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一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法

阅读：421发布：2020-07-12

专利汇可以提供一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法。是利用免疫血液学原理，在微量检测板上配备有微量(1微升)已知的抗红细胞抗原抗体，加入微量(1微升)未知待检的红细胞，检测红细胞膜表面抗原；或已知微量(1微升)红细胞抗原的红细胞，加入微量(1微升)未知待检的血清，检测人体血液中存在的抗红细胞膜表面抗原抗体。它的反应标识为红细胞聚集，有聚集的为阳性反应，无聚集的为阴性反应，结合着离心机，分光光度计，显微镜和电脑程序，可以快速，准确和自动化的检测红细胞的抗原以及在血清中的抗体。使用该微量检测板试剂盒可大大提高临床红细胞配型的安全性、高效率、准确度并降低了检测费用，促进了临床血液应用的发展。，下面是一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法，其特征是，采用微量(微升)检测板(30，60，72或其它孔微量(微升)检测板)应用红细胞凝集的方法去测定存在于人体体液的特异性抗原或抗体；
其中，所述方法可分别为：
以正向红细胞凝集的步骤检测红细胞膜上的抗原的方法；
以反向红细胞凝集的步骤检测人体内抗红细胞膜上的抗体的方法；
以间接血凝的步骤测定存在于人体体液的特异性抗体的方法；
以反向间接血凝的步骤测定存在于人体体液的特异性抗原的方法；
并且，所述方法中采用的微量(微升)板中的抗红细胞抗原抗体或吸附或交联抗体可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体，还可以是液状抗体，还可以是干燥粉状抗体；所述方法中采用的微量(微升)板中的红细胞可以是新鲜红细胞，也可以是经醛化、鞣酸处理的冰冻红细胞，还可以是冷冻干燥红细胞粉剂，还可以是红细胞膜；
并且，在所述微量(微升)板中每个孔内加入微量(微升)已知单克隆或多克隆抗红细胞抗原的抗体，用于检测每个人的像A，B，O；Rh等抗原系统的红细胞抗原，而制备成各种系列型红细胞抗原检测盒的方法也称为正向红细胞凝集实验；
并且，在所述微量(微升)检测板预先放入孔内微量(微升)已知单克隆或多克隆抗红细胞抗原的抗体用于检测红细胞抗原，制备成各种系列型红细胞抗体检测盒，用于测定红细胞抗原，也称为反向红细胞配型；
并且，在所述微量(微升)板中每个孔内加入微量(微升)吸附或交联的已知单克隆或多克隆抗体，用于检测人的病毒，肿瘤，自体免疫性疾病等，制备成各种系列型抗原检测盒，这种方法也称为红细胞反向间接凝集实验；
并且，在微量(微升)版中每个孔内加入微量(微升)吸附或交联的已知的抗原，用于检测人的病毒，肿瘤，自体免疫性疾病等抗体，制备成各种系列型抗体检测盒，这种方法也称为红细胞间接凝集实验；
并且，采用所述30，60或72孔微量(微升)检测板检测红细胞膜表面抗原，用于检测每个人不止是像A，B，O；Rh等抗原系统的红细胞表型抗原(Phenotype)，而且还包括P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统，以及任何其它有关的红细胞系统，制备成用于检测每个人的红细胞表型抗原(Phenotype)抗原检测盒。
2.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述用来检测人血清内的抗红细胞抗体或红细胞抗原系统所采用的方法可以是抗体和抗原直接的免疫反应所引起的红细胞凝集现象的直接反应；也可以是抗体和抗原在摄氏37度或摄氏4度孵育一定时间15或30分钟以后，洗去多余的抗体和抗原，加入像抗人免疫球蛋白这样的第二抗体，从而产生的间接的免疫反应的红细胞凝集现象的抗体或抗原的间接反应。
3.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述的检测板可以是供临床或血库应用的反向红细胞检测板，其步骤是，在所述检测板中加入1微升新鲜红细胞、冷冻干燥红细胞粉剂或红细胞膜蛋白和5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床检验或血库应用；同理，所述的检测板可以供临床检验或血库应用的各种正向红细胞检测板、间接血凝板或反向血凝板，其步骤是，在所述检测板中加入1微升新鲜红细胞经醛化、鞣酸处理且吸附单克隆或多克隆抗体红细胞或冷冻干燥红细胞并与5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床检验或血库应用。
4.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述方法中采用微量(微升)血量判断血型抗原或抗体，其步骤是，将检测者通过静脉或手指、耳垂的从末梢血管收集全血，经离心机后分离血清和红细胞，将红细胞用正常生理盐水稀释到1％到3％，取出1微升稀释的红细胞加入到微量(微升)检测板的孔中，以离心速度在300到1000rpm之间再离心30秒到1分钟，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后，用微量(微升)检测板直接用显微镜观察结果；根据红细胞凝集的程度，对凝集结果打分，从0加号到4个加号；0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原；而
4个加号为强阳性，存在相应的抗原。
5.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述用间接红细胞凝集方法检测人体液内所含抗体的步骤，可分别是抗AIDS病毒，并制备成AIDS病毒抗体检测微量板试剂盒、抗肝炎病毒抗体，并制备成肝炎病毒抗体检测微量板试剂盒、自家免疫性疾病，并制备成自家免疫性疾病检测微量板试剂盒的步骤。
6.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述用反向间接红细胞凝集方法检测人体液内所含抗原的步骤，可分别是确定肿瘤的甲胎蛋白，并制备成甲胎蛋白检测微量板试剂盒、确定AIDS病毒，并制备成AIDS病毒检测微量板试剂盒、确定肝炎病毒抗原，并制备成肝炎病毒抗原检测微量板试剂盒的步骤。
7.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述的人体体液，可以是妇女的尿液，其检测步骤是，将妇女的尿液制备成早期妊娠或卵巢肿瘤抗原的检测微量板试剂盒。
8.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述的检测抗体的方法可以是检测抗病原生物的抗体的方法，其中，所述抗病原生物的抗体包括抗脑膜炎球菌、沙门菌、志贺菌、结核杆菌、流感病毒、血吸虫等病原体的抗体。
9.根据权利要求1所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述的方法也是一种为增加实验的灵敏度所应用凝集胺的方法，所述方法可以使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性；其中，凝集的载体颗粒可以有O型人红细胞，羊红细胞及兔红细胞，聚苯乙烯乳胶颗粒，活性碳等颗粒，且用以吸附或交联抗原或抗体；同理，也可用金黄色葡萄球菌作为载体，并以此与免疫球蛋白的Fc相结合从而用以凝集试验；所述的常用载体包括红细胞、冷冻干燥红细胞、胶乳颗粒、活性炭、SPA菌体。
10.根据权利要求1和9所述的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体方法，其特征是，所述的用于抗体和抗原免疫反应引起的红细胞凝集的方法分别包括将抗体和抗原免疫反应引起的红细胞凝集与电脑及分光光度计机相连接的方法，其步骤是，通过电脑分析红细胞凝集现象，判断血清抗体或抗原，也可把红细胞凝集现象保存在电脑内供以后分析；
或结合着电脑，用于半自动化，自动化分析红细胞凝集现象，判断血清抗体或抗原。

说明书全文

一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种利用免疫血液学原理，检测人血清中存在的抗体或抗原的方法，尤其是一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法。

