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12种氨基酸含量的GC-MS检测方法

阅读：169发布：2020-05-08

专利汇可以提供12种氨基酸含量的GC-MS检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)标准工作液的配制；2)样品工作液的配制：3)GC-MS法检测分析。本发明设计科学合理，能够对12种氨基酸进行准确的定性定量分析，使得成分检测分析更快速，节省时间，且检测灵敏度高，检测数据精确。，下面是12种氨基酸含量的GC-MS检测方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
1)标准工作液的配制：
准确称取氨基酸标准品0.1g，用一级水溶解稀释并转移至100mL容量瓶中定容，配制成浓度为1mg/mL的溶液，精密量取1.0mL衍生化，过膜，待进样分析；
2)样品工作液的配制：
准确称取8mL酱油样品，加入3g 氯化钠，将样品瓶置于60℃水浴平衡10min，后进行衍生化，微孔滤膜过滤，备用；
3)GC-MS法检测分析：
将标准工作液与样品工作液分别注入到单四级杆气相色谱-质谱联用仪中，进行质谱分析，以标准工作液的峰面积与样品工作液峰面积进行定量比较，保留时间定性，外标法进行计算，计算样品中氨基酸的含量X。
2.根据权利要求1所述的12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，其特征在于：所述步骤3)中氨基酸的含量X采用如下公式进行计算：
X＝c*V/m
其中：c—试样中某种氨基酸的浓度，单位为μg/mL；
V—试样溶液定容体积，单位为mL；
m—试样称取的质量，单位g；
3.根据权利要求1所述的12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，其特征在于：所述的气相色谱条件为：
色谱柱：HP-5MS；
进样口温度：250℃；
程序升温；
进样体积：1uL
所述的质谱条件为：
电子轰击(EI)离子源：
离子源温度：280℃；
传输线温度：250℃。
4.根据权利要求3所述的12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，其特征在于：所述气相色谱条件为程序升温，初温80℃保持1min，20℃/min升温至140℃，3.5℃/min升温至290℃，保持5min。
5.根据权利要求3所述的12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，其特征在于：所述质谱条件中，丙氨酸的质谱参数为：定量离子158m/z，定性离子232m/z、260m/z；甘氨酸的质谱参数为：定量离子218m/z，定性离子246m/z、189m/z；缬氨酸的质谱参数为：定量离子186m/z，定性离子260m/z、288m/z；异亮氨酸的质谱参数为：定量离子200m/z，定性离子274m/z、302m/z；脯氨酸的质谱参数为：定量离子184m/z，定性离子258m/z、286m/z；丝氨酸的质谱参数为：
定量离子288m/z，定性离子362m/z、390m/z；苏氨酸的质谱参数为：定量离子303m/z，定性离子376m/z、404m/z；苯丙氨酸的质谱参数为：定量离子302m/z，定性离子234m/z、336m/z；天冬氨酸的质谱参数为：定量离子316m/z，定性离子390m/z、418m/z；赖氨酸的质谱参数为：定量离子300m/z，定性离子272m/z、329m/z；组氨酸的质谱参数为：定量离子440m/z，定性离子
338m/z、280m/z；组氨酸的质谱参数为：定量离子440m/z，定性离子338m/z、280m/z。

说明书全文

12种氨基酸含量的GC-MS检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于氨基酸检测领域，涉及12种氨基酸含量的GC-MS检测方法。

背景技术

[0002] 氨基酸是生物功能大分子-蛋白质的基本组成单位，是动物体内合成蛋白质的重要来源，在医药行业及工业生产的各个领域具有重要地位。因此，氨基酸的分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义。

[0003] 目前，氨基酸分离与测定的方法正在不断发展与完善中，包括化学法、毛细管电泳法、液相色谱法等。在氨基酸的分离测定方法中，化学法不能定性分析，液相色谱法操作复杂、影响因素多，毛细管电泳法分辨率及选择性低，氨基酸自动分析仪昂贵、运行费用高，均不能较好的定性定量分析多种氨基酸。

[0004] 通过对公开专利文献的检索，并未发现对12种氨基酸含量的GC-MS检测方法的公开专利文献，也未发现与本专利申请相同的公开专利文献。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种检测操作简单、分离度高、检测精度高、检测准确高效的12种氨基酸含量的GC-MS检测方法。

[0006] 本发明解决其技术问题是通过以下技术方案实现的：

[0007] 12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

[0008] 1)标准工作液的配制：

[0009] 准确称取氨基酸标准品0.1g，用一级水溶解稀释并转移至100mL容量瓶中定容，配制成浓度为1mg/mL的溶液，精密量取1.0mL衍生化，过膜，待进样分析；

[0010] 2)样品工作液的配制：

[0011] 准确称取8mL酱油样品，加入3g 氯化钠，将样品瓶置于60℃水浴平衡10min，后进行衍生化，微孔滤膜过滤，备用；

[0012] 3)GC-MS法检测分析：

[0013] 将标准工作液与样品工作液分别注入到单四级杆气相色谱-质谱联用仪中，进行质谱分析，以标准工作液的峰面积与样品工作液峰面积进行定量比较，保留时间定性，外标法进行计算，计算样品中氨基酸的含量X。

