【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、酒類、発酵食品及び酵母利用食品等に用いられる酵母における脂肪酸合成酵素変異遺伝子及びその利用に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来より、酒類或いはパンに代表される酵母を用いた食品には、香気成分としてカプロン酸エチルが含有されていることが知られている。 このカプロン酸エチルを増加させることによって、該食品の官能特性を向上させることができる。 特に、酒類においては、吟醸香の主要な成分がこのカプロン酸エチルであるため、
カプロン酸エチルを増加させることによって、極めて優れた芳香性を得ることができる。

【０００３】ところで、カプロン酸エチルは、酵母における脂肪酸生合成系の途中で生成されるカプロン酸とエタノールとから生成される。 しかしながら、カプロン酸は、この脂肪酸生合成系においてカプロン酸エチル以外の化合物に変化してしまう結果、酵母中にごく僅かにしか存在していない。 したがって、酵母において、カプロン酸から生成されるカプロン酸エチルは、極めて少量にしか生成されていない。 言い換えると、カプロン酸エチルの生成反応において、カプロン酸の濃度が律速となっているのである。

【０００４】これまで、脂肪酸生合成系に変異を有する酵母を取得することによって、酵母においてカプロン酸を大量に生成させる試みがなされてきた。 具体的には、
脂肪酸合成酵素の特異的阻害剤であるセルレニンに対する多数の耐性株を取得し、当該多数の耐性株のなかで大量のカプロン酸を生産するものを選抜していた。 選抜された耐性株は、脂肪酸合成酵素の活性が変化する結果、
生成する脂肪酸の組成が変化し、カプロン酸の生産能が向上していると考えられる。

【０００５】しかしながら、このような耐性株を得るためには、野生の酵母に突然変異誘発剤を作用させた後、
セルレニンを含有する培地で生育した酵母を分離しているため、目的とする脂肪酸合成酵素以外のタンパク質をコードする遺伝子にも変異を有する可能性がある。 このため、カプロン酸生産能が向上した耐性株を得たとしても、醸造特性が劣化してしまうような不都合が生じてしまうことがある。 このような耐性株は、酒類等の食品に使用する酵母としては安心して使用することができない。 また、セルレニン耐性により得る場合には変異が一定となるため、カプロン酸エチル生産量の調節は望めない。 カプロン酸エチル等の香気成分は微妙な量の調節が必要であり、セルレニン耐性による生産量の向上からは多様な生産量の調節は望めない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明は、上述したような従来の実状に鑑みてなされたものであり、
野生型の酵母が持つ醸造特性等を劣化させることなく、
カプロン酸エチルの生産能を飛躍的に向上させることができるか又はカプロン酸エチルの生産量を適切に調節することができる脂肪酸合成酵素遺伝子、当該遺伝子を用いた形質転換体及び食品の製造方法の提供を目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上述した目的を達成するために鋭意検討した結果、酵母における脂肪酸合成酵素遺伝子の活性中心近傍のアミノ酸を所定のアミノ酸に置換することによって、カプロン酸生成能を飛躍的に向上させることができることを見出し、本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明は、以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子である。 （ａ）配列番号１で表わされるアミノ酸配列における１
２５０番目のグリシンがトレオニン、アラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンに置換されたタンパク質。 （ｂ）配列番号１で表わされるアミノ酸配列における１
２５０番目のグリシンがトレオニン、アラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンに置換され、且つ、該アミノ酸配列における少なくとも１個の塩基が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、脂肪酸合成酵素活性を有するタンパク質。

【０００９】また、本発明は、以下の（ａ）又は（ｂ）
のタンパク質である。 （ａ）配列番号１で表わされるアミノ酸配列における１
２５０番目のグリシンがトレオニン、アラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンに置換されたタンパク質。 （ｂ）配列番号１で表わされるアミノ酸配列における１
２５０番目のグリシンがトレオニン、アラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンに置換され、且つ、該アミノ酸配列における少なくとも１個の塩基が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、脂肪酸合成酵素活性を有するタンパク質。

【００１０】さらに、本発明は、上記遺伝子を有する組換えベクターである。 さらにまた、本発明は、上記遺伝子を有する形質転換酵母である。 さらにまた、本発明は、上記組換えベクターを有する形質転換酵母である。
さらにまた、本発明は、上記形質転換体を用いる食品の製造方法である。

【００１１】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の脂肪酸合成酵素変異遺伝子は、例えば、酵母（Saccharomyces cerevisiae: Yeast Genetic Stock Ce
nter）の染色体ＤＮＡを抽出し、この染色体ＤＮＡから脂肪酸合成酵素遺伝子を単離し、この脂肪酸合成酵素遺伝子の所定の塩基に変異を導入することによって得ることができる。 また、この脂肪酸合成酵素変遺伝子をプラスミドベクターに組み込むことによって、本発明の組換えベクターを得ることができる。 さらに、この組換えベクターを適当な酵母に導入することによって、本発明の形質転換体を得ることができる。 さらにまた、この形質転換体を使用することによって、食品を製造することができる。

【００１２】１． 染色体ＤＮＡの調製 染色体ＤＮＡを調製する際には、Saccharomyces cerevi
siae YPH250、 Saccharomyces cerevisiae X21801-A、S
accharomyces cerevisiae W303、きょうかい酵母、パン酵母、ワイン酵母、ビール酵母、清酒酵母（（財）日本醸造協会、（財）発酵研究所、Yeast Genetic Stock Ce
nter）等といった酵母を使用することができる。 酵母の培地としては、通常使用されているものであれば如何なる培地を使用しても良く、例えば、合成培地、ＹＰＤ培地、ＹＭ培地、麹汁培地等を使用することができる。

【００１３】次に、培養した酵母を集菌し、そこから染色体ＤＮＡを抽出する。 染色体ＤＮＡを調製するには、
通常用いられる手法を適用することができる。 具体的には、細胞壁溶解酵素やプロテイナーゼを効かせた後、フェノールクロロホルム処理し、ＲＮａｓｅを効かせ、さらに、フェノール処理、続いてエタノール沈殿を行う方法が挙げられる。 また、染色体ＤＮＡを調製するには、
市販のキット（例えば、DNeasy ^ＴＭ Tissue System（キアゲン社製））等を使用することもできる。

【００１４】２． 脂肪酸合成酵素遺伝子の単離 脂肪酸合成酵素遺伝子を単離するには、（１）上記１で調製した染色体ＤＮＡを鋳型としたＰＣＲを行なう手法、（２）上記１で調製した染色体ＤＮＡから作製したＤＮＡライブラリーから遺伝子スクリーニングを行なう手法等が採用される。

【００１５】（１）のＰＣＲを行なう手法では、先ず、
野生型の酵母における脂肪酸合成酵素遺伝子の塩基配列が既に決定されているので、この塩基配列に基づいてフォワードプライマー及びリバースプライマーを設計し、
合成する。 フォワードプライマーとしては、例えば、配列番号３に示すように、5'-CGCGGATCCGCAGCCATAAGCGATG
TAGGG-3'を使用することができる。 また、リバースプライマーとしては、例えば、配列番号４に示すように、5'
-CCGCTCGAGCTGACCCTTTCCCCTCCTCAC-3'を使用することができる。

【００１６】（１）の手法では、次に、これらフォワードプライマー及びリバースプライマーを用いて、上記１
で調製された染色体ＤＮＡを鋳型とするＰＣＲ反応を行なう。 このＰＣＲ反応によれば、染色体ＤＮＡにおけるフォワードプライマー及びリバースプライマーにより挟まれる領域のＤＮＡ断片を増幅することができる。

【００１７】なお、これらフォワードプライマー及びリバースプライマーは、詳細を後述する「組換えベクターの構築」の際にプラスミドベクター等における所定の制限酵素サイトに導入するため、対応する制限酵素サイトを付加するように設計することが好ましい。

【００１８】一方、（２）の遺伝子スクリーニングを行なう手法では、先ず、上記１で調製された染色体ＤＮＡ
を適当な制限酵素で部分切断した後、適当なベクターに連結してゲノムＤＮＡライブラリーを作製する。 ここで、ベクターとしては、pRS316、pRS306、YEp24及びYEp
13等のプラスミドベクター、或いは、ゲノミックバンク用のファージベクターを使用することができる。

【００１９】（２）の手法では、次に、既知の脂肪酸合成酵素遺伝子の塩基配列から設計されたプライマーを用いて、上記１で調製された染色体ＤＮＡを鋳型にしてＤ
ＮＡ断片を増幅する。 そして、このＤＮＡ断片を［ ^３２
Ｐ］等の放射性物質又はジコキシゲニン等の非放射性物質で標識し、標識されたＤＮＡ断片をプローブとしたハイブリダイゼーションを行ない、上記ゲノムＤＮＡライブラリーからポジティブクローンを選択する。 すなわち、得られたプローブＤＮＡ断片と強く結合するクローンを選択することによって、ゲノムＤＮＡライブラリーからポジティブクローンを選択することができる。

【００２０】（２）の手法では、次に、公知の手法に従って得られたポジティブクローンから塩基配列を決定し、（１）の手法と同様にフォワードプライマー及びリバースプライマーを合成し、脂肪酸合成酵素遺伝子全体を含むクローンを鋳型としたＰＣＲを行う。 これにより、（１）の手法と同様に、野生型の酵母における脂肪酸合成酵素遺伝子を単離することができる。 次に、単離した脂肪酸合成酵素遺伝子の塩基配列を、公知の手法にしたがって決定する。 その結果、単離した脂肪酸合成酵素遺伝子の塩基配列は、配列番号２に示すように、全長５６６４塩基であることが判った。

【００２１】３． 脂肪酸合成酵素遺伝子への変異の導入 上記２で単離した脂肪酸合成酵素遺伝子の所定の塩基に対して、所定の変異を導入する。 このとき、脂肪酸合成酵素遺伝子がコードするタンパク質における１２５０番目のアミノ酸（グリシン）を、トレオニン、アラニン、
フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンとするように塩基配列を変異させる。

【００２２】具体的には、上記２で決定した配列番号２
における第３７４８塩基から第３７５０塩基に存在する
ggtの塩基配列（第１２５０番目のコドンで、グリシンをコードする。）を、トレオニン、アラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンをコードするコドンに変異させる。 ここで、トレオニン、アラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンをコードするコドンとしては、既知の縮重コドンを適宜選択することができる。

【００２３】変異を導入する手法としては、通常行われている手法を使用することができる。 例えば、市販のキットを使用してキットに付属するプロトコールにしたがって、脂肪酸合成酵素遺伝子の所定の塩基を置換する変異を導入することができる。 市販のキットとしては、宝酒造株式会社製の「TaKaRa LA PCR in vitro Mutagenes
is Kit」、「Mutan(R)-Express Km」、「Mutan(R)-
K」、「Mutan(R)-Super Express Km」、東洋紡績株式会社製の「ExSite ^ＴＭ PCR-Based Site-Directed Mutagen
esis Kit」を例示することができる。

【００２４】また、変異を導入する手法としては、市販のキットを利用せずに点変異を導入する方法を使用してもよい。 例えば、点変異を導入するサイト及び点変異の配列を含むフォワードプライマー及びその下流領域のリバースプライマーを準備する。 また、ＰＣＲテンプレートとなる標的遺伝子は、長い断片と短い断片とを用意する。 ここで、長い断片には、リバースプライマーの相補配列があるが、短い断片には当該相補配列がないように設計する。

【００２５】次に、クローニングした標的遺伝子の長い断片を鋳型にして、フォワードプライマー及びリバースプライマーを用いて第１回目のＰＣＲを行い、点変異が導入されたDNA断片を取得する。 次に、第１回目のＰＣ
Ｒにおいて使用したフォワードプライマーよりも上流領域に相補配列を有する第２のフォワードプライマーを準備する。 ここで、この第２のフォワードプライマーは、
標的遺伝子の短い断片にも相補配列を有するように設計する。

【００２６】次に、第２のフォワードプライマーとリバースプライマーを使用して、第１回目のＰＣＲで取得したDNA断片と標的遺伝子の短い断片とを鋳型として第２
回目のＰＣＲを行う。 このとき、リバースプライマーは、第１回目のＰＣＲで取得したDNA断片のみに対してアニールすることになる。 したがって、第２回目のＰＣ
Ｒにおいては、変異を持つ遺伝子のみが鋳型となり、変異が導入されたDNA断片のみが増幅されることとなる。
このような方法によれば、点変異が導入された標的遺伝子を高い確率で得ることができる。

