本发明涉及应用多肽和多核苷酸(本文称为“CASB616”多肽和 “CASB616”多核苷酸)的方法，包括癌症和自身免疫病和其它相关病症 的疗法。另一方面，本发明涉及用本发明提供的材料来鉴别激动剂和 拮抗剂/抑制剂、并且用所鉴定的化合物来治疗与CASB616多肽不平 衡相关的病症的方法。再一方面，本发明涉及用于检测与不适当 CASB616多肽活性或水平相关的疾病的诊断分析。

已经发现CASB616编码一种属于受体蛋白-酪氨酸激酶、EPH和 EPH相关受体的最大家族的多肽。CASB616还称为EPHB2(亦称： EBHB2，ERK，EPH3，EPHT3，DRT，HEK5)和EPHB2v。

在介导发育事件过程中，特别是在神经系统中涉及EPH和EPH 相关受体。Eph亚家族中的受体通常具有单个激酶结构域和含有一个 富半胱氨酸结构域和2个纤连蛋白III型重复的一个胞外区。Eph受体 的配体已由Eph命名委员会命名为ephrin(Cell 90：403-404，1997； PubMed ID：9267020)。根据其结构和序列关系，ephrin被分为ephrin- A(EFNA)类和ephrin-B(EFNB)类，ephrin-A(EFNA)类通过糖基磷脂酰 肌醇键锚定至膜上，而ephrin-B(EFNB)类为跨膜蛋白。根据其胞外域 序列和其结合ephrin-A和ephrin-B配体的亲和性，受体Eph家族被分 为2组。Eph命名委员会(1997)提出：优先与ephrin-A蛋白相互作用的 Eph受体称为EphA，而优先与ephrin-B蛋白相互作用的Eph受体称为 EphB。

Ikegaki等(Hum.Molec.Genet.4：2033-2045，1995)通过PCR筛选多 组人/啮齿动物体细胞杂种并且通过荧光原位杂交，将DRT-EPHB2 基因作图至1p36.1-p35。由于1p远端常常在成神经细胞瘤中缺失，因 此DRT基因可能在成神经细胞瘤和小细胞肺癌(SCLC)肿瘤发生中起 作用。

通过荧光原位杂交，Saito等(Genomics 26：382-384，1995，PubMed ID：7601466)证实ERK基因位于染色体区1p36.1中。他们表明，同源 基因位于小鼠4D2.2-D3和大鼠5q36.1上，这两个区都是具有与人染 色体1p有保守连锁同源性的区域。

本发明涉及如下文更详细描述的CASB616多肽和多核苷酸的用 途。本发明尤其涉及具有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3以及SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中所示核苷酸序列和氨基酸序列的CASB616的 用途。

本发明还涉及与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3以及SEQ ID NO：2 或SEQ ID NO：4中鉴定的序列具有至少85％同一性，优选至少90％同 一性，更优选至少95％同一性，最优选至少97-99％同一性或完全相同 的多核苷酸和多肽的用途。

CASB616多肽和多核苷酸被认为是针对肿瘤的专一性预防性或 治疗性免疫接种的重要免疫原，因为与正常细胞相比，它们在肿瘤中 特异性表达或高度超量表达，因此它们可以通过抗原特异性免疫机制 定向，导致破坏肿瘤细胞。它们还可以用于诊断肿瘤细胞的存在。此 外，它们在某些情况下不适当的表达可以引起诱发自身免疫，即不适 当的免疫应答，通过用所述多肽或多核苷酸适当地接种疫苗可能矫正 所述不适当的免疫应答。在这方面，对我们的目的而言，最重要的生 物活性是本发明多肽的抗原活性和免疫原性活性。本发明的一种多肽 还可能表现出一种CASB616多肽的至少一种其它生物活性，它可能被 看作是不同于与所述免疫应答相关的治疗性或预防性干涉的治疗性或 预防性干涉的靶。

在本发明的第一方面中，提供CASB616多肽以及其生物学上、诊 断上、预防上、临床上或治疗上有用的变异体和包含所述CASB616 多肽及其变异体的组合物的用途。

本发明还提供以下多肽的用途：

(a)一种分离的多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨基酸序列具有至少85％同一性，更优选至少90％同一性，再 更优选至少95％同一性，最优选至少97-99％同一性或完全相同的氨基 酸序列。

(b)一种由分离的多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸包含在 SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的全长上分别与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3具有至少85％同一性，更优选至少90％同一性，再更优选至少 95％同一性，甚至更优选至少97-99％同一性或完全相同的多核苷酸序 列。

(c)一种由分离的多核苷酸编码的多肽，所述多核苷酸所包含的一 段多核苷酸序列编码与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨基酸序列具 有至少85％同一性，更优选至少90％同一性，再更优选至少95％同一 性，甚至更优选至少97-99％同一性或完全相同的多肽。

本发明还提供CASB616多肽的免疫原性片段、即CASB616多肽 的一个连续部分的用途，所述免疫原性片段具有与包含SEQ ID NO：2 或SEQ ID NO：4的氨基酸序列的多肽相同或基本相同的免疫原性活 性。这就是说，所述片段(如有必要，当缀合到一种载体时)能够引起 识别CASB616多肽的免疫应答。这样的免疫原性片段可以包括例如缺 失N-末端前导序列和/或跨膜结构域和/或C-末端锚着结构域的 CASB616多肽。在一个优选的方面，按照本发明的CASB616的免疫 原性片段包含多肽的基本上全部的胞外域，所述多肽与在SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的全长上分别与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4 的多肽具有至少85％同一性，优选至少90％同一性，更优选至少95％ 同一性，最优选至少97-99％同一性。

一种片段是具有与本发明的任何多肽的部分任何氨基酸序列而非 全部的任何氨基酸序列完全相同的氨基酸序列的多肽。与CASB616 多肽一样，片段可以是“独立的”，或者包含于更大的多肽内，在所 述更大的多肽中它们形成一个部分或区，最好是作为在单个更大多肽 中的单个连续区。

优选的片段包括例如具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4或它们的 变异体的一部分氨基酸序列的截短多肽，例如包括氨基末端氨基酸序 列和/或羧基末端氨基酸序列的连续系列残基。也优选由宿主细胞产生 的或在宿主细胞中产生的本发明多肽的降解形式。还优选具有结构或 功能属性特征的片段，例如包含以下区的片段：β-折叠桶、α-螺旋和 α-螺旋形成区、β-折叠和β-折叠形成区、转角和转角形成区、螺旋和 螺旋形成区、亲水区、疏水区、α两亲区、β两亲区、柔性区、表面形 成区、底物结合区和高抗原性指数区。

其它优选的片段包括其中包含的氨基酸序列具有SEQ ID NO：2或 SEQ ID NO：4的氨基酸序列的至少15、20、30、40、50或100个连续 氨基酸的分离的多肽，或者包含从SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨 基酸序列中截短或缺失至少15、20、30、40、50或100个连续氨基酸 的氨基酸序列的分离多肽。

特别优选其中若干个即5-10个、1-5个、1-3个、1-2个或者1个 氨基酸以任何组合被取代、缺失或添加的变异体。

用于本发明的多肽或免疫原性片段可以是“成熟”蛋白形式，或 者可以是更大的蛋白如前体蛋白或融合蛋白的一部分。包括包含以下 序列的额外氨基酸序列通常是有利的：分泌序列或前导序列、原序列 (pro-sequences)、有助于纯化的序列如多组氨酸残基、或在重组产生过 程中有利于稳定性的其它序列。此外，也可以考虑添加外源多肽或脂 质尾或多核苷酸序列以增加最终分子的免疫原性潜力。

一方面，本发明涉及遗传工程制备的可溶性融合蛋白的用途，所 述融合蛋白包含本发明的多肽或其片段，以及不同亚类的免疫球蛋白 (IgG、IgM、IgA、IgE)重链或轻链的恒定区的不同部分。作为免疫球 蛋白，优选的是人类IgG(特别是IgG1)的重链的恒定部分，其中在绞 链区产生融合。在一个特定实施方案中，可以通过加入可用凝血因子 Xa切除的切割序列就可除去Fc部分。

在国际专利申请号WO94/29458和WO94/22914中可以找到融合 蛋白技术的实例。

所述蛋白也可以化学缀合或表达为重组融合蛋白，以使得与未融 合的蛋白相比，在表达系统中产生的水平提高。所述融合配偶体可以 协助提供T辅助细胞表位(免疫融合配偶体)，最好是被人类识别的T 辅助细胞表位，或者所述融合配偶体有助于以比天然重组蛋白更高产 量的表达所述蛋白(表达增强子)。最好所述融合配偶体既是免疫融合 配偶体，又是表达增强配偶体。

融合配偶体包括流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)的D蛋白以 及流感病毒的非结构蛋白NS1(血凝素)。另一种融合配偶体是称为 LytA的蛋白。最好使用所述分子的C-末端部分。Lyta得自肺炎链球菌 (Streptococcus pneumoniae)，它合成N-乙酰-L-丙氨酸酰胺酶LytA(由 lytA基因编码{Gene，43(1986)第265-272页})，即特异性降解肽聚糖主 链中某些键的自溶素。LytA蛋白的C-末端结构域对胆碱或一些胆碱类 似物如DEAE具有亲和性。已经利用该特性开发可用于表达融合蛋白 的大肠杆菌C-LytA表达质粒。已经描述了在其氨基端包含C-LytA片 段的杂种蛋白的纯化{Biotechnology：10，(1992)第795-798页}。可利用 存在于LytA分子C-末端的起始于残基178的重复序列部分，例如残 基188-305。

本发明还包括上面提到的多肽的变异体，即通过保守氨基酸取代 从而一个残基由另一个具有相似特性的残基取代而与参比物不同的多 肽。通常这样的取代发生在Ala、Val、Leu和Ile之间；Ser和Thr之 间；酸性残基Asp和Glu之间；Asn和Gln之间；以及碱性残基Lys 和Arg之间；或芳香族残基Phe和Tyr之间。

可以以任何合适的方式制备用于本发明的多肽。这样的多肽包括 分离的天然存在的多肽、重组产生的多肽、合成产生的多肽或通过这 些方法的组合产生的多肽。用于制备这样的多肽的方法是本领域众所 周知的。

另一方面，本发明涉及编码CASB616多肽的多核苷酸、尤其是编 码本文中命名为CASB616的多肽的多核苷酸的用途，即用于本文描述 的疫苗组合物中或用于制备本文描述的疫苗组合物。

在一个特别优选的实施方案中，所述多核苷酸包含一个编码 CASB616多肽的区，该区包含包括一个全长基因的SEQ ID NO：1或 SEQ ID NO：3所示的序列或其变异体。

使用本文中提供的信息，例如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示 的多核苷酸序列，使用标准克隆和筛选方法，从人结肠癌、肺癌、子 宫癌和胎儿组织细胞中的mRNA衍生的cDNA文库中，可以获得编码 CASB616多肽的本发明的多核苷酸。Maniatis，T.，Fritsch，E.F.和 Sambrook等，MOLECULARCLONING，ALABORATORYMANUAL，第 二版；Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York(1989)描述了合适的技术。也可从天然来源例如基因组DNA文库 得到或者可以使用众所周知的和可商业性得到的技术合成本发明中所 描述的多核苷酸。

此外，SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示的DNA序列包含一个 可读框，该可读框编码具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4所示氨基酸 残基大致数目的蛋白质，该蛋白质的推导分子量可以使用本领域技术 人员众所周知的氨基酸残基分子量值计算。

在SEQ ID NO：1的核苷酸编号105的起始密码子和起始于核苷酸 编号3066的终止密码子之间的SEQ ID NO：1的多核苷酸编码SEQ ID NO：2的多肽。

在SEQ ID NO：3的核苷酸编号26的起始密码子和起始于核苷酸 编号3191的终止密码子之间的SEQ ID NO：3的多核苷酸编码SEQ ID NO：4的多肽。

另一方面，本发明提供分离的多核苷酸的用途，所述多核苷酸包 括以下多核苷酸或由以下多核苷酸组成：

(a)一种多核苷酸序列，它在SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的全 长上与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3具有至少85％同一性，更优选至 少90％同一性，再更优选至少95％同一性，甚至更优选至少97-99％同 一性或完全相同；或

(b)一种编码一种多肽的多核苷酸序列，所述多肽在SEQ ID NO：2 或SEQ ID NO：4的全长上与SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的氨基酸序 列具有至少85％同一性，更优选至少90％同一性，再更优选至少95％ 同一性，甚至更优选至少97-99％同一性或100％相同。

编码用于本发明的多肽的多核苷酸，可以通过包括以下步骤的方 法获得：在严格杂交条件下(例如，使用的温度范围为45-65℃和SDS 浓度为0.1-1％)，使用由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的序列或其片 段组成的或包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的序列或其片段的标记 探针或可检测探针筛选合适文库；然后分离包含所述多核苷酸序列的 全长基因和/或基因组克隆。

本发明提供在其全长上与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3中的编码 序列(可读框)相同的多核苷酸序列的用途。本发明还提供编码成熟多 肽或其片段的编码序列本身以及在可读框中还有另一编码序列的编码 成熟多肽或片段的编码序列或其它融合肽部分的用途，所述另一编码 序列例如编码前导序列或分泌序列、前蛋白(pre-protein)序列、原蛋白 (pro-protein)序列或前原蛋白(prepro-protein)序列的序列。所述多核苷酸 还可以包含至少一种非编码序列，包括例如但不限于至少一种非编码 5’序列和3’序列，例如转录但不翻译的序列、终止信号(例如依赖于rho 的终止信号或不依赖于rho的终止信号)、核糖体结合位点、Kozak序 列、稳定mRNA的序列、内含子和聚腺苷酸化信号。所述多核苷酸序 列也可以包含编码额外氨基酸的额外编码序列。例如，可以编码有助 于纯化融合多肽的标记序列。在本发明的某些实施方案中，所述标记 序列为pQE载体(Qiagen，Inc.)提供并在Gentz等人，Proc.Natl.Acad. Sci.，USA 86：821-824(1989)中描述的六组氨酸肽，或者HA肽标记 (Wilson等，Cell 37：767(1984))，这两种标记可以用于纯化与其融合的 多肽序列。供本发明使用的多核苷酸还包括但不限于包含结构基因和 控制基因表达的与其天然结合的序列的多核苷酸。

编码SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的CASB616多肽的核苷酸序 列可以分别与SEQ ID NO：1的核苷酸105-3068中包含的多肽编码序列 或SEQ ID NO：3的核苷酸26-3193中包含的多肽编码序列相同。或者 它可以是由于遗传密码的丰余性(简并性)也编码SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的多肽的序列。

本文所用的术语“编码多肽的多核苷酸”包括包含编码本发明多 肽、尤其是具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中所示氨基酸序列的多 肽的序列的多核苷酸。所述术语也包括这样的多核苷酸：所述多核苷 酸包含编码所述多肽的单个连续区或多个不连续区(例如，由于整合噬 菌体、整合插入序列、整合载体序列、整合转座子序列或由于RNA编 辑或基因组DNA重建而间断的多核苷酸)以及额外的区，所述额外的 区也可包含编码序列和/非编码序列。

