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一种石油污染场地微 生物修复技术

阅读：0发布：2020-08-07

专利汇可以提供一种石油污染场地微生物修复技术专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种石油污染场地微生物修复技术，涉及土壤修复技术领域。本发明的石油污染场地微生物修复技术的主要步骤为(1)降油微生物的筛选→(2)杨木混合液对石油污染土壤的预处理→(3)海藻酸钠混合液对石油污染土壤的二次处理→(4)射线与氯化钙对石油污染土壤的处理→(5)降油微生物的施入。本发明广阔的修复技术在对石油污染土壤进行修复后可有效降低土壤中的含油率，有效提高修复效果，并对深层土壤也具有良好的修复效果。，下面是一种石油污染场地微生物修复技术专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，主要包括以下步骤:
(1)降油微生物的筛选；
(2)用杨木混合水解液对石油污染土壤进行预处理；
(3)用海藻酸钠混合溶液对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行二次处理；
(4)用射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射后，并加入氯化钙溶液；
(5)将步骤(1)所得降油微生物分散后施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤的含水量，恒温培养。
2.根据权利要求1所述的一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，主要包括以下步骤:
(1)降油菌的筛选：
(a)初筛：将35g被石油污染的土壤接入200～300mL细菌培养液中，于温度为为30℃的条件下恒温培养30h，得混合培养液，取5～10mL混合培养液接入200mL混合无机盐培养基中，于温度为30℃的条件下恒温培养2～3h后，得富集培养液，将富集培养液涂布于固体平板细菌培养基上，待长出菌落后划线培养，分离得降解石油微生物坯料；
(b)复筛：将步骤(a)所得降解石油微生物坯料接种入降油培养基中，于温度为30℃的条件下混合培养7天后，分离，得降解石油微生物；
(2)将杨木水解液与葡萄糖按质量比50：1混合，并加入杨木水解液质量0.08～0.12倍的浓度为2％的木醋杆菌菌液，搅拌混合后，得杨木混合水解液，将杨木混合水解液以3～
6kg/m2的使用量施入石油污染土壤中，并控制石油污染土壤含水量为25％，于温度为30℃的条件下恒温培养5～7天；
(3)将海藻酸钠与γ-聚谷氨酸按质量比1：1混合，并加入海藻酸钠质量30～50倍的水，搅拌混合，得海藻酸钠混合溶液，将海藻酸钠混合溶液以2～4kg/m2的使用量施入经步骤(2)处理的石油污染土壤中，于温度为60℃的条件下恒温放置10～12h；
(4)用γ-射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射，持续2～5h后，再向经照射后的石油污染土壤中按1～2kg/m2的用量施入质量分数为8％的氯化钙溶液；
(5)将步骤(1)所得降油微生物与水按质量比1：60进行分散，得降油微生物分散液，将降油微生物分散液以2～5kg/m2的使用量施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤含水量为15％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天。
3.根据权利要求2所述的一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，步骤(1)所述细菌培养液为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.1～0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.1～0.3倍的胰蛋白胨和葡萄糖质量0.1倍的琼脂，搅拌混合后，灭菌，得细菌培养液。
4.根据权利要求2所述的一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，步骤(1)所述混合无机培养基为将琼脂与水按质量比1:50混合，并加入琼脂质量0.3倍的磷酸二氢钾，琼脂质量0.1倍的硫酸亚铁，琼脂质量0.06倍的硝酸铵和琼脂质量0.3倍的石油，搅拌混合，得混合无机盐培养基。
5.根据权利要求2所述的一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，步骤(1)所述降油培养基为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.1～0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨，葡萄糖质量0.1倍的琼脂和葡萄糖质量0.2倍的石油，搅拌混合，得降油培养基。
6.根据权利要求2所述的一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，步骤(2)所述杨木水解液为将杨木粉与水按质量比1：20混合，并加入杨木粉质量3～8倍的质量分数为
5％的稀硫酸，搅拌反应后，得杨木预水解液，将杨木预水解液用质量分数为5％的氢氧化钠溶液调节pH至5，并加入杨木预水解液质量0.1倍的纤维素酶，搅拌反应后，抽滤，得杨木水解液。
7.根据权利要求2所述的一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，步骤(4)所
60
述γ-射线为Co -γ射线，辐照剂量率为每平方米0.86kGy/h。

