具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞及其制备和使用方法
阅读：950发布：2020-05-15
专利汇可以提供具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞及其制备和使用方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且提供了产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的方法以及所述T细胞在过继性 细胞疗法 中、特别是在 癌症 治疗 中的用途。，下面是具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞及其制备和使用方法专利的具体信息内容。
1.一种产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的方法，所述方法包括：在岩藻糖类似物的存在下在细胞培养基中培养T细胞；其中
所述岩藻糖类似物选自式(I)或(II)：
或其药学上可接受的盐或溶剂化物形式，其中式(I)或(II)各自可以是α或β端基异构体或相应的醛糖形式；
R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH；并且其中相对于在不存在所述岩藻糖类似物的情况下培养的T细胞，所述T细胞具有降低的表面岩藻糖基化。
2.根据权利要求1所述的方法，其还包括分离具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中R2是-F；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中R1、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中R1、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；
并且R5是-C≡CH。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述岩藻糖类似物是2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述岩藻糖类似物是炔基岩藻糖过乙酸酯。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中具有降低的表面岩藻糖基化的所述T细胞是相对于在不存在所述岩藻糖类似物的情况下培养的T细胞包含至少5％的表面岩藻糖基化降低的T细胞。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述培养基包含CD3和CD28抗体。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述培养基还包含白细胞介素2(IL2)。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述T细胞包含人外周T细胞。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中具有降低的表面岩藻糖基化的所述产生的T细胞被配置为用于过继性细胞疗法中。
15.一种产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的方法，所述方法包括：向动物提供岩藻糖类似物；以及
从所述动物获得具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞，
所述岩藻糖类似物选自式(I)或(II)：
或其药学上可接受的盐或溶剂化物形式，其中式(I)或(II)各自可以是α或β端基异构体或相应的醛糖形式；
R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH；并且其中相对于未提供所述岩藻糖类似物的对照动物体内存在的或从中获得的T细胞，从所述动物获得的所述T细胞具有降低的表面岩藻糖基化。
16.根据权利要求15所述的方法，其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中R2是-F；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
18.根据权利要求15-17中任一项所述的方法，其中R1、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。
19.根据权利要求15-18中任一项所述的方法，其中R1、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。
20.根据权利要求15所述的方法，其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；
5
并且R是-C≡CH。
21.根据权利要求15所述的方法，其中所述岩藻糖类似物是2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖。
22.根据权利要求15所述的方法，其中所述岩藻糖类似物是炔基岩藻糖过乙酸酯。
23.根据权利要求15-22中任一项所述的方法，其中具有降低的表面岩藻糖基化的所述T细胞是相对于在不存在所述岩藻糖类似物的情况下培养的T细胞包含至少5％的表面岩藻糖基化降低的T细胞。
24.根据权利要求15-23中任一项所述的方法，其中所述T细胞获得自所述动物的脾脏。
25.根据权利要求15-24中任一项所述的方法，其中经由喂食向所述动物提供所述岩藻糖类似物。
26.根据权利要求15-25中任一项所述的方法，其还包括从获得自所述动物的T细胞中富集T细胞。
27.根据权利要求15-26中任一项所述的方法，其中具有降低的表面岩藻糖基化的所述产生的T细胞被配置为用于过继性细胞疗法中。
28.根据权利要求15-27中任一项所述的方法，其中所述动物是人。
29.一种向受试者提供过继性细胞疗法的方法，所述方法包括：
向需要所述细胞疗法的受试者给予包含具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的混合物。
30.根据权利要求29所述的方法，其中根据权利要求1-28中任一项所述的方法产生具有降低的表面岩藻糖基化的所述T细胞。
31.根据权利要求29所述的方法，其中相对于正常T细胞，所述T细胞包含至少5％的表面岩藻糖基化降低。
32.根据权利要求29-31中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的方法，其中所述T细胞包含人外周T细胞。
34.根据权利要求29-33中任一项所述的方法，其中具有降低的表面岩藻糖基化的所述T细胞源自所述受试者。
35.根据权利要求29-33中任一项所述的方法，其中具有降低的表面岩藻糖基化的所述T细胞源自与所述受试者不同的动物。
36.根据权利要求29-35中任一项所述的方法，其中所述混合物基本不含红细胞。
37.根据权利要求29-36中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法被配置为治疗癌症。
38.根据权利要求29-37中任一项所述的方法，其中所述混合物是局部给予的(在癌细胞处或附近)。
39.根据权利要求29-38中任一项所述的方法，其中所述混合物是全身给予的(给予途径)。
40.一种治疗癌症的方法，所述方法包括：
向需要所述癌症疗法的受试者给予包含具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的混合物。
41.根据权利要求40所述的方法，其中根据权利要求1-28中任一项所述的方法产生具有降低的表面岩藻糖基化的所述T细胞。
42.根据权利要求40所述的方法，其中相对于正常T细胞，所述T细胞包含至少5％的表面岩藻糖基化降低。
43.根据权利要求40-42中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
44.根据权利要求40-43中任一项所述的方法，其中所述T细胞包含人外周T细胞。
45.根据权利要求40-44中任一项所述的方法，其中具有经修饰的表面岩藻糖基化的所述T细胞源自所述受试者。
46.根据权利要求40-44中任一项所述的方法，其中具有经修饰的表面岩藻糖基化的所述T细胞源自与所述受试者不同的动物。
47.根据权利要求40-46中任一项所述的方法，其中所述混合物基本不含红细胞。
48.根据权利要求40-47中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法被配置为治疗癌症。
49.根据权利要求40-48中任一项所述的方法，其中所述混合物是局部给予的。
50.根据权利要求40-49中任一项所述的方法，其中所述混合物是全身给予的。
具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞及其制备和使用方法
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请是根据35U.S.C.§119(e)要求2017年6月7日提交的美国临时申请号62/516,536的优先权的申请，将其出于所有目的通过引用以其整体并入本文。
[0004] 不适用
[0006] 不适用
背景技术
[0007] 在癌症治疗中通常采用三种方法：手术、化学疗法和放射疗法。此外，免疫疗法已经作为一种相对较新的并且仍在实验中的方法出现，其可以潜在地单独或与任何现有的方法组合地应用于癌症治疗中。癌症免疫疗法内的一种治疗模式是使用肿瘤特异性T细胞的
过继性细胞疗法。为了进行过继性细胞疗法，需要改善的策略，例如以提供特异于靶疾病
(例如患者的待治疗的特定类型的癌症)的T细胞，同时避免对非病原性组织的脱靶影响。
过继性细胞疗法。为了进行过继性细胞疗法，需要改善的策略，例如以提供特异于靶疾病
(例如患者的待治疗的特定类型的癌症)的T细胞，同时避免对非病原性组织的脱靶影响。
发明内容
[0008] 在一方面，提供了用于产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的方法。在一些方面，所述方法包括在岩藻糖类似物的存在下在细胞培养基中培养T细胞；其中所述岩藻糖类似物具有式(I)或(II)：
[0009]
[0012] R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH；并且
[0013] 其中相对于在不存在所述岩藻糖类似物的情况下培养的T细胞，所述T细胞具有降低的表面岩藻糖基化。
[0014] 在另一方面，提供了用于产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的方法。在一些方面，所述方法包括向动物提供岩藻糖类似物以及从所述动物获得具有降低的表面岩藻糖
基化的T细胞；其中所述岩藻糖类似物具有式(I)或(II)：
基化的T细胞；其中所述岩藻糖类似物具有式(I)或(II)：
[0015]
[0016] 或其药学上可接受的盐或溶剂化物形式，其中式(I)或(II)各自可以是α或β端基异构体或相应的醛糖形式；
[0017] R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者
[0018] R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH；并且
[0019] 其中相对于未提供所述岩藻糖类似物的对照动物体内存在的或从中获得的T细胞，从所述动物获得的T细胞具有降低的表面岩藻糖基化。
[0020] 在仍另一方面，提供了用于向受试者提供过继性细胞疗法的方法。在一些方面，所述方法包括向需要所述细胞疗法的受试者给予具有表面岩藻糖基化降低的T细胞的混合物。
[0021] 在仍另一方面，提供了用于治疗癌症的方法。在一些方面，所述方法包括向需要所述癌症治疗的受试者给予具有表面岩藻糖基化降低的T细胞的混合物。
[0022] 在仍另一方面，提供了用于治疗癌症的方法。在一些方面，所述方法包括向需要所述癌症治疗的受试者给予具有表面岩藻糖基化降低的T细胞的混合物，其中根据用于产生此类T细胞的任何方法来产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。
附图说明
[0024] 图1示出了这样的图，其展示了来自用2FF或未用2FF处理的KLH-A20 Id Fab疫苗接种的供体小鼠的脾细胞的过继性转移对IV植入的A20小鼠淋巴瘤细胞在初试
BALB/c小鼠体内的生长的体内影响。
BALB/c小鼠体内的生长的体内影响。
[0025] 图2示出了这样的图，其展示了2FF对SQ植入的A20小鼠淋巴瘤细胞在用于产生分离的Cd3+T的细胞的初试BALB/c小鼠体内的生长的体内影响。
[0026] 图3示出了这样的图，其展示了如通过表面LCA染色确定的，从用20mM2FF处理的荷A20肿瘤小鼠分离的CD3+T细胞的表面岩藻糖基化降低。
[0027] 图4示出了这样的图，其展示了如通过表面LCA染色确定的，在用100mM 2FF离体处理后，从人供体分离的CD3+T细胞的表面岩藻糖基化降低。
[0028] 图5A-图5B示出了这样的图，其展示了在存在或不存在2FF的情况下成熟的自体人T细胞转移到荷匹配的LCL EBV转化的B细胞肿瘤的NSG小鼠体内后的肿瘤进展。图5A示出了
经由卡尺测量展示肿瘤进展的图，并且图5B示出了经由存活展示肿瘤进展的图。
经由卡尺测量展示肿瘤进展的图，并且图5B示出了经由存活展示肿瘤进展的图。
具体实施方式
[0029] 尽管在本文示出和描述了本公开文本的各种实施方案和方面，但是对于本领域技术人员来说清楚的是，此类实施方案和方面仅通过举例的方式提供。在不背离本发明的情
况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。应当理解的是，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可以用于实践本发明。
况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。应当理解的是，本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案可以用于实践本发明。
[0030] 本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。在本申请中引用的所有文献或文献的部分(包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、手册和论文)出于任何目的通过引用明确地以其整体特此并入。
[0031] 除非另外指出，本公开文本的实践将采用组织培养、免疫学、分子生物学和细胞生物学的常规技术，所述技术在本领域的技能之内。参见例如，Sambrook和Russell编辑(2001)Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第3版；系列Ausubel等人编辑(2007)
Current Protocols in Molecular Biology；系列Methods in Enzymology(Academic
Press,Inc.,N.Y.)；MacPherson等人(1991)PCR 1:A Practical Approach(IRL Press at
Oxford University Press)；MacPherson等人(1995)PCR 2:APractical Approach；Harlow和Lane编辑(1999)Antibodies,A Laboratory Manual；Freshney(2005)Culture of
Animal Cells:A Manual of Basic Technique,第5版；Gait编辑(1984)Oligonucleotide
Synthesis；美国专利号4,683,195；Hames和Higgins编辑(1984)Nucleic Acid
Hybridization；Anderson(1999)Nucleic Acid Hybridization；Hames和Higgins编辑
(1984)Transcription and Translation；IRL Press(1986)Immobilized Cells and
Enzymes；Perbal(1984)APractical Guide to Molecular Cloning；Miller和Calos编辑
(1987)Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(Cold Spring Harbor
Laboratory)；Makrides编辑(2003)Gene Transfer and Expression in Mammalian
Cells；Mayer和Walker编辑(1987)Immunochemical Methods in Cell and Molecular
Biology(Academic Press,London)；Herzenberg等人编辑(1996)Weir’s Handbook of
Experimental Immunology；Manipulating the Mouse Embryo:ALaboratory Manual,第3
版(2002)Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sohail(2004)Gene Silencing by RNA Interference:Technology and Application(CRC Press)。
Current Protocols in Molecular Biology；系列Methods in Enzymology(Academic
Press,Inc.,N.Y.)；MacPherson等人(1991)PCR 1:A Practical Approach(IRL Press at
Oxford University Press)；MacPherson等人(1995)PCR 2:APractical Approach；Harlow和Lane编辑(1999)Antibodies,A Laboratory Manual；Freshney(2005)Culture of
Animal Cells:A Manual of Basic Technique,第5版；Gait编辑(1984)Oligonucleotide
Synthesis；美国专利号4,683,195；Hames和Higgins编辑(1984)Nucleic Acid
Hybridization；Anderson(1999)Nucleic Acid Hybridization；Hames和Higgins编辑
(1984)Transcription and Translation；IRL Press(1986)Immobilized Cells and
Enzymes；Perbal(1984)APractical Guide to Molecular Cloning；Miller和Calos编辑
(1987)Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(Cold Spring Harbor
Laboratory)；Makrides编辑(2003)Gene Transfer and Expression in Mammalian
Cells；Mayer和Walker编辑(1987)Immunochemical Methods in Cell and Molecular
Biology(Academic Press,London)；Herzenberg等人编辑(1996)Weir’s Handbook of
