一种荷丹片中多种有效成分的含量测定方法
专利汇可以提供一种荷丹片中多种有效成分的含量测定方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及荷丹片中多种有效成分的含量测定方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：取荷丹片各标准品适量，精密称定，分别置于容量瓶中，加甲醇溶解定容，得到对照品溶液；(2)供试品溶液的制备：取荷丹片， 粉碎 ，置于容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理，放冷，用甲醇定容至刻度线，密塞摇匀，取适量离心，移取上清液至容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀，即得供试品溶液；(3)测定方法：吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中有效成分的含量；色谱条件：色谱柱C18、流速0.1-0.6mL/min；柱温20-60℃，以 甲酸 水 溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。，下面是一种荷丹片中多种有效成分的含量测定方法专利的具体信息内容。
1.荷丹片中多种有效成分的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备
取荷丹片各标准品适量，精密称定，分别置于容量瓶中，加甲醇溶解定容，配制成每1mL含有适量补骨脂苷(PO)、异补骨脂苷(IPO)、金丝桃苷(Hyp)、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷(Qug)、异槲皮苷(IQ)、番泻苷B(SeB)、紫云英苷(Ast)、番泻苷A(SeA)、迷迭香酸(RoA)、紫草酸(LiA)、丹酚酸B(SaB)、荷叶碱(Nuc)、丹酚酸A(SaA)、补骨脂素(P)、异补骨脂素(IP)、丹酚酸C(SaC)、大黄酸(Rhe)、新补骨脂异黄酮(Neo)、补骨脂宁(Cor)、隐丹参酮(Cry)、补骨脂酚(Bak)的对照品储备液；
取补骨脂苷、异补骨脂苷、金丝桃苷、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、异槲皮苷、番泻苷B、紫云英苷、番泻苷A、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、荷叶碱、丹酚酸A、补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸C、大黄酸、新补骨脂异黄酮、补骨脂宁、隐丹参酮、补骨脂酚对照品储备液至容量瓶中，甲醇定容，混匀，得到混合对照品储备液；
(2)供试品溶液的制备
取荷丹片，粉碎，置于容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理，放冷，用甲醇定容至刻度线，密塞摇匀，取适量离心，移取上清液至容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀，即得供试品溶液；
(3)测定方法
吸取混合对照品储备液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，得到色谱图，根据色谱图计算供试品中有效成分的含量；
色谱条件：色谱柱C18、流速0.1-0.6mL/min；柱温20-60℃，以甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，(1)对照品溶液的制备：取荷丹片各标准品适量，精密称定，分别置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解定容，配制成每1mL含有补骨脂苷(PO)2.058mg、异补骨脂苷(IPO)2.290mg、金丝桃苷(Hyp)1.988mg、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷(Qug)2.014mg、异槲皮苷(IQ)2.152mg、番泻苷B(SeB)1.082mg、紫云英苷(Ast)
1.102mg、番泻苷A(SeA)0.224mg、迷迭香酸(RoA)1.064mg、紫草酸(LiA)1.228mg、丹酚酸B(SaB)2.144mg、荷叶碱(Nuc)1.012mg、丹酚酸A(SaA)1.120mg、补骨脂素(P)0.999mg、异补骨脂素(IP)2.072mg、丹酚酸C(SaC)0.348mg、大黄酸(Rhe)0.990mg、新补骨脂异黄酮(Neo)
1.004mg、补骨脂宁(Cor)1.044mg、隐丹参酮(Cry)1.080mg、补骨脂酚(Bak)1.338mg的对照品储备液；
取补骨脂苷、异补骨脂苷、金丝桃苷、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、异槲皮苷、番泻苷B、紫云英苷、番泻苷A、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、荷叶碱、丹酚酸A、补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸C、大黄酸、新补骨脂异黄酮、补骨脂宁、隐丹参酮、补骨脂酚对照品储备液适量至10mL容量瓶中，甲醇定容，混匀，得浓度分别为：137.0μg/mL、78.23μg/mL、133.6μg/mL、165.4μg/mL、75.59μg/mL、6.372μg/mL、24.78μg/mL、8.212μg/mL、16.04μg/mL、16.73μg/mL、211.5μg/mL、53.81μg/mL、35.04μg/mL、21.42μg/mL、31.64μg/mL、5.907μg/mL、22.48μg/mL、4.030μg/mL、0.891μg/mL、13.29μg/mL、9.904μg/mL的混合对照品储备液。
