1.一种富集CD4+或CD8+T细胞的方法，所述方法包括：
(a)在封闭系统中进行第一选择，所述第一选择包括：从包含原代人T细胞的样品中针对(i)CD4+细胞和(ii)CD8+细胞之一进行富集，所述富集由此产生第一选择群和未选择的群；和
(b)在所述封闭系统中进行第二选择，所述第二选择包括：从所述未选择的群中针对(i)CD4+细胞和(ii)CD8+细胞中另一者进行富集，所述富集由此产生第二选择群，其中，所述方法产生富集的组合物，其针对CD4+细胞和CD8+细胞富集，并且包括第一选择群的细胞和第二选择群的细胞。
2.如权利要求1所述的方法，其还包括(c)将第一选择群的细胞和第二选择群的细胞合并，由此产生富集的组合物，和/或，其中所述富集的组合物中的CD4+和CD8+细胞以CD4+细胞与CD8+细胞的培养物起始比存在。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述合并在所述封闭系统中进行。
4.一种产生遗传工程改造的T细胞的方法，所述方法包括：
(a)在封闭系统中进行第一选择，所述第一选择包括：从包含原代人T细胞的样品中针对(i)CD4+细胞和(ii)CD8+细胞之一进行富集，所述富集由此产生第一选择群和未选择的群；和
(b)在所述封闭系统中进行第二选择，所述第二选择包括：从所述未选择的群中针对(i)CD4+细胞和(ii)CD8+细胞中另一者进行富集，所述富集由此产生第二选择群；
(c)在培养器皿中于刺激条件下，孵育培养起始组合物，其包含第一选择群的细胞和第二选择群的细胞，由此产生受激的细胞；和
(d)将遗传工程改造的抗原受体引入(c)中产生的受激的细胞，
其中，所述方法由此产生输出组合物，其包含表达所述遗传工程改造的抗原受体的CD8+T细胞和CD4+T细胞。
5.如权利要求4所述的方法，其还包括，在步骤(c)之前，将第一和第二选择的细胞群的细胞合并，以产生培养起始组合物，和/或，其中所述培养起始组合物中的CD4+和CD8+细胞以CD4+细胞与CD8+细胞的培养物起始比存在。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述合并在所述封闭系统中进行。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中，所述步骤中的一个或多个以自动化方式进行，和/或，其中所述封闭系统是自动化的。
8.如权利要求2-7中任一项所述的方法，其中，CD4+与CD8+细胞的培养物起始比介于是或约是10:1和是或约是1:10之间，介于是或约是5:1和是或约是1:5之间，或介于是或约是
2:1和是或约是1:2之间。
+ +
9.如权利要求2-8中任一项所述的方法，其中，CD4 与CD8细胞的培养物起始比是或约是1:1。
10.如权利要求2-6中任一项所述的方法，其中所述样品获自人对象，并且：
CD4+与CD8+细胞的培养物起始比不同于来自所述对象的样品中的CD4+与CD8+细胞之比；
和/或
CD4+与CD8+细胞的培养物起始比比来自所述对象的样品中的CD4+与CD8+细胞之比大或小至少10％、至少20％、至少30％、至少40％，或至少50％。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，在第一和/或第二选择中富集细胞包括：基于细胞表面标志物的表达进行正选择或负选择。
12.如权利要求11所述的方法，其中，在第一和/或第二选择富集细胞包括：负选择，其包括消耗表达非T细胞表面标志物的细胞。
13.如权利要求12所述的方法，其中，所述非T细胞标志物包括CD14。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，第一或第二选择中的富集细胞包括：
基于一种或多种细胞表面标志物的表达，进行多个正或负选择步骤，以针对CD4+或CD8+细胞进行富集。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，在第一和/或第二选择中富集细胞包括：基于免疫亲和性的选择。
