技术领域
[0001] 本
发明涉及细菌性阴道病的检测，具体涉及细菌性阴道病的检测试剂盒及唾液酸酶检测方法。
背景技术
[0002] 细菌性阴道病(Bacterial Vaginosis，简称BV)是已婚妇女最常见的下生殖道感染之一，是指一类在细菌学上表现为生殖道正常菌群(产H2O2的乳酸杆菌)减少，代之以一组厌
氧菌群(类杆菌属族、加德纳菌、莫比伦氏菌属、人型支原体菌属和消化链球菌属等)数量增加所致的临床症候群。BV是妇科常见
疾病之一，感染率在15-50％，且容易复发。患BV的妇女有50％的人易早产或者分娩低体重儿，她们所生的孩子也很可能带有各种后遗症。越来越多的证据表明，BV是导致组织性绒毛膜炎、
羊水感染、剖腹产后子宫内膜炎及其它妊娠不良和妊娠并发症的危险因素。另外在妇科，BV主要与输卵管炎、盆腔炎、宫外孕、不孕症、泌尿系感染、术后感染及妇科
肿瘤有关。阴道炎是妇女最常见的疾病，
宫颈炎也存在较高的发病率。当炎性患者自我症状比较轻微时，容易造成误诊，常常延误了
治疗，并有可能并发输卵管炎、子宫内膜炎而导致不孕及流产。
[0003] 1983年Amsel等经过多年的研究及临床观察，提出四项综合临床指标作为诊断BV的依据，即①用精密
试纸测定阴道pH值，阴道分泌物pH值＞4.5；②胺试验阳性，用
棉拭子取阴道分泌物，加1滴1％KOH闻有无鱼腥样气味，若有为阳性；③查见线索细胞，线索细胞为阴道脱落上皮细胞表面黏附许多小杆菌，边缘不清；④革兰
染色镜检找到大量阴道加特纳菌(CV)，而乳酸杆菌少(1～5个/HP)，甚至缺乏。具备以上4项指标中至少3项，其中线索细胞阳性为必备条件，即可确诊BV。该方法被认为是诊断BV的“金标准”，习惯上称为Amsel法。
[0004] Amsel法4项指标中除镜检发现线索细胞外，其他标准影响因素较多，如精液中
碱性物质的刺激可使胺试验呈阳性，胺试验对诊断与否均可导致上生殖道及围产期并发症。因此Amsel诊断标准不易掌握，易受人为因素影响，而采用细菌培养，结果繁琐，费时，不利于患者及时诊治，限制了推广应用。
[0005] 在BV的诊断方面，临床上最为普遍采用的方法有传统的Amsel方法(如上所述)，然而要在实际中准确实施并非易事。首先，一些与感染无关的因素如近期性交、阴道灌洗、行经或是存在大量子宫颈粘液等同样可以导致阴道pH值升高，或使分泌物产生异味；胺试验中对气味的
鉴别因人而异；而对于作为BV诊断最佳标志的线索细胞的识别则受到显微设备的
质量、样本的采集以及操作者的经验等诸多因素的共同影响，主观性强，因而很难对判定结果进行统计和比较。
[0006] 研究表明，阴道分泌物中唾液酸酶活性与BV之间存在一定的量的关系，患BV的妇女，其阴道分泌物中含有产生唾液酸酶的细菌，无BV的妇女阴道分泌物中不显示异常的唾液酸酶活性。
发明内容
[0007] 本发明的目的是提供一种细菌性阴道病检测试剂盒，实验过程简单，针对性强，准确性高，操作快捷方便。
[0008] 本发明的技术方案为提供一种细菌性阴道病检测试剂盒，包括反应液和显色液，所述反应液包括酶底物，糖类，
醋酸钾缓冲液，所述酶底物为乙酰神经
氨酸及其盐，所述显色液为氢氧化钠溶液。
[0009] 优选的，所述反应液中乙酰神经氨酸盐质量浓度为0.1-10mg/ml，所述反应液中糖类的质量浓度为1-35mg/L，所述糖类为海藻糖或
蔗糖，所述反应液中醋酸钾缓冲液摩尔浓度为0.01-1mol/L。
[0010] 优选的，所述乙酰神经氨酸盐为5-溴-4氯-3吲哚基乙酰神经氨酸钠盐，所述反应液中5-溴-4氯-3吲哚基乙酰神经氨酸钠盐的质量浓度为0.1-10mg/ml。
[0011] 优选的，所述显色液为0.1-5mol/L的氢氧化钠溶液。
[0012] 本发明的另一个技术方案为提供一种唾液酸酶检测方法，取样品拭子与乙酰神经氨酸及其盐作为酶底物的反应液
接触，样品拭子浸入反应液中于37℃保温，10分钟后，加入20-100μl显色液，观察样品拭子的
颜色变化，最终样品拭子的颜色为绿色或者蓝色为阳性，黄色为阴性。
[0013] 本发明的有益效果为简化BV诊断的实验方法、结果判读，使用唾液酸苷酶法进行判别有以下进步：1、大大节省实验时间，所有实验操作在十几分钟内完成，不需使用其他复杂设备，只需提供37℃的
烤箱或者
培养箱。2、判读步骤，快速、直观，极大降低了误操作率、误诊率3、本检测卡灵敏、准确、便捷，与BV金标准Amsel法符合率高。