3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，(2)供试品溶液的制备：
取荷丹片，粉碎，称取约0.5g，精密称定，置于10-50mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理10-25min，放冷，用甲醇定容至刻度线，密塞摇匀，取适量离心，精密移取上清液5mL至
10mL容量瓶中，加25-100％甲醇定容至刻度，混匀，即得供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，(2)供试品溶液的制备：
取荷丹片，粉碎，称取约0.5g，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理
15min，放冷，用甲醇定容至刻度线，密塞摇匀，取适量14000rpm离心10min，精密移取上清液
5mL至10mL容量瓶中，加50％甲醇定容至刻度，混匀，即得供试品溶液。
5.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，(3)测定方法中，色谱条件：采用色谱柱ACQUITY BEH C18、流速0.3mL/min；柱温40℃，以甲酸水溶液和乙腈作为流动相，进行梯度洗脱。
6.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，(3)测定方法中，色谱条件，梯度洗脱过程如下：
7.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备
取荷丹片各标准品适量，精密称定，分别置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解定容，配制成每1mL含有补骨脂苷(PO)2.058mg、异补骨脂苷(IPO)2.290mg、金丝桃苷(Hyp)1.988mg、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷(Qug)2.014mg、异槲皮苷(IQ)2.152mg、番泻苷B(SeB)1.082mg、紫云英苷(Ast)1.102mg、番泻苷A(SeA)0.224mg、迷迭香酸(RoA)1.064mg、紫草酸(LiA)1.228mg、丹酚酸B(SaB)2.144mg、荷叶碱(Nuc)1.012mg、丹酚酸A(SaA)1.120mg、补骨脂素(P)0.999mg、异补骨脂素(IP)2.072mg、丹酚酸C(SaC)0.348mg、大黄酸(Rhe)0.990mg、新补骨脂异黄酮(Neo)1.004mg、补骨脂宁(Cor)1.044mg、隐丹参酮(Cry)1.080mg、补骨脂酚(Bak)1.338mg的对照品储备液；
取补骨脂苷、异补骨脂苷、金丝桃苷、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、异槲皮苷、番泻苷B、紫云英苷、番泻苷A、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、荷叶碱、丹酚酸A、补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸C、大黄酸、新补骨脂异黄酮、补骨脂宁、隐丹参酮、补骨脂酚对照品储备液适量至10mL容量瓶中，甲醇定容，混匀，得浓度分别为：137.0μg/mL、78.23μg/mL、133.6μg/mL、165.4μg/mL、75.59μg/mL、6.372μg/mL、24.78μg/mL、8.212μg/mL、16.04μg/mL、16.73μg/mL、211.5μg/mL、53.81μg/mL、35.04μg/mL、21.42μg/mL、31.64μg/mL、5.907μg/mL、22.48μg/mL、4.030μg/mL、0.891μg/mL、13.29μg/mL、9.904μg/mL的混合对照品储备液。
(2)供试品溶液的制备
取荷丹片，粉碎，称取约0.5g，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理
15min，放冷，用甲醇定容至刻度线，密塞摇匀，取适量14000rpm离心10min，精密移取上清液
5mL至10mL容量瓶中，加50％甲醇定容至刻度，混匀，即得供试品溶液；
(3)测定方法
吸取混合对照品储备液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，得到色谱图，根据色谱图计算供试品溶液中有效成分的含量；
色谱条件：采用色谱柱ACQUITY BEH C18、流速0.3mL/min；柱温40℃，以0.1％甲酸水溶液和乙腈作为流动相，进行梯度洗脱，梯度洗脱过程如下：
8.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备
取荷丹片各标准品适量，精密称定，分别置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解定容，配制成每1mL含有补骨脂苷(PO)2.058mg、异补骨脂苷(IPO)2.290mg、金丝桃苷(Hyp)1.988mg、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷(Qug)2.014mg、异槲皮苷(IQ)2.152mg、番泻苷B(SeB)1.082mg、紫云英苷(Ast)1.102mg、番泻苷A(SeA)0.224mg、迷迭香酸(RoA)1.064mg、紫草酸(LiA)1.228mg、丹酚酸B(SaB)2.144mg、荷叶碱(Nuc)1.012mg、丹酚酸A(SaA)1.120mg、补骨脂素(P)0.999mg、异补骨脂素(IP)2.072mg、丹酚酸C(SaC)0.348mg、大黄酸(Rhe)0.990mg、新补骨脂异黄酮(Neo)1.004mg、补骨脂宁(Cor)1.044mg、隐丹参酮(Cry)1.080mg、补骨脂酚(Bak)1.338mg的对照品储备液；