背景技术

[0002] 细菌和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病红细胞抗原和抗体的发现是凝集反应最好的例子。在1901年Kaul Landsteiner证明，当人群之间相互输血时，由于红细胞的血型不同可以引起被输血者有发烧，黄疸。因此，Kaul Landsteiner把血型分成A，B，和O型，而且在实际应用中也说明在血型之间相符的人群间输血是不会有输血反应的，并于1930年获得了诺贝尔奖金。凝集试验灵敏度高，方法简便，迄今已成为通用的免疫学试验，广泛应用于临床检验。1902年A.Decastrello和A.Sturli发现了AB血型。1940年由Levine和Stetson发现了Rh血型，这是根据红细胞膜是否存在这种抗原而把血型分为Rh阳性(也称为D+)为含有这种抗原，Rh阴性(也称为D-)为不含有这种抗原。现在已经清楚，98％以上的中国人为Rh阳性，而白种人仅有70％为Rh阳性。

[0003] 检测红细胞膜表面的抗原和血清中的抗体来自于血液免疫学的发展，随着科学家可以分离这种抗体和抗原，并利用这些抗体和抗原去检测相应红细胞膜表面的抗原和血清中的抗体。

[0004] 现已明确在A型红细胞抗原的人都有B型抗体在血浆里，B型红细胞抗原的人都有A型抗体在血浆里，而O型红细胞抗原的人都有A，B型抗体在血浆里，AB型红细胞抗原的人都无A，B，抗体存在血浆里。

[0005] 在1950年Watkins and Morgan(Nature 180：1038-1040，1957)首先分析了红细胞膜的抗原结构并纯化了许多抗原，发现了红细胞膜表面含有更多的抗原系统，同时，利用这些已知的抗原也检测出在血浆中存在着更多的抗体，而在1980年以后单克隆抗体的发明更进一步的加速了红细胞抗原的发现和发展。许多红细胞抗原的单克隆抗体的发现和生产，促进了更多抗原的发现也加速了这些抗原和抗体在临床上的应用。

[0006] 市场上可利用的单克隆或多克隆抗体大都用来测定红细胞的表面抗原，像A，B和D，而常用的方法就是红细胞凝集实验。即红细胞抗原和相应，已知的抗体结合后会产生红细胞聚集反应，这种方法称为正向红细胞配型，而采用相应，已知的红细胞抗原和未知的抗体结合后产生红细胞聚集反应，这种方法称为反向红细胞配型，为了更精确的配型，临床上都同时采用这二种方法去检测红细胞血型。

[0007] 在常规的红细胞配型实验中，待检测红细胞和已知抗体，或待检测血清和已知红细胞抗原，分别在玻璃片，试管，凝胶，检查板混合，通常用于对A，B，O红细胞抗原的测定，而对D型抗原则采用Coomb’s方法，即在待检测红细胞和抗D抗原抗体混合以后，还需加抗人免疫球蛋白抗体，然后才会出现凝结反应，这也称为间接红细胞凝结实验。

[0008] 在1980年后兴起的单克隆抗体技术，加速了这些抗原的鉴定和发展，由于这些抗体的精确反应以及来源稳定，现在已经替代了大部分在临床上应用的多克隆抗体，但其价格上也比多克隆抗体为贵。

[0009] 酶联免疫(ELISA)是一种用酶标记抗原或抗体，通过酶催化底物显色，测定抗原或抗体的方法。该法将抗原抗体反应的特异性与酶促反应的高效性和显色性有机地结合起来，具有特异、敏感、简便、易于观察结果。但耗时长，结果不能保存，用试剂量大。

[0010] 免疫荧光技术是利用抗原抗体反应的特异性，将抗原或抗体标记上荧光素，通常用异硫氰酸盐荧光素(FITC)，与相应的抗原或抗体结合后，在荧光显微镜下可观察到发荧光的抗原抗体反应物。但方法复杂，耗时长，价格高。

[0011] 放射免疫分析技术是60年代初发展起来的一种新技术，它是把同位素技术的高灵敏度、精确性与抗原抗体反应的专一性结合在一起，在体外测定超微量(微升)物质的技术。该技术已广泛应用在蛋白质、多肽激素、癌相关抗原等的测定上。放射性同位素具有pg级的灵敏度，且利用反复曝光的方法可对痕量物质进行定量检测。但放射性同位素对人体的损伤，而且方法复杂，耗时长，结果不能保存，价格高也限制了该方法的使用。

[0012] 采用玻璃片的凝集方法简单、快速、但消耗试剂多而且不是很精确，效率低下；试管凝集方法精确，但费时，费试剂，效率低，结果不能保存；凝胶方法精确，结果能保存，但费时，费试剂，效率低；检查板方法结果能保存，快速，可以方便自动化操作，效率高但费试剂，结果不能保存，操作麻烦，无直观性而且有时会出现误差，而需人工复查。

发明内容

[0013] 本发明所要解决的技术问题是提供一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法。以该方法可以分别精确、快速且用量极小地检测红细胞膜上的抗原、检测人体内抗红细胞膜上的抗体、测定存在于人体体液的特异性抗体、测定存在于人体体液的特异性抗原。

[0014] 为此，本发明解决所述问题的技术方案是：一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法，是采用微量(微升)检测板(30，60，72或其它孔微量(微升)检测板)应用红细胞凝集的方法去测定存在于人体体液的特异性抗原或抗体；其中，所述方法可分别为：

[0015] 以正向红细胞凝集的步骤检测红细胞膜上的抗原的方法；

[0016] 以反向红细胞凝集的步骤检测人体内抗红细胞膜上的抗体的方法；

[0017] 以间接血凝的步骤测定存在于人体体液的特异性抗体的方法；

[0018] 以反向间接血凝的步骤测定存在于人体体液的特异性抗原的方法；

[0019] 并且，所述方法中采用的微量(微升)板中的抗红细胞抗原抗体或吸附或交联抗体可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体，还可以是液状抗体，还可以是干燥粉状抗体；所述方法中采用的微量(微升)板中的红细胞可以是新鲜红细胞，也可以是经醛化、鞣酸处理的冰冻红细胞，还可以是冷冻干燥红细胞粉剂，还可以是红细胞膜；

[0020] 并且，在所述微量(微升)板中每个孔内加入微量(微升)已知单克隆或多克隆抗红细胞抗原的抗体，用于检测每个人的像A，B，O；Rh等抗原系统的红细胞抗原，而制备成各种系列型红细胞抗原检测盒的方法也称为正向红细胞凝集实验；

[0021] 并且，在所述微量(微升)检测板预先放入孔内微量(微升)已知单克隆或多克隆抗红细胞抗原的抗体用于检测红细胞抗原，制备成各种系列型红细胞抗体检测盒，用于测定红细胞抗原，也称为反向红细胞配型；

[0022] 并且，在所述微量(微升)板中每个孔内加入微量(微升)吸附或交联的已知单克隆或多克隆抗体，用于检测人的病毒，肿瘤，自体免疫性疾病等，制备成各种系列型抗原检测盒，这种方法也称为红细胞反向间接凝集实验；

[0023] 并且，在微量(微升)版中每个孔内加入微量(微升)吸附或交联的已知的抗原，用于检测人的病毒，肿瘤，自体免疫性疾病等抗体，制备成各种系列型抗体检测盒，这种方法也称为红细胞间接凝集实验；