Experimental Immunology；Manipulating the Mouse Embryo:ALaboratory Manual,第3
版(2002)Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sohail(2004)Gene Silencing by RNA Interference:Technology and Application(CRC Press)。
[0032] I.定义
[0033] 如本文和所附权利要求所用，单数形式“一个/一种(a、an)”和“所述(the)”包括复数指代物，除非上下文另外明确地指示。因此，例如，对“岩藻糖类似物”的提及包括一种或多种岩藻糖类似物。当意指多种岩藻糖类似物时，所述多种岩藻糖类似物中的每一种可以相同或不同。
[0034] 术语“分离(isolate、isolating或isolated)”旨在意指组分(例如化合物或细胞)与在自然界或在实验室混合物中伴随它的所有或一些组分分离。
[0035] 术语“富集(enrich、enriching或enriched)”旨在意指与所述方法之前相比，处理具有组分(例如化合物或细胞)的混合物以增加所述组分的浓度。例如，从包括T细胞和其他类型的细胞的细胞混合物中富集T细胞意指处理所述细胞混合物(例如离心)，使得在富集之前每单位体积的T细胞浓度或数目(例如105个T细胞/ml)在富集方法之后增加到大于105
个T细胞/ml。
个T细胞/ml。
[0036] 术语“培养”或“细胞培养”意指在人工体外环境中细胞的维持和/或生长。“细胞培养系统”在本文用于指代可以生长细胞群的培养条件。“培养基”在本文用于指代用于细胞的培养、生长或增殖的营养液。
[0037] 本文所用的“组合物”是指可以存活或杀死的任何化合物(包括任何化学化合物)和细胞。例如，在产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的上下文中，所述组合物可以含有提供给培养的细胞的岩藻糖类似物。在另一个例子中，在提供过继性细胞疗法或治疗癌
症的上下文中，所述组合物可以含有一组细胞，例如具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。
在任何上下文中使用的组合物可以具有一种或多种组分。
症的上下文中，所述组合物可以含有一组细胞，例如具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。
在任何上下文中使用的组合物可以具有一种或多种组分。
[0038] 术语“T淋巴细胞”或“T细胞”是指在细胞介导的免疫中起作用的淋巴细胞类型。T细胞的类型包括但不限于效应T细胞、辅助T细胞、细胞毒性杀伤T细胞、记忆T细胞、调节T细胞、自然杀伤T细胞、粘膜相关不变T细胞、αβT细胞和γδT细胞。而且，根据T细胞上的一种或多种特定标记的存在或水平，可以将T细胞进一步亚型化。
[0040] 在疾病或病症的上下文中，“治疗”意指至少实现了与折磨个体的病症相关的症状的改善，其中改善以广义用于指代至少减小与正在治疗的病症(例如，癌症)相关的参数(例如症状)的量级。因此，治疗还包括这样的情况，其中病理状况或至少与其相关的症状被完全抑制，例如防止发生或停止(例如终止)，使得宿主不再患有病症，或至少不再患有表征病症的症状。因此，治疗包括：(i)预防，即降低临床症状发展的风险，包括使临床症状不发展，例如预防疾病进展为有害状态；(ii)抑制，即阻止临床症状的发展或进一步发展，例如减轻或完全抑制活动性疾病，例如以便降低肿瘤负荷，这种降低可以包括消除可检测的癌性细胞；和/或(iii)缓解，即导致临床症状消退。
[0041] “给予(administration、administering)”等是指直接给予，其可以是体外给予至细胞、体内给予至细胞、由医学专业人员给予受试者；和/或间接给予，其可以是为本发明的组合物开处方的行为。当在本文关于细胞使用时，是指将组合物引入细胞中。通常，给予有效量，所述量可以由本领域技术人员确定。例如，当向在培养基中培养的细胞给予一种或多种岩藻糖类似物时，所述一种或多种岩藻糖类似物的有效量定义为足以产生所需效果(例如具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的产生)的量。可以使用任何给予方法。可以通过例
如将化合物添加到细胞培养基中或体内给予(例如喂食)向细胞给予化合物(例如，一种或
多种岩藻糖类似物)。可以通过例如喂食、血管内注射、直接肿瘤内递送等来实现向受试者的给予。
如将化合物添加到细胞培养基中或体内给予(例如喂食)向细胞给予化合物(例如，一种或
多种岩藻糖类似物)。可以通过例如喂食、血管内注射、直接肿瘤内递送等来实现向受试者的给予。
[0042] 给予可以意指向受试者口服给予、作为栓剂给予、局部接触、静脉内、腹膜内、肌内、病灶内、鞘内、鼻内或皮下给予或植入缓释装置(例如，微量渗透泵)。给予是通过任何途径，包括肠胃外和经粘膜(例如，经颊、舌下、经腭、经牙龈、经鼻、经阴道、经直肠或经皮)。肠胃外给予包括例如静脉内、肌内、小动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内给予。其他递送方式包括但不限于使用脂质体配制品、静脉内输注、经皮贴剂等。“共同给予”意指在给予一种或多种另外的疗法(例如癌症疗法，如化学疗法、激素疗法、放射疗法或免疫疗法)的同时、恰在之前或恰在之后给予本文所述的组合物。本发明的化合物可以向患者单独给予或可以共同给予。共同给予意在包括单独地或组合地(多于一种组合物)组合物的同时或顺序
给予。因此，当需要时，所述制剂也可以与其他活性物质组合(例如以减少代谢降解)。
给予。因此，当需要时，所述制剂也可以与其他活性物质组合(例如以减少代谢降解)。
[0043] 如本文所用的术语“癌症”是指涵盖原发性癌症和转移性癌症的通用术语。“原发性癌症”意指这样一组肿瘤细胞，其已经获得癌细胞的至少一种特征，然而尚未侵入邻近组织并且在位于原发性起源位置的肿瘤中保持在一起。“转移性癌症”意指这样一组肿瘤细胞，其源自原发性癌症的细胞，其已经侵入所述原发性癌症周围的组织、通过身体传播、粘附在新的远的位置并长成新的肿瘤。本发明的原发性癌症和转移性癌症的例子包括但不限
于乳腺癌、食管癌、结直肠癌、胰腺癌、胃(stomach)癌、(胃肠道间质组织)GIST癌、肝细胞癌、肝癌、肺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、小肠癌、大肠癌、胃癌(gastric cancer)、淋巴瘤、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、恶性黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、多发性骨髓瘤、间皮瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、胶质母细胞瘤、肉瘤、神经胶质瘤或其他脑瘤、头/颈癌、其他胃肠道和生殖细胞肿瘤、血液恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤例如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴性白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、惰性B细胞淋巴瘤、B细胞恶性肿瘤、皮肤癌(包括黑素瘤)、骨癌、上皮癌、肾细胞癌、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、尤文肉瘤、髓母细胞瘤、滑膜肉瘤和/或间皮瘤。
于乳腺癌、食管癌、结直肠癌、胰腺癌、胃(stomach)癌、(胃肠道间质组织)GIST癌、肝细胞癌、肝癌、肺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、小肠癌、大肠癌、胃癌(gastric cancer)、淋巴瘤、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、恶性黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、多发性骨髓瘤、间皮瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、胶质母细胞瘤、肉瘤、神经胶质瘤或其他脑瘤、头/颈癌、其他胃肠道和生殖细胞肿瘤、血液恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤例如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性淋巴性白血病(ALL)、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、惰性B细胞淋巴瘤、B细胞恶性肿瘤、皮肤癌(包括黑素瘤)、骨癌、上皮癌、肾细胞癌、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、尤文肉瘤、髓母细胞瘤、滑膜肉瘤和/或间皮瘤。
[0044] 如本文所用的“癌细胞”是指表现出肿瘤细胞表型的细胞，其特征可以在于例如异常细胞生长、异常细胞增殖、密度依赖性生长抑制的丧失、锚定非依赖性生长潜力、在免疫受损的非人动物模型中促进肿瘤生长和/或发展的能力和/或细胞转化的任何适当的指标中的一种或多种。“癌细胞”在本文中可以与“肿瘤细胞”或“癌性细胞”互换使用，并且涵盖实体瘤、半实体瘤、原发性肿瘤、转移性肿瘤等的癌细胞。
[0045] 如本文所用，“抗肿瘤作用”或“抗癌作用”是指可以表现为肿瘤体积减小、肿瘤生长抑制、肿瘤细胞数目减少、肿瘤细胞增殖减少、转移瘤数目减少、总体存活期或无进展存活期增加、预期寿命增加或与肿瘤相关的各种生理症状的改善的生物学作用。抗肿瘤作用还可以指代预防肿瘤的发生，例如疫苗。
[0046] 如本文所用的术语“无进展存活期”可以缩写为PFS，是指根据修订的国际工作组(IWG)恶性淋巴瘤或因任何原因死亡的反应标准，从治疗日期到疾病进展日期的时间。
[0047] 术语“总体存活期”可以缩写为OS，定义为从治疗日期到死亡日期的时间。
[0048] 如本文所用的术语“过继性细胞疗法”或“过继性细胞转移”是指将用于疗法的细胞提供(例如给予或移植)给需要所述疗法的受试者。用于疗法的细胞可以源自同一受试者或源自包括人和非人动物的另一受试者。用于过继性细胞疗法或过继性细胞转移的细胞可
以包括T细胞。
以包括T细胞。
[0049] 根据本文提供的方法，可以向受试者给予过继性细胞疗法。与过继性细胞疗法相关的方法和程序的一些例子可以从例如WO 2015120096、WO 2015164675、WO 2016011210、WO 2016040441、WO 2017070395和US 20160158359中找到，将其公开内容通过引用明确地
以其整体并入。过继性细胞疗法可以向受试者提供包括T细胞、特别是具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的细胞混合物。向受试者给予的可以产生所需生理反应(例如，抑制或减少
肿瘤生长)的T细胞的量定义为有效量。术语有效量和有效剂量可互换使用。例如，为了在受试者体内引发对治疗疾病(例如，癌症)有利的反应，有效量是这样的量，其减轻、消除或消减与障碍相关的症状，例如以便提供对癌症转移的控制以消除癌细胞等。可以由本领域技
术人员凭经验确定给予T细胞的有效量和时间表。给予的剂量范围是足够大以产生所需效
果的那些，其中疾病或障碍的一种或多种症状受到影响(例如，减轻或延迟)。剂量不应当太大以致引起严重的不良副作用，如不希望的交叉反应、过敏反应等。通常，剂量将随年龄、病症、性别、疾病类型、疾病或障碍的程度、给予途径或方案中是否包括其他药物而变化，并且可以由本领域技术人员确定。在有任何禁忌症的情况下，剂量可以由个体医师调整。剂量可以变化，并且能以每天一剂或多剂给予来给予，持续一天或数天。例如，对于给定的参数，与治疗前相比，有效量将显示为至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、
80％、90％或至少100％的增加或减少。功效也可以表示为“倍数”增加或减少。例如，与对照或治疗前相比，治疗有效量可以具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的作用。确切的剂量和配方将取决于疗法的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如，
Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms(第1-3卷,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Remington:The Science and
Practice of Pharmacy,第20版,Gennaro编辑(2003)和Pickar,Dosage Calculations
(1999))。
以其整体并入。过继性细胞疗法可以向受试者提供包括T细胞、特别是具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的细胞混合物。向受试者给予的可以产生所需生理反应(例如，抑制或减少
肿瘤生长)的T细胞的量定义为有效量。术语有效量和有效剂量可互换使用。例如，为了在受试者体内引发对治疗疾病(例如，癌症)有利的反应，有效量是这样的量，其减轻、消除或消减与障碍相关的症状，例如以便提供对癌症转移的控制以消除癌细胞等。可以由本领域技
术人员凭经验确定给予T细胞的有效量和时间表。给予的剂量范围是足够大以产生所需效
果的那些，其中疾病或障碍的一种或多种症状受到影响(例如，减轻或延迟)。剂量不应当太大以致引起严重的不良副作用，如不希望的交叉反应、过敏反应等。通常，剂量将随年龄、病症、性别、疾病类型、疾病或障碍的程度、给予途径或方案中是否包括其他药物而变化，并且可以由本领域技术人员确定。在有任何禁忌症的情况下，剂量可以由个体医师调整。剂量可以变化，并且能以每天一剂或多剂给予来给予，持续一天或数天。例如，对于给定的参数，与治疗前相比，有效量将显示为至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、
80％、90％或至少100％的增加或减少。功效也可以表示为“倍数”增加或减少。例如，与对照或治疗前相比，治疗有效量可以具有至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多的作用。确切的剂量和配方将取决于疗法的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如，
Lieberman,Pharmaceutical Dosage Forms(第1-3卷,1992)；Lloyd,The Art,Science and Technology of Pharmaceutical Compounding(1999)；Remington:The Science and
Practice of Pharmacy,第20版,Gennaro编辑(2003)和Pickar,Dosage Calculations
(1999))。
[0050] 如本文所用的术语“降低的表面岩藻糖基化”是指附着于细胞(例如，T细胞)上的表面糖蛋白的岩藻糖的抑制。这种“岩藻糖的抑制”不同于岩藻糖类似物的竞争性掺入，其中岩藻糖类似物替代了表面糖蛋白上的岩藻糖。
[0051] “对照”或“正常”样品(例如对照细胞或正常细胞)是指用作参照物(通常是已知参照物)以用于与测试样品进行比较的样品。例如，测试样品可以是经修饰的T细胞，特别是具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。此类T细胞可以通过本文公开的方法产生，例如经由在岩藻糖类似物的存在下培养T细胞或从给予岩藻糖类似物的动物获得T细胞。可以将这些经
修饰的T细胞与在不存在岩藻糖类似物的情况下培养的或从未给予岩藻糖类似物的动物获
得的对照或正常T细胞进行比较，以证实降低。也可以在暴露或给予岩藻糖类似物之前从同一个体(例如，从较早获得的样品)获得对照值。
修饰的T细胞与在不存在岩藻糖类似物的情况下培养的或从未给予岩藻糖类似物的动物获
得的对照或正常T细胞进行比较，以证实降低。也可以在暴露或给予岩藻糖类似物之前从同一个体(例如，从较早获得的样品)获得对照值。
[0052] 如本文所用的术语“药学上可接受的赋形剂”是指提供用于向受试者给予一种或多种感兴趣的化合物的药学上可接受的化合物的任何合适的物质。“药学上可接受的赋形
剂”可以涵盖称为药学上可接受的稀释剂、药学上可接受的添加剂和药学上可接受的载体
的物质。术语“载体”或“药学上可接受的载体”是指与岩藻糖类似物一起给予的稀释剂、佐剂或赋形剂。此类药物载体可以是液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成起源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。载体可以是盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石粉、角蛋白、胶体二氧化硅、尿素等。另外，可以使用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在一个实施方案中，当向动物给予时，岩藻糖类似物或组合物和药学上可接受的载体是无菌的。当静脉内给予岩藻糖类似物时，水是优选的载体。盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的药物载体还包括赋形剂，如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。如果需要，本发明的组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。
剂”可以涵盖称为药学上可接受的稀释剂、药学上可接受的添加剂和药学上可接受的载体
的物质。术语“载体”或“药学上可接受的载体”是指与岩藻糖类似物一起给予的稀释剂、佐剂或赋形剂。此类药物载体可以是液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成起源的那些，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。载体可以是盐水、阿拉伯胶、明胶、淀粉糊、滑石粉、角蛋白、胶体二氧化硅、尿素等。另外，可以使用辅助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在一个实施方案中，当向动物给予时，岩藻糖类似物或组合物和药学上可接受的载体是无菌的。当静脉内给予岩藻糖类似物时，水是优选的载体。盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的药物载体还包括赋形剂，如淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙烯、二醇、水、乙醇等。如果需要，本发明的组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。
[0053] 如本文所用，“可水解的酯基”是指可以在体内水解以产生羟基的任何常规的酯。示例性的可水解的酯基包括-OC(O)H、-OC(O)C1-C10烷基、-OC(O)C2-C10烯基、-OC(O)C2-C10炔基、-OC(O)芳基、-OC(O)杂环、-OC(O)C1-C10亚烷基(芳基)、-OC(O)C2-C10亚烯基(芳基)、-OC(O)C2-C10亚炔基(芳基)、-OC(O)C1-C10亚烷基(杂环)、-OC(O)C2-C10亚烯基(杂环)、-OC(O)C2-C10亚炔基(杂环)、-OC(O)CH2O(CH2CH2O)nCH3和-OC(O)CH2CH2O(CH2CH2O)nCH3，其中每个n是独立地选自0-5的整数。
