[0001] 本专利属于食用菌领域的虫草栽培技术，尤其涉及一种绿色北虫草产业化生产方法。

[0002] 北虫草是北冬虫草的简称，又称北冬虫夏草，也叫蛹虫草或蛹草，俗名不老草，是虫、菌结合的药用真菌，现在可以纯粮基栽培，是现代珍稀中草药，北冬虫夏草属于真菌门，子囊菌纲，肉座菌目，麦角菌科，虫草属。它主要生长在我国的北方地区。 [0003] 北虫草是一种营养价值很高的“补药”。北虫草不仅含有丰富的蛋白质和氨基酸，而且含有30多种人体所需的微量元素，是上等的滋补佳品。据了解，在虫草属的６０多个种中，惟有冬虫夏草和北虫草的医疗价值最大、经济价值最高，所以在冬虫夏草野生资源大幅度减少、且无法进行商品化人工栽培的情况下，北虫草便成了国内外医药界、保健食品界、生物界等各领域的宠儿。但北虫草的生长需要严格的温度、湿度和光照控制，要求温度保持在15℃—20℃，还要有专门的设施设备。如果一点生物知识都没有，也没有懂技术的人做技术后台、技术指导，普通老百姓很难栽培成功。需要强调指出的是，北虫草万不可随便引种，无限扩繁。

[0004] 我国北虫草出口数量近一段时间比较稳定，主要出口目的地为中国香港、日本和韩国。国际上北虫草的需求量比较稳定，每年均有10%左右的增长，但总量由于产品供给的局限性比较少。

[0005] 国内外许多专家对北虫草营养化学成份，药理及临床效果的研究，都基本上和中华虫草相同，主要有保肺益肾，止血化痰，调节身体机能，主治肺结核咳血，阳痿遗精，腰膝酸痛，美容护肤，神精衰弱，糖尿病，升白血球，防癌、抗癌，对化疗作用也很大。人工栽培的北虫草药用功效与野生北虫草的功效相差无几，有些表现还好于野生北虫草。人工栽培北虫草经济效益明显，一年可种4次，不仅大大减少了栽培时间，种植户也可取得不少收益。 [0006] 随着社会在发展，人们的保健意识也在加强，所以北虫草的生产有很大的发展前景。从功能性食品保健饮料，北虫草占有一席之地，如菌皮干，菌并等开发虫草饮料，一定能制造出不可估计的经济效益,社会效益,由此可见，人工北虫草据用很高的食用价值和药用价值，是当代新开发的功能性仪器和饮料的资源及药用资源。

[0007] 中国专利号为ZL200710166278.6、申请日为2007.11.09，公告日为2008.05.07、发明名称为“小麦栽培北虫草的方法”的专利公开了一种小麦栽培北虫草的方法，以脱皮的麦粒、蚕种粉和营养液为罐头瓶栽培的培养基。

[0008] 中国申请号为03112668.5、申请日为2003.01.14，公告日为2003.06.25、发明名称为“一种工厂化开放式培养北虫草等食用菌的方法”的专利，阐明了本发明属于涉及农业技术领域，特别是北虫草及珍稀珍贵食用菌的工厂化开放式培养。改发明的特征是：用带有通气窗和生长空间的塑料箱培养，在菌体表面喷洒无毒无害的成膜剂，形成的人工外壳，保护北虫草等食用菌菌丝体，防止水分蒸发、隔离外界微生物的危害；从而，进入真正的开放式培养。

[0009] 中国申请号200410050381.0、申请日为2004.09.05，公告日为2005.03.02、发明名称为“北虫草培养基”的专利，涉及了一种北虫草培养基，其组分配方由以下原料制成(按重量计)：大米30，玉米1，土豆10，蚕蛹5，胡萝卜1，维生素B10.01，维生素B20.01，矿泉水50。依据本发明制成的培养基生产出的北虫草，其特点是：生长周期短、质量好、产量高、成活率达到98％。

