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大理茶在制备改善应激性急性肝损伤药物中的应用

阅读：560发布：2020-05-08

专利汇可以提供大理茶在制备改善应激性急性肝损伤药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本申请涉及大理茶及其提取物在制备改善应激性急性肝损伤药物中的应用。现已发现许多中药可缓解肝损伤，但中药存在服用不便、不良气味难以掩盖、人们接受程度低、服用依从性差等问题。而本申请提供的大理茶是更加合适的缓解应激性肝损伤的保健方式。本申请大理茶提取物的制备方法如下：取大理茶叶，加水煎煮，过滤，将滤液浓缩，干燥即得。，下面是大理茶在制备改善应激性急性肝损伤药物中的应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.大理茶在制备改善应激性急性肝损伤药物或保健食品中的应用。
2.大理茶提取物在制备改善应激性急性肝损伤药物或保健食品中的应用。
3.权利要求2所述的应用，其特征在于：大理茶提取物是冻干粉。
4.权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于：所述的大理茶采自云南省楚雄州。
5.权利要求2或3任一项所述的应用，其特征在于：所述的大理茶提取物，其制备方法如下：取大理茶叶，加水煎煮，过滤，将滤液浓缩，干燥即得。
6.权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的大理茶提取物，其制备方法如下：取大理茶叶，加4-10倍量水煎煮，保持微沸5-30分钟，过滤，滤渣同法操作1-3次，合并滤液，浓缩，干燥即得。
7.权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的大理茶提取物，其制备方法如下：取大理茶叶1份，加4倍量纯净水，保持微沸10分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥即得。
8.权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于：所述的保健食品选自饮料、乳制品和茶叶。
9.权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于：所述的药物组合物剂型选自片剂、胶囊、口服液、丸剂和散剂。
10.权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于：所述的药物组合物的药物活性成分为大理茶或大理茶提取物，其在组合物中所占重量百分比是0.1-99.9％，其余为药学上可接受的载体。

说明书全文

大理茶在制备改善应激性急性肝损伤药物中的应用

技术领域

[0001] 本申请涉及大理茶的医药用途，尤其涉及大理茶在制备改善应激性急性肝损伤药物中的应用。

背景技术

[0002] 应激反应是机体针对不断变化的环境产生适应性改变，维持内环境稳定，从而有利于个体生存。应激源可以来自躯体也可来自心理，对机体构成威胁的任何刺激皆为应激源。当身心应激超过人的适应能力就会损害人的健康。现代人类疾病与应激密切相关。正常细胞的结构与功能需要通过氧化还原途径来维持和调节，遭遇应激时，体内自由基产生增加，一旦自由基的累积超过抗氧化防御系统清除能力，机体就处于氧化应激状态。肝脏是哺乳动物的重要化学物质代谢器官，负责化学物质代谢活化及代谢中间产物的排出。同时，肝脏也是三大营养物质及维生素的代谢场所，而且兼具造血、储血和调节循环血量的功能以及免疫防御、分泌胆汁等功能。

[0003] 作为体内代谢的核心器官，肝脏富含线粒体，而线粒体是体内自由基产生的主要场所。此外，化学物质在代谢过程中也会产生大量的自由基。自由基的积累及清除失衡与肝组织的损伤密切相关。应激发生时，参与应激调节的肝脏更加容易受到自由基攻击造成肝损伤。

