一种瑶药石油菜药材的质量检测方法
阅读：2发布：2021-02-05
专利汇可以提供一种瑶药石油菜药材的质量检测方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于中药分析技术领域，具体涉及一种瑶药石油菜药材的 质量 检测方法，该质量检测方法包括石油菜药材的TLC 鉴别 方法和石油菜药材中总黄 酮 含量的测定方法，所述的石油菜药材的TLC鉴别方法简便可行，重现性、专属性强，能够对药材的真伪进行准确的判断,能在一定程度上对药品的优劣作出直观的反应。所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法能够准确、快速的测定出瑶药石油菜药材中总黄酮的含量，从而有利于对石油菜药材的质量进行监控。采用本发明瑶药石油菜药材的质量检测方法能够更加准确的测定和评价石油菜药材的质量，有助于提高石油菜药材使用的安全性和 稳定性 。，下面是一种瑶药石油菜药材的质量检测方法专利的具体信息内容。
1.一种瑶药石油菜药材的质量检测方法，其特征在于，包括石油菜药材的TLC鉴别方法和石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，其中所述的石油菜药材的TLC鉴别方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：称取1.0 g石油菜药材药粉，过2号筛，加入30 mL乙醇，超声提取30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得；对照药材供试液的同法制备；
（2）对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，加乙醇配成浓度为1mg/mL的对照品溶液；
（3）薄层色谱鉴别方法：照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照药材供试液和对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，展开，取出，晾干后喷以质量分数为10% 的硫酸乙醇溶液，在加热到105 ℃至斑点清晰，在日光下检视。
2.根据权利要求1所述的瑶药石油菜药材的质量检测方法，其特征在于，所述的石油菜药材的TLC鉴别方法中所用的乙醇为体积浓度为95%的乙醇。
3.根据权利要求1所述的瑶药石油菜药材的质量检测方法，其特征在于，所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，包括以下步骤：
（1）对照品溶液的制备： 精密称取芦丁对照品适量，加体积浓度为50%的乙醇溶解，制成0.2092 mg/mL的对照品溶液；
（2） 标准曲线的绘制：分别精密量取芦丁对照品溶液 0、1、3、5、6、8 mL置于容量瓶中，各加纯水至8 mL，加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510nm波长下的吸光度，以芦丁对照溶液的浓度mg/mL为横坐标，以在510nm下的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，得出回归方程；
（3）供试品溶液的制备：取过2号筛的本品粉末1 g，精密称定，用氯仿萃取脱色至药液无色，药渣自然风干后，置于锥形瓶中，按1:40的料液比g/mL加入体积浓度为50%的乙醇，浸泡0.5 h，回流提取30 min，抽滤，定容至50 mL，即得；
（4）测定： 精密吸取适量供试品溶液, 加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定溶液在510nm波长下的吸光度；
（5）结果计算：总黄酮含量以芦丁计算，从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
一种瑶药石油菜药材的质量检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药分析技术领域，具体涉及一种瑶药石油菜药材的质量检测方法。
背景技术
[0002] 瑶药石油菜为荨麻科植物波缘冷水花Pilea cavaleriei H. Lév.的全草，别名石花菜、肥奴奴草,小石芥、冷冻草、疳积草，石苋菜、肥猪菜、打不死、石凉菜、青蛙腿，分布在广西、广东、贵州、湖南等地。生于石山阴处，多见于海拔300-1500米的山坡林下石上。全年均可采收，洗净，鲜用或晒干。微苦，性凉；归肺、脾经。清肺止咳，利水消肿，解毒止痛。主治肺热咳嗽，肺结核，肾炎水肿，烧烫伤，跌打损伤，疮疖肿毒。从瑶医理论的角度上讲，石油菜既具风类药的功能，又具打类药的特性，是风打相兼类的瑶药。