[0010] 本发明的目的是提供一种简便、不易污染、投资少、见效快，以小麦、大米等为主要原料，用塑料盆立体周年绿色栽培北虫草的新技术。

[0011] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种绿色北虫草产业化生产方法，其特征是包括以下步骤：
（1）北虫草的菌种制作方法：
每次使用首代液体母种应用生产，保持北虫草菌种遗传性状的稳定性，确保出草和产业化优质栽培的成功率；
（1.1） 菌种的选择
选用菌丝洁白、适应性强、见光后转色快、出草快、性状稳定的速生高产优质菌种；根据供销需要，选择以下任意品种；
（1.1.1）冬虫夏草
子座形态特征：子座主茎圆柱型向上，头部长锥形，有白色被生孢子囊体，菌丝萌发快，转色快，抗杂力强，子座长6～8cm，茎粗1～2mm，生长快且齐整，干燥后子囊头部仍显黄白色，产量较蛹虫草低，草质外观不佳，虫草素含量高；
（1.1.2）蛹虫夏草
子座形态特征：子座主茎椭圆型向上，上部致顶端有许多小凸起的子囊孢子，呈淡桔黄色，菌丝萌发快，培养基转色橙红色，相继发生乳黄色基点，子座发生较齐整，茎粗2～5mm，子座最长18cm；麦基子座橙红色；米基子座桔黄色；
（1.1.3）头孢虫草
子座形态特征：子座圆柱向上，头部椭圆球状，被生子囊孢子，菌丝发育快，转色橙红色，原基相继发生，草长度不整齐，子座茎粗2～3mm，最长可达8cm以上；
（1.2）子座选择
子座选择是培养新菌株的关键；选择子座金黄或橙红，子座生长点顶端大、长势强壮、整齐的虫草和菌丝组织最密集，菌丝活力最强的部位；要求：选择虫草成熟度在9成以上，子座长度在90～120cm，子座顶部膨大直径在3～5mm的高产优质虫草；用灭菌剪刀贴培养基处切断，子座排列整齐；
（1.3 ）子座处理
（1.3.1）子座灭菌
接种室洁净度为100级，周边区1000级；在无菌室内，取上述子座用镊子夹住根部放在无菌水中浸洗50～60s，重复浸洗2～3次，然后用75%酒精或用浓度70～80%的氨基酸碘溶液浸洗30～60s灭菌；
（1.3.2）子座选择
灭菌后的子座在距生长点顶端2～4cm部位，用浓度70～80%的氨基酸碘溶液擦拭消毒的剪刀切取备用；
（1.4）菌种培养
（1.4.1）配制液体培养基配制
用去皮马铃薯500g、小麦100g、水1000ml，100～120℃煮熟25～30min，凉后用3～5层纱布或双层滤纸过滤出溶液，再加葡萄糖干粉20～30g、酵母膏2～3g、天门冬酰胺1～
2g、磷酸二氢钾1.5～2g、硫酸镁0.6～1g、生长素5～10ml、维生素B125～30g，加蒸馏水调至1000ml溶液，再加入亚硒酸钠溶液，使亚硒酸钠浓度达到60mg/kg；溶液pH值调至
6～7.0；装入10～500ml的试管或三角烧瓶中，制成液体培养基；试管或三角烧瓶用医药棉封口或耐高温塑膜封口；
（1.4.2）液体培养基灭菌
用常温灭种方法或高压蒸汽灭菌均可；
（1.4.2.1）常温灭菌：把盛有液体培养基的试管或三角烧瓶放在蒸锅内，装满后把蒸锅盖紧，温度升到103℃、压力达到0.05～0.08 MPa，保持6－8hr，然后降温、压力表归零移入接菌室接菌应用；
（1.4.2.2）高压蒸汽灭菌：
具体条件如下：灭菌温度：125℃；有效灭菌时间不低于3.5hr；灭菌压力：0.135MPa；
真空度：第一次真空度：-0.011～-0.055 MPa,15min，抽去冷空气；第二次真空度：-0.055 MPa；真空度：-0.055 Mpa保持稳定；灭菌时间：5～7.5hr；焖置时间：灭菌结束后焖置
30min，利于原料糖化、灭菌和营养物质的转化；
（1.4.3 ）液体培养基接种
（1.4.3.1）接种室要求：洁净度为100级，周边区1000级；
3
特别洁净接种室技术指标：接种室：0.2个/30min.Φ90皿（5个/m）；周边区：0.4个
3 2
/30min.Φ90皿（10个/m）；表面最大染菌密度：5个/cm ；空气洁净度级别：接种室100级，周边区1000级；物流：①袋料→清洁通道→接种室；接种后反向返回；②无菌物品、敷料、灭菌的仪器及器材、菌种、一次性无菌物品→清洁通道→接种室；接种后反向返回；接种人员：清洁区换鞋→一更衣室，脱去外面工作服→二更换接种衣→缓冲间或直吹室→洁净走廊→刷手间→洁净接种室；接种后反向返回；）其他指标和监测项目：
①温度：18～26℃；
②相对湿度： 45～65% ；
