一种抗神经母细胞瘤的中药提取物及其制备工艺和应用
阅读：955发布：2023-01-25
专利汇可以提供一种抗神经母细胞瘤的中药提取物及其制备工艺和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种抗神经母细胞瘤的中药提取物及其制备工艺和应用，该中药提取物为桂花子提取物，是在 压榨 去油后得到的桂花子饼粕 基础 上经 水 、乙酸乙酯先后提取获得的。本发明涉及的中药提取物由单一的中草药制备而成，其不仅可以抑制人骨髓神经母细胞瘤 细胞增殖 ，而且因其原料的来源广泛，因此生产成本低，具有较好的社会意义和经济意义。，下面是一种抗神经母细胞瘤的中药提取物及其制备工艺和应用专利的具体信息内容。
一种抗神经母细胞瘤的中药提取物及其制备工艺和应用
技术领域
[0001] 本发明属于中药提取技术领域，具体而言，涉及一种抗神经母细胞瘤的中药提取物及其制备工艺和应用。
背景技术
[0002] 神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)又称成神经母细胞瘤，是威胁儿童生命的儿童多见的恶性肿瘤之一，据文献报告它是儿童恶性肿瘤中排列在急性白血病、脑瘤和恶性淋巴瘤之后发病率占第四位的肿瘤。NB属交感神经系统肿瘤，系由未分化的交感神经细胞听组成，具有高度恶性，近20余年来虽然在NB的生物学特性、诊断和治疗上有较大进展，但死亡率仍高。目前，人们积极寻找抗神经母细胞瘤新药，一方面从天然产物中提取新药，另一方面探索改进已有药物，增加新功能；中药是我国的传统药物，其在治疗疑难杂症方面具有先天优势。由于新药开发难度大，周期长，对中药的深入研究成为新的热点。
[0003] 桂花子为木犀科植物木犀的干燥果实。4～5月果实将成熟时采收，用温水浸泡后，晒干。干燥果实呈长卵形或椭圆形，长1.5～2厘米，直径7～9毫米；表面棕色或紫棕色，有隆起的不规则网状皱纹；基部有果柄痕，有时可见细果柄及皿状宿萼。外果皮菲薄，易脱落，露出淡黄棕色的果核，其表面具不规则的纵沟纹；内果皮带韧性，易剥开，通常含种子1枚（另一胚珠一般不发育，偶有含种子2枚的）。种子呈长卵形，长1.2～1.5厘米，直径约5毫米，灰棕色，有略凹下的棕色脉纹，腹面附有长卵形薄膜状中隔；胚乳坚硬肥厚，黄白色，富油质，胚细长，微有香气，种子味苦。以身干、子粒饱满、色橙黄、不霉者佳。其含脂肪油，出油率达11.9％。
[0004] 目前，尚无文献报道桂花子或其提取物具有抗神经母细胞瘤的功效。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于对桂花子进行深入研究和探索，从而提供一种抗神经母细胞瘤的中药提取物及其制备工艺和应用。
[0006] 为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验研究并不懈探索，最终获得了如下技术方案：一种抗神经母细胞瘤的中药提取物，所述的中药提取物为桂花子提取物。它是在桂花子压榨去油后得到的桂花子饼粕基础上经水、乙酸乙酯先后提取获得的。
[0007] 本发明的第二个目的还在于提供了上述桂花子提取物的制备工艺，其中该工艺包括如下步骤：将桂花子压榨去油后得到的桂花子饼粕加水煎煮，所得煎液过滤，滤液浓缩成稠膏后，于75℃以下干燥，得干燥物；加入乙酸乙酯，加热回流提取，所得提取液过滤，然后减压回收溶剂，于75℃以下干燥成干浸膏，粉碎，得到桂花子提取物。
[0008] 优选地，如上所述的桂花子提取物的制备工艺，其中所述的煎煮步骤为：加水煎煮提取2-4次，每次煎煮0.8-2.2h。
[0009] 本发明人通过将神经母细胞瘤细胞的体外培养，当神经母细胞瘤细胞的细胞状态达到稳定以后，将所制备的桂花子提取物与神经母细胞瘤细胞共同培养，通过CCK-8法检测桂花子提取物对神经母细胞瘤细胞增殖，通过对细胞增殖结果的分析以及细胞存活率与溶液浓度的关系，可以得到一个初步的结论：随着桂花子提取物溶液剂量浓度的增加，细胞的存活率呈下降趋势，当桂花子提取物浓度达到400μg/ml时，细胞增殖抑制率达到60%以上，这可以说明桂花子提取物对神经母细胞瘤细胞的增殖具有非常显著的抑制作用。基于以上研究结果，本发明的第三个目的在于提供一种制药用途，即上述的桂花子醇提物在制备抗神经母细胞瘤的药物中的应用。
