白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用专利检索-预后指标生物学专利检索查询-专利查询网

白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用

阅读：568发布：2020-05-15

专利汇可以提供白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及生物标志物技术领域，具体提供白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用。本发明提供了白介素26可作为脓毒症的一个诊断指标；且白介素26可以作为评估脓毒症严重程度与预后的一个指标，可根据白介素26的表达水平来进行脓毒症的预后和/或治疗监测。，下面是白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用，其特征在于：所述白介素26作为生物标志物用于制备或筛选脓毒症诊断试剂，所述试剂用于脓毒症的诊断和/或预后和/或治疗监测。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂用于测定体液样品中IL-26的表达量。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述试剂通过ELISA双抗夹心法检测IL-26的表达量。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述体液样品中IL-26的表达量与脓毒症的严重程度正相关。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述体液样品选自血清。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂用于诊断或监测脓毒症的存在和/或过程和/或严重程度和/或预后。

说明书全文

白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中

的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及生物标志物技术领域，特别是涉及一种白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用。

背景技术

[0002] 脓毒症(sepsis)是一种临床表现广泛的综合征，由世界危重症医学协会(Society of Critical Care Medicine)和欧洲重症医学协会(European Society of Intensive Care Medicine)重新定义为“宿主抗感染免疫失调引起的危及生命的多器官功能障碍”。全球每年约有3150万患脓毒症，其中约有530万人因脓毒症死亡。尽管重症监护方面取得了巨大的进步，但是由于脓毒症患者的数量的绝对增加，脓毒症的死亡率仍然居高不下。因此，控制脓毒症已成为医学界有待解决的重大问题。

[0003] 脓毒症的发病机制十分复杂，目前主要认为是机体抗感染免疫失调所致。脓毒症早期，各种免疫细胞通过模式识别受体(PRR)识别病原相关分子模式(PAMP)与损伤相关分子模式(DAMP)，随即激活免疫应答，释放过量的促炎症介质，形成“细胞因子风暴”，促进炎症反应。促炎反应有利于病原体的清除，但也增加了机体的免疫损伤，导致多器官功能障碍。持续的促炎环境影响免疫效应细胞的功能状态，最终导致免疫细胞功能障碍和免疫麻痹。因此，免疫调控紊乱在脓毒症发生过程中起关键作用，而从脓毒症的不同病理生理阶段筛选出特征性的生物标志物继而加以针对性干预，是脓毒症个体化和靶向治疗的重要手段。

[0004] 脓毒症生物标志物的功能很多，主要用于对脓毒症诊断、预后评估和治疗监测，目前应用较多的生物标志物主要包括C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)等。CRP是一种非特异性急性时相蛋白，在感染性或非感染性触发炎症反应后的4-6小时升高，36-50小时达到高峰，它的水平随着炎症的消退而减低；但是，它的敏感性和特异性在区别有无细菌感染及细菌感染程度上受到限制。PCT水平的升高通常在感染早期，且比CRP要快，24-36小时达到高峰，对细菌感染有较高的特异性；但在非脓毒症或感染时，如外科手术、多发伤、烧伤、心源性休克及非细菌性全身炎症反应也有不同程度升高。现有的脓毒症生物标志物的敏感性和特异性不足，因此，寻找兼具高敏感性和特异性的生物标志物应用于临床脓毒症的诊断、预后和治疗监测具有重要意义。

发明内容

[0005] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用，用于解决现用于脓毒症诊断、预后评估、治疗监测的生物标志物在敏感性和特异性上不足的问题。

[0006] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用，所述白介素26作为生物标志物用于制备或筛选脓毒症诊断试剂，所述试剂用于脓毒症的诊断和/或预后和/或治疗监测。

[0007] 可选地，所述试剂用于测定体液样品中IL-26的表达量。

[0008] 可选地，所述试剂通过ELISA双抗夹心法检测IL-26的表达量。

[0009] 可选地，所述体液样品中IL-26的表达量与脓毒症的严重程度正相关。

[0010] 可选地，所述体液样品选自血清。

[0011] 可选地，所述试剂用于诊断或监测脓毒症的存在和/或过程和/或严重程度和/或预后。

[0012] 如上所述，本发明的白介素26作为生物标志物在制备或筛选脓毒症诊断试剂中的应用，具有以下有益效果：一方面，本发明提供了白介素26可以作为脓毒症的一个诊断指标；另一方面，本发明提供白介素26可以作为评估脓毒症严重程度与预后的一个指标，可根据白介素26的表达水平来进行脓毒症的预后和/或治疗监测。附图说明