[0024] 并且，采用所述30，60或72孔微量(微升)检测板检测红细胞膜表面抗原，用于检测每个人不止是像A，B，O；Rh等抗原系统的红细胞表型抗原(Phenotype)，而且还包括P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统，以及任何其它有关的红细胞系统，制备成用于检测每个人的红细胞表型抗原(Phenotype)抗原检测盒。优选的，所述用来检测人血清内的抗红细胞抗体或红细胞抗原系统所采用的方法可以是抗体和抗原直接的免疫反应所引起的红细胞凝集现象的直接反应；也可以是抗体和抗原在摄氏37度或摄氏4度孵育一定时间15或30分钟以后，洗去多余的抗体和抗原，加入像抗人免疫球蛋白这样的第二抗体，从而产生的间接的免疫反应的红细胞凝集现象的抗体或抗原的间接反应。

[0025] 优选的，所述的检测板可以是供临床或血库应用的反向红细胞检测板，其步骤是，在所述检测板中加入1微升新鲜红细胞、冷冻干燥红细胞粉剂或红细胞膜蛋白和5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床检验或血库应用；同理，所述的检测板可以供临床检验或血库应用的各种正向红细胞检测板、间接血凝板或反向血凝板，其步骤是，在所述检测板中加入1微升新鲜红细胞经醛化、鞣酸处理且吸附单克隆或多克隆抗体红细胞或冷冻干燥红细胞并与5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床检验或血库应用。

[0026] 优选的，所述方法中采用微量(微升)血量判断血型抗原或抗体，其步骤是，将检测者通过静脉或手指、耳垂的从末梢血管收集全血，经离心机后分离血清和红细胞，将红细胞用正常生理盐水稀释到1％到3％，取出1微升稀释的红细胞加入到微量(微升)检测板的孔中，以离心速度在300到1000rpm之间再离心30秒到1分钟，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后，用微量(微升)检测板直接用显微镜观察结果；根据红细胞凝集的程度，对凝集结果打分，从0加号到4个加号；0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原；而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0027] 优选的，所述用间接红细胞凝集方法检测人体液内所含抗体的步骤，可分别是抗AIDS病毒，并制备成AIDS病毒抗体检测微量板试剂盒、抗肝炎病毒抗体，并制备成肝炎病毒抗体检测微量板试剂盒、自家免疫性疾病，并制备成自家免疫性疾病检测微量板试剂盒的步骤。

[0028] 优选的，所述用反向间接红细胞凝集方法检测人体液内所含抗原的步骤，可分别是确定肿瘤的甲胎蛋白，并制备成甲胎蛋白检测微量板试剂盒、确定AIDS病毒，并制备成AIDS病毒检测微量板试剂盒、确定肝炎病毒抗原，并制备成肝炎病毒抗原检测微量板试剂盒的步骤。

[0029] 优选的，所述的人体体液，可以是妇女的尿液，其检测步骤是，将妇女的尿液制备成早期妊娠或卵巢肿瘤抗原的检测微量板试剂盒。

[0030] 优选的，所述的检测抗体的方法可以是检测抗病原生物的抗体的方法，其中，所述抗病原生物的抗体包括抗脑膜炎球菌、沙门菌、志贺菌、结核杆菌、流感病毒、血吸虫等病原体的抗体。

[0031] 优选的，所述的方法也是一种为增加实验的灵敏度所应用凝集胺的方法，所述方法可以使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性；其中，凝集的载体颗粒可以有O型人红细胞，羊红细胞及兔红细胞，聚苯乙烯乳胶颗粒，活性碳等颗粒，且用以吸附或交联抗原或抗体；同理，也可用金黄色葡萄球菌作为载体，并以此与免疫球蛋白的Fc相结合从而用以凝集试验；所述的常用载体包括红细胞、冷冻干燥红细胞、胶乳颗粒、活性炭、SPA菌体。

[0032] 优选的，所述的用于抗体和抗原免疫反应引起的红细胞凝集的方法分别包括将抗体和抗原免疫反应引起的红细胞凝集与电脑及分光光度计机相连接的方法，其步骤是，通过电脑分析红细胞凝集现象，判断血清抗体或抗原，也可把红细胞凝集现象保存在电脑内供以后分析；或结合着电脑，用于半自动化，自动化分析红细胞凝集现象，判断血清抗体或抗原。

[0033] 相比现有技术，本发明具有的积极效果是，本发明将抗原或抗体结合或吸附到比其体积大千万倍的红细胞或其它相应载体的表面上，则只要少量的抗原或抗体就可以使红细胞通过抗体或抗原的特异性结合而出现肉眼可见的凝集现象，这就大大地提高了凝集反应的敏感性。也可以将可溶性多糖或蛋白质抗原吸附于一种与免疫无关的、有一定大小的载体微粒或红细胞表面，这种被抗原致敏的红细胞遇到相应的抗体时，在一定的条件下，由于抗原抗体的特异性结合而间接地带动着红细胞的凝集，这一反应称为间接血凝反应。同样，如果用免疫球蛋白致敏红细胞上，也能与相应的抗原在一定的条件下起凝集反应，这称为反向间接血凝试验。如果红细胞膜本身抗原和相应抗体发生免疫反应称为正向血凝实验，反之称为反向血凝实验。附图说明

[0034] 图1是本发明涉及的精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法的流程示意图。

具体实施方式

[0035] 凝集胺是一种高价阳离子多聚物可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞产生非特异性的凝集，当加入悬浮液去中和凝集胺阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体抗原相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。这种反应适用于各种抗原抗体的免疫反应检测，可以大大增强其敏感度。

[0036] 载体颗粒有O型人红细胞，羊红细胞及兔红细胞、聚苯乙烯乳胶、活性碳等颗粒、可以吸附或交联抗原或抗体，也可用金黄色葡萄球菌作为载体，因为该菌体可以和免疫球蛋白的Fc相结合从而可用以凝集试验。常用的载体有红细胞、胶乳颗粒、活性炭、SPA菌体等。本专利的申请载体以红细胞为例，但不局限于红细胞。

[0037] 载体颗粒可以吸附或交联病毒抗原，像AIDs病毒的特异性抗原蛋白去检测AIDs病毒的特异性抗体，也可用吸附肝炎病毒特异性抗原蛋白(A，B，C，E等)去检测肝炎病毒的特异性抗体。

[0038] 载体颗粒可以吸附或交联抗体，像AIDs病毒的特异性抗体，检测AIDs病毒的特异性抗原，也可吸附或交联肝炎病毒(A，B，C，E等)的特异性抗体检测肝炎病毒的特异性抗原。