[0054] 如本文所用，除非上下文另外指出，“炔基岩藻糖过乙酸酯”是指在位置R1-4处具有乙酸酯基团的任何或所有形式的炔基岩藻糖(5-乙炔基阿拉伯糖)(见式I和II、下文)，包括6-乙炔基-四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四酯(包括(2S,3S,4R,5R,6S)和(2R,3S,4R,5R,
6S)异构体)和5-((S)-1-羟基丙-2-炔基)-四氢呋喃-2,3,4-四乙酸三酯(包括(2S,3S,4R,
5R)和(2R,3S,4R,5R)异构体)以及醛糖形式。术语“炔基岩藻糖三乙酸酯”、“炔基岩藻糖二乙酸酯”和“炔基岩藻糖单乙酸酯”分别是指炔基岩藻糖的所指示的三乙酸酯、二乙酸酯和单乙酸酯形式。
6S)异构体)和5-((S)-1-羟基丙-2-炔基)-四氢呋喃-2,3,4-四乙酸三酯(包括(2S,3S,4R,
5R)和(2R,3S,4R,5R)异构体)以及醛糖形式。术语“炔基岩藻糖三乙酸酯”、“炔基岩藻糖二乙酸酯”和“炔基岩藻糖单乙酸酯”分别是指炔基岩藻糖的所指示的三乙酸酯、二乙酸酯和单乙酸酯形式。
[0055] 除非上下文另外指出，术语“烷基”是指具有1至20个碳原子(以及其中的碳原子的范围和特定数目的所有组合和子组合)的未经取代的饱和直链或支链烃，除非另外说明。优选1至3、1至8或1至10个碳原子的烷基。烷基的例子是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基和3,3-二甲基-2-丁基。
[0056] 无论是单独的还是作为另一基团的一部分，烷基当被取代时都可以被一个或多个基团(优选地1至3个基团)(以及选自卤素的任何另外的取代基)取代，所述基团包括但不限
于：卤素、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自-H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或芳基。
于：卤素、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自-H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或芳基。
[0057] 除非上下文另外指出，术语“烯基”和“炔基”是指具有2至20个碳原子(以及其中的碳原子的范围和特定数目的所有组合和子组合)(优选2至3、2至4、2至8或2至10个碳原子)的未经取代的或任选地经取代(经指示)的直链和支链碳链。烯基链在链中具有至少一个双
键，并且炔基链在链中具有至少一个三键。烯基的例子包括但不限于亚乙基或乙烯基、烯丙基、-1丁烯基、-2丁烯基、-异丁烯基、-1戊烯基、-2戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、-2甲基2丁烯基和-2,3二甲基2丁烯基。炔基的例子包括但不限于炔的(acetylenic)、炔丙基、乙炔基、丙炔基、-1丁炔基、-2丁炔基、-1戊炔基、-2戊炔基和-3甲基1丁炔基。
键，并且炔基链在链中具有至少一个三键。烯基的例子包括但不限于亚乙基或乙烯基、烯丙基、-1丁烯基、-2丁烯基、-异丁烯基、-1戊烯基、-2戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、-2甲基2丁烯基和-2,3二甲基2丁烯基。炔基的例子包括但不限于炔的(acetylenic)、炔丙基、乙炔基、丙炔基、-1丁炔基、-2丁炔基、-1戊炔基、-2戊炔基和-3甲基1丁炔基。
[0058] 无论是单独的还是作为另一基团的一部分，烯基和炔基当被取代时都可以被一个或多个基团(优选地1至3个基团)(以及选自卤素的任何另外的取代基)取代，所述基团包括
但不限于：卤素、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R')、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C烯基、-C2-C8炔基或芳基。
但不限于：卤素、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R')、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C烯基、-C2-C8炔基或芳基。
[0059] 除非上下文另外指出，术语“亚烷基”是指具有1至20个碳原子(以及其中的碳原子的范围和特定数目的所有组合和子组合)(优选1至8或1至10个碳原子)并且具有两个通过从母体烷烃的同一或两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生的单价自由基中心的未经取
代的饱和支链或直链烃自由基。典型的亚烷基包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基、亚癸基、1,4-亚环己基等。
代的饱和支链或直链烃自由基。典型的亚烷基包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚丁基、亚戊基、亚己基、亚庚基、亚辛基、亚壬基、亚癸基、1,4-亚环己基等。
[0060] 无论是单独的还是作为另一基团的一部分，亚烷基当被取代时都可以被一个或多个基团(优选地1至3个基团)(以及选自卤素的任何另外的取代基)取代，所述基团包括但不
限于：卤素、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或-芳基。
限于：卤素、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或-芳基。
[0061] “亚烯基”是指烯基(如上所述)的不饱和的、支链或直链或环状烃自由基，并且具有两个通过从母体烯烃的同一或两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生的单价自由基中心。如上文针对烯基所述，“亚烯基”可以是未经取代的或任选地经取代的(经指示)。在一些实施方案中，“亚烯基”是未经取代的。
[0062] “亚炔基”是指炔基(如上所述)的不饱和的、支链或直链或环状烃自由基，并且具有两个通过从母体烯烃的同一或两个不同碳原子上除去两个氢原子衍生的单价自由基中心。如上文针对炔基所述，“亚炔基”可以是未经取代的或任选地经取代的(经指示)。在一些实施方案中，“亚炔基”是未经取代的。
[0063] 除非上下文另外指出，术语“芳基”是指通过从母体芳香族环系统的单个碳原子中除去一个氢原子衍生的6-20个碳原子(以及其中的碳原子的范围和特定数目的所有组合和子组合)的经取代的或未经取代的单价芳香族烃自由基。一些芳基在示例性结构中表示为
“Ar”。典型的芳基包括但不限于衍生自苯、经取代的苯、苯基、萘、蒽、联苯等的自由基。
“Ar”。典型的芳基包括但不限于衍生自苯、经取代的苯、苯基、萘、蒽、联苯等的自由基。
[0064] 无论是单独的还是作为另一基团的一部分，芳基都可以任选地被一个或多个(优选地1至5个或甚至1至2个)基团取代，所述基团包括但不限于：卤素、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-NO2、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或芳基。
[0065] 除非上下文另外指出，术语“杂环”是指具有3至7或3至10个环原子(也称为环成员)(以及其中的碳原子和杂原子的范围和特定数目的所有组合和子组合)的经取代的或未
经取代的单环的环系统，其中至少一个环原子是选自N、O、P或S的杂原子。杂环可以具有1-4个独立地选自N、O、P或S的环杂原子。杂环中的一个或多个N、C或S原子可以被氧化。单环的杂环优选地具有3至7个环成员(例如，2至6个碳原子和1至3个独立地选自N、O、P或S的杂原子)。包括杂原子的环可以是芳香族的或非芳香族的。除非另外说明，杂环在任何杂原子或碳原子处与其侧基附接，这产生稳定的结构。
经取代的单环的环系统，其中至少一个环原子是选自N、O、P或S的杂原子。杂环可以具有1-4个独立地选自N、O、P或S的环杂原子。杂环中的一个或多个N、C或S原子可以被氧化。单环的杂环优选地具有3至7个环成员(例如，2至6个碳原子和1至3个独立地选自N、O、P或S的杂原子)。包括杂原子的环可以是芳香族的或非芳香族的。除非另外说明，杂环在任何杂原子或碳原子处与其侧基附接，这产生稳定的结构。
[0066] 杂环描述于Paquette,“Principles of Modern Heterocyclic Chemistry”(W.A.Benjamin,New York,1968)，特别是第1、3、4、6、7和9章；“The Chemistry of
Heterocyclic Compounds,Aseries of Monographs”(John Wiley&Sons,New York,1950年
至今)，特别是第13、14、16、19和28卷；以及J.Am.Chem.Soc.82:5566(1960)。通过举例的方式，“杂环”基团的例子包括但不限于吡啶基、二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、噻唑基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、岩藻糖基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基和四氢呋喃基。
Heterocyclic Compounds,Aseries of Monographs”(John Wiley&Sons,New York,1950年
至今)，特别是第13、14、16、19和28卷；以及J.Am.Chem.Soc.82:5566(1960)。通过举例的方式，“杂环”基团的例子包括但不限于吡啶基、二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、噻唑基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、岩藻糖基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基和四氢呋喃基。
[0067] 无论是单独的还是作为另一基团的一部分，杂环基团当被取代时都可以被一个或多个基团(优选地1至2个基团)取代，所述基团包括但不限于：-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基、卤素、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或-芳基。
[0068] 通过举例而非限制的方式，碳键合的杂环可以在以下位置处键合：吡啶的2、3、4、5或6位；哒嗪的3、4、5或6位；嘧啶的2、4、5或6位；吡嗪的2、3、5或6位；呋喃、四氢呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位；异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位；氮杂环丙烷的2或3位；或氮杂环丁烷的2、3或4位。示例性的碳键合的杂环可以包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、6-哒嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
[0069] 通过举例而非限制的方式，氮键合的杂环可以在以下位置处键合：氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的1位；异吲哚或异吲哚啉的2位；和吗啉的4位。仍更典型地，氮键合的杂环包括1-氮丙啶基、1-吖丁啶基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。
[0070] 除非另外说明，术语“碳环”是指具有3至6个环原子(以及其中的碳原子的范围和特定数目的所有组合和子组合)的经取代的或未经取代的、饱和的或不饱和的非芳香族单
环的环系统，其中所有的环原子都是碳原子。
环的环系统，其中所有的环原子都是碳原子。
[0071] 无论是单独的还是作为另一基团的一部分，碳环基团当被取代时都可以被例如一个或多个(优选地1或2个基团)基团(以及选自卤素的任何另外的取代基)取代，所述基团包
括但不限于：卤素、C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或芳基。
括但不限于：卤素、C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基、-O-(C1-C8烷基)、-O-(C2-C8烯基)、-O-(C2-C8炔基)、芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SR’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、＝O、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每个R’独立地选自H、-C1-C8烷基、-C2-C8烯基、-C2-C8炔基或芳基。
[0072] 单环的碳环取代基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环庚基、环辛基、-1,3-环己二烯基、-1,4-环己二烯基、-1,3-环庚二烯基、-1,3,5-环庚三烯基和-环辛二烯基。
[0073] 当任何变量在任何成分中或在任何式中出现超过一次时，其在每次出现时的定义与其在每次其他出现时的定义无关。仅在取代基和/或变量的组合产生稳定的化合物时，此类组合才是允许的。
[0074] 除非上下文另外指出，连字符(-)表示与侧链分子的附接点。因此，术语“-(C1-C10亚烷基)芳基”或“-C1-C10亚烷基(芳基)”是指如本文定义的C1-C10亚烷基自由基，其中亚烷基自由基在亚烷基自由基的任何碳原子处与侧链分子附接，并且与亚烷基自由基的碳原子键合的氢原子之一被如本文所定义的芳基自由基替代。
[0075] 当特定的基团被“取代”时，该基团可以具有一个或多个独立地选自取代基列表的取代基，优选地1至5个取代基，更优选地1至3个取代基，最优选地1至2个取代基。然而，所述基团通常具有选自卤素的任何数目的取代基。
[0076] 意图是在分子的特定位置处的任何取代基或变量的定义独立于其在该分子的其他地方的定义。应当理解，本发明的化合物的取代基和取代方式可以由本领域普通技术人
员选择，以提供具有活性和化学稳定性并且可以通过本领域已知的技术以及本文阐述的那
些方法容易地合成的化合物。
员选择，以提供具有活性和化学稳定性并且可以通过本领域已知的技术以及本文阐述的那
些方法容易地合成的化合物。
[0077] 术语“药学上可接受的”意指由联邦政府或州政府的监管机构批准的或在美国药典或其他普遍认可的药典中列出的用于在动物体内、更特别地在人体内使用。术语“药学上相容的成分”是指与岩藻糖类似物一起给予的药学上可接受的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。
[0078] 岩藻糖类似物通常基本上不含不希望的污染物。这意指类似物通常具有至少约50％w/w(重量/重量)的纯度，并且基本上没有干扰蛋白质和其他污染物。有时，试剂具有至少约80％w/w、更优选地至少90％或约95％w/w的纯度。使用常规的纯化技术，可以获得至少
99％w/w的同质产物。
99％w/w的同质产物。
[0079] II.岩藻糖类似物
[0080] 在本文的各种实施方案中的任一个中，岩藻糖类似物可以具有以下式(I)或(II)：
[0081]
[0082]
[0083] 或其药学上可接受的盐或溶剂化物形式，其中式(I)或(II)各自可以是α或β端基异构体或相应的醛糖形式；
[0084] 其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，
[0085] 或者
[0086] 其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是炔基。
[0087] 在一些实施方案中，R2是-F。
[0088] 在一些实施方案中，R5是-C≡CH。
[0089] 在一些实施方案中，岩藻糖类似物具有式(I)或(II)，其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0090] 在一些实施方案中，岩藻糖类似物具有式(I)或(II)，其中R2是-F；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0091] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R2是-F；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
[0092] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0093] 在一些实施方案中，可水解的酯基是-OC(O)C1-C10烷基。在一些选择的实施方案中，可水解的酯基是-OC(O)CH3。
[0094] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R2是-F，R1、R3和R4各自独立地选2 1 3
自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R是-F，R、R 和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R2是-F，并且R1、R3和R4各自是-OH。
自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R是-F，R、R 和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R2是-F，并且R1、R3和R4各自是-OH。
[0095] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R5是-C≡CH，R1、R2、R3和R4各自独立5
地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R 是-C≡
CH，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OH。在式(I)或(II)的另一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OAc。
地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R 是-C≡
CH，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OH。在式(I)或(II)的另一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OAc。
[0096] 在一些选择的实施方案中，岩藻糖类似物具有式：
[0097]
[0098] 或其醛糖形式，其中R1、R2、R3和R4各自是如本文所定义和描述的。
[0099] 在一些选择的实施方案中，岩藻糖类似物是2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖。
[0100] 在一些选择的实施方案中，岩藻糖类似物是炔基岩藻糖过乙酸酯。炔基岩藻糖过乙酸酯可以是炔基岩藻糖四乙酸酯、炔基岩藻糖三乙酸酯、炔基岩藻糖二乙酸酯、炔基岩藻糖单乙酸酯或其组合。在一个例示的实施方案中，岩藻糖类似物是(3S,4R,5R,6S)-6-乙炔