取补骨脂苷、异补骨脂苷、金丝桃苷、槲皮素3-O-葡萄糖醛酸苷、异槲皮苷、番泻苷B、紫云英苷、番泻苷A、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、荷叶碱、丹酚酸A、补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸C、大黄酸、新补骨脂异黄酮、补骨脂宁、隐丹参酮、补骨脂酚对照品储备液适量至10mL容量瓶中，甲醇定容，混匀，得浓度分别为：137.0μg/mL、78.23μg/mL、133.6μg/mL、165.4μg/mL、75.59μg/mL、6.372μg/mL、24.78μg/mL、8.212μg/mL、16.04μg/mL、16.73μg/mL、211.5μg/mL、53.81μg/mL、35.04μg/mL、21.42μg/mL、31.64μg/mL、5.907μg/mL、22.48μg/mL、4.030μg/mL、0.891μg/mL、13.29μg/mL、9.904μg/mL的混合对照品储备液；
(2)供试品溶液的制备
取荷丹片，粉碎，称取约0.5g，精密称定，置于25mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理(功率500W，频率40kHz)15min，放冷，用甲醇定容至刻度线，密塞摇匀，取适量14000rpm离心
10min，精密移取上清液5mL至10mL容量瓶中，加50％甲醇定容至刻度，混匀，即得供试品溶液；
(3)测定方法
吸取混合对照品储备液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，得到色谱图，根据色谱图计算供试品溶液中有效成分的含量；
采用色谱柱ACQUITY BEH C18(2.1×100mm，1.7μm，美国Waters公司)、流速0.3mL/min；柱温40℃，乙腈–0.1％甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱过程如下：
一种荷丹片中多种有效成分的含量测定方法
技术领域
背景技术
发明内容
2.152mg、番泻苷B(SeB)1.082mg、紫云英苷(Ast)1.102mg、番泻苷A(SeA)0.224mg、迷迭香酸(RoA)1.064mg、紫草酸(LiA)1.228mg、丹酚酸B(SaB)2.144mg、荷叶碱(Nuc)1.012mg、丹酚酸A(SaA)1.120mg、补骨脂素(P)0.999mg、异补骨脂素(IP)2.072mg、丹酚酸C(SaC)0.348mg、大黄酸(Rhe)0.990mg、新补骨脂异黄酮(Neo)1.004mg、补骨脂宁(Cor)1.044mg、隐丹参酮(Cry)1.080mg、补骨脂酚(Bak)1.338mg的对照品储备液；
165.4μg/mL、75.59μg/mL、6.372μg/mL、24.78μg/mL、8.212μg/mL、16.04μg/mL、16.73μg/mL、
211.5μg/mL、53.81μg/mL、35.04μg/mL、21.42μg/mL、31.64μg/mL、5.907μg/mL、22.48μg/mL、
4.030μg/mL、0.891μg/mL、13.29μg/mL、9.904μg/mL的混合对照品储备液。
165.4μg/mL、75.59μg/mL、6.372μg/mL、24.78μg/mL、8.212μg/mL、16.04μg/mL、16.73μg/mL、
211.5μg/mL、53.81μg/mL、35.04μg/mL、21.42μg/mL、31.64μg/mL、5.907μg/mL、22.48μg/mL、
4.030μg/mL、0.891μg/mL、13.29μg/mL、9.904μg/mL的混合对照品储备液。
19、补骨脂宁；20、隐丹参酮；21、补骨脂酚)注：因流动相有杂质的缘故，混合对照品溶液中含有较多杂峰，但不影响所测化合物。
具体实施方式
165.4μg/mL、75.59μg/mL、6.372μg/mL、24.78μg/mL、8.212μg/mL、16.04μg/mL、16.73μg/mL、
211.5μg/mL、53.81μg/mL、35.04μg/mL、21.42μg/mL、31.64μg/mL、5.907μg/mL、22.48μg/mL、
4.030μg/mL、0.891μg/mL、13.29μg/mL、9.904μg/mL的混合对照品储备液。
3.27％，表明该方法的重现性良好，结果见表7。
0.36～2.68％，结果表明：该方法日内、日间精密度、重复性及稳定性良好，符合相关方法学的要求，可用于样品的含量测定。分别取样品溶液和混合对照品溶液注入UPLC进行测定。荷丹片供试品溶液与混合对照品溶液色谱图见图1。
3.636mg/g)、补骨脂苷(2.164mg/g～2.474mg/g)、异补骨脂苷(1.683mg/g～1.923mg/g)、异槲皮苷(1.575mg/g～2.300mg/g)、荷叶碱(1.113mg/g～1.637mg/g)，约占总含量的85％；其次是紫云英苷、补骨脂素、异补骨脂素、丹酚酸A、大黄酸含量低于1mg/g，约占总量的15％；
番泻苷B、番泻苷A、丹酚酸C在10批次样品中均未检测到，可能是由于制剂制备过程中不稳定所致。
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