[0003] 目前，瑶药石油菜的化学成分研究方面有一些文献报道。任恒春等用硅胶、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20等色谱技术分离纯化化合物，并通过理化性质及波谱技术鉴定化合物结构，得到包含以倍半萜及其衍生物、木脂素类化合物在内共计128种化合物。其中，在挥发油和超临界流体萃取法（SFE）提取物的化学成分中，运用气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）测定相对含量，挥发油成分中已鉴定出的28个化学成分的相对含量之和占化合物检出总量的91.90%，化合物类型均为萜类，主要是倍半萜及其衍生物类，相对含量之和约为73.69%，其余均为单萜及其衍生物类，相对含量之和约为18.21 %，α-蒎烯、β-蒎烯、石竹烯的含量相对较高；石油菜SFE萃取物中鉴定处的65个化学成分相对含量占总检出量的58.17%，包括相对含量为12.21%萜类、12.43%芳香族类和31.37%脂肪族类成分，甲氧基肉桂酸乙酯、Aristolone、生育酚的含量相对较高。
[0004] 瑶药石油菜的药理作用研究方面也有文献报道。李丽芬等研究发现石油菜具有相对较强的灭虫（柑桔粉虱、萝卜蚜）活性，多应用于治疗急性呼吸衰竭、肺癌、肺结核、小儿大叶性肺炎等中药复方制剂中。瑶药石油菜广泛用于广西瑶族民间，主治肺热咳嗽，肺结核，肾炎水肿，烧烫伤，跌打损伤，疮疖肿毒，药效较好但波动大。目前该药材没有质量标准，药材质量无法控制，使民间或临床用药效果存在较大差异，严重影响其临床用药治疗的安全有效性。因此研发一种瑶药石油菜药材的质量检测方法，对于石油菜药材的进一步质量控制具有十分重要的意义。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于提供一种瑶药石油菜药材的质量检测方法，该质量检测方法包括石油菜药材的TLC鉴别方法和石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，所述的石油菜药材的TLC鉴别方法具有灵敏度高、专属性强以及可比性好等特点，能够对药材的真伪进行准确的判断, 能在一定程度上对药品的优劣作出直观的反应；所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法能够准确、快速的测定出瑶药石油菜药材中总黄酮的含量，从而有利于对石油菜药材的质量进行监控。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种瑶药石油菜药材的质量检测方法，包括石油菜药材的TLC鉴别方法和石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，其中所述的石油菜药材的TLC鉴别方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：称取1.0 g石油菜药材药粉，过2号筛，加入30 mL体积浓度为
95%的乙醇，超声提取30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得；对照药材供试液的同法制备；
（2）对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，加体积浓度为95%的乙醇配成浓度为
1mg/mL的对照品溶液；
（3）薄层色谱鉴别方法：照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照药材供试液和对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，展开，取出，晾干后喷以质量分数为10% 的硫酸乙醇溶液，在加热到105 ℃至斑点清晰，在日光下检视。供试品应在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
（1）供试品溶液的制备：称取1.0 g石油菜药材药粉，过2号筛，加入30 mL体积浓度为
95%的乙醇，超声提取30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得；对照药材供试液的同法制备；
（2）对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，加体积浓度为95%的乙醇配成浓度为
1mg/mL的对照品溶液；