【００２７】４． 組換えベクターの構築 上記３で得られた脂肪酸合成酵素変異遺伝子を、通常行われている手法を用いて、プラスミドベクター又はファージベクター等のベクターにおける所定の部位に組み込むことによって、組換えベクターを得ることができる。
使用可能なプラスミドベクターとしては、pRS316、pRS3
15（RSSikorski, etal :Genetics, 122, 19-27(198
9)）、pAUR135（宝酒造株式会社製）及びpI-REDI（東洋紡績株式会社製）を挙げることができる。

【００２８】組換えベクターを構築する際には、先ず、
上記３で得られた脂肪族合成酵素変異遺伝子を所定の制限酵素で消化する。 これにより、センスプライマー及びアンチセンスプライマーに付加した制限酵素サイトを両末端とする断片を得ることができる。 また、同じ制限酵素を用いてベクターを消化し、脂肪酸合成酵素変異遺伝子を導入する部位を形成する。 次に、脂肪酸合成酵素変異遺伝子とベクターとをリガーゼにより連結することによって、本発明の組換えベクターを得ることができる。

【００２９】５． 形質転換酵母の調製 上記４で得られた組換えベクターを、通常行われている手法を用いて形質転換することによって、形質転換酵母を得ることができる。 具体的には、コンピテント酵母細胞を、組換えベクターの存在下で所定の条件で培養することによって、形質転換することができる。 形質転換された酵母は、予めベクターに存在するマーカー遺伝子の発現により選択することができる。

【００３０】ここで、宿主として使用可能な酵母としては、清酒酵母、ビール酵母、ワイン酵母、醤油酵母、みそ酵母、きょうかい酵母及び実験室用酵母等を挙げることができる。 また、形質転換の手法としては、コンピテント酵母細胞を使用する方法だけでなく、プロトプラスト法やエレクトロポーレーション法といった手法を適用することができる。 なお、不要遺伝子を除去する手法としては、遺伝子置換法（R.AKADA, et al: Journal of B
ioscience and Bioengineering, 87, 1, 43-48(1999)）
といった手法を適用することができる。

【００３１】６． 形質転換酵母を用いた脂肪酸合成酵素の発現 上記５で調製した形質転換酵母内で組換えベクターを発現させることによって、脂肪酸合成酵素を機能させることができる。 脂肪酸合成酵素は、第１２５０番目のアミノ酸がトレオニン、アラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミンであるため、カプロン酸を多量に生成することができ、その結果、多量のカプロン酸エチルを生産することができる。 したがって、この形質転換酵母を用いて食品を製造すると、当該食品中にカプロン酸エチルが多量に含まれることになり、官能性に優れた食品となる。

【００３２】また、この酵母においては、薬剤や紫外線照射といった突然変異誘発手段によって脂肪酸合成酵素遺伝子に変異を導入した酵母とは異なり、当該脂肪酸合成酵素の所定の部位のみに変異を有するものである。 このため、この酵母では、醸造特性が低下することなく、
また、不測の変異に起因して有害な物質を産生することを防止できる。 したがって、この酵母は、優れた醸造特性を有し、且つ、安全性に優れたものである。

【００３３】なお、上述した説明においては、脂肪酸合成酵素遺伝子の所定の塩基配列に変異を導入し、カプロン酸エチルの生産能を飛躍的に向上させることができる脂肪酸合成酵素を得る手法について説明した。 しかしながら、このような脂肪酸合成酵素を得る手法としては、
このような手法に限定されず、いかなる手法を適用してもよい。

【００３４】

【実施例】以下、実施例により本発明を説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。 ［実施例１］酵母の染色体ＤＮＡの調製 まず、酵母を、Saccharomyces cerevisiae YPH250（Yea
st Genetic Stock Center）を、２％グルコース（片山化学工業株式会社製）、２％ペプトン（和光純薬工業株式会社製）及び１％酵母エキス（極東製薬工業株式会社製）からなるＹＰＤ培地で２８℃、１日間培養した。

【００３５】その後、遠心分離により集菌し、0.125mg/
mlザイモリアーゼ１００Ｔ（生化学工業株式会社製）、
1M Ｄ−ソルビトール（関東化学工業株式会社製）及び4
0mMリン酸緩衝液(pH6.8)（関東化学工業株式会社製）からなる溶液に懸濁し、３０℃、１時間放置した。

【００３６】次に、この懸濁液を遠心分離して集菌し、
菌体を溶菌液に懸濁し、６０℃で３０分間放置した。 ここで、懸濁液の組成は、1mg/ml プロナーゼＥ（シグマアルドリッチジャパン株式会社製）、0.2M 塩化ナトリウム（関東化学工業株式会社製）、0.1M エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（関東化学工業株式会社製）、
5% ドデシル硫酸ナトリウム（和光純薬株式会社製）及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン-塩酸緩衝液(pH8.5)（片山化学工業株式会社製）である。

【００３７】次に、フェノール・クロロホルム処理、続いてエタノール沈殿処理、1mg/ml RNase A（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）を３７℃で３０分間処理した後、再び、フェノール・クロロホルム処理、続いてエタノール沈殿処理した後、得られたペレットを乾燥させた。 この操作により、酵母の染色体ＤＮＡが得られた。

【００３８】［実施例２］ＰＣＲによる脂肪酸合成酵素遺伝子の増幅 得られた染色体ＤＮＡを鋳型にしたＰＣＲ法により、脂肪酸合成酵素遺伝子を増幅するためにフォワードプライマー及びリバースプライマーを合成した。 これらフォワードプライマー及びリバースプライマーは、配列番号２
に示す既知の脂肪酸合成酵素遺伝子の塩基配列に基づいて設計した。

【００３９】フォワードプライマー：5'-CGCGGATCCGCAG
CCATAAGCGATGTAGGG-3'（配列番号３） リバースプライマー：5'-CCGCTCGAGCTGACCCTTTCCCCTCCT
CAC-3'（配列番号４） これらフォワードプライマー及びリバースプライマーを用いたＰＣＲは、TaqPlus Long ^ＴＭ PCR System（東洋紡績株式会社製）を使用して以下の条件で行った。 なお、ＰＣＲ反応では、以下の組成に従って反応溶液を調製した。

【００４０】 染色体DNA（10ng） ５μｌ フォワードプライマー（100pmol） ９μｌ リバースプライマー（100pmol） ９μｌ High Salt緩衝液 ５μｌ dNTP（2mM） ５μｌ Taq Plus Long Polymerase ０．５μｌ 殺菌水 １６．５μｌ

【００４１】また、ＰＣＲの反応条件は、先ず、９５℃
で１分間の加熱に続いて、９５℃で３０秒、５０℃で１
分及び６５℃で１０分を３０サイクル繰り返し、その後、７２℃で１０分間保持し、最後に４℃で保存するものとした。 この操作により、配列番号２に示す野生型の
Saccharomyces cerevisiaにおける脂肪酸合成酵素遺伝子を単離・増幅することができた。 配列番号２に示した塩基配列より、野生型の酵母における脂肪酸合成酵素のアミノ酸配列を配列番号１に示す。

【００４２】［実施例３］変異挿入用組換えベクターの構築 実施例２で得られた脂肪酸合成酵素遺伝子を用いて、以下の方法により組換えベクターpRSFAS6を作製した。 脂肪酸合成酵素遺伝子をＢａｍＨＩとＸｈｏＩ（ニューイングランドバイオラボ社製、第一化学薬品株式会社より購入）で切断後、エタノール沈殿処理後、電気泳動を行い約6.9kbのバンドを分離し、ＢａｍＨＩとＸｈｏＩで処理したプラスミドｐＲＳ３１６に連結し、大腸菌（E.
coli DH5α）を宿主としてサブクローニングを行った。

【００４３】得られたプラスミドの電気泳動を行いプラスミドｐＲＳ３１６より、ＢａｍＨＩとＸｈｏＩとで切断した脂肪酸合成酵素遺伝子に相当する塩基鎖（約6.9k
b）分長くなったプラスミドを回収し、そのプラスミドをｐＲＳＦＡＳ６（約11.7kb）と命名した。

【００４４】次に、ｐＲＳＦＡＳ６をＳｐｈＩとＮｈｅ
Ｉ（宝酒造株式会社製）で切断後、エタノール沈殿処理後、電気泳動を行い約4.2kbのバンドを分離し、Ｓｐｈ
ＩとＮｈｅＩで処理したプラスミドｐＡＵＲ１３５（宝酒造株式会社製）に連結し、大腸菌（E. coli DH5α）
を宿主としてサブクローニングを行った。 得られたプラスミドの電気泳動を行いｐＡＵＲ１３５より、ＳｐｈＩ
とＮｈｅＩとで切断したｐＲＳＦＡＳ６に相当する塩基鎖（約4.2kb）分長くなったプラスミドを回収し、そのプラスミドをｐＡＵＲＦＡＳ６（約9.9kb）と命名した。

【００４５】［実施例４］脂肪酸合成酵素遺伝子への変異導入 実施例３で得られたｐＲＳＦＡＳ６を用いて、以下の方法により脂肪酸合成酵素の所定の位置に変異を導入した。 グリシンからトレオニンへの置換；変異導入プライマーFAS2p-1250T(5'-GGTTCTACTATGGGTGGTGTTT-3'：配列番号６)とFAS2-c5178(5'-CTTATCCTTAGATACACG-3'：配列番号７)でｐＲＳＦＡＳ６を鋳型にＰＣＲにより断片（約1.4kb）を得た。 反応組成は、殺菌水；12.5μl、緩衝液；2.5μl、2mM dNTP；2.5μl、FAS2p-1250T；2.5μ
l、FAS2-c5178；2.5μl、pRSFAS6；1.0μl、KOD；0.5μ
l；25mM MgCl ₂ ；1.0μlとした。 また、ＰＣＲの反応条件は、先ず、９４℃で１分間の加熱に続いて、９４℃で２０秒及び５０℃で２秒を２５サイクル繰り返し、その後、７２℃で３０分間保持するものとした。 この操作により、配列番号１における１２５０番目のグリシンがトレオニンに置換された脂肪酸合成酵素をコードする脂肪酸合成酵素変異遺伝子を得ることができた。 その塩基配列は「配列番号５」として示す。

【００４６】［実施例５］組換えベクターの構築 実施例４で得られた脂肪酸合成酵素変異遺伝子を用いて、以下の方法により組み換えベクターを構築した。 プライマーFAS2-2001(5'-CTTCAACGGTGTCACCTT-3'配列番号８)とFAS2-c5178そして実施例３で得られたＤＮＡ断片（約1.4kb）を加え、さらにｐＡＵＲＦＡＳ６を鋳型にしてＰＣＲで合成することにより、ＤＮＡ断片（約3.0k
b）を得た。 反応組成は、殺菌水；11.5μl、緩衝液；2.
5μl、2mM dNTP；2.5μl、FAS2-2001；2.5μl、FAS2-c5
178；2.5μl、断片（約1.4kb）；1μl、pAURFAS6；1μ
l、KOD；0.5μl；25mM MgCl ₂ ；1μlとした。 また、ＰＣ
Ｒの反応条件は、先ず、９４℃で１分間の加熱に続いて、９４℃で２０秒及び５０℃で２秒を２５サイクル繰り返し、その後、７２℃で6０分間保持するものとした。 次に、これをＡｆｌＩＩとＢｓｔＥＩＩ（宝酒造（株））で切断後、同様に処理したｐＲＳＦＡＳ６に連結し、ｐＲＳＦＡＳ６−１２５０Ｔを得た。

【００４７】［実施例６］形質転換酵母の調製 実施例５で得られた組換えベクターを用いて、酢酸リチウム法及びｐＡＵＲ１３５用マニュアル（宝酒造株式会社製）を参考にして以下のように形質転換を行った。 コンピテントセルの調整；対数増殖期の酵母溶液１０ｍｌ
を集菌後、３〜５ｍｌＴＥ緩衝液（１０ｍＭトリス塩酸（pH7.5）、０．１ｍＭＥＤＴＡ）に懸濁する。 集菌後、１ｍｌ酢酸リチウム緩衝液（０．１Ｍ酢酸リチウム、１０ｍＭトリス塩酸（pH7.5）、０．１ｍＭＥＤＴ
Ａ）に懸濁し、３０℃で１時間振盪することにより酵母のコンピテントセルの調整を行う。