③照度：≥300lx；
④沉降菌（个/Φ90mm0.5h）： ≤10 ；
⑤静压差：洁净区与非洁净区之间>10Pa；
洁净级别不同房间之间>5Pa；
⑥尘埃粒子数（个/立方米）： ≥5μm 0 ≤20000 ≤60000；
（1.4.3.2）选择子座：
步骤“1.3.2 子座选择”的子座用无菌水擦刷表层并冲洗，撕开子座，用解剖刀从子座内心切取麦粒大组织块，每个试管放置1～5个灭菌子座组织块，三角烧瓶放置1～50个灭菌子座组织块；要求：每10ml液体培养基放置1个灭菌子座组织块；然后用医用药棉封口；
（1.4.4）液体菌种培养
盛有液体培养基的试管或三角烧瓶，在下列条件下培养7～10d，形成菌球，生产出高浓度的北虫草菌种悬浊液：
温度：20～28℃；湿度：65～70%；光照：黑暗； PH值：6.0～7.0；时间：7～10d；条件：摇床培养；
优质北虫草菌种悬浊液目测标准：纯菌球多、菌液清晰；
劣质菌种悬浊液目测标准：纯菌球少、菌液混浊或净止时间长，菌膜少的菌种应淘汰；
（1.5）液体菌种保存
有菌种保存箱或用梭氏法保存两种方法，任选一种方法保存；
（1.5.1）用菌种保存箱保存
用菌种保存箱保存；要求：温度10℃；保存天数：7-15d；液体菌种随时制作随时用，防止退化、活力减弱；
（1.5.2）用梭氏法保存
梭氏法保存：将容有 1滴北虫草菌种悬液的小管﹐置于盛有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大试管中﹐用真空泵抽至1.3帕时﹐将大试管密封保存；这是为减少细胞死亡率而采取的一种不经冻结﹑缓慢脱水的干燥保藏法﹐适用于多种细菌﹑真菌；
要求：温度10℃；保存天数：7～15d；液体菌种随时制作随时用，防止退化、活力减弱；
（2）北虫草产业化生产方法
（2.1）培养基制作
（2.1.1）养菌室消毒灭菌
首先对培植北虫草的室内进行严格消毒处理，可使用烟雾弹、过氧乙酸等消毒剂（粉或液）空气消毒灭菌、地面用浓度10%高锰酸钾擦洗干净，进行封闭2～4hr备用；
（2.1.2）配置营养液
营养液配方按重量百分比：
磷酸二氢钾：20～40g；维生素B1、B2：各20～30g；食用葡萄糖粉：30～50g；加蒸馏水全部溶解，并调配到1000ml，再加入亚硒酸钠溶液，使亚硒酸钠浓度达到60mg/kg； PH值：清水加入碳酸氢钠，调制PH7.5～8；
（2.1.3）塑料盆培养基制作
（2.1.3.1）配料处理； 200L水加入4ml庆大霉素，将小麦、碎玉米、大米浸泡4～5hr，捞出杂质，淋干配料水分，10斤小麦加入2斤大米拌均备用；
（2.1.3.1）配方配料；把小麦、大米、碎玉米按比例混合均匀或者单一小麦灌装到白色聚乙烯塑料盆中，灌装深度1.5～2cm，加营养液后覆盖耐高温塑料薄膜，再用耐高温皮筋扎紧扎实等待高温灭菌，制作成塑料盆培养基；或不覆盖高温塑料薄膜，制作成塑料盆培养基；
配料如下按重量百分比：
小麦：1000g；玉米：100～200g，玉米破碎；大米：100～200g；营养液：加入营养液与小麦的比例：0.5～2ml：1～5g，以配料全吸收无液体流动为最佳；
白色聚乙烯塑料盆规格：长×宽×高=40～100×40～60×10～15cm；
（2.2 ）灭菌
用常温灭种方法或高压蒸汽灭菌，两种方法任选一种；
（2.2.1）常温灭菌
把塑料盆培养基平放在蒸锅内，主要把小麦等料摇平至全部覆盖塑料盆底部并均匀，装满后把蒸锅盖紧，温度升到103℃、压力达到0.05～0.08 MPa，保持6－8hr，然后降温、压力表归零移入接菌室接菌应用；
（2.2.2）高压蒸汽灭菌
具体条件如下：
灭菌温度：125℃；有效灭菌时间不低于3.5hr；灭菌压力：0.135MPa；真空度：第一次真空度：-0.011～-0.055 MPa,15min，抽去冷空气；第二次真空度：-0.055 MPa；真空度：-0.055 Mpa保持稳定；灭菌时间：5～7.5hr；焖置时间：灭菌结束后焖置30min，利于原料糖化、灭菌和营养物质的转化；
（3）接种
用常规接种或高洁净度接种室接种方法，任选一种；
（3.1）常规接种
（3.1.1）覆盖塑料薄膜的培养基接种
接种前要把接种室进行全方位消毒处理--使用烟雾弹、过氧乙酸等消毒剂（粉或液）、地面用高锰酸钾擦洗干净，进行封闭2～4hr灭菌；工作人员的服装也在消毒室进行消毒，人员进入必须换上紫外线消毒过的服装；把蒸过的盆放在空气净化台上进行接种；用接菌机微细针头刺破塑料盆上的塑料膜，向里面培养基均匀喷洒液体菌种，把培养基全部覆盖均匀，静置3～4hr，移到培养室上架；
