[0001] 发明背景

[0002] EPAS1是HIF(缺氧诱发因子)基因家族的成员。EPAS1也称为Hif2α，其编码参与氧调控基因诱导的转录因子的一半，并在氧水平下降时(一种称为缺氧的条件)被诱导。

[0003] 该基因的某些变体为生活在高纬度的人们提供保护。然而，在低纬度处，野生型(WT)EPAS1的过表达与中风和高血压的增加相关，且与类似高山病的症状相关。该基因中的突变还与红细胞增多家庭类型4和肺动脉高血压相关。EPAS1还可导致血红细胞的过量生产，导致受抑制的繁殖能力甚至死亡。

[0004] EPAS1还是涉及一类疾病(包括肿瘤进展)的多种基因的表达所需的，或者增强这些基因的表达。例如，EPAS1在葡萄膜黑素瘤的进展中起重要作用，可能是通过促进自分泌环VEGF-pVEGFR2/KDR，并通过增强LDHA的表达，从而赋予生长优势。

[0005] EPAS1还涉及或上调许多因子的表达，包括：c-Myc(其支持细胞增殖、转化、瘤形成和肿瘤发生，且在许多癌症中高表达)；白介素8(一种促炎介质，例如在牙龈炎或牛皮癣中)；SP-1(涉及IL-8调控的转录因子和c-Myc的共激活因子)；LDH5(与肿瘤形成和肿瘤尺寸增大相关)；以及LANA(潜伏相关核抗原，其与卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒相关)。此外，HIF(缺氧诱发因子)活性还涉及癌症肿瘤生长所需的血管发生。EPAS1还涉及若干其
他疾病，包括炎症、包括慢性炎症、新生血管疾病、类风湿性关节炎、肾疾病、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、软骨肉瘤和多发性骨髓瘤。

[0006] 因此，需要涉及这些和其他EPAS1相关疾病的治疗方法。

[0007] 本发明包括针对EPAS1(Hif2α)的RNAi试剂，其用于抑制EPAS1并可用于治疗EPAS1相关疾病，例如癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。

[0008] 本发明还包括一种治疗人对象的方法，该人对象具有至少部分由EPAS1表达介导的病理状态，该方法包括给予该对象治疗有效量的针对EPAS1的RNAi试剂的步骤。

[0009] 该方法还任选地包括给予第二试剂的方法。在一些方面中，该第二试剂是另一种针对EPAS1的RNAi试剂(例如靶向EPAS1靶标内不同序列的RNAi试剂)。在其他方面中，该第二试剂是另一种治疗方法，例如针对另一靶标的试剂，该另一靶标也是在病理状态中高活性的、突变的和/或过表达的。

[0010] 本发明提供了用于抑制EPAS1的特异性RNAi试剂，和用于降低对象(例如哺乳动物，如人)中EPAS1水平的方法。更具体地，本发明提供了包含EPAS1的至少15或19或更
多个连续核苷酸的双链RNAi试剂。具体而言，本发明提供了包含15或更多个连续核苷酸
的序列的试剂，其与例如本文任何表(如表1至5，包括表5的所有部分(表5A至5E))中
提供的RNAi试剂中任一种的序列存在0、1、2或3个核苷酸的差异。具体而言，该RNAi试
剂可在一个方面中每条链包含少于30个核苷酸，例如17-23个核苷酸、15-19、18-22和/或
19-21个核苷酸，和/或如表1至5中提供的那些，以及其修饰和未修饰的变体(例如其中
正义和/或反义或第一和/或第二链是修饰的或未修饰的)。本发明还提供了包含正义链
和反义链的试剂，该正义和/或反义链包含19或更多个连续核苷酸的序列及其修饰或未修饰的变体，该序列与如表1至5中提供的RNAi试剂的那些序列具有0、1、2或3个核苷酸的
差异。该正义和反义链可以是连续的，或物理连接的，例如通过共价键、环或接头。

[0011] 该双链RNAi试剂可具有0、1或2个钝末端，和/或来自3’和/或5'端之一或全部两个的1、2、3或4个核苷酸(即1-4nt)的突出端。该双链RNAi试剂还可任选地包含一
个或两个3’帽和/或一个或多个修饰的核苷酸。本发明所提供序列的经修饰变体包括除
含有相应修饰的核苷酸取代天然产生的核苷酸以外相同的那些。

[0012] 此外，该RNAi试剂可仅含有天然产生的核糖核苷酸亚基，或者含有一个或多个替代核苷酸亚基的糖、磷酸或碱基的一个或多个修饰(无论其包含核糖核苷酸亚基还是脱氧核糖核苷酸亚基)。在一个方面中，所公开RNAi试剂的经修饰变体具有胸苷(作为RNA或优选地DNA)取代尿苷，或具有肌苷碱基。在一些方面中，所公开RNAi试剂的经修饰变体可在随从链(passenger strand)中具有切口，在引导链和随从链之间具有错配、具有DNA以替代引导链和随从链的一部分(如种子区)的RNA，和/或具有缩短的随从链(例如13、
14、15、16、17或18nt)。一旦鉴定到功能性引导链，即可容易地制备RNAi试剂的修饰和变体。不互斥的任意两个或多个修饰可以组合(例如碱基修饰与缩短的随从链的组合；或有切口的随从链和碱基修饰；或替代种子区的一部分或全部的DNA和剩余RNA中的碱基修饰；
等)。本发明所公开的任何序列或其任何部分(例如19(或更多)个连续nt；15(或更多)
个连续nt；具有0、1、2或3nt差异的15(或更多)个连续nt)可与本发明所公开的任何修
饰或修饰方案联用，前提是其不是互斥的(例如，指不同的链长度)。RNAi试剂的序列(及其任何部分)可与本发明所公开的任何修饰、修饰组(如修饰方案)、载剂、组合物、方法、治疗方法等联用，前提是其不是互斥的。

[0013] 在一个方面中，所公开RNAi试剂的经修饰变体包括具有与表1至5中任一张所公开的任意RNAi试剂相同的序列(例如相同的碱基序列)，但该序列具有针对一个或多个核
苷酸亚基的一个或多个糖或磷酸的一个或多个修饰。在一个方面中，这些修饰改进RNAi试剂的功效、稳定性(例如针对例如血清或肠液中的核酸酶)和/或降低RNAi试剂的免疫原
性。本发明的一个方面涉及包含至少一个非天然核碱基的双链寡核苷酸。这些核碱基包括通用碱基类似物，例如Loakes 2001 Nucl.Acids Res.29:2437-2447中所述的那些。在某些方面中，该非天然核碱基是二氟甲苯基、硝基吲哚基、硝基吡咯基或硝基咪唑基。在一个特定的方面中，该非天然核碱基是二氟甲苯基。在某些方面中，仅两条寡核苷酸链中的一条含有非天然核碱基。在某些方面中，两条寡核苷酸链都含有非天然核碱基。

[0014] 该RNAi试剂任选地可与配体连接，该配体经选择以改善一种或多种特性，例如试剂(如胆固醇或其衍生物)的稳定性、分布和/或细胞摄取。该RNAi试剂可以是分离的或是用于本发明所述方法的药物组合物的一部分。具体而言，该药物组合物可配制为用于递送至特定组织(例如患有EPAS1相关疾病的那些)或配制为用于胃肠道外给药。该药物
组合物可任选地包含两种或多种RNAi试剂，其各自针对相同、重叠或不同的EPAS1 mRNA区段。任选地，该药物组合物还可包含任何EPAS1相关疾病的任何已知的治疗或与其联用。

[0015] 本发明还提供了降低细胞中EPAS1 mRNA水平的方法，特别是在以EPAS1的过表达或活性过高为特征的疾病中。包含EPASl的变化(如突变、过表达和/或活性过高)的细胞被称为“EPAS1缺陷型”细胞。这类方法包括向EPAS1缺陷型细胞给予一种或多种本发明的RNAi试剂的步骤，如下文进一步描述的那样。本发明利用涉及RNA干扰的细胞机制来选择性降解细胞中的目标RNA并包括使细胞接触一种本发明的RNAi试剂的步骤。

[0016] 本发明还包括一种治疗人对象的方法，该人对象具有至少部分由EPAS1表达介导的病理状态，该方法包括给予该对象治疗有效量的针对EPAS1的RNAi试剂的步骤。其他方法涉及预防、治疗、调节和/或缓解疾病状态，其中疾病进展(如肿瘤生长)需要EPAS1，但EPAS1未被扩增或过表达。这类方法包括向对象给予一种本发明的RNAi试剂的步骤，如下文进一步描述的那样。这类方法可直接在细胞上进行，或通过向对象给予一种本发明的RNAi试剂/药物组合物以在哺乳动物对象上进行。细胞中目标EPAS1 RNA的降低导致所生
产编码的EPAS1蛋白含量的降低。在生物体中，这可导致涉及EPAS1的途径中平衡的恢复，和/或EPAS1累积的预防，和/或EPAS1活性和/或表达的降低，和/或EPAS1介导的其他
基因激活的预防，和/或EPAS1相关疾病的缓解、治疗和/或预防。在一个方面中，EPAS1表达、水平或活性的降低可限制肿瘤生长。

[0017] 本发明的方法和组合物(如这些方法和EPAS1 RNAi试剂组合物)可以本发明公开或本领域已知的任何适当剂量和/或制剂使用，以及可以本发明公开或本领域已知的任何合适的给药途径使用。

[0018] 在附图和以下描述中详细列出了本发明的一个或多个方面。不互斥的本发明公开或本领域已知的多个方面的要素(例如序列或其部分(如具有0、1、2或3nt差异的15或更多个连续nt)、长度、修饰、末端双核苷酸、端帽(endcap)、RNAi试剂的组合、涉及EPAS1RNAi试剂和另一种试剂的组合治疗、与其他组分偶联、用于递送的技术或方法或组合物、疾病治疗等)可以彼此组合，前提是这些试剂仍然能够介导RNA干扰。例如，本发明公开的任何
RNAi试剂序列可与本发明公开的任何端帽或修饰组联用。类似的，修饰、5’端帽和/或3’端帽的任何组合可与本发明公开的RNAi试剂序列联用。本发明公开的任何RNAi试剂(其
具有任何修饰或端帽的组合或不具有修饰或端帽)可与本发明公开的任何其他RNAi试剂
或其他治疗组合物或方法联用。

[0019] 通过说明书、附图以及权利要求书，不难了解本发明的其它特征、目的和优点。

[0020] 图1显示多个示例性经修饰的核苷酸，其已被用于或可被用于EPAS1 RNAi试剂的经修饰变体：U002、U003、U004、U005、C004、C005、A004、A005、G005和G004，其可用于本发明公开的RNAi试剂。U002表示2'-脱氧-胸苷，其是DNA。U003表示2'-脱氧-尿苷。
U004表示具有尿苷("U")碱基的核苷酸，该尿苷碱基具有2'-O-甲基修饰。U005表示具有
2'-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的U碱基。C004表示具有2'-O-甲基修饰的胞苷("C")碱
基。C005表示具有2'-O-甲氧基乙基修饰的C碱基。A004表示具有2'-O-甲基修饰的腺
苷("C")碱基。A005表示具有2'-O-甲氧基乙基修饰的A碱基。G005表示具有2'-O-甲
基修饰的鸟苷("G")碱基。G004表示具有2'-O-甲基修饰G碱基。

[0021] 发明详述

[0022] 本发明包括针对EPAS1的RNAi试剂，其用于靶向和抑制EPAS1，其可用于治疗EPAS1相关疾病(例如，与EPAS1中突变和/或改变的表达、水平和/或活性相关的疾病、
需要EPAS1的疾病、受特定因子影响的疾病(该因子的表达、过表达或活性过高直接或间接地受EPAS1的影响)和/或可通过调控EPAS1的表达、水平和/或活性治疗的疾病)。这
类EPAS1相关疾病包括：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。本发明还提供了治疗人对象的方法，该人对象具有至少部分由EPAS1表达或过表达或活性过高介导的病理状态或需要EPAS1，该方法包括给予该对象治
疗有效量的针对EPAS1的RNAi试剂的步骤。

[0023] 本发明的多个方面包括下列。

[0024] 包含本发明所述RNAi试剂的反义链的RNAi试剂。

[0025] 在一个方面中，本发明的一个方面涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂含有反义链，该反义链包含至少15个连续核苷酸(nt)，其与选自本文所提供任何序列(例如在表1至5的任意一张或多张中，等)的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个方面中，本发明涉及包含一种RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂含有第一链和第二链，该第一链包含至少15个连续核苷酸，其与来自本文所提供任何序列的针对EPAS1的RNAi试剂的第一链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。在另
一个方面中，本发明涉及包含一种RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂含有正义链和反义链，该正义链包含至少15个连续核苷酸，其与上文所列针对EPAS1的RNAi试剂的正义链相比
具有0、1、2或3个核苷酸的差异，且该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与上文所列针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。在另一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列包含本发明提供的任何序列的第一链序列。在另一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是本发明提供的任何序列的第一链序列。在多个方面中，该第一和第二链分别是本发明公开的任何RNAi试剂的反义和正义链。在多个方面中，该第一和第二链分别是本发明公开的任何RNAi试剂的正义和反义链。

[0026] 具体的双链体包括表1所列未修饰(如“通用”)和示例性经修饰的变体；这些RNAi试剂的其他序列和数据列于后续表中。除了描述的示例性修饰以外，还可使用提供的核苷酸序列制备其他修饰的变体。在多个方面中，该第一和/或第二链是修饰或未修饰的。

[0027] 表格

[0028] 表1中提供了EPAS1 RNAi试剂的名称(来源于其在人EPAS1基因序列NM 001430中的位置)，以及代表DNA序列、未修饰的序列和示例性经修饰的序列(A51 S26和A85 S26示例性经修饰的序列)的SEQ ID NO。正义和反义(AS)序列都显示在这些表中。

[0029] 表2提供了DNA序列。

[0030] 表3提供了RNAi试剂的未修饰的序列。

[0031] 表4显示特定RNAi试剂序列(其来源于人)是否也对应于来自小鼠(Mu或mm)、大鼠(Ra或rn)和猕猴(mmu或Macaca mulatta)的那些。

[0032] 表5(包括表5A至5E)列举了示例性经修饰的RNAi试剂序列。

[0033] 表6至8显示体外和体内多种EPAS1 RNAi试剂的功效。

[0034] 表9显示这些EPAS1 RNAi试剂的重叠组。

[0035] 表1.多种EPAS1 RNAi试剂的SEQ ID NO

[0036] 显示了代表DNA序列、未修饰的序列和示例性经修饰的序列(A51 S26和A85 S26示例性经修饰的序列)的SEQ ID NO。

[0037]

[0038]

[0039] EPAS1 RNAi试剂的其他经修饰变体示于表5C至5E。

[0040] 因此，表1显示未修饰和示例性经修饰EPAS1 RNAi试剂的正义和反义链的SEQ ID NO标识。例如，在该表中，RNAi试剂842的未修饰的正义和反义序列分别表示为SEQ IDNO:39和58。该RNAi试剂的一种经修饰变体表示为SEQ ID NO:145和126；另一种示例性
经修饰变体表示为SEQ ID NO:77和96。还应注意，名称(如842)来源于人EPAS1基因序
列NM 001430中的位置编号。这些名称有时候具有前缀“EPAS1”或“EPAS1_”(例如“EPAS1
842”或“EPAS1_842”)。还应注意，有时前缀“AD”被“ND”替代。RNAi试剂的名称有时具有后缀，例如.1。这表示特定变体。因此，“842”和“EPAS1_842”等都表示相同序列的RNAi试剂，但其可在修饰上具有差异。

[0041] 在表5的序列中，小写字母(如c、u)表示经修饰的核苷酸，而大写字母(如C、U、A、G)表示未修饰的核苷酸。在该表中，显示了各序列的示例性经修饰形式。然而，本发明还考虑并包括这些序列的未修饰形式和包含额外的或替代性修饰的其他形式。

[0042] 在各表的序列中，经修饰和未修饰的变体可任选地还包含序列“TT”、“dTdT”、“dTsdT”或“UU”作为3’端的单链突出端，在本文中也称为末端双核苷酸或3'末端双核苷酸。dT是2'-脱氧-胸苷-5'-磷酸且sdT是2'-脱氧胸苷5'-硫代磷酸酯。在公开的序列中，末端双核苷酸“UU”是UU或2'-OMe-U2'-OMe-U，且末端TT和末端UU可以是反向/逆向取向。末端双核苷酸(如UU)不是EPAS1目标序列的一部分，但是是双胸苷双核苷酸的经修饰变体，其通常以突出端的形式存在以保护siRNA的末端抵御核酸酶(参见例如Elbashir
等2001 Nature 411:494-498；Elbashir等2001 EMBO J.20:6877-6888；以及Kraynack等
2006 RNA 12:163-176)。从这些参考文献中，已知末端双核苷酸增强核酸酶耐受性但不参与靶标识别。因此，本发明还包括本发明公开的任何经修饰或任何未修饰的变体，该经修饰变体包含末端TT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT、sdTdT等，其可以是反向/逆向取向或与双链体中的EPAS1特异性序列具有相同的5'至3'取向。此外，提及“RNAi试剂序列的EPAS1部
分”等时，本文所用术语表示衍生自EPAS1的那部分RNAi试剂序列，因此“RNAi试剂序列的EPAS1部分”不包括例如末端dTdT、TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT等，但包括对应于EPAS1基因序列或mRNA序列的一部分或与其互补的那部分RNAi试剂。在一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和
第二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试剂的第一和
第二链，其还包含3'末端双核苷酸(在3'端包含2nt的单链突出端)。在一个方面中，该
组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和第二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试剂的第一和第二链的序列，其还包含选自下组的3'末端
双核苷酸：TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。在一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和第二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试
剂的第一和第二链的序列，其还包含3'末端UU双核苷酸。

[0043] 在任何经修饰或未修饰的变体上，可使用3'端帽(如本领域已知的那样)代替末端双核苷酸，或者除末端双核苷酸以外还可使用3'端帽，从而稳定末端使之不受核酸酶降解，前提是该3'端帽能够同时稳定RNAi试剂(例如对抗核酸酶)并不过度干扰siRNA活
性。因此，本发明还包括本发明公开的任何经修饰或任何未修饰的变体，该经修饰变体还包含末端3'端帽。

[0044] 包含本发明所述RNAi试剂的反义链的RNAi试剂。

[0045] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂含有反义链，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自上文所提供的特定双链体和表1所列的那些反义链的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0046] 下文描述了该方面的多个具体的方面。

[0047] 在一个方面中，该组合物还包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。在多个方面中，该第二RNAi试剂与第一RNAi试剂物理上分离，或者这两种试剂是物理上相连的(例如共价连接或偶联)。

[0048] 在一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和第二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试剂的第一和第二链。在一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和第二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试剂的第一和第二链，其在一条或全部两条链
上还包含额外的约6-20个核苷酸(例如约6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或
20nt)。在一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和第二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试剂的第一和第二链，其还包
含3'末端双核苷酸。在一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和第
二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试剂的第一和第
二链，其还包含选自下组的3'末端双核苷酸：TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。在一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含第一和第二链，该第一链的序列和该第二链的序列分别是本文所提供的任何RNAi试剂的第一和第二链，其还包含3'末端UU双核苷酸。在多
个方面中，该第一和第二链分别是本文各表中列举的正义和反义链。在多个方面中，该第一和第二链分别是本文各表中列举的反义和正义链。

[0049] 在一个方面中，该正义链的长度是约30个核苷酸(nt)或更短。

[0050] 在一个方面中，该反义链的长度是约30个核苷酸或更短。

[0051] 在一个方面中，该反义链与该正义链形成双链体区域，该双链体区域的长度为约15-30个核苷酸对。

[0052] 一个方面中，该反义链的长度为约15至约30个核苷酸，包括约19至约23个核苷酸。一个方面中，该反义链具有至少选自下组的长度：约15个核苷酸、约16个核苷酸、约
17个核苷酸、约18个核苷酸、约19个核苷酸、约20个核苷酸、约21个核苷酸、约22个核苷酸、约23个核苷酸、约24个核苷酸、约25个核苷酸、约26个核苷酸、约27个核苷酸、约28个核苷酸、约29个核苷酸和30个核苷酸。

[0053] 在一个方面中，该RNAi试剂包含修饰，该修饰导致该RNAi试剂在生物样品或环境(例如胞质、肠液、血清或肺或肠灌洗液)中具有提高的稳定性。

[0054] 在一个方面中，该RNAi试剂包含至少一个糖主链修饰(如硫代磷酸酯连接)或至少一个2’-修饰的核苷酸。

[0055] 在一个方面中，该RNAi试剂包含：至少一个5'-尿苷-腺苷-3'(5'-ua-3')双核苷酸，该尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-尿苷-鸟苷-3'(5'-ug-3')双核苷酸，该
5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-胞苷-腺苷-3'(5'-ca-3')双核苷酸，该5'-胞
苷是2'-修饰的核苷酸；或至少一个5'-尿苷-尿苷-3'(5'-uu-3')双核苷酸，该5'-尿苷
是2'-修饰的核苷酸。这些双核苷酸基序特别针对于血清核酸酶降解(如RNA酶A)。基序
中第一嘧啶核苷酸的2’-位置处的化学修饰阻止或延缓了这类切割。该修饰方法也称为术语‘内轻(endo light)’。

[0056] 在一个方面中，该RNAi试剂包含选自下组的2'-修饰：2'-脱氧、2'-脱氧-2'-氟、2'-O-甲基(2'-OMe或2'OMe)、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、
2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙基氧乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)。在一个方面中，所有
嘧啶(脲苷和胞苷)都是2'O-甲基修饰的核苷。

