PCV3抗原表位的多肽序列筛选方法
专利汇可以提供PCV3抗原表位的多肽序列筛选方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了PCV3 抗原 表位的多肽序列筛选方法，包括五条多其 氨 基酸序列分别为PCV3-1：GTPQNNKPWH；PCV3-2：SPAQQTKTMF；PCV3-3：WLQDDPYAESSTRKV；PCV3-4：MTSKKKHSRY；PCV3-5：VPEKTGMTDFYGTKE。本发明采用ELISA的方法检测PCV2与PCV3的抗血清IgG，通过ELISA的方法，筛选出与PCV3 抗体 特异性结合的短肽。筛选出的短肽，可以为将来PCV3的亚单位 疫苗 及相关诊断 圆环病毒 3感染的 试剂 ， 治疗 圆环病毒3感染的抗体等提供可靠依据。本发明的优点在于，筛选出的五条多肽抗原性良好，抗原表位经鉴定为PCV3所特有，且序列保守，应用其表位序列可以有效的 鉴别 诊断 动物是否感染PCV3，为以后防治PCV3提供有效的检测手段。，下面是PCV3抗原表位的多肽序列筛选方法专利的具体信息内容。
1.PCV3抗原表位的多肽序列，其特征在于，包括五条多肽，其氨基酸序列分别为：
PCV3-1：gtpqnnkpwh；
PCV3-2：spaqqtktmf；
PCV3-3：wlqddpyaesstrkv；
PCV3-4：mtskkkhsry ；
PCV3-5：vpektgmtdfygtke；
上述氨基酸序列的核苷酸序列分别为：
PCV3-1：ggaacccctc agaataacaa gccctggcac 30；
PCV3-2：tctccggctc agcaaacaaa aactatgttc 30；
PCV3-3：tggctccaag acgaccctta tgcggaaagt tccactcgta aagtt 45；
PCV3-4：atgacttcta aaaaaaaaca cagccgttac 30；
PCV3-5：gtcccggaaa aaactggaat gacagacttc tacggcacca aagaa 45。
2.权利要求1所述的PCV3抗原表位的多肽序列的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）根据NCIBI上边公布的已知PCV3 cap蛋白的氨基酸序列，比对分析PCV2与PCV3结构蛋白的主要差别，观察其氨基酸的保守性；
（2）使用DNASTAR7.0软件对其中一株PCV3的cap蛋白进行氨基酸抗原性预测，预测PCV3结构蛋白的抗原表位区，从而分阶段表达；
（3）通过采取免疫PCV2与PCV3的抗血清分别与PCV3表达一系列短肽进行结合反应，从而筛选出与PCV3特异性结合的短肽，其氨基酸序列分别为PCV3-1：gtpqnnkpwh；
PCV3-2：spaqqtktmf；
PCV3-3：wlqddpyaesstrkv；
PCV3-4：mtskkkhsry ；
PCV3-5：vpektgmtdfygtke。
3.权利要求1所述的氨基酸序列在诊断PCV2与PCV3型鉴别诊断试剂盒中的应用。
4.权利要求1所述的氨基酸序列在亚单位疫苗的应用。
5.权利要求1所述的氨基酸序列在治疗PCV3抗体中的应用。
PCV3抗原表位的多肽序列筛选方法
技术领域
背景技术
发明内容
PCV3-2：spaqqtktmf；
PCV3-3：wlqddpyaesstrkv；
PCV3-4：mtskkkhsry ；
PCV3-5：vpektgmtdfygtke；
上述氨基酸序列的核苷酸序列分别为：
PCV3-1：ggaacccctc agaataacaa gccctggcac 30；
PCV3-2：tctccggctc agcaaacaaa aactatgttc 30；
PCV3-3：tggctccaag acgaccctta tgcggaaagt tccactcgta aagtt 45；
PCV3-4：atgacttcta aaaaaaaaca cagccgttac 30；
PCV3-5：gtcccggaaa aaactggaat gacagacttc tacggcacca aagaa 45。
（2）使用DNASTAR7.0软件对其中一株PCV3的cap蛋白进行氨基酸抗原性预测，预测PCV3结构蛋白的抗原表位区，从而分阶段表达；
（3）通过采取免疫PCV2与PCV3的抗血清分别与PCV3表达一系列短肽进行结合反应，从而筛选出与PCV3特异性结合的短肽，其氨基酸序列分别为：
PCV3-1：gtpqnnkpwh；
PCV3-2：spaqqtktmf；
PCV3-3：wlqddpyaesstrkv；
PCV3-4：mtskkkhsry ；
PCV3-5：vpektgmtdfygtke。
具体实施方式
其次，使用DNASTAR7.0软件对其中一株PCV3的cap蛋白进行氨基酸抗原性预测，预测结果见图1所示；
然后，通过PCR的方法，分别扩增预测的5条短肽序列，并克隆到原核表达载体pGEX-4T-
3中，通过转化的方法，转入BL21（DE3）中，诱导表达；将诱导表达的细菌进行超声波破碎，使用GST蛋白纯化柱，纯化后的蛋白经过SDS-PAGE电泳后，其电泳结果如图2所示，1-5分别为5条短肽样品，Marker为170kd蛋白电泳Marker。
（2）第二天弃去包被液，使用5%脱脂奶粉的PBST封闭ELISA板，37℃封闭2h；
（3）使用PBST溶液清洗3次后，倍比稀释从猪场采集的猪阳性血清；第一列血清1:100稀释，后边一直倍比稀释到第11列，采用2倍梯度稀释法；加入1抗溶液（猪场采集的感染圆环病毒3的阳性），加入1抗后，放于37℃孵育1h；
（4）弃去1抗，PBST洗6次，之后加入1:8000的HRP标记的羊抗猪二抗，37℃孵育1h；
（5）PBST洗6次后，加入显色液以及底物溶液显色，之后加入终止液，在酶标仪上进行OD450波长的读数，判别ELISA反应结果。
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