（3.1.2）不覆盖塑料薄膜的培养基接种
不覆盖塑料薄膜的塑料盆培养基，用用接菌机均匀喷洒液体菌种，然后在菌体表面用接种枪喷洒成膜剂；成膜剂配方质量百分比：
壳聚糖：固体粉末CS-90粉或壳聚糖溶液CS-90，其中壳聚糖质量百分比含量2%，醋酸质量百分比含量为2%：2.5%以下；
乳化剂：农浮600号1.0～5.0％；
分散展着剂：分散展着剂0.5～5.0％；
pH值调节剂：0.1～5.0％；
上述物质加蒸馏水或矿泉水按比例配成15000ml溶液；
（3.2）高洁净度接种室接种
（3.2.1）接种室条件
接菌室，具备封闭性好，有通排过滤净化空气装置，设有紫外线灯灭菌和烟雾，气雾化学间替性灭菌措施，接菌工具有火焰消毒，酒精和灭菌剂消毒，后并由无菌水冲洗，确保不带杂菌的条件，接种室为100级洁净度；
灭菌后的盛料塑料盆在接种室接种，接菌后静置3～4hr，移到培养室上架；
3.2.2液体菌种处理
对液体菌种严格审查无杂菌后，对原液体菌的菌球应用搅拌器打碎菌球，否则接菌点少并有堵塞接种枪枪孔的现像；100～200ml原液体菌种加蒸馏水兑至1000ml液体菌种；
（3.2.3）接种
用75%酒精棉球擦抹接种枪针头和塑料盆覆盖的塑料膜针眼部位，插入针头，射2～3次，形成盆内菌种全覆盖，植入菌种后培养基全吸收菌液为最佳，上架躺放时不流液体于瓶壁底位部；
（4）培养室管理
（4.1 ）养菌
（4.1.1）塑料盆培养基摆放
接种后的塑料盆培养基平放在消毒灭菌后的养菌室内，整齐的平方塑料盆培养基；
第一种方法码垛盆，以塑料盆间空码垛：
第一层：塑料盆培养基在纵、横方向上彼此留有稍小于塑料盆宽度的间隙；
第二层：塑料盆培养基放在第一层塑料盆培养基的上方间隙处；
第三层：塑料盆培养基放在第二层塑料盆培养基的上方间隙处；以此类推，可以放置
10～20层的高度，各层间呈“品”字形排列；
透明的塑料盆通过这种码垛盆方法，使得各层的塑料盆在有光线的条件下得到的散射光足以满足生长需要；
或第二种方法架体结构：
塑料盆培养基放置在金属层架上，每层架高度30～50cm、宽度60～80cm、长度任意；
摆放塑料盆培养基的四周留有80～150cm宽的工作道；
（4.1.2 ）养菌出草
塑料盆培养基摆放完毕后，养菌室内静置养菌；
（4.1.2.1）菌丝培育；条件是：
室内温度：15～20℃，架体上中下设温度表检查，并做好记录；室内湿度：75～85%；室内光照：黑暗；养菌时间：3～4d；
（4.1.2.2 ）子座培育
第5天给光，条件是：
室内温度：18～23℃；室内湿度：65～70%；保持湿度是满足菌丝体的水分供应；采收前10～15d降低空气湿度至50～65%，防止成熟过快导致菌株死亡；
光照强度：弱光，200～500lux或每隔2～5m，放置一个3～5W的LED灯照明；基内菌丝形成接菌部位幅射状态时，夜间全时给光，白日需外入散射光线，直至采收期；
培植时间：30～45d；在8～10d后菌丝由白转黄或橙红色时，继续培植，不断生长；
氧气：满足菌丝体的氧气供应；观察，当菌丝辐射外围生长时，用钉板刺出封闭膜孔道，放出二氧化碳，输入新鲜空气，促进菌丝生长过程转色性缦延生长；
（4.1.2.3）注意事项
湿度控制：菌丝与子座生长发育，都需要水分，湿度大容易行成气生菌丝，影响子座发生率和转色慢的现象；湿度小，则影响子座生长的产量和菌丝体靠水分输送营养，造成生长发育不良的现象；控制培养基pH值：一是配制培养基时pH值8～9高出最佳pH值6～7，在灭菌时PH值降低1～2个，尤其灭菌和降温的时间延长，造成pH值的下降，这是做好余量准备；
（5）采收分级与包装
（5.1）采收标准
北虫草植育40～45天时，子座上部至顶端形成凸起孢子囊时，子座长6～15cm、菌株孢头直径2～6mm时虫草成熟，进入采收期，要及时收获，在架体上有封口薄膜的塑料盆揭去封口膜、促进子实体失水和以收缩的培养基继续收缩2～4hr，可连草带培养基一块拔出处理；
（5.2）采收方法
有封口薄膜的塑料盆去膜，一手握住虫草、一手握住培养基撕下或一手握住虫草、一手用剪刀剪下或用机械刀具割下；一茬虫草收货后，每盆喷洒营养液10～100ml，可以出二茬虫草，以此类推，可以出草3茬；
（5.3）北虫草分级方法
（5.3.1）按照外观分级