16.如权利要求15所述的方法，其中，所述基于免疫亲和性的选择通过如下方式进行：
使细胞与能够特异性结合至细胞表面标志物的抗体接触，和，回收结合至所述抗体的细胞，由此进行正选择，或回收未结合至所述抗体的细胞，由此进行负选择，其中，回收的细胞富集CD4+细胞或CD8+细胞，并且抗体是固定在磁性颗粒上的。
17.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中，第一选择和第二选择在分开的分离器皿中进行，其经操作性地连接。
18.如权利要求17所述的方法，其中，所述分离器皿通过管道操作性地连接。
19.如权利要求15-18中任一项所述的方法，其中，基于免疫亲和性的选择通过如下方式进行：使细胞与固定在色谱基质上或附至亲和色谱基质的抗体接触，所述抗体能够特异性结合至细胞表面标志物，以进行针对CD4+或CD8+细胞的正或负选择。
20.如权利要求19所述的方法，其中：
所述抗体还包括一种或多种结合伴侣，其能够与固定在所述基质上的结合试剂形成可逆键，由此，所述抗体在所述接触过程中可逆结合至所述基质；和
通过破坏所述结合试剂和结合伴侣之间的可逆结合，能够从所述基质回收细胞，所述细胞表达被所述基质上的所述抗体特异性结合的细胞表面标志物。
21.如权利要求17所述的方法，其中：
所述结合伴侣选自：生物素、生物素类似物，和能够结合至所述结合试剂的肽；和所述结合试剂选自：链霉亲和素、链霉亲和素类似物或突变蛋白、抗生物素蛋白和抗生物素蛋白类似物或突变蛋白。
22.如权利要求21所述的方法，其中：
所述结合伴侣包括SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；和/或
所述结合试剂是链霉亲和素突变蛋白，其包括SEQ ID NO:12、13、15或16所示的氨基酸序列。
23.如权利要求19-21中任一项所述的方法，其还包括，在第一选择和/或第二选择中，在使所述样品中的细胞与亲和色谱基质接触之后，施加竞争试剂，以破坏所述结合伴侣和结合试剂之间的键，由此从所述基质回收选择的细胞。
24.如权利要求23所述的方法，其中，所述竞争试剂是生物素或生物素类似物。
25.如权利要求20-24中任一项所述的方法，其中，所述第一和/或第二选择中的一种或多种抗体的与所述细胞表面标志物结合的解离速率常数(koff)大于或约大于3x10-5/秒。
26.如权利要求20-25中任一项所述的方法，其中，所述第一和/或第二选择中的一种或多种抗体对于细胞表面标志物的亲和性的解离常数(Kd)在约10-3-10-7范围内或在约10-7-约10-10范围内。
27.如权利要求20-26中任一项所述的方法，其中第一和/或第二选择的色谱基质在分离器皿中填充，所述分离器皿是柱。
28.如权利要求19-27所述的方法，其中，所述亲和色谱基质吸附和/或能够选择至少或至少约50x106细胞/mL，100x106细胞/mL，200x106细胞/mL或400x106细胞/mL。
29.如权利要求19-28中任一项所述的方法，其中，第一和第二选择步骤包括：使用所述亲和色谱基质，并且，用于第一和第二选择步骤的基质处于足以实现所述培养物起始比的相对量。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中，针对CD4+细胞进行富集包括：基于CD4的表面表达进行正选择。
31.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中，针对CD8+细胞进行富集包括：基于CD8的表面表达进行正选择。
32.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中包括针对CD8+细胞进行富集的第一和第二选择还包括针对中心记忆T(TCM)细胞进行富集；和/或富集针对表达选自CD28、CD62L、CCR7、CD127和CD27的标志物的细胞进行富集。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中：