[0057] 在另一个方面中，该RNAi试剂包含选自下组的2'-修饰：

[0058] 在一个方面中，该RNAi试剂包含至少一个钝末端。

[0059] 在一个方面中，该RNAi试剂包含至少具有未配对的1nt至4nt的突出端。

[0060] 在一个方面中，该RNAi试剂包含位于RNAi试剂反义链的3’端的突出端。

[0061] 在一个方面中，该RNAi试剂连接至一种或多种诊断化合物、报告基团、交联剂、赋予核酸酶耐受性的部分、天然或不常见的核碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂质、凝集素、类固醇、熊果醇、赫西配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、菝葜皂苷元、无羁萜、表无羁萜醇衍生的胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖、支链淀粉、几丁质、壳聚糖、合成的碳水化合物、寡聚乳酸盐15聚体、天然的聚合物、低或中等分子量聚合物、菊糖、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白结合剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、多胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。

[0062] 在一个方面中，在裸小鼠的786-O肿瘤中，该RNAi试剂能够将EPAS1的表达抑制至少约50％。

[0063] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约70％。

[0064] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约75％。

[0065] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约80％。

[0066] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约90％。

[0067] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约95％。

[0068] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约99％。

[0069] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi具有不超过约0.1nM的EC50。EC50是使基因表达下降50％的有效浓度。

[0070] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi具有不超过约0.01nM的EC50。

[0071] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi具有不超过约0.001nM的EC50。

[0072] 包含本发明所述RNAi的正义和反义链的RNAi试剂。

[0073] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链和/或第二链的序列包含至少15个连续核苷酸，其与选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的第一链和/或第二链的序列相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链和/或第二链的序列包含至少15个连续核苷酸，其来自选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体
的针对EPAS1的RNAi试剂的第一链和/或第二链的序列。在一个具体的方面中，本发明涉
及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链和/或第二链的序列包含至少19个连续核苷酸(例如nt 1-19、nt 2-20、nt 3-21等)，其来自选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的第一链和/或第
二链的序列。

[0074] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链和/或第二链的序列分别包含选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的第一和/或第二链的序列。

[0075] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链和/或第二链的序列分别是选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的第一和/或第二链的序列。

[0076] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链和/或第二链的序列分别是选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的第一和/或第二链的序列，该第一和/或第二链的序列还包含末端双核苷酸。

[0077] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链和/或第二链的序列分别是选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的第一和/或第二链的序列，该第一和/或第二链的序列还包含末端UU双核苷酸。

[0078] 在一个特定的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该正义链和反义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自表1所列举的和上文所提供的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和反义链相比分别具有0、1、2或3个核苷酸的差异。在一个特定的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该正义链和反义链包含至少15个连续核苷酸，其分别来自表1所列举的和上文所提供的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和反义链。在
一个特定的方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该正义链和反义链包含至少19个连续核苷酸(例如nt 1-19、nt 2-20或nt 3-21)，其分别来自表1所列举的和上文所提供的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和
反义链。

[0079] 下文描述了该方面的多个具体的方面。

[0080] 在一个方面中，该组合物包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。在多个方面中，该第二RNAi试剂与第一RNAi试剂物理上分离，或者这两种试剂是物理上相连的(例如化学连接或偶联)。在一些方面中，该第一和第二RNAi试剂被合并在相同组合物内(例如，都处于相同的脂质纳米颗粒中)。

[0081] 在一个方面中，该反义链的长度是约30个核苷酸或更短。

[0082] 在一个方面中，该正义链和该反义链形成长度约15至约30个核苷酸对的双链体区域。

[0083] 在一个方面中，该反义链的长度是约15至约36nt，包括约18至约23nt，且包括约19至约21nt和约19至约23nt。一个方面中，该反义链具有至少选自下组的长度：约15nt、约16nt、约17nt、约18nt、约19nt、约20nt、约21nt、约22nt、约23nt、约24nt、约25nt、约
26nt、约27nt、约28nt、约29nt和约30nt。

[0084] 在一个方面中，该RNAi试剂包含修饰，该修饰导致该RNAi试剂在生物样品或环境中具有提高的稳定性。

[0085] 在一个方面中，该RNAi试剂包含经修饰的糖主链(如硫代磷酸酯连接)或包含2’-修饰的核苷酸。

[0086] 在一个方面中，该RNAi试剂包含：至少一个5'-尿苷-腺苷-3'(5'-ua-3')双核苷酸，该尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-尿苷-鸟苷-3'(5'-ug-3')双核苷酸，该
5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-胞苷-腺苷-3'(5'-ca-3')双核苷酸，该5'-胞
苷是2'-修饰的核苷酸；或至少一个5'-尿苷-尿苷-3'(5'-uu-3')双核苷酸，该5'-尿苷
是2'-修饰的核苷酸。

[0087] 在一个方面中，该RNAi试剂包含选自下组的2'-修饰：2'-脱氧、2'-脱氧-2'-氟、2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨
基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙基氧乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)。在一个方面中，所有嘧啶(脲苷和
胞苷)都是2'O-甲基修饰的核苷。

[0088] 在一个方面中，该RNAi试剂包含至少一个钝末端。

[0089] 在一个方面中，该RNAi试剂包含至少具有未配对的1-4nt的突出端。

[0090] 在一个方面中，该RNAi试剂包含位于RNAi试剂反义链的3’端的突出端。

[0091] 在一个方面中，该RNAi试剂连接至一种或多种诊断化合物、报告基团、交联剂、赋予核酸酶耐受性的部分、天然或不常见的核碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂质、凝集素、类固醇、熊果醇、赫西配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、菝葜皂苷元、无羁萜、表无羁萜醇衍生的胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖、支链淀粉、几丁质、壳聚糖、合成的碳水化合物、寡聚乳酸盐15聚体、天然的聚合物、低或中等分子量聚合物、菊糖、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白结合剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、多胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。

[0092] 在一个方面中，在裸小鼠的786-O肿瘤中，该RNAi试剂能够将EPAS1的表达抑制至少约50％。

[0093] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约70％。

[0094] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约80％。

[0095] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约90％。

[0096] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约95％。

[0097] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi试剂能够以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约99％。

[0098] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi具有不超过约0.1nM的EC50。

[0099] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi具有不超过约0.01nM的EC50。

[0100] 在一个方面中，在体外的786-O细胞中，该RNAi具有不超过约0.001nM的EC50。

[0101] 一种使用本文所述包含RNAi试剂的组合物的治疗方法。

[0102] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种治疗个体中EPAS1相关疾病的方法，包括给予该个体治疗有效量的包含RNAi试剂的组合物的步骤，该RNAi试剂包含反义链，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自表1所列举的和上文所提供的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比分别具有0、1、2或3个核苷酸的差异。在一个方面中，该针对EPAS1的RNAi试剂包含与正义链形成双链体的反义链，该正义和反义链选自表1至5
中任一张提供的序列中的一条或多条。

[0103] 下文描述了该方面的多个具体的方面。可以组合任何不互斥的本文所公开的方面。

[0104] 在一个方面中，本发明涉及这类方法，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂还包含正义链，该正义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0105] 在该方法的一个方面中，该RNAi试剂包含至少一条反义链，和/或包含正义和反义链，该正义和/或反义链的序列是选自本文提供和例如表1所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和/或反义链的序列，该组合物还包含药学上有效的制剂。

[0106] 在该方法的一个方面中，该RNAi试剂包含至少一条反义链，和/或包含正义和反义链，该正义和/或反义链的序列包含选自本文提供和例如表1所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和/或反义链的序列，该组合物还包含药学上有效的制
剂。

[0107] 在一个方面中，该EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。

[0108] 在一个方面中，该EPAS1相关疾病是癌症。

[0109] 在一个方面中，该方法还包括给予附加治疗的步骤。

[0110] 在一个方面中，该附加治疗是一种方法(或过程)。在一个方面中，该附加治疗是治疗有效剂量的组合物。

[0111] 在一个方面中，该附加治疗和该RNAi试剂可以任何顺序给予，或者可同时给予。

[0112] 在一个方面中，该方法还包括给予针对以下疾病的附加治疗的步骤：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。

[0113] 在一个方面中，该方法还包括给予附加治疗的步骤。针对EPAS1的RNAi试剂可与适用于疾病的本发明公开的任何附加治疗联用，任选地，与一种或多种其他针对EPAS1的RNAi试剂联用。

[0114] 应理解，任何附加治疗往往还包括任意活性物质的药学上可接受的盐。如果，组分(a)和/或(b)包含的活性物质具有例如至少一个碱性中心，则其可形成酸加成盐。需要时，还可形成具有额外存在的碱性中心的酸加成盐。具有酸性基团(如COOH)的活性物质
可与碱形成盐。组分(a)和/或(b)包含的活性物质或其药学上可接受的盐还可以水合物
的形式使用或包括其他用于结晶的溶剂。

[0115] 在一个方面中，该组合物包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。在多个方面中，该第二RNAi试剂与第一RNAi试剂物理上分离，或者这两种试剂是物理上相连的(例如连接或偶联)。在一些方面中，该第一和第二RNAi试剂被合并在相同组合物内(例如，都处于相同的脂质纳米颗粒中)。

[0116] 一种抑制EPAS1表达的方法，该方法使用包含本文所述RNAi试剂的RNAi。

[0117] 在一个具体方面中，本发明涉及一种抑制个体内EPAS1表达的方法，该方法包括给予该个体治疗有效量的包含本发明的RNAi试剂的组合物的步骤。在一个方面中，该RNAi包含正义链和反义链，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自表1所列举和上文所提供的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0118] 在该方法的一个方面中，该RNAi试剂包含至少一条反义链，和/或包含正义和反义链，该正义和/或反义链的序列是选自本文提供和例如表1所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和/或反义链的序列，该组合物在药学上有效的制剂中。

[0119] 在该方法的一个方面中，该RNAi试剂包含至少一条反义链，和/或包含正义和反义链，该正义和/或反义链的序列包含选自本文提供和例如表1所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和/或反义链的序列，该组合物在药学上有效的制剂中。

[0120] 下文描述了该方面的多个具体的方面。

[0121] 在一个方面中，该个体患有或容易患有EPAS1相关疾病。

[0122] 在一个方面中，该EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。

[0123] 在一个方面中，该EPAS1相关疾病是癌症。

[0124] 在一个方面中，该方法还包括给予附加治疗的步骤。

[0125] 在一个方面中，该附加治疗和该RNAi试剂可以任何顺序给予，或者可同时给予。

[0126] 在一个方面中，该方法还包括针对以下疾病给予附加治疗的步骤：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。

[0127] 在一个方面中，该组合物包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。在多个方面中，该第二RNAi试剂与第一RNAi试剂物理上分离，或者这两种试剂是物理上相连的(例如共价连接或偶联)。在一些方面中，该第一和第二RNAi试剂被合并在相同组合物内(例如，都处于相同的脂质纳米颗粒中)。

[0128] 在一个方面中，该方法还包括给予其他RNAi试剂的步骤，该其他RNAi试剂包含至少15个连续核苷酸，其与选自本文提供和例如本文中任何表列举的特定双链体的针对
EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0129] 针对EPAS1的RNAi试剂的药物组合物

[0130] 在一个具体的方面中，本发明涉及一种包含本发明的RNAi试剂的组合物。在一个方面中，该RNAi试剂包含至少一条反义链，和/或包含正义和反义链，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自本文提供和例如表1所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的
RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异，该组合物在药学上有效的制剂中。

[0131] 在一个方面中，该RNAi试剂包含至少一条反义链，和/或包含正义和反义链，该正义和/或反义链的序列是选自本文提供和例如表1所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和/或反义链的序列，该组合物在药学上有效的制剂中。

[0132] 在一个方面中，该RNAi试剂包含至少一条反义链，和/或包含正义和反义链，该正义和/或反义链的序列包含选自本文提供和例如表1所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和/或反义链的序列，该组合物在药学上有效的制剂中。

[0133] 在一个方面中，本发明涉及RNAi试剂在制造用于治疗EPAS1相关疾病的药物中的应用，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自本文提供和例如本文中任意表所列举的那些特定双链体的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0134] 与公开的序列相比包含错配的针对EPAS1的RNAi试剂的具体方面

[0135] 本文公开了针对EPAS1的RNAi试剂的多个具体方面。本发明包括表1至5至提供的示例性经修饰变体，以及相应的未修饰序列和其他经修饰变体。本发明的具体方面包括某些RNAi试剂，这些RNAi试剂的序列与表1列举的任意RNAi试剂及其经修饰和未修饰
的变体相比具有0、1、2或3nt(核苷酸)或bp(碱基对)的差异(例如具有0、1、2或3个
错配)。如下文详述的那样，错配在本文中被定义为当两条序列最大程度地比对和比较时碱基序列(如A代替G)或长度之间的差异。此外，如下文详述的那样，“未修饰变体”是其中碱基序列相同但没有碱基被修饰的变体；其包括例如与野生型EPAS1 mRNA或基因的相
应部分相同的序列。“经修饰变体”含有针对核苷酸、糖、磷酸或主链的一个或多个修饰(或一个或多个较少或不同的修饰)，和/或添加一个或多个部分；但不具有针对碱基序列的变化、取代、添加或删除。特定的序列和其经修饰或未修饰变体在其中具有0个错配。

[0136] 在一个具体的方面中，本发明包括一种RNAi试剂，该RNAi试剂包含正义和反义链，该正义和/或反义链包含至少15个连续核苷酸，其与表1至5列举的任意RNAi试剂的
正义和/或反义链的序列相比具有0、1、2或3nt的差异，及其经修饰和未修饰的变体。

[0137] 在另一个具体的方面中，该RNAi试剂包含正义链，该正义链包含至少15个连续核苷酸，其与表1至5列举的任意RNAi试剂的正义链相比具有0、1、2或3nt的差异，及其经修饰和未修饰的变体。

[0138] 其他方面

[0139] 下文描述了本发明的多个具体的方面。可以组合任何不互斥的本文所公开的方面。

[0140] 在一个方面中，本发明涉及上述方面中任一项所述的组合物，该组合物用于治疗个体中EPAS1相关疾病的方法，该方法包括给予该个体治疗有效量的各权利要求中任一项所述的组合物的步骤。

[0141] 下文描述了该方面的多个具体的方面。

[0142] 在一个方面中，本发明涉及上述方面中任一项所述的组合物，该组合物用于抑制个体中EPAS1表达的方法，该方法包括给予该个体治疗有效量的上述方面中任一项所述的组合物的步骤。

[0143] 本发明的一个方面是上述方面中任一项所述的组合物在制造用于治疗EPAS1相关疾病的药物中的应用。

[0144] 在一个方面中，该EPAS1相关疾病选自：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。

[0145] 在一个方面中，本发明涉及用于治疗EPAS1相关疾病的上述方面中任一项所述的组合物。

[0146] 在一个方面中，该EPAS1相关疾病是癌症。

[0147] 在一个方面中，本发明涉及抑制细胞中EPAS 1表达的方法，该方法包括将包含RNAi试剂的组合物导入细胞的步骤，该RNAi试剂包含反义链，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自本发明公开的EPAS1 siRNA的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有
0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0148] 在一个方面中，本发明涉及抑制细胞中EPAS1表达的方法，该方法包括将包含RNAi试剂的组合物导入细胞的步骤，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该反义链包含至少
15个连续核苷酸，其与选自本发明公开的EPAS1 siRNA的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链
相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异，且该正义链包含至少15个连续核苷酸，其与选自本发明公开的EPAS1 siRNA的针对EPAS1的RNAi试剂的正义链相比具有0、1、2或3个核苷
酸的差异。

[0149] 定义

[0150] 方便起见，下面提供了在说明书、实施例和所附的权利要求书中使用的特定术语和短语的意思。如果在本说明书的其他部分的术语的使用与在这部分中提供定义之间存在明显的偏差，以这部分中的定义为准。

[0151] EPAS1

[0152] “EPAS 1”指也称作内皮PAS结构域蛋白1的基因或蛋白，其也称作EPAS-1，HIF-2α；Hif2α；HIF2；HLF；MOP2；ECYT4；HIF2A；PASD2；bHLHe73；HGNC:3374；基 因ID:2034。应注意，一些参考文献将该基因标记为HIF-2a，并将相应的蛋白标记为EPAS1(例如van Patot等2011 High Alt.Med.Biol.12:157-167)；其他文献使用相同术语同时指代基因和蛋白。参见：Ema等1997 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:4273-4278；Flamme等1997 Mech.Dev.63:51-60；以及Hogenesch等1997 J.Biol.Chem.272:8581-8593。多种EPAS1的多态性是已知的，如文献中所述，例如：van Patot等2011 High Alt.Med.Biol.12:157-67；
Ke等Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi.2011年10月；28(5):583-8；PMID:21983741。

[0153] 该基因编码涉及氧调控基因的诱导的转录因子，其随着氧水平的下降被诱导。

[0154] EPAS1是HIF家族的成员。缺氧诱导因子(HIF)是对细胞环境中可利用氧的变化产生应答的转录因子，具体而言是对氧减少或缺氧产生应答。Smith等2008
Br.J.Haematol.141:325-34。

[0155] 大部分(如果不是所有)呼吸氧气的物种都表达高度保守的转录复合物HIF-1，其是由α亚基和β亚基组成的异源二聚体，后者是组成型表达的芳基烃受体核易位体
(ARNT)。Wang 等 1995 Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92:5510-14；Jiang 等 1996 J.Biol.Chem.271:17771-8。

[0156] HIF家族成员包括Hif1α和EPAS1(Hif2α)，这是两种最充分鉴定的HIFα亚基。虽然这两个基因高度类似并结合和介导许多相同的靶标，但其在时间和空间方面都具有不同功能。虽然HIF1α减弱白介素-8(IL-8)的表达，但EPAS1的过表达提高IL-8的表达
(Florczyk等2011 Free Radic.Biol.Med.51:1882-92)。

[0157] EPAS1(Hif2α)编码涉及氧调控基因的诱导的转录因子的一半，其随着氧水平的下降(缺氧)被诱导。编码的蛋白含有碱性螺旋-环-螺旋结构域蛋白二聚化结构域以及在响应氧水平的信号转导途径的蛋白中发现的结构域。EPAS1涉及胚胎心脏的发育并在覆盖脐带中血管壁的内皮细胞中表达。其在早期胚胎发育期间针对心力衰竭的保护和维持儿茶酚胺体内平衡方面起重要作用。儿茶酚胺包括诸如肾上腺素和去甲肾上腺素的蛋白。儿茶酚胺的生产维持体内平衡是重要的，这使得精细的胎儿心脏和成人心脏都不会用力过猛并诱导心力衰竭。胚胎中儿茶酚胺的生产涉及通过提高胎儿心律来控制心输出量。

[0158] 该基因中的突变与红细胞增多家庭类型4、肺动脉高血压和慢性高山病相关。还有证据表明该基因的某些变体为生活在高纬度的人们提供保护。EPAS1在高纬度可用作短期适应性应答。然而，EPAS1还可导致血红细胞的过量生产，导致慢性高山病，引起死亡和受抑制的繁殖能力。一些提高其表达的突变与低纬度处中风和高血压的增加相关，其症状类似于高山病。永久生活在高纬度的人可能经历EPAS1的选择以减少过量血红细胞生产的健康后果。

[0159] EPAS1相关疾病

[0160] 针对EPAS1的siRNA可用于治疗EPAS1相关疾病。“EPAS1相关疾病”是与野生型和/或突变EPAS1的突变和/或过表达和/或EPAS1相关的任何疾病，和/或由于野生
型和/或突变EPAS1的突变和/或过表达和/或EPAS1的存在而使疾病进展增强或使预
后变差的疾病。EPAS1相关疾病的非限制性示例包括：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病和类风湿性关节炎。参见：Bangoura等2004 World J.Gastroenterol.10:525；Cleven 等 2007 Analyt.Cell.Path.29:229-240；Covello 等
2006 Genes Dev.20:557-570；Florczyk 等 2011 Free Radic.Biol.Med.51:1882-92；
Giatromanolaki 等 2003 Melanoma Res.13:493-501；Giatromanolaki 等 2006 App.
Imm.Mol.Morph.14:78-82；Giatromanolaki 等 2012 Clin.Exp.Metastasis 29:11-7；
Griffiths 等 2008 Br.J.Cancer 98:965-973；Guo 等 J.Kanazawa Med.U.31:10-16；
Holmquist-Mengelbier 等 2006 Cancer Cell 10:413-23；Ioachim 等 2006 Urol.
Int.77:255-263；Koh等2011 cancer Res.71:4015-4027；Maynard等2007 Cell.Mol.Life Sci.64:2170-2180；Mutter 等 2008 Microvasc.Res.75:1-8；Nesbit 等 1999 Oncogene Mol.Cell 3:565-577；Osada 等 2007 Human Pathol.38:1310-1320；Pelegaris 等 2002 Nat.Re.Cancer 2:764-776；Rasheed等2009 Br.J.Cancer 100:1666-1673；Tian等1998 Genes Dev.12:3320-3324；Veeranna等2012 J.Virol.86:1097-708；Xu等2012 Oncogene
31:1065-72。

[0161] 正常氧压中的HIF诱导可能在具有慢性炎症组分的疾病设置中产生严重后果。还证明，慢性炎症是自我延续的(self-perpetuating)，且由于异常活跃的转录因子而破坏微环境。结果是，细胞环境内发生生长因子、趋化因子、细胞因子和ROS平衡的变化，其继而提供癌症和转移癌的从头发育所需的存活和生长轴。最近发表的研究结果对于其中NF-κΒ和HIF-1失调的多种病变具有广泛影响，包括类风湿性关节炎和癌症。因此，认为理解这两个关键转录因子(NF-κΒ和HIF)之间的交叉调控会极大提升药物开发的过程。

[0162] HIF活性涉及癌症肿瘤生长所需的血管发生，因此HIF抑制剂(如异硫氰酸苯乙酯(PEITC))可用于抗癌效果。肿瘤进展中EPAS1的至少部分作用被认为是EPAS1介导的多个基因的上调。例如，EPAS1在葡萄膜黑色素瘤的进展中起重要作用，可能是通过促进自分泌环VEGF-pVEGFR2/KDR，并通过增强LDHA的表达，从而赋予生长优势；参见Giatromanolaki等2012 Clin.Exp.Metastasis 29:11-7。