本发明还涉及本文描述的多核苷酸的变异体，所述变异体编码具 有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的推导氨基酸序列的多肽的变异体。 本发明的多核苷酸的片段可以用于例如合成本发明的全长多核苷酸。

其它特别优选的实施方案为编码CASB616变异体的多核苷酸，所 述CASB616变异体具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的CASB616多 肽的氨基酸序列，其中若干个、几个、5-10个、1-5个、1-3个、2个、 1个或没有氨基酸残基以任何组合发生取代、修饰、缺失和/或添加。 其中特别优选不改变CASB616多肽的特性和活性的沉默取代、添加和 缺失。

其它优选用于本发明的是在它们的全长上与编码具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4中所示氨基酸序列的CASB616多肽的多核苷酸 至少85％相同的多核苷酸，以及与这样的多核苷酸互补的多核苷酸。 或者，最高度优选的是所包含的一个区在其全长上与编码CASB616 多肽的多核苷酸至少90％相同的多核苷酸，以及与这样的多核苷酸互 补的多核苷酸。在这一方面，在其全长上与上面所述多核苷酸至少95％ 相同的多核苷酸是特别优选的。此外，在至少95％相同的多核苷酸中， 至少97％相同的多核苷酸是高度优选的，其中至少98％和至少99％相 同的多核苷酸是尤其高度优选的，而至少99％相同的多核苷酸是更优 选的。

优选的实施方案为编码基本保留与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3 的DNA所编码的成熟多肽同样的生物功能或活性的多肽的多核苷 酸。

按照本发明某些优选的实施方案，提供与CASB616多核苷酸序列 (例如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3中的多核苷酸)杂交、尤其是在严 格条件下杂交的多核苷酸的用途。

本发明还涉及与本文提供的多核苷酸序列杂交的多核苷酸的用 途。在这一方面，本发明尤其涉及在严格条件下与本文描述的多核苷 酸杂交的多核苷酸的用途。本文所用的术语“严格条件”和“严格杂 交条件”是指仅当序列间存在至少95％同一性、最好至少97％同一性 时才发生的杂交。严格杂交条件的一个具体实例是在包含下列组分的 溶液中于42℃温育过夜：50％甲酰胺，5×SSC(150mM NaCl，15mM 柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(pH 7.6)，5×Denhardt氏溶液，10％葡聚 糖硫酸酯和20微克/ml变性剪切的鲑精DNA；然后在约65℃下在0.1× SSC中洗涤杂交支持物。杂交和洗涤条件是众所周知的，并在下面的 文献中有范例：Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual， 第二版，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)，特别是其中的第11章。溶 液杂交也可以供本发明提供的多核苷酸序列使用。

使用SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3提供的DNA序列合成寡核苷 酸探针进行筛选，可以分离CASB616基因的编码区。然后使用具有与 本发明基因的序列互补的序列的标记寡核苷酸，筛选cDNA文库、基 因组DNA文库或mRNA文库，以确定所述探针与所述文库的中的哪 些成员杂交。

对于本领域技术人员来说，有数种获得全长DNA或延伸短DNA 的方法可利用并且是众所周知的，例如基于cDNA末端快速扩增 (RACE)方法的那些方法(参见，例如，Frohman等，PNAS USA 85： 8998-9002，1988)。例如由MarathonTM技术(Clontech Laboratories Inc.) 例举的最新改进的该技术已大大简化了对更长cDNA的搜索。在 MarathonTM技术中，可以用从选定组织提取的mRNA制备cDNA，并 将“接头”序列连接到每个末端。然后使用基因特异性寡核苷酸引物 和接头特异性寡核苷酸引物的组合，进行核酸扩增(PCR)，以扩增所述 DNA“缺失的”5’端。然后使用“嵌套”引物重复所述PCR反应，“嵌 套”引物即是设计在所扩增的产物内退火的引物(通常是在接头序列中 更远的3’退火的接头特异性引物和在选定的基因序列中更远的5’退火 的基因特异性引物)。然后通过DNA测序分析该反应的产物，随后通 过使所述产物直接连接到现有DNA而产生完整的序列，或者使用新的 序列信息设计5’引物来进行一个独立的全长PCR，构建全长DNA。

本发明还提供编码多肽的多核苷酸的用途，所述多肽是所述成熟 蛋白+额外氨基末端氨基酸或羧基末端氨基酸，或者在所述成熟多肽内 部的氨基酸(例如当成熟形式蛋白具有一条以上的多肽链时)。这样的 序列尤其可以在前体蛋白加工为成熟形式的蛋白加工中起作用，可使 得能进行蛋白转运，可以延长或缩短蛋白的半寿期、或可有助于蛋白 测定或生产操作。正如体内通常情况一样，细胞酶可以从所述成熟蛋 白加工去除所述额外的氨基酸。

具有与一个或更多个原序列(prosequences)融合的所述多肽成熟形 式的前体蛋白，可以是所述多肽的无活性形式。当去除原序列时，这 样的无活性前体通常被激活。在激活前可以去除部分或所有的原序 列。这样的前体一般称为原蛋白。

通过本领域众所周知的方法，可以用包含表达系统的遗传工程改 造的宿主细胞制备本发明的重组多肽。因此，再一方面，本发明涉及 包含本发明多核苷酸的表达系统，涉及用这样的表达系统遗传工程改 造的宿主细胞，还涉及通过重组技术产生本发明的多肽。也可以采用 衍生自本发明的DNA构建体的RNA，使用无细胞翻译系统产生这样 的蛋白质。

为了重组产生，可以遗传工程改造宿主细胞以引入本发明多核苷 酸的表达系统或其部分。可以采用许多标准实验室手册中描述的方 法，实现将多核苷酸引入宿主细胞，所述实验室手册例如Davis等， Basic Methods in Molecular Biology(1986)和Sambrook等，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，(1989)。优选的这类方法包括例如磷酸 钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、转位、微注射、阳离子脂质介导 的转染、电穿孔、转导、擦伤加样(scrape loading)、基因枪引入(ballistic introduction)或感染。

本发明的蛋白最好是与反式硫氧还蛋白(TIT)共表达。优选反式与 顺式硫氧还蛋白的共表达以保持抗原无硫氧还蛋白，而不需要蛋白 酶。硫氧还蛋白共表达使本发明的蛋白易于溶解。硫氧还蛋白共表达 还对蛋白纯化收率、对纯化蛋白的溶解度和质量产生显著影响。

合适宿主的代表性实例包括细菌细胞，如链球菌属 (Streptococci)、葡萄球菌属(staphylococci)、大肠杆菌(E.Coli)、链霉菌 属(Streptomyces)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillus)细胞；真菌细胞，例 如酵母细胞和曲霉菌属(Aspergillus)的细胞；昆虫细胞例如果蝇属 (Drosophila)S2的细胞和贪夜蛾(Spodoptera)Sf9的细胞；动物细胞例 如CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK 293和Bowes黑素瘤 细胞；和植物细胞。

可以使用各种各样的表达系统，例如染色体衍生的系统、附加体 衍生的系统和病毒衍生的系统，例如衍生自以下的载体：细菌质粒、 噬菌体、转座子、酵母附加体、插入元件、酵母染色体元件；衍生自 以下病毒的载体：杆状病毒、乳多空病毒(如SV40)、痘苗病毒、腺病 毒、禽痘病毒、假狂犬病病毒和反转录病毒；以及衍生自其组合的载 体，例如衍生自质粒和噬菌体遗传元件的那些载体，诸如粘粒和噬菌 粒。所述表达系统可以包含调节以及产生表达的控制区。一般而言， 可以使用能够在宿主中维持、繁殖或表达多核苷酸以产生多肽的任何 系统或载体。可以通过多种众所周知的常规技术中的任何一种，将合 适的核苷酸序列插入表达系统中，所述常规技术例如Sambrook等， Molecular Cloning，A Laboratory Manual(参见上文)所介绍的技术。为了 让翻译的蛋白分泌至内质网腔、壁膜间隙或胞外环境中，可以将合适 的分泌信号掺入所需的多肽中。这些信号对于所述多肽可以是内源 的，或者它们可以是异源信号。

所述表达系统也可以是活的重组微生物，例如病毒或细菌。可以 将目的基因插入活的重组病毒或细菌的基因组中。用该活的载体接种 和体内感染将使所述抗原在体内表达并诱导免疫应答。用于该目的的 病毒和细菌例如是：痘病毒(例如，痘苗病毒、禽痘病毒、金丝雀痘病 毒)、甲病毒(新培斯病毒、西门利启森林甲病毒、委内瑞拉马脑炎病 毒(Venezuelian Equine Encephalitis Virus))、腺病毒、腺相关病毒、微小 RNA病毒(脊髓灰质炎病毒、鼻病毒)、疱疹病毒(水痘-带状疱疹病毒 等)、李斯特氏菌属(Listeria)、沙门氏菌属(Salmonella)、志贺氏菌属 (Shigella)、BCG。这些病毒和细菌可以是毒性的，或是以各种方式减 毒的，以便获得活疫苗。这样的活疫苗也构成本发明的一部分。

通过众所周知的方法，可以从重组细胞培养物中回收并纯化本发 明的多肽，所述方法包括硫酸铵沉淀或乙醇沉淀、酸提取、阴离子交 换层析或阳离子交换层析、磷酸纤维素层析、疏水作用层析、亲和层 析、羟基磷灰石层析和凝集素层析。最优选使用离子金属亲和层析 (IMAC)进行纯化。当所述多肽在胞内合成、分离和/或纯化过程中变性 时，可以使用熟知的重折叠蛋白技术重建活性构象。

本发明的另一重要方面涉及在哺乳动物中诱发、强化或调节免疫 应答的方法，所述方法包括用足以产抗体和/或T细胞免疫应答的本发 明完整多肽或多核苷酸或其片段接种哺乳动物，用于预防或用于治疗 性治疗癌症和自身免疫病及相关病症。本发明的再一方面涉及在哺乳 动物中诱发、强化或调节免疫应答的方法，所述方法包括通过在体内 指导表达所述多核苷酸和编码所述多肽的载体或细胞来传递本发明的 多肽，以便诱发这样的免疫应答，以产生预防或治疗所述动物免患疾 病的免疫应答。

本发明的再一方面涉及免疫制剂/疫苗制剂(组合物)，当所述组合 物被引入哺乳动物宿主后，在该哺乳动物中诱发、强化或调节针对本 发明的多肽的免疫应答，其中所述组合物包含如本文先前所限定的本 发明的多肽或多核苷酸或其免疫片段。所述疫苗制剂还可以包含一种 合适的载体。由于多肽可能在胃中分解，因此它们最好是胃肠外给予 (例如皮下注射、肌内注射、静脉内注射或皮内注射)。适于胃肠外给 药的制剂包括水性和非水无菌注射溶液，所述溶液可以包含抗氧化 剂、缓冲剂、抑菌剂和使得所述制剂与受体血液等渗的溶质；以及可 以包括悬浮剂或增稠剂的水性和非水无菌悬浮液。所述制剂可以盛装 在单位剂量容器或多剂量容器(例如密封安瓿和管形瓶)中，并可以在 冻干条件下保存，只需要恰好在使用前加入无菌液体载体。

本发明的再一方面涉及采用来自哺乳动物免疫系统的细胞，在体 外诱导针对本发明的完整多肽或多核苷酸或其片段的免疫应答或者针 对包含本发明多肽或多核苷酸的分子的免疫应答，并且回输所述哺乳 动物的这些活化免疫细胞以治疗疾病。通过在有或无各种免疫调制剂 分子的情况下，在体外与本发明的完整多肽或多核苷酸或者包含本发 明多肽或多核苷酸的分子一起温育，达到活化来自免疫系统的所述细 胞。本发明的再一方面涉及通过给予抗原呈递细胞免疫哺乳动物，所 述抗原呈递细胞通过体外加载本发明的部分或完整多肽或者包含本发 明多肽的分子而被修饰，然后以免疫原性方式体内给予所述抗原呈递 细胞。或者，可以用含有发明的完整多核苷酸或其片段或者包含本发 明多核苷酸的分子的载体，体外转染抗原呈递细胞，例如以表达相应 的多肽，然后以免疫原性方式体内给予所述抗原呈递细胞。

本发明的疫苗制剂还可以包括用于增强所述制剂的免疫原性的佐 剂系统。所述佐剂系统最好优先产生TH1型应答。

免疫应答可以大致分为两大类：体液免疫应答或细胞介导的免疫 应答(传统上其特征分别在于提供保护的抗体机制和细胞效应物机 制)。这两类免疫应答称为TH1型应答(细胞介导应答)以及TH2型免疫 应答(体液应答)。

非常典型的TH1型免疫应答的特征可能在于产生抗原特异性单倍 型限制性细胞毒性T淋巴细胞以及天然杀伤细胞反应。在小鼠中，TH1 型应答通常的特征在于产生IgG2a亚型抗体，而在人类中这些抗体相 当于IgG1型抗体。TH2型免疫应答的特征在于产生各种各样的免疫球 蛋白同种型，在小鼠中包括IgG1、IgA和IgM。

可以认为产生这两种类型免疫应答的驱动力是细胞因子。高水平 的TH1型细胞因子往往促进诱导对给定抗原的细胞介导免疫应答，而 高水平的TH2型细胞因子倾向于促进诱导对所述抗原的体液免疫应 答。

TH1型免疫应答和TH2型免疫应答的区别并不是绝对的。实际 上，有个别人支持将免疫应答描述为主要是TH1型或主要是TH2型免 疫应答。然而，按照Mosmann和Coffiman在鼠CD4+ve T细胞克隆所 描述的细胞因子家族来考虑细胞因子家族通常是合适的(Mosmann， T.R.和Coffiman，R.L.(1989)TH1和TH2细胞：不同模式的淋巴因子分 泌产生不同的功能特性。Annual Review of Immunology，7，第145-173 页)。传统上，TH1型应答与T淋巴细胞产生IFN-γ和IL-2细胞因子有 关。其它常常与诱导TH1型免疫应答直接有关的细胞因子如IL-12并 不是T细胞产生的。相反，TH2型应答与IL-4、IL-5、IL-6和IL-13 的分泌有关。

已知某些疫苗佐剂特别适于刺激TH1型或TH2型细胞因子应答。 传统上，在接种疫苗或感染后免疫应答的TH1∶TH2平衡的最佳指标包 括在体外用抗原再刺激后直接测量T淋巴细胞产生的TH1或TH2细 胞因子，和/或测量抗原特异性抗体应答的IgG1∶IgG2a比例。

因此，TH1型佐剂是在体外用抗原再刺激时优先刺激分离的T细 胞群体产生高水平TH1型细胞因子、而且促进产生CD8+细胞毒性T 淋巴细胞以及与TH1型同种型有关的抗原特异性免疫球蛋白应答的佐 剂。

国际专利申请号WO 94/00153和WO 95/17209中描述了能够优先 刺激TH1细胞应答的佐剂。

3脱氧酰化单磷酯酰脂质A(3D-MPL)就是一种这样的佐剂。这可 从GB 2220211(Ribi)得知。在化学上它是具有4、5或6个酰化链的3 脱氧酰化单磷酯酰脂质A的混合物，由Ribi Immunochem，Montana生 产。3脱氧酰化单磷酯酰脂质A的优选形式公开于欧洲专利0 689 454 B1(SmithKline Beecham Biologicals SA)。

