一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉及其制备方法
阅读：1027发布：2020-12-24
专利汇可以提供一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供了一种 水 飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉及其制备方法，属于医药技术领域。所述水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉是由水飞蓟宾、磷脂、稳定剂和冻干保护剂组成，且产品制备工艺简单，易于操作；该纳米冻干粉复溶后粒径在50-500nm，分散均匀，药物溶出度高，并具有良好的保肝作用。，下面是一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，其特征在于，由以下组分制成，水飞蓟宾为
1.0重量份，磷脂为1.5-9.0重量份，稳定剂为0.3-6.0重量份，冻干保护剂为35.0-140.0重量份。
2.根据权利要求1所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，其特征在于，所述的纳米冻干粉复溶后的粒径为50-500nm。
3.根据权利要求1所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，其特征在于，所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻酰磷酰胆碱中的一种或几种组合。
4.根据权利要求1所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，其特征在于，所述稳定剂选自泊洛沙姆188、聚乙烯醇、吐温80、聚维酮K30和羟丙甲纤维素中的一种或几种组合。
5.根据权利要求1所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，其特征在于，所述冻干保护剂选自甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、山梨醇、羟基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙甲纤维素中的一种或几种组合。
6.一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)取适量的水飞蓟宾和磷脂加入乙醇中，加热溶解至澄清，旋转蒸发除去乙醇至干燥得到水飞蓟宾磷脂复合物；
2)取1)制备的水飞蓟宾磷脂复合物预分散于去离子水中；
3)取去离子水溶解稳定剂和冻干保护剂，与2)混合，并通过高压均质技术均质；
4)冷冻干燥得到水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉。
7.根据权利要求6所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤1)的加热溶解温度为40-80℃，旋转蒸发温度为40-80℃，真空度为0.05-0.1mbar。
8.根据权利要求6所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤2)的预分散采用的仪器是高速分散器，转速为8000-12000rpm/min，预分散时间为1-
5min；所述步骤3)的均质压力为50-1500bar，均质次数为2-10次。
9.根据权利要求6所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉的制备方法，其特征在于，所述步骤4)的冻干过程是：-60℃下预冻24h，并于-60℃，真空度0.1mbar条件下，冻干48h。
10.根据权利要求1-9所述制备的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，加生理盐水、或磷酸盐缓冲液、或5％葡萄糖溶液溶解，以静脉注射、或肌肉注射、或口服注射、或经皮给药方式，用于抗炎、抗氧化及毒物引起的肝脏损伤的治疗。
一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉及其制备方法，属于医药技术领域。
背景技术
[0003] 水飞蓟宾水中溶解度低、肝肠吸收差等缺点，限制了其生物活性的发挥。现有技术中，可将水飞蓟宾制备成可溶性盐、环糊精包合物、脂质体、磷脂复合物等。其中磷脂复合物因制备工艺简单，毒性低，易通过肝肠细胞膜，且稳定性好等优点，受到青睐，并已有产品上市。磷脂复合物是药物与磷脂分子通过电荷迁移作用形成的较为稳定的化合物或络合物；虽然并未改变药物的生物活性，但能显著改善药物脂溶性，促进药物吸收，提高药效的发挥。磷脂复合物的制备方法主要是两种有机溶剂的共溶剂法，如丙酮一正己烷共溶剂法。近年来乙醇蒸发法逐渐应用于磷脂复合物的制备，该方法操作简单，乙醇毒性低，安全性高，适合于工业化大生产。
[0004] 但是磷脂复合物的制备，仍不能显著改善药物的水中溶解度，因此大大限制了药物的溶出和药效的发挥。根据Ostwald-Freundlich公式可知，药物微粒的粒径大小影响药物溶解度，粒径越小溶解度越大，当微粒粒径达到纳米级时，可显著增加药物溶解度。纳米化技术主要有脂质体技术、纳米球囊技术、微乳技术、包合技术、纳米混悬技术。纳米混悬剂具有增加药物溶解度，胃肠道粘附强，促进吸收等优势，并且制备的制剂可口服、可注射，且其表面活性剂用量少，毒性小，制备工艺简单，易于工业化生产。纳米混悬剂的制备方法主要包括介质研磨法、结晶法、乳化法、高压均质法，以及高压均质联合结晶法或乳化法；其中，高压均质法操作简单，制备过程无有机溶剂涉入，且不存在研磨介质材料磨损导致产品污染等问题，适用于工业化大生产。
