可以将高纯度的BSA加入到标记抗体溶液中，BSA的终浓度为0.1%，可置于4℃或-20℃进行保存。
3+ 3+ 3+
标记抗体工作液中含有Eu 标记的C7164抗体50ng、Tb 标记的ab116024抗体50ng、Sm标记的MAM02-881抗体70ng，其余为分析缓冲液），震荡均匀，37℃温育1小时，用洗涤液洗
5次，在吸水纸上控干，加入200μl共用荧光增强剂的解离部分，震荡5分钟，加入20μl共用荧光增强剂的增强部分，震荡8分钟，在时间分辨荧光仪上测量荧光强度，激发光波长为
3+ 3+ 3+
315nm；647nm、612nm、544nm分别为Sm 、Eu 、Tb 的最强的发射光峰；500微秒、200微秒、
3+ 3+ 3+
50微秒分别为Eu 、Tb 、Sm 的延迟时间；分别测量各自的发光值。把不同浓度的CA724、CEA、CA199蛋白混合标准品中各指标分别和各自的发光值做标准曲线，得到不同指标的各自标准曲线，待测样品人体血清的浓度按标准曲线计算得出。得到试剂盒的精密度：CA724分析内和分析间的变异系数分别为2.9%～4.8%、4.1%～6.5%；CA199分析内和分析间的变异系数分别为3.9%～6.7%、4.8%～7.6%；CEA分析内和分析间的变异系数分别为4.7%～
7.5%、5.9%～8.9%。
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