【００４８】形質転換；例えば宿主酵母ＹＰＨ２５０を使用した場合、上述したようにコンピテントセル化した酵母溶液５０μｌ、実施例５で用意したプラスミド５μ
ｌ、キャリアーＲＮＡ（１０ｍｇ／ｍｌ）５μｌおよび６０％（ｖ／ｖ）ポリエチレングリコール４０００、８
０μｌを懸濁する。 その懸濁液を、２８℃で１時間放置後、ジメチルスルフォキサイド１４μｌ添加する。 その懸濁液を４２℃で１５分間、さらに、室温に１０分間放置する。 その懸濁液を集菌後、ＹＰＤ培地（２％グルコース、２％ペプトン、１％酵母エキス）５ｍｌに懸濁し、２８℃で一晩振盪培養する。 培養液を集菌後、０．
９％食塩水１ｍｌに懸濁する。 その中から１００μｌ
を、０．２μｇ／ｍｌオーレオバシディンＡを含むＹＰ
Ｄ寒天培地（２％グルコース、２％ペプトン、１％酵母エキス、２％寒天）に塗布し、２８℃で培養する。 生育した酵母細胞の中、比較的大きなコロニーを形成した選択し、形質転換された酵母として「変異株１」と呼ぶ。

【００４９】［実施例７］脂肪酸合成酵素の発現 実施例６で得られた形質転換酵母を、以下の方法により培養し、培養液中のカプロン酸エチルの濃度を検証した。 培養条件；形質転換体を一白金耳、ＹＭ−５液体培地（１％グルコース、０．５％ペプトン、０．３％酵母エキス、０．３％麦芽エキス）に植菌する。 １５度で４日間培養後、その上清液中のカプロン酸エチルの濃度をガスクロマトグラフ装置を用いて測定した。

【００５０】測定方法；カプロン酸エチルの濃度は国税庁所定分析法注解（西谷尚道監修、（財）日本醸造協会、１９９３））を参考にしてヘッドスペース法により次のように行った。 培養液を遠心分離して得られた上清液２ｍｌ、内部標準物質（１００ｐｐｍ ｎ−アミルアルコール、４０ｐｐｍカプロン酸メチル）０．１ｍｌ、
塩化ナトリウム１ｇを２０ｍ用バイアル瓶に入れ密栓して調整後、ガスクロマトグラフＧＣ８５００（パーキンエルマー社製）用ヘッドスペースガスサンプラーＨＳ１
０１にセットし、以下の条件で測定した。

【００５１】ヘッドスペースガスサンプラー条件 加温温度；７０℃、ニードル温度；１１０℃、トランスファー温度；１１０℃、加温時間；３０分、加圧時間；
０．５分、挿入時間；０．１分、引抜時間；０．２分

【００５２】ガスクロマトグラフ条件 カラム；ＳＵＰＥＬＣＯＷＡＸ１０、３０ｍ×０．３２
ｍｍＩＤ、検出器；ＦＩＤ、キャリアガス；ヘリウム、
入り口温度；２８０℃、検出器温度；２８０℃、カラム温度；０〜３分 ５０℃、３〜７分 ５℃／分、７〜１
５分 １０℃／分、１５〜２０分 １５０℃

【００５３】［実施例８］その他の例 配列番号１における１２５０番目のグリシンがアラニン、フェニルアラニン、システイン、チロシン又はグルタミン酸に置換された脂肪酸合成酵素をコードする脂肪酸合成酵素変異遺伝子を、実施例４と同様にして作製した。 そして、これら脂肪酸合成酵素変異遺伝子を導入した形質転換酵母を、実施例５乃至実施例７と同様の手法により作製し、培養液中のカプロン酸エチルの濃度を検証した。 なお、１２５０番目のグリシンをアラニンとした脂肪酸合成酵素を発現する形質転換酵母を「変異株２」とした。 １２５０番目のグリシンをフェニルアラニンとした脂肪酸合成酵素を発現する形質転換酵母を「変異株３」とした。 １２５０番目のグリシンをシステインとした脂肪酸合成酵素を発現する形質転換酵母を「変異株４」とした。 １２５０番目のグリシンをチロシンとした脂肪酸合成酵素を発現する形質転換酵母を「変異株５」とした。 １２５０番目のグリシンをグルタミン酸とした脂肪酸合成酵素を発現する形質転換酵母を「変異株６」とした。 結果を表１に示す。

【００５４】

【表１】

【００５５】この表１から明らかなように、変異株１〜
変異株６では、野生型の酵母と比較して３〜６．５倍程度でカプロン酸エチルの増加を確認することができた。

【００５６】［実施例９］形質転換酵母を用いた食品の製造例 清酒酵母を用いて、実施例６と同様な操作を行い、得られた形質転換酵母「変異株１」及び親株を用い、原料米として５０％精白の山田錦を使用して表２に示す仕込配合で総米１ｋｇの清酒製造試験を行った。 この結果、表３に示すように、「変異株１」では、発酵速度及び一般成分は親株と変わらないが、カプロン酸エチルの含有量が著しく高くなっており、官能的評価に優れた清酒の製造が可能となった。

【００５７】

【表２】

【表３】

【００５８】

【発明の効果】以上、詳細に説明したように、本発明によれば、脂肪酸合成酵素遺伝子における１２５０番目のグリシンを所定のアミノ酸に置換しているため、醸造特性等の他の特性を劣化させることなく、酵母におけるカプロン酸エチルの生産能を飛躍的に向上させることができる。 このため、本発明によれば、官能特性に優れた食品を製造することができる。 また、本発明によれば、脂肪酸合成酵素遺伝子の所定の位置のみに変異を導入しているため、安全性を低下させるような要因となる物質の産生を確実に防止することができる。