（3）薄层色谱鉴别方法：照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照药材供试液和对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，展开，取出，晾干后喷以质量分数为10% 的硫酸乙醇溶液，在加热到105 ℃至斑点清晰，在日光下检视。供试品应在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0007] 上述的瑶药石油菜药材的质量检测方法中，所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备： 精密称取芦丁对照品适量，加体积浓度为50%的乙醇溶解，制成0.2092 mg/mL的对照品溶液；
（2） 标准曲线的绘制：分别精密量取芦丁对照品溶液 0、1、3、5、6、8 mL置于容量瓶中，各加纯水至8 mL，加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510nm波长下的吸光度，以芦丁对照溶液的浓度mg/mL为横坐标，以在510nm下的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，得出回归方程；
（3）供试品溶液的制备：取过2号筛的本品粉末1 g，精密称定，用氯仿萃取脱色至药液无色，药渣自然风干后，置于锥形瓶中，按1:40的料液比g/mL加入体积浓度为50%的乙醇，浸泡0.5 h，回流提取30 min，抽滤，定容至50 mL，即得；
（4）测定： 精密吸取适量供试品溶液, 加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定溶液在510nm波长下的吸光度；
（5）结果计算：总黄酮含量以芦丁计算，从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
石油菜本品按干燥品计算，含总黄酮应不得少于3.00 mg/g。
（2） 标准曲线的绘制：分别精密量取芦丁对照品溶液 0、1、3、5、6、8 mL置于容量瓶中，各加纯水至8 mL，加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510nm波长下的吸光度，以芦丁对照溶液的浓度mg/mL为横坐标，以在510nm下的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，得出回归方程；
（3）供试品溶液的制备：取过2号筛的本品粉末1 g，精密称定，用氯仿萃取脱色至药液无色，药渣自然风干后，置于锥形瓶中，按1:40的料液比g/mL加入体积浓度为50%的乙醇，浸泡0.5 h，回流提取30 min，抽滤，定容至50 mL，即得；
（4）测定： 精密吸取适量供试品溶液, 加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定溶液在510nm波长下的吸光度；
（5）结果计算：总黄酮含量以芦丁计算，从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
石油菜本品按干燥品计算，含总黄酮应不得少于3.00 mg/g。
[0008] 本发明的有益效果为：本发明提供的一种瑶药石油菜药材的质量检测方法，该质量检测方法包括石油菜药材的TLC鉴别方法和石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，其中所述的石油菜药材的TLC鉴别方法具有灵敏度高、专属性强以及可比性好等特点，简便可行，重现性强，通过对薄层色谱上是否存在斑点, 能够对药材的真伪进行准确的判断, 并且斑点的颜深浅程度以及大小等都能在一定程度上对药品的优劣作出直观的反应。所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法能够准确、快速的测定出瑶药石油菜药材中总黄酮的含量，能适应工业生产的需要，从而有效控制石油菜药材的质量。
[0009] 本发明提供的一种瑶药石油菜药材的质量检测方法，检测的准确度高，方法简单、能够更加准确的测定和评价石油菜药材的质量，有助于提高石油菜药材使用的安全性和稳定性，可有效弥补中国药典中瑶药石油菜药材质量检测方法的不足，具有很强的实用性，对于石油菜药材的进一步质量控制具有十分重要的意义，也能为石油菜药材质量标准的制定提供科学依据。附图说明
[0010] 图1 为瑶药材石油菜在不同点药量的薄层色谱图，图中，1代表点样量为1 μL，2代表点样量为3μL，3代表点样量为5μL，4代表点样量为7μL，5代表点样量为10μL；图2为瑶药材石油菜在不同显色剂的薄层色谱图，图中：1、甲醇提取液，2、95%乙醇提取液，3、70%乙醇提取液，4、50%乙醇提取液，5、乙酸乙酯提取液，6、β-谷甾醇对照品；
图3为 瑶药材石油菜在不同薄层板的薄层色谱图，图中，1、西山，2、恭城，3、鹿寨，4、全州，5、宜州，6、β-谷甾醇，7、β-谷甾醇；
图4 为10批石油菜药材的薄层色谱鉴别图，图中， 1～10依次为石油菜药材批