[0013] 图1a显示为本发明实施例1中脓毒症患者和健康对照者的血液中IL-26表达量检测结果图。

[0014] 图1b显示为本发明实施例1中伴有休克的脓毒症患者和非休克的脓毒症患者的血液中IL-26表达量检测结果图。

[0015] 图1c显示为本发明实施例1中脓毒症死亡者和存活者的血液中IL-26表达量检测结果图。

[0016] 图1d显示为本发明实施例1中脓毒症患者体内IL-26的表达量与SOFA评分相关性分析结果图。

[0017] 图2显示为本发明实施例2中ROC曲线比较分析IL-26与PCT、CRP在脓毒症中的诊断效果示意图。

[0018] 图3显示为本发明实施例3中IL-26蛋白处理组小鼠及对照组小鼠的生存率统计图。

[0019] 图4显示为本发明实施例4中小鼠的肝肾功能损害检测结果图。

[0020] 图5显示为本发明实施例5中小鼠的器官病理切片与病理损伤评分图。

具体实施方式

[0021] 以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

[0022] 白细胞介素26(IL-26，白介素26)，原命名为AK155，是在2000年由Knappe等人在研究单纯疱疹病毒(HSV)的转化T细胞时，从基因文库中筛选到的一个新cDNA(AK155)。由于其氨基酸序列以及受体结构与IL-10家族成员具有一定的相似性，后成为IL-10细胞因子家族的成员，并被命名为IL-26。IL-26主要由上皮细胞和免疫细胞(Th17细胞、巨噬细胞)产生，其受体是由IL-20R1和IL-10R2组成的异二聚体。目前，关于IL-26的研究主要集中在慢性炎症性疾病中，如类风湿性关节炎、白塞氏病、克罗恩病和银屑病里面。相关文献报道在类风湿性关节炎(RA)患者血清及关节液中，IL-26表达水平明显提高，并且IL-26具有促进巨噬细胞上调促炎细胞因子表达的作用。同样，在白塞氏病(BD)患者血清中，IL-26表达水平也有明显提高，且能促进Th-17相关细胞因子如IL-17的表达。然而，IL-26在脓毒症方面的研究仍然是一片空白。

[0023] 本发明通过一系列的探究发现，IL-26参与了脓毒症的发生发展过程，并且可以作为一种良好的脓毒症的诊断、预后和治疗监测的生物标志物。

[0024] 首先通过ELISA法检测了52例脓毒症患者和30例健康体检对照者的血清IL-26表达水平，发现与健康对照者相比，脓毒症患者体内IL-26含量明显升高，伴有休克的脓毒症患者明显高于非休克的脓毒症患者，且脓毒症死亡者IL-26含量高于存活者；同时，我们通过相关性分析发现，IL-26水平与序贯器官衰竭评分(SOFA)呈正相关，并通过ROC曲线分析了PCT、CRP等指标，发现IL-26曲线下面积明显高于PCT、CRP等指标。因此，IL-26可以作为脓毒症的诊断指标，并可反应脓毒症的严重程度。

[0025] 进一步的，本发明通过盲肠结扎穿刺术(Cecal Ligation and Puncture，CLP)建立小鼠脓毒症模型，并给蛋白处理组小鼠腹腔注射IL-26重组蛋白，给对照组小鼠腹腔注射同等体积的PBS，发现蛋白处理组小鼠的生存率明显低于对照组小鼠的生存率；且组织HE染色结果也显示蛋白处理组小鼠的肝、肺、肾等器官的炎症细胞较较对照组小鼠浸润、充血更明显，组织病理评分更高；与此同时，肝肾功等生化指标也明显升高。这些结果均说明IL-26加重了脓毒症患者组织器官的损伤，可以作为评估脓毒症严重程度的指标。

[0026] 对以下实施例涉及的实验，说明如下：

[0027] 研究人群：收集2017年8月到2018年6月重庆医科大学第一附属医院诊治的脓毒症患者血液为试验组，同期健康体检者为健康对照组，试验组男女分别为35(67.3％)，17(32.7％)例，对照组男女分别为21(70.0％)例、9(30.0％)例。样本置于4℃1 400×g离心7min，之后冻存在-80℃，通过ELISA检测血清中的IL-26蛋白表达水平。患者均符合国际脓毒症会议中对该病的诊断标准Sepsis 3.0，排除患有恶性肿瘤、HIV感染、血红蛋白低于7g/mL或者存在活动性出血、需要两个单位以上的红细胞等情况，受试者所有研究均经重庆医科大学第一附属医院科学与伦理委员会批准。