基四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四酯或5-((S)-1-羟基丙-2-炔-1-基)四氢呋喃-2,3,4-
三乙酸三酯。
基四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四酯或5-((S)-1-羟基丙-2-炔-1-基)四氢呋喃-2,3,4-
三乙酸三酯。
[0101] 在各种实施方案中的任一个中，式(I)和(II)的岩藻糖类似物的内环式环氧可以被硫替代。
[0102] 本文还提供了式I和II的化合物的药学上可接受的盐和溶剂化物形式。因此，在本文提供的各种实施方案中的任一个中，可以使用所公开的化合物的药学上可接受的盐或溶
剂化物形式。溶剂化物通常不会显著改变化合物的生理活性，并且因此可以作为药理等效
物起作用。一种类型的溶剂化物是水合物。
剂化物形式。溶剂化物通常不会显著改变化合物的生理活性，并且因此可以作为药理等效
物起作用。一种类型的溶剂化物是水合物。
[0103] 在一些方面，岩藻糖类似物以至少10mM的浓度可溶于配制缓冲液(例如水性配制缓冲液)中。在一些实施方案中，岩藻糖类似物以至少100mM的浓度可溶于配制缓冲液中。在一些方面岩藻糖类似物以至少100μg/ml、至少1mg/ml、至少50mg/ml、至少约100mg/ml、至少约200mg/ml或至少约300mg/ml的浓度可溶于配制缓冲液(例如水性配制缓冲液)中。
[0104] III.产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的方法
[0105] 在一些方面，本文提供了产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的方法。
[0106] II-1.体外或离体产生方法
[0107] 在一些方面，提供了产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的体外或离体方法。所述方法可以包括在本文公开的岩藻糖类似物的存在下在细胞培养基中培养T细胞以及收
集具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。与在不存在岩藻糖类似物的情况下培养的T细胞相
比，通过所述方法产生的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。通过本文公开的方法产生的此类T细胞可以用于治疗目的，如过继性细胞疗法或癌症治疗。因此，至少在一些实施方案中，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞称为“治疗性T细胞”。
集具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。与在不存在岩藻糖类似物的情况下培养的T细胞相
比，通过所述方法产生的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。通过本文公开的方法产生的此类T细胞可以用于治疗目的，如过继性细胞疗法或癌症治疗。因此，至少在一些实施方案中，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞称为“治疗性T细胞”。
[0108] 在一些实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物可以是式(I)或(II)：
[0109]
[0110] 或其药学上可接受的盐或溶剂化物形式，其中式(I)或(II)各自可以是α或β端基异构体或相应的醛糖形式；
[0111] 其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，
[0112] 或者
[0113] 其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是炔基。
[0114] 在一些实施方案中，R2是-F。
[0115] 在一些实施方案中，R5是-C≡CH。
[0116] 在一些实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物具有式(I)或(II)，其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0117] 在一些实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物具有式(I)或(II)，其中R2是-F；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0118] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH5 2 1 3
或可水解的酯基；并且R是-CH3。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R是-F；R、R 和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
或可水解的酯基；并且R是-CH3。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R是-F；R、R 和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
[0119] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0120] 在一些实施方案中，可水解的酯基是-OC(O)C1-C10烷基。在一些选择的实施方案中，可水解的酯基是-OC(O)CH3。
[0121] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R2是-F，R1、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R2是-F，R1、R3和
4 2
R各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R是-F，并且R1、R3和R4各自是-OH。
4 2
R各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R是-F，并且R1、R3和R4各自是-OH。
[0122] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R5是-C≡CH，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R5是-C≡CH，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OH。在式(I)或(II)的另一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OAc。
[0123] 在一些选择的实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物具有式：
[0124]
[0125] 或其醛糖形式，其中R1、R2、R3和R4各自是如本文所定义和描述的。
[0126] 在一些选择的实施方案中，岩藻糖类似物是2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖。
[0127] 在一些选择的实施方案中，岩藻糖类似物是炔基岩藻糖过乙酸酯。炔基岩藻糖过乙酸酯可以是炔基岩藻糖四乙酸酯、炔基岩藻糖三乙酸酯、炔基岩藻糖二乙酸酯、炔基岩藻糖单乙酸酯或其组合。在一个例示的实施方案中，岩藻糖类似物是(3S,4R,5R,6S)-6-乙炔
基四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四酯或5-((S)-1-羟基丙-2-炔-1-基)四氢呋喃-2,3,4-
三乙酸三酯。
基四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四酯或5-((S)-1-羟基丙-2-炔-1-基)四氢呋喃-2,3,4-
三乙酸三酯。
[0128] 在各种实施方案中的任一个中，式(I)和(II)的岩藻糖类似物的内环式环氧可以被硫替代。
[0129] 在一些实施方案中，本文公开的方法可以包括在岩藻糖类似物的存在下在细胞培养基中培养T细胞的步骤。在一些实施方案中，在培养基中存在其他类型的细胞(例如红细
胞)。待培养的T细胞可以从受试者(例如人或非人动物)获得。可替代地，待培养的T细胞可以来自先前培养的和/或储存的细胞群。
胞)。待培养的T细胞可以从受试者(例如人或非人动物)获得。可替代地，待培养的T细胞可以来自先前培养的和/或储存的细胞群。
[0130] 在一些实施方案中，本文公开的方法产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞，其可以用于需要这种疗法的受试者的过继性细胞疗法中。在从样品(如生物样品，例如获得自或源自受试者的样品)分离T细胞和细胞群的实施方案中，所述受试者可以是需要细胞疗法
或将要给予细胞疗法的患者，即自体来源。可替代地，可以从不是需要过继性细胞疗法的患者的供体分离T细胞和细胞群，即同种异体来源。供体可以是健康人或患有与需要细胞疗法或将要给予细胞疗法的患者患有的病症或疾病相同的病症或疾病的另一患者。
或将要给予细胞疗法的患者，即自体来源。可替代地，可以从不是需要过继性细胞疗法的患者的供体分离T细胞和细胞群，即同种异体来源。供体可以是健康人或患有与需要细胞疗法或将要给予细胞疗法的患者患有的病症或疾病相同的病症或疾病的另一患者。
[0131] 在一些实施方案中，从受试者获得的细胞可以是原代细胞(例如，原代人细胞)的混合物。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品，以及来自一个或多个处理步骤(如分离、离心、洗涤、孵育和/或培养)的样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过处理的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、组织)和器官样品(如脾脏)，包括由其衍生的处理样品。示例性的样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾脏、其他淋巴组织、肝脏、肺、胃、肠、结肠、肾脏、胰腺、乳房、骨、前列腺、宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。在细胞疗法(例如，过继性细胞疗法)的背景下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。在一些实施方案中，细胞可以获得自异种来源，例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪。
[0132] 在一些实施方案中，根据本文公开的方法待培养的细胞可以衍生自现有的细胞系，例如T细胞系。
[0133] 在一些实施方案中，用于培养的细胞或群体的分离可以包括一个或多个制备和分离步骤。在一些实施方案中，可以将细胞在一种或多种试剂的存在下洗涤、离心和/或孵育，例如以除去不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或除去对特定试剂敏感的细胞。在一些实施方案中，基于一种或多种特性(如密度、粘附特性、大小、敏感性、表面标记表达谱和/或对特定组分的抗性)来分离细胞。
[0134] 在从受试者收集血细胞的一些实施方案中，可以洗涤收集的血细胞，例如以除去血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或培养基中以进行后续处理步骤。在一些实施方案
中，洗涤后可以将细胞重悬于本领域已知的多种生物相容的缓冲液中。在某些实施方案中，可以除去血细胞样品的组分，并且可以将细胞重悬于培养基中。在一些实施方案中，所述方法可以包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞而从外周血制备白细胞并且离
心。
中，洗涤后可以将细胞重悬于本领域已知的多种生物相容的缓冲液中。在某些实施方案中，可以除去血细胞样品的组分，并且可以将细胞重悬于培养基中。在一些实施方案中，所述方法可以包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞而从外周血制备白细胞并且离
心。
[0135] 在一些实施方案中，所述方法可以包括基于细胞中一种或多种特定分子(如表面标记，例如表面蛋白)的表达或存在来分离不同细胞类型的步骤。在一些实施方案中，可以使用基于此类标记的用于分离的任何已知方法。在一些实施方案中，分离可以是基于亲和
力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，分离包括基于细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记特异性地
结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配
偶体结合的细胞分离已结合抗体或结合配偶体的细胞。
力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，分离包括基于细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记特异性地
结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配
偶体结合的细胞分离已结合抗体或结合配偶体的细胞。
[0136] 在一些实施方案中，可以进一步富集一种或多种亚型的T细胞。在一些实施方案中，可以通过T细胞上的一种或多种特定标记(如表面标记)的存在或水平来确定T细胞的亚
型。在一些情况下，此类标记是在某些T细胞群(如非记忆细胞)上不存在或以相对较低的水平表达，但在某些其他T细胞群(如记忆细胞)上存在或以相对较高的水平表达的那些标记。
在一个实施方案中，针对对CD45RO、CCR7、CD28、CD27、CD44、CD127和/或CD62L呈阳性或表达高表面水平的CD45RO、CCR7、CD28、CD27、CD44、CD127和/或CD62L的细胞对细胞(如CD8+细胞或T细胞，例如CD3+细胞)进行富集(即，阳性选择)，和/或针对对CD45RA呈阳性或表达高水平的CD45RA的细胞对细胞(如CD8+细胞或T细胞，例如CD3+细胞)进行耗尽(例如，阴性选择)。
在一些实施方案中，针对对CD122、CD95、CD25、CD27和/或IL7-Ra(CD127)呈阳性或表达高表面水平的CD122、CD95、CD25、CD27和/或IL7-Ra(CD127)的细胞对细胞进行富集或耗尽。在一些例子中，针对对CD45RO呈阳性(或对CD45RA呈阴性)并且对CD62L呈阳性的细胞对CD8+T细
胞进行富集。
型。在一些情况下，此类标记是在某些T细胞群(如非记忆细胞)上不存在或以相对较低的水平表达，但在某些其他T细胞群(如记忆细胞)上存在或以相对较高的水平表达的那些标记。
在一个实施方案中，针对对CD45RO、CCR7、CD28、CD27、CD44、CD127和/或CD62L呈阳性或表达高表面水平的CD45RO、CCR7、CD28、CD27、CD44、CD127和/或CD62L的细胞对细胞(如CD8+细胞或T细胞，例如CD3+细胞)进行富集(即，阳性选择)，和/或针对对CD45RA呈阳性或表达高水平的CD45RA的细胞对细胞(如CD8+细胞或T细胞，例如CD3+细胞)进行耗尽(例如，阴性选择)。
在一些实施方案中，针对对CD122、CD95、CD25、CD27和/或IL7-Ra(CD127)呈阳性或表达高表面水平的CD122、CD95、CD25、CD27和/或IL7-Ra(CD127)的细胞对细胞进行富集或耗尽。在一些例子中，针对对CD45RO呈阳性(或对CD45RA呈阴性)并且对CD62L呈阳性的细胞对CD8+T细
胞进行富集。
[0137] 在一些实施方案中，可以经由流式细胞术收集和富集(或耗尽)本文所述的所需细胞群，在流式细胞术中针对多种细胞表面标记染色的细胞在流体流中载携。在一些实施方
案中，可以经由制备规模(FACS)分类收集和富集(或耗尽)原代T细胞群或产生的T细胞。在
一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记抗体或结合配偶体，以促进分离供阳性
和/或阴性选择。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞在流体流中载
携，如通过荧光激活细胞分选(FACS)，包括制备规模(FACS)和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
案中，可以经由制备规模(FACS)分类收集和富集(或耗尽)原代T细胞群或产生的T细胞。在
一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记抗体或结合配偶体，以促进分离供阳性
和/或阴性选择。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞在流体流中载
携，如通过荧光激活细胞分选(FACS)，包括制备规模(FACS)和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
[0138] 分离不需要导致100％富集或除去特定细胞群或表达特定标记的细胞。例如，针对特定类型的细胞(如表达标记的那些)的选择或富集是指增加此类细胞的数目或百分比，但
不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。例如，在一些实施方案中，CD3+T细胞群的选择富集了所述群体，但是还可以含有一些残余或少量的其他未选择的细胞，其在一些
情况下可以包括仍存在于富集群体中的另外的非CD3+T细胞和/或非T细胞群。在一些实施
方案中，具有表面岩藻糖基化降低的T细胞可以具有人外周T细胞。
不需要导致不表达所述标记的细胞的完全不存在。例如，在一些实施方案中，CD3+T细胞群的选择富集了所述群体，但是还可以含有一些残余或少量的其他未选择的细胞，其在一些
情况下可以包括仍存在于富集群体中的另外的非CD3+T细胞和/或非T细胞群。在一些实施
方案中，具有表面岩藻糖基化降低的T细胞可以具有人外周T细胞。
[0139] 在一些实施方案中，可以在培养基中培养细胞群的步骤之前或之后进行特定类型的细胞的分离或富集。因此，在一些例子中，可以处理从样品分离的原代细胞的混合物，以分离或富集T细胞并除去(例如减少数目)其他类型的细胞或组分(例如血小板和红细胞)。
然后，富集的T细胞群可以继续培养。可替代地，在其他例子中，可以在基本上不分离或富集T细胞的情况下在培养基中培养含有T细胞和如从样品分离的其他类型的细胞或组分的细
胞混合物。在细胞群达到所需数目或基本上完成培养步骤后，可以处理培养的细胞以分离
或富集T细胞以供以后使用，例如过继性细胞疗法或癌症治疗。
然后，富集的T细胞群可以继续培养。可替代地，在其他例子中，可以在基本上不分离或富集T细胞的情况下在培养基中培养含有T细胞和如从样品分离的其他类型的细胞或组分的细
胞混合物。在细胞群达到所需数目或基本上完成培养步骤后，可以处理培养的细胞以分离
或富集T细胞以供以后使用，例如过继性细胞疗法或癌症治疗。
[0140] 在一些实施方案中，所提供的方法可以包括用于培养细胞和细胞群的各种步骤中的一个或多个。在一些实施方案中，所述方法可以包括培养从样品分离的或从现有的细胞
系获得的细胞群的一个或多个步骤。在一些可替代的实施方案中，所述方法可以包括培养
细胞群的一个或多个步骤，所述细胞群从如从样品获得和分离的或从现有的细胞系获得的
细胞混合物分离。在此类实施方案中的一些中，待培养的细胞群的大部分(例如总细胞群的至少20％或更多)可以包括从较早的细胞群分离或富集的T细胞。