[0039] 载体颗粒可以吸附或交联抗体，像吸附了人类绒毛膜促性腺激素抗体，检测妇女的尿液，测定早期妊娠或卵巢肿瘤。

[0040] 若采用人O型红细胞，可以用新鲜红细胞，冷冻干燥的红细胞、也可应用醛化，鞣酸处理红细胞致敏。

[0041] 间接凝集试验也用于检测抗病原生物的抗体，例如抗脑膜炎球菌、沙门菌、志贺菌、结核杆菌、肝炎，Aids病毒、流感病毒、血吸虫等病原体的抗体。

[0042] 间接凝集试验也可用于检测自身抗体，像红斑狼疮，类风湿关节炎等。

[0043] 反向间接凝集试验也可用于检测某些肿瘤抗原，像肝肿瘤的甲胎蛋白。

具体实施方式

[0044] 与背景技术中的几种方法相比，由本发明的微量(微升)凝集法具有简单、快速、方便、准确、消耗试剂少和经济效益好的特点，而且能保存反应结果供以后的复查，更重要的是可以用电脑程序分析检测结果，省时、省人力、并可以展开自动化操作，可联网发送检测结果。并且，采用本发明的方法，可以制备成各种各样的红细胞配型微量(微升)检测板提供给临床应用，提高和保证了血液制品的安全应用，提高临床检验的快速和准确度。

[0045] 具体地说，采用微量(微升)检测板(30，60，72或其它孔微量(微升)检测板)应用红细胞凝集的方法去测定存在于人体体液的特异性抗原或抗体。即，可用正向红细胞凝集方法检测红细胞膜上的抗原。

[0046] 可用反向红细胞凝集方法检测人体内抗红细胞膜上的抗体。可用间接血凝的方法测定存在于人体体液的特异性抗体。可用反向间接血凝的方法测定存在于人体体液的特异性抗原。采用该方法的微量(微升)版中的抗红细胞抗原抗体或吸附或交联抗体可以是多克隆抗体，也可以是单克隆抗体；可以是液状抗体，也可以是干燥粉状抗体。采用该方法的微量(微升)版中的红细胞可以是新鲜红细胞，也可以是醛化，鞣酸处理冰冻红细胞，也可以是冷冻干燥红细胞粉剂，也可以是红细胞膜。在微量(微升)版中每个孔内加入微量(微升)已知单克隆或多克隆抗红细胞抗原的抗体，用于检测每个人的红细胞抗原，像A，B，O；Rh等抗原系统，制备成各种系列型红细胞抗原检测盒，这种方法也称为正向红细胞凝集实验。在微量(微升)检测板预先放入孔内微量(微升)已知单克隆或多克隆抗红细胞抗原的抗体用于检测红细胞抗原，制备成各种系列型红细胞抗体检测盒，用于测定红细胞抗原，也称为反向红细胞配型。在微量(微升)版中每个孔内加入微量(微升)吸附或交联的已知单克隆或多克隆抗体，用于检测人的病毒，肿瘤，自体免疫性疾病等，制备成各种系列型抗原检测盒，这种方法也称为红细胞反向间接凝集实验。在微量(微升)版中每个孔内加入微量(微升)吸附或交联的已知的抗原，用于检测人的病毒，肿瘤，自体免疫性疾病等抗体，制备成各种系列型抗体检测盒，这种方法也称为红细胞间接凝集实验。

[0047] 本发明是采用30，60或72孔微量(微升)检测板检测红细胞膜表面抗原，用于检测每个人的红细胞表型抗原(Phenotype)，不止是像A，B，O；Rh等抗原系统，而且还有P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统，以及任何其它有关的红细胞系统，制备成用于检测每个人的红细胞表型抗原(Phenotype)抗原检测盒。该发明是用来检测人血清内的抗红细胞抗体，这种抗红细胞抗原抗体，尤其是像A，B，O；Rh等抗体系统。本发明同时是用来检测人血清内的抗红细胞抗体，这种抗红细胞抗原抗体，不止是像A，B，O；Rh等抗体系统，而且还有P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy，Fisher和Kidd等红细胞抗体系统，用于检测每个人的红细胞表型抗原抗体以及任何其它有关的红细胞抗体系统，制备成用于检测每个人的红细胞表型抗原抗体检测盒。

[0048] 本发明用来检测人血清内的抗红细胞抗体或红细胞抗原系统，所采用的方法可以是直接反应，即抗体和抗原直接的免疫反应引起的红细胞凝集现象，也可以是间接反应，即抗体和抗原在摄氏37度，4度孵育一定时间(像15，30分钟)以后，洗去多余的抗体和抗原，加入第二抗体，像抗人免疫球蛋白，从而产生的间接的免疫反应的红细胞凝集现象，用于鉴定相应的抗体或抗原。另外，为增加实验的灵敏度，本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

[0049] 应用本方法可以将本发明用于抗体和抗原免疫反应引起的红细胞凝集也可和电脑相连接，通过电脑分析红细胞凝集现象，判断血清抗体或抗原，也可把红细胞凝集现象保存在电脑内供以后分析。也可用于抗体和抗原免疫反应引起的红细胞凝集也可和分光光度计机相连接，结合着电脑，用于半自动化，自动化分析红细胞凝集现象，判断血清抗体或抗原。

[0050] 本发明的方法，相应的检测板可以供临床或血库应用，像反向红细胞检测板，就是加入1微升新鲜红细胞、冷冻干燥红细胞粉剂或红细胞膜蛋白和5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床或血库应用：本发明采用微量(微升)血量判断血型抗原或抗体，检测者可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，红细胞用正常生理盐水稀释到1％到3％。取出1微升稀释的红细胞加入到微量(微升)检测板的孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0051] 根据本发明，可用间接红细胞凝集方法检测人体液内所含的抗体，像抗AIDS病毒，并制备成AIDS病毒抗体检测微量板试剂盒。可用间接红细胞凝集方法检测人体液内所含的抗体，像抗肝炎病毒抗体，并制备成肝炎病毒抗体检测微量板试剂盒。可用间接红细胞凝集方法检测人体液内所含的抗体，像自家免疫性疾病，并制备成自家免疫性疾病检测微量板试剂盒。可用反向间接红细胞凝集方法检测人体液内所含的抗原，像肿瘤的甲胎蛋白，并制备成甲胎蛋白检测微量板试剂盒。可用反向间接红细胞凝集方法检测人体液内所含的抗原，像AIDS病毒，并制备成AIDS病毒检测微量板试剂盒。可用间接红细胞凝集方法检测人体液内所含的抗原，像肝炎病毒抗原，并制备成肝炎病毒抗原检测微量板试剂盒。

[0052] 同理，采用本方法可以用来去检测妇女的尿液，制备成早期妊娠或卵巢肿瘤抗原检测微量板试剂盒。以及用来去检测抗病原生物的抗体，例如抗脑膜炎球菌、沙门菌、志贺菌、结核杆菌、流感病毒、血吸虫等病原体的抗体。由于载体颗粒可以有O型人红细胞，羊红细胞及兔红细胞，聚苯乙烯乳胶颗粒，活性碳等颗粒，因此可以吸附或交联抗原或抗体，也可用金黄色葡萄球菌作为载体，因为该菌体可以和免疫球蛋白的Fc相结合从而可用以凝集试验。常用的载体有红细胞、也可以是冷冻干燥红细胞、胶乳颗粒、活性炭、SPA菌体等。本专利的申请载体以红细胞为例，但不限于红细胞。

[0053] 并且，以本发明的方法其相应的检测板可以供临床检验或血库应用，各种正向红细胞检测板，间接血凝板，反向血凝板，就是加入1微升新鲜红细胞，醛化，鞣酸处理吸附单克隆或多克隆抗体红细胞或冷冻干燥红细胞和5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床检验或血库应用；以及其相应的检测板可以供临床或血库应用，像反向红细胞检测板，就是加入1微升新鲜红细胞或冷冻干燥红细胞或红细胞膜蛋白和5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床检验或血库应用。