[0004] 大理茶[Camellia taliensis(W.W.Smith)Melchior]，为山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)茶组(sect.Thea)植物，是茶组植物中较为原始的物种，主要分布于哀牢山以西的澜沧江、怒江流域、横断山脉中部的滇西南地区以及哀牢山以东的沅江地区。在化学成分上，除了简单儿茶素类及其衍生物、黄嘌呤生物碱外，与其他茶组植物如普通栽培茶Camellia sinesis以及普洱茶Camellia assamica(Mast.)Chang不同，大理茶含有丰富的水解单宁类物质，其结构特征为葡萄糖与没食子酸及其衍生物通过酯键形成，是大理茶的特征性成分。目前，从大理茶中分离得到的水解单宁类成分有1-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖(1-O-galloyl-β-D-glucopyranose,1)，1,2-二-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖(1,2-di-O-galloyl-β-D-glucopyranose,2)，1,4,6-三-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖(1,4,6-tri-O-galloyl-β-D-glucopyranose,3)，1,2,6-三-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖(1,2,6-tri-O-galloyl-β-D-glucopyranose,4)，6-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖(6-O-galloyl-D-glucopyranose,5)，2,6-二-O-没食子酰基-D-吡喃葡萄糖(2,6-di-O-galloyl-D-glucopyranose,6)，1-O-没食子酰基-4,6-O-(S)-六羟基联苯酰基-β-D-吡喃葡萄糖(1-O-galloyl-4,6-O-(S)-Hexahydroxydiphenoyl-D-glucopyranose,7)，大理茶素(1,2-di-O-galloyl-4,6-O-(S)-hexahy-droxydiphenoyl-D-glucopyranose,8)，1,3-二-O-没食子酰基-4,6-O-(S)-六羟基联苯酰基-β-D-吡喃葡萄[1,3-di-O-galloyl-4,6-O-(S)-hexahydroxydiphenoyl-β-D-glucopyranose,9]，1,2,4,6-四-O-没食子酰基-β-D-吡喃葡萄糖(1,2,4,6-tetra-O-galloyl-β-D-glucopyranose,10)和1-O-没食子酰基-4,6-O-(S)-六羟基联苯酰基-β-D-吡喃葡萄糖[1-O-galloyl-4,6-O-(S)-hexahydroxydiphenoyl-β-D-glucopyranose,11]。

[0005] 大理茶中水解单宁类化合物结构如图1所示。

[0006] 随着社会的发展、生活方式的改变，工作及生活压力倍增，现代人时刻面临身心应激，亚健康人群不断增加，处于应激调节机制中的肝脏极易发生应激性肝损伤。改善肝脏所处氧化应激状态，缓解应激性肝损伤，从而预防严重疾病的产生，既可提高人民生活质量还能为社会节省巨大医疗成本，因此，寻找天然无毒、简便易行、易于为人们接受的保健食品或途径改善应激性肝损伤已成为人们关注的焦点。中医药是中华文明的宝贵文化财富，现已发现许多中药可缓解肝损伤，但中药存在服用不便、不良气味难以掩盖、人们接受程度低、服用依从性差等问题。

[0007] 而中国是茶叶的发源地，有丰富的茶资源。大理茶是较为古老的茶组植物，且在化学成分上与栽培茶和普洱茶不同，含有丰富的水解单宁类物质。水解单宁类物质不仅在风味上会带来明显的回甘，同时在结构中含有大量的邻三酚羟基，具有较强的抗氧化作用。

[0008] 查阅现有技术，目前关于大理茶的活性报道较少。WO2016190307A1涉及脑功能保护剂；CN108403495A公开了大理茶能够有效地抑制UVB照射对HaCat细胞的氧化损伤；JP2017189169A则涉及糖尿病预防或改善剂。

[0009] 茶是风靡世界的非酒精饮料之一，风味宜人，中国有悠久的茶文化，饮茶已成分国人的生活习惯之一，受众广，接受程度高，因而，大理茶是更加合适的缓解应激性肝损伤的保健方式。发明内容

[0010] 本发明采用的拘束应激小鼠模型，通过剥夺小鼠活动自由，能较好模拟现代人在日常生活中遭遇的身心应激。实验结果表明，大理茶可改善应激造成的急性肝损伤。

[0011] 因此，本发明提供如下技术方案：

[0012] 大理茶在制备改善应激性急性肝损伤药物或保健食品中的应用。

[0013] 本发明还提供：

[0014] 大理茶提取物在制备改善应激性急性肝损伤药物或保健食品中的应用。

[0015] 本发明所述的大理茶提取物可以是冻干粉。

[0016] 本发明的大理茶叶可以采自云南省楚雄州。

[0017] 本发明的大理茶提取物，其制备方法如下：

[0018] 取大理茶叶，加水煎煮，过滤，将滤液浓缩，干燥即得。

[0019] 优选的，制备方法可以是：

[0020] 取大理茶叶，加4-10倍量水煎煮，保持微沸5-30分钟，过滤，滤渣同法操作1-3次，合并滤液，浓缩，干燥即得。

[0021] 进一步优选的，制备方法可以是：

[0022] 取大理茶叶1份，加4倍量纯净水，保持微沸10分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥即得。

[0023] 进一步的，本发明所述的大理茶提取物可以作为具有改善应激性急性肝损伤的活性成分制备成药物组合物或保健食品。

[0024] 本发明所述的保健食品包括但不限于：饮料、乳制品、茶叶。

[0025] 本发明所述的药物组合物中的药物活性成分，其在组合物中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药学上可接受的载体。