【００５９】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Yamaguchi prefecture and Yamaguchi TLO Inc. <120> A mutated gene cording fatty-acid synthase of yeast and an utility of the yeast <130> P00-232 <140> <141> <160> 8 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 1887 <212> PRT <213> Saccharomyces cerevisiae <400> 1 Met Lys Pro Glu Val Glu Gln Glu Leu Ala His Ile Leu Leu Thr Glu 1 5 10 15 Leu Leu Ala Tyr Gln Phe Ala Ser Pro Val Arg Trp Ile Glu Thr Gln 20 25 30 Asp Val Phe Leu Lys Asp Phe Asn Thr Glu Arg Val Val Glu Ile Gly 35 40 45 Pro Ser Pro Thr Leu Ala Gly Met Ala Gln Arg Thr Leu Lys Asn Lys 50 55 60 Tyr Glu Ser Tyr Asp Ala Ala Leu Ser Leu His Arg Glu Ile Leu Cys 65 70 75 80 Tyr Ser Lys Asp Ala Lys Glu Ile Tyr Tyr Thr Pro Asp Pro Ser Glu 85 90 95 Leu Ala Ala Lys Glu Glu Pro Ala Lys Glu Glu Ala Pro Ala Pro Thr 100 105 110 Pro Ala Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala Ala Ala Ala Pro Ala Pro Val 115 120 125 Ala Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Glu Ile Ala Asp Glu Pro 130 135 140 Val Lys Ala Ser Leu Leu Leu His Val Leu Val Ala His Lys Leu Lys 145 150 155 160 Lys Ser Leu Asp Ser Ile Pro Met Ser Lys Thr Ile Lys Asp Leu Val 165 170 175 Gly Gly Lys Ser Thr Val Gln Asn Glu Ile Leu Gly Asp Leu Gly Lys 180 185 190 Glu Phe Gly Thr Thr Pro Glu Lys Pro Glu Glu Thr Pro Leu Glu Glu 195 200 205 Leu Ala Glu Thr Phe Gln Asp Thr Phe Ser Gly Ala Leu Gly Lys Gln 210 215 220 Ser Ser Ser Leu Leu Ser Arg Leu Ile Ser Ser Lys Met Pro Gly Gly 225 230 235 240 Phe Thr Ile Thr Val Ala Arg Lys Tyr Leu Gln Thr Arg Trp Gly Leu 245 250 255 Pro Ser Gly Arg Gln Asp Gly Val Leu Leu Val Ala Leu Ser Asn Glu 260 265 270 Pro Ala Ala Arg Leu Gly Ser Glu Ala Asp Ala Lys Ala Phe Leu Asp 275 280 285 Ser Met Ala Gln Lys Tyr Ala Ser Ile Val Gly Val Asp Leu Ser Ser 290 295 300 Ala Ala Ser Ala Ser Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala 305 310 315 320 Ala Met Ile Asp Ala Gly Ala Leu Glu Glu Ile Thr Lys Asp His Lys 325 330 335 Val Leu Ala Arg Gln Gln Leu Gln Val Leu Ala Arg Tyr Leu Lys Met 340 345 350 Asp Leu Asp Asn Gly Glu Arg Lys Phe Leu Lys Glu Lys Asp Thr Val 355 360 365 Ala Glu Leu Gln Ala Gln Leu Asp Tyr Leu Asn Ala Glu Leu Gly Glu 370 375 380 Phe Phe Val Asn Gly Val Ala Thr Ser Phe Ser Arg Lys Lys Ala Arg 385 390 395 400 Thr Phe Asp Ser Ser Trp Asn Trp Ala Lys Gln Ser Leu Leu Ser Leu 405 410 415 Tyr Phe Glu Ile Ile His Gly Val Leu Lys Asn Val Asp Arg Glu Val 420 425 430 Val Ser Glu Ala Ile Asn Ile Met Asn Arg Ser Asn Asp Ala Leu Ile 435 440 445 Lys Phe Met Glu Tyr His Ile Ser Asn Thr Asp Glu Thr Lys Gly Glu 450 455 460 Asn Tyr Gln Leu Val Lys Thr Leu Gly Glu Gln Leu Ile Glu Asn Cys 465 470 475 480 Lys Gln Val Leu Asp Val Asp Pro Val Tyr Lys Asp Val Ala Lys Pro 485 490 495 Thr Gly Pro Lys Thr Ala Ile Asp Lys Asn Gly Asn Ile Thr Tyr Ser 500 505 510 Glu Glu Pro Arg Glu Lys Val Arg Lys Leu Ser Gln Tyr Val Gln Glu 515 520 525 Met Ala Leu Gly Gly Pro Ile Thr Lys Glu Ser Gln Pro Thr Ile Glu 530 535 540 Glu Asp Leu Thr Arg Val Tyr Lys Ala Ile Ser Ala Gln Ala Asp Lys 545 550 555 560 Gln Asp Ile Ser Ser Ser Thr Arg Val Glu Phe Glu Lys Leu Tyr Ser 565 570 575 Asp Leu Met Lys Phe Leu Glu Ser Ser Lys Glu Ile Asp Pro Ser Gln 580 585 590 Thr Thr Gln Leu Ala Gly Met Asp Val Glu Asp Ala Leu Asp Lys Asp 595 600 605 Ser Thr Lys Glu Val Ala Ser Leu Pro Asn Lys Ser Thr Ile Ser Lys 610 615 620 Thr Val Ser Ser Thr Ile Pro Arg Glu Thr Ile Pro Phe Leu His Leu 625 630 635 640 Arg Lys Lys Thr Pro Ala Gly Asp Trp Lys Tyr Asp Arg Gln Leu Ser 645 650 655 Ser Leu Phe Leu Asp Gly Leu Glu Lys Ala Ala Phe Asn Gly Val Thr 660 665 670 Phe Lys Asp Lys Tyr Val Leu Ile Thr Gly Ala Gly Lys Gly Ser Ile 675 680 685 Gly Ala Glu Val Leu Gln Gly Leu Leu Gln Gly Gly Ala Lys Val Val 690 695 700 Val Thr Thr Ser Arg Phe Ser Lys Gln Val Thr Asp Tyr Tyr Gln Ser 705 710 715 720 Ile Tyr Ala Lys Tyr Gly Ala Lys Gly Ser Thr Leu Ile Val Val Pro 725 730 735 Phe Asn Gln Gly Ser Lys Gln Asp Val Glu Ala Leu Ile Glu Phe Ile 740 745 750 Tyr Asp Thr Glu Lys Asn Gly Gly Leu Gly Trp Asp Leu Asp Ala Ile 755 760 765 Ile Pro Phe Ala Ala Ile Pro Glu Gln Gly Ile Glu Leu Glu His Ile 770 775 780 Asp Ser Lys Ser Glu Phe Ala His Arg Ile Met Leu Thr Asn Ile Leu 785 790 795 800 Arg Met Met Gly Cys Val Lys Lys Gln Lys Ser Ala Arg Gly Ile Glu 805 810 815 Thr Arg Pro Ala Gln Val Ile Leu Pro Met Ser Pro Asn His Gly Thr 820 825 830 Phe Gly Gly Asp Gly Met Tyr Ser Glu Ser Lys Leu Ser Leu Glu Thr 835 840 845 Leu Phe Asn Arg Trp His Ser Glu Ser Trp Ala Asn Gln Leu Thr Val 850 855 860 Cys Gly Ala Ile Ile Gly Trp Thr Arg Gly Thr Gly Leu Met Ser Ala 865 870 875 880 Asn Asn Ile Ile Ala Glu Gly Ile Glu Lys Met Gly Val Arg Thr Phe 885 890 895 Ser Gln Lys Glu Met Ala Phe Asn Leu Leu Gly Leu Leu Thr Pro Glu 900 905 910 Val Val Glu Leu Cys Gln Lys Ser Pro Val Met Ala Asp Leu Asn Gly 915 920 925 Gly Leu Gln Phe Val Pro Glu Leu Lys Glu Phe Thr Ala Lys Leu Arg 930 935 940 Lys Glu Leu Val Glu Thr Ser Glu Val Arg Lys Ala Val Ser Ile Glu 945 950 955 960 Thr Ala Leu Glu His Lys Val Val Asn Gly Asn Ser Ala Asp Ala Ala 965 970 975 Tyr Ala Gln Val Glu Ile Gln Pro Arg Ala Asn Ile Gln Leu Asp Phe 980 985 990 Pro Glu Leu Lys Pro Tyr Lys Gln Val Lys Gln Ile Ala Pro Ala Glu 995 1000 1005 Leu Glu Gly Leu Leu Asp Leu Glu Arg Val Ile Val Val Thr Gly Phe 1010 1015 1020 Ala Glu Val Gly Pro Trp Gly Ser Ala Arg Thr Arg Trp Glu Met Glu 1025 1030 1035 1040 Ala Phe Gly Glu Phe Ser Leu Glu Gly Cys Val Glu Met Ala Trp Ile 1045 1050 1055 Met Gly Phe Ile Ser Tyr His Asn Gly Asn Leu Lys Gly Arg Pro Tyr 1060 1065 1070 Thr Gly Trp Val Asp Ser Lys Thr Lys Glu Pro Val Asp Asp Lys Asp 1075 1080 1085 Val Lys Ala Lys Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Glu His Ser Gly Ile Arg 1090 1095 1100 Leu Ile Glu Pro Glu Leu Phe Asn Gly Tyr Asn Pro Glu Lys Lys Glu 1105 1110 1115 1120 Met Ile Gln Glu Val Ile Val Glu Glu Asp Leu Glu Pro Phe Glu Ala 1125 1130 1135 Ser Lys Glu Thr Ala Glu Gln Phe Lys His Gln His Gly Asp Lys Val 1140 1145 1150 Asp Ile Phe Glu Ile Pro Glu Thr Gly Glu Tyr Ser Val Lys Leu Leu 1155 1160 1165 Lys Gly Ala Thr Leu Tyr Ile Pro Lys Ala Leu Arg Phe Asp Arg Leu 1170 1175 1180 Val Ala Gly Gln Ile Pro Thr Gly Trp Asn Ala Lys Thr Tyr Gly Ile 1185 1190 1195 1200 Ser Asp Asp Ile Ile Ser Gln Val Asp Pro Ile Thr Leu Phe Val Leu 1205 1210 1215 Val Ser Val Val Glu Ala Phe Ile Ala Ser Gly Ile Thr Asp Pro Tyr 1220 1225 1230 Glu Met Tyr Lys Tyr Val His Val Ser Glu Val Gly Asn Cys Ser Gly 1235 1240 1245 Ser Gly Met Gly Gly Val Ser Ala Leu Arg Gly Met Phe Lys Asp Arg 1250 1255 1260 Phe Lys Asp Glu Pro Val Gln Asn Asp Ile Leu Gln Glu Ser Phe Ile 1265 1270 1275 1280 Asn Thr Met Ser Ala Trp Val Asn Met Leu Leu Ile Ser Ser Ser Gly 1285 1290 1295 Pro Ile Lys Thr Pro Val Gly Ala Cys Ala Thr Ser Val Glu Ser Val 1300 1305 1310 Asp Ile Gly Val Glu Thr Ile Leu Ser Gly Lys Ala Arg Ile Cys Ile 1315 1320 1325 Val Gly Gly Tyr Asp Asp Phe Gln Glu Glu Gly Ser Phe Glu Phe Gly 1330 1335 1340 Asn Met Lys Ala Thr Ser Asn Thr Leu Glu Glu Phe Glu His Gly Arg 1345 1350 1355 1360 Thr Pro Ala Glu Met Ser Arg Pro Ala Thr Thr Thr Arg Asn Gly Phe 1365 1370 1375 Met Glu Ala Gln Gly Ala Gly Ile Gln Ile Ile Met Gln Ala Asp Leu 1380 1385 1390 Ala Leu Lys Met Gly Val Pro Ile Tyr Gly Ile Val Ala Met Ala Ala 1395 1400 1405 Thr Ala Thr Asp Lys Ile Gly Arg Ser Val Pro Ala Pro Gly Lys Gly 1410 1415 1420 Ile Leu Thr Thr Ala Arg Glu His His Ser Ser Val Lys Tyr Ala Ser 1425 1430 1435 1440 Pro Asn Leu Asn Met Lys Tyr Arg Lys Arg Gln Leu Val Thr Arg Glu 1445 1450 1455 Ala Gln Ile Lys Asp Trp Val Glu Asn Glu Leu Glu Ala Leu Lys Leu 1460 1465 1470 Glu Ala Glu Glu Ile Pro Ser Glu Asp Gln Asn Glu Phe Leu Leu Glu 1475 1480 1485 Arg Thr Arg Glu Ile His Asn Glu Ala Glu Ser Gln Leu Arg Ala Ala 1490 1495 1500 Gln Gln Gln Trp Gly Asn Asp Phe Tyr Lys Arg Asp Pro Arg Ile Ala 1505 1510 1515 1520 Pro Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Tyr Gly Leu Thr Ile Asp Asp Leu 1525 1530 1535 Gly Val Ala Ser Phe His Gly Thr Ser Thr Lys Ala Asn Asp Lys Asn 1540 1545 1550 Glu Ser Ala Thr Ile Asn Glu Met Met Lys His Leu Gly Arg Ser Glu 1555 1560 1565 Gly Asn Pro Val Ile Gly Val Phe Gln Lys Phe Leu Thr Gly His Pro 1570 1575 1580 Lys Gly Ala Ala Gly Ala Trp Met Met Asn Gly Ala Leu Gln Ile Leu 1585 1590 1595 1600 Asn Ser Gly Ile Ile Pro Gly Asn Arg Asn Ala Asp Asn Val Asp Lys 1605 1610 1615 Ile Leu Glu Gln Phe Glu Tyr Val Leu Tyr Pro Ser Lys Thr Leu Lys 1620 1625 1630 Thr Asp Gly Val Arg Ala Val Ser Ile Thr Ser Phe Gly Phe Gly Gln 1635 1640 1645 Lys Gly Gly Gln Ala Ile Val Val His Pro Asp Tyr Leu Tyr Gly Ala 1650 1655 1660 Ile Thr Glu Asp Arg Tyr Asn Glu Tyr Val Ala Lys Val Ser Ala Arg 1665 1670 1675 1680 Glu Lys Ser Ala Tyr Lys Phe Phe His Asn Gly Met Ile Tyr Asn Lys 1685 1690 1695 Leu Phe Val Ser Lys Glu His Ala Pro Tyr Thr Asp Glu Leu Glu Glu 1700 1705 1710 Asp Val Tyr Leu Asp Pro Leu Ala Arg Val Ser Lys Asp Lys Lys Ser 1715 1720 1725 Gly Ser Leu Thr Phe Asn Ser Lys Asn Ile Gln Ser Lys Asp Ser Tyr 1730 1735 1740 Ile Asn Ala Asn Thr Ile Glu Thr Ala Lys Met Ile Glu Asn Met Thr 1745 1750 1755 1760 Lys Glu Lys Val Ser Asn Gly Gly Val Gly Val Asp Val Glu Leu Ile 1765 1770 1775 Thr Ser Ile Asn Val Glu Asn Asp Thr Phe Ile Glu Arg Asn Phe Thr 1780 1785 1790 Pro Gln Glu Ile Glu Tyr Cys Ser Ala Gln Pro Ser Val Gln Ser Ser 1795 1800 1805 Phe Ala Gly Thr Trp Ser Ala Lys Glu Ala Val Phe Lys Ser Leu Gly 1810 1815 1820 Val Lys Ser Leu Gly Gly Gly Ala Ala Leu Lys Asp Ile Glu Ile Val 1825 1830 1835 1840 Arg Val Asn Lys Asn Ala Pro Ala Val Glu Leu His Gly Asn Ala Lys 1845 1850 1855 Lys Ala Ala Glu Glu Ala Gly Val Thr Asp Val Lys Val Ser Ile Ser 1860 1865 1870 His Asp Asp Leu Gln Ala Val Ala Val Ala Val Ser Thr Lys Lys 1875 1880 1885 <210> 2 <211> 5664 <212> DNA <213> Saccharomyces cerevisiae <220> <221> CDS <222> (1)..