说明书全文

一种石油污染场地微生物修复技术

技术领域

[0001] 本发明涉及土壤修复技术领域，具体是一种石油污染场地微生物修复技术。

背景技术

[0002] 土壤污染是由于人类活动致使某些有害成分的含量明显高于土壤的原有含量而超过土壤的自净能力，由此引起土壤的组成、结构和功能发生变化，有害物质或其分解产物在土壤中逐渐积累，达到危害人体健康的程度。石油污染土壤产生于石油勘探、开采、运输、存储、加工、事故性泄漏等许多环节中，是石油工业产生的废弃物。含油污泥含有高分子有机物等有毒有害物质，若不进行有效的妥善处置，会引起土壤、地下水、水系和海洋的严重污染，对人体健康造成危害与影响。

[0003] 由于成本、技术等条件的限制，各大油田的石油污染土壤要么集中起来存放，但是在存放后，通常不做进一步处理或进行小规模但成本较高的技术处理，例如：超声辐射离旋分离法、化学搅拌分离法、热洗法、热解处理法、螺旋炉排焚烧炉法、有机溶剂萃取法、预制床法、生物反应器法等等。这些方法大多数属于异位修复方法，需要挪动污染土壤集中处理，不仅成本高昂、处理量有限，而且容易造成二次污染。

[0004] 微生物原位修复技术是指利用特定的微生物吸收、转化、清除或降解土壤石油污染物实现土壤净化的生物措施。该技术可以使石油污染物从土壤中去除，对周围环境影响较小，不会产生二次污染，具有的巨大土壤修复潜力。但现有的石油污染土壤的微生物修复技术存在一定的局限性，如微生物修复持续时间长、效果不彻底、不适合于严重污染土壤的修复等。

[0005] 大量研究表明，限制石油污染土壤微生物原位修复技术发展的一个主要因素是污染土壤通常缺乏足够的氧气和营养以供降解石油的微生物快速生长，以至这些微生物自身具备的治理潜力得不到充分发挥，未能成为较为理想的土壤石油污染治理措施。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于提供一种石油污染场地微生物修复技术，以解决现有技术中的问题。

[0007] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

[0008] 一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，主要包括以下步骤:

[0009] (1)降油微生物的筛选；

[0010] (2)用杨木混合水解液对石油污染土壤进行预处理；

[0011] (3)用海藻酸钠混合溶液对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行二次处理；

[0012] (4)用射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射后，并加入氯化钙溶液；

[0013] (5)将步骤(1)所得降油微生物分散后施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤的含水量，恒温培养。

[0014] 作为优化，所述石油污染场地微生物修复技术，主要包括以下步骤:

[0015] (1)降油菌的筛选：

[0016] (a)初筛：将35g被石油污染的土壤接入200～300mL细菌培养液中，于温度为为30℃的条件下恒温培养30h，得混合培养液，取5～10mL混合培养液接入200mL混合无机盐培养基中，于温度为30℃的条件下恒温培养2～3h后，得富集培养液，将富集培养液涂布于固体平板细菌培养基上，待长出菌落后划线培养，分离得降解石油微生物坯料；

[0017] (b)复筛：将步骤(a)所得降解石油微生物坯料接种入降油培养基中，于温度为30℃的条件下混合培养7天后，分离，得降解石油微生物；

[0018] (2)将杨木水解液与葡萄糖按质量比50：1混合，并加入杨木水解液质量0.08～0.12倍的浓度为2％的木醋杆菌菌液，搅拌混合后，得杨木混合水解液，将杨木混合水解液以3～6kg/m2的使用量施入石油污染土壤中，并控制石油污染土壤含水量为25％，于温度为
30℃的条件下恒温培养5～7天；

[0019] (3)将海藻酸钠与γ-聚谷氨酸按质量比1：1混合，并加入海藻酸钠质量30～50倍的水，搅拌混合，得海藻酸钠混合溶液，将海藻酸钠混合溶液以2～4kg/m2的使用量施入经步骤(2)处理的石油污染土壤中，于温度为60℃的条件下恒温放置10～12h；

[0020] (4)用γ-射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射，持续2～5h后，再向经2
照射后的石油污染土壤中按1～2kg/m的用量施入质量分数为8％的氯化钙溶液；

[0021] (5)将步骤(1)所得降油微生物与水按质量比1：60进行分散，得降油微生物分散液，将降油微生物分散液以2～5kg/m2的使用量施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤含水量为15％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天。