系获得的细胞群的一个或多个步骤。在一些可替代的实施方案中，所述方法可以包括培养
细胞群的一个或多个步骤，所述细胞群从如从样品获得和分离的或从现有的细胞系获得的
细胞混合物分离。在此类实施方案中的一些中，待培养的细胞群的大部分(例如总细胞群的至少20％或更多)可以包括从较早的细胞群分离或富集的T细胞。
[0142] 培养步骤可以包括以下中的至少一个或多个：培养、培育、刺激、激活、繁殖，包括通过在刺激条件(例如，旨在在群体中诱导细胞增殖、扩增、激活和/或存活的条件)的存在下孵育。
[0143] 条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、试剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和旨在激活细胞的任何其他试剂))。在一些实施方案中，可以将旨在修饰细胞特性的一种或多种试剂添加到培养基中。例如，可以将一种或多种岩藻糖类似物添加到培养基中，以修饰细胞、特别是T细胞的表面岩藻糖基化的水平。
[0144] 在一些实施方案中，本文公开的方法包括通过在岩藻糖类似物的存在下培养T细胞来修饰T细胞。可以将岩藻糖类似物添加到细胞培养基中。在某些实施方案中，细胞培养基可以含有浓度为约1ng/mL至数mg/mL的培养基的岩藻糖类似物。在一些实施方案中，培养基可以含有浓度为约1ng/mL、约10ng/mL、约50ng/mL、约100ng/mL、约150ng/mL、约200ng/mL、约250ng/mL、约300ng/mL、约350ng/mL、约400ng/mL、约450ng/mL、约500ng/mL、约550ng/mL、约600ng/mL、约650ng/mL、约700ng/mL、约750ng/mL、约800ng/mL、约950ng/mL、约1μg/mL、约10μg/mL、约50μg/mL、约100μg/mL、约150μg/mL、约200μg/mL、约250μg/mL、约300μg/mL、约350μg/mL、约400μg/mL、约450μg/mL、约500μg/mL、约550μg/mL、约600μg/mL、约650μg/mL、约700μg/mL、约750μg/mL、约800μg/mL、约950μg/mL、约1mg/mL、约2mg/mL、约3mg/mL、约
4mg/mL、约5mg/mL的培养基或更大(或前述的任何中间值)的岩藻糖类似物。在一些其他实
施方案中，细胞培养基可以在细胞培养基中含有其最终浓度为约1nM至数mM的岩藻糖类似
物。在一些实施方案中，培养基可以在细胞培养基中以其最终浓度含有浓度为约1nM、约
10nM、约50nM、约100nM、约150nM、约200nM、约250nM、约300nM、约350nM、约400nM、约450nM、约500nM、约550nM、约600nM、约650nM、约700nM、约750nM、约800nM、约950nM、约1μM、约10μM、约50μM、约100μM、约150μM、约200μM、约250μM、约300μM、约350μM、约400μM、约450μM、约500μM、约550μM、约600μM、约650μM、约700μM、约750μM、约800μM、约950μM、约1mM、约2mM、约3mM、约4mM、约5mM或更大(或前述的任何中间值)的岩藻糖类似物。
4mg/mL、约5mg/mL的培养基或更大(或前述的任何中间值)的岩藻糖类似物。在一些其他实
施方案中，细胞培养基可以在细胞培养基中含有其最终浓度为约1nM至数mM的岩藻糖类似
物。在一些实施方案中，培养基可以在细胞培养基中以其最终浓度含有浓度为约1nM、约
10nM、约50nM、约100nM、约150nM、约200nM、约250nM、约300nM、约350nM、约400nM、约450nM、约500nM、约550nM、约600nM、约650nM、约700nM、约750nM、约800nM、约950nM、约1μM、约10μM、约50μM、约100μM、约150μM、约200μM、约250μM、约300μM、约350μM、约400μM、约450μM、约500μM、约550μM、约600μM、约650μM、约700μM、约750μM、约800μM、约950μM、约1mM、约2mM、约3mM、约4mM、约5mM或更大(或前述的任何中间值)的岩藻糖类似物。
[0145] 在一些实施方案中，本文公开的方法包括用一种或多种T细胞激活剂激活T细胞以产生激活的T细胞群。一种或多种合适的T细胞激活剂的任何组合都可以用于产生激活的T
细胞群，包括但不限于靶向T细胞刺激或共刺激分子的抗体或其功能片段(例如，浓度为约
1ng/mL至约100ng/mL的抗CD2抗体、抗CD3抗体、抗CD28抗体或其功能片段)、T细胞细胞因子(例如，浓度为约1ng/mL至约100ng/mL的任何分离的、野生型或重组的细胞因子，如：白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)、白细胞介素7(IL-7)、白细胞介素15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNFα))、或任何其他合适的丝裂原(例如，任何所需浓度的十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)、植物血凝素(PHA)、伴刀豆球蛋白A(conA)、脂多糖(LPS)、商陆丝裂原(PWM))或任何所需浓度的T细胞刺激或共刺激分子的天然配体。
在一些优选的实施方案中，可以根据刺激T淋巴细胞群的步骤使用抗CD3抗体(或其功能片
段)、抗CD28抗体(或其功能片段)或抗CD3和抗CD28抗体的组合。
细胞群，包括但不限于靶向T细胞刺激或共刺激分子的抗体或其功能片段(例如，浓度为约
1ng/mL至约100ng/mL的抗CD2抗体、抗CD3抗体、抗CD28抗体或其功能片段)、T细胞细胞因子(例如，浓度为约1ng/mL至约100ng/mL的任何分离的、野生型或重组的细胞因子，如：白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)、白细胞介素7(IL-7)、白细胞介素15(IL-15)、肿瘤坏死因子α(TNFα))、或任何其他合适的丝裂原(例如，任何所需浓度的十四烷酰佛波醇乙酸酯(TPA)、植物血凝素(PHA)、伴刀豆球蛋白A(conA)、脂多糖(LPS)、商陆丝裂原(PWM))或任何所需浓度的T细胞刺激或共刺激分子的天然配体。
在一些优选的实施方案中，可以根据刺激T淋巴细胞群的步骤使用抗CD3抗体(或其功能片
段)、抗CD28抗体(或其功能片段)或抗CD3和抗CD28抗体的组合。
[0146] 在一些实施方案中，在完成培养前，将细胞培养1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21天或更多天或约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、21天或更多天。在一些实施方案中，可以将细胞传代培养一次或多次，即在完成培养之前，将至少一些培养的细胞从先前的培养基转移到新的培养基中。在一些其
他实施方案中，可以在培养完成之前将细胞培养一次。在整个培养期过程中，可以向细胞提供一次或多次添加到培养基中的任何试剂。
16、17、18、19、20、21天或更多天。在一些实施方案中，可以将细胞传代培养一次或多次，即在完成培养之前，将至少一些培养的细胞从先前的培养基转移到新的培养基中。在一些其
他实施方案中，可以在培养完成之前将细胞培养一次。在整个培养期过程中，可以向细胞提供一次或多次添加到培养基中的任何试剂。
[0147] 在一些实施方案中，可用于本文的方法的培养的T细胞的浓度可以是约1.0-10.0x 106个细胞/mL。在某些实施方案中，培养的T细胞的浓度可以是约1.0-2.0x 106个细胞/mL、约1.0-3.0x 106个细胞/mL、约1.0-4.0x 106个细胞/mL、约1.0-5.0x 106个细胞/mL、约1.0-
6.0x 106个细胞/mL、约1.0-7.0x 106个细胞/mL、约1.0-8.0x 106个细胞/mL、1.0-9.0x 106个细胞/mL或约1.0-10.0x 106个细胞/mL。在某些实施方案中，培养的T细胞的浓度可以是
约1.0-2.0x 106个细胞/mL。在某些实施方案中，培养的T细胞的浓度可以是约1.0-1.2x 106个细胞/mL、约1.0-1.4x 106个细胞/mL、约1.0-1.6x 106个细胞/mL、约1.0-1.8x 106个细
6
胞/mL或约1.0-2.0x 10 个细胞/mL。在某些实施方案中，淋巴细胞的浓度可以是至少约
1.0x 106个细胞/mL、至少约1.1x 106个细胞/mL、至少约1.2x 106个细胞/mL、至少约1.3x
106个细胞/mL、至少约1.4x 106个细胞/mL、至少约1.5x 106个细胞/mL、至少约1.6x 106个细胞/mL、至少约1.7x 106个细胞/mL、至少约1.8x 106个细胞/mL、至少约1.9x 106个细胞/
6 6 6
mL、至少约2.0x 10个细胞/mL、至少约4.0x 10 个细胞/mL、至少约6.0x 10 个细胞/mL、至少约8.0x 106个细胞/mL或至少约10.0x 106个细胞/mL。
6.0x 106个细胞/mL、约1.0-7.0x 106个细胞/mL、约1.0-8.0x 106个细胞/mL、1.0-9.0x 106个细胞/mL或约1.0-10.0x 106个细胞/mL。在某些实施方案中，培养的T细胞的浓度可以是
约1.0-2.0x 106个细胞/mL。在某些实施方案中，培养的T细胞的浓度可以是约1.0-1.2x 106个细胞/mL、约1.0-1.4x 106个细胞/mL、约1.0-1.6x 106个细胞/mL、约1.0-1.8x 106个细
6
胞/mL或约1.0-2.0x 10 个细胞/mL。在某些实施方案中，淋巴细胞的浓度可以是至少约
1.0x 106个细胞/mL、至少约1.1x 106个细胞/mL、至少约1.2x 106个细胞/mL、至少约1.3x
106个细胞/mL、至少约1.4x 106个细胞/mL、至少约1.5x 106个细胞/mL、至少约1.6x 106个细胞/mL、至少约1.7x 106个细胞/mL、至少约1.8x 106个细胞/mL、至少约1.9x 106个细胞/
6 6 6
mL、至少约2.0x 10个细胞/mL、至少约4.0x 10 个细胞/mL、至少约6.0x 10 个细胞/mL、至少约8.0x 106个细胞/mL或至少约10.0x 106个细胞/mL。
[0148] 通过上述方法培养的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。在一些方面，降低的表面岩藻糖基化可以指代降低或抑制天然存在于正常T细胞表面上的岩藻糖基化的水平。
在一些实施方案中，T细胞上的表面岩藻糖基化的降低不包括用人工提供给T细胞的岩藻糖
类似物取代T细胞表面上的天然存在的岩藻糖。
在一些实施方案中，T细胞上的表面岩藻糖基化的降低不包括用人工提供给T细胞的岩藻糖
类似物取代T细胞表面上的天然存在的岩藻糖。
[0149] 通过上述方法培养的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。在一些实施方案中，与在不存在岩藻糖类似物的情况下培养的T细胞(即对照T细胞)的平均表面岩藻糖基化相
比，通过所提供的方法培养和产生的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以降低至少约5％。
在一些实施方案中，相对于在不存在岩藻糖类似物的情况下培养的对照T细胞的平均表面
岩藻糖基化，通过所提供的方法培养和产生的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以降低至
少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约
60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约99％、约100％。T细胞上的表面岩藻糖基化的水平可以通过本领域可用的技术(例如流式细胞术)来确定。
比，通过所提供的方法培养和产生的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以降低至少约5％。
在一些实施方案中，相对于在不存在岩藻糖类似物的情况下培养的对照T细胞的平均表面
岩藻糖基化，通过所提供的方法培养和产生的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以降低至
少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约
60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约99％、约100％。T细胞上的表面岩藻糖基化的水平可以通过本领域可用的技术(例如流式细胞术)来确定。
[0150] 在一些实施方案中，可以完成培养步骤，并且培养的细胞可以进行到收集(或收获)至少一些培养的细胞的步骤。当培养的细胞的数目达到所需数目时，一旦超过计划的培养期，和/或如果培养的T细胞上的平均表面岩藻糖基化达到所需水平(例如相对于对照T细
胞的平均表面岩藻糖基化降低至少5％或更多)，则可以完成培养步骤。
胞的平均表面岩藻糖基化降低至少5％或更多)，则可以完成培养步骤。
[0151] 完成培养步骤后，可以通过本领域可用的技术收获细胞。收获步骤可以包括一个或多个步骤，如离心、洗涤、除去不需要的细胞或组分以及分离所需类型的细胞，如本文其他地方所述。
[0152] 在一些实施方案中，可以任选地冻存通过本文所述的方法产生的包括具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的细胞群，使得可以在以后的日子使用所述细胞，例如用于在过继性细胞疗法或癌症治疗中给予、或用于所述疗法或治疗的药物组合物的配制。这样一种方
法可以包括以下步骤：用稀释液洗涤并且浓缩所需的T细胞(即具有降低的表面岩藻糖基化
的T细胞)群。在一些实施方案中，稀释液可以含有生理盐水、0.9％盐水、勃脉力A
(PlasmaLyte A)、5％右旋糖/0.45％NaCl盐水溶液、人血清白蛋白(HSA)或其组合。在一些实施方案中，可以将HSA添加到洗涤并浓缩的细胞中，以改善解冻后的细胞活力和细胞回
收。在另一个实施方案中，洗涤液可以是生理盐水，并且洗涤并浓缩的细胞可以补充有HSA(5％)。在一些实施方案中，可以产生冻存混合物。冻存混合物可以包括在稀释液和合适的冻存液中的稀释的细胞群。在一些方面，冻存液可以是与产生的T细胞的稀释液混合的本领域可用的任何合适的冻存液。在一些实施方案中，所述方法还包括冷冻冻存混合物的步骤。
在一方面，使用限定的冷冻循环以任何所需的细胞浓度(例如在约106至108/ml的冻存混合
物之间)将冻存混合物在控制速率的冷冻机中冷冻。所述方法还可以包括将冻存混合物储
存在气相液氮中的步骤。
法可以包括以下步骤：用稀释液洗涤并且浓缩所需的T细胞(即具有降低的表面岩藻糖基化
的T细胞)群。在一些实施方案中，稀释液可以含有生理盐水、0.9％盐水、勃脉力A
(PlasmaLyte A)、5％右旋糖/0.45％NaCl盐水溶液、人血清白蛋白(HSA)或其组合。在一些实施方案中，可以将HSA添加到洗涤并浓缩的细胞中，以改善解冻后的细胞活力和细胞回
收。在另一个实施方案中，洗涤液可以是生理盐水，并且洗涤并浓缩的细胞可以补充有HSA(5％)。在一些实施方案中，可以产生冻存混合物。冻存混合物可以包括在稀释液和合适的冻存液中的稀释的细胞群。在一些方面，冻存液可以是与产生的T细胞的稀释液混合的本领域可用的任何合适的冻存液。在一些实施方案中，所述方法还包括冷冻冻存混合物的步骤。
在一方面，使用限定的冷冻循环以任何所需的细胞浓度(例如在约106至108/ml的冻存混合
物之间)将冻存混合物在控制速率的冷冻机中冷冻。所述方法还可以包括将冻存混合物储
存在气相液氮中的步骤。
[0153] 在一些实施方案中，通过本文提供的方法产生的T细胞(例如具有表面岩藻糖基化降低的T细胞)可以用于过继性细胞疗法或癌症治疗中。例如，可以向需要所述疗法或治疗
的受试者给予产生的T细胞。在一些实施方案中，通过本文提供的方法产生的T细胞(例如具有表面岩藻糖基化降低的T细胞)可以用于配制药物组合物，所述药物组合物可以用于过继
性细胞疗法或癌症治疗中。
的受试者给予产生的T细胞。在一些实施方案中，通过本文提供的方法产生的T细胞(例如具有表面岩藻糖基化降低的T细胞)可以用于配制药物组合物，所述药物组合物可以用于过继
性细胞疗法或癌症治疗中。
[0154] II-2.体内产生方法
[0155] 在一些方面，本文提供了产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的体内方法。所述方法可以包括向动物提供岩藻糖类似物以及从所述动物获得具有降低的表面岩藻糖基
化的T细胞。相对于未提供岩藻糖类似物的动物体内存在的或从中获得的T细胞，通过这些
方法产生的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。通过本文公开的方法产生的此类T细胞
可以用于治疗目的，如过继性细胞疗法或癌症治疗。因此，至少在一些实施方案中，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞称为“治疗性T细胞”。
化的T细胞。相对于未提供岩藻糖类似物的动物体内存在的或从中获得的T细胞，通过这些
方法产生的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。通过本文公开的方法产生的此类T细胞
可以用于治疗目的，如过继性细胞疗法或癌症治疗。因此，至少在一些实施方案中，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞称为“治疗性T细胞”。
[0156] 在一些实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物可以是式(I)或(II)：
[0157]
[0158] 或其药学上可接受的盐或溶剂化物形式，其中式(I)或(II)各自可以是α或β端基异构体或相应的醛糖形式；
[0159] 其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，
[0160] 或者
[0161] 其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是炔基。
[0162] 在一些实施方案中，R2是-F。
[0163] 在一些实施方案中，R5是-C≡CH。
[0164] 在一些实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物具有式(I)或(II)，其中R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0165] 在一些实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物具有式(I)或(II)，其中R2是-F；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3，或者其中R1、R2、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0166] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R2是卤素；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R2是-F；R1、R3和R4各自独立地是-OH或可水解的酯基；并且R5是-CH3。
[0167] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH或可水解的酯基；并且R5是-C≡CH。