(5661) <400> 2 atg aag ccg gaa gtt gag caa gaa tta gct cat att ttg cta act gaa 48 Met Lys Pro Glu Val Glu Gln Glu Leu Ala His Ile Leu Leu Thr Glu 1 5 10 15 ttg tta gct tat caa ttt gcc tct cct gtg aga tgg att gaa act caa 96 Leu Leu Ala Tyr Gln Phe Ala Ser Pro Val Arg Trp Ile Glu Thr Gln 20 25 30 gat gtt ttt ttg aag gat ttt aac act gaa agg gtt gtt gaa atc ggt 144 Asp Val Phe Leu Lys Asp Phe Asn Thr Glu Arg Val Val Glu Ile Gly 35 40 45 cct tct cca act ttg gct ggg atg gct caa aga acc ttg aag aat aaa 192 Pro Ser Pro Thr Leu Ala Gly Met Ala Gln Arg Thr Leu Lys Asn Lys 50 55 60 tac gaa tct tac gat gct gct ctg tct tta cat aga gaa atc tta tgc 240 Tyr Glu Ser Tyr Asp Ala Ala Leu Ser Leu His Arg Glu Ile Leu Cys 65 70 75 80 tat tcg aag gat gcc aaa gag att tat tat acc cca gat cca tcc gaa 288 Tyr Ser Lys Asp Ala Lys Glu Ile Tyr Tyr Thr Pro Asp Pro Ser Glu 85 90 95 cta gct gca aag gaa gag ccc gct aag gaa gaa gct cct gct cca act 336 Leu Ala Ala Lys Glu Glu Pro Ala Lys Glu Glu Ala Pro Ala Pro Thr 100 105 110 cca gct gct agt gct cct gct cct gca gca gca gcc cca gct ccc gtc 384 Pro Ala Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala Ala Ala Ala Pro Ala Pro Val 115 120 125 gcg gca gca gcc cca gct gca gca gct gct gag att gcc gat gaa cct 432 Ala Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Glu Ile Ala Asp Glu Pro 130 135 140 gtc aag gct tcc cta ttg ttg cac gtt ttg gtt gct cac aag ttg aag 480 Val Lys Ala Ser Leu Leu Leu His Val Leu Val Ala His Lys Leu Lys 145 150 155 160 aag tcg tta gat tcc att cca atg tcc aag aca atc aaa gac ttg gtc 528 Lys Ser Leu Asp Ser Ile Pro Met Ser Lys Thr Ile Lys Asp Leu Val 165 170 175 ggt ggt aaa tct aca gtc caa aat gaa att ttg ggt gat tta ggt aaa 576 Gly Gly Lys Ser Thr Val Gln Asn Glu Ile Leu Gly Asp Leu Gly Lys 180 185 190 gaa ttt ggt act act cct gaa aaa cca gaa gaa act cca tta gaa gaa 624 Glu Phe Gly Thr Thr Pro Glu Lys Pro Glu Glu Thr Pro Leu Glu Glu 195 200 205 ttg gca gaa act ttc caa gat acc ttc tct gga gca ttg ggt aag caa 672 Leu Ala Glu Thr Phe Gln Asp Thr Phe Ser Gly Ala Leu Gly Lys Gln 210 215 220 tct tcc tcg tta tta tca aga tta atc tca tct aag atg cct ggt ggg 720 Ser Ser Ser Leu Leu Ser Arg Leu Ile Ser Ser Lys Met Pro Gly Gly 225 230 235 240 ttt act att act gtc gct aga aaa tac tta caa act cgc tgg gga cta 768 Phe Thr Ile Thr Val Ala Arg Lys Tyr Leu Gln Thr Arg Trp Gly Leu 245 250 255 cca tct ggt aga caa gat ggt gtc ctt ttg gta gct tta tct aac gag 816 Pro Ser Gly Arg Gln Asp Gly Val Leu Leu Val Ala Leu Ser Asn Glu 260 265 270 cct gct gct cgt cta ggt tct gaa gct gat gcc aag gct ttc ttg gac 864 Pro Ala Ala Arg Leu Gly Ser Glu Ala Asp Ala Lys Ala Phe Leu Asp 275 280 285 tcc atg gct caa aaa tac gct tcc att gtt ggt gtt gac tta tca tca 912 Ser Met Ala Gln Lys Tyr Ala Ser Ile Val Gly Val Asp Leu Ser Ser 290 295 300 gct gct agc gct agt ggt gct gcc ggt gca ggt gct gct gcc ggt gca 960 Ala Ala Ser Ala Ser Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala 305 310 315 320 gct atg atc gat gct ggc gct ctg gaa gaa ata acc aaa gac cac aag 1008 Ala Met Ile Asp Ala Gly Ala Leu Glu Glu Ile Thr Lys Asp His Lys 325 330 335 gtt ttg gcg cgt caa caa ctg caa gta ttg gct cgt tat cta aaa atg 1056 Val Leu Ala Arg Gln Gln Leu Gln Val Leu Ala Arg Tyr Leu Lys Met 340 345 350 gac ttg gat aac ggt gaa aga aag ttc ttg aaa gaa aag gac act gtt 1104 Asp Leu Asp Asn Gly Glu Arg Lys Phe Leu Lys Glu Lys Asp Thr Val 355 360 365 gct gaa ctt caa gct cag ttg gat tac ttg aat gcc gaa tta ggt gaa 1152 Ala Glu Leu Gln Ala Gln Leu Asp Tyr Leu Asn Ala Glu Leu Gly Glu 370 375 380 ttc ttt gtt aac ggt gtt gct act tct ttc tct aga aaa aag gcc aga 1200 Phe Phe Val Asn Gly Val Ala Thr Ser Phe Ser Arg Lys Lys Ala Arg 385 390 395 400 acc ttc gat tct tcc tgg aac tgg gct aaa caa tct tta tta tca tta 1248 Thr Phe Asp Ser Ser Trp Asn Trp Ala Lys Gln Ser Leu Leu Ser Leu 405 410 415 tac ttt gag ata att cat ggt gtc ttg aaa aac gtt gat aga gag gtt 1296 Tyr Phe Glu Ile Ile His Gly Val Leu Lys Asn Val Asp Arg Glu Val 420 425 430 gtt agt gaa gct atc aat atc atg aac aga tct aac gat gct ttg att 1344 Val Ser Glu Ala Ile Asn Ile Met Asn Arg Ser Asn Asp Ala Leu Ile 435 440 445 aaa ttc atg gaa tac cat atc tct aac act gat gaa aca aaa ggt gaa 1392 Lys Phe Met Glu Tyr His Ile Ser Asn Thr Asp Glu Thr Lys Gly Glu 450 455 460 aac tat caa ttg gtt aaa act ctt ggt gag cag ttg att gaa aac tgt 1440 Asn Tyr Gln Leu Val Lys Thr Leu Gly Glu Gln Leu Ile Glu Asn Cys 465 470 475 480 aaa caa gtt ttg gat gtt gat cca gtt tac aaa gat gtt gct aag cct 1488 Lys Gln Val Leu Asp Val Asp Pro Val Tyr Lys Asp Val Ala Lys Pro 485 490 495 acc ggt cca aaa act gct att gac aag aac ggt aac att aca tac tca 1536 Thr Gly Pro Lys Thr Ala Ile Asp Lys Asn Gly Asn Ile Thr Tyr Ser 500 505 510 gaa gag cca aga gaa aag gtt agg aaa tta tct caa tac gta caa gaa 1584 Glu Glu Pro Arg Glu Lys Val Arg Lys Leu Ser Gln Tyr Val Gln Glu 515 520 525 atg gcc ctt ggt ggt cca atc acc aaa gaa tct caa cct act att gaa 1632 Met Ala Leu Gly Gly Pro Ile Thr Lys Glu Ser Gln Pro Thr Ile Glu 530 535 540 gag gat ttg act cgt gtt tac aag gca atc agt gct caa gct gat aaa 1680 Glu Asp Leu Thr Arg Val Tyr Lys Ala Ile Ser Ala Gln Ala Asp Lys 545 550 555 560 caa gat att tcc agc tcc acc agg gtt gaa ttt gaa aaa cta tat agt 1728 Gln Asp Ile Ser Ser Ser Thr Arg Val Glu Phe Glu Lys Leu Tyr Ser 565 570 575 gat ttg atg aag ttc ttg gaa agc tcc aaa gaa atc gat cct tct caa 1776 Asp Leu Met Lys Phe Leu Glu Ser Ser Lys Glu Ile Asp Pro Ser Gln 580 585 590 aca acc caa ttg gcc ggt atg gat gtt gag gat gct ttg gac aaa gat 1824 Thr Thr Gln Leu Ala Gly Met Asp Val Glu Asp Ala Leu Asp Lys Asp 595 600 605 tcc acc aaa gaa gtt gct tct ttg cca aac aaa tct acc att tct aag 1872 Ser Thr Lys Glu Val Ala Ser Leu Pro Asn Lys Ser Thr Ile Ser Lys 610 615 620 acg gta tct tca act att cca aga gaa act att ccg ttc tta cat ttg 1920 Thr Val Ser Ser Thr Ile Pro Arg Glu Thr Ile Pro Phe Leu His Leu 625 630 635 640 aga aag aag act cct gcc gga gat tgg aaa tat gac cgc caa ttg tct 1968 Arg Lys Lys Thr Pro Ala Gly Asp Trp Lys Tyr Asp Arg Gln Leu Ser 645 650 655 tct ctt ttc tta gat ggt tta gaa aag gct gcc ttc aac ggt gtc acc 2016 Ser Leu Phe Leu Asp Gly Leu Glu Lys Ala Ala Phe Asn Gly Val Thr 660 665 670 ttc aag gac aaa tac gtc ttg atc act ggt gct ggt aag ggt tct att 2064 Phe Lys Asp Lys Tyr Val Leu Ile Thr Gly Ala Gly Lys Gly Ser Ile 675 680 685 ggt gct gaa gtc ttg caa ggt ttg tta caa ggt ggt gct aag gtt gtt 2112 Gly Ala Glu Val Leu Gln Gly Leu Leu Gln Gly Gly Ala Lys Val Val 690 695 700 gtt acc acc tct cgt ttc tct aag caa gtt aca gac tac tac caa tcc 2160 Val Thr Thr Ser Arg Phe Ser Lys Gln Val Thr Asp Tyr Tyr Gln Ser 705 710 715 720 att tac gcc aaa tat ggt gct aag ggt tct act ttg att gtt gtt cca 2208 Ile Tyr Ala Lys Tyr Gly Ala Lys Gly Ser Thr Leu Ile Val Val Pro 725 730 735 ttc aac caa ggt tct aag caa gac gtt gaa gct ttg att gaa ttt atc 2256 Phe Asn Gln Gly Ser Lys Gln Asp Val Glu Ala Leu Ile Glu Phe Ile 740 745 750 tac gac act gaa aag aat ggt ggt tta ggt tgg gat cta gat gct att 2304 Tyr Asp Thr Glu Lys Asn Gly Gly Leu Gly Trp Asp Leu Asp Ala Ile 755 760 765 att cca ttc gcg gcc att cca gaa caa ggt att gaa tta gaa cat att 2352 Ile Pro Phe Ala Ala Ile Pro Glu Gln Gly Ile Glu Leu Glu His Ile 770 775 780 gat tct aag tct gaa ttt gct cat aga atc atg ttg acc aat atc tta 2400 Asp Ser Lys Ser Glu Phe Ala His Arg Ile Met Leu Thr Asn Ile Leu 785 790 795 800 aga atg atg ggt tgt gtc aag aag caa aaa tct gca aga ggt att gaa 2448 Arg Met Met Gly Cys Val Lys Lys Gln Lys Ser Ala Arg Gly Ile Glu 805 810 815 aca aga cca gct caa gtc att cta cca atg tct cca aac cat ggt act 2496 Thr Arg Pro Ala Gln Val Ile Leu Pro Met Ser Pro Asn His Gly Thr 820 825 830 ttc ggt ggt gat ggt atg tat tca gaa tcc aag ttg tct ttg gaa act 2544 Phe Gly Gly Asp Gly Met Tyr Ser Glu Ser Lys Leu Ser Leu Glu Thr 835 840 845 ttg ttc aac aga tgg cac tct gaa tcc tgg gcc aat caa tta