（5.3.2）按照营养高和药理成分的分级
短草的营养高于高草，有些药理成分，短草要低于高草的成分，由客户需求质量标准或深加工标准来选定及定价；
（5.3.3）碎草回收
分级干燥处理过程中，有碎草产生和桔黄色子囊孢子粉，要分别净选包装以利增值收益；
（5.4）延长保鲜期方法
采收的虫草在8～10℃的温度下预冷1～2hr，延长虫草的保鲜期；
（5.5）包装方法
实行封装模式包装；用塑膜袋和真空包装机抽真空包装；
（6）烘干与保存
有两种方法，常规烘干或冻干，选择任何方法均可；
（6.1）常规烘干
要边采边烘干，不要积压，烘干时把草放在烘干架上要放置区均匀，避免加热不均，烘干时温度保持40～80℃，待干后再放再回潮，回潮到草有点扎手，但是草还不碎时就可装袋；
（6.2）冻干
冻干食品是将新鲜食品快速冷冻后，送入真空容器脱水而成，在真空条件下，水分由固态冰升华成气，从而使物料脱水干燥。

[0012] 本发明的优点及积极效果：本发明富含硒元素，是一种周年绿色栽培北虫草的产业化生产方法，一年四季均可栽培。

[0013] 本发明生产虫草简便、不易污染、投资少、见效快，以小麦、大米等为主要原料，用可以重复利用的塑料盆立体周年栽培绿色北虫草。本发明节省土地资源，大棚、楼房、厂房均可生产北虫草的创新技术。可以大面积周年绿色栽培，产业化程度高，富含硒元素、效益高。

[0014]

[0015] 本发明富含硒元素，是一种周年绿色栽培北虫草的产业化生产方法，一年四季均可栽培。实施例

[0016] 1 北虫草的菌种制作方法每次使用首代液体母种应用生产，保持北虫草菌种遗传性状的稳定性，确保出草和产业化优质栽培的成功率。

[0017] 1.1 菌种的选择选用菌丝洁白、适应性强、见光后转色快、出草快、性状稳定的速生高产优质菌种。根据供销需要，选择以下任意品种。

[0018] 1.1.1冬虫夏草Cordyeps sinensis(Berk)Sacc子座形态特征：子座主茎圆柱型向上，头部长锥形，有白色被生孢子囊体，菌丝萌发快，转色快，抗杂力强，子座长6～8cm，茎粗1～2mm，生长快且齐整，干燥后子囊头部仍显黄白色，产量较蛹虫草低，草质外观不佳，资料说明虫草素含量高。

[0019] 1.1.2 蛹虫夏草Cordyceps militaris(L)Link也叫蛹虫草，子座形态特征：子座主茎椭圆型向上，上部致顶端有许多小凸起的子囊孢子，呈淡桔黄色，菌丝萌发快，培养基转色橙红色，相继发生乳黄色基点，子座发生较齐整，茎粗2～5mm，子座最长18cm。麦基子座橙红色；米基子座桔黄色；产量高。30g混合米基可采草30g以上；经化验营养与药理成分高于野生冬虫夏草。

[0020] 1.1.3 头孢虫草Cepnalosporium sinensis子座形态特征：子座圆柱向上，头部椭圆球状，被生子囊孢子，菌丝发育快，转色橙红色，原基相继发生，草长度不整齐，子座茎粗2～3mm，最长可达8cm以上。小麦基子座茎橙红色，大米基为桔黄色，产量较高，干草销售行情好。

[0021] 1.2子座选择子座选择是培养新菌株的关键。选择子座金黄或橙红色，子座生长点顶端大、长势强壮、整齐的虫草和菌丝组织最密集，菌丝活力最强的部位。要求：选择虫草成熟度在9成以上，子座长度在90～120cm，子座顶部膨大直径在3～5mm的高产优质虫草。用灭菌剪刀贴培养基处切断，子座排列整齐。

[0022] 1.3 子座处理1.3.1 子座灭菌
接种室洁净度为100级，周边区1000级。

[0023] 在无菌室内，取上述子座用镊子夹住根部放在无菌水中浸洗50～60s，重复浸洗2～3次，然后用75%酒精或用浓度70～80%的氨基酸碘溶液浸洗30～60s灭菌。 [0024] 1.3.2子座选择
灭菌后的子座在距生长点顶端2～4cm部位，用浓度70～80%的氨基酸碘溶液擦拭消毒的剪刀切取备用。

[0025] 1.4菌种培养1.4.1 配制液体培养基配制
用去皮马铃薯500g、小麦100g、水1000ml，100～120℃煮熟25～30min，凉后用3～5层纱布或双层滤纸过滤出溶液，再加葡萄糖干粉20～30g、酵母膏2～3g、天门冬酰胺1～
2g、磷酸二氢钾1.5～2g、硫酸镁0.6～1g、生长素5～10ml、维生素B125～30g，加蒸馏水调至1000ml溶液，再加入亚硒酸钠溶液，使亚硒酸钠浓度达到60mg/kg。溶液pH值调至
6～7.0。装入10～500ml的试管或三角烧瓶中，制成液体培养基。试管或三角烧瓶用医药棉封口或耐高温塑膜封口。