[0010] 与现有技术相比，本发明涉及的中药提取物由单一的中草药制备而成，其不仅可以抑制人骨髓神经母细胞瘤细胞增殖，而且因其原料的来源广泛，因此生产成本低，具有较好的社会意义和经济意义。
[0011]
具体实施方式
[0012] 以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。
[0013] 实施例1 桂花子提取物的制备将压榨去油后得到的桂花子饼粕1.5kg，粉碎后置于带有圆底烧瓶的多功能提取装置中，加入12倍量的水，煮沸后保持沸腾，共煮沸3次，第1次保沸2小时，第2、3次各保沸
1.5小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩成稠膏后，于72℃干燥，得干燥物；在装有所得干燥物的多功能提取装置中加入10倍体积质量比的乙酸乙酯，加热回流提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，然后减压回收溶剂，于72℃以下干燥成干浸膏，粉碎成细粉，过100目筛，得到桂花子提取物。
1.5小时，合并3次提取液，过滤，滤液浓缩成稠膏后，于72℃干燥，得干燥物；在装有所得干燥物的多功能提取装置中加入10倍体积质量比的乙酸乙酯，加热回流提取2次，每次提取2小时，合并提取液，过滤，然后减压回收溶剂，于72℃以下干燥成干浸膏，粉碎成细粉，过100目筛，得到桂花子提取物。
[0014] 实施例2 桂花子提取物对人骨髓神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的抑制试验研究将贴壁传代人骨髓神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞培养于37℃、5％CO2、饱和湿度条件下的培养箱中，培养基为10％胎血清的高糖亚甲基双丙烯酰胺(DMEM)，每3～4d按1：2进行传代。实验开始后，将对数生长期细胞用胰蛋白酶消化下来，制作成为细胞悬液浓度为
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2.0×10个/ml，将细胞分别接种于96孔培养板，每孔加100μl细胞悬液，使得每孔约含
2000个细胞，将培养板置37℃，5％CO2培养箱内培养24 h。将桂花子水提物制成一定比例的稀释浓度，使得96孔板每孔加入10μl桂花子提取物后终浓度为100、200、400、800 μg/ml，每个浓度设3个平行孔，以10 μl灭菌双蒸水作为对照组，无细胞组作为调零组。加药后细胞继续培养24、48 h。后加入细胞增殖检测试剂(Cell Counting Kit-8，CCK-8，该试剂盒由日本同仁化学研究所生产)，37℃孵育1h，在450 nm下测定OD值。
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2.0×10个/ml，将细胞分别接种于96孔培养板，每孔加100μl细胞悬液，使得每孔约含
2000个细胞，将培养板置37℃，5％CO2培养箱内培养24 h。将桂花子水提物制成一定比例的稀释浓度，使得96孔板每孔加入10μl桂花子提取物后终浓度为100、200、400、800 μg/ml，每个浓度设3个平行孔，以10 μl灭菌双蒸水作为对照组，无细胞组作为调零组。加药后细胞继续培养24、48 h。后加入细胞增殖检测试剂(Cell Counting Kit-8，CCK-8，该试剂盒由日本同仁化学研究所生产)，37℃孵育1h，在450 nm下测定OD值。
[0015] 桂花子提取物对SH-SY5Y细胞增殖的影响结果见表1、表2。通过表1、表2的试验结果可以看出，桂花子水提物对SH-SY5Y细胞的生长具有抑制作用，与细胞作用48h的半数抑制浓度(IC50)为338.2μg/ml，与细胞作用24 h时的IC50为357.9μg/ml。值得注意的是，本发明人曾采用水煎煮的方法得到的桂花子水提物，其并未对SH-SY5Y细胞增殖表现出明显的抑制作用，具体原因需要进一步研究。
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