acc gtt 2592 Leu Phe Asn Arg Trp His Ser Glu Ser Trp Ala Asn Gln Leu Thr Val 850 855 860 tgc ggt gct att att ggt tgg act aga ggt act ggt tta atg agc gct 2640 Cys Gly Ala Ile Ile Gly Trp Thr Arg Gly Thr Gly Leu Met Ser Ala 865 870 875 880 aat aac atc att gct gaa ggc att gaa aag atg ggt gtt cgt act ttc 2688 Asn Asn Ile Ile Ala Glu Gly Ile Glu Lys Met Gly Val Arg Thr Phe 885 890 895 tct caa aag gaa atg gct ttc aac tta ttg ggt cta ttg act cca gaa 2736 Ser Gln Lys Glu Met Ala Phe Asn Leu Leu Gly Leu Leu Thr Pro Glu 900 905 910 gtc gta gaa ttg tgc caa aaa tca cct gtt atg gct gac ttg aat ggt 2784 Val Val Glu Leu Cys Gln Lys Ser Pro Val Met Ala Asp Leu Asn Gly 915 920 925 ggt ttg caa ttt gtt cct gaa ttg aag gaa ttc act gct aaa ttg cgt 2832 Gly Leu Gln Phe Val Pro Glu Leu Lys Glu Phe Thr Ala Lys Leu Arg 930 935 940 aaa gag ttg gtt gaa act tct gaa gtt aga aag gca gtt tcc atc gaa 2880 Lys Glu Leu Val Glu Thr Ser Glu Val Arg Lys Ala Val Ser Ile Glu 945 950 955 960 act gct ttg gag cat aag gtt gtc aat ggc aat agc gct gat gct gca 2928 Thr Ala Leu Glu His Lys Val Val Asn Gly Asn Ser Ala Asp Ala Ala 965 970 975 tat gct caa gtc gaa att caa cca aga gct aac att caa ctg gac ttc 2976 Tyr Ala Gln Val Glu Ile Gln Pro Arg Ala Asn Ile Gln Leu Asp Phe 980 985 990 cca gaa ttg aaa cca tac aaa cag gtt aaa caa att gct ccc gct gag 3024 Pro Glu Leu Lys Pro Tyr Lys Gln Val Lys Gln Ile Ala Pro Ala Glu 995 1000 1005 ctt gaa ggt ttg ttg gat ttg gaa aga gtt att gta gtt acc ggt ttt 3072 Leu Glu Gly Leu Leu Asp Leu Glu Arg Val Ile Val Val Thr Gly Phe 1010 1015 1020 gct gaa gtc ggc cca tgg ggt tcg gcc aga aca aga tgg gaa atg gaa 3120 Ala Glu Val Gly Pro Trp Gly Ser Ala Arg Thr Arg Trp Glu Met Glu 1025 1030 1035 1040 gct ttt ggt gaa ttt tcg ttg gaa ggt tgc gtt gaa atg gcc tgg att 3168 Ala Phe Gly Glu Phe Ser Leu Glu Gly Cys Val Glu Met Ala Trp Ile 1045 1050 1055 atg ggc ttc att tca tac cat aac ggt aat ttg aag ggt cgt cca tac 3216 Met Gly Phe Ile Ser Tyr His Asn Gly Asn Leu Lys Gly Arg Pro Tyr 1060 1065 1070 act ggt tgg gtt gat tcc aaa aca aaa gaa cca gtt gat gac aag gac 3264 Thr Gly Trp Val Asp Ser Lys Thr Lys Glu Pro Val Asp Asp Lys Asp 1075 1080 1085 gtt aag gcc aag tat gaa aca tca atc cta gaa cac agt ggt atc aga 3312 Val Lys Ala Lys Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Glu His Ser Gly Ile Arg 1090 1095 1100 ttg atc gaa cca gag tta ttc aat ggt tac aac cca gaa aag aag gaa 3360 Leu Ile Glu Pro Glu Leu Phe Asn Gly Tyr Asn Pro Glu Lys Lys Glu 1105 1110 1115 1120 atg att caa gaa gtc att gtc gaa gaa gac ttg gaa cca ttt gag gct 3408 Met Ile Gln Glu Val Ile Val Glu Glu Asp Leu Glu Pro Phe Glu Ala 1125 1130 1135 tcg aag gaa act gcc gaa caa ttt aaa cac caa cat ggt gac aaa gtg 3456 Ser Lys Glu Thr Ala Glu Gln Phe Lys His Gln His Gly Asp Lys Val 1140 1145 1150 gat atc ttc gaa atc cca gaa aca gga gag tac tct gtt aag tta cta 3504 Asp Ile Phe Glu Ile Pro Glu Thr Gly Glu Tyr Ser Val Lys Leu Leu 1155 1160 1165 aag ggt gcc act tta tac att cca aag gct ttg aga ttt gac cgt ttg 3552 Lys Gly Ala Thr Leu Tyr Ile Pro Lys Ala Leu Arg Phe Asp Arg Leu 1170 1175 1180 gtt gca ggt caa att cca act ggt tgg aat gct aag act tat ggt atc 3600 Val Ala Gly Gln Ile Pro Thr Gly Trp Asn Ala Lys Thr Tyr Gly Ile 1185 1190 1195 1200 tct gat gat atc att tct cag gtt gac cca atc aca tta ttc gtt ttg 3648 Ser Asp Asp Ile Ile Ser Gln Val Asp Pro Ile Thr Leu Phe Val Leu 1205 1210 1215 gtc tct gtt gtg gaa gca ttt att gca tct ggt atc acc gac cca tac 3696 Val Ser Val Val Glu Ala Phe Ile Ala Ser Gly Ile Thr Asp Pro Tyr 1220 1225 1230 gaa atg tac aaa tac gta cat gtt tct gag gtt ggt aac tgt tct ggt 3744 Glu Met Tyr Lys Tyr Val His Val Ser Glu Val Gly Asn Cys Ser Gly 1235 1240 1245 tct ggt atg ggt ggt gtt tct gcc tta cgt ggt atg ttt aag gac cgt 3792 Ser Gly Met Gly Gly Val Ser Ala Leu Arg Gly Met Phe Lys Asp Arg 1250 1255 1260 ttc aag gat gag cct gtc caa aat gat att tta caa gaa tca ttt atc 3840 Phe Lys Asp Glu Pro Val Gln Asn Asp Ile Leu Gln Glu Ser Phe Ile 1265 1270 1275 1280 aac acc atg tcc gct tgg gtt aat atg ttg ttg att tcc tca tct ggt 3888 Asn Thr Met Ser Ala Trp Val Asn Met Leu Leu Ile Ser Ser Ser Gly 1285 1290 1295 cca atc aag aca cct gtt ggt gcc tgt gcc aca tcc gtg gaa tct gtt 3936 Pro Ile Lys Thr Pro Val Gly Ala Cys Ala Thr Ser Val Glu Ser Val 1300 1305 1310 gac att ggt gta gaa acc atc ttg tct ggt aag gct aga atc tgt att 3984 Asp Ile Gly Val Glu Thr Ile Leu Ser Gly Lys Ala Arg Ile Cys Ile 1315 1320 1325 gtc ggt ggt tac gat gat ttc caa gaa gaa ggc tcc ttt gag ttc ggt 4032 Val Gly Gly Tyr Asp Asp Phe Gln Glu Glu Gly Ser Phe Glu Phe Gly 1330 1335 1340 aac atg aag gcc act tcc aac act ttg gaa gaa ttt gaa cat ggt cgt 4080 Asn Met Lys Ala Thr Ser Asn Thr Leu Glu Glu Phe Glu His Gly Arg 1345 1350 1355 1360 acc cca gcg gaa atg tcc aga cct gcc acc act acc cgt aac ggt ttt 4128 Thr Pro Ala Glu Met Ser Arg Pro Ala Thr Thr Thr Arg Asn Gly Phe 1365 1370 1375 atg gaa gct caa ggt gct ggt att caa atc atc atg caa gct gat tta 4176 Met Glu Ala Gln Gly Ala Gly Ile Gln Ile Ile Met Gln Ala Asp Leu 1380 1385 1390 gct ttg aag atg ggt gtg cca att tac ggt att gtt gcc atg gct gct 4224 Ala Leu Lys Met Gly Val Pro Ile Tyr Gly Ile Val Ala Met Ala Ala 1395 1400 1405 acc gcc acc gat aag att ggt aga tct gtg cca gct cca ggt aag ggt 4272 Thr Ala Thr Asp Lys Ile Gly Arg Ser Val Pro Ala Pro Gly Lys Gly 1410 1415 1420 att tta acc act gct cgt gaa cac cac tcc agt gtt aag tat gct tca 4320 Ile Leu Thr Thr Ala Arg Glu His His Ser Ser Val Lys Tyr Ala Ser 1425 1430 1435 1440 cca aac ttg aac atg aag tac aga aag cgc caa ttg gtt act cgt gaa 4368 Pro Asn Leu Asn Met Lys Tyr Arg Lys Arg Gln Leu Val Thr Arg Glu 1445 1450 1455 gct cag att aaa gat tgg gta gaa aac gaa ttg gaa gct ttg aag ttg 4416 Ala Gln Ile Lys Asp Trp Val Glu Asn Glu Leu Glu Ala Leu Lys Leu 1460 1465 1470 gag gcc gaa gaa att cca agc gaa gac caa aac gag ttc tta ctt gaa 4464 Glu Ala Glu Glu Ile Pro Ser Glu Asp Gln Asn Glu Phe Leu Leu Glu 1475 1480 1485 cgt acc aga gaa atc cac aac gaa gct gaa agt caa ttg aga gct gca 4512 Arg Thr Arg Glu Ile His Asn Glu Ala Glu Ser Gln Leu Arg Ala Ala 1490 1495 1500 caa caa caa tgg ggt aac gac ttc tac aag agg gac cca cgt att gct 4560 Gln Gln Gln Trp Gly Asn Asp Phe Tyr Lys Arg Asp Pro Arg Ile Ala 1505 1510 1515 1520 cca ttg aga gga gca ctg gct act tac ggt tta act att gat gac ttg 4608 Pro Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Tyr Gly Leu Thr Ile Asp Asp Leu 1525 1530 1535 ggt gtc gct tca ttc cac ggt aca tcc aca aag gct aat gac aag aac 4656 Gly Val Ala Ser Phe His Gly Thr Ser Thr Lys Ala Asn Asp Lys Asn 1540 1545 1550 gaa tct gcc aca att aat gaa atg atg aag cat ttg ggt aga tct gaa 4704 Glu Ser Ala Thr Ile Asn Glu Met Met Lys His Leu Gly Arg Ser Glu 1555 1560 1565 ggt aat ccc gtc att ggt gtt ttc caa aag ttc ttg act ggt cat cca 4752 Gly Asn Pro Val Ile Gly Val Phe Gln Lys Phe Leu Thr Gly His Pro 1570 1575 1580 aag ggt gct gct ggt gca tgg atg atg aat ggt gct ttg caa att cta 4800 Lys Gly Ala Ala Gly Ala Trp Met Met Asn Gly Ala Leu Gln Ile Leu 1585 1590 1595 1600 aac agt ggt att att cca ggt aac cgt aac gct gat aac gtg gat aag 4848 Asn Ser Gly Ile Ile Pro Gly Asn Arg Asn Ala Asp Asn Val Asp Lys 1605 1610 1615 atc ttg gag caa ttt gaa tac gtc ttg tac cca tcc aag act tta aag 4896 Ile Leu Glu Gln Phe Glu Tyr Val Leu Tyr Pro Ser Lys Thr Leu Lys 1620 1625 1630 acc gac ggt gtc aga gcc gtg tcc atc act tct ttc ggt ttt ggt caa 4944 Thr Asp Gly Val Arg Ala Val Ser Ile Thr Ser Phe Gly Phe Gly Gln 1635 1640 1645 aag ggt ggt caa gct att gtg gtt cat cca gac tac tta tac ggt gct 4992 Lys Gly Gly Gln Ala Ile Val Val His Pro Asp Tyr Leu Tyr Gly Ala 1650 1655 1660 atc act gaa gac aga tac aac gag tat gtc gcc aag gtt agt gcc aga 5040 Ile Thr Glu Asp Arg Tyr Asn Glu Tyr Val Ala Lys Val Ser Ala Arg 1665 1670 1675 1680 gag aaa agt gcc tac aaa ttc ttc cat aat ggt atg atc tac aac aag 5088 Glu Lys Ser Ala Tyr Lys Phe Phe His Asn Gly Met Ile Tyr Asn Lys 1685 1690 1695 ttg ttc gta agt aaa gag cat gct cca tac act gat gaa ttg gaa gag 5136 Leu Phe Val Ser Lys Glu His Ala Pro Tyr Thr Asp Glu Leu Glu Glu 1700 1705 1710 gat gtt tac ttg gac cca tta gcc cgt gta tct aag gat aag aaa tca 5184 Asp Val Tyr Leu Asp Pro Leu Ala Arg Val Ser Lys Asp Lys Lys Ser 1715 1720 1725 ggc tcc ttg act ttc aac tct aaa aac atc caa agc aag gac agt tac 5232 Gly Ser Leu Thr Phe Asn Ser Lys Asn Ile Gln Ser Lys Asp Ser Tyr 1730 1735 1740 atc aat gct aac acc att gaa act gcc aag atg att gaa aac atg acc 5280 Ile Asn Ala Asn Thr Ile Glu Thr Ala Lys Met Ile Glu Asn Met Thr 1745 1750 1755 1760 aag gag aaa gtc tct aac ggt ggc gtc ggt gta gat gtt gaa tta atc 5328 Lys Glu Lys Val Ser Asn Gly Gly Val Gly Val Asp Val Glu Leu Ile 1765 1770 1775 act agc atc aac gtt gaa aat gat act ttt atc gag cgc aat ttc acc 5376 Thr Ser Ile Asn Val Glu Asn Asp Thr Phe Ile Glu Arg Asn Phe Thr 1780 1785 1790 ccg caa gaa ata