[0163] EPAS1也参与或上调以下因子的表达：c-Myc(其支持细胞增殖、转化、瘤形成和肿瘤发生，且在大多数癌症中高表达；参见Pelegaris等2002 Nat.Re.Cancer 2:764-776；Nesbit 等 1999 Oncogene Mol.Cell 3:565-577；Florczyk 等 2011 Free Radic.Biol.Med.51:1882-92)；白介素8(一种促炎介质，例如在牙龈炎或牛皮癣中；参见Florczyk等
2011 Free Radic.Biol.Med.51:1882-92)；SP-1(涉及IL-8调控的转录因子和c-Myc的
共激活因子；参见Florczyk等2011 Free Radic.Biol.Med.51:1882-92)；LDH5(与肿瘤形成和肿瘤尺寸增大相关；参见Giatromanolaki等2012 Clin.Exp.Metastasis 29:11-7)；
以及LANA(潜伏相关核抗原，其与卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒相关；参见Veeranna等
2012 J.Virol.86:1097-708)。除与c-Myc合作以外，EPAS1还与EGFR和KRAS合作；参
见Holmquist-Mengelbier等2006 Cancer Cell 10:413-23；以及Koh等2011 Cancer
Res.71:4015-4027。因此，涉及c-Myc、EGFR和KRAS过表达和/或活性过高的任何疾病都
可被认为是EPAS1相关疾病。此外，HIF(缺氧诱发因子)活性还涉及癌症肿瘤生长所需的
血管发生。

[0164] 存在使用EPAS1 RNAi试剂靶向透明细胞肾细胞癌(RCC)(ccRCC)及其转移癌的原理。首先，90％的ccRCC细胞不表达VHL肿瘤抑制因子。其次，在VHL肿瘤抑制因子不存在的情况下，Hif转录因子被组成型激活。第三，根据已发表的研究，对于RCC异种移植物生长，Hif-2的表达是必要且足够的。组成型Hif-2 shRNA敲减阻碍了786-O细胞异种移植物的生长。可诱导的Hif-2 shRNA敲减表明Hif-2是786-O异种移植物维持所必需的。还参
见：Tian等1998 Genes Dev.12:3320-3324；Veeranna等2012 J.Virol.86:1097-708；以及Xu等2012 Oncogene 31:1065-72；Zimmer等2004.Molecular Cancer Research 2:89-95；
Kondo等2002.Cancer Cell 1:237-246；以及Kondo等2003.PLoS Biology 1:439-444。

[0165] 因此，本发明包括EPAS1 RNAi试剂及其针对EPAS1相关疾病的应用。

[0166] 多个物种中的EPAS1基因序列

[0167] 已 对 人 EPAS1 基 因 进 行 测 序。Ema 等 1997 Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:4273-4278；Flamme等 1997 Mech.Dev.63:51-60；以 及Hogenesch等 1997 J.Biol.
Chem.272:8581-8593。多种EPAS1的多态性是已知的，如文献中所述，例如：van Patot等
2011 High Alt.Med.Biol.12:157-67；Ke等Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi.2011年10月；28(5):583-8；PMID:21983741。

[0168] 猕猴(“Cyno”或Macaca fascicularis)EPAS1序列(SEQ ID NO:125)示于下文：cyno_肾_NM_001430EPAS1，内皮PAS结构域蛋白1共有–目标长度＝5186，共有长度
＝4636，9片段重叠群(最长是2117)104个错配，1352个读取，覆盖:最大＝84，平均＝
18.499；共有一致性＝99.31％，目标/共有保守性97.76％

[0169] NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCTCGGCAGTCTCCTGAGACTGTATGGTCAGCTCAGCCCAGCCTCCGACTCCTTCCGACTCCCAGCATTCGAGCCACTTTTTTTTTTCCTTGAAAACTCAGAAAAGTGACTCTTTTTCCAGGGAAAAAGGAACTTGGGTTCCCTTCTCGCCGTCCTTTTTTCGGGTCTGACAGCCTCCACCCACTCCTTCCCCNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCGTCACCTTTCTCCACCCCCACCCCCGCACCTAGCCCGCCGCGCGCCACCTTCCACCTGACTGCGCGGGGCGCTCGGGACCTGCGCGCACCTCGGACCTTCACCACCCGCCCCGGCCGCCGGGAGCGGACGAGGGCCACAGCTCCCCACCCGCCGGGAAGCCCAGGTGCTCGGCGTCTGAACGTCTCAAAGGGCCACAGCGACAATGACAGCTGACAAGGAGAAGAAAAGGAGTAGCTCGGAGAGGAGGAAGGAGAAGTCCCGGGATGCCGCACGGTGCCGGCGGAGCAAGGAGACGGAGGTGTTCTACGAGCTGGCCCATGAGCTGCCTCTGCCCCACAGCGTGAGCTCCCATCTGGACAAGGCCTCCATCATGCGACTGGCGATCAGCTTCCTGCGAACACACAAGCTCCTCTCCTCAGTTTGCTCTGAAAATGAGTCTGAAGCTGAAGCTGACCAGCAGATGGACAACTTGTACCTGAAAGCCTTGGAGGGTTTCATTGCCGTGGTGACCCAAGATGGCGACATGATCTTTCTGTCAGAAAACATCAGCAAGTTCATGGGACTTACACAGGTGGAGCTAACAGGACATAGTATCTTTGACTTCACTCATCCCTGCGACCACGAGGAGATTCGTGAGAACCTGAGTCTCAAAAATGGCTCTGGTTTTGGGAAAAAAAGCAAAGACATGTCCACAGAGCGGGACTTCTTCATGAGGATGAAGTGCACGGTCACCAACAGAGGCCGTACTGTCAACCTCAAGTCAGCCACCTGGAAGGTCTTGCACTGCACGGGCCAAGTGAAAGTCTACAACAACTGCCCTCCTCACAATAGTCTGTGTGGCTACAAGGAGCCCCTGCTGTCCTGCCTCATCATCATGTGTGAACCGATCCAGCACCCATCCCACATGGACATTCCCCTGGACAGCAAGACCTTCCTGAGCCGCCACAGCATGGACATGAAGTTCACCTACTGTGATGACAGAATCACAGAACTGATTGGTTACCACCCTGAGGAGCTGCTTGGCCGCTCAGCCTATGAATTCTACCATGCGCTAGACTCCGAGAACATGACCAAGAGTCACCAGAACTTGTGCACCAAGGGCCAGGTGGTAAGTGGCCAGTACCGGATGCTCGCAAAGCATGGGGGCTACGTGTGGCTGGAAACCCAGGGGACAGTCATCTACAACCCTCGCAACCTGCAGCCCCAGTGCATCATGTGTGTCAACTACGTTCTGAGTGAGATTGAGAAGAATGACGTGGTGTTCTCCATGGACCAGACGGAATCCCTGTTCAAGCCCCACCTGATGGCCATGAACGGCATCTTTGATAGCAGTGGCAAGGGGGCTGTGTCTGAGAAGAGTAACTTCCTATTCACCAAGCTAAAGGAGGAGCCTGAGGAGCTGGCCCAGCTGGCTCCCACCCCAGGAGACGCCATCATCTCTCTGGATTTCGGGAATCAGAACTTCGAGGAATCCTCAGCCTATGGCAAGGCCATCCTGCCCCCGAGCCAGCCGTGGGCCACAGAGTTGAGGAGCCACAGCACCCAGAGCGAGGCTGGGAGCCTGCCTGCCTTCACCGTGCCCCAGGCAGCCGCCCCGGGCAGCACCACCCCCAGTGCCACCAGCAGCAGCAGCAGCTGCTCCACGCCCAATAGCCCTGAAGACTATTATACATCTTTGGATAACGACCTGAAGATTGAAGTGATTGAGAAGCTCTTCGCCATGGACACAGAGGCCAAGGACCAATGCAGTACCCAGACGGATTTCAATGAGCTGGACTTGGAGACACTGGCACCCTATATTCCCATGGATGGGGAAGACTTCCAGCTGAGCCCCATCTGCCCCGAGGAGCGGCTCTTGGCGGAGAACCCACAGTCCACCCCCCAGCACTGCTTCAGTGCCATGACAAACATCTTCCAGCCACTGGCCCCTGTAGCCCCGCACAGTCCCTTCCTCCTGGACAAGTTTCAGCAGCAGCTGGAGAGCAAGAAGACAGAGCCCGAGCACCGGCCCATGTCCTCCATCTTCTTTGATGCCGGAAGCAAAGCATCCCTGCCACCATGCTGTGGCCAGGCCAGCACCCCTCTCTCTTCCATGGGGGGCAGATCCAATACCCANTGGCCCCCAGATCCACCATTACATTTTGGGCCCACAAAGTGGGCCGTCGGGGATCAGCGCACAGAGTTCCTGGGAGCGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNCCCATATCTCCACATTCAAGACAAGGTCTGCAAAGGGTTTTGGGGCTCGAGGCCCAGACGTGCTGAGCCCGGCCATGGTAGCCCTCTCCAACAAGCTGAAGCTGAAGCGACAGCTGGAGTATGAAGAGCAAGCCTTCCAGGACCTGAGTGGGGGGGACCCACCTGGTGGCAGCACTTCACATTTGATGTGGAAACGGATGAAGAACCTCAGGGGTGGGAGCTGCCCTTTGATGCCGGACAAGCCACTGAGCGCAAATGTCCCCAATGGTAAGTTCACCCAAAATCCTGTGAGGGGCCTGGGCCATCCCCTGAGACATCTGCCGCTGCCACAGCCTCCATCTGCCGTCAGTCCCGGGGAGAACAGCAAGAGCAGGTTCCCCGCACAGTGCTATGCCACCCAGTACCAGG
ACTACAGCCTGTCGTCAGCCCACAAGGTGTCAGGCATGGCAAGCCGGCTGCTCGGGCCCTCGTTTGAGTCCTACCT
GCTGCCTGAACTGACCAGATATGACTGTGAGGTGAACGTGCCCGTGCTGGGAAGCTCCACGCTCCTGCAAGGAGGGGACCTCCTCAGAGCCCTGGACCAGGCCACCTGAGCCAGGCCTTCCACCTGGGCAGCACCTCTGCCGACACCGTCCCACCAGCTTCACTCTCTCCATCTGTTTTTGTAACTAGGTATTTCTAACACCAGCACACTATTTACAAGATGGACTTACCTGGCAGACTTGCCCAGGTCACCACGCAGTGGCCTTTTTCTGAGATGCTCACTTTATTATCCCTATTTTTAAAGTACACAATTGTTTTACCTGTTCTGAAATGTTCTTAAATTTTGTAATATTTTTTTTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGCGTTAGCTTCATTTTACTAAAAAGATTCCTCGTTACTGTTGTTGCCAAAGAGAAACAAAAATGATGTTGCNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAAAAAAGAAATGTGAAGGGTCAACTCCAACGTATGTGGTTATCTGTGAAGGCTGCATAGCGTGGCTTTTCCTAAACTGGTGTTTTTCCCCCGCATTCGGTGGATTTTTTATTATTATTCAAAAACATAACTGAGTTTTTNNNNNNNNNAGAAAATTTATATCTGGGTTAAGTGTTTATCATATATATGGGTACTCTGTAATATCTAAAACCTTAGAAACGGAAATGGAATCCTGCTCACAAAATCACTTTAAGATCTTTTCAAAGCTGTTAATTTTTCTTGGTGTTGTGGACACTGCAGACTTGTCCAGTGCTCCCACAGCCTGTACGGACACTGTGGAAGGCCTCCCTCTGTCGGCTTTTTGCCATCTGTGATATGCCATAGGTGTGACAATCCGAGCAGTGGAGTCATTCAGTGGGAGCACTGCGCGCTATCCCCTCATGTTCTCTATGTACTATGTATGTATGTATTATTATTATTGCTGCCAAGAGGGTCTGATGGCACGTTGTGGGGTCGGGGGGTGGGGCGGGGAAGTGCTCTAACTTTTCTTAAGGTTTTGTTGCTAGCCCTTCAAGTGCACTGAGCTATGTGACTCGGATGGTCTTTCACACGGCACATTTAGACATTTCCAGAACTACCATGAGATGGTTTAGATGGGAATTCATGCAAATGAGGGGTCAGAAATGGTATAGTGACCCGGTCCACGTCCTCCAAGCTCACGACCTTGGAGCCCCGTGGAGCTGGACTGAGGAGGAGGCTGCACAGCGGGAGAGCAGCTGGTCCAGACCAGCCTTGCAGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAAGCACTGAAAATAGCGTTCCCAGAGCACATTGCAACTCACTGGGTAAGAGGGACGACACCTCTGGTTTTTCAATACCAATTACATGGAACTTTTCTGTAATGGGTACAACGAAGAAGTTTCTAAAAACACACACAAAGCACATTAGGCCAACTATTTAGTAAGCCCGGATGGACTTATTGCCAGAAACAAAAAGTAGCTTTCAAAAGAAATTTAAGTTATATGAGAAATTCCTTAGTCATGGTGTTGTCTAAATCATATTTTAGCTGCACGNNNNNNNNNNNNNNNNNNAGGCAGAACTTGAAGGGTTACTGACATGTAAATGCTGGTATTTGATTTCCTGTGTGTGTTGCCCTGGCATTAAGGGCATTTTACCCTTGCAGTTTTACTAAAACACTGAAAAATATTCCAAGCTTCATATTAACCCTACCTGTCAACGTAACGATTTCATGAACATTATTATATTGTCGAATTCCTACTGACAACATTATAACTGTATGGGAGCTTAACTTTATAAGGAAATGTATTTTGACACTGGTATCTTATTAAAGTATTCTGATCCTAAAANNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN(SEQ ID NO：125)

[0170] N表示测序实验中该位置处核苷酸未测定。

[0171] 在一个方面中，本发明的EPAS1 RNAi试剂包含与人、小鼠和猕猴EPAS1基因相同的序列。该序列相同性促进在人测试前进行动物测试。

[0172] 在一个方面中，该EPAS1 RNAi试剂包含与任何其他基因都不匹配的序列。在一个方面中，该EPAS1 RNAi试剂包含与所有其他已知的非EPAS1基因相比具有至少0、1、2或3个核苷酸差异的序列。

[0173] 在一个方面中，该EPAS1 RNAi试剂包含与本发明公开的任意RNAi试剂相同的序列。

[0174] 用于治疗多种EPAS1相关疾病的EPAS1 RNAi试剂

[0175] 在一个方面中，本发明的EPASl RNAi试剂包含本发明公开的序列且被给予有此需要的患者(例如患有本发明公开或文献中已知的EPAS1相关疾病的患者)。在一个方面中，向有此需要的患者给予本发明的EPAS1 RNAi试剂，以及一种或多种适用于该疾病的其他药剂。例如，可向患有EPAS1相关疾病的患者给予药学上有效量的一种或多种EPAS1 RNAi试剂以及药学上有效量的一种或多种本文所列举的任何EPAS1相关疾病治疗，和/或本领域已知的任何其他EPAS1相关疾病治疗。

[0176] 可向患有EPAS1相关疾病的患者给予一种或多种针对EPAS1的RNAi试剂和一种或多种附加EPAS1相关疾病治疗。该附加治疗可选自本文列举的任何疾病治疗的列表，和/或本领域已知的任何抗EPAS1相关疾病治疗。

[0177] 还可向患者给予超过一种针对EPAS1的RNAi试剂。

[0178] 在EPAS1相关疾病的情况下，可以任何顺序给予RNAi试剂和其他疾病治疗(同时或依次)，或者随时间以多重剂量给予。RNAi试剂和附加治疗的给药可以是同时的、并行的、单独的或依次的。

[0179] 同时给药可以例如两种或多种活性成分的一种固定组合的形式进行，或者可以通过同时给予独立配制的两种或多种活性成分进行。依次使用(给药)优选表示在一个时间点给予某一组合的一种(或多种)组分，在不同的时间点给予其他组分，即以长期交错的方式给予，优选使得该组合与独立给予的单个化合物相比显示更高的效率(特别是显示协同作用)。单独使用(给药)优选表示该组合的组分的给药在不同时间点彼此独立，优选表示给予组分(a)和(b)使得不以重叠(同时)的方式显示两种化合物的可测量血液水平的重
叠。

[0180] 还可以使用依次、单独和同时给药中的两种或多种的组合，优选使得该组合组分-药物显示联合治疗效果(其超过以足够长的施加间隔使用组合组分-药物以至于其治
疗效率方面没有共同效果时发现的效果)，特别优选显示协同的效果。

[0181] 本文所用术语“进展的延迟”指在待治疗疾病首发或复发的前阶段或早期将组合给予患者，其中在患者中例如诊断到相应疾病的预发生形式(pre-form)，或者患者处于例如医疗治疗期间的状态下或由事故导致的状态下，该状态下可能发生相应疾病。

[0182] “联合治疗活性”或“联合治疗效果”指采用特定时间间隔单独地给予化合物(以长期交错的方式，特别是序列特异性方式)，使得这些化合物在待治疗的温血动物(特别是人)中仍显示(优选协同的)相互作用(联合治疗效果)。无论是否是这种情况，都可通过跟踪血液水平来测定(但不限于此)，其显示至少某些时间间隔期间两种化合物都存在于
待治疗的人的血液中。

[0183] 其他定义

[0184] 方便起见，下面提供了在说明书、实施例和所附的权利要求书中使用的特定术语和短语的意思。如果在本说明书的其他部分的术语的使用与在这部分中提供定义之间存在明显的偏差，以这部分中的定义为准。

[0185] 如本文通篇中使用的那样，冠词“一个”和“一种”指一个(种)或超过一个(种)(即至少一个(种))该冠词的语法对象。

[0186] RNAi试剂

[0187] 在一个方面中，本发明涉及EPAS1RNAi试剂或包含至少一条与EPAS1核酸(或其部分)互补的反义核酸序列的其他组合物，或者涉及编码shRNA的重组表达载体或包含反
义核酸的组合物(该反义核酸可起下文定义的RNAi功能)。本文中使用的“反义”核酸包
括与编码EPAS1蛋白的“正义”核酸互补的核苷酸序列(例如与双链DNA的编码链互补、与mRNA互补或与EPAS1基因或核酸的编码链互补)。

[0188] 作为非限制性示例，RNAi试剂包括siRNA(小干扰RNA)、dsRNA(双链RNA)、shRNA(短发夹RNA)和miRNA(微小RNA)。作为其他非限制性示例，RNAi试剂还包括锁核酸
(LNA)、吗啉基、UNA、苏糖核酸(TNA)，或甘油核酸(GNA)、肽核酸(PNA)和FANA。RNAi试剂还包括其中一条或多条链是RNA、DNA、LNA、吗啉基、UNA(解锁核酸)、TNA、GNA和/或FANA等的混合物的分子。作为非限制性示例，该RNAi试剂的一条或全部两条链可以是例如RNA，不同之处在于一个或多个RNA核苷酸被DNA、LNA、吗啉基、UNA(解锁核酸)、TNA、GNA和/或FANA等替代。在多个方面中，该RNAi试剂的一条或全部两条链可以具有切口，且两条链可以是相同长度，或一条链(如随从链)可短于另一条链。

[0189] 在多个方面中，本发明涉及包含本发明公开的RNA序列和/或对应于本发明公开的任何DNA序列的RNA序列的任何RNAi试剂(例如，其中DNA核苷酸被相应RNA核苷酸替
代，例如DNA中的T被RNA中的U替代，且核糖代替了糖磷酸主链中的脱氧核糖)。

[0190] 本发明的RNAi试剂靶向EPAS1 mRNA(例如结合EPAS1 mRNA、与EPAS1 mRNA退火、与EPAS1 mRNA杂交等)。使用特异性针对EPAS1的RNAi试剂导致EPAS1活性、水平和/或表达下降，例如目标基因或目标序列的“敲减”(KD)或“敲除”。在一个方面中，在以EPAS1过表达或活性过高为特征的疾病中，给予针对EPAS1的RNAi试剂将EPAS1靶标敲减足够程
度以提供更正常或治疗性的EPAS1活性或表达水平。EPASl-/-小鼠显示多重器官病变、生物活性异常和改变的基因表达；参见Scortegagna等Nat.Genet.35:331-340。因此，正常组织中EPAS1的最低程度表达可以是有利的。在本发明的多个方面中，患者或个体可具有以过度高水平EPAS1为特征的疾病状态且该RNAi试剂可恢复正常水平。在本发明的一个
方面中，调节体内EPAS1的水平使得某一区域(例如患有EPAS1相关疾病的区域)中EPAS1
水平较低，而未患有该疾病的身体区域较接近正常EPAS1水平。在本发明的一个方面中，可局部递送该RNAi试剂(例如递送至疾病位点，如肿瘤)，使得疾病区域外的EPAS1水平可维持在尽可能接近正常的水平。在另一个方面中，可调节体内EPAS1的水平，使得其足够低以改善疾病状态(例如足够低以阻止肿瘤生长)，但不会低到发生器官病变。

[0191] 在一个方面中，该RNAi包含单链。该单链RNAi试剂寡核苷酸或多核苷酸可包含正义或反义链，参见Sioud 2005 J.Mol.Biol.348:1079-1090，及其中参考文献。因此，本发明包括具有单链的RNAi试剂，该单链包括本文所述RNAi试剂的正义或反义链。本发明还
包括包含单链的RNAi试剂，该单链包含本文公开的任何RNAi试剂的反义和正义链的序列，例如这些链是连续的、通过环相连或连接的。这类分子的示例包括在正义和反义序列之间具有发夹的那些(如shRNA)。

[0192] 在多个方面中，在任意给定序列中，一条或全部两条链含有一个或多个切口(nick)，即磷酸主链中的断裂或键缺失，使得至少一个核苷酸亚基未与相邻核苷酸亚基共价连接。在一些方面中，随从链具有切口(参见例如WO 2007/107162)。在多个方面中，一条或全部两条链含有一个或多个缺口(gap)，即公开的序列中缺失至少一个完整的核苷酸亚基。当正义或反义序列含有缺口时，该链被认为包含两个分离的寡核苷酸。