[0026] 本发明所述的药物组合物，其剂型可以是任何口服剂型，包括但不限于：片剂、胶囊、口服液、丸剂、散剂。

[0027] 以下通过实验证明本发明所述大理茶的效果。

[0028] 一、实验方法和步骤：

[0029] 1.大理茶提取物的制备

[0030] 大理茶叶采自云南省楚雄州。取大理茶叶2kg，加8倍量纯净水，保持微沸10分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥得0.65kg大理茶提取物冻干粉，用于动物实验。

[0031] 2.实验动物及拘束应激模型的建立

[0032] 昆明种小鼠，体重18～22g，4周龄，雄性，购于昆明医科大学医学实验动物中心。实验动物饲养在清洁级层流架中，环境温度23±1℃，照明时间每天12小时(7∶00～19∶00)。适应性喂养一周后随机分为正常对照组、拘束应激模型组、拘束应激+维生素C250mg/kg(Vit)组、拘束应激+大理茶提取物低剂量50mg/kg(DLC-50)组、拘束应激+大理茶提取物中剂量100mg/kg(DLC-100)组和拘束应激+大理茶提取物高剂量200mg/kg(DLC-200)组共6组，每组
12只小鼠。维生素C组和大理茶提取物各剂量组连续7天灌胃给药，正常对照组和拘束应激模型组给予同体积蒸馏水，每天1次，在第7天拘束应激模型组、维生素C组和大理茶提取物各组小鼠灌胃30min后进行拘束应激实验。小鼠拘束装置使用改造为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，小鼠给予一次性拘束应激18h(14:00～8:00)，拘束实验期间禁食禁水。
拘束18h后摘眼球取血，处死小鼠并收集腹腔液、腹腔巨噬细胞和肝、脑、肾、脾等组织，组织分装存于-80℃超低温冰箱。拘束应激致小鼠急性肝损伤模型的建立如图2。检测以下指标：

[0033] 3.组织匀浆蛋白含量测定方法

[0034] 准确称取小鼠肝组织重量，按重量(g):体积(ml)＝1:9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件机械匀浆，2500rpm离心10分钟，取上清液用生理盐水稀释成0.5％的浓度组织匀浆后以考马斯亮兰蛋白试剂盒(南京建成)测定蛋白含量。根据试剂盒说明书操作表进行操作，于595nm测定OD值，计算样本蛋白浓度。

[0035] 4.大理茶对拘束应激小鼠肝脏丙氨酸氨基转移酶(ALT)的影响

[0036] ALT在37℃及PH7.4的条件下，对丙氨酸和α-酮戊二酸组成的底物产生作用，使其生成丙酮酸及谷氨酸。反应30min后，加入2,4-二硝基苯肼(DNPH)盐酸溶液终止反应。同时DNPH与酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙，故可以利用苯腙在碱性条件下呈现红棕色的特性，在505nm处通过比色法进行测定并计算酶活力。取10％肝组织生理盐水匀浆液稀释成1％匀浆液，照ALT试剂盒说明书(南京建成)进行测定。

[0037] 5.肝脏病理组织分析

[0038] 取各组实验动物肝组织，以10％福尔马林固定，洗涤后，正丁醇脱水，石蜡包埋，病理切片机切片。切片厚度为4μm。苏木精-伊红染色后，显微镜下观察。

[0039] 6.大理茶对拘束负荷小鼠肝脏NO和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平的影响[0040] NO测定采用Griess反应法，Griess试剂的配制由0.1％萘乙二胺溶液与1％磺胺(5％磷酸)溶液，使用前12h内等体积混合备用。分别取组织生理盐水匀浆100μl加至100μl Griess试剂中，混匀，静置20min后，540nm 波长测定OD值，根据NO标准曲线计算NO含量(μmol/ml)。

[0041] iNOS测定照iNOS测定试剂盒(南京建成)说明书进行。测定原理为NOS催化L-精氨酸和分子氧化反应生成NO，NO与亲核性物质生成有色化合物，在530nm下测定吸光度，根据吸光度的大小计算出NOS活力。

[0042] 7.大理茶对拘束应激小鼠肝脏TNF-α和IL-1β基因表达的影响

[0043] 实验采用qPCR法，依照全式金生物科技公司试剂盒说明书进行测定。

[0044] 7.1总RNA的提取

[0045] (1)样品为保存在-80℃的小鼠肝组织，取60mg肝组织样品于2ml灭菌的EP管中，加入600μl Trizol，在4℃冰浴条件下用组织匀浆机充分匀浆。