[0168] 在一些实施方案中，可水解的酯基是-OC(O)C1-C10烷基。在一些选择的实施方案中，可水解的酯基是-OC(O)CH3。
[0169] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R2是-F，R1、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R2是-F，R1、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R2是-F，并且R1、R3和R4各自是-OH。
[0170] 在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R5是-C≡CH，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)C1-C10烷基。在式(I)或(II)的一些选择的实施方案中，其中R5是-C≡CH，R1、R2、R3和R4各自独立地选自-OH和-OC(O)CH3。在式(I)或(II)的一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OH。在式(I)或(II)的另一个特定的实施方案中，R5是-C≡CH，并且R1、R2、R3和R4各自是-OAc。
[0171] 在一些选择的实施方案中，所述方法中使用的岩藻糖类似物具有式：
[0172]
[0173] 或其醛糖形式，其中R1、R2、R3和R4各自是如本文所定义和描述的。
[0174] 在一些选择的实施方案中，岩藻糖类似物是2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖。
[0175] 在一些选择的实施方案中，岩藻糖类似物是炔基岩藻糖过乙酸酯。炔基岩藻糖过乙酸酯可以是炔基岩藻糖四乙酸酯、炔基岩藻糖三乙酸酯、炔基岩藻糖二乙酸酯、炔基岩藻糖单乙酸酯或其组合。在一个例示的实施方案中，岩藻糖类似物是(3S,4R,5R,6S)-6-乙炔
基四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四酯或5-((S)-1-羟基丙-2-炔-1-基)四氢呋喃-2,3,4-
三乙酸三酯。
基四氢-2H-吡喃-2,3,4,5-四乙酸四酯或5-((S)-1-羟基丙-2-炔-1-基)四氢呋喃-2,3,4-
三乙酸三酯。
[0176] 在各种实施方案中的任一个中，式(I)和(II)的岩藻糖类似物的内环式环氧可以被硫替代。
[0177] 本文提供的方法可以含有向动物提供岩藻糖类似物的步骤。可以经由各种给予方式向动物提供岩藻糖类似物。在一些实施方案中，可以使用标准给予技术(包括口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、经皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂给予)向动物给予岩藻糖类似物。在一些实施方案中，肠胃外给予细胞群。如本文所用，术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、经直肠、经阴道和腹膜内给予。在一些实施方案中，使用外周全身递送通过静脉内、腹膜内或皮下注射向受试者给予细胞群。在一些实施方案中，可以向动物口服给予岩藻糖类
似物。
似物。
[0178] 在一些实施方案中，本文公开的方法产生具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞，其可以用于需要这种疗法或治疗的受试者的过继性细胞疗法或癌症治疗中。
[0179] 在一些实施方案中，细胞疗法(例如，使用T细胞的过继性细胞疗法或癌症治疗)可以通过自体转移进行，在自体转移中从将接受所述细胞疗法或治疗的受试者或从源自这样
一名受试者的样品分离和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，可以向需要治疗的受试者(例如，患者)提供或给予岩藻糖类似物，并且在分离和处理后，向同一受试者给予所得的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。
一名受试者的样品分离和/或以其他方式制备细胞。因此，在一些方面，可以向需要治疗的受试者(例如，患者)提供或给予岩藻糖类似物，并且在分离和处理后，向同一受试者给予所得的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。
[0180] 在一些实施方案中，细胞疗法(例如，使用T细胞的过继性细胞疗法或癌症治疗)可以通过同种异体转移进行，在同种异体转移中从将要接受或最终接受所述细胞疗法或治疗
的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中，然后向同一物种的不同受试者(例如，第二受试者)给予细胞。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相
似的。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是不同的。在一些实施方案中，第一和第二受试者不属于同一物种，例如第一受试者是人，而第二受试者是非人动物。可以分离和处理从第二受试者获得的T细胞以用于第一受试者的疗法或治疗。
的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离和/或以其他方式制备细胞。在此类实施方案中，然后向同一物种的不同受试者(例如，第二受试者)给予细胞。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是相
似的。在一些实施方案中，第一和第二受试者在遗传上是不同的。在一些实施方案中，第一和第二受试者不属于同一物种，例如第一受试者是人，而第二受试者是非人动物。可以分离和处理从第二受试者获得的T细胞以用于第一受试者的疗法或治疗。
[0181] 可以向动物提供有效量的岩藻糖类似物。有效量可以指代岩藻糖类似物的足以提供所需结果(即具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的产生)的量。在一些实施方案中，岩藻糖类似物的有效量可以在约1至约500mg的岩藻糖类似物/kg的体重的范围内。在口服提供
或给予(例如经食物或水喂食)岩藻糖类似物的一些实施方案中，向动物给予的岩藻糖类似
物的口服剂量可以是约1mg/kg至约1g/kg的动物体重，更通常是约5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg至约1g/kg的动物体重。在一些方面，向动物给予的剂量是每天约1g、约5g或约10g至约150g，或每天从约1g、约5g、约10g、约15g或约20g至约60g。在一些实施方案中，岩藻糖类似物能以任何所需量与食物或水一起提供，所述量适合于在用岩
藻糖类似物喂食的动物体内诱导表面岩藻糖基化的降低。
或给予(例如经食物或水喂食)岩藻糖类似物的一些实施方案中，向动物给予的岩藻糖类似
物的口服剂量可以是约1mg/kg至约1g/kg的动物体重，更通常是约5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg或50mg/kg至约1g/kg的动物体重。在一些方面，向动物给予的剂量是每天约1g、约5g或约10g至约150g，或每天从约1g、约5g、约10g、约15g或约20g至约60g。在一些实施方案中，岩藻糖类似物能以任何所需量与食物或水一起提供，所述量适合于在用岩
藻糖类似物喂食的动物体内诱导表面岩藻糖基化的降低。
[0182] 在一些实施方案中，可以将本文所述的方法中使用的岩藻糖类似物与一种或多种另外的药学上可接受的赋形剂或载体或同时或以任何顺序依次向动物共同给予。
[0183] 在一些实施方案中，岩藻糖类似物或其组合物可以在一定时间内给予，例如有无中断的一到数天、一到数周、一到数月或更长时间。在一些实施方案中，岩藻糖类似物或其组合物能以每天、每周、每两周或每月的时间表给予。
[0184] 在一些实施方案中，当实现所需结果(例如，相对于对照T细胞，从动物获得的T细胞的平均表面岩藻糖基化降低任何数目的百分比，例如在约5％至约95％之间)时，可以完
成向动物提供或给予岩藻糖类似物。
成向动物提供或给予岩藻糖类似物。
[0185] 本文提供的方法可以包括从提供岩藻糖类似物的动物获得细胞混合物(例如T细胞)的步骤。获得的细胞可以包括具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。
[0186] 通过上述方法培养的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。在一些方面，降低的表面岩藻糖基化可以指代降低或抑制天然存在于正常T细胞表面上的岩藻糖基化的水平。
在一些实施方案中，T细胞上的表面岩藻糖基化的降低不包括用人工提供给T细胞的岩藻糖
类似物取代T细胞表面上的天然存在的岩藻糖。
在一些实施方案中，T细胞上的表面岩藻糖基化的降低不包括用人工提供给T细胞的岩藻糖
类似物取代T细胞表面上的天然存在的岩藻糖。
[0187] 通过上述方法产生的T细胞可以具有降低的表面岩藻糖基化。在一些实施方案中，与未提供岩藻糖类似物的动物体内存在的或从中获得的T细胞(即对照T细胞)的平均表面
岩藻糖基化相比，从提供岩藻糖类似物的动物获得的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以
降低至少约5％。在一些其他实施方案中，相对于在测试或获得对照T细胞前至少数小时、数天、数周、数月或更长时间未提供岩藻糖类似物的动物体内存在的或从中获得的对照T细胞的平均表面岩藻糖基化，从提供岩藻糖类似物的动物获得的T细胞上的平均表面岩藻糖基
化可以降低至少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约99％、约100％。T细胞上的表面岩藻糖基化的水平可以通过本领域可用的技术(例如流式细胞术)
来确定。
岩藻糖基化相比，从提供岩藻糖类似物的动物获得的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以
降低至少约5％。在一些其他实施方案中，相对于在测试或获得对照T细胞前至少数小时、数天、数周、数月或更长时间未提供岩藻糖类似物的动物体内存在的或从中获得的对照T细胞的平均表面岩藻糖基化，从提供岩藻糖类似物的动物获得的T细胞上的平均表面岩藻糖基
化可以降低至少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约99％、约100％。T细胞上的表面岩藻糖基化的水平可以通过本领域可用的技术(例如流式细胞术)
来确定。
[0188] 在一些实施方案中，可以从样品(如来自或源自提供岩藻糖类似物的动物的生物样品)分离T细胞和细胞群。样品可以包括组织、流体和直接取自所述动物的其他样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过处理的样品。生物样品包括但不限于体液
(如血液、血浆、血清、组织)和器官样品(如脾脏)，包括由其衍生的处理样品。示例性的样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾脏、其他淋巴组织、肝脏、肺、胃、肠、结肠、肾脏、胰腺、乳房、骨、前列腺、宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。
(如血液、血浆、血清、组织)和器官样品(如脾脏)，包括由其衍生的处理样品。示例性的样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾脏、其他淋巴组织、肝脏、肺、胃、肠、结肠、肾脏、胰腺、乳房、骨、前列腺、宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。
[0189] 在一些实施方案中，从动物获得T细胞和细胞群后，可能会有一个或多个处理步骤，如分离、离心、洗涤、孵育和/或培养获得的细胞。在一些实施方案中，可以处理获得的含有T细胞的细胞群，以分离或富集T细胞并除去(或减少)许多其他类型的细胞(例如红细胞)
和/或组分(例如血小板)。在一些实施方案中，可以使用本领域可用的技术在细胞培养基中培养获得的细胞群或进一步富集的T细胞，以维持细胞和/或增加足以供以后使用(例如过
继性细胞疗法或癌症治疗、或药物组合物的配制)的细胞数目。在一些实施方案中，例如通过本领域可用的或如本文其他地方所述的冻存技术，可以储存如从动物获得的或从动物分
离后进一步培养的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞以供以后使用。
和/或组分(例如血小板)。在一些实施方案中，可以使用本领域可用的技术在细胞培养基中培养获得的细胞群或进一步富集的T细胞，以维持细胞和/或增加足以供以后使用(例如过
继性细胞疗法或癌症治疗、或药物组合物的配制)的细胞数目。在一些实施方案中，例如通过本领域可用的或如本文其他地方所述的冻存技术，可以储存如从动物获得的或从动物分
离后进一步培养的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞以供以后使用。
[0190] 在一些实施方案中，通过本文所述的体内产生方法产生的具有表面岩藻糖基化降低的T细胞可以用于过继性细胞疗法或癌症治疗中。在一些实施方案中，可以向需要这种疗法或治疗的受试者给予如从动物获得的或从动物分离后进一步培养的产生的T细胞。在一
些实施方案中，如从动物获得的或从动物分离后进一步培养的产生的T细胞可以用于配制
药物组合物，所述药物组合物可以用于过继性细胞疗法或癌症治疗中。在一些实施方案中，所述动物是人。
些实施方案中，如从动物获得的或从动物分离后进一步培养的产生的T细胞可以用于配制
药物组合物，所述药物组合物可以用于过继性细胞疗法或癌症治疗中。在一些实施方案中，所述动物是人。
[0191] 本文所述的产生方法还可以包括修饰T细胞群的步骤。例如，可以用包含编码细胞表面受体的核酸分子的病毒载体转导T细胞群，以产生经转导的T细胞群。数种重组病毒已
经被用作病毒载体，以将遗传材料递送到细胞中。可以根据转导步骤使用的病毒载体可以
是任何嗜亲性或双嗜性病毒载体，包括但不限于重组逆转录病毒载体、重组慢病毒载体、重组腺病毒载体和重组腺相关病毒(AAV)载体。根据本领域已知的方法，可以将用于使病毒载体生长的任何合适的生长培养基和/或补充剂用于病毒载体接种物中。在一个实施方案中，病毒载体包含编码细胞表面受体的异源基因。在一个特定的实施方案中，细胞表面受体能
够结合靶细胞表面上(例如，肿瘤细胞表面上)的抗原。
经被用作病毒载体，以将遗传材料递送到细胞中。可以根据转导步骤使用的病毒载体可以
是任何嗜亲性或双嗜性病毒载体，包括但不限于重组逆转录病毒载体、重组慢病毒载体、重组腺病毒载体和重组腺相关病毒(AAV)载体。根据本领域已知的方法，可以将用于使病毒载体生长的任何合适的生长培养基和/或补充剂用于病毒载体接种物中。在一个实施方案中，病毒载体包含编码细胞表面受体的异源基因。在一个特定的实施方案中，细胞表面受体能
够结合靶细胞表面上(例如，肿瘤细胞表面上)的抗原。
[0192] IV.用于过继性细胞疗法或癌症治疗的药物组合物
[0193] 通过上述产生方法产生的具有降低的表面岩藻糖基化的细胞群或T细胞可以配制用于过继性细胞疗法或癌症治疗。所需T细胞(或治疗性T细胞)(即具有降低的表面岩藻糖
基化的T细胞或具有此类T细胞的细胞混合物)可以配制为药物组合物，所述药物组合物包
含治疗或预防有效量的所需T细胞和一种或多种药学上相容的(可接受的)成分。在一些方
面，可以提供治疗性T细胞和药物赋形剂的药物组合物，在其中有效量的T细胞与适合于向
受试者给予的赋形剂混合。在优选的方面，T治疗性细胞及其药物组合物配制用于向人给
予。因此，本公开文本提供了药物组合物，所述药物组合物包含被配制用于向人给予的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。所配制的组合物通常可以包含一种或多种药学上相容的
(可接受的)赋形剂或载体。
基化的T细胞或具有此类T细胞的细胞混合物)可以配制为药物组合物，所述药物组合物包
含治疗或预防有效量的所需T细胞和一种或多种药学上相容的(可接受的)成分。在一些方
面，可以提供治疗性T细胞和药物赋形剂的药物组合物，在其中有效量的T细胞与适合于向
受试者给予的赋形剂混合。在优选的方面，T治疗性细胞及其药物组合物配制用于向人给
予。因此，本公开文本提供了药物组合物，所述药物组合物包含被配制用于向人给予的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。所配制的组合物通常可以包含一种或多种药学上相容的
(可接受的)赋形剂或载体。
[0194] 用于制备药物组合物的材料在所使用的量上可以是无毒的。对于本领域普通技术人员而言将清楚的是，药物组合物中的一种或多种活性成分的最佳剂量将取决于多种因
素。相关因素包括但不限于动物的类型(例如，人)、给予方式、所采用的组合物和所治疗的疾病或病症的严重程度。
素。相关因素包括但不限于动物的类型(例如，人)、给予方式、所采用的组合物和所治疗的疾病或病症的严重程度。
[0195] 根据本文的公开文本的药物组合物可以呈液体形式，例如酏剂、糖浆剂、溶液剂、乳液剂或悬浮液剂。在一些实施方案中，所述液体可以用于通过注射递送。在用于通过注射给予的组合物中(如上所述)，还可以包括表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一种或多种。
[0196] 本文所述的药物组合物可以呈允许将组合物向动物(例如，人)给予的任何形式。典型的给予途径包括但不限于口服、肠胃外和舌下。肠胃外给予包括皮下注射、腹膜内注
射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。可以配制这些药物组合物，以允许在向需要所述疗法或治疗的受试者给予所述组合物后，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞是有效的。
射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。可以配制这些药物组合物，以允许在向需要所述疗法或治疗的受试者给予所述组合物后，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞是有效的。
[0197] V.治疗方法
[0198] 在一些方面，本文提供了向受试者提供过继性细胞疗法的方法。所述方法可以包括向需要细胞疗法的受试者给予具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。
[0199] 在一些实施方案中，本文公开的方法向受试者提供过继性细胞疗法。向受试者提供过继性细胞疗法可以包括向受试者给予细胞混合物的步骤，所述细胞混合物包括具有降
低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)。在一些实施方案中，所述受试者可能需要
这种疗法。在一些实施方案中，向受试者提供过继性细胞疗法还可以包括根据本文其他地
方所述的任何体外和体内方法产生用于所述疗法的治疗性T细胞的步骤。
低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)。在一些实施方案中，所述受试者可能需要
这种疗法。在一些实施方案中，向受试者提供过继性细胞疗法还可以包括根据本文其他地
方所述的任何体外和体内方法产生用于所述疗法的治疗性T细胞的步骤。
[0200] 在一些实施方案中，过继性细胞疗法可以选自肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)免疫疗TM