第一选择包括针对CD8+细胞进行富集且第二选择包括针对CD4+细胞进行富集；和第一选择还包括针对中心记忆T(TCM)细胞进行富集和/或针对表达选自CD28、CD62L、CCR7、CD127和CD27的标志物的细胞进行富集。
34.如权利要求32或权利要求33或权利要求35所述的方法，其中，针对中心记忆T(TCM)细胞进行富集和/或针对表达所述标志物的细胞进行富集包括：
从针对CD8+细胞进行富集的第一和/或第二选择细胞群选择表达CD62L的细胞；和/或从针对CD8+细胞进行富集的第一和/或第二选择细胞选择表达CD27的细胞；和/或从针对CD8+细胞进行富集的第一和/或第二选择细胞群选择表达CCR7的细胞；和/或从针对CD8+细胞进行富集的第一和/或第二选择细胞群选择表达CD28的细胞；和/或从针对CD8+细胞进行富集的第一和/或第二选择细胞群选择表达CD127的细胞。
35.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中：
第一选择包括针对CD4+细胞进行富集且第二选择包括针对CD8+细胞进行富集；和第二选择还包括针对中心记忆T(TCM)细胞进行富集。
36.如权利要求35所述的方法，其中：
+
(i)第一选择包括：基于CD4的表面表达通过正选择富集CD4细胞，由此产生第一选择群，其针对CD4+原代人T细胞进行富集，和所述非选择的样品；
(ii)第二选择包括：针对CD8+细胞进行富集，并且还包括针对中心记忆T(TCM)细胞对第二选择的样品进行富集，其中，针对中心记忆T(TCM)细胞进行富集包括：
负选择以消耗细胞，该细胞表达在原初T细胞上存在的表面标志物，和对表达存在于中心记忆T(TCM)细胞上但不存在于另一记忆T细胞亚群上的表面标志物的细胞进行正选择；或对表达存在于中心记忆T细胞上但不存在于原初T细胞上的表面标志物的细胞进行正选择，和，对表达存在于中心记忆T(TCM)细胞上但不存在于另一记忆T细胞亚群上的表面标志物的细胞进行正选择；
由此产生针对TCM细胞富集的CD8+原代人T细胞。
37.如权利要求36所述的方法，其中：
原初T细胞上存在的标志物包括CD45RA；和
针对中心记忆T(TCM)细胞进行富集包括：负选择以消耗表达CD45RA的细胞，和，针对表达存在于中心记忆T(TCM)细胞上但不存在于另一记忆T细胞亚群上的表面标志物的细胞进行正选择。
38.如权利要求37所述的方法，其中：
所述存在于中心记忆T细胞上但不存在于原初T细胞上的表面标志物包括CD45RO；
针对中心记忆T(TCM)细胞的富集包括：针对表达CD45RO的细胞进行正选择，和，针对表达存在于中心记忆T(TCM)细胞上但不存在于另一记忆T细胞亚群上的表面标志物的细胞进行正选择。
39.如权利要求36-38中任一项所述的方法，其中，存在于中心记忆T(TCM)细胞表面上但不存在于另一记忆T细胞亚群的上的表面标志物选自下组：CD62L，CCR7，CD27，CD127，和CD44。
40.如权利要求39所述的方法，其中，存在于中心记忆T(TCM)细胞表面上但不存在于另一记忆T细胞亚群的上的表面标志物是CD62L。
41.如权利要求32-40中任一项所述的方法，其中，富集的组合物或培养起始组合物中的CD8+群包括：至少50％中心记忆T(TCM)细胞或包括少于20％的原初T(TN)细胞或包括至少
80％CD62L+细胞。
42.一种富集CD4+和CD8+T细胞的方法，所述方法包括：在孵育组合物中，于一定条件下，使包含原代人T细胞的样品的细胞与特异性结合至CD4的第一免疫亲和试剂和特异性结合至CD8的第二免疫亲和试剂接触，由此，所述免疫亲和试剂分别特异性结合至所述样品中的细胞表面上的CD4和CD8分子；和
回收结合至第一和/或第二免疫亲和试剂的细胞，由此产生富集的组合物，其以培养物起始比包括CD4+细胞和CD8+细胞，其中：
第一和/或第二免疫亲和试剂在所述孵育组合物中以次优产出浓度存在，由此，所述富集的组合物包含所述孵育组合物中少于70％的总CD4+细胞和/或所述孵育组合物中少于