[0026] 1.4.2 液体培养基灭菌用常温灭种方法或高压蒸汽灭菌均可。

[0027] 1.4.2.1常温灭菌：把盛有液体培养基的试管或三角烧瓶放在蒸锅内，装满后把蒸锅盖紧，温度升到103℃、压力达到0.05～0.08 MPa，保持6－8hr，然后降温、压力表归零移入接菌室接菌应用。

[0028] 1.4.2.2高压蒸汽灭菌：具体条件如下：（1）灭菌温度：125℃；有效灭菌时间不低于3.5hr。

[0029] （2）灭菌压力：0.135MPa；（3）真空度：第一次真空度：-0.011～-0.055 MPa,15min，抽去冷空气。

[0030] 第二次真空度：-0.055 MPa。

[0031] （4）真空度：-0.055 Mpa保持稳定。

[0032] （5）灭菌时间：5-7.5hr；（6）焖置时间：灭菌结束后焖置30min，利于原料糖化、灭菌和营养物质的转化。

[0033] 1.4.3 液体培养基接种1.4.3.1接种室要求：洁净度为100级，周边区1000级。

[0034] 特别洁净接种室技术指标：3
（1）接种室：0.2个/30min.Φ90皿（5个/m）；
3
（2）周边区：0.4个/30min.Φ90皿（10个/m）；
2
（3）表面最大染菌密度：5个/cm ；
（4）空气洁净度级别：接种室100级，周边区1000级。

[0035] （5）物流：①袋料→清洁通道→接种室；接种后反向返回。②无菌物品、敷料、灭菌的仪器及器材、菌种、一次性无菌物品→清洁通道→接种室；接种后反向返回。 [0036] （6）接种人员：清洁区换鞋→一更衣室，脱去外面工作服→二更换接种衣→缓冲间或直吹室→洁净走廊→刷手间→洁净接种室；接种后反向返回。

[0037] （7）其他指标和监测项目：①温度：18～26℃；
②相对湿度： 45～65% ；
③照度：≥300lx；
④沉降菌（个/Φ90mm0.5h）： ≤10 ；
⑤静压差：洁净区与非洁净区之间>10Pa；
洁净级别不同房间之间>5Pa；
⑥尘埃粒子数（个/立方米）： ≥5μm 0 ≤20000 ≤60000。

[0038] 1.4.3.2选择子座：“1.3.2 子座选择”的子座用无菌水擦刷表层并冲洗，撕开子座，用解剖刀从子座内心切取麦粒大组织块，每个试管放置1～5个灭菌子座组织块，三角烧瓶放置1～50个灭菌子座组织块。要求：每10ml液体培养基放置1个灭菌子座组织块。然后用医用药棉封口。

[0039] 1.4.4液体菌种培养盛有液体培养基的试管或三角烧瓶，在下列条件下培养7～10d，形成菌球，生产出高浓度的北虫草菌种悬浊液：
（1）温度：20～28℃；
（2）湿度：65～70%；
（3）光照：黑暗；
（4）PH值：6.0～7.0；
（5）时间：7～10d；
（6）条件：摇床培养。

[0040] 优质北虫草菌种悬浊液目测标准：纯菌球多、菌液清晰。

[0041] 劣质菌种悬浊液目测标准：纯菌球少、菌液混浊或净止时间长，菌膜少的菌种应淘汰。

[0042] 大罐生产液体菌种，生产效率高，但严格审查菌种液，是否有污染，有污染的菌液会造成生产严重损失。

[0043] 1.5液体菌种保存有菌种保存箱或梭氏法保存两种方法，任选一种方法保存。

[0044] 1.5.1用菌种保存箱保存用菌种保存箱（型号 FYL-YS-50L，北京福意电器有限公司专业生产）保存。

[0045] 要求：温度10℃；保存天数：7～15d。液体菌种随时制作随时用，防止退化、活力减弱。

[0046] 1.5.2用梭氏法保存梭氏法保存：将容有 1滴北虫草菌种悬液的小管，置于盛有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大试管中，用真空泵抽至1.3帕时，将大试管密封保存。这是为减少细胞死亡率而采取的一种不经冻结﹑缓慢脱水的干燥保藏法，适用于多种细菌﹑真菌。

[0047] 要求：温度10℃；保存天数：7～15d。液体菌种随时制作随时用，防止退化、活力减弱。

[0048] 2 北虫草产业化生产方法2.1培养基制作
2.1.1养菌室消毒灭菌
首先对培植北虫草的室内进行严格消毒处理，可使用烟雾弹、过氧乙酸等消毒剂（粉或液）空气消毒灭菌、地面用浓度10%高锰酸钾擦洗干净，进行封闭2～4hr备用。

[0049] 2.1.2配置营养液营养液配方（按重量百分比）：
（1）磷酸二氢钾：20～40g；
（2）维生素B1、B2：各20～30g；
（3）食用葡萄糖粉：30～50g；
加蒸馏水全部溶解，并调配到1000ml，再加入亚硒酸钠溶液，使亚硒酸钠浓度达到
60mg/kg。