法、自体细胞疗法、工程化自体细胞疗法(eACT )、同种异体T细胞移植、非T细胞移植及其任何组合。在一些实施方案中，过继性细胞疗法可以广泛地包括选择、体外富集以及向患者给予识别并且能够结合肿瘤细胞的自体或同种异体T细胞的任何方法。TIL免疫疗法是这样一
种类型的过继性T细胞疗法，其中分离、体外富集并且向患者给予能够浸润肿瘤组织的淋巴细胞。TIL细胞可以是自体的或同种异体的。自体细胞疗法是这样一种过继性T细胞疗法，其涉及从患者分离能够靶向肿瘤细胞的T细胞、体外富集T细胞以及再向同一患者给予T细胞。
同种异体T细胞移植可以包括离体扩增的天然存在的T细胞或基因工程化的T细胞的移植。
工程化自体细胞疗法是这样一种过继性T细胞疗法，其中分离患者自身的淋巴细胞，对其进行基因修饰以表达肿瘤靶向分子，体外扩增，并且再向所述患者给予。非T细胞移植可以包括用非T细胞(如但不限于自然杀伤(NK)细胞)的自体或同种异体疗法。
法、自体细胞疗法、工程化自体细胞疗法(eACT )、同种异体T细胞移植、非T细胞移植及其任何组合。在一些实施方案中，过继性细胞疗法可以广泛地包括选择、体外富集以及向患者给予识别并且能够结合肿瘤细胞的自体或同种异体T细胞的任何方法。TIL免疫疗法是这样一
种类型的过继性T细胞疗法，其中分离、体外富集并且向患者给予能够浸润肿瘤组织的淋巴细胞。TIL细胞可以是自体的或同种异体的。自体细胞疗法是这样一种过继性T细胞疗法，其涉及从患者分离能够靶向肿瘤细胞的T细胞、体外富集T细胞以及再向同一患者给予T细胞。
同种异体T细胞移植可以包括离体扩增的天然存在的T细胞或基因工程化的T细胞的移植。
工程化自体细胞疗法是这样一种过继性T细胞疗法，其中分离患者自身的淋巴细胞，对其进行基因修饰以表达肿瘤靶向分子，体外扩增，并且再向所述患者给予。非T细胞移植可以包括用非T细胞(如但不限于自然杀伤(NK)细胞)的自体或同种异体疗法。
[0201] 在一些方面，本文提供了治疗癌症的方法。所述方法可以包括向需要这种治疗的受试者给予具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞。在一些实施方案中，所述方法还可以包括根据本文其他地方所述的任何体外和体内方法产生用于所述治疗的治疗性T细胞的步骤。
[0202] 在一些方面，根据本文公开的方法用于过继性细胞疗法或癌症治疗中的T细胞是治疗性T细胞，其相对于对照T细胞具有降低的表面岩藻糖基化。在一些方面，降低的表面岩藻糖基化可以指代降低或抑制天然存在于正常T细胞表面上的岩藻糖基化的水平。在一些
实施方案中，T细胞上的表面岩藻糖基化的降低不包括用人工提供给T细胞的岩藻糖类似物
取代T细胞表面上的天然存在的岩藻糖。
实施方案中，T细胞上的表面岩藻糖基化的降低不包括用人工提供给T细胞的岩藻糖类似物
取代T细胞表面上的天然存在的岩藻糖。
[0203] 如先前所述，在一些实施方案中，用于过继性细胞疗法或癌症治疗中的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞可以源自将接受所述疗法或治疗的同一受试者(即自体疗法或
治疗)，或者源自与将接受所述疗法或治疗的受试者不同的受试者(即同种异体疗法或治
疗)。
治疗)，或者源自与将接受所述疗法或治疗的受试者不同的受试者(即同种异体疗法或治
疗)。
[0204] 在一些方面，根据本文公开的方法用于过继性细胞疗法或癌症治疗中的T细胞是治疗性T细胞，其相对于对照T细胞具有降低的表面岩藻糖基化。在一些实施方案中，特别是在向人类患者给予自体疗法或治疗的情况下，可以根据本文公开的体外或体内方法来处理
源自同一患者的T细胞，以产生治疗性T细胞。在此类实施方案中，对照T细胞可以指代(1)正常的健康人体内存在的或从中获得的T细胞群，或(2)在产生治疗性T细胞之前同一患者体
内存在的或从中获得的T细胞群。在一些其他实施方案中，特别是在向人类患者给予同种异体疗法或治疗的情况下，可以根据本文公开的体外或体内方法来处理源自不是患者的供体
的T细胞，以产生治疗性T细胞。在此类实施方案中，对照T细胞可以指代在产生治疗性T细胞之前供体体内存在的或从中获得的T细胞群。在一些其他实施方案中，在向人类患者给予同种异体疗法或治疗，并且用于所述疗法或治疗中的治疗性T细胞源自非人动物(即供体动
物)的情况下，对照T细胞可以指代(1)正常的健康非人动物体内存在的或从中获得的T细胞
群，或(2)在产生治疗性T细胞之前供体动物体内存在的或从中获得的T细胞群。
源自同一患者的T细胞，以产生治疗性T细胞。在此类实施方案中，对照T细胞可以指代(1)正常的健康人体内存在的或从中获得的T细胞群，或(2)在产生治疗性T细胞之前同一患者体
内存在的或从中获得的T细胞群。在一些其他实施方案中，特别是在向人类患者给予同种异体疗法或治疗的情况下，可以根据本文公开的体外或体内方法来处理源自不是患者的供体
的T细胞，以产生治疗性T细胞。在此类实施方案中，对照T细胞可以指代在产生治疗性T细胞之前供体体内存在的或从中获得的T细胞群。在一些其他实施方案中，在向人类患者给予同种异体疗法或治疗，并且用于所述疗法或治疗中的治疗性T细胞源自非人动物(即供体动
物)的情况下，对照T细胞可以指代(1)正常的健康非人动物体内存在的或从中获得的T细胞
群，或(2)在产生治疗性T细胞之前供体动物体内存在的或从中获得的T细胞群。
[0205] 在一些实施方案中，与对照T细胞的平均表面岩藻糖基化相比，根据本文公开的方法用于过继性细胞疗法或癌症治疗中的T治疗性细胞上的平均表面岩藻糖基化可以降低至
少约5％。在一些其他实施方案中，相对于对照T细胞的平均表面岩藻糖基化，从提供岩藻糖类似物的动物获得的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以降低至少约10％、约15％、约
20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约
75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约99％、约100％。T细胞上的表面岩藻糖基化的水平可以通过本领域可用的技术(例如流式细胞术)来确定。
少约5％。在一些其他实施方案中，相对于对照T细胞的平均表面岩藻糖基化，从提供岩藻糖类似物的动物获得的T细胞上的平均表面岩藻糖基化可以降低至少约10％、约15％、约
20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约
75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约97％、约99％、约100％。T细胞上的表面岩藻糖基化的水平可以通过本领域可用的技术(例如流式细胞术)来确定。
[0206] 在一些方面，本文公开的用于提供过继性细胞疗法或治疗癌症的方法旨在治疗任何疾病、病症和障碍，包括但不限于乳腺癌、食管癌、结直肠癌、胰腺癌、胃(stomach)癌、GIST癌、肝细胞癌、肝癌、肺癌、小细胞肺癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、膀胱癌、肾癌、结肠癌、小肠癌、大肠癌、胃癌(gastric cancer)、淋巴瘤、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、恶性黑素瘤、葡萄膜黑素瘤、多发性骨髓瘤、间皮瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、胶质母细胞瘤、肉瘤、神经胶质瘤或其他脑瘤、头/颈癌、其他胃肠道和生殖细胞肿瘤、血液恶性肿瘤、白血病、淋巴瘤例如慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、ALL、非霍奇金淋巴瘤、急性骨髓性白血病、多发性骨髓瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、惰性B细胞淋巴瘤、B细胞恶性肿瘤、皮肤癌(包括黑素瘤)、骨癌、上皮癌、肾细胞癌、胰腺癌、霍奇金淋巴瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、尤文肉瘤、髓母细胞瘤、滑膜肉瘤和/或间皮瘤。
[0207] 在一些方面，本文公开的用于提供过继性细胞疗法或治疗癌症的方法具有向受试者给予具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)的步骤。在一些实施方案中，
治疗性T细胞可以任选地与一种或多种药学上可接受的成分一起配制成如本文所述的待向
动物(例如，人)给予的药物组合物形式。在一些方面，可以给予(不限于口服、肠胃外和舌下)治疗性T细胞或其药物组合物。肠胃外给予包括皮下注射、腹膜内注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。可以配制这些药物组合物，以允许在向动物给予所述组合物后，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞是有效的。
治疗性T细胞可以任选地与一种或多种药学上可接受的成分一起配制成如本文所述的待向
动物(例如，人)给予的药物组合物形式。在一些方面，可以给予(不限于口服、肠胃外和舌下)治疗性T细胞或其药物组合物。肠胃外给予包括皮下注射、腹膜内注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。可以配制这些药物组合物，以允许在向动物给予所述组合物后，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞是有效的。
[0208] 在一些实施方案中，治疗性T细胞或含有治疗性T细胞的药物组合物可以在癌细胞的部位或附近给予(例如注射)(即局部给予)。例如，如果在器官(例如肝脏)中发现癌症，则可以将药物组合物注射到肝脏中发现癌细胞的位置或癌细胞附近(例如在离癌细胞边界数
毫米到数厘米之间)。在可替代的实施方案中，可以向患者的循环系统(例如血管)给予(例
如注射)治疗性T细胞或药物组合物(即全身给予)，使得治疗性T细胞可以经由患者的循环
系统到达病理细胞存在的一个或多个靶部位。在一些实施方案中，治疗性T细胞还可以具有特异性地结合待靶向的细胞或疾病(如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原的组分。因此，
在经由循环系统递送后，治疗性T细胞可以特异性地到达靶细胞并表现出对靶细胞的治疗
效果。
毫米到数厘米之间)。在可替代的实施方案中，可以向患者的循环系统(例如血管)给予(例
如注射)治疗性T细胞或药物组合物(即全身给予)，使得治疗性T细胞可以经由患者的循环
系统到达病理细胞存在的一个或多个靶部位。在一些实施方案中，治疗性T细胞还可以具有特异性地结合待靶向的细胞或疾病(如肿瘤细胞或癌细胞)的细胞表面抗原的组分。因此，
在经由循环系统递送后，治疗性T细胞可以特异性地到达靶细胞并表现出对靶细胞的治疗
效果。
[0209] 在一些实施方案中，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)或其药物组合物能以有效获得所需结果或效果(例如治疗疾病或病症)的量(如药学有效量)给予。
因此，在一些实施方案中，给予方法包括向需要过继性细胞疗法或癌症治疗的受试者以有
效量给予治疗性T细胞或其药物组合物。在一些实施方案中，治疗功效可以通过定期评估所治疗的受试者来监测。对于数天或更长时间的重复给予，取决于病症，重复治疗直至出现所需疾病症状的抑制。在一些实施方案中，其他剂量方案可能是有用的并且可以被确定。所需剂量可以通过治疗性T细胞或其药物组合物的单次给予、通过多次给予或通过连续给予来
递送。
因此，在一些实施方案中，给予方法包括向需要过继性细胞疗法或癌症治疗的受试者以有
效量给予治疗性T细胞或其药物组合物。在一些实施方案中，治疗功效可以通过定期评估所治疗的受试者来监测。对于数天或更长时间的重复给予，取决于病症，重复治疗直至出现所需疾病症状的抑制。在一些实施方案中，其他剂量方案可能是有用的并且可以被确定。所需剂量可以通过治疗性T细胞或其药物组合物的单次给予、通过多次给予或通过连续给予来
递送。
[0210] 在一些实施方案中，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)或其药物组合物能以有效获得所需结果或效果(例如治疗需要这种疗法或治疗的受试者的疾病或
病症)的量给予。与给予之前相比，旨在通过根据本文所述的方法给予治疗性T细胞或其药
物组合物实现的所需结果或效果可以包括一种或多种以下结果：
病症)的量给予。与给予之前相比，旨在通过根据本文所述的方法给予治疗性T细胞或其药
物组合物实现的所需结果或效果可以包括一种或多种以下结果：
[0211] (i)如通过对明显病变的CT扫描或体检测量的，病变(靶病变和/或非靶病变)减少至少约99％、至少约95％、至少约90％、至少约80％、至少约70％、至少约60％、至少约50％、至少约45％、至少约40％、至少约35％、至少约30％、至少约25％、至少约20％、至少约15％、至少约10％或至少约5％，例如约30％至约99％、约80％至约90％、约70％至约90％、约60％至约90％、约50％至约90％、约40％至约90％、约35％至约90％、约30％至约90％、约25％至约90％、约5％至约85％或约10％至约80％(与给予治疗性T细胞或其药物组合物之前相比
的实际％变化或中值％变化)；
的实际％变化或中值％变化)；
[0212] (ii)如通过活检、磁共振成像或其他合适的方法测量的，癌症转移消散(即减少)至少约99％、至少约95％、至少约90％、至少约80％、至少约70％、至少约60％、至少约50％、至少约45％、至少约40％、至少约35％、至少约30％、至少约25％、至少约20％、至少约15％、至少约10％或至少约5％，例如约30％至约99％、约80％至约90％、约70％至约90％、约60％至约90％、约50％至约90％、约40％至约90％、约35％至约90％、约30％至约90％、约25％至约90％、约5％至约85％或约10％至约80％(与给予治疗性T细胞或其药物组合物之前相比
的实际％变化或中值％变化)；
的实际％变化或中值％变化)；
[0213] (iii)肿瘤负荷(例如，癌细胞的数目、肿瘤的大小或体内癌症的量)降低至少约99％、至少约95％、至少约90％、至少约80％、至少约70％、至少约60％、至少约50％、至少约
45％、至少约40％、至少约35％、至少约30％、至少约25％、至少约20％、至少约15％、至少约
10％或至少约5％，例如约30％至约99％、约80％至约90％、约70％至约90％、约60％至约
90％、约50％至约90％、约40％至约90％、约35％至约90％、约30％至约90％、约25％至约
90％、约5％至约85％或约10％至约80％(与给予治疗性T细胞或其药物组合物之前相比的
实际％变化或中值％变化)；
45％、至少约40％、至少约35％、至少约30％、至少约25％、至少约20％、至少约15％、至少约
10％或至少约5％，例如约30％至约99％、约80％至约90％、约70％至约90％、约60％至约
90％、约50％至约90％、约40％至约90％、约35％至约90％、约30％至约90％、约25％至约
90％、约5％至约85％或约10％至约80％(与给予治疗性T细胞或其药物组合物之前相比的
实际％变化或中值％变化)；
[0214] (iv)无进展存活期(PFS)增加至少约99％、至少约95％、至少约90％、至少约80％、至少约70％、至少约60％、至少约50％、至少约45％、至少约40％、至少约35％、至少约30％、至少约25％、至少约20％、至少约15％、至少约10％或至少约5％，例如约30％至约99％、约80％至约90％、约70％至约90％、约60％至约90％、约50％至约90％、约40％至约90％、约
35％至约90％、约30％至约90％、约25％至约90％、约5％至约85％或约10％至约80％(与给予治疗性T细胞或其药物组合物之前相比的实际％变化或中值％变化)；和/或
35％至约90％、约30％至约90％、约25％至约90％、约5％至约85％或约10％至约80％(与给予治疗性T细胞或其药物组合物之前相比的实际％变化或中值％变化)；和/或
[0215] (v)总体存活期(OS)增加至少约99％、至少约95％、至少约90％、至少约80％、至少约70％、至少约60％、至少约50％、至少约45％、至少约40％、至少约35％、至少约30％、至少约25％、至少约20％、至少约15％、至少约10％或至少约5％，例如约30％至约99％、约80％至约90％、约70％至约90％、约60％至约90％、约50％至约90％、约40％至约90％、约35％至约90％、约30％至约90％、约25％至约90％、约5％至约85％或约10％至约80％(与预期总体存活期相比的实际％变化或中值％变化)。
[0216] 在一些实施方案中，具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)或其药物组合物能以药学有效量(即有效获得所需结果或效果(例如治疗疾病或病症)的量)给予。
在一些方面，药学有效量可以包括治疗性T细胞的所需剂量或数目和/或此类T细胞与其他
类型的细胞的所需比率。因此，在一些实施方案中，细胞剂量是基于细胞总数(或每kg体重的数目)和各个群体或亚型的所需比率(如CD3+与非CD3+的比率)。在一些实施方案中，细胞剂量是基于各个群体中的细胞或包含在药物组合物中的各个细胞类型的所需总数(或每kg
体重的数目)。在一些实施方案中，剂量是基于此类特征的组合，如各个群体中的所需总细胞数、所需比率和所需总治疗性T细胞数。
在一些方面，药学有效量可以包括治疗性T细胞的所需剂量或数目和/或此类T细胞与其他
类型的细胞的所需比率。因此，在一些实施方案中，细胞剂量是基于细胞总数(或每kg体重的数目)和各个群体或亚型的所需比率(如CD3+与非CD3+的比率)。在一些实施方案中，细胞剂量是基于各个群体中的细胞或包含在药物组合物中的各个细胞类型的所需总数(或每kg
体重的数目)。在一些实施方案中，剂量是基于此类特征的组合，如各个群体中的所需总细胞数、所需比率和所需总治疗性T细胞数。
[0217] 在一些实施方案中，所需剂量或量是所需治疗性T细胞数或被给予所述细胞的受试者的每单位体重的所需治疗性T细胞数(例如，个细胞/kg)。在一些方面，所需剂量或量等于或高于最小治疗性T细胞数或每单位体重的最小治疗性T细胞数。
[0218] 在某些实施方案中，可以向受试者给予范围在约100至约1000亿个细胞的治疗性T细胞，例如像约数百至约数千个细胞、约数千至约100万个细胞、约100万至约500亿个细胞(例如，约100个细胞、约500个细胞、约1000个细胞、约5000个细胞、约100万个细胞、约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约
300亿个细胞、约400亿个细胞或通过任何两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约
7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或通过任何两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下是约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或这些范围之间的任何值。治疗性T细胞的前述有效剂量或量可以依据疗法或治疗的单独给予或依据疗法或治疗的整个持续时间。
300亿个细胞、约400亿个细胞或通过任何两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约
7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞或通过任何两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下是约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)或这些范围之间的任何值。治疗性T细胞的前述有效剂量或量可以依据疗法或治疗的单独给予或依据疗法或治疗的整个持续时间。