号SYC-1～SYC-10，11为β-谷甾醇，12为对照药材，13为阴性对照；
图5为芦丁的标准曲线图。
图3为 瑶药材石油菜在不同薄层板的薄层色谱图，图中，1、西山，2、恭城，3、鹿寨，4、全州，5、宜州，6、β-谷甾醇，7、β-谷甾醇；
图4 为10批石油菜药材的薄层色谱鉴别图，图中， 1～10依次为石油菜药材批
号SYC-1～SYC-10，11为β-谷甾醇，12为对照药材，13为阴性对照；
图5为芦丁的标准曲线图。
具体实施方式
[0011] 实施例1一种瑶药石油菜药材的质量检测方法，包括石油菜药材的TLC鉴别方法和石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，其中所述的石油菜药材的TLC鉴别方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：称取1.0 g石油菜药材药粉，过2号筛，加入30 mL体积浓度为
95%的乙醇，超声提取30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得；对照药材供试液的同法制备；
（2）对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，加体积浓度为95%的乙醇配成浓度为
1mg/mL的对照品溶液；
（3）薄层色谱鉴别方法：照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照药材供试液和对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，展开，取出，晾干后喷以质量分数为10% 的硫酸乙醇溶液，在加热到105 ℃至斑点清晰，在日光下检视。供试品应在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
（1）供试品溶液的制备：称取1.0 g石油菜药材药粉，过2号筛，加入30 mL体积浓度为
95%的乙醇，超声提取30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得；对照药材供试液的同法制备；
（2）对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，加体积浓度为95%的乙醇配成浓度为
1mg/mL的对照品溶液；
（3）薄层色谱鉴别方法：照薄层色谱法，分别吸取供试品溶液、对照药材供试液和对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，展开，取出，晾干后喷以质量分数为10% 的硫酸乙醇溶液，在加热到105 ℃至斑点清晰，在日光下检视。供试品应在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0012] 所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备： 精密称取芦丁对照品适量，加体积浓度为50%的乙醇溶解，制成0.2092 mg/mL的对照品溶液；
（2） 标准曲线的绘制：分别精密量取芦丁对照品溶液 0、1、3、5、6、8 mL置于容量瓶中，各加纯水至8 mL，加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510nm波长下的吸光度，以芦丁对照溶液的浓度mg/mL为横坐标，以在510nm下的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，得出回归方程；
（3）供试品溶液的制备：取过2号筛的本品粉末1 g，精密称定，用氯仿萃取脱色至药液无色，药渣自然风干后，置于锥形瓶中，按1:40的料液比g/mL加入体积浓度为50%的乙醇，浸泡0.5 h，回流提取30 min，抽滤，定容至50 mL，即得；
（4）测定： 精密吸取适量供试品溶液, 加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定溶液在510nm波长下的吸光度；
（5）结果计算：总黄酮含量以芦丁计算，从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
石油菜本品按干燥品计算，含总黄酮应不得少于3.00 mg/g。
（2） 标准曲线的绘制：分别精密量取芦丁对照品溶液 0、1、3、5、6、8 mL置于容量瓶中，各加纯水至8 mL，加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510nm波长下的吸光度，以芦丁对照溶液的浓度mg/mL为横坐标，以在510nm下的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，得出回归方程；