[0005] 中国专利CN102228430A中公开了一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米混悬剂及其制备方法，由于其制备过程复杂，选用的有机溶剂毒性较大等缺陷，因此仍需研制出一种新型水飞蓟宾制剂。在克服水飞蓟宾水溶性不足的基础上，简化制备工艺，降低毒性，并提高药物溶解度和促进药效发挥，而水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉正是这样一种具有应用价值的新型制剂。
发明内容
[0006] 本发明的目的在于提供一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉及其制备方法，以改善水飞蓟宾水溶性差的缺陷，并提高其药效。
[0007] 本发明采用的技术方案如下，一种水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，由以下组分制成：水飞蓟宾为1.0重量份，磷脂为1.5-9.0重量份，稳定剂为0.3-6.0重量份，冻干保护剂为35.0-140.0重量份；
[0008] 作为优选，所述的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉的平均粒径为50-500nm；
[0009] 作为优选，所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱和二肉豆蔻酰磷酰胆碱中的一种或几种组合；
[0012] 本发明的制备步骤如下：
[0013] 1)取适量的水飞蓟宾和磷脂加入到乙醇中，加热溶解至澄清，旋转蒸发除去乙醇至干燥得到水飞蓟宾磷脂复合物；
[0014] 2)取1)制备的水飞蓟宾磷脂复合物预分散于去离子水中；
[0015] 3)稳定剂和冻干保护剂用去离子水溶解，与2)混合，高压均质技术均质；
[0016] 4)冷冻干燥得到水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉；
[0018] 作为优选，所述步骤2)预分散采用的仪器是高速分散器，转速为8000-12000rpm/min，预分散时间为1-5min；
[0019] 作为优选，所述步骤3)均质压力为50-1500bar，均质次数为2-10次；
[0020] 作为优选，所述步骤4)冻干过程是：-60℃下预冻24h，然后在-60℃，真空度0.1mbar条件下，冻干48h；
[0021] 本发明经过筛选发现，将水飞蓟宾磷脂复合物制备成纳米冻干粉，具有良好的粒径分布和溶出速率，可供口服、注射和透皮给药方式用于抗炎、抗氧化及毒物引起的肝脏损伤的治疗。
[0022] 本发明具有以下优点：
[0023] 1.本发明的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉，制备工艺简单，制备过程所用有机溶剂毒性小，所得制剂安全有效，磷脂氧化少，成本较低，易于产业化。
[0025] 图1水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉复溶后的粒径分布图。
[0026] 图2水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉、水飞蓟宾磷脂复合物与辅料(稳定剂和冻干保护剂)物理混合物、水飞蓟宾与辅料物理混合物的溶出曲线。
[0027] 图3正常小鼠、肝损伤小鼠模型、水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉治疗后的肝损伤小鼠模型肝脏右叶同一位置切片图。具体实施方案
[0028] 下面通过具体实施例和附图，对本发明的技术方案作进一步具体的说明，但是本发明并不限于这些实施例
[0029] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉处方如下：
[0030] 水飞蓟宾140mg
[0031] 二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱260mg
[0032] 聚乙烯醇50mg
[0033] 甘露醇5g
[0034] 本实施例的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉制备方法如下：
[0035] 称取140mg水飞蓟宾、260mg二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱于20ml无水乙醇中，40℃充分溶解，并于同温度下旋转蒸发除去乙醇并干燥，得水飞蓟宾磷脂复合物；再加入50ml去离子水，12000rpm/min条件下高速预分散1min，得水飞蓟宾磷脂复合物溶液。
[0036] 称取50mg聚乙烯醇、5g甘露醇充分溶解于50ml去离子水中，并与水飞蓟宾磷脂复合物溶液充分混合，磁力搅拌5min，分别于50bar和100bar下各均质2次，再在1500bar下均质10次，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米溶液；而后将其-60℃下预冻24h，并于-60℃、真空度0.1mbar条件下冻干48h，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉。所得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉外形好，呈圆饼状，无萎缩和空洞现象，通过生理盐水、磷酸盐液、或5％葡萄糖溶液复溶后平均粒径为225.4nm，多分散指数PI为0.279。
[0037] 实施例2
[0038] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉处方如下：
[0039] 水飞蓟宾140mg
[0040] 蛋黄卵磷脂800mg
[0041] 泊洛沙姆188200mg
[0042] 甘露醇10g
[0043] 本实施例的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉制备方法如下：