[0193] 特别有用的siRNA包括特异性结合EPAS1 mRNA的那些区域的那些siRNA，其具有以下一种或多种特性：在EPAS1的编码区段中结合；在编码区段的起始和5'非翻译区
的连接点处或附近结合；在mRNA的翻译起始位点处或附近结合；在外显子和内含子的连接点处、跨连接点或连接点附近结合；不结合或以非常低水平结合其他基因的mRNA或转录本(很少或没有“脱靶作用”)；在未双链化的区域或茎区域(例如环或单链部分中的那些区域)之中或附近结合EPAS1 mRNA；引发很少或不引发免疫原性；在多种动物物种(包括人、小鼠、大鼠、猕猴等)中保守的EPAS1 mRNA序列的区段中结合，保守的序列有助于使用多种实验室动物进行测试；结合mRNA的双链区域；结合富AT区域(例如至少约50、51、52、53、
54、55、56、57、58、59或60％富AT)；和/或缺少已知或疑似降低siRNA活性的特定序列，例如在5’端存在GG序列，其可能减少siRNA的双链部分的分离。在一个方面中，特异性针对EPAS1的RNAi试剂可以是具有这些特性中任意一种或多种的双链RNA。

[0194] 本文所用术语“双链RNA”或“dsRNA”指包含第一和第二链的RNAi试剂；例如包含RNA分子或分子的复合物的组合物，该分子具有杂交的双链体区域(即来自第一链和第二链的核苷酸碱基配对的区域)，该区域包含两条反平行和基本互补的核酸链，相对于目标RNA，其被称为具有“正义”和“反义”取向。相对于mRNA靶标，反义链也称作“引导”链，而正义链也称作“随从”或“反引导”链。该随从链可包含至少一种或多种以下物质：一个或多个与另一链相比额外的核苷酸(如凸起或1nt环)和/或与另一链相比的切口、缺口、错
配等。在多个方面中，该RNAi试剂包含第一链和第二链。在多个方面中，如本发明所使用和通过上下文可清楚发现的那样，术语第一链指正义链且第二链指反义链，如本文任意表中列举的那样。在其他方面中，如本发明所使用和通过上下文可清楚发现的那样，第一链指反义链且第二链指正义链，如本文任意表中列举的那样。

[0195] 该双链体区域可以是允许所需目标RNA通过RISC途径特异性降解的任何长度，但其长度范围通常是9-36碱基对("bp")，如15-30bp。对于9-36bp的双链体，该双链体的长度可以是该范围内的任意值，例如9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36bp和期间任何子范围，包括但不限于15-30bp、
15-26bp、15-23bp、15-22bp、15-21bp、15-20bp、15-19bp、15-18bp、15-17bp、18-30bp、
18-26bp、18-23bp、18-22bp、18-21bp、18-20bp、19-30bp、19-26bp、19-23bp、19-22bp、
19-21bp、19-20bp、19bp、20-30bp、20-26bp、20-25bp、20-24bp、20-23bp、20-22bp、20-21bp、
20碱基对、21-30bp、21-26bp、21-25bp、21-24bp、21-23bp、21-22bp、21bp、22bp或23bp。通过使用Dicer和类似的酶加工而在细胞内生成的dsRNA的长度范围通常是约19至约22bp，
但人工dsRNA的链可以更短或更长。其中一条或全部两条链短至16或15nt的siRNA仍显
示RNA干扰活性。Chu和Rana 2008 RNA 14:1714-1719。dsRNA的双链体区域的一条链包
含与目标RNA的某一区域基本互补的序列。形成双链体结构的两条链可以来自具有至少一个自我互补的双链体区域的单个RNA分子，或者可以由杂交以形成双链体的两个或多个单独的RNA分子形成。当双链体区域由单个分子的两个自我互补区域形成时，该分子可在形成双链体结构的一条链的3’端和相应另一条链的5’端之间具有被单链核苷酸链(后文中称作“发夹环”，如shRNA构建体中发现的那样)分隔的双链体区域。该发夹环可包含至少一个未配对的核苷酸；在一些方面中，该发夹环可包含至少3个、至少4个、至少5个、至少
6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少20个、至少23个或更多个未配对的核苷酸。当单独的RNA分子包含dsRNA的两条基本互补的链时，这些分子无需(但可以)共
价相连。当两条链通过发夹环共价连接时，该构建体在后文和本领域中通常称作“shRNA”。
当两条链通过除发夹环以外的方式共价连接时，该连接结构称作“接头”。

[0196] 与公开的序列相比包含错配的针对EPAS1的RNAi试剂

[0197] 本发明公开了针对EPAS1的RNAi试剂的多个具体方面；示例性序列提供于各表中。本发明的具体方面包括某些RNAi试剂，这些RNAi试剂的序列与表1至5列举的任意
RNAi试剂及其经修饰和未修饰的变体相比具有0、1、2或3nt(核苷酸)或bp(碱基对)的
差异(例如具有0、1、2或3个错配)。

[0198] 本文中，错配被定义为当两条序列最大程度地比对和比较时碱基序列或长度之间的差异。错配被定义为一条序列的碱基与其他序列的碱基不匹配的位置。因此，例如，当一条序列至的一个位置具有特定碱基(如A)，而其他序列上相应位置具有不同的碱基(如G)，则计为错配。例如使用T、C、G或U取代A会构成错配。使用T、A、C或U取代G也会构
成错配。使用T、G、A或U取代C也会构成错配。使用A、C或G取代U会构成错配。然而，
应注意，在给定链上，可使用T替代U(作为RNA或优选地作为DNA，如2'-脱氧-胸苷)；使
用T替代U不是本文中使用的错配，因为U或T都可以与相对链上的A配对。该RNAi试剂
因此可包含一个或多个DNA碱基，如T。在一些情况中，在该RNAi试剂的一部分或一些部分中，可使用DNA代替RNA(例如在种子区中)以形成DNA-RNA杂交体。参见，例如，Yamato等
2011 cancer Gene Ther.18:587-597。如果存在碱基配对，则RNAi试剂的DNA部分和相应目标mRNA之间不计错配(例如分别是DNA部分的A、G、C或T和mRNA中的相应U、C、G或
A之间)。

[0199] 例如，如果一条序列中某一位置上具有碱基(如A)，而其他序列上相应位置没有碱基(例如该位置是脱碱基核苷酸，其包含磷酸-糖主链但不包含碱基)，则也计为错配。各链中(或在正义或反义链中)的单链切口不计为错配。因此，作为非限制性示例，如果一条序列包含序列AG但其他序列包含序列AG(在A和G之间具有单链切口)，不计错配。糖
或磷酸中的核苷酸修饰也不认为是错配。因此，如果一条序列包含C且其他序列在相同位置处包含经修饰的C(如2'-修饰)，不计错配。

[0200] 因此，如果修饰是针对RNAi试剂的糖、磷酸或主链做出的而不修饰碱基，不计为错配。因此，具有RNA形式的AUGGCGACAUGAUCUUUCU(SEQ ID NO:1)的序列的链与具有PNA(或吗啉基；或LNA；或TNA；或GNA；或FANA或RNA与DNA、TNA、GNA、FANA、吗啉基、UNA、LNA和/或PNA的混合物或嵌合体等)形式的相同序列的链之间不存在错配。

[0201] 还应注意，各表中RNAi试剂的序列包括含有修饰的序列，如表5所详述的那样。应注意，dTdT(2'-脱氧-胸苷-5'-磷酸和2'-脱氧-胸苷-5'-磷酸)(或者在一些情况下TT或UU)可以末端双核苷酸帽或延伸的形式添加至一个或全部两个3’端，但该帽或延伸不包含在错配总数的计算中且不被认为是目标序列的一部分。这是因为末端双核苷酸保护末端免受核酸酶降解但不涉及靶标特异性(Elbashir等2001 Nature 411:494-498；Elbashir
等2001 EMBO J.20:6877-6888；以及Kraynack等2006 RNA 12:163-176)。

[0202] 此外，如表5所示，与相应的未修饰序列相比，经修饰变体可具有一个或多个修饰。在这种情况下，小写“c”代表2'-O-甲基胞苷-5'-磷酸，且小写“u”代表2'-O-甲基尿苷-5'-磷酸。大写“A”“C”“G”和“U”分别代表未修饰的腺苷-5'-磷酸、胞苷-5'-磷酸、鸟苷-5'-磷酸和尿苷-5'-磷酸。多种修饰示于图1。例如，在对序列之间的0、1、2或3个错配编号中，使用经修饰的c取代未修饰的C不计为错配。该命名用于表1至6的所有
序列。因此，在(a)测试序列与另一种RNAi试剂的序列之间，和(b)同一测试序列与相应
来自EPAS1基因的未修饰序列之间，和(c)经修饰序列与具有相同碱基序列的不同修饰的
序列之间计算得到相等的错配数目。

[0203] 在一个具体的方面中，本发明包括含有反义链的RNAi试剂，该反义链包含至少15-19个连续核苷酸，其与表1至6列举的任意RNAi试剂的反义链的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异，及其修饰和未修饰的变体。

[0204] 本发明涉及公开的序列的“经修饰和未修饰的变体”。

[0205] 特定序列的“未修饰变体”是不具有任何修饰的EPAS1的相应部分。示例性经修饰序列列于表3。各表中序列的“未修饰变体”具有相同的序列，其不具有碱基修饰或末端dTdT。给定序列与其“未修饰变体”具有0nt的区别(且不具有错配)。

[0206] 特定序列的“经修饰变体”包含针对主链、糖、磷酸或碱基的一个或多个(或一个或多个较少)修饰，和/或添加末端双核苷酸(如TT、dTdT、TsT或UU)，但不具有任何碱基取代(例如G取代C，A取代G)；因此给定序列与其经修饰变体具有0nt的区别(且不具有错配)。作为另一个示例，作为RNA的给定序列和作为PNA的相同序列是各自的经修饰变
体且具有0nt的区别(且不具有错配)。类似地，作为锁核酸(LNA)、吗啉基、UNA(解锁核
酸)、苏糖核酸(TNA)或甘油核酸(GNA)的相同序列(不具有碱基取代)可以是具有0个错
配的经修饰变体。此外，该相同序列可以用于RNA、DNA、LNA、吗啉基、TNA、GNA和/或FANA等的混合物的链中。作为非限制性示例，一条或全部两条链可以是例如RNA，不同之处在于一个或多个核苷酸被DNA、LNA、吗啉基、UNA、TNA、GNA和/或FANA等替代。

[0207] 如下文详述的那样，使用相同核苷酸的修饰形式在给定位置处取代单核苷酸会生成经修饰变体(不具有错配)。

[0208] 在另一个具体的方面中，该RNAi试剂包含正义链，该正义链包含至少15个连续核苷酸，其与各表列举的任意RNAi试剂的正义链的序列相比具有0、1、2或3nt的差异，及其经修饰和未修饰的变体。

[0209] 本发明的针对EPAS1的RNAi试剂可用于RNA干扰。

[0210] RNAi试剂的修饰

[0211] 本发明包括未修饰和示例性经修饰的RNAi试剂，例如各表中公开的那些。

[0212] 本发明还包括公开的RNAi试剂(如经修饰变体)的任何其他修饰。

[0213] 例如，本发明包括使用相同核苷酸的修饰形式在给定位置进行单核苷酸取代的RNAi试剂。因此，核苷酸(A、G、C或U)可被以下相应物质替代：5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、
5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、
5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(queosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2、2-二甲基鸟嘌呤、2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、-D-甘露糖基辫苷、5’-甲氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、五步苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w或2,6-二氨基嘌呤。

[0214] 其他经修饰变体包括将任何其他部分(如放射性标记或其他标签或偶联物)添加至RNAi试剂；前提是碱基序列是相同的，添加其他部分生成了“经修饰变体”(不具有错配)。

[0215] 可以使用多个修饰组。这些组包括以下格式，其用于本发明公开的多种筛选。两种这类修饰组包括A51S26和A85S26；具有这些修饰组的EPAS1 RNAi试剂示于表5。

[0216] A51S53

[0217] 引导链：除1、2和14位以外的所有U和C都是2'-OMe

[0218] 正义链：所有U都是2'-OMe-U。

[0219] A85S26(“新”)

[0220] 引导链：除1、2和14位以外的所有U都是2'-OMe

[0221] 正义链：所有C和U都是经修饰的(2'-OMe)

[0222] 然而，可以制备本发明公开的EPAS1 RNAi试剂序列的其他修饰。这些修饰包括(作为非限制性示例)：

[0223] A51S26

[0224] A51：在引导链中所有U为2'-OMe-U且所有C为2'-OMe-C，1、2和14位除外；3'突出端为2'-OMe-U 2'-OMe-U

[0225] S26：在正义链中所有U为2'-OMe-U且所有C为2'-OMe-C；3'突出端为2'-OMe-U2'-OMe-U

[0226] A22S26

[0227] A22表示所有UA都是2'-OMe-UA且所有CA都是2'-OMe-CA

[0228] S26表示所有U都是2'-OMe-U且所有C都是2'-OMe-C

[0229] 所有3’突出端都是2'-OMe-U 2'-OMe-U

[0230] 除了这些修饰和修饰的模式(如格式)以外，还可使用核酸修饰的常识生成所提供序列的其他修饰或修饰组。本发明的针对EPAS1的RNAi试剂的这些多个方面可用于RNA
干扰。

[0231] RNA干扰

[0232] RNA干扰(RNAi)是一种翻译后目标基因沉默技术，其使用双链RNA(dsRNA)降解含有与该dsRNA相同序列的信使RNA(mRNA)。当核糖核酸酶III(Dicer)将较长的dsRNA切割为称作siRNA的较短片段时，发生RNAi过程。通过Dicer生成的siRNA(小干扰RNA)的长
度通常为约21至23个核苷酸且包含约19碱基对双链体(但人工siRNA或RNAi试剂可以
更短或更长，和/或是钝末端的，和/或包含一个或多个端帽)。随后，较小的RNA区段介导目标mRNA的降解。Dicer还涉及切割21和22个核苷酸小时序RNA(stRNA)，其来自涉及翻
译控制的保守结构的前体RNA。Hutvagner等2001 Science 293:834。RNAi应答的特征还
包括一种内切核酸酶复合物(通常称作RNA诱导的沉默复合物(RISC))，其介导与RNAi试
剂的反义链互补的单链mRNA的切割。目标RNA的切割发生在与siRNA双链体的反义链互
补的区域的中部。

[0233] 在一个方面中，RNA干扰试剂包括与目标RNA序列相互作用以指导目标RNA切割的单链RNA。不受理论的约束，本发明涉及一种被导入植物和非脊椎动物细胞的长双链RNA，其被称作Dicer的III型内切核酸酶切割为siRNA。Sharp等2001 Genes Dev.15:485。Dicer(一种核糖核酸酶-III样酶)将dsRNA加工为具有特征性双碱基3’突出端的19-23
碱基对小干扰RNA。Bernstein等2001 Nature 409:363。这些siRNA随后被整合至RNA诱
导的沉默复合物(RISC)中，其中一个或多个解旋酶解开siRNA双链体，使得目前未配对的siRNA链之一作为“引导”链发挥作用以引导靶标识别。Nykanen,等2001 Cell 107:309。
在反义引导链与适当目标mRNA结合后，RISC中的一种或多种内切核酸酶切割靶标以诱导
沉默。Elbashir,等2001 Genes Dev.15:188。因此，在一个方面中，本发明涉及一种单链RNA，其促进RISC复合物的形成以使目标基因沉默。

[0234] 用于RNAi合成的试剂盒可购自例如NEB公司(New England Biolabs)和安碧公司(Ambion)。

[0235] 可通过本领域已知或本领域普通技术人员能够想到的任何方法选择合适的RNAi试剂。例如，选择标准可包括以下步骤中的一种或多种：EPAS1基因序列的初始分析和RNAi试剂的设计；该设计可考虑跨物种(人、猕猴、小鼠等)的序列相似性和与其他(非EPAS1)基因的不相似性；体外筛选RNAi试剂(例如在RKO细胞中以10nM)；在RKO细胞中测定
EC50；测定使用RNAi试剂处理的细胞的活力，包括不需要EPAS1来存活的非敏感细胞或需要EPAS1来存活的敏感细胞；使用人PMBC(外周血单核细胞)进行测试，例如测试TNF-α
的水平以估计免疫原性，其中不太需要免疫刺激序列；在人全血试验中进行测试，其中使用RNAi试剂处理新鲜人血并测定细胞因子/趋化因子水平(例如TNF-α(肿瘤坏死因子-α)
和/或MCP1(单核细胞趋化蛋白1))，其中不太需要免疫刺激序列；在测试动物中使用皮下肿瘤体内测定基因敲减；EPAS1目标基因调节分析，例如使用药效学(PD)标记物，例如表达受EPAS1影响的其他因子，其中EPAS1敲减导致这些组分丰度发生剂量依赖的降低；以及
RNAi试剂的特定修饰的优化。

[0236] 本文所述dsRNA分子(RNAi试剂)因此可用于EPAS1的RNA干扰。

[0237] RNAi试剂的特征：正义链、反义链和(任选的)突出端

[0238] 在多个方面中，该RNAi试剂包含第一链和第二链，例如正义链和反义链(或反义链和正义链)，任选地，一条或全部两条链的一端或全部两端可包含未配对的核苷酸(在本文中称作“突出端”)。

[0239] 术语“反义链”是指RNAi试剂的链，其包括与目标序列基本互补的区域。本文所用术语“互补区域”是指反义链上与一段序列(例如目标序列)基本互补的区域，如本文所定义的那样。当互补区域与目标序列不完全互补时，错配可存在于分子的内部或末端区域中。通常，最耐受的错配位于末端区域中，例如在5'和/或3'末端的5、4、3或2个核苷酸内。

[0240] 本文所用术语“正义链”是指RNAi试剂的链，其包括与本文所定义的术语反义链的一个区域基本互补的区域。

[0241] 基因的序列可能在个体之间变化，特别是在编码区段内的摇摆位置处或非翻译区内；个体的编码序列彼此间也存在差异，导致mRNA中的其他差异。因此，需要时，可将RNAi试剂的正义和反义链的序列设计为对应于个体患者的序列。还可在序列中对RNAi试剂进行修饰以降低免疫原性、与不需要的mRNA的结合(如“脱靶作用”)或提高血液中的稳定
性。这些序列变体独立于RNAi试剂的碱基或5'或3'或其他端帽的化学修饰。

[0242] 该RNAi试剂还可具有0、1或2个突出端；在0nt突出端的情况下，其是钝末端的。一个RNAi试剂因此可具有0、1或2个钝末端。在“钝末端的RNAi试剂”中，两条链都终止于一个碱基对；因此，钝末端的分子缺少3'或5'单链核苷酸突出端。

[0243] 该RNAi试剂包含突出端、钝末端和/或5'和3'端帽。

[0244] 本文所用术语“突出端”或“核苷酸突出端”表示从RNAi试剂的双链体结构的两条链中的至少一条的末端突出的至少一个未配对的核苷酸。例如，当dsRNA的一条链的3’端延伸出另一条链的5’端时，其形成核苷酸突出端，例如未配对的核苷酸形成突出端，反之亦然。dsRNA可包含至少一个核苷酸的突出端；或者该突出端可包含至少两个核苷酸、至少三个核苷酸、至少四个核苷酸、至少五个核苷酸或更多。突出端可包含或由以下物质组成：核苷酸/核苷类似物，包括脱氧核苷酸/核苷。突出端可以位于正义链、反义链或其任意组合上。此外，突出端的核苷酸可位于dsRNA的反义或正义链的5端、3'端或两端上。该RNAi试剂还可任选地包含帽。术语“帽”等包括与双链核苷酸双链体的端部相连的化学部分，但在本文中不包括核苷酸或核苷的化学部分。“3'帽”连接于核苷酸或寡核苷酸的3’端并保护分子免于降解(例如来自核酸酶的降解，如血清或肠液中的那些核酸酶)。非核苷酸3'
帽不是核苷酸并可替代钝末端RNAi试剂的末端处的TT或UU双核苷酸。在一个方面中，非
核苷酸3'端帽公开于例如WO 2005/021749和WO 2007/128477；和美国专利号8,097,716；
美国专利号8,084,600；和美国专利号8,344,128。“5'帽”连接于核苷酸或寡核苷酸的5’端。帽不应干扰(或过度干扰)RNAi活性。

[0245] 本发明因此考虑特异性针对EPAS1的RNAi试剂，其包含RNAi试剂中的反义链(其可以是连续的或经由接头或环连接的)。在更具体的方面中，RNAi试剂包含反义链和正义链，其一起包含双链或互补区域。在一个方面中，其还可任选地包含一个或两个突出端和/或一个或两个帽。该RNAi试剂用于诱导目标基因EPAS1的RNA干扰。

[0246] 目标和互补序列

[0247] 本发明的RNAi试剂靶向编码EPAS1的mRNA(例如特异性结合编码EPAS1的mRNA、与编码EPAS1的mRNA退火等)。使用特异性针对EPAS1的RNAi试剂导致EPAS1活性、水
平和/或表达下降。具体而言，在一个方面中，在以EPAS1过表达或活性过高为特征的疾病中，给予针对EPAS1的RNAi试剂将EPAS1基因敲减足够程度以恢复正常水平的EPAS1活性
或表达。

[0248] 在一个方面中，RNAi的第一或第二链包含与目标核酸EPAS1互补的序列。

[0249] 本文所用术语“包含某一序列的链”表示包含核苷酸链的寡核苷酸，其通过使用标准核苷酸命名的序列来描述。

[0250] 本文所用术语“目标序列”或“目标基因”指基因(如EPAS1基因)转录期间形成的mRNA的核苷酸序列的连续部分，包括作为主要转录产物的RNA加工产物的mRNA。目
标序列部分的长度至少足以作为该位置处或附近RNAi定向切割的底物。例如，该目标序
列的长度范围通常是9-36个核苷酸("nt")，如15-30nt，包括其间所有子范围。作为非
限制性示例，该目标序列可以是15-30nt、15-26nt、15-23nt、15-22nt、15-21nt、15-20nt、
15-19nt、15-18nt、15-17nt、18-30nt、18-26nt、18-23nt、18-22nt、18-21nt、18-20nt、
19-30nt、19-26nt、19-23nt、19-22nt、19-21nt、19-20nt、19nt、20-30nt、20-26nt、20-25nt、
20-24nt、20-23nt、20-22nt、20-21nt、20nt、21-30nt、21-26nt、21-25nt、21-24nt、21-23nt或21-22nt、21nt、22nt或23nt。RNAi的正义和反义链包含与目标核酸EPAS1互补的序列。