[0028] 实验动物：野生型C57BL/6小鼠(Wild type，WT)雄性小鼠，体重为18-22g，约6-8周龄，购买自北京华阜康生物科技股份有限公司，饲养在重庆医科大学实验动物中心SPF(Specific Pathogen Free)级实验室，该实验所用小鼠均为SPF级实验动物。动物实验均严格遵循中华人民共和国科技部颁布的实验室动物照料及使用指南，符合重庆医科大学实验动物伦理会管理规定。实验动物许可证号：SCKK(渝)2012-0001。

[0029] 具体实施过程如下：

[0030] 实施例1

[0031] 脓毒症患者血液中IL-26含量的检测及SOFA评分相关性分析

[0032] 收集52例临床脓毒症患者(52例临床脓毒症患者中包括23例伴有休克的脓毒症患者和29例非休克的脓毒症患者，其中18例死亡，34例存活)及30例健康体检对照者当天的血清标本(参见表1)，进行对照试验，通过ELISA试剂盒(购自LifeSpan公司，货号LS-F4914)检测IL-26表达量，操作步骤严格按照试剂盒所附说明书执行，然后将检测结果用SPSS 19.0 软件做统计学分析，用GraphPad Prism 5.0软件作图。

[0033] 表1脓毒症患者及健康体检者数据统计结果

[0034]

[0035]

[0036] 图1a显示为脓毒症患者和健康对照者的血液中IL-26表达量检测结果图，图1b显示为伴有休克的脓毒症患者和非休克的脓毒症患者的血液中IL-26表达量检测结果图，图1c显示为脓毒症死亡者和存活者的血液中IL-26表达量检测结果图，图1d显示为脓毒症患者体内IL-26的表达量与SOFA评分相关性分析结果图。结果显示：与健康对照者相比，IL-26水平在脓毒症患者体内明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.001)；伴有休克的脓毒症患者体内的IL-26含量明显高于非休克的脓毒症患者体内的IL-26含量，差异具有统计学意义(P＜0.001)；脓毒症患者中，死亡者体内的IL-26含量显著高于存活者体内的IL-26(P＜
0.05)，且脓毒症患者体内IL-26的表达量与SOFA评分呈正相关。因此，IL-26可以作为临床脓毒症诊断的指标，并可提示脓毒症的严重程度。

[0037] 实施例2

[0038] ROC曲线分析比较血清IL-26、PCT及CRP对脓毒症预后的预测价值

[0039] 收集实施例1中的脓毒症患者存活及死亡患者的PCT、CRP及检测出的IL-26水平值，使用SPSS19.0软件绘制ROC曲线。

[0040] 图2显示为ROC曲线比较分析IL-26与PCT、CRP在脓毒症中的诊断效果示意图。结果显示：IL-26的曲线下面积(Area under the Curve，AUC)为0.690，而PCT与CRP的曲线下面积分别为0.552、0.370，IL-26的曲线下面积明显大于PCT及CRP，这表明，与比PCT、CRP相比，IL-26对脓毒症预后的预测价值更大。

[0041] 实施例3

[0042] 小鼠生存率实验

[0043] 首先建立小鼠脓毒症模型，脓毒症动物模型的建立采用盲肠结扎穿刺术(cecal ligation and puncture，CLP)，具体操作方法如下：选用成年C57小鼠，以100微升1.5％的戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，固定于操作板，腹部用宠物电推剪剃毛，消毒皮肤，于腹正中做1cm长的切口，结扎盲肠，以26号注射器针头穿刺，最后缝合伤口，消毒皮肤。(具体实验方法参考：Daniel Rittirsch，Peter A Ward，et al.Immunodesign of experimental sepsis by cecal ligation and puncture.Nat Protoc.2009；4(1)：31-36)。该建模方法是脓毒症动物模型的经典建模方法，且该模型是目前研究脓毒症的标准动物模型。)[0044] 选用30只成年C57小鼠，按照上述脓毒症动物模型建立方法建立小鼠脓毒症模型，然后均分为三组，两组为蛋白处理组，一组为对照组；分别给其中一组蛋白处理组的小鼠腹腔注射体积为100ul，剂量为500ng的重组IL-26蛋白(R&D systems，1870-IL-010)，另一组蛋白处理组的小鼠腹腔注射体积为100ul，剂量为1.0ug的重组IL-26蛋白(R&D systems，1870-IL-010)，给对照组的小鼠腹腔注射同等体积的无菌PBS；每天观察两次小鼠的生存情况，并记录体重，连续两周左右，直至小鼠不再死亡。