[0022] 作为优化，步骤(1)所述细菌培养液为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.1～0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.1～0.3倍的胰蛋白胨和葡萄糖质量0.1倍的琼脂，搅拌混合后，灭菌，得细菌培养液。

[0023] 作为优化，步骤(1)所述混合无机培养基为将琼脂与水按质量比1:50混合，并加入琼脂质量0.3倍的磷酸二氢钾，琼脂质量0.1倍的硫酸亚铁，琼脂质量0.06倍的硝酸铵和琼脂质量0.3倍的石油，搅拌混合，得混合无机盐培养基。

[0024] 作为优化，步骤(1)所述降油培养基为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.1～0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨，葡萄糖质量0.1倍的琼脂和葡萄糖质量0.2倍的石油，搅拌混合，得降油培养基。

[0025] 作为优化，步骤(2)所述杨木水解液为将杨木粉与水按质量比1：20混合，并加入杨木粉质量3～8倍的质量分数为5％的稀硫酸，搅拌反应后，得杨木预水解液，将杨木预水解液用质量分数为5％的氢氧化钠溶液调节pH至5，并加入杨木预水解液质量0.1倍的纤维素酶，搅拌反应后，抽滤，得杨木水解液。

[0026] 作为优化，步骤(4)所述γ-射线为Co60-γ射线，辐照剂量率为每平方米0.86kGy/h。

[0027] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：

[0028] 本发明在利用微生物对石油污染土壤进行修复时，先用含有木醋杆菌的杨木混合液处理石油污染土壤，然后加入含有γ-聚谷氨酸的海藻酸钠溶液，经辐射和氯化钙交联后，在施入降油微生物分散液；首先，用含有木醋杆菌的杨木混合液处理石油污染土壤可使木醋杆菌均匀分布与土壤之中，在培养过后，可在土壤内部形成串联的细菌纤维素网络；其次加入含有γ-聚谷氨酸的海藻酸钠溶液，并用辐射和氯化钙依次交联，在辐射的作用下，γ-聚谷氨酸可与细菌纤维素间形成有效的交流，从而在土壤内部形成水凝胶结构，同事，由于溶液中含有海藻酸钠，因此海藻酸钠可被先交联的γ-聚谷氨酸固定与细菌纤维素周围，并在之后钙离子的作用下再次交联；最后，在施入降油微生物分散液后，由于经钙离子交联的海藻酸钠可吸附固定降油微生物，因此，降油微生物可吸附于细菌纤维素周围，并且可在细菌纤维素上进行迁移，从而提高石油的降解率，进而提高土壤的修复效果，与此同时，由于先加入的木醋杆菌在后续出来中死亡，可作为降油微生物的营养成分，促进降油微生物的繁殖，进而进一步提高土壤的修复效果。

具体实施方式

[0029] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0030] 为了更清楚的说明本发明提供的方法通过以下实施例进行详细说明，在以下实施例中经微生物修复的石油污染场地的各项指标测试方法如下：

[0031] 含油率：将各实施例修复后的土壤与对比例修复后的土壤用红外测油机测试一个月后每100g土壤中的含油率，并分别测试3m、6m和10m处的土壤含油率。

[0032] 实施例1

[0033] 一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，主要包括以下步骤:

[0034] (1)降油微生物的筛选；

[0035] (2)用杨木混合水解液对石油污染土壤进行预处理；

[0036] (3)用海藻酸钠混合溶液对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行二次处理；

[0037] (4)用射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射后，并加入氯化钙溶液；

[0038] (5)将步骤(1)所得降油微生物分散后施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤的含水量，恒温培养。

[0039] 作为优化，所述石油污染场地微生物修复技术，主要包括以下步骤:

[0040] (1)降油菌的筛选：

[0041] (a)初筛：将35g被石油污染的土壤接入300mL细菌培养液中，于温度为为30℃的条件下恒温培养30h，得混合培养液，取6mL混合培养液接入200mL混合无机盐培养基中，于温度为30℃的条件下恒温培养3h后，得富集培养液，将富集培养液涂布于固体平板细菌培养基上，待长出菌落后划线培养2天后，分离得降解石油微生物坯料；