（3）供试品溶液的制备：取过2号筛的本品粉末1 g，精密称定，用氯仿萃取脱色至药液无色，药渣自然风干后，置于锥形瓶中，按1:40的料液比g/mL加入体积浓度为50%的乙醇，浸泡0.5 h，回流提取30 min，抽滤，定容至50 mL，即得；
（4）测定： 精密吸取适量供试品溶液, 加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定溶液在510nm波长下的吸光度；
（5）结果计算：总黄酮含量以芦丁计算，从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
石油菜本品按干燥品计算，含总黄酮应不得少于3.00 mg/g。
[0013] 实施例2一、本发明石油菜药材的TLC鉴别方法的系统适应性的考察情况如下：
材料：β-谷甾醇对照品（批号110851-201608，中国食品药品鉴定研究院）。试剂：甲醇（成都市科隆化学品有限公司，2017052601）；乙醇（成都市科隆化学品有限公司，
2017102601）；乙酸乙酯（成都市科隆化学品有限公司，2017110801）；环己烷（天津市大茂化学试剂厂，20170102）；乙醚（上海沃凯生物技术有限公司，20170919）；水为纯水。
材料：β-谷甾醇对照品（批号110851-201608，中国食品药品鉴定研究院）。试剂：甲醇（成都市科隆化学品有限公司，2017052601）；乙醇（成都市科隆化学品有限公司，
2017102601）；乙酸乙酯（成都市科隆化学品有限公司，2017110801）；环己烷（天津市大茂化学试剂厂，20170102）；乙醚（上海沃凯生物技术有限公司，20170919）；水为纯水。
[0014] 1、点样量称取1 g对照药材粉末（过2号筛）5份，加体积浓度为95%的乙醇30 mL，分别超声30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得供试品溶液。分别考察1、3、5、7、10 μL的点样量，点样于硅胶G板上，用环己烷-乙醚-乙酸乙酯（20︰5.5︰5）展开，取出，自然晾干，喷10%硫酸乙醇溶液并且烘烤（105℃）到薄层板上的斑点明显，在日光下观察，显色并记录。
[0015] 结果见图1。由图1可知，1 μL的点样量，薄层图谱上斑点较少且斑点较为模糊；2 μL的点样量下，斑点数目多但斑点较为不清晰；而5、7 μL的斑点数目多且相对清晰，各成分之间分离相对较开，因此选用用量的较少的5 μL为石油菜薄层色谱鉴别的点样量。
[0016] 2、显色剂称取1 g对照药材粉末（过2号筛），分别加甲醇、95%乙醇、70%乙醇、50%乙醇、乙酸乙酯各30 mL，超声30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得供试品溶液。考察质量分数10%硫酸乙醇、5%三氯化铝、5%三氯化铁三个不同显色剂的显色效果， 以5 uL的点样量，点样于硅胶G板上，用环己烷-乙醚-乙酸乙酯（20︰5.5︰5）展开，取出，自然晾干，喷不同显色剂并且烘烤（105℃）到薄层板上的斑点明显，在日光下观察，拍照并记录。
[0017] 结果见图2。由图2可知A 板斑点较清晰圆整，色彩鲜明；B 板和C 板显色斑点颜色淡，且不易肉眼观察。所以本实验采用A 板的显色溶剂10%硫酸乙醇溶液为最佳显色剂。
[0018] 3、展开剂分别称取5个产地石油菜药材药粉（过2号筛）1 g，按“1、点样量”项下提取方法提取供试品溶液，分别考察4种展开剂[环己烷-乙醚-乙酸乙酯（20︰5.5:5）、氯仿：丙酮：甲酸（35：
1：1）、环己烷：乙醚：乙酸乙酯（20：5.5：2.5）和氯仿：丙酮：甲酸（35：1：2.5）]的展开效果，按“1、点样量”项下条件点样、显色并记录。
1：1）、环己烷：乙醚：乙酸乙酯（20：5.5：2.5）和氯仿：丙酮：甲酸（35：1：2.5）]的展开效果，按“1、点样量”项下条件点样、显色并记录。
[0019] 从显色结果图中分析可见，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，斑点分离度高，容易观察，并且较为圆整，效果最佳，因此本实验采用环己烷-乙醚-乙酸乙酯（20︰5.5:5）为最佳展开剂。
[0020] 4、薄层板分别称取5个产地石油菜药材药粉（过2号筛）1 g，按“1、点样量”项下提取方法提取供试品溶液，考察青岛海洋厂家生产的硅胶G板和自制板（含0.8%CMC-Na）的展开效果，以5 uL的点样量，按“1、点样量”项下条件点样、显色并记录。
[0021] 结果见图3。由图3可知，青岛海洋厂家生产的硅胶G板薄层板和自制的硅胶G板板都能有效分离供试品溶液，但是青岛海洋厂家生产的硅胶G板板比自制硅胶G板板效果更好，分离度更高，斑点更为完整。