3D-MPL的颗粒最好小得足以通过0.22微米的膜进行除菌过滤(欧 洲专利号0 689 454)。

3D-MPL的剂量范围为每剂10μg-100μg、最好是25-50μg，其中 所述抗原的剂量范围通常为每剂2-50μg。

另一种优选的佐剂包含QS21，即一种从Quillaja Saponaria Molina 的树皮得到的Hplc纯化的无毒部分。可以任选地将QS21与3脱氧酰 化单磷酯酰脂质A(3D-MPL)混合，任选地还与一种载体混合。

美国专利第5,057,540号公开了制备QS21的方法。

先前已经描述了包含QS21的非反应原性佐剂制剂(WO 96/33739)。已经证实包含QS21和胆固醇的这类制剂当与抗原一起配 制时是成功的TH1刺激佐剂。

作为TH1细胞应答优先刺激物的其它佐剂包括免疫调制性寡核苷 酸，例如在WO 96/02555中公开的未甲基化CpG序列。

还设计诸如上述的不同TH1刺激佐剂的组合，以提供作为TH1 细胞应答优先刺激物的佐剂。例如QS21可以与3D-MPL一起配制。 QS21∶3D-MPL的比例通常约为1∶10至10∶1；最好是1∶5至5∶1，而实 际上常常是1∶1。最佳协同作用的优选范围是2.5∶1至1∶1的3D- MPL∶QS21。

按照本发明的疫苗组合物中最好还存在一种载体。所述载体可以 是水包油乳剂，或者是一种铝盐，如磷酸铝或氢氧化铝。

优选的水包油乳剂包含一种可代谢的油，例如鲨烯、α-生育酚和 吐温80。在一个特别优选的方面，用这样的乳剂将按照本发明的疫苗 组合物的抗原与QS21和3D-MPL混合。此外，所述水包油乳剂可以 含有span 85和/或卵磷脂和/或三辛酰甘油酯。

给予人时，通常疫苗中的QS21和3D-MPL含量范围为每剂1μg- 200μg，例如10-100μg，最好是10μg-50μg。而水包油乳剂通常含有 2-10％的鲨烯、2-10％的α-生育酚和0.3-3％的吐温80。鲨烯：α-生育酚 的比例最好是等于或小于1，因为这样的比例提供更稳定的乳浊液。 Span 85的含量也可以为1％。在某些情况下，本发明的疫苗另外含有 一种稳定剂可能是有利的。

无毒的水包油乳剂最好在含水载体中含有一种无毒的油例如角鲨 烷或角鲨烯，以及一种乳化剂例如吐温80。所述含水载体可以是例如 磷酸缓冲盐溶液。

WO 95/17210中描述了一种特别有效的佐剂制剂，该制剂为包含 QS21、3D-MPL和生育酚的水包油乳剂。

本发明还提供多价疫苗组合物，所述多价疫苗组合物包括本发明 的疫苗制剂以及其它抗原，尤其是可用于治疗癌症、自身免疫病和相 关病症的抗原。这样的一种多价疫苗组合物可以包括如前面所述的 TH-1诱导佐剂。

本发明还涉及衍生自本发明多核苷酸的引物形式或本发明多肽形 式或者特异性针对本发明多肽的抗体或试剂形式的多核苷酸作为诊断 试剂的用途。

能够检测出伴随癌发生途径中极早期变化的血液或组织中遗传标 记或生化标记的鉴定，有助于确定用于患者的最佳疗法。可以使用例 如多核苷酸表达的替代肿瘤标记，诊断不同形式和状态的癌症。本发 明多核苷酸表达水平的鉴定将可用于对癌性疾病分类和对癌性组织的 性质分级。肿瘤分类方法监测癌症的进展，并且根据在活组织检查区 内是否存在恶性肿瘤组织来确定。本发明的多核苷酸可以有助于通过 鉴定癌症攻击力的标记(例如在机体的不同部位中的存在)来完善所述 肿瘤分类方法。癌症的分级描述肿瘤如何密切与其同类型的正常组织 相似，并通过其细胞形态学和其它分化标记进行评价。本发明的多核 苷酸可用于确定肿瘤级别，因为它们可能有助于确定肿瘤细胞的分化 状态。另一方面，本发明的多肽可以由基质细胞产生，在所述情况下， 它的特异性表达或差异表达是病症的一种标志。

通过多种方法进行诊断，所述诊断测定提供一种用于诊断或确定 对癌症、自身免疫病和相关病症易感性的方法，所述方法包括确定得 自受治疗者样品中多肽或mRNA水平的异常减少或增加。该诊断方法 称为差异表达。比较疾病组织和正常组织中特定基因的表达。比较这 两种组织中的多核苷酸相关基因、mRNA或蛋白之间的差异，例如在 分子量、氨基酸序列或核苷酸序列、相对丰度方面的差异，这表明在 怀疑患病的患者组织中所述基因、或调节它的基因的变化。

在RNA水平上可以测定出表达的减少或增加。首先从这两种组织 中分离出聚腺苷酰化(PolyA)RNA，然后由对应于差异表达的本发明多 核苷酸的基因编码的mRNA的检测，可以通过以下方法进行检测：组 织切片的原位杂交、逆转录酶-PCR、使用含polyA+mRNA的RNA 印迹、或任何其它直接或间接RNA检测方法。与正常组织相比给定 RNA在疾病组织中表达的增加或减少，表明所述转录物和/或所表达的 蛋白在所述疾病中起作用。因此，检测的对应于SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的mRNA水平比正常水平高或低，表明所述患者患有癌症。

样品中mRNA表达水平可以通过从所述样品产生已表达序列标志 (EST)的文库而确定。可以用EST在所述文库中的相对表现度，评价 所述基因转录物在原始样品中的相对表现度。然后可以将所述测试的 EST分析与参比样品的EST分析进行比较，以确定目的多核苷酸的相 对表达水平。

可以采用基因表达的系列分析(SAGE)方法学(Velculescu等，Al. Science(1995)270：484)、差异展示方法学(例如，US 5,776,683)或依赖 于核苷酸相互作用专一性的杂交分析进行其它mRNA分析。

另一方面，可以在蛋白质水平上进行所述比较。使用抗体检测来 自所述两种组织的蛋白质提取物的蛋白质印迹中的多肽，可以将两种 组织中的蛋白质大小进行比较。使用抗相应蛋白的抗体还可以在免疫 学上检测表达水平和亚细胞定位。可以用来确定得自宿主的样品中的 蛋白质水平、例如本发明多肽水平的其它测定技术，对于本领域技术 人员而言是熟知的。疾病组织中的多肽表达水平与正常组织中相同蛋 白表达水平相比升高或降低表明，所述表达的蛋白可能与所述疾病有 关。

在本发明的测定中，通过检测由至少一种SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3所示序列编码的基因产物的表达水平，可以确定所述诊断。也可 用疾病组织与正常组织中的mRNA或蛋白水平的比较，来跟踪疾病发 展或缓解。

采用多核苷酸阵列可以测定样品中大量的多核苷酸序列。这些多 核苷酸可以用来检测基因的差异表达并且可以用来确定基因功能。例 如多核苷酸序列SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3阵列可以用来确定所述 多核苷酸的任一种是否在正常细胞和癌细胞间有差异表达。在本发明 的一个实施方案中，可以构建一个包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3 核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探针的阵列，以进行有效筛选例如遗 传突变。阵列技术方法是众所周知的并且具有普遍的可应用性以及可 用来解决分子遗传学方面的各种各样的问题，包括基因表达、遗传连 锁和遗传变异性(参见例如：M.Chee等，Science，第274卷，第610- 613页(1996))。

本文所用的“诊断”包括确定受治疗者对疾病的易感性、确定受 治疗者目前是否患有所述疾病，还可以对受所述疾病影响的受治疗者 作预后。

本发明还涉及用于进行诊断测定的诊断试剂盒，所述试剂盒包 含：

(a)一种本发明的多核苷酸或其片段，所述多核苷酸最好是SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3的核苷酸序列；

(b)一种与(a)的核苷酸序列互补的核苷酸序列；

(c)一种本发明的多肽或其片段，所述多肽最好是SEQ ID NO：2 或SEQ ID NO：4的多肽；或

(d)一种抗本发明多肽的抗体，最好是抗SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：4的多肽的抗体。

对于染色体定位而言本发明的核苷酸序列也是有价值的。所述序 列特异性地靶向单个人染色体上的特定位置，并且可以与单个人染色 体上的特定位置杂交。按照本发明将有关序列作图至染色体上在使那 些序列与基因相关疾病发生联系中是重要的第一个步骤。一旦已将序 列作图至染色体的精确位置，就可以使所述序列在所述染色体上的物 理位置与基因图谱数据相联系。这样的数据例如在V.McKusick， Mendelian Inhertiance in Man(可通过Johns Hopkins University Welch Medical Library在线得到)中找到。然后通过连锁分析(物理上相邻的基 因的共遗传)鉴定已经作图至同一染色体区的基因和疾病之间的关 系。也可确定受影响个体和未受影响个体之间的cDNA序列或基因组 序列中的差别。

本发明的多肽或其片段或其类似物、或表达它们的细胞还可以用 作免疫原，以产生针对本发明多肽的免疫专一性抗体。术语“免疫专 一性”是指所述抗体对本发明多肽的亲和性比它们对现有技术中其它 相关多肽的亲和性高得多。

再一方面，本发明提供如上文所限定的按照本发明多肽的免疫专 一性抗体或其免疫学片段。所述抗体最好是单克隆抗体。

采用常规方法，通过将所述多肽或携带表位的片段、类似物或细 胞给予动物、最好是非人类动物，可以获得针对本发明多肽产生的抗 体。为了制备单克隆抗体，可以使用提供由连续细胞系培养物产生的 抗体的任一技术。实例包括杂交瘤技术(Kohler，G.和Milstein，C.，Nature (1975)256：495-497)、trioma技术、人B-细胞杂交瘤技术(Kozbor等， Immunology Today(1983)4：72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，77-96，Alan R.Liss，Inc.，1985)。

产生单链抗体的技术(例如美国专利第4,946,778号中描述的那些 技术)也可以用来产生针对本发明多肽的单链抗体。此外，可以用转基 因的小鼠或基它生物包括其它哺乳动物，表达人源化抗体。

可以使用上述抗体分离或鉴定表达所述多肽的克隆，或者通过亲 和层析纯化所述多肽。也可以使用本发明的抗体预防或治疗癌症(特别 是卵巢癌和结肠癌)、自身免疫病和相关病症。

本发明的另一方面涉及在哺乳动物中诱导或调节免疫应答的方 法，所述方法包括用足以产生抗体和/或T细胞免疫应答的本发明多肽 接种哺乳动物，以保护或改善所述疾病的症状或进程。本发明的再一 方面涉及在哺乳动物中诱导或调节免疫应答的方法，所述方法包括通 过在体内指导表达所述多核苷酸并编码所述多肽的载体传递本发明的 多肽，以便诱发这样的免疫应答，产生抗体，以保护所述动物免患疾 病。

因此人们会认识到，本发明提供治疗与CASB616多肽活性的存 在、过量表达或表达不足有关的异常病症例如癌症和自身免疫病、尤 其是卵巢癌和结肠癌的方法。

本发明还提供筛选化合物以鉴定刺激或抑制CASB616多肽功能 的那些化合物的方法。一般而言，对于上文所提到的这类疾病，为了 治疗和预防目的可以使用激动剂或拮抗剂。可以从各种来源例如来源 于细胞、无细胞制备物、化学文库以及天然产物的混合物中鉴定化合 物。根据具体情况，如此鉴定的这类激动剂、拮抗剂或抑制剂可以是 所述多肽的天然底物或修饰底物、配体、受体、酶等；或者可以是其 结构模拟物或功能模拟物(参见Coligan等，Current Protocols in Immunology 1(2)：第5章(1991))。筛选方法对于本领域技术人员而言是 已知的。其它筛选方法还可以在例如D.Bennett等，J Mol Recognition， 8：52-58(1995)；和K.Johanson等，J Biol Chem，270(16)：9459-9471(1995) 以及其中的参考文献中找到。

因此，本发明提供鉴定刺激或抑制本发明多肽功能的化合物的筛 选方法，所述方法包括一种选自以下的方法：

(a)利用与候选化合物直接或间接结合的标记，测定所述候选化合 物与所述多肽(或与携带所述多肽的细胞或膜)或与其融合蛋白的结 合；

(b)在标记竞争物存在下，测定候选化合物与所述多肽(或与携带 所述多肽的细胞或膜)或与其融合蛋白的结合；

(c)使用适合于携带所述多肽的细胞或细胞膜的检测系统，测试所 述候选化合物是否导致由所述多肽的激活或抑制产生的信号；

(d)将候选化合物与含有权利要求1的多肽的溶液混合，形成混 合物，测定所述混合物中所述多肽的活性，并将所述混合物的活性与 标准品的活性比较；或

(e)使用例如ELISA测定，检测候选化合物对在细胞中编码所述 多肽的mRNA以及所述多肽的产生的影响。

通过本领域已知的标准受体结合技术，本发明的多肽还可用来鉴 定膜结合受体或可溶性受体(如果有的话)。还可以用众所周知的筛选 方法鉴定本发明多肽的激动剂和拮抗剂(如果有的话)，所述激动剂和 拮抗剂与本发明的多肽竞争与其受体的结合。

因此，另一方面，本发明涉及用于鉴定本发明多肽的激动剂、拮 抗剂、配体、受体、底物、酶等；或者减少或增强这类多肽产生的化 合物的筛选试剂盒，所述筛选试剂盒包含

(a)一种本发明的多肽；

(b)一种表达本发明多肽的重组细胞；

(c)一种表达本发明多肽的细胞膜；或

(d)抗本发明多肽的抗体；

所述多肽最好是SEQ ID NO：2的多肽。

本领域技术人员会容易地认识到，本发明的多肽还可以用于基于 结构设计所述多肽的激动剂、拮抗剂或抑制剂的方法中，使用方法是 通过：

(a)首先确定所述多肽的三维结构；

(b)推导激动剂、拮抗剂或抑制剂可能的活性部位或结合部位的 三维结构；

(c)合成预测与推导的结合部位或活性部位结合或反应的候选化 合物；和

(d)测试所述候选化合物是否就是激动剂、拮抗剂或抑制剂。

还可以使用基因治疗实现由受治疗者的有关细胞内源性产生 CASB616多肽。关于基因治疗的概述，参见Human Molecular Genetics 中的第20章，基因治疗和其它基于分子遗传学的治疗方法(Gene Therapy and other Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches)，T Strachan和A P Read，BIOS Scientific Publishers Ltd(1996)(和其中引用 的参考文献)。

在Pharmaceutical Biotechnology，第61卷，疫苗疫计—亚单位和佐 剂方法(Vaccine Design-the subunit and adjuvant approach)，Powell和 Newman编辑，Plenum Press，1995中全面描述了疫苗制剂。New Trends and Developments in Vaccines，Voller等编辑，University Park Press， Baltimore，Maryland，U.S.A.1978。脂质体胶囊化描述于例如Fullerton 的美国专利4,235,877。蛋白质与大分子的缀合公开于例如Likhite的美 国专利4,372,945和Armor的美国专利4,474,757。