[0050] （4）PH值：清水加入碳酸氢钠，调制PH7.5～8。

[0051] 2.1.3塑料盆培养基制作2.1.3.1配料处理。 200L水加入4ml庆大霉素，将小麦、碎玉米、大米浸泡4～5hr，捞出杂质，淋干配料水分，10斤小麦加入2斤大米拌均备用。

[0052] 2.1.3.1配方配料。把小麦、大米、碎玉米按比例混合均匀或者单一小麦灌装到白色聚乙烯塑料盆中，灌装深度1.5～2cm，加营养液后覆盖耐高温塑料薄膜，再用耐高温皮筋扎紧扎实等待高温灭菌，制作成塑料盆培养基。或不覆盖高温塑料薄膜，制作成塑料盆培养基。

[0053] 配料如下（按重量百分比）：（1）小麦：1000g；
（2）玉米：100～200g，玉米破碎；
（3）大米：100～200g；
（4）营养液：加入营养液与小麦的比例：0.5～2ml：1～5g，以配料全吸收无液体流动为最佳；
白色聚乙烯塑料盆规格：长×宽×高=40～100×40～60×10～15cm。

[0054] 2.2 灭菌用常温灭种方法或高压蒸汽灭菌，两种方法任选一种。

[0055] 2.2.1常温灭菌把塑料盆培养基平放在蒸锅内，主要把小麦等料摇平至全部覆盖塑料盆底部并均匀，装满后把蒸锅盖紧，温度升到103℃、压力达到0.05～0.08 MPa，保持6－8hr，然后降温、压力表归零移入接菌室接菌应用。

[0056] 2.2.2高压蒸汽灭菌具体条件如下：
（1）灭菌温度：125℃；有效灭菌时间不低于3.5hr。

[0057] （2）灭菌压力：0.135MPa；（3）真空度：第一次真空度：-0.011～-0.055 MPa,15min，抽去冷空气。

[0058] 第二次真空度：-0.055 MPa。

[0059] （4）真空度：-0.055 Mpa保持稳定。

[0060] （5）灭菌时间：5～7.5hr；（6）焖置时间：灭菌结束后焖置30min，利于原料糖化、灭菌和营养物质的转化。

[0061] 3 接种用常规接种或高洁净度接种室接种方法，任选一种。

[0062] 3.1常规接种3.1.1覆盖塑料薄膜的培养基接种
接种前要把接种室进行全方位消毒处理--使用烟雾弹、过氧乙酸等消毒剂（粉或液）、地面用高锰酸钾擦洗干净，进行封闭2～4hr灭菌。工作人员的服装也在消毒室进行消毒，人员进入必须换上紫外线消毒过的服装。把蒸过的盆放在空气净化台上进行接种。用接菌机（菌王牌，马可波罗网有售：http://china.makepolo.com/product-detail/100195715720.html）微细针头刺破塑料盆上的塑料膜，向里面培养基均匀喷洒液体菌种，把培养基全部覆盖均匀，静置3～4hr，移到培养室上架。

[0063] 3.1.2不覆盖塑料薄膜的培养基接种不覆盖塑料薄膜的塑料盆培养基，用用接菌机均匀喷洒液体菌种，然后在菌体表面用接种枪喷洒成膜剂。成膜剂配方（质量百分比）：
（1）壳聚糖（Chitosan）：固体粉末（CS-90粉）或壳聚糖溶液（CS-90，其中壳聚糖质量百分比含量2%，醋酸质量百分比含量为2%）（北京东恒嘉生物技术有限责任公司提供）：2.5%以下；
（2）乳化剂（Octoxinol）：农浮600号(南京钟山化工厂生产) 1.0～5.0％；
（3）分散展着剂：分散展着剂（产品型号：BD-3077 ，产品名称：农用有机硅 ；结构式或组分：乙氧基改性三硅氧烷 ，包尔得有机硅有限公司供应）；0.5～5.0％；
（4）pH值调节剂：0.1～5.0％。

[0064] 上述物质加蒸馏水或矿泉水按比例配成15000ml溶液。

[0065] 效果：溶解淋失率：﹤5%；成膜时间：2.4min。壳聚糖具有杀虫、杀菌、调节作物生长、生物官能性和易于成膜等特殊功能。

[0066] 3.2高洁净度接种室接种3.2.1接种室条件
接菌室，具备封闭性好，有通排过滤净化空气装置，设有紫外线灯灭菌和烟雾，气雾化学间替性灭菌措施，接菌工具有火焰消毒，酒精和灭菌剂消毒，后并由无菌水冲洗，确保不带杂菌的条件，接种室为100级洁净度。

[0067] 灭菌后的盛料塑料盆在接种室接种，接菌后静置3～4hr，移到培养室上架。 [0068] 3.2.2液体菌种处理对液体菌种严格审查无杂菌后，对原液体菌的菌球应用搅拌器打碎菌球，否则接菌点少并有堵塞接种枪枪孔的现像。100～200ml原液体菌种加蒸馏水兑至1000ml液体菌种。

