背景技术
[0001]
皮肤会因各种因素如严酷的
气候、低的
水合水平等而受到损害或刺激。因此，需要不会进一步刺激或损害皮肤而会促进皮肤细胞活
力和/或皮肤屏障修复的产品。
[0002] 牛磺酸或2-
氨基乙基磺酸是已知具有皮肤健康益处的非
蛋白质氨基酸。例如，已知牛磺酸表现出抗
氧化性质、调节
炎症反应并增强皮肤屏障修复。牛磺酸已被引入到各种形式的个人护理产品中并且实验室皮肤模型和临床评价均已确证其皮肤健康益处。
[0003] 然而，牛磺酸在一些制剂如条皂中显示出
稳定性问题。特别地，老化后牛磺酸往往重结晶于条皂的表面上。重结晶的牛磺酸会对条皂产品造成不期望的外观和/或感觉。
[0004] 基于牛磺酸的表面活性剂，如甲基油酰基牛磺酸钠和甲基椰油酰基牛磺酸钠，已知是温和的高发泡表面活性剂。它们已被用在某些个人护理产品中。然而，这些表面活性剂的牛磺酸部分共价键合到
脂肪酸基团，所述脂肪酸基团不会在溶液中解离以提供游离牛磺酸的可得性。由于牛磺酸部分在溶液中与脂肪酸基团
捆绑在一起，因此本领域普通技术人员不会预期牛磺酸盐表面活性剂具有与牛磺酸相关的上述皮肤健康益处。
[0005] 虽然化合物如牛磺酸已知用于改善皮肤健康，但发现具有皮肤健康益处并且在其他方面与个人护理和家庭护理产品相容的其他化合物将是本领域中受欢迎的进展。
发明内容
[0006] 本公开的一个实施方案涉及一种条皂组合物。所述组合物由包含以下的成分制成：至少一种选自皂和第一表面活性剂的清洁剂；和至少一种选自牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐、N-甲基牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐及其组合的牛磺酸盐表面活性剂。牛磺酸盐表面活性剂不同于第一表面活性剂。组合物呈固体条形式。
[0007] 本公开的另一个实施方案涉及一种组合物，其由包含至少一种牛磺酸盐表面活性剂的成分制成，所述牛磺酸盐表面活性剂选自牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐、N-甲基牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐及其组合。所述组合物呈个人护理产品或家庭护理产品的形式。如果组合物为呈洗发剂形式的个人护理产品，则组合物1)不包含超过0.1％的单酯阴离子表面活性剂并且不包含超过0.1％的两性酰胺表面活性剂，2)不包含超过0.01重量％的有机
硅季铵盐-8，和3)(i)不同时为洗发剂和护发剂两者或(ii)包含
硫酸盐基表面活性剂或聚二甲基硅氧烷中的至少一者。
[0008] 本公开的其它适用领域将因下文中所提供的详细描述而变得显而易见。应理解的是，虽然详细说明和具体实例指出本公开的优选实施方案，但是这些详细描述和具体实例意图仅达到说明的目的，而无意限制本公开的范围。
附图说明
[0009] 从详细说明和附图将更全面地理解本公开，其中：
[0010] 图1描绘了从使用HaCaT细胞的细胞迁移实验收集的数据并示出了24小时后间隙距离的减小％，如下文
实施例中所述。
[0011] 图2A-2D呈现了从使用MatTek 3D EpiDerm的多重炎症
生物标志物检测实验收集的数据并以对照％报告，如下文实施例中所述。
[0012] 图3示出了来自使用MatTek 3D EpiDerm进行的实验的IL-1a检测结果并以pg/ml报告，如下文实施例中所述。
具体实施方式
[0013] 以下对优选实施方案的描述在本质上仅是示例性的，并且决不意图限制本公开、本公开的应用或用途。
[0014] 通篇使用的范围是用作描述在所述范围内的每个值的简写。范围内的任何值都可以被选为范围终点。此外，本文中引用的所有参考文献都以全文引用的方式并入。如果本公开中的定义与所引用的参考文献中的定义发生冲突，则以本公开为准。