70％的CD8+细胞，由此产生富集CD4+和CD8+T细胞的组合物。
43.一种产生遗传工程改造的T细胞的方法，所述方法包括：
(a)从包含原代人T细胞的样品中针对原代人T细胞进行富集，包括：
在孵育组合物中，于一定条件下，使所述样品的细胞与特异性结合至CD4的第一免疫亲和试剂和特异性结合至CD8的第二免疫亲和试剂接触，由此，所述免疫亲和试剂分别特异性结合至所述样品中的细胞表面上的CD4和CD8分子；和
回收结合至第一和/或第二免疫亲和试剂的细胞，由此产生富集的组合物，其以培养物+ +
起始比包括CD4细胞和CD8细胞，其中：
第一和/或第二免疫亲和试剂在所述孵育组合物中以次优产出浓度存在，由此，所述富集的组合物包含所述孵育组合物中少于70％的总CD4+细胞和/或所述孵育组合物中少于
70％的CD8+细胞；和
(b)在刺激条件下，在培养器皿内的培养起始组合物中，孵育所述富集的组合物的细胞，由此产生受激的细胞，其中，所述细胞处于或基本处于所述培养物起始比；和(c)将遗传工程改造的抗原受体引入(b)的受激的细胞，由此产生输出组合物，其包括表达所述遗传工程改造的抗原受体的CD8+T细胞和CD4+T细胞。
44.如权利要求42或权利要求43所述的方法，其中，针对原代人T细胞的富集在封闭系统中进行。
45.如权利要求42-44中任一项所述的方法，其中，第一和第二免疫亲和试剂在所述孵育组合物中以次优产出浓度存在，由此，所述富集的组合物包含所述孵育组合物中的少于
70％的总CD4+细胞和所述孵育组合物中的少于70％的总CD8+细胞。
46.如权利要求42-45中任一项所述的方法，其中：
第一免疫亲和试剂以次优产出浓度存在于所述孵育组合物中，由此，富集的组合物包含少于60％，少于50％，少于40％，少于30％或少于20％的所述孵育组合物中的总CD4+细胞；和/或
第二免疫亲和试剂以次优产出浓度存在于所述孵育组合物中，由此，所述富集的组合+
物包含少于60％，少于50％，少于40％，少于30％或少于20％的所述孵育组合物中的总CD8细胞。
47.如权利要求42-46中任一权利要求所述的方法，其中，所述样品包含至少1x109CD3+T细胞。
48.如权利要求42-47中任一项所述的方法，其中，在所述孵育组合物中，第一和第二免疫亲和试剂之一的浓度大于另一者的浓度，由此该较大浓度分别实现所述富集的组合物中CD4+细胞或CD8+细胞相比于CD4+或CD8+细胞的另一者的较高产量，由此在所述富集的组合物中产生培养物起始比。
49.如权利要求48所述的方法，其中：
第一和第二免疫亲和试剂之一的浓度比第一和第二免疫亲和试剂中另一者的浓度大至少1.2倍，1.4倍，1.6倍，1.8倍，2.0倍，3.0倍，4.0倍，5.0倍，6.0倍，7.0倍，8.0倍，9.0倍或
10倍；和/或
富集的浓度中的较高产量是高1.2倍，1.4倍，1.6倍，1.8倍，2.0倍，3.0倍，4.0倍，5.0倍，6.0倍，7.0倍，8.0倍，9.0倍或10倍。
50.如权利要求42-49中任一项所述的方法，其中，CD4+与CD8+细胞的培养物起始比介于是或约是10:1和是或约是1:10之间，介于是或约是5:1和是或约是1:5之间或介于是或约是
2:1和是或约是1:2之间。
+ +
51.如权利要求42-50中任一项所述的方法，其中，CD4与CD8细胞的培养物起始比是或约是1:1。
52.如权利要求42-51中任一项所述的方法，其中：
CD4+与CD8+细胞的培养物起始比不同于来自所述对象的样品中的CD4+与CD8+细胞之比；
和/或
CD4+与CD8+细胞的培养物起始比相比来自所述对象的样品中的CD4+与CD8+细胞之比大或小至少10％、至少20％、至少30％、至少40％，或至少50％。
53.如权利要求42-52中任一项所述的方法，其中，所述培养起始组合物中大于95％或大于98％的细胞是CD4+细胞和CD8+细胞。
54.如权利要求42-53中任一项所述的方法，其中，所述免疫亲和试剂各自包含抗体。
55.如权利要求54所述的方法，其中，所述抗体固定在球的外表面上。
56.如权利要求55所述的方法，其中，所述球是磁珠。