[0022] 二、采用本发明所述的石油菜药材的TLC鉴别方法对10批石油菜药材进行定性鉴别；所述的石油菜药材的TLC鉴别方法包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备：称取1.0g 10批石油菜药材药粉，过2号筛，加入30 mL体积浓度为95%的乙醇，超声提取30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得；对照药材供试液的制备：称取1.0 g 融安石油菜药材（批号SYC-8）药粉（过2号筛），按上述供试品溶液的制备方法同法制备，即得；
（2）对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，加体积浓度为95%的乙醇配成浓度为
1mg/mL的对照品溶液；
（3）薄层色谱鉴别方法：照薄层色谱法（2015年版2015年版《中国药典》（四部）“薄层色谱法”）试验，分别吸取供试品溶液、对照药材供试液和对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，展开，取出，晾干后喷以质量分数为10% 的硫酸乙醇溶液，在加热到105 ℃至斑点清晰，在日光下检视。供试品应在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
（1）供试品溶液的制备：称取1.0g 10批石油菜药材药粉，过2号筛，加入30 mL体积浓度为95%的乙醇，超声提取30 min，抽滤，滤液蒸干，残渣加2 mL提取溶剂溶解，即得；对照药材供试液的制备：称取1.0 g 融安石油菜药材（批号SYC-8）药粉（过2号筛），按上述供试品溶液的制备方法同法制备，即得；
（2）对照品溶液的制备：取β-谷甾醇对照品适量，加体积浓度为95%的乙醇配成浓度为
1mg/mL的对照品溶液；
（3）薄层色谱鉴别方法：照薄层色谱法（2015年版2015年版《中国药典》（四部）“薄层色谱法”）试验，分别吸取供试品溶液、对照药材供试液和对照品溶液各5 μL，点于同一硅胶G板，以体积比环己烷:乙醚:乙酸乙酯=20:5.5:5 为展开剂，展开，取出，晾干后喷以质量分数为10% 的硫酸乙醇溶液，在加热到105 ℃至斑点清晰，在日光下检视。供试品应在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0023] 结果如图4所示，由图4可知10 个批次瑶药材石油菜的供试品溶液、对照品和对照药材在相对应的位置上均显有相同斑点并且都为紫色。10批药材在该色谱条件下，分离的斑点基本与对照药材保持一致，Rf值适中，分离效果较好。说明来自10个产地的石油菜均符合本发明制定的TLC鉴别标准。
[0024] 三、讨论在考察影响瑶药材石油菜薄层色谱鉴别的因素中，以甲醇、乙醇、乙酸乙酯提取液均在瑶药材石油菜对照药材均在对照品相对应的位置出现相同的紫色斑点；甲醇、 95%乙醇、乙酸乙酯为提取溶媒提取的供试品斑点多，并且斑点个数相近；用 70%乙醇、 50%乙醇为提取溶媒提取的供试品斑存在斑点较少或斑点不清晰的情况。而因为甲醇和乙酸乙酯是具有毒性的化学试剂，长时间使用会造成操作者视力模糊、视神经乳头充血。综合考虑乙醇相较于乙酸乙酯、甲醇具有毒性小、成本低的特点，所以用 95%乙醇提取溶媒。
[0025] 在考察显色剂中，5%三氯化铁和5%三氯化铝为显色剂的硅胶G板斑点模糊不易肉眼观察出，而以10%硫酸乙醇为显色剂的硅胶G板斑点较清晰圆整，清晰，所以用10% 硫酸乙醇溶液为最佳显色剂。
[0026] 在考察提取方法时，用冷浸法提取的供试品溶液展开后斑点较少，而用超声法提取和回流法提取的供试品溶液斑点较多，同时斑点个数相差不大。超声法提取比回流法提取操作更加简单，对实验器材需求低，可行性高，所以选用超声提取法为瑶药石油菜的最佳提取方法。
[0027] 在考察提取时间中，超声处理5 min所得的供试品斑点模糊不清晰，超声处理15 min所得的供试品展开后斑点较少，但用超声处理30、45和60 min的供试品斑点多且个数相近，肉眼观察清晰。综合考虑则以30 min为提取时间。
[0028] 在展开剂的考察中，以环己烷-乙醚-乙酸乙酯（20︰5.5:5）为展开剂斑点分离度高，容易观察，并且较为圆整。因此确定环己烷-乙醚-乙酸乙酯（20︰5.5︰5）为最佳展开剂。
[0029] 在考察薄层板中不同点药量中点药量为5 μL 时斑点已经清晰，所以确定本实验薄层色谱鉴别的最佳点药量为5 μL。青岛海洋厂家生产的硅胶G板薄层板斑点圆整，而自制的硅胶G板斑点出现拖尾现象，影响了薄层色谱图的美观。