[0015] 除非另外指明，否则此处和
说明书中别处表达的所有百分比和量应理解为指代重量百分比。给定的量基于材料的有效重量。
[0016] 本公开的一个实施方案涉及一种组合物，其由包含至少一种牛磺酸盐表面活性剂的成分制成，所述牛磺酸盐表面活性剂选自牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐、N-甲基牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐及其组合。所述组合物呈个人护理或家庭护理产品的形式，包括例如身体
清洗剂、条皂、淋浴凝胶、洗发剂、护发剂、洗手皂、面部清洗剂、乳膏、手和身体洗液、碗碟清洗液、昆虫驱避剂、凝胶、走珠、除臭剂、
止汗剂或
泵式喷雾剂。
[0017] 在一个实施方案中，牛磺酸盐表面活性剂的脂肪酸链具有6个或更多
碳原子。在一个实施方案中，牛磺酸盐表面活性剂包含具有12至25个碳原子的脂肪酸链。本文所述的脂肪酸链的碳原子的
指定数量指示脂肪酸链的平均链长，并可包含较少量比指定长度具有更短或更长链长的牛磺酸盐表面活性剂，具体取决于用于制备特定成分的纯化的程度，如本领域普通技术人员将理解的。可采用各种长度的脂肪酸的共混物。此类牛磺酸盐表面活性剂的具体实例包括任何通式1的化合物：
[0018]
[0019] 其中R1为具有12至25个碳原子、如14至20个碳原子的饱和或不饱和的直链或支链烷基或烯基基团；R2为H或甲基，M为钠、
钾、
钙、镁或铵。合适的实例有椰油酰基牛磺酸钾、甲基椰油酰基牛磺酸钾、己酰基甲基牛磺酸钠、椰油酰基牛磺酸钠、月桂酰基牛磺酸钠、甲基椰油酰基牛磺酸钠、甲基月桂酰基牛磺酸钠、甲基肉豆蔻酰基牛磺酸钠、甲基油酰基牛磺酸钠、甲基棕榈酰基牛磺酸钠、甲基硬脂酰基牛磺酸钠、正-异硬脂酰基甲基牛磺酸钠、月桂酰基牛磺酸钙、甲基椰油酰基牛磺酸镁、甲基牛磺酸钠异棕榈酰胺及其混合物。牛磺酸盐表面活性剂的还其他的实例包括甲基牛磺酸椰油酰基甲基牛磺酸钠和牛磺酸椰油酰基甲基牛磺酸钠。
[0020] 在一个实施方案中，牛磺酸盐表面活性剂是其中R2为甲基基团并且R1具有16至18个碳原子的化合物；如例如甲基油酰基牛磺酸钠、甲基椰油酰基牛磺酸钠及其组合。在一个实施方案中，牛磺酸盐表面活性剂为甲基油酰基牛磺酸钠。
[0021] 在一个实施方案中，如果组合物呈洗发剂的形式，则组合物1)不包含超过0.1％的单酯阴离子表面活性剂并且不包含超过0.1％的两性酰胺表面活性剂，2)不包含超过0.01重量％的有机硅季铵盐-8，和3)或(i)不同时为洗发剂和护发剂两者或(ii)包含
硫酸盐基表面活性剂或聚二甲基硅氧烷中的至少一者。在一个实施方案中，个人护理组合物还不包含医学上有效量的水杨酸。在实施方案中，组合物还不包含
橄榄油基化合物和/或季铵盐。表述“橄榄油基化合物”在本文中定义为包括橄榄油和提供与橄榄油相关的那些益处相似的皮肤滋润益处的橄榄油衍生物，包括橄榄油聚乙二醇(PEG)酯(包括其衍生物，如但不限于橄榄油PEG-6酯、橄榄油PEG-7酯、橄榄油PEG-10酯)、橄榄油提取物、橄榄壳提取物、橄榄叶提取物、橄榄油不
皂化物、橄榄油脂肪酸衍生物、橄榄酰胺丙基(及其衍生物，如但不限于橄榄酰胺丙基二甲胺、橄榄酰胺丙基二甲胺乳酸盐和橄榄酰胺丙基甜菜
碱)、橄榄酰胺DEA和橄榄酰胺丙基苄基二甲基
氯化铵。
[0022] 在一个实施方案中，本公开的组合物还包含载体，所述载体包含个人护理成分。个人护理成分选自例如芳香剂、
防腐剂、
溶剂、推进剂、皮肤细胞更新剂、抗痤疮药物、止汗化合物、昆虫驱避剂、防晒剂、油或脂肪的分解产物、去
角质剂、表面活性剂、皂及其两种或更多种的混合物。
[0023] 当包含在与皮肤