gag tac tgc agc gcg cag cct agt gtg caa agc tct 5424 Pro Gln Glu Ile Glu Tyr Cys Ser Ala Gln Pro Ser Val Gln Ser Ser 1795 1800 1805 ttc gct ggg aca tgg tcc gcc aaa gag gct gtt ttc aag tcc tta ggc 5472 Phe Ala Gly Thr Trp Ser Ala Lys Glu Ala Val Phe Lys Ser Leu Gly 1810 1815 1820 gtc aag tcc tta ggc ggt ggt gct gca ttg aaa gac atc gaa atc gta 5520 Val Lys Ser Leu Gly Gly Gly Ala Ala Leu Lys Asp Ile Glu Ile Val 1825 1830 1835 1840 cgc gtt aac aaa aac gct cca gcc gtt gaa ctg cac ggt aac gcc aaa 5568 Arg Val Asn Lys Asn Ala Pro Ala Val Glu Leu His Gly Asn Ala Lys 1845 1850 1855 aag gct gcc gaa gaa gct ggt gtt acc gat gtg aag gta tct att tct 5616 Lys Ala Ala Glu Glu Ala Gly Val Thr Asp Val Lys Val Ser Ile Ser 1860 1865 1870 cac gat gac ctc caa gct gtc gcg gtc gcc gtt tct act aag aaa tag 5664 His Asp Asp Leu Gln Ala Val Ala Val Ala Val Ser Thr Lys Lys 1875 1880 1885 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial 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Ser Tyr Asp Ala Ala Leu Ser Leu His Arg Glu Ile Leu Cys 65 70 75 80 tat tcg aag gat gcc aaa gag att tat tat acc cca gat cca tcc gaa 288 Tyr Ser Lys Asp Ala Lys Glu Ile Tyr Tyr Thr Pro Asp Pro Ser Glu 85 90 95 cta gct gca aag gaa gag ccc gct aag gaa gaa gct cct gct cca act 336 Leu Ala Ala Lys Glu Glu Pro Ala Lys Glu Glu Ala Pro Ala Pro Thr 100 105 110 cca gct gct agt gct cct gct cct gca gca gca gcc cca gct ccc gtc 384 Pro Ala Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ala Ala Ala Ala Pro Ala Pro Val 115 120 125 gcg gca gca gcc cca gct gca gca gct gct gag att gcc gat gaa cct 432 Ala Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ala Glu Ile Ala Asp Glu Pro 130 135 140 gtc aag gct tcc cta ttg ttg cac gtt ttg gtt gct cac aag ttg aag 480 Val Lys Ala Ser Leu Leu Leu His Val Leu Val Ala His Lys Leu Lys 145 150 155 160 aag tcg tta gat tcc att cca atg tcc aag aca atc aaa gac ttg gtc 528 Lys Ser Leu Asp Ser Ile Pro Met Ser Lys Thr Ile Lys Asp Leu Val 165 170 175 ggt ggt aaa tct aca gtc caa aat gaa att ttg ggt gat tta ggt aaa 576 Gly Gly Lys Ser Thr Val Gln Asn Glu Ile Leu Gly Asp Leu Gly Lys 180 185 190 gaa ttt ggt act act cct gaa aaa cca gaa gaa act cca tta gaa gaa 624 Glu Phe Gly Thr Thr Pro Glu Lys Pro Glu Glu Thr Pro Leu Glu Glu 195 200 205 ttg gca gaa act ttc caa gat acc ttc tct gga gca ttg ggt aag caa 672 Leu Ala Glu Thr Phe Gln Asp Thr Phe Ser Gly Ala Leu Gly Lys Gln 210 215 220 tct tcc tcg tta tta tca aga tta atc tca tct aag atg cct ggt ggg 720 Ser Ser Ser Leu Leu Ser Arg Leu Ile Ser Ser Lys Met Pro Gly Gly 225 230 235 240 ttt act att act gtc gct aga aaa tac tta caa act cgc tgg gga cta 768 Phe Thr Ile Thr Val Ala Arg Lys Tyr Leu Gln Thr Arg Trp Gly Leu 245 250 255 cca tct ggt aga caa gat ggt gtc ctt ttg gta gct tta tct aac gag 816 Pro Ser Gly Arg Gln Asp Gly Val Leu Leu Val Ala Leu Ser Asn Glu 260 265 270 cct gct gct cgt cta ggt tct gaa gct gat gcc aag gct ttc ttg gac 864 Pro Ala Ala Arg Leu Gly Ser Glu Ala Asp Ala Lys Ala Phe Leu Asp 275 280 285 tcc atg gct caa aaa tac gct tcc att gtt ggt gtt gac tta tca tca 912 Ser Met Ala Gln Lys Tyr Ala Ser Ile Val Gly Val Asp Leu Ser Ser 290 295 300 gct gct agc gct agt ggt gct gcc ggt gca ggt gct gct gcc ggt gca 960 Ala Ala Ser Ala Ser Gly Ala Ala Gly Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala 305 310 315 320 gct atg atc gat gct ggc gct ctg gaa gaa ata acc aaa gac cac aag 1008 Ala Met Ile Asp Ala Gly Ala Leu Glu Glu Ile Thr Lys Asp His Lys 325 330 335 gtt ttg gcg cgt caa caa ctg caa gta ttg gct cgt tat cta aaa atg 1056 Val Leu Ala Arg Gln Gln Leu Gln Val Leu Ala Arg Tyr Leu Lys Met 340 345 350 gac ttg gat aac ggt gaa aga aag ttc ttg aaa gaa aag gac act gtt 1104 Asp Leu Asp Asn Gly Glu Arg Lys Phe Leu Lys Glu Lys Asp Thr Val 355 360 365 gct gaa ctt caa gct cag ttg gat tac ttg aat gcc gaa tta ggt gaa 1152 Ala Glu Leu Gln Ala Gln Leu Asp Tyr Leu Asn Ala Glu Leu Gly Glu 370 375 380 ttc ttt gtt aac ggt gtt gct act tct ttc tct aga aaa aag gcc aga 1200 Phe Phe Val Asn Gly Val Ala Thr Ser Phe Ser Arg Lys Lys Ala Arg 385 390 395 400 acc ttc gat tct tcc tgg aac tgg gct aaa caa tct tta tta tca tta 1248 Thr Phe Asp Ser Ser Trp Asn Trp Ala Lys Gln Ser Leu Leu Ser Leu 405 410 415 tac ttt gag ata att cat ggt gtc ttg aaa aac gtt gat aga gag gtt 1296 Tyr Phe Glu Ile Ile His Gly Val Leu Lys Asn Val Asp Arg Glu Val 420 425 430 gtt agt gaa gct atc aat atc atg aac aga tct aac gat gct ttg att 1344 Val Ser Glu Ala Ile Asn Ile Met Asn Arg Ser Asn Asp Ala Leu Ile 435 440 445 aaa ttc atg gaa tac cat atc tct aac act gat gaa aca aaa ggt gaa 1392 Lys Phe Met Glu Tyr His Ile Ser Asn Thr Asp Glu Thr Lys Gly Glu 450 455 460 aac tat caa ttg gtt aaa act ctt ggt gag cag ttg att gaa aac tgt 1440 Asn Tyr Gln Leu Val Lys Thr Leu Gly Glu Gln Leu Ile Glu Asn Cys 465 470 475 480 aaa caa gtt ttg gat gtt gat cca gtt tac aaa gat gtt gct aag cct 1488 Lys Gln Val Leu Asp Val Asp Pro Val Tyr Lys Asp Val Ala Lys Pro 485 490 495 acc ggt cca aaa act gct att gac aag aac ggt aac att aca tac tca 1536 Thr Gly Pro Lys Thr Ala Ile Asp Lys Asn Gly Asn Ile Thr Tyr Ser 500 505 510 gaa gag cca aga gaa aag gtt agg aaa tta tct caa tac gta caa gaa 1584 Glu Glu Pro Arg Glu Lys Val Arg Lys Leu Ser Gln Tyr Val Gln Glu 515 520 525 atg gcc ctt ggt ggt cca atc acc aaa gaa tct caa cct act att gaa 1632 Met Ala Leu Gly Gly Pro Ile Thr Lys Glu Ser Gln Pro Thr Ile Glu 530 535 540 gag gat ttg act cgt gtt tac aag gca atc agt gct caa gct gat aaa 1680 Glu Asp Leu Thr Arg Val Tyr Lys Ala Ile Ser Ala Gln Ala Asp Lys 545 550 555 560 caa gat att tcc agc tcc acc agg gtt gaa ttt gaa aaa cta tat agt 1728 Gln Asp Ile Ser Ser Ser Thr Arg Val Glu Phe Glu Lys Leu Tyr Ser 565 570 575 gat ttg atg aag ttc ttg gaa agc tcc aaa gaa atc gat cct tct caa 1776 Asp Leu Met Lys Phe Leu Glu Ser Ser Lys Glu Ile Asp Pro Ser Gln 580 585 590 aca acc caa ttg gcc ggt atg gat gtt gag gat gct ttg gac aaa gat 1824 Thr Thr Gln Leu Ala Gly Met Asp Val Glu Asp Ala Leu Asp Lys Asp 595 600 605 tcc acc aaa gaa gtt gct tct ttg cca aac aaa tct acc att tct aag 1872 Ser Thr Lys Glu Val Ala Ser Leu Pro Asn Lys Ser Thr Ile Ser Lys 610 615 620 acg gta tct tca act att cca aga gaa act att ccg ttc tta cat ttg 1920 Thr Val Ser Ser Thr Ile Pro Arg Glu Thr Ile Pro Phe Leu His Leu 625 630 635 640 aga aag aag act cct gcc gga gat tgg aaa tat gac cgc caa ttg tct 1968 Arg Lys Lys Thr Pro Ala Gly Asp Trp Lys Tyr Asp Arg Gln Leu Ser 645 650 655 tct ctt ttc tta gat ggt tta gaa aag gct gcc ttc aac ggt gtc acc 2016 Ser Leu Phe Leu Asp Gly Leu Glu Lys Ala Ala Phe Asn Gly Val Thr 660 665 670 ttc aag gac aaa tac gtc ttg atc act ggt gct ggt aag ggt tct att 2064 Phe Lys Asp Lys Tyr Val Leu Ile Thr Gly Ala Gly Lys Gly Ser Ile 675 680 685 ggt gct gaa gtc ttg caa ggt ttg tta caa ggt ggt gct aag gtt gtt 2112 Gly Ala Glu Val Leu Gln Gly Leu Leu Gln Gly Gly Ala Lys Val Val 690 695 700 gtt acc acc tct cgt ttc tct aag caa gtt aca gac tac tac caa tcc 2160 Val Thr Thr Ser Arg Phe Ser Lys Gln Val Thr Asp Tyr Tyr Gln Ser 705 710 715 720 att tac gcc aaa tat ggt gct aag ggt tct act ttg att gtt gtt cca 2208 Ile Tyr Ala Lys Tyr Gly Ala Lys Gly Ser Thr Leu Ile Val Val Pro 725 730 735 ttc aac caa ggt tct aag caa gac gtt gaa gct ttg att gaa ttt atc 2256 Phe Asn Gln Gly Ser Lys Gln Asp Val Glu Ala Leu Ile Glu Phe Ile 740 745 750 tac gac act gaa aag aat ggt ggt tta ggt tgg gat cta gat gct att 2304 Tyr Asp Thr Glu Lys Asn Gly Gly Leu Gly Trp Asp Leu Asp Ala Ile 755 760 765 att cca ttc gcg gcc att cca gaa caa ggt att gaa tta gaa cat att 2352 Ile Pro Phe Ala Ala Ile Pro Glu Gln Gly Ile Glu Leu Glu His Ile 770 775 780 gat tct aag tct gaa ttt gct cat aga atc atg ttg acc aat atc tta 2400 Asp Ser Lys Ser Glu Phe Ala His Arg Ile Met Leu Thr Asn Ile Leu 785 790 795 800 aga atg atg ggt tgt gtc aag aag caa aaa tct gca aga ggt att gaa 2448 Arg Met Met Gly Cys Val Lys Lys Gln Lys Ser Ala Arg Gly Ile Glu 805 810 815 aca aga cca gct caa gtc att cta cca atg tct cca aac cat ggt act 2496 Thr Arg Pro Ala Gln Val Ile Leu Pro Met Ser Pro Asn His Gly Thr 820 825 830 ttc ggt ggt gat ggt atg tat tca gaa tcc aag ttg tct ttg gaa act 2544 Phe Gly Gly Asp Gly Met Tyr Ser Glu Ser Lys Leu Ser Leu Glu Thr 835 840 845 ttg ttc aac aga tgg cac tct gaa tcc tgg gcc aat caa tta acc gtt 2592 Leu Phe Asn Arg Trp His Ser Glu Ser Trp Ala Asn Gln Leu Thr Val 850 855 860 tgc ggt gct att att ggt tgg act aga ggt act ggt tta atg agc gct 2640 Cys Gly Ala Ile Ile Gly Trp Thr Arg Gly Thr Gly Leu Met Ser Ala 865 870 875 880 aat aac atc att gct gaa ggc att gaa aag atg ggt gtt cgt act ttc 2688 Asn Asn Ile Ile Ala Glu Gly Ile Glu Lys Met Gly Val Arg Thr Phe 885 890 895 tct caa aag gaa atg gct ttc aac tta ttg ggt cta ttg act cca gaa 2736 Ser Gln Lys Glu Met Ala Phe Asn Leu Leu Gly Leu Leu Thr Pro Glu 900 905 910 gtc gta gaa ttg tgc caa aaa tca cct gtt atg gct gac ttg aat ggt 2784 Val Val Glu Leu Cys