[0054] 本发明涉及的方法，不但可用于A，B，O血型系统，而且也可用于Rh，JK，MNs，Fy等系统的红细胞抗原检测，除了采用各种不同的单克隆抗体外，所采用的红细胞可以是新鲜采取的，也可是冰冻红细胞，也可以是红细胞膜，常检测的红细胞抗原有C，-c，-E，-e，-K，-ka b a b a b，-Le，-Le，-JK，-JK，-Fy，-Fy，-P1，-M，-N，-S，and-s，并可制备成各种各样的相应的红细胞配型微量(微升)板提供给临床应用。

[0055] 本发明涉及的方法去检测体内可能存在的各种病毒，像AIDs，肝炎病毒的抗原和相应的抗体。

[0056] 本发明涉及的方法可以用来去检测妇女的尿液，测定早期妊娠或卵巢肿瘤。

[0057] 本发明涉及的方法可以用来去检测抗病原生物的抗体，例如抗脑膜炎球菌、沙门菌、志贺菌、结核杆菌、肝炎病毒、流感病毒、血吸虫等病原体的抗体。

[0058] 本发明涉及的方法可以用来去检测自身抗体，像红斑狼疮、类风湿关节炎等。

[0059] 本发明涉及的方法可以用来去检测某些肿瘤抗原，像肝肿瘤的甲胎蛋白。

[0060] 同理，由于抗原、抗体结合具有高度的特异性，本发明涉及的方法可以进行凝集反应用作血型的判定以及协助传染病的诊断、流行病学调查以及微生物分类、遗传研究等诸多方面的工作。

[0061] 通过以下实施例可以更清楚地理解本发明现实的创造意义：

[0062] 由于本发明是采用红细胞作为载体，以30，60或72孔微量(微升)检测板(仅以此数为例，但不限于此数目)为固相，在每个板孔内加人1微升已知吸附在红细胞上的单克隆或多克隆抗体，用于检测人体血液中的抗原，因此，这种方法也称为反向间接血凝实验。

[0063] 由于本发明是采用红细胞作为载体，以30，60或72孔微量(微升)检测板为固相，在每个板孔内加人1微升已知吸附在红细胞上的抗原，用于检测人体血液中的抗体，因此，这种方法也称为间接血凝实验。

[0064] 由于本发明也可加入抗红细胞血型抗体，以30，60或72孔微量(微升)检测板(仅以此数为例，但不限于此数目)为固相，在每个板孔内加人1微升已知抗红细胞的单克隆或多克隆抗体，用于检测人体血液中的红细胞抗原，因此，这种方法也称为正向血凝实验。

[0065] 由于本发明也可直接采用红细胞作为载体，以30，60或72孔微量(微升)检测板(仅以此数为例，但不限于此数目)为固相，在每个板孔内加人1微升已知血型的红细胞，用于检测人体血液中的抗红细胞抗体，因此，这种方法也称为反向血凝实验。

[0066] 本发明采用已知吸附在红细胞上的单克隆或多克隆抗体的好处是明显的，因为所需血量小，提供制备好的抗体检测板可以大大缩短配型时间，而且更适用于儿童、老人、急诊和重病人，非常适合大规模人群疾病大范围的普查，非常适合全民健康普查，也非常适合天灾人祸或紧急状态的抢救。而采用吸附在红细胞上的已知抗原或抗体的好处是节省了检测时间，而且由于检测板有阴性和阳性对照，结合着电脑分析，增强了检测的准确性。

[0067] 由于本发明是利用30，60或72孔微量(微升)检测板为固相(仅以此数为例，但不限于此数目)，因此可以配备有致敏吸附的抗原或抗体的红细胞去检测人体内可溶性的抗体或抗原，也可采用非吸附的红细胞去检测人体内自然存在的血型抗体，或用抗红细胞膜表面抗体检测人红细胞抗原。

[0068] 由于本发明是用来检测人血清内的抗体或抗原，因此所采用的方法可以是直接反应，即抗体和抗原直接的免疫反应引起的红细胞凝集现象，也可以是间接反应，即抗体和抗原在37度，4度孵育一定时间(像15，30分钟)以后，洗去游离的抗体和抗原，加入第二抗体，像抗人免疫球蛋白从而产生的间接的免疫反应的红细胞凝集现象，用于鉴定相应的抗体或抗原。也可采用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

[0069] 而本发明用于抗体和抗原免疫反应引起的红细胞凝集现象可以通过放大镜，显微镜观察，也可和电脑相连接，通过电脑分析红细胞凝集现象，判断血清中未知的抗体或抗原，也可把红细胞凝集现象保存在电脑内供以后分析。

[0070] 根据上述的方法，相应的检测板可以供临床或血库应用，像正向载体红细胞检测板，就是加入1微升单克隆或多克隆抗体致敏的红细胞和5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床或血库应用。或根据上述的方法，相应的检测板可以供临床或血库应用，像反向载体红细胞检测板，就是加入1微升新鲜红细胞，致敏抗体或抗原吸附红细胞，醛化红细胞或冷冻干燥红细胞和5微升矿物油放于深低温冰箱存放，并以干冰保存运输给临床或血库应用。

[0071] 针对以上描述，可以将本发明更细致地总结为：

[0072] 该发明描述的是采用微量(微升)检测板去检测人体内的抗原和抗体。这种抗体是可溶性的抗体，而抗原可以是可溶性的，也可以是不溶性的，像红细胞膜上的抗原。

[0073] 例如进行正向红细胞配型血凝的试验：

[0074] 该发明的方法之一是直接测定红细胞的表面抗原。成熟的红细胞膜表面都含有大量的抗原，这些抗原分别分由不同的蛋白或糖原组成，形成各种抗原族。在人类目前至少已经发现23个抗原族。ABO抗原族是最重要的血型抗原族，是输血能否相合最重要的因素。Rh血型抗原族具有强烈的免疫抗原性，极易在Rh阴性的病人产生抗Rh抗体而引起输血的免疫反应。在正常人群中，血型为A的人，其红细胞含有A抗原，而其血液中含有B抗原抗体；血型为B的人，其红细胞含有B抗原，而其血液中含有A抗原的抗体；血型为AB的人，其红细胞含有AB抗原，而其血液中不含有ABO抗原族抗体；血型为O的人，其红细胞不含ABO抗原族抗原，而其血液中含有抗A和抗B抗原抗体。ABO和Rh抗原族是红细胞血型抗原中最重要的的血型抗原族，是能否用于输血的最重要的因素。来自于小鼠的单克隆抗体已经广泛应用于临床。在本发明中，我们既可采用来自于人体的多克隆抗体，但在大多数情况下，我们采用的是单克隆抗体，用于对ABO和Rh血型抗原族进行红细胞抗原检测的正向配型。
像检测ABO和Rh抗原族一样，该发明采用来自于小鼠的单克隆抗体既可采用来自于人体的多克隆抗体也可采用单克隆抗体，对除了ABO和Rh血型抗原族以外的红细胞抗原进行正向配型检测，这些抗原有P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统，以及任何其它有关的红细胞系统中的抗原。这也称为红细胞血型抗原的抗原表型检测(Phonotype)。