[0251] 除非另有说明，本文所用术语“互补”指包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在特定条件下与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸杂交并形成双链体结构的能力。这类条件可以是例如严谨的，例如400mM NaCl，40mM PIPES pH 6.4，1mM EDTA，50℃或70℃持续12-16小时，随后清洗。可以使用其他条件，如生理相关的条件，如生物体内遭遇的那样。对于两条序列的互补性的测试，本领域技术人员能够根据杂交核苷酸的最终应用确定最合适的那组条件。

[0252] RNAi试剂内(如本文所述dsRNA内)的互补序列包括在一条或全部两条核苷酸序列的整个长度上碱基配对的包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸与包含第二核
苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸。本文中，这类序列可称作相对于彼此“完全互补”。然而，当第一序列在本文中称作相对于第二序列“基本互补”时，这两条序列可以是完全互补的，或者其在杂交形成最多30碱基对的双链体后可形成一个或多个(但通常不超过5、4、3或
2个)错配的碱基对，同时维持在与其最终应用(例如经由RISC途径抑制基因表达)最相
关的条件下进行杂交的能力。然而，当两个寡核苷酸设计为在杂交后形成一个或多个单链突出端时，这类突出端不应被认为是错配(相对于互补性的测定)。例如，包含一条长度为
21个核苷酸的寡核苷酸和另一条长度为23个核苷酸的寡核苷酸的dsRNA(其中较长的寡核
苷酸包含与较短的寡核苷酸完全互补的21个核苷酸的序列)出于本发明的目的仍被称作
“完全互补”。术语“突出端”描述了双链核苷酸双链体的3'或5'端处未配对的核苷酸，如上文所述。在一个方面中，该突出端是1至4nt长且位于3'端上。

[0253] 本文中使用的“互补”序列还可包含(或完全形成自)非沃森-克里克碱基对和/或来自非天然和经修饰核苷酸的碱基对，前提是符合关于其杂交能力的上述要求。这类非沃森-克里克碱基对包括但不限于Wobble或Hoogstein碱基配对。本文中术语“互补”、“完全互补”和“基本互补”可进一步根据dsRNA的正义链和反义链之间或RNAi试剂的反义链和目标序列之间的碱基匹配来使用，如同从其应用的上下文中理解的那样。如本文中使用的那样，与信使RNA(mRNA)的“至少一部分基本互补”的多核苷酸指与感兴趣的mRNA(如编码EPAS1的mRNA)的连续部分基本互补的多核苷酸。例如，多核苷酸与EPAS1 mRNA的至
少一部分互补的前提是该序列与编码EPAS1的mRNA的非间断部分基本互补。

[0254] 因此，本发明的RNAi试剂与目标EPAS1中的目标序列互补或基本互补并且是双链的，包含正义和反义链(其可以是连续的、经由环连接的，或接合的)，其中双链区域的长度可以是9-36bp(具体而言是例如19-22bp或19-23bp)，并且还可以任选地包含3'或5'突出端，且该RNAi试剂还可包含3’帽。该RNAi试剂介导RNA干扰，下调或抑制EPAS1的水
平、表达和/或活性，和/或建立或重新建立EPAS1和/或EPAS1活性的大致正常水平，或
者与EPAS1相关的其他生物功能。

[0255] 因此，本发明的RNAi试剂与目标EPAS1中的目标序列互补或基本互补并且是双链的，包含正义和反义链(其可以是连续的、经由环连接的，或接合的)，其中双链区域的长度可以是9-36bp(具体而言是例如19-22bp或19-23bp)，并且还可以任选地包含3'或5'突出端，且该RNAi试剂还可包含3’帽。该RNAi试剂介导RNA干扰，下调或抑制EPAS1的水
平、表达和/或活性，和/或建立或重新建立EPAS1活性或表达的大致正常水平。

[0256] 本文所用术语“双链RNA”或“dsRNA”指包含第一和第二链的RNAi试剂；例如包含RNA分子或分子的复合物的组合物，该分子具有杂交的双链体区域，该区域包含两条反平行和基本互补的核酸链，相对于目标RNA，其被称为具有“正义”和“反义”取向。相对于mRNA靶标，反义链也称作“引导”链，而正义链也称作“随从”链。如本文中使用的那样，取决于上下文，“第一”链可以是引导或反义链，且“第二”链可以是随从或正义链。还如本文中使用的那样，也取决于上下文，“第一”链可以是随从或正义链，且“第二”链可以是引导或反义链。该随从链可包含至少一种或多种以下物质：一个或多个与另一链相比额外的核苷酸(如凸起或1nt环)，与另一链相比的切口、缺口等。在多个方面中，该第一链是正义链且该第二链是反义链。在其他方面中，该第一链是反义链且该第二链是正义链。

[0257] 该双链体区域可以是允许所需目标RNA通过RISC途径加载至RISC复合物并随后特异性降解的任何长度，但其长度范围通常是9-36碱基对("bp")，如15-30碱基对。对于9-36碱基对的双链体，该双链体的长度可以是该范围内的任意值，例如9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35 或 36bp和期间任何子范围，包括但不限于15-30碱基对、15-26bp、15-23bp、15-22bp、15-21bp、
15-20bp、15-19bp、15-18bp、15-17bp、18-30bp、18-26bp、18-23bp、18-22bp、18-21bp、
18-20bp、19-30bp、19-26bp、19-23bp、19-22bp、19-21bp、19-20bp、19bp、20-30bp、20-26bp、
20-25bp、20-24bp、20-23bp、20-22bp、20-21bp、20bp、21-30bp、21-26bp、21-25bp、21-24bp、
21-23bp、21-22bp、21bp、22bp或23bp。

[0258] 通过使用Dicer和类似的酶加工而在细胞内生成的dsRNA的长度范围通常是约19至约22碱基对，但可通过本领域已知的任何方法合成或制备人工RNAi试剂。dsRNA的双链体区域的一条链包含与目标RNA的某一区域基本互补的序列。形成双链体结构的两条链可以来自具有至少一个自我互补的双链体区域的单个RNA分子，或者可以由杂交以形成双链体的两个或多个单独的RNA分子形成。当双链体区域由单个分子的两个自我互补区域形成时，该分子可在形成双链体结构的一条链的3’端和相应另一条链的5’端之间具有被单链核苷酸链(后文中称作“发夹环”，如shRNA构建体中发现的那样)分隔的双链体区域。该发夹环可包含至少一个未配对的核苷酸；在一些方面中，该发夹环可包含至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少20个、至少23个或更多个未配对的核苷酸。当单独的RNA分子包含dsRNA的两条基本互补的链时，这些分
子无需(但可以)共价相连。当两条链通过发夹环共价连接时，该构建体在后文和本领域
中通常称作“shRNA”。当两条链通过除发夹环以外的方式共价连接时，该连接结构称作“接头”。术语“siRNA”在本文中也指上文所述dsRNA。

[0259] 降低或标准化EPAS1水平、表达和/或活性的RNAi试剂

[0260] 用于靶向EPAS1的RNAi试剂包括结合本发明所提供EPAS1序列和通过RNAi机制减少EPAS1的那些。提供了示例性针对EPAS1的RNAi试剂(如siRNA)，例如在表1中。

[0261] 本领域已知的任何方法都可用于测量EPAS1 RNAi试剂诱导的EPAS1活性、水平和/或表达的变化。可在多个时间点(给予RNAi试剂之前、期间和之后)进行测量以测定
RNAi试剂的效果。

[0262] 本发明的RNAi试剂沉默EPAS1、抑制EPAS1的表达、下调EPAS1的表达，和/或压制EPAS1的表达，从而恢复大致正常的EPAS1活性或表达的水平。

[0263] 此外，在多个方面中，取决于疾病状态和生物背景，使用本发明的RNAi试剂建立低于正常水平(或高于正常水平，取决于所需的治疗结果)的EPAS1表达、活性和/或水平是可接受的。

[0264] 本领域已知的任何方法都可用于测量EPAS1 siRNA试剂诱导的EPAS1活性、水平和/或表达的变化。可在多个时间点(给予siRNA之前、期间和之后)进行测量以测定
siRNA的效果。

[0265] 在指代EPAS1基因的范围内，术语“沉默”、“抑制……的表达”、“下调……的表达”、“压制……的表达”等在本文中表示至少部分压制EPAS1基因的表达，这表现为与第二细胞或细胞组相比，分离自第一细胞或细胞组或者在第一细胞或细胞组这检测的EPAS1 mRNA的量下降，其中该第一细胞或细胞组中发生EPAS1基因的转录并已被治疗从而使EPAS1基
因的表达受到抑制，该第二细胞或细胞组与第一细胞或细胞组基本相同但尚未被如此治疗(对照细胞)。抑制的程度通常表示为

[0266]

[0267] 或者，抑制的程度可表示为与EPAS1基因表达功能上相联系的参数的降低，例如EPAS1基因编码的蛋白的量、表达取决于EPAS1的蛋白的表达变化等。原则上，可在任何表达EPAS1的细胞(组成型表达或通过基因组工程改造)中并通过任何适当试验来测定
EPAS1基因沉默。然而，在需要参考或对照来确定给定的RNAi试剂是否以某些程度抑制
EPAS1的表达并因此包含在本发明内时，下文实施例中提供的试验应用作这类参考。

[0268] 例如，在某些情况下，通过给予本发明所述RNAi试剂，EPAS1的表达被压制至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％。在一些方面中，通过给予本发明所述RNAi试剂，EPAS1的表达被压制至少约60％、70％或80％。在一些方面中，通过给予本发明所述RNAi试剂，EPAS1的表达被压制至少约85％、90％或95％或更多。在一个方面中，通过与未治疗细胞相比经治疗细胞中全长EPAS1 mRNA的减少来测定EPAS1压制程度。在一
个方面中，使用监测增殖活性丧失和/或细胞死亡的表型试验来测定EPAS1压制程度。其
他方面如同实施例中提供的那样。

[0269] 可通过本领域已知或本领域普通技术人员能够想到的任何方法选择合适的RNAi试剂。例如，选择标准可包括以下步骤中的一种或多种：EPAS1基因序列的初始分析和RNAi试剂的设计；该设计可考虑跨物种(人、猕猴、小鼠等)的序列相似性和与其他(非EPAS1)基因的不相似性；体外筛选RNAi试剂(例如在786-O细胞中以10nM和1nM)；在786-O细胞
中以10nM和1nM选择具有高敲减的RNAi试剂；在786-O细胞中测定EC50；在RCC细胞系
(786-O细胞)中确认EC50；分析相对于对照siRNA的细胞生长效果的缺少；786-O细胞中
HRE-luc(荧光素酶)报告基因表达的降低而对照UB6-luc(荧光素酶)报告基因的表达不
降低；Western印迹以测量Hif-1、Hif-2和ARNT水平；使用人PMBC(外周血单核细胞)进
行测试，例如测试TNF-α的水平以估计免疫原性，其中不太需要免疫刺激序列；在人全血试验中进行测试，其中使用RNAi试剂处理新鲜人血并测定细胞因子/趋化因子水平(例如
TNF-α(肿瘤坏死因子-α)和/或MCP1(单核细胞趋化蛋白1))，其中不太需要免疫刺激序
列；在测试动物中使用皮下肿瘤体内测定基因敲减；EPAS1目标基因调节分析，例如使用药效学(PD)标记物，例如EGLN3、SLC2A1和VEGF，其中EPAS1敲减导致细胞中EGLN3、SLC2A1和VEGF发生剂量依赖的变化；以及RNAi试剂的特定修饰的优化。需要时，可使用其他细胞系代替上文列举的那些以鉴定能够降低EPAS1水平或减少EPAS1相关疾病症状的RNAi试
剂。

[0270] 在EPAS1或EPAS1相关疾病症状的上下文中，“降低”表示这类水平的统计学显著的下降。该下降可以是例如至少10％、至少20％、至少30％、至少40％或更多。对于特定疾病或对于患有特定疾病的个体，如果EPAS1的水平或表达升高，使用本发明的EPAS1 RNAi试剂治疗能够特别将EPAS1的水平或表达降低至文献中认为不患有这类疾病的个体
的正常范围的水平，或者降低至减少或缓解疾病症状的水平。可通过评估mRNA(例如经由Northern印迹或PCR)或蛋白(例如Western印迹)来测量EPAS1的水平或表达。可通过
测量EPAS1基因转录速率(例如通过Northern印迹或反转录酶聚合酶链式反应或实时聚
合酶链式反应)来测定RNAi试剂对于EPAS1表达的作用。

[0271] 本文中使用的“下调”表示EPAS1的生物活性和/或表达的任何统计学显著的下降，包括完全封闭活性(即完全抑制)和/或表达。例如，“下调”可以表示EPAS1水平、活性和/或表达下降至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90或100％。

[0272] 本文所用术语“抑制”EPAS1表示EPAS1的生物水平、活性和/或表达的任何统计学显著的下降，包括完全封闭活性和/或表达。例如，“抑制”可以表示EPAS1水平、活性和/或表达下降至少约10、20、30、40、50、60、70、80、90或100％。指代任何其他生物试剂或组合物时，本文所用术语“抑制”类似地表示水平、活性和/或表达的显著下降。

[0273] 对于“水平”，其表示EPAS1 RNAi试剂可改变EPAS1的水平，例如EPAS1 mRNA的水平或EPAS1蛋白的水平，或EPAS1的活性的水平。

[0274] 一些疾病包括任何EPAS1相关疾病，其是本发明中公开或是文献中已知的。具体而言，在一个方面中，在以EPAS1过表达和/或活性过高为特征的疾病中，给予针对EPAS1的RNAi试剂降低了EPAS1的水平、表达和/或活性。因此，在多个方面中，给予针对EPAS1的RNAi试剂特别地建立或重新建立正常或大致正常水平的EPAS1的水平、表达和/或活性。

[0275] 形容水平、表达和/或活性时，“正常”或“大致正常”表示健康细胞、组织或器官中EPAS1的水平、表达和/或活性的至少约50％、约60％、约70％、约80％、约90％和/或约100％；和/或不超过约100％；约120％；约130％；约140％；或约150％。这可以使用例如肺或肾匀浆物测量，参见Gambling等2Kidney Intl.65:1774-1781。具体而言，在一个方面中，给予适当量的适当EPAS1 RNAi试剂将EPAS1水平、表达和/或活性恢复至健康细胞、组织或器官的约50％至约150％，更具体地约60％至约140％，更具体地约70％至约
130％，更具体地约80％至约120％，更具体地约90％至约110％，且最具体地约100％。因此，给予患有EPAS1相关疾病的患者EPAS1 RNAi特别地将EPAS1的水平、表达和/或活性
+
或Na再吸收水平恢复至大致正常水平，如通过直接测量EPAS1 mRNA或蛋白水平测定或间
接测定的那样。此外，可计算EPAS1 RNAi试剂给药后优选的EPAS1水平、表达和/或活性
的量，以考虑EPAS1相关途径中的任何其他干扰。例如，如果另一种因子在EPAS1相关途径表达过高或过低，可调节EPAS1水平、表达和/或活性以维持较正常的状态。

[0276] 此外，在多个方面中，取决于疾病状态和生物背景，使用本发明的RNAi试剂建立低于正常水平(或高于正常水平)的EPAS1表达、活性和/或水平是可接受的。

[0277] RNAi试剂的类型及其修饰

[0278] 使用RNAi试剂或包含反义核酸的组合物下调细胞中特定蛋白的表达是本领域熟知的。RNAi试剂包含与另一种核酸(如mRNA)的编码链互补并能够与之氢键结合的序列。
因此，在多个方面中，本发明的RNAi试剂包括靶向(例如互补、能够杂交或氢键结合等)所示任意序列(例如在任意表中)的RNAi试剂。

[0279] 一旦鉴定到功能性引导链，即可对引导链和/或随从链进行许多修饰。例如，该RNAi试剂可在内部或一个或全部两个末端处具有修饰。各末端处的修饰可帮助稳定RNAi试剂，保护其免受血液中核酸酶的降解。该RNAi试剂可任选地针对已知或预测位于基因的剪接位点处或附近的EPAS1 mRNA的区域。

[0280] 可利用本领域已知方法，通过化学合成和酶促连接反应构建RNAi试剂。例如，可以用天然产生的核苷酸或各种经修饰核苷酸化学合成RNAi试剂，所述经修饰核苷酸设计为降低脱靶作用，和/或提高该分子的生物学稳定性或提高反义和正义核酸之间形成的双链体的物理稳定性，例如可使用硫代磷酸酯衍生物和吖啶取代的核苷酸。

[0281] “G”、“C”、“A”、“T”和“U”分别各自通常代表含有鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶作为碱基的核苷酸。然而，术语“核糖核苷酸”、“脱氧核苷酸”或“核苷酸”也能指代经修饰的核苷酸或替代取代部分。本领域技术人员应理解，鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤和尿嘧啶可被其他部分替代而基本不改变包含携带这类替代部分的核苷酸的寡核苷酸的碱基配对特性。例如，但不限于，包含肌苷作为其碱基的核苷酸可与含有腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶的核苷酸碱基配对。因此，含有尿嘧啶、鸟嘌呤或腺嘌呤的核苷酸可在本发明所述dsRNA的核苷酸序列中被含有例如肌苷的核苷酸替代。在另一个实施例中，寡核苷酸中任意位置的腺嘌呤和胞嘧啶可分别被鸟嘌呤和尿嘧啶替代以与目标mRNA形成Wobble碱基配对。含
有这类替代部分的序列适用于本发明所述组合物和方法。

[0282] 本领域技术人员应理解，术语“RNA分子”或“核糖核酸分子”不仅包括自然中表达或发现的(即天然产生的)RNA分子，还包括非天然产生的RNA类似物和衍生物(其包含本文所述或本领域已知的一个或多个核糖核苷酸/核糖核苷类似物或衍生物)。RNA可以在核碱基结构或核糖-磷酸主链结构中被修饰，如下文描述的那样。然而，包含核糖核苷类似物或衍生物的分子必须保留形成双链体的能力。作为非限制性示例，RNAi试剂的一条或全部两条链可包含至少一个经修饰的核糖核苷，包括但不限于2'-O-甲基修饰的核苷酸、包含
5'硫代磷酸酯基团的核苷、与胆甾醇基衍生物或十二烷酸二癸酰胺基团连接的末端核苷、锁核苷、脱碱基核苷、2'-脱氧-2'-氟修饰的核苷、2'-氨基修饰的核苷、2'-烷基修饰的核苷、吗啉基修饰的核苷、解锁核糖核苷酸(如WO 2008/147824中所述开链核苷酸单体)、包含氨基磷酸酯或非天然碱基的核苷，或其任何组合。或者，RNA分子可包含至少两个经修饰核糖核苷，至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少15个、至少20个或更多个，最多至dsRNA分子的整个长度。对于一个RNA分子中
的这类多个经修饰核糖核苷中的各核糖核苷，修饰无需是相同的。在一个方面中，用于本文所述方法和组合物的经修饰RNA是肽核酸(PNA)，其能够形成所需双链体结构并经由RISC
通路允许或介导目标RNA的特异性降解。此外，该RNAi试剂可包含一条或两条链，该链是RNA或者RNA、DNA、LNA、吗啉基、UNA、TNA、GNA和/或FANA、经修饰的RNA等的混合物。作为非限制性示例，一条或全部两条链可以是例如RNA(不同之处在于一个或多个核苷酸被
DNA、LNA、吗啉基、UNA、TNA、GNA和/或FANA、和/或经修饰的RNA(本发明公开或本领域已知的任何经修饰的RNA，如2’-修饰的RNA，包括但不限于2'-F、2'-OMe、2'-MOE RNA等)替代)。

[0283] 可用于产生RNAi试剂的修饰核苷酸的示例包括5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶、5-羧甲基氨基甲基-2-硫尿核苷、5-羧甲基氨基甲基尿嘧啶、二氢尿嘧啶、β-D-半乳糖基辫苷(queosine)、肌苷、N6-异戊烯基腺嘌呤、1-甲基鸟嘌呤、1-甲基肌苷、2、2-二甲基鸟嘌呤、
2-甲基腺嘌呤、2-甲基鸟嘌呤、3-甲基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、N6-腺嘌呤、7-甲基鸟嘌呤、
5-甲基氨基甲基尿嘧啶、5-甲氧基氨基甲基-2-硫尿嘧啶、 -D-甘露糖基辫苷、5’-甲
氧基羧甲基尿嘧啶、5-甲氧基尿嘧啶、2-甲硫基-N6-异戊烯基腺嘌呤、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、五步苷(wybutoxosine)、假尿嘧啶、辫苷、2-硫胞嘧啶、5-甲基-2-硫尿嘧啶、2-硫尿嘧啶、4-硫尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、尿嘧啶-5-氧乙酸甲酯、尿嘧啶-5-氧乙酸(v)、5-甲基-2-硫尿嘧啶、3-(3-氨基-3-N-2-羧基丙基)尿嘧啶、(acp3)w和2,6-二氨基嘌呤。这
些和其他示例性修饰示于本文图1以及Usman等1992 TIBS 17:34；Usman等1994 Nucl.
Acids Symp.Ser.31:163；Burgin等1996 Biochem.35:14090。

[0284] 本发明所公开序列的“经修饰变体”包括任何变体，其含有相同序列但在碱基、糖、磷酸或主链上具有修饰(但不是碱基取代，如A取代G或C取代U)。因此，经修饰变体可包含任意上文所述经修饰核苷酸(例如5-氟脲嘧啶、5-溴脲嘧啶、5-氯脲嘧啶、5-碘脲嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、4-乙酰基胞嘧啶、5-(羧基羟甲基)尿嘧啶等)。当碱基被相应的经修饰碱基替代时(例如经修饰A代替A)，这些经修饰核苷酸不构成错配或碱基差别。因此，在特定位置具有U的给定序列与在相同序列处包含5-氟脲嘧啶、5-溴脲嘧啶、5-氯脲嘧啶或5-碘脲嘧啶的经修饰变体具有0nt的区别(且不具有错配)；然而，在特定位置具有C的
给定序列与具有5-氟脲嘧啶的不同序列(其中两条序列的其他部分是相同的)相差1nt(1
个错配)。