[0044] 称取140mg水飞蓟宾、800mg蛋黄卵磷脂于20ml无水乙醇中，40℃充分溶解，并于同温度下旋转蒸发除去乙醇并干燥，得水飞蓟宾磷脂复合物；再加入50ml去离子水，12000rpm/min条件下高速预分散5min，得水飞蓟宾磷脂复合物溶液。
[0045] 称取200mg泊洛沙姆188、10g甘露醇充分溶解于50ml去离子水，并与水飞蓟宾磷脂复合物溶液充分混合，磁力搅拌5min，分别于50bar和100bar下各均质2次，再在500bar和1000bar下各均质3次，最后在1500bar下均质5次，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米溶液；而后将其于-60℃下预冻24h，并于-60℃、真空度0.1mbar条件下冻干48h，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉。所得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉外形好，呈圆饼状，无萎缩和空洞现象，通过生理盐水、磷酸盐液、或5％葡萄糖溶液复溶后的平均粒径为168.2nm(图1)，多分散指数PI为0.263。
[0046] 实施例3
[0047] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉处方如下：
[0048] 水飞蓟宾140mg
[0049] 大豆磷脂1.2g
[0050] 吐温80 800mg
[0051] 甘露醇20g
[0052] 本实施例的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉制备方法如下：
[0053] 称取140mg水飞蓟宾、1.2g大豆磷脂加入20ml无水乙醇，40℃充分溶解，并于同温度下旋转蒸发除去乙醇并干燥，得水飞蓟宾磷脂复合物；再加入50ml去离子水，8000rpm/min条件下高速预分散5min，得水飞蓟宾磷脂复合物溶液。
[0054] 称取800mg吐温80、20g甘露醇充分溶解于50ml去离子水，并与水飞蓟宾磷脂复合物溶液充分混合，磁力搅拌5min，分别于50bar和100bar下各均质2次，再500bar和1000bar下各均质3次，最后在1500bar下均质10次，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米溶液；而后将其-60℃下预冻24h，并于-60℃、真空度0.1mbar条件下冻干48h，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉。所得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉外形好，呈圆饼状，无萎缩和空洞现象，生理盐水、磷酸盐液、或5％葡萄糖溶液复溶后平均粒径为76.8nm，多分散指数PI为0.178。
[0055] 实施例4
[0056] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉处方如下：
[0057] 水飞蓟宾140mg
[0058] 二棕榈酰磷脂酰胆碱260mg
[0059] 羟丙甲纤维素100mg
[0060] 乳糖 5g
[0061] 本实施例的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉制备方法如下：
[0062] 称取140mg水飞蓟宾、260mg二棕榈酰磷脂酰胆碱于20ml无水乙醇中，50℃充分溶解，并于同温度下旋转蒸发除去乙醇并干燥，得水飞蓟宾磷脂复合物；再加入50ml去离子水，8000rpm/min条件下高速预分散1min，得水飞蓟宾磷脂复合物溶液。
[0063] 称取100mg羟丙甲纤维素、5g乳糖充分溶解于50ml去离子水，并与水飞蓟宾磷脂复合物溶液充分混合，磁力搅拌5min，分别于50bar和100bar下各均质2次，再500bar和1000bar下各均质5次，最后在1500bar下均质5次，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米溶液；而后将其-60℃下预冻24h，并于-60℃、真空度0.1mbar条件下冻干48h，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉。所得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉外形好，呈圆饼状，无萎缩和空洞现象，生理盐水、磷酸盐液、或5％葡萄糖溶液复溶后平均粒径为292.6nm，多分散指数PI为0.297。
[0064] 实施例5
[0065] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉处方如下：
[0066] 水飞蓟宾140mg
[0067] 二硬脂酰磷脂酰胆碱260mg
[0068] 聚维酮K30 400mg
[0069] 葡萄糖10g
[0070] 本实施例的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉制备方法如下。
[0071] 称取140mg水飞蓟宾、260mg二硬脂酰磷脂酰胆碱于50ml无水乙醇，50℃下充分溶解，并于同温度下旋转蒸发除去乙醇并干燥，得水飞蓟宾磷脂复合物；再加入50ml去离子水，12000rpm/min条件下高速预分散3min，得水飞蓟宾磷脂复合物溶液。
[0072] 称取400mg聚维酮K30、10g葡萄糖充分溶解于50ml去离子水，并于水飞蓟宾磷脂复合物溶液充分混合，磁力搅拌5min，分别于50bar和100bar下各均质2次，再在500bar和1000bar下各均质5次，最后在1500bar下均质10次，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米溶液；而后将其-60℃下预冻24h，并于-60℃、真空度0.1mbar条件下冻干48h，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉。所得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉外形好，呈圆饼状，无萎缩和空洞现象，生理盐水、磷酸盐液、或5％葡萄糖溶液复溶后平均粒径为478.8nm，多分散指数PI为0.285。
