特利加压素，英文名为Terlipressin，结构式：

分子式为：C52H74N16O15S2，分子量为1227.4。特利加压素临床用于治疗严重急性 食管静脉曲张破裂出血，严重急性胃、十二指肠溃疡出血，急性糜烂性胃炎或出血 性胃炎，胰、胆和肠屡的辅助治疗以及糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗。
目前，特利加压素为人工合成的三甘氨酸-赖氨酸-加压素，是合成的血管加压素类 似物，本身无活性，在体内经氨基肽酶作用，脱去其N末端的3个甘氨酰残基后，缓 慢地转化为有活性的赖氨酸加压素，用于治疗肝硬化门脉高压引起的急性食道静脉曲 张出血，是一种安全有效的治疗急性静脉曲张出血的药物。
特利加压素最早由Ferring公司开发，于1977年首先在荷兰作为止血药上市，商 品名为Glypressin。之后又以商品名Glypressine在法国、德国、英国上市，用于治疗 消化道静脉曲张出血，剂型皆为冻干粉针剂，规格为1mg/支。我国于1999年进口Ferring 公司的该品种，有两种剂型，冻干粉针剂和注射液。目前的特利加压素的制备方法均 为液相合成法，如捷克斯洛伐克专利(CZP281589)公开的方法，采用固相合成方法 中的Boc路线，以Boc-Gly-氯甲基树脂(DVB：1％，0.9mmol/g)为起始原料，依次接上 Boc-Lys(Tos)、Boc-Pro、Boc-Cys(Bzl)、Boc-Asn、Boc-Gln、Boc-Phe、Boc-Tyr(Z)、 Boc-Cys(Bzl)、Boc-Gly、Boc-Gly、Z-Gly，再经氨解、钠氨、氧化等反应制得特利加 压素，接肽收率仅为75％。由于该工艺三废较严重，收率也较低，反应时间长，不具 备规模生产能力，工艺复杂，成本高，环境污染严重，质量较差，不能满足临床的需 要。

本发明需要解决的技术问题是公开一种固相多肽合成特利加压素的制备方法，以 克服现有技术存在的上述缺陷。
本发明的方法包括如下步骤：
以Rink Amide树脂为起始原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，以TBTU或 HBTU/HOBt为缩合剂，依次逐个接上氨基酸，最后一个肽链采用Boc-Gly-OH；
然后加入切肽试剂进行切肽，加入乙醚沉淀，获得还原型粗品；
加入碱性物质，在pH为7.5-10.0的条件下通空气氧化，获得氧化型粗品；
最后采用C18柱进行分离纯化，获得目标产物。
按照本发明优选的方案：
以Rink Amide树脂，包括Rink Amide MBHA树脂或Rink AmideAM树脂为起始 原料，以Fmoc保护的氨基酸为单体，以TBTU或HBTU/HOBt为缩合剂，依次逐个接 上氨基酸，最后一个肽链采用Boc-Gly-OH的方法包括如下步骤：
(1)Rink Amide树脂的预处理：
将Rink Amide树脂(0.93mmol/g)用DMF浸泡，使树脂充分溶胀，氮气吹干，加 入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃反应10～60分钟，氮气吹去六氢吡啶，分别用DMF、 甲醇、DMF洗涤，氮气吹干，获得(A)；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为10～50％；
六氢吡啶的DMF溶液中，Rink Amide树脂的重量浓度为5～20％；
(2)Fmoc-Gly-树脂的制备：
将步骤(1)的(A)加入Fmoc-Gly-OH(MW：297.3)、TBTU或HBTU(MW：321)、 HOBT(MW：153.1)、NMM(MW＝101.2)和DMF，20～30℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气 吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获得Fmoc-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，(A)的重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Gly-OH的摩尔数为 树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔数为树脂的 2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
(3)Fmoc-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
将步骤(2)的Fmoc-Gly-树脂加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃脱帽反应10～60 分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干，
加入Fmoc-Lys(Boc)-OH(MW：468.5)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干； 获得Fmoc-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，Fmoc-Lys(Boc)-OH的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU 的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂 的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，步骤(2)的Fmoc-Gly-树脂的重量体积浓度为5～15ml/g；
(4)Fmoc-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
将步骤(3)的Fmoc-Lys(Boc)-Gly-树脂加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃脱帽 反应10～60分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；
加入Fmoc-Por-OH(MW：337.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获 得Fmoc-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(3)的Fmoc-Lys(Boc)-Gly-树脂的重量体积浓度为 5～15ml/g，Fmoc-Por-OH的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂 的2～6倍；，HOBT的摩尔数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Lys(Boc)-Gly-树脂的重量体积浓度为5～15ml/g；
(5)Fmoc-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
将步骤(4)的Fmoc-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃ 脱帽反应10～60分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；
加入Fmoc-Cys(Trt)-OH(MW：585.7)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获 得Fmoc-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(4)的Fmoc-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的重量体积浓度为 5～15ml/g，Fmoc-Cys(Trt)-OH的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为 树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的重量体积浓度为 5～15ml/g；
(6)Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
将步骤(5)的Fmoc-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂加入六氢吡啶的DMF溶液， 20～30℃脱帽反应10～60分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干，
加入Fmoc-Asn(Trt)-OH(MW：596.7)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获 得Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(5)的树脂的重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Asn(Trt)-OH 的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔 数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的重量体积浓度为 5～15ml/g；
(7)Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