[0285] 使用脱氧核糖核苷酸替代具有双核苷酸3’-突出端的21聚体siRNA双链体的3’-末端核苷酸突出区段对于RNAi活性不具有不良影响。使用脱氧核糖核苷酸替代siRNA的各端上的最多四个核苷酸是良好耐受的，而使用脱氧核糖核苷酸进行完全取代导致没有RNAi活性。国际PCT公开号WO 00/44914和Beach等国际PCT公开号WO 01/68836初步表
明siRNA可包含针对磷酸-糖主链或核苷的修饰以包含至少一个氮或硫杂原子。Kreutzer
等加拿大专利申请号2,359,180还描述了某些用于dsRNA构建体的化学修饰，其用于对抗
双链RNA依赖的蛋白激酶PKR的激活，特别是2'-氨基或2'-O-甲基核苷酸，和含有2'-O或
4'-C亚甲基桥的核苷酸。其他3’末端核苷酸突出端包括dT(脱氧胸苷)、2'-O,4'-C-亚乙基胸苷(eT)和2-羟基乙基磷酸(hp)。还可进行4-硫尿嘧啶和5-溴尿嘧啶取代。Parrish
等2000 Molecular Cell 6:1077-1087。

[0286] 本领域技术人员应理解，能够使用本领域已知的任何常规方法根据需要合成和修饰siRNA(参见Henschel等2004 DEQOR:a web-based tool for the design and
quality control of siRNAs(DEQOR：一种用于设计siRNA并进行质量控制的基于网络的
工具).Nucleic Acids Research 32(网络服务器发布版本)：W113-W120)。此外，如果该RNAi试剂是shRNA，则对于本领域技术人员而言显而易见的是存在多种可用于shRNA表达
构建体/载体的调控序列(例如，组成型或诱导型启动子、组织特异性启动子或其功能片段等)。

[0287] 本领域中存在若干描述糖、碱基、磷酸和主链修饰的示例，其可被导入核酸分子中，显著增强其核酸酶稳定性和功效。例如，对寡核苷酸进行修饰以增强稳定性和/或使用核酸酶耐性基团(如2'-氨基,2'-C-烯丙基、2'-氟、2'-O-甲基、2'-O-烯丙基、
2'-H、核苷酸碱基修饰)进行修饰以增强生物活性(对于综述，参见Usman和Cedergren
1992 TIBS.17:34；Usman 等 1994 Nucleic Acids Symp.Ser.31:163；Burgin 等 1996 Biochemistry 35:14090)。本领域中广泛描述了核酸分子的糖修饰。

[0288] 在多个方面中，该RNAi试剂包含选自下组的2’-修饰：2'-脱氧、2'-脱氧-2'-氟、2'-O-甲基(2'-OMe或2'OMe)、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基(2'-O-AP)、
2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基氨基乙基氧乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)。

[0289] 已描述了RNAi试剂的其他修饰和偶联。Soutschek等2004 Nature 432:173-178显示通过吡咯烷接头将胆固醇偶联至siRNA分子的正义链的3’端，从而生成共价和不可逆的偶联。还可制备RNAi试剂的化学修饰(包括与其他分子偶联)以改进体内药代动力学
保留时间和效率。

[0290] 在多个方面中，该针对EPAS1的RNAi试剂包含：至少一个5'-尿苷-腺苷-3'(5'-ua-3')双核苷酸，该尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-尿苷-鸟
苷-3'(5'-ug-3')双核苷酸，该5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-胞苷-腺
苷-3'(5'-ca-3')双核苷酸，该5'-胞苷是2'-修饰的核苷酸；和/或至少一个5'-尿苷-尿
苷-3'(5'-uu-3')双核苷酸，该5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸。在某些方面中，该RNAi试
剂可包含非天然核碱基，该非天然核碱基是二氟甲苯基、硝基吲哚基、硝基吡咯基或硝基咪唑基。在一个特定的方面中，该非天然核碱基是二氟甲苯基。在某些方面中，仅两条寡核苷酸链中的一条含有非天然核碱基。在某些方面中，两条寡核苷酸链都含有非天然核碱基。

[0291] 在另一个方面中，该RNAi包含缺口或含有错配(其包括脱碱基核苷酸)。

[0292] 在另一个方面中，该RNAi试剂具有单链切口(例如主链中的断裂或键缺失)。在多个方面中，单链切口可以在正义或反义链中，或两条链中。

[0293] 该切口可以在正义链中，生成小的内部区段化的干扰RNA(或sisiRNA)，其与相应没有切口的RNAi试剂相比具有较少的脱靶作用。参见例如Wengels和Kjems的WO
2007/107162。

[0294] 反义核酸或RNAi试剂还可具有替代性主链(如锁核酸(LNA)、吗啉基、肽核酸(PNA)、苏糖核酸(TNA)或甘油核酸(GNA)或FANA)和/或其可被标记(如放射性标记或携
带标签)。FANA描述于Dowler等2006 Nucl.Acids Res.34:1669-1675。

[0295] 一条或全部两条链可包含替代性主链。

[0296] 在另一个方面中，本发明的方法所使用的RNAi试剂可包含α-异头核酸分子。α-异头核酸分子与互补RNA形成特定双链杂交体，其中与通常的β-单元相反，各链彼此平行。Gaultier等1987 Nucleic Acids.Res.15:6625-6641。

[0297] 反义核酸分子也可包含2’-o-甲基核糖核苷酸(Inoue等1987，Nucleic AcidsRes.15:6131)或嵌合的RNA-DNA类似物(Inoue等1987，FEBS Lett.215:327)。

[0298] 还可对RNAi试剂进行其他修饰和/或其他变化。RNAi试剂的一部分可以是双链DNA，而另一部分是双链RNA，形成DNA-RNA嵌合体(参见例如Yamato等2011.Cancer Gene Ther.18:587-597)。还可导入引导链和随从链之间的错配，但一些位置可能比其他位置更适合(参见例如Khvorova的美国专利申请号2009/0209626)。还可将随从链缩短至15或
16nt，而引导链维持19nt或更长(参见例如Sun等2008 Nature Biotech.26:1379-1382；
以及Chu和Rana 2008 RNA 14:1714-1719)。这可以提高引导链掺入RNA诱导的沉默复合
物(RISC)，并降低随从链的掺入，减少脱靶作用。在一些情况下，与引导链相比，随从链更适于进行修饰(例如单链切口、核苷酸修饰和缩短)。

[0299] 这些和许多其他修饰可以在鉴定到功能性引导链后立即进行。

[0300] RNAi试剂的药物组合物

[0301] 如本文所用的“药物组合物”包含药学有效量的一种或多种EPAS1 RNAi试剂、药学上可接受的运载体和任选的与RNAi试剂协同作用的其他疾病治疗。如本文所用的“药理学有效量“、”治疗有效量“或简单的”有效量“是指有效产生预期的药理学、治疗或预防性结果的RNAi试剂的量。例如，如果当疾病或病症相关可测量参数降低至少10％时认为给定的临床治疗是有效的，则治疗有效量的用于治疗该疾病或病症的药物是使该参数降低至少10％所需的量。在该方面，靶向EPAS1的RNAi试剂的治疗有效量可使EPAS1蛋白水平降
低至少10％。在其他方面中，当疾病或病症相关可测量参数降低至少15、20、25、30、35、40、
45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95％时认为给定的临床治疗是有效的，且治疗有效量的用于治疗该疾病或病症的药物是使该参数分别降低至少15、20、25、30、35、40、45、50、55、
60、65、70、75、80、85、90或95％所需的量。

[0302] 术语“药学上可接受的运载体”是指用于治疗剂给药的运载体。这类运载体包括但不限于：脂质纳米颗粒、盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇及其组合。该术语特别排除了细胞培养基。本领域已知的任何适当药物运载体都可与本发明公开的RNAi试剂联用。

[0303] 包含针对EPAS1的RNAi试剂的药物组合物

[0304] 包含针对EPAS1的RNAi试剂的药物组合物的其他组分被认为辅助递送、稳定、功效或免疫原性的降低。

[0305] 先前已将脂质体用于药物递送(例如化疗剂的递送)。脂质体(如阳离子脂质体)描述于PCT公开WO02/100435A1、WO03/015757A1、WO04029213A2；和WO/2011/076807；
美国专利号5,962,016；5,030,453；和6,680,068；以及美国专利申请2004/0208921。
WO04/002453A1还描述了一种制备脂质体的方法。此外，已将中性脂质纳入阳离子脂质体(如Farhood等1995)，以及PEG化脂质。

[0306] 已使用阳离子脂质体来将RNAi试剂递送至多种细胞类型(Sioud和Sorensen2003；美国专利申请2004/0204377；Duxbury等，2004；Donze和Picard,2002)。

[0307] 中性脂质体的应用公开于Miller等1998和美国专利申请2003/0012812。

[0308] 本文所用术语“SNALP”指稳定的核酸-脂质颗粒。SNALP表示一种脂质囊泡，其包覆还原的水性内部，该水性内部包含核酸(如iRNA)或质粒(iRNA从其中转录)。SNALP描述于例如美国专利申请公开号20060240093、20070135372和国际申请号WO 2009082817。

[0309] 使用基于脂质、基于胺和基于聚合物的技术进行的化学转染公开于德克萨斯州奥斯汀的安碧公司(Ambion)和诺瓦基公司(Novagen)、EMD生物科学公司(EMD
Biosciences,Inc)(德国达姆施塔特的默克公司(Merck KGaA))的产品；Ovcharenko
D(2003)“Efficient delivery of siRNAs to human primary cells(将siRNA有效递
送至人原代细胞)”Ambion TechNotes 10(5):15-16。此外，Song等(Nat Med.published online(2003年2月10日)doi:10.1038/nm828)和其他(Caplen等2001Proc.Natl.Acad.
Sci.(USA),98:9742-9747；和McCaffrey等Nature 414:34-39)公开了可通过将siRNA注
射至哺乳动物循环系统中来有效地转染肝细胞。

[0310] 多种分子已被用于细胞特异性RNAi试剂递送。参见例如，WO/2011/076807。例如，已将鱼精蛋白的核酸浓缩特性与特异性抗体联用来递送siRNA。Song等2005 Nat
Biotech.23:709-717。自组装PEG化聚阳离子聚乙烯亚胺(PEI)也被用于浓缩和保护
siRNA。Schiffelers等2004 Nucl.Acids Res.32:el49,141-1 10。

[0311] 本发明的RNAi试剂可经由以下途径递送：例如脂质纳米抗体(LNP)；中性脂质体(NL)；聚合物纳米颗粒；双链RNA结合基序(dsRBM)；或经由RNAi试剂的修饰(例如与
dsRNA共价连接)或通过任何本领域已知用于递送包含核算的RNAi试剂的方法。

[0312] 脂质纳米颗粒(LNP)是自组装的基于阳离子脂质的系统。其可包括例如中性脂质(脂质体基础)；阳离子脂质(用于siRNA加载)；胆固醇(用于稳定脂质体)；和PEG-脂质(用于稳定制剂、电荷屏蔽和延长的血流中循环)。

[0313] 阳离子脂质可包含例如头基团、接头、尾和胆固醇尾。LNP可具有例如良好的肿瘤递送、延长的血液中循环、小颗粒(如小于100nm)和肿瘤微环境(其是低pH和低含氧量的)中的稳定性。

[0314] 中性脂质体(NL)是基于非阳离子脂质的颗粒。

[0315] 聚合物纳米颗粒是自组装的基于聚合物的颗粒。

[0316] 双链RNA结合基序(dsRBM)是自组装的RNA结合蛋白，其需要修饰。

[0317] 包含中性脂质；阳离子脂质；胆固醇；和PEG-脂质的脂质纳米颗粒(LNP)中的EPAS1 RNAi试剂组合物

[0318] 脂质纳米颗粒(LNP)是自组装的基于阳离子脂质的系统。其可包括例如中性脂质(脂质体基础)；阳离子脂质(用于siRNA加载)；胆固醇(用于稳定脂质体)；和PEG-脂质(用于稳定制剂、电荷屏蔽和延长的血流中循环)。

[0319] 中性脂质

[0320] 中性脂质是例如脂质体基础。

[0321] 阳离子脂质

[0322] 阳离子脂质是例如用于siRNA加载。

[0323] 胆固醇

[0324] 胆固醇是例如用于稳定脂质体。

[0325] PEG-脂质(用于稳定制剂、电荷屏蔽和延长的血流中循环)。

[0326] PEG-脂质是例如用于稳定制剂、电荷屏蔽和延长的血流中循环。

[0327] 中性脂质；阳离子脂质；胆固醇；和PEG-脂质的比例和具体制剂。

[0328] 在一个方面中，该制剂包含：

[0329]

[0330] 在一个方面中，该制剂包含：

[0331]

[0332] 在一个方面中，该制剂包含：

[0333]

[0334] 在一个方面中，该制剂包含：

[0335]

[0336] 在一个方面中，该制剂包含含有本发明公开的任何序列的RNAi试剂或其部分(例如具有0、1、2或3个错配的15或更多个连续nt)，任选地具有任何长度、修饰、末端双核苷酸、端帽、RNAi试剂的组合、涉及EPAS1 RNAi试剂和另一种试剂的联合治疗、与其他组分偶联、用于递送的组合物或方法或技术，和/或疾病治疗(其中任一种都可以是本文描述或本领域已知的)，还包含化合物1、胆固醇、DSPC和/或PEG-脂质中的一种或多种。在一个方面中，该制剂是45％化合物1(阳离子脂质)、44％(胆固醇)、9％(DSPC)和2％(PEG-脂质)(所有都是摩尔比例)。这些是本领域已知的和/或描述于2013年3月8日提交的美
国专利申请号61/774759。在一个方面中，本发明涉及一种组合物，其包含45％化合物1(阳离子脂质)、44％(胆固醇)、9％(DSPC)和2％(PEG-脂质)(所有都是摩尔比例)和RNAi
试剂5049的序列的RNAi试剂。在一个方面中，本发明涉及一种组合物，其包含45％化合物
1(阳离子脂质)、44％(胆固醇)、9％(DSPC)和2％(PEG-脂质)(所有都是摩尔比例)和
RNAi试剂3875的序列的RNAi试剂。在一个方面中，本发明涉及一种组合物，其包含45％
化合物1(阳离子脂质)、44％(胆固醇)、9％(DSPC)和2％(PEG-脂质)(所有都是摩尔
比例)和包含第一链和第二链的RNAi试剂，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300的序
列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301的序列。

[0337] 在一个方面中，本发明涉及一种组合物，其包含45％化合物1(阳离子脂质)、44％(胆固醇)、9％(DSPC)和2％(PEG-脂质)(所有都是摩尔比例)和包含第一链和第二链的RNAi试剂，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302的序列，和/或该第二链的序列是
或包含SEQ ID NO:303的序列。在一个方面中，本发明涉及一种组合物，其包含45％化合物1(阳离子脂质)、44％(胆固醇)、9％(DSPC)和2％(PEG-脂质)(所有都是摩尔比例)
和包含第一链和第二链的RNAi试剂，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304的序列。

[0338] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的。

[0339] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0340] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0341] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0342] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0343] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约45％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0344] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0345] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0346] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0347] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0348] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约45％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0349] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％胆固醇(摩尔比例)。

[0350] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％胆固醇(摩尔比例)。

[0351] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％胆固醇(摩尔比例)。

[0352] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％胆固醇(摩尔比例)。

[0353] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约44％胆固醇(摩尔比例)。

[0354] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ DSPC(摩尔比例)。

[0355] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ DSPC(摩尔比例)。

[0356] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约5％ DSPC(摩尔比例)。

[0357] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约7.5％ DSPC(摩尔比例)。

[0358] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约9％ DSPC(摩尔比例)。

[0359] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ PEG(摩尔比例)。

[0360] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ PEG(摩尔比例)。

[0361] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ cDSA-PEG(摩尔比
例)。

[0362] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:303或SEQ ID NO:303的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:304或SEQ ID NO:304的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ cDSA-PEG(摩尔比
例)。

[0363] 在本发明的多个其他方面中，各组分(化合物1、阳离子脂质、胆固醇、DSPC、PEG等)的任意所述含量都可以混合/匹配或合并，前提是其不互斥。

[0364] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的。

[0365] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0366] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0367] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0368] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0369] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约45％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0370] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0371] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0372] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0373] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0374] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约45％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0375] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％胆固醇(摩尔比例)。

[0376] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％胆固醇(摩尔比例)。

[0377] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％胆固醇(摩尔比例)。

[0378] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％胆固醇(摩尔比例)。

[0379] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约44％胆固醇(摩尔比例)。

[0380] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ DSPC(摩尔比例)。

[0381] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ DSPC(摩尔比例)。

[0382] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约5％ DSPC(摩尔比例)。

[0383] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约7.5％ DSPC(摩尔比例)。

[0384] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约9％ DSPC(摩尔比例)。

[0385] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ PEG(摩尔比例)。

[0386] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ PEG(摩尔比例)。

[0387] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ cDSA-PEG(摩尔比
例)。

[0388] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:300或SEQ ID NO:300的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:301或SEQ ID NO:301的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ cDSA-PEG(摩尔比
例)。

[0389] 在本发明的多个其他方面中，各组分(化合物1、阳离子脂质、胆固醇、DSPC、PEG等)的任意所述含量都可以混合/匹配或合并，前提是其不互斥。

[0390] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的。

[0391] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0392] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0393] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0394] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0395] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约45％化合物1(阳离子脂质)(摩尔比例)。

[0396] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0397] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0398] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0399] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0400] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约45％阳离子脂质(摩尔
比例)。

[0401] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约10％胆固醇(摩尔比例)。

[0402] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约20％胆固醇(摩尔比例)。

[0403] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约30％胆固醇(摩尔比例)。

[0404] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约40％胆固醇(摩尔比例)。

[0405] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约44％胆固醇(摩尔比例)。

[0406] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ DSPC(摩尔比例)。

[0407] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ DSPC(摩尔比例)。

[0408] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约5％ DSPC(摩尔比例)。

[0409] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约7.5％ DSPC(摩尔比例)。

[0410] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约9％ DSPC(摩尔比例)。

[0411] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ PEG(摩尔比例)。

[0412] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ PEG(摩尔比例)。

[0413] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约1％ cDSA-PEG(摩尔比
例)。

[0414] 在一个方面中，本发明涉及一种包含RNAi试剂的组合物，该RNAi试剂包含第一链和第二链，该第一链的序列是或包含SEQ ID NO:302或SEQ ID NO:302的nt 1-19的序列，和/或该第二链的序列是或包含SEQ ID NO:305或SEQ ID NO:305的nt 1-19的序列，该第一和/或第二链是经修饰的或未修饰的，该组合物还包含至少约2％ cDSA-PEG(摩尔比
例)。

[0415] 在本发明的多个其他方面中，各组分(化合物1、阳离子脂质、胆固醇、DSPC、PEG等)的任意所述含量都可以混合/匹配或合并，前提是其不互斥。

[0416] 其他药物组合物

[0417] 在多个方面中，该针对EPAS1的RNAi试剂以单一治疗的方式包装为递送囊泡，或者还可连接至一种或多种诊断化合物、报告基团、交联剂、赋予核酸酶耐受性的部分、天然或不常见的核碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂质、凝集素、类固醇、熊果醇、赫西配基(hecigenin)、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、菝葜皂苷元、无羁萜、表无羁萜醇衍生的胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖、支链淀粉、几丁质、壳聚糖、合成的碳水化合物、寡聚乳酸盐15聚体、天然的聚合物、低或中等分子量聚合物、菊糖、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白结合剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、多胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。

[0418] 本发明的RNAi试剂可制备于药物组合物中，该药物组合物包含适用于该RNAi试剂的特定给药方法的多种组分。

[0419] 具体方面

[0420] 在一个具体的方面中，本发明是包含一种或多种EPAS1 RNAi试剂的组合物。

[0421] 在多个方面中，本发明包括含有以下任意一种或多种物质的组合物：

[0422] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:39的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:58的序列。

[0423] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:40的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:59的序列。

[0424] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:41的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:60的序列。

[0425] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:42的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:61的序列。

[0426] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:43的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:62的序列。

[0427] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:44的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:63的序列。

[0428] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:45的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:64的序列。

[0429] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:46的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:65的序列。

[0430] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:47的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:66的序列。

[0431] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:67的序列。

[0432] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:67的序列，该第一和/或第二链的序列还包含3’末端双核苷酸。

[0433] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:67的序列，该第一和/或第二链
的序列还包含3’末端双核苷酸，该3’末端双核苷酸选自TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。

[0434] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:67的序列，该第一和/或第二链的序列还包含3’UU末端双核苷酸。

[0435] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:49的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:68的序列。

[0436] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:50的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:69的序列。

[0437] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:70的序列。

[0438] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:70的序列，该第一和/或第二链的序列还包含3’末端双核苷酸。

[0439] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:70的序列，该第一和/或第二链
的序列还包含3’末端双核苷酸，该3’末端双核苷酸选自TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。

[0440] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:70的序列，该第一和/或第二链的序列还包含3’UU末端双核苷酸。

[0441] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:52的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:71的序列。

[0442] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:53的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:72的序列。

[0443] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:54的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:73的序列。

[0444] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:55的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:74的序列。

[0445] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:56的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:75的序列。

[0446] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:57的序列，且该第二链的序列是SEQ ID NO:76的序列。