在典型的疫苗制剂中，每种疫苗剂量中的蛋白质量选定为诱导免 疫保护应答而无明显负面副作用的量。这样的量会根据使用哪种特定 免疫原而变化。一般而言，预期每个剂量将包含1-1000μg蛋白，优选 2-100μg，最优选4-40μg。通过包括观察受治疗者的抗体效价和其它反 应的标准研究，可以确定特定疫苗的最佳量。初次疫苗接种后，受治 疗者还可以在大约4周内接受一次加强接种。

“分离的”是指天然状态的“人为”改变。如果一种“分离的” 组合物或物质存在于自然中，那么它的原始环境已改变、或已从其原 始环境中取出、或者两者兼而有之。作为本文使用的此术语，例如在 活的动物中天然存在的多核苷酸或多肽并不是“分离的”，但与其天 然状态共存的物质分开的所述多核苷酸或多肽是“分离的”。

“多核苷酸”一般是指任何多核糖核苷酸或多脱氧核糖核苷酸， 它们可以是包括单链区和双链区的未修饰的RNA或DNA或者修饰的 RNA或DNA。

“变异体”是指与参比多核苷酸或多肽不同但保持基本特性的多 核苷酸或多肽。典型多核苷酸变异体在核苷酸序列上与另一参比多核 苷酸不同。所述变异体核苷酸序列的变化可能改变或不改变参比多核 苷酸编码的多肽的氨基酸序列。如下文所论述，核苷酸的改变可能导 致参比序列编码的多肽的氨基酸取代、添加、缺失、融合和截短。典 型的多肽变异体在氨基酸序列上与另一参比多肽不同。一般而言，差 异是有限的，致使所述参比多肽和所述变异体的序列在总体上非常相 似并在许多区是相同的。变异体和参比多肽可能由于任何组合的一个 或多个取代、添加、缺失而氨基酸序列不同。取代或插入的氨基酸残 基可以是或不是由遗传密码编码的氨基酸残基。多核苷酸或多肽的变 异体可以是天然存在的变异体如等位基因变异体，或者所述变异体可 以是未知的天然存在的变异体。可以通过诱变技术或通过直接合成制 备多核苷酸和多肽的非天然存在的变异体。

“同一性”正如本领域所知的，是指通过比较序列而确定的两种 或两种以上多肽序列或者两种或两种以上多核苷酸序列之间的关系。 在本领域内，根据具体情况，“同一性”也指根据所述多肽或多核苷 酸序列的字符串之间的匹配而确定的多肽或多核苷酸的序列之间的序 列相关性程度。采用已知方法可以容易地计算出“同一性”和“相似 性”，所述方法包括但不限于以下文献中描述的方法：Computational Molecular Biology，Lesk，A.M.编辑，Oxford University Press，New York， 1988；Biocomputing：Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.编辑， Academic Press，New York，1993；Computer Analysis of Sequence Data， 第I部分，Griffin，A.M.和Griffin，H.G.编辑，Humana Press，New Jersey， 1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heinje，G.，Academic Press，1987；和Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.和Devereux，J. 编辑，M Stockton Press，New York，1991；以及Carillo，H.和Lipman，D. SIAM J.Applied Math.，48：1073(1988)。设计测定同一性的优选方法用 来获得所测试序列之间的最大匹配。测定同一性和相似性的方法在公 众可得到的计算机程序编纂。用于确定两序列之间的同一性和相似性 的优选计算机程序方法包括但不限于：GCG程序包(Devereux，J.等， Nucleic Acids Research 12(1)：387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA (Atschul，S.F.等，J.Molec.Biol.215：403-410(1990))。公众可以从NCBI 和其它来源得到BLAST X程序(BLAST Manual，Altschul，S.等，NCBI NLM NIH Bethesda，MD 20894；Altschul，S.等，J.Mol.Biol.215：403- 410(1990)。也可以使用众所周知的Smith Waterman算法测定同一性。

所用的优选算法是FASTA。采用该算法进行多肽或多核苷酸序列 比较的优选参数包括以下参数：

空位罚分(Gap Penalty)：12

空位拓展罚分(Gap extension penalty)：4

字规格(Word size)：2，最大为6

用其它方法比较多肽序列的优选参数包括以下参数：

1)算法：Needleman和Wunsch，J.Mol Biol.48：443-453(1970)

比较矩阵：Hentikoff和Hentikoff的BLOSSUM62，Proc.Natl.Acad.

Sci.USA.89：10915-10919(1992)

空位罚分：12

空位长度罚分(Gap Length penalty)：4

可使用这些参数的程序为“gap”程序，可从Genetics Computer Group，Madison WI公开获得。上面所提到的参数是进行多肽比较的默 认参数(同时对末端空位没有罚分)。

用于多核苷酸比较的优选参数包括以下参数：

1)算法：Needleman和Wunsch，J.Mol Biol.48：443-453(1970)

比较矩阵：匹配＝+10，错配＝0

空位罚分：50

空位长度罚分：3

可使用这些参数的程序“gap”程序，可从Genetics Computer Group， Madison WI公开获得。上面所提到的参数是进行多核苷酸比较的默认 参数。

作为实例，本发明的多核苷酸序列可与SEQ ID NO：1的参比序列 相同，也就是100％相同，或者它可以包括与所述参比序列相比，多至 某一整数的核苷酸改变。这样的改变选自至少一个核苷酸缺失、取代 (包括碱基转换和碱基颠换)或插入，并且其中所述改变可以发生在所 述参比核苷酸序列的5’或3’末端位置或这两个末端位置间的任何地 方，或者各自单独散置于参比序列的核苷酸中，或者散置于参比序列 的一个或多个连续组。核苷酸改变的数目如下确定：SEQ ID NO：1核 苷酸总数乘以相应的同一性百分率的数值百分率(除以100)，随后从所 述SEQ ID NO：1核苷酸总数减去该乘积，或

nn≤xn-(xn·y)，

其中nn是核苷酸改变的数目，xn是SEQ ID NO：1核苷酸总数，y 例如是0.70(70％)、0.80(80％)、0.85(85％)、0.90(90％)、0.95(95％) 等，并且其中将xn和y的任何非整数乘积从xn减去之前，将该乘积入 舍到最近的整数。编码SEQ ID NO：2多肽的多核苷酸序列的改变可能 在该编码序列中产生无义、错义或移码突变，并因此在这样的改变后 改变由所述多核苷酸编码的多肽。

同样，本发明的多肽序列可与SEQ ID NO：2的参比序列相同，也 就是100％相同，或者它可以包括与所述参比序列相比，多至某一整数 的氨基酸改变，以致同一性百分率小于100％。这样的改变选自至少一 个氨基酸缺失、取代(包括保守取代和非保守取代)或插入，并且其中 所述改变可以发生在所述参比多肽序列的氨基末端或羧基末端位置或 这两个末端位置间的任何地方，或者各自单独散置于参比序列的氨基 酸中，或者散置于参比序列的一个或多个连续组中。对于特定的同一 性百分率如下确定所述氨基酸改变的数目：SEQ ID NO：2氨基酸总数 乘以相应的同一性百分率的数值百分率(除以100)，随后从所述SEQ ID NO：2氨基酸总数减去该乘积，或

na≤xa-(Xa·y)，

其中na是氨基酸改变的数目，xa是SEQ ID NO：2氨基酸总数，y 例如是0.70(70％)、0.80(80％)、0.85(85％)等，并且其中将xa和y的 任何非整数乘积从Xa减去之前，将该乘积舍入到最近的整数。

本领域所用的遗传术语“同系物”是指具有与题述序列较高程度 序列相关性的多核苷酸序列或多肽序列。这样的相关性可以通过确定 如上所述的待比较序列之间的同一性程度和/或相似性程度而定量。属 于该遗传术语范围内的是术语“直向同源物”，是指功能等同于另一 物种的多核苷酸或多肽的多核苷酸或多肽，而“共生同源物”是指同 一物种内认为功能上相似的序列。

实施例 实施例1  实时RT-PCR分析

使用实时RT-PCR(U.Gibson.1996.Genome Research：6,996)比较 来自多个患者的配对肿瘤结肠组织和正常结肠组织中的候选抗原的 mRNA转录物的丰度。另外，通过该方法评价一组正常组织中所述候 选基因的mRNA水平。

使用TriPure试剂(Boehringer)，从速冻活检组织中提取正常和肿瘤 结肠的总RNA。来自正常组织的总RNA购自InVitrogen或者使用 TriPure试剂从速冻活检组织中提取。使用寡脱氧胸苷酸磁性微珠 (Dynal)，从DNA酶处理后的总RNA中纯化Poly-A+mRNA。采用SybrII 染料(Molecular Probes )，通过分光荧光测定法(VersaFluor，BioRad)进行 mRNA的定量。采用TaqMan扩增条件的缺省选项，用Perkin-Elmer Primer Express软件设计用于实时PCR扩增的引物。

每次反应使用2ng纯化mRNA，按照标准PCR方法进行实时反 应。为了实时检测，以终稀释度1/75000加入SybrI染料(Molecular Probes)。采用常规仪器设定值，在Perkin-Elmer Biosystems PE7700系 统中进行扩增(40个循环)和实时检测。使用PE7700 Sequence Detector 软件计算Ct值。对于每个患者样品得到2个Ct值：肿瘤Ct(CtT)和配 对的正常结肠Ct(CtN)。通过实时PCR获得的Ct值与靶模板的拷贝数 成对数-线性相关。因为在普通实验条件下的PCR扩增效率接近于理 论扩增效率，所以在所述两种组织中，2(CtN-CtT)是相对转录水平的估计 值(即在肿瘤中mRNA超量表达的倍数)。对来自17名患者的活检组织 进行实时PCR反应。如上所述计算每名患者的mRNA超量表达水平。 然后根据该数据值计算出候选抗原mRNA超量表达的平均水平和超量 表达所述候选抗原的患者比例。

对于正常组织，将候选抗原的Ct值与用相同组织样品获得的肌动 蛋白的Ct值进行比较。 结肠癌/正常结肠样品中的实时PCR结果 概述 结肠肿瘤中超量表达CASB616的患     者(％)   结肠肿瘤中超量表达的平均水平     (倍)     17/17(100％)     17 3组实验的详细记录表                                     实验1(6个样品)   CtN   (范围)     CtN (平均值)     CtT   (范围)     CtT (平均值) (CtN-CtN) (平均值)     T   过量表达   (平均倍数)   CASB616*   探针1   30-34.5     32.3   28.5-31     29.8     2.5     5.7   探针2     26.3     26     4     16   探针3     26.6     27.1     2.7     6.5                                实验2(5个样品)     CtN   (范围)     CtN (平均值)   CtT   (范围)   CtT (平均值) (CtN-CtN) (平均值)     T   过量表达   (平均倍数)   CASB616   34-39     37.5   28-34.5   31     4.7     26                                   实验3(6个样品)   CtN   (范围)     CtN (平均值)   CtT   (范围)   CtT (平均值) (CtN-CtN) (平均值)     T   过量表达   (平均倍数)   CASB616   38-40     39   29.5-35.5     32.5     7.7     207 *在第1组实验中使用3种不同的探针对 正常组织中的实时PCR结果

      Ct值  Bl    Bra    Sk    Ce    He    Ki    Li      Lu    Sp    Pl    Re      Te   CASB616  31.5  29.5   20    32.5  34.5  31.5  30.5    31    30    29.5  28.5    31   肌动蛋白  16    17     18.5  17.5  17.5  17    15.5    16.5  30    16    16.5    16.5   Ao    Ad     Lu2   Pr   Te2     O   St      Co    Sk    Ov    Fa     Ce2         Gl                        e                 Mu         Tu   CASB616   24    30     21    29   22.5    33  30.5    22    30.5  24.5  25.    28.5                                   .5                             5   肌动蛋白   40    28.5   28.5  27   25.5    26  28      33.5  29    30.5  28.    23.5                                                                  5 Bl：膀胱；Bra：脑；Sk：皮肤；Ce：宫颈；He：心脏；Ki：肾脏； Li：肝脏；Lu：肺；Sp：脾；Pl：胎盘；Re：直肠；Te：睾丸；Ao： 主动脉；Ad Gl：肾上腺；Pr：前列腺；Oe：食管；St：胃；Sk Mu： 骨骼肌；Ov：卵巢；Fa Tu：输卵管。同一组织的不同样品具有一个 额外的数字标志符。

结论：在已检测的所有原发性结肠直肠肿瘤中，CASB616基因转 录物相对于正常结肠是明显超量表达。看来在大多数正常组织中的表 达是非常低的。

实施例2 DNA微阵列

用DNA微阵列检测多个样品中基因大集合物的mRNA表达分布 型。用该信息补充通过实时PCR获得的数据，并且提供在肿瘤组织和 正常组织中基因表达水平的独立测量。

目前用于产生DNA微阵列的技术的实例包括1)Affymetrix “GeneChip”阵列，其中采用光刻法通过固相化学合成在所述芯片的表 面合成寡核苷酸，2)DNA点样(spotting)技术，其中由机器人将小体积 的DNA溶液淀积并且然后固定到固相(例如玻璃)的表面。在这两个实 例中，将所述芯片与从目标组织(例如正常组织、肿瘤等……)提取并 且用放射性或用荧光报道分子标记的cDNA或cRNA杂交。使标记材 料与所述芯片杂交，然后使用特殊扫描器，测定与所述芯片上每一序 列结合的探针量。所述实验可以用单一荧光报道分子(或放射性)建 立，或者可以用两种荧光报道分子进行。在后一种情况下，所述两个 样品中的每个用其中一种报道分子标记。然后将这两个已标记的样品 与所述DNA芯片上的序列竞争性杂交。确定所述芯片上每一序列的两 种荧光信号的比例。用该比例计算所述两个样品中所述转录物的相对 丰度。详细方案可得自许多来源，包括“DNA微阵列：一种实用方法 (DNA Microarrays：A practical approach.)。Schena M.Oxford University Press        1999           ”         和       万       维       网 (http：//cmgm.stanford.edu/pbrown/protocols/index.html)， http：//arrayit.com/DNA-Microarray-Protocols/)和许多专业销售商(例如 Affymetrix)。 实施例3. EST分布型