57.如权利要求55或56所述的方法，其中：
所述抗体包含一种或多种结合伴侣，其能够与固定在所述球上的结合试剂形成可逆键，由此，所述抗体可逆地固定至所述球；和
所述方法还包括：在使所述样品中的细胞与第一和第二免疫亲和试剂接触之后，施加竞争试剂，以破坏所述结合伴侣和结合试剂之间的键，由此从所述球回收选择细胞。
58.如权利要求57所述的方法，其中：
所述结合伴侣选自：生物素、生物素类似物，或能够结合至所述结合试剂的肽；和所述结合试剂选自：链霉亲和素、链霉亲和素类似物或突变蛋白，抗生物素蛋白，抗生物素蛋白类似物或突变蛋白。
59.如权利要求58所述的方法，其中：
所述结合伴侣包括含有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的肽，和/或
所述结合试剂是链霉亲和素突变蛋白，其包括SEQ ID NO:12、13、15或16所示的氨基酸序列。
60.如权利要求58或59所述的方法，其中：
所述结合试剂是包括链霉亲和素或链霉亲和素突变蛋白的一种或多种单体的多聚体；
和
所述结合伴侣是肽，其包括至少两种模块的依次排列，所述至少两种模块各能够可逆结合所述结合试剂的至少一种单体。
61.如权利要求60所述的方法，其中，所述结合伴侣包含SEQ ID NO:7-10中任一项所示的氨基酸序列。
62.如权利要求57-61中任一项所述的方法，其中，所述竞争试剂是生物素或生物素类似物。
63.如权利要求42-63中任一项所述的方法，其中，所述第一和/或第二选择中的一种或多种抗体的所述抗体和细胞表面标志物之间的结合的解离速率常数(koff)是大于或约大于
3x10-5/秒。
64.如权利要求42-63中任一项所述的方法，其中，所述第一和/或第二选择中的一种或多种抗体的亲和性具有约10-3-10-7范围内的解离常数(Kd)或具有约10-7-约10-10范围内的解离常数。
65.如权利要求42-63中任一项所述的方法，其中，所述一个或多个步骤以自动化方式进行，和/或，其中所述封闭系统是自动化的。
66.如权利要求2、3和5-41中任一项所述的方法，其包括：
+ +
在进行第一选择和/或第二选择之前，确定所述样品中CD4与CD8T细胞的比率；和基于所述样品中的CD4+与CD8+T细胞的比率，调节第一和/或第二选择，以产生以所述培养物起始比包括CD4+细胞和CD8+细胞的组合物。
67.如权利要求66所述的方法，其中：
第一和/或第二选择包括基于免疫亲和性的选择包括亲和色谱基质；和
调节第一和/或第二选择包括：选择第一和/或第二选择中足以实现所述培养物起始比的亲和色谱基质的量。
68.如权利要求42-65中任一项所述的方法，其包括：
在使所述样品的细胞与第一和第二免疫亲和试剂接触之前，确定所述样品中CD4+与CD8+T细胞的比率；和
+ +
基于所述样品中CD4与CD8T细胞的比率，选择第一和/或第二免疫亲和试剂的浓度，以产生所述富集的组合物，其以所述培养物起始比包括CD4+细胞和CD8+细胞。
69.如权利要求1-68中任一项所述的方法，其中，所述方法获得包括CD4+与CD8+细胞之比的输出组合物，所述CD4+与CD8+细胞之比介于是或约是2:1和是或约是1:5之间。
+ +
70.如权利要求69所述的方法，其中，所述输出组合物中的CD4 与CD8细胞之比是1:1或约是1:1。
71.如权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述样品获自对象。
72.如权利要求71所述的方法，其中，所述对象是将向其给予所述遗传工程改造的T细胞或用于过继细胞治疗的细胞的对象。
73.如权利要求72所述的方法，其中，所述对象不是将向其给予所述遗传工程改造的T细胞或用于过继细胞治疗的细胞的对象。
74.如权利要求1-73中任一项所述的方法，其中所述样品是血液或血液源性的样品。
75.如权利要求1-74中任一项所述的方法，其中所述样品是血液白细胞样品。
76.如权利要求1-75中任一项所述的方法，其中所述样品是单采、外周血单核细胞(PBMC)，或白细胞去除术样品。