具体实施方式
[0014] 下面通过
实施例对本发明作进一步的描述。
[0015] 细菌性阴道病(BV)感染与阴道分泌物中唾液酸酶的活性和阴道中存在的厌氧菌的代谢产物组织多胺有密切关系。唾液酸酶活性与组织多胺量的变化都表示着BV患者不同程度的感染，这两项指标是目前检测BV最有效和最准确的。临床“金标准”诊断方法(即Amsel法)为：
[0016] 1、阴道分泌物均匀、变稀：
[0017] 2、pH＞4.5；
[0018] 3、胺试验阳性：
[0019] 4、细胞涂片有线索细胞。以上四项特征中的三项出现阳性就可诊断BV。
[0020] 唾液酸苷酶又称神经氨酸苷酶，在阴道环境中，唾液酸苷酶活性与BV密切相关，是BV致病菌所产生的特异性酶之一，其在阴道分泌物中的活性与BV发病的严重程度成正比。唾液酸苷酶底物经阴道内唾液酸苷酶
水解后，其产物之一与显色指示剂起反应后显示蓝色或绿色，呈色深度与唾液酸苷酶活性相关。
[0021] 实施例1：
[0022] 为更好的说明试剂的性能，提供下列实施数据作参考：选取200例患者样品，做本发明试剂盒和临床“金标准”诊断方法的检测。
[0023] 本发明试剂盒制备：
[0024] 反应液配制(500ml)：称取0.46g的醋酸钾溶于300ml的蒸馏水中，加入1g的蔗糖，溶质完全溶解后补水定容至500ml，用
冰醋酸调pH至6.2-6.5。快速称取50mg的乙酰神经氨酸盐溶于500ml的醋酸钾缓冲液中混匀。分装为500ul每反应管。反应管为通透度高的管子，可以是玻璃管或者塑料管。
[0025] 显色液配制：称取2g氢氧化钠溶于500ml蒸馏水中，pH＞10，溶解后分装。
[0026] 一、样品拭子：
[0027] 1、非经期取样，且取样前72小时应禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部上药等。
[0028] 2、用无菌棉拭子阴道后壁下1/3处停留15s，旋转一周，再停留15s，使拭子充分吸收分泌物，以清晰见到棉拭子上有分泌物附着为准，得到样品拭子。
[0029] 3、取样后的标本常温下应在4小时之内测定，否则应保存在2-8℃，24小时内完成测定。
[0030] 二、本发明试剂盒使用：
[0031] 1、将取好样的样品拭子浸入反应管的反应液中，于37℃保温10min。
[0032] 2、将1中的样品拭子加入20-100μl显色液，判定反应颜色。样品拭子的颜色绿色或者蓝色为阳性；黄色为阴性。
[0033] 用Amsel方法诊断出200例BV患者样品阳性的65例样本中，本发明也检测出阳性65例，二者的阳性符合率为100％(65/65)；
[0034] 用Amsel方法诊断出BV阴性的135例样本中，本发明也检测出阴性135例，阴性符合率为100％(135/135)，总符合率为100％(200/200)。
[0035] 结论：本发明与Amsel法比较，以Amsel法为标准。
[0036] 本发明的灵敏度(真阳性率)为100％(65/65)。
[0037] 特异度(真阴性率)为100％(135/135)。
[0039] 假阴性率为0％(0/65)。
[0040] 从以上对200例临床标本的比较结果看，本发明的灵敏度、特异性与临床“金标准”一致。且具有操作简单，检测时间短、直观等特点。
[0041] 实施例2：
[0042] 为了进一步说明本发明的细菌性阴道病检测试剂盒举例如下：
[0043] 反应液配制(1L)：称取1g醋酸钾溶于500ml的蒸馏水中，加入5g的海藻糖，待完全溶解后补水定容至1000ml，用冰醋酸调pH至6.0-6.7。快速称取200mg的5-溴-4氯-3吲哚基乙酰神经氨酸钠盐溶于1000ml的醋酸钾缓冲液中混匀，分装为500ul每反应管。反应管为通透度高的管子，可以是玻璃管或者塑料管。
[0044] 显色液配制：称取5g氢氧化钠溶于500ml蒸馏水中，溶解后分装，pH＞9。
[0045] 实施例3：
[0046] 反应液配制(500ml)：称取3g的醋酸钾溶于300ml的蒸馏水中，加入6g的蔗糖，溶质完全溶解后补水定容至500ml，用冰醋酸调pH至6.2-6.5。快速称取150mg的乙酰神经氨酸盐溶于500ml的醋酸钾缓冲液中混匀。分装为500ul每反应管。反应管为通透度高的管子，可以是玻璃管或者塑料管。
[0047] 显色液配制：称取10g氢氧化钠溶于500ml蒸馏水中，pH＞10，溶解后分装。