[0219] 在一些实施方案中，治疗性T细胞的剂量或量可以在104或约104与109或约109个细胞/公斤(kg)体重之间的范围内，如在105与106个细胞/kg体重之间，例如是或是约1x 105个细胞/kg体重、1.5x 105个细胞/kg体重、2x 105个细胞/kg体重或1x 106个细胞/kg体重。例
4 4 9 9
如，在一些实施方案中，将治疗性T细胞以在10 或约10与10或约10个T细胞/公斤(kg)体
重之间(或在其一定误差范围内)给予，如在105与106个T细胞/kg体重之间，例如是或是约1x
105个T细胞/kg体重、1.5x 105个T细胞/kg体重、2x 105个T细胞/kg体重或1x 106个T细胞/kg体重。治疗性T细胞的前述有效剂量或量可以依据疗法或治疗的单独给予或依据疗法或
治疗的整个持续时间。
4 4 9 9
如，在一些实施方案中，将治疗性T细胞以在10 或约10与10或约10个T细胞/公斤(kg)体
重之间(或在其一定误差范围内)给予，如在105与106个T细胞/kg体重之间，例如是或是约1x
105个T细胞/kg体重、1.5x 105个T细胞/kg体重、2x 105个T细胞/kg体重或1x 106个T细胞/kg体重。治疗性T细胞的前述有效剂量或量可以依据疗法或治疗的单独给予或依据疗法或
治疗的整个持续时间。
[0220] 在一些实施方案中，可以根据所需效果以每天、每周、每两周或每月的时间表给予具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)或其药物组合物。在一些方面，治疗性T细胞或其药物组合物可以给予约1至5、约1至约10、约1至约15个或更多个周期，其中每个周期的持续时间是一个月。每个周期内的剂量可以在每天(包括每天一次、每天两次或每天两次以上)、隔天、每周两次、每周、每两周、每三周一次或每月的基础上给予。周期可以任选地包括休息期。可替代地，可以在周期之间包括休息期。在一些方面，给予将持续疾病的持续时间。
[0221] 在一些方面，本文公开的方法还可以包括给予具有表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)或其药物组合物和另外的治疗剂或其药学上可接受的盐或溶剂化物。治疗性T
细胞或其药物组合物和治疗剂可以叠加地或更优选地协同地起作用。在一个优选的实施方
案中，可以与一种或多种治疗剂的给予同时给予治疗性T细胞或其药物组合物，所述治疗剂可以是同一组合物的一部分或在与包含治疗性T细胞的组合物不同的组合物中。在另一个
实施方案中，可以在给予一种或多种治疗剂之前或之后给予治疗性T细胞或其药物组合物。
细胞或其药物组合物和治疗剂可以叠加地或更优选地协同地起作用。在一个优选的实施方
案中，可以与一种或多种治疗剂的给予同时给予治疗性T细胞或其药物组合物，所述治疗剂可以是同一组合物的一部分或在与包含治疗性T细胞的组合物不同的组合物中。在另一个
实施方案中，可以在给予一种或多种治疗剂之前或之后给予治疗性T细胞或其药物组合物。
[0222] 在一些方面，在本文所述的方法中有效的具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞(即治疗性T细胞)或其药物组合物的量将取决于障碍或病症的性质，并且可以通过标准临床技
术来确定。另外，可以任选地采用体外或体内测定来帮助鉴定最佳剂量范围。待用于组合物中的确切剂量还将取决于给予途径以及疾病或障碍的严重性，并且应当根据从业者的判断
和每名患者的情况决定。
术来确定。另外，可以任选地采用体外或体内测定来帮助鉴定最佳剂量范围。待用于组合物中的确切剂量还将取决于给予途径以及疾病或障碍的严重性，并且应当根据从业者的判断
和每名患者的情况决定。
[0224] 在一些方面，提供了用于过继性细胞疗法或癌症治疗的试剂盒。此类试剂盒可以包括药物组合物和药学上可接受的载体，所述药物组合物包括具有降低的表面岩藻糖基化
的T细胞，即治疗性T细胞。
的T细胞，即治疗性T细胞。
[0225] 在一些实施方案中，所述试剂盒可以包括用于本文所述的任何治疗方法的说明书。所包括的说明书可以向受试者提供给予药物组合物的描述，以在受试者体内实现预期
活性，例如治疗疾病或病症，如癌症。在一些实施方案中，与本文所述的药物组合物的使用相关的说明书可以包括关于预期治疗的剂量、给药时间表和给予途径的信息。容器可以是
单位剂量、大包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。在本公开文本的试剂盒中提供的说明书通常是在标签或包装说明书上的书面说明书。标签或包装说明书指示所述药物组合物用
于治疗受试者的疾病或障碍、延迟受试者的疾病或障碍的发作和/或减轻受试者的疾病或
障碍。
活性，例如治疗疾病或病症，如癌症。在一些实施方案中，与本文所述的药物组合物的使用相关的说明书可以包括关于预期治疗的剂量、给药时间表和给予途径的信息。容器可以是
单位剂量、大包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。在本公开文本的试剂盒中提供的说明书通常是在标签或包装说明书上的书面说明书。标签或包装说明书指示所述药物组合物用
于治疗受试者的疾病或障碍、延迟受试者的疾病或障碍的发作和/或减轻受试者的疾病或
障碍。
[0226] 在一些实施方案中，本文提供的试剂盒在合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶子、广口瓶、软包装等。还考虑了与特定装置(如吸入器、鼻给予装置或输注装置)组合使用的包装。在一些实施方案中，试剂盒可以具有无菌接入端口(例如，容器可以是静脉注射液袋或带有可通过皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。
[0227] VII.实施例
[0228] 以下实施例说明了本发明的某些具体的实施方案，并且不旨在限制本发明的范围。
[0229] 本文的实施方案通过以下实施例和详细方案进一步说明。然而，所述实施例仅旨在说明实施方案，而不应解释为限制本文的范围。在整个本申请中引用的所有参考文献和
公开的专利和专利申请的内容都通过引用特此并入。
公开的专利和专利申请的内容都通过引用特此并入。
[0230] 实施例1-使用脾细胞过继性转移的A20小鼠淋巴瘤研究
[0231] 如下产生免疫原KLH-A20 Id Fab。通过PCR扩增克隆A20肿瘤Ig重链和轻链可变区，并且将其连接到小鼠IgG表达载体中，以在HEK293F17细胞中产生A20 Id。通过蛋白质A纯化A20 Id鼠抗体。将浓缩的抗体(20mM KPO4、10mM EDTA，pH 7.0)用四倍体积的固定化木瓜蛋白酶树脂(含20mM半胱氨酸)在37℃下处理过夜。除去树脂，并且将上清液与蛋白质A树脂一起孵育过夜(4℃)，然后进行过滤以除去树脂结合的抗体Fc。收集含Fab的流出物，将其在PBS溶液(pH 7.4)中透析并浓缩。通过使用海水养殖KLH(mcKLH)和NHS-PEG12-马来酰亚
胺来完成Fab缀合。将PBS溶液(pH 8.0)中的mcKLH(10mg/mL)与NHS-PEG12-马来酰亚胺混合
并一起孵育(最终125mM，37℃，20min)。将产物mcKLHPEG12-马来酰亚胺在PD10柱(PBS溶液，pH 7.4)上进行缓冲液交换，并且浓缩至5mg/mL。将A20 Id Fab(4mg/mL)用三(2-羧乙基)膦(5mM)在含2mM EDTA的缓冲液中还原(30min，37℃)。经由PD10柱(PBS溶液(pH 7.4)、5mM
EDTA)除去还原剂，并且将还原的Fab浓缩至5mg/mL，与KLH-PEG12-马来酰亚胺(摩尔比率3:
1，Fab:KLH)混合，并且在室温下孵育(1h)。将过量的马来酰亚胺交联剂用N-乙酰半胱氨酸淬灭，并且通过PD10柱(PBS溶液，pH 7.4)除去。
胺来完成Fab缀合。将PBS溶液(pH 8.0)中的mcKLH(10mg/mL)与NHS-PEG12-马来酰亚胺混合
并一起孵育(最终125mM，37℃，20min)。将产物mcKLHPEG12-马来酰亚胺在PD10柱(PBS溶液，pH 7.4)上进行缓冲液交换，并且浓缩至5mg/mL。将A20 Id Fab(4mg/mL)用三(2-羧乙基)膦(5mM)在含2mM EDTA的缓冲液中还原(30min，37℃)。经由PD10柱(PBS溶液(pH 7.4)、5mM
EDTA)除去还原剂，并且将还原的Fab浓缩至5mg/mL，与KLH-PEG12-马来酰亚胺(摩尔比率3:
1，Fab:KLH)混合，并且在室温下孵育(1h)。将过量的马来酰亚胺交联剂用N-乙酰半胱氨酸淬灭，并且通过PD10柱(PBS溶液，pH 7.4)除去。
[0232] 如下所述产生用于脾细胞过继性转移的供体小鼠。在含10％FBS、10mM HEPES、1mM丙酮酸钠、50μM 2-巯基乙醇和青霉素(100U/ml)/链霉素(100μg/ml)(PS)的RPMI 1640中培养A20细胞(ATCC)。在第-21天向小鼠(BALB/c，Harlan)皮下注射具有KLH-A20 Id Fab与TiterMax佐剂(1:1)的缀合物(50μg)，并且在第-7天进行加强。从第-14天开始，2FF处理组接受含有20mM 2FF的饮用水，而未经处理的组接受淡水。第二次疫苗接种后一周(第0天)，所有小鼠均接受辐照的A20肿瘤细胞(RS2000辐照器第4级，17min，每只小鼠静脉注射2.5x
106个细胞)。2FF处理持续到第14天。将从每组供体小鼠收获的脾细胞(第14天)过继性地转移(一次性)到初试小鼠体内(50x 106个细胞/小鼠)。一组接受来自接受了2FF的供体小鼠
的细胞，并且一组小鼠接受来自未经2FF处理的供体小鼠的细胞(n＝7/组)。然后在转移后
当天，用活的A20细胞激发两组小鼠(2.5x 106个细胞)。对照组未接受处理。与初试动物相比，从未接受2FF的供体小鼠转移的脾细胞提供了增加的存活(中值存活期从27天增加到35
天)，而从接受2FF的供体小鼠转移的脾细胞提供了到43天的中值存活期的进一步增加。这
表明与来自未接受2FF的动物的细胞的过继性转移相比，来自用2FF处理的动物的细胞的过
继性转移可以提供增强的抗肿瘤活性。
106个细胞)。2FF处理持续到第14天。将从每组供体小鼠收获的脾细胞(第14天)过继性地转移(一次性)到初试小鼠体内(50x 106个细胞/小鼠)。一组接受来自接受了2FF的供体小鼠
的细胞，并且一组小鼠接受来自未经2FF处理的供体小鼠的细胞(n＝7/组)。然后在转移后
当天，用活的A20细胞激发两组小鼠(2.5x 106个细胞)。对照组未接受处理。与初试动物相比，从未接受2FF的供体小鼠转移的脾细胞提供了增加的存活(中值存活期从27天增加到35
天)，而从接受2FF的供体小鼠转移的脾细胞提供了到43天的中值存活期的进一步增加。这
表明与来自未接受2FF的动物的细胞的过继性转移相比，来自用2FF处理的动物的细胞的过
继性转移可以提供增强的抗肿瘤活性。
[0233] 实施例2-使用CD3+T细胞过继性转移的A20小鼠淋巴瘤研究
[0234] 从第0天到研究终止，向20只Balb/c小鼠植入A20细胞(皮下地，0.2mL 5x 10^6个细胞/小鼠)，一组小鼠由10只接受2FF(饮用水中的20mM)的动物组成。允许A20淋巴瘤肿瘤
长大，并且在20天后处死小鼠。如前所示，与对照组中的动物相比，接受20mM 2FF的小鼠的肿瘤进展具有显著延迟(图2)。2FF处理后CD3+T细胞上的表面岩藻糖基化的降低
长大，并且在20天后处死小鼠。如前所示，与对照组中的动物相比，接受20mM 2FF的小鼠的肿瘤进展具有显著延迟(图2)。2FF处理后CD3+T细胞上的表面岩藻糖基化的降低
[0235] 处死来自未经处理和经2FF处理组的小鼠，并且取脾脏以用于CD3 T细胞富集。简言之，将脾脏收集在含有2％FBS的RPMI中，并且使细胞悬浮液通过70μm目尼龙滤网，用2％RPMI洗涤。将细胞悬浮在10ml ACK裂解缓冲液中，并且在此缓冲液中孵育5min以除去RBC。
将细胞以300xg离心5分钟，并且重悬于含有2％FBS和1mM EDTA的PBS中。按照制造商的建
议，使用EasySep小鼠T细胞分离试剂盒分离T细胞。简言之，将细胞以108个细胞/mL重悬，向其中添加50μL的大鼠血清/mL。然后将细胞转移到5mL聚苯乙烯管中，并且将50μL分离混合物添加到样品中，然后在室温下孵育10分钟。将快速球涡旋并且添加75μL/ml，然后在室温下孵育2.5分钟。将样品体积加足到2.5mL，并且与细胞分离磁体一起孵育2.5分钟。倒置磁体，并且收集CD3+T细胞，并且将其在RPMI中洗涤两次，并且以21.2x 106个细胞/ml重悬。通过流式细胞术检查细胞的岩藻糖基化状态，并且从经2FF处理的动物分离的细胞所展现的
表面岩藻糖基化显著降低(图3)。
将细胞以300xg离心5分钟，并且重悬于含有2％FBS和1mM EDTA的PBS中。按照制造商的建
议，使用EasySep小鼠T细胞分离试剂盒分离T细胞。简言之，将细胞以108个细胞/mL重悬，向其中添加50μL的大鼠血清/mL。然后将细胞转移到5mL聚苯乙烯管中，并且将50μL分离混合物添加到样品中，然后在室温下孵育10分钟。将快速球涡旋并且添加75μL/ml，然后在室温下孵育2.5分钟。将样品体积加足到2.5mL，并且与细胞分离磁体一起孵育2.5分钟。倒置磁体，并且收集CD3+T细胞，并且将其在RPMI中洗涤两次，并且以21.2x 106个细胞/ml重悬。通过流式细胞术检查细胞的岩藻糖基化状态，并且从经2FF处理的动物分离的细胞所展现的
表面岩藻糖基化显著降低(图3)。
[0236] 具有降低的表面岩藻糖基化的T细胞的抗肿瘤活性
[0237] 为了评估经纯化的T细胞的抗肿瘤活性，向4组Balb/c小鼠植入A20细胞(皮下地，0.2mL 5x 106个细胞/小鼠)。一组不接受处理，另外三组在A20细胞达到100mm3时处理，并且
6
每天用在饮用水中的20mM 2FF、腹膜内注射的从对照荷瘤小鼠分离的2x 10个T细胞或腹
膜内注射的从荷2FF肿瘤小鼠分离的2x 106个T细胞进行处理。监测动物的后续肿瘤进展。
当与未经处理的动物或接受来自未经处理的荷瘤小鼠的T细胞的那些动物相比时，每天接
受在它们的水中的2FF或从荷瘤经2FF处理的动物分离的CD3+T细胞的动物显著地显示出肿
瘤生长延迟，并且在一些情况下，肿瘤消退。
6
每天用在饮用水中的20mM 2FF、腹膜内注射的从对照荷瘤小鼠分离的2x 10个T细胞或腹
膜内注射的从荷2FF肿瘤小鼠分离的2x 106个T细胞进行处理。监测动物的后续肿瘤进展。
当与未经处理的动物或接受来自未经处理的荷瘤小鼠的T细胞的那些动物相比时，每天接
受在它们的水中的2FF或从荷瘤经2FF处理的动物分离的CD3+T细胞的动物显著地显示出肿
瘤生长延迟，并且在一些情况下，肿瘤消退。
[0238] 这些数据指示，A20淋巴瘤模型中的2FF抗肿瘤活性不仅通过T细胞应答介导，而且来自用2FF处理的荷瘤小鼠的T细胞令人惊讶地足以驱动抗肿瘤应答，并且这种应答与全身
2FF处理不分上下。在癌症患者的自体T细胞离体扩增并且重新植入到患者体内、或将其用
TCR转化为特定肿瘤抗原或CAR构建体的治疗情况下，这些发现为使用2FF扩增T细胞活性提
供了可能性。
2FF处理不分上下。在癌症患者的自体T细胞离体扩增并且重新植入到患者体内、或将其用
TCR转化为特定肿瘤抗原或CAR构建体的治疗情况下，这些发现为使用2FF扩增T细胞活性提
供了可能性。
[0239] 实施例3-用2FF离体扩增人外周T细胞以获得体内抗肿瘤功效
[0240] 从10mL全血中分离出T细胞，首先将全血以1200rpm(300x g)离心10min(无间断)。在不破坏白细胞层的情况下小心除去含有血小板的顶层。然后，将RosetteSepTM人T细胞富集混合物(来自StemCell Technologies的Pan T细胞)添加到剩余的血液中(500μL/10mL血
液)。将其孵育20min，然后添加1mL FBS和10mL PBS。将Histopaque(20-25mL)放在50mL
Falcon中，将所制备的血液/PBS溶液非常缓慢地覆盖。将其不间断地离心(25℃，1500rpm，
25min)。除去顶层，然后将血沉棕黄层中的T细胞移到新的50mL管中。将T细胞用PBS洗涤，重悬于1mL AKT裂解缓冲液中并且加满到25mL，孵育5min，用PBS补足至50mL，然后沉淀。将此红细胞裂解步骤再次重复。
液)。将其孵育20min，然后添加1mL FBS和10mL PBS。将Histopaque(20-25mL)放在50mL
Falcon中，将所制备的血液/PBS溶液非常缓慢地覆盖。将其不间断地离心(25℃，1500rpm，
25min)。除去顶层，然后将血沉棕黄层中的T细胞移到新的50mL管中。将T细胞用PBS洗涤，重悬于1mL AKT裂解缓冲液中并且加满到25mL，孵育5min，用PBS补足至50mL，然后沉淀。将此红细胞裂解步骤再次重复。
[0241] 为了在体外培养原代人T细胞培养物，将分离的T细胞重悬于T细胞培养基(补充有10％胎牛血清(FCS)、1％青霉素的RPMI培养基)中，并且移入两个T25烧瓶中，一个有并且一个没有100μM 2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖。添加CD3/CD28抗体包被的珠粒(20μL/烧瓶)以激活T细胞。24h后，添加白细胞介素2(IL2)(100ng/μL)。每次将细胞传代时，添加新的IL2和2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖。培养10天后，通过流式细胞术评估在2FF中培养的扩增的T细胞的表面
岩藻糖基化变化(图4)。如通过小扁豆凝集素(LCA)表面染色监测的，用2FF处理原代人T细
胞导致表面岩藻糖基化降低约85％，并且指示细胞准备好进行体内转移。
岩藻糖基化变化(图4)。如通过小扁豆凝集素(LCA)表面染色监测的，用2FF处理原代人T细
胞导致表面岩藻糖基化降低约85％，并且指示细胞准备好进行体内转移。
[0242] 实施例4-用2FF离体成熟和分化的自体T细胞可以赋予抗肿瘤活性
[0243] 使用histopaque(Sigma)密度梯度从自愿健康志愿者的静脉血的血沉棕黄层中分离外周血单核细胞(Astarte Biologics)。随后按照制造商的说明使用EasySep人T细胞富
集混合物(STEMCELL)分离T细胞。在第0天，将以1:8的珠粒:细胞比率使用的αCD3/αCD28抗体包被的珠粒(Miltenyi Biotec)用于激活T细胞。将T细胞在RPMI 10％FCS+IL-2(100ng/μL，R&D Systems)+/-100μM 2FF中激活。每次细胞传代时，添加新的IL-2和2FF。
集混合物(STEMCELL)分离T细胞。在第0天，将以1:8的珠粒:细胞比率使用的αCD3/αCD28抗体包被的珠粒(Miltenyi Biotec)用于激活T细胞。将T细胞在RPMI 10％FCS+IL-2(100ng/μL，R&D Systems)+/-100μM 2FF中激活。每次细胞传代时，添加新的IL-2和2FF。
[0244] 将爱泼斯坦巴尔病毒(Epstein Barr virus，EBV)转化的类淋巴母细胞细胞系(LCL)皮下植入NSG小鼠体内。当LCL肿瘤体积达到300mm3时，小鼠经由尾静脉注射接受2.0x
106个自体外周T细胞，其在存在或不存在2FF的情况下扩增并且成熟。通过每两周卡尺测量监测自体T细胞对LCL进展的抗肿瘤活性。一旦肿瘤尺寸变大或完全消退超过1周，处死小
鼠。
106个自体外周T细胞，其在存在或不存在2FF的情况下扩增并且成熟。通过每两周卡尺测量监测自体T细胞对LCL进展的抗肿瘤活性。一旦肿瘤尺寸变大或完全消退超过1周，处死小
鼠。
[0245] 自体T细胞的转移导致了抗肿瘤活性，并且当在转移之前用2FF使T细胞成熟时，此活性显著增强(参见图5A)，存活也是如此(参见图5B)。
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