77.如权利要求4-41或43-76中任一项所述的方法，其中，在培养器皿中于刺激条件下对该组合物的孵育在引入遗传工程改造的抗原受体之前、过程中和/或之后进行。
78.如权利要求4-41或43-76中任一项所述的方法，其中，在培养器皿中于刺激条件下对该组合物的孵育在引入遗传工程改造的抗原受体之前、过程中和之后进行。
79.如权利要求4-41或43-78中任一项所述的方法，其中，所述刺激条件包括使所述组合物的T细胞增殖的条件。
80.如权利要求4-41或43-79中任一项所述的方法，其中，所述刺激条件包括试剂，所述试剂能够活化TCR复合物的一种或多种组分的一种或多种胞内信号转导结构域。
81.如权利要求80所述的方法，其中，所述TCR复合物的一种或多种组分包括CD3ζ链。
82.如权利要求4-41或43-81中任一项所述的方法，其中，所述刺激条件包括存在抗CD3抗体，和抗CD28抗体，抗4-1BB抗体，和/或细胞因子。
83.如权利要求82所述的方法，其中，所述抗CD3抗体和/或所述抗CD28抗体存在于固体支持物的表面上。
84.如权利要求83所述的方法，其中，所述细胞因子包括IL-2，IL-15，IL-7，和/或IL-
21。
85.如权利要求4-41或43-84中任一项所述的方法，其中，所述遗传工程改造的抗原受体包括T细胞受体(TCR)或功能性非TCR抗原受体。
86.如权利要求85所述的方法，其中，所述受体特异性结合至由待治疗的疾病或病症的细胞表达的抗原。
87.如权利要求85或86中任一项所述的方法，其中，所述抗原受体是嵌合抗原受体(CAR)。
88.如权利要求87所述的方法，其中，所述CAR包含：胞外抗原-识别结构域和包括含ITAM的序列的胞内信号转导结构域和T细胞共刺激分子的胞内信号转导结构域。
89.一种治疗方法，所述方法包括：
+ +
(a)产生输出组合物，其包括根据权利要求1-88中任一项所述的CD4T细胞和CD8T细胞；和
(b)给予所述输出组合物的细胞至对象。
90.如权利要求89所述的方法，其中，从中分离所述细胞的样品源自给予所述细胞的对象。
91.一种通过如权利要求1-88中任一项所述的方法产生的细胞组合物。
92.如权利要求91所述的组合物，其包含药学上可接受的运载体。
93.一种处理方法，所述方法包括：给予对象如权利要求91或92所述的细胞组合物。
94.如权利要求93所述的方法，其中，所述遗传工程改造的抗原受体特异性结合至与所述疾病或病症相关联的抗原。
95.如权利要求94所述的处理方法，其中，所述疾病或病症是癌症。
96.如权利要求91或权利要求92所述的组合物，其用于治疗对象中的疾病或病症。
97.如权利要求91或权利要求92所述的组合物在制备用于治疗对象中的疾病或紊乱的药物中的应用。
98.如权利要求96所述的组合物或如权利要求97所述的应用，其中，所述遗传工程改造的抗原受体特异性结合至与所述疾病或病症相关联的抗原。
99.如权利要求96-98中任一项所述的组合物或应用，其中，所述疾病或病症是癌症。
100.一种用于纯化靶细胞的封闭设备系统，其包括：
a)包含固定于其上的第一结合试剂的第一亲和色谱基质，所述结合试剂特异性结合至存在于第一细胞类型上的第一细胞表面标志物；所述第一亲和基质不包含特异性结合至第二细胞表面标志物的第二结合试剂，其中：
第一亲和色谱基质通过第一操作性连接操作性地连接至包含细胞样品的贮存储器，所述第一操作性连接能够允许细胞从所述贮存储器通向第一亲和色谱基质；和
第一亲和色谱基质通过第二操作性连接操作性地连接至输出器皿；
b)包含固定于其上的第二结合试剂的第二亲和色谱基质，其中，第二结合试剂特异性结合至存在于第二细胞类型上的第二细胞表面标志物，其中：
第一亲和色谱基质通过第三操作性连接操作性地连接至第二亲和色谱基质，所述第三操作性连接能够允许已通过第一亲和色谱基质且未结合至第一结合试剂的细胞通向第二亲和色谱基质；
第二亲和色谱基质通过第四操作性连接操作性地连接至所述输出器皿，第四操作性连接能够允许已结合至第一和/或第二亲和色谱基质且已从第一和/或第二亲和色谱基质洗脱的细胞通过；和