[0046] (2)匀浆液室温放置5min，在4℃6000rpm离心10min，去除未裂解的组织。

[0047] (3)取上清液，按照体积比1：5加氯仿，剧烈摇动15s，4℃12000rpm离心10min。

[0048] (4)吸取上层无色水相，移入另一灭菌EP管中，加与无色水相等体积的异丙醇，混匀后，-20℃沉淀2h。4℃12000rpm离心10min。

[0049] (5)在底部可见微量RNA沉淀，弃去上清，沉淀加与第二步等量的75％乙醇洗涤，室温放置10min，将RNA沉淀由管底弹起，反复倾倒几次，洗净。4℃8000rpm离心10min，倾去上清，用移液枪把无色液体吸干。开口10min挥发乙醇，待白色物呈凝胶状。

[0050] (6)加100μl ddH2O溶解，用核酸蛋白测定仪测定RNA浓度和纯度，根据浓度，将各样品总RNA的浓度调整为1000ng。

[0051] 7.2 cDNA的反转录合成

[0052] 取上述提取的总RNA，进行反转录合成cDNA(表1)。

[0053] 表1 cDNA的合成

[0054]

[0055] 将上述混合物混合均匀，置于PCR仪上进行反转录，条件为：42℃孵育15min；85℃加热5秒失活TransScript RT/RI Enzyme Mix与gDNA Remover；4℃保存。

[0056] 7.3引物设计

[0057] 根据GenBank提供的基因序列设计特异性引物，引物设计利用Primer5.0生物软件，用于扩增内参GAPDH，IL-1β，TNF-基因的引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。设计的引物序列如表所示。

[0058] 表2 PCR反应引物序列

[0059]

[0060] 7.4 PCR反应

[0061] 按照表3所示组分进行添加，然后放入PCR仪进行反应

[0062] 表3 PCR反应组分

[0063]

[0064] 将上述反应混合物放入PCR仪中，使用三步法进行扩增。扩增条件为步骤1：94℃30sec；步骤2：94℃5sec→60℃15sec→72℃10sec(45个循环)；步骤3：Dissociation Stage。

[0065] 8.大理茶对拘束应激小鼠肝脏抗氧化能力指数(ORAC)的影响

[0066] ORAC的测定方法参考了Davalos等人的报道并加以改进。实验原理为在485nm光激发下，荧光素钠会发射527nm的荧光，该荧光可以被AAPH释放的过氧自由基氧化导致消失。而当抗氧化剂存在的时候，它可以与荧光素钠竞争氧化剂，从而减缓荧光衰减的速度。所以，可以利用这一特性来测定样品清除氧自由基的能力。

[0067] 取肝组织10％生理盐水匀浆经稀释200倍后进行测定。具体测定方法是将96孔板每个微孔中加入待测样品溶液20μl，再加入磷酸钾缓冲液20μl和AAPH140μl(终浓度12.8mmol/L)，37℃避光孵育5min，最后添加荧光素钠20μl至终浓度为63nmol/L，立即启动反应并迅速将酶标板置于预温37℃的荧光酶标仪中开始测定。采用动力学方式，每2min测定一个点，至荧光强度衰减为零为止。

[0068] 实验所得各微孔反应得荧光强度数据通过软件输出到Excel中进一步处理。各微孔不同时间点的绝对荧光强度数据与-AAPH空白荧光强度相比，折算成相对荧光强度f，以相对荧光强度采用近似积分法计算荧光熄灭曲线下面积。

[0069] AUC＝2X(f0+f1+…+fn-1+fn)-f0-fn

[0070] 抗氧化剂作用下的荧光衰退曲线下面积与无抗氧化剂存在时自由基作用的荧光衰退曲线下面积之差，即荧光熄灭曲线下的延迟部分面积NetAUC为抗氧化剂的保护面积。抗氧化剂的氧自由基清除能力ORAC值，又称为抗氧化剂的抗氧化能力指数，是通过荧光衰退曲线的保护面积与12mol.L-1标准抗氧化物质Trolox的保护面积相比得出。其计算公式为：

[0071]

[0072] 9.大理茶对拘束应激小鼠肝脏丙二醛(MDA)水平的影响

[0073] MDA测定原理为过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比妥(TBA)缩合形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰，通过酶标仪进行测定。去小鼠肝组织5％生理盐水匀浆，照MDA试剂盒(南京建成)说明书进行测定。