将步骤(6)的Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂加入六氢吡啶的DMF 溶液，20～30℃脱帽反应10～60分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮 气吹干。
加入Fmoc-Gln(Trt)-OH(MW：610.7)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获 得Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(6)的树脂的重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Gln(Trt)- OH的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的 摩尔数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的重量体积 浓度为5～15ml/g；
(8)Fmoc-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
将步骤(7)的Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂加入六氢吡 啶的DMF溶液，20～30℃脱帽反应10～60分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF 洗涤，氮气吹干。
加入Fmoc-Phe-OH(FW：387.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获 得Fmoc-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(7)的树脂的重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Phe-OH 的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔 数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的 重量体积浓度为5～15ml/g；
(9)Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
将步骤(8)的Fmoc-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂加入六 氢吡啶的DMF溶液，20～30℃脱帽反应10～60分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、 DMF洗涤，氮气吹干。
加入Fmoc-Tyr(tBu)-OH(MW：403.4)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干； 获得Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(8)的树脂的重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Tyr(tBu)- OH的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的 摩尔数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中Fmoc-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树 脂的重量体积浓度为5～15ml/g；
(10)Fmoc-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树 脂的制备：
将步骤(9)的Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树 脂加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃脱帽反应10～60分钟，氮气吹干，分别用DMF、 甲醇、DMF洗涤，氮气吹干。
加入Fmoc-Cys(Trt)-OH(FW：585.7)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获 得Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(9)的树脂重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Cys(Trt)-OH 摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔数 为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys (Boc)-Gly-树脂的重量体积浓度为5～15ml/g；
(11)Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)- Gly-树脂的制备：
将步骤(10)的Fmoc-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)- Gly-树脂加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃脱帽反应10～60分钟，氮气吹干，分别 用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干。
加入Fmoc-Gly-OH(FW：297.3)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃ 接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获得 Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(10)的树脂的重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Gly-OH 的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔 数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc) -Gly-树脂的重量体积浓度为5～15ml/g；
(12)Fmoc-Gly-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)- Gly-树脂的制备：
将步骤(11)的Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys (Boc)-Gly-树脂加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃脱帽反应10～60分钟，氮气吹干， 分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干。
加入Fmoc-Gly-OH(FW：297.3)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，20～30℃ 接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干；获得 Fmoc-Gly-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树 脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(11)的树脂的重量体积浓度为5～15ml/g，Fmoc-Gly-OH 的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；，HOBT的摩尔 数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
六氢吡啶的DMF溶液的重量浓度为15～25％；
六氢吡啶的DMF溶液中，Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt) -Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的重量体积浓度为5～20ml/g；
(13)Boc-Gly-Gly-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc) -Gly-树脂的制备：
在步骤(12)获得的树脂中，加入六氢吡啶的DMF溶液，20～30℃脱帽反应10～60 分钟，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干。
加入Boc-Gly-OH(FW：175.2)、TBTU或HBTU、HOBT、NMM和DMF，将混合物20～30 ℃接肽反应0.5～1.5小时，氮气吹干，分别用DMF、甲醇、DMF洗涤，氮气吹干，再 用甲醇洗涤，干燥，得保护12肽树脂；
NMM和DMF的体积比为：NMM∶DMF＝1∶5～15；
NMM和DMF中，步骤(12)的树脂的重量体积浓度为5～15ml/g，Boc-Gly-OH 的摩尔数为树脂的2～6倍；TBTU或HBTU的摩尔数为树脂的2～6倍；HOBT的摩尔 数为树脂的2～6倍；NMM的摩尔数为树脂的4～12倍；