实验抗原组织表达表征的一种互补方法是搜索人“已表达序列标 志”(EST)数据库。EST是从特定组织或细胞系提取的mRNA集合物 制备的cDNA小片段。目前这样的数据库提供来自数百种cDNA组织 文库(包括来自各种类型疾病和疾病状态的肿瘤组织)的大量的EST (106)。借助于信息工具，进行CASB616序列的比较搜索，以便更深入 了解组织表达。 用CASB616序列搜索数据库的结果  DbEST ATG lib ID 描述 类别  NCBI：580826     424 胎心 F  NCBI：581388     424 胎心 F  NCBI：584556     424 胎心 F  NCBI：1160708     882  NCI_CGAP_Co3(12个合并的肿瘤结肠) TC  NCBI：1150180     895  NCI_CGAP_Br2(合并的乳房肿瘤组织) TB  NCBI：1150189     895  NCI_CGAP_Br2(合并的乳房肿瘤组织) TB  NCBI：1150229     895  NCI_CGAP_Br2(合并的乳房肿瘤组织) TB  NCBI：1150370     895  NCI_CGAP_Br2(合并的乳房肿瘤组织) TB  NCBI：1777532     843 胎儿 F  NCBI：2127996     1541  NCI_CGAP_Lu25 Tlg  NCBI：2129674     1541  NCI_CGAP_Lu25 Tlg  NCBI：2129684     1541  NCI_CGAP_Lu25 Tlg  NCBI：2649403     1540  NCI_CGAP_Co16 TC  NCBI：3415191     1918  Schneider胎脑00004 F  NCBI：24019     2 胎脑 F  NCBI：1942     2 胎脑 F  NCBI：79438     226 人胎盘 N  NCBI：982827     695 胎肾 F *F：胎儿组织文库；TC：结肠肿瘤文库；TB：乳房肿瘤文库；Tlg：肺肿瘤文库； N：正常组织文库。 实施例4 RNA-DNA印迹分析

通过Advantage PCR(参见上文)扩增有限量的混合肿瘤结肠 cDNA和配对的正常结肠cDNA。也使用相同方法扩增来自多个正常 组织的信使RNA。将所扩增的cDNA(1μg)在1.2％琼脂糖凝胶上电 泳，然后转移至尼龙膜上。将所述膜与用候选TAA cDNA片段制备的 探针杂交(AlkPhos Direct System)。RNA-DNA印迹分析提供关于转录 物大小、是否存在剪接变异体以及肿瘤组织和正常组织中转录物丰度 的信息。

实施例5 RNA印迹分析

按照标准方法使用1μg poly A+mRNA产生NA印迹。采用 Ready-to-Go系统(Pharmacia)制备放射性探针。

实施例6： 6.1肿瘤特异性抗原的表达和纯化

用微生物宿主中的表达产生用于疫苗目的的本发明抗原以及产生 蛋白片段或全蛋白质，用于快速纯化以及产生通过免疫组织化学法鉴 定天然已表达蛋白或者随后将其纯化所需的抗体。

在两种微生物宿主-大肠杆菌和在酵母(例如酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)或巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)毕赤酵母 属(Pichia)中可以表达重组蛋白。这允许选择具有最佳特征的表达系 统，以进行该特定抗原的生产。一般而言，让重组抗原在大肠杆菌中 表达，而让所述试剂蛋白在酵母中表达。

表达策略首先包括设计重组抗原的一级结构。一般将表达融合配 偶体(EFP)置于N末端，以提高表达水平，所述表达融合配偶体也可以 包括一个可用于调节抗原免疫原性特性的区—免疫融合配偶体(IFP)。 另外，在C-末端包括可用于有助于进一步纯化的亲和融合配偶体 (AFP)。

当重组菌株是可得到时，通过评价表达水平并且通过分析粗制提 取物的行为进一步预测溶解度来鉴定重组产物。

在合适培养基上生长并且诱导重组蛋白表达后，通过SDS-PAGE 分析总提取物。使重组蛋白在染色凝胶上显现，然后使用特异性抗体 通过蛋白质印迹分析进行鉴定。

对不同形式的所述表达抗原的比较评价将使得能够选择出最有希 望的候选物，然后将其用来进一步纯化和免疫学评价。

纯化工作采用基于重组蛋白中组氨酸亲和性尾存在的经典方法。 在一个典型实验中，过滤破碎细菌，然后将无细胞提取物加样到特异 性保留所述重组蛋白的离子金属亲和层析(IMAC；Ni++NTA，得自 Qiagen)上。在磷酸盐缓冲液中，用0-500mM咪唑梯度(可能在去垢剂 存在下)洗出所述保留的蛋白。根据Imac步骤的成功性和污染物的性 质，在该步骤后最好进行阴离子交换树脂步骤和大小排阻层析步骤。 6.2抗体的产生和免疫组织化学

可以用少量相对纯化的蛋白产生免疫学工具，以便

a)在正常或癌症组织切片中通过免疫组织化学检测所述表达；

b)检测所述表达，并且在纯化过程期间跟踪所述蛋白(ELISA/蛋

白质印迹)；或

c)鉴定/定量所述纯化蛋白(ELISA)。 6.2.1多克隆抗体： 免疫

用100μg配制在佐剂3D-MPL/QS21中的蛋白对2-3只兔子以3周 间隔肌内(I.M.)免疫3次。每次免疫后3周，采取血样，然后使用所述 蛋白作为包被抗原，根据标准方法，通过ELISA，估计所述血清中的 抗体效价。 ELISA

将96孔微量培养板(maxisorb Nunc)用5μg蛋白于4℃下包被过 夜。用1％PBS NCS于37℃饱和1小时后，于37℃加入连续稀释的兔 血清(起始于1/10)达1小时30分钟。在PBS吐温中洗涤3次后，加入 抗兔生物素化抗血清(Amersham)(1/5000)。洗涤培养板，然后于37℃ 加入过氧化物酶偶联链霉抗生物素蛋白(1/5000)达30分钟。洗涤后， 加入50μl TMB(BioRad)达7分钟，然后用0.2M H2SO4终止反应。可 以在450nm测定OD，并且用SoftmaxPro计算中点稀释度。 6.2.2单克隆抗体： 免疫

用5μg纯化蛋白对5只BALB/c小鼠以3周间隔免疫3次。第2 次免疫后14天以及第3次免疫后1周进行放血。用纯化蛋白作包被抗 原，通过Elisa测试所述血清。基于这些结果(中点稀释度＞10000)，选 择1只小鼠用于融合。 融合/HAT选择

按照标准方法，使用40％PEG和5％DMSO，将脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞融合。然后以2.5×104-105细胞/孔将细胞接种于96孔板， 然后在HAT培养基中选择抗性克隆。测试这些杂交瘤上清液中特异性 抗体的含量，当杂交瘤上清液为阳性时，将其进行2个循环的有限稀 释。经过2轮筛选后，选择出3个杂交瘤用于腹水生产。 6.2.3免疫组织化学

当抗体是可得到时，对正常组织切片或癌组织切片进行免疫染 色，以便确定：

·相对于正常组织的癌组织中的本发明抗原的表达水平或

·表达所述抗原的某一类型中癌的比例

·是否其它癌类型也表达所述抗原

·在一种癌组织中表达所述抗原的细胞比例 组织样品制备

解剖后，将组织样品用OCT化合物固定在软木盘上，然后在先前 已在液氮(-160℃)中过冷的异戊烷中快速冷冻。使用之前一直将所述冷 冻块在-70℃保存。7-10μm切片将在恒冷切片机室(-20，-30℃)中完成。 染色

将组织切片在室温(RT)下干燥5分钟，室温下在丙酮中固定10分 钟，再次干燥，然后用PBS 0.5％BSA 5％血清饱和。30分钟后，室温 下用抗原特异性抗体进行直接或间接染色。直接染色产生特异性更好 但强度较低的染色，而间接染色产生强度较高但特异性较低的染色。 6.4针对本发明抗原的人细胞免疫应答的分析

通过在体外使人T细胞接触抗原，可以评价本发明抗原的免疫相 关性(relevance)。所有T细胞淋巴细胞系和树突细胞均得自健康供者的 PBMC(外周血单核细胞)(优选为HLA-A2亚型)。HLA-A2.1/Kb转基因 小鼠也用来筛选HLA-A2.1肽。

通过每周体外刺激，产生并维持新发现的抗原特异性CD8+T细 胞系。采用标准方法，测试所述CD8系在应答所述抗原或抗原衍生肽 中的裂解活性和γ-IFN的产生。

使用两种策略来产生所述CD8+T细胞系：一种基于肽的方法和 一种基于全基因的方法。两种方法均要求将正确读框中的所述新发现 抗原的全长cDNA在合适传递系统中克隆或周来预测HLA结合肽的序 列。 基于肽的方法

用Parker算法预测HLA-2A结合肽的序列。然后在HLA-A2.1/Kb 转基因小鼠模型(Vitiello等)中筛选肽。用于进行预测的序列是 EPHB2v，因为它与EPHB2相同且具有一个额外的C-末端序列延伸。 预测结合HLA_A0201等位基因的表位： SEQ D NO 起始位置 亚序列残基表 计分*  5  948  MMMEDILRV  2979.496  6  11  LLLPLLAAV  1006.209  7  387  GLTEPRIYI  235.260  8  712  RQNDGQFTV  167.692  9  22  TLMDSTTAT  113.047  10  641  KLPGkREIFV  1338.876  11  10  LLLLpLLAAV  1006.209  12  947  QMMMeDILRV  427.474  13  810  WSYGiVMWEV  115.285  14  554  FLIAvVVIAI  110.379 *含有所述序列的分子解离半衰期的估计

概括地说，用含佐剂的HLA-A2肽免疫转基因小鼠，不能诱导CD8 应答(根据肽脉冲处理的自身脾细胞有效裂解来确定)的那些肽在人系 统中进行进一步分析。

人树突细胞(按照Romani等所述方法培养)用肽进行脉冲处理，并 且用来刺激CD8分类的T细胞(通过Facs)。每周数次刺激后，首先在 肽脉冲处理的自身BLCL(EBV-B转化细胞系)上测试所述CD8系。为 了确证在体内正确加工所述肽，在cDNA转染的肿瘤细胞(HLA-A2转 染的LnCaP、Skov3或CAMA肿瘤细胞)上测试所述CD8系。 基于全基因的方法

使CD8+T细胞系接触抗原，然后用基因枪转染的树突细胞、反 转录病毒转导的B7.1转染的成纤维细胞、重组痘病毒(Kim等)或腺病 毒(Butterfield等)感染的树突细胞刺激。病毒感染的细胞非常有效地呈 递抗原肽，因为所述抗原以高水平表达，而且可以只使用一次，以避 免病毒T细胞系的过度生长。

改变刺激后，如上所述，在cDNA转染的肿瘤细胞上测试所述CD8 系。确定肽特异性和同一性以证实免疫有效性。 参考文献

Vitiello等(L.Sherman)，J.Exp.Med.，J.Exp.Med.，1991，173：1007- 1015。

Romani等，J.Exp.Med.，1994，180：83-93。

Kim等，J.Immunother.，1997，20：276-286。

Butterfield等，J.Immunol.，1998，161：5607-5613。

在本说明书中引用的包括但不限于专利和专利申请在内的所有出 版物都通过引用结合到本文中，如同每个单独的出版物具体而单独地 通过全面叙述引用结合到本文中一样。

            序列信息 SEQ ID NO：1    1 aacaaaagct gggactccac cgcggtggcg gccgctctag cccctggttc ggcccacctc   61 tgaaggttcc agaatcgata gtgaattcgt ggggaagcgc agccatggct ctgcggaggc  121 tgggggccgc gctgctgctg ctgccgctgc tcgccgccgt ggaagaaacg ctaatggact  181 ccactacagc gactgctgag ctgggctgga tggtgcatcc tccatcaggg tgggaagagg  241 tgagtggcta cgatgagaac atgaacacga tccgcacgta ccaggtgtgc aacgtgtttg  301 agtcaagcca gaacaactgg ctacggacca agtttatccg gcgccgtggc gcccaccgca  361 tccacgtgga gatgaagttt tcggtgcgtg actgcagcag catccccagc gtgcctggct  421 cctgcaagga gaccttcaac ctctattact atgaggctga ctttgactcg gccaccaaga  481 ccttccccaa ctggatggag aatccatggg tgaaggtgga taccattgca gccgacgaga  541 gcttctccca ggtggacctg ggtggccgcg tcatgaaaat caacaccgag gtgcggagct  601 tcggacctgt gtcccgcagc ggcttctacc tggccttcca ggactatggc ggctgcatgt  661 ccctcatcgc cgtgcgtgtc ttctaccgca agtgcccccg catcatccag aatggcgcca  721 tcttccagga aaccctgtcg ggggctgaga gcacatcgct ggtggctgcc cggggcagct  781 gcatcgccaa tgcggaagag gtggatgtac ccatcaagct ctactgtaac ggggacggcg  841 agtggctggt gcccatcggg cgctgcatgt gcaaagcagg cttcgaggcc gttgagaatg  901 gcaccgtctg ccgaggttgt ccatctggga ctttcaaggc caaccaaggg gatgaggcct  961 gtacccactg tcccatcaac agccggacca cttctgaagg ggccaccaac tgtgtctgcc 1021 gcaatggcta ctacagagca gacctggacc ccctggacat gccctgcaca accatcccct 1081 ccgcgcccca ggctgtgatt tccagtgtca atgagacctc cctcatgctg gagtggaccc 1141 ctccccgcga ctccggaggc cgagaggacc tcgtctacaa catcatctgc aagagctgtg 1201 gctcgggccg gggtgcctgc acccgctgcg gggacaatgt acagtacgca ccacgccagc 1261 taggcctgac cgagccacgc atttacatca gtgacctgct ggcccacacc cagtacacct 1321 tcgagatcca ggctgtgaac ggcgttactg accagagccc cttctcgcct cagttcgcct 1381 ctgtgaacat caccaccaac caggcagctc catcggcagt gtccatcatg catcaggtga 1441 gccgcaccgt ggacagcatt accctgtcgt ggtcccagcc agaccagccc aatggcgtga 1501 tcctggacta tgagctgcag tactatgaga aggagctcag tgagtacaac gccacagcca 1561 taaaaagccc caccaacacg gtcaccgtgc agggcctcaa agccggcgcc atctatgtct 1621 tccaggtgcg ggcacgcacc gtggcaggct acgggcgcta cagcggcaag atgtacttcc 1681 agaccatgac agaagccgag taccagacaa gcatccagga gaagttgcca ctcatcatcg 1741 gctcctcggc cgctggcctg gtcttcctca ttgctgtggt tgtcatcgcc atcgtgtgta 1801 acagaagacg ggggtttgag cgtgctgact cggagtacac ggacaagctg caacactaca 1861 ccagtggcca catgacccca ggcatgaaga tctacatcga tcctttcacc tacgaggacc 1921 ccaacgaggc agtgcgggag tttgccaagg aaattgacat ctcctgtgtc aaaattgagc 1981 aggtgatcgg agcaggggag tttggcgagg tctgcagtgg ccacctgaag ctgccaggca 2041 agagagagat ctttgtggcc atcaagacgc tcaagtcggg ctacacggag aagcagcgcc 2101 gggacttcct gagcgaagcc tccatcatgg gccagttcga ccatcccaac gtcatccacc 2161 tggagggtgt cgtgaccaag agcacacctg tgatgatcat caccgagttc atggagaatg 2221 gctccctgga ctcctttctc cggcaaaacg atgggcagtt cacagtcatc cagctggtgg 2261 gcatgcttcg gggcatcgca gctggcatga agtacctggc agacatgaac tatgttcacc 2341 gtgacctggc tgcccgcaac atcctcgtca acagcaacct ggtctgcaag gtgtcggact 2401 ttgggctctc acgctttcta gaggacgata cctcagaccc cacctacacc agtgccctgg 2461 gcggaaagat ccccatccgc tggacagccc cggaagccat ccagtaccgg aagttcacct 2521 cggccagtga tgtgtggagc tacggcattg tcatgtggga ggtgatgtcc tatggggagc 2581 ggccctactg ggacatgacc aaccaggatg taatcaatgc cattgagcag gactatcggc 2641 tgccaccgcc catggactgc ccgagcgccc tgcaccaact catgctggac tgttggcaga 2701 aggaccgcaa ccaccggccc aagttcggcc aaattgtcaa cacgctagac aagatgatcc 2761 gcaatcccaa cagcctcaaa gccatggcgc ccctctcctc tggcatcaac ctgccgctgc 2821 tggaccgcac gatccccgac tacaccagct ttaacacggt ggacgagtgg ctggaggcca 2881 tcaagatggg gcagtacaag gagagcttcg ccaatgccgg cttcacctcc tttgacgtcg 2941 tgtctcagat gatgatggag gacattctcc gggttgggct cactttggct ggccaccaga 3001 aaaaaatcct gaacagtatc caggtgatgc gggcgcagat gaaccagatt cagtctgtgg 3061 aggtttgaca ttcacctgcc tcggctcacc tcttcctcca agccccgccc cctctgcccc 3121 acgtgccggc cctcctggtg ctctatccac tgcagggcca gccactcgcc aggaggccac 3181 gggccacggg aagaaccaag cggtgccagc cacgagacgt caccaagaaa acatgcaact 3241 caaacgacgg aaaaaaaaag ggaatgggaa aaaagaaaac agatcctggg agggggcggg