[0074] 10.大理茶对拘束应激小鼠肝脏SOD水平的影响

[0075] SOD的测定是利用黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基，后者氧化羟胺生成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，在450nm波长处可测定OD值。当被测样品中含有SOD时，则对超氧阴离子自由基具有专一性抑制作用，使得形成亚硝酸盐减少，测定管的OD值会低于对照管的OD值，进而可通过计算求得样品中SOD水平。取小鼠肝组织10％生理盐水匀浆，照SOD检测试剂盒(南京建成)说明书进行测定。

[0076] 11.统计学处理

[0077] 实验结果数据使用mean±SD表示，使用SPSS 21软件并利用ANOVA检验和Dunnett’s检验的方法进行统计学处理，当P<0.05时有统计学意义。

[0078] 二、实验结果：

[0079] 1.大理茶对拘束应激小鼠肝脏ALT水平的影响

[0080] ALT是蛋白质代谢所需的氨基转移酶，大量存在于在肝脏和心脏等组织中，ALT水平的显著上升，是肝脏出现炎症性损伤的重要标志。实验结果如图3所示，拘束应激后小鼠肝脏ALT水平明显升高，说明肝损伤已发生。不同剂量大理茶提取物均可显著降低肝组织中ALT水平。

[0081] 结果如图3所示：大理茶对拘束应激小鼠肝脏ALT水平的影响

[0082] 2.肝脏病理组织分析

[0083] 实验结果如图4所示(A：对照组；B：模型组；C：DLC-50；D：DLC-100；E：DLC-200；F：Vic)，对照组小鼠肝小叶结构完整、清晰，无充血和炎症形成的血窦。模型组小鼠肝脏可见肝细胞坏死，炎症细胞浸润。不同剂量大理茶提取物及维生素C都能不同程度减少炎症细胞浸润和肝细胞坏死。

[0084] 3.大理茶对拘束负荷小鼠肝脏NO和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平的影响[0085] NO是与炎症密切相关的炎症介质，过量的NO可抑制干细胞蛋白质合成和线粒体的有氧呼吸，促进过氧亚硝酸离子生成，破坏DNA结构，产生细胞毒性，介导肝损伤。同时，NO进一步诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)等炎症因子的释放，加剧肝损伤。iNOS是NO合成的关键酶。iNOS并非结构酶，而是在炎症、感染等病理条件下诱导转录合成，从而催化NO大量生成。

[0086] 如图5所示，与正常小鼠相比，模型组小鼠肝脏NO和iNOS水平显著升高，各剂量大理茶提取物均能降低NO和iNOS水平，说明大理茶能够改善拘束应激造成的肝脏炎症状态。

[0087] 4.大理茶对拘束应激小鼠肝脏TNF-α和IL-1β基因表达的影响

[0088] TNF-α与肝损伤以及肝细胞的凋亡和坏死密切相关。TNF-α可刺激凋亡刺激因子的产生，诱导肝细胞凋亡，同时也是中性粒细胞活化和黏附因子，可诱导中性粒细胞向肝脏组织区、聚集，释放蛋白酶和氧自由基。IL-1β调控多种炎症因子的分泌参与免疫应答，同样可导致炎症细胞浸润及组织炎症性坏死。

[0089] 实验结果显示(图6)，拘束应激后，模型组小鼠肝脏TNF-α和IL-1βmRNA水平较对照组明显升高，说明肝脏处于炎症状态，给予大理茶提取物后，表达水平显著下降，表明大理茶能够有效抑制炎症因子。

[0090] 5.大理茶对拘束应激小鼠肝脏抗氧化能力指数(ORAC)的影响

[0091] 肝脏中含有丰富的过氧化氢酶、超氧化物歧化酶(SOD)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等抗氧化酶，以及谷胱甘肽(GSH)、维生素C、维生素E等小分子抗氧化物质，II相代谢酶等，这些物质共同构成了肝脏的抗氧化系统。正常情况下，肝脏可维持自身氧化还原的平衡。但在应激装带下，肝组织更易受到过量自由基的攻击，出现肝损伤，因此，氧化应激状态是肝损伤的重要病理生理基础。ORAC是评价总抗氧化能力的重要指标，可用来衡量机体的氧化还原系统是否稳定。