按照本发明优选的方案，加入切肽试剂进行切肽包括如下步骤：
将上述保护的12肽树脂加入切肽试剂：(TFA/TIS/EDT/H2O＝900ml/40ml/25ml/ 10ml)，20～35℃反应1.5～2.5小时，过滤，滤液加乙醚沉淀，获得还原型粗品；
保护的12肽树脂在切肽试剂中的重量体积比为5～20ml/g；
按照本发明优选的方案，还原型粗品氧化(二硫键的形成)的方法包括如下步骤：
将还原型粗品溶于水中，在搅拌下缓慢加入0.5～1.5mol/L的氨水，调节pH至7.5- 10.0，过滤，收集滤液；
按照本发明优选的方案，纯化包括如下步骤：
滤液经C18柱纯化，流动相：0.1MNH4Ac∶乙腈(9∶1)；流速为：100-650ml/min； 检测波长为：280nm；用HPLC跟踪收集所需要的流出液，然后采用常规的方法冻干， 获得目标产物。总收率约为：21％。
由上述公开的技术方案可见，本发明的方法，采用Rink Amide树脂(包括Rink Amide MBHA树脂、Rink AmideAM树脂)为起始原料，步接肽收率≥99％，最后一个肽链采 用Boc-Gly-OH，简化了工艺，降低了生产成本，采用切肽试剂(TFA/EDT/H2O/TIS) 进行切肽，加入乙醚沉淀粗品的方法，避免使用剧毒的氟化氢，三废污染少，切肽收 率高达92％，采用弱碱性氧化(pH7.5-10.0)的方法，氧化收率高，反应时间短，采用 C18(或C8)柱进行分离纯化，避免使用三氟乙酸，减少三废，纯化收率高达25％， 每步接肽收率均在99％以上；切肽后收率为：92％，分离纯化收率为：25％，总收率约 为：21％。由此可见，本发明的方法生产成本低，工艺简单，收率高，便于工业化实 施。

实施例和前述过程中所采用的原料列表如下：   No   品名   生产厂商   1   Fmoc-Gly-OH   四川三高生化股份有限公司   2   Fmoc-Cys(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司   3   Fmoc-Tyr(tBu)-OH   四川三高生化股份有限公司   4   Fmoc-Phe-OH   四川三高生化股份有限公司   5   Fmoc-Gln(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司   6   Fmoc-Asn(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司   7   Fmoc-Cys(Trt)-OH   四川三高生化股份有限公司   8   Fmoc-Pro-OH   四川三高生化股份有限公司   9   Fmoc-Lys(Boc)-OH   四川三高生化股份有限公司   10   Rink Amide树脂   天津和成科技有限公司   11   1-羟基苯并三氮唑(HOBt)   四川三高生化股份有限公司   12   TBTU   四川三高生化股份有限公司   13   三氟乙酸(TFA)   Merck公司   14   三异丙基硅烷(TIS)   Merck公司   15   乙二硫醇(EDT)   Merck公司   16   N-甲基吗啡啉(NMM)   上海科帆公司   17   二甲基甲酰胺(DMF)   上海化学试剂公司   18   无水甲醇(MeOH)   上海振兴化工一厂   19   六氢吡啶(PIP)   上海化学试剂公司
                          实施例1
肽链制备：
溶胀和脱帽：
称取Rink Amide树脂50克(200目，0.93mmol/g，46.5mmol)，用800mlDMF浸泡， 使树脂充分溶胀，氮气吹干。加入800毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30 分钟。氮气吹滤去六氢吡啶，分别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Gly-树脂的制备：
加Fmoc-Gly-OH(MW：297.3，186mmol)55.3g，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153.1，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混 合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加Fmoc-Lys(Boc)-OH(MW：468.5，186mmol)87.1g，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBt(MW：153.1，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Por-Lys(Boc)-Gly树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加Fmoc-Por-OH(MW：337.4，186mmol)62.8g，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153.1，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将 混合物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加108.9g(585.7，186mmol)Fmoc-Cys(Trt)-OH、TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加111.0g(596.7，186mmol)Fmoc-Asn(Trt)-OH、TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加113.6g(610.7，186mmol)Fmoc-Gln(Trt)-OH、TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加72.1g(FW：387.4，186mmol)Fmoc-Phe-OH，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分 别用DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加75.0g(403.4，186mmol)Fmoc-Tyr(tBu)-OH、TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加108.9g(FW：585.7，186mmol)Fmoc-Cys(Trt)-OH，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树脂的 制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加55.3g(FW：297.3，186mmol)Fmoc-Gly-OH，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Fmoc-Gly-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly-树 脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加55.3g(FW：297.3，186mmol)Fmoc-Gly-OH，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol) 59.7g，HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合 物25℃振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
Boc-Gly-Gly-Gly-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Phe-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-Por-Lys(Boc)-Gly- 树脂的制备：
加入500毫升20％六氢吡啶的DMF溶液，25℃振摇30分钟。氮气吹干，分别用 DMF、无水甲醇DMF各洗涤三次，氮气吹干。
加32.6g(FW：175.2，186mmol)Boc-Gly-OH，TBTU或HBTU(MW：321，186mmol)59.7g， HOBT(MW：153，186mmol)32.7g，NMM 41.4ml(MW＝101.2)，400mlDMF，将混合物25℃ 振摇1小时。氮气吹干，DMF、无水甲醇、DMF各洗涤三次，氮气吹干。
再用无水甲醇洗涤三次。抽干后，放入真空干燥器中干燥，称重，得保护12肽树 脂。
切肽：
保护的12肽树脂转移到切肽瓶中，冷却下，边搅拌边加入切肽试剂： (TFA/TIS/EDT/H2O＝900ml/40ml/25ml/10ml)，25℃搅拌2小时。过滤，抽干，滤液加 无水乙醚沉淀。
氧化(二硫键的形成)：
将还原型特利加压素粗品溶于纯化水中，在搅拌下缓慢加入1mol/L氨水，调节 PH至7.5-10.0，搅拌过夜(HPLC跟踪反应进程)，过滤。
纯化：
滤液经C18柱(10×30cm)纯化，流动相：0.1MNH4Ac∶乙腈(9∶1)；流速为： 300ml/min；检测波长为：280nm；用HPLC跟踪收集所需要的流出液，然后冻干，获 得目标产物，总收率约为：21％。