Gln Lys Ser Pro Val Met Ala Asp Leu Asn Gly 915 920 925 ggt ttg caa ttt gtt cct gaa ttg aag gaa ttc act gct aaa ttg cgt 2832 Gly Leu Gln Phe Val Pro Glu Leu Lys Glu Phe Thr Ala Lys Leu Arg 930 935 940 aaa gag ttg gtt gaa act tct gaa gtt aga aag gca gtt tcc atc gaa 2880 Lys Glu Leu Val Glu Thr Ser Glu Val Arg Lys Ala Val Ser Ile Glu 945 950 955 960 act gct ttg gag cat aag gtt gtc aat ggc aat agc gct gat gct gca 2928 Thr Ala Leu Glu His Lys Val Val Asn Gly Asn Ser Ala Asp Ala Ala 965 970 975 tat gct caa gtc gaa att caa cca aga gct aac att caa ctg gac ttc 2976 Tyr Ala Gln Val Glu Ile Gln Pro Arg Ala Asn Ile Gln Leu Asp Phe 980 985 990 cca gaa ttg aaa cca tac aaa cag gtt aaa caa att gct ccc gct gag 3024 Pro Glu Leu Lys Pro Tyr Lys Gln Val Lys Gln Ile Ala Pro Ala Glu 995 1000 1005 ctt gaa ggt ttg ttg gat ttg gaa aga gtt att gta gtt acc ggt ttt 3072 Leu Glu Gly Leu Leu Asp Leu Glu Arg Val Ile Val Val Thr Gly Phe 1010 1015 1020 gct gaa gtc ggc cca tgg ggt tcg gcc aga aca aga tgg gaa atg gaa 3120 Ala Glu Val Gly Pro Trp Gly Ser Ala Arg Thr Arg Trp Glu Met Glu 1025 1030 1035 1040 gct ttt ggt gaa ttt tcg ttg gaa ggt tgc gtt gaa atg gcc tgg att 3168 Ala Phe Gly Glu Phe Ser Leu Glu Gly Cys Val Glu Met Ala Trp Ile 1045 1050 1055 atg ggc ttc att tca tac cat aac ggt aat ttg aag ggt cgt cca tac 3216 Met Gly Phe Ile Ser Tyr His Asn Gly Asn Leu Lys Gly Arg Pro Tyr 1060 1065 1070 act ggt tgg gtt gat tcc aaa aca aaa gaa cca gtt gat gac aag gac 3264 Thr Gly Trp Val Asp Ser Lys Thr Lys Glu Pro Val Asp Asp Lys Asp 1075 1080 1085 gtt aag gcc aag tat gaa aca tca atc cta gaa cac agt ggt atc aga 3312 Val Lys Ala Lys Tyr Glu Thr Ser Ile Leu Glu His Ser Gly Ile Arg 1090 1095 1100 ttg atc gaa cca gag tta ttc aat ggt tac aac cca gaa aag aag gaa 3360 Leu Ile Glu Pro Glu Leu Phe Asn Gly Tyr Asn Pro Glu Lys Lys Glu 1105 1110 1115 1120 atg att caa gaa gtc att gtc gaa gaa gac ttg gaa cca ttt gag gct 3408 Met Ile Gln Glu Val Ile Val Glu Glu Asp Leu Glu Pro Phe Glu Ala 1125 1130 1135 tcg aag gaa act gcc gaa caa ttt aaa cac caa cat ggt gac aaa gtg 3456 Ser Lys Glu Thr Ala Glu Gln Phe Lys His Gln His Gly Asp Lys Val 1140 1145 1150 gat atc ttc gaa atc cca gaa aca gga gag tac tct gtt aag tta cta 3504 Asp Ile Phe Glu Ile Pro Glu Thr Gly Glu Tyr Ser Val Lys Leu Leu 1155 1160 1165 aag ggt gcc act tta tac att cca aag gct ttg aga ttt gac cgt ttg 3552 Lys Gly Ala Thr Leu Tyr Ile Pro Lys Ala Leu Arg Phe Asp Arg Leu 1170 1175 1180 gtt gca ggt caa att cca act ggt tgg aat gct aag act tat ggt atc 3600 Val Ala Gly Gln Ile Pro Thr Gly Trp Asn Ala Lys Thr Tyr Gly Ile 1185 1190 1195 1200 tct gat gat atc att tct cag gtt gac cca atc aca tta ttc gtt ttg 3648 Ser Asp Asp Ile Ile Ser Gln Val Asp Pro Ile Thr Leu Phe Val Leu 1205 1210 1215 gtc tct gtt gtg gaa gca ttt att gca tct ggt atc acc gac cca tac 3696 Val Ser Val Val Glu Ala Phe Ile Ala Ser Gly Ile Thr Asp Pro Tyr 1220 1225 1230 gaa atg tac aaa tac gta cat gtt tct gag gtt ggt aac tgt tct ggt 3744 Glu Met Tyr Lys Tyr Val His Val Ser Glu Val Gly Asn Cys Ser Gly 1235 1240 1245 tct act atg ggt ggt gtt tct gcc tta cgt ggt atg ttt aag gac cgt 3792 Ser Thr Met Gly Gly Val Ser Ala Leu Arg Gly Met Phe Lys Asp Arg 1250 1255 1260 ttc aag gat gag cct gtc caa aat gat att tta caa gaa tca ttt atc 3840 Phe Lys Asp Glu Pro Val Gln Asn Asp Ile Leu Gln Glu Ser Phe Ile 1265 1270 1275 1280 aac acc atg tcc gct tgg gtt aat atg ttg ttg att tcc tca tct ggt 3888 Asn Thr Met Ser Ala Trp Val Asn Met Leu Leu Ile Ser Ser Ser Gly 1285 1290 1295 cca atc aag aca cct gtt ggt gcc tgt gcc aca tcc gtg gaa tct gtt 3936 Pro Ile Lys Thr Pro Val Gly Ala Cys Ala Thr Ser Val Glu Ser Val 1300 1305 1310 gac att ggt gta gaa acc atc ttg tct ggt aag gct aga atc tgt att 3984 Asp Ile Gly Val Glu Thr Ile Leu Ser Gly Lys Ala Arg Ile Cys Ile 1315 1320 1325 gtc ggt ggt tac gat gat ttc caa gaa gaa ggc tcc ttt gag ttc ggt 4032 Val Gly Gly Tyr Asp Asp Phe Gln Glu Glu Gly Ser Phe Glu Phe Gly 1330 1335 1340 aac atg aag gcc act tcc aac act ttg gaa gaa ttt gaa cat ggt cgt 4080 Asn Met Lys Ala Thr Ser Asn Thr Leu Glu Glu Phe Glu His Gly Arg 1345 1350 1355 1360 acc cca gcg gaa atg tcc aga cct gcc acc act acc cgt aac ggt ttt 4128 Thr Pro Ala Glu Met Ser Arg Pro Ala Thr Thr Thr Arg Asn Gly Phe 1365 1370 1375 atg gaa gct caa ggt gct ggt att caa atc atc atg caa gct gat tta 4176 Met Glu Ala Gln Gly Ala Gly Ile Gln Ile Ile Met Gln Ala Asp Leu 1380 1385 1390 gct ttg aag atg ggt gtg cca att tac ggt att gtt gcc atg gct gct 4224 Ala Leu Lys Met Gly Val Pro Ile Tyr Gly Ile Val Ala Met Ala Ala 1395 1400 1405 acc gcc acc gat aag att ggt aga tct gtg cca gct cca ggt aag ggt 4272 Thr Ala Thr Asp Lys Ile Gly Arg Ser Val Pro Ala Pro Gly Lys Gly 1410 1415 1420 att tta acc act gct cgt gaa cac cac tcc agt gtt aag tat gct tca 4320 Ile Leu Thr Thr Ala Arg Glu His His Ser Ser Val Lys Tyr Ala Ser 1425 1430 1435 1440 cca aac ttg aac atg aag tac aga aag cgc caa ttg gtt act cgt gaa 4368 Pro Asn Leu Asn Met Lys Tyr Arg Lys Arg Gln Leu Val Thr Arg Glu 1445 1450 1455 gct cag att aaa gat tgg gta gaa aac gaa ttg gaa gct ttg aag ttg 4416 Ala Gln Ile Lys Asp Trp Val Glu Asn Glu Leu Glu Ala Leu Lys Leu 1460 1465 1470 gag gcc gaa gaa att cca agc gaa gac caa aac gag ttc tta ctt gaa 4464 Glu Ala Glu Glu Ile Pro Ser Glu Asp Gln Asn Glu Phe Leu Leu Glu 1475 1480 1485 cgt acc aga gaa atc cac aac gaa gct gaa agt caa ttg aga gct gca 4512 Arg Thr Arg Glu Ile His Asn Glu Ala Glu Ser Gln Leu Arg Ala Ala 1490 1495 1500 caa caa caa tgg ggt aac gac ttc tac aag agg gac cca cgt att gct 4560 Gln Gln Gln Trp Gly Asn Asp Phe Tyr Lys Arg Asp Pro Arg Ile Ala 1505 1510 1515 1520 cca ttg aga gga gca ctg gct act tac ggt tta act att gat gac ttg 4608 Pro Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Tyr Gly Leu Thr Ile Asp Asp Leu 1525 1530 1535 ggt gtc gct tca ttc cac ggt aca tcc aca aag gct aat gac aag aac 4656 Gly Val Ala Ser Phe His Gly Thr Ser Thr Lys Ala Asn Asp Lys Asn 1540 1545 1550 gaa tct gcc aca att aat gaa atg atg aag cat ttg ggt aga tct gaa 4704 Glu Ser Ala Thr Ile Asn Glu Met Met Lys His Leu Gly Arg Ser Glu 1555 1560 1565 ggt aat ccc gtc att ggt gtt ttc caa aag ttc ttg act ggt cat cca 4752 Gly Asn Pro Val Ile Gly Val Phe Gln Lys Phe Leu Thr Gly His Pro 1570 1575 1580 aag ggt gct gct ggt gca tgg atg atg aat ggt gct ttg caa att cta 4800 Lys Gly Ala Ala Gly Ala Trp Met Met Asn Gly Ala Leu Gln Ile Leu 1585 1590 1595 1600 aac agt ggt att att cca ggt aac cgt aac gct gat aac gtg gat aag 4848 Asn Ser Gly Ile Ile Pro Gly Asn Arg Asn Ala Asp Asn Val Asp Lys 1605 1610 1615 atc ttg gag caa ttt gaa tac gtc ttg tac cca tcc aag act tta aag 4896 Ile Leu Glu Gln Phe Glu Tyr Val Leu Tyr Pro Ser Lys Thr Leu Lys 1620 1625 1630 acc gac ggt gtc aga gcc gtg tcc atc act tct ttc ggt ttt ggt caa 4944 Thr Asp Gly Val Arg Ala Val Ser Ile Thr Ser Phe Gly Phe Gly Gln 1635 1640 1645 aag ggt ggt caa gct att gtg gtt cat cca gac tac tta tac ggt gct 4992 Lys Gly Gly Gln Ala Ile Val Val His Pro Asp Tyr Leu Tyr Gly Ala 1650 1655 1660 atc act gaa gac aga tac aac gag tat gtc gcc aag gtt agt gcc aga 5040 Ile Thr Glu Asp Arg Tyr Asn Glu Tyr Val Ala Lys Val Ser Ala Arg 1665 1670 1675 1680 gag aaa agt gcc tac aaa ttc ttc cat aat ggt atg atc tac aac aag 5088 Glu Lys Ser Ala Tyr Lys Phe Phe His Asn Gly Met Ile Tyr Asn Lys 1685 1690 1695 ttg ttc gta agt aaa gag cat gct cca tac act gat gaa ttg gaa gag 5136 Leu Phe 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gct gtt ttc aag tcc tta ggc 5472 Phe Ala Gly Thr Trp Ser Ala Lys Glu Ala Val Phe Lys Ser Leu Gly 1810 1815 1820 gtc aag tcc tta ggc ggt ggt gct gca ttg aaa gac atc gaa atc gta 5520 Val Lys Ser Leu Gly Gly Gly Ala Ala Leu Lys Asp Ile Glu Ile Val 1825 1830 1835 1840 cgc gtt aac aaa aac gct cca gcc gtt gaa ctg cac ggt aac gcc aaa 5568 Arg Val Asn Lys Asn Ala Pro Ala Val Glu Leu His Gly Asn Ala Lys 1845 1850 1855 aag gct gcc gaa gaa gct ggt gtt acc gat gtg aag gta tct att tct 5616 Lys Ala Ala Glu Glu Ala Gly Val Thr Asp Val Lys Val Ser Ile Ser 1860 1865 1870 cac gat gac ctc caa gct gtc gcg gtc gcc gtt tct act aag aaa tag 5664 His Asp Asp Leu Gln Ala Val Ala Val Ala Val Ser Thr Lys Lys 1875 1880 1885 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <400> 6 ggttctacta tgggtggtgt tt 22 <210> 7 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <400> 7 cttatcctta gatacacg 18 <210> 8 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <400> 8 cttcaacggt gtcacctt 18

【００６０】

【配列表フリーテキスト】配列番号８〜配列番号１０
は、合成プライマーである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl. ⁷識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 9/00 (Ｃ１２Ｎ 9/00 //(Ｃ１２Ｎ 9/00 Ｃ１２Ｒ 1:865） Ｃ１２Ｒ 1:865） Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (72)発明者 赤田 倫治 山口県宇部市西岐波1606−15 Ｆターム(参考） 4B018 LB01 LB09 MD81 4B024 AA05 BA07 CA03 DA12 EA04 GA11 HA01 4B035 LC01 LG50 LP42 4B050 CC04 DD04 LL02 4B065 AA80X AA80Y AB01 AC20 BA02 CA27 CA42