[0030] 经过上述分析，得出本发明所述的石油菜药材的TLC鉴别方法为：取本品粉末（过2号筛），加入体积浓度为95%的乙醇30 mL，超声提取30 min，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加2 mL体积浓度为95%的乙醇溶解，得供试品溶液。对照药材同法制备。β-谷甾醇适量，加体积浓度为95%的乙醇配成1 mg/mL的对照品溶液。照薄层色谱法（2015年版2015年版《中国药典》（四部）“薄层色谱法”）试验，吸取上述溶液个5 μL，点于同一硅胶G板，以环己烷-乙醚-乙酸乙酯（20:5.5:5）为展开剂，展开，晾干后喷以 10% 硫酸乙醇溶液，在加热（105 ℃）至斑点清晰，在日光下检视。应在与对照品、对照药材色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0031] 使用所述的石油菜药材的TLC鉴别方法对10批石油菜瑶药材进行定性鉴别，结果显示10批石油菜瑶药材在该试验条件下， 与对照品、对照药材的斑点清晰可见、斑点数量及颜色具有统一性。说明此薄层色谱鉴别方法简便可行，重现性，专属性强，能用于瑶药材石油菜的质量控制。
[0032] 实施例3一、本发明瑶药石油菜药材的质量检测方法中所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法的方法学考察如下：
1、标准曲线的绘制
分别精密量取0.2092 mg/mL芦丁对照溶液0、1、3、5、6、8 mL，加纯水至8 mL，加亚硝酸钠1 mL，混匀，静置6 min，加硝酸铝1 mL，混匀，静置6 min， 5 min内缓慢滴加氢氧化钠10 mL，静置10 min后紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510 nm下的吸光度，以芦丁对照品溶液的浓度（mg/mL）为横坐标，以在510 nm下的吸光度为纵坐标绘制工作曲线，得出回归方程。
1、标准曲线的绘制
分别精密量取0.2092 mg/mL芦丁对照溶液0、1、3、5、6、8 mL，加纯水至8 mL，加亚硝酸钠1 mL，混匀，静置6 min，加硝酸铝1 mL，混匀，静置6 min， 5 min内缓慢滴加氢氧化钠10 mL，静置10 min后紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510 nm下的吸光度，以芦丁对照品溶液的浓度（mg/mL）为横坐标，以在510 nm下的吸光度为纵坐标绘制工作曲线，得出回归方程。
[0033] 芦丁标准曲线的绘制见图5。由图5可知，在0.008～0.042 mg/mL的质量浓度范围内，吸光度与芦丁的质量浓度有良好的线性关系。芦丁的标准曲线的回归方程为：Y=12.159X-0.0189（R2=0.9994）。
[0034] 2、精密度实验精密称定融安石油菜药材（SYC-8）1份，按本发明所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法制备供试品溶液，分别精密吸取同一供试品溶液2 mL，连续进样6次，显色，测定，记录510 nm下吸光度，计算RSD值。
[0035] 精密度实验结果详见表1。由表1可知，RSD为0.76% < 3%，表示仪器精密度良好。
[0036]3、稳定性实验
精密吸取 “精密度实验”项下供试品溶液2 mL，按本发明所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法测定0、15、30、45、60、90、120min的吸光度，根据标准曲线，并计算其RSD值。
精密吸取 “精密度实验”项下供试品溶液2 mL，按本发明所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法测定0、15、30、45、60、90、120min的吸光度，根据标准曲线，并计算其RSD值。
[0037] 稳定性实验结果详见表2。在2 h内RSD为1.57%<3%，表明供试品溶液在0～2 h内稳定性良好。
[0038] 4、 重复性实验精密称定6份融安石油菜药材粗粉（SYC-8）1 g，按本发明所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法制备供试品溶液，显色，并测定其在510 nm下的吸光度，根据标准曲线，并计算RSD值。
[0039] 重复性实验结果详见表3。RSD值为2.62% < 3%，表明该实验方法重复性良好。
[0040] 5、加样回收实验精密称定已知总黄酮含量的融安石油菜（批号：SYC-8）9份，其中3份精密加入1.5倍的芦丁对照品、3份加入一倍的芦丁对照品、3份加入0.5倍的芦丁对照品。按本发明所述的石油菜药材中总黄酮含量的测定方法制备供试品溶液，显色，并测定其在510 nm下的吸光度，计算总黄酮含量，计算加样回收率及RSD值。