接触的组合物中时，本公开的组合物可具有类似于牛磺酸的那些益处。这些益处可包括减少皮肤刺激和/或改善皮肤的细胞修复功能中的至少一者。
[0024] 本公开的另一个实施方案涉及一种条皂组合物，其由包含以下的成分制成：至少一种选自皂和第一表面活性剂(本文中有时称为清洁剂表面活性剂)的清洁剂；和至少一种选自牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐、N-甲基牛磺酸的脂肪酸酰胺的盐及其组合的牛磺酸盐表面活性剂，所述牛磺酸盐表面活性剂不同于所述第一表面活性剂。组合物呈固体条形式。
[0025] 在一个实施方案中，条皂中采用的所述至少一种清洁剂为皂。术语“皂”在本文中定义为脂肪酸的盐。在一个实施方案中，皂为C8-C22
羧酸的盐。例如，所述盐可包含至少一种选自C8-C22羧酸、如约C12-C18羧酸的碱金属盐的化合物，如钠盐或烷基铵盐。基于最终条皂组合物的总重量计，皂的量可在约60重量％至约95重量％、如约70重量％至约80重量％的范围内。
[0026] 脂肪酸皂可包含中和的脂肪酸。用于皂的典型脂肪酸包括例如肉豆蔻酸、月桂酸、棕榈酸和
硬脂酸。脂肪酸的来源包括
椰子油、
棕榈油、棕榈仁油、牛油、鳄梨、
油菜籽、玉米、
棉籽、橄榄、高油酸向日葵、中油酸向日葵、向日葵、棕榈硬脂、棕榈仁油精、红花以及巴巴苏油。
[0027] 脂肪酸可用任何碱中和以形成皂。典型的碱包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾和三
乙醇胺。在某些实施方案中，脂肪酸皂由通过两种或更多种碱中和的脂肪酸形成。例如，钠皂、铵皂、钾皂、镁皂和钙皂可各自单独作为皂成分使用，或者以钠皂、铵皂、钾皂、镁皂和钙皂中两种或更多种的混合物使用。
[0028] 所述皂可通过混合脂肪酸来源与中和剂在合并物中原位制成，或者所述皂可以预制形式提供。在某些实施方案中，脂肪酸的摩尔量大于中和剂的摩尔量使得合并物/预制皂中剩有脂肪酸。在一些实施方案中，脂肪酸皂以皂屑的形式提供于组合物中，如本领域所知。
[0029] 清洁剂表面活性剂可以是适用于条皂中的任何表面活性剂。合适的表面活性剂的实例可包括PEG-12和其他PEG、聚山梨醇酯20和其他聚山梨醇酯、合成
洗涤剂(例如，月桂基羟乙基磺酸钠、羟乙基磺酸钠等)、牛油酸钠、椰油酰胺基丙基甜菜碱和
植物油的钠盐。
[0030] 本文公开的任何牛磺酸盐表面活性剂或其组合都可用于本公开的条皂组合物中。牛磺酸盐表面活性剂可呈任何合适的浓度，只要牛磺酸盐表面活性剂在条皂制剂中保持稳定即可。合适的牛磺酸盐表面活性剂浓度的实例的范围为最终条皂组合物的约0.1重量％至约10重量％，如组合物的约0.1重量％至约5重量％或组合物的约1重量％至约3重量％。
在一个实施方案中，牛磺酸盐表面活性剂，如式1的那些，是本公开的组合物中采用的唯一的表面活性剂(例如，其中使用皂而非第一表面活性剂作为清洁剂)，从而提供本文所述的益处中的一者或多者，同时还潜在地充当表面活性剂。
[0031] 还可向条皂中添加其他成分。此类成分的实例包括结构化剂、皮肤调理剂、螯合剂、
泡沫促进剂、防腐剂、抗
微生物剂、
去角质/擦洗颗粒、甘油、
氯化钠、二氧化
钛、
着色剂、芳香剂和水。在一个实施方案中，条皂包含甘油和氯化钠中的至少一者。
[0032] 合适的结构化剂(本文中有时可称为结构剂)包括例如选自二亚苄基山梨糖醇、二亚苄基木糖醇、二亚苄基核糖醇及其混合物的
胶凝剂。结构剂的其他实例包括碱金属卤化物和碱金属硫酸盐如氯化钠和硫酸钠。相对于最终条皂组合物的总重量计，结构剂可以至多2重量％、如0.1重量％至1.5重量％或0.2重量％至1重量％的量引入到组合物中。
[0033] 条皂组合物中可包含的皮肤调理成分(包括润肤剂)包括：各种脂肪和油(例如，
大豆油、向日葵油、芥花油和牛油