[0092] 实验结果如图7所示，与正常小鼠相比，拘束应激后，小鼠肝脏ORAC水平显著降低，提示应激造成肝脏氧化还原系统失衡，肝脏处于氧化应激状态。

[0093] 6.大理茶对拘束应激小鼠肝脏丙二醛(MDA)水平的影响

[0094] 氧化应激发生时，过量产生的自由基会攻击细胞，造成磷脂双分子膜过氧化，破坏细胞膜正常功能，导致细胞代谢异常。MDA是脂质过氧化产物，可反映细胞氧化损伤程度。

[0095] 实验结果如图8所示，与对照组比较，模型组小鼠肝组织MDA水平显著升高，表明肝细胞出现氧化损伤。给予不同剂量大理茶提取物可显著降低MDA水平，说明细胞氧化损伤状态得到改善。

[0096] 7.大理茶对拘束应激小鼠肝脏SOD水平的影响

[0097] SOD是机体内源性抗氧化物质，在机体的氧化与抗氧化平衡中起着至关重要的作用，它能消除超氧阴离子自由基(O2-.)从而保护细胞免受损伤，SOD水平的高低间接反应了机体清除自由基的能力。当处于肝脏氧化应激状态时，内源性氧化物质水平降低，无法清除应激产生的超量自由基，最终氧化损伤形成。

[0098] 实验结果如图9所示，应激导致模型组小鼠肝组织SOD水平明显降低，再次说明肝脏处于氧化应激状态，中、高剂量大理茶提取物可恢复SOD水平，表明大理茶可提高内源性抗氧化物质活力，重建机体氧化还原系统平衡。附图说明

[0099] 图1大理茶中水解单宁类化合物结构

[0100] 图2拘束应激致小鼠急性肝损伤模型的建立

[0101] 图3大理茶对拘束应激小鼠肝脏ALT水平的影响

[0102] 图4大理茶对拘束应激小鼠肝脏组织形态的影响(A：对照组；B：模型组；C：DLC-50；D：DLC-100；E：DLC-200；F：Vic。)

[0103] 图5大理茶对拘束应激小鼠肝脏NO和iNOS水平的影响

[0104] 图6大理茶对拘束应激小鼠肝脏TNF-α和IL-1β基因表达的影响

[0105] 图7大理茶对拘束应激小鼠肝脏ORAC水平的影响(A：AAPH诱发荧光衰减曲线B：AAPH诱发荧光衰减曲线下面积C：ORAC水平)

[0106] 图8大理茶对拘束应激小鼠肝脏MDA水平的影响

[0107] 图9大理茶对拘束应激小鼠肝脏SOD水平的影响

[0108] 以上各图，##：与对照组(control)比较，p＜0.01，*：与模型组(Model)比较，p＜0.05；**：与模型组比较，p＜0.01；***：与模型组比较，p＜0.001

具体实施方式

[0109] 实施例1

[0110] 大理茶叶采自云南省楚雄州。取大理茶叶2kg，加8倍量纯净水，保持微沸10分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥。

[0111] 实施例2

[0112] 大理茶叶采自云南省楚雄州。取大理茶叶2kg，加11倍量纯净水，保持微沸10分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥。

[0113] 实施例3

[0114] 大理茶叶采自云南省楚雄州。取大理茶叶2kg，加16倍量纯净水，保持微沸20分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥。

[0115] 实施例4

[0116] 大理茶叶采自云南省楚雄州。取大理茶叶2kg，加16倍量纯净水，保持微沸30分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥。

[0117] 实施例5

[0118] 大理茶叶采自云南省楚雄州。取大理茶叶2kg，加16倍量纯净水，保持微沸30分钟，过滤，滤渣同法操作2次，合并3次滤液，浓缩，冷冻干燥。

[0119] 实施例6

[0120] 大理茶叶采自云南省楚雄州。取大理茶叶2kg，加20倍量纯净水，保持微沸30分钟，过滤，滤渣同法操作，合并两次滤液，浓缩，冷冻干燥。

[0121] 实施例7

[0122] 上述任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成片剂。

[0123] 实施例8

[0124] 上述任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成胶囊剂。

[0125] 实施例9

[0126] 上述任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成丸剂。

[0127] 实施例10

[0128] 上述任意一个提取物，加入常规辅料，应用制剂学上的常规方法，制成口服液。

[0129] 实施例11

[0130] 上述任意一个提取物，以常规工艺加入茶叶制品中，制成保健茶。

[0131] 实施例12

[0132] 上述任意一个提取物，以常规工艺加入乳制品中，制成保健乳制品。

[0133] 实施例13

[0134] 上述任意一个提取物，以常规工艺加入饮料中，制成保健饮料。

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