[0042] (b)复筛：将步骤(a)所得降解石油微生物坯料接种入降油培养基中，于温度为30℃的条件下混合培养7天后，分离，得降解石油微生物；

[0043] (2)将杨木水解液与葡萄糖按质量比50：1混合，并向杨木水解液与葡萄糖的混合物中加入杨木水解液质量0.12倍的浓度为2％的木醋杆菌菌液，于温度为30℃，转速为2
300r/min的条件下搅拌混合80min后，得杨木混合水解液，将杨木混合水解液以5kg/m的使用量施入石油污染土壤中，并控制石油污染土壤含水量为25％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天；

[0044] (3)将海藻酸钠与γ-聚谷氨酸按质量比1：1混合，并向海藻酸钠与γ-聚谷氨酸的混合物中加入海藻酸钠质量50倍的水，于温度为40℃，转速为320r/min的条件下搅拌混合45min后，得海藻酸钠混合溶液，将海藻酸钠混合溶液以4kg/m2的使用量施入经步骤(2)处理的石油污染土壤中，于温度为60℃的条件下恒温放置12h；

[0045] (4)用γ-射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射，持续5h后，再向经照射后的石油污染土壤中按2kg/m2的用量施入质量分数为8％的氯化钙溶液；

[0046] (5)将步骤(1)所得降油微生物与水按质量比1：60进行分散，得降油微生物分散2
液，将降油微生物分散液以5kg/m的使用量施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤含水量为15％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天。

[0047] 作为优化，步骤(1)所述细菌培养液为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨和葡萄糖质量0.1倍的琼脂，搅拌混合后，灭菌，得细菌培养液。

[0048] 作为优化，步骤(1)所述混合无机培养基为将琼脂与水按质量比1:50混合，并加入琼脂质量0.3倍的磷酸二氢钾，琼脂质量0.1倍的硫酸亚铁，琼脂质量0.06倍的硝酸铵和琼脂质量0.3倍的石油，搅拌混合，得混合无机盐培养基。

[0049] 作为优化，步骤(1)所述降油培养基为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨，葡萄糖质量0.1倍的琼脂和葡萄糖质量0.2倍的石油，搅拌混合，得降油培养基。

[0050] 作为优化，步骤(2)所述杨木水解液为将杨木粉与水按质量比1：20混合，并加入杨木粉质量8倍的质量分数为5％的稀硫酸，搅拌反应后，得杨木预水解液，将杨木预水解液用质量分数为5％的氢氧化钠溶液调节pH至5，并加入杨木预水解液质量0.1倍的纤维素酶，搅拌反应后，抽滤，得杨木水解液。

[0051] 作为优化，步骤(4)所述γ-射线为Co60-γ射线，辐照剂量率为每平方米0.86kGy/h。

[0052] 实施例2

[0053] 一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，主要包括以下步骤:

[0054] (1)降油微生物的筛选；

[0055] (2)用杨木混合水解液对石油污染土壤进行预处理；

[0056] (3)用海藻酸钠混合溶液对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行二次处理；

[0057] (4)用射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射后，并加入氯化钙溶液；

[0058] (5)将步骤(1)所得降油微生物分散后施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤的含水量，恒温培养。

[0059] 作为优化，所述石油污染场地微生物修复技术，主要包括以下步骤:

[0060] (1)降油菌的筛选：

[0061] (a)初筛：将35g被石油污染的土壤接入300mL细菌培养液中，于温度为为30℃的条件下恒温培养30h，得混合培养液，取6mL混合培养液接入200mL混合无机盐培养基中，于温度为30℃的条件下恒温培养3h后，得富集培养液，将富集培养液涂布于固体平板细菌培养基上，待长出菌落后划线培养2天后，分离得降解石油微生物坯料；

[0062] (b)复筛：将步骤(a)所得降解石油微生物坯料接种入降油培养基中，于温度为30℃的条件下混合培养7天后，分离，得降解石油微生物；

[0063] (2)将海藻酸钠与γ-聚谷氨酸按质量比1：1混合，并向海藻酸钠与γ-聚谷氨酸的混合物中加入海藻酸钠质量50倍的水，于温度为40℃，转速为320r/min的条件下搅拌混合45min后，得海藻酸钠混合溶液，将海藻酸钠混合溶液以4kg/m2的使用量施入石油污染土壤中，于温度为60℃的条件下恒温放置12h；

[0064] (3)用γ-射线对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行照射，持续5h后，再向经照射后的石油污染土壤中按2kg/m2的用量施入质量分数为8％的氯化钙溶液；