    3301 aaatacaagg aatatttttt aaagaggatt ctcataagga aagcaatgac tgttcttgcg

    3361 ggggataaaa aagggcttgg gagattcatg cgatgtgtcc aatcggagac aaaagcagtt

    3421 tctctccaac tccctctggg aaggtgacct ggccagagcc aagaaacact ttcagaaaaa

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    3541 cctcactcaa caaccaagcg cctggaggac gggacagatg gacagacagc caccctgaga

    3601 acccctctgg gaaaatctat tcctgccacc actgggcaaa cagaagaatt tttctgtctt

    3661 tggagagtat tttagaaact ccaatgaaag acactgtttc tcctgttggc tcacagggct

    3721 gaaaggggct tttgtcctcc tgggtcaggg agaacgcggg gaccccag// SEQ ID No.2

         1 malrrlgaal lllpllaave etlmdsttat aelgwmvhpp sgweevsgyd enmntirtyq

        61 vcnvfessqn nwlrtkfirr rgahrihvem kfsvrdcssi psvpgscket fnlyyyeadf

       121 dsatktfpnw menpwvkvdt iaadesfsqv dlggrvmkin tevrsfgpvs rsgfylafqd

       181 yggcmsliav rvfyrkcpri iqngaifqet lsgaestslv aargsciana eevdvpikly

       241 cngdgewlvp igrcmckagf eavengtvcr gcpsgtfkan qgdeacthcp insrttsega

       301 tncvcrngyy radldpldmp cttipsapqa vissvnetsl mlewtpprds ggredlvyni

       361 ickscgsgrg actrcgdnvq yaprqlglte priyisdlla htqytfeiqa vngvtdqspf

       421 spqfasvnit tnqaapsavs imhqvsrtvd sitlswsqpd qpngvildye lqyyekelse

       481 ynataikspt ntvtvqglka gaiyvfqvra rtvagygrys gkmyfqtmte aeyqtsiqek

       541 lpliigssaa glvfliavvv iaivcnrrgf eradseytdk lqhytsghmt pgmkiyidpf

       601 tyedpneavr efakeidisc vkieqvigag efgevcsghl klpgkreifv aiktlksgyt

       661 ekqrrdflse asimgqfdhp nvihlegvvt kstpvmiite fmengsldsf lrqndgqftv

       721 iqlvgmlrgi aagmkyladm nyvhrdlaar nilvnsnlvc kvsdfglsrf leddtsdpty

       781 tsalggkipi rwtapeaiqy rkftsasdvw sygivmwevm sygerpywdm tnqdvinaie

       841 qdyrlpppmd cpsalhqlml dcwqkdrnhr pkfgqivntl dkmirnpnsl kamaplssgi

       901 nlplldrtip dytsfntvde wleaikmgqy kesfanagft sfdvvsqmmm edilrlgvtl

       961 aghqkkilns iqvmraqmnq iqsvev SEQ ID No.3

         1 gaattccgcc ccgggaagcg cagccatggc tctgcggagg ctgggggccg cgctgctgct

        61 gctgccgctg ctcgccgccg tggaagaaac gctaatggac tccactacag cgactgctga

       121 gctgggctgg atggtgcatc ctccatcagg gtgggaagag gtgagtggct acgatgagaa

       181 catgaacacg atccgcacgt accaggtgtg caacgtgttt gagtcaagcc agaacaactg

       241 gctacggacc aagtttatcc ggcgccgtgg cgcccaccgc atccacgtgg agatgaagtt

       301 ttcggtgcgt gactgcagca gcatccccag cgtgcctggc tcctgcaagg aggaccttcaa

       361 cctctattac tatgaggctg actttgactc ggccaccaag accttcccca actggatgga

       421 gaatccatgg gtgaaggtgg ataccattgc agccgacgag agcttctccc aggtggacct

       481 gggtggccgc gtcatgaaaa tcaacaccga ggtgcggagc ttcggacctg tgtcccgcag

       541 cggcttctac ctggccttcc aggactatgg cggctgcatg tccctcatcg ccgtgcgtgt

       601 cttctaccgc aagtgccccc gcatcatcca gaatggcgcc atcttccagg aaaccctgtc

       661 gggggctgag agcacatcgc tggtggctgc ccggggcagc tgcatcgcca atgcggaaga

       721 ggtggatgta cccatcaagc tctactgtaa cggggacggc gagtggctgg tgcccatcgg

       781 gcgctgcatg tgcaaagcag gcttcgaggc cgttgagaat ggcaccgtct gccgaggttg

       841 tccatctggg actttcaagg ccaaccaagg ggatgaggcc tgtacccact gtcccatcaa

       901 cagccggacc acttctgaag gggccaccaa ccgtgtctgc cgcaatggct actacagagc

       961 agacctggac cccctggaca tgccctgcac aaccatcccc tccgcgcccc aggctgtgat

      1021 ttccagtgtc aatgagacct ccctcatgct ggagtggacc cctccccgcg actccggagg

      1081 ccgagaggac ctcgtctaca acatcatctg caagagctgt ggctcgggcc ggggtgcctg

      1141 cacccgctgc ggggacaatg tacagtacgc accacgccag ctaggcctga ccgagccacg

      1201 catttacatc agtgacctgc tggcccacac ccagtacacc ttcgagatcc aggctgtgaa

      1261 cggcgttact gaccagagcc ccttctcgcc tcagttcgcc tctgtgaaca tcaccaccaa

      1321 ccaggcagct ccatcggcag tgtccatcat gcatcaggtg agccgcaccg tggacagcat

      1381 taccctgtcg tggtcccagc cagaccagcc caatggcgtg atcctggact atgagctgca

      1441 gtactatgag aaggagctca gtgagtacaa cgccacagcc ataaaaagcc ccaccaacac

      1501 ggtcaccgtg cagggcctca aagccggcgc catctatgtc ttccaggtgc gggcacgcac

   1561 cgtggcaggc tacgggcgct acagcggcaa gatgtacttc cagaccatga cagaagccga

   1621 gtaccagaca agcatccagg agaagttgcc actcatcatc ggctcctcgg ccgctggcct

   1681 ggtcttcctc attgctgtgg ttgtcatcgc catcgtgtgt aacagacggg ggtttgagcg

   1741 tgctgactcg gagtacacgg acaagctgca acactacacc agtggccaca tgaccccagg

   1801 catgaagatc tacatcgatc ctttcaccta cgaggacccc aacgaggcag tgcgggagtt

   1861 tgccaaggaa attgacatct cctgtgtcaa aattgagcag gtgatcggag caggggagtt

   1921 tggcgaggtc tgcagtggcc acctgaagct gccaggcaag agagagatct ttgtggccat

   1981 caagacgctc aagtcgggct acacggagaa gcagcgccgg gacttcctga gcgaagcctc

   2041 catcatgggc cagttcgacc atcccaacgt catccacctg gagggtgtcg tgaccaagag

   2101 cacacctgtg atgatcatca ccgagttcat ggagaatggc tccctggact cctttctccg

   2161 gcaaaacgat gggcagttca cagtcatcca gctggtgggc atgcttcggg gcatcgcagc

   2221 tggcatgaag tacctggcag acatgaacta tgttcaccgt gacctggctg cccgcaacat

   2281 cctcgtcaac agcaacctgg tctgcaaggt gtcggacttt gggctctcac gctttctaga

   2341 ggacgatacc tcagacccca cctacaccag tgccctgggc ggaaagatcc ccatccgctg

   2401 gacagccccg gaagccatcc agtaccggaa gttcacctcg gccagtgatg tgtggagcta

   2461 cggcattgtc atgtgggagg tgatgtccta tggggagcgg ccctactggg acatgaccaa

   2521 ccaggatgta atcaatgcca ttgagcagga ctatcggctg ccaccgccca tggactgccc

   2581 gagcgccctg caccaactca tgctggactg ttggcagaag gaccgcaacc accggcccaa

   2641 gttcggccaa attgtcaaca cgctagacaa gatgatccgc aatcccaaca gcctcaaagc

   2701 catggcgccc ctctcctctg gcatcaacct gccgctgctg gaccgcacga tccccgacta

   2761 caccagcttt aacacggtgg acgagtggct ggaggccatc aagatggggc agtacaagga

   2821 gagcttcgcc aatgccggct tcacctcctt tgacgtcgtg tctcagatga tgatggagga

   2881 cattctccgg gttggggtca ctttggctgg ccaccagaaa aaaatcctga acagtatcca

   2941 ggtgatgcgg gcgcagatga accagattca gtctgtggag ggccagccac tcgccaggag

   3001 gccacgggcc acgggaagaa ccaagcggtg ccagccacga gacgtcacca agaaaacatg

   3061 caactcaaac gacggaaaaa aaaagggaat gggaaaaaag aaaacagatc ctgggagggg

   3121 gcgggaaata caaggaatat tttttaaaga ggattctcat aaggaaagca atgactgttc

   3181 ttgcggggga taaaaaaggg cttgggagat tcatgcgatg tgtccaatcg gagacaaaag

   3241 cagtttctct ccaactccct ctgggaaggt gacctggcca gagccaagaa acactttcag

   3301 aaaaacaaat gtgaagggga gagacagggg ccacccttgg ctcctgtccc tgctgctcct

   3361 ctaggcctca ctcaacaacc aagcgcctgg aggacgggac agatggacag acagccaccc

   3421 tgagaacccc tctgggaaaa tctattcctg ccaccactgg gcaaacagaa gaatttttct

   3481 gtctttggag agtattttag aaactccaat gaaagacact gtttctcctg ttggctcaca

   3541 gggctgaaag gggcttttgt cctcctgggt cagggagaac gcggggaccc cagaaaggtc

   3601 agccttcctg aggatgggca acccccaggt ctgcagctcc aggtacatat cacgcgcaca

   3661 gcctggcagc ctggccctcc tggtgcccac tcccgccagc ccctgcctcg aggactgata

   3721 ctgcagtgac tgccgtcagc tccgactgcc gctgagaagg gttgatcctg catctgggtt

   3781 tgtttacagc aattcctgga ctcgggggta ttttggtcac agggtggttt tggtttaggg

   3841 ggtttgtttg ttgggttgtt ttttgttttt tggttttttt taatgacaat gaagtgacac

   3901 tttgacattt ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa// SEQ ID No. 4

          1 malrrlgaal lllpllaave etlmdsttat aelgwmvhpp sgweevsgyd enmntirtyq

         61 vcnvfessqn nwlrtkfirr rgahrihvem kfsvrdcssi psvpgscket fnlyyyeadf

        121 dsatktfpnw menpwvkvdt iaadesfsqv dlggrvmkin tevrsfgpvs rsgfylafqd

        181 yggcmsliav rvfyrkcpri iqngaifqet lsgaestslv aargsciana eevdvpikly

        241 cngdgewlvp igrcmckagf eavengtvcr gcpsgtfkan qgdeacthcp insrttsega

        301 tncvcrngyy radldpldmp cttipsapqa vissvnetsl mlewtpprds ggredlvyni

        361 ickscgsgrg actrcgdnvq yaprqlglte priyisdlla htqytfeiqa vngvtdqspf

        421 spqfasvnit tnqaapsavs imhqvsrtvd sitlswsqpd qpngvildye lqyyekelse

        481 ynataikspt ntvtvqglka gaiyvfqvra rtvagygrys gkmyfqtmte aeyqtsiqek

        541 lpliigssaa glvfliavvv iaivcnrrgf eradseytdk lqhytsghmt pgmkiyidpf

        601 tyedpneavr efakeidisc vkieqvigag efgevcsghl klpgkreifv aiktlksgyt

        661 ekqrrdflse asimgqfdhp nvihlegvvt kstpvmiite fmengsldsf lrqndgqftv

        721 iqlvgmlrgi aagmkyladm nyvhrdlaar nilvnsnlvc kvsdfglsrf leddtsdpty

        781 tsalggkipi rwtapeaiqy rkftsasdvw sygivmwevm sygerpywdm tnqdvinaie

        841 qdyrlpppmd cpsalhqlml dcwqkdrnhr pkfgqivntl dkmirnpnsl kamaplssgi

        901 nlplldrtip dytsfntvde wleaikmgqy kesfanagft sfdvvsqmmm edilrvgvtl

        961 aghqkkilns iqvmraqmnq iqsvegqpla rrpratgrtk rcqprdvtkk tcnsndgkkk

       1021 gmgkkktdpg rgreiqgiff kedshkesnd cscgg SEQ ID NO：5 MMMEDILRV SEQ ID NO：6 LLLPLLAAV SEQ ID NO：7 GLTEPRIYI SEQ ID NO：8 RQNDGQFTV SEQ ID NO：9 TLMDSTTAT SEQ ID NO：10 KLPGkREIFV SEQ ID NO：11 LLLLpLLAAV SEQ ID NO：12 QMMMeDILRV SEQ ID NO：13 WSYGiVMWEV SEQ ID NO：14 FLIAvVVIAI

           序    列    表

<110>SmithKline Beecham Biologicals S.A

<120>新用途

<130>BC45244

<160>14

<170>FastSEQ for Windows Version 3.0

<210>1

<211>3768

<212>DNA

<213>人(Homo sapiens)