[0447] 在本文中提及某一RNAi(其中一条链的序列“是”所述SEQ ID NO的序列)时，表示一条链的序列“由所述SEQ ID NO的序列组成”。

[0448] 其他具体方面

[0449] 在一个具体的方面中，本发明是包含一种或多种EPAS1 RNAi试剂的组合物。

[0450] 在多个方面中，本发明包括含有以下任意一种或多种物质的组合物：

[0451] 其他具体方面

[0452] 在一个具体的方面中，本发明是包含一种或多种EPAS1 RNAi试剂的组合物。

[0453] 在多个方面中，本发明包括含有以下任意一种或多种物质的组合物：

[0454] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:39的序列。

[0455] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:40的序列。

[0456] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:41的序列。

[0457] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:42的序列。

[0458] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:43的序列。

[0459] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:44的序列。

[0460] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:45的序列。

[0461] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:46的序列。

[0462] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:47的序列。

[0463] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列。

[0464] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列，该链的序列还包含3’末端双核苷酸。

[0465] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列，该链的序列还包含3’末端双核苷酸，该3’末端双核苷酸选自TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。

[0466] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:48的序列，该链的序列还包含3’末端UU双核苷酸。

[0467] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:49的序列。

[0468] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:50的序列。

[0469] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列。

[0470] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列，该第一链的序列还包含3’末端双核苷酸。

[0471] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列，该链的序列还包含3’末端双核苷酸，该3’末端双核苷酸选自TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。

[0472] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:51的序列，该链的序列还包含3’UU末端双核苷酸。

[0473] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:52的序列。

[0474] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:53的序列。

[0475] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:54的序列。

[0476] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:55的序列。

[0477] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:56的序列。

[0478] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:57的序列。

[0479] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:58的序列。

[0480] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:59的序列。

[0481] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:60的序列。

[0482] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:61的序列。

[0483] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:62的序列。

[0484] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:63的序列。

[0485] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:64的序列。

[0486] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:65的序列。

[0487] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:66的序列。

[0488] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:67的序列。

[0489] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:67的序列，该链的序列还包含3’末端双核苷酸。

[0490] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:67的序列，该链的序列还包含3’末端双核苷酸，该3’末端双核苷酸选自TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。

[0491] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:67的序列，该链的序列还包含3’末端UU双核苷酸。

[0492] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:68的序列。

[0493] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:69的序列。

[0494] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:70的序列。

[0495] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:70的序列，该链的序列还包含3’末端双核苷酸。

[0496] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:70的序列，该链的序列还包含3’末端双核苷酸，该3’末端双核苷酸选自TT、UU、U(2'-OMe)dT、U(2'-OMe)U(2'-OMe)、T(2'-OMe)T(2'-OMe)、T(2'-OMe)dT、dTdT、sdT、dTsdT、sdTsdT和sdTdT。

[0497] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:70的序列，该链的序列还包含3’末端UU双核苷酸。

[0498] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:71的序列。

[0499] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:72的序列。

[0500] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:73的序列。

[0501] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:74的序列。

[0502] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:75的序列。

[0503] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列是SEQ ID NO:76的序列。

[0504] 在本文中提及某一RNAi(其中一条链的序列“是”所述SEQ ID NO的序列)时，表示一条链的序列“由所述SEQ ID NO的序列组成”。

[0505] 其他具体方面

[0506] 在多个方面中，本发明包括含有第一和第二链的RNAi试剂，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与本发明公开的任意一种或多种RNAi试剂的第一链相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与本发明公开
的任意一种或多种RNAi试剂的第二链相比具有0、1、2或3nt的差异)。

[0507] 在多个方面中，本发明包括含有以下任意一种或多种物质的组合物：

[0508] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:39的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:58的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0509] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:40的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:59的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0510] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:41的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:60的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0511] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:42的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:61的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0512] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:43的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:62的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0513] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:44的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:63的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0514] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:45的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:64的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0515] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:46的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:65的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0516] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:47的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:66的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0517] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:48的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:67的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0518] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:49的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:68的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0519] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:50的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:69的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0520] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:51的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:70的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0521] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:52的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:71的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0522] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:53的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:72的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0523] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:54的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:73的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0524] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:55的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:74的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0525] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:56的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:75的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0526] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:57的序列相比具有0、1、2或3nt的差异)，和/
或该第二链的序列包含至少15个连续核苷酸(其与SEQ ID NO:76的序列相比具有0、1、2
或3nt的差异)，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0527] 其他具体方面

[0528] 在多个方面中，本发明包括含有第一和第二链的RNAi试剂，该第一链的序列包含本发明公开的任意一种或多种RNAi试剂的第一链的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含本发明公开的任意一种或多种RNAi试剂的第二链的至少15个连续核苷酸。

[0529] 在多个方面中，本发明包括含有以下任意一种或多种物质的组合物：

[0530] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:39的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:58的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0531] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:40的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:59的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0532] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:41的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:60的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0533] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:42的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:61的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0534] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:43的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:62的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0535] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:44的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:63的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0536] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:45的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:64的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0537] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:46的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:65的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0538] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:47的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:66的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0539] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:48的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:67的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0540] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:49的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:68的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0541] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:50的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:69的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0542] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:51的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:70的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0543] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:52的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:71的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0544] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:53的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:72的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0545] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:54的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:73的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0546] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:55的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:74的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0547] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:56的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:75的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0548] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:57的序列的至少15个连续核苷酸，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:76的序列的至少15个连续核苷酸，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0549] 其他具体方面

[0550] 在一个具体的方面中，本发明是包含一种或多种EPAS1 RNAi试剂的组合物。

[0551] 在多个方面中，本发明包括含有以下任意一种或多种物质的组合物：

[0552] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:39的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:58的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0553] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:40的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:59的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0554] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:41的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:60的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0555] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:42的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:61的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0556] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:43的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:62的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0557] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:44的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:63的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0558] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:45的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:64的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0559] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:46的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:65的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0560] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:47的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:66的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0561] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:48的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:67的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0562] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:49的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:68的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0563] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:50的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:69的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0564] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:51的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:70的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0565] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:52的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:71的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0566] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:53的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:72的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0567] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:54的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:73的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0568] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:55的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:74的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0569] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:56的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:75的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0570] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:57的序列，和/或该第二链的序列包含SEQ ID NO:76的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0571] 其他具体方面

[0572] 在一个具体的方面中，本发明是包含一种或多种EPAS1 RNAi试剂的组合物。

[0573] 在多个方面中，本发明包括含有以下任意一种或多种物质的组合物：

[0574] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:39的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0575] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:40的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0576] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:41的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0577] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:42的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0578] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:43的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0579] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:44的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0580] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:45的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0581] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:46的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0582] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:47的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0583] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:48的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0584] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:49的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0585] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:50的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0586] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:51的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0587] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:52的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0588] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:53的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0589] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:54的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0590] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:55的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0591] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:56的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0592] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:57的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0593] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:58的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0594] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:59的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0595] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:60的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0596] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:61的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0597] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:62的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0598] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:63的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0599] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:64的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0600] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:65的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0601] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:66的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0602] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:67的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0603] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:68的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0604] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:69的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0605] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:70的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0606] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:71的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0607] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:72的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0608] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:73的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0609] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:74的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0610] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:75的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0611] 包含第一和第二链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该第一链的序列包含SEQ ID NO:76的序列，该第一和第二链的长度各自都不超过约30nt。

[0612] 其他具体方面

[0613] 在多个方面中，本发明包含一种含有正义和反义链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该反义链包含至少15个连续核苷酸(其与本发明公开的任何RNAi试剂的反
义链相比具有0、1、2或3nt的差异)，该反义链任选地还包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多个nt(或其中的任何范围，如0-1、1-2、1-3、1-4nt等)。

[0614] 在多个方面中，本发明包含一种含有正义和反义链的RNAi试剂或其经修饰或未修饰的变体，该反义链包含至少15个连续核苷酸(其与以下任意序列的反义链相比具有0、
1、2或3nt的差异：SEQ ID NO:40和59；SEQ ID NO:41和60；SEQ ID NO:42和61；SEQ ID NO:43和62；SEQ ID NO:44和63；SEQ ID NO:45和64；SEQ ID NO:46和65；SEQ ID NO:47和66；SEQ ID NO:48和67；SEQ ID NO:49和68；SEQ ID NO:50和69；SEQ ID NO:51和70；
SEQ ID NO:52和71；SEQ ID NO:53和72；SEQ ID NO:54和73；SEQ ID NO:55和74；SEQ ID NO:56和75；或SEQ ID NO:57和76)，该反义链任选地还包含0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多个nt(或其中的任何范围，如0-1、1-2、1-3、1-4nt等)。

[0615] 在一个方面中，本发明包括本文列举的任意一种或多种RNAi试剂。

[0616] 其他具体方面

[0617] 其他具体方面包括包含这些RNAi试剂中1、2、3、4或更多种的组合物。另一个方面是包含任何单个RNAi试剂以及与其重叠的任何其他RNAi试剂的组合物。另一个方面包括两种、三种、四种或更多种EPAS1 RNAi试剂，其不重叠并因此靶向RNA分子的不同部分。
在使用两种或多种RNAi试剂时，可同时或依次给药。

[0618] 另一个具体方面包括一种RNAi试剂，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该正义链包含(序列上与所列RNAi试剂中任一种的正义链)相同的至少15个连续核苷酸，该反义链包含(序列上与所列RNAi试剂中任一种的反义链)相同的至少15个连续核苷酸。在另
一个方面中，该组合物包含一种、两种、三种、四种或更多种这类RNAi试剂。

[0619] 在一个方面中，本发明包括一种含有反义链的RNAi试剂，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与本文所述RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个错配的差异。

[0620] 在一个方面中，本发明包括一种含有反义链的RNAi试剂，该反义链包含至少15个连续核苷酸，其与本文所述RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个错配的差异。

[0621] 在另一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该正义链包含至少15个连续核苷酸(其与列举的RNAi试剂之一的正义链相比具有0、1、2或3个错配的差异)，且该反义链包含至少15个连续核苷酸(其与列举的RNAi试剂之一的反
义链相比具有0、1、2或3个错配的差异)。

[0622] 本文中，“错配”被定义为当两条序列最大程度地比对和比较时碱基序列或长度之间的差异。作为非限制性示例，如果一条序列中特定位置处的碱基与另一条序列中相应位置处的碱基之间(例如给定的RNAi试剂的序列和本发明所列举的RNAi试剂之间)存在差异，则计为错配。因此，例如，当一条序列中的一个位置具有特定碱基(如A)，而其他序列上相应位置具有不同的碱基(如G、C或U)，则计为错配。例如，如果一条序列中某一位置上具有碱基(如A)，而其他序列上相应位置没有碱基(例如该位置是脱碱基核苷酸，其包
含磷酸-糖主链但不包含碱基)，则也计为错配。各链中(或在正义或反义链中)的单链
切口不计为错配。因此，作为非限制性示例，如果一条序列包含序列A-G但其他序列包含序列A-G(在A和G之间具有单链切口)，不计错配。碱基修饰也不认为是错配。如果一条序
列包含C且其他序列在相同位置处包含经修饰的C(如具有2'-修饰)，不计错配。因此，除碱基替代或变化以外的核苷酸修饰不构成错配。例如，核苷酸A和具有5’修饰(例如图1
所示的那些)和/或2’修饰的核苷酸A之间不存在错配。错配(碱基替代)的重要特征
是其不能够与相对链上的相应碱基进行碱基配对。此外，对错配计数时不计入末端突出端(如“UU”或“dTdT”)；计算“15个连续核苷酸”时也不包括末端“UU”和“dTdT”突出端。

[0623] 在这些方面中，错配被定义为一条序列的碱基与其他序列的碱基不匹配的位置。

[0624] 在另一个方面中，该组合物包含1、2、3、4或更多种这类RNAi试剂。

[0625] 在另一个方面中，该组合物包含RNAi试剂，该RNAi试剂包含正义链和反义链，该正义链包含至少15个连续核苷酸(其与列举的RNAi试剂之一的正义链相比具有0、1、2或3个错配的差异)，且该反义链包含至少15个连续核苷酸(其与列举的RNAi试剂之一的反
义链相比具有0、1、2或3个错配的差异)。

[0626] 重叠的EPAS1 siRNA组

[0627] 在多个方面中，本发明涉及具有重叠序列的RNAi试剂组。因此，本发明包括RNAi试剂组，组内的各RNAi试剂与同一组内的其他RNAi试剂彼此重叠至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或更多个核苷酸。具体而言，在一个方面中，该重叠是至少
12nt。表9显示了重叠的序列组(实施例6)，其中某一组的各成员与相同组的各其他成
员都重叠至少12nt。显示了正义链的重叠部分和反义链的重叠部分。因此，例如，3304和
3310共有以下共同技术特征：正义链中UCACUUUAUUAUC(SEQ ID NO:115)的序列和反义链
中GAUAAUAAAGUGA(SEQ ID NO:120)的序列。当然，应注意，多个组包含不同数目的重叠
siRNA；该组内的任意两条siRNA都重叠。因此，5057、5058和5059都彼此重叠，表示该组中的任意两条序列(5057和5059；或5058和5059；或5058和5059)共有正义和/或反义
链序列的重叠部分的技术特征。本发明因此包括重叠siRNA的任何对或组，其中所述对共有技术特征，即重叠的那部分正义和/或反义链，如表9所示。

[0628] 本发明因此包括多个方面，其包含重叠的RNAi试剂组，例如(1)包含5057和5059；或5058和5059；或5058和5059的序列的RNAi试剂(或任何其他重叠的RNAi试剂
对或组)；(2)由5057和5059；或5058和5059；或5058和5059的序列组成的RNAi试剂
(或任何其他重叠的RNAi试剂对或组)；(3)包含5057和5059；或5058和5059；或5058
和5059的序列的RNAi试剂(或任何其他重叠的RNAi试剂对或组)；(4)包含正义链和/
或反义链的RNAi试剂(或任何其他重叠的RNAi试剂对或组)，该正义链和/或反义链包
含5057和5059；或5058和5059；或5058和5059的序列；(5)包含正义链和/或反义链
的RNAi试剂(或任何其他重叠的RNAi试剂对或组)，该正义链和/或反义链包含15个连
续nt，其与5057和5059；或5058和5059；或5058和5059的序列相比具有0-3个错配的
差异；(6)包含正义链的RNAi试剂(或任何其他重叠的RNAi试剂对或组)，该正义链包含
15个连续nt，其与5057和5059；或5058和5059；或5058和5059的序列相比具有0-3个
错配的差异；(7)包含反义链的RNAi试剂(或任何其他重叠的RNAi试剂对或组)，该反义
链包含15个连续nt，其与5057和5059；或5058和5059；或5058和5059的序列相比具有
0-3个错配的差异；等。本发明还包括反映表9所述所有重叠的RNAi试剂组的类似方面。

[0629] 本发明公开了RNAi试剂的变体(例如包含不同修饰、帽等)，例如在各表中。提供了多种RNAi试剂的未修饰和示例性经修饰变体。本发明因此包括重叠的经修饰和/或未修饰的RNAi试剂组。更多的方面在本文中提供，并包含在本发明的各RNAi试剂的范围内。
实施例

[0630] 实施例1.生物信息学

[0631] 基于若干标准选择数百种针对EPAS1的RNAi试剂(siRNA)。一些标准(不是所有选择的序列都符合所有标准)包括：人/猕猴交叉反应性；BioPred；siRNA在nt 1处具
有U或A(但2802和3739起始于C)；siRNA不包含与已知人微小RNA的种子匹配(对于AS
链)；且序列不包含4个或更多个的重复。

[0632] 本发明公开了测试的最有效的RNAi试剂的选择，且其序列列于各表中。下文表2和3显示未修饰的RNA序列和RNAi试剂的DNA序列。

[0633] 术语“起始”指转录本上寡核苷酸(如19聚体)的起始位置。这在核苷酸坐标(nucleotide coordinates)中测量，相对于转录本的起点。

[0634] 表2.EPAS1 19聚体DNA序列

[0635]

[0636] 表3.EPAS1 RNAi试剂序列

[0637]所有这些序列都是智人(Homo sapiens)序列。

[0638] 如上文所述，EPAS1 RNAi试剂的选择标准之一是人和猕猴序列之间的交叉反应性。如果这些序列是交叉反应性的，则相同序列的相同RNAi试剂可用于猕猴和人实验。表
4显示多种EPAS1 RNAi试剂与小鼠(Mu)、大鼠(Ra)和猕猴(mmu或Macaca mulatta内皮
PAS结构域蛋白1，转录本变体3(EPASl)，mRNA)的交叉反应性。

[0639] 表4.EPAS1 RNAi试剂的交叉反应性

[0640]所有测试的双链体都具有智人("hs")序列，但对于其中一些，序列还与相应小鼠(Mu或mm，第二列)、大鼠(Ra或rrn，第三列)或猕猴(mmu或Macaca mulatta，第四列)序列匹配。
适当列和行中的“Y”表示该序列在人和所示动物之间匹配。在人和测试动物之间匹配的序列允许在动物和人测试中使用相同序列。

[0641] 本领域技术人员可以容易地设计表3中双链体的修饰。设计了这些双链体的示例性和非限制性修饰。这些修饰列于表3。考虑其他修饰。

[0642] 对于表5中列举的经修饰变体，一些修饰位于预测对内切核酸酶敏感的位点。一些修饰被设计为消除对siRNA的免疫应答同时保留活性。通常，正义链高度修饰，而反义链轻度修饰。一些修饰具有多个目的。表3列举了所制备的具有这些修饰的RNAi试剂。此外，提供了添加末端双核苷酸dTdT的修饰。

[0643] 表5(包括表5A至5E)列举了不同的RNAi试剂序列的经修饰变体组。

[0644] 表5.EPAS1 RNAi试剂(示例性经修饰变体)。

[0645] 表5A.EPAS1 RNAi试剂(示例性经修饰变体)。

[0646] 表5A列举了具有A51 S26修饰的示例性经修饰变体：

[0647] A51：在引导链中所有U为2'-OMe-U且所有C为2'-OMe-C，1、2和14位除外；3'突出端为2'-OMe-U 2'-OMe-U

[0648] S26：在正义链中所有U为2'-OMe-U且所有C为2'-OMe-C；3'突出端为2'-OMe-U2'-OMe-U

[0649] “G”、“C”、“A”、“T”和“U”分别各自通常代表含有鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶作为碱基的核苷酸。

[0650] 图1显示多个示例性经修饰的核苷酸，其已被用于或可被用于EPAS1 RNAi试剂的经修饰变体：U002、U003、U004、U005、C004、C005、A004、A005、G005和G004，其可用于本发明公开的RNAi试剂。U002表示2'-脱氧-胸苷，其是DNA。U003表示2'-脱氧-尿苷。
U004表示具有尿苷("U")碱基的核苷酸，该尿苷碱基具有2'-O-甲基修饰。U005表示具有
2'-O-甲氧基乙基(MOE)修饰的U碱基。C004表示具有2'-O-甲基修饰的胞苷("C")碱
基。C005表示具有2'-O-甲氧基乙基修饰的C碱基。A004表示具有2'-O-甲基修饰的腺
苷("A")碱基。A005表示具有2'-O-甲氧基乙基修饰的A碱基。G005表示具有2'-O-甲
基修饰的鸟苷("G")碱基。G004表示具有2'-O-甲基修饰G碱基。

[0651] “p”表示磷酸。

[0652]

[0653]

[0654]

[0655]

[0656]

[0657]

[0658]

[0659]

[0660]

[0661]

[0662]

[0663]

[0664]

[0665] 实施例2.siRNA的制备

[0666] 使用小规模合成来制备EPAS1 siRNA；也可使用中等和大规模合成来制备较大量的这些siRNA。

[0667] 用于初始筛选的小规模合成和纯化方法(1微摩尔规模)。

[0668] 使用小规模合成来生成siRNA。

[0669] 以1μmol的规模在MerMade 192合成仪(生物自动化公司(BioAutomation)，德克萨斯州皮亚诺)上合成EPAS1序列。

[0670] 在一些实验中，对于列表中的所有序列，如下文详述的那样施用‘内轻’化学：正义链中的所有嘧啶(胞嘧啶和尿嘧啶)都含有2'-O-甲基碱基(2'-O-甲基C和2'-O-甲基U)。在反义链中，与核糖A核苷相连(朝向5’位置)的嘧啶被其相应2-O-甲基核苷替代。

[0671] 在一些实验中，在正义和反义序列的3’端处导入双碱基dTdT延伸。

[0672] 将序列文件转换为文本文件以使其兼容于在MerMade 192合成软件上加载。

[0673] 合成、切割和去保护：

[0674] EPAS1序列的合成可使用固相支持的寡核苷酸合成(其使用亚磷酰胺化学法)。

[0675] 在96孔板中以1μΜ的规模进行上述序列的合成。以0.1M浓度制备核糖和2-O-甲基亚磷酰胺溶液并使用乙基硫四唑(ethyl thio tetrazole)(乙腈中0.6M)作为活
化剂。根据标准流程制备去封闭溶液、氧化剂溶液和加帽溶液。

[0676] 在96孔板中对合成的序列进行切割和去保护，其中在第一步中使用甲基胺溶液(水溶液和乙醇溶液的3:1混合物)并在第二步中使用氟试剂。使用丙酮:乙醇(80:20)
混合物沉淀粗序列并将团块重悬于0.02M乙酸钠缓冲液中。通过LC-MS分析来自各序列的
样品以确认相同性，通过UV进行定量并对选定的样品组进行IEX色谱以测定纯度。

[0677] 纯化和脱盐：

[0678] 使用Source 15Q柱在AKTA探测器纯化系统上纯化EPAS1序列。纯化期间维持65C的柱温度。在96孔(1.8mL深孔)板中进行样品注射和收集。在流出物中收集对应于全长
序列的单峰。使用AKTA纯化仪在Sephadex G25柱上对纯化的序列进行脱盐。使用260nm
波长处吸光度计算脱盐的EPAS 1序列的浓度，并通过离子交换色谱测量纯度。

[0679] 退火：

[0680] 等摩尔混合纯化的脱盐正义和反义单链并退火以形成EPAS1双链体。在1X PBS缓冲液以10μM浓度制备双链体并通过毛细凝胶电泳测量纯度。

[0681] 中等规模合成和合成(1-50μmol)

[0682] 还可使用中等规模合成来生成siRNA。

[0683] 使用ABI DNA/RNA合成仪394(应用生物系统公司(Applied Biosystems))和购自引物合成公司(Prime Synthesis)(宾夕法尼亚州阿斯顿)的可控多孔玻璃(CPG，500A，
80-100μmol/g加载)作为固体支持物，通过固相合成制备1-50μmol规模的单链RNA。对
于较大规模，使用来自格兰研究公司(Glen Research Corp.)的空合成柱(10μmol)和大
类星体(amidite)(80mL)和试剂瓶(450mL)。分别使用相应的亚磷酰胺和2’-O-甲基亚
磷酰胺(化学基因公司(ChemGenes)，马萨诸塞州威尔明顿)通过固相合成生成RNA和含
有2'-O-甲基核苷酸的RNA。使用标准核苷亚磷酰胺化学方法(如Current Protocols in
Nucleic Acid Chemistry(《新编核酸化学指南》)，Beaucage,S.L.等(编)，约翰威利父子出版社(John Wiley & Sons,Inc.)，美国纽约州纽约中所述)将这些结构模块在所选位点处整合至寡核糖核苷酸链的序列中。使用含0.1M DDTT(AM化学公司(AM Chemicals)，加利福尼亚州欧申赛德)的吡啶溶液导入硫代磷酸酯连接。其他辅助试剂获自格兰研究公司(维吉尼亚州斯特灵)。

[0684] 根据已建立的方法对粗寡核糖核苷酸通过阴离子交换HPLC进行纯化和去保护。在260nm波长处通过分光光度法测定产率和浓度。通过以所需浓度混合等摩尔的退火
缓冲液(通常是磷酸盐缓冲溶液，PBS，安碧公司(Ambion)，应用生物系统公司(Applied Biosystems)，德克萨斯州奥斯汀)中的互补链溶液来生成双链RNA。随后将混合物在水浴中85-90℃加热5分钟并在3-4小时的时间内冷却至室温。将RNA双链体在-20℃下储存
直至使用。

[0685] 实施例3.