[0075] 而本发明的检测方法就是采用微量(微升)检测板，在每一个微量(微升)孔内加1微升抗红细胞抗体，像抗A，B，D，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统的抗体，以及任何其它有关的红细胞系统中的抗原的抗体，并覆盖一定含量的矿物油，以避免抗体蒸发，未知的新鲜红细胞加入微量(微升)孔内，从而发生免疫反应，导致红细胞聚集，从已知加入的抗体可以决定相应的红细胞抗原。可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，红细胞用正常生理盐水稀释到1％到3％。取出1微升稀释的红细胞加入到微量(微升)检测板的孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到
4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0076] 本发明的检测方法也适用于需Coom’s反应的间接反应正向配型检测莫些红细胞抗原，像Rh系统，就是在抗原(红细胞)和抗体(微量(微升)孔中的抗体)混合后，在37度孵育15到30分钟，然后离心，离心后的红细胞加入正常生理盐水洗涤红细胞3次，然后加入1微升抗免疫球蛋白抗体，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0077] 本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升抗已知红细胞抗原的单克隆或多克隆抗体，覆盖有5微升矿物油，储存在负20到负70度冰箱保存，采用干冰运输给临床应用。

[0078] 反向红细胞配型血凝实验：

[0079] 该发明的方法也可用于直接测定血清中抗红细胞表面抗原的抗体。成熟的红细胞膜表面都含有大量的抗原，这些抗原分别分由为不同的蛋白或糖原组成，形成各种抗原族。在人类目前至少已经发现23个抗原族。ABO抗原族是最重要的血型抗原族，是输血能否相合最重要的因素。Rh血型抗原族具有强烈的免疫抗原性，极易在Rh阴性的病人产生抗Rh抗体而引起输血的免疫反应。所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升已知红细胞抗原的新鲜红细胞或冰冻红细胞，也可为提纯的红细胞膜，覆盖有5微升矿物油，储存在负20到负70度冰箱保存，采用干冰运输给临床应用。在正常人群中，血型为A的人，其红细胞含有A抗原，而其血液中含有B抗原抗体；
血型为B的人，其红细胞含有B抗原，而其血液中含有A抗原抗体；血型为AB的人，其红细胞含有AB抗原，而其血液中不含有ABO抗原族抗体；血型为O的人，其红细胞不含ABO抗原族抗原，而其血液中含有抗A和抗B抗原抗体。通过检测血清中存在的抗体也可反向鉴定个人的ABO系统血型。

[0080] 像检测ABO系统抗体一样，该发明采用来自于含有各种红细胞表型(Phenotype)的已知红细胞抗原的新鲜红细胞，醛化，鞣酸化或冰冻红细胞检测Rh，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统的血清内存在的抗体，常用来对出现输血反应的多次输血病人抗体的筛选。

[0081] 本发明的检测方法是用微量(微升)检测板，在每一个微量(微升)孔内加1微升已知红细胞抗原的新鲜红细胞或，醛化，鞣酸化或冰冻红细胞，每孔中所含抗原的表型是不同的，并覆盖一定含量的矿物油，以避免液体蒸发，待测未知的血清加入微量(微升)孔内，从而发生免疫反应，导致红细胞聚集，从聚集的已知红细胞抗原不同微量(微升)孔中用电脑排比组合计算出血清中存在的抗红细胞抗体。可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，取出血清，每孔加入1微升血清到微量(微升)检测板，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗体。

[0082] 本发明的检测方法也适用于需Coom’s反应的间接反应反向配型检测血清中莫些抗红细胞抗原的抗体，像Rh，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd系统，就是在抗原(血清)和抗体(微量(微升)孔中的红细胞)混合后，在37度孵育15到30分钟，然后离心，离心后的红细胞加入正常生理盐水洗涤红细胞3次，然后加入1微升抗免疫球蛋白抗体，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗体。在这个微量(微升)版内都含有阴性和阳性对照以保证检测的可靠性。

[0083] 为增加实验的灵敏度，本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升已知红细胞抗原的新鲜或醛化，鞣酸处理冰冻红细胞或冷冻干燥红细胞粉剂，覆盖有5微升矿物油，储存在负20到负70度冰箱保存，采用干冰运输给临床应用。

[0084] 反向间接血凝试验：

[0085] 把载体，以O型红细胞为例，红细胞通过洗涤，醛化，洗涤，鞣酸处理，再洗涤，吸附或交联特异性抗体，如抗肝炎病毒，抗AIDs病毒抗体，抗肿瘤(甲胎蛋白)抗体等。将这些吸附或交联特异性抗体的红细胞1微升加入微量(微升)检测板的孔内，并覆盖一定含量的矿物油，以避免抗体蒸发。加入1微升未知的待检血清和已知抗体的红细胞发生免疫反应，导致红细胞聚集，从已知加入的抗体可以决定相应的人体内的抗原。可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，取出1微升血清加入到微量(微升)检测板的孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0086] 间接血凝试验：

[0087] 把载体，以O型红细胞为例，红细胞通过洗涤，醛化，洗涤，鞣酸处理，再洗涤，吸附或交联特异性抗原，如抗肝炎病毒，抗AIDs病毒特异性蛋白，自家免疫性特异性变性蛋白等。将这些吸附或交联特异性蛋白的红细胞1微升加入微量(微升)检测板的孔内，并覆盖一定含量的矿物油，以避免蛋白蒸发。加入1微升未知的待检血清和已知蛋白的红细胞发生免疫反应，导致红细胞聚集，从已知加入的抗原可以决定相应的人体内的抗体。可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，取出1微升血清加入到微量(微升)检测板的孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0088] 电脑软件和相应的自动化检测：

[0089] 微量(微升)血型检测吧板可根据临床的不同需要，配备有不同的设备和软件。对一个小型医院或血库，每天的用血量不大，仅仅配备一台显微镜和低速离心机就能完成血型配型或各种检测任务。对一个中性型以上医院或血库，每天的用血量较大以及检测病人多，不仅仅需配备显微镜和低速离心机，而且应该形成自动化检测，这包括微量(微升)检测板和光电比色机相连，机器能够通过比色原理，自动报告微量(微升)孔中红细胞的凝集程度，可以把凝集结果根据透光度记分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，而4个加号为强阳性。电脑加速了血型配型和临床检验的自动化发展，检测板，显微镜，光电比色机，电脑和打印机的联合，完成了血型配型的自动化过程，通过检测板的加样，电脑输入待检人的名字和号码，，电脑可以自动报告血型配型或病人的各项检测结果，储存待检人的血型和各种临床检验信息，储存微量(微升)版上各孔反应结果，红细胞凝集情况，而且还可远程输送配型信息到其它需要此信息的单位。电脑的发展不但加速了血型配型和临床检验的自动化发展而且可以利用电脑分析解决复杂的红细胞凝集反应的分析，小到血型配型正向和反向配型的分析和报告，大到检测个体含有血型抗体，病毒抗原，抗体，肿瘤抗原，自家免疫性抗体等的分析和判断，含有各种血型抗体的分析和判断从几十种，甚至上百种配型孔中的红细胞凝集反应中找出特定存在个体血液中的抗红细胞抗体，大大的节省了配型时间，增强了配型的准确性，也可以大量储存病人病毒抗原、抗体、肿瘤抗原、自家免疫性抗体等的分析和判断的资料。同时也可以用此方法监测药物治疗病毒感染的疗效。