[0065] (4)将步骤(1)所得降油微生物与水按质量比1：60进行分散，得降油微生物分散液，将降油微生物分散液以5kg/m2的使用量施入经步骤(3)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤含水量为15％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天。

[0066] 作为优化，步骤(1)所述细菌培养液为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨和葡萄糖质量0.1倍的琼脂，搅拌混合后，灭菌，得细菌培养液。

[0067] 作为优化，步骤(1)所述混合无机培养基为将琼脂与水按质量比1:50混合，并加入琼脂质量0.3倍的磷酸二氢钾，琼脂质量0.1倍的硫酸亚铁，琼脂质量0.06倍的硝酸铵和琼脂质量0.3倍的石油，搅拌混合，得混合无机盐培养基。

[0068] 作为优化，步骤(1)所述降油培养基为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨，葡萄糖质量0.1倍的琼脂和葡萄糖质量0.2倍的石油，搅拌混合，得降油培养基。

[0069] 作为优化，步骤(3)所述γ-射线为Co60-γ射线，辐照剂量率为每平方米0.86kGy/h。

[0070] 实施例3

[0071] 一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，主要包括以下步骤:

[0072] (1)降油微生物的筛选；

[0073] (2)用杨木混合水解液对石油污染土壤进行预处理；

[0074] (3)用海藻酸钠混合溶液对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行二次处理；

[0075] (4)用射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射后，并加入氯化钙溶液；

[0076] (5)将步骤(1)所得降油微生物分散后施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤的含水量，恒温培养。

[0077] 作为优化，所述石油污染场地微生物修复技术，主要包括以下步骤:

[0078] (1)降油菌的筛选：

[0079] (a)初筛：将35g被石油污染的土壤接入300mL细菌培养液中，于温度为为30℃的条件下恒温培养30h，得混合培养液，取6mL混合培养液接入200mL混合无机盐培养基中，于温度为30℃的条件下恒温培养3h后，得富集培养液，将富集培养液涂布于固体平板细菌培养基上，待长出菌落后划线培养2天后，分离得降解石油微生物坯料；

[0080] (b)复筛：将步骤(a)所得降解石油微生物坯料接种入降油培养基中，于温度为30℃的条件下混合培养7天后，分离，得降解石油微生物；

[0081] (2)将杨木水解液与葡萄糖按质量比50：1混合，并向杨木水解液与葡萄糖的混合物中加入杨木水解液质量0.12倍的浓度为2％的木醋杆菌菌液，于温度为30℃，转速为300r/min的条件下搅拌混合80min后，得杨木混合水解液，将杨木混合水解液以5kg/m2的使用量施入石油污染土壤中，并控制石油污染土壤含水量为25％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天；

[0082] (3)将海藻酸钠与水按质量比1：50混合，于温度为40℃，转速为320r/min的条件下搅拌混合45min后，得海藻酸钠混合溶液，将海藻酸钠混合溶液以4kg/m2的使用量施入经步骤(2)处理的石油污染土壤中，于温度为60℃的条件下恒温放置12h；

[0083] (4)用γ-射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射，持续5h后，再向经照射2
后的石油污染土壤中按2kg/m的用量施入质量分数为8％的氯化钙溶液；

[0084] (5)将步骤(1)所得降油微生物与水按质量比1：60进行分散，得降油微生物分散液，将降油微生物分散液以5kg/m2的使用量施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤含水量为15％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天。

[0085] 作为优化，步骤(1)所述细菌培养液为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨和葡萄糖质量0.1倍的琼脂，搅拌混合后，灭菌，得细菌培养液。

[0086] 作为优化，步骤(1)所述混合无机培养基为将琼脂与水按质量比1:50混合，并加入琼脂质量0.3倍的磷酸二氢钾，琼脂质量0.1倍的硫酸亚铁，琼脂质量0.06倍的硝酸铵和琼脂质量0.3倍的石油，搅拌混合，得混合无机盐培养基。

[0087] 作为优化，步骤(1)所述降油培养基为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨，葡萄糖质量0.1倍的琼脂和葡萄糖质量0.2倍的石油，搅拌混合，得降油培养基。

[0088] 作为优化，步骤(2)所述杨木水解液为将杨木粉与水按质量比1：20混合，并加入杨木粉质量8倍的质量分数为5％的稀硫酸，搅拌反应后，得杨木预水解液，将杨木预水解液用质量分数为5％的氢氧化钠溶液调节pH至5，并加入杨木预水解液质量0.1倍的纤维素酶，搅拌反应后，抽滤，得杨木水解液。