树脂)；甘油酯(例如，PEG 6辛酸/癸酸甘油三酯、PEG 80椰油酸甘油酯、PEG 40椰油酸甘油酯、PEG 35大豆甘油酯)；二甲聚硅氧烷的烷氧基化衍生物(例如，如PEG/PPG-22/24二甲聚硅氧烷和PEG-8二甲聚硅氧烷)；有机硅酯(例如，二甲聚硅氧烷PEG-7异硬脂酸酯)；有机硅季铵化合物(例如，有机硅季铵盐-8)；羊毛脂季铵化合物(例如，季铵盐-33)；阳离子
聚合物(例如，聚季铵盐-6和聚季铵盐-7)；和有机硅聚合物(例如，二甲聚硅氧烷醇、二甲聚硅氧烷共聚醇、烷基二甲聚硅氧烷共聚醇和二甲聚硅氧烷共聚醇胺)。
[0034] 可引入到条皂中的泡沫促进剂的实例包括某些两性表面活性剂、椰油单乙醇酰胺(CMEA)、椰油酰胺基丙基氧化胺、十六烷基二甲胺氯化胺、癸基氧化胺、月桂基/肉豆蔻基酰胺基丙基氧化胺、月桂基氧化胺、烷基二甲基N-氧化胺和肉豆蔻基氧化胺，在某些实施方案中，泡沫促进剂的量为最终条皂组合物的2重量％至10重量％。
[0035] 还可添加螯合剂以帮助延迟氧化。可采用任何合适的螯合剂。例如，可使用
乙二胺四乙酸(EDTA)及其盐作为螯合剂。以活性物为
基础，螯合剂优选以最终条皂组合物的总重量的约0.01重量％至约0.2重量％、或约0.025重量％至约0.1重量％的量存在。
[0036] 以活性物为基础，本公开的组合物还可含有量为最终条皂组合物的至多1重量％、或约0.01重量％至约0.5重量％的防腐剂和/或抗微生物剂。防腐剂的实例包括但不限于山梨酸、山梨酸钾、对羟基苯
甲酸甲酯、对羟基
苯甲酸丙酯、咪唑啉基脲、甲基氯异噻唑啉
酮和乙内酰脲(例如，DMDM乙内酰脲)。抗微生物剂包括例如三氯卡班、三氯生等。
[0037] 还可向条皂中引入有助于去角质的颗粒物质。特定的物质包括聚乙烯珠粒、荷荷巴珠粒、lufa和燕麦粉。
[0038] 芳香剂可以最终条皂组合物的约0.001重量％至约2重量％的量引入到条皂组合物中。芳香剂可包括任何活性剂如酚、
醛、醇、腈、醚、酮或酯等。
[0039] 水可以最终条皂组合物的总重量的至多约20重量％、至多15重量％或至多10重量％的量存在于条皂中。优选地，水以最终条皂组合物的5重量％至20重量％、或8重量％至20重量％或8重量％至15重量％的量存在。水可单独加入或可得自其他成分中所含的水。
[0040] 条皂组合物的pH可例如在约8.5至约12、如约9至约11、或约9至约10的范围内。pH测试方法基于将1g条皂溶解到99g水中以制备1重量％的皂溶液，然后测试其pH水平。
[0041] 在一个实施方案中，最终条皂组合物不包含对于局部应用而言医学有效量的抗微生物剂，如三氯卡班或水杨酸。如本文所用，术语“非医学有效量”定义为指小于0.01重量％。在一个实施方案中，最终条皂组合物包含相对于最终条皂组合物的总重量小于0.001重量％或小于0.00001重量％的抗微生物剂，如三氯卡班或水杨酸。
[0042] 如本文所述，当加到条皂制剂中时，牛磺酸盐表面活性剂可具有以下优点中的一个或多个：与未用牛磺酸盐表面活性剂制得的相同组合物相比减少皮肤刺激，与未用牛磺酸盐表面活性剂制得的相同组合物相比改善皮肤的细胞修复功能，或避免如上所述牛磺酸在条皂中重结晶的问题。因此，在条皂中采用本公开的牛磺酸盐表面活性剂可提供牛磺酸所提供的相同皮肤健康益处中的一者或多者，同时避免伴随牛磺酸的已知的重结晶问题。
[0043] 如上所述，本公开的任何组合物均可用来缓解皮肤刺激、皮肤炎症和/或改善皮肤的细胞修复功能。因此，本公开的一个实施方案涉及一种减少皮肤刺激和/或炎症的方法。本公开的另一个实施方案涉及一种改善皮肤的细胞修复功能的方法。这两种方法都包括向受试者的皮肤施用有效量的任何本文所述的组合物。
[0044] 实施例