[0090] 案例举例

[0091] 举例一：用微量(微升)板检测红细胞A，B，O和Rh抗原。在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板检测里含抗A，抗B和抗D抗体，或A，B，O红细胞，加入待检人的红细胞和血清，检测红细胞A，B和D抗原和抗体，表一是检测板各孔包括的抗体和红细胞。

[0092] 表一：红细胞1-A，-B，-D抗原，抗体检测板

[0093]

[0094] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升抗已知红细胞抗原的单克隆或多克隆抗体，覆盖有5微升矿物油。每一个检测板内都具有阳性和阴性对照，第一行为质量控制检测微量(微升)版的配型可靠性。余下部分的孔分别加入Anti-A；Anti-B；和Anti-D抗体，这些孔是用于红细胞的正向配型。余下的另部分的孔分别加入A1 Cel；B Cell；和A，B Cell，这些孔是用于红细胞的反向配型。

[0095] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，红细胞用正常生理盐水稀释到1％到3％。取出1微升稀释的红细胞加入到微量(微升)检测板的正向孔中，而血清1微升加入反向孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原或抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原或抗体。

[0096] 案例二：微量(微升)板检测红细胞表型抗原(Phenotype)

[0097] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板检测里含除了抗AB O系统以外的抗体，加入待检人的红细胞，检测红细胞AB O系统以外的抗原，表二是检测板各孔包括的抗体。

[0098] Table二：红细胞表型检测板

[0099]

[0100] 应用的微量(微升)检测板，在每一个微量(微升)孔内加1微升抗红细胞抗体，像抗Rh，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统的抗体，以及任何其它有关的红细胞系统中的抗原的抗体，并覆盖一定含量的矿物油，以避免抗体蒸发，未知的新鲜红细胞加入微量(微升)孔内，从而发生免疫反应，导致红细胞聚集，从已知加入的抗体可以决定相应的红细胞抗原。

[0101] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，红细胞用正常生理盐水稀释到1％到3％。取出1微升稀释的红细胞加入到微量(微升)检测板的正向孔中，而血清1微升加入孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。
0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0102] 本发明的检测方法也适用于需Coom’s反应的正向配型检测红细胞抗原，像Rh系统，就是在抗原(红细胞)和抗体(微量(微升)孔中的抗体)混合后，在37度孵育15到30分钟，然后离心，离心后的红细胞加入正常生理盐2水洗涤红细胞3次，然后加入1微升抗免疫球蛋白抗体，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原。

[0103] 案例三：微量(微升)板筛选抗红细胞表型抗原抗体

[0104] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板检测里含已知红细胞抗原的新鲜或醛，鞣酸处理冰冻红细胞，加入待检人的血清，筛选血清内含有的抗红细胞抗体，表三是检测板各孔包括的红细胞。

[0105] 表三：血清抗体筛选板

[0106]

[0107] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1到2微升已知红细胞抗原的新鲜红细胞或冰冻红细胞，覆盖有5微升矿物油。

[0108] 像检测ABO系统抗体一样，该发明采用来自于含有各种红细胞表型(Phenotype)的已知红细胞抗原的新鲜红细胞或冰冻红细胞检测Rh，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统的血清内存在的抗体。

[0109] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，血清1微升加入反向孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗体。

[0110] 本发明的检测方法就是，采用微量(微升)检测板，在每一个微量(微升)孔内加1微升已知红细胞抗原的新鲜红细胞或冰冻红细胞，每孔中所含抗原的表型是不同的，并覆盖一定含量的矿物油，以避免液体蒸发，待测未知的血清加入微量(微升)孔内，从而发生免疫反应，导致红细胞聚集，从聚集的已知红细胞抗原不同微量(微升)孔中用电脑排比组合计算出血清中存在的抗红细胞抗体。

[0111] 本发明的检测方法也适用于需Coom’s反应的间接反应反向配型检测血清中莫些抗红细胞抗原的抗体，像Rh，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd系统，就是在抗原(血清)和抗体(微量(微升)孔中的红细胞)混合后，在37度孵育15到30分钟，然后离心，

[0112] 离心后的红细胞加入正常生理盐水洗涤红细胞3次，然后加入1微升抗免疫球蛋白抗体，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在的抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗体。在这个微量(微升)版内都含有阴性和阳性对照以保证检测的可靠性。

[0113] 案例四：微量(微升)板鉴定抗红细胞表型抗原的抗体

[0114] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板检测里含已知红细胞抗原的新鲜，醛化，鞣酸化或冰冻红细胞，加入待检人的血清，鉴定血清内含有的抗红细胞抗体，表四是检测板各孔包括的红细胞。所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升抗已知红细胞抗原的单克隆或多克隆抗体，覆盖有5微升矿物油。每一个检测板内都具有阳性和阴性对照，第一行为质量控制检测微量(微升)版的配型可靠性。余下部分的孔分别加入Anti-A；Anti-B；和Anti-D抗体，这些孔是用于红细胞的正向配型。余下的另部分的孔分别加入A1 Cel；l B Cell；和A，B Cell，这些孔是用于红细胞的反向配型。

[0115] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，红细胞用正常生理盐水稀释到1％到3％。取出1微升稀释的红细胞加入到微量(微升)检测板的正向孔中，而血清1微升加入反向孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗原或抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗原或抗体。

[0116] 表四：抗红细胞抗体鉴定表

[0117]

[0118]

[0119] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1到2微升已知红细胞抗原的新鲜红细胞或冰冻红细胞，覆盖有5微升矿物油。

[0120] 像检测ABO系统抗体一样，该发明采用来自于含有各种红细胞表型(Phenotype)的已知红细胞抗原的新鲜红细胞或冰冻红细胞检测Rh，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd等红细胞系统的血清内存在的抗体。

[0121] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞，血清1微升加入反向孔中，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗体。

[0122] 本发明的检测方法就是，采用微量(微升)检测板，在每一个微量(微升)孔内加1微升已知红细胞抗原的新鲜红细胞或冰冻红细胞，每孔中所含抗原的表型是不同的，并覆盖一定含量的矿物油，以避免液体蒸发，待测未知的血清加入微量(微升)孔内，从而发生免疫反应，导致红细胞聚集，从聚集的已知红细胞抗原不同微量(微升)孔中用电脑排比组合计算出血清中存在的抗红细胞抗体。

[0123] 本发明的检测方法也适用于需Coom’s反应的间接反应反向配型检测血清中莫些抗红细胞抗原的抗体，像Rh，P，MNS，Kell，Luthern，Kell，Duffy和Kidd系统，就是在抗原(血清)和抗体(微量(微升)孔中的红细胞)混合后，在37度孵育15到30分钟，然后离心，离心后的红细胞加入正常生理盐水洗涤红细胞3次，然后加入1微升抗免疫球蛋白抗体，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的抗体。在这个微量(微升)版内都含有阴性和阳性对照以保证检测的可靠性。

