嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏保护剂
专利汇可以提供嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏保护剂专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种浸矿 微 生物 嗜酸 氧 化亚 铁 硫杆菌(Acidithiobacillusferrooxidans)深低温冷冻保藏过程中的保护剂。其配方组成为100g/l～150g/l甘油、80g/l～120g/l海藻糖、160g/l～200g/l 蔗糖 、40g/l～60g/l二甲亚砜。该保护剂可以使冷冻嗜酸氧化亚铁硫杆菌的存活率最高达到89%，相比未加保护剂直接冷冻的对照的存活率(20%)高了4.5倍。，下面是嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏保护剂专利的具体信息内容。
技术领域：
本发明涉及一种浸矿微生物嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏过 程中保护剂。
背景技术：
冷冻保藏细菌是一种常规种保藏的方法，尽管目前发现某些 细菌本身就具有很好的抗冻能力，即使不添加任何保护剂细菌冷冻后也具有 很高的存活率，但是，众多研究表明，适当浓度的保护剂进入细胞内可避免 细胞膜的冷冻损伤，因此添加了保护剂的菌种冷冻后，其存活率一般都有较 大的提高。二甲亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)和甘油是冷冻保藏菌株最常 用的保护剂，例如美国典型菌种保藏中心(ATCC)常用一种由甘油(10％)、 DMSO(5％)和培养液制成的混合剂保存多数的细胞株。DMSO作为冷冻保护剂 其含量变化范围较广，从1％～32％都具有保护作用，采用DMSO保存病毒、乳 酸链球菌，均取得较好得保藏效果。甘油含量介于2％～55％对细菌都有保藏效 果，具体浓度因不同的细菌有所不同。此外，海藻糖和蔗糖也常用作冷冻保 护剂。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans，简称A.f菌， 以前被称作氧化亚铁硫杆菌)嗜酸好氧，是一种化能自养的革兰氏阴性菌， 以亚铁(Fe2+)、元素硫(S0)或金属硫化矿(S2-)作为能量来源，以空气中 的CO2为碳源，并吸收氮、磷等无机营养物质合成菌体细胞。在多种金属硫化 矿的生物冶金研究中，A.f菌被公认为是主要的浸矿菌种之一，国内外研究机 构一直在开展对该菌的研究和选育工作。获得具有优良性状的菌株之后，进 行对菌种资源的保藏工作是必不可少的。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌极端嗜酸自养，其特殊的生理特性使得单一地使用 以上任何一种冷冻保护剂都无法达到较好的保护效果。
发明内容：
为了提高嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏过程中的存活率， 本发明提供一种嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏保护剂。
嗜酸氧化亚铁硫杆菌冷冻保藏保护剂，由甘油、海藻糖、蔗糖和二甲 亚砜组成，含量为100g/L～150g/L甘油、80g/L～120g/L海藻糖、160g/L～ 200g/L蔗糖、40g/L～60g/L二甲亚砜。
采用本发明，可以使冷冻嗜酸氧化亚铁硫杆菌的存活率最高达到89％， 相比未加保护剂直接冷冻的对照的存活率(20％)高了4.5倍。
具体实施方式：
实施例1：
1.菌种的培养与收集
将嗜酸氧化亚铁硫杆菌CMS菌株培养至对数生长中期，过滤去除黄钾铁 钒，10000r/min离心20min收集菌体，用稀硫酸(pH＝2.0)清洗菌体2次。 10000r/min离心5min后弃上清，将菌泥用无菌水重悬，用血球计数板计数后 分装至1.5mL离心管(每支0.5mL)，10000r/min离心5min，弃上清，菌泥用 0.5mL保护剂悬浮平衡一段时间后，在液氮中速冻5min后转移至-70℃保存。
2.存活率的测定
在-70℃保藏48h后，室温放置2h，用血球计数板计数，存活率计算公式 如下：存活率(％)＝冻干后活菌数/冻干前活菌数×100％。
3.优化结果的验证
对不同配比的保护剂的保护效果的验证结果如下：
表1：不同配比的保护剂的保护效果
其中以甘油100g/L、海藻糖100g/L、蔗糖180g/L、二甲亚砜50g/L和甘 油100g/L、海藻糖80g/L、蔗糖180g/L、二甲亚砜50g/L分别为嗜酸氧化亚铁 硫杆菌冷冻保藏过程中保护能力最佳的保护剂配方，其存活率均可达89％。
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