[0686] 实施例3A.体外筛选的方法

[0687] 细胞培养和转染

[0688] 在一些实验中，786-O细胞在附加10％ FBS、链霉素和谷氨酰胺的DMEM中，在5％ CO2的气氛中在37℃下生长至接近融合，随后胰蛋白酶处理将细胞从烧瓶中释放。通过在384孔板的每个孔中添加15μl的Opti-MEM/siRNA双链体至77.5μl Opti-MEM加2.5μl
的脂质转染试剂RNAiMax(Lipofectamine RNAiMax)(英杰公司(Invitrogen)，加利福尼亚州卡尔斯巴德，货号13778-150)并在室温下孵育20分钟来进行反向转染。将15μl的该
3
复合物转移至另一384孔板中。随后添加2.0x10786-O细胞。将细胞孵育48小时，随后向
各孔中添加Bright-Glo。对于各EPAS1 siRNA，对于786-O细胞，单点实验使用6.5nM最终双链体浓度。在10nM至0.0006nM的浓度范围上测试6.5nM筛选中显示稳健沉默的siRNA
组以测定其IC50。

[0689] 测试了数百个EPAS1双链体(表6和未显示的数据)。这些双链体显示宽范围的RNAi活性，从较差至最佳。下文表6显示了一组19种EPAS1 RNAi试剂。使用本文所列举
的EPAS1 RNAi试剂的其他经修饰变体进行了额外的研究(数据未显示)。

[0690] 表6.EPAS1 RNAi试剂介导的KD(基因敲减)

[0691] 表6中使用的EPAS1 RNAi试剂是表5C中显示的经修饰变体。

[0692] 显示了786-O细胞中30nM、15nM和7.5nM下的残留基因活性和SD(标准差)以及HeLa细胞中6nM下的残留活性和SD。数字显示残留基因活性；因此，对于842，第2列显示在786-O细胞中的30nM下，存在16.8％的残留EPAS1基因活性(与对照相比)，或83.2％
基因敲减(基因活性降低)。

[0693] 表6EPAS1 RNAi试剂介导的KD(基因敲减)

[0694]

[0695]

[0696] 实施例4.786-O细胞中EPAS1 RNAi试剂的EC50(IC50)数据(报告试验)

[0697] 在设计、构建和筛选的数百个EPAS1双链体(实施例3和未显示的数据)中，选择了一组19个有效的EPAS1 RNAi试剂用于进一步研究，包括测定EC50。

[0698] 该筛选的目的是测定EC50(有效浓度50；或能够将荧光素酶信号降低50％的RNAi试剂的最小剂量)。术语IC50(抑制浓度)在本文中可与EC50互换使用。

[0699] 使用若干用于选择的标准，包括例如大于80％ KD(基因敲减)，但在某些情况下，特定的EPAS1 RNAi试剂不符合所有评估的条件。使用HRE-LUC报告基因构建786-O HRE细胞。在这些细胞中，荧光素酶(LUC)报告基因处于Hif应答元件(HRE)的控制下。

[0700] 此外，测试了RNAi试剂降低HRE-luc PEST但不影响UB6-luc Pest的能力。成功的siRNA候选物在定靶HRE-luc PEST试验和脱靶UB6-luc PEST试验之间具有超过100倍
的IC-50窗口。这表明这些siRNA序列不会在786-O细胞系中的翻译、转录和细胞生长方
面导致脱靶作用。

[0701] 为测定IC50，使用了连续稀释，包含10nM至0.0006nM之间的8种浓度。使用Lipofectamine RNAiMax 将siRNA双 链 体 转 染 至 细 胞 中 (Zhao等 2008 Mol.
Biotech.40:19-26)。

[0702] 表7A.EPAS1 RNAi试剂的IC50数据

[0703] 表7A显示多种EPAS1双链体的EC50(或IC50)。例如，在该表的第一排中，具有修饰组A85 S26的842在一个试验中显示0.093nM的IC50(3天后)。

[0704]位置_NM_001430 A85_S26_IC50nM_HRE
842 0.093
2802 0.38
3040 1.07
3304 0.43
3310 0.13
3345 0.12
3354 0.087
3735 0.102
3739 0.11
3875 0.042
4153 0.083
4157 0.104
5049 0.075
5057 0.107
5058 0.14
5059 0.186
5108 0.27
5144 0.085
5149 0.2

[0705] 表7B.EPAS1 RNAi试剂的IC50数据

[0706] 表7B显示使用具有A51 S53修饰组的EPAS1 RNAi试剂的IC50数据。在第2和第3列中，使用两种LNP制剂(脂质纳米颗粒制剂，命名为A和B)之一递送RNAi试剂，并
在第4列中，使用裸RNAi试剂。

[0707]

[0708] 成功的siRNA候选物在定靶HRE-luc PEST试验和脱靶UB6-luc PEST试验之间具有超过100倍的IC-50窗口。这表明这些siRNA序列不会在786-O细胞系中的翻译、转录
和细胞生长方面导致脱靶作用。

[0709] 实施例5.EPAS1 RNAi试剂的体内数据

[0710] 裸小鼠中EPAS1 RNAi试剂对于786-O肿瘤模型的效果。

[0711] 在裸小鼠中，针对786-O透明细胞肾细胞癌(CCRCC)肿瘤，在体内测试了脂质纳米颗粒中多种EPAS1 RNAi试剂的功效。下文表8中的数字显示敲减；例如“0.38”表示对照的38％。

[0712] 表8.裸小鼠中针对786-O肿瘤的EPAS1 RNAi试剂的功效

[0713]

[0714] 这些实验中的一些显示肿瘤体积减少，特别是在晚期阶段中(朝向实验终点)。

[0715] 在单独的体内测试实验中，在裸小鼠中针对786-O肿瘤测试了EPAS1 RNAi试剂5049、3875和3735。

[0716] 5049显示0.17(17％残留基因活性，或83％基因敲减)

[0717] 3875显示0.24(24％残留基因活性，或76％基因敲减)

[0718] 3735显示0.24(24％残留基因活性，或76％基因敲减)

[0719] 实施例6.重叠的RNAi试剂

[0720] 上文列举的一些siRNA在序列上彼此重叠。下表显示了对RNAi试剂组的汇编，其中某一组的各成员与相同组的各其他成员都重叠至少12nt。显示了正义链的12nt重叠
部分和反义链的12nt重叠部分，但在某些情况下重叠部分比12nt长。因此，3304和3310
共有以下共同技术特征：正义链中UCACUUUAUUAUC(SEQ ID NO:115)的序列和反义链中
GAUAAUAAAGUGA(SEQ ID NO:120)的序列。当然，应注意，多个组包含不同数目的重叠siRNA；
该组内的任意两条siRNA都重叠。因此，5057、5058和5059都彼此重叠，表示该组中的任意两条序列(5057和5059；或5058和5059；或5058和5059)共有正义和/或反义链序列的
重叠部分的技术特征。本发明因此包括重叠siRNA的任何对或组，其中所述对共有技术特征，即重叠的那部分正义和/或反义链，如表9所示。

[0721] 表9.重叠的siRNA

[0722]

[0723] 因此，在多个方面中，本发明涉及一组重叠的RNAi试剂，其包含或由以下RNAi试剂组成；或者其包含以下RNAi试剂的正义链或和反义链；或者其包含与以下RNAi试剂的正义和/或反义链相比具有0、1、2或3个错配的包含至少15的连续nt的正义链和/或反
义链：3304和3310；3735和3739；4153和4157；5057和5059；或5058和5059；或5058和
5059；或5144和5149中的任一组；以及其修饰体和变体；及其任何重叠的对或组。

[0724] 实施方式

[0725] 1.一种包含RNAi试剂的组合物，所述RNAi包含正义链和反义链，所述反义链包含至少15个连续核苷酸，其与表1至5中任一张提供的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0726] 2.如实施方式1所述的组合物，所述组合物还包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。

[0727] 3.如实施方式1所述的组合物，所述反义链的长度是约30个核苷酸或更短。

[0728] 4.如实施方式1所述的组合物，所述正义链和所述反义链形成长度约15至约30个核苷酸对的双链体区域。

[0729] 5.如实施方式1所述的组合物，所述反义链和所述正义链的长度均为约19至约23个核苷酸。

[0730] 6.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂包含修饰，所述修饰导致所述RNAi试剂在生物样品或环境中具有提高的稳定性。

[0731] 7.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂包含经修饰的糖主链，包括硫代磷酸酯连接，或包含2’-修饰的核苷酸。

[0732] 8.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂包含：

[0733] 至少一个5'-尿苷-腺苷-3'(5'-ua-3')双核苷酸，该尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-尿苷-鸟苷-3'(5'-ug-3')双核苷酸，该5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少
一个5'-胞苷-腺苷-3'(5'-ca-3')双核苷酸，该5'-胞苷是2'-修饰的核苷酸；或至少一
个5'-尿苷-尿苷-3'(5'-uu-3')双核苷酸，该5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸。

[0734] 9.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂包含选自下组的2'-修饰：2'-脱氧、2'-脱氧-2'-氟、2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基
(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、
2'-O-二甲基氨基乙基氧乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)。

[0735] 10.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂包含钝末端。

[0736] 11.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂包含具有1至4个未配对核苷酸的突出端。

[0737] 12.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂包含位于RNAi试剂反义链的3’端的突出端。

[0738] 13.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂连接至一种或多种诊断化合物、报告基团、交联剂、赋予核酸酶耐受性的部分、天然或不常见的核碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂质、凝集素、类固醇、熊果醇、赫西配基、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、菝葜皂苷元、无羁萜、表无羁萜醇衍生的胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖、支链淀粉、几丁质、壳聚糖、合成的碳水化合物、寡聚乳酸盐15聚体、天然的聚合物、低或中等分子量聚合物、菊糖、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白结合剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、多胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。

[0739] 14.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂能够在裸小鼠的786-O肿瘤中将EPAS1的表达抑制至少约50％。

[0740] 15.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂能够在体外的786-O细胞中以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约70％。

[0741] 16.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂能够在体外的786-O细胞中以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约80％。

[0742] 17.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi试剂能够在体外的786-O细胞中以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约90％。

[0743] 18.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi的EC50不超过约0.1nM。

[0744] 19.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi的EC50不超过约0.01nM。

[0745] 20.如实施方式1所述的组合物，所述RNAi的EC50不超过约0.001nM。

[0746] 21.一种包含RNAi试剂的组合物，所述RNAi包含正义链和反义链，所述正义链和反义链包含至少15个连续核苷酸，其与表1至5中任一张提供的针对EPAS1的RNAi试剂的正义和反义链相比分别具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0747] 22.如实施方式21所述的组合物，所述组合物包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。

[0748] 23.如实施方式21所述的组合物，所述反义链的长度是30个核苷酸或更短。

[0749] 24.如实施方式21所述的组合物，所述正义链和所述反义链形成长度15至30个核苷酸对的双链体区域。

[0750] 25.如实施方式21所述的组合物，所述反义链和所述正义链的长度均为19至23个核苷酸。

[0751] 26.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂包含修饰，所述修饰导致所述RNAi试剂在生物样品或环境中具有提高的稳定性。

[0752] 27.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂包含经修饰的糖主链，包括硫代磷酸酯连接，或包含2’-修饰的核苷酸。

[0753] 28.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂包含：

[0754] 至少一个5'-尿苷-腺苷-3'(5'-ua-3')双核苷酸，该尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少一个5'-尿苷-鸟苷-3'(5'-ug-3')双核苷酸，该5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸；至少
一个5'-胞苷-腺苷-3'(5'-ca-3')双核苷酸，该5'-胞苷是2'-修饰的核苷酸；或至少一
个5'-尿苷-尿苷-3'(5'-uu-3')双核苷酸，该5'-尿苷是2'-修饰的核苷酸。

[0755] 29.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂包含选自下组的2'-修饰：2'-脱氧、2'-脱氧-2'-氟、2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(2'-O-MOE)、2'-O-氨基丙基
(2'-O-AP)、2'-O-二甲基氨基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲基氨基丙基(2'-O-DMAP)、
2'-O-二甲基氨基乙基氧乙基(2'-O-DMAEOE)和2'-O-N-甲基乙酰氨基(2'-O-NMA)。

[0756] 30.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂包含钝末端。

[0757] 31.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂包含具有1至4个未配对核苷酸的突出端。

[0758] 32.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂包含位于RNAi试剂反义链的3’端的突出端。

[0759] 33.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂连接至一种或多种诊断化合物、报告基团、交联剂、赋予核酸酶耐受性的部分、天然或不常见的核碱基、亲脂性分子、胆固醇、脂质、凝集素、类固醇、熊果醇、赫西配基、薯蓣皂苷配基、萜、三萜、菝葜皂苷元、无羁萜、表无羁萜醇衍生的胆酸、维生素、碳水化合物、右旋糖、支链淀粉、几丁质、壳聚糖、合成的碳水化合物、寡聚乳酸盐15聚体、天然的聚合物、低或中等分子量聚合物、菊糖、环糊精、透明质酸、蛋白质、蛋白结合剂、整联蛋白靶向分子、聚阳离子、肽、多胺、肽模拟物和/或转铁蛋白。

[0760] 34.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂能够在裸小鼠的786-O肿瘤中将EPAS1的表达抑制至少约50％。

[0761] 35.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂能够在体外的786-O细胞中以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约70％。

[0762] 36.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂能够在体外的786-O细胞中以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约80％。

[0763] 37.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi试剂能够在体外的786-O细胞中以10nM的浓度将EPAS1的表达抑制至少约90％。

[0764] 38.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi的EC50不超过约0.1nM。

[0765] 39.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi的EC50不超过约0.01nM。

[0766] 40.如实施方式21所述的组合物，所述RNAi的EC50不超过约0.001nM。

[0767] 41.一种治疗个体中EPAS1相关疾病的方法，所述方法包括给予所述个体治疗有效量的包含RNAi试剂的组合物的步骤，所述RNAi试剂包含正义链和反义链，所述反义链包含至少15个连续核苷酸，其与表1至5中任一张提供的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链
相比分别具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0768] 42.如实施方式41所述的方法，所述EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病或类风湿性关节炎。

[0769] 43.如实施方式41所述的方法，所述EPAS1相关疾病是癌症。

[0770] 44.如实施方式41所述的方法，所述方法还包括给予附加治疗的步骤。

[0771] 45.如实施方式44所述的方法，所述包含RNAi试剂的组合物和所述附加治疗的给药是同时的、并行的、单独的或依次的。

[0772] 46.如实施方式41所述的方法，所述EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病或类风湿性关节炎。

[0773] 47.如实施方式41所述的方法，所述EPAS1相关疾病是癌症。

[0774] 48.如实施方式41所述的方法，所述方法还包括给予附加治疗的步骤。

[0775] 49.如实施方式41所述的方法，所述包含RNAi试剂的组合物和所述附加治疗的给药是同时的、并行的、单独的或依次的。

[0776] 50.如实施方式41所述的方法，所述EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病或类风湿性关节炎。

[0777] 51.如实施方式41所述的方法，所述EPAS1相关疾病是癌症。

[0778] 52.如实施方式41所述的方法，所述组合物包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。

[0779] 53.一种抑制个体中EPAS1表达的方法，所述方法包括给予所述个体治疗有效量的包含RNAi试剂的组合物的步骤，所述RNAi试剂包含正义链和反义链，所述反义链包含至少15个连续核苷酸，其与表1至5中任一张提供的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比
分别具有0、1、2或3个核苷酸的差异。

[0780] 54.如实施方式53所述的方法，所述个体患有或容易患有EPAS1相关疾病。

[0781] 55.如实施方式53所述的方法，所述EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病或类风湿性关节炎。

[0782] 56.如实施方式53所述的方法，所述EPAS1相关疾病是癌症。

[0783] 57.如实施方式53所述的方法，所述方法还包括给予其他疾病治疗的步骤。

[0784] 58.如实施方式53所述的方法，所述方法还包括给予其他疾病治疗的步骤，所述包含RNAi试剂的组合物和所述其他疾病治疗的给药是同时的、并行的、单独的或依次的。

[0785] 59.如实施方式53所述的方法，所述EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病或类风湿性关节炎。

[0786] 60.如实施方式53所述的方法，所述EPAS1相关疾病是癌症。

[0787] 61.如实施方式53所述的方法，所述方法还包括给予其他疾病治疗的步骤。

[0788] 62.如实施方式53所述的方法，所述方法还包括给予其他疾病治疗的步骤，所述包含RNAi试剂的组合物和所述其他疾病治疗的给药是同时的、并行的、单独的或依次的。

[0789] 63.如实施方式53所述的方法，所述EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病或类风湿性关节炎。

[0790] 64.如实施方式53所述的方法，所述EPAS1相关疾病是癌症。

[0791] 65.如实施方式53所述的方法，所述组合物还包含针对EPAS1的第二RNAi试剂。

[0792] 66.用于治疗个体中EPAS1相关疾病的方法中的实施方式1或实施方式21所述的组合物，所述方法包括给予所述个体治疗有效量的实施方式1或实施方式21所述的组合物的步骤。

[0793] 67.用于抑制个体中EPAS1表达的方法中的实施方式1或实施方式21所述的组合物，所述方法包括给予所述个体治疗有效量的实施方式1或实施方式21所述的组合物的步骤。

[0794] 68.实施方式1或实施方式21所述的组合物在制造用于治疗EPAS1相关疾病的药物中的应用。

[0795] 69.如实施方式68所述的应用，所述EPAS1相关疾病是：癌症、转移癌、星形细胞瘤、膀胱癌、乳腺癌、软骨肉瘤、结直肠癌、胃癌、成胶质细胞瘤、头颈鳞状细胞癌、肝细胞癌、肺腺癌、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、黑素瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、直肠癌、肾癌、透明细胞肾细胞癌(以及该癌症和其他癌症的转移癌)、牙龈炎、牛皮癣、卡波济氏肉瘤相关疱疹病毒、先兆子痫、炎症、慢性炎症、新生血管疾病或类风湿性关节炎。

[0796] 70.用于治疗EPAS1相关疾病的实施方式1或实施方式21所述的组合物。

[0797] 71.如实施方式70所述的应用，所述EPAS1相关疾病是癌症。

[0798] 72.一种抑制细胞中EPAS1表达的方法，所述方法包括将包含RNAi试剂的组合物导入所述细胞的步骤，所述RNAi试剂包含正义链和反义链，所述反义链包含至少15个连续核苷酸，其与表1至5中任一张提供的针对EPAS1的RNAi试剂的反义链相比分别具有0、1、
2或3个核苷酸的差异。

[0799] 73.如实施方式1所述的组合物，其中，所有嘧啶都是2'O-甲基修饰的核苷。

[0800] 74.如实施方式21所述的组合物，其中，所有嘧啶都是2'O-甲基修饰的核苷。

[0801] 除非另有定义，本文所用的技术和科学术语与本发明所属领域技术人员所通常理解的一致。

[0802] 除非另有说明，所有未具体详述的方法、步骤、技术和操作都可以且已经以本领域技术人员已知的方式进行。例如，再次参考本文提及的标准操作手册和通用背景技术并参考本文引用的其他参考文献。除非另有说明，各参考文献都通过引用全文纳入本文。

[0803] 本发明的权利要求是非限制性的并提供于下文。

[0804] 还应注意，当权利要求描述特定SEQ ID NO时，要求保护的所述序列的分子包括未修饰或被任何已知修饰所修饰的分子(例如具有或不具有2'-修饰、末端双核苷酸、3’端帽等)，除非权利要求另有说明。虽然已在本文中详细公开了特定方面和权利要求，但这应被理解为例如仅说明目的，而不是旨在限制所附权利要求的范围，或任何相应未来申请的权利要求主题的范围。具体而言，发明人考虑，可对本发明进行多种取代、变化和修改而不背离权利要求所限定的本发明的精神和范围。核酸起始材料、感兴趣的克隆或文库类型的选择被认为是具有本领域知识的本领域普通技术人员的常规行为。其他方面、优点和修改被认为在以下权利要求的范围内。本领域技术人员应了解或能够确定仅采用常规实验即可获得本文所述的本发明具体方面的许多等同形式。这类等同形式应包含在所附权利要求书的范围内。随后提交的相应申请中对权利要求范围的重拟可以是由于各国专利法的限制而不应被解释为放弃权利要求的主题。