[0124] 案例五：微量(微升)板间接血凝实验检测检测人体抗AIDs病毒抗体。

[0125] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板里含有吸附或交联AIDs病毒抗原的O型红细胞，这抗原可以是gp120，gp41，也可以是AIDs病毒抗原的变种或其它抗原，加入待检人的血清，检测待检人的抗AIDs病毒抗体，表一是检测板各孔包含的带有抗原的红细胞。

[0126]

[0127] 第一行为对照，只有对照有效，实验才可靠；

[0128] 第二行到第五行为检测病人血清。

[0129] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升孔的微量(微升)板里含有吸附或交联AIDs病毒抗原的O型红细胞，覆盖有5微升矿物油。每一个检测板内都具有阳性和阴性对照，第一行为质量控制检测微量(微升)版的配型可靠性。余下部分的孔分别加入孔的微量(微升)板里含有吸附或交联AIDs病毒抗原的O型红细胞。

[0130] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞。取出血清做等倍稀释，然后以1微升分别加入孔内，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的Aids病毒抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的Aids病毒抗体。

[0131] 为增加实验的灵敏度，本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性

[0132] 案例六：微量(微升)板间接血凝实验检测检测人体抗肝炎病毒抗体。

[0133] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板里含有吸附或交联肝炎病毒抗原的O型红细胞，这抗原可以是甲型肝炎，乙型肝炎病毒(澳抗)，丙型肝炎病毒也可以是其它肝炎病毒抗原的变种或其它抗原，加入待检人的血清，检测待检人的抗肝炎病毒抗体，表一是检测板各孔包括的带有抗原的红细胞。

[0134]

[0135]

[0136] 第一行为对照，只有对照有效，实验才可靠；

[0137] 第二行到第五行为检测病人血清。

[0138] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升孔的微量(微升)板里含有吸附或交联肝炎病毒抗原的O型红细胞，覆盖有5微升矿物油。每一个检测板内都具有阳性和阴性对照，第一行为质量控制检测微量(微升)版的配型可靠性。余下部分的孔分别加入孔的微量(微升)板里含有吸附或交联肝炎病毒抗原的O型红细胞。

[0139] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞。取出血清做等倍稀释，然后以1微升分别加入孔内，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的肝炎病毒抗体，而4个加号为强阳性，存在相应的病毒抗体。为增加实验的灵敏度，本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

[0140] 案例七：微量(微升)板反向间接血凝实验检测检测人体肝炎病毒抗原。

[0141] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板里含有吸附或交联肝炎病毒抗体的O型红细胞，这抗体可以是抗甲型肝炎，抗乙型肝炎病毒(澳抗)，抗丙型肝炎病毒也可以是其它抗肝炎病毒抗原的变种或其它抗原，加入待检人的血清，检测待检人的抗肝炎病毒抗原，表一是检测板各孔包括的带有抗原的红细胞。

[0142]

[0143] 第一行为对照，只有对照有效，实验才可靠；

[0144] 第二行到第五行为检测病人血清。

[0145] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升孔的微量(微升)板里含有吸附或交联肝炎病毒抗体的O型红细胞，覆盖有5微升矿物油。每一个检测板内都具有阳性和阴性对照，第一行为质量控制检测微量(微升)版的配型可靠性。余下部分的孔分别加入孔的微量(微升)板里含有吸附或交联肝炎病毒抗体的O型红细胞。

[0146] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞。取出血清做等倍稀释，然后以1微升分别加入孔内，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的肝炎病毒抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的病毒抗原。为增加实验的灵敏度，本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

[0147] 案例八：微量(微升)板反向间接血凝实验检测检测人体抗AIDs病毒抗原。

[0148] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板里含有吸附或交联AIDs病毒抗原的O型红细胞，这抗原可以是抗gp120，抗gp41抗体，也可以是抗AIDs病毒抗原的变种或其它抗体，加入待检人的血清，检测待检人的AIDs病毒抗原，表一是检测板各孔包括的带有抗体的红细胞。

[0149]

[0150] 第一行为对照，只有对照有效，实验才有效；

[0151] 第二行到第五行为检测病人血清。

[0152] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升孔的微量(微升)板里含有吸附或交联AIDs病毒抗体的O型红细胞，覆盖有5微升矿物油。每一个检测板内都具有阳性和阴性对照，第一行为质量控制检测微量(微升)版的配型可靠性。余下部分的孔分别加入孔的微量(微升)板里含有吸附或交联AIDs病毒抗体的O型红细胞。

[0153] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞。取出血清做等倍稀释，然后以1微升分别加入孔内，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的Aids病毒抗原，而4个加号为强阳性，存在相应的Aids病毒抗原。

[0154] 为增加实验的灵敏度，本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

[0155] 案例九：微量(微升)板反向间接血凝实验检测检测人体肿瘤抗原，以甲胎蛋白为例。

[0156] 在下列例子里，30，60，或72孔的微量(微升)板里含有吸附或交联抗甲胎蛋白抗体的O型红细胞，加入待检人的血清，检测待检人的甲胎蛋白抗原，表一是检测板各孔包括的带有抗体的红细胞。

[0157]

[0158]

[0159] 第一行为对照，只有对照有效，实验才有效；

[0160] 第二行到第五行为检测病人血清。

[0161] 所采用的微量(微升)板是30，60或72孔板或其它型号的微量(微升)板，每个孔含有1微升孔的微量(微升)板里含有吸附或交联的抗甲胎蛋白O型红细胞，覆盖有5微升矿物油。每一个检测板内都具有阳性和阴性对照，第一行为质量控制检测微量(微升)版的配型可靠性。余下部分的孔分别加入孔的微量(微升)板里含有吸附或交联抗甲胎蛋白O型红细胞。

[0162] 待测人可以通过静脉，也可以从末梢血管，像手指，耳垂收集全血，离心后分离血清和红细胞。取出血清做等倍稀释，然后以1微升分别加入孔内，离心30秒到1分钟，离心速度在300到1000rpm，然后用吹风或摇晃打散离心后的红细胞，此后微量(微升)检测板可以直接用显微镜观察结果。根据红细胞凝集的程度，可以把凝集结果打分，从0加号到4个加号。0加号为没有红细胞凝集，为阴性反应，不存在相应的抗甲胎蛋白红，而4个加号为强阳性，存在相应的抗甲胎蛋白红细胞。

[0163] 为增加实验的灵敏度，本发明也可应用凝集胺的方法，使正常的红细胞非特异性凝集散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗原抗体相结合，则会被凝集胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。

[0164] 综上所述，由于以上例子的待检血清都做等倍稀释，所以都可以定量检测待检者的病毒或甲胎蛋白的含量，既可以用于诊断，也可以用于治疗效果监测。

[0165] 本发明最大优越性为快速，加血样后，一分钟就可看结果；经济：较常规方法的价格便宜1/2到1/3，可以用于大规模人群的筛选；准确：该方法是采用显微镜下看结果，而不是像常规方法用肉眼查看，所以更准确；用血量少：该方法仅需要数微升血清，所以仅取耳血就可检测。

[0166] 本发明的突出优势就是大大节省了医院，血库检测所需要的成本和费用，从而医院，血库可以大大提高接受检测病人的数量，促进全社会民众的健康普及。

[0167] 本发明由于快速，准确，安全，可靠，省时和省费用，特别适合于偏远，贫穷，经济不发达的地区和国家医院和血库应用。

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一种精确、快速和微量检测人血清中抗原和抗体的方法

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