[0045] 以下体外研究评价与相同重量浓度的牛磺酸相比，甲基油酰基牛磺酸钠的皮肤健康益处。观察到相当的抗刺激/抗炎和细胞修复作用。结果表明，此新发现可允许在条皂中配制甲基油酰基牛磺酸钠以实现牛磺酸的皮肤健康益处并避免牛磺酸稳定性问题如重结晶。
[0046] 以下实施例中使用的材料为如下：
[0047] ·HaCat细胞系(AddexBio，San Diego，CA)
[0048] ·3D EpiDerm皮肤模型(SIT 200皮肤刺激模型，MatTek Corporation，Ashland，MA 01721)。
[0049] ·牛磺酸(Sigma Aldrich＞99％，批号1419568V)
[0050] ·甲基油酰基牛磺酸钠(M35676，Rhodia Solvay Group)
[0051] ·SDS-十二烷基硫酸钠(MatTek Corporation，Cambridge，MA)
[0052] ·DMEM杜氏改良Eagle培养基(Gibco by Life Technologies，Grand Island，NY)[0053] ·HCYTOMAG-60K-07人细胞因子
磁性试剂盒(Millipore，Billerica，MA)[0054] 实施例1-细胞迁移检测
[0055] 制备三种不同的培养基样品。包含杜氏改良Eagle培养基(DMEM)的对照培养基，其包含10％胎牛血清和1％青霉素
链霉素的活性物；牛磺酸培养基，其与对照培养基相同但包含0.01重量％的牛磺酸；和牛磺酸盐培养基，其与对照培养基相同但包含0.01重量％的甲基油酰基牛磺酸钠。
[0056] 为了确定牛磺酸(0.01％)和甲基油酰基牛磺酸钠(0.01％)对细胞修复功能的作用，使用HaCaT细胞进行体外实验。HaCaT细胞是来自成人皮肤的自发转化的非整倍体永生角质形成细胞系。让HaCaT细胞的三个样品孔各自生长直至100％汇合。之后，用1000微升(ul)尖端划刻每个孔(以形成间隙)并用1毫升(ml)
磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)洗涤两次以消除死亡的漂浮细胞。之后，将三个样品孔中的每一个用1ml三种培养基样品中的一种进行处理：一个用对照培养基，一个用牛磺酸(0.01％)培养基，一个用甲基油酰基牛磺酸钠(0.01％)培养基。然后，使用
显微镜(OLYMPUS IX71)对间隙距离进行初始测量。接下来，将处理过的细胞孵育24小时并使用相同的显微镜再次进行测量。图1中示出了间隙距离减小百分数。
[0057] 迁移检测提供了细胞迁移的量度以评价活性物在促进
细胞增殖并因此诱导屏障修复中的潜力。间隙越小，迁移率越大，表明细胞修复功能越好(例如，皮肤屏障修复改善)。如图1中所示，用相同重量浓度的甲基油酰基牛磺酸钠和牛磺酸处理24小时的细胞显示出相当的细胞迁移率增强。
[0058] 实施例2-多重炎症生物标志物检测
[0059] 为了确证对皮肤炎症的作用，使用3D EpiDerm皮肤模型(SIT 200皮肤刺激模型，MatTek Corporation，Ashland，MA)进行体外实验。使用刺激性化学品十二烷基硫酸钠(0.02重量％SDS)来在体外皮肤样品中诱导皮肤刺激。在诱导皮肤刺激之后，在组织
培养箱(37℃，5％ CO2)中将体外皮肤样品各用两种30ul试验溶液(1％的牛磺酸/PBS溶液或1％的甲基油酰基牛磺酸钠/PBS溶液)中的一种局部处理1小时。孵育后，用PBS洗涤皮肤样品，置于培养基中并再孵育24小时。
收获组织并匀浆化以进行多重炎症生物标志物检测，测试IL-1、IL-6、IL-8和TNF-a的水平。通过Milliplex检测试剂盒(Millipore，Billerica，MA)分析生物标志物。