<400>1 aacaaaagct ggagctccac cgcggtggcg gccgctctag cccctggttc ggcccacctc     60 tgaaggttcc agaatcgata gtgaattcgt ggggaagcgc agccatggct ctgcggaggc     120 tgggggccgc gctgctgctg ctgccgctgc tcgccgccgt ggaagaaacg ctaatggact     180 ccactacagc gactgctgag ctgggctgga tggtgcatcc tccatcaggg tgggaagagg     240 tgagtggcta cgatgagaac atgaacacga tccgcacgta ccaggtgtgc aacgtgtttg     300 agtcaagcca gaacaactgg ctacggacca agtttatccg gcgccgtggc gcccaccgca     360 tccacgtgga gatgaagttt tcggtgcgtg actgcagcag catccccagc gtgcctggct     420 cctgcaagga gaccttcaac ctctattact atgaggctga ctttgactcg gccaccaaga     480 ccttccccaa ctggatggag aatccatggg tgaaggtgga taccattgca gccgacgaga     540 gcttctccca ggtggacctg ggtggccgcg tcatgaaaat caacaccgag gtgcggagct     600 tcggacctgt gtcccgcagc ggcttctacc tggccttcca ggactatggc ggctgcatgt     660 ccctcatcgc cgtgcgtgtc ttctaccgca agtgcccccg catcatccag aatggcgcca     720 tcttccagga aaccctgtcg ggggctgaga gcacatcgct ggtggctgcc cggggcagct     780 gcatcgccaa tgcggaagag gtggatgtac ccatcaagct ctactgtaac ggggacggcg     840 agtggctggt gcccatcggg cgctgcatgt gcaaagcagg cttcgaggcc gttgagaatg     900 gcaccgtctg ccgaggttgt ccatctggga ctttcaaggc caaccaaggg gatgaggcct     960 gtacccactg tcccatcaac agccggacca cttctgaagg ggccaccaac tgtgtctgcc    1020 gcaatggcta ctacagagca gacctggacc ccctggacat gccctgcaca accatcccct    1080 ccgcgcccca ggctgtgatt tccagtgtca atgagacctc cctcatgctg gagtggaccc    1140 ctccccgcga ctccggaggc cgagaggacc tcgtctacaa catcatctgc aagagctgtg    1200 gctcgggccg gggtgcctgc acccgctgcg gggacaatgt acagtacgca ccacgccagc    1260 taggcctgac cgagccacgc atttacatca gtgacctgct ggcccacacc cagtacacct    1320 tcgagatcca ggctgtgaac ggcgttactg accagagccc cttctcgcct cagttcgcct    1380 ctgtgaacat caccaccaac caggcagctc catcggcagt gtccatcatg catcaggtga    1440 gccgcaccgt ggacagcatt accctgtcgt ggtcccagcc agaccagccc aatggcgtga    1500 tcctggacta tgagctgcag tactatgaga aggagctcag tgagtacaac gccacagcca    1560 taaaaagccc caccaacacg gtcaccgtgc agggcctcaa agccggcgcc atctatgtct    1620 tccaggtgcg ggcacgcacc gtggcaggct acgggcgcta cagcggcaag atgtacttcc    1680 agaccatgac agaagccgag taccagacaa gcatccagga gaagttgcca ctcatcatcg    1740 gctcctcggc cgctggcctg gtcttcctca ttgctgtggt tgtcatcgcc atcgtgtgta    1800 acagaagacg ggggtttgag cgtgctgact cggagtacac ggacaagctg caacactaca    1860 ccagtggcca catgacccca ggcatgaaga tctacatcga tcctttcacc tacgaggacc    1920 ccaacgaggc agtgcgggag tttgccaagg aaattgacat ctcctgtgtc aaaattgagc    1980 aggtgatcgg agcaggggag tttggcgagg tctgcagtgg ccacctgaag ctgccaggca    2040 agagagagat ctttgtggcc atcaagacgc tcaagtcggg ctacacggag aagcagcgcc    2100 gggacttcct gagcgaagcc tccatcatgg gccagttcga ccatcccaac gtcatccacc    2160 tggagggtgt cgtgaccaag agcacacctg tgatgatcat caccgagttc atggagaatg    2220 gctccctgga ctcctttctc cggcaaaacg atgggcagtt cacagtcatc cagctggtgg    2280 gcatgcttcg gggcatcgca gctggcatga agtacctggc agacatgaac tatgttcacc    2340 gtgacctggc tgcccgcaac atcctcgtca acagcaacct ggtctgcaag gtgtcggact    2400 ttgggctctc acgctttcta gaggacgata cctcagaccc cacctacacc agtgccctgg    2460 gcggaaagat ccccatccgc tggacagccc cggaagccat ccagtaccgg aagttcacct    2520 cggccagtga tgtgtggagc tacggcattg tcatgtggga ggtgatgtcc tatggggagc    2580 ggccctactg ggacatgacc aaccaggatg taatcaatgc cattgagcag gactatcggc    2640 tgccaccgcc catggactgc ccgagcgccc tgcaccaact catgctggac tgttggcaga    2700 aggaccgcaa ccaccggccc aagttcggcc aaattgtcaa cacgctagac aagatgatcc    2760 gcaatcccaa cagcctcaaa gccatggcgc ccctctcctc tggcatcaac ctgccgctgc    2820 tggaccgcac gatccccgac tacaccagct ttaacacggt ggacgagtgg ctggaggcca    2880 tcaagatggg gcagtacaag gagagcttcg ccaatgccgg cttcacctcc tttgacgtcg    2940 tgtctcagat gatgatggag gacattctcc gggttgggct cactttggct ggccaccaga    3000 aaaaaatcct gaacagtatc caggtgatgc gggcgcagat gaaccagatt cagtctgtgg    3060 aggtttgaca ttcacctgcc tcggctcacc tcttcctcca agccccgccc cctctgcccc    3120 acgtgccggc cctcctggtg ctctatccac tgcagggcca gccactcgcc aggaggccac    3180 gggccacggg aagaaccaag cggtgccagc cacgagacgt caccaagaaa acatgcaact    3240 caaacgacgg aaaaaaaaag ggaatgggaa aaaagaaaac agatcctggg agggggcggg    3300 aaatacaagg aatatttttt aaagaggatt ctcataagga aagcaatgac tgttcttgcg    3360 ggggataaaa aagggcttgg gagattcatg cgatgtgtcc aatcggagac aaaagcagtt    3420 tctctccaac tccctctggg aaggtgacct ggccagagcc aagaaacact ttcagaaaaa    3480 caaatgtgaa ggggagagac aggggccgcc cttggctcct gtccctgctg ctcctctagg    3540 cctcactcaa caaccaagcg cctggaggac gggacagatg gacagacagc caccctgaga    3600 acccctctgg gaaaatctat tcctgccacc actgggcaaa cagaagaatt tttctgtctt    3660 tggagagtat tttagaaact ccaatgaaag acactgtttc tcctgttggc tcacagggct    3720 gaaaggggct tttgtcctcc tgggtcaggg agaacgcggg gaccccag                 3768

<210>2

<211>986

<212>PRT

<213>人

<400> Met Ala Leu Arg Arg Leu Gly Ala Ala Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu   1               5                 10                  15 Ala Ala Val Glu Glu Thr Leu Met Asp Ser Thr Thr Ala Thr Ala Glu

         20                 25                  30 Leu Gly Trp Met Val His Pro Pro Ser Gly Trp Glu Glu Val Ser Gly

    35                  40                  45 Tyr Asp Glu Asn Met Asn Thr Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val

50                  55                  60 Phe Glu Ser Ser Gln Asn Asn Trp Leu Arg Thr Lys Phe Ile Arg Arg 65                  70                  75              80 Arg Gly Ala His Arg Ile His Val Glu Met Lys Phe Ser Val Arg Asp

            85                  90              95 Cys Ser Ser Ile Pro Ser Val Pro Gly Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn

        100                 105             110 Leu Tyr Tyr Tyr Glu Ala Asp Phe Asp Ser Ala Thr Lys Thr Phe Pro

    115                 120             125 Asn Trp Met Glu Asn Pro Trp Val Lys Val Asp Thr Ile Ala Ala Asp

130                 135             140 Glu Ser Phe Ser Gln Val Asp Leu Gly Gly Arg Val Met Lys Ile Asn 145                 150             155                     160 Thr Glu Val Arg Ser Phe Gly Pro Val Ser Arg Ser Gly Phe Tyr Leu

            165             170                     175 Ala Phe Gln Asp Tyr Gly Gly Cys Met Ser Leu Ile Ala Val Arg Val

        180                 185                 190 Phe Tyr Arg Lys Cys Pro Arg Ile Ile Gln Asn Gly Ala Ile Phe Gln

    195                 200                 205 Glu Thr Leu Ser Gly Ala Glu Ser Thr Ser Leu Val Ala Ala Arg Gly

210                 215                 220 Ser Cys Ile Ala Asn Ala Glu Glu Val Asp Val Pro Ile Lys Leu Tyr 225                 230                 235                 240 Cys Asn Gly Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Arg Cys Met Cys

            245                 250                 255 Lys Ala Gly Phe Glu Ala Val Glu Asn Gly Thr Val Cys Arg Gly Cys

        260                 265                 270 Pro Ser Gly Thr Phe Lys Ala Asn Gln Gly Asp Glu Ala Cys Thr His

    275                 280                 285 Cys Pro Ile Asn Ser Arg Thr Thr Ser Glu Gly Ala Thr Asn Cys Val

290                 295                 300 Cys Arg Asn Gly Tyr Tyr Arg Ala Asp Leu Asp Pro Leu Asp Met Pro 305                 310                 315                 320 Cys Thr Thr Ile Pro Ser Ala Pro Gln Ala Val Ile Ser Ser Val Asn

            325                 330                 335 Glu Thr Ser Leu Met Leu Glu Trp Thr Pro Pro Arg Asp Ser Gly Gly

        340                 345                 350 Arg Glu Asp Leu Val Tyr Asn Ile Ile Cys Lys Ser Cys Gly Ser Gly

    355                 360                 365 Arg Gly Ala Cys Thr Arg Cys Gly Asp Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg

370                 375                 380 Gln Leu Gly Leu Thr Glu Pro Arg Ile Tyr Ile Ser Asp Leu Leu Ala 385                 390                 395                 400 His Thr Gln Tyr Thr Phe Glu Ile Gln Ala Val Asn Gly Val Thr Asp

            405                 410                 415 Gln Ser Pro Phe Ser Pro Gln Phe Ala Ser Val Asn Ile Thr Thr Asn

        420                 425                 430 Gln Ala Ala Pro Ser Ala Val Ser Ile Met His Gln Val Ser Arg Thr

    435                 440                 445 Val Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Ser Gln Pro Asp Gln Pro Asn Gly

450                 455                 460 Val Ile Leu Asp Tyr Glu Leu Gln Tyr Tyr Glu Lys Glu Leu Ser Glu 465                 470                 475                 480 Tyr Asn Ala Thr Ala Ile Lys Ser Pro Thr Asn Thr Val Thr Val Gln

            485                 490                 495 Gly Leu Lys Ala Gly Ala Ile Tyr Val Phe Gln Val Arg Ala Arg Thr

        500                 505                 510 Val Ala Gly Tyr Gly Arg Tyr Ser Gly Lys Met Tyr Phe Gln Thr Met

    515                 520                 525 Thr Glu Ala Glu Tyr Gln Thr Ser Ile Gln Glu Lys Leu Pro Leu Ile

530                 535                 540 Ile Gly Ser Ser Ala Ala Gly Leu Val Phe Leu Ile Ala Val Val Val 545                 550                 555                 560 Ile Ala Ile Val Cys Asn Arg Arg Gly Phe Glu Arg Ala Asp Ser Glu

            565                 570                 575 Tyr Thr Asp Lys Leu Gln His Tyr Thr Ser Gly His Met Thr Pro Gly

        580                 585                 590 Met Lys Ile Tyr Ile Asp Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu Ala

    595                 600                 605 Val Arg Glu Phe Ala Lys Glu Ile Asp Ile Ser Cys Val Lys Ile Glu

610                 615                 620 Gln Val Ile Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly His Leu 625                 630                 635                 640 Lys Leu Pro Gly Lys Arg Glu Ile Phe Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys

            645                 650                 655 Ser Gly Tyr Thr Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala Ser

        660                 665                 670 Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Val Ile His Leu Glu Gly Val

    675                 680                 685 Val Thr Lys Ser Thr Pro Val Met Ile Ile Thr Glu Phe Met Glu Ash

690                 695                 700 Gly Ser Leu Asp Ser Phe Leu Arg Gln Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val 705                 710                 715                 720 Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys Tyr

            725                 730                 735 Leu Ala Asp Met Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

        740                 745                 750 Leu Val Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser

    755                 760                 765 Arg Phe Leu Glu Asp Asp Thr Ser Asp Pro Thr Tyr Thr Ser Ala Leu

770                 775                 780 Gly Gly Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Gln Tyr 785                 790                 795                 800 Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met

            805                 810                 815 Trp Glu Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Thr Asn

        820                 825                 830 Gln Asp Val Ile Asn Ala Ile Glu Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro Pro

    835                 840                 845 Met Asp Cys Pro Ser Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln

850                 855                 860 Lys Asp Arg Asn His Arg Pro Lys Phe Gly Gln Ile Val Asn Thr Leu 865                 870                 875                 880 Asp Lys Met Ile Arg Asn Pro Asn Ser Leu Lys Ala Met Ala Pro Leu

            885                 890                 895 Ser Ser Gly Ile Asn Leu Pro Leu Leu Asp Arg Thr Ile Pro Asp Tyr

        900                 905                 910 Thr Ser Phe Asn Thr Val Asp Glu Trp Leu Glu Ala Ile Lys Met Gly

    915                 920                 925 Gln Tyr Lys Glu Ser Phe Ala Asn Ala Gly Phe Thr Ser Phe Asp Val

930                 935                 940 Val Ser Gln Met Met Met Glu Asp Ile Leu Arg Leu Gly Val Thr Leu 945                 950                 955                 960 Ala Gly His Gln Lys Lys Ile Leu Asn Ser Ile Gln Val Met Arg Ala

            965                 970                 975 Gln Met Asn Gln Ile Gln Ser Val Glu Val