[0041] 加样回收实验结果详见表4。
[0042] 6、药材预处理前期在预实验的过程中发现，未经过处理的石油菜药材进行提取后，含有大量色素，提取后显色，产生红色凝絮状沉淀，影响显色效果，实验结果波动大，推断是由于石油菜中的叶绿素与NaOH 发生皂化反应。针对这一现象，前期采用加活性炭吸附色素、大孔树脂吸附色素、石油醚萃取色素、石油醚脱色处理、氯仿脱色等方法进行处理，发现活性炭吸附、石油醚除色素有效，但结果仍不理想，大孔树脂吸附，工作量较大，等待时间较长，氯仿的极性虽然不算很低，但是通过实验发现，相对与其他色素处理的方法，运用氯仿进行前处理后的药材，在显色的过程中，没有凝絮产生，显色后实验结果稳定，有效的消除石油菜中大量叶绿素对总黄酮实验结果的影响，能较完整的保留石油菜中的总黄酮，并且实验方法较为稳定，因此最后选择使用氯仿进行脱色处理。
[0043] 二、采用本发明所述的瑶药石油菜药材的质量检测方法对10批石油菜药材的总黄酮含量进行测定；测定方法，包括以下步骤：（1）对照品溶液的制备： 精密称取芦丁对照品适量，加体积浓度为50%的乙醇溶解，制成0.2092 mg/mL的对照品溶液；
（2） 标准曲线的绘制：分别精密量取芦丁对照品溶液 0、1、3、5、6、8 mL置于容量瓶中，各加纯水至8 mL，加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510nm波长下的吸光度，以芦丁对照溶液的浓度mg/mL为横坐标，以在510nm下的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，得出回归方程；
（3）供试品溶液的制备：取过2号筛的本品粉末1 g，精密称定，用氯仿萃取脱色至药液无色，药渣自然风干后，置于锥形瓶中，按1:40的料液比g/mL加入体积浓度为50%的乙醇，浸泡0.5 h，回流提取30 min，抽滤，定容至50 mL，即得；
（4）测定： 精密吸取适量供试品溶液, 加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定溶液在510nm波长下的吸光度；
（5）结果计算：总黄酮含量以芦丁计算，从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
（2） 标准曲线的绘制：分别精密量取芦丁对照品溶液 0、1、3、5、6、8 mL置于容量瓶中，各加纯水至8 mL，加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定各溶液在510nm波长下的吸光度，以芦丁对照溶液的浓度mg/mL为横坐标，以在510nm下的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线，得出回归方程；
（3）供试品溶液的制备：取过2号筛的本品粉末1 g，精密称定，用氯仿萃取脱色至药液无色，药渣自然风干后，置于锥形瓶中，按1:40的料液比g/mL加入体积浓度为50%的乙醇，浸泡0.5 h，回流提取30 min，抽滤，定容至50 mL，即得；
（4）测定： 精密吸取适量供试品溶液, 加质量分数为5％的亚硝酸钠溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min，加质量分数为10％的硝酸铝溶液 1.0 mL，混匀，静置6 min后，于5 min内缓慢滴加质量分数为4%的氢氧化钠溶液 10 mL，再加水定容至刻度，振荡摇匀，静置10min后，采用紫外-可见分光光度仪，于紫外灯下进行全波长扫描，并测定溶液在510nm波长下的吸光度；
（5）结果计算：总黄酮含量以芦丁计算，从回归方程计算供试品溶液中总黄酮的含量。
[0044] 测定结果详见表5。由表5可知不同产地的总黄酮含量差异较大，全州（SYC-1）的总黄酮含量较高，达到22.80 mg/g，武鸣（SYC-7）的含量最低，仅有3.22 mg/g。
[0045] 讨论：上述测定结果表明不同批号的石油菜药材中所含总黄酮的含量有较大差异，其中全州产地的石油菜药材中总黄酮含量最高，为 22.80 mg/g，武鸣石油菜中药材中总黄酮牡的含量最低，为3.22 mg/g，10 批样品平均含量为9.89 mg/g，如按照国家药典委员会颁布的“《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求”，适当降低石油菜总黄酮的含量限度，按平均值降低 20%计，为7.91 mg/g，如拟定石油菜药材含量限度不低于7.91 mg/g，则有6批药材不符合要求。因此，拟定石油菜干品的总黄酮含量不得低于3.00 mg/g。
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