[0073] 实施例6
[0074] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉处方如下：
[0075] 水飞蓟宾140mg
[0076] 二棕榈酰磷脂酰胆碱260g
[0077] 泊洛沙姆188100mg
[0078] 蔗糖20g
[0079] 本实施例的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉制备方法如下。
[0080] 称取140mg水飞蓟宾、260mg二棕榈酰磷脂酰胆碱于50ml无水乙醇中，50℃下充分溶解，并于同温度下旋转蒸发除去乙醇并干燥，得水飞蓟宾磷脂复合物；再加入50ml去离子水，12000rpm/min条件下高速预分散3min，得水飞蓟宾磷脂复合物溶液。
[0081] 称取100mg泊洛沙姆188、20g蔗糖充分溶解于50ml去离子水，并与水飞蓟宾磷脂复合物溶液充分混合，磁力搅拌5min，分别于50bar和100bar下各均质2次，再500bar和1000bar下各均质5次，最后在1500bar下均质10次，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米溶液；而后将其-60℃下预冻24h，并于-60℃，真空度0.1mbar条件下冻干48h，得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉。所得水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉外形好，呈圆饼状，无萎缩和空洞现象，生理盐水、磷酸盐液、或5％葡萄糖溶液复溶后平均粒径为376.5nm，多分散指数PI为0.135。
[0082] 实施例7
[0083] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉体外溶出度研究
[0084] 将本发明实施例2的水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉、水飞蓟宾磷脂复合物与辅料(含等比例稳定剂和冻干保护剂)物理混合物、水飞蓟宾与辅料物理混合物进行体外溶出实验研究，不同时间点的样品经含量测定并计算累积溶出百分数。结果显示本发明水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉溶出速率明显高于其它两组(图2)。
[0085] 1.溶出度实验方法
[0086] 取水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉、水飞蓟宾磷脂复合物与辅料物理混合物、水飞蓟宾与辅料物理混合物各6份，每份相当于水飞蓟宾35mg，按2015版《中国药典》四部溶出度测定第二法(浆法)，以1000ml含0.5％吐温80水溶液为溶出介质，温度(37±0.5)℃，转速为100rpm/min，分别于5、10、20、30、45、60、80、120min取样20ml，并补充等量等温溶出介质，样品12000rpm/min离心5min，取上清HPLC检测。
[0087] 2.HPLC色谱条件色谱柱：汉邦Hedera ODS-2柱(250nm×4.6nm，5μm)；流动相：甲醇∶水∶冰醋酸(48∶52∶
1)；检测波长：288nm；流速：1ml/min；柱温：40℃；进样体积：20μl；
1)；检测波长：288nm；流速：1ml/min；柱温：40℃；进样体积：20μl；
[0088] 3.线性关系考察精密称取水飞蓟宾标准品适量，于50ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，得200μg/ml水飞蓟宾对照品储备液。分别精密量取储备液适量于10ml容量瓶中，甲醇稀释至刻度，得浓度分别为1、5、10、20、30、40、50μg/ml系列标准液，按上述方法测定，以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归，得回归方程A＝53397C-15556(R2＝0.9991)，表明水飞蓟宾在1-50μg/ml内峰面积与药物浓度呈良好的线性关系。
[0089] 实施例8
[0090] 水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉对四氯化碳损伤小鼠肝细胞修复作用的研究[0091] 购置雌雄各半小鼠(20-30g)9只，随机分为3组(n＝3)，实验前禁食12h，自由饮水，称重，根据重量计算灌胃体积(0.1ml/10g)。空白组连续6天灌胃生理盐水；毒性对照组连续6天灌胃生理盐水，并于第5天灌胃前腹腔注射0.1％四氯化碳溶液(0.1ml/10g)；治疗组连续6天灌胃水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉溶液(200mg/kg)，并于第5天灌胃前腹腔注射
0.1％四氯化碳溶液(0.1ml/10g)。并于最后一次给药24h后处死，取肝脏右叶同一部位0.3g于10％甲醛水溶液中固化，石蜡包埋切片和HE染色后在光学显微镜下观察(图3)。
0.1％四氯化碳溶液(0.1ml/10g)。并于最后一次给药24h后处死，取肝脏右叶同一部位0.3g于10％甲醛水溶液中固化，石蜡包埋切片和HE染色后在光学显微镜下观察(图3)。
[0092] 结果显示空白对照组小鼠肝组织正常；毒性对照组小鼠的肝内见局灶性脂肪变性；而治疗组小鼠肝细胞大部分恢复正常。表明水飞蓟宾磷脂复合物纳米冻干粉对四氯化碳诱导的肝脏损伤具有良好的治疗作用。
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