[0089] 作为优化，步骤(4)所述γ-射线为Co60-γ射线，辐照剂量率为每平方米0.86kGy/h。

[0090] 对比例

[0091] 一种石油污染场地微生物修复技术，其特征在于，主要包括以下步骤:

[0092] (1)降油微生物的筛选；

[0093] (2)用杨木混合水解液对石油污染土壤进行预处理；

[0094] (3)用海藻酸钠混合溶液对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行二次处理；

[0095] (4)用射线对经步骤(3)处理的石油污染土壤进行照射后，并加入氯化钙溶液；

[0096] (5)将步骤(1)所得降油微生物分散后施入经步骤(4)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤的含水量，恒温培养。

[0097] 作为优化，所述石油污染场地微生物修复技术，主要包括以下步骤:

[0098] (1)降油菌的筛选：

[0099] (a)初筛：将35g被石油污染的土壤接入300mL细菌培养液中，于温度为为30℃的条件下恒温培养30h，得混合培养液，取6mL混合培养液接入200mL混合无机盐培养基中，于温度为30℃的条件下恒温培养3h后，得富集培养液，将富集培养液涂布于固体平板细菌培养基上，待长出菌落后划线培养2天后，分离得降解石油微生物坯料；

[0100] (b)复筛：将步骤(a)所得降解石油微生物坯料接种入降油培养基中，于温度为30℃的条件下混合培养7天后，分离，得降解石油微生物；

[0101] (2)将海藻酸钠与水按质量比1：50混合，于温度为40℃，转速为320r/min的条件下搅拌混合45min后，得海藻酸钠混合溶液，将海藻酸钠混合溶液以4kg/m2的使用量施入石油污染土壤中，于温度为60℃的条件下恒温放置12h；

[0102] (3)用γ-射线对经步骤(2)处理的石油污染土壤进行照射，持续5h后，再向经照射2
后的石油污染土壤中按2kg/m的用量施入质量分数为8％的氯化钙溶液；

[0103] (4)将步骤(1)所得降油微生物与水按质量比1：60进行分散，得降油微生物分散液，将降油微生物分散液以5kg/m2的使用量施入经步骤(3)处理的石油污染土壤中，控制石油污染土壤含水量为15％，于温度为30℃的条件下恒温培养7天。

[0104] 作为优化，步骤(1)所述细菌培养液为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨和葡萄糖质量0.1倍的琼脂，搅拌混合后，灭菌，得细菌培养液。

[0105] 作为优化，步骤(1)所述混合无机培养基为将琼脂与水按质量比1:50混合，并加入琼脂质量0.3倍的磷酸二氢钾，琼脂质量0.1倍的硫酸亚铁，琼脂质量0.06倍的硝酸铵和琼脂质量0.3倍的石油，搅拌混合，得混合无机盐培养基。

[0106] 作为优化，步骤(1)所述降油培养基为将葡萄糖与水按质量比1:10混合，并加入葡萄糖质量0.3倍的氯化钠，葡萄糖质量0.2倍的胰蛋白胨，葡萄糖质量0.1倍的琼脂和葡萄糖质量0.2倍的石油，搅拌混合，得降油培养基。

[0107] 作为优化，步骤(3)所述γ-射线为Co60-γ射线，辐照剂量率为每平方米0.86kGy/h。

[0108] 效果例

[0109] 下表1给出了采用本发明实施例1至3经修复后的石油污染土壤与对比例经修复后的石油污染土壤含油量分析结果。

[0110] 表1

[0111]

[0112]

[0113] 从表1中实施例1与对比例的实验数据比较可发现，微生物修复石油污染土壤过程中加入杨木混合液与γ-聚谷氨酸可有效提高修复技术对土壤的修复效果，减少土壤中的石油含量；从实施例1与实施例2的实验数据比较可发现，当在修复过程中不加入杨木混合液时，被石油污染的土壤中无法形成交联的细菌纤维素网络，从而无法时降油微生物在土壤中的迁移，从而降低修复效果；从实施例1与实施例3的实验数据比较可发现，当修复过程中不加入γ-聚谷氨酸时，海藻酸钠无法在细菌纤维素周围形成凝胶，从而不利于降油微生物在土壤中的均匀分布，进而降低修复效果。

[0114] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何标记视为限制所涉及的权利要求。

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