[0014] 而且，所述步骤3)中氨基酸的含量X采用如下公式进行计算：

[0015] X＝c*V/m

[0016] 其中：c—试样中某种氨基酸的浓度，单位为μg/mL；

[0017] V—试样溶液定容体积，单位为mL；

[0018] m—试样称取的质量，单位为g；

[0019] 而且，所述的气相色谱条件为：

[0020] 色谱柱：HP-5MS；

[0021] 进样口温度：250℃；

[0022] 程序升温；

[0023] 进样体积：1uL

[0024] 所述的质谱条件为：

[0025] 电子轰击(EI)离子源：

[0026] 离子源温度：280℃；

[0027] 传输线温度：250℃。

[0028] 而且，所述气相色谱条件为程序升温，初温80℃保持1min，20℃/min升温至140℃，3.5℃/min升温至290℃，保持5min。

[0029] 而且，所述质谱条件中，丙氨酸的质谱参数为：定量离子158m/z，定性离子232m/z、260m/z；甘氨酸的质谱参数为：定量离子218m/z，定性离子246m/z、189m/z；缬氨酸的质谱参数为：定量离子186m/z，定性离子260m/z、288m/z；异亮氨酸的质谱参数为：定量离子200m/z，定性离子274m/z、302m/z；脯氨酸的质谱参数为：定量离子184m/z，定性离子258m/z、
286m/z；丝氨酸的质谱参数为：定量离子288m/z，定性离子362m/z、390m/z；苏氨酸的质谱参数为：定量离子303m/z，定性离子376m/z、404m/z；苯丙氨酸的质谱参数为：定量离子302m/z，定性离子234m/z、336m/z；天冬氨酸的质谱参数为：定量离子316m/z，定性离子390m/z、
418m/z；赖氨酸的质谱参数为：定量离子300m/z，定性离子272m/z、329m/z；组氨酸的质谱参数为：定量离子440m/z，定性离子338m/z、280m/z；组氨酸的质谱参数为：定量离子440m/z，定性离子338m/z、280m/z。

[0030] 本发明的优点和有益效果为：

[0031] 1、本发明12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，更具有针对性，更为有效，分析步骤更为简洁，更能快速有效地对12种氨基酸进行较为准确的定性定量分析。

[0032] 2、本发明12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，应用气相色谱-质谱联用技术分析12种氨基酸，较好地解决了以往液相色谱法操作复杂、影响因素多等问题。具有选择性好、灵敏度高、分析速度快等优点。

[0033] 3、本发明12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，由于氨基酸R基不同，因此各种氨基酸的化学性质也有较大差异，测定多种不同属性的氨基酸存在一定困难，运用GC-MS法分析多种不同氨基酸，能够更为有效地分离、选择不同种类的氨基酸。

[0034] 4、本发明12种氨基酸含量的GC-MS检测方法，具有极高的灵敏度，简便易操作，氨基酸测定种类全面，适用于多种生物样本的测定。附图说明

[0035] 图1为本发明标准工作液的质谱图；

[0036] 图2为本发明样品工作液的质谱图。

具体实施方式

[0037] 下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。

[0038] 12种氨基酸含量的GC-MS检测方法检测方法，其创新之处在于：该方法包括如下步骤：

[0039] 1)标准工作液的配制：

[0040] 准确称取氨基酸标准品0.1g，用一级水溶解稀释并转移至100mL容量瓶中定容，配制成浓度为1mg/mL的溶液，精密量取1.0mL衍生化，过膜，待进样分析；

[0041] 2)样品工作液的配制：

[0042] 准确称取8mL酱油样品，加入3g氯化钠，将样品瓶置于60℃水浴平衡10min，后进行衍生化，微孔滤膜过滤，备用；

[0043] 3)GC-MS法检测分析：

[0044] 将标准工作液与样品工作液分别注入到单四级杆气相色谱-质谱联用仪中，进行质谱分析，以标准工作液的峰面积与样品工作液峰面积进行定量比较，保留时间定性，外标法进行计算，计算样品中氨基酸的含量X。

[0045] 步骤3)中氨基酸的含量X采用如下公式进行计算：

[0046] X＝c*V/m

[0047] 其中：c—试样中某种氨基酸的浓度，单位为μg/mL；

[0048] V—试样溶液定容体积，单位为mL；

[0049] m—试样称取的质量，单位为g；

[0050] 所述的气相色谱条件为：

[0051] 色谱柱：HP-5MS；

[0052] 进样口温度：250℃；

[0053] 进样体积：1uL；

[0054] 气相色谱为程序升温，程序升温过程见表1；

[0055] 表1程序升温表

[0056]步骤升温速度(℃/min) 温度(℃) 保持时间(min)
初始 / 80 1.00
1 20.0 140.0 0.00
2 3.5 290.0 15.00

[0057] 所述的质谱条件为：

[0058] 电子轰击(EI)离子源：

[0059] 离子源温度：280℃；

[0060] 传输线温度：250℃。

[0061] 12中氨基酸的质谱参数见表2。

[0062] 表2 12中氨基酸的定性离子、定量离子参数表

[0063]

[0064]

[0065] 尽管为说明目的公开了本发明的实施例和附图，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例和附图所公开的内容。

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