[0060] 使用的刺激性化学品十二烷基硫酸钠(SDS)通常用作对MatTek组织的刺激/炎症检测中的阴性对照。实施例2的多重生物标志物检测在一个检测中测量了包括IL-1a、IL-6、IL-8、TNF-a在内的促炎细胞因子的水平以评价皮肤刺激/炎症的水平。释放的细胞因子越多，则刺激和/或炎症潜能越大。如图2A-2D中所示，SDS诱导细胞因子IL-1a、IL-6、IL-8和TNF-a的表达。然而，通过甲基油酰基牛磺酸钠或牛磺酸的共同处理，细胞因子水平受到抑制。可以得出结论，与未用甲基油酰基牛磺酸钠或牛磺酸处理的样品相比，在用甲基油酰基牛磺酸钠处理的组织中发现刺激潜能的降低。
[0061] 基于上述细胞迁移检测和炎症检测结果，甲基油酰基牛磺酸钠在促进皮肤细胞修复(例如，皮肤屏障修复)和对抗皮肤刺激/炎症中显示出与牛磺酸相当的益处。结果表明，甲基油酰基牛磺酸钠可潜在地用于条皂制剂以及其他产品形式中以递送先前已用牛磺酸确证的皮肤益处。并且，当用于各种产品(例如，条皂等)中时，甲基油酰基牛磺酸钠潜在地提供比牛磺酸的改进，因为据推测甲基油酰基牛磺酸钠可在条皂中具有改善的稳定性并因此可能不会导致条皂制剂中与重结晶的牛磺酸相关的不期望的外观和/或感觉。
[0062] 实施例3-条皂制剂
[0063] 本公开的任何牛磺酸盐表面活性剂均可用来制备如本文所述的条皂制剂。用于此类条皂制剂的实施例成分示于下表1中。
[0064]
[0065] 表1中的百分数为基于最终条皂组合物的总重量的重量百分数。所有范围仅是示例性的，故也可采用所示范围之外的量。可使用本领域已知或尚待开发的任何合适的方法来混合成分和成型条皂。
[0066] 实施例4-刺激生物标志物(IL-1a)检测
[0067] 配制两个单独的复合皂(combar)样品，一个具有牛磺酸，一个具有甲基油酰基牛磺酸钠。牛磺酸和甲基油酰基牛磺酸钠均以相同的摩尔浓度配制在复合皂样品中。牛磺酸和甲基油酰基牛磺酸盐在其各自的复合皂基料中的重量浓度为如下：
[0068] 牛磺酸复合皂样品-2％牛磺酸(得自中国武汉的潜江永安药业)、98％复合皂；
[0069] 牛磺酸盐复合皂样品-6.8％甲基油酰基牛磺酸钠(得自Rhodia Solvay Group)、93.2％复合皂。
[0070] 用于试验的样品通过在PBS中混合牛磺酸复合皂和牛磺酸盐复合皂来制备(对于牛磺酸复合皂和甲基油酰基牛磺酸钠复合皂中的每一者，1％(重量/体积)的复合皂基料/PBS)。
[0071] 为了确证皮肤炎症，使用3D EpiDerm皮肤模型(SIT 200皮肤刺激模型，MatTek Corporation，Ashland，MA)进行体外实验。在组织培养箱中将单独的体外皮肤样品用各30ul的牛磺酸复合皂和牛磺酸盐复合皂试验样品处理1小时。孵育后，用PBS洗涤皮肤样品，置于培养基中并使得继续孵育24小时。收获组织并匀浆化以进行IL-1a检测。使用可得自R&D Systems，Minneapolis，MN的人IL-1α/IL-1F1 Quantikine ELISA试剂盒分析IL-1a水平。
在沿着炎症途径释放的细胞因子中，IL-1a被认为是突出的刺激生物标志物。释放的IL-1a越多，刺激潜能越大。
[0072] 由于制剂中高的pH和表面活性剂的存在，故预期与未经处理的皮肤样品相比，复合皂基料将显示出显著较高的刺激水平。因此，使用复合皂基料作为对MatTek组织的阴性对照。
[0073] 如图3中所示，2％牛磺酸复合皂样品和6.8％甲基油酰基牛磺酸钠复合皂样品(在曲线图中示出为6.8％牛磺酸盐)降低IL-1a水平。统计分析在复合皂基料与6.8％甲基油酰基牛磺酸钠复合皂之间给出0.03的p值并在2％牛磺酸复合皂与6.8％甲基油酰基牛磺酸钠复合皂之间给出0.07的p值。因此，可以得出结论，甲基油酰基牛磺酸钠显著降低了复合皂基料的刺激潜能。该效果与相同摩尔浓度下的牛磺酸相当。这些结果表明，甲基油酰基牛磺酸钠可潜在地用于条皂制剂以及其他产品形式中以递送先前已用牛磺酸确证的皮肤益处。