[0069] 3.2.3接种用75%酒精棉球擦抹接种枪针头和塑料盆覆盖的塑料膜针眼部位，插入针头，射2～3次，形成盆内菌种全覆盖，植入菌种后培养基全吸收菌液为最佳，上架躺放时不流液体于瓶壁底位部。

[0070] 4培养室管理4.1 养菌
4.1.1塑料盆培养基摆放
接种后的塑料盆培养基平放在消毒灭菌后的养菌室内，整齐的平方塑料盆培养基。

[0071] 第一种方法码垛盆，以塑料盆间空码垛：第一层：塑料盆培养基在纵、横方向上彼此留有稍小于塑料盆宽度的间隙；
第二层：塑料盆培养基放在第一层塑料盆培养基的上方间隙处；
第三层：塑料盆培养基放在第二层塑料盆培养基的上方间隙处；以此类推，可以放置
10～20层的高度，各层间呈“品”字形排列。

[0072] 透明的塑料盆通过这种码垛盆方法，使得各层的塑料盆在有光线的条件下得到的散射光足以满足生长需要。

[0073] 或第二种方法架体结构：塑料盆培养基放置在金属层架上，每层架高度30～50cm、宽度60～80cm、长度任意。

[0074] 摆放塑料盆培养基的四周留有80～150cm宽的工作道。

[0075] 4.1.2 养菌出草塑料盆培养基摆放完毕后，养菌室内静置养菌。

[0076] 4.1.2.1 菌丝培育。条件是：（1）室内温度：15～20℃，架体上中下设温度表检查，并做好记录；
（2）室内湿度：75～85%；
（3）室内光照：黑暗；
（4）养菌时间：3～4d；
4.1.2.2子座培育。

[0077] 第5天给光，条件是：（1）室内温度：18～23℃；
（2）室内湿度：65～70%；保持湿度是满足菌丝体的水分供应；采收前10～15d降低空气湿度至50～65%，防止成熟过快导致菌株死亡。

[0078] （3）光照强度：弱光，200～500lux或每隔2～5m，放置一个3～5W的LED灯照明。基内菌丝形成接菌部位幅射状态时，夜间全时给光，白日需外入散射光线，直至采收期。 [0079] （4）培植时间：30～45d。在8～10d后菌丝由白转黄或橙红，继续培植，不断生长。

[0080] （5）氧气：满足菌丝体的氧气供应。观察，当菌丝辐射外围生长时，用钉板刺出封闭膜孔道，放出二氧化碳，输入新鲜空气，促进菌丝生长过程转色性缦延生长。 [0081] 4.1.2.3注意事项。（1）湿度控制：菌丝与子座生长发育，都需要水分，湿度大容易行成气生菌丝，影响子座发生率和转色慢的现象；湿度小，则影响子座生长的产量和菌丝体靠水分输送营养，造成生长发育不良的现象。（2）控制培养基pH值：一是配制培养基时pH值8～9高出最佳pH值6～7，在灭菌时PH值降低1～2个，尤其灭菌和降温的时间延长，造成pH值的下降，这是做好余量准备。

[0082] 5采收分级与包装5.1采收标准
北虫草植育40～45天时，子座上部至顶端形成凸起孢子囊时，子座长6～15cm、菌株孢头直径2～6mm时虫草成熟，进入采收期，要及时收获，在架体上有封口薄膜的塑料盆揭去封口膜、促进子实体失水和以收缩的培养基继续收缩2～4hr，可连草带培养基一块拔出处理。

[0083] 5.2采收方法有封口薄膜的塑料盆去膜，一手握住虫草、一手握住培养基撕下或一手握住虫草、一手用剪刀剪下或用机械刀具割下。一茬虫草收货后，每盆喷洒营养液10～100ml，可以出二茬虫草，以此类推，可以出草3茬。

[0084] 5.3北虫草分级方法5.3.1按照外观分级

5.3.2按照营养高和药理成分的分级
短草的营养高于高草，有些药理成分，短草要低于高草的成分，由客户需求质量标准或深加工标准来选定及定价。

[0085] 5.3.3碎草回收分级干燥处理过程中，有碎草产生和桔黄色子囊孢子粉，要分别净选包装以利增值收益。

[0086] 5.4延长保鲜期方法采收的虫草在8～10℃的温度下预冷1～2hr，延长虫草的保鲜期。

[0087] 5.5包装方法实行“2500g一包×4件的封装”模式包装。用塑膜袋和真空包装机抽真空包装。

[0088] 该北虫草富含硒元素。

[0089] 6 烘干与保存有两种方法，选择任何方法均可。

[0090] 6.1常规烘干要边采边烘干，不要积压，烘干时把草放在烘干架上要放置区均匀，避免加热不均，烘干时温度保持40～80℃，待干后再放再回潮，回潮到草有点扎手，但是草还不碎时就可装