        980                 985

<210>3

<211>3949

<212>DNA

<213>人

<400>3 gaattccgcc ccgggaagcg cagccatggc tctgcggagg ctgggggccg cgctgctgct      60 gctgccgctg ctcgccgccg tggaagaaac gctaatggac tccactacag cgactgctga     120 gctgggctgg atggtgcatc ctccatcagg gtgggaagag gtgagtggct acgatgagaa     180 catgaacacg atccgcacgt accaggtgtg caacgtgttt gagtcaagcc agaacaactg     240 gctacggacc aagtttatcc ggcgccgtgg cgcccaccgc atccacgtgg agatgaagtt     300 ttcggtgcgt gactgcagca gcatccccag cgtgcctggc tcctgcaagg agaccttcaa     360 cctctattac tatgaggctg actttgactc ggccaccaag accttcccca actggatgga     420 gaatccatgg gtgaaggtgg ataccattgc agccgacgag agcttctccc aggtggacct     480 gggtggccgc gtcatgaaaa tcaacaccga ggtgcggagc ttcggacctg tgtcccgcag     540 cggcttctac ctggccttcc aggactatgg cggctgcatg tccctcatcg ccgtgcgtgt     600 cttctaccgc aagtgccccc gcatcatcca gaatggcgcc atcttccagg aaaccctgtc     660 gggggctgag agcacatcgc tggtggctgc ccggggcagc tgcatcgcca atgcggaaga     720 ggtggatgta cccatcaagc tctactgtaa cggggacggc gagtggctgg tgcccatcgg     780 gcgctgcatg tgcaaagcag gcttcgaggc cgttgagaat ggcaccgtct gccgaggttg     840 tccatctggg actttcaagg ccaaccaagg ggatgaggcc tgtacccact gtcccatcaa     900 cagccggacc acttctgaag gggccaccaa ctgtgtctgc cgcaatggct actacagagc     960 agacctggac cccctggaca tgccctgcac aaccatcccc tccgcgcccc aggctgtgat    1020 ttccagtgtc aatgagacct ccctcatgct ggagtggacc cctccccgcg actccggagg    1080 ccgagaggac ctcgtctaca acatcatctg caagagctgt ggctcgggcc ggggtgcctg    1140 cacccgctgc ggggacaatg tacagtacgc accacgccag ctaggcctga ccgagccacg    1200 catttacatc agtgacctgc tggcccacac ccagtacacc ttcgagatcc aggctgtgaa    1260 cggcgttact gaccagagcc ccttctcgcc tcagttcgcc tctgtgaaca tcaccaccaa    1320 ccaggcagct ccatcggcag tgtccatcat gcatcaggtg agccgcaccg tggacagcat    1380 taccctgtcg tggtcccagc cagaccagcc caatggcgtg atcctggact atgagctgca    1440 gtactatgag aaggagctca gtgagtacaa cgccacagcc ataaaaagcc ccaccaacac    1500 ggtcaccgtg cagggcctca aagccggcgc catctatgtc ttccaggtgc gggcacgcac    1560 cgtggcaggc tacgggcgct acagcggcaa gatgtacttc cagaccatga cagaagccga    1620 gtaccagaca agcatccagg agaagttgcc actcatcatc ggctcctcgg ccgctggcct    1680 ggtcttcctc attgctgtgg ttgtcatcgc catcgtgtgt aacagacggg ggtttgagcg    1740 tgctgactcg gagtacacgg acaagctgca acactacacc agtggccaca tgaccccagg    1800 catgaagatc tacatcgatc ctttcaccta cgaggacccc aacgaggcag tgcgggagtt    1860 tgccaaggaa attgacatct cctgtgtcaa aattgagcag gtgatcggag caggggagtt    1920 tggcgaggtc tgcagtggcc acctgaagct gccaggcaag agagagatct ttgtggccat    1980 caagacgctc aagtcgggct acacggagaa gcagcgccgg gacttcctga gcgaagcctc    2040 catcatgggc cagttcgacc atcccaacgt catccacctg gagggtgtcg tgaccaagag    2100 cacacctgtg atgatcatca ccgagttcat ggagaatggc tccctggact cctttctccg    2160 gcaaaacgat gggcagttca cagtcatcca gctggtgggc atgcttcggg gcatcgcagc    2220 tggcatgaag tacctggcag acatgaacta tgttcaccgt gacctggctg cccgcaacat    2280 cctcgtcaac agcaacctgg tctgcaaggt gtcggacttt gggctctcac gctttctaga    2340 ggacgatacc tcagacccca cctacaccag tgccctgggc ggaaagatcc ccatccgctg    2400 gacagccccg gaagccatcc agtaccggaa gttcacctcg gccagtgatg tgtggagcta    2460 cggcattgtc atgtgggagg tgatgtccta tggggagcgg ccctactggg acatgaccaa    2520 ccaggatgta atcaatgcca ttgagcagga ctatcggctg ccaccgccca tggactgccc    2580 gagcgccctg caccaactca tgctggactg ttggcagaag gaccgcaacc accggcccaa    2640 gttcggccaa attgtcaaca cgctagacaa gatgatccgc aatcccaaca gcctcaaagc    2700 catggcgccc ctctcctctg gcatcaacct gccgctgctg gaccgcacga tccccgacta    2760 caccagcttt aacacggtgg acgagtggct ggaggccatc aagatggggc agtacaagga    2820 gagcttcgcc aatgccggct tcacctcctt tgacgtcgtg tctcagatga tgatggagga    2880 cattctccgg gttggggtca ctttggctgg ccaccagaaa aaaatcctga acagtatcca    2940 ggtgatgcgg gcgcagatga accagattca gtctgtggag ggccagccac tcgccaggag    3000 gccacgggcc acgggaagaa ccaagcggtg ccagccacga gacgtcacca agaaaacatg    3060 caactcaaac gacggaaaaa aaaagggaat gggaaaaaag aaaacagatc ctgggagggg    3120 gcgggaaata caaggaatat tttttaaaga ggattctcat aaggaaagca atgactgttc    3180 ttgcggggga taaaaaaggg cttgggagat tcatgcgatg tgtccaatcg gagacaaaag    3240 cagtttctct ccaactccct ctgggaaggt gacctggcca gagccaagaa acactttcag    3300 aaaaacaaat gtgaagggga gagacagggg ccacccttgg ctcctgtccc tgctgctcct    3360 ctaggcctca ctcaacaacc aagcgcctgg aggacgggac agatggacag acagccaccc    3420 tgagaacccc tctgggaaaa tctattcctg ccaccactgg gcaaacagaa gaatttttct    3480 gtctttggag agtattttag aaactccaat gaaagacact gtttctcctg ttggctcaca    3540 gggctgaaag gggcttttgt cctcctgggt cagggagaac gcggggaccc cagaaaggtc    3600 agccttcctg aggatgggca acccccaggt ctgcagctcc aggtacatat cacgcgcaca    3660 gcctggcagc ctggccctcc tggtgcccac tcccgccagc ccctgcctcg aggactgata    3720 ctgcagtgac tgccgtcagc tccgactgcc gctgagaagg gttgatcctg catctgggtt    3780 tgtttacagc aattcctgga ctcgggggta ttttggtcac agggtggttt tggtttaggg    3840 ggtttgtttg ttgggttgtt ttttgttttt tggttttttt taatgacaat gaagtgacac    3900 tttgacattt ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaa                3949

<210>4

<2ll>1055

<212>PRT

<213>人

<400>4 Met Ala Leu Arg Arg Leu Gly Ala Ala Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu   1             5                   10                   15 Ala Ala Val Glu Glu Thr Leu Met Asp Ser Thr Thr Ala Thr Ala Glu

        20                  25                  30 Leu Gly Trp Met Val His Pro Pro Ser Gly Trp Glu Glu Val Ser Gly

    35                  40                  45 Tyr Asp Glu Asn Met Asn Thr Ile Arg Thr Tyr Gln Val Cys Asn Val

50                  55                  60 Phe Glu Ser Ser Gln Asn Asn Trp Leu Arg Thr Lys Phe Ile Arg Arg 65                  70                  75                  80 Arg Gly Ala His Arg Ile His Val Glu Met Lys Phe Ser Val Arg Asp

            85                  90                  95 Cys Ser Ser Ile Pro Ser Val Pro Gly Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn

        100                 105                 110 Leu Tyr Tyr Tyr Glu Ala Asp Phe Asp Ser Ala Thr Lys Thr Phe Pro

    115                 120                 125 Asn Trp Met Glu Asn Pro Trp Val Lys Val Asp Thr Ile Ala Ala Asp

130                 135                 140 Glu Ser Phe Ser Gln Val Asp Leu Gly Gly Arg Val Met Lys Ile Asn 145                 150                 155                 160 Thr Glu Val Arg Ser Phe Gly Pro Val Ser Arg Ser Gly Phe Tyr Leu

            165                 170                 175 Ala Phe Gln Asp Tyr Gly Gly Cys Met Ser Leu Ile Ala Val Arg Val

        180                 185                 190 Phe Tyr Arg Lys Cys Pro Arg Ile Ile Gln Asn Gly Ala Ile Phe Gln

    195                 200                 205 Glu Thr Leu Ser Gly Ala Glu Ser Thr Ser Leu Val Ala Ala Arg Gly

210                 215                 220 Ser Cys Ile Ala Asn Ala Glu Glu Val Asp Val Pro Ile Lys Leu Tyr 225                 230                 235                 240 Cys Asn Gly Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro Ile Gly Arg Cys Met Cys

            245                 250                 255 Lys Ala Gly Phe Glu Ala Val Glu Asn Gly Thr Val Cys Arg Gly Cys

        260                 265                 270 Pro Ser Gly Thr Phe Lys Ala Asn Gln Gly Asp Glu Ala Cys Thr His

    275                 280                 285 Cys Pro Ile Asn Ser Arg Thr Thr Ser Glu Gly Ala Thr Asn Cys Val

290                 295                 300 Cys Arg Asn Gly Tyr Tyr Arg Ala Asp Leu Asp Pro Leu Asp Met Pro 305                 310                 315                 320 Cys Thr Thr Ile Pro Ser Ala Pro Gln Ala Val Ile Ser Ser Val Asn

            325                 330                 335 Glu Thr Ser Leu Met Leu Glu Trp Thr Pro Pro Arg Asp Ser Gly Gly

        340                 345                 350 Arg Glu Asp Leu Val Tyr Asn Ile Ile Cys Lys Ser Cys Gly Ser Gly

    355                 360                 365 Arg Gly Ala Cys Thr Arg Cys Gly Asp Asn Val Gln Tyr Ala Pro Arg

370                 375                 380 Gln Leu Gly Leu Thr Glu Pro Arg Ile Tyr Ile Ser Asp Leu Leu Ala 385                 390                 395                 400 His Thr Gln Tyr Thr Phe Glu Ile Gln Ala Val Asn Gly Val Thr Asp

            405                 410                 415 Gln Ser Pro Phe Ser Pro Gln Phe Ala Ser Val Asn Ile Thr Thr Asn

        420                 425                 430 Gln Ala Ala Pro Ser Ala Val Ser Ile Met His Gln Val Ser Arg Thr

    435                 440                 445 Val Asp Ser Ile Thr Leu Ser Trp Ser Gln Pro Asp Gln Pro Asn Gly

450                 455                 460 Val Ile Leu Asp Tyr Glu Leu Gln Tyr Tyr Glu Lys Glu Leu Ser Glu 465                 470                 475                 480 Tyr Asn Ala Thr Ala Ile Lys Ser Pro Thr Asn Thr Val Thr Val Gln

            485                 490                 495 Gly Leu Lys Ala Gly Ala Ile Tyr Val Phe Gln Val Arg Ala Arg Thr

        500                 505                 510 Val Ala Gly Tyr Gly Arg Tyr Ser Gly Lys Met Tyr Phe Gln Thr Met

    515                 520                 525 Thr Glu Ala Glu Tyr Gln Thr Ser Ile Gln Glu Lys Leu Pro Leu Ile

530                 535                 540 Ile Gly Ser Ser Ala Ala Gly Leu Val Phe Leu Ile Ala Val Val Val 545                 550                 555                 560 Ile Ala Ile Val Cys Asn Arg Arg Gly Phe Glu Arg Ala Asp Ser Glu

            565                 570                 575 Tyr Thr Asp Lys Leu Gln His Tyr Thr Ser Gly His Met Thr Pro Gly

        580                 585                 590 Met Lys Ile Tyr Ile Asp Pro Phe Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Glu Ala

    595                 600                 605 Val Arg Glu Phe Ala Lys Glu Ile Asp Ile Ser Cys Val Lys Ile Glu

610                 615                 620 Gln Val Ile Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Cys Ser Gly His Leu 625                 630                 635                 640 Lys Leu Pro Gly Lys Arg Glu Ile Phe Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys

            645                 650                 655 Ser Gly Tyr Thr Glu Lys Gln Arg Arg Asp Phe Leu Ser Glu Ala Ser

        660                 665                 670 Ile Met Gly Gln Phe Asp His Pro Asn Val Ile His Leu Glu Gly Val

    675                 680                 685 Val Thr Lys Ser Thr Pro Val Met Ile Ile Thr Glu Phe Met Glu Asn

690                 695                 700 Gly Ser Leu Asp Ser Phe Leu Arg Gln Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val 705                 710                 715                 720 Ile Gln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys Tyr

            725                 730                 735 Leu Ala Asp Met Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile

        740                 745                 750 Leu Val Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser

    755                 760                 765 Arg Phe Leu Glu Asp Asp Thr Ser Asp Pro Thr Tyr Thr Ser Ala Leu

770                 775                 780 Gly Gly Lys Ile Pro Ile Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala Ile Gln Tyr 785                 790                 795                 800 Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Val Met

            805                 810                 815 Trp Glu Val Met Ser Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Asp Met Thr Asn

        820                 825                 830 Gln Asp Val Ile Asn Ala Ile Glu Gln Asp Tyr Arg Leu Pro Pro Pro

    835                 840                 845 Met Asp Cys Pro Ser Ala Leu His Gln Leu Met Leu Asp Cys Trp Gln

850                 855                 860 Lys Asp Arg Asn His Arg Pro Lys Phe Gly Gln Ile Val Asn Thr Leu 865                 870                 875                 880 Asp Lys Met Ile Arg Asn Pro Asn Ser Leu Lys Ala Met Ala Pro Leu

            885                 890                 895 Ser Ser Gly Ile Asn Leu Pro Leu Leu Asp Arg Thr Ile Pro Asp Tyr

        900                 905                 910 Thr Ser Phe Asn Thr Val Asp Glu Trp Leu Glu Ala Ile Lys Met Gly

    915                 920                 925 Gln Tyr Lys Glu Ser Phe Ala Asn Ala Gly Phe Thr Ser Phe Asp Val

930                 935                 940 Val Ser Gln Met Met Met Glu Asp Ile Leu Arg Val Gly Val Thr Leu 945                 950                 955                 960 Ala Gly His Gln Lys Lys Ile Leu Asn Ser Ile Gln Val Met Arg Ala

            965                 970                 975 Gln Met Asn Gln Ile Gln Ser Val Glu Gly Gln Pro Leu Ala Arg Arg

        980                 985                 990 Pro Arg Ala Thr Gly Arg Thr Lys Arg Cys Gln Pro Arg Asp Val Thr

    995                 1000                1005 Lys Lys Thr Cys Asn Ser Asn Asp Gly Lys Lys Lys Gly Met Gly Lys

1010                1015                1020 Lys Lys Thr Asp Pro Gly Arg Gly Arg Glu Ile Gln Gly Ile Phe Phe 1025                1030                1035                1040 Lys Glu Asp Ser His Lys Glu Ser Asn Asp Cys Ser Cys Gly Gly

            1045                1050                1055

<2l0>5

<2ll>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>5 Met Met Met Glu Asp Ile Leu Arg Val   1             5

<210>6

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>6 Leu Leu Leu Pro Leu Leu Ala Ala Val   1                 5

<210>7

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>7 Gly Leu Thr Glu Pro Arg Ile Tyr Ile   1             5

<210>8

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>8 Arg Gln Asn Asp Gly Gln Phe Thr Val   1             5

<210>9

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>9 Thr Leu Met Asp Ser Thr Thr Ala Thr   1             5

<210>10

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>10 Lys Leu Pro Gly Arg Glu Ile Phe Val   1             5

<210>11

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>11 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ala Val   1             5

<210>12

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>12 Gln Met Met Met Asp Ile Leu Arg Val   1             5

<210>13

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>13 Trp Ser Tyr Gly Val Met Trp Glu Val   1             5

<210>14

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<400>14 Phe Leu Ile Ala Val Val Ile Ala Ile   1             5