第二亲和色谱基质通过第五操作性连接操作性地连接至废料器皿，第五操作性连接能够允许已通过第一亲和色谱基质且未结合至第一结合试剂和已通过第二亲和色谱基质且未结合至第二结合试剂的细胞通过；
c)所述输出器皿；和
d)所述废料器皿，
其中，所述系统经设置以允许，在所述封闭系统中于所述输出器皿中以单一组合物形式收集下述细胞：(i)已结合至第一亲和色谱基质且从第一亲和色谱基质回收的细胞，和(ii)已通过且未结合至第一亲和色谱基质且已结合至第二色谱基质并从第二色谱基质回收的细胞。
101.如权利要求100所述的封闭设备，其中，所述操作性连接中的一种或多种包括连接所述贮存储器、第一亲和色谱基质、第二亲和色谱基质和/或培养器皿的管道。
102.如权利要求101所述的封闭设备，其中，所述管道连接至闩、阀或夹。
103.如权利要求100-102中任一项所述的封闭设备系统，其中：
(a)第一亲和色谱基质是CD4+亲和色谱基质或CD8+亲和色谱基质之一；和
(b)第二亲和色谱基质是所述CD8+亲和色谱基质或所述CD4+亲和色谱基质中的另一者。
104.如权利要求100-103中任一项所述的封闭设备系统，其还包括：
d)包含固定于其上的第三结合试剂的第三亲和色谱基质，所述结合试剂特异性结合至第三细胞表面标志物，由此，第三结合试剂能够结合表达第三细胞表面标志物的细胞，其中：
第三操作性连接还将第三亲和色谱基质操作性地连接至第一基质：
第三亲和色谱基质通过第六操作性连接操作性地连接至所述输出容器，从而，第六操作性连接能够允许已结合至第一基质且从第一基质回收的和已结合至第三基质且从第三基质回收的细胞通向所述输出容器；和
所述第五操作性连接还将第三亲和色谱基质操作性地连接至所述废料容器，从而，第五操作性连接能够允许已通过第三柱且未结合至第三柱的细胞通向所述废料容器。
105.如权利要求100-103中任一项所述的封闭设备系统，其还包括：
d)包括固定于其上的第三结合试剂的第三亲和色谱基质，所述结合试剂特异性结合至第三细胞表面标志物，由此，第三亲和色谱基质能够结合表达第三细胞表面标志物的细胞，其中
第二操作性连接还将第三亲和色谱基质操作性地连接至第一基质和所述输出容器，从而，第二操作性连接能够允许已结合至第一基质并从第一基质回收且已结合至第三基质并从第三基质回收的细胞通向所述输出容器。
106.如权利要求104或105所述的封闭设备系统，其中：
第一亲和色谱基质包括特异性结合CD8的结合试剂；
第二亲和色谱基质包括特异性结合CD4的结合试剂；和
第三亲和色谱基质包括特异性结合中心记忆T(TCM)细胞上表达的标志物的结合试剂。
107.如权利要求106所述的封闭设备系统，其中，第三亲和色谱基质的结合试剂选择性地结合至选自下组的细胞表面标志物：CD62L，CD45RA，CD45RO，CCR7，CD27，CD127，和CD44。
108.如权利要求100-107中任一项所述的封闭设备系统，其中，一种或多种或全部所述亲和色谱基质进一步地操作性地连接至包括一种或多种竞争试剂的洗脱缓冲液储器。
109.如权利要求100-107中任一项所述的封闭设备系统，其中，所述竞争试剂选自下组的一种或多种：生物素、生物素类似物，和能够结合至所述色谱基质的肽。
110.如权利要求100-107中任一项所述的封闭设备系统，其中，第三、第四或第六操作性连接中的一种或多种或全部还包括竞争试剂移除腔室。
111.如权利要求110所述的封闭设备系统，其中，所述竞争试剂移除腔室还包含结合试剂。
112.如权利要求111中任一项所述的封闭设备系统，其中，所述结合试剂包括选自下组的一种或多种：链霉亲和素、链霉亲和素类似物或突变蛋白、抗生物素蛋白和抗生物素蛋白类似物或突变蛋白。
113.如权利要求100-112中任一项所述的封闭设备系统，其中，所述结合试剂中的一种或多种或全部是抗体。
114.如权利要求113所述的封闭设备系统，其中，所述抗体是Fab。
115.如权利要求100-113中任一项所述的封闭设备系统，其中，所述结合试剂中的一种或多种或全部可逆结合至所述亲和色谱基质。
116.如权利要求17-41或54-88中任一项所述的方法，其中，所述抗体是Fab。