[0045] 图3显示为IL-26蛋白处理组小鼠及对照组小鼠的生存率统计图。结果显示：500ng IL-26处理组的小鼠生存率为40％，而1ug IL-26蛋白处理组的小鼠生存率为20％，均明显低于生存率为80％的对照组，说明IL-26增加脓毒症小鼠的死亡率，在小鼠体内发挥损害作用，即表明IL-26可作为评估脓毒症严重程度的指标。

[0046] 实施例4

[0047] 小鼠肝肾功等能生化指标检测

[0048] 选用10只成年C57小鼠，按照实施例3中所述的脓毒症动物模型建立方法建立小鼠脓毒症模型，并均分为蛋白处理组和对照组，并按照实施例3中同样的方法分别对两组小鼠注射同等体积的IL-26蛋白和PBS。

[0049] 48小时后，取小鼠心脏血，离心后取上清，检测肝肾功指标如丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)以及肌酐(Creatinine)。

[0050] 图4显示为小鼠的肝肾功能损害检测结果图。结果显示：与对照组相比，IL-26蛋白处理组小鼠的肝肾功指标ALT、AST、LDH、Creatinin明显升高，且差异具体统计学意义(P＜0.05)，说明对于脓毒症患者而言，IL-26会加重组织器官的损伤，因此，IL-26可以作为可以作为评估脓毒症严重程度的指标。

[0051] 实施例5

[0052] 小鼠组织病理学检测

[0053] 选用10只成年C57小鼠，按照实施例3中所述的脓毒症动物模型建立方法建立小鼠脓毒症模型，并均分为蛋白处理组和对照组，并按照实施例3中同样的方法分别对两组小鼠注射同等体积的IL-26蛋白和PBS。

[0054] 48小时后，取小鼠肝、脾、肺、肾等组织器官，于4％多聚甲醛中固定24～48小时，分别进行脱水、浸蜡、包埋、切片，经HE染色后于显微镜下镜检。

[0055] 图5显示为小鼠的器官病理切片与病理损伤评分图。结果显示：与对照组相比，IL-26蛋白处理组的小鼠组织器官炎症细胞浸润、充血水肿更明显，且病理评分具有统计学意义(P＜0.05)，说明IL-26加重了脓毒症患者组织器官的损伤，可以作为评估脓毒症严重程度的指标。

[0056] 综上所述，本发明发现IL-26在临床脓毒症患者体内的表达量明显高于健康体检者，且与脓毒症患者的SOFA评分呈正相关，并通过ROC曲线分析发现IL-26可作为预测脓毒症预后的一个新的生物学标志物；并进一步经过体内动物实验发现，IL-26蛋白会加重脓毒症小鼠组织器官的损伤，增加小鼠的死亡率，在小鼠体内发挥损害作用。因此，本发明提供IL-26作为脓毒症感染的诊断、预后和治疗监测的指标，并可以评估脓毒症严重程度。

[0057] 上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

标题	发布/更新时间	阅读量
白介素26作为生物标志物在诊断、预后或治疗监测脓毒症中的应用	2020-05-15	568
一种卵巢癌诊断或预后组合物及其应用	2020-05-13	237
通过结直肠癌免疫学指标CD3阳性表达量对结直肠癌患者的预后进行评价的方法	2020-05-12	841
C9orf139和MIR600HG作为胰腺癌预后标志物及其确立方法	2020-05-24	838
用于测定乳腺癌预后以及是否使用化疗的装置和方法	2020-05-19	507
用于肝癌切除术后预后的免疫组化检测试剂盒	2020-05-25	451
用于测定乳腺癌预后以及是否使用化疗的装置和方法	2020-05-19	216
用于VEGF的ELISA	2020-05-22	586
一种基于GALNT2基因的非小细胞肺癌辅助诊断、预后评价试剂盒及其使用方法	2020-05-24	1015
用于VEGF的ELISA	2020-05-21	48